EA021944B1 - Замещенные пиперидины - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к новым замещенным пиперидинам формулы (I)способу их получения, их применению для лечения и/или профилактики болезней, а также к их применению для получения лекарств для лечения и профилактики болезней, в частности сердечно-сосудистых болезней и опухолевых болезней.

Description

Данное изобретение относится к новым замещенным пиперидинам, способу их получения, их применению для лечения и/или профилактики болезней, а также к их применению для получения лекарств для лечения и профилактики болезней, в частности сердечно-сосудистых болезней и опухолевых болезней.

Тромбоциты (кровяные пластинки) представляют собой существенный фактор как в физиологической остановке кровотечения (гемостаз), так и при тромбоэмболических заболеваниях. В особенности в артериальной системе тромбоциты играют центральную роль в комплексном взаимодействии между компонентами крови и стенкой сосуда. Нежелательное активирование тромбоцитов может в результате образования богатых пластинками тромбов приводить к тромбоэмболическим заболеваниям и тромботическим осложнениям с состояниями, представляющими угрозу для жизни.

Одним из потенциальных активаторов пластинок является тромбин, протеаза сворачивания крови, который образуется на поврежденных стенках сосуда и, наряду с образованием фибрина, ведет к активированию тромбоцитов, эндотелиальных клеток и мезенхимальных клеток (Уи Т.К.Н., Нипд Ό.Τ., ХУНеаЮп ν.Ι., СоидЫш 8.К., Се11 1991, 64, 1057-1068). У тромбоцитов ίη νίΐτο и на моделях животных ингибиторы тромбина замедляют (ингибируют) агрегирование пластинок, соответственно образование богатых пластинками тромбов. Артериальные тромбозы у человека могут успешно предотвращаться или лечиться с помощью ингибиторов тромбоцитной функции, а также ингибиторов тромбина (ВНаП Э.Ь., Τοροί Е.Т, Ναΐ Κον. Эгид Όίκοον. 2003, 2, 15-28). В связи с этим существует большая вероятность того, что антагонисты действия тромбина на кровяные пластинки уменьшают вероятность образования тромбов и наступления клинических последствий, таких как инфаркт миокарда и инсульт. Другие действия тромбина на клетки, например на клетки эндотелия сосудов и клетки гладких мышц сосудов, лейкоциты и фибробласты возможно вызывают воспалительные и пролиферативные заболевания.

Клеточные эффекты тромбина передаются, как минимум, отчасти с помощью семейства О-протеинсвязанных рецепторов (протеазой активируемые рецепторы, РАКк), прототипом которых является РАК1-рецептор. РАК-1 активируется в результате связывания тромбина и протеолитического расщепления внеклеточно лежащего Ν-окончания (терминуса). В результате протеолиза высвобождается новый Νтерминус с аминокислотной последовательностью 8ΡΤΤΚΝ.... который в качестве агониста (связанного лиганда) приводит к внутримолекулярному активированию рецептора и переносу внутриклеточных сигналов. Пептиды, ответвленные от последовательности связанного лиганда, могут быть использованы в качестве агонистов рецептора и приводят на тромбоцитах к активированию и агрегации. Другие протеазы также способны актививировать РАК-1, к ним относятся, например, плазмин, фактор У11а, фактор Ха, трипсин, активированный протеин С (аРС), триптаза, катепсин О, протеиназа 3, гранзим А, эластаза и матриксметаллопротеаза 1 (ММР-1).

В отличие от ингибирования протеазной активности тромбина непосредственными ингибиторами тромбина блокада РАК-1 должна приводить к ингибированию активирования тромбоцитов, не уменьшая способности крови к сворачиванию (антикоагуляция).

Антитела и другие селективные РАК-1-антагонисты ингибируют индуцированную тромбином агрегацию тромбоцитов ίη νίΐτο при низких до средних концентрациях тромбина (Ка1п М.Ь., ΝαΚαηίίκΙιίМа1ки1 М., §Ьар1ГО М.Т, ЫиНага Н., ^идЫт δ.Κ., 1. С1ш. Ιηνοκΐ. 1999, 103, 879-887). Другой тромбиновый рецептор, который возможно оказывает влияние на патофизиологию тромботических процессов, РАК-4, был идентифицирован в тромбоцитах человека и животных. В экспериментальных тромбозах на животных со сравнимым с человеком образцом РАК-экспрессии РАК-1-антагонисты снижают образование богатых пластинками тромбов (Эепап С.К., □апшию В.Р., Αάάο М.Р., Эагго\у А.Ь., Э'Апйтеа М.К., №йе1тап М., 2Ьапд Н.-С., МагуагюП' В.Е., Αη^πάο-Οοτάοη Р., 1. ΡЬа^тасο1. Ехр. Т1ег. 2003, 304, 855-861).

В последние годы было испытано большое число веществ на ингибирование ими функций пластинок, однако на практике оправдали себя только немногие ингибиторы функции пластинок. В связи с этим существует потребность в фармацевтических средствах, которые специфически ингибируют возросшую реакцию пластинок, не вызывая при этом заметного увеличения риска кровотечения и связанных с ним риском тромбоэмболических осложнений.

Эффекты тромбина, которые передаются через рецептор РАК-1, проявляются на течении болезни во время и после оперативного коронарного шунтирования (САВО), а также других операций и, в частности, при операциях с экстракорпоральным (внешним) кровообращением (например, аппарат искусственного кровообращения). В ходе операции, возможно в связи с приемом лекарств перед операцией или во время операции, с веществами, ингибирующими сворачивание крови и/или ингибирующими пластинки, могут происходить осложнения, связанные с кровотечениями. В связи с этим следует, например, прервать прием клопидогреля за несколько дней перед операцией САВО. Кроме того, как упомянуто выше, может (например, по причине длительного контакта между кровью и искусственными поверхностями при применении экстракорпоральной циркуляции или при переливаниях крови) происходить диссеминированное внутрисосудистое сворачивание крови или коагулопатия потребления (Э1С), которая вторично может приводить к осложнениям, связанным с кровотечением. В дальнейшем развитии это часто приводит к рестенозу установленных венозных или артериальных байпасов (вплоть до закупорки) по причине тромбоза, интимафиброза, артериосклероза, стенокардии, инфаркта миокарда, сердечной недостаточно- 1 021944 сти, аритмий, кратковременных приступов ишемии (ΤΙΑ) и/или инсульту.

Рецептор ΡΑΚ-1 у человека экспримируют и в других клетках, среди них, например, клетки эндотелия, гладкие мышцы сосудов и клетки опухолей. Злокачественные опухолевые заболевания (рак) имеют высокую частоту заболеваний и связаны, как правило, с высокой смертностью. Современные терапии достигают только у части пациентов полной ремиссии и связаны обычно с тяжелыми побочными последствиями. В связи с этим существует большая потребность в эффективных и надежных методах лечения. ΡΑΚ-1-рецептор вносит вклад в возникновение, рост, инвазивность и метастазирование рака. Кроме того, экспримированный на клетках эндотелия ΡΑΚ-1 передает сигналы, которые сливаются в месте роста сосудов (ангиогенез), событие, которое незаменимо для возможности роста опухоли свыше примерно 1 мм³. Ангиогенез также вносит вклад в возникновение и ухудшение других заболеваний, среди них, например, гематопоэтические раковые заболевания, ведущее к слепоте дегенерирование макулы и диабетическая ретинопатия, воспалительные заболевания, такие как ревматоидный артрит и колит.

Сепсис (или септикемия) представляет собой часто встречающееся заболевание с высокой летальностью. Первоначальные симптомы сепсиса, как правило, не специфичны (например, температура, плохое самочувствие), при дальнейшем развитии это может, однако, приводить к общему активированию системы сворачивания крови (диссеминированная внутрисосудистая коагуляция или коагулопатия потребления (Л1С)) с микротромбозированием в различных органах и вторичными осложнениями кровотечений. ЭК.' может проявляться также независимо и в отсутствии сепсиса, например, в рамках операций или при опухолевых заболеваниях.

Терапия сепсиса состоит, с одной стороны, в соответствующем устранении инфекционной причины, например, путем оперативной санации очага и антибиоза. С другой стороны, она состоит во временной интенсивной медицинской поддержке поврежденной системы органов. Терапия различных стадий этого заболевания описана, например, в следующей публикации (ЛсШпдсг и др., Стй. Саге Меб. 2004, 32, 858-873). Для И1С не существует доказанной эффективной терапии.

В связи с этим задача данного изобретения состоит в создании новых ΡΑΚ-1-антагонистов для лечения таких заболеваний, как, например, заболевания сердечно-сосудистой системы и тромбоэмболические заболевания, а также опухолевых заболеваний у людей и животных.

В АО 2006/012226, АО 2006/020598, АО 2007/038138, АО 2007/130898, АО 2007/101270 и И8 2006/0004049 описаны структурно похожие пиперидины в качестве 11-β Η3Ό1 ингибиторов для лечения среди других диабета, тромбоэмболических заболеваний и инсульта.

Предметом данного изобретения являются соединения формулы

в которой К¹ означает трифторметил, 1,1-дифторэтил, 2,2-дифторэтил, 2,2,2-трифторэтил, дифторметокси-, трифторметоксигруппу или этил;

К² означает 2-гидроксиэт-1-ил, 2-метоксиэт-1-ил, 2-этоксиэт-1-ил, циклопропил или 1метоксициклопроп-1-ил;

К³ означает группу формулы

ИЛИ

причем * означает место присоединения к карбонильной группе, и их соли, их сольваты и сольваты их солей.

К соединениям согласно данному изобретению относятся соединения формулы (Ι) и их соли, сольваты и сольваты солей; охваченные формулой (Ι) соединения приведенных далее формул и их соли, сольваты и сольваты солей, а также охваченные формулой (Ι) соединения, приведенные далее в качестве примеров получения и их соли, сольваты и сольваты солей, если только под охваченными формулой (Ι), далее приведенными соединениями не имеются как раз в виду соли, сольваты и сольваты солей.

Соединения согласно данному изобретению могут существовать в зависимости от их структуры в виде стереоизомерных форм (энантиомеры, диастереомеры). В связи с этим изобретение охватывает также энантиомеры или диастереомеры и любые их смеси. Из таких смесей энантиомеров и/или диастереомеров можно выделить известными способами стереоизомерно одинаковые компоненты.

Поскольку соединения согласно данному изобретению могут находиться и в таутомерных формах, данное изобретение охватывает также все таутомерные формы.

В качестве солей в рамках данного изобретения предпочтительны все физиологически не вызывающие сомнений соли соединений согласно данному изобретению. Охвачены также соли, которые сами по себе не пригодны для фармацевтического применения, однако, например, могут применяться для вы- 2 021944 деления или очистки соединений согласно данному изобретению.

К физиологически не вызывающим сомнения солям соединений согласно данному изобретению относятся соли присоединения минеральных кислот, карбоновых кислот и сульфоновых кислот, например соли хлористо-водородной кислоты, бромисто-водородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, метансульфоновой кислоты, этансульфоновой кислоты, толуолсульфоновой кислоты, бензолсульфоновой кислоты, нафталиндисульфоновой кислоты, уксусной кислоты, трифторуксусной кислоты, пропионовой кислоты, молочной кислоты, винной кислоты, яблочной кислоты, лимонной кислоты, фумаровой кислоты, малеиновой кислоты и бензойной кислоты.

К физиологически не вызывающим сомнения солям соединений согласно данному изобретению относятся также соли с обычными основаниями, такие как, например и предпочтительно, соли щелочных металлов (например, натриевые и калиевые соли), соли щелочно-земельных металлов (например, кальциевые и магниевые соли) и аммониевые соли, получаемые с аммиаком или органическими аминами с 116 С-атомами, такими как, например и предпочтительно, этиламин, диэтиламин, триэтиламин, этилдиизо-пропиламин, моноэтаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, дициклогексиламин, диметиламиноэтанол, прокаин, дибензиламин, Ν-метилморфолин, аргинин, лизин, этилендиамин, Ν-метилпиперидин и холин.

Под сольватами в рамках данного изобретения понимают такие формы соединений согласно данному изобретению, которые образуют в твердом или жидком состоянии комплекс в результате координации молекул растворителя. Гидраты представляют собой особые формы сольватов, у которых происходит координация воды.

Наряду с этим, данное изобретение охватывает также пролекарства соединений согласно данному изобретению. Понятие пролекарство охватывает соединения, которые сами по себе могут быть биологически активными или неактивными, однако во время нахождения в теле человека могут испытать превращение в соединения согласно данному изобретению (например, метаболически или гидролитически).

В формуле группы, которая может означать К³, конечная точка линии, рядом с которой стоит *, означает не только атом углерода, соответственно СН₂-группу, но и составную часть связи с атомом, с которым связан К³.

Предпочтительны соединения формулы (I), в которой К¹ означает трифторметил, 1,1-дифторэтил, 2,2-дифторэтил, 2,2,2-трифторэтил, дифторметокси-, трифторметоксигруппу или этил;

К² означает 2-метоксиэт-1-ил, циклопропил или 1-метокси-циклопроп-1-ил;

К³ означает группу формулы

причем * означает место присоединения к карбонильной группе, и их соли, их сольваты и сольваты их солей.

Предпочтительны также соединения формулы (I), в которой К¹ означает трифторметил, 2,2,2-трифторэтил, трифторметоксигруппу или этил; К² означает 2-метоксиэт-1-ил, циклопропил или 1-метоксициклопроп-1-ил;

К³ означает группу формулы

или

причем * означает место присоединения к карбонильной группе, и их соли, их сольваты и сольваты их солей.

Предпочтительны также соединения формулы (I), в которой К¹ означает трифторметил, 2,2,2-трифторэтил или трифторметоксигруппу; К² означает циклопропил или 1-метоксициклопроп-1-ил;

К³ означает группу формулы

причем * означает место присоединения к карбонильной группе, и их соли, их сольваты и сольваты их солей.

Предпочтительны также соединения формулы (I), в которой К¹ означает трифторметил, трифторметоксигруппу или этил;

К² означает 2-гидроксиэт-1-ил, 2-метоксиэт-1-ил, 2-этоксиэт-1-ил циклопропил; К³ означает группу формулы » — / \=О или «— / \_/ \_~/ Ύ

- 3 021944 причем * означает место присоединения к карбонильной группе, и их соли, их сольваты и сольваты их солей.

Предпочтительны также соединения формулы (I), в которой К¹ означает трифторметил или этил;

К² означает 2-гидроксиэт-1-ил, 2-метоксиэт-1-ил или циклопропил; К³ означает группу формулы

причем * означает место присоединения к карбонильной группе, и их соли, их сольваты и сольваты их солей.

Предпочтительны также соединения формулы (I), в которой К¹ означает трифторметил или этил;

К² означает 2-метоксиэт-1-ил;

К³ означает группу формулы

причем * означает место присоединения к карбонильной группе, и их соли, их сольваты и сольваты их солей.

Предпочтительны также соединения формулы (I), в которой К¹ означает трифторметил или этил;

К² означает 2-метоксиэт-1-ил;

К³ означает группу формулы причем * означает место присоединения к карбонильной группе, и их соли, их сольваты и сольваты их солей.

Предпочтительны соединения формулы (I), в которой К¹ означает трифторметоксигруппу;

К² означает 2-метоксиэт-1-ил или циклопропил;

К³ означает группу формулы

причем * означает место присоединения к карбонильной группе, и их соли, их сольваты и сольваты их солей.

Предпочтительны соединения формулы (I), в которой К¹ означает трифторметоксигруппу;

К² означает циклопропил;

К³ означает группу формулы *—(/ \=О или «—г/ причем * означает место присоединения к карбонильной группе, и их соли, их сольваты и сольваты их солей.

Предпочтительны соединения формулы (I), в которой К¹ означает трифторметоксигруппу;

К² означает 2-метоксиэт-1-ил или циклопропил;

К³ означает группу формулы

причем * означает место присоединения к карбонильной группе, и их соли, их сольваты и сольваты их солей.

Предпочтительны соединения формулы (I), в которой фенильный заместитель и 1,2,4-оксадиазол-5ил заместитель, которые присоединены к пиперидиновому кольцу, находятся в цис-положении друг к другу.

Предпочтительны также соединения формулы (I), в которой атом углерода, к которому присоединен фенильный заместитель, имеет δ-конфигурацию и атом углерода, к которому присоединен 1,2,4- 4 021944 оксадиазол-5-ил заместитель, также имеет §-конфигурацию.

Предпочтительны также соединения формулы (I), в которой К¹ означает трифторметил.

Предпочтительны также соединения формулы (I), в которой К¹ означает трифторметоксигруппу.

Предпочтительны также соединения формулы (I), в которой К¹ означает этил.

Предпочтительны также соединения формулы (I), в которой К² означает 2-метоксиэт-1-ил.

Предпочтительны также соединения формулы (I), в которой К² означает циклопропил.

Предпочтительны также соединения формулы (I), в которой К² означает 1-метоксициклопроп-1-ил.

Предпочтительны также соединения формулы (I), в которой К³ означает группу формулы .-^3=0 причем * означает место присоединения к карбонильной группе.

Предпочтительны также соединения формулы (I), в которой К³ означает группу формулы

ΛΛ/_Ζ° причем * означает место присоединения к карбонильной группе.

Приведенные по отдельности значения радикалов в любых комбинациях, соответственно предпочтительных комбинациях радикалов, могут независимо от любых приведенных комбинаций радикалов любым образом замещаться значениями радикалов других комбинаций.

Более предпочтительна комбинация двух или более названных выше предпочтительных областей значений радикалов.

Предметом данного изобретения далее является способ получения соединений формулы (I) или их солей, их сольватов или сольватов их солей, причем, или [А] соединения формулы

в которой К¹ и К² имеют значения, приведенные выше, подвергают взаимодействию с соединениями формулы

О _кэА_х, пт, в которой К³ имеет значения, приведенные выше;

X¹ означает галоид, предпочтительно бром или хлор, или гидрокси- или 4-нитрофеноксигруппу, или [В] соединения формулы (II) на первой стадии подвергают взаимодействию с 4нитрофенилхлороформатом и на второй стадии подвергают взаимодействию с соединениями формулы К⁵—Η (IV), в которой К³ имеет значения, приведенные выше, или [С] соединения формулы

в которой К¹ и К³ имеют значения, приведенные выше, подвергают взаимодействию с соединениями формулы нею

N

.. х (VI), в которой К² имеет значения, приведенные выше, или [Ό] соединения формулы

- 5 021944

в которой К¹ и К² имеют значения, приведенные выше, подвергают взаимодействию с 0,8-1,1 экв. метахлорпербензойной кислоты с образованием соединений формулы

в которой К¹ и К² имеют значения, приведенные выше, или [Е] соединения формулы (1а) подвергают взаимодействию с 2,0-3,0 экв. метахлорпербензойной кислоты с образованием соединений формулы

в которой К¹ и К² имеют значения, приведенные выше.

Соединения формул (1а)-(1с) представляют собой частичные подмножества соединений формулы (I).

Превращение согласно способу [А] в том случае, когда X¹ означает галоид, происходит, как правило, в инертном растворителе, при необходимости в присутствии основания, предпочтительно в температурном интервале от -30 до 50°С при нормальном давлении.

Инертными растворителями являются, например, тетрагидрофуран, метиленхорид, пиридин, диоксан или диметилформамид, предпочтителен метиленхлорид.

Основаниями являются, например, триэтиламин, диизопропилэтиламин или Ν-метилморфолин, предпочтительны триэтиламин или диизопропилэтиламин.

Взаимодействие согласно способу [А] в том случае, когда X¹ означает гидроксигруппу, происходит, как правило, в инертном растворителе, в присутствии дегидратизирующего реагента, при необходимости в присутствии основания, предпочтительно в температурном интервале от -30 до 50°С, при нормальном давлении.

Инертными растворителями являются, например, галоидуглеводороды, такие как дихлорметан или трихлорметан, углеводороды, такие как бензол, нитрометан, диоксан, диметилформамид или ацетонитрил. Также возможно использование смеси растворителей. Более предпочтительны дихлорметан или диметилформамид.

В качестве дегидратизирующих реагентов подходят при этом, например, карбодиимиды, такие как, например, Ν,Ν'-диэтил-, Ν,Ν'-дипропил-, Ν,Ν'-диизопропил-, Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид, гидрохлорид М(3-диметиламиноизопропил)-№-этилкарбодиимида (ЕЭС). Мциклогексилкарбодиимид-№пропилоксиметил-полистирол (Ρδ-карбодиимид) или карбонильные соединения, такие как карбонилдиимидазол, или 1,2-оксазолиевые соединения, такие как 2-этил-5-фенил-1,2-оксазолий-3-сульфат или 2трет-бутил-5-метил-изоксазолий-перхлорат, или ациламиносоединения, такие как 2-этокси-1этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин, или ангидрид пропанфосфоновой кислоты, или изобутилхлороформат, или бис-(2-оксо-3-оксазолидинил)-фосфорилхлорид или бензотриазолилокситри(диметиламино)фосфоний-гексафторфосфат, или О-(бензотриазол-1 -ил)-Л,^№,№-тетраметилуронийгексафторфосфат (НВТИ), 2-(2-оксо-1-(2Н)-пиридил)-1,1,3,3-тетраметилуронийтетрафторборат (ТРТИ) или О-(7-азабензотриазол-1-ил)-П,^№,№-тетраметил-уроний-гексафторфосфат (НАТИ), или 1-гидроксибензотриазол (НОВ!), или бензотриазол-1-илокси-трис-(диметиламино)фосфоний-гексафторфосфат (ВОР), или Ν-гидроксисукцинимид, или их смеси с основаниями.

Основаниями являются, например, карбонаты щелочных металлов, такие как, например, карбонат

- 6 021944 или гидрокарбонат натрия или калия, или органические основания, такие как триалкиламины, например триэтиламин, Ν-метилморфолин, Ν-метилпиперидин, 4-диметиламинопиридин или диизопропилэтиламин.

Предпочтительно конденсацию проводят с помощью НАТИ или ЕЭС в присутствии НОВ!.

Взаимодействие согласно способу [А], когда X¹ означает 4-нитрофеноксигруппу, проводят, как правило, в инертном растворителе, при необходимости в присутствии основания, при необходимости в микроволновой печи, предпочтительно в температурном интервале от 50 до 200°С, при давлении от нормального давления до 5 бар.

Инертными растворителями являются, например, Ν-метилпирролидон, диоксан или диметилформамид, предпочтителен Ν-метилпирролидон.

Основаниями являются, например, триэтиламин, диизопропилэтиламин или Ν-метилморфолин, предпочтительны триэтиламин или диизопропилэтиламин.

Соединения формулы (III) известны или могут быть синтезированы известными способами из соответствующих исходных соединений.

Взаимодействие на первой стадии согласно способу [Β] происходит, как правило, в инертном растворителе, в присутствии основания, предпочтительно в температурном интервале от 0 до 50°С, при нормальном давлении.

Инертными растворителями являются, например, галоидуглеводороды, такие как метиленхлорид, трихлорметан, тетрахлорметан или 1,2-дихлорэтан, предпочтителен метиленхлорид.

Основаниями являются, например, органические основания, такие как триалкиламины, например триэтиламин, Ν-метилморфолин, Ν-метилпиперидин, 4-диметиламинопиридин или диизопропилэтиламин, предпочтителен триэтиламин.

Взаимодействие на второй стадии согласно способу [Β] происходит, как правило, в инертном растворителе, в присутствии основания, при необходимости в микроволновой печи, предпочтительно в температурном интервале от 50 до 200°С, при давлении от нормального давления до 5 бар.

Инертными растворителями являются, например, диметилсульфоксид, диметилформамид или Νметилпирролидон, предпочтителен диметилформамид.

Основаниями являются, например, карбонаты щелочных металлов, такие как, например, карбонат натрия или калия, предпочтителен карбонат калия.

Соединения формулы (IV) известны или могут быть синтезированы известными способами из соответствующих исходных соединений.

Взаимодействие согласно способу [С] происходит, как правило, в инертном растворителе, в присутствии дегидратизирующего реагента, при необходимости в присутствии основания, предпочтительно в температурном интервале от комнатной температуры до температуры рефлюкса растворителя, при нормальном давлении.

Инертными растворителями являются, например, галоидуглеводороды, такие как метиленхлорид, трихлорметан или 1,2-дихлорэтан, простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран или 1,2диметоксиэтан, или другие растворители, такие как ацетон, диметилформамид, диметилацетамид, 2бутанон или ацетонитрил. Также возможно использование смесей растворителей.

Предпочтителен диметилформамид или смесь из диоксана и диметилформамида.

В качестве дегидратизирующих реагентов подходят при этом, например, карбодиимиды, такие как, например, Ν,Ν'-диэтил-, Ν,Ν'-дипропил-, Ν,Ν'-диизопропил-, Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид, гидрохлорид ^(3-диметиламиноизопропил)-№-этилкарбодиимида (ЕИС), ^циклогексилкарбодиимид-№пропилоксиметил-полистирол (Ρδ-карбодиимид) или карбонильные соединения, такие как карбонилдиимидазол, или 1,2-оксазолиевые соединения, такие как 2-этил-5-фенил-1,2-оксазолий-3-сульфат или 2трет-бутил-5-метил-изоксазолий-перхлорат, или ациламиносоединения, такие как 2-этокси-1этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин, или ангидрид пропанфосфоновой кислоты, или изобутилхлороформат, или бис-(2-оксо-3-оксазолидинил)-фосфорилхлорид или бензотриазолилокси-три(диметиламино)фосфоний-гексафторфосфат, или О-(бензотриазол-1 -ил)-КК№.№-тетраметилуронийгексафторфосфат (НВТИ), 2-(2-оксо-1-(2Н)-пиридил)-1,1,3,3-тетраметилуроний-тетрафторборат (ТРТИ) или О-(7-азабензотриазол-1-ил)-НХ,№,№-тетраметил-уроний-гексафторфосфат (НАТИ), или 1-гидроксибензотриазол (НОВ!), или бензотриазол-1-илокси-трис-(диметиламино)фосфоний-гексафторфосфат (ВОР), или бензотриазол-1-илокси-трис-(пирролидино)фосфоний-гексафторфосфат (ΡΥΒΟΡ), или Νгидроксисукцинимид, или их смеси с основаниями.

Основаниями являются, например, карбонаты щелочных металлов, такие как карбонат или гидрокарбонат натрия или калия, или органические основания, такие как триалкиламины, например триэтиламин, Ν-метилморфолин, Ν-метилпиперидин, 4-диметиламино-пиридин или диизопропилэтиламин, предпочтителен диизопропилэтиламин.

Предпочтительно конденсацию проводят с помощью НАТИ в присутствии диизопропилэтиламина или в виде альтернативы только карбонилдиимидазолом.

Соединения формулы (VI) известны или могут быть синтезированы известными способами из соответствующих исходных соединений.

- 7 021944

Взаимодействие согласно способу [И] проводят, как правило, в инертном растворителе, предпочтительно в температурном интервале от комнатной температуры до температуры рефлюкса растворителя, при нормальном давлении.

Метахлорпербензойную кислоту используют предпочтительно в количестве от 0,9 до 1,0 экв.

Инертными растворителями являются, например, галоидуглеводороды, такие как метиленхлорид, трихлорметан или 1,2-дихлорэтан. Предпочтителен метиленхлорид.

Взаимодействие согласно способу [Е] происходит, как правило, в инертных растворителях, предпочтительно в температурном интервале от комнатной температуры до температуры рефлюкса растворителя, при нормальном давлении.

Метахлорпербензойную кислоту предпочтительно используют в количестве от 2,3 до 2,6 экв., более предпочтительно в количестве 2,5 экв.

Инертными растворителями являются, например, галоидуглеводороды, такие как метиленхлорид, трихлорметан или 1,2-дихлорэтан. Предпочтителен метиленхлорид.

Соединения формулы (II) известны или могут быть получены, когда соединения формулы

в которой К¹ имеет значения, приведенные выше, на первой стадии подвергают взаимодействию с соединениями формулы (VI) и на второй стадии подвергают взаимодействию с кислотой.

Взаимодействие на первой стадии происходит так же, как описано для способа [С].

Взаимодействие на второй стадии происходит, как правило, в инертных растворителях, предпочтительно в температурном интервале от комнатной температуры до 60°С, при нормальном давлении.

Инертными растворителями являются, например, галоидуглеводороды, такие как метиленхлорид, трихлорметан, тетрахлорметан или 1,2-дихлорэтан, или простые эфиры, такие как тетрагидро фуран или диоксан, предпочтителен метиленхлорид.

Основаниями являются, например, трифторуксусная кислота или хлористый водород в диоксане, предпочтительна трифторуксусная кислота.

Соединения формулы (VII) известны или могут быть получены, когда соединения формулы

в которой К¹ имеет значения, приведенные выше;

К⁴ означает метил или этил, на первой стадии подвергают взаимодействию с ди-трет-бутилдикарбоксилатом и на второй стадии подвергают взаимодействию с основанием.

Взаимодействие на первой стадии происходит, как правило, в инертных растворителях, в присутствии основания, предпочтительно в температурном интервале от комнатной температуры до 50°С, при нормальном давлении.

Инертными растворителями являются, например, галоидуглеводороды, такие как метиленхлорид, трихлорметан, тетрахлорметан или 1,2-дихлорэтан, предпочтителен метиленхлорид.

Основаниями являются, например, триэтиламин, диизопропилэтиламин или Ν-метилморфолин, предпочтителен триэтиламин или диизопропилэтиламин.

Взаимодействие на второй стадии происходит, как правило, в инертных растворителях, в присутствии основания, предпочтительно в температурном интервале от комнатной температуры до температуры рефлюкса растворителя, при нормальном давлении.

Инертными растворителями являются, например, галоидуглеводороды, такие как метиленхлорид, трихлорметан, тетрахлорметан или 1,2-дихлорэтан, спирты, такие как метанол или этанол, простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, метил-трет-бутиловый эфир, 1,2-диметоксиэтан, диоксан или тетрагидрофуран, или другие растворители, такие как диметилформамид, диметилацетамид, ацетонитрил или пиридин, или смеси растворителей, или смеси растворителей с водой, предпочтительны метанол или метанол с эквивалентом воды, или смесь тетрагидрофурана с водой.

Основаниями являются, например, гидроксиды щелочных металлов, такие как гидроксид натрия, лития или калия, или карбонаты щелочных металлов, такие как карбонат цезия, натрия или калия, или алкоголяты, такие как трет-бутилат калия или натрия, предпочтителен гидроксид лития или трет-бутилат калия.

- 8 021944

Соединения формулы (VIII) известны или могут быть получены, когда гидрируют соединения формулы

в которой К¹ и К⁴ имеют значения, приведенные выше.

Гидрирование, как правило, проводят с помощью восстановительного средства в инертных растворителях, при необходимости с добавлением кислоты, такой как минеральная кислота и карбоновая кислота, предпочтительна уксусная кислота, предпочтительно в температурном интервале от комнатной температуры до температуры рефлюкса растворителя, в интервале давлений от нормального давления до 100 бар, предпочтительно при нормальном давлении или при 50-80 бар.

В качестве восстановительного средства предпочтителен водород с палладием на активном угле, с родием на активном угле, с рутением на активном угле или смеси этих катализаторов, или водород с палладием на оксиде алюминия или с родием на оксиде алюминия, или водород с палладием на активном угле и с оксидом платины(^). предпочтителен водород с палладием на активном угле, или с родием на активном угле, или водород с палладием на активном угле и с оксидом платины(Ш). Под давлением можно гидрировать только водородом и с одним оксидом платины(Ш).

Инертными растворителями являются, например, спирты, такие как метанол, этанол, н-пропанол, изопропанол, н-бутанол или трет-бутанол, или концентрированная уксусная кислота, или метанол с добавкой концентрированной соляной кислотой, предпочтительны метанол или этанол, или концентрированная уксусная кислота, или метанол с добавкой концентрированной соляной кислоты.

Соединения формулы (IX) известны или могут быть получены, когда соединения формулы о (X), в которой К⁴ имеет значения, приведенные выше, подвергают взаимодействию с соединениями формул

в которых К¹ имеет значения, приведенные выше.

Взаимодействие происходит, как правило, в инертных растворителях, в присутствии катализатора, при необходимости в присутствии дополнительного реагента, предпочтительно в температурном интервале от комнатной температуры до температуры рефлюкса растворителя, при нормальном давлении.

Инертными растворителями являются, например, простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран или 1,2-диметоксиэтан, углеводороды, такие как бензол, ксилол или толуол, или другие растворители, такие как нитробензол, диметилформамид, диметилацетамид, диметилсульфоксид или Νметилпирролидон, при необходимости к этим растворителям добавляют немного воды. Предпочтителен толуол с водой или смесь 1,2-диметоксиэтана, диметилформамида и воды.

Катализаторами, например, для условий реакции Сузуки являются обычные палладиевые катализаторы, предпочтительны такие катализаторы, как, например, дихлор-бис-(трифенилфосфин)палладий, тетракистрифенилфосфинпалладий(0), ацетат палладия(П) или бис-(дифенилфосфан-ферроценил)палладий(П)-хлорид.

К дополнительным реагентам относятся, например, ацетат калия, карбонат цезия, калия или натрия, гидроксид бария, трет-бутилат калия, фторид цезия, фторид калия или фосфат калия, или их смеси, предпочтительны фторид калия или карбонат натрия или смесь фторида калия и карбоната калия.

Соединения формул (X), (XI) и (XIII) известны или могут быть синтезированы известными способами из соответствующих исходных соединений.

Соединения формулы (V) известны или могут быть получены, когда соединения формулы

в которой К¹ и К³ имеют значения, приведенные выше;

- 9 021944

К⁴ означает метил или этил, подвергают взаимодействию с основанием.

Взаимодействие происходит, как правило, в инертных растворителях, в присутствии основания, предпочтительно в температурном интервале от комнатной температуры до температуры рефлюкса растворителя, при нормальном давлении.

Инертными растворителями являются, например, галоидуглеводороды, такие как метиленхлорид, трихлорметан, тетрахлорметан или 1,2-дихлорэтан, спирты, такие как метанол или этанол, простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, метил-трет-бутиловый эфир, 1,2-диметоксиэтан, диоксан или тетрагидрофуран, или другие растворители, такие как диметилформамид, диметилацетамид, ацетонитрил или пиридин, или смеси растворителей, или смеси растворителей с водой, предпочтительны метанол или метанол с одним эквивалентом воды или смесь тетрагидрофурана и воды.

Основаниями являются, например, гидроксиды щелочных металлов, такие как гидроксид натрия, лития или калия, или карбонаты щелочных металлов, такие как карбонат цезия, карбонат натрия или карбонат калия, или алкоголяты, такие как трет-бутилат калия или натрия, предпочтителен гидроксид лития или трет-бутилат калия.

Соединения формулы (XII) известны или могут быть получены, когда соединения формулы (VIII) подвергают взаимодействию с соединениями формулы (III).

Взаимодействие происходит, как описано для способа [А].

В альтернативном способе соединения формулы (XII) можно получить, когда соединения формулы (VIII) на первой стадии подвергают взаимодействию с 4-нитрофенилхлороформатом, а на второй стадии с соединениями формулы (IV).

Взаимодействие происходит так же, как описано для способа [В].

Получение соединений формулы (I) можно пояснить следующей схемой реакции:

Соединения согласно данному изобретению обнаруживают непредсказуемый, ценный фармакологический и фармакокинетический спектр действия. При этом речь идет о селективных антагонистах РАК-1-рецептора, которые, в частности, действуют в качестве ингибиторов агрегации тромбоцитов, в качестве ингибиторов активирования клеток эндотелия, в качестве ингибиторов пролиферации клеток гладких мышц и в качестве ингибиторов роста опухолей. Для некоторых из названных заболеваний, например сердечно-сосудистых заболеваний с высоким тромбоэмболическим риском, непрерывная защита в результате РАК-1 антагонизма при одновременно простом обращении с лекарством имеет большое значение. РАК-1-антагонисты данного изобретения показывают длительное действие после одноразового орального приема, то есть действие, продолжающееся как минимум 16 ч.

В связи с этим они пригодны для применения в качестве лекарств для лечения и/или профилактики заболеваний у людей и животных.

Другим предметом данного изобретения является применение соединений согласно данному изобретению для лечения и/или профилактики заболеваний, предпочтительно тромбоэмболических заболеваний и/или тромбоэмболических осложнений.

К тромбоэмболическим заболеваниям по смыслу данного изобретения относятся, в частности, такие заболевания, как инфаркт сердца с увеличением δΤ-сегмента (δΤΕΜΙ) и без увеличения δΤ-сегмента (поп-8ТЕМД, стабильная стенокардия (Аи§1па РсеЮпх). нестабильная стенокардия, реокклюзии и рестенозы после коронарных вмешательств (интервенций, таких как ангиопластия, имплантация стентов или аортокоронарное шунтирование, периферические артериальные заболевания, связанные с закупоркой, легочные эмболии, глубокие венозные тромбозы, тромбозы почечных вен, транзиторические ишемические приступы, а также тромботический и тромбоэмболический мозговой инсульт.

Вещества пригодны в связи с этим для предупреждения и лечения кардиогенных тромбоэмболий, таких как, например, ишемия мозга, инсульт (внезапный приступ) и системные тромбоэмболии и ишемии, у пациентов с острыми, интермиттирующими или персистирующими аритмиями сердца, такими как, например, мерцание предсердий, и такими, которые подходят под кардиоверсию, далее у пациентов с заболеваниями сердечных клапанов или с внутрисосидистыми телами, такими как, например, искусственные сердечные клапаны, катетеры, внутриаортная баллонная противопульсация и зонды водителя ритма.

Тромбоэмболические осложнения далее появляются при микроангиопатических гемолитических

- 10 021944 анемиях, при экстракорпоральных системах кровообращения, таких как, например, гемодиализ, гемофильтрация, вспомогательные желудочковые устройства и искусственное сердце, а также при наличии протезов сердечных клапанов.

Кроме того, соединения согласно данному изобретению также используют для воздействия на заживление ран, для профилактики и/или лечения атеросклеротических заболеваний сосудов и воспалительных заболеваний, таких как ревматические заболевания опорно-двигательного аппарата, коронарных сердечных заболеваний, сердечной недостаточности, высокого кровяного давления, воспалительных заболеваний, таких как астма, хроническое обструктивное заболевание легких (СОРИ), воспалительных легочных заболеваний, гломерулонефрит и воспалительных кишечных заболеваний, сверх того также для профилактики и/или лечения болезни Альцгеймера, аутоиммунных заболеваний, болезни Крона и язвенного колита.

Наряду с этим, соединения согласно данному изобретению можно также использовать для ингибирования роста опухолей и образования метастазов, при микроангиопатиях, при связанной со старостью дегенерацией желтого пятна сетчатки, при диабетической ретинопатии, диабетической нефропатии и других микроваскулярных (микрососудистых) заболеваниях, а также для предупреждения и лечения тромбоэмболических осложнений, таких как, например, венозные тромбоэмболии, в случае пациентов с опухолями, в частности, таких, которые могут быть связаны с большими хирургическими вмешательствами или с химической или радиационной терапией.

Далее соединения согласно данному изобретению пригодны для лечения рака. Раковые заболевания включают среди других: карциномы (среди них рак молочной железы, гепатоцеллюларные карциномы, рак легкого, колоректальный рак, рак толстой кишки и меланомы), липомы (например, липома неХодгкина (Νοη-ΗοάβΚίη) и клетки грибовидного микоза), лейкемии, саркомы, мезотелиомы, рак мозга (например, глиомы), герминомы (например, рак яичка и рак яичника), хориокарцинома, рак легких, рак поджелудочной железы, рак щитовидной железы, рак головы и рак горла, рак эндометрия, рак шейки матки, рак мочевого пузыря, рак желудка и мультиплетная миелома.

Кроме того, экспримированный РАК-1 передает клеткам эндотелия сигналы, которые сходятся к росту сосудов (ангиогенез), явление, которое необходимо для возможности роста опухолей свыше около 1 мм³. Индукция ангиогенеза возможна и при других заболеваниях, среди них заболевания ревматического ряда (например, ревматоидные артриты), при легочных заболеваниях (например, фиброз легких, пульмональная гипертония, в частности пульмональноартериальная гипертония, заболевания, характеризующиеся закупоркой легочных сосудов), склероз артерий, разрыв бляшки, диабетическая ретинопатия и влажная дегенерация макулы.

Наряду с этим, соединения согласно данному изобретению подходят для лечения сепсиса. Сепсис (или септикемия) является распространенным заболеванием с высокой летальностью. Начальные симптомы сепсиса типичным образом не специфичны (например, температура, плохое самочувствие), дальнейший ход болезни, однако, может приводить к общему активированию системы сворачивания крови (диссеминированной внутрисосудистой коагуляции или коагулопатия потребления, в дальнейшем обозначаемая как И1С) с микротромбозированием в различных органах и с вторичными осложнениями, связанными с кровотечениями. Кроме того, это может приводить к эндотелиальному повреждению с повышенной проницаемостью сосудов и приводить к выходу жидкости и протеинов во внесосудистое пространство. Дальнейшее развитие может приводить к дисфункции или отказу одного из органов (например, почечная недостаточность, печеночная недостаточность, нарушение дыхания, нарушение центральной нервной системы и нарушение сердечно-сосудистой системы вплоть до недостаточности деятельности многих органов). От этого может в принципе пострадать каждый орган, чаще всего дисфункция органа и отказ деятельности наступает у легкого, почки, сердечно-сосудистой системы, системы свертывания крови, центральной нервной системы, эндокринных желез и печени. Сепсис может быть связан с острым синдромом нарушения дыхания (Аси1е КекрпаЮгу Όίδΐτθδδ 8уибтоте, далее обозначаемый как АКЭ§). АКЭ§ может появляться и независимо от сепсиса. Септический шок означает наступление понижения кровяного давления, требующее оказания медицинской помощи, и способствует дальнейшему повреждению органа и ухудшению прогноза.

Возбудителями болезней могут быть бактерии (грамотрицательные и грамположительные), грибы, вирусы и/или эукариоты. Входной форточкой, соответственно первичными инфекциями, могут быть, например, пневмония, инфекция мочеиспускательных путей, перитонит. Инфекция может быть, но не должна быть обязательно связана с бактериеэмией.

Сепсис дефинируется как присутствие инфекции и системного воспалительного ответного синдрома (8у81ешю игПаттаЮгу гекроике куибгоше, далее обозначаемого как δΙΚδ). δΙΚδ наступает в результате инфекции, а также в результате других состояний, таких как ранения, ожоги, шоки, операции, ишемия, панкреатит, реанимация или опухоли. Согласно решению комитета АССР/8ССМ Соикеикик СоИегеисе СотшИее от 1992 (Стб. Саге Меб. 1992, 20, 864-874) описаны необходимые для диагноза δΙΚδ симптомы для диагноза и измеряемые параметры (среди которых измененная температура тела, повышенная частота сердечных сокращений, затруднения с дыханием и измененная картина крови). На более поздней (2001) международной конференции по определению сепсиса

- 11 021944 §ССМ/Е§1СМ/АССР/АТ§/§1§ 1п1егпа1юпа1 8ер818 Όβίΐηίΐίοηδ СопГегепсе критерии в существенной мере сохранены, однако в деталях более уточнены (Ьеуу и др., Сгк. Саге Мек. 2003, 31, 1250-1256).

О1С и δΙΚδ могут происходить в рамках сепсиса, а также вследствие операций, опухолевых заболеваний, ожогов и других ранений (повреждений). В случае О1С происходит массовое активирование системы сворачивания крови на поверхности поврежденных клеток эндотелия, поверхностях инородных тел или поврежденной экстраваскулярной ткани. Как следствие происходит сворачивание крови в маленьких сосудах различных органов с гипоксией и последующей дисфункцией органов. Вторично это приводит к расходованию факторов сворачивания крови (например, фактор X, протромбин, фибриноген) и пластинок, в результате чего снижается способность крови к сворачиванию и могут возникнуть тяжелые кровотечения.

Соединения согласно данному изобретению могут, наряду с этим, применяться для воспрепятствования (предупреждения) коагуляции ех νίνο, например для консервирования продуктов крови и плазмы, для очистки/предварительной обработки катетеров и других медицинских вспомогательных средств и приборов, включая экстракорпоральные кровеносные системы, для покрытия слоем искусственных поверхностей применяемых ш νίνο или ех νίνο медицинских вспомогательных средств и приборов или в случае биологических проб, которые содержат кровяные пластинки.

Другим предметом данного изобретения является применение соединения согласно данному изобретению для покрытия слоем медицинских приборов и имплантатов, например катетеры, протезы, стенты или искусственные сердечные клапаны. Соединения согласно данному изобретению при этом могут быть крепко связаны с поверхностью или высвобождаться через определенный промежуток времени, выделяясь из покрывающего слоя носителя в непосредственное окружение для локального действия.

Другим предметом данного изобретения является применение соединения согласно данному изобретению для лечения и/или профилактики заболеваний, в частности указанных выше заболеваний.

Другим предметом данного изобретения является применение соединений согласно данному изобретению для получения лекарства для лечения и/или профилактики заболеваний, в частности указанных выше заболеваний.

Другим предметом данного изобретения является способ лечения и/или профилактики заболеваний, в частности указанных выше заболеваний, путем применения терапевтически эффективного количества соединения согласно данному изобретению.

Другим предметом данного изобретения являются лекарства, содержащие одно соединение согласно данному изобретению и одно или несколько других биологически активных веществ, в частности, для лечения и/или профилактики указанных выше заболеваний. В качестве подходящих комбинационных биологически активных веществ, например и предпочтительно, следует назвать блокаторы кальциевого канала, например амлодипин бесилат (например, норваск®), фелодипин, дилтиазем, верапамил, нифедипин, никардипин, нисолдипин и беприлил;

иомеризин;

статины, например аторвастатин, флувастатин, ловастатин, питавастатин, правастатин, росувастатин и симвастатин;

ингибиторы абсорбции холестирина, например эзетимибы и ΑΖΌ4121;

ингибиторы протеинов, переносящих холестириловые эфиры (СЕТР), например торцетрапиб; низкомолекулярные гепарины, например далтепарин натрий, ардепарин, цертопарин, эноксапарин, парнапарин, тинзапарин, ревипарин и надропарин;

другие антикогулянты, например варфарин, маркумар, фондапаринукс;

антиаритмики, например дофетилид, ибутилид, метопролол, метопрололтартрат, пропранолол, атенолол, аймалин, дисопирамид, праймалин, прокаинамид, квинидин, спартеин, априндин, лидокаин, мексилетин, токамид, енкамид, флекамид, лоркамид, морицизин, пропафенон, ацебутолол, пиндолол, амиодарон, бретилиум-тозилат, бунафтин, соталол, аденозин, атропин и дигоксин;

альфа-адренерговые агонисты, например доксазосин-мезилат, теразосон и празосин; бета-адренерговые блокаторы, например карведилол, пропанолол, тимолол, надолол, атенолол, метопролол, бисопролол, небиволол, бетаксолол, ацебутолол и бисопролол; альдостерон-антагонисты, например эплеренон и спиронолактон;

ингибиторы энзимов, конвертирующих ангиотензин (АСЕ-ингибиторы), например моэксиприл, гидрохлорид квиналприла, рамиприл, лизиноприл, гидрохлорид беназеприла, эналаприл, каптоприл, спираприл, периндоприл, фосиноприл и трандолаприл;

блокаторы ангиотензин II рецептора (АКВе), например олмесартан-медоксомил, кандесартан, валсартан, телмисартан, ирбесартан, лосартан и эпросартан;

антагонисты эндотелина, например тезосентан, босентан и ситакссентан-натрий;

нейтральные ингибиторы эндопептидазы, например кандоксатрил и экадотрил;

ингибиторы фосфодиэстеразы, например милриноон, теофиллин, винпоцетин, ΕΗΝΑ (эритро-9-(2гидрокси-3-нонил)аденин), силденафил, варденафил и тадалафил; фибринолитики, например ретеплаз, алтеплаз и тенектеплаз;

ОР ПЪ/Ша-антагонисты, например интегриллин, абциксимаб и тирофибан;

- 12 021944 прямые ингибиторы тромбинина, например ΆΖΌ0837, аргатробан, бивалирудин и дабигатран; непрямые ингибиторы тромбинина, например одипарцил;

прямые и непрямые ингибиторы фактора Ха, например фондапаринукс-натрий, апиксабан, разаксабан, ривароксабан (ΒΑΥ 59-7939), КВА-1982, ОХ-9065а, АУЕ3247, отамиксабан (ХКР0673), АУЕ6324, 8АК377142, идрапаринукс, 88К126517, ΌΒ-772ά, ΌΤ-83Γ), ΥΜ-150, 813893, ΒΥ517717 и Όυ-1766;

прямые и непрямые ингибиторы фактора Ха/11а, например эноксапарин-натрий, АУЕ5026, 88К128428, 88К128429 и ΒΙΒΤ-986 (таногитран);

модуляторы липопротеин-ассоциированной фосфолипазы А2 (ЬрРЬА2);

диуретики, например хлорталидон, этакриновая кислота, фуросемид, амилорид, хлоротиазид, гидрохлоротиазид, метилхлотиазид и бензтиазид;

нитраты, например изосорбид-5-мононитрат;

антагонисты тромбоксана, например сератродаст, пикотамид и раматробан;

ингибиторы агрегации пластинок, например клопидогрель, тиклопидин, цилостазол, аспирин, абциксимаб, лимапрост, эптифибатид и СТ-50547;

ингибиторы циклооксигеназы, например мелоксикам, рофекоксиб и целекоксиб; натриуретические пептиды В-типа, например несиритид и уларитид;

ХУ1РОР-модуляторы, например ХКР0038;

НТ1В/5-НТ2А-антагонисты, например 8Ь65.0472;

активаторы гуанилатциклазы, например атацигуат (НМК1766), ΗΜΚΤ069, риоцигуат и цинацигуат;

Ο-ΝΘ8 усилители транскрипции, например АУЕ9488 и АУЕ3085; анти-атерогенные вещества, например АС1-1067;

СРи-ингибиторы, например ΑΖ^9684; ингибиторы ренинина, например алискирин и νΝΓ489;

ингибиторы агрегации пластинок, индуцированной аденозин-дифосфатом, например клопидогрел, тиклопидин, прасугрел, ΑΖ^6140, тикагрелор и элиногрел;

ХНЕ-1 ингибиторы, например ΑVЕ4454 и ΑVЕ4890.

Антибиотическая терапия: различные антибиотики или антифунгальные комбинации лекарств имеются в виду, или в виде рассчитанной терапии (перед получением результатов о микробном заражении) или в виде специфической терапии; жидкостная терапия, например кристаллоидальные или коллоидальные жидкости; вазопрессоры, например норепинефрин, допамин или вазопрессин; инотропная терапия, например добутамин; кортикостероиды, например гидрокортизон или флудрокортизон; рекомбинантный человеческий активированный протеин (белок) С, ксигрис; кровяные продукты, например концентраты эритроцитов, концентраты тромбоцитов, эритропиетин или свежезамороженная плазма; механическое машинное дыхание при индуцированном сепсисом остром легочном повреждении (Асйе Ьипд 1п)игу (АЬ1)) соответственно, остром респираторном заболевании (Асйе Кекрийоту Όίδϋΐδδ 8упйтоше (АКО8)), например допустимой гиперкапнии, более низких объемах тидала; успокоение седитативными средствами, например диазепам, лоразепам, мидазолам или пропофол. Опиоиды, например фентанил, гидроморфон, морфин, меперидин или ремифентанил. Х8АЮ$, например кеторолак, ибупрофен или ацетаминофен. Нейромускулярная блокада, например панкурониум; контроль глюкозы, например инсулин, глюкоза; способы замещения почек, например непрерывная вено-венозная-гемофильтрация или интермиттирующий гемодиализ. Допамин с низкой дозировкой для ренальной защиты; антикоагулянты, например, для профилактики тромбоза или при способах замещения почек, инфракционированные гепарины, гепарины с низким молекулярным весом, гепариноиды, гирудин, бивалирудин или арготробан; бикарбонатная терапия; профилактика стрессовой язвы, например, ингибиторы Н2-рецептора, антазида.

Лекарства при пролиферативных заболеваниях: урацил, хлорметин, циклофосфамид, ифосфамид, мелфалан, хлорамбуцил, пипоброман, триэтиленэмеламин, триэтиленетиофосфорвамин, бусулфан, кармустин, ломустин, стрептозоцин, дакарбазин, метотрексат, 5-флуороурацил, флоксуридин, цитарабин, бмеркаптопурин, 6-тиогуанин, флударабин фосфат, пентостатин, винбластин, винкристин, виндесин, блеомицин, дактиномицин, даунорубицин, доксорубицин, эпирубицин, идарубицин, паклитаксел, митрамицин, деоксикоформицин, митомицин-С, Ь-аспаргиназа, интерферон, этопосид, тенипозид 17.альфа.этинилэстрадиол, диэтилстилбестрол, тестостерон, преднизон, флуоксиместерон, пропионат дромостанолона, тестолактон, мегестролацетат, тамоксифен, метилпреднизолон, метилтестостерон, преднизолон, триамцинолон, хлоротрианизен, гидроксипрогестерон, аминоглютетимид, эстранрустин, медроксипрогестеронацетат, леупролид, флутамид, торемифен, госерелин, цисплатин, карбоплатин, гидроксимочевина, амсакрин, прокарбазин, митотан, митоксантрон, левамисол, навелбен, анастразол, летразол, капецитабин, релоксафин, дролоксафин, гексаметилмеламин, оксалиплатин (элоксатин®), иресса (гефтимид, Ζ61839), КСЕЛОДА® (капецитабин), таркева® (эрлотиниб), азацитидин (5-азацитидин; 5-А/аС), темозоломид (темодар®), гемцитабин (то есть СЕΜΖΑК® (гемцитабин НС1)), вазостатин или комбинация двух или нескольких названных выше веществ.

Другим предметом данного изобретения является способ предупреждения коагуляции крови ίη νίίτο, в частности, в случае консервов крови или биологических проб, которые содержат кровяные пла- 13 021944 стинки, отличающийся тем, что добавляют антигоагуляторно действующее количество соединения согласно данному изобретению.

Соединения согласно данному изобретению могут действовать системно и/или локально. Для этой цели они могут применяться подходящим образом, например орально, парентерально, пульмонально, назально, подъязычно, язычно, щечно, ректально, накожно, чрескожно, конъюктивально, в уши или в виде имплантанта, соответственно стента.

Для этих путей применения соединения согласно данному изобретению могут применяться в подходящих лекарственных формах для приема.

Для орального применения подходят формы применения, функционирующие согласно уровню техники, быстро и/или модифицировано высвобождающие соединения согласно данному изобретению, которые содержат соединения согласно данному изобретению в кристаллической и/или аморфной форме, и/или в растворенном виде, такие как, например, таблетки (не покрытые пленкой или покрытые пленкой таблетки, например, с покровами, которые устойчивы к желудочному соку, или с замедленно растворяемыми или нерастворяемыми покровами, которые контролируют высвобождение соединений согласно данному изобретению), быстро распадающиеся в ротовой полости таблетки или пленки/облатки, пленки/лиофилизаты, капсулы (например, твердые или мягкие желатиновые капсулы), драже, грануляты, пилюли, порошки, эмульсии, суспензии, аэрозоли или растворы.

Парентеральное применение может происходить так, что избегается ресорбционная стадия (например, внутривенно, внутриартериально, внутрисердечно, интраспинально или интралумбально) или путем включения ресорбции (например, внутримышечно, подкожно, внутрикожно, чрескожно или внутрибрюшно). Для парентерального применения подходят в качестве форм для применения среди прочих инъекционные и инфузионные препараты в виде растворов, суспензий, эмульсий, лиофилизатов или стерильных порошков.

Предпочтительным является оральное применение.

Для других путей применения пригодны, например, ингаляционные лекарственные формы (среди прочих порошковые ингаляторы, распылители), капли в нос - растворы или спреи, язычные, подъязычные и буккально применяемые таблетки, пленки/облатки или капсулы, суппозитории, препараты для внесения в уши или глаза, вагинальные капсулы, водные суспензии (лосьоны, получаемые при встряхивании смеси), липофильные суспензии, мази, кремы, трансдермальные терапевтические системы (например, пластыри), молочко, пасты, пены, порошки для посыпания, имплантаты или стенты.

Соединения согласно данному изобретению могут быть переведены в приведенные формы применения лекарств. Это можно осуществить известным образом путем смешивания с инертными, нетоксичными, фармацевтически пригодными вспомогательными веществами. К таким вспомогательным веществам относятся среди прочих вещества-носители (например, микрокристаллическая целлюлоза, лактоза, маннитол), растворители (например, жидкие полиэтиленгликоли), эмульгаторы и диспергирующие и смачивающие средства (например, додецилсульфат натрия, полиоксисорбитанолеат), связующие средства (например, поливинилпирролидон), синтетические и природные полимеры (например, альбумин), стабилизаторы (например, антиоксиданты, такие как, например, аскорбиновая кислота), красители (например, неорганические пигменты, такие как, например, оксиды железа) и средства, корригирующие вкус и/или запах.

Другим предметом данного изобретения являются лекарства, которые содержат как минимум одно соединение согласно данному изобретению, предпочтительно вместе с одним или несколькими инертными нетоксичными, фармацевтически пригодными вспомогательными веществами, а также их применение для названных выше целей.

Вообще оказалось предпочтительным, когда при парентеральном применении принимается количество от 5 до 250 мг каждые 24 ч для достижения эффективных результатов. При оральном применении это количество составляет от 5 до 100 мг каждые 24 ч.

Однако может возникнуть необходимость отклонения от указанных количеств, а именно в зависимости от веса тела, пути применения, индивидуального поведения по отношению к биологически активному веществу, вида препарата и момента времени, соответственно интервала, в который происходит прием лекарства.

Процентные задания в последующих тестах и примерах, если особо не оговорено, даны в виде весовых процентов; доли приведены в виде весовых долей. Соотношение растворителей, условия разбавления и концентрационные задания жидко/жидких растворов относятся в каждом случае к объемам. Обозначение в/о означает вес/объем. Так, например, 10% в/о означает, что 100 мл раствора или суспензии содержат 10 г вещества.

А. Примеры.

Сокращения:

КДИА - карбонилдиимидазол,

Б - дублет (в случае ЯМР),

ТСХ - тонкослойная хроматография,

ПХИ - прямая химическая ионизация (в случае МС),

- 14 021944 бб - двойной дублет (в случае ЯМР),

ДМАП - 4-диметиламинопиридин,

ДМФ - Ν,Ν-диметилформамид,

ДМСО - диметилсульфоксид,

ДФФА - дифенилфосфоразидат,

ΌδΟ - дисукцинимидилкарбонат, от теор. - от теоретического (выход), экв. - эквивалент(ы),

ИЭП - ионизация электронным пучком (в случае МС),

ΌΆΌ - с помощью диодной матрицы,

НАТИ - О-(7-азабензотриазол-1-ил)-Ы,Ы,№,№-тетраметилуроний-гексафторфосфат,

ЖХВР - жидкостная хроматография высокого разрешения, высокого давления,

ЖХ-МС - жидкостная хроматография, сопряженная с масс-спектрометрометрией,

ЬОА - диизопропиламид лития, т - мультиплет (в случае ЯМР), мин - минута(ы),

МС - масс-спектрометрия,

ЯМР - спектрометрия ядерного магнитного резонанса,

ΡΥΒΟΡ - бензотриазол-1-илокси-трис-(пирролидино)-фосфоний-гексафторфосфат, с] - квартет (в случае ЯМР),

ΚΡ - обратимая фаза (в случае ЖХВР),

Ю - время удерживания (в случае ЖХВР),

- синглет (в случае ЯМР), ΐ - триплет (в случае ЯМР),

ТГФ - тетрагидрофуран,

ЖХВР-методы.

Метод 1А. Прибор: НР 1100 с ОАО-детектированием; колонка: Кгота8Й 100 ΚΡ-18, 60x2,1 мм, 3,5 мкм; элюент А: 5 мл перхлорной кислоты (70%)/1 л воды, элюент В: ацетонитрил; градиент: 0 мин 2% В 0,5 мин 2% В 4,5 мин 90% В 6,5 мин 90% В 6,7 мин 2% В 7,5 мин 2% В; поток: 0,75 мл/мин; температура колонки: 30°С; УФ-детектирование: 210 нм.

ЖХ-МС-методы.

Метод 1В. Тип прибора МС: М1сгота88 ΖΡ; тип прибора ЖХВР: ΗΡ 1100 §епе8; УФ ΌΑΌ; колонка: ΡΙιοηοιηοηοχ Оет1ш 3 мкм, 30x3,0 мм; элюент А: 1 л воды + 0,5 мл 50% муравьиной кислоты, элюент В: 1 л ацетонитрила + 0,5 мл 50% муравьиной кислоты; градиент: 0,0 мин 90%А 2,5 мин 30%А 3,0 мин

5%А 4,5 мин 5%А; поток: 0,0 мин 1 мл/мин, 2,5 мин/3,0 мин/4,5 мин 2 мл/мин; печь: 50°С; УФдетектирование: 210 нм.

Метод 2В. Прибор: М1егота88 ^иаΗ^οΡ^ет^е^ с Юа1ег8 υΡΕ-С АссцЩу; колонка: ТНегто Нурегей ООЙО 1,9 мкм, 50x1 мм; элюент А: 1 л воды + 0,5 мл 50% муравьиной кислоты, элюент В: 1 л ацетонитрила + 0,5 мл 50% муравьиной кислоты; градиент: 0,0 мин 90%А 0,1 мин 90%А 1,5 мин 10%А

2,2 мин 10%А; печь: 50°С; поток: 0,33 мл/мин; УФ-детектирование: 210 нм.

Метод 3В. Тип прибора МС: Мюгота88 ΖΡ; тип прибора ЖХВР: Юа1ег8 АШаисе 2795; колонка: ΡНеηοтеηеx 8уиег§1 2,5 мкм МАХ-ΚΡ 100А Мегсигу, 20x4 мм; элюент А: 1 л воды +0,5 мл 50% муравьиной кислоты, элюент В: 1 л ацетонитрила + 0,5 мл 50% муравьиной кислоты; градиент: 0,0 мин 90%А 0,1 мин 90%А 3,0 мин 5%А 4,0 мин 5%А 4,01 мин 90%А; поток: 2 мл/мин; печь: 50°С; УФдетектирование: 210 нм.

Метод 4В. Прибор: Мюгота88 РиаИго Мюго М§ с ЖХВР Адбей 8епе 1100; колонка: ТНегто Нурег8Ϊ1 ООЙО 3 мкм 20x4 мм; элюент А: 1 л воды + 0,5 мл 50% муравьиной кислоты, элюент В: 1 л ацетонитрила + 0,5 мл 50% муравьиной кислоты; градиент: 0,0 мин 100%А 3,0 мин 10%А 4,0 мин 10%А

4,01 мин 100%А 5,00 мин 100%А; печь: 50°С; поток: 2 мл/мин; УФ-детектирование: 210 нм.

Метод 5В. Прибор: Юа1ег8 АСРИ1ТУ 5>РО υΡΕ-С §у81ет; колонка: Юа1ег8 АссцЩу υΡΕ-С Н§§ Т3 1,8 мкм 50x 1 мм; элюент А: 1 л воды + 0,25 мл 99% муравьиной кислоты, элюент В: 1 л ацетонитрила + 0,25 мл 99% муравьиной кислоты; градиент: 0,0 мин 90%А 1,2 мин 5%А 2,0 мин 5%А; печь: 50°С; поток: 0,40 мл/мин; УФ-детектирование: 210-400 нм.

Метод 6В. Тип прибора МС: Юа1ег8 (Мюгота88) Риайго Мюго; тип прибора ЖХВР: Адйей 1100 8епе; колонка: ТНегто Нурег8Й ООЙО 3 мкм 20x4 мм; элюент А: 1 л воды + 0,5 мл 50% муравьиной кислоты, элюент В: 1 л ацетонитрила + 0,5 мл 50% муравьиной кислоты; градиент: 0,0 мин 100%А 3,0 мин 10%А 4,0 мин 10%А 4,01 мин 100%А (поток: 2,5 мл/мин) 5,00 мин 100%А; печь: 50°С; поток: 2 мл/мин; УФ-детектирование: 210 нм.

Метод 7В. Тип прибора МС: Юа1ег8 ΖΡ; тип прибора ЖХВР: АцбеШ 1100 §епе8; ИУ ОАЭ; колонка: ТНегто Нурег8Й ООЙО 3 мкм 20x4 мм; элюент А: 1 л воды + 0,5 мл 50% муравьиной кислоты, элюент В:

- 15 021944 л ацетонитрила + 0,5 мл 50% муравьиной кислоты; градиент: 0,0 мин 100% А 3,0 мин 10% А 4,0 мин 10% А, печь: 55°С; поток: 2 мл/мин; УФ-детектирование: 210 нм.

Препаративное разделение энантиомеров.

Метод 1Ό. Фаза: Эа1се1 СЫта1рак АЭ-Н, 5 мкм 250x20 мм, элюент: изогексан/изопропанол 25:75; поток: 15 мл/мин, температура: 45°С; УФ-детектирование: 220 нм.

Метод 2Ό. Фаза: Эа1се1 Сйта1рак ΣΑ, 5 мкм 250x20 мм, элюент: метанол/ацетонитрил 25:75; поток: 15 мл/мин, температура: 30°С; УФ-детектирование: 220 нм.

Метод 3Ό. Фаза: Эа1сс1 СЫта1рак ΣΑ 5 мкм 250x20 мм, элюент: метанол/ацетоонитрил 50:50; Р1и55: 15 мл/мин, температура: 30°С; УФ-детектирование: 220 нм.

Метод 4Ό. Фаза: Эа1сс1 Сйга1рак ΣΑ, 5 мкм 250x20 мм; элюент: трет-бутилметиловый эфир/метанол 50:50; поток: 15 мл/мин; температура: 30°С; УФ-детектирование: 220 нм.

Метод 5Ό. Фаза: Эа1сс1 Сйга1рак ΣΑ, 5 мкм 250x20 мм, элюент: метанол/ацетонитрил 25:75; поток: 15 мл/мин, температура: 30°С; УФ-детектирование: 220 нм.

Метод 6Ό. Фаза: Эа1се1 Сйга1рак АЭ-Н, 5 мкм 250x20 мм, элюент: изогексан/этанол 25:75; поток: 15 мл/мин, температура: 45°С; УФ-детектирование: 220 нм.

Метод 7Ό. Фаза: Эа1се1 СЫта1рак АЭ-Н, 5 мкм, 250x20 мм, элюент: этанол 100%; поток: 15 мл/мин, температура: 45°С; УФ-детектирование: 220 нм.

Метод 8Ό. Фаза: Эа1се1 Сйта1рак АЭ-Н, 5 мкм, 250x20 мм, элюент: изогексан/изопропанол 30:70; поток: 15 мл/мин, температура: 45°С; УФ-детектирование: 220 нм.

Метод 9Ό. Фаза: Эа1се1 СЫта1рак ТА 5 мкм, 250x20 мм, элюент: ацетонитрил/метанол 70:30; поток: 15 мл/мин, температура: 30°С; УФ-детектирование: 220 нм.

Метод 10Ό. Фаза: Иаюе1 Сйта1рак ^, 5 мкм, 250x20 мм, элюент: ацетонитрил/метанол 70:30; поток: 20 мл/мин, температура: 35°С; УФ-детектирование: 210 нм.

Метод 11Ό. Фаза: Иаюе1 СЫта1рак АЭ-Н, 5 мкм, 250x20 мм, элюент: изогексан/этанол 70:30; поток: 15 мл/мин, температура: 40°С; УФ-детектирование: 220 нм.

Аналитическое разделение энантиомеров.

Метод 1Е. Фаза: Иа1се1 СЫта1рак АЭ-Н, 5 мкм 250x4 мм; элюент: изопропанол/изогексан: 75:25; поток: 1 мл/мин; температура: 45°С; УФ-детектирование: 220 нм.

Метод 2Е. Фаза: Эа1се1 Сйта1рак АЭ-Н, 5 мкм 250x4,6 мм; элюент: изогексан/изопропанол 25:75 + 0,2% трифторуксусной кислоты + 1% воды; поток: 1 мл/мин; температура: 45°С; УФ-детектирование: 235 нм.

Метод 3Е. Фаза: Эа1се1 Сйта1рак ^, 5 мкм 250x4,6 мм; элюент: ацетонитрил/метанол 75:25; поток: 1 мл/мин; температура: 25°С; УФ-детектирование: 220 нм.

Метод 4Е. Фаза: Эа1се1 Сйта1рак ^, 5 мкм 250x4,6 мм; элюент: ацетонитрил/метанол 50:50; поток: 1 мл/мин; температура: 25°С; УФ-детектирование: 220 нм.

Метод 5Е. Фаза: Оаюе1 СЫта1рак ^, 5 мкм 250x4,6 мм; элюент: трет-бутилметиловый эфир/метанол 50:50; поток: 1 мл/мин; температура: 25°С; УФ-детектирование: 220 нм.

Метод 6Е. Фаза: Оаюе1 Сйта1рак АЭ-Н, 5 мкм, 250x4,6 мм, элюент: этанол 100%; поток: 1 мл/мин, температура: 45°С; УФ-детектирование: 220 нм.

Метод 7Е. Фаза: Оаюе1 СЫта1рак АЭ-Н, 5 мкм, 250x4,6 мм, элюент: изогексан/изопропанол 30:70; поток: 1 мл/мин, температура: 45°С; УФ-детектирование: 220 нм.

Метод 8Е. Фаза: Оаюе1 СЫта1рак ^, 5 мкм, 250x4,6 мм, элюент: ацетонитрил/метанол 70:30; поток: 15 мл/мин, температура: 25°С; УФ-детектирование: 220 нм.

Метод 9Е. Фаза: Оаюе1 СЫта1рак ^, 5 мкм, 250x4,6 мм, элюент: ацетонитрил/метанол 70:30; поток: 15 мл/мин, температура: 30°С; УФ-детектирование: 220 нм.

Метод 10Е. Фаза: Оаюе1 СЫта1рак ^, 5 мкм 250x4,6 мм, злюент: ацетонитрил/метанол 70:30; поток: 1 мл/мин, температура: 30°С; УФ-детектирование: 220 нм.

Метод 11Е. Фаза: Оаюе1 Сйта1рак АЭ-Н, 5 мкм, 250x4,6 мм, элюент: изогексан/этанол 25:75 + 0,2% трифторуксусной кислоты + 1% воды; поток: 1 мл/мин, температура: 45°С; УФ-детектирование: 220 нм.

ГХ-МС-методы.

Метод 1Р. Прибор: М1стота55 ОСТ, ОС68 90; колонка: Ке§1ек КТХ-35, 15 мx200x0,33 мкм; постоянный поток с гелием: 0,88 мл/мин; печь: 70°С; напуск: 250°С; градиент: 70°С, 30°С/мин 310°С (3 мин выдержать).

В качестве микроволнового реактора применяют 5ш§1е тоДе прибор типа Еттук™ ОрЬип/ег.

Исходные соединения.

Общий метод 1А. Получение Ν'-гидроксиимидамида.

К раствору соответствующего нитрила (1,0 экв.) в этаноле (1,2 мл/ммоль) добавляют при комнатной температуре гидроксиламмонийхлорид (1,5 экв.) и триэтиламин (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Для переработки отгоняют этанол в вакууме, к реакционной смеси добавляют насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия и экстрагируют этило- 16 021944 вым эфиром уксусной кислоты. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и отгоняют растворитель. Остаток подвергают дальнейшему превращению без дальнейшей очистки.

Общий метод 2А. Получение Ν'-гидроксиимидамида.

К раствору соответствующего нитрила (1,0 экв.) в смеси из этанола (1,9 мл/ммоль) и воды (0,5 мл/ммоль) добавляют при комнатной температуре гидроксиламмонийхлорид (1,08 экв.) и гидроксид натрия (1,12 экв.). Реакционную смесь перемешивают в течение 16 ч при комнатной температуре. Для переработки из реакционной смеси отгоняют растворитель в вакууме, добавляют дихлорметан и фильтруют. Из фильтрата отгоняют растворитель в вакууме и остаток без дальнейшей очистки подвергают превращению.

Общий метод 3А. Сочленение (реакция) Сузуки.

К смеси соответствующего бромпиридина в толуоле (1,8 мл/ммоль) в атмосфере аргона при комнатной температуре добавляют тетракис-(трифенилфосфин)палладий (0,02 экв.), раствор соответствующей арилборной кислоты (1,2 экв.) в этаноле (0,5 мл/ммоль) и раствор фтористого калия (2,0 экв.) в воде (0,2 мл/ммоль). Реакционную смесь много часов перемешивают в условиях рефлюкса до почти полного превращения. Добавляют этиловый эфир уксусной кислоты и разделяют фазы, органическую фазу промывают один раз водой и один раз насыщенным водным раствором хлористого натрия, сушат над сульфатом магния, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Сырой продукт чистят с помощью флэшхроматографии (силикагель-60, элюент: дихлорметан-метанол-смеси).

Общий метод 4А. Г идрирование пиридина.

К раствору пиридина в этаноле (9 мл/ммоль) добавляют в атмосфере аргона палладий на активированном угле (увлажненный примерно 50% воды, 0,3 г/ммоль) и гидрируют при температуре 60°С в течение ночи в атмосфере водорода при давлении 50 бар. Затем катализатор отфильтровывают через фильтровальный слой и многократно промывают этанолом. Из объединенных фильтратов отгоняют растворитель в вакууме.

Общий метод 5А. Омыление метилового эфира/эпимеризация.

К раствору соответствующего метилового эфира (1,0 экв.) в метаноле (35-40 мл/ммоль) добавляют при комнатной температуре трет-бутилат калия (10 экв.). Смесь перемешивают в течение ночи при температуре 60°С. При неполном превращении добавляют воду (1,0 экв.) и перемешивают до полного превращения при температуре 60°С. Для переработки отгоняют метанол в вакууме, к остатку добавляют воду и, добавляя водный 1н. раствор соляной кислоты, подкисляют (рН 1). Смесь экстрагируют этиловым эфиром уксусной кислоты, органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме.

Общий метод 6А. Получение оксадиазола.

К раствору соответствующей пиперидин-3-карбоновой кислоты в диметилформамиде (10-20 мл/ммоль) добавляют в атмосфере аргона при комнатной температуре НАТИ (1,2 экв.), Ν,Νдиизопропилэтиламин (2,2 экв.) и соответствующий Ν'-гидроксиимидамид (1.1 экв.). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре до полного образования промежуточной стадии, после этого продолжают перемешивать при температуре 120°С вплоть до образования необходимого продукта из этой промежуточной стадии. После этого реакционную смесь чистят препаративной ЖХВР.

Пример 1А. №-Гидрокси-3-метоксипропанимидамид

Согласно общему методу 1А подвергают превращению 20,0 г (235,0 ммоль) 3метоксипропионитрила. Выход: 18,1 г (49% от теор., 74% чистоты).

ЖХВР (метод 1А): К. 0,3 5 мин; МС (ИЭПпол): μ/ζ=119 [М+Н]+.

Пример 2А. 3-Этокси-№-гидроксипропанимидамид _ХОН

Согласно общему методу 2А подвергают превращению 5,0 г (50,4 ммоль) 3-этоксипропионитрила. Выход: 0,6 г (8% от теор., 90% чистоты).

ЖХВР (метод 1А): К=0,60 мин; МС (ИЭПпол): щ^=133 [М+Н]+.

- 17 021944

Пример 3А. Ν'-Гидроксициклопропанкарбоксимидамид

Согласно общему методу 2А подвергают превращению 7,2 г (107,3 ммоль) нитрила циклопропанкарбоновой кислоты. Выход: 4,8 г (44% от теор.).

ЖХ-МС (метод 2В): К=0,16 мин; МС (ИЭПпол): μ/ζ=101 [М+Н]+.

Пример 4А. Метиловый эфир 5-(4-этилфенил)пиридин-3-карбоновой кислоты

Согласно общему методу 3А подвергают взаимодействию 32 г (148 ммоль) метилового эфира 5бромникотиновой кислоты и 27 г (178 ммоль, 1,2 экв.) 4-этилфенилборной кислоты. Выход: 24 г (64% от теор.)

ЖХ-МС (метод 3В): 1+22)3 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 242 [М+Н]+.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆): δ 9,13 (ά, 1Н), 9,05 (ά, 1Н), 8,45 (ΐ, 1Н), 7,72 (ά, 2Н), 7,38 (ά, 2Н), 3,93 (5, 3Н), 2,68 (ц, 2Н), 1,22 (ΐ, 3Н).

Пример 5А. Метиловый эфир 5-(4-этилфенил)пиперидин-3-карбоновой кислоты [рацемическая смесь цис-/транс-изомеров]

Согласно общему методу 4А гидрируют 24 г (94 ммоль) метилового эфира 5-(4этилфенил)пиридин-3-карбоновой кислоты. Выход: 20 г (77% от теор.).

ЖХ-МС (метод 4В): К_е=1,43 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 248 [М+Н]+.

Пример 6А. Метил-5-(4-этилфенил)-1-(тиоморфолин-4-илкарбонил)пиперидин-3-карбоксилат [ра-

5,00 г (12,1 ммоль) 3-метил-1-(4-нитрофенил)-5-(4-этилфенил)пиперидин-1,3-дикарбоксилата (пример 30А), 3,57 г (36,4 ммоль) тиоморфолина и 5,03 г (36,4 ммоль) карбоната калия помещают в 76 мл ДМФ и нагревают 5 порциями при 150°С в течение 1,5 ч в микроволновой печи типа 8ш§1е Μοάβ (фирмы Етгу5 ΟρΙίιηίζοΓ). Для переработки объединяют реакционные растворы, фильтруют и остаток чистят препаративной ЖХВР. Выход: 3,07 г (67% от теор.)

ЖХ-МС (метод 5В): К₁=1,16 и 1,18 мин (цис-/транс-изомеры); МС (ИЭПпол): тА=377 [М+Н]+.

Пример 7А. 5-(4-Этилфенил)-1-(тиоморфолин-4-илкарбонил) пиперидин-3-карбоновая кислота [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 5А подвергают взаимодействию 3,00 г (7,97 ммоль) соединения примера 6А и 8,94 г (79,7 ммоль) трет-бутилата калия. Реакция приводит селективно к цис-изомеру. Выход: 2,74 г (93% от теор.)

ЖХ-МС (метод 5В): К=1,04 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 363 [М+Н]+.

- 18 021944

Пример 8А. {3-(4-Этилфенил)-5-[3-(2-метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]пиперидин-1-ил} (тиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 6А подвергают взаимодействию 300 мг (0,828 ммоль) соединения примера 7А и 134 мг (0,910 ммоль) №-гидрокси-3-метоксипропанимидамида. Выход: 185 мг (49% от теор.)

ЖХ-МС (метод 5В): К_!=1,22 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 445 [М+Н]+.

Пример 9А. [3 -(3 -Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-(4-этилфенил)пиперидин-1 ил](тиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 6А подвергают взаимодействию 300 мг (0,828 ммоль) соединения примера 7А и 91 мг (0,91 ммоль) Ν'-гидроксициклопропанкабоксимидамида. Выход: 141 мг (40% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К=1,32 мин; МС (ИЭПпол): тУ=427 [М+Н]+.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,22 (б, 2Н), 7,15 (б, 2Н), 3,92 (б, 1Н), 3,52 (б, 1Н), 3,44 (Ьг. 5., 4Н), 3,38-3,31 (т, 1Н), 3,03-2,79 (т, 3Н), 2,63-2,55 (т, 6Н), 2,25 (б, 1Н), 2,10 (!б, 1Н), 1,91 (ц, 1Н), 1,16 (!, 3Н), 1,09-1,01 (т, 2Н), 0,92-0,85 (т, 2Н).

Пример 10А. {3-(4-Этилфенил)-5-[3-(2-гидроксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]пиперидин-1ил}(тиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 6А подвергают взаимодействию 300 мг (0,828 ммоль) соединения примера 7А и 112 мг (1,08 ммоль) №,3-дигидроксипропанимидамида [ОгаЬат А. 5>1ю\ус11 и др., 1. Меб. СЬет., 1991, 34, 1086-1094]. Выход: 248 мг (66% от теор.)

ЖХ-МС (метод 5В): К 2.22 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 43 1 [М+Н]+.

Пример 11А. {3-[3-(2-Этоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-(4-этилфенил)пиперидин-1ил}(тиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 6А подвергают взаимодействию 600 мг (1,655 ммоль) соединения примера 7А и 355 мг (около 2,152 ммоль) 3-этокси-№-гидроксипропанимидамида. Выход: 389 мг (49% от теор.).

ЖХ-МС (метод 6В): К_!=2,61 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 459 [М+Н]+.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,23 (б, 2Н), 7,16 (б, 2Н), 3,95 (б, 1Н), 3,71 (!, 2Н), 3,54 (б, 1Н), 3,483,34 (т, 7Н), 3,08-2,81 (т, 5Н), 2,63-2,55 (т, 6Н), 2,29 (б, 1Н), 1,95 (д, 1Н), 1,16 (!, 3Н), 1,07 (!, 3Н).

- 19 021944

Пример 12А. Метиловый эфир 5-[4-(трифторметил)фенил]пиридин-3-карбоновой кислоты

Согласно общему методу ЗА подвергают взаимодействию 28 г (132 ммоль) метилового эфира 5бромникотиновой кислоты и 30 г (158 ммоль, 1,2 экв.) 4-трифторметилфенилборной кислоты. Выход: 32 г (85% от теор.).

ЖХ-МС (метод 4В): К=2,27 мин; МС (ИЭПпол): т// 282 [М+Н]+.

Пример 13А. Метиловый эфир 5-[4-(трифторметил)фенил]пиперидин-3-карбоновой кислоты [раце-

Согласно общему методу 4А гидрируют 32 г (112 ммоль) метилового эфира 5-[4(трифторметил)фенил]пиридин-3-карбоновой кислоты (пример 12А). Выход: 26 г (82% от теор.).

ЖХ-МС (метод 1В): К,= 1,35 и 1,41 мин (цис-/транс-изомеры); МС (ИЭПпол): т//=288 [М+Н]+.

¹ Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 9,22 (б, 1Н), 9,14 (б, 1Н), 8,57 (1, 1Н), 8,06 (б, 2Н), 7,89 (б, 2Н), 3,94 (5, 3Н).

Пример 14А. 3-Метил-1-(4-нитрофенил)-5-[4-(трифторметил)фенил]пиперидин-1,3-дикарбоксилат [рацемическая смесь цис-/транс-изомеров]

20,0 г (69,6 ммоль) метил-5-[4-(трифторметил)фенил]пиперидин-3-карбоксилата (пример 13А) растворяют в 1,0 л дихлорметана и при температуре 0°С добавляют 14,1 г (139 ммоль) триэтиламина. Затем добавляют по каплям 14,0 г (69,6 ммоль) 4-нитрофенил-хлорокарбоната. Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при температуре 0°С и затем в течение 16 ч при комнатной температуре. Для переработки промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Получают 31,3 г сырого продукта, который подвергают взаимодействию без дальнейших операций по очистке.

ЖХ-МС (метод 3В): К,=2,44 мин и 2,48 мин (цис-/транс-изомеры); МС (ИЭПпол): т//=453 [М+Н]+.

Пример 15А. Метил-1 -(тиоморфолин-4-илкарбонил)-5-[4-(трифторметил)фенил]пиперидин-3 карбоксилат [рацемическая смесь цис-/транс-изомеров]

10,0 г (22,1 ммоль) 3-метил-1-(4-нитрофенил)-5-[4-(трифторметил)фенил]пиперидин-1,3дикарбоксилата, 6,84 г (66,3 ммоль) тиоморфолина и 9,17 г (66,3 ммоль) карбоната калия помещают в 150 мл ДМФ и 10 порциями нагревают в течение 1 ч при температуре 150°С в микроволновой печи типа §1ид1е Мобе (фирмы Етгуз ΟρΙίιηί/ег). Для переработки реакционные растворы объединяют, фильтруют

- 20 021944 и остаток чистят препаративной ЖХВР. Выход: 5,16 г (55% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): Р,= 1.13 и 1,16 мин (цис-/транс-изомеры); МС (ИЭПпол): т//=417 [М+Н]+. Пример 16А. 1 -(Тиоморфолин-4-илкарбонил) -5 - [4-(трифторметил)фенил] пиперидин-3 -карбоновая кислота [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 5А подвергают взаимодействию 5,16 г (12,4 ммоль) соединения примера 15А и 13,9 г (124 ммоль) трет-бутилата калия. Реакция приводит селективно к цис-изомеру. Выход: 4,90 г (98% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К=1,04 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 403 [М+Н]+.

Пример 17А. {3-(3 -Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(трифторметил)фенил]пиперидин-1 ил}(тиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 6А подвергают взаимодействию 600 мг (1,4 91 ммоль) соединения примера 16А и 164 мг (1,640 ммоль) Ν'-гидроксициклопропанкарбоксимидамида. Выход: 352 мг (47% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К=1,28 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 467 [М+Н]+.

^!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-Д₆): δ 7,70 (Д, 2Н), 7,56 (Д, 2Н), 3,92 (Д, 1Н), 3,57 (Д, 1Н), 3,45 (Ьг. 5., 4 Н), 3,40-3,34 (т, 1Н), 3,08-2,95 (т, 3Н), 2,59 (Ьг. 5., 4Н), 2,30 (Д, 1Н), 2,16-2,07 (т, 1Н), 2,04-1,91 (т, 1Н), 1,101,01 (т, 2Н), 0,92-0,85 (т, 2Н).

Пример 18А. {3-[3-(2-Метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4-(трифторметил) фенил]пиперидин1-ил}(тиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 6А подвергают взаимодействию 600 мг (1,4 91 ммоль) соединения примера 16А и 242 мг (1,640 ммоль) №-гидрокси-3-метоксипропанимидамида. Выход: 350 мг (46% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): Κ_ΐ=1,18 мин; МС (ИЭПпол): т^=485 [М+Н]+.

^!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-Д₆): δ 7,70 (Д, 2Н), 7,57 (Д, 2Н), 3,95 (Д, 1Н), 3,68 (ΐ, 2Н), 3,58 (Д, 1Н), 3,513,36 (т, 5Н), 3,23 (5, 3Н), 3,13-2,96 (т, 3Н), 2,94 (ΐ, 2Н), 2,60 (Ьг. 5., 4Н), 2,33 (Ьг. Д., 1Н), 2,10-1,95 (т, 1Н).

Пример 19А. {3-[3-(2-Этоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4-(трифторметил)фенил]пиперидин-1ил}(тиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 6А подвергают взаимодействию 600 мг (1,491 ммоль) соединения примера 16А и 320 мг (около 1,983 ммоль) 3-этокси-№-гидроксипропанимидамида. Выход: 343 мг (46% от теор.).

- 21 021944

ЖХ-МС (метод 6В): Κ_ί=2,57 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 499 [М+Н]+.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆): δ 7,70 (ά, 2Н), 7,57 (ά, 2Н), 3,96 (ά, 1Н), 3,71 (!, 2Н), 3,58 (ά, 1Н), 3,493,37 (т, 7Н), 3,11-2,97 (т, 3Н), 2,93 (ΐ, 2Н), 2,60 (Ъг. 5., 4Н), 2,34 (Ъг. ά., 1Н), 2,02 (ф 1Н), 1,07 (!, 3Н).

Пример 20А. {3-[3-(2-Гидроксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4-(трифторметил)фенил]пиперидин1-ил}(тиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 6А подвергают взаимодействию 600 мг (1,491 ммоль) соединения примера 16А и 201 мг (1,938 ммоль) №,3-дигидроксипропанимидамида. Выход: 494 мг (68% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К_!=1,04 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 471 [М+Н]+.

Пример 21А. Метиловый эфир 5-[4-(трифторметокси)фенил]пиридин-3-карбоновой кислоты

Согласно общему методу 3А подвергают взаимодействию 23 г (105 ммоль) метилового эфира 5бромникотиновой кислоты и 26 г (126 ммоль, 1,2 экв.) 4-трифторметоксифенилборной кислоты. Выход: 14 г (41% от теор.).

ЖХ-МС (метод 1В): Κ_ί=2,44 мин; МС (ИЭПпол): т^=298 [М+Н]+.

Альтернативный синтез.

К раствору 26 г (121 ммоль) метилового эфира 5-бромникотиновой кислоты в толуоле (220 мл) в атмосфере аргона при комнатной температуре добавляют 2,8 г (2,4 ммоль) тетракис(трифенилфосфин)палладия и затем добавляют раствор 30 г (146 ммоль) 4-трифторметоксифенилборной кислоты в этаноле (58 мл). После добавления 14 г (243 ммоль) фтористого кальция в воде (58 мл) перемешивают в течение ночи в условиях рефлюкса, затем добавляют еще 0,70 г (0,61 ммоль) тетракис(трифенилфосфин)палладия и перемешивают еще в течение 24 ч в условиях рефлюкса. После нового добавления 1,4 г (1,2 ммоль) тетракис(трифенилфосфин)палладия перемешивают в течение 20 ч в условиях рефлюкса, к реакционному раствору добавляют этиловый эфир уксусной кислоты и промывают водой и насыщенным водным раствором хлористого натрия. Органические фазы сушат над сульфатом магния, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Остаток чистят на хроматографической колонке (силикагель, циклогексан/дихлорметан 1:1 дихлорметан). Выход: 31 г (86% от теор.).

ЖХ-МС (метод 4В): Κ_ί=2,32 мин; МС (ИЭПпол): т^=298 [М+Н]+;

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОД₆): δ 9,17 (ά, 1Н), 9,10 (ά, 1Н), 8,51 (ΐ, 1Н), 7,95 (ά, 2Н), 7,52 (ά, 2Н), 3,94 (5, 3Н).

Пример 22А. Метиловый эфир 5-[4-(трифторметокси)фенил]пиперидин-3-карбоновой кислоты [рацемическая смесь цис-/транс-изомеров]

К 14 г (45 ммоль) метилового эфира 5-[4-(трифторметокси)фенил]пиридин-3-карбоновой кислоты в этаноле (500 мл) добавляют 17 г увлажненного палладий/уголь-катализатора (10% палладия, 50% воды) и затем гидрируют в течение ночи при температуре 60°С и при давлении 50 бар водородной атмосферы. Реакционный раствор фильтруют, остаток после фильтрования промывают этанолом и отгоняют растворитель из фильтрата. Остаток чистят на хроматографической колонке (силикагель, дихлорметан/метанол 600:1 10:1). Выход: 8 г (59% от теор.).

ЖХ-МС (метод 1В): К,= 1,29 мин и 1,33 мин (цис-/транс-изомеры); МС (ИЭПпол): ιη/ζ=304 [М+Н]+;

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОД₆): δ 7,43-7,35 (т, 4Н), 7,31-7,25 (т, 4Н), 3,60 (5, 3Н), 3,40-3,21 (т, 5Н), 3,16 (ά, 1Н), 3,01-2,89 (т, 3Н), 2,88-2,78 (т, 2Н), 2,78-2,65 (т, 4Н), 2,17 (ά, 1Н), 2,09 (ά, 1Н), 1,82 (ΐά, 1Н), 1,68 (д, 1Н), около 1:1,3 смесь цис-/транс-изомеров, два протона перекрыты.

- 22 021944

Пример 23А. 3 -Метил-1 -(4-нитрофенил)-5-[4-(трифторметокси)фенил]пиперидин-1,3дикарбоксилат [рацемическая смесь цис-/транс-изомеров]

К 8,0 г (26,4 ммоль) метилового эфира 5-(4-(трифторметокси)фенил)пиперидин-3-карбоновой кислоты (пример 22А) и 5,34 г (26,3 ммоль) триэтиламина в 666 мл дихлорметана медленно добавляют при температуре 0°С 5,32 г (26,4 ммоль) 4-нитрофенилхлороформата. Смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Для переработки реакционную смесь промывают вначале насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия, а затем водой. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и отгоняют растворитель в вакууме. Остаток чистят с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (растворитель: циклогексан/этиловый эфир уксусной кислоты 1:2 до 1:1). Выход: 7,32 г (54% от теор.).

ЖХ-МС (метод 3В): К==2,47 мин; МС (ИЭПпол): т// 469 [М+Н]+.

Пример 24А. Метил-1 -(тиоморфолин-4-илкарбонил)-5-[4-(трифторметокси)фенил] пиперидин-3 карбоксилат [рацемическая смесь цис-/транс-изомеров]

12,0 г (25,1 ммоль) 3-метил-1-(4-нитрофенил)-5-[4-(трифторметокси)фенил]пиперидин-1,3дикарбоксилата, 7,77 г (75,3 ммоль) тиоморфолина и 10,4 г (75,3 ммоль) карбоната калия помещают в 180 мл ДМФ и 12 порциями нагревают при температуре 150°С в течение 2 ч в микроволновой печи типа 8шд1е Мойе (фирмы Етгу5 ОрПпи/сг). Для переработки реакционные растворы объединяют, фильтруют и остаток чистят препаративной ЖХВР. Выход: 7,88 г (73% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К=1,16 и 1,18 мин (цис-/транс-изомеры); МС (ИЭПпол): т//=433 [М+Н]+.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-й₆): δ 7,46-7,39 (т, 4Н), 7,32 (й, 4Н), 3,84 (йй, 2Н), 3,64 (5, 3Н), 3,63 (5, 3Н), 3,55-3,34 (т, 10Н), 3,09 (йй, 1Н), 3,06-2,96 (т, 1Н), 2,92-2,81 (т, 6Н), 2,76-2,67 (т, 1Н), 2,65-2,56 (т, 7Н), 2,25-2,10 (т, 2Н), 1,95-1,84 (т, 1Н), 1,76 (ц, 1Н), около 1:1 смесь цис-/транс-изомеров).

Пример 25А. 1-(Тиоморфолин-4-илкарбонил)-5-[4-(трифторметокси)фенил]пиперидин-3карбоновая кислота [рацемическая смесь цис-/транс-изомеров]

К раствору 7,85 г (18,2 ммоль) соединения примера 24А в метаноле (650 мл) добавляют при комнатной температуре 20,4 г (182 ммоль) трет-бутилата калия. Смесь перемешивают в течение ночи при температуре 60°С. Для переработки отгоняют метанол в вакууме, к остатку добавляют воду и, добавляя водный 1н. раствор соляной кислоты, делают раствор кислым (рН 1). Смесь экстрагируют этиловым эфиром уксусной кислоты, органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и отгоняют растворитель. Реакция дает смесь 85:15 цис/транс-изомеров. Выход: 7,70 г (99% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): Р,= 1,03 мин (транс-изомер) и 1,04 мин (цис-изомер); МС (ИЭПпол): т//=419 [М+Н]+.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-й₆): δ 12,44 (Ъг. 5., 1Н), 7,47-7,39 (т, 2Н), 7,31 (й, 2Н), 3,79 (й, 1Н), 3,563,48 (т, 1Н), 3,46-3,37 (т, 4Н), 2,91-2,73 (т, 3Н), 2,63-2,55 (т, 5Н), 2,14 (й, 1Н), 1,81-1,66 (т, 1Н).

- 23 021944

Пример 26А. {3-[3-(2-Метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4-(трифторметокси)фенил]пиперидин-1-ил}(тиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 6А подвергают взаимодействию 600 мг (1,43 ммоль) соединения примера 25А и 232 мг (1,58 ммоль) №-гидрокси-3-метоксипропанимидамида. Выход: 398 мг (53% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): Κ_ΐ=1,21 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 501 [М+Н]+.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆): δ 7,47 (ά, 2Н), 7,33 (ά, 2Н), 3,95 (ά, 1Н), 3,68 (ΐ, 2Н), 3,56 (ά, 1Н), 3,503,35 (т, 5Н), 3,23 (к, 3Н), 3,08-2,86 (т, 5Н), 2,60 (Ьг. к., 4Н), 2,32 (ά, 1Н), 1,97 (д, 3Н).

Пример 27А. {3 -(3 -Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(трифторметокси)фенил]пиперидин-1 ил}(тиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 6А подвергают взаимодействию 300 мг (0,717 ммоль) соединения примера 25А и 79 мг (0,789 ммоль) Ν'-гидроксициклопропанкарбоксимидамида. Выход: 135 мг (39% от теор.).

ЖХ-МС (метод 2В): Κ_ΐ=1,44 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 483 [М+Н]+.

Альтернативный синтез.

К 600 мг (1,43 ммоль) соединения примера 25А в диметилформамиде (29,0 мл) при комнатной температуре добавляют 654 мг (1,72 ммоль) НАТИ и 0,55 мл (498 мг, 3,16 ммоль) Ν,Νдиизопропилэтиламина и перемешивают в течение 30 мин. Затем добавляют 158 мг (1,58 ммоль) Ν'гидроксициклопропан-карбоксимидамида и перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь нагревают до 120°С и перемешивают в течение 1 ч при этой температуре. Реакционную смесь чистят напрямую препаративной ЖХВР. Выход: 315 мг (45% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): Κ_ΐ=1,30 мин; МС (ИЭПпол): т^=483 [М+Н]+.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОД₆): δ 7,46 (ά, 2Н), 7,33 (ά, 2Н), 3,91 (ά, 1Н), 3,55 (ά, 1Н), 3,45 (Ьг. к., 4Н), 3,39-3,32 (т, 1Н), 3,05-2,91 (т, 3Н), 2,59 (Ьг. к., 4Н), 2,28 (ά, 1Н), 2,17-2,08 (т, 1Н), 1,93 (д, 1Н), 1,10-1,02 (т, 2Н), 0,92-0,84 (т, 2Н).

Пример 28А. {3-[3-(2-Этоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4-(трифторметокси)фенил]пиперидин1-ил}(тиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 6А подвергают взаимодействию 600 мг (1,434 ммоль) соединения примера 25А и 307 мг (около 1,864 ммоль) 3-этокси-№-гидроксипропанимидамида. Выход: 403 мг (55% от теор.).

ЖХ-МС (метод 6В): К=2,61 мин; МС (ИЭПпол): т^=515 [М+Н]+.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОД₆): δ 7,47 (ά, 2Н), 7,33 (ά, 2Н), 3,95 (ά, 1Н), 3,71 (ΐ, 2Н), 3,56 (ά, 1Н), 3,503,35 (ΐ, 7Н), 3,10-2,88 (т, 5Н), 2,60 (Ьг. к., 4Н), 2,32 (ά, 1Н), 2,02-1,92 (т, 1Н), 1,07 (ΐ, 3Н).

- 24 021944

Пример 29А. {3-[3-(2-Г идроксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4-(трифторметокси)фенил]пиперидин-1-ил}(тиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 6А подвергают взаимодействию 1,00 г (2,390 ммоль) соединения примера 25А и 323 мг (3,107 ммоль) №,3-дигидроксипропанимидамида. Выход: 848 мг (69% от теор.).

ЖХ-МС (метод 6В): К 2.26 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 487 [М+Н]+.

Пример 30А. 3-Метил-1-(4-нитрофенил)-5-(4-этилфенил)пиперидин-1,3-дикарбоксилат [рацемическая смесь цис-/транс-изомеров]

3,0 г (12,1 ммоль) соединения примера 5А помещают в 30 мл дихлорметана, охлаждают до температуры 0°С и добавляют 3,4 мл (2,4 г, 12,1 ммоль) триэтиламина, а также 2,4 г (12,1 ммоль) 4нитрофенилового эфира хлормуравьиной кислоты. Реакционную смесь медленно нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 16 ч при комнатной температуре. Промывают многократно водой, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Остаток чистят на хроматографической колонке на силикагеле (растворитель дихлорметан дихлорметан/метанол 100:2). Выход: 4,7 г (83% от теор., 89% чистоты).

ЖХВР (метод 1А): К.=4,94 мин и 5,00 мин (цис-/транс-изомеры); МС (ИЭПпол): т//=413 [М+Н]+.

Пример 31А. 4-Нитрофенилтиоморфолин-4-карбоксилат

7,7 г (74,4 ммоль) тиоморфолина помещают в 100 мл дихлорметана и при охлаждении на ледяной бане добавляют 20,7 мл (15,1 г, 148,8 ммоль) триэтиламина. Добавляют по порциям 10,0 г (49,6 ммоль) нитрофенилового эфира хлормуравьиной кислоты. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре и добавляют воду и этиловый эфир уксусной кислоты. Органическую фазу отделяют, промывают 1 N раствором соляной кислоты, а также насыщенным раствором хлористого натрия, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Выход: 13,2 г (99% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К, 0,98 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 269 [М+Н]+.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-Б₆): δ 8,28 (Б, 2Н), 7,46 (Б, 2Н), 3,86 (Ъг. к., 2Н), 3,72 (Ъг. к., 2Н), 2,71 (Ъг. Б., 4Н).

Пример 32А. 4-Нитрофенилтиоморфолин-4-карбоксилат-1-оксид

13,1 г (49,0 ммоль) 4-нитрофенилтиоморфолин-4-карбоксилата помещают в 135 мл дихлорметана и при температуре 0°С добавляют порциями 7,6 г (44,1 ммоль) м-хлорпербензойной кислоты. Перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре, добавляют воду и отделяют органическую фазу. Органическую фазу быстро промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Сырой продукт чистят препаративной ЖХВР. Выход: 7,8 г (56% от

- 25 021944 теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): 1+0,69 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 285 [М+Н]+.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСОЛ₆): δ 8,30 (ά, 2Н), 7,49 (ά, 2Н), 4,20-3,70 (т, 4Н), 3,03 (άΐ, 2Н), 2,85 (ά,

2Н).

Пример 33А. Гидрохлорид [5-(метоксикарбонил)пиридин-3-ил]борной кислоты

17,6 г (81,4 ммоль) метилового эфира 5-бромникотиновой кислоты помещают в 375 мл ДМФ в атмосфере аргона, добавляют 26,9 г (105,8 ммоль) 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би-1,3,2-диоксаборолана, 3,0 г (3,6 ммоль) трис-(дибензилиден-ацетон)дипалладия(0), 1,8 г (6,5 ммоль) трициклогексилфосфина и 32,0 ммоль (325,9 ммоль) ацетата калия. Реакционную смесь перемешивают в течение 20 ч при температуре 100°С. Затем отгоняют растворитель в вакууме, к остатку добавляют 40 мл воды и 140 мл третбутилметилового эфира и отделяют органическую фазу. Водную фазу экстрагируют три раза по 80 мл трет-бутилметилового эфира. Объединенные органические экстракты промывают насыщенным водным раствором хлористого натрия, сушат над сульфатом магния, фильтруют и отгоняют растворитель. Остаток растворяют в 360 мл метанола и добавляют 36 мл концентрированной соляной кислоты. Реакционную смесь нагревают 22 ч в условиях рефлюкса и затем 12 ч перемешивают при комнатной температуре. Примерно половину растворителя отгоняют в вакууме, раствор фильтруют и далее концентрируют в вакууме. Маслянистый остаток два раза перекристаллизовывают из ацетона, остаток помещают в 10 мл ацетона и добавляют 100 мл трет-бутилметилового эфира. Через 16 ч образовавшийся осадок отделяют от раствора. Этот осадок перемешивают с 50 мл ацетона, оставляют стоять на 5 недель при комнатной температуре и снова отделяют раствор. Растворы объединяют, отгоняют растворитель и растворяют в 50 мл трет-бутилметилового эфира. Оставляют стоять 5 недель при комнатной температуре и после этого отделяют осадок. Осадок три раза промывают трет-бутилметиловым эфиром и сушат в вакууме в сушильном шкафу.

ЖХ-МС (метод 4В): К.=0,91 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 182 [М+Н]+.

Пример 34А. Метиловый эфир 5-[4-(дифторметокси)фенил]никотиновой кислоты

10,0 г (44,8 ммоль) 4-(дифторметокси)бромбензола подвергают взаимодействию согласно общему методу 3А с 14,6 г (67,3 ммоль) гидрохлорида [5-(метоксикарбонил)пиридин-3-ил]борной кислоты.

Высвобождение гидрохлорида достигается дополнительным добавлением 6,80 г (49,3 ммоль) карбоната калия. Выход: 8,6 г (67% от теор.).

ЖХ-МС (метод 2В): К.= 1,15 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 280 [М+Н]+.

Пример 35А. Метиловый эфир 5-[4-(дифторметокси)фенил]пиперидин-3-карбоновой кислоты [рацемическая смесь цис-/транс-изомеров]

К раствору 8,6 г (30,9 ммоль) метилового эфира 5-[4-(дифторметокси)фенил]никотиновой кислоты в концентрированной уксусной кислоте (112 мл) добавляют 841 мг палладий/угля (10% палладия) и 1,12 г оксида платины(ЧУ). Затем гидрируют в течение 24 ч при нормальном давлении водородной атмосферы. Из реакционного раствора отгоняют растворитель в вакууме, подкисляют 1 N соляной кислотой (рН 1), экстрагируют диэтиловым эфиром, затем с помощью насыщенного водного раствора гидрокарбоната натрия делают основным (рН > 10) и многократно экстрагируют этиловым эфиром уксусной кислоты. Объединенные фильтраты сушат над сульфатом натрия, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Выход: 6,6 г (74% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К.=0,65 мин и 0,66 мин (цис-/транс-изомеры); МС (ИЭПпол): ιπ/ζ=286 [М+Н]+.

- 26 021944

Пример 36А. Метиловый эфир 5-[4-(дифторметокси)фенил]-1-[(1,1-диоксидо-тиоморфолин-4ил)карбонил]пиперидин-3-карбоновой кислоты [смесь цис-/транс-изомеров]

2,2 г (7,7 ммоль) метилового эфира 5-[4-(дифторметокси)фенил]пиперидин-3-карбоновой кислоты растворяют в 14 мл Ν-метилпирролидона, добавляют 4,0 мл (3,0 г, 23,0 ммоль) Ν,Νдиизопропилэтиламина и 3,5 г (11,5 ммоль) 4-нитрофенил-тиоморфолин-4-карбоксилат-1,1-диоксида. Реакционную смесь подвергают превращению в течение 7 мин при температуре 180°С в микроволновой печи. Затем добавляют воду и этиловый эфир уксусной кислоты, отделяют водную фазу и многократно экстрагируют этиловым эфиром уксусной кислоты. Объединенные органические экстракты промывают водой и насыщенным водным раствором хлористого натрия, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Остаток растворяют в диэтиловом эфире, фильтруют и фильтрат чистят препаративной ЖХВР. Выход: 2,0 г (51% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К.=0,92 мин и 0,94 мин (цис-/транс-изомеры); МС (ИЭПпол): ιη/ζ=447 [М+Н]+.

Пример 37А. 5-[4-(Дифторметокси)фенил]-1-[(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)карбонил]пиперидин-3-карбоновая кислота [рацемическая смесь цис-изомеров]

Согласно общему методу 4А подвергают взаимодействию 2,7 г (6,1 ммоль) метилового эфира 5-[4(дифторметокси)фенил] -1-[(1,1 -диоксидотиоморфолин-4-ил)карбонил]пиперидин-3 -карбоновой кислоты с 6,9 г (61,3 ммоль) трет-бутилата калия. Выход: 2,1 г (77% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К. 0.82 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 43 3 [М+Н]+.

Пример 38А. Метиловый эфир 5-[4-(дифторметокси)фенил]-1-[(1-оксидо-тиоморфолин-4ил)карбонил]пиперидин-3-карбоновой кислоты [смесь цис-/транс-изомеров]

2,2 г (7,7 ммоль) метилового эфира 5-[4-(дифторметокси)фенил]пиперидин-3-карбоновой кислоты растворяют в 14 мл Ν-метилпирролидона, добавляют 4,0 мл (3,0 г, 23,0 ммоль) Ν,Νдиизопропилэтиламина и 3,3 г (11,5 ммоль) 4-нитрофенил-тиоморфолин-4-карбоксилат-1-оксида. Реакционную смесь подвергают взаимодействию в течение 7 мин при температуре 180°С в микроволновой печи. Затем добавляют воду и этиловый эфир уксусной кислоты, водную фазу отделяют и многократно экстрагируют этиловым эфиром уксусной кислоты. Объединенные органические экстракты промывают водой и насыщенным водным раствором хлористого натрия, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Остаток чистят препаративной ЖХВР. Выход: 2,2 г (59% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К.=0,90 мин и 0,92 мин (цис-/транс-изомеры); МС (ИЭПпол): ιη/ζ=431 [М+Н]+.

- 27 021944

Пример 3 9А. 5-[4-(Дифторметокси)фенил]-1-[( 1 -оксидотиоморфолин-4-ил)карбонил] пиперидин-3 карбоновая кислота [рацемическая смесь цис-изомеров]

Согласно общему методу 4А подвергают взаимодействию 2,7 г (6,3 ммоль) метилового эфира 5-[4(дифторметокси)фенил] -1-[(1 -оксидотиоморфолин-4 -ил)карбонил] пиперидин-3 -карбоновой кислоты с 7,1 г (63,3 ммоль) трет-бутилата калия. Из реакционной смеси отгоняют растворитель в вакууме, остаток суспендируют в воде и делают кислым, добавляя концентрированную соляную кислоту. Осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат в вакууме. Выход: 1,1 г (34% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К. 0.75 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 417 [М+Н]+.

Пример 40А. 1-Бром-4-(2,2,2-трифторэтил)бензол

К раствору 25,0 г (100 ммоль) 4-бромбензилбромида в 1-метил-2-пирролидоне (121 мл) добавляют при комнатной температуре 4,95 г (26,0 ммоль) йодида меди(1) и 37,5 г (195 ммоль) метил-2,2-дифтор-2(фторсульфонил)ацетата. Нагревают до 80°С и затем перемешивают в течение ночи. Реакционный раствор выливают в воду и экстрагируют диэтиловым эфиром, а затем органическую фазу сушат над сульфатом натрия. После фильтрования и отгонки растворителя из органической фазы в вакууме остаток чистят на хроматографической колонке (силикагель, циклогексан/этиловый эфир уксусной кислоты 20:1). Выход: 16,1 г (67% от теор.).

ГХ-МС (метод 1Р): К. 2,66 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 240 [М+Н]+.

Пример 41А. Метил-5-[4-(2,2,2-трифторэтил)фенил]никотинат

К раствору 8,00 г (33,5 ммоль) соединения примера 40А в толуоле (304 мл) добавляют в атмосфере аргона при комнатной температуре 10,9 г (50,2 ммоль) соединения примера 33А в этаноле (100 мл) и

5,10 г (36,8 ммоль) карбоната калия. После перемешивания в течение 10 мин добавляют 3,87 г (3,35 ммоль) тетракис(трифенилфосфин)палладия и затем 5,83 г (100 ммоль) фтористого калия в воде (64 мл). Перемешивают в течение 8 ч в условиях рефлюкса, реакционную смесь охлаждают и разбавляют этиловым эфиром уксусной кислоты. Реакционный раствор промывают водой, органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Остаток чистят на хроматографической колонке (силикагель, дихлорметан/метанол 100:1 80:1). Выход: 9,20 г (69% от теор., 75% чистоты).

ЖХ-МС (метод 5В): К=1,06 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 296 [М+Н]+.

Пример 42А. Метил-5-[4-(2,2,2-трифторэтил)фенил]пиперидин-3-карбоксилат [рацемическая смесь цис-/транс-изомеров]

К раствору 9,20 г (23,4 ммоль) соединения примера 41А в концентрированной уксусной кислоте (192 мл) добавляют 1,94 г палладий/угля (10% палладия) и 2,23 г оксида платины(1У). Затем гидрируют в течение 6 ч при нормальном давлении в атмосфере водорода, после этого добавляют еще 1,00 г палладий/угля (10% палладия) и 2,00 г оксида платины(1У) и гидрируют в течение ночи при нормальном давлении в атмосфере водорода. В заключение добавляют еще 1,00 г палладий/угля (10% палладия) и 3,00 г оксида платины(1У) и гидрируют в течение 24 ч при нормальном давлении в атмосфере водорода. Реак- 28 021944 ционный раствор фильтруют через целит, остаток после фильтрования промывают метанол/водой и из объединенных фильтратов отгоняют растворитель в вакууме. Остаток растворяют в дихлорметане и затем промывают 1 N водным раствором карбоната натрия. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Выход: 6,64 г (85% от теор., 90% чистоты).

ЖХ-МС (метод 2В): К_г=0,83 мин и 0,84 мин (цис-/транс-изомеры); МС (ИЭПпол): т//=302 [М+Н]+. Пример 43А. 3-Метил-1-(4-нитрофенил)-5-[4-(2,2,2-трифторэтил)фенил]пиперидин-1,3дикарбоксилат [рацемическая смесь цис-/транс-изомеров]

К раствору 6,62 г (19,8 ммоль, 90% чистоты) соединения примера 42А в дихлорметане (211 мл) добавляют 9,65 мл (7,00 г, 69,2 ммоль) триэтиламина, а затем при температуре 0°С добавляют 3,99 г (19,8 ммоль) 4-нитрофенилового эфира хлормуравьиной кислоты. Нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 1 ч. Реакционный раствор промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и водой, органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и в вакууме отгоняют растворитель. Выход: 10,3 г (91% от теор., 81% чистоты).

ЖХ-МС (метод 2В): К<=1,40 мин и 1,42 мин (цис-/транс-изомеры); МС (ИЭПпол): т//=467 [М+Н]+.

Пример 44А. Метил-1-(тиоморфолин-4-илкарбонил)-5-[4-(2,2,2-трифторэтил)фенил]пиперидин-3карбоксилат [рацемическая смесь цис-/транс-изомеров]

К раствору 10,3 г (17,9 ммоль, 81% чистоты) соединения примера 43А в 1-метил-2-пирролидоне (65 мл) добавляют 12,6 мл (13,7 г, 132 ммоль) тиоморфолина и 11,5 мл (8,56 г, 66,2 ммоль) Ν,Νдиизопропилэтиламина, а затем 5 порциями нагревают при температуре 150°С в течение 1 ч в микроволновой печи типа 8т§1е Мобе (фирмы Етгуз ОрРтг/ег). Для переработки объединяют реакционные растворы и чистят напрямую препаративной ЖХВР. Выход: 5,63 г (71% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К_г=1,13 и 1,16 мин (цис-/транс-изомеры); МС (ИЭПпол): т//=431 [М+Н]+.

Пример 45А. 1-(Тиоморфолин-4-илкарбонил)-5-[4-(2,2,2-трифторэтил)фенил]пиперидин-3карбоновая кислота [рацемический цис-изомер]

К раствору 2,97 г (6,90 ммоль) соединения примера 44А в метаноле (83 мл) добавляют при комнатной температуре 7,74 г (69,0 ммоль) трет-бутилата калия. Смесь перемешивают в течение ночи при температуре 60°С. Для переработки отгоняют метанол в вакууме, к остатку добавляют воду и подкисляют раствор, добавляя раствор водной 1 N соляной кислоты (рН 1). Смесь экстрагируют этиловым эфиром уксусной кислоты, органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Выход: 2,61 г (76% от теор., 84% чистоты).

ЖХ-МС (метод 5В): К_г=1,02 мин; МС (ИЭПпол): т//=417 [М+Н]+.

- 29 021944

Пример 46А. {3-(3-Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(2,2,2-трифторэтил)фенил]пиперидин1-ил}(тиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 6А подвергают взаимодействию 300 мг (0,720 ммоль) соединения примера 45А и 79,3 мг (0,792 ммоль) Ν'-гидроксициклопропанкарбоксимидамида. Выход: 160 мг (45% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К=1,23 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 481 [М+Н]+.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,32 (к, 4Н), 3,92 (б, 1Н), 3,68-3,52 (ш, 3Н), 3,44 (Ьг. к., 4Н), 3,393,33 (т, 1Н), 3,03-2,85 (т, 3Н), 2,59 (Ьг. к., 5Н), 2,28 (б, 1Н), 2,16-2,06 (т, 1Н), 1,92 (ф 1Н), 1,10-1,01 (т, 2Н), 0,92-0,85 (т, 2Н).

Пример 47А. {3-[3-(2-Метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4-(2,2,2-трифторэтил)фенил]пиперидин-1-ил}(тиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 6А подвергают взаимодействию 300 мг (0,720 ммоль) соединения примера 45А и 93,6 мг (0,792 ммоль) №-гидрокси-3-метоксипропанимидамида. Выход: 231 мг (63% от теор., около 15% транс-изомера).

ЖХ-МС (метод 5В): К=1,14 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 499 [М+Н]+.

Пример 48А. 1-Бром-4-(1,1-дифторэтил)бензол

К раствору 10,0 г (50,2 ммоль) 4-бромацетофенона в тетрагидрофуране (20 мл) добавляют 50,0 мл (151 ммоль, 50% в тетрагидрофуране) бис-(2-метоксиэтил)аминосератрифторид (деоксофлуор) и 3 капли метанола, а затем перемешивают в течение 4 дней в условиях рефлюкса. Реакционную смесь осторожно добавляют по каплям в смесь насыщенного водного раствора гидрокарбоната натрия и льда (1:1), а затем экстрагируют диэтиловым эфиром. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Остаток чистят на хроматографической колонке (силикагель, петролейный эфир/дихлорметан 3:1). Выход: 8,46 г (76% от теор.).

^!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,70 (б, 2Н), 7,52 (б, 2Н), 1,96 (ΐ, 3Н).

Пример 49А. Метил-5-[4-(1,1-дифторэтил)фенил]никотинат

К раствору 2,98 г (13,3 ммоль) соединения примера 48А в толуоле (25,0 мл) в атмосфере аргона при комнатной температуре добавляют 3,62 г (16,7 ммоль) соединения примера 33А в этаноле (8,4 мл) и 2,03 г (14,7 ммоль) карбоната калия. После перемешивания в течение 10 мин добавляют 1,54 г (1,34 ммоль) тетракис-(трифенилфосфин)палладия, а затем 2,33 г (40,0 ммоль) фтористого калия в воде (5,8 мл). Перемешивают в течение 8 ч в условиях рефлюкса, охлаждают реакционный раствор и разбавляют этиловым эфиром уксусной кислоты. Реакционный раствор промывают водой, органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и в вакууме отгоняют растворитель. Остаток чистят на хроматографической колонке (силикагель, дихлорметан/метанол 100:1 80:1). Выход: 2,62 г (69% от теор., 4:1 - смесь

- 30 021944 из метилового и этилового эфиров).

ЖХ-МС (метод 2В): К₁=1,20 мин (метиловый эфир) и 1,28 мин (этиловый эфир); МС (ИЭПпол): т//=278 [М+Н]+ (метиловый эфир) и 292 [М+Н]+ (этиловый эфир).

Пример 50А. Метил-5-[4-(1,1-дифторэтил)фенил]пиперидин-3-карбоксилат [рацемическая смесь цис-/транс-изомеров]

К раствору 2,30 г (8,30 ммоль) соединения примера 49А в метаноле (52 мл) и концентрированному раствору хлористого водорода (6,5 мл) добавляют 1,05 г палладия/угля (10% палладия) и 1,92 г оксида платины(1У) и затем в течение ночи гидрируют в атмосфере водорода при нормальном давлении. Реакционный раствор фильтруют через целит, остатки на фильтре промывают метанолом/водой и из объединенных фильтратов отгоняют растворитель в вакууме. Остаток растворяют в дихлорметане и затем промывают 1 N водным раствором карбоната натрия. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Выход: 2,30 г (81% от теор., 82% чистоты).

ЖХ-МС (метод 2В): К₁=0,80 и 0,81 мин (цис-/транс-изомеры); МС (ИЭПпол): ш//=284 [М+Н]+.

Пример 51А. 3 -Метил-1 -(4-нитрофенил)-5-[4-( 1,1 -дифторэтил)фенил]пиперидин- 1,3-дикарбоксилат [рацемическая смесь цис-/транс-изомеров]

К раствору 1,30 г (3,78 ммоль, 82% чистоты) соединения примера 50А в дихлорметане (44 мл) добавляют 1,84 мл (1,34 г, 13,2 ммоль) триэтиламина и затем при температуре 0°С добавляют 762 мг (3,78 ммоль) 4-нитрофенилового эфира хлормуравьиной кислоты. Нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 2 дней. Реакционный раствор промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и водой, органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Выход: 1,93 г (92% от теор., 81% чистоты, 2:1 - смесь метилового и этилового эфиров).

ЖХ-МС (метод 5В): В,=2.58 мин и 2,61 мин (метиловый эфир, цис-/транс-изомеры) и 2,68 мин и 2,70 мин (этиловый эфир, цис-/транс-изомеры); МС (ИЭПпол): ш//=278 [М+Н]+ (метиловый эфир) и 292 [М+Н]+ (этиловый эфир).

Пример 52А. Метил-5-[4-(1,1-дифторэтил)фенил]-1-(тиоморфолин-4-илкарбонил)пиперидин-3карбоксилат [рацемическая смесь цис-/транс-изомеров]

К раствору 1,94 г (3,50 ммоль, 81% чистоты) соединения примера 51А в 1-метил-2-пирролидоне (18 мл) добавляют 1,99 мл (2,17 г, 21,0 ммоль) тиоморфолина и 1,83 мл (1,36 г, 10,5 ммоль) Ν,Νдиизопропилэтиламина и затем 3 порциями нагревают при температуре 150°С в течение 45 мин в микроволновой печи типа §ш§1е Мобе (фирмы Еттук ΟρΙίιηί/ег). Для переработки объединяют реакционные растворы и напрямую чистят препаративной ЖХВР. Выход: 530 мг (34% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К₁=2,28 и 2,35 мин (цис-/транс-изомеры); МС (ИЭПпол): т//=413 [М+Н]+.

- 31 021944

Пример 53А. 5-[4-(1,1-Дифторэтил)фенил]-1-(тиоморфолин-4-илкарбонил)пиперидин-3-карбоновой кислоты [рацемическая смесь цис-/транс-изомеров]

К раствору 528 мг (1,28 ммоль) соединения примера 52А в 15 мл метанола добавляют при комнатной температуре 1,44 г (12,8 ммоль) трет-бутилата калия. Смесь перемешивают в течение ночи при температуре 60°С. Для переработки отгоняют метанол в вакууме, к остатку добавляют воду и делают его кислым с помощью водного раствора 1 N соляной кислоты (рН 1). Смесь экстрагируют этиловым эфиром уксусной кислоты, органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Выход: 471 мг (91% от теор., 2:1 смесь цис-/транс-изомеров).

ЖХ-МС (метод 5В): К=0,99 и 1,01 мин; МС (ИЭПпол): т^=399 [М+Н]+.

Пример 54А. {3-(3-Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(1,1-дифторэтил)фенил]пиперидин-1ил}(тиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 6А подвергают взаимодействию 150 мг (0,376 ммоль) соединения примера 53А и 41,5 мг (0,414 ммоль) Ν'-гидроксициклопропанкарбоксимидамида. Выход: 77,9 мг (44% от теор.).

ЖХ-МС (метод 2В): Κ_ΐ=1,37 мин; МС (ИЭПпол): т^=463 [М+Н]+.

Пример 55А. Метил-5-[4-(2-гидроксиэтил)фенил]никотинат

Согласно общему методу 3А подвергают взаимодействию 6,00 г (29,8 ммоль) 2-(4бромфенил)этанола и 19,6 г (74,6 ммоль) метил-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2ил)никотината. Выход: 6,12 г (74% от теор.).

ЖХ-МС (метод 2В): К=0,86 мин; МС (ИЭПпол): т^=258 [М+Н]+.

Пример 56А. Метил-5-[4-(2-гидроксиэтил)фенил]пиперидин-3-карбоксилат [рацемическая смесь цис-/транс-изомеров]

К раствору 5,40 г (19,6 ммоль) соединения примера 55А в концентрированной уксусной кислоте (124 мл) добавляют 1,00 г палладия/угля (10% палладия) и 1,00 г оксида платиныДУ). Затем гидрируют в течение 6 ч в атмосфере водорода при нормальном давлении, после этого добавляют еще раз 1,00 г палладий/угля (10% палладия) и 1,00 г оксида платины(Ш) и гидрируют в течение ночи в атмосфере водорода при нормальном давлении. В заключение гидрируют еще в течение 2 ч в атмосфере водорода при давлении 3 бар в аппаратуре Парра (Рагг). Реакционный раствор фильтруют через целит, остаток после фильтрования промывают метанолом/водой и из объединенных фильтратов отгоняют растворитель в вакууме. Остаток многократно перегоняют совместно с толуолом и затем сушат при высоком вакууме. Выход: 6,63 г (56% от теор., 44% чистоты).

ЖХ-МС (метод 2В): Κ_ΐ=0,36 мин и 0,40 мин (цис-/транс-изомеры); МС (ИЭПпол): ιη/ζ=264 [М+Н]+.

- 32 021944

Пример 57А. Метил-1-ацетил-5-[4-(2-гидроксиэтил)фенил]пиперидин-3-карбоксилат [рацемическая смесь цис-/транс-изомеров]

К раствору 5,58 г (9,33 ммоль, 44% чистоты) соединения примера 56А в дихлорметане (80 мл) добавляют 2,60 мл (1,89 г, 18,7 ммоль) триэтиламина, а затем охлаждают до температуры 0°С. При этой температуре добавляют по каплям 0,33 мл (0,37 г, 4,67 ммоль) ацетилхлорида и перемешивают в течение 2 ч. Добавляют дополнительно 0,13 мл (0,15 г, 1,86 ммоль) ацетилхлорида и перемешивают в течение 1 ч. После этого реакционный раствор промывают водным 1 Ν раствором соляной кислоты, органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Остаток чистят на хроматографической колонке (силикагель, дихлорметан/метанол 30:1) и полученный сырой продукт чистят еще раз препаративной ЖХВР. Выход: 1,17 г (41% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К=0,72 мин и 0,74 мин (цис-/транс-изомеры); МС (ИЭПпол): ιη/ζ=306 [М+Н]+.

Пример 58А. Метил-1-ацетил-5-[4-(2,2-дифторэтил)фенил]пиперидин-3-карбоксилат [рацемическая смесь цис-/транс-изомеров]

К раствору 631 мг (2,05 ммоль) соединения примера 57А в дихлорметане (20,8 мл) добавляют 1,45 мл (1,60 г, 20,5 ммоль) диметилсульфоксида и 1,78 мл (1,32 г, 10,2 ммоль) Ν,Ν-диизопропиламина. Затем при температуре -20°С добавляют 1,30 г (8,18 ммоль) комплекса триоксида серы-пиридина и перемешивают в течение ночи, причем медленно нагревают до комнатной температуры. Реакционный раствор разбавляют дихлорметаном, органическую фазу промывают водой, сушат над сульфатом магния, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Сырой продукт (778 мг) затем помещают в дихлорметан (5,2 мл) и при комнатной температуре по каплям добавляют 0,50 мл (615 мг, 3,81 ммоль) трифторида диэтиламиносеры (ЭЛЗТ). Перемешивают в течение 4 ч при комнатной температуре и в заключение прекращают реакцию осторожным добавлением 2 Ν водного раствора карбоната натрия. После разделения фаз органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Сырой продукт чистят препаративной ЖХВР. Выход: 120 мг (24% от теор., 61% чистоты, около 2:1 смесь цис-/транс-изомеров).

ЖХ-МС (метод 2В): К_!=1,07 мин и 1,09 мин (цис-/транс-изомеры); МС (ИЭПпол): ιη/ζ=326 [М+Н]+.

Пример 59А. 1-Ацетил-5-[4-(2,2-дифторэтил)фенил]пиперидин-3-карбоновая кислота [рацемический цис-изомер]

К раствору 205 мг (0,365 ммоль, 61% чистоты) соединения примера 58А в метаноле (6,9 мл) добавляют при комнатной температуре 410 мг (3,65 ммоль) трет-бутилата калия. Смесь перемешивают в течение ночи при температуре 60°С. Для переработки отгоняют метанол в вакууме, к остатку добавляют воду и подкисляют с помощью водного раствора 1 Ν соляной кислоты до значения (рН 1). Смесь экстрагируют этиловым эфиром уксусной кислоты, органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Выход: 153 мг (67% от теор., 50% чистоты).

ЖХ-МС (метод 5В): К_!=1,74 мин; МС (ИЭПпол): тУ=312 [М+Н]+.

- 33 021944

Пример 60А. 1-{3-[4-(2,2-Дифторэтил)фенил]-5-[3-(2-метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5ил]пиперидин-1-ил}-этанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 6А подвергают взаимодействию 153 мг (0,270 ммоль, 50% чистоты) соединения примера 59А и 41,3 мг (0,297 ммоль, 85% чистоты) №-гидрокси-3-метоксипропанимидамида. Выход: 46,6 мг (32% от теор., 72% чистоты).

ЖХ-МС (метод 2В): К=1,07 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 394 [Μ+Η]+.

Пример 61А. 3-[4-(2,2-Дифторэтил)фенил]-5-[3-(2-метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]пиперидин [рацемический цис-изомер]

К раствору 45,0 мг (0,083 ммоль, 72% чистоты) соединения примера 60А в этаноле (10,0 мл) добавляют 69 мкл (15 мг, 0,42 ммоль) концентрированной соляной кислоты. Затем перемешивают в течение 24 ч в условиях рефлюкса, реакционный раствор разбавляют водой и промывают диэтиловым эфиром. Водную фазу делают щелочной и экстрагируют дихлорметаном. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Выход: 36,3 мг (87% от теор., 70% чистоты).

ЖХ-МС (метод 5В): К=0,71 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 3 52 [Μ+Η]+.

Пример 62А. 4-Нитрофенил-3-[4-(2,2-дифторэтил)фенил]-5-[3-(2-метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5ил]пиперидин-1-карбоксилат [рацемический цис-изомер]

К раствору 36,3 мг (0,061 ммоль, 70% чистоты) соединения примера 61А в дихлорметане (2,0 мл) добавляют 0,03 мл (21,6 мг, 0,21 ммоль) триэтиламина и затем при комнатной температуре 12,3 мг (0,061 ммоль) 4-нитрофенилового эфира хлормуравьиной кислоты. Перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре и затем промывают реакционный раствор насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и водой, органическуюфазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. Выход: 56,2 мг (91% от теор., 60% чистоты).

ЖХ-МС (метод 4В): К=2,56 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ Я' [Μ+Η]+.

Пример 63А. {3-[4-(2,2-Дифторэтил)фенил]-5-[3-(2-метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]пиперидин1-ил](тиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

К раствору 56,0 мг (0,065 ммоль, 60% чистоты) соединения примера 62А в 1-метил-2-пирролидоне (2,0 мл) добавляют 37,0 мкл (40,0 мг, 0,390 ммоль) тиоморфолина и 34,0 мкл (25,0 мг, 0,195 ммоль) Ν,Νдиизопропилэтиламина, а затем нагревают при температуре 150°С в течение 30 мин в микроволновой печи типа 8ш§1е Мойе (фирмы Етгук Οрί^т^ζе^). Для переработки реакционные растворы объединяют и

- 34 021944 напрямую чистят препаративной ЖХВР. Выход: 14,7 мг (47% от теор.). ЖХ-МС (метод 5В): К=1,09 мин; МС (ИЭПпол): т//=481 [М+Н]+. Пример 64А. №-Гидрокси-1-метоксициклопропанкарбоксимидамид

К 100 мг (1,03 ммоль) 1-метоксициклопропанкарбоксамид [Ь.Ы. О\\сп, Н.М. ВаЪаШпйе 8отайе, I. СЬет. §ос. 1947, 1030-1034] в тетрагидрофуране (22,7 мл) добавляют 1,51 г (6,08 ммоль) метил-Ν(триэтиламмонийсульфонил)карбамата (реагент Бургесса (Вигде55)) и после этого перемешивают в течение 1,5 ч при температуре 60°С. К реакционной смеси добавляют дихлорметан и воду, органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме (637 мг сырого продукта). 100 мг сырого продукта помещают в этанол (1,2 мл), добавляют 107 мг (1,55 ммоль) гидроксиламмонийхлорида и 0,17 мл (125 мг, 1,24 мг) триэтиламина, а затем перемешивают в течение ночи в условиях рефлюкса. Из реакционного раствора отгоняют растворитель в вакууме, к остатку добавляют насыщенный водный раствор хлористого натрия, а затем экстрагируют дихлорметаном. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и отгоняют растворитель в вакууме. В заключение остаток перемешивают с этиловым эфиром уксусной кислоты, отфильтровывают нерастворимые соли и отгоняют растворитель из фильтрата в вакууме. Выход: 32,3 мг (23% от теор.).

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-й₆): δ 9,09 (Ъг. 5., 1Н), 5,39 (Ъг. 5., 2Н), 3,15 (5, 3Н), 0,81 (й, 4Н).

Пример 65А. {3-[3-(1-Метоксициклопропил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4-(2,2,2-трифторэтил)фенил]пиперидин-1-ил}(тиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 6А подвергают взаимодействию 93,1 мг (0,224 ммоль) соединения примера 45А и 32,0 мг (0,246 ммоль) №-гидрокси-1-метоксициклопропанкарбоксимидамида примера 64А.

Выход: 31,1 мг (27% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К=1,22 мин; МС (ИЭПпол): т//=511 [М+Н]+.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-й₆): δ 7,33 (5, 4Н), 3,94 (й, 1Н), 3,69-3,52 (т, 3Н), 3,48-3,42 (т, 4Н), 3,413,34 (т, 4Н), 3,06-2,85 (т, 3Н), 2,63-2,57 (т, 4Н), 2,32-2,25 (т, 1Н), 2,02-1,88 (т, 1Н), 1,34-1,28 (т, 2Н), 1,19-1,11 (т, 2Н).

Пример 66А. 4-Нитрофенилтиоморфолин-4-карбоксилат-1,1-диоксид

17,0 г (99,2 ммоль) гидрохлорида тиоморфолин-1,1-диоксида помещают в 100 мл дихлорметана и в условиях охлаждения ледяной баней добавляют 20,7 мл (15,1 г, 148,8 ммоль) триэтиламина. Добавляют по порциям 10,0 г (49,6 ммоль) 4-нитрофенилового эфира хлормуравьиной кислоты. Реакционную смесь перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре, добавляют воду и этиловый эфир уксусной кислоты, а затем фильтруют. Остаток сушат при высоком вакууме. Выход: 12,4 г (83% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К=0,75 мин; МС (ИЭПпол): т//=301 [М+Н]+.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-й₆): δ 8,34-8,28 (т, 2Н), 7,55-7,50 (т, 2Н), 4,01 (Ъг. 5., 2Н), 3,87 (Ъг. 5., 2Н), 3,37 (Ъг. 5., 2Н), 3,28 (Ъг. 5., 2Н).

Примеры получения.

Общий метод 1. Получение сульфоксида.

К раствору соответствующего простого тиоэфира (1,0 экв.) в дихлорметане (около 20-40 мл/ммоль) добавляют при комнатной температуре 50% мета-хлорпероксибензойную кислоту (0,9-1,0 экв.). Реакционную смесь перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. Отгоняют растворитель в вакууме и остаток чистят препаративной ЖХВР.

Общий метод 2. Получение сульфона.

К раствору соответствующего простого тиоэфира (1,0 экв.) в дихлорметане (около 20-40 мл/ммоль) добавляют при комнатной температуре 50% мета-хлорпероксибензойную кислоту (2,5 экв.). Реакцион- 35 021944 ную смесь перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. Отгоняют растворитель в вакууме и остаток чистят препаративной ЖХВР.

Пример 1.

{3-[3 -(2-Метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил] -5-[4-(трифторметокси)фенил]пиперидин-1-ил}(1 оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 1 подвергают превращению 100 мг (0,200 ммоль) соединения примера 26А. Выход: 90 мг (87% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К=0,97 мин; МС (ИЭПпол): т^=517 [М+Н]+;

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,48 (б, 2Н), 7,33 (б, 3Н), 3,99 (б, 1Н), 3,69-3,66 (т, 3Н), 3,65-3,58 (т, 4Н), 3,57-3,48 (т, 3Н), 3,23 (5, 3Н), 3,09-2,88 (т, 7Н), 2,75-2,66 (т, 3Н), 2,35-2,28 (т, 1Н), 2,00 (т, 1Н).

Пример 2.

{3-(3-Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(трифторметокси)фенил]пиперидин-1-ил}(1оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 1 подвергают превращению 100 мг (0,207 ммоль) соединения примера 27А. Выход: 95 мг (91% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К=1,05 мин; МС (ИЭПпол): т/г=499 [М+Н]+;

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,47 (б, 2Н), 7,33 (б, 2Н), 3,95 (б, 1Н), 3,67-3,48 (т, 5Н), 3,05-2,85 (т, 5Н), 2,75-2,65 (т, 2Н), 2,28 (б, 1Н), 2,14-2,08 (т, 1Н), 1,94 (ц, 1Н), 1,09-1,01 (т, 2Н), 0,92-0,84 (т, 2Н).

Пример 3. [3 -(3 -Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-(4-этилфенил)пиперидин-1-ил] (1 оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 1 подвергают превращению 55 мг (0,130 ммоль) соединения примера 9А. Выход: 43 мг (75% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К=1,06 мин; МС (ИЭПпол): ω/ζ=443 [М+Н]+.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,24 (б, 2Н), 7,17 (б, 2Н), 3,96 (б, 2Н), 3,67-3,46 (т, 5Н), 3,045-2,85 (т, 5Н), 2,74-2,66 (т, 2Н), 2,57 (ц, 2Н), 2,25 (б, 1Н), 2,14-2,06 (т, 1Н), 1,91 (ц, 1Н), 1,16 (ί, 3Н), 1,08-1,02 (т, 2Н), 0,91-0,86 (т, 2Н).

Пример 4. {3-[3-(2-Этоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-(4-этилфенил)пиперидин-1-ил}(1оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 1 подвергают превращению 50 мг (0,109 ммоль) соединения примера 11А. Выход: 17 мг (32% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К.=1,01 мин; МС (ИЭПпол): т^=475 [М+Н]+.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,23 (б, 2Н), 7,17 (б, 2Н), 3,98 (б, 2Н), 3,71 (ί, 2Н), 3,67-3,47 (т, 4Н),

- 36 021944

3,43 (д, 1Н), 3,07-2,89 (т, 3Н), 2,75-2,66 (т, 3Н), 2,57 (д, 3Н), 1,95 (д, 1Н), 1,24 (Ьг. к., 1Н), 1,16 (ΐ, 3Н), 1,07 (ΐ, 3Н).

Пример 5. {3-[3 -(2-Этоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5 -ил] -5 -(4-этилфенил)пиперидин-1-ил}(1 оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Разделение энантиомеров рацемата примера 4 согласно методу 6Ό дает 37,7 мг титульного соединения примера 5 и 20,0 мг титульного соединения примера 6.

ЖХ-МС (метод 5В): К=1,01 мин; МС (ИЭПпол): μ/ζ=475 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 1Е): Κ_ΐ=6,48 мин, >99,5% ее.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОД₆): δ 7,23 (ά, 2Н), 7,17 (ά, 2Н), 3,98 (ά, 2Н), 3,71 (ΐ, 2Н), 3,67-3,47 (т, 4Н),

3,43 (д, 1Н), 3,07-2,89 (т, 3Н), 2,75-2,66 (т, 3Н), 2,57 (д, 3Н), 1,95 (д, 1Н), 1,24 (Ьг. к., 1Н), 1,16 (ΐ, 3Н), 1,07 (ΐ, 3Н).

Пример 6. {3-[3-(2-Этоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-(4-этилфенил)пиперидин-1-ил}(1оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Разделение энантиомеров рацемата примера 4 согласно методу 6Ό дает 37,7 мг титульного соединения примера 5 и 20,0 мг титульного соединения примера 6.

ЖХ-МС (метод 5В): Κ_ΐ=1,01 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 475 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 1Е): Κ_ΐ=7,27 мин, >99,5% ее.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОД₆): δ 7,23 (ά, 2Н), 7,17 (ά, 2Н), 3,98 (ά, 2Н), 3,71 (ΐ, 2Н), 3,67-3,47 (т, 4Н),

3,43 (д, 1Н), 3,07-2,89 (т, 3Н), 2,75-2,66 (т, 3Н), 2,57 (д, 3Н), 1,95 (д, 1Н), 1,24 (Ьг. к., 1Н), 1,16 (ΐ, 3Н), 1,07 (ΐ, 3Н).

Пример 7. {3-[3-(2-Гидроксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4-(трифторметил)фенил]пиперидин-1ил}(1-оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 1 подвергают превращению 80 мг (0,170 ммоль) соединения примера 20А. Выход: 77 мг (91% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): Κ_ΐ=0,85 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 487 [М+Н]+.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОД₆): δ 7,70 (ά, 2Н), 7,58 (ά, 2Н), 4,77 (ΐ, 1Н), 3,99 (ά, 1Н), 3,74 (д, 2Н), 3,683,59 (т, 3Н), 3,57-3,48 (т, 2Н), 3,48-3,38 (т,1Н), 3,12-3,01 (т, 3Н), 2,98-2,86 (т 2Н), 2,85-2,80 (т, 2Н), 1,55 (д, 1Н).

Пример 8. (1,1-Диоксидотиоморфолин-4-ил){3-[3-(2-метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4(трифторметокси)фенил]пиперидин-1-ил}метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

- 37 021944

Согласно общему методу 2 подвергают превращению 150 мг (0,300 ммоль) соединения примера 26А. Разделение энантиомеров рацемата согласно методу 1Ό дает 65,0 мг титульного соединения примера 8 и 72,0 мг титульного соединения примера 9.

ЖХ-МС (метод 5В): Н.= 1,04 мин; МС (ИЭПпол): т^=533 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 2Е): Н. 1У64 мин, >99,5% ее.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОД₆): δ 7,48 (ά, 2Н), 7,33 (ά, 2Н), 4,03 (ά, 1Н), 3,70-3,58 (т, 7Н), 3,45-3,35 (т, 1Н), 3,23 (5, 3Н), 3,21-3,15 (т, 4Н), 3,12-2,90 (т, 5Н), 2,33 (ά, 1Н), 1,97 (ф 1Н).

Пример 9. (1,1-Диоксидотиоморфолин-4-ил){3-[3-(2-метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4(трифторметокси)фенил]пиперидин-1-ил}метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Согласно общему методу 2 подвергают превращению 150 мг (0,300 ммоль) соединения примера 26А. Разделение энантиомеров рацемата согласно методу 1Ό дает 65,0 мг титульного соединения примера 8 и 72,0 мг титульного соединения примера 9.

ЖХ-МС (метод 5В): Н.= 1,04 мин; МС (ИЭПпол): т^=533 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 2Е): Н. 42.42 мин, >99,5% ее.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОД₆): δ 7,48 (ά, 2Н), 7,33 (ά, 2Н), 4,03 (ά, 1Н), 3,70-3,58 (т, 7Н), 3,45-3,35 (т, 1Н), 3,23 (5, 3Н), 3,21-3,15 (т, 4Н), 3,12-2,90 (т, 5Н), 2,33 (ά, 1Н), 1,97 (ф 1Н).

Пример 10. {3-(3-Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(трифторметокси)фенил]пиперидин-1ил}(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

К 136 мг (0,281 ммоль) {3-(3-циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(трифторметокси)фенил]пиперидин-1-ил}(тиоморфолин-4-ил)метанона [рацемический цис-изомер] (пример 27А) в дихлорметане (11,6 мл) добавляют при комнатной температуре 243 мг (0,703 ммоль) метахлорпербензойной кислоты и после этого перемешивают в течение 30 мин. Из реакционного раствора отгоняют растворитель в вакууме, остаток растворяют в ацетонитриле и чистят препаративной ЖХВР. Разделение энантиомеров 136 мг рацемата согласно методу 2Ό дает 61,7 мг титульного соединения примера 10 и 59,6 мг титульного соединения примера 11.

ЖХ-МС (метод 5В): Н.= 1,12 мин; МС (ИЭПпол): т^=515 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 3Е): Н. 4.26 мин, >99,05% ее.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОД₆): δ 7,47 (ά, 2Н), 7,33 (ά, 2Н), 3,99 (ά, 1Н), 3,67-3,56 (т, 5Н), 3,40-3,33 (т, 1Н), 3,20-3,14 (т, 4Н), 3,08-2,96 (т, 3Н), 2,28 (ά, 1 Н), 2,14-2,06 (т, 1Н), 1,94 (ф 1Н), 1,08-1,03 (т, 2Н), 0,91-0,86 (т, 2Н).

Пример 11. {3-(3-Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(трифторметокси)фенил]пиперидин-1ил}(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

К 136 мг (0,281 ммоль) {3-(3-циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(трифторметокси)фенил]пиперидин-1-ил}(тиоморфолин-4-ил)метанона [рацемический цис-изомер] (пример 27А) в дихлорметане (11,6 мл) добавляют при комнатной температуре 243 мг (0,703 ммоль) метахлорпербензой- 38 021944 ной кислоты и после этого перемешивают в течение 30 мин. Из реакционного раствора отгоняют растворитель в вакууме, остаток растворяют в ацетонитриле и чистят препаративной ЖХВР. Разделение энантиомеров 136 мг рацемата согласно методу 2Ό дает 61,7 мг титульного соединения примера 10 и 59,6 мг титульного соединения примера 11.

ЖХ-МС (метод 5В): К.= 1,12 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 515 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 3Е): К.=5,68 мин, >99,0% ее.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСОЛ₆): δ 7,47 (ά, 2Н), 7,33 (ά, 2Н), 3,99 (ά, 1Н), 3,67-3,56 (т, 5Н), 3,40-3,33 (т, 1Н), 3,20-3,14 (т, 4Н), 3,08-2,96 (т, 3Н), 2,28 (ά, 1Н), 2,14-2,06 (т, 1Н), 1,94 (ц, 1Н), 1,08-1,03 (т, 2Н), 0,91-0,86 (т, 2Н).

Пример 12. (1,1-Диоксидотиоморфолин-4-ил){3-(4-этилфенил)-5-[3-(2-метоксиэтил)-1,2,4оксадиазол-5-ил]пиперидин-1-ил}метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Согласно общему методу 2 подвергают превращению 77,0 мг (0,173 ммоль) соединения примера 8А. Разделение энантиомеров 74,9 мг рацемата по методу 3Ό дает 36,0 мг титульного соединения примера 12 и 35,0 мг титульного соединения примера 13.

ЖХ-МС (метод 2В): К.= 1,17 мин; МС (ИЭПпол): тА=477 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 4Е): К.=5,49 мин, >99,0% ее.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСОЛ₆): δ 7,23 (ά, 2Н), 7,17 (ά, 2Н), 4,03 (ά, 1Н), 3,73-3,56 (т, 7Н), 3,46-3,35 (т, 1Н), 3,23 (5, 3Н), 3,17 (Ъг. 5., 4Н), 3,06 (ΐ, 1Н), 3,01-2,83 (т, 4Н), 2,58 (ά, 3Н), 2,30 (ά, 1Н), 1,95 (ц, 1Н), 1,16 (ΐ, 3Н).

Пример 13. (1,1 -Диоксидотиоморфолин-4-ил) { 3 -(4-этилфенил)-5-[3 -(2-метоксиэтил)-1,2,4оксадиазол-5-ил]пиперидин-1-ил}метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Согласно общему методу 2 подвергают превращению 77,0 мг (0,173 ммоль) соединения примера 8А. Разделение энантиомеров 74,9 мг рацемата по методу 3Ό дает 36,0 мг титульного соединения примера 12 и 35,0 мг титульного соединения примера 13.

ЖХ-МС (метод 2В): К.= 1,17 мин; МС (ИЭПпол): тА=477 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 4Е): К 12,07 мин, >99,0% ее.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСОЛ₆): δ 7,23 (ά, 2Н), 7,17 (ά, 2Н), 4,03 (ά, 1Н), 3,73-3,56 (т, 7Н), 3,46-3,35 (т, 1Н), 3,23 (5, 3Н), 3,17 (Ъг. 5., 4Н), 3,06 (ΐ, 1Н), 3,01-2,83 (т, 4Н), 2,58 (ά, 3Н), 2,30 (ά, 1Н), 1,95 (ц, 1Н), 1,16 (ΐ, 3Н).

Пример 14. [3-(3-Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-(4-этилфенил)пиперидин-1-ил](1,1диоксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Согласно общему методу 2 подвергают превращению 55 мг (0,130 ммоль) соединения примера 9А. Разделение энантиомеров 53,3 мг рацемата по методу 4Ό дает 23,0 мг титульного соединения примера 14 и 23,0 мг титульного соединения примера 15.

ЖХ-МС (метод 2В): К.= 1,30 мин; МС (ИЭПпол): тА=459 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 5Е): К.=8,89 мин, >99,0% ее.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСОЛ₆): δ 7,23 (ά, 2Н), 7,16 (ά, 2Н), 3,99 (ά, 1Н), 3,67-3,55 (т, 5Н), 3,39-3,32 (т, 1Н), 3,17 (Ъг. 5., 4 Н), 3,07-2,91 (т, 2Н), 2,91-2,81 (т, 1Н), 2,62-2,55 (т, 2Н), 2,26 (ά, 1Н), 2,16-2,08 (т, 1Н), 1,91 (д, 1Н), 1,16 (ΐ, 3Н), 1,10-1,02 (т, 2Н), 0,92-0,85 (т, 2Н).

- 39 021944

Пример 15. [3 -(3 -Циклопропил-1,2,4-оксадиаэол-5-ил)-5-(4-этилфенил)пиперидин-1-ил] (1,1диоксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Согласно общему методу 2 подвергают превращению 55,5 мг (0,130 ммоль) соединения примера 9А. Разделение энантиомеров 53,3 мг рацемата по методу 4Ό дает 23,0 мг титульного соединения примера 14 и 23,0 мг титульного соединения примера 15.

ЖХ-МС (метод 2В): К.= 1,27 мин; МС (ИЭПпол): т// 459 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 5Е): К.=12,06 мин, >99,0% ее.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-Б₆): δ 7,23 (Б, 2Н), 7,16 (Б, 2Н), 3,99 (Б, 1Н), 3,67-3,55 (т, 5Н), 3,39-3,32 (т, 1Н), 3,17 (Ъг. к., 4Н), 3,07-2,91 (т, 2Н), 2,91-2,81 (т, 1Н), 2,62-2,55 (т, 2Н), 2,26 (Б, 1Н), 2,16-2,08 (т, 1Н), 1,91 (ц, 1Н), 1,16 (ΐ, 3Н), 1,10-1,02 (т, 2Н), 0,92-0,85 (т, 2Н).

Пример 16. {3-(3-Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(трифторметил)фенил]пиперидин-1ил}(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Согласно общему методу 2 подвергают превращению 269 мг (0,578 ммоль) соединения примера 17А. Разделение энантиомеров 292 мг рацемата по методу 1Ό дает 57,8 мг титульного соединения примера 16 и 99,7 мг титульного соединения примера 17.

ЖХ-МС (метод 2В): К=1,26 мин; МС (ИЭПпол): т//=499 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 1Е): К,=10,53 мин, >99,0% ее.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-Б₆): δ 7,70 (Б, 2Н), 7,57 (Б, 2Н), 4,00 (Б, 1Н), 3,67 (Б, 1Н), 3,61 (Ъг. к., 4Н), 3,44-3,33 (т, 1Н), 3,17 (Ъг. к., 4Н), 3,12-2,98 (т, 3Н), 2,31 (Б, 1Н), 2,11 (Б1, 1Н), 1,98 (ц, 1Н), 1,12-1,00 (т, 2Н), 0,95-0,84 (т, 2Н).

Пример 17. {3-(3-Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(трифторметил)фенил]пиперидин-1ил}(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Согласно общему методу 2 подвергают превращению 269 мг (0,578 ммоль) соединения примера 17А. Разделение энантиомеров 292 мг рацемата по методу 1Ό дает 57,8 мг титульного соединения примера 16 и 99,7 мг титульного соединения примера 17.

ЖХ-МС (метод 2В): К=1,26 мин; МС (ИЭПпол): т//=499 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 1Е): К.=16,04 мин, >99,0% ее.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-Б₆): δ 7,70 (Б, 2Н), 7,57 (Б, 2Н), 4,00 (Б, 1Н), 3,67 (Б, 1Н), 3,61 (Ъг. к., 4Н), 3,44-3,33 (т, 1Н), 3,17 (Ъг. к., 4Н), 3,12-2,98 (т, 3Н), 2,31 (Б, 1Н), 2,11 (Б1, 1Н), 1,98 (ц, 1Н), 1,12-1,00 (т, 2Н), 0,95-0,84 (т, 2Н).

- 40 021944

Пример 18. (1,1-Диоксидотиоморфолин-4-ил){3-[3-(2-этоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4(трифторметокси)фенил]пиперидин-1-ил}метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Согласно общему методу 2 подвергают превращению 317 мг (0,616 ммоль) соединения примера 28А. Разделение энантиомеров 294 мг рацемата по методу 2Ό дает 132 мг титульного соединения примера 18 и 129 мг титульного соединения примера 19.

ЖХ-МС (метод 6В): К=2,34 мин; МС (ИЭПпол): тА=547 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 3Е): К,=4,60 мин, >99,0% ее.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-к₆): δ 7,48 (ά, 2Н), 7,33 (ά, 2Н), 4,03 (ά, 1Н), 3,71 (ΐ, 2Н), 3,68-3,56 (т, 5 Н), 3,43 (д, 3Н), 3,17 (Ъг. 5., 4Н), 3,07 (ΐ, 1Н), 3,01 (ά, 2Н), 2,93 (ΐ, 2Н), 2,32 (ά, 1Н), 2,05-1,91 (т, 1Н), 1,07 (ΐ, 3Н).

Пример 19. (1,1-Диоксидотиоморфолин-4-ил){3-[3-(2-этоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4(трифторметокси)фенил]пиперидин-1-ил}метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Согласно общему методу 2 подвергают превращению 317 мг (0,616 ммоль) соединения примера 28А. Разделение энантиомеров 294 мг рацемата по методу 2Ό дает 132 мг титульного соединения примера 18 и 129 мг титульного соединения примера 19.

ЖХ-МС (метод 6В): К.=2,34 мин; МС (ИЭПпол): тА=547 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 3Е): К.=11,53 мин, >99,0% ее.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-άΑ δ 7,48 (ά, 2Н), 7,33 (ά, 2Н), 4,03 (ά, 1Н), 3,71 (ΐ, 2Н), 3,68-3,56 (т, 5Н),

3,43 (д, 3Н), 3,17 (Ъг. 5., 4Н), 3,07 (ΐ, 1Н), 3,01 (ά, 2Н), 2,93 (ΐ, 2Н), 2,32 (ά, 1Н), 2,05-1,91 (т, 1Н), 1,07 (ΐ, 3Н).

Пример 20. {3 -(3 -Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(трифторметил)фенил]пиперидин-1 ил}(1-оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 1 подвергают превращению 50,0 мг (0,107 ммоль) соединения примера 17А. Выход: 4,3 мг (8% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К=1,05 мин; МС (ИЭПпол): тА=483 [М+Н]+.

Пример 21. {3-[3-(2-Гидроксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4-(трифторметокси)фенил]пиперидин1-ил}(1-оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 1 подвергают превращению 100,0 мг (0,206 ммоль) соединения примера 29А. Выход: 105,2 мг (99% от теор.).

- 41 021944

ЖХ-МС (метод 5В): К₁==0,89 мин; МС (ИЭПпол): т//=503 [М+Н]+.

Пример 22. {3-[3-(2-Этоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4-(трифторметил)фенил]пиперидин-1ил}(1-оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 1 подвергают превращению 50,0 мг (0,100 ммоль) соединения примера 19А. Выход: 50,2 мг (92% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К₁=1,02 мин; МС (ИЭПпол): т//=515 [М+Н]+.

Пример 23. {3-[3-(2-Этоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4-(трифторметил)фенил]пиперидин-1ил}(1-оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Разделение энантиомеров 50,2 мг рацемата примера 22 по методу 1Ό дает 25,5 мг титульного соединения примера 23 и 22,4 мг титульного соединения примера 24.

ЖХ-МС (метод 2В): К₁=1,14 мин; МС (ИЭПпол): т//=515 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 2Е): К₁=7,51 мин, >99,0% ее.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,70 (б, 2Н), 7,58 (б, 2Н), 4,00 (б, 1Н), 3,71 (1, 2Н), 3,63 (б, 3Н), 3,573,48 (т, 2Н), 3,43 (ц, 3Н), 3,14-3,00 (т, 3Н), 2,93 (1, 4Н), 2,77-2,65 (т, 2Н), 2,35 (б, 1Н), 2,10-1,95 (т, 1Н), 1,06 (т, 3Н).

Пример 24. {3-[3-(2-Этоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4-(трифторметил)фенил]пиперидин-1ил}(1-оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Разделение энантиомеров 50,2 мг рацемата примера 22 по методу 1Ό дает 25,5 мг титульного соединения примера 23 и 22,4 мг титульного соединения примера 24.

ЖХ-МС (метод 2В): К₁=1,14 мин; МС (ИЭПпол): т//=515 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 2Е): К₁=13,93 мин, >99,0% ее.

^!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,70 (б, 2Н), 7,58 (б, 2Н), 4,00 (б, 1Н), 3,71 (1, 2Н), 3,63 (б, 3Н), 3,573,48 (т, 2Н), 3,43 (ц, 3Н), 3,14-3,00 (т, 3Н), 2,93 (1, 4Н), 2,77-2,65 (т, 2Н), 2,35 (б, 1Н), 2,10-1,95 (т, 1Н), 1,06 (т, 3Н).

Пример 25. {3-(4-Этилфенил)-5-[3-(2-метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]пиперидин-1-ил}(1оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 1 подвергают превращению 77,0 мг (0,173 ммоль) соединения примера 8А. Выход: 63,2 мг (79% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К₁=0,97 мин; МС (ИЭПпол): т//=461 [М+Н]+.

- 42 021944

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,23 (т, 2Н), 7,17 (т, 2Н), 3,99 (б, 1Н), 3,72-3,46 (т, 7Н), 3,46-3,34 (т, 2Н), 3,09-2,98 (т, 1Н), 2,97-2,83 (т, 6Н), 2,65 (Ьг. 5., 1Н), 2,76-2,64 (т, 2Н), 2,58 (б, 3Н), 2,30 (б, 1Н),

1,95 (с]. 1Н), 1,16 (ΐ, 3Н); один протон перекрыт.

Пример 26. {3-(4-Этилфенил)-5-[3-(2-метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]пиперидин-1-ил}(1оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Разделение энантиомеров 63,2 мг рацемата примера 25 по методу 6Ό дает 17,8 мг титульного соединения примера 26 и 18,7 мг титульного соединения примера 27.

ЖХ-МС (метод 5В): Ю=0,97 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 461 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 2Е): Ю=6,48 мин, >99,0% ее.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,23 (т, 2Н), 7,17 (т, 2Н), 3,99 (б, 1Н), 3,72-3,46 (т, 7Н), 3,46-3,34 (т, 2Н), 3,09-2,98 (т, 1Н), 2,97-2,83 (т, 6Н), 2,65 (Ьг. 5., 1Н), 2,76-2,64 (т, 2Н), 2,58 (б, 3Н), 2,30 (б, 1Н),

1,95 (Д. 1Н), 1,16 (ΐ, 3Н); один протон перекрыт.

Пример 27. {3-(4-Этилфенил)-5-[3-(2-метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]пиперидин-1-ил}(1оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Разделение энантиомеров 63,2 мг рацемата примера 25 по методу 6Ό дает 17,8 мг титульного соединения примера 26 и 18,7 мг титульного соединения примера 27.

ЖХ-МС (метод 5В): Ю=0,97 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 461 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 2Е): Ю=7,97 мин, >99,0% ее.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,23 (т, 2Н), 7,17 (т, 2Н), 3,99 (б, 1Н), 3,72-3,46 (т, 7Н), 3,46-3,34 (т, 2Н), 3,09-2,98 (т, 1Н), 2,97-2,83 (т, 6Н), 2,65 (Ьг. 5., 1Н), 2,76-2,64 (т, 2Н), 2,58 (б, 3Н), 2,30 (б, 1Н),

1,95 (ч, 1Н), 1,16 (ΐ, 3Н); один протон перекрыт.

Пример 28. (1,1-Диоксидотиоморфолин-4-ил){3-[3-(2-метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4(трифторметил)фенил]пиперидин-1-ил}метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Согласно общему методу 2 подвергают превращению 269 мг (0,556 ммоль) соединения примера 18А. Разделение энантиомеров рацемата по методу 5Ό дает 126 мг титульного соединения примера 28 и 122 мг титульного соединения примера 29.

ЖХ-МС (метод 6В): Κ_ί=2,18 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 517 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 2Е): К,=4,98 мин, >99,0% ее.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,70 (б, 2Н), 7,58 (б, 2Н), 4,03 (б, 1Н), 3,68 (ΐ, 3Н), 3,62 (Ьг. 5., 4Н), 3,49-3,38 (т, 1Н), 3,23 (5, 3Н), 3,18 (Ьг. 5., 4Н), 3,14-3,02 (т, 3Н), 2,94 (ΐ, 2Н), 2,35 (б, 1Н), 2,02 (б, 1Н).

- 43 021944

Пример 29. (1,1-Диоксидотиоморфолин-4-ил){3-[3-(2-метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4(трифторметил)фенил]пиперидин-1-ил}метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Согласно общему методу 2 подвергают превращению 269 мг (0,556 ммоль) соединения примера 18А. Разделение энантиомеров рацемата по методу 5Ώ дает 126 мг титульного соединения примера 28 и 122 мг титульного соединения примера 29.

ЖХ-МС (метод 6В): ^=2,18 мин; МС (ИЭПпол): т//=517 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 2Е): ^=15,96 мин, >99,0% ее.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,70 (б, 2Н), 7,58 (б, 2Н), 4,03 (б, 1Н), 3,68 (ΐ, 3Н), 3,62 (Ьг. 8., 4Н), 3,49-3,38 (т, 1Н), 3,23 (8, 3Н), 3,18 (Ьг. 8., 4Н), 3,14-3,02 (т, 3Н), 2,94 (ΐ, 2Н), 2,35 (б, 1Н), 2,02 (б, 1Н).

Пример 30. (1,1-Диоксидотиоморфолин-4-ил){3-[3-(2-этоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4(трифторметил)фенил]пиперидин-1-ил}метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Согласно общему методу 2 подвергают превращению 259 мг (0,519 ммоль) соединения примера 19А. Разделение энантиомеров 252 мг рацемата по методу 21) дает 104 мг титульного соединения примера 30 и 91,0 мг титульного соединения примера 31.

ЖХ-МС (метод 6В): Γΐ=2,29 мин; МС (ИЭПпол): т//=531 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 3Е): Γΐ=4,92 мин, >99,0% ее.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,71 (б, 2Н), 7,58 (б, 2Н), 4,03 (б, 1Н), 3,75-3,68 (т, 3Н), 3,62 (Ьг. 8., 4Н), 3,43 (ц, 3Н), 3,18 (Ьг. 8., 4Н), 3,14-3,01 (т, 3Н), 2,93 (ΐ, 2Н), 2,35 (б, 1Н), 2,12-1,95 (т, 1Н), 1,07 (ΐ, 3Н).

Пример 31. (1,1 -Диоксидотиоморфолин-4-ил) {3-[3-(2-этоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5- [4(трифторметил)фенил]пиперидин-1-ил}метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Согласно общему методу 2 подвергают превращению 259 мг (0,519 ммоль) соединения примера 19А. Разделение энантиомеров 252 мг рацемата по методу 21) дает 104 мг титульного соединения примера 30 и 91,0 мг титульного соединения примера 31.

ЖХ-МС (метод 6В): Γΐ=2,29 мин; МС (ИЭПпол): т//=531 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 3Е): Γΐ=13,63 мин, >99,0% ее.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,71 (б, 2Н), 7,58 (б, 2Н), 4,03 (б, 1Н), 3,75-3,68 (т, 3Н), 3,62 (Ьг. 8., 4Н), 3,43 (ц, 3Н), 3,18 (Ьг. 8., 4Н), 3,14-3,01 (т, 3Н), 2,93 (ΐ, 2Н), 2,35 (б, 1Н), 2,12-1,95 (т, 1Н), 1,07 (ΐ, 3Н).

Пример 32. (1,1-Диоксидотиоморфолин-4-ил){3-[3-(2-гидроксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4(трифторметил)фенил]пиперидин-1-ил}метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

- 44 021944

Согласно общему методу 2 подвергают превращению 100 мг (0,213 ммоль) соединения примера 20А. Разделение энантиомеров 97,4 мг рацемата по методу 2Ό дает 33,9 мг титульного соединения примера 32 и 35,0 мг титульного соединения примера 33.

ЖХ-МС (метод 5В): Κ_ΐ=0,91 мин; МС (ИЭПпол): т// 503 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 3Е): Κ_ΐ=4,75 мин, >99,0% ее.

^!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,71 (б, 2Н), 7,58 (б, 2Н), 4,77 (ΐ, 1Н), 4,03 (б, 1Н), 3,74 (ф 2Н), 3,68 (б, 1Н), 3,62 (Ьг. к., 4Н), 3,47-3,37 (т, 1Н), 3,18 (Ьг. к., 4Н), 3,13-3,00 (т, 3Н), 2,82 (ΐ, 2-Н), 2,35 (б, 1Н), 2,10-1,94 (т, 1Н).

Пример 33. (1,1-Диоксидотиоморфолин-4-ил){3-[3-(2-гидроксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4(трифторметил)фенил]пиперидин-1-ил}метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Согласно общему методу 2 подвергают превращению 100 мг (0,213 ммоль) соединения примера 20А. Разделение энантиомеров 97,4 мг рацемата по методу 2Ό дает 33,9 мг титульного соединения примера 32 и 35,0 мг титульного соединения примера 33.

ЖХ-МС (метод 5В): Κ_ΐ=0,91 мин; МС (ИЭПпол): т//=503 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 3Е): Κ_ΐ=8,97 мин, >99,0% ее.

^!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,71 (б, 2Н), 7,58 (б, 2Н), 4,77 (ΐ, 1Н), 4,03 (б, 1Н), 3,74 (ф 2Н), 3,68 (б, 1Н), 3,62 (Ьг. к., 4Н), 3,47-3,37 (т, 1Н), 3,18 (Ьг. к., 4Н), 3,13-3,00 (т, 3Н), 2,82 (ΐ, 2-Н), 2,35 (б, 1Н), 2,10-1,94 (т, 1Н).

Пример 34. (1,1-Диоксидотиоморфолин-4-ил){3-[3-(2-этоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-(4этилфенил)пиперидин-1-ил}метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Согласно общему методу 2 подвергают превращению 303 мг (0,661 ммоль) соединения примера 11А. Разделение энантиомеров 297 мг рацемата по методу 2Ό дает 139 мг титульного соединения примера 34 и 117 мг титульного соединения примера 35.

ЖХ-МС (метод 2В): К=1,24 мин; МС (ИЭПпол): т//=491 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 3Е): Κ_ΐ=4,81 мин, >99,0% ее.

^!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,24 (т, 2Н), 7,17 (т, 2Н), 4,03 (б, 1Н), 3,71 (ΐ, 2Н), 3,67-3,57 (т, 5Н), 3,49-3,35 (т, 3Н), 3,17 (Ьг. к., 4Н), 3,06 (ΐ, 1Н), 2,98-2,86 (т, 3Н), 2,62-2,55 (т, 3Н), 2,30 (б, 2Н), 1,95 (ф 1Н), 1,16 (ΐ, 3Н), 1,07 (ΐ, 3Н).

Пример 35. (1,1-Диоксидотиоморфолин-4-ил){3-[3-(2-этоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-(4этилфенил)пиперидин-1-ил}метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Согласно общему методу 2 подвергают превращению 303 мг (0,661 ммоль) соединения примера 11А. Разделение энантиомеров 297 мг рацемата по методу 2Ό дает 139 мг титульного соединения примера 34 и 117 мг титульного соединения примера 35.

ЖХ-МС (метод 2В): К=1,24 мин; МС (ИЭПпол): ш//=491 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 3Е): Κ_ΐ=6,80 мин, >99,0% ее.

^!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,24 (т, 2Н), 7,17 (т, 2Н), 4,03 (б, 1Н), 3,71 (ΐ, 2Н), 3,67-3,57 (т,

- 45 021944

5Н), 3,49-3,35 (т, 3Н), 3,17 (Ъг. 5., 4Н), 3,06 (ί, 1Н), 2,98-2,86 (т, 3Н), 2,62-2,55 (т, 3Н), 2,30 (ά, 2Н), 1,95 (я, 1Н), 1,16 (ί, 3Н), 1,07 (ί, 3Н).

Пример 36. {3-[3-(2-Метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4-(трифторметил)фенил]пиперидин-1ил}(1-оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

Согласно общему методу 1 подвергают превращению 196 мг (0,405 ммоль) соединения примера 18А. Выход: 194 мг (96% от теор.).

ЖХ-МС (метод 2В): К=1,08 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 501 [М+Н]+.

^!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆): δ 7,70 (ά, 2Н), 7,58 (ά, 2Н), 4,00 (ά, 1Н), 3,73-3,58 (т, 5Н), 3,57-3,48 (т, 2Н), 3,48-3,39 (т, 1Н), 3,13-2,99 (т, 3Н), 2,97-2,84 (т, 4Н), 2,77-2,65 (т, 2Н), 2,35 (ά, 1Н), 2,03 (ц, 1Н).

Пример 37. {3-[3-(2-Метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4-(трифторметил)фенил]пиперидин-1ил}(1-оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Разделение энантиомеров 194 мг рацемата примера 36 по методу 1Ό дает 81,1 мг титульного соединения примера 37 и 78,5 мг титульного соединения примера 38.

ЖХ-МС (метод 2В): К=1,08 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 501 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 1Е): К,=8.45 мин, >99,0% ее.

^!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-άΑ δ 7,70 (ά, 2Н), 7,58 (ά, 2Н), 4,00 (ά, 1Н), 3,73-3,58 (т, 5Н), 3,57-3,48 (т, 2Н), 3,48-3,39 (т, 1Н), 3,13-2,99 (т, 3Н), 2,97-2,84 (т, 4Н), 2,77-2,65 (т, 2Н), 2,35 (ά, 1Н), 2,03 (ц, 1Н).

Пример 38. {3-[3-(2-Метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4-(трифторметил)фенил]пиперидин-1ил}(1-оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Разделение энантиомеров 194 мг рацемата примера 36 по методу 1Ό дает 81,1 мг титульного соединения примера 37 и 78,5 мг титульного соединения примера 38.

ЖХ-МС (метод 2В): К=1,08 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 501 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 1Е): К,=18,94 мин, >99,0% ее.

'Н-НМР (400 МГц, ДМСО-άΑ δ 7,70 (ά, 2Н), 7,58 (ά, 2Н), 4,00 (ά, 1Н), 3,73-3,58 (т, 5Н), 3,57-3,48 (т, 2Н), 3,48-3,39 (т, 1Н), 3,13-2,99 (т, 3Н), 2,97-2,84 (т, 4Н), 2,77-2,65 (т, 2Н), 2,35 (ά, 1Н), 2,03 (ц, 1Н).

Пример 39. {3-[4-(2,2-Дифторэтил)фенил]-5-[3-(2-метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]пиперидин-1ил}(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

14,7 мг (0,031 ммоль) соединения пример 63А согласно общему методу 2 подвергают взаимодейст- 46 021944 вию с 26,3 мг (0,076 ммоль) метахлорпербензойной кислоты. Выход: 9,5 мг (60% от теор.).

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-й₆): δ 7,33 (й, 2Η), 7,26 (т, 2Η), 6,23 (ίί, 1Н), 4,03 (й, 1Н), 3,71-3,56 (т,

7Н), 3,46-3,36 (т, 1Н), 3,23 (к, 3Η), 3,21-3,13 (т, 5Н), 3,12-2,87 (т, 6Н), 2,31 (й, 1Н), 1,97 (ц, 1Η).

Пример 40. {3-(3-Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(2,2,2-трифторэтил)фенил]пиперидин-1ил}(1-оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

78,0 мг (0,162 ммоль) соединения примера 46А согласно общему методу 1 подвергают взаимодействию с 50,4 мг (0,146 ммоль) метахлорпербензойной кислоты. Выход: 76,2 мг (88% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К=1,02 мин; МС (ИЭПпол): тА=497 [Μ+Η]+.

Пример 41. {3-(3-Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(2,2,2-трифторэтил)фенил]пиперидин-1ил}(1-оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Разделение энантиомеров 76,2 мг рацемата примера 40 по методу 7Ό дает 29,1 мг титульного соединения примера 41 (энантиомер 1) и 28,9 мг титульного соединения примера 42 (энантиомер 2).

ЖХ-МС (метод 7В): Κ_ί=2,18 мин; МС (ИЭПпол): тА=497 [Μ+Η]+.

ЖХВР (метод 6Е): К₄=13,2 мин, >99,0% ее.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-й₆): δ 7,37-7,29 (т, 4Н), 3,96 (й, 1Η), 3,68-3,47 (т, 7Η), 3,41-3,33 (т, 1Η), 3,07-2,85 (т, 5Η), 2,74-2,66 (т, 2Η), 2,28 (й, 1Η), 2,16-2,08 (т, 1Η), 1,93 (ц, 1Η), 1,08-1,02 (т, 2Η), 0,920,85 (т, 2Η).

Пример 42. {3-(3-Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(2,2,2-трифторэтил)фенил]пиперидин-1ил}(1-оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Разделение энантиомеров 76,2 мг рацемата примера 40 по методу 7Ό дает 29,1 мг титульного соединения примера 41 (энантиомер 1) и 28,9 мг титульного соединения примера 42 (энантиомер 2).

ЖХ-МС (метод 7В): К=2,18 мин; МС (ИЭПпол): тА=497 [Μ+Η]+.

ЖХВР (метод 6Е): Кщ16,4 мин, >99,0% ее.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-й₆): δ 7,37-7,29 (т, 4Η), 3,96 (й, 1Η), 3,68-3.47 (т, 7Н), 3,41-3,33 (т, 1Н), 3,07-2,85 (т, 5Н), 2,74-2,66 (т, 2Н), 2,28 (й, 1Н), 2,16-2,08 (т, 1Н), 1,93 (ц, 1Η), 1,08-1,02 (т, 2Н), 0,920,85 (т, 2Н).

Пример 43. {3-(3-Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(2,2,2-трифторэтил)фенил]пиперидин-1ил}(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

- 47 021944

78,0 мг (0,162 ммоль) соединения примера 46А согласно общему методу 2 подвергают взаимодействию с 140 мг (0,146 ммоль) метахлорпербензойной кислоты. Выход: 87,5 мг (100% от теор.).

ЖХ-МС (метод 2В): Κ_ΐ=1,25 мин; МС (ИЭПпол): μ/ζ=513 [М+Н]+.

Пример 44. {3-(3-Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(2,2,2-трифторэтил)фенил]пиперидин-1ил}(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Разделение энантиомеров 87,5 мг рацемата примера 43 по методу 8Ό дает 29,1 мг титульного соединения примера 44 (энантиомер 1) и 30,7 мг титульного соединения примера 45 (энантиомер 2).

ЖХ-МС (метод 7В): К=2,34 мин; МС (ИЭПпол): т^=513 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 7Е): К,=9,86 мин, 99,0% ее.

^!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-Д₆): δ 7,37-7,29 (т, 4Н), 4,00 (Д, 1Н), 3,67-3,56 (т, 7Н), 3,17 (Ьг. 5., 4Н), 3,07-2,87 (т, 3Н), 2,28 (Д, 1Н), 2,16-2,08 (т, 1Н), 1,93 (д, 1Н), 1,09-1,02 (т, 2Н), 0,92-0,85 (т, 3Н), один протон перекрыт.

Пример 45. {3-(3-Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(2,2,2-трифторэтил)фенил]пиперидин-1ил}(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Разделение энантиомеров 87,5 мг рацемата примера 43 по методу 8Ό дает 29,1 мг титульного соединения примера 44 (энантиомер 1) и 30,7 мг титульного соединения примера 45 (энантиомер 2).

ЖХ-МС (метод 7В): Κ_ΐ=2,34 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 513 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 7Е): Κ_ΐ=10,9 мин, 97,5% ее.

^!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-Д₆): δ 7,37-7,29 (т, 4Н), 4,00 (Д, 1Н), 3,67-3,56 (т, 7Н), 3,17 (Ьг. 5., 4Н), 3,07-2,87 (т, 3Н), 2,28 (Д, 1Н), 2,16-2,08 (т, 1Н), 1,93 (д, 1Н), 1,09-1,02 (т, 2Н), 0,92-0,85 (т, 3Н), один протон перекрыт.

Пример 46. {3-[3 -(2-Метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил] -5-[4-(2,2,2-трифторэтил)фенил]пиперидин-1-ил}(1-оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

113 мг (0,227 ммоль) соединения примера 47А согласно общему методу 1 подвергают взаимодействию с 70,4 мг (0,204 ммоль) метахлорпербензойной кислотой. Разделение энантиомеров 108 мг рацемата по методу 9Ό дает 37,1 мг титульного соединения примера 46 (энантиомер 1) и 41,8 мг титульного соединения примера 47 (энантиомер 2).

ЖХ-МС (метод 5В): Κ_ΐ=0,96 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 515 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 8Е): Κ_ΐ=5,48 мин, >99,0% ее.

^!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-Д₆): δ 7,38-7,29 (т, 4Н), 4,00 (Д, 1Н), 3,72-3,48 (т, 9Н), 3,46-3,37 (т, 1Н),

3,23 (5, 3Н), 3,10-2,85 (т, 7Н), 2,76-2,65 (т, 3Н), 2,32 (Д, 1Н), 1,98 (д, 1Н).

- 48 021944

Пример 47. {3-[3 -(2-Метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил] -5-[4-(2,2,2-трифторэтил)фенил]пиперидин-1-ил}(1-оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

113 мг (0,227 ммоль) соединения примера 47А согласно общему методу 1 подвергают взаимодействию с 70,4 мг (0,204 ммоль) метахлорпербензойной кислотой. Разделение энантиомеров 108 мг рацемата по методу 9Ό дает 37,1 мг титульного соединения примера 46 (энантиомер 1) и 41,8 мг титульного соединения примера 47 (энантиомер 2).

ЖХ-МС (метод 5В): 1+0,96 мин; МС (ИЭПпол): тУ=515 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 8Е): К.=7,15 мин, >99,0% ее.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,38-7,29 (т, 4Н), 4,00 (б, 1Н), 3,72-3,48 (т, 9Н), 3,46-3,37 (т, 1Н),

3,23 (5, 3Н), 3,10-2,85 (т, 7Н), 2,76-2,65 (т, 3Н), 2,32 (б, 1Н), 1,98 Щ, 1Н).

Пример 48. (1,1-Диоксидотиоморфолин-4-ил){3-[3-(2-метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4(2,2,2-трифторэтил)фенил]пиперидин-1-ил}метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

113 мг (0,227 ммоль) соединения примера 47А согласно общему методу 2 подвергают взаимодействию с 196 мг (0,567 ммоль) метахлорпербензойной кислоты. Разделение энантиомеров 121 мг рацемата по методу 9Ό дает 34,4 мг титульного соединения примера 48 (энантиомер 1) и 29,2 мг титульного соединения примера 49 (энантиомер 2).

ЖХ-МС (метод 7В): К_!=2,17 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 53 1 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 8Е): К_.=4,34 мин, >99,0% ее.

'ίί-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,39-7,29 (т, 4Н), 4,03 (б, 1Н), 3,72-3,56 (т, 10Н), 3,46-3,36 (т, 1Н),

3,23 (5, 3Н), 3,18 (Ьг. 5., 4Н), 3,11-2,90 (т, 5Н), 2,33-2,27 (т, 1Н), 1,97 Щ, 1Н).

Пример 49. (1,1-Диоксидотиоморфолин-4-ил){3-[3-(2-метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]-5-[4(2,2,2-трифторэтил)фенил]пиперидин-1-ил}метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

113 мг (0,227 ммоль) соединения примера 47А согласно общему методу 2 подвергают взаимодействию с 196 мг (0,567 ммоль) метахлорпербензойной кислоты. Разделение энантиомеров 121 мг рацемата по методу 9Ό дает 34,4 мг титульного соединения примера 48 (энантиомер 1) и 29,2 мг титульного соединения примера 49 (энантиомер 2).

ЖХ-МС (метод 7В): К.=2,18 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 53 1 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 8Е): К_.=7,86 мин, >99,0% ее.

^!Н-НМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,39-7,29 (т, 4Н), 4,03 (б, 1Н), 3,72-3,56 (т, 10Н), 3,46-3,36 (т, 1Н),

3,23 (5, 3Н), 3,18 (Ьг. 5., 4Н), 3,11-2,90 (т, 5Н), 2,33-2,27 (т, 1Н), 1,97 (д, 1Н).

- 49 021944

Пример 50. {3-(3-Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(1,1-дифторэтил)фенил]пиперидин-1ил}(1-оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

34,1 мг (0,074 ммоль) соединения примера 54А согласно общему методу 1 подвергают взаимодействию с 22,9 мг (0,066 ммоль) метахлорпербензойной кислоты. Выход: 39,7 мг (100% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): Κ_ΐ=0,99 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 479 [М+Н]+.

Пример 51. {3-(3 -Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5 -ил)-5-[4-( 1,1 -дифторэтил)фенил]пиперидин-1 ил}(1-оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Разделение энантиомеров 35,5 мг рацемата примера 50 по методу 9Ό дает 12,0 мг титульного соединения примера 51 (энантиомер 1) и 14,0 мг титульного соединения примера 52 (энантиомер 2).

ЖХ-МС (метод 5В): Κ_ΐ=1,00 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 479 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 9Е): Κ_ΐ=5,27 мин, >99,0% ее.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОД₆): δ 7,53 (ά, 2Н), 7,45 (ά, 2Н), 3,96 (ά, 1Н), 3,71-3,46 (т, 5Н), 3,42-3,35 (т, 1Н), 3,09-2,84 (т, 5Н), 2,71 (ά, 2Н), 2,29 (ά, 1Н), 2,16-2,08 (т, 1Н), 2,02-1,90 (т, 4Н), 1,10-1,02 (т, 2Н), 0,93-0,85 (т, 2Н).

Пример 52. {3-(3-Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(1,1-дифторэтил)фенил]пиперидин-1ил}(1-оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Разделение энантиомеров 35,5 мг рацемата примера 50 по методу 9Ό дает 12,0 мг титульного соединения примера 51 (энантиомер 1) и 14,0 мг титульного соединения примера 52 (энантиомер 2).

ЖХ-МС (метод 5В): Κ_ΐ=1,00 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 479 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 9Е): Κ_ΐ=6,78 мин, >99,0% ее.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОД₆): δ 7,53 (ά, 2Н), 7,45 (ά, 2Н), 3,96 (ά, 1Н), 3,71-3,46 (т, 5Н), 3,42-3,35 (т, 1Н), 3,09-2,84 (т, 5Н), 2,71 (ά, 2Н), 2,29 (ά, 1Н), 2,16-2,08 (т, 1Н), 2,02-1,90 (т, 4Н), 1,10-1,02 (т, 2Н), 0,93-0,85 (т, 2Н).

Пример 53. {3-(3-Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(1,1-дифторэтил)фенил]пиперидин-1ил}(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

34,1 мг (0,074 ммоль) соединения примера 54А согласно общему методу 2 подвергают взаимодействию с 63,6 мг (0,184 ммоль) метахлорпербензойной кислоты. Выход: 37,1 мг (99% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): Κ_ΐ=1,06 мин; МС (ИЭПпол): т/ζ 495 [М+Н]+.

- 50 021944

Ή-НМР (400 МГц, ДМСО-ά,·,): δ 7,52 (ά, 2Н), 7,44 (ά, 2Н), 4,00 (ά, 1Н), 3,69-3,56 (т, 5Н), 3,41-3,34 (т, 1Н), 3,17 (Ъг. 5., 4Н), 3,10-2,95 (т, 3Н), 2,28 (ά, 1Н), 2,17-2,07 (т, 1Н), 2,03-1,89 (т, 4Н), 1,10-1,01 (т, 2Н), 0,94-0,85 (т, 2Н).

Пример 54. {3-(3-Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(1,1-дифторэтил)фенил]пиперидин-1ил}(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Разделение энантиомеров 37,1 мг рацемата примера 53 по методу 9Ό дает 13,0 мг титульного соединения примера 54 (энантиомер 1) и 14,0 мг титульного соединения примера 55 (энантиомер 2).

ЖХВР (метод 9Е): К.=5,81 мин, >99,0% ее.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-ά^: δ 7,52 (ά, 2Н), 7,44 (ά, 2Н), 4,00 (ά, 1Н), 3,69-3,56 (т, 5 Н), 3,41-3,34 (т, 1Н), 3,17 (Ъг. 5., 4Н), 3,10-2,95 (т, 3Н), 2,28 (ά, 1Н), 2,17-2,07 (т, 1Н), 2,03-1,89 (т, 4Н), 1,10-1,01 (т, 2Н), 0,94-0,85 (т, 2Н).

Пример 55. {3-(3-Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(1,1-дифторэтил)фенил]пиперидин-1ил}(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Разделение энантиомеров 37,1 мг рацемата примера 53 по методу 9Ό дает 13,0 мг титульного соединения примера 54 (энантиомер 1) и 14,0 мг титульного соединения примера 55 (энантиомер 2).

ЖХВР (метод 9Е): К,=9,63 мин, >99,0% ее.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-άΑ δ 7,52 (ά, 2Н), 7,44 (ά, 2Н), 4,00 (ά, 1Н), 3,69-3,56 (т, 5Н), 3,41-3,34 (т, 1Н), 3,17 (Ъг. 5., 4Н), 3,10-2,95 (т, 3Н), 2,28 (ά, 1Н), 2,17-2,07 (т, 1Н), 2,03-1,89 (т, 4Н), 1,10-1,01 (т, 2Н), 0,94-0,85 (т, 2Н).

Пример 56. {3-(3 -Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(дифторметокси)фенил]пиперидин-1 ил}(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

100 мг (0,23 ммоль) соединения примера 37А и 46 мг (0,46 ммоль) Ν-гидроксициклопропанкарбоксимидамида помещают в 0,8 мл ДМФ и подвергают взаимодействию с 132 мг (0,35 ммоль) О-(7-азабензотриазол-1-ил)-Х^№,№-тетраметилуроний-гексафтор-фосфатом (НАТИ), а также 0,12 мл (90 мг, 0,69 ммоль) Ν,Ν-диизопропилэтиламина. Перемешивают в течение 15 мин при комнатной температуре и в заключение реакционную смесь разделяют между водой и этиловым эфиром уксусной кислоты. Органическую фазу многократно промывают водой, сушат над сульфатом магния и отгоняют растворитель в вакууме. Остаток помещают в 3,0 мл ДМФ и подвергают превращению в течение 2 мин при температуре 180°С в микроволновой печи. Реакционную смесь чистят препаративной ЖХВР. Выход: 46 мг (37% от теор.).

ЖХ-МС (метод 2В): К=1,20 мин; МС (ИЭПпол): тА=497 [М+Н]+.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-άΑ δ 7,43-7,30 (т, 2Н), 7,14 (ά, 2Н), 4,09 (д, 1Н), 3,99 (Ъг. ά, 1Н), 3,63 (Ъг. ά., 1Н), 3,40-3,33 (т, 1Н), 3,33-3,28 (т, 4Н), 3,22-3,10 (т, 4Н), 3,08-2,88 (т, 3Н), 2,28 (Ъг. ά, 1Н), 2,16-2,07 (т, 1Н), 2,00-1,87 (т, 1Н), 1,12-0,99 (т, 2Н), 0,94-0,84 (т, 2Н).

- 51 021944

Пример 57. {3-[4-(Дифторметокси)фенил]-5-[3-(2-метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]пиперидин-1ил}(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

300 мг (0,69 ммоль) соединения примера 37А и 246 мг (2,08 ммоль) №-гидрокси-3метоксипропанимидамида помещают в 2,6 мл ДМФ и подвергают взаимодействию с 396 мг (1,0 ммоль) НАТИ, а также 0,36 мл (269 мг, 2,1 ммоль) Ν,Ν-диизопропилэтиламина. Перемешивают в течение 15 мин при комнатной температуре и затем распеределяют реакционную смесь между водой и этиловым эфиром уксусной кислоты. Органическую фазу многократно промывают водой, сушат над сульфатом магния и отгоняют растворитель в вакууме. Остаток растворяют в 2,0 мл ДМФ и подвергают превращению в течение 2 мин при температуре 180°С в микроволновой печи. Реакционную смесь чистят препаративной ЖХВР. Выход: 141 мг (38% от теор.).

ЖХ-МС (метод 2В): К.=1,10 мин; МС (ИЭПпол): μ/ζ=515 [М+Н]+.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,43-7,33 (т, 2Н), 7,15 (б, 2Н), 4,11-3,99 (т, 2Н), 3,71-3,64 (т, 3Н), 3,64-3,55 (т, 4Н), 3,46-3,35 (т, 1Н), 3,35-3,30 (т, 4Н), 3,18 (Ьг. 5, 3Н), 3,14-2,90 (т, 5Н), 2,30 (Ьг. б, 1Н), 2,03-1,92 (т, 1Н).

Пример 58. {3-[4-(Дифторметокси)фенил]-5-[3-(2-метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]пиперидин-1ил}(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Разделение энантиомеров 117 мг рацемата примера 57 по методу 10Ό дает 43 мг соединения примера 58 (энантиомер 1) и 38 мг соединения примера 59 (энантиомер 2).

ЖХВР (метод 10Е): Κ_ί=4,17 мин, >99,0% ее.

ЖХ-МС (метод 2В): Κ_ί=1,10 мин; МС (ИЭПпол): μ/ζ=515 [М+Н]+.

Пример 59. {3-[4-(Дифторметокси)фенил]-5-[3-(2-метоксиэтил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]пиперидин-1ил}(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Разделение энантиомеров 117 мг рацемата примера 57 по методу 10Ό дает 43 мг соединения примера 58 (энантиомер 1) и 38 мг соединения примера 59 (энантиомер 2).

ЖХВР (метод 10Е): К. 9,24 мин, >99,0% ее.

ЖХ-МС (метод 2В): Κ_ί=1,10 мин; МС (ИЭПпол): μ/ζ=515 [М+Н]+.

- 52 021944

Пример 60. {3 -(3 -Циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5-[4-(дифторметокси)фенил]пиперидин-1 ил}(1-оксидотиоморфолин-4-ил)метанон [рацемический цис-изомер]

200 мг (0,48 ммоль) соединения примера 39А и 96 мг (0,96 ммоль) Ν'-гидроксициклопропанкарбоксимидамида помещают в 1,8 мл ДМФ и подвергают взаимодействию с 274 мг (0,72 ммоль) НАТи, а также с 0,25 мл (186 мг, 1,44 ммоль) Ν,Ν-диизопропилэтиламина. Перемешивают в течение 15 мин при комнатной температуре и затем распеределяют реакционную смесь между водой и этиловым эфиром уксусной кислоты. Органическую фазу многократно промывают водой, сушат над сульфатом магния и отгоняют растворитель в вакууме. Остаток растворяют в 2,0 мл ДМФ и в течение 2 мин подвергают превращению в микроволновой печи при температуре 180°С. Реакционную смесь чистят препаративной ЖХВР. Выход: 25 мг (10% от теор.).

ЖХ-МС (метод 2В): К₁=1,12 мин; МС (ИЭПпол): т//=481 [М+Н]+.

^!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,42-7,35 (т, 2Н), 7,14 (б, 2Н), 4,01-3,87 (т, 1Н), 3,69-3,45 (т, 5Н), 3,42-3,34 (т, 1Н), 3,07-2,85 (т, 5Н), 2,70 (Ьг. б, 2Н), 2,34-2,23 (т, 1Н), 2,15-2,07 (т, 1Н), 1,99-1,88 (т, 1Н), 1,12-1,01 (т, 2Н), 0,94-0,85 (т, 2Н).

Пример 61. (1,1 -Диоксидотиоморфолин-4-ил){3-[3 -(1 -метоксициклопропил)-1,2,4-оксадиазол-5 -ил] 5-[4-(2,2,2-трифторэтил)фенил]пиперидин-1-ил}метанон [рацемический цис-изомер]

29,0 мг (0,162 ммоль) соединения примера 65А согласно общему методу 2 подвергают взаимодействию с 49,0 мг (0,142 ммоль) метахлорпербензойной кислоты. Выход: 31,2 мг (95% от теор.).

ЖХ-МС (метод 5В): К₁=1,06 мин; МС (ИЭПпол): т//=543 [М+Н]+.

^!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,37-7,29 (т, 4Н), 4,02 (б, 1Н), 3,68-3,55 (ц, 7Н), 3,38 (5, 3Н), 3,17 (Ьг. 5., 4Н), 3,10-2,88 (т, 3Н), 2,30 (б, 1Н), 1,95 (ц, 1Н), 1,34-1,28 (т, 2Н), 1,20-1,12 (т, 2Н).

Пример 62. (1,1-Диоксидотиоморфолин-4-ил){3-[3-(1-метоксициклопропил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил]5-[4-(2,2,2-трифторэтил)фенил]пиперидин-1-ил}метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Разделение энантиомеров 31,2 мг рацемата примера 61 по методу 11Ό дает 12,0 мг титульного соединения примера 62 (энантиомер 1) и 12,0 мг титульного соединения примера 63 (энантиомер 2).

ЖХ-МС (метод 2В): К₁=1,26 мин; МС (ИЭПпол): т//=543 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 11Е): К₁=17,9 мин, >99,0% ее.

^!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7,37-7,29 (т, 4Н), 4,02 (б, 1Н), 3,68-3,55 (ц, 7Н), 3,38 (5, 3Н), 3,17 (Ьг. 5., 4Н), 3,10-2,88 (т, 3Н), 2,30 (б, 1Н), 1,95 (д, 1Н), 1,34-1,28 (т, 2Н), 1,20-1,12 (т, 2Н).

- 53 021944

Пример 63. (1,1 -Диоксидотиоморфолин-4-ил){3-[3 -(1 -метоксициклопропил)-1,2,4-оксадиазол-5-ил] 5-[4-(2,2,2-трифторэтил)фенил]пиперидин-1-ил}метанон [энантиомерно чистый цис-изомер]

Разделение энантиомеров 31,2 мг рацемата примера 61 по методу 11Ό дает 12,0 мг титульного соединения примера 62 (энантиомер 1) и 12,0 мг титульного соединения примера 63 (энантиомер 2).

ЖХ-МС (метод 2В): К.= 1,26 мин; МС (ИЭПпол): т//=543 [М+Н]+.

ЖХВР (метод 11Е): К.=29,2 мин, >99,0% ее.

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-Б₆): δ 7,37-7,29 (т, 4Н), 4,02 (Б, 1Н), 3,68-3,55 (ц, 7Н), 3,38 (к, 3Н), 3,17 (Ъг. к., 4Н), 3,10-2,88 (т, 3Н), 2,30 (Б, 1Н), 1,95 (ц, 1Н), 1,34-1,28 (т, 2Н), 1,20-1,12 (т, 2Н).

В) Определение физиологической эффективности.

Сокращения:

САКРС - сывороточный альбумин крупного рогатого скота,

ЭМЕМ - модифицированная по методу Дюльбекко среда Игла,

ЭГТУК - этиленгликоль-гликоль-бис-(2-аминоэтил)-Х^№,№-тетра-уксусная кислота,

ФТС - фетальная телячья сыворотка,

ГЭПЭС - 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазин-этансульфоновая кислота, [3Н]ЬаТКАР - замещенный тритием пептид, активирующий тромбиновый рецептор с высоким сродством,

ВПП - богатая пластинками плазма.

Пригодность соединений согласно данному изобретению для лечения тромбоэмболических заболеваний можно показать в дальнейшем с помощью системы опытов:

1. Опыты ίη νΐίΓΟ.

1.а) Клеточный функциональный ίη νΐίΓΟ-тест.

Идентифицирование антагонистов активированного рецептора 1 (РАК-1) протеазы человека, а также количественное определение эффективности описанных здесь веществ происходит с помощью рекомбинантной линии клеток. Клетка происходит обычно из эмбриональной почечной клетки человека (НЕК293; АТСС: Атепсап Туре СиЬиге Со11сс11оп, Мапаккак, УА 20108, И8А). Тестируемая линия клеток экспримирует определяюще модифицированную форму кальций-чувствительного фотопротеина аекворина, который после восстановления с помощью Со-фактора коэлентеразина при повышении свободной кальций-концентрации во внутреннем митохондриальном отделении эмитирует свет (Кк/и.о К., §1тркоп Α.ν., Βππί М., Ро//ап Т.; №-11иге 1992, 358, 325-327). Дополнительно клетка стабильно экспримирует эндогенный человеческий РАК-1-рецептор, а также эндогенный пуринерговый рецептор Ρ2Υ2. Получаемая в результате РАК-1-тестовая клетка реагирует на стимуляцию эндогенного РАК-1 или Р2Υ2-рецептора внутриклеточным высвобождением кальциевых ионов, которое можно количественно измерить подходящим люминометром исходя из результирующей люминесценции аекворина (МПНдап О., МагкЬа11 Р., Кеек δ., ТгепБк ш РЬагтасо1од1са1 8аепсек 1996, 17, 235-237).

Для испытания специфичности вещества сравнивают его действие после активирования эндогенного РАК-1-рецептора с действием после активирования эндогенного пуринергового Р2Υ2-рецептора, который использует тот же внутриклеточный путь сигнала.

Прохождение теста.

Клетки за два дня до теста (48 ч) в культурной среде (ИМЕМ Р12, дополненный 10% ФТС, 2 мМ глутамина, 20 мМ ГЭПЭС, 1,4 мМ пирувата, 0,1 мг/мл гентамицина, 0,15% ^-бикарбоната; Вю\У1Ш1акег Са..# ВЕ04-687О; В-4800 УегИегк, Бельгия) помещают в микротитровальные пластинки с 384углублениями и выдерживают в инкубаторе для клеток (относительная влажность воздуха 96%, 5% о/о СО₂, температура 37°С). В день тестирования заменяют культурную среду на раствор Тирода (ТугоБе) (в мМ: 140 хлористого натрия, 5 хлористого калия, 1 хлористого магния, 2 хлористого кальция, 20 глюкозы, 20 ГЭПЭС), который дополнительно содержит Со-фактор коэлентеразин (25 мкМ) и глутатион (4 мМ), и затем инкубируют микротитровальную пластинку еще в течение 3-4 ч. После этого тестируемые вещества пипеттируют на микротитровальную пластинку и через 5 мин после переноса тестируемых веществ в углубления микротитровальной пластинки пластинку помещают в люминометр, добавляют концентрацию РАК-1-агониста, с ЕС₅₀ соответствующей Κ.'₅₀ (концентрация ингибитора, при которой наблюдается 50% ингибирования), и сразу после этого измеряют результирующий световой сигнал в люминометре. Для того чтобы отличить действие антагонист-вещество от токсического действия, непосредственно по- 54 021944 сле этого активируют эндогенный пуринерговый рецептор с помощью агониста (АТР, 10 мкМ конечная концентрация) и измеряют результирующий световой сигнал. Результаты приведены в табл. А.

Таблица А

1.Ъ) Опыт по связыванию РАК-1 рецептора.

Тромбоцитные мембраны инкубируют с 12 нМ [3Н]ЬаТКАР и тестовым веществом в различных концентрациях в буфере (50 мМ трис-буфера (=буферный раствор на основе три(гидроксиметил)аминометана) с рН 7,5, 10 мМ хлористого магния, 1 мМ ЭГТУК, 0,1% САКРС) при комнатной температуре в течение 80 мин. После этого смесь переносят на фильтровальную пластинку и промывают два раза буфером. После добавления сцинтилляционной жидкости измеряют радиоактивность на фильтре с помощью бета-счетчика.

1.с) Агрегация тромбоцитов в плазме.

Для определения агрегации тромбоцитов в плазме берут кровь здоровых испытуемых обоих полов, которые в течение последних десяти дней не принимали лекарств, влияющих на агрегацию тромбоцитов. Кровь набирают в моноветты (=одноразовые кюветы для забора крови, фирмы 8аг51ей1, —ипЬгесШ, Германия), которые содержат в качестве антикоагулянтов цитрат натрия 3,8% (1 ч. цитрата + 9 ч. крови). Для получения богатой пластинками плазмы цитрат-цельную кровь центрифугируют в течение 20 мин при ускорении 140 д.

Для измерения агрегации инкубируют аликвоты богатой пластинками плазмы с возрастающей концентрацией испытываемого вещества в течение 10 мин при температуре 37°С. В заключение вызывают агрегацию добавлением агониста тромбин-рецептора (ТКАР6, §РЬЬК№) в агрегометре и измеряют с помощью турбидиметрического метода согласно Борну (Вогп, СУ.К, Сго55 М.1, ТЬе АддгедаЪоп оГ В1оой Р1а1е1е15; I. РЬу5ю1. 1963, 168, 178-195) при температуре 37°С. Концентрацию §РЬЬК^ которая приводит к максимальной агрегации, при необходимости определяют для каждого донора индивидуально.

Для расчета ингибиторного действия определяют максимальное возрастание пропускания света (амплитуда кривой агрегации в процентах (%)) в пределах 5 мин после добавления агонистов в присутствии и отсутствие испытываемого вещества и рассчитывают ингибирование. Из кривых ингибирования рассчитывают концентрацию, которая приводит к ингибированию в 50%. Результаты показаны в табл. В.

Таблица В

1.й) Агрегация тромбоцитов в буфере.

Для определения агрегации тромбоцитов берут кровь здоровых испытуемых обоих полов, которые в течение последних десяти дней не принимали лекарств, влияющих на агрегацию тромбоцитов. Кровь набирают в моноветты (§аг51ей1, ЖипЬгесШ, Германия), которые содержат в качестве антикоагулянтов цитрат натрия 3,8% (1 ч. цитрата + 9 ч. крови). Для получения богатой пластинками плазмы цитратцельную кровь центрифугируют в течение 20 мин при ускорении 140 д. К БИЛ добавляют четверть объема АСЭ-буфера (44,8 мМ цитрата натрия, 20,9 мМ лимонной кислоты, 74,1 мМ глюкозы и 4 мМ хлористого калия) и центрифугируют в течение 10 мин при ускорении 1000 д. Осадок тромбоцитов после центрифугирования ресуспендируют промывным буфером и центрифугируют 10 мин при ускорении 1000 д.

- 55 021944

Тромбоциты ресуспендируют в инкубационном буфере и устанавливают концентрацию 200000 клеток/мкл. Перед началом опыта добавляют хлористый кальций и хлористый магний, конечная концентрация каждого 2 мМ (исходный раствор 2 М, разбавление 1:1000). Особенность: при Α^Ρ (аденозиндифосфат)индуцированной агрегации добавляют только хлористый кальций. Могут применяться следующие агонисты: ТΚΑΡ6-трифторацетат-соль, коллаген, человеческий α-тромбин и И-46619. Концентрация агониста тестируется у каждого донора.

Проведение теста.

Применяются микротитровальные пластинки с 96 углублениями. Испытываемое вещество разбавляют ДМСО и по 2 мкл помещают вначале в каждое углубление. Добавляют 178 мкл суспензии тромбоцитов и предварительно инкубируют 10 мин при комнатной температуре. Добавляют 20 мкл агониста и сразу начинают измерение на приборе ЗресГтатах, ОЭ 405 нм. Кинетику определяют при 11 измерениях, каждое по 1 мин. Между измерениями встряхивают в течение 55 с.

1.е) Агрегация тромбоцитов в обедненной фибриногеном плазме.

Для определения агрегации тромбоцитов берут кровь здоровых испытуемых обоих полов, которые в течение последних десяти дней не принимали лекарств, влияющих на агрегацию тромбоцитов. Кровь набирают в моноветты (§аг51еб1, ЫитЬгесШ, Германия), которые содержат в качестве антикоагулянтов цитрат натрия 3,8% (1 ч. цитрата + 9 ч. крови).

Получение плазмы, обедненной фибриногеном.

Для получения обедненной пластинками плазмы центрифугируют цитрат-цельную кровь в течение 20 мин при ускорении 140 д. К обедненной пластинками плазме добавляют в соотношении 1:25 рептилазу (КосНе О1адио51ю, Германия) и осторожно инвертируют. Затем следует 10 мин инкубации при температуре 37°С на водяной бане, а сразу после этого инкубация на льду в течение 10 мин. Смесь плазмарептилаза центрифугируют в течение 15 мин при ускорении 1300 д и получают выступающую жидкость (обедненную фибриногеном плазму).

Выделение тромбоцитов.

Для получения богатой пластинками плазмы цитрат-цельную кровь центрифугируют в течение 20 мин при ускорении 140 д. К БПП добавляют четверть объема АСИ-буфера (44,8 мМ цитрата натрия, 20,9 мМ лимонной кислоты, 74,1 мМ глюкозы и 4 мМ хлористого калия) и центрифугируют в течение 10 мин при ускорении 1300 д. Гранулы тромбоцитов ресуспендируют с промывным буфером и центрифугируют в течение 10 мин при ускорении 1300 д. Тромбоциты ресуспендируют в инкубационном буфере, устанавливают концентрацию 400000 клеток/мкл и добавляют раствор хлористого кальция с конечной концентрацией 5 мМ (разбавление 1/200).

Для измерения агрегации берут аликвоты (98 мкл обедненной фибриногеном плазмы и 80 мкл суспензии тромбоцитов) с возрастающей концентрацией испытываемого вещества и инкубируют в течение 10 мин при комнатной температуре. Затем вызывают агрегацию путем добавления человеческого альфатромбина в агрегометре и проводят измерение агрегации с помощью турбидиметрического метода согласно Борну (Вот, О.У.К., Сго55 М.1, ТНе Аддгедайои оГ В1ооб Ρ1аΐе1еΐ5; I. ΡНу5^ο1. 1963, 168, 178-195) при температуре 37°С. Концентрация альфа-тромбина, которая как раз приводит к максимальной агрегации, определяется для каждого донора индивидуально.

Для расчета ингибиторного действия определяют максимальное возрастание пропускания света (амплитуда кривой агрегации в процентах (%)) в пределах 5 мин после добавления агониста в присутствии и отсутствие испытываемого вещества и рассчитывают ингибирование. Из кривых ингибирования рассчитывают концентрацию, которая приводит к ингибированию в 50%.

.Г) Стимуляция промытых тромбоцитов и анализ с помощью проточной цитометрии.

Выделение промытых тромбоцитов.

Человеческую цельную кровь берут пункцией из вены от добровольных доноров и помещают в моноветты (Заг51еб1, ЫйтЬгесНЬ Германия), которые содержат в качестве антикоагулянта цитрат натрия (1 ч. цитрата натрия 3,8% + 9 ч. цельной крови). Моноветты центрифугируют в течение 20 мин при 900 об/мин при температуре 4°С (Негаеи5 Ρι^ι^, Германия; МедаГиде 1.0К8). Богатую пластинками плазму медленно снимают и помещают в 50 мл фальконовую трубку. Затем к плазме добавляют АСЭ-буфер (44 мМ цитрата натрия, 20,9 мМ лимонной кислоты, 74,1 мМ глюкозы). Объем АСЭ-буфера соответствует четверти объема плазмы. Путем десятиминутного центрифугирования при числе оборотов 2500 и температуре 4°С седиментируют тромбоциты. Затем осторожно декантируют выступающую жидкость и выбрасывают ее. Осажденные тромбоциты затем осторожно ресуспендируют в 1 мл буфера для промывки (113 мМ хлористого натрия, 4 мМ динатрийгидрофосфата, 24 мМ натрийдигидрофосфата, 4 мМ хлористого калия, 0,2 мМ этиленгликоль-бис-(2-аминоэтил)-Н,Ы,№,№-тетрауксусной кислоты, 0,1% глюкозы) и затем заполняют буфером для промывки до объема, который соответствует количеству плазмы. Процесс промывки проводят второй раз. После осаждения тромбоцитов в результате нового 10-минутного центрифугирования при 2500 об и температуре 4°С их осторожно ресуспендируют в 1 мл инкубационного буфера (134 мМ хлористого натрия, 12 мМ гидрокарбоната натрия, 2,9 мМ хлористого калия, 0,34 мМ дигидрокарбоната натрия, 5 мМ ГЭПЭС, 5 мМ глюкозы, 2 мМ хлористого кальция и 2 мМ хлористого магния) и, добавляя инкубационный буфер, устанавливают концентрацию 300000 тромбоцитов на 1 мкл.

- 56 021944

Окрашивание и стимулирование человеческих тромбоцитов человеческим α-тромбином в присутствии или отсутствие РАН-1-антагониста.

Суспензию тромбоцитов вместе с подлежащим испытанию веществом, соответственно соответстствующим растворителем, предварительно инкубируют в течение 10 мин при температуре 37°С (ΈρροηάοιΓ. Германия; ТНегтопи.хег СотГой). В результате добавления агониста (0,5 мкМ, соответственно 1 мкМ αтромбина; Κοτάία, Нидерланды, 3281 МН единиц/мг; или 30 мкг/мл пептида, активирующего тромбиновый рецептор ((ТНАР6); ВасЪет, Швейцария) при температуре 37° и при встряхивании в результате 500 об/мин вызывают активирование тромбоцитов. В моменты времени 0, 1, 2,5, 5, 10 и 15 мин каждый раз отбирают аликвот 50 мкл и помещают в 1 мл однократно концентрированного Се11Р1х™-раствора (Вес.оп Эюкиъоп ПптипосуЮтейу Зу5.ет5, США). Для фиксирования клеток их инкубируют в течение 30 мин при температуре 4°С в темноте. Осаждают тромбоциты путем 10-минутного центрифугирования при ускорении 600 д и температуре 4°С. Расположенную выше жидкость выбрасывают и тромбоциты ресуспендируют в 400 мкл средства для промывки клеток ((Се11^а5Ъ™ (Вес.оп Эюкйъоп ПптипосуЮтеЩ 8у5!ет5, США). Аликвоту в 100 мкл переводят в новую РАС8 (=активированная флуоресценцией сортировка клеток) трубочку. 1 мкл идентифицирующего тромбоциты антитела и 1 мкл детектирующего активирующее состояние антитела дополняют с помощью средства для промывания клеток (Се11^а5Ъ™) до объема 100 мкл. Этот раствор антител после этого добавляют к суспензии тромбоцитов и инкубируют в течение 20 мин при температуре 4°С в темноте. В заключение к окрашиванию объем реакционной смеси увеличивают добавлением дополнительных 400 мкл Се11\Уа5Н™.

Для идентифицирования тромбоцитов вводят флуоресцеин-изотиоцианат-сопряженное антитело, которое направлено против человеческого гликопротеина ПЪ (СЭ41) Дттипо.есЪ Сои1!ег, Франция; Са!. №. 0649). С помощью фикоэритрин-сопряженного антитела, которое направлено против человеческого гликопротеин Р-селектина Дттипо.есЪ СоиЙег, Франция; Са!. №. 1759), можно определить состояние активирования тромбоцитов. Р-селектин (СЭ62Р) локализован в α-гранулах покоящихся тромбоцитов. Однако его можно после ίη-νίΐΐΌ-, соответственно ш-угуо-стимулирования транслокализовать во внешней мембране плазмы.

Проточная цитометрия и расчет данных.

Пробы измеряют на приборе РАСЗСаИЪиг™ Но\у Су!оте!гу Зу5.ет фирмы Вес.оп Эюкиъоп IттипосуЮтейу Зу5.ет5, США и обрабатывают с помощью программы Зой^аге Се110ие51, версия 3.3 (Вес.оп Эюкшзоп ПптипосуЮтеЩ Зу5.ет5, США), получая данные и представляя их в графическом виде. Мера активирования тромбоцитов определяется процентным содержанием СП62Р-положительных тромбоцитов (СО41-положительные события). От каждой пробы отсчитывают 10000 СО41-положительных событий.

Ингибиторное действие испытываемых веществ рассчитывают, опираясь на уменьшение активирования тромбоцитов, которое связано с активированием агонистами.

1.д) Измерение агрегации тромбоцитов с помощью проточной камеры параллельных пластинок.

Для определения агрегации тромбоцитов берут кровь здоровых испытуемых обоих полов, которые в течение последних десяти дней не принимали лекарств, влияющих на агрегацию тромбоцитов. Кровь набирают в моноветты (δηΐΈ^άΙ, №тЪгесЪ!, Германия), которые содержат в качестве антикоагулянтов цитрат натрия 3,8% (1 ч. цитрата + 9 ч. крови). Для получения богатой пластинками плазмы цитратцельную кровь центрифугируют в течение 20 мин при ускорении 140 д. К ВПП добавляют четверть объема АСЭ-буфера (44,8 мМ цитрата натрия, 20,9 мМ лимонной кислоты, 74,1 мМ глюкозы и 4 мМ хлористого калия) и в течение 10 мин центрифугируют при ускорении 1000 д. Гранулы тромбоцитов ресуспендируют с буфером для промывки и центрифугируют в течение 10 мин при ускорении 1000 д. Для исследования перфузии готовят смесь из 40% эритроцитов и 60% промытых тромбоцитов (200000/мкл) и суспендируют в ГЭПЭС-Тирода буфере. Измерение агрегации тромбоцитов в условиях потока проводят с помощью проточной камеры параллельных пластинок (В. Ме5\уаМ1 и др., ЕМВО I. 2001, 20, 2120-2130; С. \Уее1еппд5, Айегю5с1ег ТЪготЪ. Vа5е. Вю1. 2006, 26, 670-675; Ы. §1хта, ТЪготЪ. Не5. 1998, 92, 43-46). Стеклянные носители объекта смачивают 100 мкл раствора человеческого α-тромбина (растворенного в трис-буфере) в течение ночи при температуре 4°С (α-тромбин в различных концентрациях, например, от 10 до 50 мкг/мл) и затем блокируют с помощью 2% ВЗА.

Восстановленную кровь пропускают через смоченные тромбином стеклянные носители объекта в течение 5 мин с постоянной скоростью потока (например, со скоростью среза 300/с), наблюдают с помощью микроскоп-видеосистемы и зарисовывают. Ингибиторное действие испытываемых веществ определяют морфометрически по уменьшению образования агрегатов пластинок. Альтернативно можно определить ингибирование активирования пластинок с помощью проточной цитометрии, например, через экспрессию п-селектина (СЭ62р) (см. метод 1.Г).

1.Ь) Измерение агрегации тромбоцитов и активирования тромбоцитов с помощью камеры потока параллельных пластинок (антикоагулированная кровь, коллаген).

Для определения активирования тромбоцитов в условиях потока берут кровь здоровых испытуемых обоих полов, которые в течение последних десяти дней не принимали лекарств, влияющих на агрегацию

- 57 021944 тромбоцитов. Кровь набирают в моноветты (8агк1ей1. Ж'ипЬгесЙ, Германия), которые содержат в качестве антикоагулянтов цитрат натрия 3,8% (1 ч. цитрата + 9 ч. крови).

Измерение активирования тромбоцитов проводят с помощью камеры потока параллельных пластинок (В. №ек\\апй1 и др., ЕΜΒΟ ί. 2001, 20, 2120-2130; С. АееЮппдк, Айегю5с1ег ТЬготЬ. Vаке. ΒίοΙ. 2006, 26, 670-675; Ы 81хта, ТЬготЬ. Кек. 1998, 92, 43-46). Стеклянные носители объекта смачивают 20 мкл суспензии коллагена (коллагеновый реагент Иогт, фирмы Хусотей) в течение ночи при температуре 4°С (тип Ι-коллагена в различных концентрациях, например 1-10 мкг/на носитель объекта) и затем с помощью 2% САКРС блокируют.

К цитрат-цельной крови для воспрепятствованию свертыванию фибрина добавляют пефаблок РО (фирмы РейарЬагт, конечная концентрация 3 мМ) и, добавляя СаС1₂ раствор (конечная концентрация Са++ 5 мМ), в течение 5 мин пропускают при постоянной скорости потока через стеклянный носитель объекта, покрытый слоем коллагена (например, скорость среза 1000/с), наблюдают с помощью микроскоп-видеосистемы и зарисовывают. Ингибиторное действие испытываемого вещества определяют морфометрически по уменьшению образования агрегатов пластинок. Альтернативно можно определить ингибирование активирования пластинок с помощью проточной цитометрии, например, через экспрессию п-селектина (СЭ62р) (см. метод 1ί).

1. ί) Измерение агрегации тромбоцитов и активирования тромбоцитов с помощью камеры потока параллельных пластинок (не-антикоагулированная кровь, коллаген).

Для определения активирования тромбоцитов в условиях потока берут кровь здоровых испытуемых обоих полов, которые в течение последних десяти дней не принимали лекарств, влияющих на агрегацию тромбоцитов. Кровь набирают в нейтральные моноветты (8агк1ей1, №тЬгесЙ, Германия), которые не содержат антикоагулянтов и сразу во избежание сворачивания фибрина добавляют пефаблок РО (фирмы РейарЬагт, конечная концентрация 3 мМ). Растворенные в ДМСО испытываемые вещества добавляют одновременно с пефаблоком РО и без дальнейшей инкубации направляют в камеру потока параллельных пластинок. Измерение активирования тромбоцитов проводят в покрытой слоем коллагена камере потока параллельных пластинок морфометрически или проточно-цитометрически, как описано в методе 1.Ь).

2. Опыты ех νί\Ό.

2.а) Агрегация тромбоцитов (приматы, морские свинки).

Морских свинок или приматов обрабатывают в бодром или наркотизированном состоянии орально, внутривенно или интраперитонеально испытываемыми веществами в виде подходящего препарата. В качестве контроля других морских свинок или приматов обрабатывают идентичным образом соответствующей лекарственной основой. В зависимости от вида применения через различные промежутки времени берут у глубоко наркотизированных животных кровь с помощью пункции из сердца или из аорты. Кровь набирают в моноветты (8агк1ей1, ЖипЬгесЙ, Германия), которые содержат в качестве антикоагулянта цитрат натрия 3,8% (1 ч. раствора цитрата + 9 ч. крови). Для получения богатой пластинками плазмы цитрат-цельную кровь центрифигуриют в течение 20 мин при ускорении 140 д

Агрегацию вызывают добавлением агониста тромбинового рецептора (ТКАР6, 8ΡΡΡΚΝ, 50 мкг/мл; концентрацию в каждом эксперименте устанавливают (определяют) в зависимости от вида животных) в агрегометре и определяют с помощью турбидиметрического метода согласно Борну (Е!огп, Ο.ν.Κ., Сгокк М.Ь, ТЬе АддгедаИоп о£ Β1οοй Р1а1е1е1к; ί. РЬукю1. 1963, 168, 178-195) при температуре 37°С.

Для измерения агрегации определяют максимальное увеличение пропускания света (амплитуда агрегационной кривой в процентах (%)) в пределах 5 мин после добавления агониста. Ингибиторное действие испытываемого вещества у обработанных животных рассчитывается по уменьшению агрегации по отношению к среднему значению контрольных животных.

Дополнительно к измерению агрегации можно определить ингибирование активирования пластинок с помощью проточной цитометрии, например, через экспрессию п-селектина (СЭ62р) (см. метод 1£).

2.Ь) Измерение агрегации тромбоцитов и активирования тромбоцитов с помощью камеры потока параллельных пластинок (приматы).

Приматов обрабатывают в бодром или наркотизированном состоянии орально, внутривенно или интраперитонеально испытываемыми веществами в подходящем виде препарата. В качестве контроля других животных обрабатывают идентичным образом соответствующей лекарственной основой. В зависимости от вида применения через различные промежутки времени берут у животных кровь с помощью пункции из вены. Кровь набирают в моноветты (8агк1ей1, ЖипЬгесЙ, Германия), которые содержат в качестве антикоагулянта цитрат натрия 3,8% (1 ч. раствора цитрата + 9 ч. крови). Альтернативно можно неантикоагулированную кровь набирать в нейтральные моноветты (8агк1ей1). В обоих случаях во избежание свертывания фибрина к крови добавляют пефаблок РО (фирмы РейарЬагт, конечная концентрация 3 мМ).

Цитрат-цельную кровь перед измерением рекальцифицируют, добавляя раствор СаС12 (конечная концентрация Са++ 5 мМ). Не-антикоагулированную кровь направляют непосредственно для измерения в камеру потока параллельных пластинок. Измерение активирования тромбоцитов проводят в покрытой пленкой коллагена камере потока параллельных пластинок морфометрически или проточно цитометрически, как описано в методе 1.Ь).

- 58 021944

3. Опыты ίη νίνο.

3.а) Модель тромбоза.

Соединения согласно данному изобретению могут быть исследованы в моделях тромбоза у подходящих видов животных, у которых индуцированная тромбином агрегация пластинок передается с помощью РАК-1-рецептора. В качестве видов животных подходят морские свинки и особенно приматы (сравни: υηάαίιΐ. А.К., ЗсагЬогоидЬ, К.М., Ναιΐβΐιΐοη. М.А., Нагкег, Ь.А., Нап5оп, 8.К., ТЬготЪ Наетο5ΐ 1993, 69, 1196; Соок РР, §11ко О.К., Веάηа^ В., СоМга С., Ме11ой М.1, Репд Ό.-М., Νυΐΐ К.Р., 8Ьадег РА., СоиМ К.Р, Соппо11у Т.М., Сагсикйюп 1995, 91, 2961-2971; КодтЫ М., КоЪауа5Ы Н., Μаΐ5иοка Т., διιζιιΓί δ., КауаЬага Т., Каруага А., Н15Ыпита I., Сагсикйюп 2003, 108 8ирр1. 17, ГУ-280; Эепап С.К., Оаткто В.Р., Аάάο М.Р., Эаггслу А.Ь., Э'АгЛгеа М.К., Nеάе1таη М., 2Ьапд Н.-С., МагуапоГГ В.Е., АшЕЛе-СоНоп Р., Р РЬагтасо1. Ехр. ТЬег. 2003, 304, 855-861). Альтернативно можно использовать морских свинок, которые предварительно обработаны ингибиторами РАК-3 и/или РАК-4 (Ьедег Λ.ί и др., Сагсикйюп 2006, 113, 1244-1254) или ингибиторами трансгенных РАК-3- и/или РАК-4-обездвиженных морских свинок.

3.Ъ) Нарушение сворачивания крови и дисфункция органов при дисэминированном интравасальном сворачивании крови (ОК.').

Соединения согласно данному изобретению исследуют в моделях для ΌΚ.' и/или сепсиса у подходящих видов животных. В качестве подходящих видов животных подходят морские свинки и особенно приматы при исследовании эффектов, передаваемых эндотелием, также мыши и крысы (сравни Коди5Ы М., КоЬауа51и Н., Μаΐ5иοка Т., διιζιιΓί δ., КауаЬага Т., Кацуага А., Н15Ыпита I., Сагсикйюп 2003, 108 8ирр1. 17, РУ-280; Оепап С.К., Оаткто В.Р., Аάάο М.Р., Оаггоу А.Ь., О'АМгеа М.К., Nеάе1таη М., 2Ьапд Н.-С., МагуапоГГ В.Е., АМ1^е-СоМоп Р., Г. РЬагтасоГ Ехр. ТЬег. 2003, 304, 855-861; КапМег Ν.0 и др., №й. ^типо^ 2007, 8, 1303-12; Сатегег Е. и др., В1οοά, 2006, 107, 3912-21; КеуаМ М. и др., Г. Вю1. СЬет., 2005, 280, 19808-14.). Альтернативно можно использовать морских свинок, которые предварительно обработаны ингибиторами РАК-3 и/или РАК-4 (Ьедег АД и др., Сагсикйюп 2006, 113, 1244-1254), или ингибиторами трансгенных РАК-3- и/или РАК-4-обездвиженных морских свинок.

3Ъ.1) Тромбин-антитромбин-комплексы.

Тромбин-антитромбин-комплексы (далее обозначаемые как ТАТ) являются мерой эндогенно образующегося в результате активирования сворачивания крови тромбина. ТАТ определяют с помощью ЕЬЕА-опыта (энцигност ТАТ микро, фирмы О;Ле-ВеЬппд). Из цитрат-крови получают плазму центрифугированием. К 50 мкл плазмы добавляют 50 мкл ТАТ-пробы-буфер, недолго встряхивают и 15 мин инкубируют при комнатной температуре. Пробы отсасывают и ячейку (углубление, виалку) промывают 3 раза буфером для промывания (300 мкл/виалка). Пластинку между промывками простукивают. Добавляют конъюгатный раствор (100 мкл) и 15 мин инкубируют при комнатной температуре. Пробы отсасывают и углубление 3 раза промывают буфером для промывания (300 мкл/углубление). Затем добавляют хромогенный субстрат (100 мкл/углубление), инкубируют 30 мин в темноте при комнатной температуре, добавляют останавливающий раствор (100 мкл/ углубление) и измеряют цветную картинку при 492 нм (ЬарЬЬе Ркйе ге;Лег).

3.Ъ.2) Параметры для дисфункции органов.

Определяют различные параметры, которые основаны на ответных реакциях на ограничение функции различных внутренних органов в результате приема ΡΓδ и по которым может быть оценен терапевтический эффект испытываемых веществ. Цитрат-кровь или при необходимости литий-гепарин-кровь центрифугируют и параметры определяют из плазмы. Типично предпочитаются следующие параметры: креатинин, мочевина, аспартат-аминотрансфераза (АδТ), аланин-аминотрансфераза (АРТ), общийбилирубин, лактат-дегидрогеназа (ЬОН), общий-протеин (белок), общий-альбумин и фибриноген. Значения позволяют сделать вывод о функции почек, печени, системы кровообращения и сосудов.

3.Ъ.3) Параметры для воспалительных процессов.

Размах вызванной эндотоксином воспалительной реакции удается обнаружить по возрастанию медиаторов воспаления в плазме, например интерлейкин (1, 6, 8 и 10), фактор некроза опухолей альфа или моноцит хемоаттрактант протеин-1. Для этого могут применяться ферментный иммуносорбентный тест (ЕЬЕА) или люминекс-система.

3.с) Противоопухолевая эффективность.

Соединения согласно данному изобретению могут быть испытаны на моделях рака, например на модели человеческого рака груди, у иммунодефицитных мышей (сравни: δ. Еνеη-Кат и др., №йиге Μеά^сше, 1988, 4, 909-914).

3.ά) Антиангиогенетическая эффективность.

Соединения согласно данному изобретению могут быть испытаны на ш \йго и ш угуо моделях ангиогенеза (сравни Саип1 и др., Гоигпа1 оГ ТЬготЪо515 ηπά Наето51а515, 2003, 10, 2097-2102, Нага1аЪорои1о5 и др., Ат Г. РЬу5ю1., 1997, С239-С245; Т5орапод1ои и др., ГВС, 1999, 274, 23969-23976; 2ата и др., ГРЕТ, 2006, 318, 246-254).

3.е) Действие, модулирующее кровяное давление и частоту сокращения сердца.

Соединения согласно данному изобретению могут быть исследованы в ш утуо моделях относительно их действия на артериальное кровяное давление и частоту сокращений сердца. Для этого крыс (на- 59 021944 пример, Вистар) инструментируют радиотелеметрическими блоками, для этого применяют систему сбора и хранения данных (Эа1а §аеисек, М^ υδΑ), состоящую из хронически имплантируемого блока приемника/медиатор в соединении с наполненным жидкостью катетером. Медиатор имплантируют в полость брюшины и сенсор-катетер позиционируют в нисходящей аорте. Соединения согласно данному изобретению могут применяться, например, орально или интравенозно. Перед обработкой измеряют среднее артериальное кровяное давление и частоту сокращений сердца у необработанных и обработанных животных и обеспечивают, что они находятся в интервале около 131-142 мм Нд и 279-321 ударов/минуту. РАК-1-активирующий пептид (δΡΕΕΚΝ; например, дозы между 0,1 и 5 мг/кг) вводят внутривенно. Кровяное давление и частоту сокращений сердца измеряют в различные интервалы времени и временные пространства при наличии или отсутствии РАК-1-активирующего пептида, а также при наличии и отсутствии одного из соединений согласно данному изобретению (сравни: Сюа1а С и др., ТЬе ΡАδЕΒ 1оитиа1, 2001, 15, 1433-5; δίаксЬ ЕР и др., ВЬЬкЬ 1оитиа1 оР РЬагтасо1оду 2002, 135, 344-355).

3.Р) Модель тромбоза.

Дальнейший опыт по тромбозу ш У1уо, который подходит для определения эффективности соединений согласно данному изобретению, описан в статье Тискег Е.1., Маг/ес и.М., \У1и1е Т.С., Нигк1 δ., Кидоиу1 δ., МсСаЬу О.ЕТ., ОаЬат Ό., ОгиЬег А., Наикои δ.Κ.: РгеуеиЬои оР уакси1аг дгай осс1икюи аиб ЬиотЬик-аккоааЮб ^отЬт деиегаЬои Ьу тЫЬШои оР ГасЮг XI. В1ооб 2009, 113, 936-944.

4) Определение растворимости.

Приготовление исходного раствора (первоначальный раствор).

Как минимум 1,5 мг испытываемого вещества помещают в У-виалку с широким горлом и 10-мм винтовой нарезкой (фирмы С1ак1ес1иик ОгаРеигоба ОтЬН, ΛγΙ.-Νγ. 8004-^М-Н/У15р) с подходящей завинчиваемой крышкой и септум точно взвешивают, добавляют ДМСО, доводя до концентрации 50 мг/мл, и в течение 30 мин встряхивают с помощью вихревого смесителя (УоЬехегк).

Приготовление калибровочных растворов.

Необходимые стадии подачи растворов пипетками в 1,2-мл пластинку с 96 углублениями (Ц^Р) осуществляются роботом для манипулирования жидкостями. В качестве растворителя применяют смесь ацетонитрил/вода 8:2.

Приготовление исходного раствора для калибровочных растворов (первоначальный раствор): к 10 мкл первоначального раствора добавляют 833 мкл смеси растворителей (концентрация=600 мкг/мл) и гомогенизируют. Приготавливают для каждого тестируемого вещества разбавления 1:100 в отдельных О\УР и опять же гомогенизируют.

Калибровочный раствор 5 (600 нг/мл): к 30 мкл первоначального раствора добавляют 270 мкл смеси растворителей и гомогенизируют.

Калибровочный раствор 4 (60 нг/мл): к 30 мкл калибровочного раствора 5 добавляют 270 мкл смеси растворителей и гомогенизируют.

Калибровочный раствор 3 (12 нг/мл): к 100 мкл калибровочного раствора 4 добавляют 400 мкл смеси растворителей и гомогенизируют.

Калибровочный раствор 2 (1,2 нг/мл): к 30 мкл калибровочного раствора 3 добавляют 270 мкл смеси растворителей и гомогенизируют.

Калибровочный раствор 1 (0,6 нг/мл): к 150 мкл калибровочного раствора 2 добавляют 150 мкл смеси растворителей и гомогенизируют.

Приготовление пробных растворов.

Необходимые стадии подачи растворов пипетками в 1,2 мл пластинку с 96 углублениями (Ц^Р) осуществляются роботом для манипулирования жидкостями. К 10,1 мкл первоначального раствора добавляют 1000 мкл РВδ-буфера рН 6,5 ^Βδ-буфер рН 6,5: 61,86 г хлористого натрия, 39,54 г дигидрофосфата натрия и 83,35 г 1 N натронного щелока взвешивают и помещают в 1-литровую измерительную колбу, заполняют водой и перемешивают около 1 ч. Из этого раствора берут 500 мл и помещают в 5литровую измерительную колбу и заполняют колбу водой. С помощью 1 Ν натронного щелока доводят до значения рН 6,5).

Осуществление.

Необходимые стадии подачи растворов пипетками в 1,2-мл пластинку с 96 углублениями (Ц^Р) осуществляются роботом для манипулирования жидкостями. Полученные таким образом пробные растворы встряхивают в течение 24 ч при 1400 об/мин с помощью нагреваемого встряхивающего устройства при температуре 20°С. Из этих растворов берутся в каждом случае 180 мкл и помещают в тубы центрифуги Весктаи Ро1уа11огаег СеиЬгРиде. Эти растворы центрифугируют в течение 1 ч при ускорении около 223000 д. Из каждого пробного раствора берут 100 мкл выступающей жидкости и разбавляют 1:10 и 1:1000 РΒδ-буфером 6,5.

Аналитика.

Пробы анализируют с помощью ЖХВР/МС-МС. Количественное определение проводят с помощью калибровочной кривой тестируемого соединения, проведенной по пяти точкам. Растворимость выражают в мг/л. Последовательность анализа:

1) чистый (смесь растворителей);

- 60 021944

2) калибровочный раствор 0,6 нг/мл;

3) калибровочный раствор 1,2 нг/мл;

4) калибровочный раствор 12 нг/мл;

5) калибровочный раствор 60 нг/мл;

6) калибровочный раствор 600 нг/мл;

7) чистый (смесь растворителей);

8) пробный раствор 1:1000;

9) пробный раствор 1:10.

ЖХВР/МС-МС-метод.

ЖХВР. Прибор Адйей 1100, циак насос (С1311Л), автосамплер СТС НТ§ РАЬ, дегазатор (С1322А) и термостат для колонки (С1316А); колонка: Оа818 НЬВ 20x2,1 мм, 25 мкм; температура: 40°С; элюент А: вода + 0,5 мл муравьиной кислоты/л; элюент В: ацетонитрил + 0,5 мл муравьиной кислоты/л; скорость потока: 2,5 мл/мин; время остановки 1,5 мин; градиент: 0 мин 95% А, 5% В; рампа: 0-0,5 мин 5% А, 95% В; 0,5-0,84 мин 5% А, 95% В; рампа: 0,84-0,85 мин 95% А, 5% В; 0,85-1,5 мин 95% А, 5% В.

МС/МС. Прибор ХУАТЕВЗ ОиаИго Мюго Тапбет МС/МС; Ζ-спрей АР1-интерфейс; ЖХВР-МСвходное расщепляющее устройство 1:20; измерение в ИЭП-моде.

5) Определение ίη уйго очистки (клиренса) с гепатоцитами.

Инкубации со свежими первичными гепатоцитами при температуре 37°С в общем объеме 1,5 мл с модифицированным роботом 1апи8® (фирмы Регкт Е1тег) проводят при встряхивании. Инкубации содержат типичным образом 1 млн живых клеток печени млн/мл, около 1 мкМ субстрата и 0,05 М калийфосфатного буфера (рН 7,4). Конечная концентрация ацетонитрила в инкубации составляет <1%.

Аликвоты в 125 мкл забирают из инкубации через 2, 10, 20, 30, 50, 70 и 90 мин и помещают в фильтровальные пластинки с 96 углублениями (0,45 мкм слабосвязывающего гидрофильного РТРЕ; ультратонкий фильтр: МиШ8Сгееп δο1ν^ηе^ι). Они содержат в каждом случае 250 мкл ацетонитрила, для того чтобы остановить реакцию. После центрифугирования фильтраты анализируют с помощью МС/МС (обычно на приборе АР1 3000).

Значения ίη νίΐτο очистки (клиренса) рассчитывают из времен полураспада распада вещества, причем используют следующее уравнение:

СЬ'_т4гш81С [мл/(мин-кг)]=(0,693/ш νίΐτο ΐ1/2 [мин])-(вес печени [г печени/кг веса тела])-(число клеток [1,1-10^Л8]/вес печени [г])/(число клеток [1-10^Л6]/инкубационный объем [мл]) (шШп8Ю=свойственный, присущий).

Величина СЬ_Ь1ооб рассчитывается без учета свободной фракции (не ограниченная хорошо перемешанная модель) согласно следующему уравнению (Ь1ооб=кровь):

СЬыооб хорошо перемешанная [л/(ч-кг)]=(Ой[л/(ч-кг)]-СЬ'щ,пийс [л/(ч-кг)])/(Ой[л/(ч-кг)] + СЬ'шйийс [л/(ч-кг)]).

Эти специфичные для частиц расчетные коэффициенты, которые следует учитывать, сведены в следующей таблице:

Мужская / женская особь	Мыши м	Мыши ж	Крысы м/ж	Собаки м/ж	Супо ж	Люди м/ж
Число клеток / г печень [млн. клеток]	110	110	110	110	110	110
Печень [г] / кг веса тела	50	43	32	39	30	21
Печень ПОТОК крови [л/(ч-кг)]	5,4	5,4	4,2	2,1	2,5	1,3

Р_тах значения, максимально возможная биодоступность - в пересчете на гепатическую экстракцию рассчитывают следующим образом:

Р_тах хорошо перемешанная [%]=(1-(СЬ_Ь1ооб хорошо перемешанная [л/(ч-кг)]/р_Н[л/(ч-кг)]))· 100.

6) Определение фармакокинетики ίη νί\Ό.

Для определения фармакокинетики ίη νί\Ό тестируемые соединения растворяют в различных средствах для приготовления препаратов (например, плазма, этанол, ДМСО, РЕС400 и т.п.) или смесях этих посредников растворения и вводят внутривенно или орально мышам, крысам, собакам или обезьянам.

- 61 021944

Внутривенное введение проводят выборочно в виде пилюль или в виде инфузии. Применяемые дозы находятся в интервале от 0,1 до 5 мг/кг. Пробы крови отбирают с помощью катетера или в виде мертвой плазмы в различные моменты времени в интервале вплоть до 26 ч. Дополнительно частично делают также заборы проб органов, тканей и мочи. Количественное определение веществ в опытных пробах делают с помощью калибровочных проб, которые устанавливают в любой матрице. Протеины (белки), содержащиеся в пробах, удаляют осаждением в ацетонитриле или метаноле. В заключение пробы разделяют с помощью ЖХВР на установке 2300 НТЬС (фирмы СоНе51ме ТесЪпо1од1е5, РгапИш, МА, США) или А§Пеп1 1200 (фирмы ВбЫшдеп, Германия) с использованием колонок с реверсивной фазой. ЖХВР-система подсоединена через турбоион спрей интерфейс к триплетному квадрупольному масс-спектрометру ΑРI 3000 или 4000 (фирмы АррИеН Вю5у51ет5, ^а^т5ίаάί, Германия). Определение кривой концентрация плазмы в зависимости от времени проводят, используя удовлетворительную программу определения кинетики.

С) Примеры приготовления фармацевтических препаратов.

Соединения согласно данному изобретению можно следующим образом перевести в фармацевтические препараты.

Таблетки.

Состав: 100 мг соединения примера 1,50 мг лактозы (моногидрат), 50 мг кукурузного крахмала, 10 мг поливинилпирролидона (РУР 25) (фирмы ВА8Р, Германия) и 2 мг стеарата магния.

Вес таблетки 212 мг. Диаметр 8 мм, радиус закругления 12 мм.

Получение.

Смесь, состоящую из соединения примера 1, лактозы и крахмала в 5% растворе (м/м) поливинилпирролидона в воде, гранулируют. Гранулят после сушки перемешивают в течение 5 мин со стеаратом магния. Из этой смеси прессуют таблетки на обычном прессе для прессования таблеток (формат таблеток см. выше).

Орально принимаемая суспензия.

Состав: 1000 мг соединения примера 1, 1000 мг этанола (96%), 400 мг родигеля® (ксантановая смола фирмы РМС, США) и 99 г воды.

Единичной дозе в 100 мг соединения согласно данному изобретению соответствуют 10 мл оральной суспензии.

Получение.

Родигель суспендируют в этаноле и добавляют к суспензии соединение примера 1. Перемешивают и во время перемешивания добавляют воду. Перемешивание продолжают до завершения набухания родигеля в течение около 6 ч.

Внутривенно применяемый раствор.

Состав: 1 мг соединения примера 1,15 г полиэтиленгликоля 400 и 250 г воды для инъекционных целей.

Получение.

Соединение примера 1 совместно с полиэтиленгликолем 400 растворяют в воде при перемешивании. Раствор стерильно фильтруют (диаметр пор 0,22 мкм) и при асептических условиях заполняют в инфузионные бутылки, стерилизованные при высокой температуре. Бутылки закрывают инфузионными пробками и колпачками с закатанным буртиком.

Claims (22)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение формулы в которой К¹ означает трифторметил, 1,1-дифторэтил, 2,2-дифторэтил, 2,2,2-трифторэтил, дифторметокси-, трифторметоксигруппу или этил;

   К² означает 2-гидроксиэт-1-ил, 2-метоксиэт-1-ил, 2-этоксиэт-1-ил, циклопропил или 1метоксициклопроп-1-ил;

   К³ означает группу формулы

   Г~\Л *—N 5—0 или «—N 35 %

   причем * означает место присоединения к карбонильной группе, или одна из его солей, один из его сольватов или сольватов его солей.
2. 2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что

   - 62 021944

   К¹ означает трифторметил, 2,2,2-трифторэтил, трифторметоксигруппу или этил; К² означает 2-метоксиэт-1-ил, циклопропил или 1-метоксициклопроп-1-ил;

   К³ означает группу формулы причем * означает место присоединения к карбонильной группе, или одна из его солей, один из его сольватов или сольватов его солей.
3. 3. Соединение по п.1 или 2, отличающееся тем, что

   К¹ означает трифторметоксигруппу;

   К² означает 2-метоксиэт-1-ил или циклопропил;

   К³ означает группу формулы причем * означает место присоединения к карбонильной группе, или одна из его солей, один из его сольватов или сольватов его солей.
4. 4. Соединение по одному из пп.1-3, отличающееся тем, что фенильный заместитель и 1,2,4оксадиазол-5-ил заместитель, связанные с пиперидиновым кольцом, находятся в цис-положении друг к другу.
5. 5. Соединение по одному из пп.1-4, отличающееся тем, что

   К¹ означает трифторметоксигруппу,

   К² означает циклопропил,

   К³ означает группу формулы причем * означает место присоединения к карбонильной группе, или одна из его солей, один из его сольватов или сольватов его солей.
6. 6. Соединение по одному из пп.1-5, отличающееся тем, что атом углерода, к которому присоединен фенильный заместитель, имеет δ-конфигурацию и атом углерода, к которому присоединен 1,2,4оксадиазол-5-ил заместитель, также имеет δ-конфигурацию.
7. 7. Способ получения соединения формулы (I) или одной из его солей, одного из его сольватов или сольватов его солей по п.1, отличающийся тем, что соединение формулы в которой К¹ и К² имеют значения, приведенные в п.1, подвергают взаимодействию с соединением формулы в которой К³ имеет значения, приведенные в п.1;

   X¹ означает галоид, представляющий собой бром или хлор или гидрокси- или 4нитрофеноксигруппу.
8. 8. Способ получения соединения формулы (I) или одной из его солей, одного из его сольватов или сольватов его солей по п.1, отличающийся тем, что соединение формулы (II) в которой К¹ и К² имеют значения, приведенные в п.1, на первой стадии подвергают взаимодействию с 4-нитрофенилхлороформатом и на второй стадии подвергают взаимодействию с соединением формулы в которой К³ имеет значения, приведенные в п.1.
9. 9. Способ получения соединения формулы (I) или одной из его солей, одного из его сольватов или сольватов его солей по п.1, отличающийся тем, что соединение формулы

   - 63 021944 в которой К и К имеют значения, приведенные в п.1, подвергают взаимодействию с соединением формулы

   НО,

   Η₂Ν

   X.

   1 (VI).

   в которой К² имеет значения, приведенные в п.1.
10. 10. Способ получения соединения формулы (I), в которой К³ означает группу формулы или одной из его солей, одного из его сольватов или сольватов его солей по п.1, отличающийся тем, что соединение формулы в которой К¹ и К² имеют значения, приведенные в п.1, подвергают взаимодействию с 0,8-1,1 экв. метахлорпербензойной кислоты.
11. 11. Способ получения соединения формулы (I), в которой К³ означает группу формулы или одной из его солей, одного из его сольватов или сольватов его солей по п.1, отличающийся тем, что соединение формулы (Ш) в которой К¹ и К² имеют значения, приведенные в п.1, подвергают взаимодействию с 2,0-3,0 экв. метахлорпербензойной кислоты.
12. 12. Соединение формулы в которой К¹, К² и К³ имеют значения, указанные в любом из пп.1-6, для лечения и/или профилактики заболеваний, вызываемых активностью РАК-1-рецептора.
13. 13. Соединение по п.12, где заболевание выбрано из сердечно-сосудистых заболеваний, тромбоэмболических заболеваний и/или опухолевых заболеваний.
14. 14. Соединение формулы

    - 64 021944 в которой Κ’, Κ² и Κ³ имеют значения, указанные в любом из пп.1-6, для лечения и/или профилактики сердечно-сосудистых заболеваний, тромбоэмболических заболеваний и/или опухолевых заболеваний.
15. 16. Применение соединения по одному из пп.1-6 для предупреждения коагуляции крови ίη νίίτο.
16. 17. Фармацевтический препарат для лечения и/или профилактики заболеваний, вызываемых активностью ΡΑΚ-1-рецептора, содержащий соединение по одному из пп.1-6 в комбинации с инертным, нетоксичным, фармацевтически пригодным вспомогательным веществом.
17. 18. Фармацевтический препарат по п.17, где заболевание выбрано из сердечно-сосудистых заболеваний, тромбоэмболических заболеваний и/или опухолевых заболеваний.
18. 19. Способ лечения и/или профилактики тромбоэмболических заболеваний у людей и животных с использованием антикоагуляторно действующего количества как минимум одного соединения по одному из пп.1-6.
19. 20. Способ лечения и/или профилактики тромбоэмболических заболеваний у людей и животных с использованием антикоагуляторно действующего количества как минимум одного фармацевтического препарата по п.17 или 18.
20. 21. Соединение формулы (I), представляющее собой {3-(3-циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5[4-(трифторметокси)фенил]пиперидин-1-ил}(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)метанон структурной формулы или одна из его солей, один из его сольватов или сольватов его солей.
21. 22. Соединение формулы (I), представляющее собой {3-(3-циклопропил-1,2,4-оксадиазол-5-ил)-5[4-(трифторметокси)фенил]пиперидин-1-ил}(1,1-диоксидотиоморфолин-4-ил)метанон структурной формулы
22. 23. Соединение формулы (I) по п.21 или 22 в виде энантиомерно чистого цис-изомера структурной формулы

    - 65 021944