KR20110048572A - 인간 ｉｌ17 에 대한 항체 및 이의 용도 - Google Patents

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Abstract

단일클론성 항체 3C1 가 결합하는 IL-17 에피토프와 동일한 IL-17 에피토프에 결합하고, CH1 와 CH2 사이의 아미노산 위치 216-240, 바람직하게 아미노산 위치 220-240 의 경첩 부위, 및/또는 CH2 와 CH3 사이의 아미노산 위치 327-331 에서의 제 2 상호-도메인 부위에서 개질된 인간 IgG1 아이소타입의 것인 것을 특징으로 하는 IL-17 에 결합하는 항체는 염증 질환 치료에 유익한 특성을 갖는다.

Description

인간 ＩＬ17 에 대한 항체 및 이의 용도 {ANTIBODIES AGAINST HUMAN IL17 AND USES THEREOF}
본 발명은 인간 IL17A 에 대한 항체 (IL17 항체), 이의 제조 방법, 이 항체를 포함하는 약학적 조성물 및 이의 용도에 관한 것이다.
인간 IL-17A (CTLA-8, Swiss Prot Q16552, 나아가 IL-17 로도 명명됨) 는 MS 의 발병기전에 연루되어 있는 메모리 T 세포의 서브세트 (Th17 로 명명) 에 의해 생성된 염증전 (pro-inflammatory) 사이토카인이다. IL-17A 는 다른 염증성 사이토카인, 케모카인 및 부착 분자들의 유도에서 역할을 맡는다. IL-17A 중화 항체로 동물을 치료하면, 자가면역 뇌척수염의 질병 발생률 및 중증도가 감소한다 (Komiyama, Y. et al., J. Immunol. 177 (2006) 566-573). IL-17A 는 MS 환자의 뇌척수액에서 과발현된다 (Hellings, P.W. et al., Am. J. Resp. Cell Mol. Biol. 28 (2003) 42-50; Matusevicius, D. et al., Multiple Sclerosis 5 (1999) 101-104; WO 2005/051422). 게다가, IL-17A 중화 항체는, 콜라겐 유도 관절염의 마우스 RA 모델에서의 중증도 및 발병율을 감소시키고, 고농도의 IL-17A 가 RA 환자에게서 염증 관절의 윤활액에서 검출될 수 있다 (Ziolkowska, M. et al., J. Immunol. 164 (2000) 2832-2838; Kotake, S. et al., J. Clin. Invest. 103 (1999) 1345-1352; Hellings, P.W. et al., Am. J. Resp. Cell Mol. Biol. 28 (2003) 42-50).
WO　96/17939, US　5,716,623; WO　95/18826; WO　97/15320; WO　99/35276 및 WO　00/69436 WO　95/18826 US　6,274,711, US 6,274,711, WO　97/15320, US　6,063,372, WO 2006/013107 및 WO200802115 은 IL-17A 과 IL-17A 에 대한 항체에 관한 것이다.
본 발명의 개요
본 발명은 중쇄 가변 도메인이 SEQ ID NO: 1 의 CDR3 부위, SEQ ID NO:2 또는 9 의 CDR2 부위 및 SEQ ID NO:3 의 CDR1 부위를 포함하고, 경쇄 가변 도메인이 SEQ ID NO: 4 의 CDR3 부위, SEQ ID NO:5 의 CDR2 부위 및 SEQ ID NO:6 의 CDR1 부위를 포함하는 것을 특징으로 하는 IL-17 에 결합하는 항체를 포함한다. 바람직하게는, 항체는 중쇄 가변 도메인이 SEQ ID NO:7 또는 10 을 포함하는 것을 특징으로 한다. 바람직하게는, 항체는 중쇄 가변 도메인이 SEQ ID NO:7 또는 10 을 포함하고, 경쇄 가변 도메인이 SEQ ID NO:8 을 포함하는 것을 특징으로 한다. 항체가 IL-17 과 결합하고, 상술된 아미노산 서열 및 아미노산 분절이 CH1 과 CH2 사이의 아미노산 위치 216-240, 바람직하게는 아미노산 위치 220-240 의 경첩부위에서 및/또는 CH2 와 CH3 사이의 아미노산 위치 327-331 의 제 2 상호 도메인 (inter-domain) 부위에서 개질된 인간 IgG1 아이소타입의 것인 것을 특징으로 하는 것이 바람직하다. 바람직하게, 항체는 돌연변이 L234A (아미노산 위치 234 에서 류신 대신 알라닌) 및 L235A 를 포함한다. 돌연변이 L234A 및 L235A 을 포함하는 바람직한 중쇄 불변 부위는 SEQ ID NO:11 에 나타낸다.
본 발명에 따른 바람직한 하이브리도마 세포주인 <hIL-17>1A1.3C1 (항체 3C1) 은 Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSMZ), Braunschweig, Germany 에 수탁하였다.
Figure pct00001
상기 세포주로부터 수득가능한 항체 (항체 3C1) 가 본 발명의 바람직한 구현예이다. 본 발명의 추가 구현예는 항체 3C1 (DSM ACC2941) 의 키메라, 인간화 또는 T 세포 에피토프 소실된 항체 변이체이다 . 항체는 특이적으로 IL17 과 결합하며, IC50 값은 1 nM 이하이다. 3C1 의 바람직한 인간화 버젼은 Mab 106 및 Mab 107 이다.
본 발명은 또한 IL-17 과 결합하고, 단일클론성 항체 3C1 이 결합하는 IL-17에피토프와 동일한 IL-17 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체에 관한 것이다. 항체는 적어도 10-8 M-1 내지 10-12 M-1 의 친화도로 IL-17 과 결합하며, CH1 과 CH2 사이의 아미노산 위치 216-240, 바람직하게 아미노산 위치 220-240 의 경첩 부위에서, 및/또는 CH2 과 CH3 사이 아미노산 위치 327-331의 제 2 상호 도메인 부위에서 개질된 인간 IgG1 아이소타입의 것이다. 항체가 돌연변이 L234A (아미노산 위치 234 에서 류신 대신 알라닌) 및 L235A 를 포함하는 인간 IgG1 아이소타입의 것인 것이 바람직하다.
바람직하게, 항체는 인간화 또는 인간 항체이다. 바람직하게, 본 발명에 따른 항체는, 사이노몰거스 원숭이 (cynomolgus) 의 진피 섬유모세포를 이용하고, IC50 값이 1.5 nM 이하인 사이토카인 방출 어세이에서, 100 ng/ml 농도에서, 사이노몰거스 원숭이 IL-17A 유도된 IL-6 및 IL-8 생성을 억제한다.
본 발명의 추가 구현예는 본 발명에 따른 항체를 포함하는 약학적 조성물이다. 바람직하게는, 약학적 조성물은 단일클론성 항체 3C1 이 결합하는 IL-17 에피토프와 동일한 IL-17 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체를 포함한다. 바람직하게 약학적 조성물의 항체는 적어도 10-8 M-1 내지 10-12 M- 1 의 친화도로 IL-17 과 결합되고, CH1 과 CH2 사이의 아미노산 위치 216-240, 바람직하게는 아미노산 위치 220-240 의 경첩 부위에서 및/또는 CH2 과 CH3 사이의 아미노산 위치 327-331 의 제 2 상호 도메인에서 개질된 인간 IgG1 아이소타입의 것이다. 바람직하게, 돌연변이 L234A (아미노산 위치 234 에서 류신 대신 알라닌) 및 L235A 를 포함하는 인간 IgG1 아이소타입의 것이다.
본 발명의 추가 구현예는 약학적 조성물 제조를 위한 본 발명에 따른 항체의 용도이다. 바람직하게, 약학적 조성물은, 단일클론성 항체 3C1 이 결합하는 IL-17 에피토프와 동일한 IL-17 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체를 포함한다. 바람직하게, 약학적 조성물의 항체는 적어도 10-8 M-1 내지 10-12 M- 1 의 친화도로 IL-17 과 결합되며, CH1 과 CH2 사이의 아미노산 위치 216-240, 바람직하게는 아미노산 위치 220-240 의 경첩 부위에서 및/또는 CH2 과 CH3 사이의 아미노산 위치 327-331 의 제 2 상호 도메인에서 개질된 인간 IgG1 아이소타입의 것이다. 바람직하게는, 돌연변이 L234A (아미노산 위치 234 에서 류신 대신 알라닌) 및 L235A 를 포함하는 인간 IgG1 아이소타입의 것이다.
본 발명의 추가 구현예는 다발 경화증, 류마티스 관절염, 건선, 크론병, 만성 폐쇄폐병 (COPD), 천식, 및 이식 거부 치료를 위한 본 발명에 따른 항체의 용도이다. 본 발명의 추가 구현예는 본 발명에 따른 항체를 포함하는 약학적 조성물의 제조 방법이다. 바람직하게, 약학적 조성물은 단일클론성 항체 3C1 이 결합하는 IL-17 에피토프와 동일한 IL-17 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체를 포함한다. 바람직하게, 약학적 조성물의 항체는 적어도 10-8 M-1 내지 10-12 M- 1 의 친화도로 IL-17 과 결합하며, CH1 과 CH2 사이의 아미노산 위치 216-240, 바람직하게는 아미노산 위치 220-240 의 경첩 부위에서 및/또는 CH2 과 CH3 사이의 아미노산 위치 327-331 의 제 2 상호 도메인에서 개질된 인간 IgG1 아이소타입의 것이다. 바람직하게는, 항체는 돌연변이 L234A (아미노산 위치 234 에서 류신 대신 알라닌) 및 L235A 를 포함하는 인간 IgG1 아이소타입의 것이다.
본 발명의 추가 구현예는 SEQ ID NO:1 의 중쇄 CDR3 부위 및 바람직하게는 IgG1 중쇄 불변 도메인에 돌연변이 L234A 및 L235A 를 포함하는 것을 특징으로 하는, IL-17 과 결합하는 항체의 중쇄를 인코딩 (encoding) 하는 핵산이다. 바람직하게, 항체는 추가로 SEQ ID NO:2 또는 9 의 중쇄 CDR2 부위 및 SEQ ID NO:3 의 CDR1 부위를 포함한다. 본 발명의 추가 구현예는 본 발명에 따른 경쇄 CDR3 부위 및 바람직하게는 IgG1 중쇄 불변 도메인 내 돌연변이 L234A 및 L235A 를 포함하는 것을 특징으로 하는 IL-17 과 결합하는 항체의 경쇄를 인코딩하는 핵산이다. 바람직하게, 항체는 추가로 SEQ ID NO:2 또는 9 의 중쇄 CDR2 부위 및 SEQ ID NO:3 의 CDR1 부위를 포함한다. 본 발명의 추가 구현예는 SEQ ID NO: 7 또는 10 의 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO:8 의 가변 경쇄 도메인 및 바람직하게는 중쇄 IgG1 불변 도메인 내 돌연변이 L234A 및 L235A 를 포함하는 것을 특징으로 하는 본 발명에 따른 항체를 인코딩하는 핵산이다.
본 발명에 따른 항체는 불변 쇄가 인간 기원의 것인 것을 특징으로 한다. 이러한 불변 쇄는 당업계에 익히 공지되어 있으며, 예를 들어 Kabat (예컨대, Johnson, G. 및 Wu, T.T., Nucleic Acids Res. 28 (2000) 214-218 참조) 에 의해 기술되어 있다. 예를 들면, 유용한 인간 중쇄 불변 부위는 돌연변이 L234A 및 L235A 를 갖는 SEQ ID NO: 11 의 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들어, 유용한 인간 경쇄 불변 부위는 SEQ ID NO: 12 의 카파-경쇄 불변 부위의 아미노산 서열을 포함한다. 항체가 마우스 기원의 것이고 Kabat (예, Johnson, G. 및 Wu, T.T., Nucleic Acids Res. 28 (2000) 214-218 참고) 에 따른 마우스 항체의 항체 가변 서열 프레임을 포함하는 것이 추가로 바람직하다.
본 발명에 따른 항체는 특히 CCD25-SK 세포로부터 인터류킨-8 (IL-8) 의 방출을 억제하는 것을 특징으로 한다. 본 발명에 따른 항체는 0.5 nM (16 ng/ml) 이하의 IC50 값으로 특이적으로 IL17-매개된 세포 활성화를 중화한다. 본 발명에 따른 항체는 특이적으로 1 nM 이하의 IC50 값으로 특이적으로 IL17 과 결합한다.
본 발명에 따른 항체는 인간 아이소타입 IgG1 의 것이 바람직하다. 바람직한 γ1 중쇄 불변 부위는 SEQ ID NO:11, 및 L234A 와 L235A 돌연변이가 없는 SEQ ID NO:11 에 나타냈다.
본 발명에 따른 항체는 바람직하게 인간 보체 인자 C1q 를 결합하지 않고, 그리하여 CDC 효과기 (effector) 기능을 피하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 항체는 바람직하게 CH1 과 CH2 사이의 아미노산 위치 216-240, 바람직하게는 아미노산 위치 220-240 의 경첩 부위에서 및/또는 CH2 과 CH3 사이의 아미노산 위치 327-331 의 제 2 상호 도메인에서 개질된 인간 IgG1 아이소타입의 것이다. 본 발명에 따른 항체는 바람직하게 L234 (아미노산 위치 234 에서 류신), L235, D270, N297, E318, K320, K322, P331, 및/또는 P329 (EU 지침에 따라 번호부여) 에서 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 아이소타입의 것인 것을 특징으로 한다. 바람직하게 돌연변이 L234A (아미노산 위치 234 에서 류신 대신 알라닌) 및 L235A 를 포함하는 인간 IgG1 아이소타입의 것이다.
본 발명은 추가로 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 핵산을 발현할 수 있는 본 발명에 따른 상기 핵산을 함유하는 발현 벡터, 및 이러한 항체의 재조합체 생성을 위한 상기 벡터를 함유하는 숙주 세포를 제공한다. 본 발명은 추가로 본 발명에 따른 벡터를 포함하는 원핵 또는 진핵 숙주 세포를 포함한다. 본 발명은 추가로 본 발명에 따른 재조합 인간 또는 인간화 항체의 제조 방법을 포함하는데, 이 방법은 원핵 또는 진핵 숙주 세포 내에서 본 발명에 따른 핵산을 발현하고, 상기 항체를 상기 세포 또는 세포 배양 상청액으로부터 회수하는 것을 특징으로 한다. 본 발명은 또한 그러한 재조합 방법으로 수득가능한 항체를 포함한다.
본 발명에 따른 항체는 IL-17 타겟팅 요법을 필요로 하는 환자에게 이롭다. 본 발명에 따른 항체는 면역질환, 특히 다발 경화증, 류마티스 관절염, 건선, 크론병, 만성 폐쇄폐병 (COPD), 천식, 또는 이식 거부를 앓고 있는 환자에게 이로운, 신규성 및 진보성을 지닌다. 본 발명에 따른 항체는 치료된 환자의 포도구균 및 장내 세균 감염에 대한 감수성 (susceptability) 을 야기하지 않는다. 본 발명은 추가로 다발 경화증, 류마티스 관절염, 건선, 크론병, 만성 폐쇄폐병 (COPD), 천식, 또는 이식 거부를 앓고 있는 환자의 치료 방법을 제공하는데, 이는 상기 질환으로 진단받은 환자 (그리하여, 이러한 치료를 필요로 하는 환자) 에게 유효량의 본 발명에 따른 IL-17 과 결합하는 항체를 투여하는 것을 포함한다. 약학적 조성물로 항체를 투여하는 것이 바람직하다. 본 발명의 추가 구현예는,다발 경화증, 류마티스 관절염, 건선, 크론병, 만성 폐쇄폐병 (COPD), 천식, 또는 이식 거부를 앓고 있는 환자의 치료 방법으로, 이는 상기 환자에게 본 발명에 따른 항체를 투여하는 것을 특징으로 한다. 본 발명은 또한 다발 경화증, 류마티스 관절염, 건선, 크론병, 만성 폐쇄폐병 (COPD), 천식, 또는 이식 거부를 앓고 있는 환자의 치료를 위한, 및 본 발명에 따른 약학적 조성물의 제조를 위한, 본 발명에 따른 항체의 용도를 포함한다. 게다가, 본 발명은 본 발명에 따른 약학적 조성물의 제조 방법을 포함한다.
본 발명은 본 발명에 따른 항체를, 임의로는 약학적 용도의 항체 제형물에 유용한 버퍼 및/또는 보조제 (adjuvant) 와 함께 포함하는 약학적 조성물을 추가로 포함한다. 본 발명은 약학적으로 허용가능한 담체 내 본 발명에 따른 항체를 포함하는 약학적 조성물을 추가로 제공한다. 한 구현예에서, 약학적 조성물은 제조 성형품 또는 키트에 포함될 수 있다.
본 발명의 상세한 설명
용어 "항체" 는 전체 항체에 제한되지 않고, 항체 분절을 포함하는 다양한 형태의 항체 구조를 포함한다. 본 발명에 따른 항체는, 본 발명에 따른 특징적인 특성이 보유되는 한, 인간화 항체, 키메라 항체 또는 나아가 유전자 조작 항체가 바람직하다. "항체 분절" 은 전장 항체의 일부, 바람직하게는 그의 가변 도메인, 또는 적어도 그의 항원 결합 부위를 포함한다. 항체 분절의 예에는 항체 분절로부터 형성된 디아바디 (diabody), 단일-쇄 항체 분자, 및 다중특이성 항체가 포함된다. scFv 항체가, 예를 들어, 문헌 [Huston, J.S., Methods in Enzymol. 203 (1991) 46-52] 에 기술되어 있다. 또한, 항체 분절은, VH 도메인의 특성, 즉 VL 도메인과 함께 어셈블링 가능한 특성, 또는 IL-17 에 결합하는 VL 도메인의 특성, 즉 VH 도메인과 함께 기능적 항원 결합 부위에 어셈블링 가능한 특성을 가져, 이로 인해 본 발명에 따른 항체 특성을 제공하는 단일 쇄 폴리펩타이드를 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "단일클론성 항체" 또는 "단일클론성 항체 조성물" 은 단일 아미노산 조성물의 항체 분자 제조물을 지칭한다. 용어 "인간화 항체" 란, 골격부 (framework) 및/또는 "상보성 결정 부위" (CDR) 가 모 면역글로불린의 것과 비교했을 때 상이한 종의 면역글로불린의 CDR 을 포함하도록 개질된 항체를 지칭한다. 바람직한 구현예에서, 마우스 CDR 을 인간 항체의 골격부에 이식시켜 "인간화 항체" 를 제조한다. 예를 들어, 문헌 [Riechmann, L., et al., Nature 332 (1988) 323-327; 및 Neuberger, M.S., et al., Nature 314 (1985) 268-270] 을 참조한다.
본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "IL-17 로의 결합" 이란, ELISA 결합 어세이에서 항체의 인간 IL-17 과의 결합을 의미한다. 결합은, 항체가 항체 농도 1 ㎍/ml 에서, 7:1 이상의 S/N (신호/잡음) 비를 일으킬 때 발견된다. 본 발명에 따른 항체는 인간 IL-17A 와 특이적으로 결합하고, IC50 값은 1nM (0.15 ㎍/ml) 이하이다. 항체는 IL-17 B, C, D, E, 및 F (7:1 미만의 S/N (신호/잡음) 비) 와는 결합하지 않으므로, 그리하여 IL-17A 와 특이적으로 결합한다. IL-17 A 및 변이체와의 결합은 고정된 IL-17 또는 변이체를 이용하여 ELISA 로 수행한다.
용어 "에피토프" 란, 특이적으로 항체에 결합할 수 있는 단백질 결정인자를 의미한다. 에피토프는 통상 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자들의 화학적으로 활성인 표면 그룹으로 이루어지며, 통상 에피토프는 특이적인 3 가지의 3 차 구조 특성 및 특이적인 전하 특성을 지닌다. 입체형태적 및 비(非)입체형태적 에피토프는 후자가 아닌 전자로의 결합이 변성 용매의 존재하에서 사라지는 점으로 인해 구별된다. 바람직하게도, 본 발명에 따른 항체는 변성 IL-17 이 아닌 천연 IL-17 에 특이적으로 결합한다. 본 발명에 따른 IL-17 항체는, 항체 Mab317 이 결합하는 IL-17 상 동일한 에피토프와 결합한다. 본 발명의 IL-17 항체의 에피토프 결합 특성은 당업계에 공지된 기술을 이용하여 측정할 수 있다. IL-17 항체는, 항체 Mab317 의 IL-17 과의 결합을 저지하는 시험 항체의 능력을 측정하는 시험관 내 가교차단 (crossblocking) 결합 어세이를 통해 시험한다. 15% 이상 시험 항체의 항체 Mab317 에 의한 전치가 존재하는 경우에는, 에피토프는 근접해 있다.
본원에서 사용되는 바와 같은 "가변 도메인" (경쇄의 가변 도메인 (VL), 중쇄의 가변 도메인 (VH)) 은, 항원에 대한 항체 결합에 직접적으로 관련되는 각각의 경쇄 및 중쇄 도메인 한 쌍을 말한다. 가변의 경쇄 및 중쇄 도메인은 동일한 일반적인 구조를 가지며, 각 도메인은 서열이 광범위하게 보전되어 있으면서 3 개의 "고가변 영역" (또는 상보성 결정 부위, CDR) 에 의해 연결되는 4 개의 골격부 (FR) 부위를 포함한다. 골격부 부위는 β-시트 입체형태를 취하고, CDR은 β-시트 구조를 연결하는 루프를 형성할 수 있다. 각 쇄에서의 CDR은 그의 3 차원 구조로 골격부 부위에 의해 유지되며, 다른 쇄에 있는 CDR 과 함께 항원 결합 부위를 형성한다. 항체의 중쇄 및 경쇄 CDR3 부위는 본 발명에 따른 항체의 결합 특이성/친화성에 특히 중요한 역할을 하므로 이는 본 발명의 추가적인 대상이다.
본원에서 사용되는 경우, 용어 "항체의 항원-결합부" 란, 항원-결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다. 항체의 항원-결합부는 "상보성 결정 부위" 또는 "CDR" 의 아미노산 잔기를 포함한다. "골격부" 또는 "FR" 부위는, 본원에서 정의된 바와 같은 고가변부 잔기 외의 상기 가변 도메인 부위이다. 따라서, 항체의 경쇄 및 중쇄의 가변 도메인은 N- 내지 C-말단 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4 를 포함한다. 특히, 중쇄의 CDR3 는 항원 결합에 가장 많이 기여하고, 항체의 특성을 한정짓는 부위이다. CDR 및 FR 부위는 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)] 의 표준 정의 및/또는 "고가변 루프" 유래의 잔기에 따라 결정된다.
본 출원에서 사용되는 바와 같은 용어 "아미노산" 은, 알라닌 (3 자리 문자 코드: ala, 1 자리 문자 코드: A), 아르기닌 (arg, R), 아스파라긴 (asn, N), 아스파르트산 (asp, D), 시스테인 (cys, C), 글루타민 (gln, Q), 글루탐산 (glu, E), 글리신 (gly, G), 히스티딘 (his, H), 이소류신 (ile, I), 류신 (leu, L), 리신 (lys, K), 메티오닌 (met, M), 페닐알라닌 (phe, F), 프롤린 (pro, P), 세린 (ser, S), 트레오닌 (thr, T), 트립토판 (trp, W), 티로신 (tyr, Y), 및 발린 (val, V) 을 포함하는 천연 발생 카르복시 α-아미노산의 군을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "핵산" 또는 "핵산 분자" 는 DNA 분자 및 RNA 분자를 포함하는 것으로 의도된다. 핵산 분자는 외가닥 또는 이중가닥일 수 있으나, 이중가닥 DNA 인 것이 바람직하다. 핵산은 이것이 또 다른 핵산과 작용 관계에 처하게 되는 경우, "작동적으로 (operably) 연결"된다. 예를 들어, 예비-서열 또는 분비 리더 (secretory leader) 용 DNA 는 이것이 폴리펩타이드의 분비에 관여하는 프레단백질 (preprotein) 로서 발현되는 경우, 상기 폴리펩타이드를 위한 DNA 에 작동적으로 연결되거나; 프로모터 또는 증강자 (enhancer) 는 이것이 서열의 전사에 영향을 미치는 경우, 코딩 서열에 작동적으로 연결되거나; 또는 리보솜 결합 부위는, 이것이 번역을 촉진시키도록 위치되는 경우 코딩 서열에 작동적으로 연결된다. 일반적으로 "작동적으로 연결된" 이란, 연결되어 있는 DNA 서열들이 상호 선형 상에 있고, 분비 리더의 경우, 인접하면서도 리딩 프레임 내에 있음을 의미한다. 그러나, 증강자는 인접되어 있을 필요는 없다. 가까운 제한 부위에서의 결찰로써 연결이 이루어진다. 그러한 부위가 존재하지 않는 경우에는, 합성 올리고뉴클레오티드 어댑터 또는 링커가 통상적인 절차에 따라 사용된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "세포", "세포주" 및 "세포 배양물" 이라는 표현들은 상호교환하여 사용할 수 있고, 이러한 모든 지명은 자손을 포함한다. 따라서, 단어 "형질전환주" 및 "형질전환된 세포" 에는, 는 원래의 주체 세포, 및 이전 (transfer) 의 수에 상관없이 그로부터 유래된 배양물을 포함한다. 계획적 또는 우연적인 돌연변이로 인해, 모든 자손은 DNA 함량에 있어서 정확하게 동일하지 않을 수 있음이 또한 자명하다. 원래 형질전환된 세포내에서 스크리닝된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 변이체 자손이 포함된다.
항체의 "Fc 부분"은 항체의 항원으로의 결합에 직접적으로 관여하지 않으나, 다양한 효과기 기능을 나타낸다. "항체의 Fc 부분"은 당업자에게 익히 공지되어 있으며 항체의 파파인 절단을 기초로 정의된다. 항체 또는 면역글로불린은, 이의 중쇄의 불변 부위 아미노산 서열에 따라, IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM 으로 나뉘어지고, 이들 중 몇몇은 하위부류 (아이소타입), 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4, IgA1 및 IgA2 로 추가 나뉘어질 수 있다. 중쇄 불변 부위에 따라, 상이한 부류의 면역글로불린은 α, δ, ε, γ, 및 μ 로 각각 불리운다. 항체의 Fc 부분은 보체 활성화, C1q 결합 및 Fc 수용체 결합에 따라 ADCC (항체-의존 세포-매개 세포독성) 및 CDC (보체-의존 세포독성) 에 직접 관여한다. 보체 활성화 (CDC) 는 보체 인자 C1q 의 대부분의 IgG 항체 하위부류의 Fc 부분과의 결합에 의해 개시된다. 보체계에 대한 항체의 영향은 특정한 조건에 따라 좌우되는 반면, C1q 와의 결합은 Fc 부분 내 정의된 결합 부위에 의해 야기된다. 이러한 Fc 부분 결합 부위는 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어 문헌 [Boakle, R.J. et al., Nature 282 (1979) 742-743; Lukas, T.J. et al., J. Immunol. 127 (1981) 2555-2560; Brunhouse, R. 및 Cebra, J.J., Mol. Immunol. 16 (1979) 907-917　; Burton, D.R. et al., Nature 288 (1980) 338-344　; Thommesen, J.E. et al., Mol. Immunol. 37 (2000) 995-1004　; Idusogie, E.E. et al., J. Immunol.164 (2000) 4178-4184　; Hezareh, M. et al., J. Virology 75 (2001) 12161-12168　; Morgan, A. et al., Immunology 86 (1995) 319-324; EP 0307434] 에 기술되어 있다. 이러한 결합 부위는 예를 들어 L234, L235, D270, N297, E318, K320, K322, P331, 및 P329 (Kabat 의 EU 지침에 따라 번호부여, 하기 참조) 이다. 하위 부류 IgG1, IgG2, 및 IgG3 의 항체는 통상적으로 보체 활성화 및 C1q 결합을 나타내는 반면에, IgG4 는 보체계를 활성화하지 않으며, C1q 을 결합하지 않는다.
본 발명에 따른 항체는, 하부 부류 IgG1 의 인간 항체의 Fc 부분인, 인간 기원의 Fc 부분을 포함한다. 본 발명에 따른 항체의 Fc 부분에 있어서, 바람직하게도 어떠한 하기에 정의된 바와같은 C1q 결합도 검출할 수 없다.
따라서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체가 IL-17 을 결합하고, 인간 기원의 Fc 부분을 포함하며, 인간 보체 인자 C1q 를 결합하지 않아 CDC 효과기 기능을 막는 것을 특징으로 하는 상기 항체를 포함한다.
바람직하게, 본 발명에 따른 항체는, L234, L235, 및/또는 D265 에서 돌연변이를 갖는 인간 IgG1 또는 IgG2 하위부류의, Fcγ 수용체 결합에 관한 것이고/거나, PVA236 돌연변이를 포함한다. 돌연변이 L234A, L235A, L235E, 및/또는 PVA236 (PVA236 이란, IgG1 의 아미노산 위치 233 내지 236 으로부터의 아미노산 서열 ELLG (1 자리수 문자 아미노산 코드로 나타냄) 또는 IgG4 의 EFLG 가 PVA 로 대체됨을 의미함) 가 바람직하다. 그리하여, 본 발명은 본 발명에 따른 항체가 L234, L235, D270, N297, E318, K320, K322, P331 및/또는 P329 에서 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 인간 하부 부류 IgG1 의 항체인 것을 특징으로 하는 본 발명에 따른 항체를 제공한다. 한 구현예에서, 항체는 인간 항체이다. 또 다른 구현예에서, 항체는 인간화 항체이다. 한 구현예에서, 본 발명은 인간 기원 유래의 Fc 부분을 포함하며, L234, L235, D270, N297, E318, K320, K322, P331 에서 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 인간 하부 부류 IgG1 의 항체인 것을 특징으로 하는 본 발명에 따른 항체를 제공하는데, 이때 상기 항체는 BIAcore 어세이에서 10-8 M 미만의 KD 값으로 IL-17 과 결합한다. 또 다른 구현예에서, KD 범위는 10 -11 내지 10-9 M 이다.
C1q 결합은 [Idusogie, E.E., et al., J. Immunol. 164 (2000) 4178-4184] 에 따라 측정가능하다. 본 발명에 따른 C1q 비(非)결합은 ELISA 플레이트가 상이한 농도의 항체로 코팅된 어세이에서라면, 인간 C1q 를 첨가하는 것을 특징으로 한다. C1q 결합은 인간 C1q 에 대한 항체 후, 퍼옥시다아제 기질 ABTS®(2,2'-아지노-디-[3-에틸벤즈티아졸린술포네이트]) 로의 퍼옥시다아제-라벨링된 콘쥬게이트 검출에 의해 검출한다. 본 발명에 따른 C1q 비결합은 시험 항체에 있어서, 405 nm 에서의 광학 밀도 (OD) 가 10 μg/ml 의 항체 농도에서 0.05 미만인 경우에 발견된다.
본 발명에 따른 항체는 불변 쇄가 인간 기원의 것인 것을 특징으로 하는 것이 바람직하다. 이러한 불변 쇄는 당업계에 익히 공지되어 있으며, 예를 들면 Kabat 에 의해 기술되어 있다 (Johnson, G., 및 Wu, T.T., Nucleic Acids Res. 28 (2000) 214-218 참고). 예를 들면, 유용한 인간 중쇄 불변 부위는 SEQ ID NO: 23 을 포함한다. 예를 들면, 유용한 인간 경쇄 불변 부위는 SEQ ID NO: 12 의 카파-경쇄 불변 부위의 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명의 추가 구현예는 본 발명에 따른 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 핵산이다.
본 발명은 치료를 필요로 하는 환자의 치료 방법을 포함하는데, 이는 상기 환자에게 치료학적 유효량의 본 발명에 따른 항체를 투여하는 것을 특징으로 한다. 본 발명은 치료를 위한 본 발명에 따른 항체의 용도를 포함한다. 본 발명은 염증 및 혈전 장애의 예방 및 치료용 약제 제조를 위한 본 발명에 따른 항체의 용도를 포함한다. 본 발명은 염증 질환, 바람직하게는 만성 폐쇄폐병 (COPD), 다발 경화증, 및 류마티스 관절염 치료를 위한 본 발명에 따른 항체의 용도를 포함한다.
본 발명에 따른 항체는 또한 본 발명에 따른 항체의 상기-언급된 특징에 영향을 끼치지 않거나 또는 변경시키지 않는 뉴클레오티드 및 아미노산 서열 개질물인 "보존적 서열 개질" 을 갖는 항체 (변이체 항체) 를 포함한다. 상기 개질물은 위치-특이적 돌연변이 유발 (site directed mutagenesis) 및 PCR-매개 돌연변이 유발과 같은 당업계에 공지된 표준 기술로 도입가능하다. 보존적 아미노산 치환은, 상기 아미노산 잔기를 유사 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것을 포함한다. 유사 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 당업계에 정의되어 있다. 이들 패밀리는 염기성 측쇄 (예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 무전하 극성 측쇄 (예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄 (예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타-분지형 측쇄 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘) 를 갖는 아미노산을 포함한다. 따라서, 인간 항-IL17 항체 내 예측된 비필수 아미노산 잔기는 동일한 측쇄 패밀리로부터의 또다른 아미노산 잔기로 대체할 수 있는 것이 바람직하다. 이에 따라 본원에서 "변이체" 항-IL17 항체란, "모" 항-IL17 항체의 아미노산 서열과, 그 모 항체의 하나 이상의 가변 영역에서, 10 개 이하, 바람직하게는 약 2 내지 약 5 개의 부가, 결손 및/또는 치환을 통해, 아미노산 서열에서 차이를 보이는 분자를 지칭한다. 아미노산 치환이란, 문헌 [Riechmann, L., et al., Nature 332 (1988) 323-327 및 Queen, C., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 (1989) 10029-10033] 에 기술된 바와 같은 분자 모델링에 기초한 돌연변이 유발로 수행될 수 있다.
본 발명의 추가 구현예는, Fcγ 수용체 및/또는 C1q 에 결합하지 않는 IL-17 에 대한 항체의 제조 방법인데, 이는 IL-17 에 결합하는 인간 IgG1 형 항체의 중쇄를 코딩하는 핵산 서열을, 상기 개질된 항체가 C1q 및/또는 Fcγ 수용체에 결합하지 않는 방식으로 개질시키고, 상기 개질된 핵산 및 상기 항체의 경쇄를 인코딩하는 핵산을 발현 벡터에 삽입시킨 후, 상기 벡터를 진핵 숙주 세포에 삽입하여, 인코딩된 단백질을 발현시키고 숙주 세포 또는 그 상청액에서 회수하는 것을 특징으로 하는 방법이다.
서열에 대한 동질성 또는 상동성이란, 본원에서는, 최대% 의 서열 동질성을 획득하기 위해, 필요하다면, 서열을 배열하고 간극을 도입한 후, 모 서열과 동일한 후보 서열 내 아미노산 잔기의 백분율로서 정의된다. 항체 서열로의 N-말단, C-말단 또는 내부 확대, 결손 또는 삽입 중 어떤 것도 서열 동질성 또는 상동성에 영향을 미치는 것으로 해석되어서는 안된다. 변이체는 인간 IL-17 에 결합하는 능력을 보유하며, 바람직하게는, 모 항체의 것보다 우수한 특성을 가진다. 예를 들어, 변이체는 처리 동안 부작용이 감소될 수 있다.
본원에서 "모" 항체란, 항체 3C1 의 CDR 을 포함하고 바람직하게는 변이체 제조에 사용된다. 바람직하게는, 모 항체는 인간 골격부 부위를 가지며, 존재한다면, 인간 항체 불변 부위 또는 인간 항체 불변 도메인을 가진다. 예를 들어, 모 항체는 인간화 또는 인간 항체일 수 있다.
본 발명에 따른 항체는 재조합 수단으로 제조되는 것이 바람직하다. 이러한 방법은 당업계에 널리 공지되어 있으며, 이는 원핵 또는 진핵 세포내에서 단백질을 발현시키고 후속하여 항체 폴리펩타이드를 단리하고 통상 약학적으로 허용가능한 순도로 정제하는 것을 포함한다. 상기 단백질 발현을 위해서는, 경쇄 및 중쇄 또는 이의 분절을 인코딩하는 핵산을 표준 방법으로 발현 벡터에 삽입한다. 발현은, CHO 세포, NSO 세포, SP2/0 세포, HEK293 세포, COS 세포, 효모, 또는 E. coli 세포와 같은 적절한 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 수행되며, 항체는 상기 세포 (상청액으로부터 또는 세포 분해 후) 에서 회수된다. 항체의 재조합체 제조는 당업계에 익히 공지되어 있으며, 예를 들어, [Makrides, S.C., Protein Expr. Purif. 17 (1999) 183-202; Geisse, S., et al., Protein Expr. Purif. 8 (1996) 271-282; Kaufman, R.J., Mol. Biotechnol. 16 (2000) 151-160; Werner, R.G., Drug Res. 48 (1998) 870-880] 의 종설에 기술되어 있다. 항체는 전 세포, 세포 분해물, 또는 부분적으로 정제되거나 또는 실질적으로 순수한 형태로 존재할 수 있다. 정제는 기타 세포 성분 또는 기타 오염물, 예를 들어 기타 세포성 핵산 또는 단백질을 제거하기 위해, 컬럼 크로마토그래피를 비롯한 표준 기법을 통해 수행된다. 문헌 [Ausubel, F., et al., ed. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York (1987)] 을 참조한다. NSO 세포 내 발현은 예를 들어 문헌 [Barnes, L.M., et al., Cytotechnology 32 (2000) 109-123; Barnes, L.M., et al., Biotech. Bioeng. 73 (2001) 261-270] 에 기술되어 있다. 일과성 발현은 예를 들어, 문헌 [Durocher, Y., et al., Nucl. Acids. Res. 30 (2002) E9] 에 기술되어 있다. 가변 도메인의 클로닝은 문헌 [Orlandi, R., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 (1989) 3833-3837; Carter, P., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 (1992) 4285-4289; Norderhaug, L., et al., J. Immunol. Methods 204 (1997) 77-87] 에 기술되어 있다. 바람직한 일과성 발현 시스템 (HEK 293) 은 문헌 [Schlaeger, E.-J. 및 Christensen, K., in Cytotechnology 30 (1999) 71-83] 및 [Schlaeger, E.-J., J. Immunol. Methods 194 (1996) 191-199] 에 기술되어 있다. 단일클론성 항체는 예를 들어, 단백질 A-세파로오스, 수산화인회석 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 또는 친화 크로마토그래피와 같은 통상의 면역글로불린 정제 절차를 통해 배양 배지에서 적절하게 분리한다. 단일클론성 항체를 인코딩하는 DNA 및 RNA 는 통상의 절차를 이용하여 용이하게 단리 및 서열화한다. 하이브리도마 세포가 이러한 DNA 및 RNA 의 공급원으로서 역할을 할 수 있다. 일단 단리된다면, DNA 를 발현 벡터에 삽입할 수 있고, 그 다음, 면역글로불린 단백질을 달리 생성하지 않는 HEK 293 세포, CHO 세포, 또는 골수종 세포와 같은 숙주 세포에 트랜스펙션할 수 있어, 숙주 세포 내 재조합 단일클론성 항체를 합성할 수 있다.
인간 IL-17 항체의 아미노산 서열 변이체는, DNA 를 인코딩하는 항체로 적절히 변경한 뉴클레오티드를 도입하거나, 또는 펩타이드 합성으로 제조된다. 그러나, 그러한 개질은 예컨대 상술한 바와 같이 매우 제한된 범위 내에서만 수행가능하다. 예를 들어, 개질은 IgG 아이소타입 및 에피토프 결합과 같은 상술한 항체의 특성을 바꾸지 않으나, 재조합체 생산율, 단백질 안정성을 개선할 수 있거나 또는 정제를 용이하게 할 수 있다. 항-IL-17 항체의 적절한 입체형태를 유지하는데 관여하지 않는 임의의 시스테인 잔기는 또한 일반적으로 세린으로 치환되어 분자의 산화 안정성을 개선할 수 있고, 비정상의 가교결합을 방지할 수 있다. 반대로, 시스테인 결합(들) 이 항체에 부가되어 이의 안정성을 개선할 수 있다 (특히 항체가 Fv 분절과 같은 항체 분절인 경우). 또 다른 유형의 항체의 아미노산 변이체는 그 항체의 본래 글리코실화 패턴을 변경한다. "변경" 한다는 것의 의미란, 항체 내에서 발견되는 하나 이상의 탄수화물 부분을 제거함 및/또는 항체 내에 존재하지 않는 하나 이상의 글리코실화 부위를 부가함이다. 항체의 글리코실화는 통상 N-연결된다. N-연결된이란, 아스파라긴 잔기의 측쇄에 탄수화물 부분이 부착함을 의미한다. 트리펩타이드 서열인 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌 (여기서, X 는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산임) 은 아스파라긴 측쇄에 대한 탄수화물 부분의 효소적 부착의 인지 서열이다. 따라서, 폴리펩타이드 내 이들 트리펩타이드 서열들 중 어느 하나의 존재가 잠재적인 글리코실화 부위를 형성한다. 항체에 글리코실화 부위를 부가하는 것은 하나 이상의 상술한 트리펩타이드 서열 (N-연결된 글리코실화 부위) 을 포함하도록 아미노산 서열을 변경함으로써 알맞게 달성된다.
항-IL-17 항체의 아미노산 서열 변이체를 인코딩하는 핵산 분자는 당업계에 공지된 다양한 방법들로 제조된다. 이들 방법에는, 이에 제한되는 것은 아니나, (천연 발생 아미노산 서열 변이체의 경우) 천연원으로부터의 단리, 또는 올리고뉴클레오티드-매개 (또는 위치-특이적) 돌연변이 유발, PCR 돌연변이 유발, 및 미리 제조된 변이체 또는 인간화 항-IL-17 항체의 비변이체 버젼의 카세트 돌연변이 유발에 의한 제조가 포함된다.
다른 유형의 항체의 공유결합 개질에는, 예를 들면 US 특허 4,640,835; 4,496,689; 4,301,144; 4,670,417; 4,791,192; 4,179,337 에 나타난 방식으로 예를 들면 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜 또는 폴리옥시알킬렌 등 다양한 비단백질성 중합체 중 하나와의 연결을 포함한다.
본 발명에 따른 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 프로모터, 번역 개시부, 불변 부위, 3' 미번역부, 폴리아데닐화 및 전사 종료의 서열과 조합되어 발현 벡터 구축물을 형성한다. 중쇄 및 경쇄 발현 구축물은 단일 벡터로 조합, 숙주 세포로 공동-트랜스펙션, 연속 트랜스펙션 또는 별도로 트랜스펙션된 다음, 융합되어, 상기 양 쇄를 발현하는 단일 숙주 세포를 형성할 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 조성물, 예를 들어 본 발명의 단일클론성 항체, 또는 그의 항원-결합 부분 중 하나 또는 조합물을 함유하고 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 제형되는 약학적 조성물을 제공한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "약학적으로 허용가능한 담체" 에는, 생리학적으로 상용성인 임의의 그리고 모든 용매, 분산액 배지, 코팅제, 항박테리아제 및 항균제, 등장성 및 흡수/재흡수 지연제 등이 포함된다. 바람직하게는, 담체는 주사 또는 주입에 적합하다. 본 발명에 따른 조성물은 당업계에 공지된 각종 방법으로 투여될 수 있다. 당업자가 잘 알다시피, 투여 경로 및/또는 방식은 원하는 결과에 따라 다양할 것이다. 약학적으로 허용가능한 담체에는 멸균 주사용액 또는 분산액의 제조를 위한 멸균 수용액 또는 분산액 및 멸균 분말이 포함된다. 약학적 활성 물질을 위한 상기 매질 및 제제의 사용은 당업계에 공지되어 있다. 담체는 물 뿐 아니라, 예를 들어, 등장 완충 식염수일 수 있다. 선택되는 투여 경로와 관계없이, 적절한 수화 형태로 사용될 수 있는 본 발명의 화합물, 및/또는 본 발명의 약학적 조성물은 당업자에게 공지된 통상의 방법으로 약학적으로 허용가능한 투여 형태로 제형화된다. 본 발명의 약학적 조성물 내 활성 성분의 실제 투여량 수준은, 환자에게 독성을 나타내지 않게 하면서, 특정한 환자, 조성물 및 투여 방식에 대해서 원하는 치료적 반응을 얻게 하는데 유효한 활성 성분의 양 (유효량) 을 수득하도록 다양할 수 있다. 선택된 투여량 수준은 활용되는 본 발명의 특정 조성물, 그의 에스테르, 염 또는 아미드의 활성도, 투여 경로, 투여 시간, 활용되는 특정 화합물의 배출률, 활용되는 특정 조성물과 조합되어 사용되는 기타 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료받는 환자의 나이, 성별, 체중, 병태, 일반 건강 상태, 이전의 병력, 의학 분야에 익히 공지된 유사한 인자들을 포함하는 각종 약물동력학적 인자에 좌우될 것이다.
본 발명은 다발 경화증, 류마티스 관절염 (RA), 건선, 크론병, 만성 폐쇄폐병 (COPD), 천식, 및 이식 거부를 앓는 환자의 치료를 위한 본 발명에 따른 항체의 용도를 포함한다.
본 발명의 추가 구현예는 항-IL-17 항체, 바람직하게는 본 발명에 따른 항체의, 류마티스 관절염을 앓고 있는 환자를 치료하기 위한 용도로, 상기 환자는 TNF 안타고니스트, 항-CD20 항체, CTLA4Ig 또는 항-IL6 항체를 이용하는 치료에 반응하지 않거나 적절히 반응한다. 본 발명의 추가 구현에는 항-IL-17 항체, 바람직하게는 본 발명에 따른 항체의, 류마티스 관절염을 앓고 있는 환자의 치료용 약제 제조를 위한 용도로, 상기 환자는 TNF 안타고니스트, 항-CD20 항체, CTLA4Ig 또는 항-IL6 항체를 이용한 치료에 적절히 반응하거나 또는 반응하지 않는다. RA 치료용 TNF 안타고니스트는 예를 들면 인플릭시마브 (infliximab; IFX, Remicade®), 에타네르셉트 (etanercept; ETA, Enbrel®), 및 아달리무마브 (adalimumab; ADA, Humira®) 이다. 항-IL-17 항체는 TNF 안타고니스트, 항-CD20 항체, CTLA4Ig 또는 항-IL6 항체를 이용하는 치료에 적절히 반응하거나 또는 반응하지 않는 환자에게 3 개월 이상, 바람직하게는 6 개월 투여되는 것이 바람직하다.
본 발명은 또한 유효량의 본 발명에 따른 항체를 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 포함하는 약학적 조성물의 제조 방법, 및 이 방법을 위한 본 발명에 따른 항체의 용도를 제공한다. 본 발명은 또한 유효량의 본 발명에 따른 항체의, 약학적 제제, 바람직하게는 약학적으로 허용가능한 담체와 함께하는 제조에 있어서, 다발 경화증, 류마티스 관절염, 건선, 크론병, 만성 폐쇄폐병 (COPD), 천식, 및 이식 거부를 앓고 있는 환자 치료에 있어서의 용도를 제공한다. 본 발명은 또한 다발 경화증, 류마티스 관절염, 건선, 크론병, 만성 폐쇄폐병 (COPD), 천식, 및 이식 거부를 앓고 있는 환자의 치료를 위한, 유효량의 본 발명에 따른 항체의, 약학적 제제, 바람직하게는 약학적으로 허용가능한 담체와 함께하는 제조에서의 용도를 제공한다.
서열 기술
SEQ ID NO: 1 중쇄 CDR3, Mab 106 및 Mab 107
SEQ ID NO: 2 중쇄 CDR2, Mab 106
SEQ ID NO: 3 중쇄 CDR1, Mab 106 및 Mab 107
SEQ ID NO: 4 경쇄 CDR3, Mab 106 및 Mab 107
SEQ ID NO: 5 경쇄 CDR2, Mab 106 및 Mab 107
SEQ ID NO: 6 경쇄 CDR1, Mab 106 및 Mab 107
SEQ ID NO: 7 중쇄 가변 도메인, Mab 106
SEQ ID NO: 8 경쇄 가변 도메인, Mab 106 및 Mab 107
SEQ ID NO: 9 중쇄 CDR2, Mab 107
SEQ ID NO: 10 중쇄 가변 도메인, Mab 106
SEQ ID NO: 11 γ1 중쇄 불변 부위
SEQ ID NO: 12 κ 경쇄 불변 부위
실시예 1
면역화 기술
5 마리의 암컷 Balb/c 마우스를 이용하여, 마우스 당 250 (1x) 및 100 ㎍ (3x) 재조합 인간 IL17 (Peprotech) (http://www.peprotech.com; Cat.Nr: 200-17, 1% PBS 중 1% 알부민과 함께) 를 이용해 20 주 내로 면역화를 수행했다.
실시예 2
ELISA 로 측정된 IL -17 과의 결합
NUNC®Maxisorp 플레이트 (96-웰) 를, PBS (100ml/웰) 중 0.5㎍/ml 의 농도로 하여 재조합 인간 IL-17 (Peprotech # 200-17, www.peprotech.com) 로 코팅한다. 플레이트를 37℃ 에서 오비탈 쉐이커 상에서 2 시간 동안 교반하면서 인큐베이션한다. 이후, 코팅액을 제거하고, 100㎕/웰 PBSTC (인산염완충식염수, 0.05% Tween®20, 2% 닭 혈청) 을 첨가한다. 플레이트를 실온에서 1 시간 동안 인큐베이션한다. 차단액 (blocking solution) 을 제거하고, 샘플 (공시약: PBSTC, 샘플 (PBS 중 10㎍/ml): 본 발명에 따른 항-인간 IL-17 항체 3C1 및 Mab 106; Mab 16-7178-85, eBioscience (www.ebioscience.com); MAB 317, R&D Systems (www.rndsystems.com), NVP-AIN-497 (WO 2006013107)) 을 플레이트 (100㎕/웰) 에 첨가한다. 플레이트를 실온에서 교반하면서 인큐베이션한다. 샘플을 제거하고, 플레이트를 3 회 200㎕/웰 PBST (인산염완충식염수, 0.05% Tween®20) 로 세정하고, 마우스 항체의 검출을 위해 2차 항체 (염소 항-마우스 IgG, Fc 감마, HRP 콘쥬게이트; Chemicon AP127P, www.millipore.com) 또는 인간화 항체의 검출을 위해 염소 항-인간 IgG, Fc 감마, HRP 콘쥬게이트 (Chemicon AP113P) 를 첨가한다. 2차 항체를 PBSTC 중에서 1:10000 희석하고, 플레이트를 실온에서 교반하면서 1 시간 동안 인큐베이션한다. 2차 항체를 제거하고, 플레이트를 3 회 200㎕/웰 PBST (인산염완충식염수, 0.05% Tween®20) 로 세정한 다음 100㎕/웰 ABTS®(Roche Diagnostics GmbH) 를 첨가한다. 광학 밀도를 IL-17A 결합에 관하여서 405/492nm 에서 측정한다 (100% 로 설정). 다른 인간 IL-17 하부유형 (IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E 및 IL-17F) 과의 결합을, 동일한 어세이 포맷으로 수행하였다. 결과를 표 1 에 나타낸다.
표 1:
Figure pct00002

실시예 3
IgG1 부류의 면역글로불린을 위한 발현 플라스미드의 제조
플라스미드 6454 (하기에 p6454 로 표기) 는 진핵 세포에서 항-IL-17-항체의 발현을 위한 발현 플라스미드 (엑손-인트론 조직을 보유한 유전자 조작된 발현 카세트) 이다. 이것은 하기 기능 성분을 포함한다:
- 벡터 pUC18 유래 복제 기원 (pUC 기원),
- E. coli 에서 암피실린 내성을 부여하는 β(베타)-락타마아제 유전자 (Amp),
- 하기의 요소를 포함하는 감마 1-중쇄의 발현을 위한 발현 카세트:
- 인간 시토메갈로바이러스로부터의 주요 전초기(immediate-early) 프로모터 및 증강자 (hCMV IE1 프로모터),
- Kozak 서열을 포함하는 합성 5'UTR,
- 신호 서열 인트론을 포함하는 쥣과 동물 면역글로불린 중쇄 신호 서열 (L1_인트론_L2),
- 3' 말단에 스플라이스 공여자 부위와 배열되는 중쇄 가변 부위 (VH) 의 cDNA,
- 마우스 면역글로불린 μ-증강자 부위,
- 엑손 CH1, 경첩, CH2 및 CH3, 개재 (intervening) 인트론 및 폴리아데닐화 신호 서열을 갖는 3' UTR 을 포함하는 인간 면역글로불린 중쇄 감마 1-유전자 (IGHG1),
- 하기의 요소를 포함하는 카파-경쇄의 발현을 위한 발현 카세트:
- 인간 시토메갈로바이러스 유래의 주요 전초기 프로모터 및 증강자 (hCMV IE1 프로모터),
- Kozak 서열을 포함하는 합성 5'UTR,
- 신호 서열 인트론을 포함하는 쥣과 동물 면역글로불린 중쇄 신호 서열 (L1_인트론_L2),
- 3' 말단에서 스플라이스 공여자 부위와 배열되는 경쇄 가변 부위 (VL) 의 cDNA,
- 인트론계 마우스 Ig-카파 증강자 부위,
- IGKC 엑손 및 폴리아데닐화 신호 서열을 갖는 IGK 3'UTR 을 포함하는 인간 면역글로불린 카파 유전자 (IGK),
- 하기를 포함하는 진핵 세포에서 영양요구성 선별에 적합한 쥣과동물 디히드로폴레이트 리덕타아제 (DHFR) 의 발현에 적합한 발현 카세트:
- 단축 버젼의 SV40 초기 프로모터 및 기원,
- 쥣과 동물 DHFR 의 코딩 서열,
- SV40 초기 폴리아데닐화 신호.
P6454 를 CHO-K1 세포에 트랜스펙션하여 안정한 세포주를 메토트렉세이트 (MTX) 선별 후 단리하고 이를 인간 IgG 용 ELISA 로 인간 항체의 생성에 대해 스크리닝하였다.
실시예 4
보체계의 활성화 연구 ( C1q 결합 ELISA )
본 발명에 따른 항체의 C1q 결합을 연구하기 위해, ELISA 접근법을 이용한다. C1q 는 적응성 (adaptive) 면역계의 일부이고, 면역 복합체와 결합시, 몇몇의 효소원의 순차적 활성화를 촉발한다. 차례대로 효소들은 C3 분자의 절단을 야기하여, 그 결과 염증 반응의 개시, 외래 또는 비정상 입자에서의 옵소닌작용 및 세포막 분해를 일으킬 수 있다.
MTP (Nunc) 에 PBS-완충액 중 시험될 항체를 10 ㎍/mL 내지 0.156 ㎍/mL 의 7 가지 농도로 하룻밤 4℃ 에서 100 ㎕/웰로 코팅한다. 자유 결합 부위의 차단을, 1 시간 동안 실온에서 200 ㎕/웰로 PBS 중 3% BPLA (Roche) 로 수행한다. MTP 를 PBS 중 3% BPLA 내 2 ㎍/mL C1q (Quiddel) 와 함께 100 ㎍/mL 로 인큐베이션한다. MTP 를 실온에서 PBS 중 0.1% Tween®20 로 3 회 세정한다. 100 ㎕/웰로, 1 시간 동안 실온에서 다클론성 래빗 항-C1q 항체 (DAKO) 를 0.25 ㎍/mL 로, PBS 중 0.1% Tween®20, 3% BPLA 중에 첨가함으로써 결합을 검출하였다. MTP 를 실온에서 PBS 중 0.1% Tween20 으로 3 회 세정한다. 2차 항체 염소 항-래트 IgG POD (Jackson Immuno Research) 를 PBS 중 3% Tween 20 중 0.1 ㎍/mL 로 1 시간 동안 실온에서 100 ㎕/웰로 첨가한다. MTP 를 실온에서 PBS 중 0.1% Tween20 로 3 회 세정한 후, MTP 를 ABTS 용액 (Roche) 과 인큐베이션하고 405 nm 파장에서의 흡수를 490 nm 의 기준 파장과 비교해 측정한다. 배경 신호는, 항체로 코팅하지 않았으나 동일한 검출 절차로 처리한 웰에서 측정한다. 시험 항체에 대해서 405 nm 에서의 광학 밀도 (OD) 가 10 ㎍/ml 의 항체 농도에서 0.05 미만인 경우, 어떠한 C1q 결합도 발견되지 않는다.
실시예 5
BIAcore 크로스블로킹 ( crossblocking ) 실험을 통한 에피토프 부위 맵핑
BIAcore 3000 장치를 25 ℃ 에서 이용하여 모든 측정을 수행했다. 시스템 및 샘플 버퍼는 HBS-EP (10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3.4 mM EDTA, 0.005% Polysorbate 20 (v/v)) 이었다. BIAcore CM5 센서 칩을 전조건화 (preconditioning) 절차에 적용하였다. 순차적으로 0.1 % SDS, 50 mM NaOH, 10 mM HCl 및 100 mM H3PO4 를 30 초 동안 유동 세포 FC1, FC2, FC3 및 FC4 로 주입했다. 아민 커플링 절차를 BIAcore 3000 wizard v. 4.1 를 이용하여 제조자 지침에 따라 수행하였다.
키메라 또는 인간화 항체로 크로스블로킹 실험을 수행하기 위해, 센서 표면의 EDC/NHS 활성화 후에, 다클론성 염소 항-인간 IgG 항체 (Jackson) 를 모든 센서 유동 세포 (FC) 상에 고정하였다. 10 mM NaAc pH 5.0 중 30 ㎍/ml 다클론성 염소 항-인간 IgG 항체를 10 ㎕/min 로 7 분 동안 10.000 RU 의 항체 포획 시스템을 고정하는데 사용했다. 표면을 에탄올아민으로의 포화로써 불활성화시켰다. 인간 포획 시스템 센서를, 10 ㎕/min 로 huIgG 분석물 (Bayer) 의 결합 (2 분) 및 30㎕/min 로 10 mM Glycine pH 1.7 로의 재생 (3 분) 의 5 사이클로 조건화하였다.
10 ㎕/min 의 유속으로 1차 mAb 를 3 분 동안 FC1 - FC4 에 주입했다. 센서 캡처 시스템의 자유 결합 능력을, FC1-FC4 로, 10 ㎕/min 의 HBS-EP 버퍼 중 50 ㎍/ml huIgG (Bayer) 유래 칵테일을 3 분 주입하는 것을 이용하여 블로킹하였다. 후속해서, 항원 rhuIL17-A 를 3 분 동안 FC1-FC4 에 10 ㎕/min 로 주입하여 1차 항체 결합 수용력을 포화시켰다. 30 ㎕/min 로 3 분 동안 FC1-FC4 에 2차 주입하는 것을, 2차 항체를 개별적으로 유동 세포 FC1, FC2, FC3 및 FC4 에 3 분 동안 30 ㎕/min 로 주입하기 이전에 수행했다. 센서를 3 분 동안 10 mM Glycine pH 1.75 를 30 ㎕/min 로 이용해 재생하였다.
먼저, 다클론성 염소 항-인간 IgG 포획 시스템으로부터 1 차 항체의 분리를 정정하기 위해 0 nM 분석물 주입을 모든 센서그램 (sensorgram) 에서 차감했다. 2 차 항체 및 1 차 항체의 반응 신호에 의해 몫을 구했다. 몫은 몰비 (Molar Ratio: MR) 의 명칭을 내포하며, 에피토프 부위의 접근가능성을 나타낸다.
몰비 값을 매트랙스에 열거하였다. 블로킹 절차가 성공적으로 수행되었는지 여부와 관계 없이 상동 mAb 조합은 대조군 역할을 하였다. 컷오프 (cut-off) 는 상동 mAb 조합에 의해 정의되었다.
크로스블로킹 실험에서 컷오프를 Mab106 균일 어세이 포캣 (9%) 로 설정하였다. MR = 15 % 초과의 몰비 값은 독립적인 에피토프로의 접근에 관한 것이다.
에피토프 맵핑 (표 2 참고) 결과는, Mab K106 및 이의 유도체 Mab107 가 NVP-AIN-497 와는 상이한 에피토프 부위와 결합하는 것을 나타낸다. 더욱이, Mab K106 은 eBio64CAP17 과 상이한 에피토프를 커버하고 Mab317 과는 동일한 에피토프 부위를 커버한다.
표 2:
에피토프 맵핑 결과
Figure pct00003
분석의 컷오프는 균일 어세이 조합에 의해 정의된다. (106, 9 %); (AIN-457, 6%); (eBio64CAP17, 7%); (Mab317, 0%). 여기에서는 컷오프를 균일 Mab106 어세이로 설정하였다.
실시예 6
사이토카인 방출 어세이 , IL -17A 유도된 hIL -8 방출의 억제
항-IL-17 항체의 예비인큐베이션을 이용하여 IL-17A 및 TNF-알파로 자극한 후, CCD-25SK 세포의 hIL-8 생성 검출로서 어세이를 수행한다. CCD-25SK 세포는 IL-17 수용체를 가진다. 가용성 IL-17A 는 이들 IL-17 수용체에 결합한다. IL-17A 에 대항하는 항체는 IL-17A 에 결합한다. 이 메카니즘은 오로지 TNF알파 존재하에서만 작동한다. IL-17A 의 IL-17 수용체와의 결합을 통해, 세포는 ELISA 로 판독하여 검출될 수 있는 hIL-8 을 생성한다. 측정된 hIL-8 은, 항-IL-17 항체가 IL-17 에 의한 CCD-25SK 세포의 자극을 억제하는 농도 정보를 제공한다.
CCD-25SK 세포를 48-웰 플레이트 (부피 0.45ml/웰) 에서 2.5x104 세포/웰의 세포 밀도로 시딩하고, 24 시간 동안 37℃ 및 5%CO2 에서 인큐베이션하였다. 하룻밤 인큐베이션 후, 세포를 30 분 동안 항-IL-17 항체로 최종 농도를 9000; 3000;1000; 333.3; 111,1; 37.03; 12.34; 및 4.11 ng/ml 로 하여 처리하였다. 각 항체 계단 희석물을 배지, 50㎕/웰 (10x 농축) 로 만들었다. 30 분 후, 세포를 10ng/ml IL-17A 과 50pg/ml TNF-알파의 혼합물로 자극했다. 50㎕/웰 (10x 농축) 및 24 시간 동안 37℃ 및 5%CO2 에서 인큐베이션하였다. 하룻밤 인큐베이션 후, 상청액을 96-웰 플레이트로 옮겨 -20℃ 에서 hIL-8 ELISA 를 위해 중간체로서 동결하였다.
hIL-8 ELISA 를 하기와 같이 수행했다. 100㎕ 희석 포획 항체를 각각의 웰에 첨가하고 하룻밤 4℃ 에서 인큐베이션하였다. 코팅 버퍼를 이용하여 희석물을 만들었다. 플레이트를 흡인 (aspiration) 하고, 3 회 동안 200㎕/웰로 세정, 200㎕/웰 어세이 희석제로 블로킹 및 1 시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 플레이트를 흡인하고, 200㎕/웰로 3 회 세정하였다. 100㎕ 표준 및 샘플을 첨가하고, 2 시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 표준 계단 희석물: 400pg/ml; 200pg/ml; 100pg/ml; 50pg/ml; 25pg/ml; 12.5pg/ml; 6.3pg/ml 및 음성 대조군으로서의 어세이 희석제. 샘플 희석은 1:200 이었다. 플레이트를 흡인하고, 4 회 동안 250㎕/웰로 세정했다. 100㎕ 콘쥬게이트를 각 웰에 첨가하였다. 콘쥬게이트를 어세이 희석제에 1: 250 희석된 검출 항체 및 효소 시약으로 제조했다. 플레이트를 흡인하고 6 회 동안 250㎕/웰로 세정했다. 100㎕ 기질을 각 웰에 첨가하고, 12 분 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 반응을 50㎕/웰 1M H2SO4 로 멈췄다. 30 분 이내 450 nm 에서 판독하고, 570 nm 에서 λ교정하였다. 그 결과를 표 3 에 나타낸다 (80% 의 최대 억제에 대해 비교하여 측정된 IC50 값).
표 3:
Figure pct00004

실시예 7
윤활막세포 사이토카인 방출 어세이 , IL -17A 유도된 hIL -6 및 hIL - 8 의 억제
윤활막세포 (HFLS) 와 같은 일차 인간 섬유모세포는 IL-17A 자극에 반응하여 hIL-6 및 hIL-8 을 생성한다. 어세이를 수행하여, 자극 이전에 항-IL-17A 로 세포를 예비인큐베이션한 후 HFLS 세포에 의해 상기 IL-17A 로 자극된 hIL-6 및 hIL-8 생성의 억제를 측정하였다.
HFLS 세포를 48-웰 플레이트에 0.5 ml 부피로 4x105 세포/ml 의 세포 밀도로 하여 시딩한 다음 하룻밤 37℃ 및 5%CO2 에서 인큐베이션하여 부착시켰다. 하룻밤 인큐베이션 후, 배지를 400㎕ 신선한 배지로 대체하고, 세포를 30 분 동안 여러 항체 농도 (10000, 3000, 1000, 300, 100, 30, 10, 3, 0 ng/ml) 로 하여 항-IL-17 항체로 처리하였다. 각 항체 계단 희석물을 50㎕/웰 (10x 농축) 을 이용하는 배지를 이용하여 만들었다. 30 분 후, 세포를 100ng/ml IL-17A (50㎕ 의 1000ng/ml 10x 농도) 로 자극하고, 하룻밤 (18 시간) 37℃ 및 5%CO2 에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 기간 후, 상청액을 신선한 튜브로 옮기고 즉시 분석하거나 ELISA 분석까지 -80℃ 에서 보관하였다. hIL-6 및 hIL-8 ELISA 를 위해, 100㎕ 희석된 포획 항체를 각 웰에 첨가하고, 4℃ 에서 하룻밤 인큐베이션하였다. 희석물을 코팅 버퍼로 만들었다. 플레이트를 흡인하고, 200㎕/웰로 3 회 동안 세정하고, 200㎕/웰 어세이 희석제로 블로킹하고 1 시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 플레이트를 흡인하고 200㎕/웰로 3 회 동안 세정하였다. 100㎕ 표준 및 샘플을 첨가하고, 2 시간 동안 실온에서 제조자 지침에 따라 인큐베이션하였다. 플레이트를 흡인하고, 250㎕/웰로 3 회 이상 동안 세정하였다. 100㎕ 콘쥬게이트를 각 웰에 첨가했다. 콘쥬게이트를 어세이 희석제에 1: 250 희석된 검출 항체 및 효소 시약으로 제조했다. 플레이트를 흡인하고 250㎕/웰로 3 회 이상 동안 세정하였다. 100㎕ 기질을 각 웰에 첨가하고, 판독하기에 충분하게 발색될 때까지 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후 반응을 50㎕/웰 1M H2SO4 로 정지하고, 플레이트 판독기 상에서 30 분 이내에 450 nm 의 파장에서 판독했다. 그 결과를 표 4 에 나타낸다.
표 4:
Figure pct00005

실시예 8
사이노몰거스 원숭이 IL -17A 과의 교차반응성 (결합 어세이 )
결합 어세이를 실시예 2 에 따라 수행하였다. 그 결과를 표 5 에 나타낸다.
표 5:
Figure pct00006

실시예 9
사이노몰거스 원숭이 ( Maccaca Fasicularis ) 사이토카인 방출 어세이 , 사이 노몰거스 원숭이 IL -17A 유도된 IL -6 및 IL -8 생성의 억제
사이노몰거스 원숭이 진피 섬유모세포 (CDF) 세포는 인간 또는 사이노몰거스 원숭이 IL-17A 자극에 반응하여 사이노몰거스 원숭이 IL-6 및 IL-8 을 생성한다. 어세이를 수행하여, 자극 이전에 인간 IL-17 에 대항하여 상승된 항-IL-17 항체로 세포를 예비인큐베이션 후, CDF 세포에 의한 사이노몰거스 원숭이 IL-17A 자극된 IL-6 및 IL-8 의 억제를 측정했다.
CDF 세포를 48-웰 플레이트에서 0.5ml 의 부피에서 2x105 세포/ml 의 세포 밀도로 시딩하고, 하룻밤 37℃ 및 5%CO2 에서 부착하도록 인큐베이션하였다. 하룻밤 인큐베이션 후, 배지를 400㎕ 신선한 배지로 대체하고, 세포를 30 분 동안 각종 항체 농도로 (10000, 3000, 1000, 300, 100, 30, 10, 3, 0 ng/ml) 해 항-IL-17 항체로 처리하였다. 각 항체 계단 희석물을 50㎕/웰 (10x 농축) 을 이용하는 배지를 이용하여 만들었다. 30 분 후, 세포를 100ng/ml IL-17A (50㎕ 의 1000ng/ml 10x 농도) 로 자극하고, 37℃ 및 5%CO2 에서 하룻밤 (18 시간) 인큐베이션하였다. 인큐베이션 기간 이후, 상청액을 신선한 튜브로 옮기고 즉시 분석하거나, 또는 ELISA 분석할 때까지 -80℃ 에서 저장했다. hIL-6 및 hIL-8 ELISA 는 이의 각 사이노몰거스 원숭이 사이토카인과 교차-반응성임을 보여주었는데, 이를 사이토카인 수준을 정량화하는데 사용했다. ELISA 를 위해 100㎕ 희석된 포획 항체를, 각 웰에 첨가하고, 4℃ 에서 하룻밤 인큐베이션하였다. 희석물을 코팅 버퍼로 만들었다. 플레이트를 흡인하고, 3 회 동안 200㎕/웰로 세정하고, 200㎕/웰 어세이 희석제로 블로킹하고, 1 시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 플레이트를 흡인하고, 200㎕/웰로 3 회 동안 세정했다. 100㎕ 표준 및 샘플을 첨가하고, 2 시간 동안 실온에서 제조자 지침에 따라 인큐베이션하였다. 플레이트를 흡인하고 250㎕/웰로 3 회 이상 동안 세정했다. 100㎕ 콘쥬게이트를 각 웰에 첨가했다. 콘쥬게이트를 어세이 희석제 중에 1: 250 희석된 검출 항체 및 효소 시약으로 제조했다. 플레이트를 흡인하고, 250㎕/웰로 3 회 이상 동안 세정했다. 100㎕ 기질을 각 웰에 첨가하고, 판독하기에 충분하게 발색될 때까지 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 반응을 50㎕/웰 1M H2SO4 로 정지하고, 30 분 이내 450 nm 의 파장에서 플레이트 판독기로 판독했다. 그 결과를 표 6 에 나타낸다.
표 6:
Figure pct00007

실시예 10
유로피움 -기재 ADCC 어세이
PBL 를 Ficoll Paque Plus Gradient 원심분리로 단리한다: 헤파린화 혈액 샘플을 PBS 와 1:1 희석했다. 8ml 의 희석된 혈청을 Ficoll 상에 덮어씌우고 (overlay) 30 분 800 g 원심분리했다. 세포 (PBL) 를 수집하고, RPMI1640/10% FCS 로 세정하고, 세포 배양 배지에서 재현탁했다. 세포를 2.5x106 세포/ml 로 희석했다. (이는, 5x103 타겟 세포를 웰 당 사용했을 때 25:1 의 효과기/타겟 비율을 제공할 것이다).
타겟 세포를 BADTA (2,2':6',2"-터피리딘-6,6"-디카르복실산 아세톡시메틸에스테르) 로 라벨링한다: 세포를 Accutase™ (Millipore) 첨가에 의해 수확하고, 1 회 세정하고, 1x106 세포/ml 로 희석하였다. 2.5㎕ BADTA/1x106 세포를 첨가하고, 35 분 동안 37℃/5% CO2 에서 인큐베이션하였다. 라벨링 기간 후, 세포를 10 ml 배양 배지로 희석하고, 200g 에서 10 분 동안 원심분리하고, 상청액을 흡인하였다. 이 단계를 3 회 배양 배지/2mM 프로베니시드 (Probenicid) 로 반복하고, 샘플을 1x105 세포/ml 로 희석하고, 300g 5 분 원심분리한 후, 상청액을 제거해내고, 50㎕ 를 배경 대조군으로 사용되는 웰로 피펫팅하였다.
배경: 100㎕ 배지로 희석된 50㎕ 분취물. 자발적 분해: 50㎕ 의 라벨링된 타겟 세포 현탁액; 100㎕ 배양 배지를 첨가하고, 샘플 나머지로서 2h/37℃ 인큐베이션한다. 최대 분해: 50㎕/웰의 라벨링된 타겟 세포 현탁액; 100㎕ Triton®X-100 (PBS 중 0.5%) 첨가하고, 2h/37℃ 인큐베이션함. 항체 없는 분해 대조군: 50㎕/웰의 라벨링된 타겟 세포 현탁액; 50㎕ 배양 배지를 첨가; 50㎕ 의 효과기 세포, 2 시간 37℃ 에서 첨가. 효과기 세포 없는 분해 대조군: 50㎕/웰의 라벨링된 타겟 세포 현탁액; 50㎕ 배양 배지 첨가 50 ml 항체 용액을 사용된 최고 농도로 첨가 및 2h/37℃ 인큐베이션함.
인큐베이션 기간 말미에, 96웰 플레이트를 100rpm 에서 원심분리하였다. 20㎕ 의 각 상청액을 OptiPlate™HTRF-96 (Packard) 에 옮기고, 200ml 유로피움 용액을 첨가하고, 15 분 동안 쉐이커 상에서 인큐베이션하였다. 시간 분해 형광에 대해서 형광을 측정하고, 자발 방출 및 특이적 방출을 하기 식에 따라 산출했다:
Figure pct00008
항체 106 첨가 후에는 어떠한 유의한 특이적 방출 (ADCC) 도 측정되지 않았다.
실시예11
CDC 어세이
세포를 트립신 첨가로 수확하고, 세정, 1x105 세포/ml 로 희석하고, 100㎕/웰을 96-웰 평평 바닥 마이크로타이터 플레이트에 첨가하였다. 항체를 배지 중 25㎕ 부피로 6-배의 최종 농도에서 첨가했다 (각각 항체-리간드 복합체). 30 분 인큐베이션 시간 후, 25㎕ 신선하게 용해된 새끼 토끼 보체 (Cedarlane CL3441, 1ml 동결건조, 신선하게 4ml 이중 증류수 중 희석) 를 보체에 최종 농도 1: 24 로 첨가하였다. 20 시간 인큐베이션 기간 후, 50㎕ 상청액을 꺼내고 100㎕ Cell Titer Glo®시약 (Promega Corp.) 을 남은 100㎕ 상청액에 첨가하였다. 플레이트를 2 분 동안 오르비탈 쉐이커 상에서 진탕하고, 100㎕/웰을 흑색 발광 마이크로타이터 플레이트 (Costar) 에 옮기고 발광을 측정했다.
대조군: 배지 대조군 (타겟 세포 + 50㎕ 배지); 최대 분해 (타겟 세포 + 50㎕ 0.5% Triton X-100), 보체 대조군 (타겟 세포 + 25㎕ 배지 + 25㎕ 보체).
결과: 어떠한 보체 의존 세포독성 (CDC) 도 항-IL18 항체 106 으로 검출될 수 없었다.
Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH DSMACC2941 20080812
<110> F. Hoffmann-La Roche AG <120> Antibodies against human IL17 and uses thereof <130> 25345 FT <150> EP08017155 <151> 2008-09-29 <160> 12 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 13 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 1 Asp Gly Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 2 <211> 19 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Val Ala Ile Ile Lys Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Tyr Tyr Pro Asp Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 3 Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Thr Met Leu 1 5 10 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 4 Leu Gln Tyr Asp Ala Phe Pro Pro Tyr 1 5 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 5 Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp 1 5 <210> 6 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6 Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser 1 5 10 <210> 7 <211> 122 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 7 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Thr Met Leu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ile Ile Lys Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gly Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Ala Met Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 8 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 8 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Ala Phe Pro Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 9 <211> 19 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 9 Val Ser Ile Ile Lys Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Tyr Tyr Pro Asp Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 10 <211> 122 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 10 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Thr Met Leu Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ile Ile Lys Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gly Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Ala Met Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 11 <211> 330 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 11 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 12 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 12 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105

Claims (18)

  1. 중쇄 가변 도메인이 SEQ ID NO: 1 의 CDR3 부위, SEQ ID NO:2 또는 9 의 CDR2 부위 및 SEQ ID NO:3 의 CDR1 부위를 포함하고, 경쇄 가변 도메인이 SEQ ID NO: 4 의 CDR3 부위, SEQ ID NO:5 의 CDR2 부위 및 SEQ ID NO:6 의 CDR1 부위를 포함하는 것을 특징으로 하는 인간 IL-17 에 결합하는 항체.
  2. 제 1 항에 있어서, 중쇄 가변 도메인이 SEQ ID NO:7 또는 10 을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  3. 제 2 항에 있어서, 중쇄 가변 도메인이 SEQ ID NO:7 또는 10 를 포함하고, 경쇄 가변 도메인이 SEQ ID NO:8 를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  4. 하이브리도마 세포주 DSM ACC2941로부터 수득가능한 것을 특징으로 하는 인간 IL-17 에 결합하는 항체.
  5. 항체 3C1 (DSM ACC2941) 의 키메라, 인간화 또는 T 세포 에피토프 소실된 항체 변이체인 것을 특징으로 하는 인간 IL-17 에 결합하는 항체.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 위치 216-240 의 경첩 부위에서 및/또는 CH2 과 CH3 사이의 아미노산 위치 327-331 의 제 2 상호 도메인 부위에서 개질된 인간 IgG1 아이소타입의 것인 것을 특징으로 하는 항체.
  7. 단일클론성 항체 3C1 (DSM ACC2941) 이 결합하는 IL-17 에피토프와 동일한 IL-17 에피토프에 결합하며, 아미노산 위치 216-240 의 경첩 부위 및/또는 CH2 과 CH3 사이 아미노산 위치 327-331 의 제 2 상호-도메인 부위에서 개질된 인간 IgG1 아이소타입의 것인 것을 특징으로 하는 인간 IL-17 에 결합하는 항체.
  8. 제 6 항 또는 제 7 항에 있어서, 돌연변이 L234A (아미노산 위치 234 에서 류신 대신 알라닌) 및 L235A 를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항의 항체를 포함하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  10. 단일클론성 항체 3C1 (DSM ACC2941) 가 결합하는 IL-17 에피토프와 동일한 IL-17 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  11. 약학적 조성물 제조를 위한 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 따른 항체의 용도.
  12. 약학적 조성물 제조를 위한, 단일클론성 항체 3C1 (DSM ACC2941) 이 결합하는 IL-17 에피토프와 동일한 IL-17 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체의 용도.
  13. 다발 경화증, 류마티스 관절염, 건선, 크론병, 만성 폐쇄폐병 (COPD), 천식, 및 이식 거부의 치료를 위한 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 따른 항체의 용도.
  14. 다발 경화증, 류마티스 관절염, 건선, 크론병, 만성 폐쇄폐병 (COPD), 천식, 및 이식 거부의 치료를 위한, 단일클론성 항체 3C1 (DSM ACC2941) 이 결합하는 IL-17 에피토프와 동일한 IL-17 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체의 용도.
  15. IL-17 에 결합하는 항체의 중쇄를 인코딩하는 핵산으로서, 상기 항체가 SEQ ID NO: 1 의 중쇄 CDR3 부위, SEQ ID NO:2 또는 9 의 중쇄 CDR2 부위, SEQ ID NO:3 의 중쇄 CDR1 부위, SEQ ID NO: 4 의 경쇄 CDR3 부위, SEQ ID NO:5 의 경쇄 CDR2 부위 및 SEQ ID NO:6 의 경쇄 CDR1 부위를 포함하는 것을 특징으로 하는 핵산.
  16. 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 IL-17 에 결합하는 항체의 발현을 위한, 제 15 항에 따른 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는 발현 벡터.
  17. IL-17 에 결합하는 재조합 항체의 생산 방법으로서, 제 15 항에 따른 핵산을 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 발현시키고, 상기 항체를 상기 숙주 세포 또는 세포 배양 상청액으로부터 회수하는 것을 특징으로 하는 방법.
  18. 하이브리도마 세포주 DSM ACC2941.
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Families Citing this family (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL1641822T3 (pl) 2003-07-08 2013-10-31 Genentech Inc Heterologiczne polipeptydy IL-17 A/F i ich zastosowania terapeutyczne
US8790642B2 (en) 2008-08-29 2014-07-29 Genentech, Inc. Cross-reactive and bispecific anti-IL-17A/F antibodies
MX2011003184A (es) * 2008-09-29 2011-04-21 Roche Glycart Ag Anticuerpos contra il17 humana y usos de los mismos.
WO2010062960A2 (en) 2008-11-26 2010-06-03 Cedars-Sinai Medical Center METHODS OF DETERMINING RESPONSIVENESS TO ANTI-TNFα THERAPY IN INFLAMMATORY BOWEL DISEASE
RU2605318C2 (ru) 2009-05-05 2016-12-20 Новиммун С.А. Анти-il-17f антитела и способы их применения
BR112012010280B1 (pt) 2009-10-30 2020-09-24 Janssen Biotech, Inc. Anticorpo isolado ou fragmento do mesmo que se liga especificamente a il-17a humana, seu uso, e composição farmacêutica
NZ603570A (en) 2010-05-20 2014-12-24 Ablynx Nv Biological materials related to her3
RU2595385C2 (ru) * 2010-08-05 2016-08-27 Анаптисбайо, Инк. Антитела, направленные против il-17
CA2813900C (en) 2010-10-08 2017-01-10 Novartis Ag Methods of treating psoriasis using il-17 antagonists
EP3542820A1 (en) 2010-11-05 2019-09-25 Novartis AG Methods of treating psoriatic arthritis using il-17 antagonists
WO2012076442A1 (en) 2010-12-07 2012-06-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Adapter for the non-invasive cultivation of cells and uses thereof
BR112013009934A2 (pt) 2010-12-07 2016-07-05 Hoffmann La Roche dispositivo para adicionar pelo menos duas soluções de alimentação, aparelho de cultivo celular, uso de um dispositivo e método para obter um polipeptídeo
AR084234A1 (es) * 2010-12-13 2013-05-02 Novartis Ag Metodos predictivos y metodos para tratar artritis usando antagonistas de interleuquina 17 (il-17)
CN102188707B (zh) * 2011-02-25 2015-08-05 中国医学科学院基础医学研究所 Il-17抑制剂在制备治疗流感的药物中的用途
ES2865449T3 (es) 2011-03-16 2021-10-15 Hoffmann La Roche Cromatografía de intercambio iónico con selectividad mejorada para la separación de monómeros, agregados y fragmentos polipeptídicos por modulación de la fase móvil
UA117218C2 (uk) 2011-05-05 2018-07-10 Мерк Патент Гмбх Поліпептид, спрямований проти il-17a, il-17f та/або il17-a/f
RU2014125071A (ru) 2011-11-21 2015-12-27 Новартис Аг Способы лечения псориатического артрита (psa) с использованием антагонистов il-17 и аллелей ответа psa или отсутствия ответа psa
CA2868404A1 (en) 2012-04-05 2013-10-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies against human tweak and human il17 and uses thereof
AR090738A1 (es) 2012-04-20 2014-12-03 Novartis Ag Metodos para el tratamiento de espondilitis anquilosante usando antagonistas de il-17
CA2886207C (en) 2012-09-26 2021-01-05 Jorg Wischhusen Monoclonal antibodies to growth and differentiation factor 15 (gdf-15)
EA031537B1 (ru) * 2013-02-08 2019-01-31 Новартис Аг Антитела против il-17a и их применение для лечения аутоиммунных и воспалительных нарушений
WO2014155278A2 (en) 2013-03-26 2014-10-02 Novartis Ag Methods of treating autoimmune diseases using il-17 antagonists
CA2908553A1 (en) 2013-03-27 2014-10-02 Cedars-Sinai Medical Center Mitigation and reversal of fibrosis and inflammation by inhibition of tl1a function and related signaling pathways
WO2015010108A1 (en) 2013-07-19 2015-01-22 Cedars-Sinai Medical Center Signature of tl1a (tnfsf15) signaling pathway
US10434172B2 (en) 2013-08-15 2019-10-08 Novartis Ag Methods of treating generalized pustular psoriasis (GPP) using IL-17 antagonists
HUE052184T2 (hu) 2013-11-18 2021-12-28 Shanghai hengrui pharmaceutical co ltd IL-17A kötõanyag és felhasználásai
JP2017508446A (ja) * 2014-01-28 2017-03-30 北京韓美薬品有限公司 二機能性融合タンパク質及びその製造方法並びに使用
PT3653644T (pt) 2014-03-26 2023-12-19 Univ Wuerzburg J Maximilians Anticorpos monoclonais do fator de crescimento e diferenciação 15 (gdf-15) e suas utilizações para o tratamento da caquexia cancerosa e do cancro
KR20170045240A (ko) 2014-09-10 2017-04-26 노파르티스 아게 건선성 관절염 환자에서 구조적 손상의 진행을 억제하기 위한 il-17 길항제의 용도
WO2016123329A2 (en) * 2015-01-28 2016-08-04 Genentech, Inc. Gene expression markers and treatment of multiple sclerosis
CN105315371B (zh) 2015-03-05 2018-05-29 北京百特美博生物科技有限公司 抗人il-17单克隆抗体
ES2968226T3 (es) 2015-10-02 2024-05-08 Univ Wuerzburg J Maximilians GDF-15 como marcador de diagnóstico para predecir la evolución clínica de un tratamiento con bloqueadores de puntos de control inmunitario
EP3355919B1 (en) 2015-10-02 2022-12-07 Julius-Maximilians-Universität Würzburg Combination therapy using inhibitors of human growth and differentiation factor 15 (gdf-15) and immune checkpoint blockers
KR20180127416A (ko) 2016-03-17 2018-11-28 세다르스-신나이 메디칼 센터 Rnaset2를 통한 염증성 장 질환의 진단 방법
WO2017221174A1 (en) 2016-06-22 2017-12-28 Novartis Ag Methods of treating vitiligo using interleukin-17 (il-17) antibodies
WO2018015880A1 (en) 2016-07-19 2018-01-25 Novartis Ag Methods of treating new-onset plaque type psoriasis using il-17 antagonists
CN109715660A (zh) * 2016-09-14 2019-05-03 北京韩美药品有限公司 一种能够特异性地结合il-17a的抗体及其功能片段
JP7194104B2 (ja) 2016-10-26 2022-12-21 シーダーズ―シナイ メディカル センター 抗ｔｌ１ａモノクローナル抗体の中和
JP2019505516A (ja) 2016-11-28 2019-02-28 ノバルティス アーゲー インターロイキン−１７（ｉｌ−１７）アンタゴニストを使用してざ瘡を治療する方法
WO2018158741A1 (en) 2017-03-03 2018-09-07 Novartis Ag Psoriasis disease modification following long-term treatment with an il-17 antagonist
US10676522B2 (en) 2017-05-05 2020-06-09 Novartis Ag Methods of selectively treating asthma using IL-17 antagonists
CN109206515B (zh) * 2017-07-06 2021-10-12 北京伟峰益民科技有限公司 一种全人源抗人白介素17a抗体及其应用
US20210179702A1 (en) 2017-11-02 2021-06-17 Novartis Ag Method of treating tendinopathy using interleukin-17 (il-17)
KR102048475B1 (ko) * 2017-11-10 2019-11-26 주식회사 와이바이오로직스 IL-17A (Interleukin-17A)에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 용도
US20200277369A1 (en) 2017-11-20 2020-09-03 Novartis Ag Method of treating hidradentitis suppurativa with il-17 antagonists
CN111699006B (zh) * 2018-02-12 2021-08-24 原启生物科技(上海)有限责任公司 Il17抗体及其应用
CA3098374A1 (en) 2018-04-25 2019-10-31 Prometheus Biosciences, Inc. Optimized anti-tl1a antibodies
JP6930778B2 (ja) * 2018-05-17 2021-09-01 江蘇▲筌▼信生物医薬有限公司Ｑｙｕｎｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｃｏ．， Ｌｔｄ． 抗ヒトインターロイキン１７ａモノクローナル抗体およびその使用
EP3689907A1 (en) 2019-01-31 2020-08-05 Numab Therapeutics AG Antibodies targeting il-17a and methods of use thereof
SG11202107995SA (en) 2019-01-31 2021-08-30 Numab Therapeutics AG Multispecific antibodies having specificity for tnfa and il-17a, antibodies targeting il-17a, and methods of use thereof
US20220363749A1 (en) 2019-09-20 2022-11-17 Novartis Ag Methods of treating autoimmune diseases using interleukin-17 (il-17) antagonists
KR20220103721A (ko) 2019-10-24 2022-07-22 프로메테우스 바이오사이언시즈, 인크. Tnf 유사 리간드 1a(tl1a)에 대한 인간화 항체 및 그의 용도
JP2023502103A (ja) 2019-11-19 2023-01-20 ノバルティス アーゲー インターロイキン－１７（ｉｌ－１７）アンタゴニストを用いてループス腎炎を治療する方法
US20220403018A1 (en) 2019-12-06 2022-12-22 Novartis Ag Methods of treating lichen planus using interleukin (il-17) antagonists
WO2023223211A1 (en) 2022-05-16 2023-11-23 Novartis Ag Methods of treating giant cell arteritis using interleukin-17 (il-17) antagonists
WO2023223263A1 (en) 2022-05-18 2023-11-23 Novartis Ag Methods of selectively treating tendinopathy using interleukin-17 (il-17) antagonists

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6562333B1 (en) 1993-06-14 2003-05-13 Schering Corporation Purified mammalian CTLA-8 antigens and related reagents
US6274711B1 (en) 1993-06-14 2001-08-14 Inserm, Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Purified mammalian CTLA-8 antigens and related reagents
US5716623A (en) 1994-12-07 1998-02-10 Immunex Corporation Isolated Herpesvirus saimiri proteins that bind MHC Class II molecules
ES2181915T3 (es) 1995-10-27 2003-03-01 Schering Corp Ctla-8 en combinacionpn con g-csf y il-6, y uso de ctla-8 para tratar infecciones.
US6063372A (en) 1995-10-27 2000-05-16 Inserm, Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Uses of mammalian CTLA-8 and related reagents
US6271014B1 (en) 1998-01-09 2001-08-07 Schering-Plough Mammalian proteinases; related reagents and methods
US6333345B1 (en) 1999-05-14 2001-12-25 Sepracor, Inc. Methods of using and compositions comprising N-desmethylzolpidem
CN1341660A (zh) * 2000-09-07 2002-03-27 上海博德基因开发有限公司 一种新的多肽——人白细胞介素受体－配体(il－17b和il－17br)32.56和编码这种多肽的多核苷酸
JP4833850B2 (ja) 2003-11-21 2011-12-07 ユセベ ファルマ ソシエテ アノニム Ｉｌ−１７活性阻害による多発性硬化症を治療するための方法
GB0417487D0 (en) * 2004-08-05 2004-09-08 Novartis Ag Organic compound
GB0425569D0 (en) * 2004-11-19 2004-12-22 Celltech R&D Ltd Biological products
SI2481753T1 (en) * 2005-12-13 2018-06-29 Eli Lilly And Company Anti-IL-17 antibodies
AU2007235199B8 (en) * 2006-01-31 2010-10-28 Novartis Ag IL-17 antagonistic antibodies for treating cancer
TW200815469A (en) * 2006-06-23 2008-04-01 Astrazeneca Ab Compounds
WO2008002115A1 (fr) 2006-06-27 2008-01-03 Vladimir Guzenko Appareil hydraulique à membrane transformant la force de gravitation en couple de torsion destiné à un moteur sans carburant et moteur correspondant
GB0612928D0 (en) * 2006-06-29 2006-08-09 Ucb Sa Biological products
PE20080739A1 (es) * 2006-08-11 2008-06-14 Schering Corp Anticuerpos para il-17a
MX2011003184A (es) * 2008-09-29 2011-04-21 Roche Glycart Ag Anticuerpos contra il17 humana y usos de los mismos.

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US20100080812A1 (en) 2010-04-01
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