KR20120009920A - Cosmetic composition for promoting hair growth comprising the extract of walnut - Google Patents

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KR20120009920A
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Abstract

PURPOSE: A cosmetic composition containing walnut oil soluble extract or walnut water soluble extract is provided to ensure substantial hair growth effect. CONSTITUTION: A cosmetic composition for promoting hair growth contains extract prepared by adding carbon dioxide to a mixture of walnut shell and walnut fruit. A cosmetic composition for promoting hair growth contains water soluble extract as an active ingredient. The walnut fruit is contained in 0.5-1.5 weight parts based on 1 weight part of walnut shell.

Description

호두 추출물을 함유하는 모발 성장 촉진용 화장료 조성물{Cosmetic composition for promoting hair growth comprising the extract of walnut}Cosmetic composition for promoting hair growth containing walnut extract

본 발명은 모발 성장 촉진용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 호두 유용성 추출물 또는 호두 수용성 추출물을 함유하는 모발 성장 촉진용 화장료 조성물에 관한 것이다.
The present invention relates to a cosmetic composition for promoting hair growth, and more particularly, to a hair growth promoting cosmetic composition containing a walnut oil-soluble extract or a walnut water-soluble extract.

모발의 성장은 모낭조직의 작용에 따라 좌우된다. 모낭조직은 외모근초세포(outer root sheath cell), 내모근초세포(inner root sheath cell), 기질세포(matrix cell) 및 모유두 세포(dermal papilla cell)로 구성되어 있다. 각각의 세포는 형태학적으로 특정한 형태를 하고 있을 뿐만 아니라, 서로 독특한 기능을 갖는 것으로 알려져 있는데, 이들 세포들은 여러 가지 성장인자(growth factor)와 호르몬(hormone) 등에 대해 반응 특이성을 갖는다. Hair growth depends on the action of the hair follicle tissue. The hair follicle tissue is composed of outer root sheath cells, inner root sheath cells, matrix cells and dermal papilla cells. Each cell is not only morphologically specific, but also known to have unique functions. The cells have reaction specificities for various growth factors and hormones.

모낭조직의 다른 세포들은 외배엽성 기원임에 반해 모유두(dermal papilla)는 중배엽성 기원으로 진피에 존재하는 섬유아세포(fibroblast-like cell)로 구성되는데, 모유두는 모낭조직의 최하단부에 위치하며, 주위의 상피세포(epithelial cell)에 감싸 안긴 형태를 취하고 있다.While other cells of hair follicles are of ectoderm origin, dermal papilla is composed of fibroblast-like cells in the dermis of mesodermal origin, which is located at the lowest end of hair follicle tissue. It is enclosed in epithelial cells.

모발의 성장은 모유두를 둘러싸고 있는 상피세포(epithelial cell)가 분열하여 모간(hair shaft)을 만들면서 진행되므로, 모유두 세포는 상피세포(epithelial cell)의 분열을 조절하는 중요한 역할을 하는 것으로 생각되고 있다. 또한, 모유두는 남성형 탈모증에서 핵심적인 남성호르몬이 모낭에 작용하는 부위로서, 발모/탈모에 중요한 역할을 담당하고 있는 것으로도 알려져 있다.Hair growth proceeds as the epithelial cells surrounding the dermal papilla divide and form a hair shaft, so the dermal papilla cells are thought to play an important role in regulating the division of the epithelial cells. . In addition, breast papilla is a site where male hormones, which are essential for androgenetic alopecia, act on hair follicles, and are known to play an important role in hair growth / hair loss.

탈모증은 기존에는 중?장년 남성들만의 문제로 치부되는 경향이 있었으나, 최근에는 환경 오염과 과도한 스트레스 등의 이유로 여성 및 젊은 층의 탈모가 크게 증가하는 추세이다. Hair loss has tended to be regarded as a problem only among middle-aged and older men, but in recent years, hair loss of women and young people has increased significantly due to environmental pollution and excessive stress.

이에, 좋은 식습관, 올바른 생활습관, 올바른 머리손질 및 두피 마사지 등을 통해 두피의 경혈을 자극하고, 두피의 혈액순환을 촉진하는 등, 두피 및 모발에 대한 관리 욕구가 지속적으로 증가하는 추세에 있다.
Accordingly, the need for management of the scalp and hair is continuously increasing, such as stimulating the menstrual blood of the scalp and promoting blood circulation of the scalp through good eating habits, correct lifestyle, correct hair care, and scalp massage.

한편, 호두는 가래나무과의 낙엽교목인 호두나무의 열매로서, 단백질과 영양가가 높고, 머리카락에 윤이 나게 하며, 노화방지와 신장기능강화에 효과가 있는 것으로 알려져 있는데, 호두 추출물을 함유하는 발모 관련 조성물로는 공개특허 10-2004-0001683에 기재된 내용이 알려져 있다. 하지만, 상기 내용은 발모 효능에 대한 검증이 불충분하고, 실질적으로 발모 효과가 있는지에 대해서 의구심이 많다.
On the other hand, walnut is a fruit of walnut tree, a deciduous arborescent of the sputum, and is known to be high in protein and nutritional value, to shine in hair, and to be effective in preventing aging and strengthening kidney function. As is disclosed, the contents described in Patent Publication No. 10-2004-0001683. However, the above contents are insufficient to verify the hair growth efficacy, and there is much doubt about whether there is a substantial hair growth effect.

이에 본 발명은 호두를 이용하여 실질적으로 모발 성장 촉진능을 발휘할 수 있는 추출물을 개발하고 이를 화장료 조성물 발전시켜 제공하는데 그 목적이 있다.
Therefore, the present invention has an object to develop an extract that can exhibit substantially the ability to promote hair growth using walnuts and to develop it to provide a cosmetic composition.

상기의 목적을 달성하기 위해 본 발명은 제1형태로 파쇄된 호두껍질 및 호두알로 조성되는 혼합물에 초임계 이산화 탄소를 흘려주어 초임계 추출함으로써 수득되는 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 모발 성장 촉진용 화장료 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention is characterized in that the hair is characterized by containing the extract obtained by supercritical extraction by flowing supercritical carbon dioxide into a mixture composed of walnut shells and walnut crushed in a first form as an active ingredient. Provided is a cosmetic composition for promoting growth.

또한, 본 발명은 제2형태로 파쇄된 호두껍질 및 호두알로 조성되는 혼합물에 초임계 이산화 탄소를 흘려주어 초임계 추출하는 단계; 상기 추출 후, 추출물을 제거하고 추출박을 회수하는 단계: 및 상기 회수된 추출박에 20~40%의 부틸렌 글리콜 수용액을 추출박 1 중량부에 대비 1.8~2.8 중량부 만큼 첨가한 후, 20~24℃에서 800~1200Mpa으로 20~28시간 동안 추출하는 단계;로부터 수득되는 수용성 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 모발 성장 촉진용 화장료 조성물을 제공한다.In addition, the present invention is a supercritical extraction step by flowing supercritical carbon dioxide in the mixture consisting of walnut shells and walnut eggs crushed in a second form; After the extraction, the step of removing the extract and recovering the extraction foil: 20 to 40% butylene glycol aqueous solution of 20 to 40% by weight to 1 part by weight of the extraction foil to the recovered extraction foil, and then 20 Extracting for 20 to 28 hours at 800 ~ 1200Mpa at ~ 24 ℃; provides a cosmetic composition for promoting hair growth, characterized in that it contains a water-soluble extract as an active ingredient.

이하 본 발명의 과제의 해결 수단에 대해 상세히 설명하고자 한다.
Hereinafter will be described in detail for solving the problems of the present invention.

본 발명은 호두로부터 유용한 생리활성 물질을 효과적으로 추출하여 실질적인 모발 성장촉진 효과를 발휘하는 화장료 조성물을 제조하기 위한 것이다.The present invention is to produce a cosmetic composition that effectively extracts useful bioactive substances from walnuts to exhibit a substantial hair growth promoting effect.

본 발명 제1형태의 모발 성장 촉진용 화장료 조성물은 파쇄된 호두껍질 및 호두알로 조성되는 혼합물에 초임계 이산화 탄소를 흘려주어 초임계 추출함으로써 수득되는 추출물(이하 '호두 오일' 또는 '호두 유용성 추출물'이라고도 함)을 유효성분으로 함유한다.The cosmetic composition for promoting hair growth of the first aspect of the present invention is obtained by supercritical extraction by pouring supercritical carbon dioxide into a mixture composed of crushed walnut shells and walnut eggs (hereinafter, 'walnut oil' or 'walnut oil extract') ), As an active ingredient.

또한, 본 발명 제2형태의 모발 성장 촉진용 화장료 조성물은 파쇄된 호두껍질 및 호두알로 조성되는 혼합물에 초임계 이산화 탄소를 흘려주어 초임계 추출하는 단계; 상기 추출 후, 추출물을 제거하고 추출박을 회수하는 단계; 및 상기 회수된 추출박에 20~40%의 부틸렌 글리콜 수용액을 추출박 1 중량부에 대비 1.8~2.8 중량부 만큼 첨가한 후, 20~24℃에서 800~1200Mpa으로 20~28시간 동안 추출하는 단계;로부터 수득되는 수용성 추출물(이하, '호두 수용성 추출물'이라고도 함)을 유효성분으로 함유한다.
In addition, the cosmetic composition for promoting hair growth of the second aspect of the present invention comprises the steps of supercritical extraction by flowing supercritical carbon dioxide into a mixture composed of crushed walnut shells and walnut eggs; After the extraction, removing the extract and recovering the extraction foil; And 20 to 40% by weight of the aqueous solution of butylene glycol to the recovered extraction foil by adding 1.8 to 2.8 parts by weight relative to 1 part by weight of the extraction foil, followed by extraction for 20 to 28 hours at 800 ~ 1200Mpa at 20 ~ 24 ℃ It contains a water-soluble extract (hereinafter referred to as 'walnut water-soluble extract') obtained from the step; as an active ingredient.

상기로부터 본 발명의 제2형태로부터 수득된 호두 수용성 추출물에 대한 세포 독성을 측정한 결과, 일반 유기용매 추출물보다 세포 독성이 적어 피부 안전성이 우수한 것을 확인할 수 있었고, 세포 증식효과도 일반 유기용매 추출물보다 우수함을 확인할 수 있었다.As a result of measuring the cytotoxicity of the water-soluble walnut extract obtained from the second embodiment of the present invention from the above, it was confirmed that the cytotoxicity is less than that of the general organic solvent extract, the skin safety is superior, and the cell proliferation effect is also higher than that of the general organic solvent extract. It was confirmed that excellent.

또한, 본 발명으로부터 수득된 호두 수용성 추출물은 0.5% 처리 농도에서 50% 이상의 항산화활성을 나타내고, 화장품 소재로 사용되는 세이지 추출물보다 우수한 항염효과를 나타냈으며, C57BL6 마우스를 이용한 모근활성 및 발모효과 실험결과 대조군 대비 발모효과가 우수하였다. In addition, the water-soluble extract of walnut obtained from the present invention showed more than 50% antioxidant activity at 0.5% treatment concentration, showed an excellent anti-inflammatory effect than the sage extract used as a cosmetic material, hair root activity and hair growth effect using C57BL6 mice The hair growth effect was superior to the control group.

또한, 상기의 본 발명 제1형태 및 제2형태로부터 각각 수득된 호두 오일 및 호두 수용성 추출물을 이용하여 화장료 조성물을 제조한 후, C57BL6 마우스에 도포하여 발모효과를 측정한 결과, 모근을 활성화시켜 우수한 발모효과를 발휘함을 확인할 수 있었다.     In addition, after preparing a cosmetic composition using the walnut oil and walnut water-soluble extracts obtained from the first and second embodiments of the present invention, and applied to the C57BL6 mouse to measure the hair growth effect, it activates the hair roots and excellent It was confirmed that the hair growth effect.

한편, 본 발명의 제1형태 또는 제2형태에 기재된 파쇄된 호두껍질과 호두알의 혼합물은 바람직하게 호두껍질 1 중량부에 대해 호두알 0.5~1.5 중량부가 혼합되어 조성되는 것이 좋다.
On the other hand, the mixture of the crushed walnut shell and the walnut egg according to the first or second aspect of the present invention is preferably composed by mixing 0.5 to 1.5 parts by weight of walnut eggs with respect to 1 part by weight of the walnut shell.

본 발명에서는 호두를 초임계 추출 또는 초고압 추출함으로써 모발 생장 촉진에 유용한 생리활성물질이 일반 유기용매 추출보다 다량으로 함유된 호두 추출물을 제조할 수 있는데, 이를 이용하여 화장료 조성물을 제조한 결과, 모근을 활성화하여 실질적인 발모효과가 발휘됨을 확인할 수 있었다.
In the present invention, by extracting the walnut supercritical extraction or ultra-high pressure can be produced a walnut extract containing a bioactive material useful for promoting hair growth than a conventional organic solvent extraction, as a result of preparing a cosmetic composition, hair roots It was confirmed that the actual hair growth effect is exerted by activation.

도 1은 본 발명의 호두 수용성 추출물에 대한 세포독성을 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명 호두 수용성 추출물의 세포 증식 효과를 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명 호두 수용성 추출물의 항산화 효과를 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명 호두 수용성 추출물의 항염 효과를 나타낸 도이다.
도 5는 본 발명 호두 유용성 추출물(호두 오일) 및 호두 수용성 추출물의 모발성장 효과를 나타낸 도이다.
도 6은 본 발명 호두 유용성 추출물(호두 오일) 및 호두 수용성 추출물의 모낭조직 활성화 효과를 나타낸 도이다.
도 7은 본 발명의 호두 수용성 추출물을 함유하는 모발 성장 촉진용 화장료 조성물(실시예 3)을 쥐의 피부에 처리한 후, 모발 성장 상태를 관찰한 도이다.
도 8은 본 발명의 호두 수용성 추출물을 함유하는 모발 성장 촉진용 화장료 조성물(실시예 3)을 쥐의 피부에 처리한 후, 모낭조직 상태를 관찰한 도이다.
1 is a diagram showing the cytotoxicity to the water-soluble extract of walnut of the present invention.
Figure 2 is a diagram showing the cell proliferation effect of the present invention walnut water-soluble extract.
Figure 3 is a diagram showing the antioxidant effect of the present invention water-soluble walnut extract.
Figure 4 is a view showing the anti-inflammatory effect of the present invention walnut water-soluble extract.
Figure 5 is a diagram showing the hair growth effect of the present invention walnut oil soluble extract (walnut oil) and walnut water-soluble extract.
Figure 6 is a diagram showing the hair follicle activation effect of the present invention walnut oil-soluble extract (walnut oil) and walnut water-soluble extract.
Figure 7 is a view of the hair growth state after the hair growth promoting cosmetic composition (Example 3) containing a water-soluble extract of walnut of the present invention to the mouse skin.
8 is a diagram illustrating the state of hair follicle tissue after treating the skin of rats with a cosmetic composition (Example 3) for promoting hair growth containing a walnut water-soluble extract of the present invention.

이하, 본 발명의 내용에 대해 하기 실시예에서 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 이와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.
Hereinafter, the content of the present invention will be described in more detail in the following examples, but the scope of the present invention is not limited only to the following examples, and includes modifications of equivalent technical ideas.

실시예Example 1: 호두 유용성 추출물 제조 1: Walnut Soluble Extract Preparation

호두껍질과 호두알(1:1 비율, 총 400g)을 파쇄한 후 초임계추출기(SCF, Korea.)를 이용하여 CO2를 40bar/hr의 속도로 주입하면서 3시간 동안 추출하여 호두 초임계 추출물을 수득하였다Walnut shell and walnut egg (1: 1 ratio, total 400g) and then walnut supercritical extract by extracting for 3 hours while injecting CO 2 at a rate of 40bar / hr using a supercritical extractor (SCF, Korea.) Obtained

추출 수율은 처음 호두 양의 13.20%(55.80g)이었는데, 추출된 호두 유용성 추출물(이하 '호두 오일'이라고 칭함)은 400 mesh 필터를 이용하여 불순물을 제거하여 실험에 이용하였다.The extraction yield was 13.20% (55.80g) of the first walnut amount, the extracted walnut oil extract (hereinafter referred to as 'walnut oil') was used in the experiment to remove impurities using a 400 mesh filter.

실시예Example 2: 호두 수용성 추출물 제조 2: Walnut Water Soluble Extract Manufacturer

상기 실시예 1에서 호두 오일을 추출하고 남은 추출박 300g에 30% 부틸렌 글리콜(butylene glycol) 수용액 700g을 혼합하여 초고압추출기(TSF-10, japan)를 이용하여 온도 22℃, 1000mPa의 조건으로 24시간 동안 추출하였다. 이 후, 추출액을 회수하고 400 mesh로 1차 필터한 후, 제균하여 750g(수율 75%)의 추출물을 얻었다. 이때, 얻어진 추출물의 건조 잔량은 0.2% 이었으며, 당 농도는 30 brix°이었다.
Extract the walnut oil in Example 1 and mixed with 300g of the remaining extraction foil 300g 30% butylene glycol aqueous solution 700g using an ultra-high pressure extractor (TSF-10, Japan) at a temperature of 22 ℃, 1000mPa 24 Extraction over time. Thereafter, the extract was recovered, first filtered with 400 mesh, and then sterilized to obtain an extract of 750 g (yield 75%). At this time, the remaining amount of the dried extract was 0.2%, the sugar concentration was 30 brix °.

실험예Experimental Example 1: 호두 수용성 추출물의 세포독성 측정( 1: Determination of Cytotoxicity of Water-Soluble Extracts from Walnuts inin vitroin vitro ))

피부 진피층을 구성하는 섬유아세포에 시료를 처리하고 24시간 후 MTT assay를 측정하여 세포 생존율을 평가하였다.The cells were treated with fibroblasts constituting the dermal dermal layer, and cell viability was evaluated by measuring MTT assay after 24 hours.

측정 결과(도 1), 초고압추출로 얻어진 호두 수용성 추출물이 일반 유기용매 추출물(70% 에탄올 추출물)보다 세포 독성이 적어 피부에 안전성이 우수한 것으로 확인할 수 있었다.
As a result of the measurement (FIG. 1), it was confirmed that the water-soluble extract of walnut obtained by ultra high pressure extraction has less cytotoxicity than the general organic solvent extract (70% ethanol extract) and has excellent safety on skin.

실험예Experimental Example 2: 호두 수용성 추출물의 섬유 아세포에 대한 세포 증식효과 측정( 2: Measurement of Cell Proliferation Effect of Fibrous Cells of Walnut Water-Soluble Extracts inin vitroin vitro ))

피부 진피층을 구성하는 섬유 아세포에 시료를 처리하고 48시간 후 MTT assay를 측정하여 세포 증식 효과를 측정하였다.Samples were treated to fibroblasts constituting the dermal dermal layer, and 48 hours later, MTT assay was used to measure cell proliferation effects.

측정 결과(도 2), 초고압 추출로 얻어진 호두 수용성 추출물이 유기용매 추출물(70% 에탄올 추출물)보다 약 25~30% 정도 높은 세포증식 촉진 효과를 나타내는 것으로 확인할 수 있었다. As a result of the measurement (FIG. 2), it was confirmed that the water-soluble extract of walnut obtained by ultra high pressure extraction showed about 25-30% higher cell growth promoting effect than the organic solvent extract (70% ethanol extract).

상기의 결과로부터, 본 발명의 초고압 추출기술을 이용할 경우, 호두로부터 피부에 유용한 생리 활성 물질을 효과적으로 추출할 수 있음을 추론할 수 있었다.
From the above results, it can be inferred that when the ultra-high pressure extraction technique of the present invention is used, physiologically active substances useful for skin can be effectively extracted from walnuts.

실험예Experimental Example 3: 호두 수용성 추출물의 항산화 효과 측정( 3: Determination of Antioxidant Effect of Water-Soluble Extracts from Walnuts inin vitroin vitro ))

DPPH법으로 호두 수용성 추출물의 항산화효과를 측정하였다.The antioxidant effect of walnut soluble extract was measured by DPPH method.

측정 결과(도 3), 호두 수용성 추출물의 처리 농도 0.5%에서 50% 이상의 항산화활성을 나타냈는데, 이로부터 세포 노화억제에 효과가 있을 것으로 추론할 수 있었다.
As a result of the measurement (FIG. 3), the treatment concentration of the water-soluble extract of walnut showed an antioxidant activity of 50% or more. From this, it could be inferred that it would be effective in inhibiting cellular senescence.

실험예Experimental Example 4: 호두 수용성 추출물의 항염효과 측정( 4: Determination of anti-inflammatory effect of walnut soluble extract ( inin vitroin vitro ))

ELISA법을 이용하여 호두 수용성 추출물의 IL-1a 억제효과를 측정하였다.The IL-1a inhibitory effect of walnut soluble extract was measured by ELISA.

측정 결과(도 4), 처리 농도 1.6%에서 약 20% 정도가 억제됨을 확인하였고, 화장품의 항염 소재인 세이지 추출물보다 우수한 IL-1a 억제효과를 나타냄을 확인할 수 있었다.
As a result of the measurement (FIG. 4), it was confirmed that about 20% was suppressed at 1.6% of the treatment concentration, and exhibited a superior IL-1a inhibitory effect than the sage extract, which is an anti-inflammatory material of cosmetics.

실험예Experimental Example 5: 호두 오일 및 호두 수용성 추출물의 모발 성장  5: Hair Growth of Walnut Oil and Walnut Water Soluble Extract 촉진능Promotion 및 모낭 조직 변화 측정 And changes in hair follicle tissue

동물 입수 후 수의학적 검역을 실시하고, 7일간의 순화기간을 두고 순화 기간 중 이상이 발견되지 않은 건강한 동물만을 대상으로 순화종료 시점에 일렉트릭 크립퍼(electric clipper, ER143. Panasonic. Japan)를 이용하여 1차 제모하였다. Veterinary quarantine is carried out after the animal is obtained, and only 7 healthy animals with no acclimation period have been detected. Only at the end of acclimatization, the electric clipper (ER143. Panasonic. Japan) was used. First hair removal.

그 후, 쉐이빙 폼(shaving form, Gillette foamy sensitive. Gillette(35735378). Australia.)을 바르고, 쉐이빙 레이져(shaving razor, Gillette Venus. Gillette(46239951). U.S)를 이용하여 가로로 등쪽 경부에서 꼬리 기시부 까지의 길이와 세로로 등쪽 정중선을 기준으로 좌우 각각 1 cm 이상의 폭에 대하여 2차 제모를 실시하여 등쪽 피부색이 균질한 핑크색을 보이는 개체만을 선별하여 실험에 사용하였다. Then, shaving form (Gilet foamy sensitive. Gillette (35735378). Secondary hair removal was performed on the width of the dorsal midline up to 1 cm or more from the left and right of the dorsal midline, and only the individuals with homogeneous pink color on the dorsal skin were selected and used in the experiment.

군 분리는 제모 다음날 실시하였고, 제모과정에서 찰과 및 심한 발적이 발생하지 않은 동물만을 이용하여 체중 기준으로 Z배열법에 따라 분리하였다.Group separation was performed the next day of hair removal, and was separated by Z-array method on the basis of weight using only animals that did not cause abrasion and severe redness during hair removal.

시험에 사용되는 동물의 개체식별은 테일 마킹(tail marking)법을 사용하도록 하였으며, 각 사육 상자에는 시험번호, 시험군, 동물번호가 기입된 라벨(lable)을 부착하였다. The individual identification of the animals used in the test was to use the tail marking method (tail marking), and each breeding box was attached with a label containing the test number, test group, and animal number.

시료의 투여방법은 제모 부위에 붓을 댄 후, 시험물질 200 ㎕를 마이크로피펫(micropipette)을 이용하여 붓끝에 분주한 후, 상하 방향으로 제모 부위 전체에 균질하게 1일 1회 21일간 도포하는 방법으로 수행하였다(G1:음성대조군-완충용액, G2: 양성대조군-3% 미녹시딜, G3: 5% 호두 오일, G4: 5% 호두 수용성 추출액).In order to administer the sample, after applying a brush to the epilation site, 200 μl of the test substance is dispensed to the tip of the brush using a micropipette, and then uniformly applied to the entire epilation site once a day for 21 days in the vertical direction. (G1: negative control-buffer, G2: positive control-3% minoxidil, G3: 5% walnut oil, G4: 5% walnut aqueous extract).

순화기간 중 순화 2일째 및 7일째 체중을 측정하였고, 7일째의 체중 측정 자료를 이용하여 군 분리를 수행하였으며, 시험기간 중 주 1회 체중을 측정하였다. 체중측정은 시험물질 도포 전 일정한 시간에 실시하였다. Body weight was measured on the 2nd and 7th days of the acclimation period, group separation was performed using the 7th day weight data, and body weight was measured once a week during the test period. Body weight measurement was performed at a certain time before application of the test substance.

실험 개시 후 주 1회 일정량의 사료와 음수를 일정한 시간 사이에 공급하고 익일 같은 시각에 잔량을 측정하여 케이지(cage)당 동물수로 나눔으로써 개체 당 1일 사료 및 음수 섭취량을 계산하였다. After the start of the experiment, a daily amount of feed and drinking water was supplied between a certain time, and the remaining amount was measured at the same time the next day and divided by the number of animals per cage (cage) to calculate the daily food and drinking intake per subject.

모든 실험 결과는 '평균치±표준편차'로 표시하였고, 모든 자료들에 대해 분산의 동질성 비교를 위해 'Turkey test'를 실시하였으며, 분산이 동질성을 갖는 경우 ANOVA(one-way analysis of variance)를 실시하여, 유의성이 관찰되면 대조군과의 유의차가 있는 시험군을 알아내기 위하여 'Dunnett's t-test'를 실시하였다. All test results were expressed as 'mean ± standard deviation', 'Turkey test' was performed to compare the homogeneity of variance for all data, and if the dispersion was homogeneous, one-way analysis of variance (ANOVA) was performed. When significance was observed, 'Dunnett's t-test' was performed to find a test group with significant differences from the control group.

마우스는 시험개시 후 10일 종료 후 시점에서 3 마리, 시험 종료일(21일 후)에 3 마리씩 부검하였으며, 시료 도포 부위를 해부기를 이용하여 적출한 후 포르말린(formalin)으로 고정하였다. 단계별로 알콜(alcohol)과 자일렌(xylene)으로 탈수 처리한 후 파라핀으로 포매하고, 조직절편기를 이용하여 5㎛의 절편을 만들어 다시 알콜(alcohol)과 자일렌(xylene)으로 파라핀을 제거하였다.  Mice were autopsied at 3 rats at the end of 10 days after the start of the test and 3 rats at the end of the test (after 21 days), and the sample application site was extracted using an anatomical apparatus and fixed in formalin. Step by step dehydration with alcohol (alcohol) and xylene (xylene) and then embedded in paraffin, using a tissue slicer to make a 5㎛ section to remove the paraffin with alcohol (alcohol) and xylene (xylene) again.

이 후, H&E(Hematoxylin & Eosin) 염색하여 광학현미경으로 모낭조직의 조직학적 변화를 관찰하였다.Thereafter, H & E (Hematoxylin & Eosin) staining was used to observe the histological changes of the hair follicle tissue by light microscopy.

(1) 모발 성장 상태 변화 측정(1) hair growth state change measurement

제모 후 7, 10, 17, 21일 총 4회에 걸쳐 디지털 카메라(Canon EOS 30D. Canon. Japan)를 이용하여 사진 촬영을 하였는데, 동물실 조명의 영향을 최소화하기 위해 지정된 장소(SPF-238호)의 200~300lux 실광 하 사진대(Copy stand CS-30. LPL. Japan)에서 사진촬영을 하였다.   After depilation, I took a photo using a digital camera (Canon EOS 30D.Canon. Japan) four times a day, 7, 10, 17, 21, and was designated to minimize the effect of lighting in the animal room (SPF-238). The photographs were taken at 200 ~ 300 lux real-time photo table (Copy stand CS-30.LPL. Japan).

매 사진촬영시 조건으로 피사체와의 거리는 70cm로 동일하게 하였으며, 렌즈 규격(Canon zoom lens, EF 28-105mm 1:3.5-4.5Ⅱ) 및 모드(mode) 조건은 오토 모드(auto mode, AI focus on, 중앙 피사체 focus, auto white balance, flash)로 하여, 1504x1000의 디지털 이미지(digital image)로 사진 촬영하였으며, jpg 파일(file)로 저장하였다. The distance to the subject was the same as 70cm for each photographing condition.The lens size (Canon zoom lens, EF 28-105mm 1: 3.5-4.5Ⅱ) and the mode condition were auto mode (AI focus on) , The center subject focus, auto white balance, flash), was taken as a digital image (digital image) of 1504x1000, and saved as a jpg file (file).

사진 촬영은 당일 시험물질 도포 전에 실시하였다. 사진촬영에 사용되는 동물은 디메틸 에테르(dimethyl ether)를 이용하여 가볍게 마취하였다. Photographs were taken before the test material application on the day. Animals used for photography were lightly anesthetized with dimethyl ether.

측정 결과(도 5), 음성대조군에 비해 양성 대조군, 5% 호두 수용성 추출물 및 5% 호두 오일을 도포한 시험군의 모발 성장 상태가 우수한 것으로 확인되었다. 도포 10일 후, 음성대조군에서는 모발 성장이 미흡하였으나, 호두 오일 및 호두 수용성 추출액을 도포한 시험군에서는 우수한 모발 성장 효과가 나타났고, 특히 21일 후의 호두 오일을 도포한 시험군은 몸통 전체에 모발이 난 것을 확인할 수 있었다. As a result of the measurement (FIG. 5), it was confirmed that the hair growth state of the positive control group, 5% walnut water-soluble extract and 5% walnut oil applied test group was superior to the negative control group. After 10 days of application, hair growth was insufficient in the negative control group, but the test group coated with walnut oil and walnut water-soluble extract showed excellent hair growth effects. Especially, the test group coated with walnut oil after 21 days showed the entire hair. I could confirm this.

(2) 모낭조직의 변화 측정(2) measuring changes in hair follicle tissue

시험 시작 10일 차, 21일 차에 각 군별로 실험동물을 경추 탈구하여 치사시킨 후, 최초 제모 부위의 조직을 적출하였다. 절취된 조직은 필터 페이퍼(filter paper, Watman No.2 185 mm, Watman, Germany)를 이용하여 펼친 상태로 10% 중성 포르말린에서 1~2일간 고정하였다. 각 개체별로 넓이 0.5㎝, 길이 2.5㎝의 피부조직 절편 4개를 얻었는데, 4개의 피부조직을 하나의 쌍으로 하여 일반적 조직처리 과정을 거쳐 파라핀 블럭(paraffin block)으로 제작한 후, 5㎛ 두께로 박절하여 H&E 염색(stain)을 실시하였다. 조직 절편은 광학 현미경하(JP/BX51. Olympus. Japan)에서 피부 두께, 모낭 수, 모구 크기, 깊이와 같은 모낭 조직의 조직학적 변화를 관찰하였다.On the 10th and 21st day of the test, the experimental animals were dislocated and killed by cervical spine in each group, and the tissue of the first epilation site was extracted. The cut tissues were fixed for 1 to 2 days in 10% neutral formalin unfolded using filter paper (Watman No. 2 185 mm, Watman, Germany). Four sections of skin tissue 0.5 cm wide and 2.5 cm long were obtained for each individual. Four skin tissues were paired and fabricated into paraffin blocks after general tissue treatment. The H & E stain was performed by cutting into H. Tissue sections were examined for histological changes in hair follicle tissue such as skin thickness, hair follicle number, hair follicle size, and depth under an optical microscope (JP / BX51. Olympus. Japan).

측정 결과(도 6), 호두 오일 및 호두 수용성 추출물에서 모근세포(검정색)이 길게자란 것을 확인할 수 있었는데, 특히, 호두 오일을 처리한 군에서 모근세포의 성장이 우수하게 나타났다. As a result of the measurement (FIG. 6), it was confirmed that the hair root cells (black) were elongated in the walnut oil and the walnut water-soluble extract. In particular, the hair root cells were excellent in the growth of the walnut oil-treated group.

상기의 결과로부터 호두 오일 및 호두 수용성 추출물은 모근활성의 촉진을 통한 발모효과가 있음을 추론할 수 있었다.
From the above results, it can be inferred that walnut oil and walnut soluble extract have a hair growth effect through promoting hair root activity.

실시예Example 3:  3: 헤어hair 토닉액Tonic solution 제조 Produce

호두 수용성 추출물 및 호두 유용성 추출물을 이용하여 하기 표 1과 같이 조성된 헤어토닉액을 제조하였다.Using a walnut water-soluble extract and walnut oil-soluble extract was prepared a hair tonic liquid as shown in Table 1.

원료명Raw material name 중량%weight% 엘-멘톨L-menthol 0.300.30 살리실산Salicylic acid 0.250.25 디-판테놀Di-panthenol 0.200.20 호두 수용성 추출물Walnut Water Soluble Extract 5.005.00 호두 유용성 추출물 Walnut Soluble Extract 5.005.00 디소듐이디티에이Disodium ID 0.050.05 메칠파라벤Methylparaben 0.100.10 피이지-60하이드로제네이티드캐스터오일Fiji-60 Hydrogenated Castor Oil 0.500.50 프로필렌 글리콜Propylene glycol 5.005.00 에탄올ethanol 25.0025.00 생약 추출물Herbal extract 15.0015.00 트리에탄올아민Triethanolamine 0.20.2 정제수Purified water 잔량Balance 합계Sum 100100

실험예Experimental Example 6: 양모 면적 및 조직학적 변화 측정 6: Measurement of wool area and histological changes

상기 실시예 3에서 제조된 헤어 토닉액의 양모효과를 측정하였다(상기 실험예 5 방법 참조). The wool effect of the hair tonic solution prepared in Example 3 was measured (see Experimental Example 5 Method).

(1) 양모 면적 측정(1) wool area measurement

상기 실험예 5에 기재된 방법대로 제모 후 7, 10, 17, 21일 총 4회에 걸쳐 디지털 카메라(Canon EOS 30D. Canon. Japan)를 이용하여 사진을 촬영하였다. Photographs were taken using a digital camera (Canon EOS 30D. Canon. Japan) four times a day, 7, 10, 17, and 21 days after depilation according to the method described in Experimental Example 5.

사진 평가에서 얻어진 이미지 파일(image file)을 대상으로 평가 시점별로 'Image Analysis Software(Image Partner. SaramSoft. Korea)'를 이용하여 전체 제모 면적 중 모발이 성장한 부분의 비율을 백분율(%)로 산출하였다.   Using the Image Analysis Software (Image Partner. SaramSoft. Korea) for each image evaluation point, the percentage of hair growth in the total area of hair removal was calculated as a percentage (%) of the image file obtained in the photo evaluation. .

Figure pat00001
Figure pat00001

실험동물의 제모한 날을 0일로 하여 7, 10, 17, 21일의 총 4회간 찍은 사진에 대해 발모의 정도를 Image J 를 사용하여 분석하였다(표 2 참조).The degree of hair growth was analyzed using Image J on the four photographs taken on 7, 10, 17, and 21 days on the day of depilation of the experimental animals (see Table 2).

모발성장정도Hair growth 점수화Scoring 판정Judgment 0~20%0-20% -- 효과 없음no effect 21~40%21-40% ± ± 미약weak 41~60%41-60% ++ 양호Good 61~80%61-80% ++++ 우수함Excellent 81%이상Over 81% ++++++ 매우 우수함Very good

분석결과(도 7), 생리식염수만을 도포한 대조군에서는 7일째에 평균 38.63±18.79% 면적에서, 21일째에 평균 73.27±40.83% 면적에서 모낭의 성장이 나타났다.  As a result of the analysis (FIG. 7), the control group coated with physiological saline only showed hair follicle growth at an average area of 38.63 ± 18.79% at 7 days and an average of 73.27 ± 40.83% area at 21 days.

양성 대조물질인 미녹시딜(Minoxidil)은 7일째에 평균 69.64±14.98% 면적에서, 17일째에 평균 90.59±3.40% 면적에서 모낭의 성장이 나타났다. Minoxidil, a positive control, showed hair follicle growth at an average of 69.64 ± 14.98% on day 7 and 90.59 ± 3.40% on day 17.

실시예 3의 경우, 7일째에 평균 37.83±18.80% 면적에서, 21일째에 평균 82.5±3.71% 면적에서 모낭의 성장이 나타났다. In Example 3, hair follicle growth was observed at an average area of 37.83 ± 18.80% on day 7, and an average 82.5 ± 3.71% area on day 21 .

양모 면적을 기준으로 모낭의 성장을 비교한 결과, 실시예 3의 헤어 토닉액이 생리식염수만을 도포한 대조군에 비해 빠른 육모 효과를 보임을 확인할 수 있었다. As a result of comparing the growth of hair follicles on the basis of the wool area, it was confirmed that the hair tonic solution of Example 3 showed a faster hair growth effect than the control group coated with physiological saline only.

(2) 조직학적 변화 측정(2) Histological Change Measurement

대조군과 시험군에서 모낭의 형태학적인 변화를 살펴보기 위해 시험개시 10일, 21일째에 채취한 피부조직을 'hematoxylin-eosin'으로 염색하여 광학현미경으로 관찰하였다. To examine the morphological changes of hair follicles in the control and test groups, skin tissues collected on the 10th and 21st day of the test were stained with 'hematoxylin-eosin' and observed under an optical microscope.

측정 결과(도 8), 대조군에서는 제모 후 10일경에 모낭이 다수 형성되어 있었지만, 상피 조직층으로 자라나오지 못한 상태였으며, 그 이후에야 모근이 길게 성장하여 피부 밖으로 돌출되어 나왔다. As a result of the measurement (FIG. 8), in the control group, a large number of hair follicles were formed around 10 days after hair removal, but the hair follicles did not grow into the epithelial tissue layer.

이에 비해 미녹시딜(Minoxidil) 3% 도포군은 10일째에 이미 대조군에 비해 피부의 두께가 두껍고, 모낭의 수가 증가하였으며, 모낭조직의 길이가 길어지면서 피모가 피부의 표면으로 자라나와 있었다. On the other hand, the minoxidil 3% application group had a thicker skin, increased number of hair follicles, and increased hair follicle tissue length than the control group on the 10th day.

실시예 3은 미녹시딜(Minoxidil) 3% 도포군과 마찬가지로 대조군에 비해 피부의 두께가 두껍고, 모낭의 수가 증가하였으며, 모낭조직의 길이가 길어지면서 피모가 피부의 표면으로 자라나와 있는 것을 확인할 수 있었다. In Example 3, the thickness of the skin was increased, the number of hair follicles increased, and the length of the hair follicle tissue was increased as compared to the control group, as in the minoxidil 3% applied group.

Claims (3)

파쇄된 호두껍질 및 호두알로 조성되는 혼합물에 초임계 이산화 탄소를 흘려주어 초임계 추출함으로써 수득되는 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 모발 성장 촉진용 화장료 조성물.
A cosmetic composition for promoting hair growth, comprising extracting the supercritical carbon by pouring supercritical carbon dioxide into a mixture composed of crushed walnut shells and walnut eggs as an active ingredient.
파쇄된 호두껍질 및 호두알로 조성되는 혼합물에 초임계 이산화 탄소를 흘려주어 초임계 추출하는 단계;
상기 추출 후, 추출물을 제거하고 추출박을 회수하는 단계; 및
상기 회수된 추출박에 20~40%의 부틸렌 글리콜 수용액을 추출박 1 중량부에 대비 1.8~2.8 중량부 만큼 첨가한 후, 20~24℃에서 800~1200Mpa으로 20~28시간 동안 추출하는 단계;로부터 수득되는 수용성 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 모발 성장 촉진용 화장료 조성물.
Supercritical extraction by pouring supercritical carbon dioxide into the mixture composed of crushed walnut shells and walnut eggs;
After the extraction, removing the extract and recovering the extraction foil; And
After the addition of 1.8 to 2.8 parts by weight of 20 to 40% butylene glycol aqueous solution compared to 1 part by weight of the extracted foil, the extraction step for 20 to 28 hours at 800 ~ 1200Mpa at 20 ~ 24 ℃ Hair growth promoting cosmetic composition comprising a water-soluble extract obtained as an active ingredient.
제1항 또는 제2항에 있어서,
혼합물은,
호두껍질 1중량부에 대해 호두알 0.5~1.5중량부가 혼합되어 조성되는 것을 특징으로 하는 모발 성장 촉진용 화장료 조성물.
The method according to claim 1 or 2,
The mixture is
Hair growth promoting cosmetic composition, characterized in that 0.5 to 1.5 parts by weight of walnut shells are mixed with 1 part by weight of walnut shells.
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