KR20120027340A - 혈액으로부터 적어도 일 종의 성분을 추출하는 방법 및 상기 방법의 실행시 사용되는 샘플링 장치 - Google Patents
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Abstract
생물학적 특성을 갖는 적어도 일 종의 성분을 혈액으로부터 추출하는 방법이 개시된다. 상기 방법은 성분의 취급에 의해 야기되는 성분의 세균 오염을 줄이거나 방지하도록 대기압 미만의 압력하의 폐쇄 튜브 내에서 수행된다. 상기 방법은 무엇보다도 다음의 단계를 임의의 바람직한 횟수로 반복하는 것을 포함한다: 제2 진공 용기를, 여러 부분으로 분리되는 혈액이 담겨지는 제1 용기에 연결되는 혈액 샘플링 기구에 연결하는 단계; 원하는 부분(들)이 전달 완료되기까지 대기하는 단계; 제2 용기를 회수하는 단계. 생물학적 치료를 위한 것을 포함하는 다른 의료적 용도의 다른 성분을 포함하는 다양한 제2 용기가 얻어질 수 있다. 상기 단계들은 용기를 개방하지 않고 폐쇄 시스템에서 수행될 수 있거나, 제1 용기가 혈액 샘플링 기구의 도입 전에 개방될 수 있다.
Description
본 발명은 예컨대 세포 신호에 풍부한 성분과 같은 혈액으로부터 적어도 일 성분을 추출하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 방법의 실행에 사용되는 장치에 관한 것이다.
미국 특허 제6569204호는 혈액으로부터의 성장 인자에 풍부한 성분을 추출하는 방법을 개시하고 있는데, 해당 방법은 시간의 경과에 따라 다양한 의료적 응용 분야에 매우 흥미롭고 유익한 생물학적 특성을 제공하는 것으로 나타났다. (복잡한 설비나 수술을 요하지 않고) 전문 병원에서 수행되는 이 방법은 기본적으로 다음의 단계를 포함한다: 혈액과 항응고제를 담고 있는 튜브를 소정의 시간 동안 특정 속도 및 온도에서 원심 분리하는 것에 의해 혈액이 다른 부분들로 분리되도록 하는 원리 분리 단계; 적혈구(하부 부분) 위의 부분으로 혈소판이 풍부한 혈장인 중간 부분을 추출하는 단계; 상기 혈장을, 응고제 및 혈장 활성제(성장 인자가 혈소판에 의해 해리되도록 공정을 개시할 수 있는 작용제)로서 작용하는 염화 칼슐이 첨가될 수 있는 제2 튜브로 전달하는 단계; 적용시의 필요 점도가 달성되기까지 혈장의 활성화 및 응고화가 이루어지도록 소정의 시간 동안 대기하는 단계. 이 조성물은 (대체로 이식학 및 외상학에 있어서의) 골 재생, 관절통의 치료, 피부 치료 등과 같은 다양한 의료 분야에 유리한 결과를 가지고 사용되고 있다. 이들 중 일부는 미국 특허 제6569204호 자체와 미국 특허 출원 제2009035382호에 기술되고 있다.
미국 특허 제6569204호에 개시된 방법과 바람직한 생물학적 특성을 갖는 혈액 성분의 추출을 위한 많은 다른 공지된 방법은 최종 성분을 투여받은 환자가 소정의 단계에서 세균 오염으로부터 면역성이 없는 것에 기인하여 감염될 위험을 포함하고 있다. 이러한 세균 오염에는 여러 가지 이유가 있을 수 있다: 병원체를 혈관류 내로 보내는 패혈증, 혈관에 투침 순간의 부적절한 피부 소독, 또한 상기 방법의 수행 중 혈액과 계속해서 소정 성분을 취급하는 것에 기인할 수 있다. 처치 과정 중 세균 오염의 위험에 기여하는 요인 중 하나는 미국 특허 제6569204호에 개시된 방법과 기타 방법은 개방 튜브, 즉 폐쇄되지 않거나 진공 밀봉되지 않은 개방 튜브에서 수행됨으로써 상기 공정 중 얻어지는 원심 분리된 혈장과 성분들은 대기와 접촉한다(소위 "개방 회로")는 사실이다.
본 발명은 공지된 공정에 대한 다른 개선점 중에서 공정 과정 중 혈액과 그 후속의 다른 물질의 취급으로부터 야기되는 최종 성분의 세균 오염의 위험이 감소되고 최종 생성물은 밀봉되고 살균성 용기 내에 보관되는, 혈액으로부터 얻어지는 유용한 생물학적 특성을 갖는 성분의 추출을 위한 개선된 공정을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 목적은 진공 밀봉된 튜브(즉, 대기압보다 낮은 내압을 가지는 튜브)를 사용하고, 혈액으로부터 바람직한 생물학적 특성을 가지는 적어도 일 종의 성분을 추출하는 방법을 제공하는 것이다. 대부분의 방법 지속 시간 동안, 바람직하게는 전체 방법 지속 시간 동안, 혈장 또는 상기 방법에 포함되는 임의의 다른 성분은 대기에 접촉되는 것이 방지된다. 본 발명에 따른 방법은 상당한 수준으로 최종 성분 또는 성분들의 오염을 억제하고 그것들의 의료적 및 생물학적 상태를 최적으로 보장한다.
본 발명의 방법은 다음의 단계를 포함한다: 진공 밀봉되고 선택적으로 항응고제를 함유한 제1 용기에 소정량의 혈액을 제공하는 단계; 혈소판 응집 성분을 갖는 혈장 부분을 포함하는 일련의 부분으로 혈액을 분리하는 단계; 상기 제1 용기 내에 함유된 최상위 부분에서 실질적으로 상위 높이까지 추출 기구를 도입하는 단계, 진공 밀봉된(대기압보다 낮고 제1 용기의 압력보다 낮은 압력) 제2 용기를 제1 용기에 연결하고, 압력차에 의해 필요한 양의 혈장 및/또는 다른 부분이 제1 용기로부터 제2 용기로 전달될 때까지 소정 시간 동안 대기하는 단계; 제2 용기를 제거하는 단계. 상기 제2 용기의 연결, 소정 시간 동안의 대기 및 제2 용기의 제거를 포함하는 단계는 형소판 응집 특성과 사용될 의료적 적용 분야에 특정한 다른 생물학적 특성을 갖는 조성물을 각기 포함하는 두 개 이상의 제2 용기(추출 기구의 삽입 깊이의 적절한 조정을 보장함)를 얻기 위해 반복될 수 있다.
일 실시예에서, 모든 단계는 용기를 개방하지 않거나 용기의 내용물이 대기에 접촉되도록 하는 어떤 다른 동작을 행하지 않고 폐쇄 시스템에서 수행된다. 본 실시예에서, 제1 용기에는 해당 제1 용기에 제2 용기가 연결되기 전에 선택적으로 배기 시스템(소량의 여과 공기의 도입을 허용함)이 삽입될 수 있다.
다른 실시예에서, 제1 용기는 혈액을 여러 부분으로 분리한 후 그리고 추출 기구의 도입 전에 개방됨으로써, 사이막(septum)을 갖는 캡을 투침할 필요가 없으므로 제2 용기의 연결 및 혈장 및/또는 다른 부분의 전달을 단순화할 수 있다. 이 방법은 예컨대, 해당 방법이 수술실과 같은 살균 환경에서 층류식 무균실에서 수행되는 경우 제2 용기로의 전달 이전에 제1 용기가 개방시 있을 수 있는 성분의 세균 오염의 측면에서 동등하게 안전할 수 있다. 또한, 많은 경우 최종 성분은 개방 환경(예, 구강 수술 또는 피부 궤양의 치료시)에 적용되므로 상기 방법은 살균 환경에서 수행할 필요는 없다.
본 발명의 방법은 기존의 방법에 비해 많은 흥미로운 측면과 장점을 제공한다.
먼저, 본 발명의 방법은 혈장 전체 부분 또는 다양한 전체 부분에 대한 자동 또는 강제 추출을 포함하지 않는다. 대신에, 본 발명의 방법은 적용 분야에 따라 제1 용기로부터 살균 상태에서 필요한 양의 혈장 및/또는 다른 부분이 추출될 수 있게 한다. 다시 말해, 최종 생성물의 원하는 특성에 따라 필요한 양의 혈장을 추출할 수 있다. 전술한 바와 같이, 단일 샘플의 혈액(단일의 제1 용기)으로부터 다른 의료적 적용을 위한 다른 성분을 갖는 여러 개의 제2 용기를 획득하는 것도 가능하다. 상기 방법은 추출되는 부분 또는 부분들의 임의의 다른 필요한 생물학적 특성과 함께 개별화되는 혈소판의 첨가를 가능케 한다. 이것은 의도된 의료적 응용에 대한 최종 성분(들)의 조제가 가능함을 의미한다.
두 번째로, 제2 용기에 남는 생성물은 밀봉되고 살균된 용기에 저장되므로 후속 처치: 즉 추가의 처치(예, 활성화 작용제의 첨가, 소정 시간의 대기, 소정 온도에 노출, 추가의 원심 분리 등), 기타 물질 또는 생성물의 여과, 저장, 냉각 등;를 받기가 용이하다.
본 발명의 방법에 따라 제조되는 성분은 골 재생과 퇴행성 관절 질환과 같은 다양한 응용에 사용될 수 있다.
첨부되는 비제한적인 도면을 참조로 본 발명의 상세를 살펴볼 수 있다:
도 1 및 도 2는 조립도와 분해도 형태로 각각 도시된 본 발명에 따른 일 실시예의 추출 기구의 개략도이다.
도 3 및 도 4는 각각 도 1의 실시예에 포함된 케이싱의 완전 사시도 및 부분 사시도이다.
도 1 및 도 2는 조립도와 분해도 형태로 각각 도시된 본 발명에 따른 일 실시예의 추출 기구의 개략도이다.
도 3 및 도 4는 각각 도 1의 실시예에 포함된 케이싱의 완전 사시도 및 부분 사시도이다.
본 발명은 혈액으로부터 적어도 일 종의 성분을 추출하는 방법을 제공하며, 이 방법은
ⅰ) 진공 밀봉되어 있는, 달리 말하면 대기압보다 낮은 압력으로 있는 제1 용기 내에 특정 양의 혈액을 제공하는 단계와,
ⅱ) 상기 혈액을 적어도 이하의 부분(fraction), 즉 상기 제1 용기의 바닥부의 적혈구의 부분과, 이 위에 백혈구 및 혈소판을 함유하는 소량의 부분과, 제1 용기의 상부를 향할수록 감소하는 혈소판 농도 구배를 갖는 상부의 혈장 부분으로 분리하는 단계(혈장은 원심분리 조건에 따라 혈소판이 없는 상부를 포함할 수도 있음)와,
ⅲ) 상기 제1 용기에 함유된 실질적으로 가장 높은 부분의 상부 레벨에 이르기까지 추출 기구(카테터, 바늘 또는 유사 장치)를 삽입하는 단계와,
ⅳ) 상기 제1 용기보다 낮은 압력으로 진공 밀봉된 제2 용기를 상기 추출 기구에 접속하는 단계; 압력의 차이에 의하여, 필요량의 혈장 부분, 백혈구 및 혈소판의 부분 및/또는 적혈구의 부분이 제2 용기에 전달될 때까지 특정 기간 동안 대기하는 단계; 제2 용기를 분리하는 단계; 추가의 추출이 실행되는 경우에, 나머지 부분의 상부 레벨에 다시 한번 도달할 수 있도록 추출 기구가 삽입되는 정도를 조정하는 단계를 적어도 1회 실행하는 단계를 포함한다.
그 결과, 본 발명에 의해, 제1 용기의 여러 부분(전술한 농도 구배의 혈장 및/또는 다른 부분)을 선택적으로 분할할 수 있게 된다.
상기 방법의 제1 단계, 특히 방법의 시작점으로서 특정 양의 혈액이 제공되는 제1 용기와 관련해서, 상기 제1 용기는 일련의 특정한 특징을 나타낼 수도 있다.
일 실시형태에서, 제1 용기는 밀봉되어 있고 어느 때에도 개방되지 않으므로, 혈액 및 후속적으로 얻어지는 다른 성분이 여과 없이 대기와 접촉하지 않는 폐쇄 시스템 또는 폐쇄 회로를 형성하며, 이로써 취급에 의한 세균 오염의 위험이 감소하고, 멸균(sterility)이 보장되며, 결과적인 최종 생성물의 생화학적 안정성 및 생물보안이 유지된다. 본 실시형태에서는, 제1 용기 내에 배기 시스템이 선택적으로 도입될 수 있으므로, 상기 제1 용기 내로 여과된 공기를 흡입할 수 있게 된다. 또한, 회로를 밀봉 상태로 유지하기 위하여 추출 기구에 사이막을 마련하는 것이 바람직하다.
다른 실시형태에서, 혈액이 여러 부분들로 분리된 후에, 그리고 추출 기구가 도입되기 전에, 제1 용기가 개방된다.
제1 용기는 일반적으로 플라스틱 또는 유리로 제조되고, 나사 결합식 또는 가압식의 캡에 의해 밀봉되거나 덮인다. 캡에는 추출 장치의 밀봉 접속을 가능하게 하도록 구멍이 뚫려 있을 수도 있다. 또한, 제1 용기는 용량이 4 ml 내지 50 ml인 원통형 튜브인 것이 바람직하다.
상기 제1 용기는 후속 용도에 따라서, 과정의 결과로서 얻어지는 성분으로 이루어지는 적어도 하나의 항응고제를 선택적으로 포함할 수도 있다. 구연산나트륨이 일반적으로 항응고제로서 사용되는데, 그 이유는 구연산나트륨이 혈류 중에서 찾을 수 있는 자연 성분이고 칼슘이가양이온 칼레이트제(Ca 2+)로서 기능하기 때문이다. 그러나 칼슘이가양이온(Ca 2+)보다는 덜 특정적이지만, 인공 항응고제인 EDTA 등의 다른 항응고제도 고려된다.
제1 용기의 예
본 발명에 사용될 수 있는 제1 용기의 2가지 예로는, 본원의 출원인이 판매하는 TE5 또는 TE9 PRGF Collection Tube가 있다. 이들 양 튜브는, 본체와 천공 캡을 구비하며 각각의 용적이 5 ml 및 9 ml인 살균 플라스틱 튜브이다. 이들 양 튜브 중 어느 것을 사용할 것인가는 특정의 의료 용도의 요건에 의해 결정되며, 양 튜브에는 라벨이 붙어 있다. 상기 라벨은, 용적을 표시하고 튜브의 바닥부를 향해서 증가하는 눈금을 갖는다. 튜브는 항응고제로서 3.8% 농도의 구연산나트륨을 포함하여, 이하의 특징을 나타낸다.
TE5 튜브
용량: 5 ml
진공 용적 (가압): 4.5 ml
구연산나트륨의 용적: 0.5 ml
사이즈: 13×75 mm
TE9 튜브
용량: 9 ml
진공 용적 (가압): 8.1 ml
구연산나트륨의 용적: 0.9 ml
사이즈: 16× 100 mm
상기 방법의 두 번째 단계는 혈액을 여러 부분으로 분리하는 것을 포함하는데, 이러한 분리는 바람직하게는, 제1 용기를 (특정의 원심 분리 속도 및 특정의 기간 동안) 원심 분리함으로써 또는 튜브를 랙(rack)에 배치하고 부분들이 침강에 의해 분리되는 것을 대기함으로써 실행된다.
제1 용기를 원심 분리하는 경우에, 이러한 원심 분리는 일련의 특정한 특징을 나타낼 수 있다. 제1 용기는 바람직하게는 100G 내지 900G의 속도로 3분 내지 12분간, 상온 또는 상온 이외의 온도(즉, 임의의 온도)에서 원심 분리된다. 이들 범위 중에서, 300G 내지 800G의 속도로 5분 내지 9분간 원심 분리를 실행하는 것이 특히 바람직하다. 이들 원심 분리의 파라미터 범위에 의해, 다양한 부분(혈소판 농도가 변경되는 혈장, 혈소판을 갖는 백혈구, 적혈구 및 기타 부분)이 보다 확실하게 분리된다.
제1 용기에 배기 시스템을 삽입하는 단계는 선택 사항이다. 배기 시스템이 삽입되지 않으면, 의료 스태프가 제2 용기를 분리할 때까지 또는 제1 및 제2 용기 내의 압력 레벨(제2 용기의 압력에 의존)이 동일하게 될 때까지 혈장 및/또는 다른 부분이 전달된다. 그러나 배기 시스템이 삽입되면, 밀봉된 제1 용기에 여과된 공기를 도입할 수 있게 되고, 그 결과 제1 용기의 압력이 항상 제2 용기의 압력보다 높게 된다. 결과적으로, 의료 스태프가 제2 용기를 분리할 때, 추출 기구가 최고 레벨 위로 이동할 때, 또는 물론 제1 용기의 모든 내용물이 제2 용기로 전달될 때에 추출이 종료된다.
본 발명에 포함되는 이하의 단계, 즉 추출 기구의 삽입, 제2 용기의 접속, 혈장의 한 부분 또는 다른 부분을 제2 용기로 추출, 상기 제2 용기의 분리에 있어서, 상기 단계들과 제2 용기는 일련의 특정한 특징을 나타낼 수도 있다.
추출 기구는 제1 용기에 함유된 실질적으로 가장 높은 부분의 상부 레벨에 이르기까지 삽입된다. 일련의 제2 용기에 상이한 부분들을 계속해서 또는 순차적으로 추출하는 경우, 이러한 추출에는 항상, 나머지 액체의 상부 부분의 흡인이 수반된다. 달리 말하면, 추출 장치의 삽입은 항상, 흡인 중에 액체의 레벨이 저하됨에 따라 액체의 상부로 조정된다. 결과적으로, 특정의 의료적 적용에 대해서, 예컨대 혈장의 바닥부(혈소판의 농도가 최고인 부분)를 추출할 필요가 있는 경우에는, 먼저 필요한 부분 위에 위치한 혈장이 일 단계 또는 여러 단계로 추출된다(혈소판의 농도가 낮은 혈장은 폐기될 수도 있고, 다른 의료적 적용에 사용될 수도 있다).
본 발명은, 부분 또는 부분들의 조합을 추출할 수 있는 것과 관련하여 무수한 가능성을 제공한다. 다음과 같이 추출할 수도 있다. 혈장만(원심 분리가 고속으로 실행되는 경우에, 다양한 농도의 혈소판을 함유하거나 또는 심지어 혈소판을 함유하지 않는 부분(fraction)의 전부 또는 일부); 혈소판을 갖는 백혈구만(부분의 전부 또는 일부); 적혈구만(부분의 전부 또는 일부); 백혈구(부분의 전부 또는 일부)와 함께 혈장(부분의 전부 또는 일부); 백혈구의 전체 부분 및 적혈구의 부분의 일부 또는 전부와 함께 혈장(부분의 전부 또는 일부); 또는 적혈구의 부분의 전부 또는 일부와 함께 백혈구의 부분의 일부 또는 전부를 추출할 수 있다.
또한, 제2 용기는 밀봉 상태로 유지되고, 적어도 과정의 종료까지는 개방되지 않으므로, 혈액 및 다른 성분이 공기와 접촉하지 않는 폐쇄 시스템 또는 폐쇄 회로를 형성한다(제1 용기에서와 동일). 일반적으로, 제2 용기는 나사 결합식 또는 가압식의 캡에 의해 밀봉되거나 덮인다. 캡에는 구멍이 뚫려 있을 수도 있다. 제2 용기는 용량이 4 ml 내지 50 ml인 원통형 튜브인 것이 바람직하다.
제2 용기는, 최종 화합물이 사용되는 특정의 의료적 적용의 요건에 따라 적어도 하나의 응고제, 응고 촉진제 또는 혈소판 활성화제를 선택적으로 함유할 수도 있다. 보빈 트롬빈, 휴먼 트롬빈 등의 다른 응고제도 고려되지만, 10% 농도의 염화칼슘이 일반적으로 응고제로서 사용된다. 본 발명에 있어서는, 응고를 돕는 특정의 불활성 첨가물(실리카 등)과 같은 응고 촉진제를 제2 용기에 사용하고, 제2 용기가 응고 촉진제(유리)로 제조되는 것도 고려된다. 본 발명에 있어서는, 상기 제2 용기에 수용된 화합물이 사용되는 의료적 적용에 필요한 다른 생체 물질 또는 제재가 제2 용기에 수용될 수 있는 것도 고려된다.
제1 용기로부터의 전달 전에(예컨대, 제2 용기의 제작 중에) 또는 전달이 완료된 후에, 응고제, 응고 촉진제, 활성화제 또는 다른 생체 물질 또는 제재를 제2 용기에 첨가할 수도 있다.
제2 용기는 일반적으로 플라스틱 또는 유리로 제조된다. 플라스틱은, 응고 과정을 지연시키는 능력으로 인하여 특정의 용례에 유용할 수도 있는데, 이러한 효과는 응고제를 함유하지 않는 제2 플라스틱 용기가 사용되는 경우에 더욱 현저하다.
제2 용기의 예
본 발명에 사용될 수 있는 제1 용기의 2가지 예로는, 본원의 출원인이 판매하는 TF5-EST 또는 TF9-EST PRGF? Plasma Fabrication Tube가 있다. 이들 양 튜브는, 본체와 천공 캡을 구비하며 각각의 용적이 5 ml 및 9 ml인 살균 플라스틱 튜브이다. 이들 양 튜브 중 어느 것을 사용할 것인가는 특정의 의료 용도의 요건에 의해 결정되며, 양 튜브에는 라벨이 붙어 있다. 상기 라벨은, 용적을 표시하고 튜브의 바닥부를 향해서 증가하는 눈금을 갖는다. 이들 튜브는 상이한 부압을 갖고 기술적 요건에 따라 상이한 압력으로 제조될 수 있다.
다른 한편으로, 본 발명은 특정한 용례를 위한 제2 용기 내에 적어도 하나의 부분으로부터 필요한 양을 분리하기 위하여 추출이 단 1회 수행될 수 있는 것을 고려한다. 본 발명은 또한 이 단계가 다른 적용을 위한 다른 제2 용기에서 (상이한 농도의 혈소판이 있거나 심지어는 혈소판이 없는) 혈장의 상이한 부분들 또는 다른 부분을 분리하기 위하여 2회 이상 반복될 수 있는 것을 고려한다. 예컨대, 혈소판의 농도가 보다 낮거나 혈소판이 없는 혈장 부분(튜브의 상부 부분의 상부)이 소정의 적용을 위해 추출될 수 있고, 혈소판의 농도가 보다 높은 혈장 부분(백혈구의 부분에 보다 가깝게 더 아래에 위치함)은 백혈구 신호가 많은 최종 제품을 필요로 하는 다른 특정한 용례를 위해 나중의 단계에서 추출될 수 있음으로써, 혈장 부분의 혈소판 농도 구배를 사용하게 한다. 본 발명의 추출 공정의 배경 개념을 설명하는 절차의 예가 아래에 제공된다.
절차 1의 예
항응고제 없이 플라스틱으로 제조된 제1 용기 내에 혈액이 마련된다(항응고제가 사용되지 않는다는 점은 나중의 단계에서 응고제와 활성제를 사용할 필요가 없다는 것을 의미한다). 원심 분리 후에, 전체 혈장 부분은 유리로 제조된 제2 용기로 또는 응고 촉진제가 있는 플라스틱으로 제조된 제2 용기로 추출됨으로써, 혈병 퇴축(clot retraction)이 얻어진다. 최종 성분은 반고체성의 농도를 가지고 있어서 이에 따라 발치 치조(post-extraction alveolus) 등의 치료를 위해 구강 또는 악안면 수술에서 봉합 폐쇄 전에 특별한 골 이식의 안정화와 같은 용례에서 피브린 캡 또는 멤브레인으로서 사용될 수 있다.
절차 2의 예
항응고제 없이 플라스틱으로 제조된 제1 용기 내에 혈액이 마련된다(항응고제가 사용되지 않는다는 점은 나중의 단계에서 응고제와 활성제를 사용할 필요가 없다는 것을 의미한다). 원심 분리 후에, 전체 혈장 부분은 응고 촉진제 없이 플라스틱으로 제조된 제2 용기로 추출됨으로써, 혈장의 응고가 지연된다. 따라서, 최종 성분은 액체 농도를 가지고 관절 조직 재생 또는 피내 주사 또는 근육 주사에서 침윤과 같은 용례를 위해, 또는 생체 물질 등을 응고시키도록 생체 물질로서의 그 첨가를 위해 사용될 수 있다.
절차 3의 예
항응고제가 있는 플라스틱으로 제조된 제1 용기 내에 혈액이 마련된다(이에 의해 응고를 지연 또는 방지한다). 원심 분리 후에:
-먼저, 특정량의 혈장 상부(바꿔 말하면, 낮은 농도의 혈소판을 갖거나 혈소판이 없는 혈장)이 유리로 제조되고 염화칼슘(응고제 및 활성제)을 포함하는 제2 용기로 추출된다. 절차 1의 예에서 언급한 것과 같은 용례에서 피브린 캡으로서 사용될 수 있는 반고체 성분이 형성된다.
-둘째로, 제1 용기 내에 나머지 혈장 상부(바꿔 말하면, 미리 추출된 혈장에 관하여 보다 높은 농도의 혈소판을 갖는 혈장)가 플라스틱으로 제조되고 염화칼슘(응고제 및 활성제)을 포함하는 다른 제2 용기로 추출된다. 염화칼슘은 또한 나중의 단계에서 추가될 수 있다. 피부 및 관절의 침윤 또는 임의의 다른 용도를 위해 골이 재생되는 신체의 영역에서 환자(본 발명에 사용되는 뼈가 얻어질 수 있는)로부터 자가 조직의 특별한 골과의 융합과 같은 용례를 위해 사용될 수 있는 액체 성분이 형성된다.
절차 4의 예
플라스틱으로 제조되고 항응고제를 구비하는 제1 용기 내에 혈액이 마련된다. 원심 분리 후에, 전체 혈장 부분은 응고제와 활성제를 갖는 제2 플라스틱 용기로 추출된다. 응고제와 활성제는 나중의 단계에서 첨가될 수도 있다. 최종 성분은 액체 균일성을 갖고 관절 조직의 침윤, 피내 주사 또는 근육 주사 등과 같은 용례를 위해 사용될 수 있다.
절차 5의 예
항응고제 없이 플라스틱으로 제조된 제1 용기 내에 혈액이 마련된다(항응고제가 사용되지 않는다는 점은 나중의 단계에서 응고제와 활성제를 사용할 필요가 없다는 것을 의미한다). 원심 분리 후에, 제1 용기가 개방되고 전체 혈장 부분은 유리로 제조된 제2 용기로 또는 응고 촉진제가 있는 플라스틱로 제조된 제2 용기로 추출됨으로써, 혈병 퇴축이 얻어진다. 최종 성분은 반고체 농도를 가지고 있고 이에 따라 발치 치조 등의 치료를 위해 구강 또는 악안면 수술에서 봉합 폐쇄 전에 특별한 골 이식의 안정화와 같은 용례에서 피브린 캡 또는 멤브레인으로서 사용될 수 있다.
본 발명의 다른 목적은 제1 용기로부터 제2 용기로 재료를 추출하는 추출 기구를 제공하는 것이다. 도 1 및 도 2는 상기 본 발명의 추출 기구의 실시예의 개략도를 조립체로서 그리고 분리 형태로 각각 도시하고 있다. 추출 기구는 본 발명의 방법에 따라 제1 용기 내로 삽입될 제1 바늘(2)과, 본 발명의 방법에 따라 제2 용기 내로 삽입될 제2 바늘(4)과, 제1 바늘(2)로부터 제2 바늘(4)로의 물질의 통로를 개방 및 폐쇄하도록 사용자에 의해 작동될 수 있는 수단을 주요 요소로 포함한다. 대체로, 제1 바늘(2)에는 방법이 밀봉된 환경에서 수행되는 경우에, 바꿔 말하면 제1 용기가 밀봉된 경우에 경사진 팁이 마련된다(이에 의해, 경사진 팁이 제1 용기의 캡을 천공할 수 있다). 그러나, 방법이 (제1 용기를 일단 원심 분리한 후 개방시킴으로써) 개방된 환경에서 수행되면, 제1 바늘(2)이 경사진 팁을 갖는 것이 불필요하다. 바람직하게는, 제1 바늘(2)로부터 제2 바늘(4)로의 물질의 통로를 개방 및 폐쇄하는 수단은 기구의 용이하고도 효율적인 사용을 가능하게 하도록 도면에 도시된 바와 같이 버튼(3a)이 마련된 스위치 유닛(3)이다.
도시된 실시예에서, 시스템은 스위치 유닛(3)의 수형 연결부에 대한 제2 바늘(4)의 수형 연결을 적합하게 하는 커넥터(6)를 포함한다. 이 커넥터(6)는 항상 필요하지는 않다.
바람직하게는, 기구는 또한 제1 바늘(2)이 돌출하는 케이싱(1)을 포함한다. 케이싱(1)은 제1 바늘(2)로부터 제2 바늘(4)로의 물질의 통로를 개방 및 폐쇄하는 수단이 작동되게 한다. 도시된 실시예에서, 예컨대 스위치 유닛(3)의 버튼(3a)은 케이싱(1)으로부터 돌출하고 기구의 사용자에 의해 쉽게 작동될 수 있다.
바람직하게는, 케이싱(1)은 또한 본 발명의 방법에 따라 제2 용기를 (전체적으로 또는 부분적으로) 수용하도록 된 수용 영역(5)을 포함한다. 상기 수용 영역(5)은 또한 도 1에 도시된 케이싱(1)의 부분 사시도를 도시하는 도 4에서 볼 수 있다. 도 3은 전체 케이싱(1)의 사시도를 도시하는데, 스위치 유닛(3)의 버튼(3a)이 돌출되는 구멍(7)과 제1 바늘(2)이 돌출되는 구멍(8)을 볼 수 있다.
케이싱(1)은 또한 배기 시스템의 삽입을 가능하게 하는 구멍과, 배기 시스템을 제1 용기로 안내하는 수단을 포함할 수 있다. 소량의 여과된 공기의 흡입을 허용하는 배기 시스템은, 본 발명의 공정이 제1 용기가 밀봉된 상태로 수행될 때에, 제1 용기와 제2 용기 간의 압력들의 균형에 의해 물질의 통과가 방해되지 않아야 하는 경우에 유용할 수 있다.
도시된 시스템은 이하와 같이 사용된다. 제2 용기는 수용 영역(5) 내로 삽입되고, 충분한 압력을 가함으로써 제2 바늘(4)은 상기 제2 용기의 캡을 천공할 수 있다. 이어서, 제1 바늘(2)이 제1 용기(개방된 또는 폐쇄된) 내에 삽입된다. 다음에, 스위치 유닛(3)의 버튼(3a)이 눌리고, (본 발명의 절차에 따른) 물질이 압력차의 결과로서 제1 용기로부터 제2 용기로 전달된다.
Claims (18)
- 혈액으로부터 적어도 일 종의 성분을 추출하는 방법으로서,
ⅰ) 대기압보다 낮은 압력으로 있는 제1 밀봉 용기 내에 혈액을 제공하는 단계와;
ⅱ) 상기 혈액을 적어도 이하의 부분들(fractions): 상기 제1 용기의 바닥부의 적혈구의 부분과, 상기 적혈구 부분 위에 백혈구 및 혈소판의 부분과, 상기 백형구 및 혈소판의 부분 위에 상기 제1 용기의 상부를 향할수록 감소하는 혈소판 농도 구배를 갖는 혈장 부분으로 분리하는 단계와;
ⅲ) 상기 제1 용기에 함유된 실질적으로 최상위의 상위 레벨에 이르기까지 추출 기구를 삽입하는 단계와;
ⅳ) 상기 제1 용기보다 낮은 압력으로 진공 밀봉된 제2 용기를 상기 추출 기구에 접속하는 단계; 압력의 차이에 의하여, 필요량의 혈장 부분, 백혈구 및 혈소판의 부분 및/또는 적혈구의 부분이 제2 용기에 전달될 때까지 특정 기간 동안 대기하는 단계; 제2 용기를 분리하는 단계; 추가의 추출이 실행되는 경우에, 나머지 부분의 상부 레벨에 다시 한번 도달할 수 있도록 추출 기구가 삽입되는 정도를 조정하는 단계를 적어도 1회 실행하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 혈액으로부터 적어도 일 종의 성분을 추출하는 방법.
- 제1항에 있어서,
상기 제1 용기는 상기 혈액을 여러 부분으로 분리하는 단계 이후와 상기 추출 기구의 도입 단계 이전에 개방되는, 혈액으로부터 적어도 일 종의 성분을 추출하는 방법.
- 제1항에 있어서,
상기 모든 단계는 폐쇄 시스템에서 수행되는, 혈액으로부터 적어도 일 종의 성분을 추출하는 방법.
- 제3항에 있어서,
상기 추출 기구와 함께, 상기 제1 용기에는 상기 용기 내에 여과된 공기의 도입을 허용하고 제1 용기의 압력이 제2 용기의 압력보다 항상 높게 되도록 하는 배기 시스템이 도입되는, 혈액으로부터 적어도 일 종의 성분을 추출하는 방법.
- 제3항에 있어서,
상기 추출 기구는 회로를 밀봉되게 유지하는 사이막(septum)을 포함하는, 혈액으로부터 적어도 일 종의 성분을 추출하는 방법.
- 제1항에 있어서,
상기 제1 용기는 적어도 일 종의 항응고제를 함유하는, 혈액으로부터 적어도 일 종의 성분을 추출하는 방법.
- 제1항에 있어서,
상기 제1 용기는 항응고제를 함유하지 않는, 혈액으로부터 적어도 일 종의 성분을 추출하는 방법.
- 제1항에 있어서,
상기 제2 용기는 상기 제1 용기로부터의 전달 이전에, 또는 나중 단계에서 추가되는 적어도 하나의 응고제, 예비 응고제, 활성화 작용제, 또는 임의의 다른 생체 물질 또는 작용제를 함유하는, 혈액으로부터 적어도 일 종의 성분을 추출하는 방법.
- 제1항에 있어서,
상기 제2 용기는 적어도 일 종의 응고 촉진제를 함유하는, 혈액으로부터 적어도 일 종의 성분을 추출하는 방법.
- 제1항에 있어서,
상기 혈액은 침강에 의해 여러 부분으로 분리되는, 혈액으로부터 적어도 일 종의 성분을 추출하는 방법.
- 제1항에 있어서,
상기 혈액은 상기 제1 용기의 원심 분리에 의해 여러 부분으로 분리되는, 혈액으로부터 적어도 일 종의 성분을 추출하는 방법.
- 제11항에 있어서,
상기 제1 용기는 3 내지 12분 동안 100 내지 900 G의 원심 분리 속도로 원심 작용을 받는, 혈액으로부터 적어도 일 종의 성분을 추출하는 방법.
- 제12항에 있어서,
상기 제1 용기는 5 내지 9분 동안 300 내지 800 G의 원심 분리 속도로 원심 작용을 받는, 혈액으로부터 적어도 일 종의 성분을 추출하는 방법.
- 제1항 내지 제13항에 따른 방법의 실시를 위한 추출 기구로서, 상기 방법에 따라 상기 제1 용기 내에 삽입되는 제1 바늘(2)과, 상기 방법에 따라 상기 제2 용기 내에 삽입되는 제2 바늘(4)과, 사용자에 의해 작동되어 제1 바늘(2)로부터 제2 바늘(4)로의 물질의 통로를 개방 및 폐쇄하는 수단을 포함하는 것을 특징으로 하는 추출 기구.
- 제14항에 있어서,
상기 제1 바늘(2)로부터 제2 바늘(4)로의 물질의 통로를 개방 및 폐쇄하는 상기 수단은 버튼(3a)을 갖는 스위치 유닛(3)인 추출 기구.
- 제14항에 있어서,
상기 제1 바늘(2)이 돌출되는 시점이고 상기 제1 바늘(2)로부터 제2 바늘(4)로의 물질의 통로를 개방 및 폐쇄하는 상기 수단이 작동될 수 있게 하는 케이싱(1)을 포함하는 추출 기구.
- 제16항에 있어서,
상기 케이싱(1)은 상기 방법에 따라 상기 제2 용기를 수용하도록 구성된 하우징 영역(5)을 포함하는 추출 기구.
- 제14항에 있어서,
배기 시스템의 삽입을 허용하는 구멍과 상기 배기 시스템을 상기 제1 용기로 안내하는 수단을 포함하는 추출 기구.
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