KR20120024652A

KR20120024652A - 치환된 피페리딘

Info

Publication number: KR20120024652A
Application number: KR1020117028161A
Authority: KR
Inventors: 더크 하임바흐; 수잔 뢰리그; 욜란다 칸초 그란데; 에크하드 벤더; 캣야 지머만; 안야 버흐뮐러; 크리스토프 게르데스; 마크 진 노트; 커스텐 마티아스 게리케; 마리오 예스케
Original assignee: 바이엘 파마 악티엔게젤샤프트
Priority date: 2009-05-27
Filing date: 2010-05-18
Publication date: 2012-03-14
Also published as: CU24011B1; HN2011003102A; EA201190313A1; US20120135985A1; IL215903A0; CU20110214A7; SG175759A1; DE102009022894A1; CN102482270B; CA2763386A1; TW201107319A; WO2010136138A1; NZ596621A; AU2010252339B2; AU2010252339A1; TWI464166B; MY166555A; UY32652A; JP5728687B2; HK1171450A1

Abstract

본 발명은 신규한 치환된 피페리딘, 그의 제조 방법, 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 그의 용도, 및 질환, 특히 심혈관 질환 및 종양 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 의약의 제조를 위한 그의 용도에 관한 것이다.
<화학식 I>

Description

치환된 피페리딘 {SUBSTITUTED PIPERIDINES}

본 발명은 신규 치환된 피페리딘, 그의 제조 방법, 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 그의 용도, 및 질환, 특히 심혈관 질환 및 종양 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 의약의 제조를 위한 그의 용도에 관한 것이다.

혈전구 (혈소판)은 생리적 지혈 및 혈전색전성 장애 모두에 있어서 필수적인 요소이다. 특히 동맥계에서, 혈소판은 혈액 성분과 혈관 벽 사이의 복합적 상호작용에 중요한 역할을 한다. 원치않는 혈소판 활성화는, 혈소판-풍부 혈전의 형성의 결과로서, 혈전색전성 장애 및 생명을 위협하는 상태를 동반하는 혈전성 합병증을 유발할 수 있다.

가장 효능 있는 혈소판 활성화제 중 하나는 혈액 응고 프로테아제 트롬빈이며, 이는 손상된 혈관 벽에 형성되고, 피브린을 형성하는 것 이외에도 혈소판, 내피 세포 및 중간엽 세포의 활성화를 유발한다 (문헌 [Vu TKH, Hung DT, Wheaton VI, Coughlin SR, Cell 1991, 64, 1057-1068]). 시험관내 및 동물 모델에서의 혈소판에서, 트롬빈 억제제는 혈소판 응집 및 혈소판-풍부 혈전의 형성을 억제한다. 인간에서 동맥 혈전증은 혈소판 기능 억제제 및 트롬빈 억제제로 성공적으로 예방 또는 치료될 수 있다 (문헌 [Bhatt DL, Topol EJ, Nat. Rev. Drug Discov. 2003, 2, 15-28]). 따라서, 혈액 혈소판에 대한 트롬빈 작용의 길항제가 혈전의 형성 및 임상적 후유증, 예컨대 심근경색 및 졸중의 발병을 감소시킬 확률이 높다. 예를 들어, 혈관의 내피 및 평활근 세포, 백혈구 및 섬유모세포에 대한 트롬빈의 다른 세포 효과가 염증성 및 증식성 장애에 대한 원인이 될 수 있다.

트롬빈의 세포 효과의 적어도 일부는 원형이 PAR-1 수용체인 G-단백질-커플링된 수용체 (프로테아제 활성화 수용체, PAR)의 족을 통해 매개된다. PAR-1은 트롬빈의 결합 및 그의 세포외 N-말단의 단백질분해 절단에 의해 활성화된다. 단백질분해는 SFLLRN...의 아미노산 서열을 갖는 새로운 N-말단을 노출시키고, 이는 효능제 ("결합된(tethered) 리간드")로서 분자내 수용체 활성화 및 세포내 신호의 전달을 유발한다. 결합된 리간드 서열로부터 유래된 펩티드는 수용체의 효능제로서 사용될 수 있으며, 혈소판에 대해서 활성화 및 응집을 유도한다. 다른 프로테아제도 마찬가지로 PAR-1을 활성화시킬 수 있으며; 이들 프로테아제에는, 예를 들어 플라스민, 인자 VIIa, 인자 Xa, 트립신, 활성화된 단백질 C (aPC), 트립타제, 카텝신 G, 프로테이나제 3, 그란자임 A, 엘라스타제 및 매트릭스 메탈로프로테아제 1 (MMP-1)이 포함된다.

직접적으로 트롬빈 억제제를 사용하여 트롬빈의 프로테아제 활성을 억제하는 것과 반대로, PAR-1을 차단하는 것은 혈액의 응고성의 감소 (항응고) 없이 혈소판 활성화의 억제를 유발해야 한다.

항체 및 다른 선택적인 PAR-1 길항제는 시험관내에서, 트롬빈의 저농도 내지 중간 농도에서 트롬빈-유도된 혈소판의 응집을 억제한다 (문헌 [Kahn ML, Nakanishi-Matsui M, Shapiro MJ, Ishihara H, Coughlin SR, J. Clin. Invest. 1999, 103, 879-887]). 혈전성 과정의 병리생리학에 중요할 수 있는 추가의 트롬빈 수용체인 PAR-4를 인간 및 동물 혈소판 상에서 확인하였다. 인간과 유사한 PAR 발현 패턴을 갖는 동물에서의 실험적 혈전증에서, PAR-1 길항제는 혈소판-풍부 혈전의 형성을 감소시켰다 (문헌 [Derian CK, Damiano BP, Addo MF, Darrow AL, D'Andrea MR, Nedelman M, Zhang H-C, Maryanoff BE, Andrade-Gordon P, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2003, 304, 855-861]).

지난 몇 년간, 수많은 물질이 그의 혈소판 기능-억제 작용에 대해 시험되었으나, 실제로 극소수의 혈소판 기능 억제제만이 실제로 유용한 것으로 나타났다. 따라서, 출혈의 위험을 유의하게 증가시키지 않으면서, 증가된 혈소판 반응을 특이적으로 억제하여 혈전색전성 합병증의 위험을 감소시키는 약제에 대한 요구가 존재한다.

PAR-1 수용체를 통해 매개되는 트롬빈의 효과는 관상 동맥 우회로 이식 (CABG) 및 다른 수술, 특히 체외 순환 (예컨대, 심폐기)를 이용하는 수술 도중 및 그 후 질환의 진행에 영향을 미친다. 수술 진행 중에는, 응고-억제 및/또는 혈소판-억제 물질의 수술전 또는 수술중 투약으로 인한 출혈 합병증이 있을 수 있다. 이러한 이유로, 예를 들어 클로피도그렐의 투약은 CABG 수일 전에 중단해야 한다. 또한, 언급된 바와 같이, (예를 들어, 체외 순환 또는 혈액 수혈 동안 혈액과 합성 표면 사이의 광범위한 접촉으로 인해) 파종성 혈관내 응고 또는 소모 응고병증 (DIC)이 발생할 수 있고, 이는 이어서 출혈 합병증을 유발할 수 있다. 이후 단계에서, 혈전증, 내막섬유증, 동맥경화증, 협심증, 심근경색, 심부전, 부정맥, 일과성 허혈성 발작 (TIA) 및/또는 졸중으로 인해 이식된 정맥 또는 동맥 우회로의 재협착 (심지어 폐쇄를 초래할 수 있음)이 빈번히 있다.

인간에서, PAR-1 수용체는 또한, 예를 들어 내피 세포, 평활근 세포 및 종양 세포를 비롯한 다른 세포에서도 발현된다. 악성 종양 장애 (암)는 높은 발병률을 갖고, 일반적으로 높은 사망률과 관련된다. 현행 치료로는 환자의 일부에서만 완전한 완화가 달성되며, 전형적으로 심각한 부작용과 관련된다. 따라서 보다 효과적이고 보다 안전한 요법에 대한 높은 요구가 있다. PAR-1 수용체는 암 발병, 성장, 침습 및 전이에 기여한다. 더욱이, 내피 세포에서 발현되는 PAR-1은 혈관 성장 ("혈관신생")을 유발하는 신호를 매개하고, 이러한 과정은 종양이 활력을 갖도록 하여 약 1 ㎣ 초과로 성장할 수 있도록 함에 있어서 중요하다. 혈관신생은 또한, 예를 들어 조혈암 장애, 황반 변성을 비롯한 여타 장애의 발병 또는 악화에 기여하고, 이는 실명, 및 당뇨병성 망막병증, 염증성 장애, 예컨대 류마티스 관절염 및 결장염을 유발한다.

패혈증 (sepsis (또는 septicaemia))은 높은 사망률을 갖는 통상의 장애이다. 패혈증의 초기 증상은 전형적으로 비특이적이나 (예컨대, 열, 전신적 건강 상태의 저하); 추가의 진행 동안 다양한 기관에서의 미세혈전 형성 및 2차 출혈 합병증을 수반하는 전신적 응고계의 활성화 ("파종성 혈관내 응고" 또는 "소모 응고병증" (DIC))가 있을 수 있다. DIC는 또한 패혈증, 예를 들어 수술 중 패혈증과 독립적으로 또는 종양 장애와 관련하여 발생할 수 있다.

패혈증의 치료는 우선, 예를 들어 수술적 병소 재구성 및 항생작용에 의한 감염성 원인의 철저한 제거로 이루어진다. 다음으로, 이는 질환에 걸린 기관계에 대한 임시적인 강력한 약물 지원으로 이루어진다. 이 질환의 다양한 단계의 치료법이, 예를 들어 다음 문헌에 기재되어 있다 (문헌 [Dellinger et al., Crit. Care Med. 2004, 32, 858-873]). DIC에 대한 효과적인 치료법은 입증된 바가 없다.

따라서, 본 발명의 목적은 인간 및 동물에서의 장애, 예를 들어 심혈관 장애 및 혈전색전성 장애, 및 또한 종양 장애의 치료를 위한 신규 PAR-1 길항제를 제공하는 것이다.

WO 2006/012226, WO 2006/020598, WO 2007/038138, WO 2007/130898, WO 2007/101270 및 US 2006/0004049에는, 특히 당뇨병, 혈전색전성 장애 및 졸중의 치료를 위한 11-β HSD1 억제제로서의 구조적으로 유사한 피페리딘을 기재하고 있다.

본 발명은 하기 화학식 I의 화합물, 및 그의 염, 그의 용매화물 및 그의 염의 용매화물을 제공한다.

<화학식 I>

상기 식에서,

R¹은 트리플루오로메틸, 1,1-디플루오로에틸, 2,2-디플루오로에틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 디플루오로메톡시, 트리플루오로메톡시 또는 에틸이고,

R²는 2-히드록시에트-1-일, 2-메톡시에트-1-일, 2-에톡시에트-1-일, 시클로프로필 또는 1-메톡시시클로프로프-1-일이고,

R³은 화학식

의 기이고, 여기서, *은 카르보닐 기에 대한 부착 지점이다.

본 발명의 화합물은 화학식 I의 화합물, 및 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물; 하기 언급되는 화학식의 화합물 (화학식 I에 포함됨), 및 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물, 및 작업 실시예로서 하기 언급되는 화합물 (화학식 I에 포함됨), 및 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물 (화학식 I에 포함되는 하기 언급되는 화합물이 이미 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 아닌 경우)이다.

그의 구조에 따라, 본 발명의 화합물은 입체이성질체 형태 (거울상이성질체, 부분입체이성질체)로 존재할 수 있다. 따라서, 본 발명은 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체 및 그의 각각의 혼합물을 포함한다. 거울상이성질체 및/또는 부분입체이성질체의 이러한 혼합물로부터, 공지된 방식으로 입체 이성체적으로 단일 구성성분을 분리하는 것이 가능하다.

본 발명의 화합물이 호변이성질체 형태로 존재할 수 있는 경우에, 본 발명은 모든 호변이성질체 형태를 포함한다.

본 발명의 문맥에서, 바람직한 염은 본 발명의 화합물의 생리학상 허용되는 염이다. 그러나, 그 자체로는 제약 용도에 적합하지 않지만, 예를 들어 본 발명의 화합물의 단리 또는 정제를 위해 사용될 수 있는 염이 또한 포함된다.

본 발명의 화합물의 생리학상 허용되는 염은 무기 산, 카르복실산 및 술폰산의 산 부가염, 예를 들어 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 톨루엔술폰산, 벤젠술폰산, 나프탈렌디술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 프로피온산, 락트산, 타르타르산, 말산, 시트르산, 푸마르산, 말레산 및 벤조산의 염을 포함한다.

본 발명의 화합물의 생리학상 허용되는 염은 또한 통상적인 염기의 염, 예컨대, 예로서 및 바람직하게는, 알칼리 금속 염 (예를 들어, 나트륨 염 및 칼륨 염), 알칼리 토금속 염 (예를 들어, 칼슘 염 및 마그네슘 염) 및 암모니아 또는 1 내지 16개의 탄소 원자를 갖는 유기 아민으로부터 파생된 암모늄 염, 예컨대, 예로서 및 바람직하게는, 에틸아민, 디에틸아민, 트리에틸아민, 에틸디이소프로필아민, 모노에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 디시클로헥실아민, 디메틸아미노에탄올, 프로카인, 디벤질아민, N-메틸모르폴린, 아르기닌, 리신, 에틸렌디아민, N-메틸피페리딘 및 콜린을 포함한다.

본 발명의 문맥에서, 용매화물은 용매 분자와의 배위에 의해 고체 또는 액체 상태로 착체를 형성하는 본 발명의 화합물의 형태를 지칭한다. 수화물은 물과 배위된 용매화물의 특정 형태이다.

또한, 본 발명은 또한 본 발명의 화합물의 전구약물을 포함한다. 용어 "전구약물"은 그 자체로는 생물학적 활성 또는 불활성일 수 있으나, 체내에서 그의 체류시간 동안, 본 발명의 화합물로 (예를 들어 대사 또는 가수분해 반응에 의해) 전환되는 화합물을 포함한다.

R³일 수 있는 기의 화학식에서, *에 의해 표시된 선의 종점은 탄소 원자 또는 CH₂ 기를 나타내지 않지만, R³이 부착된 원자에 대한 결합의 일부이다.

R¹이 트리플루오로메틸, 1,1-디플루오로에틸, 2,2-디플루오로에틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 디플루오로메톡시, 트리플루오로메톡시 또는 에틸이고,

R²가 2-메톡시에트-1-일, 시클로프로필 또는 1-메톡시시클로프로프-1-일이고,

R³이 화학식

의 기이고, 여기서 *은 카르보닐 기에 대한 부착 지점인 화학식 I의 화합물, 및 그의 염, 그의 용매화물 및 그의 염의 용매화물이 바람직하다.

또한, R¹이 트리플루오로메틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 트리플루오로메톡시 또는 에틸이고,

R³이 화학식

또한, R¹이 트리플루오로메틸, 2,2,2-트리플루오로에틸 또는 트리플루오로메톡시이고,

R²가 시클로프로필 또는 1-메톡시시클로프로프-1-일이고,

R³이 화학식

또한, R¹이 트리플루오로메틸, 트리플루오로메톡시 또는 에틸이고,

R²가 2-히드록시에트-1-일, 2-메톡시에트-1-일, 2-에톡시에트-1-일 또는 시클로프로필이고,

R³이 화학식

또한, R¹이 트리플루오로메틸 또는 에틸이고,

R²가 2-히드록시에트-1-일, 2-메톡시에트-1-일 또는 시클로프로필이고,

R³이 화학식

또한, R¹이 트리플루오로메틸 또는 에틸이고,

R²가 2-메톡시에트-1-일이고,

R³이 화학식

또한, R¹이 트리플루오로메틸 또는 에틸이고,

R²가 2-메톡시에트-1-일이고,

R³이 화학식

R¹이 트리플루오로메톡시이고,

R²가 2-메톡시에트-1-일 또는 시클로프로필이고,

R³이 화학식

R¹이 트리플루오로메톡시이고,

R²가 시클로프로필이고,

R³이 화학식

R¹이 트리플루오로메톡시이고,

R²가 2-메톡시에트-1-일 또는 시클로프로필이고,

R³이 화학식

또한, 피페리딘 고리에 결합된 페닐 치환기 및 1,2,4-옥사디아졸-5-일 치환기가 서로에게 시스 위치에 있는 화학식 I의 화합물이 바람직하다.

또한, 페닐 치환기가 결합된 탄소 원자가 S 배위를 갖고 1,2,4-옥사디아졸-5-일 치환기가 결합된 탄소 원자가 마찬가지로 S 배위를 갖는 화학식 I의 화합물이 바람직하다.

또한, R¹이 트리플루오로메틸인 화학식 I의 화합물이 바람직하다.

또한, R¹이 트리플루오로메톡시인 화학식 I의 화합물이 바람직하다.

또한, R¹이 에틸인 화학식 I의 화합물이 바람직하다.

또한, R²가 2-메톡시에트-1-일인 화학식 I의 화합물이 바람직하다.

또한, R²가 시클로프로필인 화학식 I의 화합물이 바람직하다.

또한, R²가 1-메톡시시클로프로프-1-일인 화학식 I의 화합물이 바람직하다.

또한, R³이 화학식

의 기이고, 여기서 *은 카르보닐 기에 대한 부착 지점인 화학식 I의 화합물이 바람직하다.

또한, R³이 화학식

라디칼의 각각의 조합 또는 바람직한 조합에 명시된 개별 라디칼 정의는 명시된 라디칼의 각각의 조합과는 독립적으로, 또한 원하는 경우 다른 조합의 라디칼 정의로 대체된다.

상기 언급된 2가지 이상의 바람직한 범위의 조합이 매우 특히 바람직하다.

본 발명은 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 그의 용매화물 또는 그의 염의 용매화물을 제조하는 방법을 추가로 제공하며, 여기서 방법은

[A]

하기 화학식 II의 화합물:

<화학식 II>

(상기 식에서, R¹ 및 R²는 각각 상기 정의된 바와 같음)을 하기 화학식 III의 화합물:

<화학식 III>

(상기 식에서, R³은 상기 정의된 바와 같고,

X¹은 할로겐, 바람직하게는 브롬 또는 염소, 또는 히드록실 또는 4-니트로페녹시임)과 반응시키거나, 또는

[B]

화학식 II의 화합물을 제1 단계에서 4-니트로페닐 클로로포르메이트와 반응시키고, 제2 단계에서 하기 화학식 IV의 화합물:

<화학식 IV>

(상기 식에서,R³은 상기 정의된 바와 같음)과 반응시키거나, 또는

[C]

하기 화학식 V의 화합물:

<화학식 V>

(상기 식에서, R¹ 및 R³은 각각 상기 정의된 바와 같음)을 하기 화학식 VI의 화합물:

<화학식 VI>

(상기 식에서, R²는 상기 정의된 바와 같음)과 반응시키거나, 또는

[D]

하기 화학식 Ia의 화합물:

<화학식 Ia>

(상기 식에서, R¹ 및 R²는 각각 상기 정의된 바와 같음)을 0.8 내지 1.1 당량의 메타-클로로퍼벤조산과 반응시켜 하기 화학식 Ib의 화합물:

<화학식 Ib>

(상기 식에서, R¹ 및 R²는 각각 상기 정의된 바와 같음)을 수득하거나, 또는

[E]

화학식 Ia의 화합물을 2.0 내지 3.0 당량의 메타-클로로퍼벤조산과 반응시켜 하기 화학식 Ic의 화합물:

<화학식 Ic>

(상기 식에서, R¹ 및 R²는 각각 상기 정의된 바와 같음)을 수득한다.

화학식 Ia, Ib 및 Ic의 화합물은 화학식 I의 화합물의 하위세트이다.

X¹이 할로겐인 경우에, 방법 [A]에 따른 반응은 일반적으로 불활성 용매 중에서, 임의로 염기의 존재 하에, 바람직하게는 -30℃ 내지 50℃의 온도 범위에서 표준압에서 수행한다.

불활성 용매는, 예를 들어 테트라히드로푸란, 메틸렌 클로라이드, 피리딘, 디옥산 또는 디메틸포름아미드이고, 메틸렌 클로라이드가 바람직하다.

염기는, 예를 들어 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민 또는 N-메틸모르폴린이고, 트리에틸아민 또는 디이소프로필에틸아민이 바람직하다.

X¹이 히드록실인 경우에, 방법 [A]에 따른 반응은 일반적으로 불활성 용매 중에서, 탈수 시약의 존재 하에, 임의로 염기의 존재 하에, 바람직하게는 -30℃ 내지 50℃의 온도 범위에서 표준압에서 수행한다.

불활성 용매는, 예를 들어 할로탄화수소, 예컨대 디클로로메탄 또는 트리클로로메탄, 탄화수소, 예컨대 벤젠, 니트로메탄, 디옥산, 디메틸포름아미드 또는 아세토니트릴이다. 용매의 혼합물을 사용하는 것이 또한 가능하다. 디클로로메탄 또는 디메틸포름아미드가 특히 바람직하다.

이와 관련해서 적합한 탈수 시약은, 예를 들어 카르보디이미드, 예를 들어 N,N'-디에틸-, N,N'-디프로필-, N,N'-디이소프로필-, N,N'-디시클로헥실카르보디이미드, N-(3-디메틸아미노이소프로필)-N'-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (EDC), N-시클로헥실카르보디이미드-N'-프로필옥시메틸폴리스티렌 (PS-카르보디이미드) 또는 카르보닐 화합물, 예컨대 카르보닐디이미다졸 또는 1,2-옥사졸륨 화합물, 예컨대 2-에틸-5-페닐-1,2-옥사졸륨 3-술페이트 또는 2-tert-부틸-5-메틸이속사졸륨 퍼클로레이트 또는 아실아미노 화합물, 예컨대 2-에톡시-1-에톡시카르보닐-1,2-디히드로퀴놀린 또는 프로판포스폰산 무수물 또는 이소부틸 클로로포르메이트 또는 비스-(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스포릴 클로라이드 또는 벤조트리아졸릴옥시트리(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 또는 O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU), 2-(2-옥소-1-(2H)-피리딜)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TPTU) 또는 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 또는 1-히드록시벤조트리아졸 (HOBt) 또는 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (BOP) 또는 N-히드로시숙신이미드, 또는 염기와 이들의 혼합물이다.

염기는, 예를 들어 알칼리 금속 탄산염, 예를 들어 탄산나트륨 또는 탄산칼륨 또는 탄산수소나트륨 또는 탄산수소칼륨 또는 유기 염기, 예컨대 트리알킬아민, 예를 들어 트리에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피페리딘, 4-디메틸아미노피리딘 또는 디이소프로필에틸아민이다.

바람직하게는, 축합은 HOBt의 존재 하에 HATU 또는 EDC로 수행된다.

X¹이 4-니트로페녹시인 경우에, 방법 [A]에 따른 반응은 일반적으로 불활성 용매 중에서, 임의로 염기의 존재 하에, 임의로 마이크로웨이브에서, 바람직하게는 50℃ 내지 200℃의 온도 범위에서 표준압 내지 5 bar에서 수행된다.

불활성 용매는, 예를 들어 N-메틸피롤리돈, 디옥산 또는 디메틸포름아미드이고, N-메틸피롤리돈이 바람직하다.

화학식 III의 화합물은 공지되어 있거나, 또는 적절한 출발 화합물로부터 공지된 방법에 의해 합성할 수 있다.

방법 [B]에 따른 제1 단계의 반응은 일반적으로 불활성 용매 중에서, 염기의 존재 하에, 바람직하게는 0℃ 내지 50℃의 온도 범위에서 표준압에서 수행한다.

불활성 용매는, 예를 들어 할로탄화수소, 예컨대 메틸렌 클로라이드, 트리클로로메탄, 사염화탄소 또는 1,2-디클로로에탄이고, 메틸렌 클로라이드가 바람직하다.

염기는, 예를 들어 유기 염기, 예컨대 트리알킬아민, 예를 들어 트리에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피페리딘, 4-디메틸아미노피리딘 또는 디이소프로필에틸아민이고, 트리에틸아민이 바람직하다.

방법 [B]에 따른 제2 단계의 반응은 일반적으로 불활성 용매 중에서, 염기의 존재 하에, 임의로 마이크로웨이브에서, 바람직하게는 50℃ 내지 200℃의 온도 범위에서 표준압 내지 5 bar에서 수행된다.

불활성 용매는, 예를 들어 디메틸 술폭시드, 디메틸포름아미드 또는 N-메틸피롤리돈이고, 디메틸포름아미드가 바람직하다.

염기는, 예를 들어 알칼리 금속 탄산염, 예를 들어 탄산나트륨 또는 탄산칼륨이고, 탄산칼륨이 바람직하다.

화학식 IV의 화합물은 공지되어 있거나, 또는 적절한 출발 화합물로부터 공지된 방법에 의해 합성할 수 있다.

방법 [C]에 따른 반응은 일반적으로 불활성 용매 중에서 탈수제의 존재 하에, 임의로 염기의 존재 하에, 바람직하게는 실온 내지 용매의 환류 온도까지의 온도 범위에서 표준압에서 수행한다.

불활성 용매는, 예를 들어 할로탄화수소, 예컨대 메틸렌 클로라이드, 트리클로로메탄 또는 1,2-디클로로에탄, 에테르, 예컨대 디옥산, 테트라히드로푸란 또는 1,2-디메톡시에탄, 또는 다른 용매, 예컨대 아세톤, 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드, 2-부타논 또는 아세토니트릴이다. 상기 용매의 혼합물을 사용하는 것이 동등하게 가능하다. 디메틸포름아미드, 또는 디옥산과 디메틸포름아미드의 혼합물이 바람직하다.

이와 관련해서 적합한 탈수 시약은, 예를 들어 카르보디이미드, 예를 들어 N,N'-디에틸-, N,N'-디프로필-, N,N'-디이소프로필-, N,N'-디시클로헥실카르보디이미드, N-(3-디메틸아미노이소프로필)-N'-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (EDC), N-시클로헥실카르보디이미드-N'-프로필옥시메틸폴리스티렌 (PS-카르보디이미드) 또는 카르보닐 화합물, 예컨대 카르보닐디이미다졸 또는 1,2-옥사졸륨 화합물, 예컨대 2-에틸-5-페닐-1,2-옥사졸륨 3-술페이트 또는 2-tert-부틸-5-메틸이속사졸륨 퍼클로레이트 또는 아실아미노 화합물, 예컨대 2-에톡시-1-에톡시카르보닐-1,2-디히드로퀴놀린 또는 프로판포스폰산 무수물 또는 이소부틸 클로로포르메이트 또는 비스-(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스포릴 클로라이드 또는 벤조트리아졸릴옥시트리(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 또는 O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU), 2-(2-옥소-1-(2H)-피리딜)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TPTU) 또는 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 또는 1-히드록시벤조트리아졸 (HOBt) 또는 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (BOP) 또는 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(피롤리디노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (PYBOP) 또는 N-히드로시숙신이미드, 또는 염기와 이들의 혼합물이다.

염기는, 예를 들어 알칼리 금속 탄산염, 예를 들어 탄산나트륨 또는 탄산칼륨 또는 탄산수소나트륨 또는 탄산수소칼륨 또는 유기 염기, 예컨대 트리알킬아민, 예를 들어 트리에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피페리딘, 4-디메틸아미노피리딘 또는 디이소프로필에틸아민이고, 디이소프로필에틸아민이 바람직하다.

바람직하게는, 축합은 디이소프로필에틸아민의 존재 하에 HATU를 사용하여 수행하거나, 또는 별법으로 카르보닐디이미다졸만을 사용하여 수행한다.

화학식 VI의 화합물은 공지되어 있거나, 또는 적절한 출발 화합물로부터 공지된 방법에 의해 합성할 수 있다.

방법 [D]에 따른 반응은 일반적으로 불활성 용매 중에서, 바람직하게는 실온 내기 용매의 환류 온도까지의 온도 범위에서 표준압에서 수행한다.

메타-클로로퍼벤조산은 바람직하게는 0.9 내지 1.0 당량의 양으로 사용한다.

불활성 용매는, 예를 들어 할로탄화수소, 예컨대 메틸렌 클로라이드, 트리클로로메탄 또는 1,2-디클로로에탄이다. 메틸렌 클로라이드가 바람직하다.

방법 [E]에 따른 반응은 일반적으로 불활성 용매 중에서, 바람직하게는 실온 내기 용매의 환류 온도까지의 온도 범위에서 표준압에서 수행한다.

메타-클로로퍼벤조산은 바람직하게는 2.3 내지 2.6 당량의 양으로 사용되고, 보다 바람직하게는 2.5 당량의 양으로 사용된다.

화학식 II의 화합물은 공지되어 있거나, 또는 하기 화학식 VII의 화합물:

<화학식 VII>

(상기 식에서, R¹은 상기 정의된 바와 같음)을 제1 단계에서 화학식 VI의 화합물과 반응시키고, 제2 단계에서 산과 반응시킴으로써 제조할 수 있다.

제1 단계 반응은 방법 [C]에 대해 기재된 바와 같이 수행한다.

제2 단계 반응은 일반적으로 불활성 용매 중에서, 바람직하게는 실온 내지 60℃의 온도 범위에서 표준압에서 수행한다.

불활성 용매는, 예를 들어 할로탄화수소, 예컨대 메틸렌 클로라이드, 트리클로로메탄, 사염화탄소 또는 1,2-디클로로에탄 또는 에테르, 예컨대 테트라히드로푸란 또는 디옥산이고, 메틸렌 클로라이드가 바람직하다.

염기는, 예를 들어 디옥산 중 염화수소 또는 트리플루오로아세트산이고, 바람직하게는 트리플루오로아세트산이다.

화학식 VII의 화합물은 공지되어 있거나, 또는 하기 화학식 VIII의 화합물:

<화학식 VIII>

(상기 식에서, R¹은 상기 정의된 바와 같고

R⁴는 메틸 또는 에틸임)을

제1 단계에서 디-tert-부틸 디카르복실레이트와 반응시키고,

제2 단계에서 염기와 반응시킴으로써 제조할 수 있다.

제1 단계 반응은 일반적으로 불활성 용매 중에서, 염기의 존재 하에, 바람직하게는 실온 내지 50℃의 온도 범위에서 표준압에서 수행한다.

제2 단계 반응은 일반적으로 불활성 용매 중에서, 염기의 존재 하에, 바람직하게는 실온 내지 용매의 환류 온도까지의 온도 범위에서 표준압에서 수행한다.

불활성 용매는, 예를 들어 할로탄화수소, 예컨대 메틸렌 클로라이드, 트리클로로메탄, 테트라클로로메탄 또는 1,2-디클로로에탄, 알콜, 예컨대 메탄올 또는 에탄올, 에테르, 예컨대 디에틸 에테르, 메틸 tert-부틸 에테르, 1,2-디메톡시에탄, 디옥산 또는 테트라히드로푸란, 또는 다른 용매, 예컨대 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드, 아세토니트릴 또는 피리딘, 또는 용매의 혼합물, 또는 용매와 물의 혼합물이고, 메탄올, 또는 메탄올과 1당량의 물의 혼합물, 또는 테트라히드로푸란 및 물의 혼합물이 바람직하다.

염기는, 예를 들어 알칼리 금속 수산화물, 예컨대 나트륨, 리튬 또는 수산화칼륨 또는 알칼리 금속 탄산염, 예컨대 탄산세슘, 탄산나트륨 또는 탄산칼륨 또는 알콕시드, 예컨대 칼륨 또는 나트륨 tert-부톡시드이고, 수산화리튬 또는 칼륨 tert-부톡시드가 바람직하다.

화학식 VIII의 화합물은 공지되어 있거나, 또는 하기 화학식 IX의 화합물을 수소화시켜 제조할 수 있다:

<화학식 IX>

상기 식에서,

R¹ 및 R⁴는 각각 상기 정의된 바와 같다.

수소화는 일반적으로 불활성 용매 중에서 환원제를 사용하여, 임의로 산, 예컨대 무기 산 및 카르복실산, 바람직하게는 아세트산을 첨가하여, 바람직하게는 실온 내지 용매의 환류 온도까지의 온도 범위에서 및 표준압 내지 100 bar의 압력 범위에서, 바람직하게는 표준압에서 또는 50 내지 80 bar에서 수행된다.

바람직한 환원제는 활성 탄소 상 팔라듐, 활성 탄소 상 로듐, 활성 탄소 상 루테늄 또는 그의 혼합된 촉매와 수소, 또는 알루미나 상 팔라듐 또는 알루미나 상 로듐과 수소, 또는 활성 탄소 상 팔라듐 및 백금(IV) 옥시드와 수소이고, 활성 탄소 상 팔라듐 또는 활성 탄소 상 로듐과 수소, 또는 활성 탄소 상 팔라듐 및 백금(IV) 옥시드와 수소가 바람직하다. 수소 및 백금(IV) 옥시드 단독으로 압력 하에 수소화시키는 것이 또한 가능하다.

불활성 용매는, 예를 들어 알콜, 예컨대 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올, n-부탄올 또는 tert-부탄올 또는 진한 아세트산, 또는 진한 염산을 첨가한 메탄올이고, 메탄올 또는 에탄올 또는 진한 아세트산, 또는 진한 염산을 첨가한 메탄올이 바람직하다.

화학식 IX의 화합물은 공지되어 있거나, 또는 하기 화학식 X의 화합물:

<화학식 X>

(상기 식에서, R⁴는 상기 정의된 바와 같음)을 하기 화학식 XI 또는 XIII의 화합물:

<화학식 XI>

<화학식 XIII>

(상기 식에서, R¹은 상기 정의된 바와 같음)과 반응시킴으로써 제조할 수 있다.

반응은 일반적으로 불활성 용매 중에서, 촉매의 존재 하에, 적절한 경우, 추가의 시약의 존재 하에, 바람직하게는 실온 내지 용매의 환류 온도까지의 온도 범위에서 표준압에서 수행한다.

불활성 용매는, 예를 들어 에테르, 예컨대 디옥산, 테트라히드로푸란 또는 1,2-디메톡시에탄, 탄화수소, 예컨대 벤젠, 크실렌 또는 톨루엔, 또는 다른 용매, 예컨대 니트로벤젠, 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드, 디메틸 술폭시드 또는 N-메틸피롤리돈이고; 적절한 경우, 약간의 물이 이러한 용매에 첨가된다. 물을 함유한 톨루엔, 또는 1,2-디메톡시에탄, 디메틸포름아미드 및 물의 혼합물이 바람직하다.

촉매는, 예를 들어 스즈끼 반응 조건에 통상적인 팔라듐 촉매이고, 예를 들어 디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐, 테트라키스트리페닐포스핀팔라듐(0), 팔라듐(II) 아세테이트 또는 비스(디페닐포스피노페로세닐)팔라듐(II) 클로라이드와 같은 촉매가 바람직하다.

추가의 시약은, 예를 들어 아세트산칼륨, 탄산세슘, 탄산칼륨 또는 탄산나트륨, 수산화바륨, 칼륨 tert-부톡시드, 불화세슘, 불화칼륨 또는 인산칼륨, 또는 그의 혼합물이고, 불화칼륨 또는 탄산나트륨, 또는 불화칼륨 및 탄산칼륨의 혼합물이 바람직하다.

화학식 X, XI 및 XIII의 화합물은 공지되어 있거나, 또는 적절한 출발 화합물로부터 공지된 방법에 의해 합성할 수 있다.

화학식 V의 화합물은 공지되어 있거나, 또는 하기 화학식 XII의 화합물:

<화학식 XII>

(상기 식에서,

R¹ 및 R³은 상기 정의된 바와 같고,

R⁴는 메틸 또는 에틸임)을 염기와 반응시킴으로써 제조할 수 있다.

반응은 일반적으로 불활성 용매 중에서, 염기의 존재 하에, 바람직하게는 실온 내지 용매의 환류 온도까지의 온도 범위에서 표준압에서 수행한다.

염기는, 예를 들어 알칼리 금속 수산화물, 예컨대 나트륨, 리튬 또는 수산화칼륨 또는 알칼리 금속 탄산염, 예컨대 탄산세슘, 탄산나트륨 또는 탄산칼륨, 또는 알콕시드, 예컨대 칼륨 또는 나트륨 tert-부톡시드이고, 수산화리튬 또는 칼륨 tert-부톡시드가 바람직하다.

화학식 XII의 화합물은 공지되어 있거나, 또는 화학식 VIII의 화합물을 화학식 III의 화합물과 반응시킴으로써 제조할 수 있다.

반응은 방법 [A]에 대해 기재된 바와 같이 수행한다.

대안적 방법에서, 화학식 XII의 화합물은 화학식 VIII의 화합물을 제1 단계에서 4-니트로페닐 클로로포르메이트과 반응시키고, 제2 단계에서 화학식 IV의 화합물과 반응시킴으로써 제조할 수 있다.

반응은 방법 [B]에 대해 기재된 바와 같이 수행한다.

화학식 I의 화합물의 제조는 하기 합성 반응식에 의해 설명될 수 있다:

<반응식>

본 발명의 화합물은 약학적 및 약동학 활성에 있어서 예견할 수 없었던 가치있는 스펙트럼을 갖는다. 그들은 특히 혈소판 응집 억제제로서, 내피-세포 활성화의 억제제로서, 평활근 세포 증식의 억제제로서 및 종양 성장의 억제제로서 작용하는 PAR-1 수용체의 선택적 길항제이다. 언급된 질환의 일부, 예를 들어 높은 혈전색전성 위험을 갖는 심혈관 질환에 있어서, PAR-1 길항작용에 의한 영구적 보호는 의약의 단순한 관리와 동시에 큰 중요성을 갖는다. 본 발명의 PAR-1 길항제는 단일 경구 투여 후 장기적 작용, 즉 16시간 이상 지속되는 작용을 나타낸다.

따라서, 그들은 인간 및 동물에서 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 의약으로서 사용하기에 적합하다.

본 발명은 또한 장애, 바람직하게는 혈전색전성 장애 및/또는 혈전색전성 합병증의 치료 및/또는 예방을 위한 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다.

본 발명의 문맥에서 "혈전색전성 장애"는 특히 장애, 예컨대 ST-분절 상승 심근경색 (STEMI) 및 비-ST-분절 상승 심근경색 (비-STEMI), 안정형 협심증, 불안정형 협심증, 관상동맥 개입, 예컨대 혈관성형술, 스텐트 이식 또는 대동맥관상동맥 우회술 후의 재폐쇄 및 재협착, 말초 동맥 폐쇄 질환, 폐 색전증, 심부 정맥 혈전증 및 신정맥 혈전증, 일과성 허혈 발작 및 또한 혈전성 및 혈전색전성 졸중을 포함한다.

따라서, 본 물질은 또한 급성, 간헐성 또는 지속성 심장 부정맥, 예를 들어 심방 세동을 갖는 환자, 심장율동전환을 겪는 환자, 및 또한 심장 판막 장애 또는 혈관내 물질, 예를 들어 인공 심장 판막, 카테터, 대동맥내 풍선 대위박동 및 박동조율기 프로브를 갖는 환자에서, 심인성 혈전색전증, 예를 들어 뇌 허혈, 졸중 및 전신 혈전색전증 및 허혈의 예방 및 치료에 적합하다.

혈전색전성 합병증은 또한 미세혈관병증성 용혈성 빈혈, 체외 순환, 예를 들어 혈액투석, 혈액여과, 심실 보조 장치 및 인공 심장, 및 또한 심장 판막 인공삽입물과 관련하여 발생한다.

더욱이, 본 발명의 화합물은 또한 상처 치유, 아테롬성동맥경화성 혈관 장애 및 염증성 장애, 예컨대 운동계의 류마티스성 장애, 관상동맥 심장 질환, 심부전, 고혈압, 염증성 장애, 예를 들어 천식, COPD, 염증성 폐 장애, 사구체신염 및 염증성 장 장애의 예방 및/또는 치료, 및 추가로 또한 알츠하이머병, 자가면역 장애, 크론병 및 궤양성 결장염의 예방 및/또는 치료에 영향을 미치는데 사용된다.

더욱이, 본 발명의 화합물은 종양 환자, 특히 주요 수술적 개입 또는 화학- 또는 방사선요법을 받는 환자를 위해, 종양 성장 및 전이의 형성을 억제하기 위해, 미세혈관병증, 연령-관련 황반 변성, 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 신장병증 및 다른 미세혈관 장애를 위해, 및 또한 혈전색전성 합병증, 예를 들어 정맥 혈전색전증의 예방 및 치료를 위해 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물은 추가로 암의 치료에 적합하다. 암에는, 특히 암종 (유방암, 간세포 암종, 폐암, 결장직장암, 결장암 및 흑색종 포함), 림프종 (예를 들어, 비-호지킨 림프종 및 균상 식육종), 백혈병, 육종, 중피종, 뇌암 (예컨대, 신경교종), 배아종 (예컨대, 고환암 및 난소암), 융모막암종, 신암, 췌장암, 갑상선암, 두경부암, 자궁내막암, 자궁경부암, 방광암, 위암 및 다발성 골수종이 포함된다.

더욱이, 내피 세포에서 발현되는 PAR-1은 혈관 성장 ("혈관신생")을 유발하는 신호를 매개하며, 이러한 과정은 약 1 mm³ 초과로 종양 성장을 가능하게 함에 있어서 중요하다. 혈관신생의 유도는 또한 다른 장애와 관련되며; 이에는 류마티스성 유형의 장애 (예를 들어, 류마티스 관절염), 폐 장애 (예를 들어, 폐섬유증, 폐고혈압, 특히 폐 동맥 고혈압, 폐 폐쇄를 특징으로 하는 장애), 동맥경화증, 플라크 파열, 당뇨병성 망막병증 및 습성 황반 변성이 포함된다.

또한 본 발명의 화합물은 패혈증의 치료에 적합하다. 패혈증 (Sepsis (또는 septicaemia))은 높은 사망률을 갖는 흔한 장애이다. 패혈증의 초기 증상은 전형적으로 비특이적이나 (예컨대, 열, 전신적 건강 상태의 저하); 추가의 진행 동안 다양한 기관에서의 미세혈전 형성 및 2차 출혈 합병증을 수반하는 응고계의 전신적 활성화 ("파종성 혈관내 응고" 또는 "소모 응고병증"; 이하 "DIC"로 지칭함)가 있을 수 있다. 또한, 혈관의 투과성이 증가되고 혈관외 강으로 체액 및 단백질이 스며나오는 내피의 손상이 있을 수 있다. 이후에, 기관 기능장애 또는 기관 부전 (예를 들어 신부전, 간부전, 호흡 부전, 중추신경계 결손 및 심장/순환 부전) 및 심지어 다발성-기관 부전이 있을 수 있다. 원칙적으로, 이는 임의의 장기에 영향을 미칠 수 있으며; 가장 빈번하게 발생하는 기관 기능장애 및 기관 부전은 폐, 신장, 심혈관계, 응고계, 중추신경계, 내분비선 및 간의 기능장애 및 부전이다. 패혈증은 "급성 호흡 곤란 증후군" (이하 ARDS로 지칭함)과 연관될 수 있다. ARDS는 또한 패혈증과 독립적으로 발생할 수 있다. "패혈성 쇼크"는 기관 손상을 더욱 촉진하며 예후의 악화와 관련되는, 치료를 요하는 저혈압의 발생을 지칭한다.

병원균은 세균 (그람-음성 및 그람-양성), 진균, 바이러스 및/또는 진핵생물일 수 있다. 진입 부위 또는 일차 감염은, 예를 들어 폐렴, 요로 감염 또는 복막염일 수 있다. 감염은 세균혈증과 관련될 수 있으나, 반드시 그러한 것은 아니다.

패혈증은 감염의 존재 및 "전신 염증 반응 증후군" (이하 "SIRS"로 지칭함)으로 정의된다. SIRS는 감염 중에 발생할 뿐만 아니라 손상, 화상, 쇼크, 수술, 허혈, 췌장염, 재생 또는 종양과 같은 다른 상태 중에 발생한다. 1992년 ACCP/SCCM 컨센서스 컨퍼런스 위원회 (Consensus Conference Committee)의 정의 (문헌 [Crit. Care Med. 1992, 20, 864-874])에는 "SIRS" 진단에 필요한 증상 및 측정 파라미터 (특히 체온 변화, 심박수 증가, 호흡 곤란 및 변화된 혈액 프로파일)가 기재되어 있다. 이후 (2001) SCCM/ESICM/ACCP/ATS/SIS 국제 패혈증 정의 컨퍼런스 (International Sepsis Definitions Conference)에서 본질적으로는 상기 기준을 유지시키되, 상세내용이 미세하게 조정하였다 (문헌 [Levy et al., Crit. Care Med. 2003, 31, 1250-1256]).

DIC 및 SIRS는 패혈증 동안에 일어날 수 있지만, 또한 수술, 종양 장애, 화상 또는 기타 손상의 결과로서 일어날 수 있다. DIC의 경우에, 손상된 내피 세포의 표면, 이물 또는 손상을 입은 혈관외 조직의 표면에서 응고계가 대규모로 활성화된다. 그 결과, 저산소증을 수반하는 다양한 기관의 소혈관내 응고 및 뒤이은 기관 기능장애가 발생한다. 2차적으로, 응고 인자 (예를 들어, 인자 X, 프로트롬빈, 피브리노겐) 및 혈소판이 소모되어 혈액의 응고력이 감소되고, 심각한 출혈이 초래될 수 있다.

또한, 본 발명의 화합물은 또한 생체외에서 응고를 방지하는데 사용될 수 있으며, 예를 들어 혈액 및 혈장 생성물의 보존, 카테터 및 다른 의료 보조기 및 기기 (체외 순환 포함)의 세정/전처리, 생체내 또는 생체외에서 사용되는 의료 보조기 및 기기의 합성 표면 코팅, 또는 혈소판-함유 생물학적 샘플에 사용될 수 있다.

본 발명은 또한 의료 기기 및 임플란트, 예컨대 카테터, 보철물, 스텐트 또는 인공 심장 판막을 코팅하기 위한 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다. 이 경우에, 본 발명의 화합물은 표면에 견고하게 부착될 수 있거나, 또는 국부 작용을 위해 담체 코팅으로부터 인접한 주변으로 특정 기간에 걸쳐 방출될 수 있다.

본 발명은 또한 장애, 특히 상기 언급된 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다.

본 발명은 또한 장애, 특히 상기 언급된 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 의약의 제조를 위한 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다.

본 발명은 또한 치료 유효량의 본 발명의 화합물을 사용하는, 장애, 특히 상기 언급된 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 특히 상기 언급된 장애의 치료 및/또는 예방을 위한, 본 발명의 화합물 및 1종 이상의 추가의 활성 성분을 포함하는 의약을 제공한다. 조합에 적합한 활성 성분은 예로서 및 바람직하게는 다음을 포함한다:

칼슘 채널 차단제, 예를 들어 암로디핀 베실레이트 (예를 들어 노바스크(Norvasc)^？), 펠로디핀, 딜티아젬, 베라파밀, 니페디핀, 니카르디핀, 니솔디핀 및 베프리딜;

이오메리진;

스타틴, 예를 들어 아토르바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴 및 심바스타틴;

콜레스테롤 흡수 억제제, 예를 들어 에제티미브 및 AZD4121;

콜레스테릴 에스테르 전달 단백질 ("CETP") 억제제, 예를 들어 토르세트라피브;

저분자량 헤파린, 예를 들어 달테파린 나트륨, 아르데파린, 세르토파린, 에녹사파린, 파르나파린, 틴자파린, 레비파린 및 나드로파린;

추가의 항응고제, 예를 들어 와파린, 마르쿠마르, 폰다파리눅스;

항부정맥제, 예를 들어 도페틸리드, 이부틸리드, 메토프롤롤, 메토프롤롤 타르트레이트, 프로프라놀롤, 아테놀롤, 아즈말린, 디소피라미드, 프라즈말린, 프로카인아미드, 퀴니딘, 스파르테인, 아프린딘, 리도카인, 멕실레틴, 토카미드, 엔카미드, 플레카미드, 로르카미드, 모리시진, 프로파페논, 아세부톨롤, 핀돌롤, 아미오다론, 브레틸륨 토실레이트, 부나프틴, 소탈롤, 아데노신, 아트로핀 및 디곡신;

알파-아드레날린성 효능제, 예를 들어 독사조신 메실레이트, 테라조손 및 프라조신;

베타-아드레날린성 차단제, 예를 들어 카르베딜롤, 프로프라놀롤, 티몰롤, 나돌롤, 아테놀롤, 메토프롤롤, 비소프롤롤, 네비볼롤, 베탁솔롤, 아세부톨롤 및 비소프롤롤;

알도스테론 길항제, 예를 들어 에플레레논 및 스피로놀락톤;

안지오텐신-전환 효소 억제제 ("ACE 억제제"), 예를 들어 모엑시프릴, 퀴나프릴 히드로클로라이드, 라미프릴, 리시노프릴, 베나제프릴 히드로클로라이드, 에날라프릴, 카프토프릴, 스피라프릴, 페린도프릴, 포시노프릴 및 트란돌라프릴;

안지오텐신 II 수용체 차단제 ("ARB"), 예를 들어 올메사르탄-메독소밀, 칸데사르탄, 발사르탄, 텔미사르탄, 이르베사르탄, 로사르탄 및 에프로사르탄;

엔도텔린 길항제, 예를 들어 테조센탄, 보센탄 및 시탁센탄-나트륨;

중성 엔도펩티다제 억제제, 예를 들어 칸독사트릴 및 에카도트릴;

포스포디에스테라제 억제제, 예를 들어 밀리논, 테오필린, 빈포세틴, EHNA (에리트로-9-(2-히드록시-3-노닐)아데닌), 실데나필, 바르데나필 및 타달라필;

섬유소용해제, 예를 들어 레테플라제, 알테플라제 및 테넥테플라제;

GP IIb/IIIa 길항제, 예를 들어 인테그릴린, 압식시맙 및 티로피반;

직접 트롬빈 억제제, 예를 들어 AZD0837, 아르가트로반, 비발리루딘 및 다비가트란;

간접 트롬빈 억제제, 예를 들어 오디파르실;

직접 및 간접 인자 Xa 억제제, 예를 들어 폰다파리눅스-나트륨, 아픽사반, 라작사반, 리바록사반 (BAY 59-7939), KFA-1982, DX-9065a, AVE3247, 오타믹사반 (XRP0673), AVE6324, SAR377142, 이드라파리눅스, SSR 126517, DB-772d, DT-831j, YM-150, 813893, LY517717 및 DU-1766;

직접 및 간접 인자 Xa/IIa 억제제, 예를 들어 에녹사파린-나트륨, AVE5026, SSR 128428, SSR 128429 및 BIBT-986 (타노기트란(Tanogitran));

지단백질-관련 포스포리파제 A2 ("LpPLA2") 조절제;

이뇨제, 예를 들어 클로르탈리돈, 에타크린산, 푸로세미드, 아밀로리드, 클로로티아지드, 히드로클로로티아지드, 메틸클로티아지드 및 벤즈티아지드;

니트레이트, 예를 들어 이소소르비드 5-모노니트레이트;

트롬복산 길항제, 예를 들어 세라트로다스트, 피코타미드 및 라마트로반;

혈소판 응집 억제제, 예를 들어 클로피도그렐, 티클로피딘, 실로스타졸, 아스피린, 압식시맙, 리마프로스트, 엡티피바티드 및 CT-50547;

시클로옥시게나제 억제제, 예를 들어 멜록시캄, 로페콕시브 및 셀레콕시브;

B-유형 나트륨이뇨 펩티드, 예를 들어 네시리티드 및 울라리티드;

NV1FGF 조절제, 예를 들어 XRP0038;

HT1B/5-HT2A 길항제, 예를 들어 SL65.0472;

구아닐레이트 시클라제 활성화제, 예를 들어 아타시구아트 (HMR1766), HMR1069, 리오시구아트 및 시나시구아트;

e-NOS 전사 인핸서, 예를 들어 AVE9488 및 AVE3085;

항아테롬형성 물질, 예를 들어 AGI-1067;

CPU 억제제, 예를 들어 AZD9684;

레닌 억제제, 예를 들어 알리스키린 및 VNP489;

아데노신 디포스페이트-유도된 혈소판 응집 억제제, 예를 들어 클로피도그렐, 티클로피딘, 프라수그렐, AZD6140, 티카그렐로르 및 엘리노그렐;

NHE-1 억제제, 예를 들어 AVE4454 및 AVE4890.

항생제 요법: 다양한 항생제 또는 항진균제 의약 조합은 (미생물 평가가 이루어지기 전의) 계산된 요법 또는 특이적 요법으로 적합함; 수액 요법, 예를 들어 결정질 또는 콜로이드성 유체; 혈압상승제, 예를 들어 노르에피네프린, 도파민 또는 바소프레신; 근수축 요법, 예를 들어 도부타민; 코르티코스테로이드, 예를 들어 히드로코르티손, 또는 플루드로코르티손; 재조합 인간 활성화 단백질 C, 자이그리스 (Xigris); 혈액 생성물, 예를 들어 적혈구 농축물, 혈소판 농축물, 에리트로포이에틴 또는 신선 동결 혈장; 패혈증-유도 급성 폐 손상 (ALI) 또는 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)에서의 보조 환기, 예를 들어 허용성 고탄산증, 낮은 일회 호흡량; 진정: 예를 들어, 디아제팜, 로라제팜, 미다졸람 또는 프로포폴. 오피오이드: 예를 들어, 펜타닐, 히드로모르폰, 모르핀, 메페리딘 또는 레미펜타닐. NSAID: 예를 들어 케토로락, 이부프로펜 또는 아세트아미노펜. 신경근육 차단: 예를 들어, 판쿠로늄; 글루코스 조절, 예를 들어 인슐린, 글루코스; 신장 대체 요법, 예를 들어 연속적 정맥간 혈액여과 또는 간헐적 혈액투석. 신장 보호를 위한 저용량 도파민; 항응고제, 예를 들어 혈전증 예방 또는 신장 대체 요법을 위한 항응고제, 예를 들어 미분획 헤파린, 저분자량 헤파린, 헤파리노이드, 히루딘, 비발리루딘 또는 아르가트로반; 비카르보네이트 요법; 스트레스 궤양 예방, 예를 들어 H2 수용체 억제제, 제산제.

증식성 장애를 위한 의약: 우라실, 클로르메틴, 시클로포스파미드, 이포스파미드, 멜팔란, 클로람부실, 피포브로만, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌티오포스포르아민, 부술판, 카르무스틴, 로무스틴, 스트렙토조신, 다카르바진, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실, 플록수리딘, 시타라빈, 6-메르캅토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 펜토스타틴, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 블레오마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신, 파클리탁셀, 미트라마이신, 데옥시코포르마이신, 미토마이신-C, L-아스파라기나제, 인터페론, 에토포시드, 테니포시드, 17.알파.-에티닐에스트라디올, 디에틸스틸베스트롤, 테스토스테론, 프레드니손, 플루옥시메스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 테스토락톤, 메게스트롤 아세테이트, 타목시펜, 메틸프레드니솔론, 메틸테스토스테론, 프레드니솔론, 트리암시놀론, 클로로트리아니센, 히드록시프로게스테론, 아미노글루테티미드, 에스트란루스틴, 메드록시프로게스트론 아세테이트, 류프롤리드, 플루타미드, 토레미펜, 고세렐린, 시스플라틴, 카르보플라틴, 히드록시우레아, 암사크린, 프로카르바진, 미토탄, 미톡산트론, 레바미솔, 나벨벤, 아나스트라졸, 레트라졸, 카페시타빈, 렐록사핀, 드롤록사핀, 헥사메틸멜라민, 옥살리플라틴 (엘록사틴(Eloxatin)^？), 이레사 (게프미티브, Zdl839), 젤로다(XELODA)^？ (카페시타빈), 타르세바(Tarceva)^？ (에를로티닙), 아자시티딘 (5-아자시티딘; 5-AzaC), 테모졸로미드 (테모다르(Temodar)^？), 겜시타빈 (예를 들어 겜자르(GEMZAR)^？ (겜시타빈 HCl)), 바소스타틴 또는 상기 2종 이상의 조합.

본 발명은 또한 항응고량의 본 발명의 화합물을 첨가하는 것을 특징으로 하는, 시험관내 혈액, 특히 보존된 혈액 또는 혈소판 함유 생물학적 샘플의 응고를 예방하는 방법을 제공한다.

본 발명의 화합물은 전신적으로 및/또는 국소적으로 작용할 수 있다. 이를 위해, 이를 적합한 방식으로, 예를 들어 경구, 비경구, 폐, 코, 설하, 설측, 협측, 직장, 피부, 경피, 결막 또는 귀 경로로, 또는 임플란트 또는 스텐트로서 투여할 수 있다.

본 발명의 화합물은 이러한 투여 경로에 적합한 투여 형태로 투여될 수 있다.

경구 투여에 적합한 투여 형태는, 선행기술에 따라 기능하고 본 발명의 화합물을 신속하게 전달하고/하거나 변형된 방식으로 전달하며, 본 발명의 화합물을 결정질 및/또는 무정형 및/또는 용해된 형태로 함유하는 투여 형태, 예를 들어 정제 (비코팅 또는 코팅 정제, 예를 들어 장용 코팅, 또는 불용성 또는 지연 용해성이며 본 발명의 화합물의 방출을 제어하는 코팅을 갖는 정제), 구강 내에서 신속하게 붕해되는 정제, 또는 필름/웨이퍼, 필름/동결건조물, 캡슐 (예를 들어, 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐), 당-코팅 정제, 과립, 펠릿, 분말, 에멀젼, 현탁액, 에어로졸 또는 용액이다.

비경구 투여는 흡수 단계 없이 (예를 들어, 정맥내, 동맥내, 심장내, 척수내 또는 요추내), 또는 흡수 단계를 포함하여 (예를 들어, 근육내, 피하, 피내, 경피 또는 복강내) 수행될 수 있다. 비경구 투여에 적합한 투여 형태는 용액, 현탁액, 에멀젼, 동결건조물 또는 멸균 분말 형태의 주사 및 주입을 위한 제제를 포함한다.

경구 투여가 바람직하다.

그밖의 투여 경로에 적합한 것은, 예를 들어, 흡입용 약제 형태 (특히, 분말 흡입기, 네뷸라이저), 점비제, 용액 또는 스프레이; 설측, 설하 또는 협측 투여용 정제, 필름/웨이퍼 또는 캡슐, 좌제, 귀 또는 눈을 위한 제제, 질 캡슐, 수성 현탁액 (로션, 진탕 혼합물), 친유성 현탁액, 연고, 크림, 경피 치료학적 시스템 (예를 들어, 패치), 유제, 페이스트, 발포제, 살포용 분말, 임플란트 또는 스텐트이다.

본 발명의 화합물은 언급된 투여 형태로 전환될 수 있다. 이는 공지된 방식 그 자체로 불활성, 비독성, 제약상 적합한 부형제와 혼합함으로써 수행될 수 있다. 이러한 부형제는 담체 (예를 들어, 미세결정질 셀룰로스, 락토스, 만니톨), 용매 (예를 들어, 액체 폴리에틸렌 글리콜), 유화제 및 분산제 또는 습윤제 (예를 들어, 나트륨 도데실술페이트, 폴리옥시소르비탄 올레에이트), 결합제 (예를 들어, 폴리비닐피롤리돈), 합성 및 천연 중합체 (예를 들어 알부민), 안정화제 (예를 들어 항산화제, 예를 들어 아스코르브산), 착색제 (예를 들어 무기 안료, 예를 들어 산화철) 및 향미 및/또는 냄새 차폐제를 포함한다.

본 발명은 또한 본 발명의 1종 이상의 화합물을 바람직하게는 1종 이상의 불활성이고 비독성인 제약상 적합한 부형제과 함께 포함하는 의약, 및 상기 언급된 목적을 위한 그의 용도를 제공한다.

비경구 투여의 경우에, 일반적으로 이는 효과적인 결과를 달성하기 위해 매 24시간마다 약 5 내지 250 mg의 양으로 투여하는 것이 유리하다는 것이 발견되었다. 경구 투여의 경우에, 양은 매 24시간마다 약 5 내지 100 mg이다.

그럼에도 불구하고, 특히 체중, 투여 경로, 활성 성분에 대한 개별 반응, 제제의 성질, 및 투여가 수행되는 시간 또는 간격에 따라 상기 명시한 양으로부터 벗어나는 것이, 적절한 경우, 필요할 수 있다.

달리 언급되지 않는 한, 하기 시험 및 실시예에서의 백분율은 중량 퍼센트이고, 부는 중량부이다. 액체/액체 용액의 용매 비, 희석 비, 및 농도 데이터는 각각 부피를 기준으로 한다. "w/v"는 "중량/부피"를 의미한다. 예를 들어, "10% w/v"는 용액 또는 현탁액 100 ml가 물질 10 g을 포함하는 것을 의미한다.

A) 실시예

약어:

approx. 대략

CDI 카르보닐디이미다졸

d 일, 이중선 (NMR에서)

TLC 박층 크로마토그래피

DCI 직접 화학 이온화 (MS에서)

dd 이중 이중선 (NMR에서)

DMAP 4-디메틸아미노피리딘

DMF N,N-디메틸포름아미드

DMSO 디메틸 술폭시드

DPPA 디페닐 포스포르아지데이트

DSC 디숙신이미딜 카르보네이트

eq. 당량

ESI 전기분무 이온화 (MS에서)

h 시간

HATU O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트

HPLC 고압, 고성능 액체 크로마토그래피

LC-MS 액체 크로마토그래피-결합 질량 분광분석법

LDA 리튬 디이소프로필아미드

m 다중선 (NMR에서)

min 분

MS 질량 분광분석법

NMR 핵 자기 공명 분광분석법

PYBOP 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(피롤리디노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트

q 사중선 (NMR에서)

RP 역상 (HPLC에서)

RT 실온

R_t 체류 시간 (HPLC에서)

s 단일선 (NMR에서)

t 삼중선 (NMR에서)

THF 테트라히드로푸란

HPLC 방법:

방법 1A: 기기: DAD 검출을 구비한 HP 1100; 칼럼: 크로마실(Kromasil) 100 RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 μm; 용리액 A: 5 ml 과염소산 (70%)/l 물, 용리액 B: 아세토니트릴; 구배: 0분 2% B → 0.5분 2% B → 4.5분 90% B → 6.5분 90% B → 6.7분 2% B → 7.5분 2% B; 유량: 0.75 ml/분; 칼럼 온도: 30℃; UV 검출: 210 nm.

LC-MS 방법:

방법 1B: MS 기기 유형: 마이크로매스(Micromass) ZQ; HPLC 기기 유형: HP 1100 시리즈; UV DAD; 칼럼: 페노메넥스 제미니(Phenomenex Gemini) 3 μ, 30 mm x 3.0 mm; 용리액 A: 물 1 l + 50% 포름산 0.5 ml, 용리액 B: 아세토니트릴 1 l + 50% 포름산 0.5 ml; 구배: 0.0분 90% A → 2.5분 30% A → 3.0분 5% A → 4.5분 5% A; 유량: 0.0분 1 ml/분, 2.5분/3.0분/4.5분 2 ml/분; 오븐: 50℃; UV 검출: 210 nm.

방법 2B: 기기: 워터스(Waters) UPLC 액퀴티(Acquity)가 장착된 마이크로매스 쿼트로프리미어(QuattroPremier); 칼럼: 써모 하이퍼실 골드(Thermo Hypersil GOLD) 1.9 μ, 50 mm x 1 mm; 용리액 A: 물 1 l + 50% 포름산 0.5 ml, 용리액 B: 아세토니트릴 1 l + 50% 포름산 0.5 ml; 구배: 0.0분 90% A → 0.1분 90% A → 1.5분 10% A → 2.2분 10% A; 오븐: 50℃; 유량: 0.33 ml/분; UV 검출: 210 nm.

방법 3B: MS 기기 유형: 마이크로매스 ZQ; HPLC 기기 유형: 워터스 알리안스(Alliance) 2795; 칼럼: 페노메넥스 시너지(Synergi) 2.5 μ MAX-RP 100A 머큐리(Mercury), 20 mm x 4 mm; 용리액 A: 물 1 l + 50% 포름산 0.5 ml, 용리액 B: 아세토니트릴 1 l + 50% 포름산 0.5 ml; 구배: 0.0분 90% A → 0.1분 90% A → 3.0분 5% A → 4.0분 5% A → 4.01분 90% A; 유량: 2 ml/분; 오븐: 50℃; UV 검출: 210 nm.

방법 4B: 기기: HPLC 애질런트(Agilent) 시리즈 1100이 장착된 마이크로매스 쿼트로 마이크로(Quattro Micro) MS; 칼럼: 써모 하이퍼실 골드 3 μ 20 mm x 4 mm; 용리액 A: 물 1 l + 50% 포름산 0.5 ml, 용리액 B: 아세토니트릴 1 l + 50% 포름산 0.5 ml; 구배: 0.0분 100% A → 3.0분 10% A → 4.0분 10% A → 4.01분 100% A → 5.00분 100% A; 오븐: 50℃; 유량: 2 ml/분; UV 검출: 210 nm.

방법 5B: 기기: 워터스 액퀴티 SQD UPLC 시스템; 칼럼: 워터스 액퀴티 UPLC HSS T3 1.8μ 50 mm x 1 mm; 용리액 A: 물 1 l + 99% 포름산 0.25 ml, 용리액 B: 아세토니트릴 1 l + 99% 포름산 0.25 ml; 구배: 0.0분 90% A → 1.2분 5% A → 2.0분 5% A; 오븐: 50℃; 유량: 0.40 ml/분; UV 검출: 210-400 nm.

방법 6B: MS 기기 유형: 워터스 (마이크로매스) 쿼트로 마이크로; HPLC 기기 유형: 애질런트 1100 시리즈; 칼럼: 써모 하이퍼실 골드 3μ 20 mm x 4 mm; 용리액 A: 물 1 l + 50% 포름산 0.5 ml, 용리액 B: 아세토니트릴 1 l + 50% 포름산 0.5 ml; 구배: 0.0분 100% A → 3.0분 10% A → 4.0분 10% A → 4.01분 100% A; (유량: 2.5 ml/분) → 5.00분 100% A; 오븐: 50℃; 유량: 2 ml/분; UV 검출: 210 nm.

방법 7B: MS 기기 유형: 워터스 ZQ; HPLC 기기 유형: 애질런트 1100 시리즈; UV DAD; 칼럼: 써모 하이퍼실 골드 3 μ 20 mm x 4 mm; 용리액 A: 물 1 l + 50% 포름산 0.5 ml; 용리액 B: 아세토니트릴 1 l + 50% 포름산 0.5 ml; 구배: 0.0분 100% A → 3.0분 10% A → 4.0분 10% A; 오븐: 55℃; 유량: 2 ml/분; UV 검출: 210 nm.

거울상이성질체의 정제용 분리:

방법 1D: 상: 다이셀 키랄팩(Daicel Chiralpak) AD-H, 5 ㎛ 250 mm x 20 mm, 용리액: 이소헥산/이소프로판올 25:75; 유량: 15 ml/분, 온도: 45℃; UV 검출: 220 nm.

방법 2D: 상: 다이셀 키랄팩 IA, 5 ㎛ 250 mm x 20 mm, 용리액: 메탄올/아세토니트릴 25:75; 유량: 15 ml/분, 온도: 30℃; UV 검출: 220 nm.

방법 3D: 상: 다이셀 키랄팩 IA, 5 ㎛ 250 mm x 20 mm, 용리액: 메탄올/아세토니트릴 50:50; 유량: 15 ml/분, 온도: 30℃; UV 검출: 220 nm.

방법 4D: 상: 다이셀 키랄팩 IA, 5 ㎛ 250 mm x 20 mm, 용리액: tert-부틸 메틸 에테르/메탄올 50:50; 유량: 15 ml/분; 온도: 30℃; UV 검출: 220 nm.

방법 5D: 상: 다이셀 키랄팩 IA, 5 ㎛ 250 mm x 20 mm, 용리액: 메탄올/아세토니트릴 25:75; 유량: 15 ml/분, 온도: 30℃; UV 검출: 220 nm.

방법 6D: 상: 다이셀 키랄팩 AD-H, 5 ㎛ 250 mm x 20 mm, 용리액: 이소헥산/에탄올 25:75; 유량: 15 ml/분, 온도: 45℃; UV 검출: 220 nm.

방법 7D: 상: 다이셀 키랄팩 AD-H, 5 ㎛ 250 mm x 20 mm, 용리액: 에탄올 100%; 유량: 15 ml/분, 온도: 45℃; UV 검출: 220 nm.

방법 8D: 상: 다이셀 키랄팩 AD-H, 5 ㎛ 250 mm x 20 mm, 용리액: 이소헥산/이소프로판올 30:70; 유량: 15 ml/분, 온도: 45℃; UV 검출: 220 nm.

방법 9D: 상: 다이셀 키랄팩 IA, 5 ㎛ 250 mm x 20 mm, 용리액: 아세토니트릴/메탄올 70:30; 유량: 15 ml/분, 온도: 30℃; UV 검출: 220 nm.

방법 10D: 상: 다이셀 키랄팩 IA, 5 ㎛ 250 mm x 20 mm, 용리액: 아세토니트릴/메탄올 70:30; 유량: 20 ml/분, 온도: 35℃; UV 검출: 210 nm.

방법 11D: 상: 다이셀 키랄팩 AD-H, 5 ㎛ 250 mm x 20 mm, 용리액: 이소헥산/에탄올 70:30; 유량: 15 ml/분, 온도: 40℃; UV 검출: 220 nm.

거울상이성질체의 분석용 분리:

방법 1E: 상: 다이셀 키랄팩 AD-H, 5 ㎛ 250 mm x 4 mm; 용리액: 이소프로판올/이소헥산: 75:25; 유량: 1 ml/분; 온도: 45℃; UV 검출: 220 nm.

방법 2E: 상: 다이셀 키랄팩 AD-H, 5 ㎛ 250 mm x 4.6 mm; 용리액: 이소헥산/이소프로판올 25:75 + 0.2% 트리플루오로아세트산 + 1% 물; 유량: 1 ml/분; 온도: 45℃; UV 검출: 235 nm.

방법 3E: 상: 다이셀 키랄팩 IA, 5 ㎛ 250 mm x 4.6 mm, 용리액: 아세토니트릴/메탄올 75:25; 유량: 1 ml/분; 온도: 25℃; UV 검출: 220 nm.

방법 4E: 상: 다이셀 키랄팩 IA, 5 ㎛ 250 mm x 4.6 mm, 용리액: 아세토니트릴/메탄올 50:50; 유량: 1 ml/분; 온도: 25℃; UV 검출: 220 nm.

방법 5E: 상: 다이셀 키랄팩 IA, 5 ㎛ 250 mm x 4.6 mm, 용리액: tert-부틸 메틸 에테르/메탄올 50:50; 유량: 1 ml/분; 온도: 25℃; UV 검출: 220 nm.

방법 6E: 상: 다이셀 키랄팩 AD-H, 5 ㎛ 250 mm x 4.6 mm, 용리액: 에탄올 100%; 유량: 1 ml/분, 온도: 45℃; UV 검출: 220 nm.

방법 7E: 상: 다이셀 키랄팩 AD-H, 5 ㎛ 250 mm x 4.6 mm, 용리액: 이소헥산/이소프로판올 30:70; 유량: 1 ml/분, 온도: 45℃; UV 검출: 220 nm.

방법 8E: 상: 다이셀 키랄팩 IA, 5 ㎛ 250 mm x 4.6 mm, 용리액: 아세토니트릴/메탄올 70:30; 유량: 15 ml/분, 온도: 25℃; UV 검출: 220 nm.

방법 9E: 상: 다이셀 키랄팩 IA, 5 ㎛ 250 mm x 4.6 mm, 용리액: 아세토니트릴/메탄올 70:30; 유량: 15 ml/분, 온도: 30℃; UV 검출: 220 nm.

방법 10E: 상: 다이셀 키랄팩 IA, 5 ㎛ 250 mm x 4.6 mm, 용리액: 아세토니트릴/메탄올 70:30; 유량: 1 ml/분, 온도: 30℃; UV 검출: 220 nm.

방법 11E: 상: 다이셀 키랄팩 AD-H, 5 ㎛ 250 mm x 4.6 mm, 용리액: 이소헥산/에탄올 25:75 + 0.2% 트리플루오로아세트산 + 1% 물; 유량: 1 ml/분, 온도: 45℃; UV 검출: 220 nm.

GC-MS 방법:

방법 1F: 기기: 마이크로매스 GCT, GC6890; 칼럼: 레스텍(Restek) RTX-35, 15 m x 200 ㎛ x 0.33 ㎛; 일정한 헬륨 유량: 0.88 ml/분; 오븐: 70℃; 유입구: 250℃; 구배: 70℃, 30℃/분 → 310℃ (3분 동안 유지).

이용한 마이크로웨이브 반응기는 엠리스(Emrys)^TM 옵티마이저 유형의 "단일 방식" 기기였다.

출발 화합물

일반적 방법 1A: N'-히드록시이미드아미드 형성

에탄올 (1.2 ml/mmol) 중 적절한 니트릴 (1.0 eq)의 용액을 실온에서 히드록실암모늄 클로라이드 (1.5 eq.) 및 트리에틸아민 (1.2 eq.)과 혼합하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 후처리를 위해, 에탄올을 감압 하에 제거하고, 탄산수소나트륨 포화 수용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 추가의 정제없이 반응시켰다.

일반적 방법 2A: N'-히드록시이미드아미드 형성

에탄올 (1.9 ml/mmol) 및 물 (0.5 ml/mmol)의 혼합물 중 적절한 니트릴 (1.0 eq)의 용액을 실온에서 히드록실암모늄 클로라이드 (1.08 eq.) 및 수산화나트륨 (1.12 eq.)과 혼합하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 후처리를 위해, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 디클로로메탄과 혼합하여 여과하였다. 여과액을 농축시키고, 잔류물을 추가의 정제없이 반응시켰다.

일반적 방법 3A: 스즈끼 커플링

톨루엔 (1.8 ml/mmol) 중 적절한 브로모피리딘의 혼합물을 실온에서 아르곤 하에 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 (0.02 eq.), 에탄올 (0.5 ml/mmol) 중 적절한 아릴보론산 (1.2 eq.)의 용액 및 물 (0.2 ml/mmol) 중 불화칼륨 (2.0 eq.)의 용액과 혼합하였다. 반응 혼합물을 전환이 실질적으로 완료될 때까지 수시간 동안 환류 하에 교반하였다. 에틸 아세테이트를 첨가하고, 상을 분리한 후, 유기 상을 물로 1회 세척하고, 염화나트륨 포화 수용액으로 1회 세척하고, 건조시키고 (황산마그네슘), 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔 60, 용리액: 디클로로메탄/메탄올 혼합물)에 의해 정제하였다.

일반적 방법 4A: 피리딘의 수소화

에탄올 (9 ml/mmol) 중 피리딘의 용액을 활성 탄소 상 팔라듐 (대략 50% 물로 습윤화됨, 0.3 g/mmol)과 아르곤 하에 혼합하고, 혼합물을 밤새 50 bar 수소 분위기에서 60℃에서 수소화시켰다. 이어서, 촉매를 여과 층을 통해 여과하고, 에탄올로 반복적으로 세척하였다. 합한 여과물을 감압 하에 농축시켰다.

일반적 방법 5A: 메틸 에스테르 가수분해/에피머화

실온에서, 칼륨 tert-부톡시드 (10 eq.)를 메탄올 (35 내지 40 ml/mmol) 중 적절한 메틸 에스테르 (1.0 eq.)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 밤새 교반하였다. 전환이 완료되지 않은 경우, 물 (1.0 eq.)을 첨가하고, 혼합물을 전환이 완료될 때까지 60℃에서 교반하였다. 후처리를 위해, 메탄올을 감압 하에 제거하고, 잔류물을 물과 혼합하고 혼합물을 1N 염산 수용액으로 산성화시켰다 (pH 1). 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 상을 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다.

일반적 방법 6A: 옥사디아졸 형성

디메틸포름아미드 (10 내지 20 ml/mmol) 중 적절한 피페리딘-3-카르복실산의 용액을 실온에서 아르곤 하에 HATU (1.2 eq.), N,N-디이소프로필에틸아민 (2.2 eq.) 및 적절한 N'-히드록시이미드아미드 (1.1 eq.)와 혼합하였다. 반응 혼합물을 중간체가 완전히 형성될 때까지 실온에서 교반한 다음, 목적 생성물이 이러한 중간체로부터 형성될 때까지 120℃에서 추가로 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다.

실시예 1A

N'-히드록시-3-메톡시프로판이미드아미드

일반적 방법 1A에 따라, 3-메톡시프로피오니트릴 20.0 g (235.0 mmol)을 반응시켰다. 수율: 18.1 g (이론치의 49%, 순도 74%)

실시예 2A

3-에톡시-N'-히드록시프로판이미드아미드

일반적 방법 2A에 따라, 3-에톡시프로피오니트릴 5.0 g (50.4 mmol)을 반응시켰다. 수율: 0.6 g (이론치의 8%, 순도 90%)

실시예 3A

N'-히드록시시클로프로판카르복스이미드아미드

일반적 방법 2A에 따라, 시클로프로판카르보니트릴 7.2 g (107.3 mmol)을 반응시켰다. 수율: 4.8 g (이론치의 44%)

실시예 4A

메틸 5-(4-에틸페닐)피리딘-3-카르복실레이트

일반적 방법 3A에 따라, 메틸 5-브로모니코티네이트 32 g (148 mmol) 및 4-에틸페닐보론산 27 g (178 mmol, 1.2 eq.)을 반응시켰다. 수율: 24 g (이론치의 64%)

실시예 5A

메틸 5-(4-에틸페닐)피페리딘-3-카르복실레이트 [라세미 시스/트랜스 이성질체 혼합물]

일반적 방법 4A에 따라, 메틸 5-(4-에틸페닐)피리딘-3-카르복실레이트 24 g (94 mmol)을 수소화시켰다. 수율: 20 g (이론치의 77%)

실시예 6A

메틸 5-(4-에틸페닐)-1-(티오모르폴린-4-일카르보닐)피페리딘-3-카르복실레이트 [라세미 시스/트랜스 이성질체 혼합물]

3-메틸 1-(4-니트로페닐) 5-(4-에틸페닐)피페리딘-1,3-디카르복실레이트 (실시예 30A) 5.00 g (12.1 mmol), 티오모르폴린 3.57 g (36.4 mmol) 및 탄산칼륨 5.03 g (36.4 mmol)을 DMF의 76 ml에 첨가하고, 단일-모드 마이크로웨이브 (엠리스 옵티마이저(Emrys Optimizer))에서 1.5시간 동안 150℃에서 5부분으로 나누어 가열하였다. 후처리를 위해, 반응 용액을 합하고 여과하고, 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 수율: 3.07 g (이론치의 67%)

실시예 7A

5-(4-에틸페닐)-1-(티오모르폴린-4-일카르보닐)피페리딘-3-카르복실산 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 5A에 따라, 실시예 6A로부터의 화합물 3.00 g (7.97 mmol) 및 칼륨 tert-부톡시드 8.94 g (79.7 mmol)을 반응시켰다. 반응은 시스 이성질체를 선택적으로 유도하였다. 수율: 2.74 g (이론치의 93%)

실시예 8A

{3-(4-에틸페닐)-5-[3-(2-메톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]피페리딘-1-일}(티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 6A에 따라, 실시예 7A로부터의 화합물 300 mg (0.828 mmol) 및 N'-히드록시-3-메톡시프로판이미드아미드 134 mg (0.910 mmol)을 반응시켰다. 수율: 185 mg (이론치의 49%)

실시예 9A

[3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-(4-에틸페닐)피페리딘-1-일](티오모르폴린-4-일)-메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 6A에 따라, 실시예 7A로부터의 화합물 300 mg (0.828 mmol) 및 N'-히드록시시클로프로판카르복스이미드아미드 91 mg (0.91 mmol)을 반응시켰다. 수율: 141 mg (이론치의 40%)

실시예 10A

{3-(4-에틸페닐)-5-[3-(2-히드록시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]피페리딘-1-일}(티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 6A에 따라, 실시예 7A로부터의 화합물 300 mg (0.828 mmol) 및 N',3-디히드록시프로판이미드아미드 112 mg (1.08 mmol) (문헌 [Graham A. Showell et al., J. Med. Chem., 1991, 34, 1086-1094])을 반응시켰다. 수율: 248 mg (이론치의 66%)

실시예 11A

{3-[3-(2-에톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-(4-에틸페닐)피페리딘-1-일}(티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 6A에 따라, 실시예 7A로부터의 화합물 600 mg (1.655 mmol) 및 3-에톡시-N'-히드록시프로판이미드아미드 355 mg (대략 2.152 mmol)을 반응시켰다. 수율: 389 mg (이론치의 49%)

실시예 12A

메틸 5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피리딘-3-카르복실레이트

일반적 방법 3A에 따라, 메틸 5-브로모니코티네이트 28 g (132 mmol) 및 4-트리플루오로메틸페닐보론산 30 g (158 mmol, 1.2 eq.)을 반응시켰다. 수율: 32 g (이론치의 85%)

실시예 13A

메틸 5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘-3-카르복실레이트 [라세미 시스/트랜스 이성질체 혼합물]

메틸 5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피리딘-3-카르복실레이트 (실시예 12A) 32 g (112 mmol)를 일반적 방법 4A에 따라 수소화시켰다. 수율: 26 g (이론치의 82%)

실시예 14A

3-메틸 1-(4-니트로페닐) 5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘-1,3-디카르복실레이트 [라세미 시스/트랜스 이성질체 혼합물]

메틸 5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘-3-카르복실레이트 (실시예 13A) 20.0 g (69.6 mmol)을 디클로로메탄의 1.0 l에 용해시키고, 트리에틸아민 14.1 g (139 mmol)과 0℃에서 혼합하였다. 다음에, 4-니트로페닐 클로로카르보네이트 14.0 g (69.6 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 0℃에서 및 이어서, 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 후처리를 위해, 혼합물을 탄산수소나트륨 포화 수용액으로 세척하였다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 이와 같이 하여, 조 생성물 31.3 g을 수득하였고, 이를 임의의 추가의 정제 단계 없이 반응시켰다.

실시예 15A

메틸 1-(티오모르폴린-4-일카르보닐)-5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘-3-카르복실레이트 [라세미 시스/트랜스 이성질체 혼합물]

3-메틸 1-(4-니트로페닐)-5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘-1,3-디카르복실레이트 10.0 g (22.1 mmol), 티오모르폴린 6.84 g (66.3 mmol) 및 탄산칼륨 9.17 g (66.3 mmol)을 DMF의 150 ml에 첨가하고, 단일-모드 마이크로웨이브 (엠리스 옵티마이저)에서 1시간 동안 150℃에서 10부분으로 나누어 가열하였다. 후처리를 위해, 반응 용액을 합하고 여과하고, 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 수율: 5.16 g (이론치의 55%)

실시예 16A

1-(티오모르폴린-4-일카르보닐)-5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘-3-카르복실산 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 5A에 따라, 실시예 15A로부터의 화합물 5.16 g (12.4 mmol) 및 칼륨 tert-부톡시드 13.9 g (124 mmol)을 반응시켰다. 반응은 시스 이성질체를 선택적으로 유도하였다. 수율: 4.90 g (이론치의 98%)

실시예 17A

{3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘-1-일}(티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 6A에 따라, 실시예 16A로부터의 화합물 600 mg (1.491 mmol) 및 N'-히드록시시클로프로판카르복스이미드아미드 164 mg (1.640 mmol)을 반응시켰다. 수율: 352 mg (이론치의 47%)

실시예 18A

{3-[3-(2-메톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘-1-일}-(티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 6A에 따라, 실시예 16A로부터의 화합물 600 mg (1.491 mmol) 및 N'-히드록시-3-메톡시프로판이미드아미드 242 mg (1.640 mmol)을 반응시켰다. 수율: 350 mg (이론치의 46%)

실시예 19A

{3-[3-(2-에톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘-1-일}-(티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 6A에 따라, 실시예 16A로부터의 화합물 600 mg (1.491 mmol) 및 3-에톡시-N'-히드록시프로판이미드아미드 320 mg (대략 1.983 mmol)을 반응시켰다. 수율: 343 mg (이론치의 46%)

실시예 20A

{3-[3-(2-히드록시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘-1-일}-(티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 6A에 따라, 실시예 16A로부터의 화합물 600 mg (1.491 mmol) 및 N',3-디히드록시프로판이미드아미드 201 mg (1.938 mmol)을 반응시켰다. 수율: 494 mg (이론치의 68%)

실시예 21A

메틸 5-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]피리딘-3-카르복실레이트

일반적 방법 3A에 따라, 메틸 5-브로모니코티네이트 23 g (105 mmol) 및 4-트리플루오로메톡시페닐보론산 26 g (126 mmol, 1.2 eq.)을 반응시켰다. 수율: 14 g (이론치의 41%)

대안적 합성:

톨루엔 (220 ml) 중 메틸 5-브로모니코티네이트 26 g (121 mmol)의 용액을 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 2.8 g (2.4 mmol)과 실온에서 아르곤 하에 혼합하고, 이어서, 에탄올 (58 ml) 중 4-트리플루오로메톡시페닐보론산 30 g (146 mmol)의 용액을 첨가하였다. 물 (58 ml) 중 불화칼륨 14 g (243 mmol)을 첨가한 후, 혼합물을 환류 하에 밤새 교반하고, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐의 추가 0.70 g (0.61 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 환류 하에 추가의 24시간 동안 교반하였다. 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐의 또 다른 1.4 g (1.2 mmol)을 첨가한 후, 혼합물을 환류 하에 20시간 동안 교반하고, 반응 용액을 에틸 아세테이트와 혼합하고, 물 및 염화나트륨 포화 수용액으로 세척하였다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 시클로헥산/디클로로메탄 1:1 → 디클로로메탄)에 의해 정제하였다. 수율: 31 g (이론치의 86%)

실시예 22A

메틸 5-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]피페리딘-3-카르복실레이트 [라세미 시스/트랜스 이성질체 혼합물]

에탄올 (500 ml) 중 메틸 5-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]피리딘-3-카르복실레이트 14 g (45 mmol)을 습윤 팔라듐/탄소 촉매 (10% 팔라듐, 50% 물) 17 g과 혼합하고, 60℃ 및 50 bar 수소 분위기에서 밤새 수소화시켰다. 반응 용액을 여과하고, 여과 잔류물을 에탄올로 세척하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 디클로로메탄/메탄올 600:1 → 10:1)에 의해 정제하였다. 수율: 8 g (이론치의 59%)

실시예 23A

3-메틸 1-(4-니트로페닐)-5-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]피페리딘-1,3-디카르복실레이트 [라세미 시스/트랜스 이성질체 혼합물]

0℃에서, 4-니트로페닐 클로로포르메이트 5.32 g (26.4 mmol)을 디클로로메탄 666 ml 중 메틸 5-(4-(트리플루오로메톡시)페닐)피페리딘-3-카르복실레이트 (실시예 22A) 8.0 g (26.4 mmol) 및 트리에틸아민 5.34 g (26.3 mmol)에 천천히 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 후처리를 위해, 반응 혼합물을 먼저 탄산수소나트륨 포화 수용액으로, 이어서 물로 세척하였다. 유기 상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (용리액: 시클로헥산/에틸 아세테이트 1:2 → 1:1)에 의해 정제하였다. 수율: 7.32 g (이론치의 54%)

실시예 24A

메틸 1-(티오모르폴린-4-일카르보닐)-5-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]피페리딘-3-카르복실레이트 [라세미 시스/트랜스 이성질체 혼합물]

3-메틸 1-(4-니트로페닐)-5-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]피페리딘-1,3-디카르복실레이트 12.0 g (25.1 mmol), 티오모르폴린 7.77 g (75.3 mmol) 및 탄산칼륨 10.4 g (75.3 mmol)을 DMF의 180 ml에 첨가하고, 단일-모드 마이크로웨이브 (엠리스 옵티마이저)에서 2시간 동안 150℃에서 12부분으로 나누어 가열하였다. 후처리를 위해, 반응 용액을 합하고 여과하고, 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 수율: 7.88 g (이론치의 73%)

실시예 25A

1-(티오모르폴린-4-일카르보닐)-5-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]피페리딘-3-카르복실산 [라세미 시스/트랜스 이성질체 혼합물]

칼륨 tert-부톡시드 20.4 g (182 mmol)을 메탄올 (650 ml) 중 실시예 24A로부터의 화합물 7.85 g (18.2 mmol)의 용액에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 밤새 60℃에서 교반하였다. 후처리를 위해, 메탄올을 감압 하에 제거하고, 잔류물을 물과 혼합하고, 혼합물을 1N 염산 수용액으로 산성화시켰다 (pH 1). 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 상을 황산마그네슘에 의해 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 반응을 통해 85:15 시스/트랜스 이성질체 혼합물를 수득하였다. 수율: 7.70 g (이론치의 99%)

실시예 26A

{3-[3-(2-메톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]피페리딘-1-일}-(티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 6A에 따라, 실시예 25A로부터의 화합물 600 mg (1.43 mmol) 및 N'-히드록시-3-메톡시프로판이미드아미드 232 mg (1.58 mmol)을 반응시켰다. 수율: 398 mg (이론치의 53%)

실시예 27A

{3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]피페리딘-1-일}(티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 6A에 따라, 실시예 25A로부터의 화합물 300 mg (0.717 mmol) 및 N'-히드록시시클로프로판카르복스이미드아미드 79 mg (0.789 mmol)을 반응시켰다. 수율: 135 mg (이론치의 39%)

대안적 합성:

디메틸포름아미드 (29.0 ml) 중 실시예 25A로부터의 화합물 600 mg (1.43 mmol)을 HATU 654 mg (1.72 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 0.55 ml (498 mg, 3.16 mmol)과 실온에서 혼합하고, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 다음에, N'-히드록시시클로프로판카르복스이미드아미드 158 mg (1.58 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응 용액을 120℃로 가열하고, 1시간 동안 이 온도에서 교반하였다. 후속적으로 반응 용액을 직접적으로 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 수율: 315 mg (이론치의 45%)

실시예 28A

{3-[3-(2-에톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]피페리딘-1-일}-(티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 6A에 따라, 실시예 25A로부터의 화합물 600 mg (1.434 mmol) 및 3-에톡시-N'-히드록시프로판이미드아미드 307 mg (대략 1.864 mmol)을 반응시켰다. 수율: 403 mg (이론치의 55%)

실시예 29A

{3-[3-(2-히드록시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]피페리딘-1-일}-(티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 6A에 따라, 실시예 25A로부터의 화합물 1.00 g (2.390 mmol) 및 N',3-디히드록시프로판이미드아미드 323 mg (3.107 mmol)을 반응시켰다. 수율: 848 mg (이론치의 69%)

실시예 30A

3-메틸 1-(4-니트로페닐) 5-(4-에틸페닐)피페리딘-1,3-디카르복실레이트 [라세미 시스/트랜스 이성질체 혼합물]

실시예 5A로부터의 화합물 3.0 g (12.1 mmol)을 처음에 디클로로메탄의 30 ml에 충전하고, 0℃로 냉각시키고, 트리에틸아민 3.4 ml (2.4 g, 12.1 mmol) 및 4-니트로페닐 클로로포르메이트 2.4 g (12.1 mmol)과 혼합하였다. 반응 혼합물을 실온에서 천천히 가온하고, 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 수회 물로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (용리액 디클로로메탄 → 디클로로메탄/메탄올 100:2)에 의해 정제하였다. 수율: 4.7 g (이론치의 83%, 순도 89%)

실시예 31A

4-니트로페닐 티오모르폴린-4-카르복실레이트

티오모르폴린 7.7 g (74.4 mmol)을 처음에 디클로로메탄 100 ml에 충전하고, 빙조에 의해 냉각시키면서, 트리에틸아민 20.7 ml (15.1 g, 148.8 mmol)과 혼합하였다. 4-니트로페닐 클로로포르메이트 10.0 g (49.6 mmol)을 나누어 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 물 및 에틸 아세테이트와 혼합하였다. 유기 상을 제거하고, 1N 염산 및 염화나트륨 포화 수용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 수율: 13.2 g (이론치의 99%)

실시예 32A

4-니트로페닐 티오모르폴린-4-카르복실레이트 1-옥시드

4-니트로페닐 티오모르폴린-4-카르복실레이트 13.1 g (49.0 mmol)을 처음에 디클로로메탄 135 ml에 충전하고, m-클로로퍼벤조산 7.6 g (44.1 mmol)을 나누어 0℃에서 혼합하였다. 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고, 물을 첨가하고, 유기 상을 제거하였다. 유기 상을 탄산수소나트륨 포화 수용액으로 신속하게 세척하고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 수율: 7.8 g (이론치의 56%)

실시예 33A

[5-(메톡시카르보닐)피리딘-3-일]보론산 히드로클로라이드

메틸 5-브로모니코티네이트 17.6 g (81.4 mmol)을 초기에 아르곤 하에 DMF 375 ml 중에 충전하고, 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비-1,3,2-디옥사보롤란 26.9 g (105.8 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) 3.0 g (3.6 mmol), 트리시클로헥실포스핀 1.8 g (6.5 mmol) 및 아세트산칼륨 32.0 mmol (325.9 mmol)과 혼합하였다. 반응 혼합물을 20시간 동안 100℃에서 교반하였다. 후속적으로, 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 물 40 ml 및 tert-부틸 메틸 에테르 140 ml와 혼합하고, 유기 상을 제거하였다. 수성 상을 tert-부틸 메틸 에테르로 각 경우에 80 ml로 3회 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염화나트륨 포화 수용액으로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 메탄올 360 ml 중에 녹이고, 진한 염산 36 ml와 혼합하였다. 반응 혼합물을 22시간 동안 환류로 가열한 다음, 12시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매의 약 절반을 감압 하에 제거하고, 용액을 여과하고 추가로 감압 하에 농축시켰다. 유성 잔류물을 아세톤으로부터 2회 재결정하고, 잔류물을 아세톤의 10 ml 중에 녹이고, tert-부틸 메틸 에테르 100 ml와 혼합하였다. 16 시간 후, 형성된 침전물을 용액으로부터 제거하였다. 이 침전물을 아세톤 50 ml 중에서 교반하고 5 주 동안 실온에서 정치시키고, 용액을 다시 제거하였다. 용액을 합하고, 농축시키고 tert-부틸-메틸 에테르 50 ml에 용해시켰다. 혼합물을 5 주 동안 실온에서 정치시키고, 이어서 침전물을 제거하였다. 침전물을 tert-부틸 메틸 에테르로 3회 세척하고, 건조 캐비닛에서 감압 하에 건조시켰다.

실시예 34A

메틸 5-[4-(디플루오로메톡시)페닐]니코티네이트

4-(디플루오로메톡시)브로모벤젠 10.0 g (44.8 mmol)을 일반적 방법 3A에 따라 [5-(메톡시카르보닐)피리딘-3-일]보론산 히드로클로라이드 14.6 g (67.3 mmol)과 반응시켰다. 히드로클로라이드의 방출은 탄산칼륨 6.80 g (49.3 mmol)의 추가적 첨가에 의해 이루어졌다. 수율: 8.6 g (이론치의 67%)

실시예 35A

메틸 5-[4-(디플루오로메톡시)페닐]피페리딘-3-카르복실레이트 [라세미 시스/트랜스 이성질체 혼합물]

진한 아세트산 (112 ml) 중 메틸 5-[4-(디플루오로메톡시)페닐]니코티네이트 8.6 g (30.9 mmol)의 용액을 팔라듐/탄소 (10% 팔라듐) 841 mg 및 백금(IV) 옥시드 1.12 g과 혼합하였다. 이후 이를 24시간 동안 표준압에서 수소 분위기 하에 수소화시켰다. 반응 용액을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 물 중에 녹이고, 1N 염산으로 산성화시키고 (pH 1), 디에틸 에테르로 추출하고, 이어서 탄산수소나트륨 포화 수용액으로 염기성화시키고 (pH > 10), 에틸 아세테이트로 반복적으로 추출하였다. 합한 여과물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 수율: 6.6 g (이론치의 74%)

실시예 36A

메틸 5-[4-(디플루오로메톡시)페닐]-1-[(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일)카르보닐]피페리딘-3-카르복실레이트 [시스/트랜스 이성질체 혼합물]

메틸 5-[4-(디플루오로메톡시)페닐]피페리딘-3-카르복실레이트 2.2 g (7.7 mmol)을 N-메틸피롤리돈 14 ml에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민 4.0 ml (3.0 g, 23.0 mmol) 및 4-니트로페닐 티오모르폴린-4-카르복실레이트 1,1-디옥시드 3.5 g (11.5 mmol)과 혼합하였다. 반응 혼합물을 7분 동안 180℃에서 마이크로웨이브에서 전환시켰다. 후속적으로, 물 및 에틸 아세테이트를 첨가하고, 수성 상을 제거하고, 에틸 아세테이트로 반복적으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물 및 염화나트륨 포화 수용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 디에틸 에테르 중에 녹이고 여과하고, 여과물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 수율: 2.0 g (이론치의 51%)

실시예 37A

5-[4-(디플루오로메톡시)페닐]-1-[(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일)카르보닐]피페리딘-3-카르복실산 [라세미 시스 이성질체 혼합물]

일반적 방법 4A에 따라, 메틸 5-[4-(디플루오로메톡시)페닐]-1-[(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일)카르보닐]피페리딘-3-카르복실레이트 2.7 g (6.1 mmol)를 칼륨 tert-부톡시드 6.9 g (61.3 mmol)과 반응시켰다. 수율: 2.1 g (이론치의 77%)

실시예 38A

메틸 5-[4-(디플루오로메톡시)페닐]-1-[(1-옥시도티오모르폴린-4-일)카르보닐]피페리딘-3-카르복실레이트 [시스/트랜스 이성질체 혼합물]

메틸 5-[4-(디플루오로메톡시)페닐]피페리딘-3-카르복실레이트 2.2 g (7.7 mmol)을 N-메틸피롤리돈 14 ml에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민 4.0 ml (3.0 g, 23.0 mmol) 및 4-니트로페닐 티오모르폴린-4-카르복실레이트 1-옥시드 3.3 g (11.5 mmol)과 혼합하였다. 반응 혼합물을 7분 동안 180℃에서 마이크로웨이브에서 전환시켰다. 후속적으로, 물 및 에틸 아세테이트를 첨가하고, 수성 상을 제거하고 에틸 아세테이트로 반복적으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물 및 염화나트륨 포화 수용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 수율: 2.2 g (이론치의 59%)

실시예 39A

5-[4-(디플루오로메톡시)페닐]-1-[(1-옥시도티오모르폴린-4-일)카르보닐]피페리딘-3-카르복실산 [라세미 시스 이성질체 혼합물]

일반적 방법 4A에 따라, 메틸 5-[4-(디플루오로메톡시)페닐]-1-[(1-옥시도티오모르폴린-4-일)카르보닐]피페리딘-3-카르복실레이트 2.7 g (6.3 mmol)을 칼륨 tert-부톡시드 7.1 g (63.3 mmol)과 반응시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 물 중에 현탁시키고, 진한 염산으로 산성화시켰다. 침전물을 여과하고, 물로 세척하고, 감압 하에 건조시켰다. 수율: 1.1 g (이론치의 34%)

실시예 40A

1-브로모-4-(2,2,2-트리플루오로에틸)벤젠

1-메틸-2-피롤리돈 (121 ml) 중 4-브로모벤질 브로마이드 25.0 g (100 mmol)의 용액을 구리(I) 요오다이드 4.95 g (26.0 mmol) 및 메틸 2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)아세테이트 37.5 g (195 mmol)과 실온에서 혼합하였다. 혼합물을 80℃로 가열한 다음, 밤새 교반하였다. 반응 용액을 물에 첨가하고 디에틸 에테르로 추출하고, 유기 상을 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 유기 상을 여과하고 감압 하에 농축시킨 후, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 시클로헥산/에틸 아세테이트 20:1)에 의해 정제하였다. 수율: 16.1 g (이론치의 67%)

실시예 41A

메틸 5-[4-(2,2,2-트리플루오로에틸)페닐]니코티네이트

톨루엔 (304 ml) 중 실시예 40A로부터의 화합물 8.00 g (33.5 mmol)의 용액을 에탄올 (100 ml) 중 실시예 33A로부터의 화합물 10.9 g (50.2 mmol) 및 탄산칼륨 5.10 g (36.8 mmol)과 실온에서 아르곤 하에 혼합하였다. 10분 동안 교반한 후, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 3.87 g (3.35 mmol), 및 이어서 물 (64 ml) 중 불화칼륨 5.83 g (100 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 환류 하에 8 시간 동안 교반하고 반응 용액을 냉각시키고 에틸 아세테이트로 희석하였다. 반응 용액을 물로 세척하고, 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 디클로로메탄/메탄올 100:1 → 80:1)에 의해 정제하였다. 수율: 9.20 g (이론치의 69%, 순도 75%)

실시예 42A

메틸 5-[4-(2,2,2-트리플루오로에틸)페닐]피페리딘-3-카르복실레이트 [라세미 시스/트랜스 이성질체 혼합물]

진한 아세트산 (192 ml) 중 실시예 41A로부터의 화합물 9.20 g (23.4 mmol)의 용액을 팔라듐/탄소 (10% 팔라듐) 1.94 g 및 백금 (IV)옥시드 2.23 g과 혼합하였다. 이후 이를 6시간 동안 표준압에서 수소 분위기 하에 수소화시키고, 이어서 추가로 팔라듐/탄소 (10% 팔라듐) 1.00 g 및 백금(IV) 옥시드 2.00 g를 첨가하고, 밤새 표준압에서 수소 분위기 하에 수소화시켰다. 후속적으로, 추가로 팔라듐/탄소 (10% 팔라듐) 1.00 g 및 백금(IV) 옥시드 3.00 g을 첨가하고, 추가 24시간 동안 표준압에서 수소 분위기 하에 수소화를 수행하였다. 반응 용액을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과 잔류물을 메탄올/물로 세척하고 합한 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄 중에 녹이고, 이어서 1N 탄산나트륨 수용액으로 세척하였다. 유기 상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 수율: 6.64 g (이론치의 85%, 순도 90%)

실시예 43A

3-메틸 1-(4-니트로페닐) 5-[4-(2,2,2-트리플루오로에틸)페닐]피페리딘-1,3-디카르복실레이트 [라세미 시스/트랜스 이성질체 혼합물]

디클로로메탄 (211 ml) 중 실시예 42A로부터의 화합물 6.62 g (19.8 mmol, 순도 90%)의 용액을 트리에틸아민 9.65 ml (7.00 g, 69.2 mmol)와 혼합한 다음, 4-니트로페닐 클로로포르메이트 3.99 g (19.8 mmol)과 0℃에서 혼합하였다. 혼합물을 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 탄산수소나트륨 포화 수용액 및 물로 세척하고, 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 수율: 10.3 g (이론치의 91%, 순도 81%)

실시예 44A

메틸 1-(티오모르폴린-4-일카르보닐)-5-[4-(2,2,2-트리플루오로에틸)페닐]피페리딘-3-카르복실레이트 [라세미 시스/트랜스 이성질체 혼합물]

1-메틸-2-피롤리돈 (65 ml) 중 실시예 43A로부터의 화합물 10.3 g (17.9 mmol, 순도 81%)의 용액을 티오모르폴린 12.6 ml (13.7 g, 132 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 11.5 ml (8.56 g, 66.2 mmol)와 혼합한 다음, 1시간 동안 150℃에서 단일-모드 마이크로웨이브 (엠리스 옵티마이저)에서 5부분으로 나누어 가열하였다. 후처리를 위해, 반응 용액을 합하고 정제용 HPLC를 사용하여 직접 정제하였다. 수율: 5.63 g (이론치의 71%)

실시예 45A

1-(티오모르폴린-4-일카르보닐)-5-[4-(2,2,2-트리플루오로에틸)페닐]피페리딘-3-카르복실산 [라세미 시스 이성질체]

칼륨 tert-부톡시드 7.74 g (69.0 mmol)을 메탄올 (83 ml) 중 실시예 44A로부터의 화합물 2.97 g (6.90 mmol)의 용액에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 밤새 60℃에서 교반하였다. 후처리를 위해, 메탄올을 감압 하에 제거하고, 잔류물을 물과 혼합하고, 혼합물을 1N 염산 수용액으로 산화시켰다 (pH 1). 혼합물을 에틸 아세테이트 추출하고, 유기 상을 황산마그네슘에 의해 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 수율: 2.61 g (이론치의 76%, 순도 84%)

실시예 46A

{3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-[4-(2,2,2-트리플루오로에틸)페닐]피페리딘-1-일}-(티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 6A에 따라, 실시예 45A로부터의 화합물 300 mg (0.720 mmol) 및 N'-히드록시시클로프로판카르복스이미드아미드 79.3 mg (0.792 mmol)을 반응시켰다. 수율: 160 mg (이론치의 45%)

실시예 47A

{3-[3-(2-메톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(2,2,2-트리플루오로에틸)페닐]피페리딘-1-일}-(티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 6A에 따라, 실시예 45A로부터의 화합물 300 mg (0.720 mmol) 및 N'-히드록시-3-메톡시프로판이미드아미드 93.6 mg (0.792 mmol)을 반응시켰다. 수율: 231 mg (이론치의 63%, 대략 15% 트랜스 이성질체)

실시예 48A

1-브로모-4-(1,1-디플루오로에틸)벤젠

테트라히드로푸란 (20 ml) 중 4-브로모아세토페논 10.0 g (50.2 mmol)의 용액을 비스(2-메톡시에틸)아미노황 트리플루오라이드 (데옥소플루오르(Deoxofluor)) 50.0 ml (151 mmol, 테트라히드로푸란 중 50%) 및 메탄올 3 방울과 혼합한 다음, 환류 하에 4일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 탄산수소나트륨 포화 수용액 및 얼음의 혼합물 (1:1)에 조심스럽게 적가하고, 이어서 디에틸 에테르로 추출하였다. 유기 상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르/디클로로메탄 3:1)에 의해 정제하였다. 수율: 8.46 g (이론치의 76%)

실시예 49A

메틸 5-[4-(1,1-디플루오로에틸)페닐]니코티네이트

톨루엔 (25.0 ml) 중 실시예 48A로부터의 화합물 2.98 g (13.3 mmol)의 용액을 에탄올 (8.4 ml) 중 실시예 33A로부터의 화합물 3.62 g (16.7 mmol) 및 탄산칼륨 2.03 g (14.7 mmol)과 실온에서 아르곤 하에 혼합하였다. 10분 동안 교반한 후, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 1.54 g (1.34 mmol) 및 이어서 물 (5.8 ml) 중 불화칼륨 2.33 g (40.0 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 환류 하에 8 시간 동안 교반하고, 반응 용액을 냉각시키고 에틸 아세테이트로 희석하였다. 반응 용액을 물로 세척하고, 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 디클로로메탄/메탄올 100:1 → 80:1)에 의해 정제하였다. 수율: 2.62 g (이론치의 69%, 메틸 및 에틸 에스테르의 4:1 혼합물)

실시예 50A

메틸 5-[4-(1,1-디플루오로에틸)페닐]피페리딘-3-카르복실레이트 [라세미 시스/트랜스 이성질체 혼합물]

메탄올 (52 ml) 중 실시예 49A로부터의 화합물 2.30 g (8.30 mmol)의 용액 및 진한 염화수소 용액 (6.5 ml)을 팔라듐/탄소 (10% 팔라듐) 1.05 g 및 백금(IV) 옥시드 1.92 g과 혼합하고, 이어서 밤새 표준압에서 수소 분위기에서 수소화시켰다. 반응 용액을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과 잔류물을 메탄올/물로 세척하고, 합한 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄 중에 녹이고, 이어서 1N 탄산나트륨 수용액으로 세척하였다. 유기 상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 수율: 2.30 g (이론치의 81%, 순도 82%)

실시예 51A

3-메틸 1-(4-니트로페닐) 5-[4-(1,1-디플루오로에틸)페닐]피페리딘-1,3-디카르복실레이트 [라세미 시스/트랜스 이성질체 혼합물]

디클로로메탄 (44 ml) 중 실시예 50A로부터의 화합물 1.30 g (3.78 mmol, 순도 82%)의 용액을 트리에틸아민 1.84 ml (1.34 g, 13.2 mmol)와 혼합하고, 이어서 0℃에서 4-니트로페닐 클로로포르메이트 762 mg (3.78 mmol)과 혼합하였다. 혼합물을 실온으로 가온하고, 2 일 동안 교반하였다. 반응 용액을 탄산수소나트륨 포화 수용액 및 물로 세척하고, 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 수율: 1.93 g (이론치의 92%, 순도 81%, 메틸 및 에틸 에스테르의 2:1 혼합물)

실시예 52A

메틸 5-[4-(1,1-디플루오로에틸)페닐]-1-(티오모르폴린-4-일카르보닐)피페리딘-3-카르복실레이트 [라세미 시스/트랜스 이성질체 혼합물]

1-메틸-2-피롤리돈 (18 ml) 중 실시예 51A로부터의 화합물 1.94 g (3.50 mmol, 순도 81%)의 용액을 티오모르폴린 1.99 ml (2.17 g, 21.0 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 1.83 ml (1.36 g, 10.5 mmol)와 혼합한 다음, 45분 동안 150℃에서 단일-모드 마이크로웨이브 (엠리스 옵티마이저)에서 3부분으로 나누어 가열하였다. 후처리를 위해, 반응 용액을 합하고 정제용 HPLC에 의해 직접 정제하였다. 수율: 530 mg (이론치의 34%)

실시예 53A

5-[4-(1,1-디플루오로에틸)페닐]-1-(티오모르폴린-4-일카르보닐)피페리딘-3-카르복실산 [라세미 시스/트랜스 이성질체 혼합물]

칼륨 tert-부톡시드 1.44 g (12.8 mmol)을 메탄올 15 ml 중 실시예 52A로부터의 화합물 528 mg (1.28 mmol)의 용액에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 밤새 60℃에서 교반하였다. 후처리를 위해, 메탄올을 감압 하에 제거하고, 잔류물을 물과 혼합하고, 혼합물을 1N 염산 수용액으로 산화시켰다 (pH 1). 혼합물을 에틸 아세테이트 추출하고, 유기 상을 황산마그네슘에 의해 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 수율: 471 mg (이론치의 91%, 2:1 시스/트랜스 이성질체 혼합물)

실시예 54A

{3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-[4-(1,1-디플루오로에틸)페닐]피페리딘-1-일}-(티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 6A에 따라, 실시예 53A로부터의 화합물 150 mg (0.376 mmol) 및 N'-히드록시시클로프로판카르복스이미드아미드 41.5 mg (0.414 mmol)을 반응시켰다. 수율: 77.9 mg (이론치의 44%)

실시예 55A

메틸 5-[4-(2-히드록시에틸)페닐]니코티네이트

일반적 방법 3A에 따라, 2-(4-브로모페닐)에탄올 6.00 g (29.8 mmol) 및 메틸 5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)니코티네이트 19.6 g (74.6 mmol)을 반응시켰다. 수율: 6.12 g (이론치의 74%)

실시예 56A

메틸 5-[4-(2-히드록시에틸)페닐]피페리딘-3-카르복실레이트 [라세미 시스/트랜스 이성질체 혼합물]

진한 아세트산 (124 ml) 중 실시예 55A로부터의 화합물 5.40 g (19.6 mmol)의 용액을 팔라듐/탄소 (10% 팔라듐) 1.00 g 및 백금(IV) 옥시드 1.00 g과 혼합하였다. 그후에 수소 분위기 하에 표준압에서 6시간 동안 수소화시키고, 다음에 팔라듐/탄소 (10% 팔라듐)의 또 다른 1.00 g 및 백금(IV) 옥시드 1.00 g을 첨가하고, 수소 분위기 하에 표준압에서 밤새 수소화시켰다. 그후에 파르 장치에서 3 bar의 수소 분위기 하에 추가의 2시간 동안 수소화시켰다. 반응 용액을 셀라이트로 여과하고, 여과 잔류물을 메탄올/물로 세척하고, 합한 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 톨루엔으로 반복적으로 공증류시켰고, 이어서, 고진공 하에 건조시켰다. 수율: 6.63 g (이론치의 56%, 순도 44%)

실시예 57A

메틸 1-아세틸-5-[4-(2-히드록시에틸)페닐]피페리딘-3-카르복실레이트 [라세미 시스/트랜스 이성질체 혼합물]

디클로로메탄 (80 ml) 중 실시예 56A로부터의 화합물 5.58 g (9.33 mmol, 순도 44%)의 용액을 트리에틸아민 2.60 ml (1.89 g, 18.7 mmol)과 혼합한 다음, 0℃로 냉각시켰다. 이 온도에서, 아세틸 클로라이드 0.33 ml (0.37 g, 4.67 mmol)를 적가하고, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 아세틸 클로라이드의 추가의 0.13 ml (0.15 g, 1.86 mmol)을 첨가하고, 혼합물은 1시간 동안 교반하였다. 다음에, 반응 용액을 수성 1N 염산으로 세척하고, 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 디클로로메탄/메탄올 30:1)에 의해 정제하고, 수득된 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 한번 더 정제하였다. 수율: 1.17 g (이론치의 41%)

실시예 58A

메틸 1-아세틸-5-[4-(2,2-디플루오로에틸)페닐]피페리딘-3-카르복실레이트 [라세미 시스/트랜스 이성질체 혼합물]

디클로로메탄 (20.8 ml) 중 실시예 57A로부터의 화합물 631 mg (2.05 mmol)의 용액을 디메틸 술폭시드 1.45 ml (1.60 g, 20.5 mmol) 및 N,N-디이소프로필아민 1.78 ml (1.32 g, 10.2 mmol)과 혼합하였다. 다음에, 황 트리옥시드-피리딘 1.30 g (8.18 mmol)을 -20℃에서 첨가하고, 혼합물을 밤새 교반하였고, 그 과정에서 혼합물이 서서히 실온으로 가온되었다. 반응 용액을 디클로로메탄으로 희석하고, 유기 상을 물로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 다음에, 조 생성물 (778 mg)을 먼저 디클로로메탄 (5.2 ml)에 충전하고, 디에틸아미노황 트리플루오라이드 (DAST) 0.50 ml (615 mg, 3.81 mmol)를 실온에서 적가하였다. 혼합물을 4시간 동안 실온에서 교반한 다음, 조심스럽게 2N 탄산나트륨 수용액을 첨가하여 반응을 종료시켰다. 상 분리 후, 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 수율: 120 mg (이론치의 24%, 순도 61%, 대략 2:1 시스/트랜스 이성질체 혼합물)

실시예 59A

1-아세틸-5-[4-(2,2-디플루오로에틸)페닐]피페리딘-3-카르복실산 [라세미 시스 이성질체]

칼륨 tert-부톡시드 410 mg (3.65 mmol)을 메탄올 (6.9 ml) 중 실시예 58A로부터의 화합물 205 mg (0.365 mmol, 순도 61%)의 용액에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 밤새 60℃에서 교반하였다. 후처리를 위해, 메탄올을 감압 하에 제거하고, 잔류물을 물과 혼합하고, 혼합물을 1N 염산 수용액으로 산화시켰다 (pH 1). 혼합물을 에틸 아세테이트 추출하고, 유기 상을 황산마그네슘에 의해 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 수율: 153 mg (이론치의 67%, 순도 50%)

실시예 60A

1-{3-[4-(2,2-디플루오로에틸)페닐]-5-[3-(2-메톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]피페리딘-1-일}-에타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 6A에 따라, 실시예 59A로부터의 화합물 153 mg (0.270 mmol, 순도 50%) 및 N'-히드록시-3-메톡시프로판이미드아미드 41.3 mg (0.297 mmol, 순도 85%)을 반응시켰다. 수율: 46.6 mg (이론치의 32%, 순도 72%)

실시예 61A

3-[4-(2,2-디플루오로에틸)페닐]-5-[3-(2-메톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]피페리딘 [라세미 시스 이성질체]

에탄올 (10.0 ml) 중 실시예 60A로부터의 화합물 45.0 mg (0.083 mmol, 순도 72%)의 용액을 진한 염산의 69 μl (15 mg, 0.42 mmol)와 혼합하였다. 다음에, 혼합물을 환류 하에 24시간 동안 교반하고, 반응 용액을 물로 희석하고 디에틸 에테르로 세척하였다. 수성 상을 알칼리화시키고 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 수율: 36.3 mg (이론치의 87%, 순도 70%)

실시예 62A

4-니트로페닐 3-[4-(2,2-디플루오로에틸)페닐]-5-[3-(2-메톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]피페리딘-1-카르복실레이트 [라세미 시스 이성질체]

디클로로메탄 (2.0 ml) 중 실시예 61A로부터의 화합물 36.3 mg (0.061 mmol, 순도 70%)의 용액을 트리에틸아민 0.03 ml (21.6 mg, 0.21 mmol)와 혼합하고, 이어서, 4-니트로페닐 클로로포르메이트 12.3 mg (0.061 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반한 다음, 반응 용액을 탄산수소나트륨 포화 수용액 및 물로 세척하고, 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 수율: 56.2 mg (이론치의 91%, 순도 60%)

실시예 63A

{3-[4-(2,2-디플루오로에틸)페닐]-5-[3-(2-메톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]피페리딘-1-일}(티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

1-메틸-2-피롤리돈 (2.0 ml) 중 실시예 62A로부터의 화합물 56.0 mg (0.065 mmol, 순도 60%)의 용액을 티오모르폴린 37.0 μl (40.0 mg, 0.390 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 34.0 μl (25.0 mg, 0.195 mmol)와 혼합한 다음, 30분 동안 150℃에서 단일-모드 마이크로웨이브 (엠리스 옵티마이저)에서 가열하였다. 후처리를 위해, 반응 용액을 합하고 직접적으로 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 수율: 14.7 mg (이론치의 47%)

실시예 64A

N'-히드록시-1-메톡시시클로프로판카르복스이미드아미드

테트라히드로푸란 (22.7 ml) 중 1-메톡시시클로프로판카르복스아미드 (문헌 [L. N. Owen, H. M. Babatunde Somade, J. Chem. Soc. 1947, 1030-1034]) 100 mg (1.03 mmol)을 메틸 N-(트리에틸암모늄술포닐)카르바메이트 (버지스(Burgess) 시약) 1.51 g (6.08 mmol)과 혼합한 다음, 1.5시간 동안 60℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄 및 물과 혼합하고, 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다 (조 생성물 637 mg). 조 생성물 100 mg을 처음에 에탄올 (1.2 ml)에 충전하고, 히드록실암모늄 클로라이드 107 mg (1.55 mmol) 및 트리에틸아민 0.17 ml (125 mg, 1.24 mg)와 혼합한 다음, 환류 하에 밤새 교반하였다. 반응 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 염화나트륨 포화 수용액과 혼합하고, 이어서 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 다음에 에틸 아세테이트에 의해 교반하고, 불용성 염을 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 수율: 32.3 mg (이론치의 23%)

실시예 65A

{3-[3-(1-메톡시시클로프로필)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(2,2,2-트리플루오로에틸)페닐]피페리딘-1-일}(티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 6A에 따라, 실시예 45A로부터의 화합물 93.1 mg (0.224 mmol) 및 실시예 64A로부터의 N'-히드록시-1-메톡시시클로프로판카르복스이미드아미드 32.0 mg (0.246 mmol)을 반응시켰다. 수율: 31.1 mg (이론치의 27%)

실시예 66A

4-니트로페닐 티오모르폴린-4-카르복실레이트 1,1-디옥시드

티오모르폴린 1,1-디옥시드 히드로클로라이드 17.0 g (99.2 mmol)을 처음에 디클로로메탄 100 ml에 충전하고, 빙조에 의해 냉각시키면서, 트리에틸아민 20.7 ml (15.1 g, 148.8 mmol)와 혼합하였다. 4-니트로페닐 클로로포르메이트 10.0 g (49.6 mmol)을 나누어 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반하고, 물 및 에틸 아세테이트와 혼합한 다음, 여과하였다. 잔류물을 고진공 하에 건조시켰다. 수율: 12.4 g (이론치의 83%)

작업 실시예

일반적 방법 1: 술폭시드 형성

디클로로메탄 (대략 20-40 ml/mmol) 중 적절한 티오에테르 (1.0 eq)의 용액을 50% 메타-클로로퍼옥시벤조산 (0.9-1.0 eq.)과 실온에서 혼합하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다.

일반적 방법 2: 술폰 형성

디클로로메탄 (대략 20-40 ml/mmol) 중 적절한 티오에테르 (1.0 eq)의 용액을 50% 메타-클로로퍼옥시벤조산 (2.5 eq.)과 실온에서 혼합하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다.

실시예 1

{3-[3-(2-메톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]피페리딘-1-일}-(옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 1에 따라, 실시예 26A로부터의 화합물 100 mg (0.200 mmol)을 반응시켰다. 수율: 90 mg (이론치의 87%)

실시예 2

{3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]피페리딘-1-일}(1-옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 1에 따라, 실시예 27A로부터의 화합물 100 mg (0.207 mmol)을 반응시켰다. 수율: 95 mg (이론치의 91%)

실시예 3

[3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-(4-에틸페닐)피페리딘-1-일](1-옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 1에 따라, 실시예 9A로부터의 화합물 55 mg (0.130 mmol)을 반응시켰다. 수율: 43 mg (이론치의 75%)

실시예 4

{3-[3-(2-에톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-(4-에틸페닐)피페리딘-1-일}(1-옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 1에 따라, 실시예 11A로부터의 화합물 50 mg (0.109 mmol)을 반응시켰다. 수율: 17 mg (이론치의 32%)

실시예 5

{3-[3-(2-에톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-(4-에틸페닐)피페리딘-1-일}(1-옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

방법 6D에 따른 실시예 4로부터의 라세미체의 거울상이성질체 분리는 실시예 5로부터의 표제 화합물 37.7 mg 및 실시예 6으로부터의 표제 화합물 20.0 mg을 제공하였다.

실시예 6

실시예 7

{3-[3-(2-히드록시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘-1-일}(1-옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 1에 따라, 실시예 20A로부터의 화합물 80 mg (0.170 mmol)을 반응시켰다. 수율: 77 mg (이론치의 91%)

실시예 8

(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일){3-[3-(2-메톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]피페리딘-1-일}메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

일반적 방법 2에 따라, 실시예 26A로부터의 화합물 150 mg (0.300 mmol)을 반응시켰다. 방법 1D에 따른 라세미체의 거울상이성질체 분리는 실시예 8로부터의 표제 화합물 65.0 mg 및 실시예 9로부터의 표제 화합물 72.0 mg을 제공하였다.

실시예 9

실시예 10

{3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]피페리딘-1-일}(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

디클로로메탄 (11.6 ml) 중 {3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]-피페리딘-1-일}(티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체] (실시예 27A) 136 mg (0.281 mmol)을 메타-클로로퍼벤조산 243 mg (0.703 mmol)과 실온에서 혼합한 다음, 30분 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 아세토니트릴에 녹이고, 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 방법 2D에 따른 라세미체 136 mg의 거울상이성질체 분리는 실시예 10으로부터의 표제 화합물 61.7 mg 및 실시예 11로부터의 표제 화합물 59.6 mg을 제공하였다.

실시예 11

실시예 12

(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일){3-(4-에틸페닐)-5-[3-(2-메톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-피페리딘-1-일}메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

일반적 방법 2에 따라, 실시예 8A로부터의 화합물 77.0 mg (0.173 mmol)을 반응시켰다. 방법 3D에 따른 라세미체 74.9 mg의 거울상이성질체 분리는 실시예 12로부터의 표제 화합물 36.0 mg 및 실시예 13으로부터의 표제 화합물 35.0 mg을 제공하였다.

실시예 13

실시예 14

[3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-(4-에틸페닐)피페리딘-1-일](1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

일반적 방법 2에 따라, 실시예 9A로부터의 화합물 55 mg (0.130 mmol)을 반응시켰다. 방법 4D에 따른 라세미체 53.3 mg의 거울상이성질체 분리는 실시예 14로부터의 표제 화합물 23.0 mg 및 실시예 15로부터의 표제 화합물 23.0 mg을 제공하였다.

실시예 15

일반적 방법 2에 따라, 실시예 9A로부터의 화합물 55.5 mg (0.130 mmol)을 반응시켰다. 방법 4D에 따른 라세미체 53.3 mg의 거울상이성질체 분리는 실시예 14로부터의 표제 화합물 23.0 mg 및 실시예 15로부터의 표제 화합물 23.0 mg을 제공하였다.

실시예 16

{3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘-1-일}(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

일반적 방법 2에 따라, 실시예 17A로부터의 화합물 269 mg (0.578 mmol)을 반응시켰다. 방법 1D에 따른 라세미체 292 mg의 거울상이성질체 분리는 실시예 16으로부터의 표제 화합물 57.8 mg 및 실시예 17로부터의 표제 화합물 99.7 mg을 제공하였다.

실시예 17

실시예 18

(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일){3-[3-(2-에톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]피페리딘-1-일}메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

일반적 방법 2에 따라, 실시예 28A로부터의 화합물 317 mg (0.616 mmol)을 반응시켰다. 방법 2D에 따른 라세미체 294 mg의 거울상이성질체 분리는 실시예 18로부터의 표제 화합물 132 mg 및 실시예 19로부터의 표제 화합물 129 mg을 제공하였다.

실시예 19

실시예 20

{3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘-1-일}(1-옥시도티오-모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 1에 따라, 실시예 17A로부터의 화합물 50.0 mg (0.107 mmol)을 반응시켰다. 수율: 4.3 mg (이론치의 8%)

실시예 21

{3-[3-(2-히드록시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]피페리딘-1-일}-(1-옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 1에 따라, 실시예 29A로부터의 화합물 100.0 mg (0.206 mmol)을 반응시켰다. 수율: 105.2 mg (이론치의 99%)

실시예 22

{3-[3-(2-에톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘-1-일}(1-옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 1에 따라, 실시예 19A로부터의 화합물 50.0 mg (0.100 mmol)을 반응시켰다. 수율: 50.2 mg (이론치의 92%)

실시예 23

{3-[3-(2-에톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘-1-일}(1-옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

방법 1D에 따른 실시예 22로부터의 라세미체 50.2 mg의 거울상이성질체 분리는 실시예 23으로부터의 표제 화합물 25.5 mg 및 실시예 24로부터의 표제 화합물 22.4 mg을 제공하였다.

실시예 24

실시예 25

{3-(4-에틸페닐)-5-[3-(2-메톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]피페리딘-1-일}(1-옥시도티오-모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 1에 따라, 실시예 8A로부터의 화합물 77.0 mg (0.173 mmol)을 반응시켰다. 수율: 63.2 mg (이론치의 79%)

실시예 26

{3-(4-에틸페닐)-5-[3-(2-메톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]피페리딘-1-일}(1-옥시도티오-모르폴린-4-일)메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

방법 6D에 따른 실시예 25로부터의 라세미체 63.2 mg의 거울상이성질체 분리는 실시예 26으로부터의 표제 화합물 17.8 mg 및 실시예 27로부터의 표제 화합물 18.7 mg을 제공하였다.

실시예 27

실시예 28

(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일){3-[3-(2-메톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘-1-일}메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

일반적 방법 2에 따라, 실시예 18A로부터의 화합물 269 mg (0.556 mmol)을 반응시켰다. 방법 5D에 따른 라세미체의 거울상이성질체 분리는 실시예 28로부터의 표제 화합물 126 mg 및 실시예 29로부터의 표제 화합물 122 mg을 제공하였다.

실시예 29

실시예 30

(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일){3-[3-(2-에톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘-1-일}메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

일반적 방법 2에 따라, 실시예 19A로부터의 화합물 259 mg (0.519 mmol)을 반응시켰다. 방법 2D에 따른 라세미체 252 mg의 거울상이성질체 분리는 실시예 30으로부터의 표제 화합물 104 mg 및 실시예 31로부터의 표제 화합물 91.0 mg을 제공하였다.

실시예 31

실시예 32

(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일){3-[3-(2-히드록시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘-1-일}메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

일반적 방법 2에 따라, 실시예 20A로부터의 화합물 100 mg (0.213 mmol)을 반응시켰다. 방법 2D에 따른 라세미체 97.4 mg의 거울상이성질체 분리는 실시예 32로부터의 표제 화합물 33.9 mg 및 실시예 33으로부터의 표제 화합물 35.0 mg을 제공하였다.

실시예 33

실시예 34

(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일){3-[3-(2-에톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-(4-에틸페닐)-피페리딘-1-일}메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

일반적 방법 2에 따라, 실시예 11A로부터의 화합물 303 mg (0.661 mmol)을 반응시켰다. 방법 2D에 따른 라세미체 297 mg의 거울상이성질체 분리는 실시예 34로부터의 표제 화합물 139 mg 및 실시예 35로부터의 표제 화합물 117 mg을 제공하였다.

실시예 35

실시예 36

{3-[3-(2-메톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘-1-일}(1-옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

일반적 방법 1에 따라, 실시예 18A로부터의 화합물 196 mg (0.405 mmol)을 반응시켰다. 수율: 194 mg (이론치의 96%)

실시예 37

{3-[3-(2-메톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘-1-일}(1-옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

방법 1D에 따른 실시예 36으로부터의 라세미체 194 mg의 거울상이성질체 분리는 실시예 37로부터의 표제 화합물 81.1 mg 및 실시예 38로부터의 표제 화합물 78.5 mg을 제공하였다.

실시예 38

실시예 39

{3-[4-(2,2-디플루오로에틸)페닐]-5-[3-(2-메톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]피페리딘-1-일}(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

실시예 63A로부터의 화합물 14.7 mg (0.031 mmol)을 일반적 방법 2에 따라 메타-클로로퍼벤조산 26.3 mg (0.076 mmol)과 반응시켰다. 수율: 9.5 mg (이론치의 60%)

실시예 40

{3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-[4-(2,2,2-트리플루오로에틸)페닐]피페리딘-1-일}(1-옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

실시예 46A로부터의 화합물 78.0 mg (0.162 mmol)을 일반적 방법 1에 따라 메타-클로로퍼벤조산 50.4 mg (0.146 mmol)과 반응시켰다. 수율: 76.2 mg (이론치의 88%)

실시예 41

{3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-[4-(2,2,2-트리플루오로에틸)페닐]피페리딘-1-일}(1-옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

방법 7D에 따른 실시예 40으로부터의 라세미체 76.2 mg의 거울상이성질체 분리는 실시예 41 (거울상이성질체 1)로부터의 표제 화합물 29.1 mg 및 실시예 42 (거울상이성질체 2)로부터의 표제 화합물 28.9 mg을 제공하였다.

실시예 42

실시예 43

{3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-[4-(2,2,2-트리플루오로에틸)페닐]피페리딘-1-일}(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

실시예 46A로부터의 화합물 78.0 mg (0.162 mmol)을 일반적 방법 2에 따라 메타-클로로퍼벤조산 140 mg (0.146 mmol)과 반응시켰다. 수율: 87.5 mg (이론치의 100%)

실시예 44

{3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-[4-(2,2,2-트리플루오로에틸)페닐]피페리딘-1-일}(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

방법 8D에 따른 실시예 43으로부터의 라세미체 87.5 mg의 거울상이성질체 분리는 실시예 44 (거울상이성질체 1)로부터의 표제 화합물 29.1 mg 및 실시예 45 (거울상이성질체 2)로부터의 표제 화합물 30.7 mg을 제공하였다.

실시예 45

실시예 46

{3-[3-(2-메톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(2,2,2-트리플루오로에틸)페닐]피페리딘-1-일}(1-옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

실시예 47A로부터의 화합물 113 mg (0.227 mmol)을 일반적 방법 1에 따라 메타-클로로퍼벤조산 70.4 mg (0.204 mmol)과 반응시켰다. 방법 9D에 따른 라세미체 108 mg의 거울상이성질체 분리는 실시예 46 (거울상이성질체 1)으로부터의 표제 화합물 37.1 mg 및 실시예 47 (거울상이성질체 2)로부터의 표제 화합물 41.8 mg을 제공하였다.

실시예 47

실시예 48

(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일){3-[3-(2-메톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(2,2,2-트리플루오로에틸)페닐]피페리딘-1-일}메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

실시예 47A로부터의 화합물 113 mg (0.227 mmol)을 일반적 방법 2에 따라 메타-클로로퍼벤조산 196 mg (0.567 mmol)과 반응시켰다. 방법 9D에 따른 라세미체 121 mg의 거울상이성질체 분리는 실시예 48 (거울상이성질체 1)으로부터의 표제 화합물 34.4 mg 및 실시예 49 (거울상이성질체 2)으로부터의 표제 화합물 29.2 mg을 제공하였다.

실시예 49

실시예 47A로부터의 화합물 113 mg (0.227 mmol)을 일반적 방법 2에 따라 메타-클로로퍼벤조산 196 mg (0.567 mmol)과 반응시켰다. 방법 9D에 따른 라세미체 121 mg의 거울상이성질체 분리는 실시예 48 (거울상이성질체 1)로부터의 표제 화합물 34.4 mg 및 실시예 49 (거울상이성질체 2)로부터의 표제 화합물 29.2 mg을 제공하였다.

실시예 50

{3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-[4-(1,1-디플루오로에틸)페닐]피페리딘-1-일}-(1-옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

실시예 54A로부터의 화합물 34.1 mg (0.074 mmol)을 일반적 방법 1에 따라 메타-클로로퍼벤조산 22.9 mg (0.066 mmol)과 반응시켰다. 수율: 39.7 mg (이론치의 100%).

실시예 51

{3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-[4-(1,1-디플루오로에틸)페닐]피페리딘-1-일}-(1-옥시도-티오모르폴린-4-일)메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

방법 9D에 따른 실시예 50으로부터의 라세미체 35.5 mg의 거울상이성질체 분리는 실시예 51 (거울상이성질체 1)로부터의 표제 화합물 12.0 mg 및 실시예 52 (거울상이성질체 2)로부터의 표제 화합물 14.0 mg을 제공하였다.

실시예 52

실시예 53

{3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-[4-(1,1-디플루오로에틸)페닐]피페리딘-1-일}(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

실시예 54A로부터의 화합물 34.1 mg (0.074 mmol)을 일반적 방법 2에 따라 메타-클로로퍼벤조산 63.6 mg (0.184 mmol)과 반응시켰다. 수율: 37.1 mg (이론치의 99%)

실시예 54

{3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-[4-(1,1-디플루오로에틸)페닐]피페리딘-1-일}-(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

방법 9D에 따른 실시예 53으로부터의 라세미체 37.1 mg의 거울상이성질체 분리는 실시예 54 (거울상이성질체 1)로부터의 표제 화합물 13.0 mg 및 실시예 55 (거울상이성질체 2)로부터의 표제 화합물 14.0 mg을 제공하였다.

실시예 55

실시예 56

{3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-[4-(디플루오로메톡시)페닐]피페리딘-1-일}(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

실시예 37A로부터의 화합물 100 mg (0.23 mmol) 및 N-히드록시시클로프로판카르복스이미드아미드 46 mg (0.46 mmol)을 처음에 DMF의 0.8 ml에 충전하고, HATU 132 mg (0.35 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 0.12 ml (90 mg, 0.69 mmol)와 반응시켰다. 반응 혼합물을 15분 동안 실온에서 교반한 다음, 물 및 에틸 아세테이트 사이에 분배했다. 유기 상을 물로 반복적으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 DMF의 3.0 ml에 녹이고, 2분 동안 180℃에서 마이크로웨이브에서 전환시켰다. 반응 혼합물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 수율: 46 mg (이론치의 37%)

실시예 57

{3-[4-(디플루오로메톡시)페닐]-5-[3-(2-메톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]피페리딘-1-일}(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

실시예 37A로부터의 화합물 300 mg (0.69 mmol) 및 N'-히드록시-3-메톡시프로판이미드아미드 246 mg (2.08 mmol)을 처음에 DMF의 2.6 ml에 충전하고, HATU 396 mg (1.0 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 0.36 ml (269 mg, 2.1 mmol)와 반응시켰다. 반응 혼합물을 15분 동안 실온에서 교반한 다음, 물 및 에틸 아세테이트 사이에 분배했다. 유기 상을 물로 반복적으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 DMF의 2.0 ml에 용해시키고, 2분 동안 180℃에서 마이크로웨이브에서 전환시켰다. 반응 혼합물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 수율: 141 mg (이론치의 38%)

실시예 58

{3-[4-(디플루오로메톡시)페닐]-5-[3-(2-메톡시에틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]피페리딘-1-일}(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

방법 10D에 따른 실시예 57로부터의 라세미체 117 mg의 거울상이성질체 분리는 실시예 58 (거울상이성질체 1)로부터의 표제 화합물 43 mg 및 실시예 59 (거울상이성질체 2)로부터의 화합물 38 mg을 제공하였다.

실시예 59

실시예 60

{3-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-5-[4-(디플루오로메톡시)페닐]피페리딘-1-일}(1-옥시도티오모르폴린-4-일)메타논 [라세미 시스 이성질체]

실시예 39A로부터의 화합물 200 mg (0.48 mmol) 및 N'-히드록시시클로프로판카르복스이미드아미드 96 mg (0.96 mmol)을 처음에 DMF의 1.8 ml에 충전하고, HATU 274 mg (0.72 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 0.25 ml (186 mg, 1.44 mmol)와 반응시켰다. 반응 혼합물을 15분 동안 실온에서 교반한 다음, 물 및 에틸 아세테이트 사이에 분배했다. 유기 상을 물로 반복적으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 DMF의 2.0 ml에 용해시키고 2분 동안 180℃에서 마이크로웨이브에서 전환시켰다. 반응 혼합물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 수율: 25 mg (이론치의 10%)

실시예 61

(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일){3-[3-(1-메톡시시클로프로필)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(2,2,2-트리플루오로에틸)페닐]피페리딘-1-일}메타논 [라세미 시스 이성질체]

실시예 65A로부터의 화합물 29.0 mg (0.162 mmol)을 일반적 방법 2에 따라 메타-클로로퍼벤조산 49.0 mg (0.142 mmol)과 반응시켰다. 수율: 31.2 mg (이론치의 95%)

실시예 62

(1,1-디옥시도티오모르폴린-4-일){3-[3-(1-메톡시시클로프로필)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-5-[4-(2,2,2-트리플루오로에틸)페닐]피페리딘-1-일}메타논 [거울상이성질체적으로 순수한 시스 이성질체]

방법 11D에 따른 실시예 61로부터의 라세미체 31.2 mg의 거울상이성질체 분리는 실시예 62 (거울상이성질체 1)로부터의 표제 화합물 12.0 mg 및 실시예 63 (거울상이성질체 2)으로부터의 표제 화합물 12.0 mg을 제공하였다.

실시예 63

B) 생리 활성의 평가

약어:

BSA 소 혈청 알부민

DMEM 둘베코 변형 이글 배지

EGTA 에틸렌 글리콜 비스(2-아미노에틸)-N,N,N',N'-테트라아세트산

FCS 소 태아 혈청

HEPES 4-(2-히드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산

[3H]haTRAP 삼중수소화 고친화도 트롬빈 수용체 활성화 펩티드

PRP 혈소판-풍부 혈장

혈전색전성 장애를 치료하기 위한 본 발명의 화합물의 적합성은 하기 검정 시스템을 사용하여 입증할 수 있다:

1.) 시험관내 검정

1.a) 세포 기능의 시험관내 시험

재조합 세포주를 사용하여 인간 프로테아제 활성화 수용체 1 (PAR1)의 효능제를 확인하고, 본원에 기재된 물질의 활성을 정량하였다. 세포는 본래, 인간 배아 신장 세포 (HEK293; ATCC: 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션, 미국 20108 버지니아주 매나사스)로부터 유래되었다. 시험 세포주는 내부 미토콘드리아 구획에서의 유리 칼슘 농도가 증가되는 경우에 보조인자 코엘렌테라진(coelenterazine)과 재구성된 후 빛을 방출하는 변형된 형태의 칼슘-감수성 광단백질인 에쿼린(aequorin)을 구조적으로 발현한다 (문헌 [Rizzuto R, Simpson AW, Brini M, Pozzan T.; Nature 1992, 358, 325-327]). 추가로, 세포는 내인성 인간 PAR1 수용체 및 내인성 퓨린성 수용체 P2Y2를 안정적으로 발현한다. 생성된 PAR1 시험 세포는 칼슘 이온의 세포내 방출로 내인성 PAR1 또는 P2Y2 수용체의 자극에 반응하며, 적합한 광도계를 이용하여 생성된 에쿼린 발광을 통해 정량할 수 있다 (문헌 [Milligan G, Marshall F, Rees S, Trends in Pharmacological Sciences 1996, 17, 235-237]).

물질 특이성을 시험하기 위해, 내인성 PAR1 수용체의 활성화 후의 그의 효과를 동일한 세포내 신호 경로를 이용하는 내인성 퓨린성 P2Y2 수용체의 활성화 후의 효과와 비교하였다.

시험 절차: 세포를 시험 2일 (48시간) 전에 384-웰 미세적정 플레이트에서 배양 배지 (10% FCS, 2 mM 글루타민, 20 mM HEPES, 1.4 mM 피루베이트, 0.1 mg/ml 젠타마이신, 0.15% 중탄산나트륨으로 보충된 DMEM F12; 바이오휘태커 (BioWhittaker) 카탈로그 번호 BE04-687Q; 벨기에 B-4800 베르비에르) 중에 플레이팅하고, 세포 인큐베이터 (96% 대기 습도, 5% v/v CO₂, 37℃) 중에 두었다. 시험일에 배양 배지를 보조인자 코엘렌테라진 (25 μM) 및 글루타티온 (4 mM)을 추가로 함유하는 티로드 용액 (140 mM 염화나트륨, 5 mM 염화칼륨, 1 mM 염화마그네슘, 2 mM 염화칼슘, 20 mM 글루코스, 20 mM HEPES)으로 대체하고, 이어서 미세적정 플레이트를 추가의 3 내지 4시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 시험 물질을 미세적정 플레이트 상에 피펫팅하고, 시험 물질을 미세적정 플레이트의 웰에 옮기고 5분 후에, 플레이트를 광도계로 이동시키고, EC₅₀에 상응하는 PAR1 효능제 농도로 첨가하고, 생성된 빛 신호를 광도계에서 즉시 측정하였다. 길항제 물질 작용을 독성 작용과 구별하기 위해, 후속으로 내인성 퓨린성 수용체를 효능제 (ATP, 최종 농도 10 μM)로 즉시 활성화시키고, 생성된 빛 신호를 측정하였다. 결과를 하기 표 A에 나타냈다.

<표 A>

1.b) PAR-1 수용체 결합 분석

혈소판 막을 완충제 (50 mM 트리스(Tris) (pH 7.5), 10 mM 염화마그네슘, 1 mM EGTA, 0.1% BSA) 중 다양한 농도의 시험 물질 및 12 nM [3H]haTRAP와 함께 실온에서 80분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 혼합물을 필터 플레이트로 옮기고, 완충제로 2회 세척하였다. 섬광 액체를 첨가한 후, 필터 상의 방사성을 베타 계수기에서 측정하였다.

1.c) 혈장 내 혈소판 응집

최근 10일 동안 혈소판 응집에 영향을 미치는 어떠한 의약도 수여받은 적이 없는 건강한 남녀 지원자의 혈액을 사용하여 혈소판 응집을 측정하였다. 혈액을 항응고제로서 시트르산나트륨 3.8%를 함유하는 모노베트 (독일 뉨브레히트 사르슈테트)에 채웠다 (시트레이트 1부 + 혈액 9부). 혈소판-풍부 혈장을 수득하기 위해, 시트레이트 처리된 전혈을 140 g에서 20분 동안 원심분리하였다.

응집 측정을 위해, 혈소판-풍부 혈장의 분취액을 시험 물질의 농도를 증가시키면서 37℃에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 후속적으로, 응집측정기 중에서 트롬빈 수용체 효능제 (TRAP6, SFLLRN)를 첨가하여 응집을 유발하고, 보른 (Born) (문헌 [Born, G.V.R., Cross M.J., The Aggregation of Blood Platelets; J. Physiol. 1963, 168, 178-195])에 따른 비탁 측정법을 이용하여 37℃에서 측정하였다. 최대 응집을 일으키는 SFLLRN 농도를, 적절한 경우에, 각각의 공여자에 대해 개별적으로 측정하였다.

억제 영향을 계산하기 위해, 광 투과의 최대 증가 (응집 곡선의 증폭, %)를 시험 물질의 존재 및 부재 하에 효능제의 첨가 후 5분 내에 측정하고, 억제율을 계산하였다. 억제 곡선을 이용하여 응집이 50%만큼 억제되는 농도를 계산하였다. 결과를 하기 표 B에 나타냈다.

<표 B>

1.d) 완충제 내 혈소판 응집

최근 10일 동안 혈소판 응집에 영향을 미치는 어떠한 의약도 수여받은 적이 없는 건강한 남녀 지원자의 혈액을 사용하여 혈소판 응집을 측정하였다. 혈액을 항응고제로서 시트르산나트륨 3.8%를 함유하는 모노베트 (독일 뉨브레히트 사르슈테트)에 채웠다 (시트레이트 1부 + 혈액 9부). 혈소판-풍부 혈장을 수득하기 위해, 시트레이트 처리된 전혈을 140 g에서 20분 동안 원심분리하였다. 1/4 부피의 ACD 완충제 (44.8 mM 시트르산나트륨, 20.9 mM 시트르산, 74.1 mM 글루코스 및 4 mM 염화칼륨)을 PRP에 첨가하고, 혼합물을 1000 g에서 10분 동안 원심분리하였다. 혈소판 펠릿을 세척 완충제 중에 재현탁시키고, 1000 g에서 10분 동안 원심분리하였다. 혈소판을 인큐베이션 완충제로 재현탁시키고, 200,000개의 세포/μl로 조정하였다. 시험을 시작하기 전에, 염화칼슘 및 염화마그네슘 (각 경우 최종 농도 2 mM (2 M 원액, 1:1000 희석))을 첨가하였다. 주의: ADP-유도 응집의 경우에는 염화칼슘만을 첨가하였다. 다음 효능제: TRAP6-트리플루오로아세테이트 염, 콜라겐, 인간 α-트롬빈 및 U-46619를 사용할 수 있다. 각각의 공여자에 대해, 효능제의 농도를 시험하였다.

시험 절차: 96-웰 미세적정 플레이트를 사용하였다. 시험 물질을 DMSO 중에 희석하고, 초기에 웰 당 2 μl를 채웠다. 혈소판 현탁액 178 μl를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 10분 동안 예비인큐베이션하였다. 효능제 20 μl를 첨가하고, 즉시 스펙트라맥스 (Spectramax, OD 405 nm)에서 측정을 시작하였다. 역학을 11회 (각각 1분씩) 측정으로 측정하였다. 측정들 사이에, 혼합물을 55초 동안 진탕하였다.

1.e) 피브리노겐-제거 혈장 내 혈소판 응집

혈소판 응집을 측정하기 위해, 최근 10일 동안 혈소판 응집에 영향을 미치는 어떠한 의약도 수여받은 적이 없는 건강한 남녀 지원자의 혈액을 사용하였다. 혈액을 항응고제로서 시트르산나트륨 3.8%를 함유하는 모노베트 (독일 뉨브레히트 사르슈테트)에 채웠다 (시트레이트 1부 + 혈액 9부).

피브리노겐-제거 혈장의 제조: 저-혈소판 혈장을 수득하기 위해, 시트레이트 처리된 전혈을 140 g에서 20분 동안 원심분리하였다. 저-혈소판 혈장을 렙틸라제 (로슈 다이아그노스틱 (Roche Diagnostic), 독일)와 1:25의 비로 혼합하고 조심스럽게 인버팅하였다. 이후, 이를 37℃의 수조에서 10분 동안 인큐베이션한 직후, 얼음상에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 혈장/레프틸라제 혼합물을 1300 g에서 15분 동안 원심분리하고, 상청액 (피브리노겐-제거 혈장)을 수득하였다.

혈소판 단리: 혈소판-풍부 혈장을 수득하기 위해, 시트레이트 처리된 전혈을 140 g에서 20분 동안 원심분리하였다. 1/4 부피의 ACD 완충제 (44.8 mM 시트르산나트륨, 20.9 mM 시트르산, 74.1 mM 글루코스 및 4 mM 염화칼륨)을 PRP에 첨가하고, 혼합물을 1300 g에서 10분 동안 원심분리하였다. 혈소판 펠릿을 세척 완충제로 재현탁시키고, 1300 g에서 10분 동안 원심분리하였다. 혈소판을 인큐베이션 완충제 중에 재현탁시키고, 400,000개의 세포/μl로 조정하고, 염화칼슘 용액을 최종 농도 5 mM (1/200 희석)이 되도록 첨가하였다.

응집을 측정하기 위해, 시험 물질의 농도를 증가시키면서 분취액 (피브리노겐-제거 혈장 98 μl 및 혈소판 현탁액 80 μl)을 실온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 후속적으로, 응집측정기 중에서 인간 알파 트롬빈을 첨가하여 응집을 유발하고, 보른 (문헌 [Born, G.V.R., Cross M.J., The Aggregation of Blood Platelets; J. Physiol. 1963, 168, 178-195])에 따른 비탁 측정법을 이용하여 37℃에서 측정하였다. 단지 최대 응집을 일으키는 알파 트롬빈 농도를 각각의 공여자에 대해 개별적으로 측정하였다.

억제 활성을 계산하기 위해, 최대 광 투과의 증가 (응집 곡선의 증폭, %)를 시험 물질의 존재 및 부재 하에 효능제의 첨가 후 5분 내에 측정하고, 억제율을 계산하였다. 억제 곡선을 이용하여 응집이 50% 만큼 억제되는 농도를 계산하였다.

1.f) 세척된 혈소판의 자극 및 유동 세포측정법으로의 분석

세척된 혈소판의 단리: 인간 전혈을 지원자 공여자로부터 정맥 천자에 의해 수득하고, 항응고제로서 시트르산나트륨을 함유하는 모노베트 (독일 뉨브레히트 사르슈테트)에 채웠다 (시트르산나트륨 3.8% 1부 + 전혈 9부). 모노베트를 분 당 900 회전으로 4℃에서 20분 동안 원심분리하였다 (헤라우스 인스트루먼츠(Heraeus Instruments), 독일; 메가퓨즈(Megafuge) 1.0RS). 혈소판-풍부 혈장을 조심스럽게 제거하고, 50 ml 팔콘(Falcon) 튜브로 옮겼다. 이어서, ACD 완충제 (44 mM 시트르산나트륨, 20.9 mM 시트르산, 74.1 mM 글루코스)를 혈장에 첨가하였다. ACD 완충제의 부피는 혈장 부피의 1/4에 상응하였다. 10분 동안 2500 rpm 및 4℃에서 원심 분리하자 혈소판이 침강되었다. 그 후, 상청액을 조심스럽게 따라내어 폐기하였다. 침전된 혈소판을 우선 1 밀리리터의 세정 완충제 (113 mM 염화나트륨, 4 mM 이나트륨 히드로겐포스페이트, 24 mM 인산이수소나트륨, 4 mM 염화칼륨, 0.2 mM 에틸렌 글리콜-비스(2-아미노에틸)-N,N,N'N'-테트라아세트산, 0.1% 글루코스) 중에 조심스럽게 재현탁시키고, 이어서 세정 완충제를 사용하여 혈장의 양의 부피에 상응하는 부피가 되도록 하였다. 세정 절차를 반복하였다. 혈소판을 2500 rpm 및 4℃에서 또 다른 10분 동안 원심분리를 사용하여 침전시키고, 이어서 1 밀리리터의 인큐베이션 완충제 (134 mM 염화나트륨, 12 mM 탄산수소나트륨, 2.9 mM 염화칼륨, 0.34 mM 탄산이수소나트륨, 5 mM HEPES, 5 mM 글루코스, 2 mM 염화칼슘 및 2 mM 염화마그네슘) 중에 조심스럽게 재현탁시키고, 인큐베이션 완충제를 사용하여 μl 당 300,000 혈소판의 농도로 조정하였다.

PAR-1 길항제의 존재 및 부재 하에 인간 α-트롬빈을 사용한 인간 혈소판의 염색 및 자극: 혈소판 현탁액을 시험하고자 하는 물질 또는 적절한 용매로 37℃에서 10분 동안 예비인큐베이션하였다 (독일 에펜도르프; 써모믹서 컴포트 (Thermomixer Comfort)). 37℃에서 효능제 (0.5 μM 또는 1 μM의 α-트롬빈; 코디아(Kordia), 네덜란드, 3281 NIH 유닛/mg; 또는 30 μg/ml의 트롬빈 수용체 활성화 펩티드 (TRAP6); 바켐(Bachem), 스위스)를 첨가하고, 500 rpm으로 진탕하여 혈소판 활성화를 유발시켰다. 각각 0, 1, 2.5, 5, 10 및 15분에, 50 μl의 하나의 분취액을 제거하고, 단일 농도의 셀픽스(CellFix)^TM 용액 (벡톤 디킨슨 이뮤노사이토메트리 시스템즈(Becton Dickinson Immunocytometry Systems), 미국) 1 ml 중으로 옮겼다. 세포를 고정시키기 위해, 이를 4℃의 암실에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 혈소판을 600 g 및 4℃에서 10분 동안 원심분리하여 침전시켰다. 상청액을 폐기하고, 혈소판을 셀워시(CellWash)^TM (벡톤 디킨슨 이뮤노사이토메트리 시스템즈, 미국) 400 μl 중에 재현탁시켰다. 하나의 100 μl 분취액을 새로운 FACS 튜브로 옮겼다. 혈소판-확인 항체 1 μl 및 활성화 상태-검출 항체 1 μl를 셀워시^TM를 사용하여 100 μl의 부피가 되도록하였다. 이어서, 항체 용액을 혈소판 현탁액에 첨가하고, 4℃의 암실에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 염색시킨 후, 혼합물 부피를 추가의 400 μl의 셀워시^TM를 첨가하여 증가시켰다.

인간 당단백질 IIb (CD41)에 대해 지정된 플루오레세인-이소티오시아네이트-접합 항체 (이뮤노테크 콜터(Immunotech Coulter), 프랑스; 카탈로그 번호 0649)를 사용하여 혈소판을 확인하였다. 인간 당단백질 P-셀렉틴에 대해 지정된 피코에리트린-접합 항체 (이뮤노테크 콜터, 프랑스; 카탈로그 번호 1759)를 사용하여 혈소판의 활성화 상태를 측정할 수 있었다. P-셀렉틴 (CD62P)은 휴지 혈소판의 α-과립에 국한되어 있었다. 그러나, 시험관내 또는 생체내 자극 이후에는 외부 원형질 막으로 이동하였다.

유동 세포측정 및 데이터 평가: 샘플을 벡톤 디킨슨 이뮤노사이토메트리 시스템즈 (미국)로부터의 FACS칼리버(FACSCalibur)^TM 유동 세포측정 시스템 기기에서 분석하고, 셀퀘스트(CellQuest) 소프트웨어 버전 3.3 (벡톤 디킨슨 이뮤노사이토메트리 시스템즈, 미국)을 이용하여 평가하고, 그래프로 나타내었다. 혈소판 활성화의 정도를 CD62P-양성 혈소판 (CD41-양성 결과)의 백분율을 통해 측정하였다. 각각의 샘플로부터 10,000개의 CD41-양성 결과가 계수되었다.

시험되는 물질의 억제 효과를, 효능제에 의한 활성화와 관계된 혈소판 활성화의 감소를 통해 계산하였다.

1.g) 평행-플레이트 유동 챔버를 사용한 혈소판 응집 측정

최근 10일 동안 혈소판 응집에 영향을 미치는 어떠한 의약도 수여받은 적이 없는 건강한 남녀 지원자의 혈액을 사용하여 혈소판 활성화를 측정하였다. 혈액을 항응고제로서 시트르산나트륨 3.8%를 함유하는 모노베트 (독일 뉨브레히트 사르슈테트) 중에 채웠다 (시트레이트 1부 + 혈액 9부). 혈소판-풍부 혈장을 수득하기 위해, 시트레이트 처리된 전혈을 140 g에서 20분 동안 원심분리하였다. 1/4 부피의 ACD 완충제 (44.8 mM 시트르산나트륨, 20.9 mM 시트르산, 74.1 mM 글루코스 및 4 mM 염화칼륨)을 PRP에 첨가하고, 혼합물을 1000 g에서 10분 동안 원심분리하였다. 혈소판 펠릿을 세척 완충제 중에 재현탁시키고, 1000 g에서 10분 동안 원심분리하였다. 관류 연구를 위해, 40% 적혈구 및 60% 세척 혈소판의 혼합물 (200,000/μl)을 제조하고, HEPES-티로드 완충제 중에 현탁시켰다. 유동 조건 하에 평행-플레이트 유동 챔버를 이용하여 혈소판 응집을 측정하였다 (문헌 [B. Nieswandt et al., EMBO J. 2001, 20, 2120-2130; C. Weeterings, Arterioscler Thromb. Vasc. Biol. 2006, 26, 670-675; JJ Sixma, Thromb. Res. 1998, 92, 43-46]). 유리 슬라이드를 인간 α-트롬빈의 용액 (트리스 완충제에 용해됨) 100 μl를 사용하여 4℃에서 밤새 습윤시키고 (다양한 농도, 예를 들어 10 내지 50 μg/ml의 α-트롬빈), 마지막으로 2% BSA를 사용하여 중지시켰다.

재구성된 혈액을 일정한 유속 (예를 들어, 300/초의 전단율)에서 5분 동안 트롬빈-습윤된 유리 슬라이드 상에 통과시키고, 현미경 영상 시스템을 이용하여 관측하고, 기록하였다. 시험되는 물질의 억제 효과를 혈소판 응집체 형성의 감소를 통해 형태 계측적으로 측정하였다. 별법으로, 혈소판 활성화의 억제를 유동 세포측정법에 의해, 예를 들어 p-셀렉틴 발현 (CD62p)을 통해 측정할 수 있었다 (방법 1.f 참조).

1.h) 평행-플레이트 유동 챔버 (항응고화 혈액, 콜라겐)를 사용한 혈소판 응집 및 활성화 측정

최근 10일 동안 혈소판 응집에 영향을 미치는 어떠한 의약도 수여받은 적이 없는 건강한 남녀 지원자의 혈액을 사용하여, 흐름 상태 하의 혈소판 활성화를 측정하였다. 혈액을 항응고제로서 시트르산나트륨 3.8%를 함유하는 모노베트 (독일 뉨브레히트 사르슈테트) 중에 채웠다 (시트레이트 1부 + 혈액 9부).

평행-플레이트 유동 챔버를 사용하여 혈소판 활성화의 측정을 수행하였다 (문헌 [B. Nieswandt et al., EMBO J. 2001, 20, 2120-2130; C. Weeterings, Arterioscler Thromb. Vasc. Biol. 2006, 26, 670-675; JJ Sixma, Thromb. Res. 1998, 92, 43-46]). 유리 슬라이드를 20 μl의 콜라겐 현탁액 (콜라겐 시약: 호름(Horm), 니코메드(Nycomed))를 사용하여 4℃에서 밤새 습윤시킨 후 (다양한 농도, 예를 들어 1 내지 10 μg/슬라이드의 유형 I 콜라겐), 최종적으로 2% BSA를 사용하여 중지시켰다.

피브린 혈병 형성을 방지하기 위해, 시트레이트 처리된 전혈을 페파블럭(Pefabloc) FG (펜타팜(Pentapharm), 최종 농도 3 mM)와 혼합하고, CaCl₂ 용액 (최종 Ca⁺⁺ 농도 5 mM)의 첨가에 의해, 5분 동안 일정 유량 (예를 들어, 1000/초의 전단율)에서 콜라겐-코팅된 유리 슬라이드를 통과시키고, 현미경 비디오 시스템을 사용하여 관찰하고, 기록하였다. 시험되는 물질의 억제 활성을 혈소판 응집물 형성의 감소를 통해 형태계측적으로 측정하였다. 별법으로, 혈소판 활성화의 억제를 유동 세포측정법에 의해, 예를 들어 p-셀렉틴 발현 (CD62p)을 통해 측정할 수 있었다 (방법 1.f 참조).

1.i) 평행-플레이트 유동 챔버 (비-항응고된 혈액, 콜라겐)를 사용한 혈소판 응집 및 활성화 측정

최근 10일 동안 혈소판 응집에 영향을 미치는 어떠한 의약도 수여받은 적이 없는 건강한 남녀 지원자의 혈액을 사용하여, 흐름 상태 하의 혈소판 활성화를 측정하였다. 혈액을 어떠한 항응고제도 함유하지 않은 중성 모노베트 (독일 뉨브레히트 사르슈테트)에 채우고, 피브린 혈병 형성을 방지하기 위해 페파블럭 FG (펜타팜, 최종 농도 3 mM)과 즉시 혼합하였다. DMSO에 용해된 시험 물질을 페파블럭 FG와 동시에 첨가하고, 추가적 인큐베이션 없이 평행-플레이트 유동 챔버로 도입하였다. 혈소판 활성화의 측정은 방법 1.h)에 기재된 바와 같이, 콜라겐-코팅된 평행-플레이트 유동 챔버에서 형태계측 또는 유동 세포측정법에 의해 수행하였다.

2.) 생체외 검정

2.a) 혈소판 응집 (영장류, 기니아 피그)

깨어있거나 마취된 기니아 피그 또는 영장류를 경구로, 정맥내로 또는 복막내로 적합한 제제 중의 시험 물질로 처리하였다. 대조군으로서, 다른 기니아 피그 또는 영장류를 상응하는 비히클을 사용하여 동일한 방식으로 처리하였다. 적용 방식에 따라, 상이한 시간에 대하여 심장 또는 대동맥의 천자에 의해, 깊이 마취된 동물로부터 혈액을 수득하였다. 혈액을 항응고제로서 시트르산나트륨 3.8%를 함유하는 모노베트 (독일 뉨브레히트 사르슈테트)에 옮겼다 (시트레이트 용액 1 부 + 혈액 9부). 혈소판-풍부 혈장을 수득하기 위해, 시트레이트 처리된 전혈을 140 g에서 20분 동안 원심분리하였다.

응집측정기 중에서 트롬빈 수용체 효능제 (TRAP6, SFLLRN, 50 μg/ml; 각 실험에서 농도는 각각의 동물 종에 대해 결정함)를 첨가하여 응집을 유발시키고, 보른 (문헌 [Born, G.V.R., Cross M.J., The Aggregation of Blood Platelets; J. Physiol. 1963, 168, 178-195] 참조)에 따른 비탁측정법을 이용하여 37℃에서 측정하였다.

응집을 측정하기 위해, 광 투과의 최대 증가 (응집 곡선의 증폭, %)를 효능제의 첨가 5분 후에 측정하였다. 처리된 동물들에서의 투여된 시험 물질의 억제 효과를 대조군 동물의 평균을 기준으로 하여, 응집의 감소를 통해 계산하였다.

응집의 측정뿐만 아니라, 혈소판 활성화의 억제는, 예를 들어 p-셀렉틴 발현 (CD62p)을 통해, 유동 세포측정법에 의해 측정될 수 있다 (방법 1.f 참조).

2.b) 평행-플레이트 유동 챔버 (영장류)에서의 혈소판 응집 및 활성화 측정

깨어있거나 마취된 영장류를 경구로, 정맥내로 또는 복막내로 적합한 제제 중의 시험 물질로 처리하였다. 대조군으로서, 다른 동물을 상응하는 비히클을 사용하여 동일한 방식으로 처리하였다. 투여 방식에 따라, 혈액을 상이한 기간에 대해 정맥 천자에 의해 동물로부터 수득하였다. 혈액을 항응고제로서 시트르산나트륨 3.8%를 함유하는 모노베트 (독일 뉨브레히트 사르슈테트)에 옮겼다 (시트레이트 용액 1 부 + 혈액 9부). 별법으로, 비-항응고된 혈액을 중성 모노베트 (사르슈테트)에 채울 수 있다. 두 경우에서, 혈액을 피브린 혈병 형성을 방지하기 위해 페파블럭 FG (펜타팜, 최종 농도 3 mM)와 혼합하였다.

시트레이트 처리된 전혈을 측정 전에 CaCl₂ 용액 (최종 Ca⁺⁺ 농도 5 mM)을 첨가하여 재석회화하였다. 비-항응고된 혈액을 분석을 위해 평행-플레이트 유동 챔버로 직접 도입하였다. 혈소판 활성화의 측정을 방법 1.h)에 기재된 바와 같이, 콜라겐-코팅된 평행-플레이트 유동 챔버에서 형태 계측 또는 유동 세포측정법에 의해 수행하였다.

3.) 생체내 검정

3.a) 혈전증 모델

본 발명의 화합물은 트롬빈-유도된 혈소판 응집이 PAR-1 수용체를 통해 매개되는 적합한 동물 종의 혈전증 모델에서 연구할 수 있었다. 적합한 동물 종은 기니아 피그, 특히 영장류이다 (참조: 문헌 [Lindahl, A.K., Scarborough, R.M., Naughton, M.A., Harker, L.A., Hanson, S.R., Thromb Haemost 1993, 69, 1196; Cook JJ, Sitko GR, Bednar B, Condra C, Mellott MJ, Feng D-M, Nutt RF, Shager JA, Gould RJ, Connolly TM, Circulation 1995, 91, 2961-2971; Kogushi M, Kobayashi H, Matsuoka T, Suzuki S, Kawahara T, Kajiwara A, Hishinuma I, Circulation 2003, 108 Suppl. 17, IV-280; Derian CK, Damiano BP, Addo MF, Darrow AL, D'Andrea MR, Nedelman M, Zhang H-C, Maryanoff BE, Andrade-Gordon P, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2003, 304, 855-861]). 별법으로, PAR-3 및/또는 PAR-4의 억제제로 전처리한 기니아 피크 (문헌 [Leger AJ et al., Circulation 2006, 113, 1244-1254]), 또는 트랜스제닉 PAR-3- 및/또는 PAR-4-녹다운 기니아 피그를 이용할 수 있다.

3.b) 파종성 혈관내 응고 (DIC)에서의 응고 부전 및 기관 기능장애

본 발명의 화합물을 적절한 동물 종에서의 DIC 및/또는 패혈증 모델에서 연구할 수 있었다. 적합한 동물 종은 기니아 피그, 및 특히 영장류, 및 또한 (내피-매개 효과 연구용) 마우스 및 래트이다 (참조: 문헌 [Kogushi M, Kobayashi H, Matsuoka T, Suzuki S, Kawahara T, Kajiwara A, Hishinuma I, Circulation 2003, 108 Suppl. 17, IV-280; Derian CK, Damiano BP, Addo MF, Darrow AL, D'Andrea MR, Nedelman M, Zhang H-C, Maryanoff BE, Andrade-Gordon P, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2003, 304, 855-861; Kaneider NC et al., Nat Immunol., 2007, 8, 1303-12; Camerer E et al., Blood, 2006, 107, 3912-21; Riewald M et al., J Biol Chem., 2005, 280, 19808-14.]). 별법으로, PAR-3 및/또는 PAR-4의 억제제로 전처리한 기니아 피크 (문헌 [Leger AJ et al., Circulation 2006, 113, 1244-1254]), 또는 트랜스제닉 PAR-3- 및/또는 PAR-4-녹다운 기니아 피그를 이용할 수 있다.

3.b.1) 트롬빈-항트롬빈 복합체

트롬빈-항트롬빈 복합체 (이하 "TAT"로 지칭됨)는 응고 활성화에 의해 내생적으로 형성된 트롬빈의 척도이다. ELISA 검정 (엔지그노스트(Enzygnost) TAT 마이크로, 다데-베링(Dade-Behring))을 통해 TAT를 측정하였다. 혈장은 원심분리에 의해 시트레이트 처리된 혈액으로부터 수득하였다. TAT 샘플 완충제 50 μl를 혈장 50 μl에 첨가하고, 잠깐 진탕하고, 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 샘플을 흡입하여 여과하고, 웰을 세척 완충제로 3회 세척하였다 (300 μl/웰). 세척 단계들 사이에, 플레이트를 가볍게 두드려 임의의 잔류 세척 완충제를 제거하였다. 접합체 용액 (100 μl)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 샘플을 흡입하여 여과하고, 웰을 세척 완충제로 3회 세척하였다 (300 μl/웰). 이어서, 발색 기질 (100 μl/웰)을 첨가하고, 혼합물을 실온의 암실에서 30분 동안 인큐베이션하고, 정지 용액 (100 μl/웰)을 첨가하고, 492 nm에서 발색을 측정하였다 (사파이어(Safire) 플레이트 판독기).

3.b.2) 기관 기능장애의 파라미터

LPS의 투여에 의한 다양한 내부 기관의 기능 제한에 관하여 결론을 도출시키고, 시험 물질의 치료 효과를 평가할 수 있도록 하는 다양한 파라미터를 측정하였다. 시트레이트 처리된 혈액, 또는 적절한 경우에 리튬 헤파린 혈액을 원심분리하고, 혈장을 사용하여 파라미터를 측정하였다. 전형적으로는, 다음 파라미터를 측정하였다: 크레아티닌, 우레아, 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 (AST), 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (ALT), 총 빌리루빈, 락테이트 데히드로게나제 (LDH), 총 단백질, 총 알부민 및 피브리노겐. 상기 값은 신장 기능, 간 기능, 심혈관 기능 및 혈관 기능과 관련된 정보를 제시하였다.

3.b.3) 염증의 파라미터

내독소에 의해 야기되는 염증성 반응의 범위는 혈장 내 염증 매개자, 예를 들어 인터류킨 (1, 6, 8 및 10), 종양 괴사 인자 알파 또는 단핵구 화학유인물질 단백질-1의 증가에 의해 입증할 수 있다. 이를 위해 ELISA 또는 루미넥스(Luminex) 시스템을 사용할 수 있다.

3.c) 항종양 활성

본 발명의 화합물은 암의 모델, 예를 들어 면역결핍 마우스의 인간 유방암 모델에서 실험할 수 있었다 (참조: 문헌 [S. Even-Ram et al., Nature Medicine, 1988, 4, 909-914]).

3.d) 항혈관신생 활성

본 발명의 화합물을 혈관신생의 시험관내 및 생체내 모델에서 실험할 수 있었다 (참조: 문헌 [Caunt et al., Journal of Thrombosis and Haemostasis, 2003, 10, 2097-2102; Haralabopoulos et al., Am J Physiol., 1997, C239-C245; Tsopanoglou et al., JBC, 1999, 274, 23969-23976; Zania et al., JPET, 2006, 318, 246-254]).

3.e) 혈압- 및 맥박-조절 활성

본 발명의 화합물을 동맥 혈압 및 심박수에 대한 그의 작용에 대해 생체내 모델에서 시험할 수 있었다. 이를 위해, 래트 (예를 들어, 위스타(Wistar))에게 이식가능한 무선원격측정 유닛을 제공하고, 액체가 채워진 카테터와 조합하여 만성적으로 이식가능한 변환기/송신기 유닛으로 이루어진 전자 데이터 입수 및 저장 시스템 (데이터 사이언시즈(Data Sciences), 미국 미네소타주)을 사용하였다. 송신기를 복강내에 이식하고, 센서 카테터를 하행 대동맥에 위치시켰다. 본 발명의 화합물을 (예를 들어, 경구로 또는 정맥내로) 투여할 수 있었다. 처리 전에, 비처리된 동물 및 처리된 동물의 평균 동맥 혈압 및 심박수를 측정하여, 이들이 약 131 내지 142 mmHg, 및 279 내지 321 박동/분의 범위 내에 있음을 확인하였다. PAR-1-활성화 펩티드 (SFLLRN; 예를 들어 0.1 내지 5 mg/kg 용량)를 정맥내로 투여하였다. 혈압 및 심박수를 다양한 시간 간격 및 PAR-1-활성화 펩티드의 존재 및 부재 하의 기간, 및 본 발명의 화합물의 존재 및 부재 하의 기간에 측정하였다 (참조: 문헌 [Cicala C et al., The FASEB Journal, 2001, 15, 1433-5; Stasch JP et al., British Journal of Pharmacology 2002, 135, 344-355]).

3.f) 혈전증 모델

본 발명의 화합물의 효능을 결정하는데 적합한 추가의 생체내 혈전증 검정은 문헌 [Tucker EI, Marzec UM, White TC, Hurst S, Rugonyi S, McCarty OJT, Gailani D, Gruber A, Hanson SR: Prevention of vascular graft occlusion and thrombus-associated thrombin generation by inhibition of factor XI. Blood 2009, 113, 936-944]에 기재되어 있다.

4.) 용해도의 측정

출발 용액 (최초 용액)의 제조:

시험 물질 1.5 mg 이상을 정확하게 칭량하여, 스크류 캡 및 격막이 장착된 입구가 넓은 10 mm 스크류 V-바이알 (글라스테크닉 그래펜로다 게엠베하(Glastechnik Graefenroda GmbH), 품목 번호 8004-WM-H/V15μ)에 넣고, 50 mg/ml의 농도로 DMSO를 첨가하고, 바이알을 30분 동안 볼텍싱하였다.

보정 용액의 제조:

필요한 피펫팅 단계를 액체-취급 로봇을 이용하여 1.2 ml의 96-딥 웰 플레이트 (DWP)에서 수행하였다. 아세토니트릴/물 8:2의 혼합물을 용매로서 사용하였다.

보정 용액 (원액)의 출발 용액의 제조: 용매 혼합물 833 μl를 최초 용액 (농도 = 600 μg/ml) 10 μl에 첨가하고, 혼합물을 균질화시켰다. 각각의 시험 물질로부터 1:100 희석액을 별도의 DWP에서 제조한 후, 이들을 균질화시켰다.

보정 용액 5 (600 ng/ml): 용매 혼합물 270 μl를 원액 30 μl에 첨가하고 혼합물을 균질화시켰다.

보정 용액 4 (60 ng/ml): 용매 혼합물 270 μl를 보정 용액 5 30 μl에 첨가하고 혼합물을 균질화시켰다.

보정 용액 3 (12 ng/ml): 용매 혼합물 400 μl를 보정 용액 4 100 μl에 첨가하고 혼합물은 균화시켰다.

보정 용액 2 (1.2 ng/ml): 용매 혼합물 270 μl를 보정 용액 3 30 μl에 첨가하고 혼합물을 균질화시켰다.

보정 용액 1 (0.6 ng/ml): 용매 혼합물 150 μl를 보정 용액 2 150 μl에 첨가하고 혼합물을 균질화시켰다.

샘플 용액의 제조:

필요한 피펫팅 단계를 액체-취급 로봇을 사용하여 1.2 ml의 96-웰 DWP에서 수행하였다. PBS 완충제 (pH 6.5) 1000 μl를 원액 10.1 μl에 첨가하였다. (PBS 완충제 (pH 6.5): 염화나트륨 61.86 g, 인산이수소나트륨 39.54 g 및 1 N 수산화나트륨 수용액 83.35 g을 칭량하여 1 l 표준 플라스크에 넣고, 표시한 곳까지 물을 채우고, 혼합물을 약 1시간 동안 교반하였다. 이 용액 500 ml를 5 l 측정 플라스크에 도입하고, 표시한 곳까지 물을 채웠다. 1 N 수산화나트륨 수용액을 사용하여, pH를 6.5로 조정하였다.)

절차:

필요한 피펫팅 단계를 액체-취급 로봇을 이용하여 1.2 ml의 96-웰 DWP에서 수행하였다. 가변 온도 진탕기를 사용하여, 상기 방식으로 제조된 샘플 용액을 24시간 동안 20℃ 및 1400 rpm에서 진탕시켰다. 이들 용액 각각으로부터 180 μl를 취하여, 베크만 폴리알로머(Beckman Polyallomer) 원심분리 튜브로 옮겼다. 이들 용액을 1시간 동안 약 223,000 x g에서 원심분리하였다. 각각의 샘플 용액으로부터, 상청액 100 μl를 제거하고, PBS 완충제 (6.5)를 사용하여 1:10 및 1:1000으로 희석하였다.

분석:

샘플을 HPLC/MS-MS로 분석하였다. 시험 화합물을 5개 점의 보정 곡선을 사용하여 정량하였다. 용해도는 mg/l로 표시하였다. 분석 순서: 1) 블랭크(blank) (용매 혼합물); 2) 보정 용액 0.6 ng/ml; 3) 보정 용액 1.2 ng/ml; 4) 보정 용액 12 ng/ml; 5) 보정 용액 60 ng/ml; 6) 보정 용액 600 ng/ml; 7) 블랭크 (용매 혼합물); 8) 샘플 용액 1:1000; 9) 샘플 용액 1:10.

HPLC/MS-MS 방법:

HPLC: 애질런트 1100, 4중 펌프 (G1311A), 오토샘플러 CTC HTS PAL, 탈기장치 (G1322A) 및 칼럼 자동온도조절장치 (G1316A); 칼럼: 오아시스(Oasis) HLB 20 mm x 2.1 mm, 25 μ; 온도: 40℃; 용리액 A: 물 + 포름산 0.5 ml/l; 용리액 B: 아세토니트릴 + 포름산 0.5 ml/l; 유량: 2.5 ml/분; 중지 시간 1.5분; 구배: 0분 95% A, 5% B; 램프: 0-0.5분 5% A, 95% B; 0.5-0.84분 5% A, 95% B; 램프: 0.84-0.85분 95% A, 5% B; 0.85-1.5분 95% A, 5% B.

MS/MS: 워터스 쿼트로 마이크로 탠덤(WATERS Quattro Micro Tandem) MS/MS; Z-스프레이 API 인터페이스; HPLC-MS 유입구 스플리터 1:20; ESI 모드에서 측정.

5.) 간세포를 이용한 시험관내 청소율 측정

새로운 1차 간세포의 인큐베이션을, 변형된 야누스(Janus)^？ 로봇 (퍼킨 엘머)을 이용해 진탕 하에 1.5 ml의 총 부피로 37℃에서 수행하였다. 인큐베이션은 전형적으로 100만개의 살아 있는 간 세포 / ml (대략 1 μM 기질 및 0.05 M 인산칼륨 완충제 (pH = 7.4))를 포함하였다. 인큐베이션에서 최종 아세토니트릴 농도는1% 이하였다.

125 μl의 분취액을 인큐베이션으로부터 2, 10, 20, 30, 50, 70 및 90분 후에 취출하고, 96-웰 필터 플레이트 (0.45 μm 저결합 친수성 PTFE; 밀리포어: 멀티스크린 솔비너트(MultiScreen Solvinert))에 옮겼다. 이들 각각은 250 μl의 아세토니트릴을 포함하여 반응이 정지되었다. 원심분리 후, 여과물을 MS/MS (전형적으로 API 3000)에 의해 분석하였다.

하기 식을 이용하여 물질 분해의 반감기로부터 시험관내 청소율을 계산하였다.

CL'_고유 [ml/(min?kg)] = (0.693 / 시험관내 t1/2 [min])?(간 중량 [g 간 /kg 체중])?(세포 수 [1.1?10^8] / 간 중량 [g]) / (세포 수 [1?10^6] / 인큐베이션 부피 [ml])

CL_혈액을 유리 분획 ("제한되지 않은 잘 교반된 모델")에 대한 고려 없이 하기 식에 의해 계산하였다.

CL_혈액 (잘-교반된 것)[l/(h?kg)] = (Q_H [l/(h?kg)]?CL'_고유 [l/(h?kg)]) / (Q_H[l/(h?kg)] + CL'_고유 [l/(h?kg)])

계산에 사용된 종-특이적 외삽 인자를 하기 표에 요약하였다.

F_최대 값 (간 추출에 기반을 둔 최대 가능 생체이용률)은 하기와 같이 계산하였다.

F_최대 (잘-교반된 것)[%] = (1-(CL_혈액 (잘-교반된 것) [l/(h?kg)]/ Q_H [l/(h?kg)]))?100

6.) 생체내 약동학의 측정

생체내 약동학을 측정하기 위해, 시험 물질을 다양한 제제 매질 (예를 들어, 혈장, 에탄올, DMSO, PEG400 등) 또는 이들 가용화제의 혼합물에 용해시키고, 마우스, 래트, 개 또는 원숭이에게 정맥내로 또는 경구로 투여하였다. 정맥내 투여는 일시 주사로서 또는 주입으로서 수행하였다. 투여된 용량은 0.1 내지 5 mg/kg의 범위였다. 최대 26시간에 걸쳐 다양한 시점에서 카테터를 이용하거나 희생물 혈장으로서 혈액 샘플을 채취하였다. 또한 일부 기관, 조직 및 소변 샘플을 또한 수득하였다. 물질을 특정 매트릭스 중에 확립된 보정 샘플을 사용하여 시험 샘플에서 정량적으로 측정하였다. 샘플 중에 존재하는 단백질은 아세토니트릴 또는 메탄올로 침전시켜 제거하였다. 후속적으로, 역상 칼럼을 사용하여 2300 HTLC 시스템 (코헤시브 테크놀로지스(Cohesive Technologies, 미국 메사추세츠주 프랭클린) 또는 애질런트 1200 (독일 뵈블링겐)) 상에서 HPLC에 의해 샘플을 분리하였다. HPLC 시스템을 터보 이온 스프레이 계면을 통해 API 3000 또는 4000 3중 사중극자 질량 분석계 (어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems, 독일 다름스타트)에 연결시켰다. 시간에 대한 혈장 농도의 플롯을 유효 역학 평가 프로그램을 사용하여 평가하였다.

C) 제약 조성물의 작업 실시예

본 발명의 물질을 다음과 같이 제약 제제에서 전환시킬 수 있었다.

정제:

조성:

실시예 1의 화합물 100 mg, 락토스 (1수화물) 50 mg, 메이즈 전분 50 mg, 폴리비닐피롤리돈 (PVP 25) (바스프 (BASF, 독일)) 10 mg 및 스테아르산마그네슘 2 mg.

정제 중량 212 mg. 직경 8 mm, 곡률 반경 12 mm.

제조:

실시예 1의 화합물, 락토스 및 전분의 혼합물을 물 중 PVP의 5% 용액 (m/m)으로 과립화시켰다. 과립을 건조시킨 후, 스테아르산마그네슘과 5분 동안 혼합하였다. 이 혼합물을 통상의 정제 프레스로 타정하였다 (정제의 구성에 대해서는 상기 참조).

경구 현탁액:

조성:

실시예 1의 화합물 1000 mg, 에탄올 (96%) 1000 mg, 로디겔(Rhodigel, FMC (미국)) (잔탄 검) 400 mg 및 물 99 g.

본 발명의 화합물 100 mg의 단일 용량은 경구 현탁액 10 ml에 상응하였다.

제조:

로디겔을 에탄올 중에 현탁시키고, 현탁액에 실시예 1의 화합물을 첨가하였다. 교반하면서 물을 첨가하였다. 혼합물을 로디겔의 팽윤이 완료될 때까지 대략 6시간 동안 교반하였다.

정맥내로 투여가능한 용액:

조성:

실시예 1의 화합물 1 mg, 폴리에틸렌 글리콜 400 15 g 및 주사용수 250 g.

제조:

실시예 1의 화합물을 폴리에틸렌 글리콜 400과 함께 물 중에서 교반하여 용해시켰다. 용액을 멸균-여과시키고 (기공 직경 0.22 μm), 무균 조건 하에 가열-멸균된 주입병으로 분배하였다. 이를 주입 마개 및 크림핑된 캡으로 밀봉하였다.

Claims

하기 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 그의 용매화물 또는 그의 염의 용매화물 중 하나.
<화학식 I>

상기 식에서,
R¹은 트리플루오로메틸, 1,1-디플루오로에틸, 2,2-디플루오로에틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 디플루오로메톡시, 트리플루오로메톡시 또는 에틸이고,
R²는 2-히드록시에트-1-일, 2-메톡시에트-1-일, 2-에톡시에트-1-일, 시클로프로필 또는 1-메톡시시클로프로프-1-일이고,
R³은 화학식
의 기이고, 여기서 *은 카르보닐 기에 대한 부착 지점이다.
제1항에 있어서,
R¹이 트리플루오로메틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 트리플루오로메톡시 또는 에틸이고,
R²가 2-메톡시에트-1-일, 시클로프로필 또는 1-메톡시시클로프로프-1-일이고,
R³이 화학식
의 기이고, 여기서 *은 카르보닐 기에 대한 부착 지점인 것
을 특징으로 하는 화합물, 또는 그의 염, 그의 용매화물 또는 그의 염의 용매화물 중 하나.
제1항 또는 제2항에 있어서,
R¹이 트리플루오로메톡시이고,
R²가 2-메톡시에트-1-일 또는 시클로프로필이고,
R³이 화학식
의 기이고, 여기서 *은 카르보닐 기에 대한 부착 지점인 것
을 특징으로 하는 화합물, 또는 그의 염, 그의 용매화물 또는 그의 염의 용매화물 중 하나.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 피페리딘 고리에 결합된 페닐 치환기 및 1,2,4-옥사디아졸-5-일 치환기가 서로에게 시스 위치에 있는 것을 특징으로 하는 화합물.
[A]
하기 화학식 II의 화합물:
<화학식 II>

(상기 식에서, R¹ 및 R²는 각각 제1항에 정의된 바와 같음)을 하기 화학식 III의 화합물:
<화학식 III>

(상기 식에서, R³은 제1항에 정의된 바와 같고,
X¹은 할로겐, 바람직하게는 브롬 또는 염소, 또는 히드록실 또는 4-니트로페녹시임)과 반응시키거나, 또는
[B]
화학식 II의 화합물을 제1 단계에서 4-니트로페닐 클로로포르메이트와 반응시키고, 제2 단계에서 하기 화학식 IV의 화합물:
<화학식 IV>

(상기 식에서,R³은 제1항에 정의된 바와 같음)과 반응시키거나, 또는
[C]
하기 화학식 V의 화합물:
<화학식 V>

(상기 식에서, R¹ 및 R³은 각각 제1항에 정의된 바와 같음)을 하기 화학식 VI의 화합물:
<화학식 VI>

(상기 식에서, R²는 제1항에 정의된 바와 같음)과 반응시키거나, 또는
[D]
하기 화학식 Ia의 화합물:
<화학식 Ia>

(상기 식에서, R¹ 및 R²는 각각 제1항에 정의된 바와 같음)을 0.8 내지 1.1 당량의 메타-클로로퍼벤조산과 반응시켜 하기 화학식 Ib의 화합물:
<화학식 Ib>

(상기 식에서, R¹ 및 R²는 각각 제1항에 정의된 바와 같음)을 수득하거나, 또는
[E]
화학식 Ia의 화합물을 2.0 내지 3.0 당량의 메타-클로로퍼벤조산과 반응시켜 하기 화학식 Ic의 화합물:
<화학식 Ic>

(상기 식에서, R¹ 및 R²는 각각 제1항에 정의된 바와 같음)을 수득하는 것
을 특징으로 하는, 제1항에 따른 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 그의 용매화물 또는 그의 염의 용매화물 중 하나의 제조 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 화합물.
질환의 치료 및/또는 예방을 위한 의약의 제조를 위한 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
심혈관 장애, 혈전색전성 장애 및/또는 종양 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 의약의 제조를 위한 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
시험관내 혈액 응고의 방지를 위한 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 불활성이고 비독성인 제약상 허용되는 보조제와 함께 포함하는 의약.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 추가의 활성 성분과 함께 포함하는 의약.
제10항 또는 제11항에 있어서, 심혈관 장애, 혈전색전성 장애 및/또는 종양 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 의약.
항응고량의 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 1종 이상의 화합물, 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 의약, 또는 제7항 또는 제8항에 따라 수득된 의약을 사용하는, 인간 및 동물에서의 혈전색전성 장애의 치료 및/또는 예방 방법.
항응고량의 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 첨가하는 것을 특징으로 하는, 시험관내 혈액 응고의 방지 방법.