KR20110115589A - 신경영양인자가 매개된 장애의 치료 - Google Patents

신경영양인자가 매개된 장애의 치료 Download PDF

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다릴 리스
안토니아 오르시
패트릭 호우슨
종퀸 시아
야어 후
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파이토팜 피엘씨
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Abstract

A/B-cis 푸로스탄, 푸로스텐, 스피로스탄 및 스티로스텐 스테로이드성 사포게닌, 및 이들의 에스테르, 에테르, 케톤 및 글리코실화 형태로부터 선택되는 물질은 항상성 통제하에서 비독성 방식으로 신경영양인자를 조절함으로써 신경영양인자(NFs), 예를 들어 BDNF 및/또는 GDNF의 자가조절 항상성을 유도하기 위해 사용되며, 상기 NFs는 피험자에게서 제한되고 감당할 수 있는 부작용을 갖는다. 적어도 하나의 상기 물질의 유효량은 피험자에게 투여되며, 특히 전반적인 신경영양인자 매개된 장애를 치료하거나 방지하는데에 사용되며, 구체적으로 신경 장애, 정신 장애, 알레르기성 장애, 면역성 장애 및 종양 장애에 사용되고, 조직(예를 들어 피부, 뼈, 눈 및 근육) 치유와 일반 피부, 뼈 눈 및 근육 건강을 도와주는 경우를 포함하는, 뉴런, 및 임의의 손상된 조직 또는 비정상적 조직의 다른 기능 또는 이와 관련된 기능의 회복 또는 정상화에 사용된다.

Description

신경영양인자가 매개된 장애의 치료{TREATMENT OF NEUROTROPHIC FACTOR MEDIATED DISORDERS}
본 발명은 신경영양인자 매개 장애, 구체적으로 신경 장애, 정신 장애, 염증성 장애, 알레르기성 장애, 면역성 장애 및 종양 장애의 치료 및 예방에 관한 것이고, 조직(예를 들어 피부, 뼈, 눈 및 근육) 치유와 일반 피부, 뼈 눈 및 근육 건강을 도와주는 경우를 포함하는, 뉴런, 및 임의의 손상된 조직 또는 비정상적 조직의 다른 기능 또는 이와 관련된 기능의 회복 또는 정상화와 관련된 비치료적 방법, 그리고 상기 관련된 화합물 및 조성물에 관한 것이다.
천연 신경영양인자(NFs)는 뉴로트로핀(neurotrophin), TGF-β-상과(TGF-β-super-family), 신경영양인자 및 뉴로킨(neurokines), 예를 들어 신경성장인자(NGF), 뇌유래신경영양인자(BDNF), 섬모신경영양인자(CNTF), 뉴로트로핀 3(NT-3), 뉴로트로핀 4(NT-4) 및 신경유래 신경영양인자(GDNF)를 포함한다. 신경영양인자는 신경영양인자 수용체(NFrs)로서 알려진 세포 수용체에 결합한다. NFr TrkA는 NGF의 효과를 매개한다. 상기 NFr TrkB는 BDNF, NT-3 및 NT-4에 의해 활성화된다. 상기 NFr TrkC는 NT-3에 의해서만 활성화된다. 상기 NFr 저 친화성 NGF 수용체(LNGFR 또는 p57)은 모든 신경영양물질계와 결합한다. 상기 GDNF에 대한 NFr은 두 개의 구성성분으로 구성되며, 상기 구성성분은 GDNF 결합 도메인(GDNF 수용체 α1(GFR α1)) 및 GFR α1에 수용체 티로신 구성성분 Ret 이다. GFR α1에 GDNF를 결합하는 것을 Ret를 활성화 한다.
천연 NFs의 비정상적 발현은 전반적인 장애에 연류되어 있으며, 추정되는 NF를 모방하거나 소분자 비-펩타이드 치료제의 활성을 활성화하는 것에 기초하는 치료법이 고안되어왔다. 이론상으로는, 소분자 비-펩타이드(비-폴리펩타이드 및 비-단백질을 포함함) 치료제는 펩티트 물질보다 더 많은 이점을 일반적으로 가지며, 이러한 이점은 펩타이드와 비교하여, 저비용 및 제조의 비교적 쉬움, 다루고 저장하기 쉬움, 감소된 내재하는 독성, 환자에게 특히 뇌에 전달하기 비교적 쉬움, 그리고 연구와 개발단계에 최적화하기 비교적 쉬운 것이다. 가능한 물질로서 NFs, NF-모사체 및 NF-개선제에 실질적으로 관심이 있음에도 불구하고, 이들의 내재하는 개발상의 어려움, 잠재적인 독성 및 다른 문제들이 이들의 가능성을 심각하게 제한하는 것으로 발견되어 왔다.
소분자 비-펩타이드의 수는 어떤 신경장애 및 정신장애를 치료하기 위해 제안되어 왔다. 이어지는 문단은 공개문헌의 일부를 강조한다. 반면에, 이러한 이전의 제안은 물질의 실질적으로 좋지 않은 부작용에 의해 모두 특정되며, 상기 부작용은 유효 투여량의 투여를 막아서, 모든 경우에서 화합물이 신경장애 및 정신 장애를 치료하거나 방지하기 위한 시판의약품을 제공하도록 개발될 수 없었다.
예를 들어, 크살리프로덴(Sanofi-Aventis) (1-(2-나프탈렌-2-일에틸)-4-[3-(트리플루오로메틸)페닐]-3,6-디히드로-2H-피리딘 히드로클로라이드; 염의 분자량: 417.5; 유리 염기(free base)의 분자량: 381)), 세로토닌 5-HT1A 수용체 작용물질은 NGF를 약간 정도 활성화시키는 것으로 이후에 발견되었다. 크살리프로덴은 루게릭병(ALS)을 위한 가능한 치료법으로서 제3상 임상실험을 완료했다고 보고되고(Drug R D. 2003, 4(6), pp. 386-388), 최근데는 알츠하이머병에 대한 가능성으로서 제3상 임상실험이 평가되었다. 반면에, 상기 5-HT1A 작용 활성은 크살리프로덴을 의약으로서의 용도를 제한하는 투여량 의존 부작용을 낳는다.
4-메틸카테콜(MW 124)은 신경영양합성을 자극한다고 보고되어왔고, 따라서 이론상으로 신경퇴화의 치료에 대한 접근법을 제공한다(Furukawa 등, Advances in Behavioral Biology, 2002, 53, pp. 233-236). 반면에, 이 물질은 유독성의 부작용을 제공하는 것을 발견했으며, 이는 아마도 신경 성장 인자(NGF)의 발현의 과다 촉진 때문일 것이다.
레티노산은 혈청 및 NGF의 신경 수준을 증가시킨다고 보고되어왔고, 당뇨병을 앓는 마우스에서 신경병증을 막는다고 보고되어왔으며(Arrieta 등, European Journal of Clinical Investigation, 2005, 35, pp. 201-207), 상기 레티노산은 신경퇴화성 장애에 대한 가능한 치료법일 것이라고 제안되어왔다(Mey 및 McCaffery, The Neuroscientist, 2004, 10, pp. 409- 420). 반면에, 이런 물질은 심각하게 투여량을 제한하는 유독성의 부작용을 갖는다고 알려져 있다.
AMPA 수용체 강화제(AMPAkines)는 글루탐산 수용체 조절자이며, 일부는 생체조건에서 BDNF 발현을 증가시키는 것으로 보여져 왔다(Mackowiak 등, Neuropharmacology, 2002, 43, pp. 1-10). 나아가, 두 개의 AMPAkines(CX614 및 CX546)는, AMPAkine에 지속적인 노출에도 불구하고, 투여 후 6 내지 12시간에 BDNF mRNA 수준을 최대로 증가시키고, 이후에 투여 후 48시간에 대조군 수준과 비슷한 수준으로 감소 된다고 보여져 왔다(Lauterborn 등, Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 2003, 307, pp. 297-305). 몇몇의 AMPAkines는 신경의 장애를 위해 개발되어 왔거나, 현재에도 개발에 있다(Price 등, Pharmacology and Therapeutics, 2007, 115, pp. 292-306). 반면에, 이러한 물질 중 적어도 일부는 유독성의 부작용을 가진다.
선택성 세로토닌 재흡수 억제제(SSRIs) 및 모노아민 산화 효소 억제제(MAOIs)로서 일차 작용을 갖는 것을 포함하는 어떤 항우울제는, 생체내에서 BDNF mRNA 수준을 증가시킨다고 보여져왔다(Malberg 및 Blendy, Trends in Pharmacological Sciences, 2005, 26, pp. 631-638; Martinez-Turrillas 등, Neuropharmacology, 2005, 49, pp. 1178-1188). 문헌[Castren, "Neurotrophic effects of antidepressant drugs", Current Opinion in Pharmacology, 2004, 4, pp. 58-64]도 참조하여라. 반면에, 이러한 모든 물질은 원치 않는 많은 부작용을 가진다고 잘 알려져 있다.
이뮤노필린(Immunophillins)은 뉴로트로핀의 활성을 강화하는 것으로 보여지는 면역억제제의 부류이다(Price 등, Pharmacology and Therapeutics, 2007, 115, pp. 292-306). FK506 (타크로리무스(Tacrolimus))는 생체내에서 BDNF mRNA 수준(Zawadzka 및 Kaminska, Molecular and Cellular Neuroscience, 2003, 22, pp. 202-209) 및 BDNF와 GDNF 단백질 수준(Tanaka 등, Brain Research, 2003, 970, pp. 250-253)을 증가시키는 것을 보여주었다. 반면에, 전체 부류는 심각한 투여량-제한 유독성의 부작용을 가진다.
N4-(7-클로로-2-[(E)-2-(2-클로로-페닐-비닐)]-퀴놀린-4-일)-N,N'-디에틸-펜탄-l,4-다이온(XIB4035), a GFR*-1 수용제 작용물질은 농도 의존 방식으로 신경돌기 성장을 촉진한다고 보고되어 왔다(Tokugawa 등, Neurochemistry International, 42, 1, January 2003, pp. 81-86). 반면에, 이 분자 역시 투여량 제한 부작용을 가진다.
따라서, 이러한 알려진 소분자 물질은 NF를 모방하거나 어느 정도까지 효과를 활성화하지만, 임사전의 모델 또는 임상의 모델에서 투여량에 의존하는 좋지 않은 부작용을 가진다. 상기 부작용은 표면화된 유독성을 그들 자신에게 일반적으로 발생시킬 수 있다. 이런 심각성은 치료에서 상기 물질의 가능한 활용을 제한한다.
개발에 대한 일반적인 필요성이 존재하고, 특히 신경장애 및 정신 장애의 치료를 위한 비-독성, 소분자 비-펩타이드 생체활성 물질의 개발에 대한 일반적인 필요성이 존재한다.
WO-A-99/16786, WO-A-99/48482, WO-A-99/48507, WO-A-01/23407, WO-A-01/23408, WO-A-02/079221, WO-A-03/082893, WO-A-2005/105108, WO-A-2005/105825 및 WO- A-2006/048665, 상기 공개문헌은 참조로 본 명세서에 포함되며, 이들은 인지기능장애 및 어떤 다른 신경 장애와 정신장애의 치료에 대한 어떤 소분자 스테로이드의 사용과 관련이 있다. 일반적으로, 이러한 활성 물질은 AJB-cis 푸로스탄, 푸로스텐, 스피로스탄 또는 스피로스텐 스테로이드성 사포게닌, 및 이들의 에스테르, 에테르, 케톤 그리고 글리코실화 형태이며, 상기 표면 "사포게닌"은 모든 E 및/또는 F 링이 개반된 유도체를 포함하는 것으로 이해되며, 예를 들어, 상기 사포게닌의 수도사포게닌 및 디히드로수도사포게닌 형태를 포함한다. 상기 화합물의 불포화된(-엔) 형태에서, 하나 이상의 이중 결합은 AJB-cis 모티프에 영향을 주기 않는 위치에 존재한다.
WO-A-03/082893, 페이지 25, 5 내지 18번째 줄은 화합물 중 적어도 일부가 뉴런의 퇴화의 특정 양태를 늦추거나 반전시키는 것으로 발견되었다고 보고하며, 상기 양태를 늦추거나 반전시키는 것은 좋지않은 세포체 변형 및 세포돌기 위축증을 반전시키며, 뉴로트로핀, TGF-β-성과 NFs 및 뉴로킨과 같은 신경영양인자의 방출을 감소시키고, 뉴런의 유독성과 세포사멸을 감소시키는 것을 포함한다. 또한, 상기 인용문헌은 신경보호 및 수용체 손실 효과의 반전이 능동적으로 통제된 효과 라고 보고하고 있으며, 과거의 퇴화는 지속되는 퇴화에 대하여 정상인으로 반전되거나 보호함으로써 젊은 상태로 반전된다.
동일한 문헌의 페이지 26, 8 내지 15번째 줄은, 활성 물질의 생리학적 효과는 신경영양인자 또는 그들의 수용체의 합성 또는 방출을 증가시키는 능력이라고 더 보고한다. 이것은 성장인자에 대한 이러한 효과가 "시토졸 또는 핵 수용체 상의 화합물의 효과, 또는 프로모토 영역에 화합물이 결합함으로써 성장 인자에 대한 mRNA의 생산율에 직접적으로 영향을 미치거나 또 다른 물질 인자의 생산을 증가시키는 효과 때문일 수 있다"는 이론이 제시된다.
동일한 문헌의 페이지 20, 4번째 줄 부터는, 자폐성 증후군 우울증 및 정신분열증의 정신 장애를 치료하기 위한 활성물질의 사용을 설명한다.
문헌[Zhang Y 등, FEBS Letters, 19 March 2008, 582, 6판, pp. 956-960]은 참조로 본 명세서에 포함되었고, 상기 문헌은 1-메틸-4-페닐피리디늄(MPP+) 뿐만 아니라 배양 배지 중의 GDNF 함량에 의해 손상된 랫트 중뇌 도파민작동성 뉴런의 GDNF mRNA 발현을 증가시키는 것으로 보여진다고 보고하고 있고, 스미라게닌은 이런 뉴런에서 MPP+ 유도 신경의 손상과 위축을 막는 것으로 보인다고 보고하고 있다. 이 공개문헌은 본 발명자로부터 유래한 것이고, 모든 지정된 주에서 선행문헌이 아니다.
면역계 항상성에서 신경영양인자의 역할은 최근에 많은 연구의 목적이 되어왔다(예를 들어, Vega, J A 등, J. Anat. 2003, 203, pp. 1-19을 참조하고, 상기 공개문헌은 참조로 본 명세서에 포함된다). Vega 등의 공개문헌에서 더 구체적으로 설명되고, 8 페이지의 표 2에서 요약된 것과 같이, 신경영양인자는 면역계에 수반되는 전반적인 세포, 특히 B-림프구, T-림프구, 단핵구/대식세포, 호중성 백혈구, 산호성 백혈구, 호염기성 백혈구, 비만세포 및 조혈 세포뿐만 아니라, 혈소팜 및 관다발 조직과 관련한 전반적인 활성을 보여왔다. 신경영양인자의 항상성 조절은 면역계 장애를 치료하거나 방지하기 위한 사용 가능한 기술을 제공한다.
또한, 염증 및 염증성 장애와 알레르기에 대한 신경영양인자의 역할은 많은 주목을 받았다. NGF 수준은 염증반응 및 알레르기 반응 과정뿐만 아니라 면역계의 질병(Stanisz, AM & Stanisz, JA, Ann. N Y Acad. ScL, 2000, 917, pp. 268-272; Otten, U et al, Ann. N.Y Acad. ScL, 2000, 917, pp.322-330을 참조; 또한, Vega 등의 문헌에서 10 페이지, 컬럼 2, 및 11 페이지, 컬럼 1 및 2를 참조)에서 증가한다고 알려져 있다. 신경영양인자의 항상성 조절은 염증과 염증성 장애 및 알레르기 반응을 치료하거나 방지하기 위한 사용 가능한 기술을 제공한다.
잘 알려진 염증, 알레르기 및 면역 반응은 동시에 그리고 서로 연관된 방식예를 들어, 자가면역질병 및 독성, 기생충 및 다른 감염 물질에 저항하는 반응에 의해 발생할 수 있다. 신경영양인자의 항상성 조절은 이러한 질환을 치료하거나 방지하기 위한 사용 가능한 기술을 제공한다.
NGF는 혈관염 유도 류마티스 관절염에 유용한 효과를 가지고(Tuveri, M. 등, Lancet, 2000 Nov 18, 356, pp. 1739 -1740; Aloe, L., Arch. Physiol. Biochem., 2001, 109, pp. 354-356), 알레르기 또는 염증 과정 중에 신경영양인자의 과다발현을 차단하는 새로운 치료 계획으로서 고려되어 왔다(Vega 등 publication cited above, 12 페이지, 컬럼 1). 신경 장애와 관련한 상기 설명된 이유에 대하여, NGF 단백질의 사용은 소분자의 사용보다 덜 바람직하다. 신경영양인자 과다발현을 조절하기 위해서는 소분자 물질이 더 바람직할 것이다.
공개문헌 WO-A-01/64247는 참조로 본 명세서에 포함되며, 상기 문헌은 암세포 표면상의 신경영양인자 수용체, 특히 trk+ 암 세포의 발현으로 특정되는 종양 장애(암)를 치료하거나 방지하기 위한 방법을 설명한다. 상기 방법은 항-신경영양인자 물질(본 명세세어세는 항-뉴로트로핀 또는 항-NT 물질로 나타남), 예를 들어 항-NT 항체, 항-신경영양인자 안티센스 폴리뉴클레오티드 도는 항-신경영양인자 trk 돌연변이체의 유효량을 투여하는 것을 수반한다. 상기문헌은 유방암, 갑상선암, 대장암, 폐암, 난소암, 피부암, 근육암, 췌장암, 전립선암, 신장암, 생식기암, 혈액암, 면역계 조직암(예, 비장, 흉선 및 골수), 뇌암 및 말초신경계 조직 암을 포함하는 전반적인 암이 이런 방법으로 치료되거나 방지될 수 있다는 것을 명시한다. 작용의 방식에는 활성 물질이 신경영양인자에 매우 특이적으로 결합을 통해, 활성 NF 리간드를 중성화함으로써 trk 수용체의 억제를 가져온다는 것이 명시된다(5 페이지, 8 내지 10번째 줄).
문헌[Innominato, P F 등, J. Pathol., 2001, 194, pages 95-100]은 참조로 본 명세서에 포함되며, 상기 문헌은 흑색종 세포의 표면상에서의 신경영양인자 및 신경영양인자 수용체의 발현을 설명했다. 그러므로, 피부암세포, 특히 흑색종 세포는 신경영양인자 수용체 양성 암 세포의 상기 리스트에 포함될 수 있다.
신경 장애에 과한 상기 설명된 이유에 대하여, 항체, 폴리뉴클레오티드 및 항-신경영양인자 수용체 돌연변이 단백질의 사용은 소분자의 사용보다 덜 바람직하다(LeSauteur 등, Nature Biotech., 1996, 14, page 1120 참조). 신경영양인자 단백질의 작용 방식과 유사한, 수용체에 대한 결합 파트너의 조절을 통해 암 세포의 trk 수용체를 방해하기 위해, 신경영양인자의 항상성 조절을 위한 소분자 물질이 매우 바람직할 것이다.
본 발명은 상기 A/B-cis 푸로스탄, 푸로스텐, 스피로스탄 또는 스피로스텐 스테로이드성 사포게닌 물질, 및 하기 설명되는 이들의 에스테르, 에테르 케톤 및 글리코실화 형태가 비독성 방식으로 신경영양인자의 조절을 가져오고, 온전한 피험자의 정상적인 항상성 제어 과정을 그대로 둔다는 새로운 결과에 기초한다. 따라서, 상기 물질들은 약간의 부작용을 갖는 신경영양인자의 자가조절 항상성을 유도하며, 만일 약간의 부작용이 존재하면, 이는 조절될 수 있고, 유효 투여량의 투여를 막지 않는다. 필수적으로 비독성, 비-펩타이드, 소분자를 사용하는 자가조절 항상성의 유도의 -이에 의하여 건강하지 않은 상태에서 하나 이상의 신경영양인자가 좋지않은 부작용 없이(수준을 증가시키거나 감소시킴으로써) 건강한 상태로 회복시키는- 결과는 예상 밖의 놀라운 것이고, 상당한 혜택을 제공하며, 이에 대해서는 하기에서 더 구체적으로 논의될 것이다.
나아가, 우리는 상기 물질이 좋지 않은 부작용 없이 NF 이외, 예를 들어 BDNF와 GDNF의 자가조절 항상성을 유도한다는 것을 발견했다. 하나의 활성제에 의해, 하나 이상의 신경영양인자가 좋지 않은 부작용이 없이 함께 자가조절되는 항상성의 성취는 놀랍고, 이는 우리가 아는 범위에서 임의의 소분자 물질로 유일하다. 뉴런은 최적의 신경보호 및 신경회복을 위해 하나 이상의 신경영양인자를 일반적으로 요구한다고 알려져 있기 때문에, 본 발명에 따른 이 결과는 신경영양인자 매개 장애 및 관련 질환의 치료와 예방을 실질적으로 향상시키기 위해 제공된다.
또한, 신경영양인자는 피부, 각막 조직, 뼈 및 근육을 포함하는 조직의 치유에서 역할을 담당하는 것으로 알려져 있고, 일반적으로 피부, 뼈 및 근육 건강에 이롭다. 예를 들어, 문헌[Albers, K. M. 등, Neuroscientist 2007, 13, pp. 317-382]; 문헌[Asaumi, K., 등, Bone, 26(6), June 2000, pp. 625-633]; 문헌[You, L 등, Investigative Opthalmology & Visual Science, October 2001, 42(11), pp. 2496-2504]; 문헌[Cruise, B. A. 등, Developmental Biology, 271, (2004), pp. 1-10]; 문헌[Jurjus, A. 등, Burns 33 (2007), 892- 907];.문헌[Matsuda, H., 등, J. Exp. Med., 187(3), 2 February 1998, pp. 297-306]; 문헌[Menetrey, J 등, J. Bone Joint Surg (Br), 82-B(1), January 2000, pp. 131-137]; 문헌[Micera, A., 등, Cytokine & Growth Factor reviews, 18, (2007), pp. 245-256]; 문헌[Nithya, M., 등, Biochim. Biophys. Acta, 1620, (2003), pp. 25-31]; 문헌[Matsuda, H 등, J. Exp. Med. 1998, 187, pp. 297-306]; 문헌[Lambiase 등, Invest. Ophthalmol. Vision ScL, 2000, 41, pp. 1063-1069]을 참조하라. 이러한 공개문헌은 참조로 본 명세서에 포함된다.
따라서, 본 발명의 기본을 이루는 결과는 피부, 뼈, 근육 및 눈 조직(예, 가각막조직)을 포함하는 조직의 치유와 웰빙을 가능하게 한다. 그러므로, 본 발명은 임의의 손상된 조직 또는 비정상적 조직에서 뉴런의 기능 또는 이와 관련된 뉴런의 기능의 회복 또는 정상화와 또한 관련이 있고, 운동, 힘든 작업 또는 체력소모로부터 근육과 조직의 회복, 태양에 대한 노출, 바람에 대한 노출, 비에 대한 노출, 추우위에 대한 노출, 노화 및 주름의 영향으로부터 피부의 회복을 포함하는 조직() 치유 및 일반적인 피부, 뼈, 근육 건강을 도와서 인내심을 향상시키고 피로감을 감소시키는 것과 관련이 있다. 본 발명에 의해 도움을 받을 수 있는 조직 치유는 하기에서 더 구체적으로 설명되는 상처 및 화상의 치유를 제한 없이 포함한다.
본 발명의 목적은 신경영양인자가 매개된 장애를 치료하기 위함이다.
본 발명의 제 1 양태에 따르면, A/B-cis 푸로스탄, 프로스텐, 스피로스탄 및 스피로스텐 스테로이드성 사포게닌, 및 에스테르, 에테르, 케톤 및 이의 글리코실화 형태로부터 선택되는 하나 이상의 물질의 유효량을 피험자에게 투여하는 단계를포함하여, 비독소 수단 중의 피험자의 자생 신경영양인자를 생체 항상성 제어하에서 조절함으로써, 피험자의 신경영양인자(NFs)의 자가조절 항상성을 유도하는 방법이 제공된다. 상기 피험자의 자생 신경영양인자는 BDNF 및 GDNF 중 하나이거나, 둘다 일 수 있다.
본 발명의 제 1 양태의 방법은, 신경영양인자의 자가조절 항상성의 유도가 제한되고 조절가능한 부작용과 함께 일어난다는 것이다.
본 발명의 제 1 양태의 일 구체적인 바람직한 실시예에서, 유도된 항상성은 피험자의 자가 두 개 이상의 신경영양인자, 예를 들어 BDNF 및 GDNF를 함께 조절한다.
본 발명의 제 2 양태에 따르면, 비독소 수단 중의 피험자의 자생 신경영양인자를 생체 항상성 제어하에서 조절함으로써, 피험자의 신경영양인자의 자가조절 항상성을 유도하기 위하여, A/B-cis 푸로스탄, 프로스텐, 스피로스탄 및 스피로스텐 스테로이드성 사포게닌, 및 에스테르, 에테르, 케톤 및 이의 글리코실화 형태로부터 선택되는 하나 이상의 물질이 제공된다.
본 발명의 제 2 양태에 따른 사용을 위한 물질은, 신경영양인자의 자가조절 항상성의 유도가 제한되고, 조절가능한 부작용 또는 좋지 않은 부작용과 함께 일어난다는 것이다.
본 발명의 제 3 양태에 따르면, 비독소 수단 중의 피험자의 자생 신경영양인자를 생체 항상성 제어하에서 조절함으로써, 피험자의 신경영양인자의 자가조절 항상성을 유도하기 위한 방법의 사용을 위해, A/B-cis 푸로스탄, 프로스텐, 스피로스탄 및 스피로스텐 스테로이드성 사포게닌, 및 에스테르, 에테르, 케톤 및 이의 글리코실화 형태로부터 선택되는 활성제를 포함하는 조성물이 제공된다.
본 발명의 제 3 양태에 따른 사용을 위한 조성물은, 신경영양인자의 자가조절 항상성의 유도가 제한되고 조절가능한 부작용 또는 좋지 않은 부작용과 함께 일어난다는 것이다.
본 발명의 제 4 양태에 따르면, 비독소 수단 중의 피험자의 자생 신경영양인자를 생체 항상성 제어하에서 조절함으로써, 피험자의 신경영양인자의 자가조절 항상성을 유도하기 위한 약제의 제조에서, A/B-cis 푸로스탄, 프로스텐, 스피로스탄 및 스피로스텐 스테로이드성 사포게닌, 및 에스테르, 에테르, 케톤 및 이의 글리코실화 형태로부터 선택되는 물질의 사용이 제공된다.
본 발명의 제 4 양태에 따른 사용은, 신경영양인자의 자가조절 항상성의 유도가 제한되고 조절가능한 부작용 또는 좋지 않은 부작용과 함께 일어난다는 것이다.
본 발명은 좋지 않은 부작용을 제한하며, 구체적으로 신경영양인자, 예를 들어 NGF의 과유도, 과자극, 과증대와 관련된 부작용, 수용체 촉진 작용과 관련된 부작용 그리고 효소 결합 작용과 관련된 부작용을 제한한다.
본 발명은 신경영양인자 매개된 장애, 구체적으로 신경 장애, 정신 장애, 염증 장애, 알레르기 장애, 면역 장애 및 종양 장애의 치료방법과 함께 사용될 수 있으며, 임의의 손상된 조직 또는 비정상 조직에서 또는 이와 관련하여 뉴런의 기능 및 다른 기능의 복원 또는 정상화에 사용될 수 있으며, 이는 인간 및 비-인간 동물 피험자의 조직(예, 피부, 뼈, 눈 및 근융) 치유 및 일반 피부, 뼈, 눈 및 근육 건강, 그리고 관련된 비치료적 방법을 돕는 경우를 포함한다.
본 명세서에 사용된 용어 "신경영양인자 매개된"는 일반적인 의미로 이해될 것이며, 상기 용어는 신경영양인자가 장애 또는 질환의 발생, 진전 또는 영향에 기여하는 역할을 하는 것으로 이해되는 장애 및 질환을 포함한다. 따라서, 예를 들어, 현재의 증거가 신경영양인자 수용체, 이의 촉진제, 또는 신경영양인자의 다른 활성제 또는 억제제를 시사하는 장애 또는 질환은 본 발명에 따른 "신경영양인자 매개된"것으로 이해될 것이다. 이러한 장애 및 질환은 본 발명에 따른 인간 또는 비-인간 동물 피험자의 자생 신경영양인자의 항상성 조절에 대하여 반응할 것으로 기대된다.
따라서, 본 발명은 임의의 손상된 조직 또는 비정상 조직에서 정상적인 뉴런의 기능 및 다른 기능의 복원과 함께 사용될 수 있으며, 상기 손상된 조직 또는 비정상 조직은 예를 들어, 부상, 혈액의 부족, 노화 또는(피부의 경우) 주름 또는 태양, 바람 , 비, 추위, 다른 손상시키는 매질에 노출에 의해 손상된 조직(뇌조직 또는 피부, 뼈, 눈 및 근육과 같은 다른 조직 등)이 있다. 정상적인 뉴런 기능의 복원은, 중추신경계(CNS) 또는 말초신경계(PNS)의 염증과 같은 신경병증 질환 또는 뉴런의 비정상화를 정상화할 뿐만 아니라, 신경재생과 개선된 혈류를 가져오는 신경영양인자의 자가조절 항상성을 유도함으로써, 본 발명에 따라 일반적으로 달성된다.
따라서, 본 발명은 상처 치유의 도움과 함께 사용될 수 있으며, 특히 인간 및 다른 포유류의 피부 상처를 치유하는 속도 및 질을 개선하기 위해 함께 사용될 수 있다. 본 명세서에서, "상처"는 어떤 원인의 모든 병소를 포함하며, 이러한 병소는 예를 들어, 자상 및 찰과상과 같은 부상, 칼에 의한 상처, 외과적 외상, 멍, 화상, 궤양, 욕창이 있다. 만성 및 급성 상처 모두 본 발명에 의해 치료될 수 있다.
본 발명은 태아, 줄기 또는 다른 세포 치료 및 조직 이식과 함께 사용될 수 있으며, 특히 이식된 물질의 생전 또는 치료의 효능을 개선하거나 둘 다 개선하기 위해 함께 사용될 수 있다. 예시는 신체의 다른 기관에서 뇌 기능 또는 세포 기능을 개선하도록 세포 치료를 포함한다.
더 나아가, 본 발명은 피부, 뼈, 눈 및 근육과 같은 조직의 웰빙(wellbeing)과 일반적인 건강을 촉진하거나 돕기 위해, 운동, 힘든 작업 또는 체력소모로부터 근육과 조직의 회복을 촉진하기 위해, 노화, 주름 또는 태양, 바람, 비, 추위 또는 다른 손상을 주는 매질에 대한 노출의 영향으로부터 피부의 회복을 촉진하기 위해 비치료적 방법에 사용될 수 있다. 상기 조직에서 신경영양인자의 자가조절 항상성의 이득 때문에 인내심 및 근지구력을 향상시키고(예, 경쟁 스포츠, 비경쟁 스포츠에서), 피로감을 감소시킨다.
본 발명에 따르면, 물질은 온 몸에 또는 국부적으로 투여될 수 있으며, 작용부로 전달되는 것은 일반적으로 좋다고 밝혀졌다. 특히, 이에 제한되지 않지만, 경구 및 비경구 투여 경로가 적합하다고 밝혀졌고, 하기에서 더 구체적으로 설명된다.
본 명세서에서 사용된 표현 "사포게닌"은 모든 E 및/또는 F 링이 개방된 유도체를 포함하며, 이러한 예로 상기 사포게닌의 수도사포게닌 및 디히드로수도사포게닌 형태가 있으며, 이러한 유도체 또한 주입이 가능하다. 화합물의 불포화된(-엔) 형태에서, 하나 이상의 이중 결합은 A/B-cis 기조(motif)에 영향을 미치지 않는 위치에 존재한다. 사포게닌의 글리코실화 형태는 사포닌으로 보통 지칭된다.
이제 추가적인 예에 대하여, 본 발명을 지지하는 데이터는 오직 실시예와 제한되지 않는 실시예의 방식으로 설명될 것이다.
첨부되는 도면에서:
도 1은 스미라게닌(smilagenin)으로 선처리한 뉴런이 MPP+로 유래되는 손상에 대하여 뉴런을 보호하는 효과를 보여주며;
도 2는 (a) 복합근활동전위(CMAP) 진폭, (b) 그리드 테스트(grid test) 및 (c) 진행성 운동 신경 장애(pmn)에서 살아남은 마우스에 대한 사르사사포게닌의 효과를 보여주며; 그리고
도 3은 신경이 손상된 마우스에서 시간의 경과에 따른 CMAP의 (a) 진폭, (b) 잠복기 및 (c) 지속시간에 대한 사르사사포게닌, 스미라게닌 및 4-메틸카테콜의 효과를 보여준다.
도입
본원에서 소개되는 증거는 물질이 수용체 및 효소의 범위에 결합하지 않는다는 것을 보여준다(실시예 1 참조).
신경영양인자 또는 신경영양인자-수용체의 유도에 대한 활성제의 효과를 지지하는 증거는 본원에서 소개된다. 상기 증거(하기 실시예 2 및 3을 참조)는 활성이 신경영양인자 및 신경영양인자-수용체의 향상된 유전자 발현을 수반한다는 것을 보여준다. 실시예 2에서 볼 수 있듯이, 신경은 비교적 건강하며(기저 배양조직), 상기 향상된 유전자 발현은 일시적이고, 시간의 척도는 자가조절 메커니즘의 관여를 강하게 나타낸다.
실시예 3의 질병이 더 심한 상황에서, 데이터는 훨씬 더 연장된 기간 동안 증가된 유전자 발현을 보여주며, 순환 메커니즘이 온전하고 유전자 발현의 향상도는 시스템의 요구에 의존한다는 것을 보여준다.
또한, 본원에서 소개되는 증거는 활성제가 신경영양인자, 예를 들어, 구체적으로 BDNF 및 GDNF의 자가조절 항상성을 제공한다는 것을 보여준다(실시예 4 내지 7 및 18 참조). 극히 예외적인 비-펩타이드 물질에 의해 오직 신경영양인자, 예를 들어, BDNF 또는 GDNF가 함께 자가조절 정상화되는 것뿐만 아니라, 비-펩타이드 물질에 의해 두 개의 신경영양인자 예를 들어, BDNF 및 GDNF가 모두 자가조절 정상화되는 것도 특별하다. 두 개의 신경영양인자가 함께 정상화되는 것은 특히 이로운 BDNF 및 GDNF의 공동 작용성의 정상화된 조합을 가져오는 것으로 보인다.
또한, 본원에서 소개되는 증거는 활성제가 중추신경계 및 말초신경계 신경의 범위에서 신경형성을 증가시킨다는 것을 보여준다(실시예 8 참조). 중요한, 이런 신경돌기형성 효과는 외인성의 신경영양인자의 존재에 의존하지 않는다. 이는, 본 발명의 물질의 영향이 신경영양인자의 향상보다 신경영양인자의 유도라는 것을 보여준다.
또한, 본원에서 소개되는 증거는 활성제가 신경영양인자로서 동일한 세포내의 형질도입 경로를 활성화시킨다는 것을 보여준다(실시예 9 참조). 이는 물질의 신경영양인자 조절 활성을 지지하는 증거를 제공한다.
또한, 본원에서 소개되는 증거는 A/B-cis 활성제의 범위가 대뇌 피질 신경에 글루탐산 유도 손상과 도파민에 의해 활성되는 신경의 세포사멸을 감소시키는 반면에, 일반적으로 유사한 화학 구조를 갖지만 A/B-cis 모티프(motif)를 가지는 사포게닌(디오스게닌(diosgenin))은 비활성이라는 것을 보여준다(실시예 10 및 11 참조).
또한, 본원에서 소개되는 증거는 물질이 신경 중에서 신경 손상을 반전시킨다고 보여주며, 즉, 이들은 신경회복성 또는 신경재생성이다(실시예 12 참조).
또한, 본원에서 소개되는 증거는 물질이 경구적으로 투여가능하다는 것을 보여준다(실시예 13 및 14 참조). 상기 실시예는 상기 물질의 경구 투여가 운동 뉴런 질병 또는 외상 후 신경 부상을 갖는 마우스 모델에서 뉴런의 기능의 회복을 개선한다는 것을 보여준다.
또한, 본원에서 소개되는 증거는 물질이 불안감을 감소시키고 늙은 랫트에서 인지를 복구한다는 것을 보여준다(실시예 15 참조).
또한, 본원에서 소개되는 증거는 경구 투여되는 물질이 신체 조직 범위에 전달되고(실시예 16 참조), 유효 투여량에서 비-독성(실시예 17 참조) 이라는 것을 보여준다.
또한, 본원에서 소개되는 증거는 물질이 마카크에서 파킨슨병을 감소시킨다는 것을 보여준다(실시예 18 참조).
본원에서 소개되는 증거는 물질의 신경영양인자 또는 신경영양인자-수용체(NFr) 매개 활성이 수용체와 효소의 범위와 직접적인 결합 상호작용을 수반하지않는다는 것을 보여준다. 예를 들어, 상기 활성은 중요한 수용체의 범위에서 직접 결합 촉진작용(agonism), 촉진작용 또는 비-촉진 직접 결합과 연관되지 않으며, 상기 수용체의 범위는 에스트로겐, 프로게스테론, 테스토스테론 및 세로토닌 수용체와 같은 호르몬 수용체, 니코틴성 수용체, 무스카린성 수용체, 아드레날린성 수용체, 카나비노이드 및 아편제 수용체와 같은 마약 수용체, NMDA, AMPA 및 카이닛(kainite) 수용체와 같은 글루탐산 수용체, 그리고 레티노이드 X 수용체와 같은 레티노산 수용체를 포함한다. 그 결과, 활성제의 생리학적 효과는 신경 장애 및 정신 장애에 대한 이전에 알려진 치료로 발견된 많은 수용체- 및 효소-매개 부작용과는 독립적이다. 예를 들어, 신경 질환 및 정신 질환의 이전의 많은 치료로 발견된 문제, 이에 의한 중독 및 의존증, 중독성의 성격 유형, 수용체 또는 효수 부작용을 갖는 이전의 치료, 및 중독 또는 의존성을 약화시키기 위한 최근의 치료는 신경 장애 또는 정신 장애의 치료에 각각 사용을 금하게 할 수 있으며, 물질을 사용하여 실질적으로 감소시킨다.
정신 장애를 치료하는 선행 문헌에서, 생화학적 방식의 작용을 즉각적으로 보임에도 불구하고, 훨씬 긴 기간 동안에 유익한 정신의학 효과를 보인다. 본 발명의 효과는 훨씬 더 즉각적이며, 항상성 제어하에서 비-독성 방식의 신경영양인자의 조절에 대한 증거를 제공한다. 따라서, 본 발명은 정신 장애 및 신경 장애를 위한 알려진 소분자(비-펩타이드) 치료로부터 차이를 나타낸다.
실시예의 시험에서 물질의 투여량-반응 프로파일은 최고점 이후에 정체기를 보이며, 이는 자가조절 메커니즘의 특징이다(도 1 참조).
본 발명에서 사용되는 하나 이상의 활성제는 GDNF 또는 BDNF와 같은 외인성의 투여되는 신경영양인자 없이 사용될 수 있다.
본 발명과 연관된 새로운 용도
본 발명은 예를 들어, (i) 치료될 장애, (ii) 치료될 개체의 부류, (iii) 사용하기 위한 조합 치료, 및 (iv) 안전한 사용의 환경에 관하여 식별될 수 있는 활성제의 새로운 사용을 가능하게 한다.
예를 들어, (i)이 고려되는 한, 성격적 특성 및 행동학적 특성뿐만 아니라 전반적인 신경, 정신, 염증, 알레르기, 면역 및 종양 장애와 질환을 치료하기 위한 활성제의 사용, 신경의 재생 또는 정상화, 신경을 향하는 혈류, 손상된 조직(예, 피부, 뼈, 눈 또는 근조직)의 재성장 및 치유, 뇌의 안쪽 바깥쪽 모두에서(예, 피부, 뼈, 눈 및 근조직) 조직의 일반적인 건강 및 웰빙을 달성하며, 운동, 힘든 작업 또는 체력소모로부터 근육과 조직의 회복을 달성하며, 약과 기능성 음식 모두를 통해 인내심을 향상시키고 피로감을 감소시키며, 정상적인 뉴런의 기능 및 정상적인 뉴런의 회로망을 재생하는 것은 이제 쉽게 식별할 수 있으며, 하기에서 더 구체적으로 논의할 것이다. 이런 사용은 모집단의 정상적인 범위 내에 있는 개체의 뉴런의 기능 또는 정신 기능을 개선하기 위한 비치료적 사용, 또는 개체의 일반적인 건강 및 개체의 웰빙을 위한 비치료적 사용, 피부, 뼈, 눈, 근육 및 다른 조직 건강을 개선, 예를 들어 노화, 주름 또는 태양, 바람, 비, 추위 또는 다른 손상을 주는 매질에 노출의 영향으로부터 피부의 회복을 촉진하기 위한 비치료적 사용, 및 운동, 힘든 작업 또는 체력소모로부터 근육과 조직의 회복을 포함하고, 인내심을 향상시키고 피로감을 감소시키는 건강 및 웰빙의 다른 양태를 위해 제공하는 비치료적 사용을 포함하고, 용어 "장애", "질환" 및 "특성"은 그에 맞춰서 이해될 것이다.
(ii)가 고려되는 한, 본 발명의 물질이 조절하거나 많은 수용체 또는 효소에 결합하는 것보다, 신경생성인자의 자가조절 항상성을 통해 일한다는 결과는 일부 효소 억제 약물 또는 수용체 작용 약물로부터 좋지 않은 부작용에 민감한 환자를 치료하게 한다. 예를 들어, 치매(알츠하이머) 환자는 콜린에스테라아제 억제제를 견딜 수 없다. 일부 파킨슨 질병 환자는 L-도파(dopa)를 견디지 못하고, 운동장애 또는 위험부담과 같은 신경정신과학적인 문제를 포함하는 부작용에 시달릴 것이다.
예를 들어, (iii)이 고려되는 한, 특정 장애, 질환 및 특성의 치료 또는 개체의 특정 부류의 치료를 위해 다른 공동제와 함께 물질을 조합하여 사용하는 것은 이제 쉽게 식별할 수 있으며, 하기에서 더 구체적으로 논의될 것이다. 많은 상기 조합의 식별은 과거에는 기껏해야 추측에 근거한 것이었다. 이런 사용은 모집단의 정상적인 범위 내에 있는 개체의 뉴런의 기능 또는 정신 기능을 개선하기 위한 비치료적 사용, 피부, 뼈, 눈, 근육 및 다른 조직 건강을 개선하기 위한 비치료적 사용, 예를 들어, 노화, 주름 또는 태양, 바람, 비, 추위 또는 다른 손상을 주는 매질에 노출의 영향으로부터 피부의 회복을 촉진하기 위한 비치료적 사용, 및 운동, 힘든 작업 또는 체력소모로부터 근육과 조직의 회복을 포함하고, 인내심을 향상시키고 피로감을 감소시키는 건강 및 웰빙의 다른 양태를 위해 제공하는 비치료적 사용을 포함하고, 용어 "장애", "질환" 및 "특성"은 그에 맞춰서 이해될 것이다.
예를 들어, (iv)가 고려되는 한, 임상적 및 약학적 분야 밖에서 사용하는 상황의 새로운 범위는 이제 식별 가능하며, 하기에서 더 구체적으로 논의될 것이다.
새로운 사용(i) - 새로운 치료
본 발명은 인간 또는 비-인간 포유류에서 필요에 따라 (a) 신경, 정신, 염증, 알레르기, 면역 및 종양 장애를 치료하거나 예방하는 방법, (b) 뉴런의 기능 또는 뉴런의 회로망을 재생하는 것을 포함하는, 뉴런 및 뉴런에 대한 혈류를 재생 및/또는 정상화하는 방법, (c) 손상된 조직의 재성장 및 치유, (d) 운동, 힘든 작업 또는 체력소모로부터 근육과 조직을 회복하는 방법, (e) 인내심을 향상시키고 피로감을 감소시키는 방법, 또는 (f) 비정상적 행동적 특성 또는 성격적 특성을 치료하거나 예방하는 방법에 사용될 수 있다. 신경, 정신, 염증, 알레르기, 면역 및 종양 장애는 상기 언급된 선행 문헌에 개시된 것일 수 있거나, 이러한 장애와 상이한 것 일 수 있다. 예를 들어, 신경학적 방법은 자폐성 증후군, 우울증 및 정신 분열증일 수 있거나, 이런 것을 제외한 장애일 수 있다. 뉴런 및 뉴런에 대한 혈류, 손상된 조직의 재성장 및 치유, 뉴런의 기능 또는 뉴런의 회로망을 재생하거나 정상화하는 방법은, 예를 들어, 외상후 뉴런의 복원, 조직 이식편 및 수술후 뉴런의 복원(예, 사지와 손가락의 재결합을 위한), 뇌졸증, 일과성허혈발작(TIAs) 또는 다른 국소성 빈혈로부터 회복을 돕는 것, 예를 들어, 뉴런의 기능 및 허혈성 조직에 대한 혈류의 회복을 돕는 것, 상처, 뼈 및 근육의 치유를 돕는 것, 그리고 중추신경계 또는 말초신경계와 관련된 신경 장애 및 임의의 염증성 질환을 치료하는 것을 포함한다.
본 발명은 예를 들어 신경 장애 및 정신 장애에 대하여, 또는 손상되거나 비정상적인 조직 또는 기능의 회복 또는 정상화를 위해, 활성제의 신경보호성 및 신경회복성(신경재생) 효과의 관점에서 태아, 줄기 또는 다른 세포 치료법과 함께 사용될 수 있다. 예시는 뇌 장애를 치료하기 위한 세포 치료법을 포함한다. 본 발명에 따른 활성제의 사용은 예를 들어, 이식된 세포의 생존율을 높임으로써, 치료법에서 생존한 세포의 효율을 개선함으로써, 또는 이의 조합으로써 세포 치료법의 효능을 개선할 수 있다.
본 발명은, 이러한 장애로부터 고통받거나 이러한 장애에 민감한 인간 또는 비-인간 동물 중의 하나 이상의 신경영양인자 또는 신경영양인자-수용체의 비정상적 발현과 관련된 장애를 치료하는 방법에 사용될 수 있다. 상기 장애는 상기 언급된 선행 문헌에 개시된 것일 수 있거나, 이러한 장애와 다를 수 있다. 예를 들어, 신경학적 방법은 자폐성 증후군, 우울증 및 정신 분열증일 수 있거나, 이런 것을 제외한 장애일 수 있다. 신경 장애 또는 정신 장애, 또는 비정상적 행동 특성 또는 성격 특성을 제외한 이러한 장애는, 예를 들어, 수면 부족 및 스트레스, 염증성 장애, 알레르기, 면역 장애 및 신경영양인자 매개 암의 영향을 포함한다.
상기 언급된 것처럼, 본원에서 증거는, 본 발명에서 사용되는 활성제가 뇌에서 BDNF 및 GDNF 모두의 수준을 동시에 정상화하거나 향상시킬 수 있다 라는 것을 보여준다. 그러므로, 본 발명은 신경성장인자들(BDNF, GDNF) 중 하나 또는 둘 다의 비정상적 또는 감소된 뇌 수준으로 고통받는 인간 또는 비-인간 동물의 뇌에서 BDNF 및 GDNF 중 하나 또는 둘 다의 수준을 동시에 정상화하는 방법에 사용될 수 있다.
본 발명은 BDNF 및 GDNF와 같은 신경영양인자의 자가조절 항상성을 유도하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 신경영양인자의 자가조절 항상성의 유도가 제한되고 조절가능한 부작용과 함께 일어난다는 것이다. 본원은 이런 유도가 펩타이드 신경영양인자 또는 신경영양인자-수용체의 존재를 필요로 하지 않는다는 증거를 포함한다. 그러므로, 본 발명은 알려진 물질과 비교하여, 본 발명의 비-펩타이드 활성제와 함께 펩타이드 신경영양인자 또는 신경영양인자-수용체의 공동 투여에 대한 필요성을 회피한다.
상기 설명된 새로운 사용 각각은 본 발명의 양태 각각과 함께 사용될 수 있다.
본 발명에 의해 효과가 더해지는 상기 방법은 치료적 또는 비치료적일 수 있고, 조성물은 약학적 또는 비-약학적 조성물일 수 있으며, 이는 하기에서 더 구체적으로 설명된다. 활성제는 다른 투여 경로도 제공될 수 있지만, 경구 투여가 바람직하고, 이는 하기에서 더 구체적으로 설명된다.
새로운 사용( ii ) - 치료가능한 개체의 새로운 부류
새롭게 발견된 근본적인 본 발명은, 활성제가 적어도 특정 시점에 하나 이상의 신경영양인자 또는 신경영양인자-수용체(예, BDNF 및/또는 GDNF)가, 예를 들어 수면 부족 또는 스트레스 받는 사람에게서 자연 발생적으로 과발현 또는 비정상적으로 발현될 수 있는 개체를 치료하기 위해 사용될 수 있다는 것을 나타내는 반면에, 신경영양인자 모사체 또는 자극제에 의해 이러한 개체를 치료하는 기존의 치료법은 금지되었다.
본 발명은 이런 장애 또는 질환으로부터 고통받거나 상기 장애 또는 질환에 민감한 인간 또는 비-인간 동물 중의 감소되거나 비정상적인 신경영양인자 또는 신경영양인자-수용체 수준과 관련된 장애 또는 질환을 치료하거나 예방하는 방법에 사용될 수 있으며, 상기 인간 또는 동물은 하나 이상의 다른 신경영양인자 또는 신경영양인자-수용체를 자연 발생적으로 과발현하거나 비정상적으로 발현하는 것에 민감한 개체이다.
또한, 새롭게 발견된 근본적인 본 발명은, 활성제가 신경영양인자-모사체 또는 자극 약물의 정신의학상의 부작용에 민감한 개체를 치료하기 위해 사용될 수 있다는 것을 나타내며, 이런 부작용은 일반적으로 정신, 기분, 불안감이나 다른 성격적 또는 행동 증상이며, 신경영양인자 모사체 또는 자극제에 의한 기존의 치료법으로 개체를 치료하는 것은 금지되었다.
새롭게 발견된 근본적인 본 발명은 조절하거나 많은 수용체 또는 효소에 결합하는 것보다 신경영양인자의 자가조절 항상성을 통해 일하고, 이는 일부 효소 억제 약물 또는 수용체 작용 약물로부터 유래되는 좋지 않은 부작용에 예민한 환자의 치료를 가능하게 한다. 예를 들어, 일부 치매(알츠하이머) 환자는 콜린에스테라아제 억제제를 견딜 수 없다. 일부 파킨슨 질병 환자는 L-도파를 견디지 못하고, 운동장애 또는 위험부담과 같은 신경정신과학적인 문제를 포함하는 부작용에 시달릴 것이다.
본 발명은 이런 장애 또는 질환으로부터 고통받거나 상기 장애 또는 질환에 민감한 인간 또는 비-인간 동물 중의 감소되거나 비정상적인 신경영양인자 또는 신경영양인자-수용체 수준과 관련된 장애 또는 질환을 치료하거나 예방하는 방법에 사용될 수 있으며, 상기 인간 또는 동물은 신경영양인자 모사체 또는 자극제의 정신의학상의 부작용 또는 다른 부작용에 민감한 개체이다.
감소되거나 비정상적인 신경영양인자 또는 신경영양인자-수용체 수준과 관련된 장애 또는 질환은, 예를 들어, 신경, 정신, 염증, 알레르기, 면역 및 종양 장애 또는 비정상적 행동 또는 성격적 특성을 포함하며, 예를 들어 하기에서 더 구체적으로 이들이 설명된다. 부가적으로, 이러한 장애 및 질환은 피부, 근육, 눈 및 뼈 장애 및 하기에 설명되는 질환을 포함하며, 상기 질환은 조직의 웰빙과 건강 및 근육 또는 다른 조직의 피로에 대한 질환과 관련된 질환을 포함한다.
또한, 새롭게 발견된 근본적인 본 발명은, 호르몬성 수용체 및 다른 수용체의 범위에 대하여 적대적이거나 결합 능력을 갖지 않고 효소의 범위 전체에 효소 결합 능력을 갖지 않는 활성제가 약물의 수용체- 또는 효소-매개 부작용에 민감한 개체를 치료하는데 사용될 수 있다는 것을 나타낸다. 예를 들어, 이러한 개체는 중독 또는 의존성을 가질 수 있으며, 이는 중독 또는 의존성에 의해 영향받는 수용체에서 적대적 효과에 의해 악화 될 수 있으며; 동일한 이유로 중독 또는 의존성이 없어지도록 치료 또는 자가치료의 과정에 있는 개체는 중독 또는 의존성에 의해 영향받는 수용체에서 적대적 효과에 의해 저지될 수 있으며; 중독 또는 의존적 성격 유형을 갖는 개체, 예를 들어 수용체 또는 효소 결합자리에서 적대감 또는 결합에 특히 예민한 특정 수용체 또는 대사 과정을 갖는다. 나아가, 수용체- 또는 효소-매개 부작용에 대한 민감성은 이러한 수용체- 또는 효소-매개 영향에 의해 방해받을 수 있는 다른 임상의 질환에 대한 치료를 겪는 자, 예를 들어 호르몬 치료를 받는 개체(예, 종양학에서 호르몬 치료법, 성장 호르몬 치료, 갑상선 호르몬 치료, 여성 호르몬 대체 치료법(HRT), 또는 성 전환 치료법)에게서 발생할 수 있다.
그러므로, 본 발명은 이런 장애 또는 질환으로부터 고통받거나 상기 장애 또는 질환에 민감한 인간 또는 비-인간 동물 중의 감소되거나 비정상적인 신경영양인자 또는 신경영양인자-수용체 수준과 관련된 장애 또는 질환을 치료하거나 예방하는 방법에 사용될 수 있으며, 상기 인간 또는 동물은 악물의 수용체- 또는 효소-매개 부작용에 민감한 개체이다.
수용체(또는 결합 부위)-매개 부작용에 대한 개체의 민감성과 관련이 있는 수용체 또는 결합 부위는 하기 수용체 중 임의의 하나 이상을 포함한다. 하기는, 아데노신 A1 수용체; 아데노신 A2A 수용체; 아데노신 A3A 수용체; 아드레날린성 α1A, 아드레날린성 α1B 또는 아드레날린성 α1D 수용체를 포함하는 비특이적 아드레날성 α1 수용체; 아드레날린성 α2A 또는 아드레날린성 α2B 수용체를 포함하는 비특이적 아드레날성 α2 수용체; 아드레날린성 β1, 아드레날린성 β2 또는 아드레날린성 β3 수용체를 포함하는 비특이적 아드레날린성 β 수용체; 아드레노메둘린 AM1 수용체; 아드레노메둘린 AM2 수용체; 알도스테론 수용체; 아나필라톡신 C5a 수용체; 안드로겐(테스토스테론) 수용체 AR; 앤지오텐신 AT1 수용체; 앤지오텐신 AT2 수용체; 아펠린(APJ) 수용체; 심방나트륨이뇨인자 수용체; 봄베신 BB1 수용체; 봄베신 BB2 수용체; 봄베신 BB3 수용체; 브래디키닌 B1 수용체; 브래디키닌 B2 수용체; 칼시토닌 수용체; 칼시토닌 유전자연관펩타이드(CGRP1) 수용체; 벤조티아제핀 L-형 칼슘채널; 디히드로피리딘 L-형 칼슘채널; 페닐알킬아민 L-형 칼슘채널; 칼슘채널 N-형; 카나비노이드 CB1 수용체; 카나비노이드 CB2 수용체; 케모킨 CCR1 수용체; 케모킨 CCR2B 수용체; 케모킨 CCR4 수용체; 케모킨 CCR5 수용체; 케모킨 CXCR1 수용체; 케모킨 CXCR1(IL-8RB) 수용체; 콜레시스토키닌 CCK1(CCKA) 수용체; 콜레시스토키닌 CCK2(CCKB) 수용체; 콜히친(colchicine) 수용체; 코르티코트로핀 방출 인자(CRF1) 수용체; 도파민 D1 수용체; 도파민 D2S 수용체; 도파민 D3 수용체; 도파민 D4 .2 수용체; 도파민 D5 수용체; 엔도텔린 ETA 수용체; 엔도텔린 ETB 수용체; 표피생장인자(EGF) 수용체; 에리트로포이에틴 EPOR 수용체; 에스트로겐 수용체; 에스트로겐 (ERα) 수용체; 에스트로겐 (ERβ) 수용체; G 단백질 결합 수용체 GPR103; G 단백질 결합 수용체 GPR8; GABAA 수용체; TBOB 염소 채널 GABAA 수용체; 중앙(central) 플루니트라제팜 GABAA 수용체; 중앙 무시몰(muscimol) GABAA 수용체; GABAB1A 수용체; GABAB1B 수용체; 가바펜틴 수용체; 갈라닌 GAL1 수용체; 갈라닌 GAL2 수용체; 글루코코르티코이드 수용체; 글루탐산 수용체; AMPA 글루탐산 수용체; 카인산 글루탐산 수용체; 호전성 NMDA 글루탐산 수용체; 글리신 NMDA 글루탐산 수용체; 펜시클리딘 NMDA 글루탐산 수용체; 폴리아민 NMDA 글루탐산 수용체; 성장호르몬 분비촉진 (GHS, 그렐린) 수용체; 히스타민 H1 수용체; 히스타민 H2 수용체; 히스타민 H3 수용체; 히스타민 H4 수용체; 중앙 이미다졸린 I2 수용체; 인터루킨 IL-2 수용체; 인터루킨 IL-6 수용체; 렙틴 수용체; BLT 류코트리엔(LTB4) 수용체; 시스테이닐 류코트리엔 CysLT1 수용체; 시스테이닐 류코트리엔 CysLT2 수용체; 멜라노코르틴 MC1 수용체; 멜라노코르틴 MC3 수용체; 멜라노코르틴 MC4 수용체; 멜라노코르틴 MC5 수용체; 멜라토닌 MT1 수용체; 멜라토닌 MT2 수용체; 모톨린(motolin) 수용체; 무스카린성 M1 수용체; 무스카린성 M2 수용체; 무스카린성 M3 수용체; 무스카린성 M4 수용체; 무스카린성 M5 수용체; N-포르밀 펩타이드 수용체 FPR1; N-포르밀 펩타이드 수용체 유사 FPRL1 수용체; 뉴로메딘 U MNU1 수용체; 뉴로메딘 U MNU2 수용체; 뉴로펩타이드 Y Y1 수용체; 뉴로펩타이드 Y Y2 수용체; 뉴로텐신 NT1 수용체; 니코틴성 아세틸콜린 수용체; 니코틴성 아세틸콜린 α1, 붕가로독소 수용체; 니코틴성 아세틸콜린 α7, 붕가로독소 수용체; 아편제 δ(OP1, DOP) 수용체; 아편제 κ(OP2, KOP) 수용체; 아편제 μ(OP3, MOP) 수용체; 오파닌 ORL1 수용체; 포르볼 에스테르 수용체; 혈소판 활성 인자(PAF) 수용체; 혈소판 유래 성장인자(PDGF) 수용체; 칼륨채널[KA]; 칼륨채널[KATP]; 칼륨채널[SKCA]; 칼륨채널 HERG; 프로게스테론 수용체; 프로게스테론 PR-B 수용체; 프로스타노이드 CRTH2 수용체; 프로스타노이드 DP 수용체; 프로스타노이드 EP2 수용체; 프로스타노이드 EP4 수용체; 프로스타노이드 트롬복세인 A2 (TP) 수용체; 퓨린작동성 P2X 수용체; 퓨린작동성 P2Y 수용체; 레타오니드 X 수용체 RXRα; 롤리프람 수용체; 리안딘(ryandine) RyR3 수용체; 세로토닌 5-히드록시트립타민 5-HT1 수용체; 5-히드록시트립타민 5-HT1A 수용체; 5-히드록시트립타민 5-HT1B 수용체; 5-히드록시트립타민 5-HT2B 수용체; 5-히드록시트립타민 5-HT2C 수용체; 5-히드록시트립타민 5-HT3 수용체; 5-히드록시트립타민 5-HT4 수용체; 5-히드록시트립타민 5-HT5A 수용체; 5-히드록시트립타민 5-HT6 수용체; 시그마 α1 수용체; 시그마 α2 수용체; 부위 2 나트륨채널 수용체; 소마스타틴 sst1 수용체; 소마스타틴 sst2 수용체; 소마스타틴 sst3 수용체; 소마스타틴 sst4 수용체; 소마스타틴 sst5 수용체; 타키키닌 NK1 수용체; 타키키닌 NK2 수용체; 타키키닌 NK3 수용체; 테스토스테론 수용체; 티록신 호르몬 수용체; 티로트로핀 방출 호르몬(TRH) 수용체; 형질전환인자-β(TGF-β) 수용체; 아데노신 운반체; 콜린 운반체; 도파민 운반체(DAT); GABA 운반체; 모노아민 운반체; 노르에피네프린 운반체(NET); 5-히드록시트립타민 운반체(SERT); 비선택적 종양 사멸 인자(TNF) 수용체; 유로텐신 II 수용체; 바닐로이드 수용체; 혈관내피생장인자(VEGF) 수용체; 혈관작동성장펩티드 VIP1 수용체; 바소프레신 V1A 수용체; 바소프레신 V1B 수용체; 바소프레신 V2 수용체; 및 비타민 D3 수용체이다.
부작용에 대한 개체의 민감성과 관련이 있는 효소는 하기 효소 중 임의의 하나 이상을 포함한다. 하기는, 아세틸콜린스테라아제; 아세틸 CoA 합성효소; 콜린 아세틸전이효소; 단백질 세린/트레오닌 키나아제 AKT1(PRKBA); 단백질 세린/트레오닌 키나아제 AKT3(PRKBG); 단백질 세린/트레오닌 키나아제 CAMK2D(KCC2D); 단백질 세린/트레오닌 키나아제 MAP2K1(MEKl); 단백질 세린/트레오닌 키나아제 MAPKl(ERK2); 단백질 세린/트레오닌 키나아제 MAPKI l(p38β); 단백질 세린/트레오닌 키나아제 MAPKl 2(p38γ); 단백질 세린/트레오닌 키나아제 MAPKl 3(p38δ); 단백질 세린/트레오닌 키나아제 MAPK3(ERKl); 단백질 세린/트레오닌 키나아제 MAPK8(JNKl); 비특이적 단백질 세린/트레오닌 키나아제 PKC; 단백질 티로신 키나아제 NTRKl(trkA); 단백질 티로신 키나아제 NTRK2(trkB); 단백질 티로신 키나아제 SRC; 알도오스 환원효소; ABTS 라디칼 자유 라디칼 포집 효소; DPPH 라디칼 자유 라디칼 포집 효소; SOD 모사 자유 라디칼 포집 효소; 및 UDP 글루쿠로노실전이효소 UGTlAl이다.
그러므로, 본 발명은 활성제의 수용체- 및 효소-매개 활성으로부터 발생되는 부작용없이, 또는 적어도 어떤 부작용의 발생을 실질적으로 감소시키며, 이런 개체에 사용하기 위한 소분자 치료 물질을 최초로 가능하게 하였다.
에스트로겐, 안드로겐, 프로게스테론, 글루코코르티코이드 및 테스토스테론 수용체에서 특정 A/B-cis 스피로스탄 사포게닌 및 사포닌의 비활성은 WO-A-99/48507, WO-A-99/48482, WO-A-01/23406, WO-A-01/23407, WO-A-01/23408 및 WO-A-01/49703에서 이미 공지되었다. 무스카린 수용체의 증가된 수와 합성의 증거는 보여주었지만 무스카린 수용체에서 동일한 물질의 비활성/비결합은 보여주지 않았다. 무스카린 및 아드레날린 β2 수용체의 수의 정상화에 대한 증거는 투여량-의존 또는 활성/결합과 관련된 증거 없이 WO-A-02/079221 및 WO-A-03/082893에서 보여주었다.
특정 A/B-cis 푸로스탄 사포닌, 티모사포닌 BII에 의해 증가되는 니코틴 수용체의 수의 투여량-의존의 증거는 WO-A-99/16786 (EP-A-1024146; US-A-6593301)에서 이미 공지되었다. 이런 수용체에서 물질의 활성/결합의 정도는 명백하게 측정되지 않았다. 여기에서 보여주는 추가적인 증거는 선행 문헌에서 발표된 효과가 신경영양인자 및/또는 이의 수용체의 합성 또는 방출의 통제된 증가, 및/또는 저하율의 감소로부터 유래되는 것이라고 보여준다.
본 발명은 페이지 20, 28번째 줄부터 페이지 23, 7번째 줄까지에 나열된 수용체 및 효소 중 하나 이상을 포함하여 수용체- 또는 효소-매개 부작용을 유도함 없이 인간 또는 비-인간 동물의 필요에 따라 신경의 저하를 치료하거나 예방하는 방법에 사용할 수 있다.
방법은 치료적 또는 비치료적일 수 있고, 조성물은 약학적 또는 비약학적 조성물일 수 있으며, 이는 하기에서 더 구체적으로 설명된다. 예를 들어, 비치료적 사용은 정상적인 모집단의 범위 내에 있는 개체의 신경 또는 정신 기능을 개선하기 위해 사용될 수 있다. 용어 "장애", "질환" 및 "특성"은 그에 맞춰서 이해될 것이다. 활성제는 다른 투여 경로도 제공될 수 있지만, 경구 투여가 바람직하고, 이는 하기에서 더 구체적으로 설명된다.
새로운 사용( iii ) - 물질의 새로운 조합
본 발명의 활성제는 피험자의 신경영양인자 또는 신경영양인자-수용체의 비정상적 수준을 야기할 수 있는(즉, 비정상적으로 낮은 수준 또는 비정상적으로 높은 수준) 알려지거나 의심스러운 다른 생물학적 활성제와 조합하여 사용될 수 있거나, 어떤 비정상적 수준을 야기할 가능성이 알려지지 않거나 의심되지 않거나 시험되지 않기 위해, 하나 이상의 다른 생물학적 활성제로 예방의 기준에 사용될 수 있다. 이런 다른 생물학적 활성제는 약, 억제 단백질에 대한 특정 결합제 또는 폴리뉴클레오티드(예, 항체, F(ab) 또는 F(ab)2 조각과 같은 항체 조각, siRNA 또는 안티센스 DNA)와 같은 활성 화학 물질 및 줄기세포와 같은 활성 조직을 포함한다.
이리하여, 본 발명에 따른 물질은 다른 생물학적 활성제의 임의의 좋지않은 가능한 효과에 대응하는데에 사용될 수 있다.
본 발명은 환자의 특정 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하기 위하여 인간 또는 비-인간 동물 피험자에게 투여하기 위한 조성물 또는 조성물의 세트(연어를 이룬 군(collocated group))에 사용될 수 있으며, 상기 조성물 또는 세트는 상기 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하기 위한 제 1 생체활성 물질을 포함하고 피험자의 신경영양인자 또는 신경영양인자-수용체의 비정상적 수준을 야기할 수 있는 가능성을 가지며, 피험자에서 유도된 임의의 비정상적 신경영양인자 또는 신경영양인자-수용체 수준에 대해 자가조절 방식으로 대응하기 위한 본 발명의 활성 물질이며, 이에 의하여 상기 비정상적 신경영양인자 또는 신경영양인자-수용체 수준은 피험자에서 대응되며, 바람직하게는 정상 신경영양인자 또는 신경영양인자-수용체 수준의 성향을 보인다.
새로운 사용( iv ) - 사용의 새로운 상황
본 발명은 투여 또는 투여량 프로토콜의 가까운 임상 제어(close clinical control)가 가능하지 않거나 실행할 수 없는 상황에 사용될 수 있다.
과투여에 대한 자가조절 치료의 저항력 및 반응의 시간-연장 유형은 비교적 좋지 않게 제어된 상황하에서 활성 물질의 투여, 예를 들어, 자가투여 또는 비치료적 투여를 돕기 위해 혼합된다. 본 발명에 따른 자가조절 치료에 대한 프로토콜은 선행 문헌에 따른 치료보다 폭넓은 내성에 있어서 효과적일 것이다.
그러므로, 본 발명을 사용하는 임의의 방법은 투여 프로토콜의 임상적 제어가 없는 상황에서 적용될 수 있고, 특히 자가투여 또는 비치료적 투여의 상황에서 그러하다.
본 발명의 임의의 양태는 실행될 수 있거나, 본 발명의 다른 양태 중 임의의 하나 이상의 양태와 동시에 사용될 수 있고, 임의의 예 또는 본 발명의 일 양태를 위해 바람직게 정해진 것은 본 발명의 임의의 다른 양태에도 동일하게 적용될 수 있다.
"치료 또는 예방"
본 명세서에 사용된 표현 "치료 또는 예방" 및 유사한 용어는 지배적인 의료 및 정신의학상의 실행에 의해 이용될 수 있는 임의의 시험에 따라 판단되는 장애를 제거하거나 방지하는 것 또는 이런 증상을 완화시키는 것을 의미하는 건강관리의 모든 형태를 지칭하며, 이러한 예는 예방, 치유력이 있는 관리 및 완화치료가 있다. 특정한 결과 하지만 항상 그렇지는 않은 결과를 달성하기 위한 합리적인 기대를 목표로 하는 개입은 상기 표현 "치료 또는 예방" 내에 포함된다. 장애의 진행을 늦추거나 중단하는데에 성공적인 개입은 상기 표현 "치료 또는 예방" 내에 포함된다. 어떤 신경, 정신, 염증, 알레르기 및 면역 장애는 "스펙트럼" 질환으로서 고려되며, 개체는 상기 질환에서 가능한 증상의 일부 또는 전체 범위를 보일 수 있거나, 장애의 온화한 형태만 보일 수 있다. 더 나아가, 수많은 신경, 정신, 염증, 알레르기, 면역 및 종양 질환은 점진적이며, 비교적 온화하게 비정상적인 증상으로 시작하고, 더 극심한 비정상적 증상으로 진행된다. 본 발명은 모든 신경영양인자 매개 신경, 정신, 염증, 알레르기, 면역 및 종양 질환의 어떤 유형 및 어떤 단계에서의 치료와 예방을 포함한다.
"~에 민감한"
본 명세서에 사용된 표현 "~에 민감한" 및 유사한 용어는 이상이 있는 사람 또는 장애에 대해 알려진 위험 인자를 사용하여 평가되어서, 의료 장애, 건강 장애, 웰빙 장애 또는 정신 장애, 또는 성격적 변화의 발생 위험이 정상보다 큰 개체를 구체적으로 지칭한다. 이런 개체는 예를 들어, 하나 이상의 특정 장애 또는 성격적 변화를 실질적으로 발생시키는 위험을 가지는 것으로서 분류될 수 있으며, 약물이 처방되고/처방되거나 특별한 식사, 생활방식 또는 유사한 권고는 개체에게 주어질 것이다.
유독성 및 부작용
본 발명에 따른 물질은 제한되고 조절 가능한 부작용을 가지고, 상기 물질은 비독성이거나 사용시에 근본적으로 비독성이다.
약학적(수의학을 포함하는) 사용과 관련해서, 생리학적으로 사용가능한 물질이라고 시사하고 있고, 따라서, 소리 의학(sound medical) 및 수의과의 판단의 범위 내에서 물질은 지나친 독성, 과민증, 알레르기 반응, 원치 않는 부작용 없이 인간, 포유류 및 다른 동물의 세포에 접하여 유효 투여량으로 사용하기 적합하고, 발생할 수 있는 이러한 좋지 않는 사건은 지나친 것으로 생각되거나 부차적 치료에 의해 조절될 수 없으며, 합리적인 혜택/위험 비율과 잘 맞는다.
기능성 화장품 및 피부과학적이고 다른 피부-접촉 제제 또는 눈-접촉 제제 뿐만 아니라, 기능성 음식, 특히 식품, 식품 보충제(식이 보충제), 음료 및 음료 보충제와 관련해서, 이는 특정 조성물 또는 제제와 이를 공급하기 위한 특정한 사용에 대한 안정성 및 독성 기준에 적합한 혜택/위험 및 부작용의 해당하는 평가를 시사한다.
"비치료적 방법"
비치료적 사용은 의사의 지도 없이 인간 피험자의 선택에 의한 조성물 중의 생리학적 활성제의 자가 투여, 일반적으로 경구 투여에 의해 일반적으로 특징된다. 보편적으로, 이로부터 성취하고자 하는 혜택은, (i) 공식적으로 진단받지 않았으며, (ii) 임상적 실행에 의해 진단받을 수 없거나, (iii) 정상적인 건강한 모집단의 범위 내에 있어서 장애로 고려되지 않는 질환 또는 인식된 질환과 관련된 웰빙 또는 일반적 건강 혜택일 것이다.
또한, 비치료적 사용은 의학적 개입의 부존재 또는 피험자의 조성물 구매 또는 조성물 매수단계에서의 도움으로 특징될 수 있다.
한층 나아가, 비치료적 사용은 조성물 공급자에 의한 의료적 요청의 부존재에 의해 특징될 수 있어서, 자가투여가 진단된 장애를 치료하기 위한 특정 의도에 의해 진행되지 않는다.
예를 들어, 적당히 비치료적으로 영향을 미칠 수 있는 뉴런의 기능은, 예를 들어, 인식(생각, 추리, 기억, 기억능력, 상상 및 학습), 집중과 주의, 특히 질환의 한층 온화한 끝에서, 그리고 온화한 비정상적 행동 또는 성격적 특성을 포함할 수 있다. 적당히 비치료적으로 치료될 수 있는 정신 기능은, 예를 들어, 인간 행동, 기분, 성격적 및 사회적 기능을 포함할 수 있으며, 구체적으로 예를 들어, 성적 행동, 성적 기능장애, 고민, 우을증, 침울함, 10대 기분(teenage moods), 잠을 설치는 패턴, 생생한 꿈, 악몽 및 몽유병을 포함할 수 있다.
본 발명의 비치료적 방법에 따라 치료가 가능한 상기 주어진 뉴런의 기능 및 정신 기능의 예에 부가하여, 관련된 행동 또는 생각이 개체에게 상당한 고통을 유발하지 않거나 그 또는 그녀의 일상 생활을 방해하지 않기 때문에 임상적 실행에 의해 진단될 수 없는 신경 장애 및 정신 장애의 온화한 형태 또한 본 발명에 따라 비치료적으로 치료가능한 질환으로서 고려될 수 있다.
염증, 알레르기 및 면역 장애, 또는 알려지지 않은 원인 또는 다른 이유로 공식적인 진단을 받지 않은 염증 알레르기 및 면역 장애의 온화한 형태도 본 발명에 따라 비치료적으로 치료가능한 질환으로서 고려될 수 있다.
양성 종양 장애, 또는 알려지지 않은 원인 또는 다른 이유로 공식적인 진단을 받지 않은 종양 장애도 본 발명에 따라 비치료적으로 치료가능한 질환으로서 고려될 수 있다.
"정상화"
본 명세서에 사용된 표현 "정상화" 및 유사한 용어(예, "항상성")는 구체적으로 일반적인 정상 건강의 질환 특징을 향한 생물학적 조정을 지칭한다. 최적의 정상 질환은 건강한 젊은 성인 인간 또는 비-인간 동물의 질환에 의해 예시될 수 있다.
따라서, "정상화"는 정상적인 질환으로 조정하는 과정을 포함하며, 질환이 실제로 도달하든지 안하든지 상기 질환은 정상으로 특징될 것이다.
"신경 장애"
본 명세서에 사용된 표현 "신경 장애" 및 유사한 용어는, 예를 들어, 신경의 저하(손상된 인식의 증상을 갖는 신경의 저하 및 손상된 인지를 갖지 않는 신경의 저하를 포함), 신경근육 저하, 및 운동-감각 신경의 저하를 포함한다.
본 발명에서 고려되는 신경 장애의 예는, 치매, 연령관련인지장애, 알츠하이머병, 알츠하이머 유형의 노인성 치매(SDAT), 루이체 치매(Lewy body dementia), 혈관성 치매, 파킨슨병, 뇌염후 파킨슨증, 뇌염후와 다른 그리고 파킨슨병과 다른원인을 갖는 파킨슨병, 안면견갑상완근이영양증(FSH), 뒤시엔느 근위축증(Duchenne muscular dystrophy), 베커평 근위축증(Becker muscular dystrophy) 및 브레이스형 근위축증(Brace's muscular dystrophy)을 포함하는 근위축증, 푸크스 이영양증, 근긴장성이영양증, 각막 이영양증, 반사성 교감신경 이영양증(RSDSA), 신경혈관영양장애, 중증 근무력증, 램버트 이튼 증후군, 헌팅턴병, 운동 신경 질병(루게릭병(ALS), 유아성 척수 근위축증(infantile spinal amyotrophy), 다발성 경화증, 체위성 저혈압증, 통증, 신경통, 정신적 외상 예를 들어, 타격 이후 또는 사고 이후(예를 들어, 정신적 외상에 의한 머리 또는 뇌 부상 또는 척수 부상)에 신경퇴행, 바텐병, 코카인 증후군, 다운 증후군, 피질 기저핵 변성, 다계통위축, 뇌위축증, 올리브교소뇌 위축증, 치상핵적핵 위축증, 담창구시상하부 위축증, 척추 근위축증, 시신경염, 경화성전뇌염(SSPE), 주의력 결핍 장애, 후바이러스성뇌염, 후소아마비증후군, 파 증후군(Fahr's syndrome), 주버트 증후군, 길랭-바레 증후군, 활택뇌증, 모야모야병, 신경세포 이주장애, 신경장애 자폐증후군, 폴리글루타민 질병, 니만-피크병, 진행성다병소성백질뇌증, 가성뇌종양, 레프섬병, 젤웨거증후군, 핵상마비, 프리드라이히운동실조증, 척수소뇌성 운동실조증 제2형, 레트증후군, 샤이-드래거증후군, 결절성 경화증, 피크병, 만성 피로증후군을 포함함), 유전성 신경장애, 당뇨병성 말초신경병 및 유사분열 신경병증을 포함하는 신경병증, 크로이츠펠트-야콥병(CJD), 인간 광우병, 신종 크로이츠펠트 야콥병, 광우병(BSE), GSS, FFI, 쿠루병 및 알퍼스 증후군을 포함하는 프리온계 신경퇴화, 요셉병(Joseph's disease), 급성산재성뇌척수염, 지주막염, 중추신경계의 혈관성 병소, 수족 뉴론 기능의 손실, 샤리코-마리-듀스병(Charcot-Marie-Tooth disease), 크라베병, 백질이영양증, 심부전 민감성, 천식, 간질, 청각신경퇴화, 시력감퇴, 망막색소병증, 및 녹내장-유발 시신경 퇴화를 제한없이 포함한다.
정신 장애
표현 "정신 장애"는 성격 및 행동에 영향을 미치는 모든 인간의 정신적인(mental) 장애를 포함하며, 구체적으로 사람의 생각, 느낌, 기분 및 인간관계 능력과 관련한 것을 포함한다. 다라서, "신경" 및 "정신" 장애 사이에 일부 중복이 있고, 특히 본 발명에 의해 치료되거나 예방될 수 있는 "정신 장애"는 신경영양인자 또는 신경영양인자-수용체에 의해 직접적으로 또는 간접적으로 영향받는 근본적인 신경 결점과 직접적 또는 간접적으로 관련될 것이다.
일반적으로, 정신적인 장애는, 관련된 행동 또는 생각이 개체에게 상당한 고통을 유발하거나 그 또는 그녀의 일상생활을 방해하지 않는 한 "정신 장애"로서 진단되지 않는다. 그러므로, 진단가능한 장애 및 유사한 장애, 즉 덜 극심하거나 적게 방해하는 장애 사이에 경계가 있으며, 정신의 기능은 비치료법으로서 고려되어야한다(하기 참조).
본 발명에서 고려되는 정신 장애의 예는, 불안장애 (예를 들어, 급성 스트레스 장애, 공황장애, 광장공포증, 사회공포증, 특정공포증, 강박장애, 외상후 스트레스 장애, 신체 이형 질환 및 범불안장애), 성교 불안장애 (예를 들어, 질경련, 발기 부전증, 남성 절정감 장애 및 여성 오르가즘 장애), 아동기 장애 (예를 들어, 주의력결핍 과다행장애(ADHD), 아스퍼거장애, 자폐장애, 품행장애, 반항장애, 분리불안장애 및 토레트병), 섭식장애 (예를 들어, 신경성 식욕부진증 및 폭식증), 기분 장애 (예를 들어, 우울증, 주요우울장애, 조울증 (조울병), 계절성 우울증(SAD), 순환성 기분장애 및 기분부전장애), 수면장애, 인지 정신장애 (예를 들어, 섬망, 기억상실장애), 인격장애 (예를 들어, 편집성 인격장애, 분열성 인격장애, 분열형 인격장애, 반사회적 인격장애, 경계선 인격장애, 연기성 인격장애, 자기애 인격장애, 회피성 인격장애, 의존성 성격장애 및 강박성 인격장애), 정신분열장애 (예를 들어, 정신분열증, 망상장애, 단기 정신병적 장애, 정신분열형장애, 분열정동장애 및 공유 정신병적 장애), 및 물질 관련 장애 (예를 들어, 알콜 의존증, 암페타민 의존증, 대마초 의존증, 코카인 의존증, 환각제 의존증, 흡입성 의존증, 니코틴 의존증, 오피오이드 의존증, 펜시클리딘 의존증 및 진정제 의존증)를 제한없이 포함한다.
염증성 및 알레르기성 장애
본 발명에 따라 치료 가능한 염증성 및 알레르기성 장애의 예는 기침, 소양증 (Johansson, O 등, Arch. Dermatol. Res., 2002, 293, pp. 614-619 참조), 음식과민증, 건선, 급성후두기관염, 과민성 대장 증후군, 이명, 메니에르 증후군, 스트레스성 위궤양 또는 아세틸살리실산성 위궤양, 알레르기성 비염, 알레르기성 피부염, 결막염, 염증, 염증성 장 질환, 회장염, 췌장염, 담낭염, 비알레르기성 비염, 역류성식도염, 골관절염, 류마티스 관절염, 고초열, 집진드기에 대한 알레르기, 애완동물에 대한 알레르기, 헌팅턴병, 급성 염증성 통증, 내장통, 치통 및 두통, 염증성 통각과민, 촉각계 통각과민 (예를 들어, Ma, QP 등, Neuroreport 1997, 8, pp. 807-810 참조), 알레르기성 피부 반응, 알레르기성 눈 반응, 천식 (Bonini, S, 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1996, 93, pp. 10955-10960; Braun, A 등, Am. J. Respiratory Cell Mol. Biol., 1999, 21, pp. 537-546 참조), 죽상동맥경화증, 관절염, 만성 궤양 (예를 들어. 류마티스 관절염과 관련된 만성 배술리틱 궤양(chronic vasulitic ulcers))을 포함한다.
본 발명에 따른 경관된 비치료적 치료는 정상적인 호흡을 유지하고, 인후염을 안정시키고, 정상적인 소화의 유지를 돕고, 배탈을 편안하게 하고, 감기 및 독감으로부터 회복을 돕고, 충혈 완화제로서, 두통을 안정시키고, 근육통을 완화시키고, 온화한 고통 및 통증을 편안하게 하고, 치통의 경감을 제공하고, 구강염 또는 위궤양의 경감을 제공하고, 건강한 관절을 유지하기 위해 포함한다.
면역 장애
본 발명에 따라 치료가능한 신경영양인자 면역 장애의 예는, Vega 등에 의해 공개된 상기 문헌의 표 2(페이지 8)에 나열된 면역 세포 기능에 대한 신경영양인자의 작용의 정상화에 의해 치료가능한 질환을 포함한다. 이런 장애들은 AIDS(신경영양인자의 정상화는 피험자의 면역성을 신장시킬 것임)와 같은 면역결핍 질환, 면역 과다활동 질환(신경영양인자의 정상화는 피험자의 면역 시스템을 하향조절할 것임), 및 손상된 면역 특이성을 갖는 질환(신경영양인자의 정상화는 외부 물질에 더 특이적이도록 면역계를 도울 것임), 예를 들어 전신 홍반성 루프스(SLE)와 같은 자가면역 질병을 포함한다.
종양 장애
본 발명에 따라 치료가능한 신경영양인자 매개 악성 종양 장애의 예는 유방암, 갑상선암, 대장암, 폐암, 난소암, 피부암, 근육암, 췌장암, 전립선암, 신장암, 생식기암, 혈액암, 면역계암 (예를 들어, 비장, 흉선 및 골수), 뇌암, 말초신경계암 및 피부(예를 들어, 흑색종 및 카포시육종)를 포함한다..
손상되거나 비정상적인 조직의 뉴런의 기능, 또는 이와 관련된 뉴런의 기능의 복원 또는 정상화
본 발명은 손상되거나 비정상적인 조직의 뉴런의 기능, 또는 이와 관련된 뉴런의 기능의 복원 또는 정상화의 일 양태를 제공한다. 상기 조직은 뇌 조직 또는 뇌의 외피 조직, 예를 들어 피부, 뼈, 눈 또는 근육 조직일 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 이런 양태는 수술, 자상, 상처, 사고, 멍, 찰과상, 화상, 동상, 골절 후에 뉴런의 회복과 관련하여 사용될 수 있다.
상처 치유
본 발명은 상처 치유를 돕는 일 양태를 제공한다. 상기 상처는 만성(예, 궤양) 피부 병소 및 급성 피부 병소를 포함하는 임의의 피부 병소일 수 있다. 이러한 병소의 원인은 많고 다양하다. 일반적으로 모든 피부 병소는 본 발명을 사용하여 유익하게 치료가 가능하다.
치유의 특성을 평가하기 위해 측정되는 상처 치유의 양태는, 치유 과정의 다양한 시점에서 상처의 폐쇄율, 상처 위의 피부 조직의 재성장 속도, 주변 피부 색소와 비교하여 치유된 상처의 색깔, 주변 피부 강도와 비교하여 치유된 상처의 기계적 강도, 최대로 치료된 후에 상처에 남은 비정상적인 질감 또는 거칠기를 갖는 흉터 조직 또는 다른 피부 조직의 정도, 상처에서 삼출물이 흐르는 것을 멈추게 하는데 걸리는 시간 또는 삼출물 흐름을 덜어주는데 걸리는 시간, 상처 또는 삼출물의 물리적 모습 및 냄새, 및 통증, 간지러움 또는 다른 불편함을 포함한다.
이런 모든 기준에 대하여, 본 발명은 선행 기술의 방법과 비교할 때 장점을 제공한다. 외인성의 신경영양인자의 필수적인 부가 없이, 피험자의 자생 신경영양인자의 자가조절 항상성은 사용된 모든 기준 하에서 인간과 비인간 동물 피부 병소에 유익한 영향을 미칠것으로 예상된다.
본 발명에 따른 물질은 상처를 치료하기 위하여 국부적 또는 신체 전체에 투여될 수 있다. 만일 국부적으로 투여되면, 그들은 임의의 적합한 조성물 또는 구조 예를 들어, 상처를 위한 드레싱 또는 상처에 적용되는 크림이나 다른 제제로부터 전달될 수 있다. 전달 시스템의 더 구체적인 것은 하기에서 제공된다.
조직의 웰빙과 일반적인 건강을 촉진하거나 돕는 단계
본 발명은 운동, 힘든 작업 또는 체력소모로부터 근육과 다른 조직의 회복을 촉진하기 위한 다른 양태, 및 인내심과 근지구력을 개선하고(예, 경쟁적 도는 비경쟁적 스포츠) 피로감을 감소시키기 위한 다른 양태를 제공한다.
더 일반적으로, 뇌 내부 및 외부 모두의 조직의 웰빙과 일반적인 건강은 본 발명에 의해 도움을 받을 수 있다.
일 예에서, 피부에 대한 본 발명에 따른 물질의 화장품, 눈 또는 피부과학적인 응용은 새로운 피부 세포의 인공주입을 개선할 것이고, 이에 의해 피부 또는 눈의 건강과 웰빙 느낌을 도울 것이다. 예를 들어, 문헌[Alber, K.M. 등, Neuroscientist 2007, 13, pages 371-382]를 참조하라. 피부 신경영양인자의 자가조절 항상성을 수반하는 본 발명에 따른 방법은 신체에 독성 물질의 투여를 방지하고, 그 대신에 치료를 위해 피험자 고유의 자생 신경영양인자를 조절한다.
배타적이지 않고, 비치료적이지만, 이런 사용은 주된 목표로 일반적으로 건강한 사람을 대상으로 한다.
포유류
인간 치료에 유용한 것에 비해, 본 발명은 신경 및 정신/정신의학의 질환에 의해서 또한 영향받을 수 있는 포유류의 범위에도 유용하다. 이런 포유류는 비-인간 영장류(예, 유인원, 원숭이 및 여우원숭이), 예를 들어 동물원에 있는 영장류, 고양이나 개와 같은 반려동물, 개, 말 및 조랑말과 같은 스포츠 동물, 되지, 양, 염소, 사슴, 황소 및 소와 같은 농장 동물, 토끼 또는 설치류(예, 랫트, 마우스, 햄스터, 게르빌루스쥐 또는 기니아 피그)와 같은 실험실 동물을 포함한다.
치료될 수 있는 장애, 질환, 특성 또는 기능은 인간에 대해 독점적이어서, 치료될 수 있는 포유류는 인간이라고 이해될 것이다. 만일 치료될 수 있는 장애, 질환, 특성 또는 기능이 상기 종에 대해 독점적이면, 동일한 것은 임의의 다른 포유류 종에도 각각 적용된다.
물질
본 명세서에 사용된 활성제는 일반적으로 약 800 미만의 분자량, 예를 들어 약 700 미만의 분자량, 예를 들어 약 600 미만의 분자량, 예를 들어, 약 500 미만의 분자량, 예를 들어 약 450 미만의 분자량을 가지지만, 필수적이지는 않다.
다음은 스테로이드 화학으로부터의 표준 명칭으로, 왼쪽 6각 고리는 A링으로, A링에 인접한 링은 B링으로 명명된다. 또, 다음의 스테로이드 화학으로부터의 표준 명칭으로, 탄소 원자는 하기에 도시되듯이 번호를 매겼고, 그 결과 링들 사이에 결합선은 5번과 10번 위치의 탄소 사이에서 발생한다.
A/B-cis 스테로이드성 푸로스탄/푸로스텐 또는 스피로스탄/스피로스텐 사포게닌에서, 5번과 10번 위치의 탄소 원자 둘 다에서 치환기 또는 수소 원자는 분자의 수평면에서 (위로) β 지향된다.
다음에서 3차원 그림으로 보여지는 약물 분자구조 군을 제조하기 위하여 분자의 평면을 뒤틀리게 하는 효과를 가진다. 10번 위치의 탄소 원자에서 치환기 또는 수소 원자는 그림에서 "a"로 라벨링 되고, 5번 위치의 탄소 원자에서 치환기 또는 수소 원자는 "b"로 라벨링 되며; C링은 오직 부분적으로 도시됐다.
Figure pct00001
상기는 A/B-cis 모티프(motif)이다.
WO-A-99/48482, WO-A-99/48507, WO-A-01/23407, WO-A-01/23408, WO-A-02/079221, WO-A-03/082893, WO-A-2005/105825 및 WO-A-2006/048665에 개시되는 A/B-cis 푸로스탄/푸로스텐 및 스피로스탄/스피로스텐 사포게닌 및 이의 유도체의 형태의 예는 본 발명에서 사용하기 위한 활성제로 구체적으로 언급될 수 있다. 화합물의 구체적인 세트 및 이런 공개문헌에서 개시되는 각각의 화합물, A/B-cis 푸로스탄/푸로스텐 및 스피로스탄/스피로스텐 사포게닌 및 에스테르, 에테르, 케톤 및 이의 글리코실화 형태인 화합물 부류의 대표 화합물은 참조로 본 명세서에 포함된다.
에스터, 에터, 케톤 및 A/B-cis 푸로스탄/푸로스텐 및 스피로스탄/스피로스텐 사포게닌의 글리코실화 형태는 분자 내에 존재할 수 있는 하나 이상의 에스터, 에테르, 케톤 및 글리코실화 군일 수 있다. 일반적으로, 에스테르, 에테르, 케톤 또는 글리코실화 군은 A/B-cis 스피로스탄.스피로스텐 사포게닌 중 임의의 하나 이상의 OH 부분에서 종래의 화학 합성 방법을 사용하여 형성될 수 있다.
본 발명에 따른 활성제의 예는 WO-A-01/23406에서 화학식 I (공개된 PCT 출원서 6 페이지), WO-A-01/23406에서 화학식 II (공개된 PCT 출원서 7 페이지), WO-A-01/23407에서 화학식 I (공개된 PCT 출원서 6 페이지), WO- A-01/23407에서 화학식 II (공개된 PCT 출원서 6 페이지), WO-A-01/23408에서 화학식 I (공개된 PCT 출원서 6 페이지), WO-A-01/49703에서 화학식 I (공개된 PCT 출원서 7 페이지), WO-A-02/079221에서 화학식 II (공개된 PCT 출원서 6 페이지), WO-A-03/082893에서 화학식 I (공개된 PCT 출원서 4 페이지 참조), WO-A-03/082893에서 화학식 II (공개된 PCT 출원서 4 페이지 참조), WO-A-03/082893에서 화학식 III (공개된 PCT 출원서 5 페이지 참조), EP-A- 1024146에서 화학식 I (공개된 유럽 출원서 4 페이지 참조), 그리고 EP-A-102416에서 화학식 II (공개된 유럽 출원서 8 페이지 참조)로 나타내지는 A/B-cis 화합물이다.
예를 들어, 분자 사르사사포게닌(sarsasapogenin) 및 스밀라게닌(smilagenin) 및 이에 대응하는 에스테르, 에테르, 케톤 및 사포닌(글리코실화) 유도체는 본 발명에 대하여 유용한 활성제이다. A/B-cis 푸로스탄 사포닌인 화합물 티모사포닌 BII는 본 발명에 대하여 유용한 활성제이다.
본 발명에 대하여 유용한 다른 활성제는 에피사르사사포게닌(episarsasapogenin), 에피스미라게닌(epismilagenin), 메타게닌(metagenin), 사모게닌(samogenin), 디오티게닌(diotigenin), 이소디오티게닌(isodiotigenin), 텍소게닌(texogenin), 요노게닌(yonogenin), 멕소게닌(mexogenin) 및 마르코게닌(markogenin)을 포함하며, 이에 상응하는 에스테르, 에테르, 케톤 및 사포닌 유도체를 포함한다.
활성제는 임의의 적합한 결정형 또는 무정형의 형태에 사용될 수 있고, 임의의 적합한 무수물, 수화물 또는 용매화 형태에 사용될 수 있다. 사르사사포게닌 및 스밀라게닌 및 이의 유도체의 형태의 더 구체적인 것은 WO-A-2005/105825 및 WO-A-2006/048665에서 주어지고, 특히 참조 문헌이 관련된다.
상기 에스테르는 카복실산염 (예, 카틸산염 (에톡시카보닐옥시), 아세트산염, 숙신산염, 신남산염(cinnamate), 페룰산염(ferulate), 프로피온산염, 부티르산연, 이소부티르산염, 발레르산염, 이소발레르산염, 카프로산염(caproate), 이소카프로산염, 디에틸아세트산염, 옥타노산염, 데카노산염, 라우르산염, 미리스트산염, 팔미트산염, 스테아르산염, 벤조산염, 페닐아세트산염, 페닐프로피온산염, 신남산염(cinnamate), p-니트로벤조일옥시, 3,5-디니트로벤조일옥시, p-클로로벤조일옥시, 2,4-디클로로벤조일옥시, p-브로모벤조일옥시, m-브로모벤조일옥시, p-메톡시벤조일옥시, 프탈일, 글리신산염, 알라닌산염, 발린산염, 페닐알라닌산염, 이소류신산염, 메티오닌산염, 아르기닌산염, 아스파라긴산염, 아스파르트산염, 시스테인산염, 글루탐산염, 히스티딘산염, 리신산염, 프롤린산염, 세린산염, 트레오닌산염, 트립토판산염, 티로신산염, 퓨마르산염, 말레산염), 인산염 및 황산염 에스테르와 같은 3번 위치 에스테르를 포함한다.
에테르는 특히 알콕시 유도체(예, 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, s-프로폭시, n-부톡시, s-부톡시, t-부톡시)와 같은 3번 위치 에테르를 포함한다.
링 시스템 중 OH기를 갖는 상이한 탄소 원자에서 형성되는 다른 케톤 유도체가 또한 가능함에도 불구하고, 케톤(사포게논)은 보편적으로 사포게닌에 대응하는 3-케토 유도체이다. 3-케토 사포게논의 예는 사르사사포게논, 스밀라게논, 에피사르사사포게논(episarsasapogenone) 및 에피스밀라게논(epismilagenone)을 포함한다.
적합한 사포닌 화합물의 예는 3번 위치의 탄소 원자가(즉, R3가 결합된 탄소) R3위치에 O-당 부분, 예를 들어 모노-, 디- 또는 트리-사카라이드 또는 고급 폴리사카라이드 또는 이의 아실화된 형태를 도입하는 화합물을 포함한다. 이런 당 군의 예는 글루코오스, 만노오스, 프룩토오스, 갈락토오스, 말토오스, 셀로비오스, 수크로오스, 람노오스, 자일로오스, 아라비노오스, 푸코오스, 퀴오보오스, 아미오스, 락토오스, 갈락토오스-글루코오스, 글루코오스-아라비노오스, 프코오스-글루코오스, 람노오스-글루코오스, 글루코오스-글루코오스-글루코오스, 글루코오스-람노오스, 만노오스-글루코오스, 글루코오스-(람노오스)-글루코오스, 갈락토오스-(람노오스)-갈락토오스 및 이들의 아실화된(예, 아세틸화된) 유도체로부터 선택되는 당 군를 포함한다.
수도사포(게)닌은 각각의 스피로스탄/스피로스텐 사포게닌의 링이 개방된 유도체 또는 F링이 개방되고 닫히는 사포닌이다. 수도사포(게)닌은 C20 내지 C22 결합에서 포화되거나 불포화될 수 있다. 포화된 형태는 가끔 "디히드로수도사포(게)닌" 형태로서 지칭된다.
본 발명에 대한 활성제는 단독으로 또는 다른 소정의 조합으로 사용될 수 있다.
다른 공동 활성제 또는 공동 성분
본 발명에서 사용되는 조성물은 만일 필요하다면 하나 이상의 공동 물질 및/또는 하나 이상의 공동 성분을 포함할 수 있고, 하기에서 조성물과 투여경로와 관련하여 더 자세히 설명된다.
구체적으로, 물질대사 보조제, 케톤체 수준을 높이는 화합물(케톤체 생성 화합물), 트리카복실산(TCA) 순환 중간체, 생체 내에서 TCA 중간체로 전환될 수 있는 화합물, 에너지를 높이는 화합물, 또는 이의 임의의 혼합물이 사용될 수 있다.
물질 대사 보조제는 비타민(예, 비타민 E), 미네랄, 항산화제 및 다른 관련된 화합물(예를 들어, 아스코르브산, 바이오틴, 칼시트리올, 코발라민, 폴르산, 니아신, 판토텐산, 피리독신, 레티놀, 레티날(레틴알데히드), 레티노산, 리보플라빈, 티아민, α-토코페롤, 피틸메나퀴논(phytylmenaquinone), 멀티프레닐메나퀴논(multiprenylmenaquinone), 칼슘, 마그네슘, 나트륨, 알루미늄, 아연, 칼륨, 크로뮴, 바나듐, 셀레늄, 인, 만강, 철, 불소, 구리, 코발트, 몰리브데늄, 요오드 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
케톤체 생성 화합물은 수용자에 의해 내생의 지방 대사를 일반적으로 향상시키고, 이에 의하여 혈중 케톤 수준이 상승하며, 상기 케톤체 생성 화합물은 예를 들어, 아세톤, D-β-히드록시부티르산염, D-β-히드록시부티르산염의 대사물질 전구체 (예를 들어, 아세토아세틸-l,3-부탄다이올, 아세토아세틸-D-β-히드록시부티르산염 및 아세토아세틸글리세롤과 같은 아세토아세틸 전구체; 일가 알콜, 이가 알콜 또는 삼가 알콜을 가지는 D-β-히드록시부티르산염의 에스테르와 같은 에스테르; 또는 약 2 내지 약 100 번 반복되는 예를 들어, 약 3 내지 약 10번 반복되는 폴리-D-β-히드록시부티르산염 또는 말단이 산화된 폴리-D-β-히드록시부티르산염과 같은 D-β-히드록시부티르산염의 폴리에스테르)와 같은 C3 -8 케톤, 아세토아세트산염의 대사물질 전구체, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
상기 TCA 중간체는 시트르산, 아코니트산, 이소시트르산, α-케토클루타르산, 숙신산, 퓨마르산, 말산, 옥소아세트산, 또는 이의 임의의 조합을 포함한다.
상기 생체 내에서 TCA 중간체로 전환 가능한 화합물은 2-케토히드록시프로판올, 2,4-디히드록시부탄올, 2-케토-4-히드록시부탄올, 2,4-디히드록시부티르산, 2-케토-4-히드록시부티르산, 아스파르트산, 모노- 및 디-알킬-옥살로아세트산염, 피루브산염, 글루코오스-6-인산염, 또는 이의 임의의 조합을 포함한다.
상기 에너지를 높이는 화합물은, 예를 들어, 코엔자임 CoQ-10, 크리아틴, 크리아틴 유도체, L-카르니틴, n-아세틸-카르니틴, L-카르니틴 유도체, 또는 이의 임의의 조합을 포함한다. 이런 화합물은 다양한 수단에 의한 에너지 생산을 향상시킨다. 카르니틴은 지방산의 대사를 증가시킬 것이다. CoQ-10은 미토콘드리아 내에서 전자 전달 중에 전자 운반체로써 역할한다. 따라서, 이런 화합물을 중간사슬지방(MCTs)과 같은 활성제와 함께 부가하는 것은 물질 대사 효율, 특히 영양적으로 부족할 수 있는 개체에서 물질 대사 효율을 증가시킬 것이다.
상기 공동 물질이 존재하면, 상기 공동 물질은 치료법 또는 영양학에 사용하기 위해 하나 이상의 양이온을 포함하는 착물 또는 염과 같은 물질 대사 전구체의 형태로 제공될 수 있다. 양이온 및 보편적인 생리학적 염의 예는 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘염을 포함하고, 각각의 경우에 양이온은 L-리신, L-아르기닌, 메틸 글루카민 또는 당해 분야에서 알려진 것과 같은 염 착물을 형성하는 생리학적 짝이온에 의해 균형을 이룬다. 이런 물질 대사 전구체의 제조 및 사용은 WO-A-98/41201 및 WO-A-00/15216에 개시되며, 상기 공개문헌은 참조로 본 명세서에 포함된다.
조성물 및 투여 경로
활성제는 조성물의 형태로 투여될 수 있으며, 상기 조성물은 활성제 및 임의의 적합한 부가 성분을 포함한다. 상기 조성물은 예를 들어, 약학 조성물(약제), 식품, 식품 보충제 또는 음료일 수 있다. 이런 조성물은 특정 화합물의 혼합물, 및/또는 이의 생리학적으로 허용되는 에스테르, 아미드, 염, 용매화합물, 유사체 또는 다른 적합한 유도체의 혼합물을 함유할 수 있다. 일반적으로, 하나의 활성제 및/또는 조성물의 다른 성분의 존재에 대한 본 명세서의 참조문헌은 2개 이상의 물질 및/또는 성분의 혼합물이 존재하는 범위 내에 포함된다.
약학 조성물은 임의의 적절한 경로에 의해 투여될 수 있으며, 상기 투여 경로는 경구, 비위관(nasogastric), 직장, 경피, 비경구(예, 피하의, 근육내의, 정맥내의, 수내의 그리고 피내의 주사 또는 주입), 비강내, 경점막(transmucosal), 이식, 질의, 국부의, 구강의 그리고 설하선의 경로를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
이것은 투여 부위가 치료될 포유류의 뇌와 동떨어질 수 있는 활성제와 같은 수만큼 어느 정도의 소분자 친유성제의 사용을 보편적인 특징으로 하며, 상기 물질은 혈류를 통해 이동하고 혈액 뇌 관문 및/또는 혈액 신경 장벽을 통과한다.
본 발명과 관련하여 상기 용어 "약학 조성물"은 투여 및 제형의 방식의 유형에 따라, 활성제를 포함하고 부가적인 약학적으로 허용가능한 캐리어, 희석제, 보조제, 부형제, 또는 보존제, 필러제, 붕해제, 완충제, 보존제, 침투 증진제, 습윤제, 유화제, 서스펜션화제, 감미제, 방향제, 향기제(perfuming agent), 항세균제, 항진균제, 윤활제 및 투여제(dispensing agent)와 같은 비히클(vehicle)을 포함한다. 적합한 제형은 리포좀 제제를 포함하는 주사를 위한 액체 제제뿐만 아니라 예를 들어, 정제, 당과, 분말, 영약, 시럽, 액체 제제를 포함하며, 상기 액체 제제는 현탁액, 분무, 흡입제. 정제, 캔디, 에멀젼, 용액, 과립, 캡슐 및 좌약을 포함한다. 기법 및 제형은 일반적으로 문헌[Remington, Pharmaceutical Sciences, Mack Publiching Co., Easton, PA, 최근판]에서 발견할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "식품", "식품 보충제", "음료" 및 "음료 보충제"는 이러한 용어에 대하여 평범한 의미를 가지며, 약학 제제에 제한되지 않는다. 이런 조성물은 경구 섭취에 맞게 조정된다. 보충제 조성물(예, 식품 보충제 또는 음료 보충제)은 식품과 음료에 첨가되어 함께 소화되도록 준비된다. 식품은 단백질 및 미네랄원과 섬유소원뿐만 아니라, 지방, 오일 및 탄수화물과 같은 칼로리가 높은 물질을 포함할 수 있다. 조성물의 예는 유제품, 곡류, 야채, 육류, 생선, 가금류 또는 과일 기반 식품을 포함한다. 음료의 예는 탄산 음료 및 비탄산 음료, 과일 쥬스, 커피 또는 차와 같은 우러낸 음료 예를 들어, 허브차, 과일차, 녹차 또는 인디안차 또는 중국차를 포함한다. 조성물은 우유 또는 분말화된 우유 및/또는 락토오스와 같은 우유-유래 성분 및/또는 카세인을 포함할 수 있다. 상기 우유 또는 우유-유래 성분은 소 또는 염소로부터 유래되는 것이 바람직하다. 두유와 같은 식물-유래 우유가 사용될 수 있다. 식용가능한 조성물은 하나 이상의 발효된 성분을 포함할 수 있다. 상기 조성물은 요거트를 포함할 수 있다. 예를 들어, 식품 보충제는 비타민, 미네랄, 카페인, 마황 알칼로이드를 함유할 수 있다.
경구 조성물
적합한 섭취가능한 형태의 예는 액체, 분말 또는 고형 중심을 갖는 고형, 제형; 얇은 조각(thin strips); 검질의 정제; 폼(foam) 정제; 및 코팅 및/또는 과립 기질에 타액 유도제를 갖는 코팅된 입자를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일 실시예에서, 제형은 고체, 반고체, 또는 특이적으로 기결정된 양(즉, 투여량)의 특정 성분, 예를 들어 하기에서 정의되는 활성 성분을 함유하도록 설계되는 액체 조성물이다. 적합한 제형은 약학적 약물 전달 시스템일 수 있으며, 상기 약학적 약물 전달 시스템은 경구 투여, 구강 투여 또는 점막 전달을 위해 적합한 제형을 포함하며; 또는 미네랄, 비타민 및 다른 약효 식품, 경구 치료제, 향신료 등을 전달하기 위해 조성물을 포함한다. 일 실시예에서, 본 발명의 제형으로 고체가 고려될 수 있지만; 반면에, 상기 제형은 액체 또는 반고체 성분을 함유할 수 있다. 또 다른 실시예에서, 제형은 약학적 활성 성분을 인간의 위장관에 전달하기 위하여 경구적으로 투여되는 시스템이다. 조성물 내의 적합한 공동 물질은 진통제, 항염증제, 항관절염제, 마취제, 항히스타민제, 기침약, 항생제, 항암제, 항알레르기제, 항감염제, 항바이러스제, 항응고제, 항우울제, 항당뇨병제, 진토제, 가스제거제, 항진균제, 진경제, 식용감퇴제, 기관지확장제, 심혈관작용제, 중추신경계제, 중추신경계 자극제, 면역계 자극제, 충혈완화제, 이뇨제, 거담제, 위장관제, 편두통 제제, 멀미제품, 점액 용해제, 근육 이완제, 골다공증 제제, 폴리디메틸실록세인, 호흡기계통 치료제, 수면제, 요로치료제 및 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 적합한 경구 치료제, 예를 들어 구강 청정제, 치아 미백제, 항미생물제, 치아 광화제, 치아 부식 억제제, 국소 마취제, 점막보호제(mucoprotectants) 등이 존재할 수 있다. 적합한 방향제는 메탄올, 페퍼민트, 민트 향신료, 과일 향신료, 초콜렛, 바닐라, 풍선껌 향신료, 커피 향신료, 리큐어 향신료 및 이의 조합 등을 포함한다. 또 존재할 수 있는 적합한 위장관제의 예는 탄산 칼슘, 산화 마그네슘, 마그네슘 산화물, 탄산 마그네슘, 산화 알루미늄, 이탄산 나트륨, 디히드록시알루미늄 탄산 나트륨과 같은 제산제; 비사코딜(bisacodyl), 카스카라 사그라다(cascara sagrada), 단손(danthron), 차풀(senna), 페놀프탈레인, 알로에, 피마자유, 리시놀레산, 및 데히드로콜산(dehydrocholic acid)과 같은 자극성 완화제 및 이의 혼합물; 파모타딘(famotadine), 라니티딘(ranitidine), 시메타딘(cimetadine), 니자티딘(nizatidine)와 같은 H2 수용체 촉진제; 오메프라졸(omeprazole) 또는 란소프라졸(lansoprazole)와 같은 양성자 펌프 억제제; 수크라플레이트(sucraflate) 및 미소프로스톨(misoprostol)와 같은 위장의 세포보호제; 프루칼로프라이드(prucalopride)와 같은 위장 운동 촉진제 , 클래리스로마이슨(clarithromycin), 아목시실린(amoxicillin), 테트라시클린(tetracycline), 및 메트로니다졸(metronidazole)과 같은 헬리코박터 파이로리에 대한 항생제; 디페녹실산염 및 로페라마이드(loperamide)와 같은 지사제; 글리코피롤산염; 온단세트론(ondansetron)와 같은 제토제, 메살라민(mesalamine)과 같은 진통제를 포함한다. 또한, 물질은 진통제, 항염증제 및 해열제로부터 선택되는 것으로 존재할 수 있다: 예를 들어, 프로피온산 유도체를 포함하는 비스테로이드성 항염증 약물(NSAIDs): 예를 들어, 이부프로펜, 나프록센, 케토프로펜 등; 아세트산 유도체: 예를 들어, 인도메타신, 디클로페낙(diclofenac), 술린닥(slindac), 톨메틴(tolmetin) 등; 페남산(fenamic acid) 유도체: 예를 들어, 메패남산(mefanamic acid), 메클로페남산(meclofenamic acid), 플루페남산(flufenamic acid) 등; 비페닐카딜산(biphenylcarbodylic acid) 유도체: 예를 들어, 디플루니살(diflunisal), 플루페니살(flufenisal) 등; 및 옥시캠(oxicams): 예를 들어, 피록시캠(piroxicam), 수독시캠(sudoxicam), 이속시캠(isoxicam), 멜록시캠(meloxicam) 등이 있다. 일 실시예에서, 공동 활성 성분은 프로피온산 유도체로부터 선택될 수 있다: 예를 들어, 이부프로펜, 나프록센(naproxen), 플루르비프로펜(flurbiprofen), 펜부펜(fenbufen), 페노프로펜(fenoprofen), 인도프로펜(indoprofen), 케토프로펜(ketoprofen), 플루프로펜(fluprofen), 피르프로펜(pirprofen), 카르프로펜(carprofen), 옥사프로진(oxaprozin), 프라노프로펜(pranoprofen), 수프로펜(suprofen), 및 약학적으로 허용가능한 염, 유도체 및 이의 조합이 있다. 본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 활성 성분은 아세트아미노펜, 아세틸 살리실산, 이부프로펜, 나프록센, 케토프로펜, 플루르비프로펜, 디클로페낙, 시클로벤자프린(cyclobenzaprine), 멜록시캠, 로페콕시브(rofecoxib), 셀레콕시브(celecoxib), 및 약학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 이성질체 및 이의 혼합물로부터 선택될 수 있다.
다른 실시예에서, 공동 활성제는 수도에페드린(pseudoephedrine), 페닐에페린(phenylepherine), 페닐프로판올아민, 클로로페니라민(chlorpheniramine), 덱스트로메토르판(dextromethorphan), 디펜히드라민(diphenhydramine), 구아이페네신(guaifenesin), 아스테미졸(astemizole), 테르페나딘(terfenadine), 펙소페나딘(fexofenadine), 로라타딘(loratadine), 데스로라티딘(desloratidine), 독실라민(doxilamine), 노라스테미졸(norastemizole), 세티리진(cetirizine), 벤조카인(benzocaine), 이의 혼합물, 및 약학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 이성질체 및 이의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 또 다른 실시예에서, 공동 활성 성분은 메틸페니데이트(methylphenidate), 모다프밀(modafmil) 및 주의력결핍 과잉행동장애 또는 주의령 결핍장애에 적합한 다른 활성물질; 옥시부티닌(oxybutynin); 시데네필(sidenefil); 및 시클로벤자프린(cyclobenzaprine)일 수 있다. 활성 성분 또는 성분들은 본 발명의 제형에 치료적 유효량으로 존재하며, 상기 치료적 유효량은 경구 투여에 대한 소정의 치료적 반응을 낳고 통상의 기술자에 의해 결정될 수 있는 양이다. 투여되는 특정 활성 성분의 이러한 양을 결정함에 있어서, 당해 분야에서 알려진 것 같이, 활성 성분의 생물학적 이용가능성 특징, 투여량 요법, 환자의 나이와 몸무게, 그리고 다른 인자는 고려되어야만 한다. 일 실시예에서, 상기 제형은 활성성분의 적어도 85 중량%를 포함한다. 상기 활성 성분 또는 성분들은 임의의 형태의 제형으로 존재할 수 있다. 예를 들어, 상기 활성 성분은 제형 내에서 분자 수준으로 예를 들어, 녹거나 용해되어 분산될 수 있거나, 코팅되거나 비코팅되어서 입자의 형태로 분산될 수 있다. 만일 활성 성분이 입자의 형태이면, 상기 입자(코팅되건 되지 않건)는 약 1 마이크론 내지 약 2000 마이크론의 평균 입자 크기를 보편적으로 가진다. 일 실시예에서, 이러한 입자는 약 1 마이크로 내지 약 300 마이크론의 평균 입자 크기를 가지는 결정이다. 또, 다른 실시예에서, 상기 입자는 약 50 마이크론 내지 약 2000 마이크론, 예를 들어 약 50 마이크론 내지 약 1000 마이크론 또는 약 100 마이크론 내지 약 800 마이크론의 평균 입자 크기를 가지는 과립 또는 펠렛이다.
일 실시예에서, 본 발명의 경구 조성물은 인간 또는 애완동물 식품과 같은 식품 조성물이다. 어떤 실시예에서, 상기 조성물은 식품 조성물이며, 활성제에 부가하여 약 15 내지 50 건조중량% 단백질, 약 5 내지 40 건조중량% 지방, 약 15 내지 60 건조중량% 탄수화물, 5 내지 10 건조중량% 먼지 함량을 더 포함하고, 약 5 내지 20 중량%의 수분함량을 가진다. 어떤 실시예에서, 상기 식품은 완전한 필수적 식이 요법을 공급하는 것을 목적으로 한다. 또한, 제공되는 것은 스낵, 애완동물 간식(예, 비스켓), 영양바, 그리고 식료품 또는 식이 보충제에 대한 다른 형태로서 유용한 조성물이며, 상기 다른 형태는 하기에서 논의되는 정제, 캡슐, 겔, 반죽, 에멀젼, 캐플릿 등을 포함한다. 선택적으로, 상기 식품 조성물은 건조한 조성물(예를 들어, 애완동물 사료를 위한 개먹이), 반습(semi-moist) 조성물, 습한 조성물 또는 이의 임의의 조합일 수 있다.
본 발명의 조성물은 인간의 소비를 위해 특별히 제형화된 식료품일 수 있다. 상기 조성물은 다른 인간 식이 보충제뿐만 아니라 인간의 필수 식이 요법을 목적으로 식품 및 영양소를 포함할 것이다. 일 실시예에서, 인간의 소비를 위해 제형화된 상기 식료품은 완벽하고 영양상으로 균형이 잡혔으며, 이와 다르게, 다른 것들은 균형이 잡히거나 제형화된 식사와 함께 사용되기 위한 목적의 식이 보충제이다.
조성물은 그레이비, 마시는 물, 음료, 액체 농축물, 겔, 요거트, 분말, 과립, 반죽, 현탁액, 씹어 먹는 사탕, 조각, 간식, 스낵, 펠렛, 환약, 캡슐, 정제, 또는 임의의 다른 전달 형태와 같은 식품 보충제일 수 있다. 상기 용어 "식품 보충제"는 식이 보충제를 포함한다. 식이 보충제는 특정 종 또는 반려동물과 같은 개체의 동물까지 또는 인간에 의한 소비를 위해 특별히 제형화 될 수 있다. 일 실시예에서, 식이 보충제는 활성제의 비교적 농축된 투여량을 포함할 수 있어서, 상기 보충제는 적은 양으로 동물에게 투여될 수 있거나, 동물에게 투여하기 전에 희속할 수 있다. 일부 실시예에서, 상기 식이 보충제 또는 다른 활성-함유 조성물은 동물에게 투여하기 이전에, 예를 들어, 투여량을 조절하기 위해, 더 맛있게 하기 위해, 또는 적은 투여량으로 더 자주 투여할 수 있도록 물 또는 그 밖에 유사한 것과 혼합된다.
본 발명의 조성물은 냉장되거나 냉동될 수 있다. 상기 활성제는 필요한 유익한 양을 제공하기 위하여 조성물의 다른 성분과 미리 혼합될 수 있으며, 유화될 수 있으며, 애완동물 식품 조성물, 식이 보충물, 또는 인간의 소비를 위해 제형화된 식료품상에 코팅될 수 있으며, 또는 상기 활성제를 동물에게 소비하거나 제공하기 이전에 예를 들어, 분말 또는 혼합 가루를 사용하여 조성물에 첨가될 수 있다.
일 실시예에서, 상기 조성물은, 상기 조성물이 투여되는 동물 또는 인간에게서 소정의 생리학적 또는 정신의학적 또는 행동학적 효과를 갖도록 활성제를 유효량으로 포함한다. 애완동물 식품 및 인간의 소비를 위해 제형화된 식료품에 대하여, 조성물의 퍼센트로서 활성제의 양은 상기 조성물의 건조물을 기준으로 하여 약 1 % 내지 30 %이며, 그러나 이보다 적거나 큰 퍼센트도 공급될 수 있다. 다양한 실시예에서, 상기 양은 상기 조성물의 건조물을 기준으로 하여 약 1.0 %, 1.5 %, 2.0 %, 2.5 %, 3.0 %, 3.5 %, 4.0 %, 4.5 %, 5.0 %, 5.5 %, 6 %, 6.5 %, 7 %, 7.5 %, 8 %, 8.5 %, 9 %, 9.5 %, 10 %, 10.5 %, 11 %, 11.5 %, 12 %, 12.5 %, 13 %, 13.5 %, 14 %, 14.5 %, 15 %, 15.5 %, 16 %, 16.5 %, 17 %, 17.5 %, 18 %, 18.5 %, 19 %, 19.5 %, 20 %, 20.5 %, 21 %, 21.5 %, 22 %, 22.5 %, 23 %, 23.5 %, 24 %, 24.5 %, 25 %, 25.5 %, 26 %, 26.5 %, 27 %, 27.5 %, 28 %, 28.5 %, 29 %, 29.5 %, 30 %, 또는 그 이상이다. 식이 보충제는 몇 배 더 높은 활성제의 농도를 함유하도록 제형화될 수 있으며, 정제, 캡슐, 액체 농축물 또는 다른 유사한 제형의 형태로 동물 도는 인간에게 투여하기 위해 다루기 쉽도록 제형화될 수 있으며, 또는 물에서 희석, 애완동물 또는 인간 식품상에 분무 또는 살포, 그리고 투여의 다른 유사한 방식에 의해 투여하기 전에 희석되기 위해 제형화될 수 있다. 식이 보충제에 대하여, 단독의 활성제는 동물 도는 인간에게 직접적으로 투여될 수 있거나, 동물의 또는 인간의 일상 식품에 직접적으로 적용될 수 있다. 상기 조성물은 미네랄, 비타민, 염, 조미료, 색료, 및 보존제와 같은 보충 물질을 선택적으로 포함할 수 있다. 보충 미네랄의 제한되지 않는 예는 칼슘, 인, 칼륨, 나트륨, 철, 염소, 붕소, 구리, 아연, 마그네슘, 망간, 요오드, 셀레늄 등을 포함한다. 보충 비타민의 제한되지 않는 예는 비타민 A, 비타민 B 중 어느 것, 비타민 C, 비타민 D, 비타민 E, 및 비타민 K를 포함하며, 다양한 염, 에스테르 도는 상기의 다른 유도체를 포함한다. 또한, 부가적인 식이 보충제는 예를 들어, 니아신의 임의의 형태, 판토텐산, 이눌린, 폴산(folic acid), 바이오틴, 아미노산 등뿐만 아니라 이의 염 및 유도체에 포함될 수 있다. 이에 더하여, 상기 조성물은 (n-3) 및/또는 (n-6) 지방산과 같은 이로운 장쇄(long chain) 폴리불포화된 지방산, 아라키돈산(arachidonic acid), 아이코사펜타에노산(eicosapentaenoic acid), 도코사펜타에노산(docosapentaenoic acid), 및 도코사헥사에노산(docosahexaenoic acid) 뿐만 아니라 이의 모든 조합을 포함할 수 있다.
본 명세서에 제공되는 상기 조성물은 일반적인 신경 건강을 촉진하거나 지속시키는 하나 이상의 보충 물질을 선택적으로 포함하거나, 인식 기능을 더 향상시키는 하나 이상의 보충 물질을 선택적으로 포함한다. 예를 들어, 이런 물질은 콜린, 포스파티딜세린, 알파-리포산, CoQ10, 아세틸-L-카르니틴, 및 허브 성분 또는 예를 들어, 은행잎추출물, 바코파 몬니에라(Bacopa monniera), 콘볼불러스 플루리카울리스(Convolvulus pluricaulis) 및/또는 은방울수선화(Leucojum aestivum) 식물로부터 유래된 하나 이상의 성분을 함유하는 추출물을 포함한다.
다양한 실시예에서, 본 명세서에 제공되는 상기 식품 도는 식품/식이 보충제 조성물은 건조된 중량을 기준으로 하여 약 15 내지 약 50 %의 조질(crude) 단백질을 포함한다. 상기 조질 단백질 물질은 동물, 식물 또는 다른 것들 중 임의의 원천으로부터 유래되는 하나 이상의 단백질을 포함한다. 예를 들어, 콩, 목화씨 및 땅콩과 같은 식물 단백질 여기서 사용하기에 적합하다. 카세인, 알부민, 및 돼지고기, 양고기, 말고기, 가금류 고기, 물고기를 포함하는 고기 단백질 또는 이의 혼합물과 같은 동물 단백질 및 유제품 단백질은 유용하다.
상기 조성물은 건조된 중량을 기준으로 하여 약 5 % 내지 약 40 %의 지방을 더 포함할 수 있다. 상기 조성물은 탄수화물원을 더 포함할 수 있다. 상기 조성물은 건조된 중량을 기준으로 하여 약 15 % 내지 약 60 %의 탄수화물을 보편적으로 포함한다. 이러한 탄수화물의 예는 쌀, 옥수수, 수수, 자주개자리, 보리, 콩, 카놀라, 보리, 밀과 같은 곡물 또는 시리얼, 또는 이의 혼합물을 포함한다. 또한, 상기 조성물은 건조된 유장(whey)과 같은 탄수화물을 포함하는 다른 성분 및 다른 유제품 또는 부산물을 선택적으로 포함한다.
또한, 상기 조성물은 적어도 하나의 섬유소원을 포함할 수 있다. 식품 또는 사료에 사용하기에 적합한 다양한 용해성 또는 비용해성 섬유소 중 어떤 것도 활용될 수 있고, 이런 섬유소는 통상의 기술자에게 알려져있다. 적합한 섬유소원은 사탕 무우박(사탕 무우로부터), 아라빅검, 탈하검, 사일륨(psyllium), 쌀겨, 카로브콩검(carob bean gum), 감귤펄프(citrus pulp), 펙틴, 단쇄(short chain) 올리고프룩토오스에 추가한 프룩토올리고사카라이드, 만난올리고프룩토오스(mannanoligofructose), 대두 섬유소(soy fibre), 알라비노갈락탄, 갈락토올리고사카라이드, 아라비녹실란, 또는 이의 혼합물을 포함한다. 대안적으로, 상기 섬유소원은 발효가능한 섬유소일 수 있다. 발효가능한 섬유소는 반려 동물의 면역 시스템에 혜택을 제공하기 위해 이미 설명되어왔다. 장 내에서 프로바이오틱(probiotic) 미생물의 성장을 향상시키기 위한 프리바이오틱(prebiotic) 조성물을 제공하는 통상의 기술자에게 알려진 발효가능한 섬유소 또는 다른 조성물은 동물의 면역 시스템에 대하여 본 발명에 의해 제공되는 혜택의 향상을 돕기 위해 조성물에 포함될 수도 있다. 예를 들어, 부가적으로, 유산균(Lactobacillus)종 또는 비피도박테리움(Bifidobacterium)종과 같은 프로바이오틱 미생물이 조성물에 포함될 수 있다.
또 다른 실시예에서, 본 발명의 경구 조성물은 탄산 음료 조성물이며, 이를 위한 농축물을 포함한다. 이런 조성물은 당해 분야에 잘 알려진 방법에 의해 제조될 수 있다.
이런 실시예에서, 이산화 탄소 때문에(물에서 탄소를 형성함), 상기 음료는 보통 산성이다. 반면, 탄산은 "신맛이 나게 하는" 음료를 가능하게 하며, 즉 조절되어서 "톡 쏘는"음료에서 발견될 수 있는 유형의 부가산(additional acid)을 함유한다. 예는 인산을 포함할 수 있고, 시트르산, 말레산, 퓨마르산 및 타르타르산과 같은 식품 산(food acids)(가끔 "건강에 좋은 산"이라고 불림)을 포함할 수 있다. 과일, 과일 쥬스 및 과일 추출물은 과일산을 함유하여서, 이러한 성분을 함유하는 음료는 신맛이 나는 것으로서 생각된다.
상기 음료는 무알코올일 수 있다. 예는 콜라 음료, 오렌지 음료, 레몬 음료, 레모네이드, 탄산 음료, 루트 비어(root beer), 진저 비어를 포함한다.
상기 음료는 알코올일 수 있으며, 보편적으로 3 내지 9 중량%의 에탄올을 포함한다. 예는 사과주 이른바 "알코팝"을 포함하며, 상기 알코팝은 종종 보드카 또는 다른 증류주와 과일 향신료의 탄산 혼합이다. 상기 음료는 살짝 알콜성을 가질 수 있고, 보편적으로 0.1 내지 3 중량%의 에탄올을 포함한다. 예는 섄디(shandy) 및 루트 비어, 진저 비어 및 레모네이드의 어느 정도로 발효된 유형을 포함한다.
탄산 음료는 비-유제품일 수 있고, 예를 들어, 우유가 포함되지 않은 또는 요거트가 포함되지 않은 음료일 수 있다. 상기 탄산 음료는 실질적으로 무-지방이다.
상기 음료는 향미가 있는 물을 기반으로 하는 음료일 수 있다.
상기 탄산 음료는 맑거나 혼탁하거나 탁하거나 불투명할 수 있다.
상기 탄산 음료는 비타민, 예를 들어 A, B, C, D, E 및 K 군 비타민 중 하나 이상을 함유할 수 있다. 비타민은 과일 쥬스와 같은 다른 성분에 존재하는 비타민에 부가하여 첨가될 수 있다. 수용성 비타민 B와 C는 음료의 가장 적절한 성분이다. 지용성 비타민 A, D, E 및 K는 별로 좋지 않다. 바람직하게, 비타민 E 또는 이의 유도체는 음료에 포함되지 않는다. 바람직하게, 비타민 A 및 K, 또는 이의 유도체는 음료에 포함되지 않는다.
상기 탄산 음료는 감미제를 함유할 수 있다. 상기 감미제는 천연 또는 합성 감미제, 예를 들어 설탕, 옥수수 시럽, 당 알코올(예를 들어, 소르비톨, 자일리톨, 만니톨, 말티톨 또는 이소말트), 또는 강렬한 감미료(예를 들어, 사카린, 수크랄로오스, 네오탐, 아세설팜칼륨 또는 아스파르탐)일 수 있거나, 이의 임의의 조합일 수 있다.
국부 조성물
또 다른 실시예에서, 본 발명의 조성물은 국부 조성물, 예를 들어 화장품, 눈 또는 피부과학적인 조성물이다.
활성 물질의 전달을 위한 국부 조성물은 임의의 적합한 방식으로 제형화된다. 상기 국부 조성물은 종래의 방식의 상처 드레싱 또는 다른 기계적 응용 시스템으로 제형화될 수 있다.
본 명세서에 설명된 활성제 화합물은 하나 이상의 화장용으로 및/또는 피부과학적으로 허용가능한 캐리어를 포함하여 제조되고 전달될 수 있으며, 선택적으로 다른 치료적 성분을 포함하여 제조되고 전달될 수 있다. 조성물 중의 임의의 다른 성분과 양립할 수 있고 이의 수용자에게 해롭지 않는 캐리어가 허용되어야 한다. 또한, 캐리어는 물질의 원하지 않는 임의의 부작용을 감소시킬 수 있다. 이러한 캐리어 또는 비히클 성분은 당해 분야게 알려져 있다. 문헌[Handbook of Cosmetic Science and Technology Taylor & Francis Group, 2006]을 참조하고, 전체가 참조로 여기에 포함된다.
본 발명에 따른 국부 투여를 위한 조성물은 조성물 내에 제공되는 활성 성분및 투여의 면적과 빈도에 따라 국부에 사용 및/또는 전신에 사용을 할 수 있다. 따라서, 국부용 제형에 대한 하기의 기재는, 국부적으로 전신적으로 투여될 수 있는 활성 물질이 포함되는 경우에는, 전신용 제형에 관한 것으로 볼 수 있다.
본 발명의 조합에 사용되는 국부 투여용 조성물은 종래에 사용되고 다양한 형태로 존재할 수 있는 임의의 약, 화장품, 눈 또는 피부과학적 제제에 포함될 수 있다. 예를 들어, 상기 국부 투여용 조성물은 용액, 오일 중의 물(W/O)형 에멀젼, 물 중의 오일(O/W)형 에멀젼, 또는 물 중의 오일 중의 물(W/O/W) 또는 오일 중의 물 중의 오일(O/W/O) 에멀젼과 같은 다중 에멀젼, 수성분산제 또는 지성분산제, 겔, 크림, 고체 스틱, 또는 연무제일 수 있다. 본 발명에 따른 에멀젼, 예를 들어, 크림, 로션 또는 화장용 유액(cosmetic milk)의 형태는 이롭고, 예를 들어, 지방, 오일, 왁스 및/또는 다른 지질을 포함할 뿐만 아니라 물과 상기 유형의 제제를 위해 보통 사용되는 하나 이상의 유화제를 포함한다.
어떤 실시예에서는, 본 발명에 따른 국부 투여용 조성물이 조성물에 따라서 예를 들어, 보호용 피부 크림, 클렌징 우유, 피부 보호용 로션, 영양 크림, 데이 크림(day cream), 나이트 크림(night cream) 등으로서 사용될 수 있다.
국부 투여용 조성물은 이런 제제에 전통적으로 사용되는 화장용으로 활성을 가지는 성분, 화장품 조제 및/또는 화장품 첨가물을 포함할 수 있다. 상기 조성물은 예를 들어, 항산화제, 보존제, 살균제, 증점제, 필러제, 소포제, 향료, 필수 오일, 착색제(예를 들어, 실리카흄, 코팅된 철 산화물, 티타늄 이산화물, 보론 질화물, 및 황산 바륨을 선택적으로 포함하는 산화물 및 규산염과 같은 매우고운 착색제), 세라미드(천연 물질 또는 천연 세라미드의 기능성 모사 중 어느 하나), 계면활성제, 유화제, 인지질, 콜레스테롤, 파이토스핀고신(phytosphingosines), additional active ingredients such as 비타민 또는 단백질(예를 들어, 레티닐 팔미트산염 도는 아세트산염, 판테놀로서 비타민 B, 그리고 이의 유도체, 토코페롤 아세트산염으로서 비타민 E, 감마-리놀렌산 에스테르와 같은 폴리불포화지방산으로서 비타민 F), 자외선차단제(화학적 자외선차단제 및 분산되는 물리적 자외선차단제를 포함), 안정화제, 구충제, 알콜, 가소제, 폴리올, 폴리머, 발포 안정화제, 전해액, 유기용매, 실리콘 유도체, 보습제 및/또는 습윤제, 지방, 오일, 왁스, 물, 염, 단백질 가수분해 또는 각층박리성활성 물질 등을 포함한다. 이런 첨가물은 국부 투여를 위한 피부과용 또는 화장품 조성물에 존재할 수 있다.
상기에서 언급하였듯이, 국부 전달을 위한 활성제에 부가하여, 본 발명의 국부 조성물은 이로운 효과를 제공하는 하나 이상의 부가적인 활성제 또는 물질을 또 포함할 수 있다. 예를 들어, 특정 실시예에서, 상기 국부 조성물은 자외선 보호 제품을 포함할 수 있다. 본 발명에 따라 사용되는 활성 성분에 부가하여, 국부 조성물은 적어도 하나의 부가적인 UVA 필터 및/또는 적어도 하나의 UVB 필터 및/또는 적어도 하나의 무기 안료를 바람직하게 포함한다.
상기 UVB 필터는 오일 또는 물에 용해될 수 있다. 오일에 용해될 수 있는 물질의 예에는 예를 들어: 3-벤질리덴캄퍼(3-benzylidenecamphor) 및 이의 유도체, 예를 들어 3-(4-메틸벤질리덴)캄퍼, 4-아미노벤조산 유도체, 바람직하게는 2-에틸핵실 4-디메틸아미노벤조산염, 아밀 4-디메틸아미노벤조산염; 시나믹 에스테르(cinnamic esters), 바람직하게는 2-에틸헥실 4-메톡시시남산염, 이소펜틸 4-메톡시시남산염; 살리실릭 에스테르, 바람직하게는 2-에틸헥실 살리실산염, 4-이소프로피벤질 살리실산염(isopropybenzyl salicylate), 호모메틸 살리실산염; 벤조페논 유도체, 바람직하게는 2-히드록시-4-메톡시벤조페논, 2-히드록시-4-메톡시-4'-멘틸벤조페논, 2,2'-디히드록시-4-메톡시벤조페논; 벤즈알말로닉 에스테르(benzalmalonic esters), 바람직하게는 디(2-에틸헥실) 4-메톡시벤즈알말론산염; 2,4,6-트리아닐리노-(p-카르보-2'-에틸-1'-헥실옥시)-l,3,5-트리잔이 있다.
물에 용해될 수 있는 이로운 물질에는 2-페닐벤즈이미다졸-5-설폰산 및 이의 염, 예를 들어 나트륨, 칼륨 또는 트리에탄올암모늄 염, 벤조페논의 설폰산 유도체, 바람직하게는 2-히드록시-4-메톡시벤조페논-5-설폰산 및 이의 염; 예를 들어, 4-(2-옥소-3-보르닐리덴-메틸)벤젠설폰산, 2-메틸-5-(2-옥소-3-보르닐리덴메틸)설폰산 및 이의 염과 같은 3-벤질리덴캄퍼의 설폰산 유도체가 있다. 물론, 본 발명에 의해 사용될 수 있는 상기 언급된 UVB 필터의 리스트는 제한하기 위한 의도가 아니다.
본 발명에 의해 사용될 수 있는 UVA 필터의 예는 디벤조일메탄 유도체를 포함하며, 구체적으로 1-(4'-tert-부틸페닐)-3-(4'-메톡시페닐)프로만-1,3-다이온 및 1-페닐-3-(4'-이소프로필페닐)프로판-1,3-다이온을 포함한다.
본 발명에 의해 사용될 수 있는 무기 안료의 예는 티타늄, 아연, 철, 지르코늄, 실리콘, 망간, 알루미늄, 세륨 산화물 및 이의 혼합물의 산화물, 그리고 상기 산화물이 활성제인 변형물을 포함한다. 특별히 바람직하게, 상기 무기 안료는 티타늄 이산화물을 기반으로 하는 안료이다.
본 발명에 따라서 사용될 수 있는 유리한 항산화제는 화장품 및/또는 눈 및/또는 피부과 응용을 위해 적합하거나 종래의 모든 항산화제이다. 상기 항산화제는 매우 낮은 내량(예, pmol 내지μmol/kg)의 아미노산(예, 글리신, 히스티딘, 티로신, 트립토판) 및 이의 유도첸, 이미다졸 (예, 유로카닌산) 및 이의 유도체, D,LO카르노신, D-카르노신, L-카르노신 및 이의 유도체(예, 안세린), 카로티노이드, 카로틴(예, 알파-카로틴, 베타-카로틴, 리코펜) 및 이의 유도체와 같은 펩타이드, 오로티오글루코오스(aurothioglucose), 프로필티오우라실 및 다른 티올(예, 티오레독신, 글루타티온, 시스테인, 시스타인, 시스타민 및 이의 클리코실, N-아세틸, 메틸, 에틸, 프로필, 아밀, 부틸 및 라우릴, 팔미토일, 올레일, 감마-리놀레일, 콜레스테릴 및 글리세릴 에스테르) 및 이의 염, 디라우릴 티오디프로피온산염(dilauryl thiodipropionate), 디스테아릴 티오디프로피온산염, 티오디프로피오닉산 및 이의 유도체(예, 에스테르, 에테르, 펩타이드, 지질, 뉴클레오타이드, 뉴클레오시드 및 염) 및 설폭심 화합물(sulphoxime compounds)(예, 부티오닌(buthionine) 설폭시민, 호모시스테인 설폭시민, 부티오닌 설폰, 펜타-, 헥사-, 헵타티오닌 설폭시민), 더나아가 (금속)킬레이트화제 (예, 알파-히드록시 지방산, 팔미트산, 피드산, 락토페린), 알파-히드록시산(예, 시트르산, 락트산, 말산), 부식산, 담즙산, 담즙 추출물, 빌리루빈, 빌리베르딘, EDTA, EGTA 및 이의 유도체, 불포화 지방산 및 이의 유도체(예, 감마-리놀렌산, 리놀산, 올레산), 폴산 및 이의 유도체, 알라닌디아세트산, 플라보노이드, 폴페놀, 카테콜, 유비퀴논 및 유비퀴놀 및 이의 유도체, 비타민 C 및 유도체(예, 아스코르빌 팔미트산염, Mg-아스코르빌 인산염, 아스코르빌 아세트산염), 토코페롤 및 유도체(예, 비타민 E 아세트산염), 및 벤조인 수지의 코니페릴 벤조산염, 루틴산 및 이의 유도체, 페룰산 및 이의 유도체, 부틸히드록시톨루엔, 부틸히드록시아니솔, 노르디히드로구아이악산(nordihydroguaiacic acid), 노르디히드로구아이아레트산(nordihydroguaiaretic acid), 트리히드록시부티로페논(trihydroxybutyrophenone), 요산 및 이의 유도체, 만노오스 및 이의 유도체, 아연 및 이의 유도체(예, ZnO, ZnSO/i) 셀레늄 및 이의 유도체(예, 셀레늄 메티오닌), 스틸벤 및 이의 유도체(예, 스틸벤 산화물, 트랜스-스틸벤 산화물) 및 본 발명에 따른 적합한 상기 언급된 활성 성분의 유도체(예, 염, 에스테르, 에테르, 당, 뉴클레오타이드, 뉴클레오시드, 펩타이드 및 지질)로 구성된 군으로부터 유리하게 선택된다.
용액, 에멀젼, 또는 분산액으로 제공되면, 국부 투여용 조성물은 다음에 예시되는 용매를 포함할 수 있다: 물 또는 수용액; 카프르산 또는 카프릴산의 트리글리세라이드와 같은 오일, 바람직하게는 피마자유; 지방, 왁스와 다른 천연 및 합성 지질, 바람직하게는 저탄소수의 알코올, 예를 들어 이소프로판올, 프로필렌 글리콜 또는 글리세롤을 갖는 지방산의 에스테르, 또는 저탄소수의 알카놀산을 포함하거나 fatty accords를 포함하는 지방 알콜의 에스테르; 저탄소수의 알콜, 다이올 또는 폴리올 및 이들의 에스테르, 바람직하게는 에탄올, 이소프로판올, 프로필렌 글리콜, 글리세롤, 에틸렌 글리콜, 에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 또는 에틸렌 글리콜 모노부틸 에테르, 프로필렌 글리콜 모노메틸 에테르, 프로필렌 글리콜 모노에틸 에테르 또는 프로필렌 글리콜 모노부틸 에테르, 디에틸렌 글리콜 모노메틸 에테르 또는 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 및 유사체. 더 나아가, 상기 언급된 용매의 혼합물이 사용될 수 있다. 알코올 용매에 대한 구체적인 참고문헌에서, 물은 추가적인 구성 성분 일 수 있다.
본 발명에 따른 에멀젼, 올레오겔 또는 수성- 또는 지성 분산제의 오일상은 방향족 카복실산 및 3개 내지 30개의 쇄장(chain length)을 갖는 포화된 및/또는 불포화된, 분지된 및/또는 분지되지 않은 알콜의 에스테르 군으로부터 유래되는, 3개 내지 30개의 쇄장을 갖는 포화된 및/또는 불포화된, 분지된 및/또는 분지되지 않은 알칸카복실산의 에스테르 및 3개 내지 30개의 쇄장을 가지는 포화된 및/또는 불포화된, 분지된 및/또는 분지되지 않은 알콜의 군으로부터 유리하게 선택된다. 이 경우에, 이러한 에스테르 오일은 이스프로필 미리스트산염, 이스프로필 팔미트산염, 이소프로필 스테아르산염, 이소프로필 올레산염, n-부틸 스테아르산염, n-헥실 라우르산염, n-데실 올레산염, 이소옥틸 스테아르산염, 이소노닐 스테아르산염, 이소노닐 이소노난산염, 2-에틸헥실, 팔미트산염, 2-에틸헥실 라우르산염, 2-헥실데실 스테아르산염, 2-옥틸도데실 팔미트산염, 올레일 올레산염, 올레일 에루크산염(oleyl erucate), 에루실 올레산염(erucyl oleate), 에루실 에루크산염, 및 합성, 반합성 및 이러한 에스테르의 천연 혼합물, 예를 들어 호호바 오일의 군으로부터 유리하게 선택될 수 있다.
더 나아가, 상기 오일상은 분지형 및 비분지형 탄화수소 및 탄화수소 왁스, 실리콘 오일, 디알킬 에테르, 포화 또는 불포화 분지되거나 포화 또는 불포화 비분지된 알콜 군 및 지방산 트리글리세라이드 군, 즉 8 내지 24개의 쇄장(chain length), 구체적으로 12 내지 18개의 탄소 원자를 갖는 포화된 및/또는 불포화된, 분지된 및/또는 비분지된 알칸카복실산의 트리글리세롤 에스테르의 군으로부터 유리하게 선택될 수 있다. 예를 들어, 상기 지방산 트리글리세라이드는 합성 오일, 반합성 오일 및 천연 오일의 군으로부터 유리하게 선택될 수 있으며, 상기 오일의 예는 올리브 오일, 해바리기유, 두유, 땅콩유, 유채씨유, 아몬드유, 야자유, 코코넛유, 야자핵 기름 등이 있다. 또한, 이런 오일 및 왁스 성분의 임의의 혼합물은 본 발명에 따라 유리하게 이용될 수 있다. 만일 적절하다면, 세틸 팔미트산염과 같은 왁스를 오일상의 유일한 지질 성분으로서 이용하는 것이 유리할 수 있다.
상기 오일상은 2-에틸헥실 이소스티아르산염, 옥틸도데칸올, 이소트리데실 이소노나노에이트(isotridecyl isononanoate), 이오에이코산(isoeicosan), 2-에틸헥실 코코에이트, C12-15-알킬 벤조산염, 카프릴릭/카프릭 아코드 트리글리세라이드(caprylic/capric acod triglyceride), 디카프릴일 에테르(dicaprylyl ether)로 구성된 군으로부터 유리하게 선택된다. 특별히 유리한 혼합물은 C12-15-알킬 벤조산염 및 2-에틸헥실 이소스티아르산염의 혼합물, C12-15-알킬 벤조산염 및 이소트리데실 이소노나노에이트의 혼합물, C12-15-알킬 벤조산염, 2-에틸헥실 이소스티아르산염 및 이소트리데실 이소노나노에이트의 혼합물이다. 탄화수소, 액체 파라핀, 스쿠알란 및 스쿠알렌과 관련하여, 이들은 본 발명에 따라 유리하게 사용될 수 있다. 더욱이, 오일 상은 환상 또는 선형 실리콘 오일을 더 유리하게 포함할 수 있으며, 또는 상기 오일로 전체가 구성되지만, 실리콘 오일을 제외하고 다른 오일상 성분의 부가적인 함량을 사용하는 것이 바람직하다. 시클로메티콘(옥타메틸시클로테트라실록세인)은 본 발명에 의해 사용될 수 있는 실리콘 오일로서 유리하게 이용된다. 반면에, 다른 실리콘 오일은 본 발명에 따라 유리하게 사용될 수 있으며, 이런 예로는 헥사메틸시클로트리실록세인, 폴리디메틸실록세인, 폴리(메틸페닐실록세인)이 있다. 더욱이, 특별히 유리한 혼합물은 시클로메티콘 및 이소트리데실 이소노나노에이트의 혼합물, 그리고 시클로메티콘 및 2-에틸헥실 이소스테아르산염의 혼합물이다.
만일 적절하다면, 본 발명에 따른 제제의 수성 상은 저탄소수의 알콜, 다이올 또는 폴리올, 및 이들의 에테르형, 바람직하게는 에탄올, 이소프로판올, 프로필렌 글리콜, 글리세롤, 에틸렌 글리콜, 에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 또는 에틸렌 글리콜 모노부틸 에테르, 프로필렌 글리콜 모노메틸 에테르, 프로필렌 글리콜 모노에틸 에테르 또는 프로필렌 글리콜 모노부틸 에테르, 디에틸렌 글리콜 모노메틸 에테르 또는 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 및 유사체를 포함할 뿐만 아니라 저탄소수의 알콜, 예를 들어 에탄올, 이소프로판올, 1,2-프로판다이올, 글리세롤을 포함하며, 구체적으로는 실리콘 이산화물, 알루미늄 실리케이트, 폴리사카라이드 및 이의 유도체, 예를 들어 히알루론산, 크산탄 검, 히드록시프로필메틸셀룰로오스로 구성되는 군으로부터 유리하게 선택될 수 있는 하나 이상의 증점제, 폴리아크릴레이트들의 군, 바람직하게는 이른바 카보폴(Carbopol)들, 예를 들어 980, 981, 1382, 2984 및 5984 카보폴의 군으로부터 유래되는 폴리아크릴레이트로부터 각각의 경우에 단독으로 또는 조합으로 특별히 유리하게 선택되는 증점제를 포함한다.
본 발명에 의해서 사용되는 겔은 저탄소수의 알콜, 예를 들어, 에탄올, 이소프로판알, 1,2-프로판다이올, 글리세롤 및 물, 또는 증점제의 존재하에서 상기에서 언급된 오일을 보통 포함하며, 이런 증점제는 오일이 함유된 알콜이 든 겔의 경우에서 실리콘 이산화물 또는 알루미늄 실리케이트이고, 바람직하게는 수성 알콜이 든 겔 또는 알콜이 든 겔에서 폴리아크릴레이트이다.
고체 스틱은, 예를 들어, 천연 또는 합성 왁스, 지방 알콜 또는 지방산 에스테를를 포함한다. 본 발명에 따른 화장품으로서 사용하기에 적합한 종래의 기본 물질은 액체 오일(예를 들어, 액체 파라핀, 피마자유, 이소프로필 미리스테이트), 반고체 구성성분(예를 들어, 바셀린, 라놀린), 고체 구성성분(예를 들어, 밀랍, 세레신 및 미세 결정질의 왁스, 또는 지랍) 및 고녹는점의 왁스(예를 들어, 카르나우바 왁스, 칸데리라 왁스)이다.
연무제에서 분사될 수 있는 본 발명에 따른 화장품 및/또는 피부과용 제제를 위해 적합한 추진제(propellant)는 종래에 알려진 휘발성의 액화 추진제, 예를 들어 단독으로 또는 서로 혼합하여 이용될 수 있는 탄화수소(프로판, 부탄, 이소부텐)이다. 또한, 가압된 공기가 유리하게 사용될 수 있다. 물론, 통상의 기술자는 무독성의 추진제가 있다는 사실과 친숙할 것이며, 상기 무독성 추진제는 연무제 제제의 형태로 본 발명을 실행하기 위해 적절한 원리일 것이며; 반면에, 환경 또는 다른 수반하는 상황에 대한 좋지 않은 효과 때문에 플루오로탄화수소 및 플루오로클로로탄화수소(FCHCs)에 포함되지 않도록 다루는 것이 요구된다.
또한, 본 발명에 따른 국부 투여용 조성물은 본 발명에 따른 활성 성분의 유효량과 종래에 사용된 용매를 포함할 뿐만 아니라 유기 증점제도 포함하는 겔의 형태일 수 있다. 이런 증점제의 예는 아라빅 검, 크산탄 검, 알긴산 나트륨, 셀룰로오스 유도 인자를 포함하며, 바람직하게는 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 또는 무기 증점제를 포함하며, 상기 무기 증점제의 예는 aluminum silicates such as, 예를 들어, 벤토나이트, 또는 폴리에틸렌 글리콜과 폴리에틸렌 글리콜 스티아르산염 또는 폴리에틸렌 글리콜 디스티아르산염의 혼합물과 같은 알루미늄 실리케이트이다.
상기 언급된 활성 성분을 함유하는 허용가능한 화장용/피부과용 캐리어 제제의 예는 다음의 성분을 포함할 수 있다: 크산탄 검; 99.7 % 글리세린; 테트라나트륨 EDTA; 글리세릴 스티아르산염 및 PEG-100 스티아르산염(ARLACELTM 165); 세틸 알콜; 이소프로필 팔미트산염; 부틸화된 히드록시톨루엔(BHT); 메틸파라벤; 프로필파라벤; 및 탈이온수. 상기 언급된 활성 성분을 함유하는 허용가능한 화장용/피부과용 캐리어 제제의 또 다른 예는 다음의 성분을 포함할 수 있다: 스테르산; 세틸 알콜; 라우레스 4; CARSONOLTM Sles; 프로필 파라벤; 아스코르빌 팔미트산ㄴ염; 프로필렌 글리콜; CARBOPOLTM 974 P; 메틸 파라벤; KOH(10%); 및 물.
상기 언급된 조성물은 예를 들어 하기 공정에 의해 제조될 수 있다:
1. 오일상을 혼합하고 녹이는 단계: 스테아르산, 세틸 알콜, 라우레스 4, 프로필 파라벤 및 아스코르빌 팔미트산염;
2. 유리 비커에서, 프로필렌 글리콜과 물을 혼합하고, 메틸 파라벤과 CARBOPOLTM을 고속 프로펠러 교반을 하여 분산시키는 단계;
3. CARSONOLTM Sles를 단계(2)의 산물에 첨가하는 단계;
4. 단계(3)의 산물을 65 내지 70 ℃로 데우는 단계;
5. 혼합과 함께, 단계(1)의 산물을 단계(4)의 산물에 첨가하고 잘 혼합하는 단계;
6. 혼합물을 40 ℃로 냉각하는 단계;
7. 용매부를 첨가하고 손으로 잘 혼합하는 단계;
8. 중성화하기 위해 KOH 용액을 첨가하는 단계; 및
9. 빛으로부터 보호하는 단계.
일반
각각의 경우에서, 조성물은 하나 이상의 활성제를 적절하게 함유할 수 있으며, 상기 활성제는 A/B-cis 스피로스탄 또는 스피로스텐 스테로이드성 사포게닌 및 에스테르, 에테르, 케톤 및 이의 글리코실화 형태, 다른 사포(게)닌, 다른 비-사포(게)닌 활성제, 또는 이의 임의의 조합으로부터 선택될 수 있다. 상기 조성물은 하나 이상의 생물학적 비활성 성분, 예를 들어 희석제, 캐리어 및 부형제를 함유할 수 있으며, 상기 생물학적 비활성 성분은 생리학적 활성 요소의 제공, 투여 또는 전달과 관련된 목적에 기여하거나, 활성 요소의 생리학적 효과로부터 관련된 혜택을 피험자에게 별도로 제공한다. 상기 캐리어는 대두 단백질과 같은 식물 물질을 포함할 수 있다. 또한, 예를 들어, 상기 조성물은 투여 및 제형의 방식의 유형에 따라, 보존제, 필러제, 붕해제, 습윤제, 유화제, 서스펜션화제, 감미제, 방향제, 향기제, 항세균제, 항진균제, 윤활제 및 투여제 중 임의의 하나 이상을 포함할 수 있다.
본 발명에서 사용하기 위한 조성물, 특히 약학 조성물은 단위 투여량 형태일 수 있고, 일정한 수의 이러한 형태는 치료되거나 예방되어야 할 질환에 따라 일정한 기간 동안 피험자에게 투여된다. 대안적으로, 상기 조성물은 대량형일 수 있고, 대량 조성물의 일정 중량 또는 부피는 계량되어 치료되거나 예방되어야 할 질환에 따라 일정 기간 동안 피험자에게 투여된다.
반면에, 독성은 이런 활성제에서 문제로 고려되지 않으며, 고 투여량에서도 문제로 고려되지 않는다. 따라서, 적절한 투여량의 선택은 과도한 부담 없이 통상의 기술자의 능력 내에 있다. 투여된 활성제의 투여량은 체중에 대하여 약 0.3 mg/kg이며, 하루에 한번 투여되는 것이 바람직하다. 더 보편적으로, 투여량은 약 0.1 내지 약 25 mg/kg, 예를 들어 약 1 내지 약 10 mg/kg일 것이며, 하루에 한번 또는 두 번 투여되는 것이 바람직하다. 성인에 대한 사용에 있어서, 상기 투여량은 하루에 약 10 내지 약 700 mg가 알맞을 것이다.
본 발명에서 사용하기 위한 조성물은 상기 논의된 다른 치료적 및/또는 비치료적 생리활성제를 적절히 함유할 수 있다.
본 발명에서 사용하기 위한 조성물은 단위 투여량 형태일 수 있으며, 일정 수의 이런 형태는 치료되거나 예방되어야 할 질환에 따라 일정한 기간 동안 피험자에게 투여된다. 대안적으로, 상기 조성물은 대량형일 수 있고, 대량 조성물의 일정 중량 또는 부피는 계량되어 치료되거나 예방되어야 할 질환에 따라 일정 기간 동안 피험자에게 투여된다.
활성제의 소정의 투여량은 치료되거나 예방되어야 할 증상의 격렬함에 따라 폭넓게 변화할 것이다. 펨토 몰랄(fM) 내지 마이크로 몰랄(μM)의 농도가 효과적이며, 이러한 예로는 약 1 fM 내지 약 5 μM이 있다. 실시예 12에서 보고되는 실험은 배양조직 중의 신경의 손상에 대하여 EC50 13.4 fM의 스미라게닌을 시험관안에서 보인다. 일반적으로, 생체내의 혈장 농도는 피코 몰랄(pM) 내지 마이크로 몰랄(μM) 범위(예를 들어, 나노 몰랄(nM) 내지 마이크로 몰랄(μM))인 것이 바람직하며, 이러한 예로는 약 1 pM 초과, 예를 들어 약 1 pM 내지 약 5 μM, 예를 들어, 약 1 pM 내지 약 3 μM, 예를 들어 약 10 pM 내지 약 700 nM, 예를 들어 약 0.1 nM 내지 약 500 nM가 있다. 피코몰랄 미만이면, 활성제의 생체내 활성이 감소하는 경향이 있다. 마이크로 몰랄 초과, 과잉투여 하도록 피험자의 자가조절 및 피험자의 관련 저항성은 단순히 활성제가 낭비되었다는 것을 의미할 것이다. 반면에, 본원의 실시예는, 독성이 이런 활성제에 문제로 고려되지 않고, 고 투여량에서도 문제로 고려되지 않는다고 보여준다. 따라서, 적절한 투여량의 선택은 과도한 부담 없이 통상의 기술자의 능력 내에 있다. 투여된 상기 활성제의 투여량은 예를 들어, 체중에 대하여 약 0.1 mg/kg 보다 클 수 있으며, 예를 들어, 체중에 대하여 약 0.3 mg/kg보다 클 수 있고, 하루에 한번 투여하는 것이 바람직하다. 더 보편적으로, 상기 투여량은 약 0.1 내지 약 25 mg/kg, 예를 들어 약 1 내지 약 10 mg/kg이며, 하루에 한번 투여되는 것이 바람직하다. 성인에 대한 사용에 있어서, 상기 투여량은 하루에 약 10 내지 약 700 mg이 알맞을 것이다.
적절한 조성물 형태 및 투여량에 대한 더 구체적인 것, 본 발명에 의해 치료될 수 있는 질환 및 질병의 예에 대하여는 WO-A-99/48482, WO-A-99/48507, WO-A-01/23407, WO-A-01/23408, WO-A-02/079221, WO-A-03/082893, WO-A-2005/105825 및 WO-A-2006/048665를 참고하기 바랍니다.
활성제는 조성물에 하나 이상의 캐리어, 부형제 및/또는 희석제를 갖도록 적절히 제형화된다. 일반적으로, 약학 조성물, 식품, 식품 보충제 및 음료와 같은 경구 조성물, 또는 화장품, 눈 또는 피부 제제와 같은 국부 조성물을 위해 사용되는 전통적인 캐리어, 부형제 및/또는 희석제가 사용될 수 있다.
수많은 활성제는 비교적 친유성이고, 이런 경우에 용해제 및/또는 서스펜션화제 및/또는 분산제는 조성물에서 활성제가 용액 또는 현탁액 도는 분산액으로 유지되도록 적절히 사용될 수 있다.
구체적으로 언급될 수 있는 용해제 및/또는 서스펜션화제 및/또는 분산제의 두개의 군은 중간사슬지방(MCT) 및 중간사슬지방산(MCFAs)이다. 이들은 약 4 내지 약 12개의 탄소 원자로 구성된 쇄장을 가지는 지방산 쇄 친유성 화합물이다.
중간사슬지방의 바람직한 예는 하기 화학식 1로 나타내진다.
Figure pct00002
상기 Ra, Rb 및 Rc는 서로 독립적이며, 탄소 골격으로부터 4 내지 12개의 탄소 원자를 가지는 포화되거나 불포화된 지방산 잔기로부터 선택된다.
중간사슬지방산의 바람직한 예는 하기 화학식 2로 나타내진다.
Figure pct00003
상기 Rd는 탄소 골격으로부터 4 내지 12개의 탄소 원자를 가지는 포화되거나 불포화된 지방산 잔기이다.
Ra, Rb, Rc 및 Rd의 예는 카프로산 잔기(C6:0), 카프릴산 잔기(C8:0), 카프르산 잔기(C10:0) 및 라우르산(C12:0)을 포함한다. 표준 명칭 시스템에서, C 바로 다음에 나오는 숫자는 탄소 쇄장을 표시하고, 콜론(:) 바로 다음에 나오는 숫자는 불포화 결합의 수를 표시한다. 이런 중간사슬지방과 중간사슬지방산은 코코넛 오일, 야자핵 기름 및 장뇌 석과(camphor drupe)(과일)와 같은 천연원으로부터 알려진 방식으로 수득할 수 있다.
예를 들어, 본 발명에서 사용하기 위한 중간사슬지방산은 tri-C6:0 MCT, tri-C8:0 MCT 및 tri-C10:0 MCT로부터 선택될 수 있다.
이어지는 실시예와 도면에 대한 설명에서, 다음의 약어가 사용된다: h=시간; min=분; s=초, s.c=피하의, p.o=구강의. 조성물의 구성성분에 대한 퍼센트는 고체 중의 고체, 또는 액체 중의 고체, 또는 고체 중의 액체로, 중량%이다. 조성물의 구성성분에 대한 퍼센트는 액체 중의 액체로, 부피%이다.
사르사사포게닌 및 스미라게닌은 몇몇의 효소와 수용체에 결합하지 않는다
하기 표 1에 나열된 효소의 활성에 대한 사르사사포게닌의 효과, 및 하기 표 1에 나열된 수용체에 사르사사포게닌의 결합을 조사했다.
다음의 방법을 사용하여 효소 활성 조절을 조사했다: 사르사사포게닌을 각각의 효소와 효소 각각에 대한 특정 기질을 함께 배양했다. 배양기간이 지난 후에, 반응을 멈췄고, 특정 기질의 감소 또는 사르사사포게닌의 존재하에 그리고 부존재하에서 특정 산물의 증가를 측정했고, 사르사사포게닌의 존재하에서 반응 억제 비율을 계산했다. 사용된 효소의 양, 배양 조건, 사용된 기질 및 정량 방법은 각각의 특정 분석에 따라 각기 달랐다.
다음의 방법을 사용하여 수용체 결합을 조사했다: 관심있는 수용체를 발현하고, 관심있는 수용체에 친화력을 갖는 방사성동위원소로 라벨링된 농도로 알려진 조직 또는 세포 균질액과 함께 사르사사포게닌을 배양했다. 배양기간이 지난 후에, 결합되지 않은 방사성동위원소로 라벨링된 화합물을 제고했고, 특정 결합의 양을 정량했다. 사르사사포게닌의 존재하에 그리고 부존재하에서 특정 결합의 양을 비교했고, 사르사사포게닌에 의하여 방사성동위원소로 라벨링된 화합물의 결합의 억제 비율을 계산했다. 수용체원, 배양 조건, 사용된 방사성동위원소로 라벨링된 화합물은 각각의 특정 분석에 따라 각기 달랐다.
결과는 하기 표 1에 보여진다.
효소 및 수용체 결합 분석에 대한 사르사사포게닌의 효과
목표물 종 사르사사포게닌 (μM) 효과(%)
효소 활성 분석
아세틸콜린 가수분해효소 인간 10 NS
아세틸CoA 합성효소 효모 100 NS
콜린 아세틸 전이효소 인간 100 NS
수용체 결합 분석
아드레날린성 α1, 비선택성 랫트 10 NS
아드레날린성 α2, 비선택성 랫트 10 NS
아드레날린성 β, 비선택성 랫트 10 NS
도파민 D1 인간 10 NS
에스트로겐 소 10 NS
GABAA 랫트 10 NS
글로코코르티코이드 인간 10 NS
글루탐산 랫트 10 NS
히스타민 H1 기니피그 10 NS
무스카린성 M1 인간 10 NS
무스카린성 M2 인간 10 NS
무스카린성 M3 인간 10 NS
무스카린성 M4 인간 10 NS
무스카린성 M5 인간 10 NS
프로게스테론 소 10 NS
세로토닌 5-HT1 랫트 10 NS
테스토스테론 랫트 10 NS
NS=현저한 반응이 없음. 현저한 반응은 30 % 이상 촉진되거나 억제되었을 때를 말함.
상기 설명된 동일한 방법을 사용하여, 하기 표 2에 나열된 수용체에 스미라게닌(1 μM)의 결합과 하기 표 2에 나열된 효소의 활성에 대한 스미라게닌의 효과를 조사했다.
수용체 결합 분석 및 효소에 대한 스미라게닌의 효과
목표물 종 효과(%)
결합 분석
아데노신 A1 인간 NS
아데노신 A2a 인간 NS
아데노신 A3 인간 NS
아드레날린성α1A 랫트 NS
아드레날린성 α1B 랫트 NS
아드레날린성 α1D 인간 NS
아드레날린성 α2A 인간 NS
아드레날린성 α2C 인간 NS
아드레날린성 β1 인간 NS
아드레날린성 β2 인간 NS
아드레날린성 β3 인간 NS
아드레노메둘린 AM1 인간 NS
아드레노메둘린 AM2 인간 NS
알도스테론 랫트 NS
아나필락톡신 C5a 인간 NS
안드로겐(테스토스테론)AR 랫트 NS
안지오텐신 AT1 인간 NS
안지오텐신 AT2 인간 NS
APJ 인간 NS
심방나트륨이뇨성인자 기니아 피그 NS
봄베신 BB1 인간 NS
봄베신 BB2 인간 NS
봄베신 BB3 인간 NS
브래디키닌 B1 인간 NS
브래디키닌 B2 인간 NS
칼시토닌 인간 NS
칼시토닌유전자관련펩티드 CGRP1 인간 NS
칼슘 채널 L-형, 벤조티아제핀 랫트 NS
칼슘 채널 L-형, 디히드로피리딘 랫트 NS
칼슘 채널 L-형, 페닐알킬아민 랫트 NS
칼슘 채널 N-형 랫트 NS
칸나비노이드 CB1 인간 NS
칸나비노이드 CB2 인간 NS
케모킨 CCR1 인간 NS
케모킨 CCR2B 인간 NS
케모킨 CCR4 인간 NS
케모킨 CCR5 인간 NS
케모킨 CXCR1 인간 NS
케모킨 CXCR1 (IL-8RB) 인간 NS
콜레시스토키닌 CCK1(CCKA) 인간 NS
콜레시스토키닌 CCK2(CCKB) 인간 NS
콜키신 인간 NS
코르티코트로핀 방출 인자(CRF1) 인간 NS
도파민 D1 인간 NS
도파민 D2S 인간 NS
도파민 D3 인간 NS
도파민 D4 .2 인간 NS
도파민 D5 인간 NS
엔도텔린 ETA 인간 NS
엔도텔린 ETB 인간 NS
상피세포성장인자(EGF) 인간 NS
에리트로포이에틴 EPOR 인간 NS
에스트로겐(ERα) 인간 NS
에스트로겐(Erβ) 인간 NS
G단백질연관수용체 GPR103 인간 NS
G단백질연관수용체 GPR8 인간 NS
GABAA 염소채널, TBOB 랫트 NS
GABAA 플루니트라제팜, Central 랫트 NS
GABAA 무시몰, Central 랫트 NS
GABAB1A 인간 NS
GABAB1B 인간 NS
가바펜틴 랫트 NS
갈라닌 GAL1 인간 NS
갈라닌 GAL2 인간 NS
글루탐산, AMPA 랫트 NS
글루타만, 카이닌산 랫트 NS
글루탐산, NMDA, 아고니즘 랫트 NS
글루탐산, NMDA, 글라이신 랫트 NS
글루탐산, NMDA, 펜시클리딘 랫트 NS
글루탐산, NMDA, 폴리아민 랫트 NS
글리신, 스트리크닌-민감성 랫트 NS
성장호르몬분비촉진(GHS, 그렐린) 인간 NS
히스타민 H1 인간 NS
히스타민 H2 인간 NS
히스타민 H3 인간 NS
히스타민 H4 인간 NS
이미다졸린 I2, central 랫트 NS
이노시톨 트리포스페이트 IP3 랫트 NS
인슐린 랫트 NS
인터류킨 IL-1 마우스 NS
인터류킨 IL-2 마우스 NS
인터류킨 IL-6 인간 NS
렙틴 마우스 NS
류코트리엔, BLT(LTB4) 인간 NS
류코트리엔, 시스테이닐, CysLT1 인간 NS
류코트리엔, 시스테이닐, CysLT2 인간 NS
멜라노코르틴 MC1 인간 NS
멜라노코르틴 MC3 인간 NS
멜라노코르틴 MC4 인간 NS
멜라노코르틴 MC5 인간 NS
멜라토닌 MT1 인간 NS
멜라토닌 MT2 인간 NS
모틸린 인간 NS
무스카린성 M1 인간 NS
무스카린성 M2 인간 NS
무스카린성 M3 인간 NS
무스카린성 M4 인간 NS
무스카린성 M5 인간 NS
N-포르밀 펩타이드 수용체 FPR1 인간 NS
N-포르밀 펩타이드 수용체 유사 FPRL1 인간 NS
뉴로메딘 U MNU1 인간 NS
뉴로메딘 U MNU2 인간 NS
뉴로펩타이드 Y Y1 인간 NS
뉴로펩타이드 Y Y2 인간 NS
뉴로텐신 NT1 인간 NS
니코틴성 아세틸콜린 인간 NS
니코틴성 아세틸콜린 α1, 분가루스독소 인간 NS
니코틴성 아세틸콜린 α7, 분가루스독소 랫트 NS
아편류 δ(OP1, DOP) 인간 NS
아편류 κ(OP2, KOP) 인간 NS
아편류 μ(OP3, MOP) 인간 NS
오르파닌 ORL1 인간 NS
포르볼 에스테르 마우스 NS
혈소판 활성 인자(PAF) 인간 NS
혈소판 유래 성장 인자(PDGF) 마우스 NS
칼륨채널[KA] 랫트 NS
칼륨채널[SKCA] 랫트 NS
칼륨채널 HERG 인간 NS
프로게스테론 PR-B 인간 NS
프로스타노이드 CRTH2 인간 NS
프로스타노이드 DP 인간 NS
프로스타노이드 EP2 인간 NS
프로스타노이드 EP4 인간 NS
프로스타노이드 트롬복세인 A2(TP) 인간 NS
퓨린작동성 P2X NS
퓨린작동성 P2Y 랫트 NS
레타노이드 X 수용체 RXRα 인간 NS
롤리프람 랫트 NS
리아노딘 RyR3 랫트 NS
5-히드록시트립파민, 5-HT1A 인간 NS
5-히드록시트립파민, 5-HT1B 랫트 NS
5-히드록시트립파민, 5-HT3B 인간 NS
5-히드록시트립파민, 5-HT2C 인간 NS
5-히드록시트립파민, 5-HT3 인간 NS
5-히드록시트립파민, 5-HT4 기니아 피그 NS
5-히드록시트립파민, 5-HT5A 인간 NS
5-히드록시트립파민, 5-HT6 인간 NS
시그마σ1 NS
시그마σ2 랫트 NS
나트륨채널, 부위 2 랫트 NS
소마토스타틴 sst1 인간 NS
소마토스타틴 sst2 인간 NS
소마토스타틴 sst3 인간 NS
소마토스타틴 sst4 인간 NS
소마토스타틴 sst5 인간 NS
타키키닌 NK1 인간 NS
타키키닌 NK2 인간 NS
타키키닌 NK3 인간 NS
갑상선 자극 호르몬 렛트 NS
갑상선 자극 호르몬 방출 호르몬(TRH) 랫트 NS
형질전환 성장 인자-β(TGF-β) 마우스 NS
운반체, 아데노신 기니아 피그 NS
운반체, 콜린 랫트 NS
운반체, 도파민(DAT) 인간 NS
운반체, GABA 랫트 NS
운반체, 모노아민 래빗 NS
운반체, 노르에피네프린(NET) 인간 NS
종양 사멸 인자(TNF), 비선택적 인간 NS
유로텐신 II 인간 NS
바닐로이드 랫트 NS
혈관내피세포 성장 인자(VEGF) 인간 NS
혈관작용성 장 펨타이드, VIP1 인간 NS
바소프레신 V1A 인간 NS
바소프레신 V1B 인간 NS
바소프레신 V2 인간 NS
비타민 V3 인간 NS
기능성 분석 NS
단백질 세린/트레오닌 키나아제, AKT1 (PRKBA) 인간 NS
단백질 세린/트레오닌 키나아제, AKT3 (PRKBG) 인간 NS
단백질 세린/트레오닌 키나아제, CAMK2D (KCC2D) 인간 NS
단백질 세린/트레오닌 키나아제, MAP2K1 (MEK1) 인간 NS
단백질 세린/트레오닌 키나아제, MAPK1 (ERK2) 인간 NS
단백질 세린/트레오닌 키나아제, MAPK11 (p38β) 인간 NS
단백질 세린/트레오닌 키나아제, MAPK12 (p38γ) 인간 NS
단백질 세린/트레오닌 키나아제, MAPK13 (p38δ) 인간 NS
단백질 세린/트레오닌 키나아제, MAPK3 (ERK1) 인간 NS
단백질 세린/트레오닌 키나아제, MAPK8 (JNK1) 인간 NS
단백질 세린/트레오닌 키나아제, PKC, 비특이적 랫트 NS
단백질 티로신 키나아제 NTRK1 (trkA) 인간 NS
단백질 티로신 키나아제 NTRK2 (trkB) 인간 NS
단백질 티로신 키나아제, SRC 인간 NS
알도오스 환원효소 랫트 NS
자유 라디칼 포집제, ABTS 라디칼 abts-hzoz-과산화효소계 NS
자유 라디칼 포집제, DPPH 라디칼 화학적 합성 dpph 라디칼 NS
자유 라디칼 포집제, SOD 모사 보빈 NS
UDP 글루투로노실전이효소, UGT1A1 인간 NS
NS=현저한 반응이 없음. 현저한 반응은 30 % 이상 촉진되거나 억제되었을 때를 말함.
사르사사포게닌 및 스미라게닌은 수용체들에 결합하지 않고 효소들의 활성을 조절하지 않는다. 이런 수용체 및 효소가 신경 경로, 감각 경로, 운동 경로에 수반되는 것으로 알려져 있기 때문에, 뉴런, 감각 및 운동 기점을 갖는 질환 및 장애에 대하여 사르사사포게닌 및 스미라게닌의 활성이 수용체 결합 또는 효소 조절을 통해 발생하지 않는다는 것이 이런 실험으로부터 얻은 지식의 범위 내에서 추론된다.
시험관 안에서, 사르사사포게닌 및 스미라게닌은 기저질환을 갖는 배양된 뉴런 내의 신경영양인자 mRNA 를 일시적으로 증가시킨다.
전문화된 배지 및 조건을 사용하여, 새롭게 단리된 뉴런은 시험관 내에서 배양될 수 있으며; 시험관 내의 환경은 생리학적 환경과 상이하여서, 뉴런은 더 스트레스를 받고 뉴런 손상을 받는 결과를 낳는다. 뉴런 손상의 수준은 사용된 정밀한 조건에 따라 배양조직 간에 다를 것이다. 이후에, 뉴런 손상의 수준은 병리학적 물질을 첨가함으로써 현저히 증가시킬 수 있다(예, β-아밀로이드 또는 MPP+).
앞서 설명한 방법을 변형하여 랫트 대뇌피질 뉴런을 배양했다(Singer, 등, Neuroscience Letters, 1996, 212, pp. 13-16). 배양 시작 후 12일째에, 사르사사포게닌(30 nM), 스밀라게닌(30 nM), 4-메틸카테콜(0.5 mM), NGF 및 BDNF 방출 유도제(Saporito 등, Experimental Neurology., 1993, 123, pp. 295-302; Nitta 등, Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 1999, 291, pp. 1276-1283) 또는 비히클(디메틸 설폭사이드, DMSO, 0.25%)를 1, 3 또는 6시간 동안 첨가했다. 배양후에, 실시간 역전사 PCR(re RT-PCR)을 사용하여 총 mRNA를 정량했다.
결과는 하기 표 3에서 보여진다.
1, 3 및 6 시간의 배양 후에 랫트 대뇌피질 뉴론에서 BDNF 및 trkB mRNA 발현에 대한 사르사사포게닌, 스미라게닌 및 4- 메틸카테콜의 효과
대조군에 비해 증가된 %
mRNA 시간(h) 사르사사포게닌 (30 nM ) 스미라게닌
(30 nM ) 		4- 메틸카테콜
(0.5 mM )
BDNF 1 증가하지 않음 증가하지 않음 증가하지 않음
3 22 40 증가하지 않음
6 증가하지 않음 증가하지 않음 92
trkB 1 증가하지 않음 21 증가하지 않음
3 33 55 증가하지 않음
6 증가하지 않음 증가하지 않음 증가하지 않음
사르사사포게닌 및 스미라게닌 모두는 새롭게 단리된 대뇌피질 뉴런에서 BDNF 및 BDNF 수용체 trk-B(티로신 수용체 키나아제 신영영양수용체)의 수준을 일시적으로(3시간 후에) 증가시킨다.
분리된 실험에서, 앞서 설명한 방법을 변형하여 랫트 대뇌피질 뉴런을 배양했다(Eckenstein and Sofroniew, Journal of Neuroscience, 1983, 3, pp. 2286-2291). 8일째에, 배양 배지를 비히클을 함유하는 배지(DMSO, 0.5%) 또는 스미라게닌(10 μM)로 48시간 동안 교체했고, 대뇌피질 뉴런에서 BDNF mRNA의 수준을 rt RT-PCR로 평가했다.
결과는 하기 표 4에서 보여진다.
사르사사포게닌과 함께 48 시간 배양하는 것이
랫트 대뇌피질 뉴런에서 BDNF mRNA 발현에 미치는 효과
조건 BDNF mRNA 의 상대량(대조군에 대한 %)
대조군(DMSO, 0.5%) 100.0±0.0
스미라게닌(10μM) 103.9±6.5
스미라게닌(10μM)과 함께 48시간 동안 배양하는 것은 새롭게 단리된 대뇌피질 뉴런에서 BDNF mRNA의 수준을 증가시키지 않는다. 이는 스미라게닌과 사르사사포게닌이 3시간째에 BDNF mRNA를 증가시키지만 6시간째에는 증가시키지 않는다는 것을 보여주는 표 3에서 나타나는 데이터와 일치한다. 또한, 스미라게닌의 고농도에 의해서(표 4) 스미라게닌의 일시적인 효과(표 3)를 극복이 되지 않았다.
시험관 안에서, 스미라게닌은 병리학적 물질에 노출되는 배양된 뉴런에서 신경영양인자 mRNA 발현의 현저한 증가를 가져온다.
스미라게닌은 사전에 β-아밀로이드에 노출된 대뇌피질 뉴런에서 BDNF mRNA 를 증가시킨다.
앞서 설명한 방법을 변형하여 랫트 대뇌피질 뉴런을 배양했다(Eckenstein and Sofroniew, Journal of Neuroscience, 1983, 3, pp. 2286-2291). 8일째에, 배양 배지를 비히클을 함유하는 배지(DMSO, 0.5%) 또는 스미라게닌(10 μM)로 교체했다. 10일째에, 랫트 1차 대뇌피질 뉴런을 β-아밀로이드(10 μM/ml)에 48시간이 될 때까지 37 ℃에서 노출시켰고, 이후 48시간에 걸쳐서 실시간 RT-PCR을 이용하여 대뇌피질 뉴런에서 BDNF mRNA의 수준을 평가했다.
결과는 하기 표 5에서 보여진다.
48시간 동안 스미라게닌과 함께 선배양한 후에 β-아밀로이드에 노출시키는 것은
랫트 대뇌피질 뉴런에서 BDNF mRNA 를 증가시킨다
β-아밀로이드의 노출(h) BDNF mRNA 의 상대량(0시간에서 대조군에 대한 %)
비히클 + β-아밀로이드(10 μg/ ml ) 스미라게닌 (10 μM) + β-아밀로이드(10 μg/ ml )
6 97.6±1.3 108.0±5.2
24 77.7±3.6## 321.5±54.2*
48 60.9±5.0## 334.6±48.1**
평균±표준오차평균; n=3, β-아밀로이드에만 노출시킨 상응하는 시점에 비교했을 시에 **=p<0.01, *=p<0.05. 통계학적 분석은 Student's t-test에 의했다.
48시간 동안 스미라게닌으로 선처리한 후에 β-아밀로이드에 노출시키는 것은 랫트 대뇌피질 뉴런에서 BDNF mRNA 발현의 현저하고 일관된 증가를 제공했다.
스미라게닌은 사전에 MPP + 에 노출되는 도파민작동성 뉴련에서 GDNF mRNA 를 증가시킨다.
앞서 설명된 방법을 약간 변형한 방법을 이용하여 랫트 도파민작동성 뉴런을 준비했다(Brouard 등, Journal of Neuroscience, 1992, 12, pp. 1409-1415). 배양 MPP+(2μM)에서 5일 후에, 특정 도파민작동성 신경독 또는 비히클(식염수)를 48시간 동안 첨가했다. 이후에, 배양 배지를 스미라게닌(10μM) 또는 비히클(DMSO, 0.25%)을 함유하는 새로운 배지로 교환했고, 도파민작동성 뉴련에서 GDNF mRNA의 수준을 10분 후, 2시간 후, 24시간 후, 48시간 후, 72시간 후에 실시간 RT-PCR로 평가했다.
결과는 하기 표 6에서 보여진다.
스밀라게닌은 MPP +에 노출시킨 후에
랫트 도파민작동성 뉴런에서 GDNF mRNA 발현을 증가시킨다
스미라게닌의 노출(h) GDNF mRNA 의 상대량(0.167시간에서 대조군에 대한 %)
MPP + (2μM) MPP + + 스미라게닌 (10μM)
0.167 100.0±0.0 119.9±19.8
2 90.1±13.4 581.6±66.3**
24 107.0±25.0 3319.1±830.3*
48 97.8±33.5 2185.3±304.1**
72 77.2±15.6 1413.5±352.1*
평균±표준오차평균; n=3, 대조군과 비교했을 시에 **=p<0.01, *=p<0.05. 대조군 및 스미라게닌 간의 각 시점에서 GDNF mRNA의 통계학적 분석은 Student's t-test에 의했다.
MPP+에 노출시킨 이후에 48시간 동안 스미라게닌으로 처리하는 것은 랫트 도파민작동성 뉴련에서 GDNF mRNA의 현저한 증가를 야기했다. 증가는 24시간째에 최고치였고, 48시간과 72시간 이후에는 감소했다.
실시예 2 및 실시예 3은 스미라게닌과 사르사사포게닌이 신경영양인자 mRNA 발현을 증가시킨다는 것을 증명했다. 나아가, 신경영양인자 mRNA 발현에 대한 스미라게닌과 사르사사포게닌의 효과는 뉴런의 질환에 따라 그 정도(지속시간, 규모)가 변한다. 기저 조건하에서 배양된 뉴런에서, 스미라게닌과 사르사사포게닌은 3시간째(표 3)에는 관찰되었지만, 6시간(표 3) 또는 48시간째(표 4)에는 관찰되지 않은 신경영양인자 RNA 수준의 일시적인 증가(대조군에 대해 최대 140 %)를 제공했다. 그와 대조적으로, 병리학적 물질에 노출된 배양된 뉴런(예, β-아밀로이드 또는 MPP+)에서, 스미라게닌은 신경영양인자 mRNA 발현의 증가를 더 확연하고(대조군에 대해 최대 3319 %) 오랜 지속기간 동안(최대 72시간) 제공했다(표 5 및 표 6). 결과는 사르사사포게닌과 스미라게닌의 뉴로트로핀 유도 인자 효과가 시스템에 대한 손상도에 따라 그들 자신을 자가조절한다는 것을 증명한다. 즉, 사르사사포게닌과 스미라게닌은 신경영양인자의 자가조절 메커니즘을 방해하거나 중단시키지 않는다.
시험관 안에서, 스미라게닌은 기저 조건하에서 배양된 뉴런의 신경영양인자 단백질 발현을 변동시키지 않는다.
앞서 설명한 방법을 변형하여 랫트 대뇌피질 뉴런을 배양했다(Eckenstein and Sofroniew, Journal of Neuroscience, 1983, 3, pp. 2286-2291). 8일째에, 배양 배지를 비히클을 함유하는 배지(DMSO, 0.5%) 또는 스미라게닌(10 μM)로 교체했다. 12일째에, 배양 배지 중의 BDNF의 농도를 측정했다.
결과는 하기 표 7에서 보여진다.
시험관 내에서, 스미라게닌과 함께 배양하는 것은
기저 조건하에서 배양된 뉴런의 BDNF 단백질 수준을 변동시키지 않는다
조건 BDNF 농도( pg / ml )
대조군(DMSO, 0.5%) 3.66±0.05
대조군 + 스미라게닌(10μM) 3.67±0.05
평균±표본오차평균; n=6
시험관 내에서, 스미라게닌은 기저 조건하에서 배양된 뉴런의 BDNF 수준을 증가시키지 않는다.
시험관 내에서, 사르사사포게닌과 스미라게닌은 병리학적 물질에 노출된 배양된 뉴런에서 신경영양인자 단백질 발현을 증가시킨다.
사르사사포게닌과 스미라게닌은 BDNF 단백질을 증가시키고, 사전에 β-아밀로이드에 노출된 대뇌피질 뉴런 중의 뉴런 생존률 및 신경돌기 성장( neurite outgrowth)을 증가시킨다.
앞서 설명한 방법을 변형하여 랫트 대뇌피질 뉴런을 배양했다(Eckenstein and Sofroniew, Journal of Neuroscience, 1983, 3, pp. 2286-2291). 8일째에, 배양 배지를 비히클을 함유하는 배지(DMSO, 0.5%) 또는 스미라게닌(10 μM)로 교체했다. 10일째에, 랫트 1차 대뇌피질 뉴런을 β-아밀로이드(10 μM/ml)에 48시간 동안 37 ℃에서 노출시켰고, 배양 배지 중의 BDNF의 농도, 콜린 아세틸전이효소(ChAT) 양성 세포의 수, 및 신경돌기 성장을 측정했다(스미라게닌에서만).
결과는 하기 표 8에서 보여진다.
시험관 안에서, 48시간 동안 스미라게닌 또는 사르사사포게닌으로 선배양한 후에 β-아미로이드에 노출시키는 것은 BDNF 수준을 증가시키고, 뉴런의 손상과 뉴론의 위축을 막는다.
조건 bdnf 농도( pg / ml ) 영역당 ChAT 양성 뉴런의 수 신경돌기 성장
(대조군에 대한 %)
사르사사포게닌 결과
대조군(DMSO, 0.5%) 7.35±0.18 100.0±3.6 n.m.
β-아미로이드(10μg/ml) 1.94±0.06++++ 33.9±1.4++++ n.m.
β-아미로이드 + 사르사사포게닌(10μM) 9.31±0.15++++,**** 71.6±3.7**** n.m.
스미라게닌 결과
대조군(DMSO, 0.5%) 3.66±0.05 100.0±11.9 100.0±1.7
β-아미로이드(10μg/ml) 3.10±0.05++++ 29.9±4.4++++ 39.5±2.2++++
β-아미로이드 + 스미라게닌(10μM) 4.20±0.06****,++++ 70.1±9.6*** 85.8±4.0****
n.m.=측정안함; 평균±표준오차평균; n=4-8, 대조군과 비교했을 시에 ++++=p<0.001, β-아미로이드만 있는 조건과 비교했을 시에 ****=p<0.001, ***=p<0.005. 통계학적 분석은 일방적 ANOVA을 사용하여 수행하였고, 이어서 Fisher's post - hoc 시험을 수행하였다.
사르사사포게닌과 스미라게닌은 BDNF 수준을 대조군 수준보다 높도록 증가시키고, 대뇌피질 뉴런에서 β-아미로이드에 의해 유도되는 뉴런 손상을 막는다.
스미라게닌은 GDNF 단백질을 증가시키고, 사전에 MPP + 에 노출된 도파민작동성 뉴런 중의 뉴런 생존률 및 신경돌기 성장을 증가시킨다.
앞서 설명된 방법을 약간 변형한 방법을 이용하여 랫트 도파민작동성 뉴런을 준비했다(Brouard 등, Journal of Neuroscience, 1992, 12, pp. 1409-1415). 6일째에, 배양 배지를 새로운 배지 또는 스미라게닌(10μM) 또는 비히클(DMSO, 0.25%)을 함유하는 새로운 배지로 교환했다. 8일째에, MPP+(2μM) 또는 비히클(식염수)를 첨가했고, 48시간 후에 도파민작동성 뉴런을 착색했고, 배양 배지 중의 GDNF 농도, 뉴런의 손상 및 신경돌기 성장을 평가했다.
결과는 하기 표 9에서 보여진다.
스미라게닌은 배양 배지 중의 GDNF 의 양을 증가시키고, 랫트 도파민작동성 뉴련에서 뉴런의 손상과 뉴런의 위축 이후에 MPP +에 노출을 막는다.
조건 GDNF 농도( pg / ml ) 영역당 TH 양성 뉴런의 수(대조군에 대한 %) 신경돌기 성장(대조군에 대한 %)
대조군(DMSO, 0.25%) n.m. 100±9.9 100±10.1
MPP+(2μM) 2.7±0.5 34.3±3.3++++ 38.2±4.2++++
MPP+(2μM) + 스미라게닌(10μM) 6.6±0.7** 57.1±5.2* 62.1±7.0*
n.m.=측정안함; 평균±표준오차평균; n=5-6, 대조군과 비교했을 시에 ++++=p<0.001, MPP+만 있는 조건과 비교했을 시에 *=p<0.05. TH 양성 뉴런과 신경돌기 성장의 수의 통계학적 분석은 일방적 ANOVA을 사용하여 수행하였고, 이어서Fisher's post - hoc 시험을 수행하였다. GDNF 농도의 통계학적 분석은 Student's t-test에 의했다.
스미라게닌은 GDNF의 양을 증가시키고, 도파민작동성 뉴런에서 MPP+에 의해 유도되는 뉴런의 손상을 막는다.
실시예 4에서 제시되는 데이터는, 스미라게닌이 시험관 안에서 기저 조건하에서 배양된 뉴런의 신경영양인자 단백질 발현을 증가시키지 않는다는 것을 보여준다. 그와 대조적으로, 실시예 5는, 사르사사포게닌과 스미라게닌 모두가 시험관 안에서 병리학적 물질에 노출되는 배양된 뉴런의 신경영양인자 단백질 발현을 증가시킨다는 것을 보여준다. 그러므로, 신경영양인자 단백질에 대한 사르사사포게닌과 스미라게닌의 효과는 신경영양인자 mRNA에 대한 효과와 비슷하다. 즉, 사르사사포게닌과 스미라게닌은 신경영양인자의 자가조절 메커니즘을 방해하거나 중단시키지않지만, 뉴런의 필요조건에 따라 뉴런에 사실상 주입된다.
BDNF, trk-B 및 GDNF가 신경, 감각 및 운동 경로에 수반되는 것으로 알려져 있기 때문에, 신경, 감각 및 운동 기점을 갖는 질환 및 장애에 대하여 사르사사포게닌 및 스미라게닌의 활성이 신경영양인자 및 이의 수용체의 증가된 유전자 발현을 수반한다는 것은, 이런 실험으로부터 얻은 지식의 범위 내에서 추론된다.
사르사사포게닌과 스미라게닌은 나이 든 동물의 BDNF 농도를 복원한다.
나이 든 Sprague Dawley(SD) 랫트(생후 20개월)에게 3달 동안 사르사사포게닌 또는 스미라게닌(18 mg/kg/day)을 경구 투여했다. BDNF는 어린 랫트의 뇌와 비교할 때 나이 든 랫트의 뇌에서 현저히 감소되었다. 어린 SD 랫트(생후 4개월)를 건강한 양성 대조군으로 사용했다. 치료의 말미에, ELISA를 사용한 BDNF의 정량화를 위해 뇌를 제거했다.
결과는 하기 표 11에서 보여진다.
사르사사포게닌과 스미라게닌은 나이 든 랫트의 BDNF 수준의 감소를 반전시키고,
어린 랫트의 수준으로 BDNF 수준을 복원한다
조건 BDNF ( ng /g 조직)
어린 랫트 1.65±0.09
나이 든 랫트 1.21±0.07++++
나이 든 랫트 + 사르사사포게닌(18 mg/kg/day) 1.41±0.07*
나이 든 랫트 + 스미라게닌(18 mg/kg/day) 1.34±0.07*
평균±표준오차평균; n=9-10, 통계학적 분석은 짝지은 일방적 Student's t-test를 사용하여 수행되며, 어린 랫트에 비교시에 ++++=p<0.001, 나이 든 랫트에 비교시에 *=p<0.05를 나타낸다.
3달 동안 나이든 랫트에게 사르사사포게닌 또는 스미라게닌을 경구투여하는 것은 나이든 동물의 BDNF의 감소를 어린 건강한 랫트에서 관찰되는 수준으로 반전시키고, 즉, 상기 물질들은 나이 든 대조군 랫트와 비교할 때 BDNF를 현저하게 증가시킨다.
이런 데이터는 BDNF 발현에 대한 상기 물질의 효과가 장기적인 투여하에서 정상화하는 효과와 같다는 것을 나타내며, 즉, 거의 정상 상태로의 회복을 제한함으로써, 물질에 과다노출되는 것에 대하여 치료된 동물을 보호하는 장기적인 조절효과를 가진다.
이런 예는 PCT 특허출원번호 WO-A-03/082893의 실시예 9에서의 실험을 보완하며, 참조로 본 명세서에 포함된다. 상기 실시예는 랫트에서 나이와 연관된 BDNF, 도파민 수용체 및 무스카린성 아세틸콜린 수용체의 감소가 스미라게닌 또는 사르사사포게닌에 의해 현저히 감소되거나 반전되었다는 것을 증명했다.
스미라게닌은 MPTP 손상 마우스의 선조체(striatum)에서 BDNF 와 GDNF 농도를 증가시킨다.
생후 7개월 된 나이 든 수컷 C57bl/6 RJ 마우스(C57 마우스)는 1-메틸-4-페닐-1,2,3,6-테트라히드로피리딘(복강내에 MPTP를 25 mg/kg/day 5일 동안 연이어서 주사함)을 매일 주사 받았고, ELISA를 사용하여 GDNF 및 BDNF의 선초체 수준을 정량하고 [I125]-RTI 결합을 사용하여 도파민 운반체(DAT) 수준을 정량하기 위해 상기 마우스의 뇌가 제거된 후 60일 동안 스밀라게닌(10 mg/kg/day) 또는 비히클(히드록실프로필메틸셀룰로오스, 트윈-80 0.2 %(w/v)를 함유하는 HPMC 0.5 %(w/v))을 경구 투여 받았다. DAT는 도파민작동성 뉴런의 뉴런 손상에 대한 표지이다.
신경독소 MPP+에 의해 유발된 손상, MPTP의 대사 산물은 파킨슨병과 같은 신경퇴행성 질병에서 관찰되는 흑질-선조체(nigrostriatal) 도파민작동성 뉴런의 악화처럼 보인다(Mytinlineou, 등, Science, 225, 529-531 (1984)). 이런 독소에 의해 유도되는 가장 두드러진 생화학적 변화는 흑색질 치밀부(substantia nigra pars compacta)와 미상핵(caudate nucleus)에서 도파민과 도파민의 대사 산물의 수준이 증가하는 것(Burns 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80, 4546-4550 (1983)) 및 흑질-선조체 시냅토솜(synaptosomal)에서 활용하는 도파민이 감소하는 것을 포함한다(Heikkila 등, J. Neurochem., 44, 310- 313 (1985)).
따라서, 이 실험에서 사용된 MPTP 처리된 마우스는 파킨슨병 및 유사한 운동-감각 신경퇴행성 질환에 대한 적합한 모델을 제공한다.
결과는 하기 표 12 및 표 13에서 보여진다
스미라게닌은 MPTP 손상 마우스에서 선조체 GDNF 및 BDNF 를 증가시킨다
GDNF ( pg / mg 조직) GDNF ( MPTP 마우스에 비해 증가한 %)
MPTP 마우스 58.36±15.32 -
MPTP + 스미라게닌 275.31±59.62** 372±92**
BDNF ( pg / mg 조직) BDNF ( MPTP 마우스에 비해 증가한 %)
MPTP 마우스 17.75±4.80 -
MPTP 마우스 + 스미라게닌 46.91±9.97** 164±53**
평균±표준오차평균; n=8-11 MPTP 손상 마우스에 비교할 때 **=p<0.01. 통계학적 분석은 일방적 ANOVA를 사용하여 수행되었고, 이어서 Tuckey's post - hoc 다중 비교 시험을 수행하였다.
스미라게닌은 MPTP 손상 마우스에서 선조체 DAT 수준을 증가시킨다
조건 DAT 수준( 선조체에 [ I 125 ]- RTI 결합; nCi /g 단백질)
대조군 마우스 74.4±4.9
MPTP 마우스 23.4±3.9++
MPTP + 스미라게닌 (10 mg/kg/day) 69.7±8.8**
평균±표준오차평균; n=6-8, 대조군 마우스에 비교할 때 ++=p<0.01; MPTP 손상 마우스에 비교할 때 **=p<0.01. 통계학적 분석은 일방적 ANOVA를 사용하여 수행되었고, 이어서 Tuckey's post - hoc 다중 비교 시험을 수행하였다.
MPTP 손상 마우스에게 스미라게닌을 60일 동안 경구적으로 투여하는 것은 선조체 GDNF 및 BDNF 수준을 현저히 상승시키고, DAT 결합의 MPTP 유도 손실을 현저히 막는다.
이 실시예는 PCT 특허 출원 번호 WO-A-03/082893의 실시예 6 및 7의 시험관 안에서의 실험을 보완하며, 참조로 여기에 포함된다. 이런 실험은 시험관 안에서 랫트 중뇌의 도파민작동성 뉴런을 스미라게닌 또는 사르사사포게닌으로 선처리 하는 것이 MPP+ 유도 신경퇴행성을 현저히 막거나 반전시킨다는 것을 증명했다.
유사한 실험에서, 생후 10주 된 수컷 C57 마우스는 연이은 5일 동안(1일-5일) 식염수 또는 MPTP(복강내로 25 mg/kg/day 주사함)을 매일 주사 받았고, 운반체(DAT) 수준을 정량하기 위해 상기 마우스의 뇌가 제거된 후 61일 동안(12일-72일) 또는 71일 동안(2일-72일) 스밀라게닌(10 mg/kg/day) 또는 비히클(트윈-80을 0.2 %(w/v) 함유하는 HPMC 0.5 %(w/v))을 경구 투여 받았으며, 상기 DAT의 수준은 도파민작동성 뉴런의 뉴런 손상에 대한 표지이다.
결과는 하기 표 14에서 보여진다.
스미라게닌은 마우스 중의 선조체 DAT 수준의 MPTP 유도 감소를 반전시킨다
DAT 수준( 선조체에 [ I 125 ]- RTI 결합; nCi /g 단백질)
대조군 435.9±20.4
대조군 + 스미라게닌 (10 mg/kg/day, 2일-72일) 406.2±21.8
MPTP 158.2±24.9****
MPTP + 스미라게닌 (10 mg/kg/day, 12일-72일) 280.3±18.3++++
MPTP + 스미라게닌 (10 mg/kg/day, 2일-72일) 256.2±21.4++++
평균±표본오차평균; n=8-12, 대조군 마우스에 비교할 때 ****=p<0.001; MPTP 마우스에 비교할 때 ++++=p<0.001. 통계학적 분석은 일방적 ANOVA를 사용하여 수행되었고, 이어서 Fisher's post - hoc 다중 비교 시험을 수행하였다.
대조군 마우스에게 71일 동안 스미라게닌을 경구적으로 투여하는 것은 비히클만을 받은 대조군 마우스와 비교할 때 선구체 DAT 수준을 변화시키지 않는다. 61일 또는 71일 동안 MPTP 손상 마우스에게 스미라게닌을 경구적으로 투여하는 것은 선구체 DAT 수준에서 MPTP 유도 감소를 현저히 반전시킨다.
사르사사포게닌과 스미라게닌은 대뇌피질 뉴런, 척추 운동 뉴런 및 감각 뉴런에서 신경돌기 생성을 증가시킨다.
대뇌피질 뉴런
앞서 설명한 방법을 변형하여 랫트 대뇌피질 뉴런을 배양했다(Singer, 등, Neuroscience Letters, 1996, 212, pp. 13-16). 24시간 동안 사르사사포게닌, 스미라게닌, 비히클(DMSO 0.25%), GDNF, BDNF 또는 NGF와 함께 세포를 배양했다. 각각의 군에 대하여, 신경돌기를 보여주는 뉴런을 나타내는 15개의 사진을 각각의 영영에서 무작위로 선택했고, 각각의 뉴론에 대하여 가장 긴 신경돌기를 측정했다. 각각의 영역에서 신경돌기를 보여주는 뉴런의 수, 신경돌기를 보여주지 않는 뉴런의 수, 그리고 총 뉴런의 수를 셈으로써 신경돌기의 수를 측정했다. 웰당 6개의 영역이 조사됐다.
결과는 하기 표 15에서 보여지며, 영역당 뉴런의 총 수의 비율로서 영역당 신경돌기를 갖는 뉴런의 수를 나타냈다.
사르사사포게닌과 스미라게닌은 대뇌피질 뉴런의 신경돌기 생성을 증가시킨다
대뇌피질 뉴런
조건 신경돌기 길이(대조군에 대한 %) 신경돌기를 보이는 뉴런(%)
대조군 10.00±4.76 39.35±2.06
사르사사포게닌(3 nM) 168.29±6.12**** 52.40±2.63****
사르사사포게닌(30 nM) 156.74±4.06**** 57.32±2.54****
스미라게닌(3 nM) 159.03±4.91**** 53.84±2.93****
스미라게닌(30 nM) 176.71±6.34**** 53.46±2.13****
GDNF (3 nM) 125.30±4.18*** 55.72±1.98****
BDNF (3 nM) 162.34±5.91**** 48.06±2.17**
NGF (3 nM) 145.73±5.13**** 52.59±2.43****
평균±표본오차평균; 하나의 배양, 통계학적 분석은 일방적 ANOVA를 사용하여 수행되었고, 이어서 Fisher's post - hoc 시험이 수행되었다. 대조군과 비교할 때 **=p<0.01; ***=p<0.005, ****=p<0.001.
사르사사포게닌과 스미라게닌은 랫트 제 1 대뇌피질 뉴런에 존재하는 신경돌기의 길이 및 신경돌기를 보이는 뉴런의 비율을 현저히 증가시킨다. 신경돌기 성장을 증가시키고, 이어서 사르사사포게닌과 스미라게닌에 노출시키는 효과는 양성 대조군, GDNF, BDNF 및 NGF로 관찰되는 것과 비슷하다.
이런 실시예는 PCT 특허 출원 번호 WO-A-03/082893의 실시예 5의 실험을 보완하며, 참조로 본 명세서에 포함된다. 상기 실험은 사르사사포게닌 또는 스미라게닌으로 랫트 제 1 대뇌피질 뉴런의 치료가 존재하는 신경돌기의 길이 및 신경돌기를 보이는 뉴런의 비율을 현저히 증가시켰다는 것을 증명했다.
사르사사포게닌과 스미라게닌의 신경영양활성, 신경보호활성 및 신경회복활성이 BDNF 또는 GDNF와 같은 신경영양인자의 존재에 의존하는 지를 시험하기 위하여, 다음의 실험이 수행되었다:
랫트 대뇌피질 뉴런을 배양한 후에 상기 설명된 방법이 이어진다.
이전의 연구와 다르게, 배양 배지에 첨가된 소태아혈청(FBS) 또는 송아지태아혈청(FCS)이 없으며, 이는 배양에 신경영양인자가 존재하지 않는다는 것을 보여준다. 상기 시험 화합물을 24시간 동안 첨가했다.
FBS 또는 FCS의 부존재하에서 하루 동안 랫트 대뇌피질 뉴런을 사르사사포게닌, 스미라게닌(30 nM) 또는 비히클(DMSO, 0.25%)에 노출시켰다. 단일클론 항체 항 β-튜뷸린 희석된 것 및 항 마우스 면역 글로불린 항체 G 희석된 것을 사용하여 대뇌피질 뉴런을 착색했다. 이러한 항체는 뉴런 세포체(신경보호 효과를 정량함) 및 신경돌기(뉴로트로핀 효과를 정량함)를 착색했다. 카메라가 포함된 epi-형광(epifluorecence) 현미경(배율 x 20)은 웰당 2개의 사진을 찍었다(질환당 10개의 사진). LUCIA 6.0 소프트웨어를 사용하여 항 β-튜뷸린 항체로 라벨링된 세포의 수 및 세포의 총수에 대한 분석을 수행했다.
결과는 하기 표 16에서 보여진다.
혈정 및 임의의 부가적인 신경영양인자의 부존재하에서 배양된 대뇌피질 뉴런의 뉴런 생존률 및 신경돌기 성장에 대한 사르사사포게닌과 스미라게닌의 효과
대뇌피질 뉴런
조건 뉴론 생존률(대조군에 대한 %) 신경돌기 성장(대조군에 대한 %)
대조군 100±4.05 100±3.82
사르사사포게닌(30 nM) 149.55±6.22**** 152.85±10.68****
스미라게닌(30 nM) 155.36±4.75**** 173.89±9.23****
BDNF(3 nM) 162.75±5.61**** 146.84±9.27****
평균±표본오차평균; 배양조직 당 n=12 웰, n=2 배양조직이 사용됨. 통계학적 분석은 일방적 ANOVA를 사용하여 수행되었고, 이어서 Fisher's post - hoc 시험이 수행되었으며, 대조군과 비교할 때 ****=p<0.001이다.
사르사사포게닌과 스미라게닌은 그들의 신경영양활성, 신경보호활성 및 신경회복활성을 위해 부가적인 신경영양인자가 필요하지 않다.
척추 운동 뉴런
SR 57746A로도 알려진, 크살리프로덴(xaliproden)(1-[2-(나프트-2-일)에틸]-4-(3-트리플루오로메틸페닐)-1,2,5,6-테트라-히드로피리딘 히드로클로라이드)은 신경퇴행성 질병을 치료하기 위해 Sanofi-Aventis에 의해 개발된 경구적으로 활성이며 합성 비-펩타이드 화합물이다. 크살리프로덴은 시험관 안에서 혈액 뇌 관문을 침투하고, 신경영양활성을 가지며, 이는 PC12 세포 중의 신경돌기 성장에 대한 NGF의 효과(Fournier 등, Neuroscience, 1993, 55, pp. 629-641; Pradines 등, Journal of Neurochemistry, 1995, 64, pp. 1954-1964)에 힘을 더하고, 마우스 척추 운동 뉴런의 생존률을 증가시킨다(Duong 등, British Journal of Pharmacology, 1999, 128, pp. 1385-1392). 나아가, 크살리프로덴은 평균 생존 시간 및 진행성 운동 신경 장애를 갖는 마우스의 운동 수행능을 증가시킨다(Duong 등, British Journal of Pharmacology, 1998, 124, pp. 811-817). 크살리프로덴의 작용방식은 거의 이해되지 않는다. 반면에, 크살리프로덴의 신경보호효과는 5-히드록시트립타민1A 수용체에서 이의 촉진 작용에 대해 독립성을 보인다(Labie 등, British Journal of Pharmacology, 1999, 127, pp. 139-144).
이어지는 실험은 크살리프로덴에 대하여 사르사사포게닌 또는 스미라게닌의 신경인성효과 및 neuritogenic효과를 비교한다.
앞서 설명한 방법에 따라서 랫트 척추 운동 뉴런을 제조했다(Martinou 등, Neuron, 8, 737-744, 1992). 사르사사포게닌, 스미라게닌, 비히클(DMSO, 0.25%), 크살리프로덴 또는 BDNF와 함께 3일간 배양한 후에, 척수 운동 뉴런을 PBS로 2번 세척했고, 차가운 알콜 용액(95%) 및 아세트산(5%)에서 5분간 고정한 이후에, PBS로 3번 씻어냈다. 단일클론 항체 항 β-튜뷸린 희석된 것 및 항 마우스 면역 글로불린 항체 G 희석된 것을 사용하여 뉴런을 착색했다. 이러한 항체는 뉴런 세포체(신경보호 효과를 정량함) 및 신경돌기(뉴로트로핀 효과를 정량함)를 착색했다. 형광 표지로 세포핵을 착색했다. 배양 후 1시간 째에, 세포를 PBS로 세번 세척했다. epi-형광 현미경을 사용하여 20배 배율로 배양조직을 관찰했다. 컴퓨터 소프트웨어에 의해 제어되는 카메라를 사용하여 일련의 사진을 찍었다. 동일한 조건하에서 모든 영상을 얻었다. LUCIA 6.0 소프트웨어를 사용하여 항 β-튜뷸린 항체로 라벨링된 세포의 수 및 세포의 총수(착색된 핵의 수)에 대한 분석을 수행했다.
결과는 하기 표 17에서 보여진다.
사르사사포게닌과 스미라게닌은 척추 운동 뉴런에서
신경형성 및 신경돌기형성을 증가시킨다
척추 운동 뉴런
조건 뉴런의 생존율(대조군에 대한 %) 신경돌기 성장(대조군에 대한 %)
대조군 100.00±2.16 100.00±7.82
사르사사포게닌(30 nM) 119.14±3.33**** 129.98±5.47**
사르사사포게닌(100 nM) 117.87±3.63**** 137.38±7.93***
스미라게닌(30 nM) 120.11±2.92**** 163.66±9.28****
스미라게닌(100 nM) 121.21±2.75**** 164.75±5.57****
크살리프로덴(30 nM) 110.95±2.14** 137.57±11.69***
크살리프로덴(100 nM) 111.18±2.85** 137.55±6.76***
크살리프로덴(300 nM) 109.47±3.34* 131.22±7.93**
BDNF(1.85 nM) 126.15±1.60**** 176.91±7.25****
평균±표본오차평균; 배양조직 당 n=12 웰, n=2 배양조직이 사용됨. 통계학적 분석은 일방적 ANOVA를 사용하여 수행되었고, 이어서 Fisher's post - hoc 시험이 수행되었으며, 대조군과 비교할 때 *=p<0.05, **=p<0.01, ***=p<0.005 및 ****=p<0.001이다.
데이터는 크살리프로덴에 대한 노출이 대조군과 비교할 때 뉴런의 생존률 및 신경돌기 성장을 현저히 증가시켰다는 것을 보여준다. 또한, 사르사사포게닌과 스미라게닌은 랫트 제 1 척추 운동 뉴런에서 뉴런의 생존률 및 신경돌기 성장을 현저한 증가시켰다. 신경돌기생성을 증가시키는 효과는 양성 대조군 BDNF을 사용하여 관찰된 것과 비슷하다.
신경형성을 촉진하기 위한 사르사사포게닌과 스미라게닌의 효과는 크살리프로덴의 효과보다 약간 더 현저함을 보이며; 하지만, 사르사사포게닌과 스미라게닌의 효과는 기존의 연구와 비교할 때 본 연구에서 감소된 것을 보인다.
크살리프로덴(1 및 2 mg/day)의 효능 및 안전성은 루게릭병(ALS)을 앓는 환자에게서 2개의 제3상 임상실험으로 평가되었다(Meininger 등, Amyotrophic Lateral Sclerosis and Other Motor Neuron Disorders, 2004, 5, pp. 107-117). 게다가, 크살리프로덴은 알츠하이머 질병의 발생 가능성을 갖는다고 제3상 임상실험에서 최근에 평가되었고, 이는 크살리프로덴이 이제 더 이상 사용되지 않는다. 투여량 의존성 부작용은 크살리프로덴의 5-히드록시트립타민(5-HT) 작용자 특징과 주로 관련된다.
본 실시예에서, 사르사사포게닌과 스미라게닌은 크살리프로덴과 비교할 때 개선되거나 유사한 활성 프로파일을 보였다. 중요하게, 사르사사포게닌과 스미라게닌은 5-HT 작용자가 아니고, 상응하는 크살리프로덴의 부작용을 보이지 않는다.
이 실시예는 PCT 특허 출원 번호 WO-A-03/082893의 실시예 8의 시험관 내 실험을 보완하며, 참조로 여기에 포함된다. 상기 실험은 시험관 내에서 랫트 제 1 척추 운동 뉴론의 글루탐산 유도 신경퇴화가 사르사사포게닌 또는 스미라게닌으로 현저히 감소되거나 반전되었다.
감각 뉴런
임신의 15일째에 Wistar 랫트 배아로부터 랫트 감각 뉴런을 수득했다. 세포를 5% CO2/95% 공기 분위기에서 37℃로 배양했다. 사르사사포게닌, 스미라게닌, 비히클(DMSO, 0.25%) 또는 NGF와 함께 배양을 시작한지 2일 후에, 감각 뉴런을 PBS로 2번 씻었고, PBS 중의 파라포름알데하이드(4%)에 30분 동안 4℃에서 고정했다. 세포를 Triton X-100(0.1%)로 처리했고, 송아지태아혈청을 사용하여 비특이적 부위를 포화시켰다. 착색하기 이전에, 세포를 1차 항체의 혼합물(송아지태아혈청을 5% 함유하는 PBS 중의 항-신경미세섬유 68 및 200)과 함께 실온에서 2시간 동안 배양했다. 세척하기 이전에, 슬라이드를 떼어내고 세포를 5분 동안 PBS로 2회 세척했으며, 1시간 동안 암실에 놓아두고 2차 항체(송아지태아혈청(5%)을 함유하는 PBS에서, 시아닌 3(Cy3; 1/1600)과 결합된 항-마우스 및 플루오로이소티오시아네이트(FITC; 1/200)와 결합된 항-래빗)와 함께 배양했다. 슬라이드를 5분간 PBS로 2회 세척했고, Mowiol(Tris/HCl(0.2 mM; pH 8.5)로 완충된 글리세롤(22%) 중의 항산화제 용액(9% w/v))을 이용하여 커버글라스상에 고정시켰다. DAPI/FITC/Cy3 삼중 필터 현미경을 사용하여 20 배 비율로 슬라이드를 관찰했다. 디지털 카메라를 사용하여 웰당 일련의 사진을 무작위로 찍었다.
결과는 하기 표 18에서 보여진다.
사르사사포게닌과 스미라게닌은 감각 뉴런 중의 뉴런의 생존률을 증가시킨다
감각 뉴런
조건 뉴런의 생존률 (대조군에 대한 %)
대조군 100.00±5.34
사르사사포게닌(30 nM) 130.83±1.75****
스미라게닌(300 nM) 124.02±7.64*
NGF(0.2 nM) 151.50±7.19****
평균±표본오차평균; n=40-49 웰, n=2 배양조직이 사용되었다. 통계학적 분석은 일방적 ANOVA를 사용하여 수행되었고, 이어서 Fisher's post - hoc 시험이 수행되었으며, 대조군과 비교할 때 *=p<0.05 및 ****=p<0.001이다.
사르사사포게닌과 스미라게닌은 랫트 1차 감각뉴런 중의 뉴런의 생존률을 현저하게 증가시켰다.
사르사사포게닌과 스밀라게닌은 신경생성인자와 동일한 세포내 전달 경로를 활성화한다.
사르사사포게닌과 스미라게닌으로 유도된 신경돌기생성은 K252a, trk 억제자에 의해 억제되며, 사르사사포게닌과 스미라게닌의 뉴로트로핀 효과가 trk 수용체를 통해 직접적 또는 간접적으로 매개된다는 것을 시사한다. 이런 억제 실험은 하기에서 설명되고, 결과는 하기 표 19에서 보여진다.
상기 구체적으로 설명된 것처럼 대뇌피질 뉴런을 배양했다. 1시간 동안 비히클(DMSO, 0.25%) 또는 K252a(100 nM)에 뉴런을 노출시켰다. 1시간 후에, K252a의 지속적인 존재하에서 배지에 비히클, 사르사사포게닌, 스미라게닌(30 nM) 또는 BDNF(1.85 nM)를 첨가했다. 이어지는 24시간 동안 사르사사포게닌 또는 스미라게닌(30 nM), 비히클(DMSO, 0.25%) 또는 BDNF(1.85 nM)에 노출시킨 후에, 뉴런을 인산완충식염수(phosphate buffered saline)를 사용하여 세척했고, PBS 중의 글루타르알데히드(2.5%)에 고정했다. 현미경(대물렌즈 x20, Nikon)에 고정된 카메라로 신경돌기를 보이는 40 내지 60개의 뉴런의 사진을 찍었다. 사진의 분석을 통해 신경돌기 길이를 측정했다.
결과는 하기 표 19에 보여진다.
랫트 1차 대뇌피질 뉴런에서
사르사사포게닌 및 스미라게닌으로 유도된 신경돌기 성장의 억제
대뇌피질 뉴런
조건 신경돌기 길이(대조군에 대한 %)
대조군 100.00±3.18
k252a를 포함한 대조군(100 nM) 95.22±3.10
사르사사포게닌(30 nM) 126.74±5.76++++
K252a(100 nM)를 포함한 사르사사포게닌(30 nM) 93.12±2.88****
스미라게닌(30 nM) 146.78±6.75++++
K252a(100 nM)를 포함한 스미라게닌(30 nM) 94.36±3.96****
BDNF(1.85 nM) 125.30±5.80++++
K252a(100 nM)를 포함한 BDNF(1.85 nM) 87.31±2.20****
평균±표본오차평균; 배양당 n=81-105 뉴론, n=2 가 사용되며, 통계학적 분석은 일방적 ANOVA를 사용하여 수행되었고, 이어서 Fisher's post - hoc 시험이 수행되었다. 대조군과 비교할 때 ++++=p<0.001; K252a만 없는 동일한 조건과 비교할 때 ****=p<0.001이다.
대뇌피질 및 중뇌 뉴런에 K252a, 항-BDNF 또는 항-GDNF 항체를 사용하는 독립적인 실험에서 유사한 결과를 얻었다.
trk 수용체 활성에 이어서, 특정한 신호 전달 경로는 뉴런의 생존을 야기하도록 활성화되고, MEK1/2은 이 경로에 수반되는 것으로 보여진다(Finkbeiner, Neuron, 2000, 25, pp. 11-14). 스미라게닌으로 유도되는 신경돌기형성은 PD98059, MEK1/2 억제자에 의해 부분적으로 억제되며, 스미라게닌의 신경영양효과가 MEK1/2를 통해 부분적으로 매개된다는 것을 시사한다. 이런 억제 실험은 하기에서 설명되고, 결과는 하기 표 20에서 보여진다.
상기 구체적으로 설명된 것처럼 대뇌피질 뉴런을 배양했다. 1시간 동안 비히클(DMSO, 0.25%) 또는 PD98059(10 μM)에 뉴런을 노출시켰다. 1시간 후에, PD98059의 지속적인 존재하에서 배지에 비히클, 스미라게닌(30 nM) 또는 BDNF(1.85 nM)를 첨가했다. 이어지는 24시간 동안 스미라게닌(30 nM), 비히클(DMSO, 0.25%) 또는 BDNF(1.85 nM)에 노출시킨 후에, 뉴런을 PBS를 사용하여 세척했고, PBS 중의 글루타르알데히드(2.5%)에 고정했다. 현미경(대물렌즈 x20, Nikon)에 고정된 카메라로 신경돌기를 보이는 40 내지 60개의 뉴런의 사진을 찍었다. 사진의 분석을 통해 신경돌기 길이를 측정했다.
결과는 하기 표 20에 보여진다.
랫트 1차 대뇌피질 뉴런에서 스미라게닌에 의해 유도되는 신경돌기 성장의 억제
대뇌피질 뉴런
조건 신경돌기 길이(대조군에 대한 %)
대조군 100±3.18
PD98059(10 μM)을 포함하는 대조군 96.08±2.47
스미라게닌(30 nM) 146.78±6.75++++
PD98059(10 μM)을 포함하는 스미라게닌(30 nM) 120.27±5.80****
BDNF(1.85 nM) 125.30±5.80++++
PD98059(10 μM)을 포함하는 BDNF(1.85 nM) 99.07±5.15****
평균±표본오차평균; 배양당 n=86-109 뉴론, n=2가 사용되며, 통계학적 분석은 일방적 ANOVA를 사용하여 수행되었고, 이어서 Fisher's post - hoc 시험이 수행되었다. 대조군과 비교할 때 ++++=p<0.001; PD98059만 없는 동일한 조건과 비교할 때 ****=p<0.001이다.
유사한 결과를 낳는 사르사사포겐닌을 사용하여 유사한 실험을 수행했다.
CREB(cAMP response element binding)단백질은 전사인자류에 속하고 뉴런의 생존을 조절하는데에 중요하다. 게다가, trk 수용체 활성 이후에 CREB는 상향조절된다(Finkbeiner, Neuron, 2000, 25, pp. 11-14). 사르사사포게닌은 중국햄스터난소(CHO)세포 중의 인산화된 CREB(pCREB, CREB의 활성형)의 양을 현저히 증가시켰다. 이 실험은 하기에서 설명되고, 그 결과는 하기 표 21에서 보여진다.
24시간 동안 DMSO(0.5%) 또는 사르사사포게닌(10 μM)과 함께 CHO를 배양했다. 이후에 세포를 차가운 PBS로 세척했으며, 도데실황산나트륨(SDS) 완충액에 용해시켰고, 5분간 가열했고, Bradford 방법에 의해 단백질 함량을 측정했다. 이후에, SDS 폴리아크릴아미드겔 상에서 시료를 분리했고, PVDF(Bio-Rad)막으로 이동시켰다. 5 % 탈지분유에 1시간 동안 노출시킨 이후에, 1차 항체(마우스 pCREB(Upsdate, 1:1000) 및 마우스 β-액틴(Santa Cruz, 1:1000))에서 4℃로 밤새도록 배양했다. 이후에, 상기 막을 실온에서 1시간 동안 페록시다아제 콘주게이트된 2차 항체(Wuhan Boster Biology Technology, China. 1:2000)에서 배양했고, ECL 시약(Pierce)으로 성장시켰다. 막을 pH 6.8, 50℃조건에서 30분 동안 2-메르캅토에탄올(100 mM), SDS(2%), Tris HCL(62.5 mM)에 배양함으로써 분해했다. 영상 분석기를 갖는 영상 J 분석 시스템(Gel Doc 2000, Bio-Rad)을 사용하여 항체염색의 농도 정량을 수행했다. 동일한 실험에서 pCREB의 각각의 밴드에 대한 항체염색의 상대량은 β-액틴 밴드런(band run)으로 정상화 되었고, 임의의 단위(arbitrary units)로 나타냈다.
CHO 세포에서 사르사사포게닌에 24시간 노출시킨 후에 인산화된 CREB 의 발현
인산화된 CREB (임의의 단위)
대조군 사르사사포게닌(10 μM)
0.729±0.112 1.342±0.084++
평균±표준오차평균; n=5, 통계학적 분석은 짝지은 t-test에 의해 수행되었고, 대조군과 비교할 때 ++=p<0.01이다.
사르사사포게닌 , 스미라게닌 , 에피사르사사포게닌 및 에피스미라게닌으로 선처리하는 것은 대뇌피질 뉴런에 글루탐산에 의해 유도되는 손상을 감소시킨다.
글루탐산에 대한 랫트 1차 대뇌피질 뉴런의 노출은 글루탐산에 노출시킨지 24 시간 후에 측정된 락트산탈수소효소(LDH) 활성을 증가시키며, 현저한 뉴런의 손상을 나타낸다. 앞서 설명한 방법을 변형하여 랫트 대뇌피질 뉴런을 배양했다(Singer, 등, Neuroscience Letters, 1996, 212, pp. 13-16). 배양의 10일째에, 배지를 혈청이 없는 합성 배지로 교환했다. 12일째에, 배양조직을 세척했고, 시험화합물 또는 비히클(DMSO, 0.25%)을 함유하는 새로운 배지에서 24시간 동안 넣어놨다. 13일째에, 37 ℃조건에서 글루탐산(100 μM; 10 분)에 뉴런을 노출시켰다. 이후에 배양조직을 세척했고, LDH를 측정하기 전에 추가로 24시간 동안 시험 화합물 또는 비히클로 보충되는 새로운 배지에 넣어놨다. 글루탐산에 24시간 노출시킨후에 배지에서 LDH 활성을 측정함으로써 뉴런의 손상을 평가했다.
결과는 하기 표 22 내지 26에서 보여진다.
사르사사포게닌은 대뇌피질 뉴런에서 그루탐산 유도 손상을 감소시킨다
대뇌피질 뉴런
조건 뉴런의 생존(대조군에 대한 %)
대조군 100.00±2.23
글루탐산(100 μM) 65.83±2.46+++
글루탐산 + 사르사사포게닌(1 nM) 76.88±2.79***
글루탐산 + 사르사사포게닌(3 nM) 77.23±2.62***
글루탐산 + 사르사사포게닌(10 nM) 73.50±3.05*
글루탐산 + 사르사사포게닌(30 nM) 78.91±2.97***
글루탐산 + 사르사사포게닌(100 nM) 76.30±4.15***
평균±표준오차평균; 배양조직당 n=4 웰, 3개의 배양조직이 사용되며, 통계학적 분석은 ANOVA를 사용하여 수행되고, 이어서 Fisher's post - hoc 시험이 수행되었다. 대조군과 비교할 때 +++=p<0.005, 글루탐산과 비교할 때 *=p<0.05; **=p<0.01; ***=p<0.005이다.
스미라게닌은 대뇌피질 뉴런에서 그루탐산 유도 손상을 감소시킨다
대뇌피질 뉴런
조건 뉴런의 생존(대조군에 대한 %)
대조군 100.00±4.17
글루탐산 67.09±3.46+++
글루탐산 + 스미라게닌(1 nM) 81.53±1.66***
글루탐산 + 스미라게닌(3 nM) 78.19±1.85**
글루탐산 + 스미라게닌(10 nM) 82.50±1.00***
글루탐산 + 스미라게닌(30 nM) 89.86±3.55***
글루탐산 + 스미라게닌(100 nM) 82.45±2.18***
평균±표준오차평균; n=4 웰, 1개의 배양조직이 사용되었다.
에피사르사사포게닌은 대뇌피질 뉴런에서 그루탐산 유도 손상을 감소시킨다
대뇌피질 뉴런
조건 뉴런의 생존(대조군에 대한 %)
대조군 100.00±4.17
글루탐산 67.09±3.46+++
글루탐산 + 에피사르사사포게닌(1 nM) 84.79±2.40***
글루탐산 + 에피사르사사포게닌(3 nM) 80.39±5.18*
글루탐산 + 에피사르사사포게닌(10 nM) 83.80±4.18***
글루탐산 + 에피사르사사포게닌(30 nM) 87.17±2.51***
글루탐산 + 에피사르사사포게닌(100 nM) 86.42±2.95***
평균±표준오차평균; n=4 웰, 1개의 배양조직이 사용되었다.
에피스미라게닌은 대뇌피질 뉴런에서 그루탐산 유도 손상을 감소시킨다
대뇌피질 뉴런
조건 뉴런의 생존(대조군에 대한 %)
대조군 100.00±5.18
글루탐산 70.15±1.07+++
글루탐산 + 에피스미라게닌(3 nM) 82.49±3.93**
글루탐산 + 에피스미라게닌(10 nM) 78.57±2.15
글루탐산 + 에피스미라게닌(30 nM) 81.76±2.09**
글루탐산 + 에피스미라게닌(100 nM) 78.39±1.75
글루탐산 + 에피스미라게닌(300 nM) 78.86±1.80*
평균±표준오차평균; n=4 웰, 1개의 배양조직이 사용되었다.
디오스게닌은 대뇌피질 뉴런에서 그루탐산 유도 손상을 감소시킨다
대뇌피질 뉴런
조건 뉴런의 생존(대조군에 대한 %)
대조군 100.00±4.20
글루탐산 67.67±4.54+++
글루탐산 + 디오스게닌(3 nM) 69.43±1.76
글루탐산 + 디오스게닌(10 nM) 66.51±5.13
글루탐산 + 디오스게닌(30 nM) 68.98±5.39
글루탐산 + 디오스게닌(100 nM) 70.95±5.03
글루탐산 + 디오스게닌(300 nM) 75.02±2.68
평균±표준오차평균; n=4 웰, 1개의 배양조직이 사용되었다.
랫트 1차 대뇌피질 뉴런에서, 글루탐산에 노출시키기 24시간 전에 사르사사포게닌, 스미라게닌, 에피사르사사포게닌(1-100 nM) 및 에피스미라게닌(3-300 nM)으로 선처리하는 것은 글루탐산에만 노출된 뉴런과 비교할 때 글루탐산 유도 LDH 방출을 현저히 감소시켰다.
그와 대조적으로, 글루탐산에 노출시키기 24시간 전에 디오스게닌(3-300 nM)으로 선처리하는 것은 뉴런 손상을 막지 못했다.
사르사사포게닌, 스미라게닌, 에피사르사사포게닌 및 에피스미라게닌의 활성은 어떤 독성도 유발함 없이 나노몰랄 농도에서 정체기에 도달했다. 이런 실험 조건에서 마이크로몰랄 농도의 시험 화합물은 용액의 밖으로 촉진한다.
이 실시예는 PCT 특허 출원 번호 WO-A-03/082893의 실시예 2 내지 4의 시험관내 실험을 보완하며, 참조로 본 명세서에 포함된다. 이러한 실험들은 사르사사포게닌, 에피사르사사포게닌, 스미라게닌, 에피스미라게닌 또는 이들의 3-케톤 또는 3-에스테르로 랫트 1차 대뇌피질 뉴런을 선처리하는 것이 글루탐산 유도 신경퇴행증을 현저히 방지하거나 반전시킨다는 것을 증명했으며, 반면에 디오스게닌은 이러한 활성을 보이지 않았다.
도파민작동성 뉴런에서 사르사사포게닌 , 에피사르사사포게닌 , 스미라게닌 및 에피스미라게닌의 항-세포사멸 효과
이전에 설명한 것처럼 랫트 도파민성 뉴런을 배양했다(Schinelli 등, Journal of Neurochemistry, 1988, 50, pp. 1900-1907). 5일째에, 배양조직을 세척했고, 시험 화합물(30 nM), 비히클(DMSO, 0.25 %) 또는 BDNF(1.85 nM)와 GDNF(0.17 nM)의 조합을 함유하는 새로운 배지에 24시간 동안 놔뒀다.
MPP+(2 μM, 24 h)에 랫트 1차 도파민작동성 뉴런의 노출은 대조군과 비교할 때 도파민작동성 뉴런의 수에 현저한 감소를 초래한다. 6일째에, MPP+ 2 μM)를 추가적인 48 시간 동안 시험 화합물, 비히클 또는 BDNF와 GDNF의 조합의 존재하에서 배양에 첨가했다. MPP+는 미토콘드리아 중의 복합체 I의 억제와 그 결과로 ATP의 고갈, 자유라디칼의 생성, 그리고 세포사멸의 유도를 통해 뉴런의 죽음을 유도한다. 배양기간 후에, PBS(4%) 중의 파라포름알데히드로 배양조직을 고정했다. 고정후에, 세포를 Triton X-100(0.5%)로 30분간 처리했다. 이후에, 항-티로신 수산화효소(TH)와 함께 뉴런을 37 ℃에서 2시간 동안 배양했다. PBS로 뉴런을 3회 세척한 후에, 염소 항 마우스/Cy3과 함께 37 ℃에서 2시간 동안 배양했다. 뉴런을 고정했고 형광 현미경으로 조사했다.
결과는 하기 표 27에서 보여진다.
사르사사포게닌 , 스미라게닌 , 에피사르사사포게닌 및 에피스미라게닌은 도파민작동성 뉴런의 MPP + 유도 손실을 감소시킨다
도파민작동성 뉴런
조건 뉴런의 생존륜 (대조군에 대한 %)
대조군 100.00±3.20
+ MPP+(2 μM) 55.31±3.15++++
+ MPP+ + 사르사사포게닌(30 nM) 88.73±4.39****
+ MPP+ + 스미라게닌(30 nM) 97.91±3.63****
+ MPP+ + 에피사르사사포게닌(30 nM) 95.01±4.52****
+ MPP+ + 에피스미라게닌(30 nM) 115.12±4.73****
+ MPP+ + BDNF(1.85 nM) & GDNF(0.17 nM) 121.94±6.51****
평균±표본오차평균; n=40 또는 80 영역, 배양조직당 웰, n=1 또는 2개의 배양조직이 사용되었다. 통계학적 분석은 ANOVA에 의해 수행되었고, 이어서 Dunnett's post - hoc 시험을 수행했으며; 대조군과 비교할 때 ++++=p<0.005, MPP+와 비교할 때 ****=p<0.005이다.
사르사사포게닌, 스미라게닌, 에피사르사사포게닌 및 에피스미라게닌은 도파민작동성 뉴런에서 MPP+ 유도 감소를 현저히 막는다. 또한, 영양생성인자, BDNF 및 GDNF의 조합에 노출시키는 것은 도파민작동성 뉴런에서 MPP+ 유도 감소를 현저히 막는다.
사르사사포게닌과 스미락게닌은 글루탐산 또는 MPP + 유도 손상 후에 신경을 회복시킨다.
대뇌피질 뉴런
신경퇴행성 질환에 대한 치료의 중요한 목적은 진행을 막는 것 뿐만 아니라 환자에게서 발생하는 뉴런의 손실을 원상태로 돌려놓는 것이다. 글루탐산(100 μM; 10 분)에 대한 랫트 1차 대뇌피질 뉴런의 노출 이후에, 사르사사포게닌 및 스미라게닌(30 nM)은 24시간 치료 후에 글루탐산 유도 손상을 현저하게 반전시킨다. 이 실시예는 PCT 특허 출원 번호 WO-A-03/082893의 실시예 2 내지 4에서 보고되는 작업을 발전시킨다.
앞서 구체적으로 설명한 것처럼 랫트 대뇌피질 뉴런을 제조했다. 13일째에, 합성 배지 중의 5% CO2/95% 공기 환경에서 37 ℃조건으로 10분간 배양조직을 글루탐산에 노출시켰다. 배양기간 이후에, 배양조직을 세척했고, 사르사사포게닌, 스미라게닌 또는 비히클을 함유하는 새로운 배지에서 보존시켰다. 글루탐산에 노출시킨 후, 세포를 추가적인 24시간 동안 배양한 이후에, 앞서 구체적으로 설명한 것처럼 뉴런의 손상에 대하여 평가했다.
결과는 하기 표 28에서 보여진다.
사르사사포게닌과 스미라게닌은 대뇌피질 뉴런에서 글루탐산 유도 손상을 반전시킨다
대뇌피질 뉴런
조건 뉴런의 생존률 (대조군에 대한 %)
대조군 100.00±4.03
+ 글루탐산(100 μM) 66.32±2.36++++
+ 글루탐산 + 사르사사포게닌(30 nM) 103.43±5.10****
+ 글루탐산 + 스미라게닌(30 nM) 111.06±3.40****
평균±표본오차평균; 배양조직당 n=4 웰, 2개의 배양조직이 사용되었으며, 통계학적 분석은 일방적 ANOVA를 사용하여 수행되었고, 이어서 Fisher's post - hoc 시험을 수행했으며; 대조군과 비교할 때 ++++=p<0.001, 글루탐산과 비교할 때 ****=p<0.001이다.
척추 운동 뉴런
앞서 구체적으로 설명한 것처럼 척추 운동 뉴런을 제조했다. 10일째에, 배지를 제거했고, 배양조직은 합성 배지 중의 5% CO2/95% 공기 환경에서 37 ℃조건으로 10분간 글루탐산에 노출시켰다. 글루탐산에 노출시킨 이후에, 배양조직을 DMEM으로 37 ℃에서 세척했고, 이후에 사르사사포게닌, 스미라게닌 또는 비히클을 함유하는 새로운 배양 배지에서 보존시켰다. 48시간 이후에, 운동 신경 손상의 정도를 앞서 구체적으로 설명한 것처럼 확인했다. 이 실시예는 PCT 특허 출원 번호 WO-A-03/082893의 실시예 8에서 보고되는 작업을 발전시킨다.
결과는 하기 표 29에서 보여진다.
사르사사포게닌과 스미라게닌은 척추 운동 뉴런에서 글루탐산 유도 손상을 반전시킨다
척추 운동 뉴런
조건 뉴런의 생존률 (대조군에 대한 %)
대조군 100.00±8.87
+ 글루탐산(4 μM) 75.52±2.58+
+ 글루탐산 + 사르사사포게닌(0.03 nM) 101.09±4.12****
+ 글루탐산 + 사르사사포게닌(3 nM) 108.10±3.56****
+ 글루탐산 + 사르사사포게닌(300 nM) 120.43±7.46****
+ 글루탐산 + 스미라게닌(0.03 nM) 90.98±2.46*
+ 글루탐산 + 스미라게닌(3 nM) 101.53±3.18****
+ 글루탐산 + 스미라게닌(300 nM) 106.61±4.24****
+ 글루탐산 + BDNF(3 nM) 106.60±6.14****
평균±표본오차평균; 배양조직당 n=6 웰, 2개의 배양조직 및 BDNF를 위한 n=1 배양조직이 사용되었으며, 통계학적 분석은 일방적 ANOVA를 사용하여 수행되었고, 이어서 Fisher's post - hoc 시험을 수행했다. 대조군과 비교할 때 +=p<0.005, 글루탐산과 비교할 때 ****=p<0.001, *=p<0.05이다.
글루탐산(4 μM; 10 분)에 랫트 1차 척추 운동 뉴런을 노출시키는 것은 글루탐산에 노출시킨지 48시간 후에 LDH 활성을 증가시켰으며, 이는 현저항 뉴런의 ㅅ손상을 나타낸다. 사르사사포게닌과 스미라게닌(0.03-300 nM)은 48시간 치료후에 글루탐산 유도 손상을 현저히 반전시켰다.
반면에, 사르사사포게닌과 스미라게닌의 가장 낮은 농도에 의해 제공되는 손상의 반전은 배양조직간에 달랐으며, 이는 0.03 nM이 이 모델에서 활성의 하한일 것이라는 것을 시사한다. 뇌유래신경영양인자(3 nM)를 양성 대조군으로 사용했고, 글루탐산에만 노출된 척추 운동 뉴론과 비교할 때 글루탐산 유도 LDH를 현저히 반전시켰다.
도파민작동성 뉴런
앞서 구체적으로 설명한 것처럼 랫트 1차 도파민작동성 뉴런을 제조했다. 5일째에, 합성 배지 중의 5% CO2/95% 공기 환경에서 37 ℃조건으로 배양 배지에서 24시간 동안 배양조직에 MPP+(2 μM)를 첨가했다. MPP+(2 μM, 24시간)에 랫트 1차 도파민작동성 뉴런을 노출시키는 것은 대조군과 비교할 때 도파민작동성 뉴런의 수에 현저한 감소를 초래한다. 6일째에, 배지를 제거했고, 비히클(DMSO, 0.25%), 사르사사포게닌, 스미라게닌 또는 BDNF와 GDNF의 조합을 함유하는 새로운 배지를 첨가했다. 48시간 이후에, 도파민작동성 손상의 정도를 앞서 구체적으로 설명한 것처럼 확인했다.
결과는 하기 표 30에서 보여진다.
사르사사포게닌과 스미라게닌은 도파민작동성 뉴런에서 MPP + 유도 손상을 반전시킨다
도파민작동성 뉴런
조건 뉴런의 생존률 (대조군에 대한 %)
대조군 100.00±5.79
+ MPP+(2 μM) 75.81±4.00+++
+ MPP+ + 사르사사포게닌(30 nM) 104.30±5.63****
+ MPP+ + 스미라게닌(30 nM) 113.44±4.62****
+ MPP+ + BDNF(1.85 nM) & GDNF(0.17 nM) 97.85±4.68***
평균±표본오차평균; n=40 영역 n=1 배양조직이 사용되었으며, 통계학적 분석은 일방적 ANOVA를 사용하여 수행되었고, 이어서 Fisher's post - hoc 시험을 수행했다. 대조군과 비교할 때 +++=p<0.005, MPP+와 비교할 때 ***=p<0.005; ****=p<0.001이다.
데이터는 사르사사포게닌과 스미라게닌(30 nM)에 노출시키는 것이 도파민작동성 뉴런에서 MPP+로 유도된 감소를 현저히 반전시켰다고 보여준다. 또한, 신경영양인자, BDNF(1.85 nM) 및 GDNF(0.17 nM)의 조합에 노출시키는 것은 도파민작동성 뉴런에서 MPP+로 유도된 감소를 현저히 반전시켰다.
이와 유사한 실험에서, 결과는 도 1에서 보여지며, 랫트 1차 도파민작동성 뉴런에서 MPP+(2 μM, 24 h) 유도 뉴런의 손상을 반전시키기 위한 다양한 농도의 스미라게닌의 효과를 조사했다. BDNF, GDNF 및 비히클의 농도는 상기 언급된 것과 같았다. 스미라게닌(0.3 fM 내지 30 nM), BDNF(1.85 nM) 및 GDNF(0.17 nM)의 조합 또는 비히클(DMSO, 0.25%)을 함유하는 배지에서 24시간 동안 도파민작동성 뉴런을 배양했다. 이후에, MPP+(2 μM) 또는 비히클을 배지에 첨가했고, 배양조직을 추가적인 48시간 동안 배양했다. 영역당 도파민작동성(TH-양성) 뉴런의 수를 명역조직화학 및 형광 현미경을 통해 정량화했고, 이후에 데이터가 연관될 수 있도록 이들 고유의 대조군에 대해 일반화했다. MPP+에 24시간 노출시킨 후에 스미라게닌(3 fM 내지 30 nM)으로 48시간 처리하는 것은 13.4 fM의 EC50과 함께 MPP+ 유도 뉴런의 손상을 현저하게 반전시켰다.
사르사사포게닌과 스미라게닌의 경구 투여는 신경손상을 가진 마우스 모델에서 뉴런의 기능의 회복을 향상시킨다.
진행성 운동 신경병(pmn) 마우스는 퇴행성 운동 뉴런 질병의 유전학적 모델이며, 이는 원위 축삭 퇴행 및 근위 축삭과 세포체의 상대적인 보존을 갖는 다잉-백(dying-back) 과정을 수반한다(Schmalbruch 등, Journal of Neuropathology and Experimental Neurology, 1991, 50, pp. 192-204). pmn / pmn 동형접합체는 운동 축삭의 caudio-cranial degeneration로 고통받고, 생후 몇 주 만에 죽으며, 이는 아마도 호흡근 신경제거 때문일 것이다(Schmalbruch 등, Journal of Neuropathology and Experimental Neurology, 1991, 50, pp. 192-204; Sendtner 등, Nature, 1992, 358, pp. 502-504). pmn 마우스가 임의의 특정 인간의 운동 뉴런 질병과 부합하는 정확한 모델로 고려될 수 없을지라도(Kennel 등, Neurobiology of Disease, 1996, 3, pp. 137-147), 상기 pmn 마우스는 신경퇴행성 질병에 대하여 새로운 약물의 가능성을 평가하기 위한 유용한 모델이다. 이 마우스 모델은 운동 뉴런 퇴화의 근본 원인 되는 병원성 메커니즘을 확인하기 위하여 이미 사용되어왔고(Sagot 등, Journal of Neuroscience, 1995, 15, pp. 7727- 7733), ALS, 진행성근위축증, 척수성 근위축, 진행성연수마비, 가성구마비 및 원발성측삭경화증와 같은 운동 뉴런 질병을 치료하기 위한 가능한 치료적 계획을 평가하기 위해 사용되어 왔다(Haase 등, Nature Medicine, 1997, 3, pp. 429-436 ; Sendtner 등, Nature, 1992, 358, pp. 502-504; Sagot 등, Journal of Neuroscience, 1995, 15, pp. 7727-7733; Sagot 등, Journal of Neuroscience, 1996, 16, pp. 2335-2341). 이 실시예는 PCT 특허 출원 번호 WO-A-03/082893의 실시예 11에서 보고되는 작업을 발전시키며, 참조로 본 명세서에 포함된다.
Neurofit(Illkirch, France)에서 부양되는 추가적인 발가락 장소(Xt)+/+pmn 유전자 변형 마우스(extra toe locus(Xt)+/+pmn double heterozygous mice)의 육종 군집으로부터 영향을 받은 동형접합체 +/+ pmn {"pmn mice") 마우스를 얻었다. 경구 위관영양법에 의해 pmn 마우스에 매일 투여했으며, 투여는 생후 10일 후에 질병의 최초 증상이 나타난 바로 직후에 투여를 시작했다. 오일 중의 현탁액으로서(10 ml/kg) 사르사사포게닌(0.03, 0.3 및 3 μg/kg/day)을 pmn 마우스에게 투여했다. 미국전기진단학회의 지침에 따라서 표준 Neuromatic 2000M 근전계 장치를 사용하여 근전도(EMG) 기록을 수행했다. pmn 마우스의 운동 수행을 평가하는 표준 행동방식 시험(그리드, 회전 및 매달림 시험)을 8일째부터 매주 수행했다.
운동 기능에 대한 사르사사포게닌의 효과를 비복근유발운동반응(CMAP, 기능성 운동 뉴런의 수의 간접적 측정)의 크기를 기록함으로써 평가했다.
결과는 도면 중의 도 2에서 보여진다.
pmn 대조군은 생후 12일째에 CMAP의 크기에 급속한 감소를 보였다. pmn 마마우스에게 매일 사르사사포게닌(0.3 μg/kg/day)을 투여하는 것은 운동 기능의 저하(p < 0.001)를 지연시켰다. 대조군 마우스의 비틀거리는 횟수는 생후 12일째부터 급속히 증가되었다. pmn 마우스에게 매일 사르사사포게닌(0.3 μg/kg/day)을 경구 투여하는 것은 pmn 대조군 마우스와 비교할 때(p = 0.02 MANOVA analysis) 회전 및 그리드 시험 수행에서 저하를 지연시켰다. 사르사사포게닌(0.3 μg/kg/day)을 매일 경구 투여하는 것은 pmn 대조군과 비교할 때 pmn 마우스의 생존률을 현저히 증가시켰다(대조군과 비교할 때 최대 62%, log rank, χ2 = 7.36, p = 0.006).
그와 대조적으로, 임상적 증상의 발병 후에, 사르사사포게닌을 가장 적은 시험용 투여량(0.03 μg/kg/day)으로 매일 경구 투여하는 것은 유전자변형 모델에서 운동 신경 퇴화의 진행을 지연시키지 않는다.
이러한 결과는 경구적으로 활성이며, 비펩타이드성 신경영양인자 유도물질인 사르사사포게닌이 이런 유전자변형 모델에서 운동 뉴런 퇴화의 진행을 지연할 수 있다는 것을 시사한다. pmn 마우스 모델에서 신경영양인자(섬모신경영양인자; CNTF; Sagot 등, Journal of Neuroscience, 1995, 15, pp. 7727-7733) 및 GDNF (Sagot 등, Journal of Neuroscience, 1996, 16, pp. 2335-2341)를 시험했다. 이런 연구들은 CNTF(CNTF-분비세포의 복강내 투여)가 생존시간을 40%로 증가시키고, 운동기능을 향상시켰다는 것을 보여주었지만, 반면에 GDNF는 운동 뉴런 생존률을 향상시켰지만 질병을 늦추지는 않는다는 것을 보여주었다(Sagot 등, Journal of Neuroscience, 1996, 16, pp. 2335-2341). 신경영양인자는 운동 뉴런 질병에 대한 가능한 치료법으로서 고려되어왔지만; 단백질로서 그들의 광범위한 임상적 용도는 매우 문제가 있다. 생후로부터 pmn 마우스에 경구적으로 투여되는 비-펩타이드성 뉴로트로핀 화합물 SR57746A(크살리프로덴)는 운동 신경퇴화의 진행을 지연시켰고, 마우스 운동 수행과 수명을 향상시켰다(~ 50%; Duong 등, British Journal of Pharmacology, 1998, 124, pp. 811-817). 나아가, 질병의 개시단계에서 경구적으로 투여되는 CGP 3466B(항-세포사멸제)는 질병의 진행을 지연시켰고, pmn 마우스 수명을 57%로 향상시켰으며(Sagot 등, British Journal of Pharmacology, 2000, 131, pp.721-728); 분자 BN 80933(뉴련의 산화질소 합성효소 및 과산화지방질의 억제물질)은 pmn 마우스 수명을 40%로 향상시켰다(Sagot 등, British Journal of Pharmacology, 2000, 131, pp.721-728).
중요하게, 질병의 증상이 나타난 이후에 사르사사포게닌을 투여하는 경우에, 사르사사포게닌은 질병의 진행을 지연시켰고, 이 모델에 대하여 시험관 내에서 pmn 마우스 수명을 최대 62%까지 향상시켰다. 스미라게닌으로도 유사한 결과를 얻었다.
사르사사포게닌과 스미라게닌의 경구 투여는 신경손상을 가진 추가적인 마우스 모델(신경 압박손상 모델)에서 뉴런의 기능의 회복을 향상시킨다.
좌골 신경 압박 모델은 운동 뉴런 질병과 외상후 신경의 부상에 대한 가역적 모델로 바람직하게 특정된다(McMahon 및 Priestley, Current Opinion in Neurobiology, 1995, 5, pp. 616-624). 신경 손상은 이런 마우스의 우측 좌골 신경의 세 갈래에 5 mm 근접하여 헤모스탓 겸자(haemostatic forceps)를 사용하여 2번 기계적 압력을 가함으로써 발생된다. 이는 2주간의 신경 퇴화를 초래하며, 이어서 최대 4주간까지 계속되는 신경의 국부염증을 초래한다. 뉴런의 기능의 손실은 기계적 외상 이후에 4 내지 5주간 점진적으로 회복된다.
좌골 신경 손상 이후에, 사르사사포게닌(3 mg/kg/day, 오일 중의 경구 위관영양법)과 스미라게닌(0.3 및 3 mg/kg/day, 오일 중의 경구 위관영양법)을 6주간 C57 마우스에매일 경구 투여하는 것은 신경기능의 회복을 현저히 향상시키며, 이는 비복근 근육에서 CMAP 파라메터(각각의 크기, 잠복기 및 지속시간, 활성 운동 신경섬유의 간접적 표지, 운동 신경 전도 속도 및 신경 섬유의 기능성)의 측정 및 좌골 신경의 형태학적 분석에 의해 알 수 있다. 4-메틸카테콜(복강 내로 10 μg/kg/day)을 양성 대조군으로서 사용했다(Kaechi 등,Journal of Phamacology and Experimental Therapeutics, 1995, 272, pp. 1300-1304).
결과는 도면 중의 도 3에서 보여진다.
C57bl/6 RJ 마우스를 케타민 클로르히드레이트(ketamine chlorhydrate)(복강 내로 60 mg/kg)로 마취시켰다. 좌골 신경을 세로로 외과적으로 노출시켰고, 좌골 신경의 세 갈래에 5 mm 근접해서 압박했다. 신경을 헤모스탓 겸자로 압박간에 90도로 회전시키며 30초 동안 2번 압박했다. 이는 2주동안 신경 퇴화를 초래하며, 이어서 최대 4주간 지속되는 신경의 국부 염증을 초래한다. 뉴런의 기능의 손실은 기계적 외상 이후에 4 내지 5주간 점진적으로 회복된다. 근정도 기록을 상기 설명된 것과 같이 평가했다.
결과는 하기 표 31에서 보여진다.
사르사사포게닌과 스미라게닌은
신경손상을 가진 마우스 모델에서 퇴화된 신경섬유의 수를 감소시킨다
군 퇴화된 신경섬유(대조군에 대한 %)
대조군 0.00±6.71
신경 압박 109.10±2.65++++
사르사사포게닌(3 mg/kg/day) 33.50±12.60****
스미라게닌(0.3 mg/kg/day) 16.70±4.23****
스미라게닌(3 mg/kg/day) -8.10±6.03****
4-메틸카테콜(10 μg/kg/day) -7.48±1.62****
평균±표본오차평균; 퇴화된 신경섬유에 대한 통계학적 분석은 일방적 ANOVA및 Dunnett's post - hoc 시험를 사용하여 수행되었고, n=3-4이다. 대조군과 비교할 때 ++++=p<0.001, 신경 압박과 비교할 때 ****=p<0.001이다.
사르사사포게닌과 스미라게닌은 좌골신경 압박 모델에서 경구적으로 활성이고, 신경기능의 회복을 향상시킬 수 있으며, 신경 재생을 촉진한다.
사르사사포게닌과 스미라게닌은 불안감을 감소시키고, 나이 든 동물에서 인지능력과 BDNF 의 저하를 복원시킨다.
나이 든 Sprague Dawley (SD) 랫트 (생후 20개월)에게 3달 동안 사르사사포게닌 또는 스미라게닌(18 mg/kg/day)을 경구적으로 투여했다. 어린 SD 랫트(생후 4개월)를 건강한 양성 대조군으로 사용했고, 나이 든 SD 랫트(생후 20개월)을 신경퇴화성 대조군으로 사용했다. Y자형 미로를 학습과 기억을 평가하기 위해 사용했고, 동물에게 고통을 유발하는 시험의 자연광에서 불안함을 갖는 모델 또한 고려했다. Y자형 미로의 각각의 줄기(arm)의 바닥 표면에는 조정가능한 전압 전류를 필요시에 가하기 위해 구리선(2 mm x 140 mm)을 배치했다. 각각의 줄기는 450 mm 길이로 15 W 램프가 말단에 있다. 2달의 치료 이후에, 각각의 랫트를 하루에 한번 연속 7일간 훈련시켰다. 각각의 교육 과정에서, fot를 Y자형 미로의 한족 줄기에 놓고, 2분 후에 전류를 시계반대방향의 줄기로 구리선에 가해주었고, 전류가 가해지지 않은 영역을 나타내기 위해 시계방향 줄기의 조명을 밝혔다. 만일 랫트가 조명이 밝혀진 줄지로 이동하며 맞았다는 반응을 기록했으며, 그렇지 않으면 틀렸다는 반응을 기록했다. 이런 자극-반응 시험을 각 시험간 5초의 휴식기를 가지면서 매일 20번 반복했다. 옳은 반응의 수를 총 반응 시간으로 나눈 몫을 계산했고, 이를 학습능력의 지표로 사용했고, 큰 몫은 더 좋은 학습 능력을 나타낸다. 학습 시험을 시작한지 1달 후에(치료 후 3달) Y자형 미로 시험을 다시 수행했고, 몫을 기억 능력에 대한 지표로서 사용했다. 치료의 말미에, 랫트를 죽였고, ELISA를 사용하여 BDNF를 정량하기 위해 뇌를 제거했다(BDNF의 데이터는 상기 실시예 3에서 보여짐).
Y자형 미로 실험의 결과는 하기 표 32에서 보여진다.
사르사사포게닌과 스미라게닌은
나이 든 랫트에서 인지 능력( 학슥 및 기억)과 BDNF 의 저하를 복원시킨다
군 학습 능력(올바른 반응/총 시간) 기억 능력(올바른 반응/총 시간)
어린 군 5.97±0.35 5.27±0.35
나이 든 군 2.39±0.26++++ 2.16±0.30++++
나이 든 군 + 사르사사포게닌(18 mg/kg/day) 5.02±0.50**** 4.66±0.34****
나이 든 군 + 스미라게닌(18 mg/kg/day) 4.81±0.32**** 4.58±0.26****
평균±표본오차평균; n=9-10, 통계학적 분석은 짝지은 일방적 Student's t-test를 사용하여 수행되며, 어린 랫트와 비교할 때 ++++=p<0.001, 나이 든 랫트와 비교할 때 ****=p<0.001이다.
최대 3개월 동안 나이 든 랫트에게 경구적으로 투여되는 사르사사포게닌과 스미라게닌(18 mg/kg/day)은 불안감을 감소시키고, 인지 능력(학습 및 기억 능력)을 어린 랫트에서 관찰되는 인지능력에 가까이 회복시킨다.
사르사사포게닌과 스미라게닌의 경구적 투여는 신체 조직 전반에 전달된다.
사르사사포게닌과 스미라게닌은 경구적으로 활성이라고 증명되어 왔고, 이들의 혈청, 뇌, 척수(및 다른 조직) 농도는 설치류와 비설치류에 경구 투여 후에 측정되었다.
결과는 하기 표 33에서 보여진다.
사르사사포게닌과 스미라게닌은 단일 경구 투여 후에 혈장, 뇌 및 척수로 분배된다
화합물 종 성 투여량( mg / kg ) 시간(h) 화합물의 농도( ng 당량 /g 조직)
혈장 뇌 척수
사르사포게닌 랫트 M 30 1 1690 1140 1090
사르사포게닌 M 30 4 2920 4970 4350
사르사포게닌 M 30 8 2970 6920 6060
사르사포게닌 M 30 24 967 3800 4720
사르사포게닌 M 30 168 149 194 747
사르사포게닌 F 30 1 1530 1210 3020
사르사포게닌 F 30 4 2050 3860 3830
사르사포게닌 F 30 8 1760 5980 5080
사르사포게닌 F 30 24 629 2800 3290
사르사포게닌 F 30 168 90 134 590
사르사포게닌 개 M 25 4 0.641 1.37 1.13
사르사포게닌 M 25 24 0.196 2.33 1.82
사르사포게닌 M 25 168 0.309 0.605 1.49
사르사포게닌 F 25 4 0.184 0.128 0.515
사르사포게닌 F 25 24 1.79 8.64 5.79
사르사포게닌 F 25 168 0.115 0.535 1.42
스마라게닌 랫트 M 18 1 2045 769 958
스미라게닌 M 18 4 3842 3372 3286
스미라게닌 M 18 8 3896 4457 4520
스미라게닌 M 18 24 857 1417 1957
스미라게닌 M 18 168 122 122 256
스미라게닌 F 18 1 1626 704 608
스미라게닌 F 18 4 1824 2330 2049
스미라게닌 F 18 8 1658 2940 2823
스미라게닌 F 18 24 394 954 1284
스미라게닌 F 18 168 46 52 243
스미라게닌 개 M 10 2 3878 3670 1805
스미라게닌 M 10 24 1508 5813 3647
스미라게닌 M 10 168 1129 1727 3165
경구적으로 투여되는 사르사사포게닌과 스미라게닌은 신체의 신경 부위 및 혈장으로 이동한다.
사르사사포게닌과 스미라게닌의 경구 투여는 유효 투여량에서 비독성을 가진다.
사르사사포게닌과 스미라게닌은 시험관 내에서 나노몰랄 농도에서 활성을 가지는데 반하여, 낮은 농도는 뉴론에서 비활성이거나 다양한 활성을 보인다. 고농도의 사르사사포게닌과 스미라게닌은 시험관 내에서 고농도의 신경영양인자에서 관찰되는 독성을 보이지 않는다.
높은 투여량의 경구 투여 후에 장기의 독성 연구는 신경영양인자가 높은 수준에 도달하면 보일 수 있는 독성 또는 부작용의 어떤 신호도 보여주지 않는 사르사사포게닌(랫트에서 최대 26주, 비설치류에서 최대 39주)과 스미라게닌(마우스와 비설치류에서 최대 52주)으로 수행했다.
스미라게닌은 MPTP 손상 마카크(macaques)에서 파키슨병을 감소시키고, 피각에서 GDNF 및 BDNF 농도를 조절한다.
19마리의 암컷 사이노몰거스(cynomolgus) 원숭이(Macaca fascicularis, 3.0 - 4.5 kg, 생후 4-6년)를 실험 환경 및 3달간 처치에 순응시켰고, 기준 행동방식을 모든 동물에 대해 평가했다. 14마리의 암컷 마카크는 뚜렷하고, 안정한 파키슨병의 증상이 발생할 때까지 MPTP(피하에 0.2 mg/kg/day)를 받았다. 동물(n=7/군)을 2개의 군으로 무작위로 배치했고; 스밀라게닌(경구적으로 20 mg/kg/day) 또는 비히클 대조군(Tween 80, 0.2% v/v을 함유하는 0.5% w/v HPMC). MPTP를 받지 않은 5마리의 마카크에게 비히클을 투여했고, 대조군으로 사용했다.
MPTP 투여 후에 그리고 스미라게닌 또는 비히클을 투여한지 18주 후에 파키슨병 장애의 평가를 했다. 치료를 못보는 신경학자에 의해 DVD-기록의 post hoc 분석을 통해서 파킨슨병 장애를 평가했다. 연구의 말미에, 뇌를 제거했고, 피각에서 결합하지 않은 GDNF 및 BDNF의 수준을 Multiplex ELISA/Aushon assay를 사용하여 측정했다. 따라서, 본 실험에서 사용된 MPTP 처리된 마카크는 파키슨병 및 유사한 운동 감각 신경퇴행성 질환에 대한 적합한 모델을 제공한다.
결과는 하기 표 34에서 보여진다.
스미라게닌은 MPTP 손상 마카크 원숭이의 행동방식을 개선하고 GDNF 와 BDNF 의 피각 수준을 조절한다
군 MPTP 투여후, 중간 정도의 파키슨병의 장애 18주째에 중간 정도의 파킨슨병의 장애 피각에서 결합하지 않은 GDNF 수준의 평균±표본오차평균(pg/mg 단백질) 피각에서 결합하지 않은 BDNF 수준의 평균±표본오차평균(pg/mg 단백질)
대조군 N/A N/A 9.52±1.98 257.58±50.69
마카크 원숭이
MPTP 손상 마카크 원숭이 50.33 41.67 15.33±1.86 388.73±27.51
MPTP + 스미라게닌 마카크 원숭이 47.17 27.00### 5.09±1.35** 208.27±36.58**
MPTP 투여 후에, 파키슨병의 장애와 비교할 때 ###=p<0.001이다. 통계학적 분석은 Bonferroni 다중 비교 post hoc 시험과 함께 매치 되지 않는 2-방식-ANOVA(non-matched 2-way-ANOVA)를 사용하여 수행되었다. 통계학적 분석은 일방적 ANOVA를 사용하여 수행되었고, 이어서 Turkey's post - hoc 다중 비교 시험을 수행했다.
MPTP 손상 마카크에게 18주 동안 경구적으로 투여된 스미라게닌은 MPTP 손상 마카크에서 파킨슨병의 수준을 현저히 감소시켰다. 또한, 스미라게닌은, 대조군(비손상된 마카크)에서 관찰되는 것과 크게 다르지 않은 수준의 비히클을 수용한 마카크와 비교할 때 MPTP 손상 마카크의 피각에서 GDNF 및 BDNF의 수준을 현저히 감소시켰다.
이런 데이터는 GDNF 및 BDNF 발현에 대한 스미라게닌의 효과가 장기 투여하에서 거의 정상 상태로 수준을 회복시킴으로써 정상화되는 효과, 즉 GDNF와 BDNF에 대한 과다노출에 대하여 동물을 보호하는 장기 순환 효과를 나타낸다.
논의
상기 실시예는 시험관 내에서 또는 탈체 데이터에 의해 증명되는 것처럼, A/B-cis 스피로스탄 스테로이드성 사포게닌, 사르사사포게닌 및 스미라게닌이 신경영양인자 유도 물질이라는 것을 증명하며; 경구 투여후에 그들은 시험관 내에서 그리고 생체조건에서 신경보호성 및 신경회복성을 가진다. 그들은 유도 물질로서 기능하기 위해 신경영양인자의 존재를 필요로 하지않고, 따라서 NF 개선제가 아닌 참된 NF 유도 물질인 것 같다.
신경영양인자(예, BDNF 및 GDNF)의 투여는 우울증, 정신 분열증, 파킨슨병 그리고 다른 질환에서 질병 개선을 위한 전략이었고, 이런 전략은 매우 과학적인 근거를 가진다. 반면에, 상기 전략은 과학적 근거를 임상적으로 바꾸는데 어려움있다고 판명됐다. 이는 신경영양인자의 단백질 본성, 그리고 수술, 바이러스성 백터 및 세포기반 유전자/단백질 전달 접근법에 내재하는 어려움으로부터 기인한다. 뉴런의 복잡한 영양의 요구는 단일 인자에 의해 달성되는 효능을 제한하고, 임상적 혜택을 달성하기 위해 요구되는 신경영양인자의 양과 필요한 치료의 지속시간 또한 여전히 알려지지 않았다.
경구적으로 활성인 신경영양인자 사르사사포게닌과 스미라게닌, 그리고 본 출원에서 정의된 관련 분자들은 수많은 이러한 어려움을 극복한다. 우리는 사르사사포게닌과 스미라게닌이 시험관 내에서 피코- 및 나노몰랄 농도에서 활성을 가진다는 것을 본 명세서에서 보여주었다. 그들은 시험관 내에서 고농도의 신경영양인자에서 관찰되는 독성을 보이지 않았다.
본 명세서와 관련된 참조 문헌에서 이미 공개된 증거와 함께 본 출원에서의 증거는, 제한되고 조절가능한 부작용을 갖는 신경영양인자, 예를 들어 BDNF 및/또는 GDNF의 자가조절 항상성을 유도하는 것이 A/B-cis 푸로스탄, 푸로스텐, 스피로스탄 및 스피로스텐 스테로이드성 사포게닌, 및 이들의 에스테르, 에테르 케톤 및 글리코실화 형태로부터 선택되는 적어도 하나의 물질의 유효량을 피험자에게 투여함으로써 달성될 것이고, 이는 신경, 정신, 염증, 알레르기, 면역, 종양 및 관련 질환과 같은 신경영양인자 매개된 장애 및 질환을 치료하고 예방하는 치료적 비치료적 방법의 전반에 신규하고 예상치 못한 혜택을 제공할 것이라고 보여준다.
앞서 말한 내용은 본 발명을 제한하지 않고 광범위하게 설명한다. 통상의 기술자게에 용이하게 인식되는 변형 및 변경은 첨부된 청구항에 정의된 것으로서 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 생각된다.
본 발명은 인간과 비인간 포유류의 신경영양인자 매개 장애 및 기능의 치료적 그리고 비치료적 치료법의 최초 자가조절되는 방법을 가능하게 하였으며, 이런 치료에서 생리학적 반응은 투여량에 의존적이지 않고 활성제 투여량의 비교적 폭넓은 범위 내에서 자가조절되는 반면에, 좋지않은 부작용 또는 독성이 없는 예측 가능한 이로운 생리학적 효과에서 보면 비교적 좁은 "치료적 기회"를 제공한다. 따라서, 치료는 비교적 광범위한 제한 내에서 과잉투여에 내성이 있다. 이런 특성은 자가투여 또는 임상적 환경 밖의 다른 상황에서 치료가 적합하게 하며, 지금까지 불가능했던 신경의 치료 및 다른 치료의 특징을 갖게 한다. 물질이 소분자인 사실과 펩타이드(예, 단백질)가 아닌 사실은, 펩타이드 활성제를 뇌 또는 중추신경계에 투여하기 위한 정교한 전달 장치가 사용 불가능할 수 있는 임상적 환경 밖에서 본 발명의 잠재적인 활용성을 더 지지한다.
신경, 정신, 염증, 알레르기, 면역 또는 종양 장애로 고통받고 있는 수많은 환자가 비교적 늙었기 때문에, 또는 빈약한 일반적인 건강을 갖기 때문에, 그들은 이런 범주에서 일부 다른 장애에 종종 민감할 수 있다. 다른 장애 또는 질환이 유발될 것이어서 어떤 확신성을 가지고 종종 예측할 수 없다. 본 발명 이전에, 치료가 환자에게서 다른 장애 또는 질환을 촉진할 실질적인 위험성을 매우 자주 수반한 것처럼, 이러한 다른 장애 또는 질환, 즉, 치료에 대한 개체의 민감성은 최초 질환의 치료에 사용이 금지되게 하였다. 그러므로, 이전보다 쉽고 간단한 방법으로 장애와 질환을 치료하는 본 발명의 활용, 및 이 방법으로 환자의 광범위한 군에 사용할 수 있는 본 발명의 활용은 의학의 실질적인 진보 및 인간과 동물 건강의 중요한 영역에서 실행을 보여준다.

Claims (22)

  1. 비독소 수단 중의 피험자의 자생 신경영양인자를 생체 항상성 제어하에서 조절함으로써 피험자 중의 BDNF 및/또는 GDNF와 같은 신경영양인자(NFs)가 자가 조절되는 항상성을 갖도록 유도하는 방법에 있어서,
    상기 방법은 A/B-cis 푸로스탄, 프로스텐, 스피로스탄 및 스피로스텐 스테로이드성 사포게닌, 및 에스테르, 에테르, 케톤 및 이의 글리코실화 형태로부터 선택되는 하나 이상의 물질의 유효량을 피험자에게 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 신경영양인자 자가 조절 항상성 유도 방법.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 신경영양인자가 자가 조절되는 항상성의 유도는 신경영양인자, 예를 들어 NGF의 과유도, 과자극 또는 과증대와 관련되며, 수용체 촉진작용과 관련되고, 효소 결합 작용과 관련된, 제한되고 조절가능한 부작용과 함께 일어나는 것을 특징으로 하는 신경영양인자 자가 조절 항상성 유도 방법.
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 방법은 어려움에 처한 인간 또는 비-인간 포유류에서 신경장애, 정신장애, 염증 또는 알레르기 장애, 면역장애 및 종양장애으로부터 선택되는 신경영양인자 매개 장애의 치료 또는 예방을 위한 방법인데,
    (a) 상기 신경장애는 치매, 연령관련인지장애, 알츠하이머병, 알츠하이머 유형의 노인성 치매(SDAT), 루이체 치매(Lewy body dementia), 혈관성 치매, 파킨슨병, 뇌염후 파킨슨증, 뇌염후와 다른 그리고 파킨슨병과 다른원인을 갖는 파킨슨병, 안면견갑상완근이영양증(FSH), 뒤시엔느 근위축증(Duchenne muscular dystrophy), 베커평 근위축증(Becker muscular dystrophy) 및 브레이스형 근위축증(Brace's muscular dystrophy)을 포함하는 근위축증, 푸크스 이영양증, 근긴장성이영양증, 각막 이영양증, 반사성 교감신경 이영양증(RSDSA), 신경혈관영양장애, 중증 근무력증, 램버트 이튼 증후군, 헌팅턴병, 운동 신경 질병(루게릭병(ALS), 유아성 척수 근위축증(infantile spinal amyotrophy), 다발성 경화증, 체위성 저혈압증, 통증, 신경통, 정신적 외상 예를 들어, 타격 이후 또는 사고 이후(예를 들어, 정신적 외상에 의한 머리 또는 뇌 부상 또는 척수 부상)에 신경퇴행, 바텐병, 코카인 증후군, 다운 증후군, 피질 기저핵 변성, 다계통위축, 뇌위축증, 올리브교소뇌 위축증, 치상핵적핵 위축증, 담창구시상하부 위축증, 척추 근위축증, 시신경염, 경화성전뇌염(SSPE), 주의력 결핍 장애, 후바이러스성뇌염, 후소아마비증후군, 파 증후군(Fahr's syndrome), 주버트 증후군, 길랭-바레 증후군, 활택뇌증, 모야모야병, 신경세포 이주장애, 신경장애 자폐증후군, 폴리글루타민 질병, 니만-피크병, 진행성다병소성백질뇌증, 가성뇌종양, 레프섬병, 젤웨거증후군, 핵상마비, 프리드라이히운동실조증, 척수소뇌성 운동실조증 제2형, 레트증후군, 샤이-드래거증후군, 결절성 경화증, 피크병, 만성 피로증후군을 포함함), 유전성 신경장애, 당뇨병성 말초신경병 및 유사분열 신경병증을 포함하는 신경병증, 크로이츠펠트-야콥병(CJD), 인간 광우병, 신종 크로이츠펠트 야콥병, 광우병(BSE), GSS, FFI, 쿠루병 및 알퍼스 증후군을 포함하는 프리온계 신경퇴화, 요셉병(Joseph's disease), 급성산재성뇌척수염, 지주막염, 중추신경계의 혈관성 병소, 수족 뉴론 기능의 손실, 샤리코-마리-듀스병(Charcot-Marie-Tooth disease), 크라베병, 백질이영양증, 심부전 민감성, 천식, 간질, 청각신경퇴화, 시력감퇴, 망막색소병증, 및 녹내장-유발 시신경 퇴화로부터 선택되는 신경 장애이며;
    (b) 정신장애는 불안장애 (예를 들어, 급성 스트레스 장애, 공황장애, 광장공포증, 사회공포증, 특정공포증, 강박장애, 외상후 스트레스 장애, 신체 이형 질환 및 범불안장애), 성교 불안장애 (예를 들어, 질경련, 발기 부전증, 남성 절정감 장애 및 여성 오르가즘 장애), 아동기 장애 (예를 들어, 주의력결핍 과다행장애(ADHD), 아스퍼거장애, 자폐장애, 품행장애, 반항장애, 분리불안장애 및 토레트병), 섭식장애 (예를 들어, 신경성 식욕부진증 및 폭식증), 기분 장애 (예를 들어, 우울증, 주요우울장애, 조울증 (조울병), 계절성 우울증(SAD), 순환성 기분장애 및 기분부전장애), 수면장애, 인지 정신장애 (예를 들어, 섬망, 기억상실장애), 인격장애 (예를 들어, 편집성 인격장애, 분열성 인격장애, 분열형 인격장애, 반사회적 인격장애, 경계선 인격장애, 연기성 인격장애, 자기애 인격장애, 회피성 인격장애, 의존성 성격장애 및 강박성 인격장애), 정신분열장애 (예를 들어, 정신분열증, 망상장애, 단기 정신병적 장애, 정신분열형장애, 분열정동장애 및 공유 정신병적 장애), 및 물질 관련 장애 (예를 들어, 알콜 의존증, 암페타민 의존증, 대마초 의존증, 코카인 의존증, 환각제 의존증, 흡입성 의존증, 니코틴 의존증, 오피오이드 의존증, 펜시클리딘 의존증 및 진정제 의존증)로부터 선택되는 정신 장애이며;
    (c) 염증 또는 알레르기 장애는 기침, 소양증, 음식과민증, 건선, 급성후두기관염, 과민성 대장 증후군, 이명, 메니에르 증후군, 스트레스성 위궤양 또는 아세틸살리실산성 위궤양, 알레르기성 비염, 알레르기성 피부염, 결막염, 염증, 염증성 장 질환, 회장염, 췌장염, 담낭염, 비알레르기성 비염, 역류성식도염, 골관절염, 류마티스 관절염, 고초열, 집진드기에 대한 알레르기, 애완동물에 대한 알레르기, 헌팅턴병, 급성 염증성 통증, 내장통, 치통 및 두통, 염증성 통각과민, 촉각계 통각과민, 알레르기성 피부 반응, 알레르기성 눈 반응, 천식, 죽상동맥경화증, 관절염, 만성 궤양 (예를 들어. 류마티스 관절염과 관련된 만성 배술리틱 궤양(chronic vasulitic ulcers)), 정상적인 호흡을 유지시키는 것, 인후염과 기침을 진정시키는 것, 정상적인 소화를 유지하도록 돕는 것, 배탈을 편안하게 하는 것, 충혈 완화제로서 감기와 독감으로부터 회복을 돕는 것, 두통을 진정시키는 것, 근육통을 완화시키는 것, 가벼운 고통과 통증을 편안하게 하는 것, 치통의 경감을 제공하는 것, 구강 또는 위 궤양의 경감을 제공하는 것, 및 건강한 관절을 유지하는 것으로부터 선택되는 염증 또는 알레르기 장애이며;
    (d) 면역장애는 AIDS와 같은 면역결핍 질환, 면역 과다활동 질환, 및 손상된 면역 특이성을 갖는 질환, 예를 들어 전신 홍반성 루프스(SLE)와 같은 자가면역 질병면역장애로부터 선택되는 면역장애이며; 및
    (e) 종양장애는 유방암, 감상선암, 대장암, 폐암, 난소암, 피부암, 근육암, 췌장암, 전립선암, 신장암, 생식기암, 혈액암, 면역계암 (예를 들어, 비장, 흉선 및 골수), 뇌암, 말초신경계암 및 피부(예를 들어, 흑색종 및 카포시육종) 로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 신경영양인자 자가 조절 항상성 유도 방법.
  4. 제 1 항에 있어서,
    상기 방법은, 신경, 뉴런의 기능 또는 뉴런의 회로망을 회복시키거나 재생시키기 위한 방법, 신경에 혈류를 재생시키거나 정상화하기 위한 방법, 트라우마 이후에 신경의 복원, 조직이식편, 수술 이후에 신경의 복원과 같은 손상된 조직의 재성장 또는 치유하는 방법, 뇌졸증, TIA 또는 다른 국소빈혈로부터 회복을 돕기 위한 방법, 상처, 뼈 및 근육의 치유를 돕는 방법, 신경병질 질환 또는 신경의 비정상, 또는 이식된 세포의 생존률을 증가시키는 태아, 줄기 또는 다른 세포 치료를 정상화하기 위한 방법, 생존한 세포의 효율을 개선하기 위한 방법, 또는 이의 조합을 함께 사용하는 것을 특징으로 하는 신경영양인자 자가 조절 항상성 유도 방법.
  5. 제 1 항에 있어서,
    상기 방법은 비정상적 행동 변화 또는 성격적 특성을 치료하거나 예방하기 위한 방법과 함께 사용되는 것을 특징으로 하는 신경영양인자 자가 조절 항상성 유도 방법.
  6. 제 1 항에 있어서,
    상기 방법은 상처 치유의 도움과 함께 사용되는 것을 특징으로 하는 신경영양인자 자가 조절 항상성 유도 방법.
  7. 제 1 항에 있어서,
    상기 방법은 피부, 뼈, 눈, 근육 및 다른 조직 건강을 개선하기 위한 비-치료적 방법과 함께 사용되는데, 상기 비-치료적 방법은 노화, 주름 또는 태양, 바람, 비, 추위 또는 다른 손상을 주는 매질에 대한 노출의 영향으로부터 피부의 회복을 촉진하거나, 운동, 힘든 작업 또는 체력소모로부터 근육과 조직을 회복시켜서 인내심을 향상시키고 피로감을 감소시키는 단계를 포함하는 건강 및 웰빙(well-being)의 다른 측면을 제공하기 위해 사용하는 것을 특징으로 하는 신경영양인자 자가 조절 항상성 유도 방법.
  8. 제 1 항에 있어서,
    상기 방법은, 모집단의 정상 범위 내에 있어서 장애가 진단될 수 없는 신경 질환과 정신 질환을 치료하고 예방하는 비-치료적 방법과 함께 사용되는 것을 특징으로 하는 신경영양인자 자가 조절 항상성 유도 방법.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은 선천적으로 BDNF 또는 GDNF를 과도발현(overexpress)하거나, 신경영양인자를 모방하거나 자극하는 약물의 정신장애의 부작용에 민감하거나, 수용체에 적대적인 또는 효소-상호작용하는 약물의 수용체- 또는 효소-매개된 부작용에 민감한 인간 또는 동물에 사용되는 것을 특징으로 하는 신경영양인자 자가 조절 항상성 유도 방법.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 활성제는 외인성의 신경영양인자의 투여 없이 사용되는 것을 특징으로 하는 신경영양인자 자가 조절 항상성 유도 방법.
  11. 제 1항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은 피험자에 대한 투여 계획의 임상적 통제가 없는 상황에서 사용되는 것을 특징으로 하는 신경영양인자 자가 조절 항상성 유도 방법.
  12. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 활성제는 사르사사포게닌, 스미라게닌, 에피사르사사포게닌, 에피스미라게닌, 티모사포닌 BII, 메타게닌, 사모게닌, 디오티게닌, 이소디오티게닌, 텍소게닌, 요노게닌, 멕소게닌 및 마르코게닌, 그리고 이들의 상응하는 에스테르, 에테르, 케톤 및 사포닌(글리코실화) 유도체로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 신경영양인자 자가 조절 항상성 유도 방법.
  13. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 활성제는 사르사사포게닌과 스미라게닌 그리고 이에 상응하는 에스테르, 에테르, 케톤 및 사포닌(글리코실화) 유도체로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 신경영양인자 자가 조절 항상성 유도 방법.
  14. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 활성제는 물질대사 보조제, 케톤체 수준을 증가시키는 화합물(케톤체 생성 화합물), 트리카복실산(TCA) 순환 중간체, 생체조건안에서 TCA 중간체, 에너지를 향상시키는 화합물로 전환 가능한 화합물, 및 이의 임의의 혼합물로부터 선택되는 하나 이상의 공동제(co-agent)와 함께 사용되는 것을 특징으로 하는 신경영양인자 자가 조절 항상성 유도 방법.
  15. 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 활성제는 상기 활성제 및 임의의 적합한 부가 화합물을 포함하는 조성물로 투여되는데, 상기 부가 화합물은 예를 들어, 약학 조성물(약제), 식품, 식품 보충제 또는 음료(예, 탄산 음료), 또는 화장품, 눈 또는 피부(예, 피부과용) 조성물과 같은 국부 조성물인 것을 특징으로 하는 신경영양인자 자가 조절 항상성 유도 방법.
  16. 제 13 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 활성제는 하나 이상의 가용화제 및/또는 서스펜션화제 및/또는 분산제를 갖는 조성물로 존재하여, 상기 활성제가 용액 또는 현탁액 또는 분산액에서 조성물(예를 들어, 중간사슬지방(MCTs) 또는 중간사슬지방산(MCFAs))로 유지되도록 하는 것을 특징으로 하는 신경영양인자 자가 조절 항상성 유도 방법.
  17. A/B-cis 푸로스탄, 푸토스텐, 스피로스탄 및 스피로스텐 스테로이드성 사포게닌, 및 에스터, 에터, 케톤과 이의 글리코실화 형태로부터 선택되는 하나 이상의 물질을 피험자에게 유효량 투여함으로써, 생체 항상성 제어하에서 비독소 수단 중의 피험자의 자생 신경영양인자를 조절하여, 피험자의 신경영양인자가 자가조절되는 항상성을 유도하기 위한 방법에 사용하기 위한 물질.
  18. 제 17 항에 있어서,
    제 2 항 내지 제 16 항 중 어느 하나로 정의되는 방법으로 사용하기 위한 물질.
  19. A/B-cis 푸로스탄, 푸토스텐, 스피로스탄 및 스피로스텐 스테로이드성 사포게닌, 및 에스터, 에터, 케톤과 이의 글리코실화 형태로부터 선택되는 하나 이상의 물질을 포함하는 조성물을 유효량을 피험자에게 투여함으로써, 생체 항상성 제어하에서 비독소 수단 중의 피험자의 자생 신경영양인자를 조절하여, 피험자의 신경영양인자가 자가조절되는 항상성을 유도하기 위한 방법에 사용하기 위한 조성물.
  20. 제 15 항에 있어서,
    제 2 항 내지 제 16 항 중 어느 하나로 정의되는 방법으로 사용하기 위한 조성물.
  21. 비독소 수단 중의 피험자의 자생 신경영양인자를 생체 항상성 제어하에서 조절함으로써, 피험자의 신경영양인자(NFs)가 자가 조절되는 항상성을 갖도록 유도하기 위한 약제의 제조에, A/B-cis 푸로스탄, 프로스텐, 스피로스탄 및 스피로스텐 스테로이드성 사포게닌, 및 에스테르, 에테르, 케톤 및 이의 글리코실화 형태로부터 선택되는 하나 이상의 물질의 사용.
  22. 제 21 항에 있어서,
    상기 약제는 제 2 항 또는 제 16 항 중 어느 한 항으로 정의되는 방법에 사용하기 위한 것인 사용.
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