KR20110107344A

KR20110107344A - 에리스로포이에시스를 증대시키기 위한 화합물 및 방법

Info

Publication number: KR20110107344A
Application number: KR1020117017126A
Authority: KR
Inventors: 롱-춘 우
Original assignee: 우 소피아 수 펀; 롱-춘 우
Priority date: 2008-12-24
Filing date: 2009-12-21
Publication date: 2011-09-30
Also published as: JP5856659B2; EP3628321A1; TW201023861A; EP2893930B1; AU2009330200B2; KR101448039B1; US9248143B2; WO2010075263A3; US20130316967A1; CN102316873A; EP2893930A3; EP2893930A2; EP3628321C0; US20100160243A1; JP2015007085A; TWI386213B; CA2747996C; CA2747996A1; JP2012514000A; HK1209313A1

Abstract

본 발명은 에리스로포이에시스를 증대시키는 화합물 및 방법에 관한 것이다. 상기 화합물은 하기 화학식 (I)의 화학 구조를 포함하고, 하기 화학식 (I)에서 R은 글리코실기이다. 화학식 (I)의 화합물은 에리스로포이에시스 효과를 갖는 것과 더불어, 에리스로포이에틴 생성을 증대시키고, 신장 기능 및 간세포 성장 인자의 발현을 증가시키는데 효과적이다. 상기 방법에는, 유효량의 화학식 (I)의 화합물을 이를 필요로 하는 대상에 투여하는 단계 및 이에 의해 에리스로포이에시스를 증대시키는 단계를 포함한다.

(I)

Description

에리스로포이에시스를 증대시키기 위한 화합물 및 방법{COMPOUNDS AND METHODS FOR ENHANCING ERYTHROPOIESIS}

본 발명은 일반적으로 에리스로포이에시스(erythropoiesis)에 관한 것이고, 보다 상세하게는 에리스로포이에시스의 증대에 관한 것이다.

만성 신장 질환(chronic kidney disease; CKD)은 신부전(kidney failure), 심혈관 질환(cardiovascular disease) 및 조기 사망(premature death) 등의 부작용을 나타내어, 세계적으로 사회 전체의 건강 문제로 대두 되었다(Levey, 2005). CKD를 앓고 있는 환자들은 말기 신장병(renal disease)으로 진행될 높은 위험성이 있어, 장기간의 생존을 유지하기 위하여 투석(dialysis) 또는 신장 이식(kidney transplantation)을 필요로 한다. 빈혈, CKD의 조기 징후는 신장에 의한 내생적인 에리스로포이에틴(erythropoietin)(Epo)의 생성부족으로 인해 발생된다(Zarzecki et al ., 2004). CKD와 더불어, 빈혈도 역시 다른 질병들, 이를 테면, 암, 급성 및 만성 감염, 자가면역, 염증 및 고형 장기(solid-organ)의 이식 후 만성 거부반응과 연관된다(Weiss and Goodnough, 2005).

Epo는 주로 성인의 신장과 태아의 간에서 생성되는 당단백질 호르몬이다. Epo는 세포 표면상의 에리트로포이에틴 수용체(Epo 수용체)에 결합하여 효과를 나타낸다. 세포가 상대적으로 낮은 산소 레벨(저산소증 등)을 감지한 경우, Epo를 생성하고 방출하여, 에리스로이드 계통 세포(erythroid lineage cell)에서 증식, 분화, 성숙, 및 생존을 조절하게 된다(Moritz et al., 1997 및 Fisher, 2003). 혈류 내에서 비정상적인 Epo 레벨은 골수 및 신장 질환의 지표일 수 있다. 상대적으로 낮은 Epo 레벨은 CKD, 1차 진성 적혈구증가증(primary polycythemia rubra vera) 및 화학요법-유발 빈혈증(chemotherapy-induced anemia)을 갖는 환자들에게서 나타난다. 상대적으로 높은 Epo 레벨은 2차 적혈구증가증 및 신장암 환자들에게서 나타난다(Eckardt and Kurtz, 2005 및 Hodges et al., 2007).

신장 및 간 조직에서 생성되는 것 외에도, Epo 및 그의 수용체는 비-에리스로이드 조직 및 장기, 예컨대, 뇌, 눈, 심장, 폐, 창자, 췌장, 근육, 자궁 및 생식기에서도 발견된다(Eckardt and Kurtz, 1992). Epo-Epo 수용체 신호법(signaling)은, 상처 치유 반응(wound healing response), 신생혈관생성(angiogenesis) 및 국소 조직-보호 기능, 예컨대, 신경보호(neuroprotection), 심혈관 보호 및 조직 허혈증(tissue ischemia) 및 허혈/재관류(ischemia/reperfusion) 손상으로부터의 보호에 기여한다(Paschos et al., 2008 및 Arcasoy, 2008). Epo는, 신기능 장애(renal dysfunction)의 정도를 감소시키고, 시스플라틴-유발(cisplatin-induced) 급성 신부전으로부터 회복을 용이하게 함으로써, 신기능 보호효과(renoprotective effect)를 갖는 것으로 보고되었다(Sepodes et al., 2006 및 Arcasoy, 2008).

국립 신장 재단 신장 질환 치료결과 품질 지침(National Kidney Foundation Kidney Disease Outcomes Quality Initiative guideline)에서는, 치료-반응성 빈혈증(treatment-responsive anemia)을 앓는 환자들에게서 CKD의 빈혈증 치료를 위해 에리스로포이에시스 촉진제(erythropoiesis-stimulating agent; ESA)를 추천하고 있다. CKD의 빈혈증, 화학요법을 받는 암 환자들의 빈혈증을 치료하고, 수술중 수혈 요구를 감소시키며, 인간 면역결핍증 바이러스(HIV)에 감염된 지도부딘(zidovudine) 치료를 받는 환자들에 있어서 빈혈증을 치료하기 위해, 재조합 인간 Epo(rHuEpo)가 승인되었다. 플라즈마 반감기가 보다 긴 Epo로부터 설계된 신규한 에리스로포이에시스-촉진 단백질(NESP)가, 만성 신부전에 있어서 빈혈증을 치료하기 위해 승인되었다(Fisher, 2003). 유지 요법(maintenance therapy)을 위해서는, 이들 ESA를 주당 1회 이상 정맥내(i.v.) 또는 피하(s.c.) 투여하는 것을 추천한다. 빈번한 주사로 인한 통증, 불편함, 및 rHuEpo와 연관된 내재하는 항원성으로 인한 항-Epo 항체의 발달이 매우 우려된다(Bunn, 2007). 또한, ESA는 보다 높은 헤모글로빈 레벨을 갖는 환자들에 있어서 안전 위험성이 있고, 고혈압, 혈전색전증, 철 결핍증 및 극심한 적아구로(pure red-cell aplasia)와 같은 합병증을 일으킬 수도 있다(Wish and Coyne, 2007).

따라서, 당분야에서는 특히 적혈구 생성 및 신장 기능과 관련하여 이제껏 검토되지 않았던 필요성들이 존재하므로, 상술한 결함들과 부적절한 것들을 다루고자 한다.

본 발명의 일 측면으로서, 본 발명은 에리스로포이에틴 생성을 증강시키기 위한 약제를 제조하는 하기 화학식 (I)의 화합물의 용도에 관한 것이다:

(I)

상기 식에서, R은 글리코실기를 나타낸다. 상기 용도에는 치료적 유효량의 약제를 이를 필요로 하는 대상에 투여하는 것이 포함된다.

글리코실기는 디하이드록시아세톤, 글루코스, 갈락토스, 글리세르알데히드, 트레오스, 크실로스, 만노스, 리보스, 리불로스, 크실룰로스, 타가토스, 사이코스(알룰로스), 프룩토스, 소르보스, 람노스, 에리스로스, 에리스룰로스, 아라비노스, 릭소스, 알로스, 알트로스, 굴로스, 이도스 및 탈로스로 구성된 군으로부터 선택되는 단당류이다.

상술한 화학식 (I)의 화합물을, 에리스로포이에틴 생성을 증대시키기 위하여, 뼈, 골수, 간, 신장 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 조직 및/또는 장기에 투여한다.

다른 측면으로서, 본 발명은 에리스로포이에틴 치료로 효험을 얻을 수 있는 질환 및/또는 질병을 치료하기 위한 약제를 제조하는 상기 화학식 (I)의 화합물의 용도에 관한 것이다. 상기 용도에는 치료적 유효량의 약제를 이를 필요로 하는 대상에 투여하는 것이 포함된다.

상기 질환 및/또는 질병은, 빈혈증, 신부전 및 에리스로포이에시스 결핍 관련 질환 중에서 선택되는 적어도 하나이다.

상기 질환 및/또는 질병은, 에리스로포이에틴 관련 보호 효과로 효험을 얻을 수 있다.

에리스로포이에틴 관련 보호 효과는, 신경보호, 심혈관 보호, 신기능 보호효과, 및 조직 허혈증 및 허혈/재관류 손상으로부터의 보호 중에서 선택되는 적어도 하나이다.

다른 측면으로서, 본 발명은 에리스로포이에시스를 증대시키기 위한 약제를 제조하는 상기 화학식 (I)의 화합물의 용도에 관한 것이다. 상기 용도에는 치료적 유효량의 약제를 이를 필요로 하는 대상에 투여하는 것이 포함된다.

또 다른 측면으로서, 본 발명은 신장 기능을 향상시키기 위한 약제를 제조하는 상기 화학식 (I)의 화합물의 용도에 관한 것이다. 상기 용도에는 치료적 유효량의 약제를 이를 필요로 하는 대상에 투여하는 것이 포함된다.

또 다른 측면으로서, 본 발명은 간세포(hepatocyte) 성장 인자의 발현을 증가시키기 위한 약제를 제조하는 상기 화학식 (I)의 화합물의 용도에 관한 것이다. 상기 용도에는 치료적 유효량의 약제를 이를 필요로 하는 대상에 투여하는 것이 포함된다.

다른 측면으로서, 본 발명은 간세포 성장 인자 치료로 효험을 얻을 수 있는 질환 및/또는 질병을 치료하기 위한 약제를 제조하는 상기 화학식 (I)의 화합물의 용도에 관한 것이다. 상기 용도에는 치료적 유효량의 약제를 이를 필요로 하는 대상에 투여하는 것이 포함된다.

또 다른 측면으로서, 본 발명은 간세포 성장 인자의 발현을 조절하는 것을 통하여, 질환 및/또는 질병을 치료하기 위한 약제를 제조하는 상기 화학식 (I)의 화합물의 용도에 관한 것이다. 상기 용도에는 치료적 유효량의 약제를 이를 필요로 하는 대상에 투여하는 것이 포함된다.

상기 질환 및/또는 질병은, 간 질환, 신장 질환, 폐 질환, 심혈관 질환, 소화계통 질환, 신경계 질환, 골 질환, 관절 질환, 근육 질환, 피부 질환, 압궤 증후군(crush syndrome), 알레르기성 염증, 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나이다.

간 질환은, 급성 간염(acute hepatitis), 간경변증(liver cirrhosis), 전격성 간염(fulminant hepatitis), 지방간, 및 간 이식, 부분 절제 및 허혈증에 대한 수술 치료로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나이다.

신장 질환은, 신장 섬유증(kidney fibrosis), 급성 신부전, 만성 신부전, 당뇨병성 신장질환(diabetic nephropathy), 및 신장 이식 및 허혈증에 대한 수술 치료로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나이다.

만성 신부전은, 신염 증후군(nephritic syndrome) 및 폐쇄성 신장병(obstructive nephropathy) 중 적어도 하나이다.

폐 질환은, 급성 폐렴, 폐 섬유증(pulmonary fibrosis), 및 폐 이식 및 허혈증에 대한 수술 치료로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나이다.

심혈관 질환은, 염증 매개 심장 질환(inflammation-mediated heart disease), 협심증(angina), 심근경색, 심근증(cardiomyopathy) 및 폐쇄성 죽상동맥경화증(atherosclerosis obliterans)으로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나이다.

염증 매개 심장 질환에는, 심장 동종이식 거부반응(cardiac allograft rejection) 및 심근염(myocarditis)이 포함될 수 있다.

소화계통 질환은, 장점막 손상(intestinal mucosal injury), 염증성 장질환(flammatory bowel disease), 위궤양 및 진성 당뇨병(diabetes mellitus)으로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나이다.

신경계 질환은, 뇌혈관 질환(cerebrovascular disease), 신경변성 질환(neurodegenerative disease), 척수 손상(spinal cord injury), 당뇨 망막병증(diabetic retinopathy), 말초신경병증(peripheral neuropathy), 척추관 협착증(spinal canal stenosis) 및 난청으로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나이다.

뇌혈관 질환은 일과성 허혈 발작(transient ischemic attack) 및 뇌졸중 중 적어도 하나이다.

신경변성 질환은, 루게릭병(amyotrophic lateral sclerosis), 알츠하이머병(Alzheimer’s disease) 및 파킨슨병(Parkinson's disease)으로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나이다.

골 질환 및 관절 질환에는, 골 관절염(osteoarthritis) 및/또는 류머티스 관절염(rheumatoid arthritis)이 포함될 수 있다.

근육 질환은, 근이영양증(muscular dystrophy) 및/또는 근위축증(muscular atrophy)일 수 있다.

피부 질환은, 피부 궤양(skin ulcer), 화상 및 강피증(scleroderma)으로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나이다.

이들과 함께 기타 측면들은 하기 도면과 더불어 바람직한 구체예의 설명으로부터 명백해질 것이며, 본원에 개시된 신규한 발명 내용의 본질과 범위를 벗어나지 않고, 변화 내지 수정을 할 수 있을 것이다.

첨부된 도면은 본 발명의 하나 이상의 구체예들을 나타낸 것으로서, 상세한 설명과 함께 본 발명의 원리를 이해하는데 도움이 될 것이다. 되도록이면 도면 전반에 걸쳐, 구체예의 동일하거나 유사한 요소를 언급하기 위하여, 동일한 참조 번호를 사용하였다.

도 1은 골수 세포에서 화합물 A가 헤모글로빈 레벨을 증대시키는 것을 나타낸다.
도 2는 화합물 A가 에리스로이드 전구세포(progenitor) 증식을 활성화 시킨다는 것을 골수 세포에서 적아구군형성단위(burst-forming units-erythroid; BFU-E) 어세이를 사용하여 나타낸다.
도 3은 신장 조직에서 화합물 A가 에리스로포이에틴(Epo)의 발현을 증가시킨다는 것을 나타낸다.
도 4는 간세포에서 화합물 A가 에리스로포이에틴(Epo)의 발현을 증가시킨다는 것을 나타낸다.
도 5는 시스플라틴-유발 급성 신부전 동물 모델에서 화합물 A가 적혈구의 수를 증가시킨다는 것을 나타낸다.
도 6은 시스플라틴-유발 급성 신부전 동물 모델에서 화합물 A가 혈청 혈액 요소 질소(serum blood urea nitrogen) 레벨을 감소시킨다는 것을 나타낸다.
도 7은 시스플라틴-유발 급성 신부전 동물 모델에서, 23일째, 화합물 A가 적혈구의 수를 증가시킨다는 것을 나타낸다. 수평방향의 화살표는 화합물 A 처리(mg/Kg/일)를 나타낸다.
도 8은 시스플라틴-유발 급성 신부전 동물 모델에서, 23일째, 화합물 A가 혈청 혈액 요소 질소 레벨을 감소시킨다는 것을 나타낸다. 수평방향의 화살표는 화합물 A 처리(mg/Kg/일)를 나타낸다.
도 9는 시스플라틴-유발 급성 신부전 동물 모델에서 화합물 A가 에리스로포이에틴(Epo)의 발현을 증가시킨다는 것을 나타낸다. 수평방향의 화살표는 화합물 A 처리(mg/Kg/일)를 나타낸다.
도 10은 시스플라틴-유발 급성 신부전 동물 모델에서 화합물 A가 간 조직 내 간세포 성장 인자(HGF)의 발현을 증가시큰다는 것을 나타내는 그래프이다. 수평방향의 화살표는 화합물 A 처리(mg/Kg/일)를 나타낸다.
도 11은 시스플라틴-유발 급성 신부전 동물 모델에서, 화합물 A가 에리스로이드 전구세포 증식을 활성화시킨다는 것을 골수 세포에서 적아구군형성단위(BFU-E) 어세이로 측정하여 나타낸다. 수평방향의 화살표는 화합물 A 처리(mg/Kg/일)를 나타낸다.

정의

본 명세서에서 사용되는 용어들은 일반적으로, 본 발명의 문맥 내, 그리고 각 용어가 사용되는 특정 문맥 내에서, 당분야에서 사용되는 그 용어들의 통상적인 의미를 갖는다. 본 발명을 설명하기 위하여 사용되는 특정 용어들은 이하에서, 또는 본 명세서의 어느 곳에서든, 실시자에게 본 발명의 설명에 관하여 추가적인 교시를 제공하기 위해 논의된다. 편의상, 특정 용어들은, 예를 들면, 이탤릭체 및/또는 인용 마크를 사용하여 강조할 수 있다. 용어의 강조표시를 사용하는 것은 용어의 범위와 의미에 영향을 미치지 않으며, 강조표시가 있는지의 여부와 관계없이 동일한 문맥 내에서는 용어의 범위와 의미는 동일하다. 동일한 대상을 여러가지 방법으로 언급할 수 있다는 것을 알 수 있을 것이다. 결론적으로, 대안적인 언어와 동의어가 본원에서 논의되는 임의의 하나 이상의 용어에 대해 사용될 수 있으므로, 용어가 본원에서 상세하게 설명되거나 논의되고 있는지의 여부가 어떠한 특별한 중요성을 갖는 것은 아니다. 특정 용어에 대한 동의어들이 제공된다. 하나 이상의 동의어들에 대하여 설명하는 것은 다른 동의어들을 배제시키는 것이 아니다. 본원에서 논의되는 임의의 용어들의 예를 포함하는 본 명세서에 개시된 모든 예들의 사용은 단지 예시적인 것으로서, 본 발명 또는 임의의 예시적인 용어의 범위와 의미를 제한하는 것이 아니다. 마찬가지로, 본 발명은 본 명세서에서 주어지는 다양한 구체예들로 제한되는 것이 아니다.

달리 정의하지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 과학 기술 용어들은 본 발명이 속한 분야의 당업자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 충돌되는 경우에는, 정의들을 포함하여 본 문서에서 제어할 것이다.

본원에서 사용되는 "대략", "약" 또는 "근사적으로" 등은 일반적으로 주어진 값 또는 범위의 20 퍼센트 내, 바람직하게 10 퍼센트 내, 보다 바람직하게 5 퍼센트 내에 드는 것이다. 본원에서 주어진 수치량은 근사치로서, 명확하게 언급하지 않는다면, 용어 "대략", "약" 또는 "근사적으로" 등으로 추론할 수 있는 의미를 갖는다.

실시예

하기에서는 본 발명의 범위를 제한하지 않고, 본 발명의 구체예에 관한 예시적인 도구, 장치, 방법 및 이들의 관련 결과를 나타낸다. 독자의 편의를 위해 타이틀 또는 서브타이틀을 사용할 수 있으며, 이는 본 발명의 범위를 제한하는 것이 아니다. 또한, 본원에서 특정 이론들이 제안되고 개시되고 있으나, 이것들이 옳은지 그른지에 관계없이, 임의의 특정 이론 또는 수행의 개요와 상관없이 본 발명에 따라 실시된 것이라면 본 발명의 범위를 제한하지 않는다.

실시예 1

화합물 A의 정제

2 kg의 건조 하수오(Polygonum multiflorum)을 펄버라이저(pulverizer)에서 분쇄하고, 분쇄된 물질을 2 리터의 85%(v/v) 에탄올에 밤새도록 담가두어 반응 용액을 생성하였다. 반응 용액을 수집하고, 또 다른 2 리터의 85%(v/v) 에탄올을 분쇄된 하수오에 첨가하여 상술한 과정에 따라 추가로 추출하였다. 에탄올 추출을 추가로 3회 반복하였다. 수집된 용액을 가스-추출 장치(Whatman #1 필터 페이퍼 장착)를 사용하여 여과하고, 40℃에서 회전농축기(rotavapor)(Buchi)에서 농축하여 부피를 6배 축소시켰다. 농축된 여과물을 모두 모아 n-헥산/H₂O=1:1(총 5 리터)으로 5회 분할하였다. 수상(aqueous phase)을 수집하고, 에틸 아세테이트 수, EtOAc/H₂O=1:1(총 6.5 리터)로 추가로 6회 분할하여 EtOAc 층을 수득하였다. 6개의 EtOAc 층을 모두 모아 농축하고, 농축물을 동결 건조기(Kingmech, Taiwan)에서 건조하여 EtOAc 추출물("PoMuEPe"라고 함)을 수득하였다. PoMuEPe를 메탄올:H₂O=50:50 용매 시스템을 가진 Diaion^®HP-200 컬럼(4.8×60cm; Mitsubishi Chemical)에서 2 ml/분의 유속으로 크로마토그래피를 실시하였다. 각 부분들을 수집하여, 농축, 건조하고, 헤모글로빈 형성을 증대시키는 능력을 분석하였다. 활성을 나타내는 부분들을 수집하여 PoMuEPeD9로 명명하였다. PoMuEPeD9를 메탄올: H2O=100:0 용매 시스템을 가진 Sephadex™LH20 컬럼(2.6×100cm; GE Healthcare Life Science)에서 1 ml/분의 유속으로 크로마토그래피를 실시하였다. 각 부분들을 수집하여, 농축, 건조하고, 헤모글로빈 형성을 증대시키는 능력을 분석하였다. 생물활성(bioactivity)을 나타내는 부분들을 수집하여 PoMuEPeD9L11로 명명하였다.

PoMuEPeD9L11 내 주성분의 화학 구조를 핵자기 공명(NMR) 분광법(Bruker), 액체 크로마토그래피/질량 분석법(LC/MS; Bruker)으로 측정하였다. 주성분이, "화합물 A"로 불리워지며, 하기 화학식 (I)을 갖는 2,3,5,4'-테트라하이드록시스틸벤 2-O-β-D-글루코피라노사이드라는 것을 확인하였다.

(I)

상기 식에서, R은 글루코실기를 나타낸다.

실시예 2

화합물 A의 헤모글로빈 생성 증대

8~10주령의 C57BL/6JNarl 마우스를 국립 연구소 동물 센터(National Laboratory Animal Center; NLAC, Taiwan)로부터 구입하였다. 페닐히드라진 하이드로클로라이드(Sigma-Aldrich)를 포스페이트 완충 살린(PBS) 내 100 mg/kg의 용량으로 단일의 복강내 주사하여 급성 용혈성 빈혈증(acute hemolytic anemia)을 유발시켰다. 주사 후 6일째, 마우스로부터 골수 셀을 분리하여 Worthington et al.,(1987) 및 Rosenthal et al.,(1987)에 기술된 방법에 최소한으로 수정하여 배양하였다. 셀 현탁액을, 1%(v/v) 소혈청 알부민(bovine serum albumin)(BSA, Sigma-Aldrich), 7.5μm의 2-머캅토에탄올(Sigma-Aldrich), 1.4 mM의 L-글루타민(Sigma-Aldrich), 10μm의 염화 제2철(FeCl₃, Sigma-Aldrich) 및 50 mU/ml의 EPO(Recormon Epoetin, Roche)를 함유하는 MEM 알파 배지(α-MEM, Gibco)에서 약 6×10⁵ 셀/ml의 밀도로 조정하였다. 셀들을 96-웰 플레이트(Costar)에 약 1.5×10⁵ 셀/웰로 평평하게 하고, 5% CO₂-95% 대기를 함유하는 37℃ 가습 인큐베이터에서 배양하였다.

다음날, 상이한 농도의 화합물 A(0, 0.1, 0.5, 2.5, 12.5 및 20μg/ml)를 각각 셀에 첨가하고, 4일간 인큐베이팅하였다. DAF-기반 헤모글로빈 색측정 분석법(hemoglobin colorimetry assay)을 사용하고, Kaiho and Mizuno(1985) 및 Worthington(1987)에 최소한으로 수정하여 헤모글로빈의 상대적인 레벨을 측정하였다. 간략하게, 셀을 PBS로 세척하여 Nonidet™ P40(NP-40, Sigma-Aldrich)(0.01% (v/v), 50μl/웰)에 용해시켰다. 그 후, 셀을 4,5-디아미노플루오레세인(DAF, Sigma-Aldrich)(100μg/ml, 100μl/웰), 및 30% 과산화수소(Sigma-Aldrich)(6μl/웰)로 5~10분간 인큐베이팅하였다. 610 nm에서 흡광도를 Victor 2 1420 다표지 카운터(Multilable Counter)(Wallac, PerkinElmer)로 측정하였다. 결과를 상대 지수(relative index)±S.E.(n=6)로 나타내었다. 스튜던트 테스트(Student's t test)(**P<0.01 대 대조군(0μg/ml))로 통계적 유의성(statistical significance)을 평가하였다. 화합물 A가 약 0.1 내지 20μg/ml 농도에서 헤모글로빈 형성을 유의성있게 증대시켰다(도 1).

실시예 3

세포 배양에서 화합물 A의 에리스로이드 전구세포 활성화

에리스로이드 전구세포에서 "화합물 A"의 효과를 조사하기 위하여, Corazza et al.(2004) 및 Jin et al.(2003)에 기술된 방법에 수정을 가하여 적아구군형성단위(BFU-E) 어세이를 수행하였다. 간단하게, 6주령의 C57BL/6JNarl 마우스를 국립 연구소 동물 센터(NLAC, Taiwan)로부터 구입하였다. 골수 셀을 마우스로부터 분리하여, 셀 현탁액을, 15%(v/v) FBS(소태아 혈청, Gibco), 1%(v/v) BSA(Sigma-Aldrich), 0.8%(w/v) 메틸셀룰로오스(Sigma-Aldrich), 10μM 2-머캅토 에탄올(Sigma-Aldrich), 2 U/ml Epo(Recormon Epoetin，Roche), 및 10 ng/ml IL-3(Sigma-Aldrich)를 함유하는 α-MEM에 약 8.3×10⁴셀/ml로 조정하였다. 셀을 24-웰 플레이트(Falcon)에 약 7.5×10⁴셀/웰로 평평하게 하였다. 상이한 농도의 화합물 A(0, 0.1, 0.5, 2.5 및 12.5μg/ml)를 각각 5% CO₂-95% 대기를 함유하는 37℃ 가습 인큐베이터에서 9일간 배양하였다. 군집들을 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐-테트라졸륨 브로마이드(50μg/50μl/웰)(MTT; Sigma-Aldrich)로 착색하였다. 50 셀 이상의 군집을 카운팅하는 동안 플레이트들을 포토그래핑하였다. 결과를 평균±S.E.(n=3)으로 나타내었다. 스튜던트 테스트(*P<0.05 및 **P<0.01 대 대조군(즉, 0 농도))로 통계적 유의성을 평가하였다. 화합물 A가 0.5~12.5μg/ml 농도에서 골수 셀의 BFU-E 군집의 수를 유의성있게 증가시켰다(도 2). 이와 같은 결과는 화합물 A가 헤모글로빈 형성을 증가시키고, 에리스로이드 전구세포를 활성화시킴으로써, 에리스로포이에시스를 증대시킨다는 것을 나타낸다.

실시예 4

화합물 A의 Epo의 신장 발현 증대

8~10주령의 C57BL/6JNarl 마우스를 국립 연구소 동물 센터(NLAC, Taiwan)로부터 구입하였다. 마우스의 신장 절편을 상술한 방법에 수정을 가하여 제조하였다(Parrish et al.,1995, Obatomi et al.,1998 및 De Kanter et al.,1999). 간단하게, 마우스를 경추 탈골(cervical dislocation)하여 희생시키고, 신장을 잘라내어, 20 mM HEPES(USB), 128 mM 염화나트륨(Sigma-Aldrich), 2.5 mM 염화칼륨(Sigma-Aldrich), 2.7 mM 염화칼슘(Sigma-Aldrich), 1 mM 염화마그네슘(Sigma-Aldrich) 및 16 mM D-글루코스(Sigma-Aldrich)를 함유하는 기체(95% O₂ 및 5% CO₂) 얼음-냉각 살균 Krebs-HEPES 완충액(pH 7.4)에 유지시켰다. 신장을 피막제거하여 피질-유두(cortico-papillary) 축에 수직으로 파내었다. 신장 절편(250μm)을, 기체(95% O₂: 5% CO₂) 얼음-냉각 살균 Krebs-HEPES 완충액으로 채워진 마이크로슬라이서(microslicer)(D.S.K microslicer, DRK 1000, Dosaka EM Co)로 제조하였다. 신장 절편을 수집하여, 기체(95% O₂, 5% CO₂) 얼음-냉각 살균 Krebs-HEPES 완충액 내 얼음에 저장하고, 절편 제조 10분 이내에 사용하였다.

신장 절편을, 15 mM HEPES(USB), 20 mM sodium bicarbonate(Sigma-Aldrich)) 및 5 %(v/v) FBS(Gibco)을 함유하는 1.0 ml/웰의 기체(95% O₂, 5% CO₂)의 신선한 배지(DMEM/F12(Gibco/Invitrogen))를 포함하는, 24-웰 플레이트(Falcon)에서, 37℃, 95% O₂ : 5% CO₂ 대기 챔버에서 90~120분간 미리 인큐베이팅하였다. 그 후, 신장 절편을 상이한 농도의 화합물 A(0, 0.6, 2.5, 10, 40 및 100μg/ml)로, 각각 37℃, 50% O₂ : 5% CO₂ : 45% N₂ 대기 챔버에서 16시간 동안 인큐베이팅하였다. RNA-Bee™ RNA 분리 용매(Tel-test)로 신장 절편의 리보 핵산(RNA)을 추출하였다. 전체 RNA(5μg)을 사용하여, MMLV 역전사효소(Promega)를 사용하는 상보적 디옥시리보핵산(cDNA)을 제조하였다. 역전사된 cDNA 샘플을, ABI 프리즘 7700 시퀀스 감지 시시스템(Applied Biosystems)과 SYBR 그린 마스터 믹스 키트(Applied Biosystems)를 사용하는, 실시간 PCR(real-time PCR)로 분석하였다. 마우스 β-액틴(SEQ ID NO: 1 및 2) 및 에리스로포이에틴(Epo)(SEQ ID NO: 3 및 4)로 타겟팅하는 실시간 PCR 프라이머(표 1)를 사용하였다. 실시간 PCR 조건은 다음과 같았다: 10분간 95℃ 변성 후, 95℃ 30초간, 58℃ 35초간, 72℃ 40초간 40순환. β-액틴의 발현 레벨을 내부 참고자료로 사용하였다. 상대적인 유전자 발현 레벨을 2^-△△ ^CT로 계산하였다. 결과를 대조군(0μg/ml)과 비교하고, 상대 지수로 나타내었다. 결과는 화합물 A가 신장 조직 내 Epo의 발현을 증가시킨다는 것을 나타낸다(도 3).

유전자		시퀀스	SEQ ID NO.
β-액틴	정	5'-GTGGGCCGCCCTAGGCACCA-3'	1
β-액틴	역	5'-TGGCCTTAGGGTTCAGGGGG-3'	2
Epo	정	5'-AATGGAGGTGGAAGAACAGG-3'	3
Epo	역	5'-ACCCGAAGCAGTGAAGTGA-3'	4
GAPDH	정	5'-TGGCATCGTGGAAGGGCTCA-3'	5
GAPDH	역	5'-GGAAGAATGGGAGTTGCTGT-3'	6
HGP	정	5'-CTTGGCATCCACGATGTTCAT-3'	7
HGP	역	5'-TGGTGCTGACTGCATTTCTCA-3'	8

실시예 5

화합물 A의 Epo의 간세포 발현 증대

8~10주령의 C57BL/6JNarl 마우스를 국립 연구소 동물 센터(NLAC, Taiwan)로부터 구입하였다. 간세포를 상술한 방법에 수정을 가하여 제조하였다(Kreamer et al.,1986). 간단하게, 마우스를 Avertin(2%(w/v) 2,2,2-트리브로모에탄올, i.p., 400mg/Kg 체중)으로 마취하고, 0.5 mM 에틸렌 글리콜-비스(2-아미노에틸에테르)-N,N,N'N'-테트라아세트산(EGTA; Sigma-Aldrich)를 함유하는 무칼슘 한크의 평형 염 용액(Hank's balanced salt solution; HBSS)으로 하대정맥을 통하여, 간을 그 상태대로 관류하였다. 절단된 문맥(portal vein)을 통해 배출되는 관류액의 유속은 1 ml/분이었다. 10분간 관류 후, 0.05%(w/v) 콜라게나제(타입 II; Worthington Biochemical Corporation) 및 1 mM 칼슘 클로라이드(Sigma-Aldrich)를 함유하는 HBSS를 관류 장치로 도입하였다. 동일한 유속으로 다시 10분간 관류를 계속하였다. 부분적으로 소화된 간을 제거하여, HBSS를 함유하는 60-mm 배양 접시(BD Falcon)에 놓고, 부드럽게 다져서 간 피막을 개방시켰다. 다져진 간 현탁물을 나일론 매쉬(공극 크기 약 300μm)를 통해 여과하고, 50×g로 3분간 원심분리하여 셀 펠렛을 얻었다. 밀도가 1.06 g/ml인 퍼콜(percoll)(GE Healthcare) 배지를 제조하였다. 셀 펠렛을 DMEM 배지(Gibco/Invitrogen)에 현탁시키고, 퍼콜 배지와 함께 4℃에서 10분간 50×g로 원심분리하여, DMEM 배지로 한번 세척한 후, 2분간 50×g로 원심분리하여 간세포를 얻었다.

5% CO₂-95% 대기를 함유하는 37℃ 가습 인큐베이터에서, 분리된 간세포를 10% FBS(Gibco)를 함유하는 DMEM 배지(Gibco/Invitrogen)내 6-웰 플레이트(Costar)에 약 6×10⁵ 셀/웰(2 ml/웰)로 평평하게 두었다. 3시간 후, 배지를 제거하고, 셀을 상이한 농도의 화합물 A(0, 0.1, 0.5, 2.5 및 12.5μg/ml)과 함께 각각 24시간 동안 인큐베이팅하였다. 간세포의 RNA를 역전사를 위해 RNA-Bee™ RNA 분리 용매(Tel-test)로 추출하고, 상술한 바와 같이 PCR로 전사를 분석하였다. 결과는 화합물 A가 간세포 내에서 Epo의 발현을 증대시키는 것으로 나타났다(도 4).

실시예 6

시스플라틴-유발 급성 신부전 동물 모델에서 화합물 A의 신장 기능 증대

시스플라틴-유발 급성 신부전 동물 모델에서 화합물 A의 치료 효과를 조사하였다. C57BL/6JNarl 마우스(8주령)를 국립 연구소 동물 센터(NLAC, Taiwan)로부터 구입하였다. 시스플라틴(시스-디아민플라티늄(II) 디클로라이드, Sigma-Aldrich)을 일반 식염수(0.9%(w/v)) 소듐 클로라이드, Sigma-Aldrich)에 1 mg/ml의 농도로 용해시키고, 다음 스케줄에 따라 마우스에 복강내(i.p.) 주입하였다: 1일째, 7 mg/kg; 5일째, 6 mg/kg; 9일째, 6 mg/kg. 시스플라틴 처리되지 않은 일반 마우스 그룹에 대하여, 동시에 같은 부피의 일반 식염수를 복강내 주입하였다. 13일째에, 혈청 샘플을 수집하여 혈액 요소 질소(BUN) 함량을 분석하였다. BUN 레벨이 100 mg/dl 이상인 시스플라틴-주입된 마우스와 시스플라틴-비처리된 일반 마우스를 추가로 그룹당 6 마우스씩, 5 그룹으로 나누어, 2주 동안 먹이를 주었다: (1) 일반 그룹: 마우스에 일반 식염수를 주입한 후, 표준 식단(LabDiet^®)을 공급하였다; (2) 대조군: 마우스에 시스플라틴을 주입한 후, 표준 식단을 공급하였다; (3) 화합물 A 10 mg/kg/일 그룹: 마우스에 시스플라틴을 주입한 후, 10 mg/kg/일 용량으로 화합물 A를 공급하였다; (4) 화합물 A 30 mg/kg/일 그룹: 마우스에 시스플라틴을 주입한 후, 30 mg/kg/일 용량으로 화합물 A를 공급하였다; (5) 화합물 A 90 mg/kg/일 그룹: 마우스에 시스플라틴을 주입한 후, 90 mg/kg/일 용량으로 화합물 A 처리하였다.

0, 5, 10, 13, 18, 23 및 28일째에 마우스의 후안구동(retro-orbital sinus)으로부터 혈액 샘플을 수집하였다. Sysmex^® Kx-21 혈액학 분석기를 사용하여 일반 혈액 검사(complete blood cell count)로 적혈구(RBC) 농도를 측정하였다. 혈액 요소 질소(BUN) 레벨을 우레아제 GLDH 법(Urea FS, DiaSys)으로 측정하였다. 결과를 평균± S.E. (n=5~6)으로 나타내었다. 스튜던트 테스트(##P<0.01 대 일반 그룹 및 **P<0.01 대 대조군)로 통계적 유의성을 평가하였다. 결과는 30~90 mg/kg/일 농도의 화합물 A 처리가 적혈구(RBC)의 수를 증가시키고, 혈청 BUN 레벨을 감소시키는 것으로 나타났다(도 5). 23일째, 30~90 mg/kg/일 농도에서 화합물 A가 RBC의 수를 유의성있게 증가시킨 반면(도 7), 혈청 BUN 레벨을 감소시켰다(도 8). 도 7 및 8에서 수평방향의 화살표는 화합물 A 처리(mg/Kg/일)를 나타낸다. 상기 데이터는 시스플라틴-유발 급성 신부전 동물 모델에서 화합물 A의 처리가 신기능 증대시키고, 빈혈을 감소시킨다는 것을 나타낸다. 이러한 결과는 에리스로포에이시스를 증대시키는 화합물 A의 기능과 일치한다.

실시예 7

시스플라틴-유발 급성 신부전 동물 모델에서 화합물 A의 Epo 및 간세포 성장 인자의 간 발현 증대

실시예 6이 끝날 무렵(즉, 28일째), 마우스를 희생시켜, 신장 및 간 조직을 제거하고, 골수 셀을 분리하였다. 조직 및 골수 셀로부터 RNA-Bee™ RNA 분리 용매(Tel-test)로 RNA를 추출하였다. 전체 RNA(5μg)로, MMLV 역전사효소(Promega)를 사용하여 cDNA를 제조하였다. ABI GeneAmp™ 시스템 2700 (Applied Biosystems)을 사용하는 PCR과 마우스 글리세르알데히드 3-포스페이트 디하이드로지나제(GAPDH)(SEQ ID NO: 5 및 6), 에리스로포이에틴(Epo)(SEQ ID NO: 3 및 4) 및 간세포 성장 인자(HGF)(SEQ ID NO: 7 및 8)로 타겟팅하는 프라이머를 사용하는 SYBR Green Master Mix 키트(Applied Biosystems)로 역전사된 cDNA를 분석하였다. 실시간 PCR 조건은 다음과 같았다: 10분간 95℃에서 변성한 후 30초간 95℃, 35초간 58℃, 및 40초간 72℃을 40순환 하였다. GAPDH의 발현 레벨을 내부 참고자료로 사용하였다. 상대적인 유전자 발현 레벨을 2^-△△ ^CT로 계산하였다. 결과를 상대 지수± S.E. (n=5~6)으로 나타내었다. 스튜던트 테스트(##P<0.01 대 일반 그룹 및 *P<0.05, **P<0.01 대 대조군)로 통계적 유의성을 평가하였다.

결과는 시스플라틴-유발 급성 신부전 동물 모델에서 30~90 mg/kg/일 농도의 화합물 A가 비처리된 대조군에 비하여 간의 Epo 발현을 유의성있게 증가시키는 것으로 나타났다(도 9). 간과 신장은 Epo를 생성하는 2개의 주기관이다. 화합물 A는 신장 조직(도 3), 간세포(도 4) 및 간 조직(도 9) 내에서 Epo의 발현을 증대시킨다는 것을 알 수 있었다. 이러한 결과는 Epo의 발현을 증대시키는 화합물 A의 기능과 일치한다. 또한, 화합물 A(10~90 mg/kg/일)의 처리는 간 조직 내에서 HGF의 발현을 증대시킨다(도 10). 도 9 및 10에서 수평방향의 화살표는 화합물 A 처리(mg/Kg/일)를 나타낸다.

실시예 8

시스플라틴-유발 급성 신부전 동물 모델에서 화합물 A의 에리스로이드 전구세포 활성화

실시예 7에 기초하여, 상술한 적아구군형성단위(BFU-E) 어세이를 위해, 분리된 골수 셀을 5% CO₂-95% 대기를 함유하는 37℃ 가습 인큐베이터에서 12일간 배양하였다. 결과를 상대 지수± S.E. (n=5~6)으로 나타내었다. 스튜던트 테스트(##P<0.01 대 일반 그룹 및 *P<0.05, **P<0.01 대 대조군)로 통계적 유의성을 평가하였다. 10~90 mg/kg/일 농도의 화합물 A가 골수 셀의 BFU-E 군집수를 유의성있게 증가시키는 것을 알 수 있었다(도 11). 도 11에서 수평방향의 화살표는 화합물 A 처리(mg/Kg/일)를 나타낸다. 이러한 결과는 화합물 A가 에리스로이드 전구세포를 활성화시키고, 에리스로포이에시스를 증대시킨다는 것을 나타낸다.

화합물 2,3,5,4'-테트라하이드록시스틸벤-2-O-β-D-글루코피라노사이드, 즉, 화합물 A는 여러 식물들에서 발견된다. 문헌에 따르면, 화합물 A는 다음의 약리학적 효과를 갖는다: 티로시나제 활성화에 의한 멜라닌형성 자극(Guan et al., 2008), 지질 과산화 억제(Kimura et al., 1983), 산소 및 질소 자유 라디칼을 경감시키고 유도성 산화질소 생성효소 발현의 하향조절을 통한 대장염의 보호 효과(Wang et al., 2008), 리포단백질의 산화, 증식에 대한 길항 효과 및 관상 동맥 평활근 세포의 산화질소 함량 감소를 통한 항동맥경화 효과(Liu et al., 2007), 사이클로옥시게나아제-2 효소 활성 및 발현의 억제와 관련된 항염증 작용(Zhang et al., 2007), 알츠하이머병 및 인지 장애에 대한 유효성(Wang et al., 2007).

미국 공개특허 공보 제20050042314호(발명의 명칭 "Extracts of Polygonum multiflorum Thunb., and preparation process and uses of the same")에는, Polygonum multiflorum Thunb .의 뿌리 추출물이 간세포 및 골수 셀의 증식, 성장 및/또는 분화를 증가시키는데 생물학적 활성을 나타낸다고 개시되어 있다. Fleeceflower 뿌리는 많은 화학 성분들, 예컨대, 에모딘, 크리소파놀, 피지온, 레인, 크리소파놀 안스론, 레스베라트롤, 피세이드, 2,3,5,4'-테트라하이드록시스틸벤-2-O-β-D-글루코피라노사이드, 2,3,5,4'-테트라하이드록시스틸벤-2-O-β-D-글루코피라노사이드-2"-O-모노갈로일 에스테르, 2,3,5,4'-테트라하이드록시스틸벤-2-O-β-D-글루코피라노사이드-3"-O-모노갈로일 에스테르, 갈릭산, 카테친, 에피카테친, 3-O-갈로일(-)-카테친, 및 3-O-갈로일(-)-에피카테친, 3-O-갈로일-프로시아니딘 B-2,3,3'-디-O-갈로일-프로시아니딘 B-2, 및 β-시토스테롤을 함유하고 있다. 미국 공개특허 공보 제20050042314호는 화학 성분(들)의 활성에 대해서는 언급하고 있지 않다.

상술한 바와 같이, 화합물 A는 Epo 생성을 증가시키고, 에리스로포이에시스 및 신장 기능을 증대시키는 데 있어서 생물학적 활성을 갖는다는 것이 입증되었다. 화합물 A 내의 글리코실기는 단당류, 예컨대, 디하이드록시아세톤, 글루코스, 갈락토스, 글리세르알데히드, 트레오스, 크실로스, 만노스, 리보스, 리불로스, 크실룰로스, 타가토스, 사이코스(알룰로스), 프룩토스, 소르보스, 람노스, 에리스로스, 에리스룰로스, 아라비노스, 릭소스, 알로스, 알트로스, 굴로스, 이도스 및 탈로스로 대체될 수 있다.

Epo는 에리스로포이에시스를 자극하고, 에리스로포이에시스에 필요한 것으로 잘 알려져 있다(Moritz et al., 1997). 또한, Epo는 신기능 보호효과를 갖는 것으로 보고되었다(Sepodes et al., 2006 및 Arcasoy, 2008). 화합물 A는 Epo 생성을 증가시키는 것 외에도, 에리스로포이에시스 및 신장 기능을 증대시킨다.

HGF는 세포 생존, 성장, 운동성(motility) 및 형태발생(morphogenesis), 조직 재생, 보호 및 회복과 관련된 다기능성 사이토킨이다. HGF는 Epo 수용체로부터의 신호 전달을 활성화시키는 것으로 보고되었다(Iguchi et al., 1999 및 Isobe et al., 2006). HGF는 알레르기성 염증(Ito et al., 2008), 골 관절염, 류머티스 관절염, 근이영양증, 근위축증, 피부 궤양, 화상, 강피증, 압궤 증후군(Funakoshi and Nakamura, 2003), 뇌혈관 질환, 예컨대, 일과성 허혈 발작 및 뇌졸중, 신경변성 질환, 예컨대, 루게릭병, 알츠하이머병 및 파킨슨병, 척수 손상, 당뇨 망막병증, 말초신경병증, 척추관 협착증 및 난청(Funakoshi and Nakamura, 2003 및 Takeo et al., 2007), 급성 간염, 간경변증, 전격성 간염, 지방간, 간 이식, 부분 절제 및 허혈증에 대한 수술 치료(Funakoshi and Nakamura, 2003 및 Mizuno and Nakamura, 2007), 신장 섬유증, 급성 신부전, 만성 신부전, 예컨대, 신염 증후군 및 폐쇄성 신장병, 신장 이식 및 허혈증에 대한 수술 치료, 당뇨병성 신장질환(Matsumoto and Nakamura, 2001; Funakoshi and Nakamura, 2003 및 Liu, 2004), 급성 폐렴, 폐 섬유증, 폐 이식, 부분 절제 및 허혈증에 대한 수술 치료(Funakoshi and Nakamura, 2003), 염증 매개 심장 질환, 예컨대, 심장 동종이식 거부반응 및 심근염, 심혈관 질환, 예컨대, 염증 매개 심장 질환, 협심증, 심근경색, 심근증 및 폐쇄성 죽상동맥경화증(Funakoshi and Nakamura, 2003 및 Isobe et al., 2006), 장점막 손상, 염증성 장질환(Ido et al., 2005), 위궤양 및 진성 당뇨병(Funakoshi and Nakamura, 2003) 등에 대하여 치료적 잠재성을 갖는 것으로 나타났다.

화합물 A는 3,4',5-트리하이드록시-트랜스-스틸벤을 기반으로 하는 구조를 갖고, 이는 산화질소 의존성 및/또는 항산화 메커니즘을 통한 신기능 보호를 포함하는 수많은 생물학적 활성을 갖는 천연 화합물이다(Sharma et al., 2006; Shankar et al., 2007; Do Amaral et al., 2008 및 Orallo, 2008). 화합물 A는 신장 기능 증대 및 빈혈을 개선시키는 데 있어서 3,4',5-트리하이드록시-트랜스-스틸벤보다 우수한 것으로 알려져 있다(데이터는 나타나지 않음).

rHuEpo 및 NESP는 CKD의 빈혈증, 화학요법을 받는 암 환자들의 빈혈증, 인간 면역결핍증 바이러스(HIV)에 감염된 지도부딘 치료를 받는 환자들에 있어서 빈혈증을 치료하기 위해, 정맥내(i.v.) 또는 피하(s.c.) 주사로 사용된다(Fisher, 2003). 유지 요법을 위해서는 주당 1회 이상 투여하는 것을 추천한다. 빈번한 주사로 인한 비용, 불편함, 및 rHuEpo와 연관된 내재하는 항원성으로 인한 항-Epo 항체의 발달은 모두, 개선된 치료제 개발의 필요성을 지적하고 있다. 3,4',5-트리하이드록시-트랜스-스틸벤 유사체 중 하나인 화합물 A를 경구 투여 하면, Epo 생성을 증가시키고, 에리스로포이에시스 및 신장 기능을 증대시키며, 빈혈증을 감소시킬 수 있다.

화합물 3,4',5-트리하이드록시-트랜스-스틸벤은 산화질소 의존성 및/또는 항산화 메커니즘을 통한 신기능 보호효과를 갖는 것으로 보고되었다. 화합물 A는 에리스로포이에시스 및 신장 기능 증대에 있어서 3,4',5-트리하이드록시-트랜스-스틸벤보다 우수하다. 또한, 화합물 A는 재조합 Epo가 갖지 않는 이점들을 갖고, 화합물 A의 경구 투여는 재조합 Epo가 갖는 내재하는 항원성을 일으키지 않는다. 또한, rEpo의 투여 경로는 빈번한 주사를 요하기 때문에 불편하다. 화합물 A는 질병-관련 빈혈증, 예컨대, CKD, 암, 급성 및 만성 감염, 자가면역, 염증, 고형 장기의 이식 후 만성 거부반응, 화학요법-유발 빈혈증, 및 조직 허혈증에 유용할 수 있다.

상기 설명한 본 발명의 예시적인 구체예들은 단지 설명과 예시를 위한 목적으로 나타낸 것이며, 개시된 세세한 형태로 본 발명의 범위를 제한하고자 하는 것이 아니다. 상기 교시를 고려하여 많은 수정과 변화를 행할 수 있다.

다른 당업자들이 본 발명 및 다양한 구체예들을 특정 용도에 맞추어 다양한 변화를 줄 수 있도록, 본 발명의 원리를 설명하기 위해 구체예 및 실시예를 선택하고 기술하였다. 대안적인 구체예들은, 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않고, 본 발명이 속한 분야의 당업자들에게 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 범위는 본원에서 기술하는 상세한 설명 및 실시예보다는 특허청구범위에 의해 정해진다.

특허, 특허출원 및 다양한 공개문헌을 포함하는 일부 참고문헌이 본 발명의 상세한 설명에서 인용되고 논의되고 있다. 이러한 참고문헌의 인용 및/또는 논의는 단지 본 발명의 설명을 명확하게 하기 위해 제공되는 것이고, 이러한 참고문헌이 본원에서 설명하는 발명에 대해 "선행 기술"임을 인정하는 것은 아니다. 본 명세서에서 인용되고 논의된 모든 참고문헌은, 각 참고문헌이 개별적으로 참조로 인용되는 경우와 마찬가지로 그 전체 내용이 본원에 참조로 인용된다.

참고문헌 목록

Claims

필요로 하는 대상에 치료적 유효량이 투여되는, 에리스로포이에틴 생성 증대용 약제를 제조하기 위한 하기 화학식 (I)의 화합물의 용도:

(I)
상기 식에서, R은 글리코실기를 나타낸다.
제1항에 있어서, 글리코실기가 디하이드록시아세톤, 글루코스, 갈락토스, 글리세르알데히드, 트레오스, 크실로스, 만노스, 리보스, 리불로스, 크실룰로스, 타가토스, 사이코스(알룰로스), 프룩토스, 소르보스, 람노스, 에리스로스, 에리스룰로스, 아라비노스, 릭소스, 알로스, 알트로스, 굴로스, 이도스 및 탈로스로 구성된 군으로부터 선택되는 단당류인 용도.
제1항에 있어서, 화학식 (I)의 화합물이 뼈, 골수, 간, 신장 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 조직 및/또는 장기에서 에리스로포이에틴 생성을 증대시키기 위해 투여되는 용도.
필요로 하는 대상에 치료적 유효량이 투여되는, 에리스로포이에틴 치료로 효과를 얻을 대상에서 질환 및/또는 장애의 치료용 약제를 제조하기 위한 하기 화학식 (I)의 화합물의 용도:

(I)
상기 식에서, R은 글리코실기를 나타낸다.
제4항에 있어서, 글리코실기가 디하이드록시아세톤, 글루코스, 갈락토스, 글리세르알데히드, 트레오스, 크실로스, 만노스, 리보스, 리불로스, 크실룰로스, 타가토스, 사이코스(알룰로스), 프룩토스, 소르보스, 람노스, 에리스로스, 에리스룰로스, 아라비노스, 릭소스, 알로스, 알트로스, 굴로스, 이도스 및 탈로스로 구성된 군으로부터 선택되는 단당류인 용도.
제4항에 있어서, 질환 및/또는 장애가 빈혈(anemia), 신부전(renal failure), 에리스로포이에시스 결핍 관련 질환으로부터 선택되는 적어도 하나인 용도.
제4항에 있어서, 질환 및/또는 장애가 에리스로포이에틴 관련 보호 효과로부터 효과를 얻는 용도.
제7항에 있어서, 에리스로포이에틴 관련 보호 효과가 신경보호(neuroprotection), 심혈관 보호(cardiovascular protection), 신기능 보호효과(renoprotective effect), 및 조직 허혈(tissue ischemia) 및 허혈/재관류(ischemia/reperfusion) 손상으로부터의 보호로부터 선택되는 적어도 하나인 용도.
필요로 하는 대상에 치료적 유효량이 투여되는, 에리스로포이에시스 증대용 약제를 제조하기 위한 하기 화학식 (I)의 화합물의 용도:

(I)
상기 식에서, R은 글리코실기를 나타낸다.
제9항에 있어서, 글리코실기가 디하이드록시아세톤, 글루코스, 갈락토스, 글리세르알데히드, 트레오스, 크실로스, 만노스, 리보스, 리불로스, 크실룰로스, 타가토스, 사이코스(알룰로스), 프룩토스, 소르보스, 람노스, 에리스로스, 에리스룰로스, 아라비노스, 릭소스, 알로스, 알트로스, 굴로스, 이도스 및 탈로스로 구성된 군으로부터 선택되는 단당류인 용도.
필요로 하는 대상에 치료적 유효량이 투여되는, 신장 기능 증대용 약제를 제조하기 위한 하기 화학식 (I)의 화합물의 용도:

(I)
상기 식에서, R은 글리코실기를 나타낸다.
제11항에 있어서, 글리코실기가 디하이드록시아세톤, 글루코스, 갈락토스, 글리세르알데히드, 트레오스, 크실로스, 만노스, 리보스, 리불로스, 크실룰로스, 타가토스, 사이코스(알룰로스), 프룩토스, 소르보스, 람노스, 에리스로스, 에리스룰로스, 아라비노스, 릭소스, 알로스, 알트로스, 굴로스, 이도스 및 탈로스로 구성된 군으로부터 선택되는 단당류인 용도.
필요로 하는 대상에 치료적 유효량이 투여되는, 간세포(hepatocyte) 성장 인자의 발현 증대용 약제를 제조하기 위한 하기 화학식 (I)의 화합물의 용도:

(I)
상기 식에서, R은 글리코실기를 나타낸다.
제13항에 있어서, 글리코실기가 디하이드록시아세톤, 글루코스, 갈락토스, 글리세르알데히드, 트레오스, 크실로스, 만노스, 리보스, 리불로스, 크실룰로스, 타가토스, 사이코스(알룰로스), 프룩토스, 소르보스, 람노스, 에리스로스, 에리스룰로스, 아라비노스, 릭소스, 알로스, 알트로스, 굴로스, 이도스 및 탈로스로 구성된 군으로부터 선택되는 단당류인 용도.
필요로 하는 대상에 치료적 유효량이 투여되는, 간세포 성장 인자 치료로 효과를 얻을 대상에서 질환 및/또는 장애의 치료용 약제를 제조하기 위한 하기 화학식 (I)의 화합물의 용도:

(I)
상기 식에서, R은 글리코실기를 나타낸다.
제15항에 있어서, 글리코실기가 디하이드록시아세톤, 글루코스, 갈락토스, 글리세르알데히드, 트레오스, 크실로스, 만노스, 리보스, 리불로스, 크실룰로스, 타가토스, 사이코스(알룰로스), 프룩토스, 소르보스, 람노스, 에리스로스, 에리스룰로스, 아라비노스, 릭소스, 알로스, 알트로스, 굴로스, 이도스 및 탈로스로 구성된 군으로부터 선택되는 단당류인 용도.
제15항에 있어서, 질환 및/또는 장애가 간 질환, 신장 질환, 폐 질환, 심혈관 질환, 소화계통 질환, 신경계 질환, 골 질환, 관절 질환, 근육 질환, 피부 질환, 압궤 증후군(cursh syndrome), 알레르기성 염증, 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나인 용도.