KR20110000745A

KR20110000745A - 활성산소종의 억제를 위한 ａｒＮＯＸ-억제제를 포함하는 조성물

Info

Publication number: KR20110000745A
Application number: KR1020107023951A
Authority: KR
Inventors: 데일 컨; 크리스티안 메도우즈
Original assignee: 너스킨 인터어내셔날 인코포레이팃드; 녹스 테크놀로지스 인코포레이티드
Priority date: 2008-03-28
Filing date: 2008-03-28
Publication date: 2011-01-05
Also published as: CN102014930A; AU2008353441A1; IL208324A0; JP2011515466A; MX2010010668A; EA201001558A1; EP2280714A1; WO2009120214A1; ZA201007247B; AU2008353441A2; CA2719833A1

Abstract

본 발명은 혈청 노화 인자를 격리시키기 위한 제제, 및 이의 사용 방법에 관한 것이다. 더 상세하게는, 본 발명은 엔.타제타 분말에 존재하거나 또는 갓 제조한 엔.타제타 추출물과 비슷한 억제 수준으로 엔.타제타 분말을 증강시킬 수 있는 여러 자연발생의 arNOX 억제제 중 어느 하나를 의미하는, 본 명세서에서 '나락틴(Naractin)'이라 지칭한 제제, 및 NADH 옥시다제의 노화-관련 이소폼(arNOX)에 의해 유발되는 세포 손상으로 인한 장애 및 장애의 합병증을 예방 또는 치료하기 위해 '나락틴'을 사용하는 방법에 관한 것이다. 한 예시적 구체예에서, 본 발명의 제제는 적어도 하나의 자연발생의 나락틴을 포함한다. 이러한 자연발생의 나락틴은 또한 다른 자연발생의 arNOX 억제제의 항-arNOX 효과를 증강시킬 수 있다.

Description

활성산소종의 억제를 위한 ａｎｒＮＯＸ-억제제를 포함하는 조성물{Compositions comprising anrNOX-inhibitors for the inhibition of reactive oxygen species}

본 발명은 내부 또는 국소 투여될 수 있는 혈청 노화 인자를 격리시키는데 유용한 천연 산물의 추출물에 관한 것이다. 더 상세하게는, 본 발명은 노화-관련 산화를 억제하거나 개선시키기 위해 화장품학적으로 사용되는 제제 및 이의 조성물, 및 피부 보호 제품으로서 이들의 사용방법에 관한 것이다.

원형질막 NADH 옥시다제(NOX)는 하이드로퀴논(NADH) 옥시다제 및 단백질 디설파이드-티올 상호교환 활성을 나타내는 고유의 세포 표면 단백질로, 보통 호르몬 및 성장인자에 반응한다. NOX(또는 CLOX)는 노화 세포와 관련이 있는 성장 관련 단백질의 계열이다. 암 세포에 특이적인, tNOX라 표시되는 NOX의 호르몬-둔감성 및 약물-반응성 형태는 소개된 바 있다. 예컨대, 전문이 참고인용되는 미국 특허 5,605,810호를 참조한다.

이러한 단백질 계열의 한 구성원은 NADH 옥시다제의 노화-관련 이소폼(arNOX; aging-related isoform of NADH oxidase)이다. arNOX의 혈행 형태는 사람 혈청 및 개체, 특히 30세 내지 65세의 개체의 림프구에서 크게 증가한다. arNOX 단백질의 독특한 특징은 초과산화물(superoxide) 라디칼의 생산력으로, 이는 죽종형성 및 다른 원격작용 노화 현상을 비롯한 노화-관련 변화에 상당히 기여할 수 있다. 노화 세포 및 혈청에서 arNOX의 활성은 종래에 기술된 바 있다. 예컨대 전문이 참고인용되는 PCT 공개번호 WO 00/57871을 참조한다.

이러한 arNOX 효과 모델은 노화 동안 미토콘드리아에서 증가된 활성산소종이 미토콘드리아 DNA의 돌연변이를 유발하고 미토콘드리아 성분을 손상시켜 노쇠를 초래한다는 것을 담고 있는 노화의 미토콘드리아 이론과 일치한다. 노화의 미토콘드리아 이론은 미토콘드리아 DNA(mtDNA)의 자발적 체세포 돌연변이의 축적이 mtDNA 암호화된 폴리펩타이드 쇄의 오류를 초래한다고 제안한다(Manczak M et al., J. Neurochem. 2005 Feb; 92(3): 494-504). mtDNA 암호화된 폴리펩타이드 쇄에서 일어나는 이러한 오류는 미토콘드리아 및 세포 분열 동안 확률적 및 무작위로 전달된다. 이러한 변경의 결과는 결손성 산화적 인산화이다. 호흡 연쇄 결손은 초기 손상을 증폭시키는 증가된 산화적 스트레스와 연계될 수 있다(Ozawa, 1995, Biochim. Biophys. Acta 1271: 177-189; 및 Lenaz, 1998, Biochim. Biophys. Acta 1366:53-67). 그러므로, 이러한 관점에서, 돌연변이된 미토콘드리아 DNA는 체내에 극소량으로만 존재할지라도 산화적 스트레스의 주요 발생인자일 수 있다.

mtDNA의 체세포 돌연변이의 축적이 결손성 산화적 인산화를 야기하는 경우, 원형질막 옥시도-리덕타제(PMOR)계가 산화된 피리딘 뉴클레오타이드의 재생을 통해 미토콘드리아 결손 세포의 생존을 연장하는 것으로 제안되어 있다(de Grey, 1997, BioEssays 19: 16 1-166; de Grey, 1998, Anti-Aging Med. 1:53-66; Yoneda et al, 1995, Biochem. Biophys. Res. Comm, 209: 723-729; Schon et al., 1996, Cellular Aging and Cell Death, Wiley and Sons, New York, pp. 19-34; Ozawa, 1997, Physiol. Rev. 77: 425-464; 및 Lenaz, 1998, BioFactors 8: 195-204). mtDNA 중의 병변의 축적과 세포외 반응, 예컨대 저밀도 지단백질(LDL) 중의 지질의 산화 및 부속 동맥 변화의 연계 모델은 처음 rho°세포에 의해 제안되었다(Larm et al., 1994, Biol. Chem. 269: 30097-30100; Lawen et al., 1994, Mol. Aspects. Med. 15:s13-s27; de Grey, 1997, BioEssays 19:161-166; 및 de Grey, 1998, Anti-Aging Med. 1:53-66). 이와 유사한 연구는 형질전환된 사람 세포의 배양물로 수행되었다(Vaillant et al., 1996, Bioenerg. Biomemb. 28:53 1-540).

원형질막 옥시도리덕타제(PMOR)가 과잉발현되는 조건 하에서, 전자는 일정한 전자 수송 연쇄에 의해 NADH로부터 외부 수용체로 전이되어 세포 표면에 활성산소종(ROS)을 발생시킨다. 이러한 세포 표면-발생 ROS는 이후 미토콘드리아에서 발생하는 노화 캐스캐이드(cascade)를 인접 세포뿐 아니라 저밀도 지단백질과 같은 혈행 혈액 성분으로 전파할 수 있다[전문이 참고인용된 PCT 공개번호 WO 00/57871 참조].

결과적으로, 최종 생리적 조건, 예컨대 지밀도 지단백질(LDL)의 지질 산화 및 부속 동맥 변화 등을 경감시키거나 치료하기 위한 목적으로 활성산소종(ROS)을 발생하는 arNOX의 능력을 감소시키는 제제를 찾아야만 한다. 노화 세포의 arNOX 활성은 조효소 Q(유비퀴논)와 같은 자연발생 제제에 의해 억제되는 것으로 밝혀져 있다[예컨대, 전문이 참고인용된 PCT 공개번호 WO 00/57871, WO 01/72318 및 WO 01/72319 참조]. 하지만, 조효소 Q의 사용은 몇가지 이유로 인해 전적으로 만족스러운 것은 아니다: 값이 비싸고, 산화하여 효능을 쉽게 상실하며, 조효소 Q를 함유하는 제제는 기능 상실을 방지하기 위해 특수 포장되어야 한다. 따라서, arNOX 활성을 억제할 수 있는 일부 제제 및 방법이 현재 존재하지만, 여전히 과제로 남아있다. 따라서, 종래 개시된 제제 및 기술을 증진시키거나 또는 arNOX를 억제하지만 비독성이고 자연 발생성인 제제 및 기술로 대체하는 개선책이 있을 수 있다.

피부는 특히 활성산소종에 의한 손상을 받기 쉽다. 피부는 2개의 주요 층으로 구성되어 있다. 각질층 또는 표피는 상층이고 피부의 보호 커버링을 형성하며 피부 안팎으로의 물과 물질의 흐름을 조절한다. 진피는 피부의 하부 층이고 피부에 강도, 탄성 및 두께를 제공한다. 진피의 주요 세포 종류는 섬유아세포로, 콜라겐, 엘라스틴 글리코스아미노글리칸과 같은 모든 피부 매트릭스 성분의 합성 및 분비에 책임이 있다. 콜라겐은 강도를 제공하고, 엘라스틴은 탄성을 제공하며 글리코스아미노글리칸은 피부의 촉촉함과 탱탱함을 제공한다.

활성산소종에 의한 손상 외에, 피부는 다양한 손상 스트레스 요인에 영향을 받는다. 피부는 환경의 다양한 요인들에 의해 손상되거나 악영향을 받을 수 있다. 일부는 햇빛에 의한 UV선, 바람 및 심지어 베임, 긁힘 등과 같은 기계적 상해와 같은 자연 발생성이다. 다른 요인으로, 인위적 상해도 매일 일어난다. 그 예로는 비누, 유화제 기반의 화장품, 열수, 유기 용매, 공기 조절장치 및 중앙 난방의 사용을 포함한다. 또한, 다른 피부 상해는 다양한 외부 스트레스요인(예: 광피부노화)에 피부가 노출되어 가속화될 수 있는 정상 노화 과정(세월에 따른 노화) 또는 피부 장애로부터 초래될 수도 있고, 또는 그 일부일 수도 있다.

모든 사람의 피부는 시간이 갈수록 노화한다. 하지만, 현대 사회에서 사람들은 더 오래 살고 정상적인 노화 효과가 축적할 기회가 있다. 이러한 효과는 주름이나 "검버섯"의 증가와 같이 순전히 표면적인 것이거나, 또는 UV선 노출로 인한 피부암 발생과 같이 건강에 영향을 미칠 수 있다. 사람들은 나이가 들수록, 피부가 얇아지고, 피부의 결합 조직인 콜라겐과 엘라스틴이 변화하여 피부의 탄탄함이 풀어지고 건조해진다. 또한, 피부의 땀샘과 지방분비선이 활성이 떨어지기 시작하여 피부가 수분을 상실하고 건조하게 한다. 또한, 피부의 혈관이 연약해져 파열하여 피부에 흘러나온다.

피부 노화의 증상으로는 건조, 가려움증, 피부의 박막화 또는 비후화, 주름 및 잔주름, 일반적으로 검버섯이라 불리는 과색소침착 부위 및 혈관이 파열된 피부밑 부위(거미양정맥류)를 포함한다.

주름, 잔주름, 처짐, 과색소침착 및 검버섯과 같은 실제 노화 및 오래된 피부의 육안 징후를 치료하거나 지연시키는 "노화방지" 화장품 및 의약품이 바람직하다. 하지만, 대부분의 화장품 또는 의약품은 이러한 증상들의 기본사항, 예컨대 ROS 유래의 arNOX 관련 라디칼의 생산 및 축적 등을 해결하지 못한다. 따라서, 효과적인 자연 피부 치료 및 예방 조성물 및 이를 사용하는 방법이 요구된다.

본 발명은 혈청 노화 인자를 격리하기 위한 제제, 및 이를 사용하는 방법에 관한 것이다. 더 상세하게는 본 발명은 여기서 "나락틴(Naractin)"이라 지칭되는 제제로, 엔.타제타(N. tazetta) 분말에 존재하거나, 또는 갓 제조한 엔.타제타 추출물과 비슷한 억제 수준으로 엔.타제타 분말을 증가시킬 수 있는 여러 자연 발생의 arNOX 억제제 중 어느 하나를 의미하는 제제, 및 NADH 옥시다제의 노화 관련 이소폼(arNOX)에 의해 유발된 세포 손상에서 초래되는 장래 및 장애 합병증을 예방하거나 치료하는데 "나락틴"을 사용하는 방법에 관한 것이다. 한가지 예시적 양태에서, 본 발명의 제제는 적어도 하나의 자연 발생의 나락틴을 포함한다. 이러한 자연 발생의 나락틴은 또한 다른 자연 발생의 arNOX 억제제의 항-arNOX 효과를 증가시킬 수 있다.

따라서, 1가지 예시적 양태로, 본 발명은 적어도 하나의 arNOX 억제제의 유효량을 함유하는, 노화 효과의 개선에 유용한 국소(topical) 조성물을 포함한다. 이러한 예시적 양태에 따르면, arNOX 억제제는 나락틴이고, 이 나락틴은 노화 효과를 감소시키는데 효과적이다. 본 발명에 따른 일부 예시적 양태에서, 나락틴은 엔.타제타, 버드나무, 옥수수, 크레피스(crepis), 포플러, 비부남(viburnam), 곰팡이, 특히 아스퍼질러스(Aspergillus), 박쥐나무, 자작나무, 시호(bupleurum), 콜키쿰(colchicum), 등대풀(spurge), 필리펜둘럼(filipendulum), 치자나무, 지치, 담배 또는 겨우살이로부터 추출 및/또는 정제된다.

다양한 다른 예시적 양태에서, 나락틴은 살리실레이트 또는 이의 유도체이다. 일부 예시적 양태에서, 살리실레이트는 살리신, 살리실산, 살리실 하이드록사메이트, 이들의 유도체 또는 배합물이다. 다양한 예시적 양태에서, 나락틴은 알란지움 치넨스(Alangium chinense), 에이.플라타니폴리움(A. platanifolium), 에이.프렘니폴리움(A. premnifolium), 아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger), 베툴라 알바(Betula alba), 부플루럼 팔카텀(Bupleurum falcatum), 카타란투스 로제우스(Catharanthus roseus), 초세니아 브락테오사(Chosenia bracteosa), 콜치쿰 오텀날레(Colchicum autumnale), 크레피스 훼티다(Crepis foetida), 씨.뢰아디폴리아(C. rhoeadifolia), 다투라 이녹시아(Datura inoxia), 두보이시아 미오포로이데스(Duboisia myoporoides), 엘루테로코커스 세추엔시스(Eleutherococcus setchuensis), 유포비아 살리시폴리아(Euphorbia salicifolia), 필리펜둘라 울마리아(Filipendula ulmaria), 포에니컬럼 불가레(Foeniculum vulgare), 가데니아 자스미노이데스(Gardenia jasminoides), 리토스퍼뭄 에리스로리존(Lithospermum erythrorhizon), 니코티아나 타바쿰(Nicotiana tabacum), 포풀러스 알바(Populus alba), 피.발사미페라(P. balsamifera), 피.다비디아나(P. davidiana), 피.델토이데스(P. deltoides), 피.유프라티카(P. euphratica), 피.그란디덴타타(P. grandidentata), 피.헤테로필라(P. heterophylla), 피.라시오카파(P. lasiocarpa), 피.맥시모윅지(P. maximowiczii), 피.니그라(P. nigra), 피.시에볼디(P. sieboldii), 피.시모니(P. simonii), 피.타카마하카(P. tacamahaca), 피.토멘토사(P. tomentosa), 피.트레물라(P. tremula), 피.트레물로이데스(P. tremuloides), 피.트리초카파(P. trichocarpa), 살릭스 아쿠티폴리아(Salix acutifolia), 에스.알바(S. alba), 에스.아메리카나(S. americana), 에스.악티카(S. arctica), 에스.아우리타(S. aurita), 에스.바빌로니카(S. babylonica), 에스.바스포디아나(S. basfordiana), 에스.카에시아(S. caesia), 에스.칼로덴드론(S. calodendron), 에스.카피타타(S. capitata), 에스.카프레아(S. caprea), 에스.차에노멜로이데스(S. chaenomeloides), 에스.시네레아(S. cinerea), 에스.다프노이데스(S. daphnoides), 에스.프라질리스(S. fragilis ), 에스.제미나타(S. geminata), 에스.그라실리스(S. gracilis), 에스.그라실리스틸라(S. gracilistyla), 에스.그라실리스틸로이데스(S. gracilistyloides), 에스.짐노레피스(S. gymnolepis), 에스.하스타타(S. hastata), 에스.허바세아(S. herbacea), 에스.인카나(S. incana), 에스.코리야나기(S. koriyanagi), 에스.라포눔(S. lapponum), 에스.라시안드라(S. lasiandra), 에스.라시오레피스(S. lasiolepis), 에스.마추다나(S. matsudana), 에스.미르시니폴리아(S. myrsinifolia), 에스.니그리칸스(S. nigricans), 에스.오레스테라(S. orestera), 에스.펜탄드라(S. pentandra), 에스.펜탄드로이데스(S. pentandroides), 에스.페티올라리스(S. petiolaris), 에스.필리시폴리아(S. phylicifolia), 에스.퍼퓨레아(S. purpurea), 에스.레펜스(S. repens), 에스.루브라(S. rubra), 에스.쉬웨리니(S. schwerinii), 에스.스코울레리아나(S. scouleriana), 에스.스미티아나(S. smithiana), 에스.송가리카(S. songarica), 에스.스페시스(S. species), 에스.스티풀라리스 (S. stipularis), 에스.테트라스퍼마(S. tetrasperma), 에스.트레물로이데스(S. tremuloides), 에스.트리안드라(S. triandra), 에스.비미날리스(S. viminalis), 토이수수 어바니아나(Toisusu urbaniana), 비버눔 헨리(Viburnum henryi), 브이.프루니폴리움(V. prunifolium), 브이.리티도필럼(V. rhytidophyllum) 또는 비스쿰 알붐(Viscum album) 유래인 것이다.

다양한 다른 예시적 구체예에서, 나락틴은 살리실레이트 또는 이의 유도체이다. 일부 예시적 양태에서, 살리실레이트는 살리신, 살리실산, 살리실 하이드록사메이트, 이들의 유도체 또는 배합물이다.

다양한 다른 예시적 구체예에서, 조성물은 추가로 화장품학적으로 또는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 일부 예시적 구체예에서, 나락틴 억제제는 자연발생의 급원, 예컨대 브로콜리, 표고버섯, 콜레우스(Coleus), 로즈마리, 연(lotus), 아티초크(artichoke), 씨 로즈(sea rose), 탠저린(tangerine), 달맞이꽃(Oenothera biennis), 아스타잔틴, 레드 오렌지, 오미자(Schisandra chinensis), 로니세라(Lonicera), 메밀(Fagopyrum), 당근 또는 올리브 등에서 유래하는 다른 arNOX 억제제와 함께 제공된다. 다양한 예시적 양태에서, 나락틴은 추가의 arNOX 억제제의 효과를 증강시킨다.

당업자는 본 명세서에 기술된 arNOX 억제 조성물이 임의의 편리한 방식으로 투여될 수 있음을 이해할 것이다. 일부 예시적 구체예에서, 이러한 투여 형태로는 크림제, 밀크제, 로션제, 젤제, 지질 또는 고분자 미소구체 또는 나노구체 또는 소포의 현탁액제, 비누제, 샴푸제 또는 선스크린제가 포함된다. 다양한 예시적 구체예에서, 본 발명에 의해 개선되는 노화 효과는 잔주름, 주름, 과색소침착, 탈수, 탄력 상실, 혈관종, 건조, 가려움, 모세혈관확장증, 광선 자반증, 지루성 각화증, 수화 부족, 콜라겐 감소 또는 광선 각화증을 포함하나, 이에 국한되는 것은 아니다. 본 발명의 이러한 예시적 양태 및 다른 예시적 양태에서, arNOX 억제제는 약 5 ㎍/ml 내지 약 500 ㎍/ml의 농도로 제공된다.

또 다른 예시적 양태에서, 본 발명은 노화 효과를 개선하기 위해 NADH 옥시다제의 노화-관련 이소폼에 의한 활성산소종의 생성을 억제하는 방법으로, 살리신, 살리실산, 살리실 하이드록사메이트 중 적어도 하나를 함유하는 조성물의 치료학적 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하여, NADH 옥시다제의 노화-관련 이소폼에 의한 활성산소종의 생성이 억제되고 노화 효과가 개선되도록 하는 방법을 포함한다. 다양한 예시적 구체예에서, 이 방법은 추가로 브로콜리, 표고버섯, 콜레우스, 로즈마리, 연, 아티초크, 씨 로즈, 탠저린, 달맞이꽃, 아스타잔틴, 레드 오렌지, 오미자, 로니세라, 메밀, 당근, 나르시서스 타제타, 버드나무, 귀리 또는 옥수수 중 적어도 하나에서 유래되는 추출물, 또는 정제된 추출물을 포함한다. 본 발명에 따른 다양한 예시적 구체예에서, 조성물은 크림제, 밀크제, 로션제, 젤제, 지질 또는 고분자 미소구체 또는 나노구체 또는 소포의 현탁액제, 비누제, 샴푸제 또는 선스크린제로서 도포된다. 이러한 예시적 구체예에서, 노화 효과로는 잔주름, 주름, 과색소침착, 탈수, 탄력 상실, 혈관종, 건조, 가려움, 모세혈관확장증, 광선 자반증, 지루성 각화증, 수화 부족, 콜라겐 감소 또는 광선 각화증을 포함하나, 이에 국한되는 것은 아니다.

또 다른 예시적 구체예에서, 본 발명은 arNOX을 억제하기에 충분한 나락틴의 유효량을 함유하는 화장품 조성물을 피부에 도포하는 것을 포함하여, 적어도 하나의 arNOX 매개의 노화 효과를 억제하는, 노화 효과를 개선하기 위한 화장 방법을 포함한다. 이러한 구체예에서, 나락틴은 살리실레이트 염 또는 이의 유도체이다. 다양한 예시적 구체예에서, 살리실레이트는 살리신, 살리실 하이드록사메이트 또는 살리실산이다. 본 발명에 따른 방법의 다양한 다른 구체예에서, 화장품 조성물은 추가로 당근 추출물, 올리브 추출물, 브로콜리 추출물, 표고버섯 추출물, 콜레우스 추출물, 로즈마리 추출물, 연 추출물, 아티초크 추출물, 씨 로즈 추출물, 탠저린 추출물, 달맞이꽃 추출물, 레드 오렌지 추출물, 오미자 추출물, 로니세라 추출물, 메밀 추출물, 버드나무 추출물, 옥수수, 귀리 또는 나르시서스 타제타 추출물을 비롯한 식물 추출물을 포함한다. 이러한 예시적 구체예에서, 나락틴은 화장품학적으로 허용되는 담체와 함께 제공된다.

다양한 예시적 구체예에서, 본 발명에 따른 방법에 의해 개선되는 노화 효과로는 잔주름, 주름, 과색소침착, 탈수, 탄력 상실, 혈관종, 건조, 가려움, 모세혈관확장증, 광선 자반증, 지루성 각화증, 수화 부족, 콜라겐 감소 또는 광선 각화증을 포함하나, 이에 국한되는 것은 아니다.

본 발명에 따른 방법의 다양한 구체예에서, 나락틴은 적어도 1일 1회 도포된다. 일부 예시적 구체예에서, 나락틴은 약 5 ㎍/ml 내지 약 500 ㎍/ml의 농도로 화장품 제제에 제공된다. 이러한 예시적 구체예에서, 본 발명에 따른 화장품 조성물은 크림제, 밀크제, 로션제, 젤제, 지질 또는 고분자 미소구체 또는 나노구체 또는 소포의 현탁액제, 비누제, 샴푸제 또는 선스크린제로서 투여된다.

본 발명에 따른 또 다른 구체예로, 본 발명은 적어도 하나의 나락틴 및 사용 설명서를 포함하여, 노화 효과를 개선시키는데 유용한 화장품의 도포를 위한 키트를 포함한다. 일부 예시적 구체예에서, 이 키트는 추가로 적어도 하나의 arNOX 억제성 식물 추출물용 담체로서 적합한 화장품 제제를 포함한다.

본 발명의 이러한 특징 및 장점은 물론 다른 특징과 장점도 이하 상세한 설명과 첨부되는 특허청구범위에서 더욱 완벽하게 밝혀질 것이다. 이러한 특징과 장점은 특히 첨부되는 특허청구범위에서 지적한 기구 및 배합에 의해 실현되고 수득될 수 있다. 더욱이, 본 발명의 특징 및 장점은 본 발명을 실행함으로써 익힐 수 있거나, 이하 제시된 상세한 설명으로부터 자명해질 것이다.

본 발명에 따른 조성물 및 방법의 다양한 예시적 구체예는 이하 도면을 참조하여 상세하게 설명될 것이다:
도 1a는 72세 남성의 타액 시료 유래의 arNOX 이소폼의 활성 패턴(BL=기준선) 및 엔.타제타 분말의 추출물을 첨가한 후 부분 억제(중앙 패널)를 도시한 것이다. 오른쪽 패널은 엔.타제타 분말에 살리실 하이드록사메이트(SHAM)(나락틴 1) 성분을 첨가한 후 활성의 거의 완전한 억제를 나타낸다. 도 1b는 엔.타제타 분말의 억제 효과가 SHAM 대신에 살리신(나락틴 3)에 의해 증가된 것을 제외하고는 도 1a와 동일했다. 나락틴은 도 2에 도시한 바와 같은 arNOX-억제 물질을 함유하는 엔.타제타 구근 부분의 일부 및 추출물을 특징짓는 붉은빛 색과 분광 성질이 유사하게, 철과 붉은빛 착물을 형성한다.
도 2a 내지 2f는 arNOX 활성에 억제성인 물질을 함유하는 엔.타제타 구근 영역 및 추출물을 예시한다. 억제 물질은 색이 적색이나 핑크색이 되지 않는, 구근 부분 및/또는 추출물에는 존재하지 않는다. 도 2a는 잎으로 구성된 영역과 줄기 영역으로 나뉜 구근을 도시한 것이다. 도 2b는 arNOX 억제와 관련이 있는 적색 화합물이 줄기 영역에 위치해 있음을 보여주는 사진이다. 도 2c는 추출물이 만들어진 구근의 여러 영역을 보여주고, 여러 영역이 도 2d, 2e 및 2f에 도시한 바와 같은 다른 수준의 적색 발색을 나타낸다는 것을 보여준다. 색의 발색은 빠르다. 또한, 추출물이 arNOX 활성을 억제하지 않는 엔.타제타 변종의 구근은 적색을 발색하지 못한다.
도 3은 철 염화물을 첨가한 후 옥수수 스틸(maize steele)의 맥관구조(뿌리의 중심 물 전달 조직)의 유사한 붉은빛 색을 예시한다. 적색을 초래하는 물질은 자연발생의 하이드록사메이트이다.
도 4는 기준선(BL) 패널에서의 타액(72세 남성)의 arNOX 활성 억제 및 옥수수 스틸로 제조된 균질액의 첨가에 의한 억제를 도시한 것이다. 옥수수 껍질(스틸을 둘러싼 조직)은 철 첨가 후 색이 변하지도 않고 arNOX 활성을 억제하지도 않았다.
도 5는 시판용 엔.타제타 분말(A) 대비, 엔.타제타 구근의 메탄올 추출물(B)의 박층 크로마토그래피에 의한 분석 예를 도시한 것이다. 청색 평판(UV) 배경은 자외선 형광을 나타낸다. 밝은 배경의 평판(BB)은 베를린 블루로 염색되었다. TLC 시스템은 디클로로메탄:메탄올:NH₄OH(10:1:0.2)였다. 실험실-추출 시료에서, 기원에서 물질의 바로 위에 있지만 분명하게 분리되고 하이드록사메이트의 존재를 시사하는 붉은빛 성분은 시판 분말에서보다 실험실-추출된 시료에서 훨씬 더 분명했다. 이것은 메탄올 추출물(도 5a) 및 수 추출물(도 5b)에서 모두 분명했다. 추정상의 하이드록사메이트는 실험실-추출된 시료에서보다 훨씬 낮은 수준으로 시판 분말에서도 관찰되었고, 다시 한번 arNOX 억제 활성의 수준과의 상관성을 입증했다.
도 6은 적색화된 철계 하이드록사메이트를 형성하도록 염화제2철을 첨가한 후 공지의 하이드록사메이트(SHAM)과 비교했을 때, 엔.타제타 구근 및 옥수수 스틸 및 껍질 추출물의 분광 분석을 도시한 것이다. 엔.타제타 구근의 arNOX 억제성-추출물은 적색이었고 약 550m에서 최대 흡광도를 나타냈다. 억제 활성이 없는 엔.슈도 나르시서스 구근의 추출물은 무색이었고 550nm에서 흡광도를 나타내지 않았다. 옥수수 뿌리 스틸 분획(활성) 및 옥수수 뿌리 껍질 분획(비활성)은 염화제2철의 첨가 부재 시에(-FeCl₂), 주로 무색이었다. 하지만, 염화제2철의 존재 시에(+FeCl₂), 적색은 약 550nm에서 최대 흡광도를 나타내는 옥수수 스틸 추출물에서 나타난 반면, 옥수수 껍질에서는 550nm에서 최대 흡광도가 나타나지 않았다. 시판용 안정한 하이드록사메이트인, 살리실 하이드록사메이트(SHAM)는 또한 약 550nm에서 최대 흡광도를 나타내는 적색을 제공했다. 음성 대조군은 무색이었고 550nm에서 흡광도를 나타내지 않았다.
도 7은 SHAM 희석율의 함수(log)로서 페리사이토크롬 c의 arNOX 활성을 도시한 그래프이다. 이 그래프는 시판 제제인 SHAM(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)에 의한 타액(72세 남성)의 arNOX 활성의 용량-의존적 억제를 도시한 것이다. 억제는 주로 11mg/ml에서 종결된다.
도 8은 살리실산 희석율의 함수(log)로서 페리사이토크롬 c의 arNOX 활성을 도시한 그래프이다. 이 그래프는 살리실산 농도의 함수로서, 타액(72세 남성)의 arNOX 활성의 용량-의존적 억제를 도시한 것이다. 1mg/ml 농도의 살리실산은 약 50%를 억제한다.
도 9는 살리신 희석율의 함수(log)로서 페리사이토크롬 c의 arNOX 활성을 도시한 그래프이다. 이 그래프는 살리신 농도의 함수로서, 타액(72세 남성)의 arNOX 활성의 용량-의존적 억제를 도시한 것이다. arNOX 활성의 최대 억제는 1mg/ml 농도에서 달성된다.
도 10a 및 10b는 다양한 "나락틴" 배합물의 arNOX 억제를 나타낸 그래프이다. 도 10a는 1mg/ml 살리신의 존재 하에 4mg/ml 쉬잔드라(Schizandra) 분말 + 엔.타제타 추출물(20㎕)의 혼합물이 나타내는 arNOX 억제의 살리신 증강을 예시한 것이다. 도 10b는 1mg/ml 살리신의 존재 하에 4mg/ml 쉬잔드라 분말 + 1mg/ml 엔.타제타 분말의 혼합물이 나타내는 arNOX 억제를 예시한 것이다. 이 혼합물 중 60㎕를, arNOX 활성의 급원으로 타액(72세 남성)을 함유하는 분석 혼합물 총 3ml에 첨가했다.

본 발명은 혈청 노화 인자를 격리하기 위한 제제, 및 이의 사용 방법에 관한 것이다. 더 상세하게는, 본 발명은 엔.타제타 분말에 존재하거나, 또는 신선한 엔.타제타 추출물과 비슷한 억제 수준으로 엔.타제타 분말을 증강시킬 수 있는 여러 자연발생의 arNOX 억제제 중 어느 하나를 의미하는 "나락틴"으로 지칭되는 제제, 및 NADH 옥시다제의 노화-관련 이소폼(arNOX)에 의해 유발된 세포 손상으로부터 초래되는 장애 또는 장애의 합병증을 예방하거나 치료하기 위해 "나락틴"을 사용하는 방법에 관한 것이다. 1가지 예시적 구체예에서, 본 발명의 제제는 적어도 하나의 자연발생의 나락틴을 포함한다. 이러한 자연발생의 나락틴은 또한 다른 자연발생의 arNOX 억제제의 항-arNOX 효과를 증강시킬 수도 있다.

본 명세서에 사용된 "나락틴"이란 용어는 엔.타제타 분말(예컨대, Xian Aojing Science and Technology Developing CO., LTD, Xi'an, Shaanxi, CN)에 존재하거나 또는 신선한 엔.타제타 추출물과 비슷한 억제 수준으로 엔.타제타 분말을 증강시킬 수 있는 여러 자연발생의 arNOX 억제제 중 어느 하나를 의미한다. 본 발명자들은 현재 "나락틴" 활성이 있는, 화학적으로 순수한, 3종의 공지된 물질을 확인했다. 또한, "나락틴"은 본 명세서에서 엔.타제타 추출물로부터 확인되었지만, 다른 자연 급원, 예컨대 버드나무, 옥수수 및 귀리에 존재할 수 있으며, 물론 본 발명은 그 급원에 상관없이 나락틴을 포괄한다는 것을 유의해야 한다.

본 명세서에 사용된, "화장품"이란 용어는 외양을 깨끗이 하거나, 아름답게 하거나, 매력을 향상시키거나 또는 변경시키기 위해 신체에 도포하는 물질을 의미한다.

본 명세서에 사용된 "추출물"이란 용어는 물질을 용매에 함침 또는 침지한 뒤, 활성 성분을 분리하여 수득되는 용액을 의미한다. 용매는 알콜, 물 등을 포함하여, 이에 국한되지 않는 임의의 적당한 용매일 수 있다. 일부 경우에, 추출물은 농축되거나, 용매를 증발시킨 뒤, 활성 성분을 다른 용매에 재현탁시키거나 용해시킬 수 있다. 본 명세서에 기술된, 엔.타제타 추출물은 구근으로부터 줄기 영역을 분리한 뒤, 하나의 줄기 영역을 증류수 3ml에서 균질화시켜 제조한다.

본 명세서에 사용된, "장애"란 용어는 임의의 병, 질병, 질환, 임상 상태, 병리학적 상태, 약화된 상태, 건강하지 않은 상태 및 임의의 비정상 또는 바람직하지 않은 신체 상태를 포함하여, 정상 기능을 손상시키는 살아있는 동물 신체 또는 식물 본체 또는 이의 일부 중 하나의 임의의 상태를 의미한다.

본 명세서에 사용된, "활성산소종"이란 용어는 산소 대사 또는 유리 전자의 전이로부터 유리 라디칼(예: 초과산화물 또는 하이드록시 라디칼)의 형성을 초래하는 산소 유도체를 의미한다.

본 명세서에 사용된, "항산화제"란 용어는 활성산소종의 활성을 중화시키거나 또는 상기 반응성 종에 의해 이루어진 세포 손상을 억제하는 화합물을 의미한다.

본 명세서에 사용된, "약제학적으로 허용되는 담체"란 용어는 활성 성분의 생물학적 활성의 효과를 방해하지 않고, 화학적으로 불활성이며 투여된 환자에게 비독성인 담체 매질을 의미한다.

본 명세서에 사용된, "약제학적으로 허용되는 유도체"란 용어는 항산화 활성을 나타내고 피검자에게 비교적 무독성인, 본 출원에 기술된 제형에 대응하는 임의의 동족체, 유사체 또는 단편을 의미한다.

"치료제"란 용어는 활성산소종에 의해 유발된 장애 또는 장애의 합병증을 예방 또는 치료하는데 도움을 주는 임의의 분자, 화합물 또는 치료제, 바람직하게는 항산화제를 의미한다.

"arNOX를 격리시키는 제제"란 용어는 arNOX와 상호작용하여 다른 물질과 arNOX의 반응을 감소시키고 활성산소종을 생성하는 arNOX의 능력을 억제하는 임의의 분자, 화합물 또는 치료제를 의미한다.

본 명세서에 사용된 "살리실레이트"란 용어는 자연발생의 급원에서 유래되든지 또는 새로이 합성되든지 간에 상관없이 살리신의 염, 접합체 또는 유도체를 의미한다. 이러한 살리실레이트로는, 예컨대 살리실산, 살리신 하이드록사메이트 및 살리신 자체, 이들의 유도체, 염 및 접합체를 포함한다.

본 발명자들은 연구 과정 동안 항-arNOX 활성이 있는 활성 제제를 함유하는 엔.타제타 추출물의 특정 시판 제제를 발견했다. 본 발명은 IBR-Dormin® 엔.타제타 구근 추출물(Israeli Biotechnology Research, Ltd., Israel)의 일부 시료가 arNOX에 대해 사실상 전혀 억제 활성을 나타내지 않는 반면, 동일 공급업체의 다른 로트(lot)는 강하게 억제성이라는 관찰에 의해 촉발되었다. 본 발명자들은 arNOX 억제제가 특정 보존제의 부재 시에 불안정하거나, 또는 엔.타제타 추출물 정제 동안 arNOX 억제제가 상실된 것으로 가정했다. 하지만, 상표명 IBR-Dormin®으로 입수가능한 시판 엔.타제타 분말은 특히 휴면기인 엔.타제타 구근으로 가공된 것임을 유의한다. 이 이론은 성장기에 구근은 "도민(dormin)이라 불리는 다량의 미확인 화합물을 생산한다는 것이다. 또한, 이러한 "도민"은 세포 또는 조직에서 휴면 상태를 유인한다는 가정이 세워져 있다. 따라서, 당해 개시된 데이터로부터 엔.타제타 "도민"은 본원에서 "나락틴"으로 동정된 것과 동일한 제제가 아닌 것으로 확인된다.

이러한 가능성을 시험하기 위해, 본 발명자들은 소수의 페이퍼 화이트(paper white)(엔.타제타) 구근을 수득했다. 물 및 에탄올성 추출물은 arNOX를 억제했다. 대부분 활성이 없는, 엔.슈도-나르시서스(N. pseudo - narcissus)(수선화) 및 엔.종퀼라(N. jonquilla)(노랑수선화)로 비교했다. 활성은 역시 arNOX를 억제하는 옥수수 및 귀리 실생식물(데이터는 미제시)에서 발견되는 자연발생의 하이드록사메이트의 특징인, 제2철계 철의 첨가로 증가된 적색 착색과 상관성이 있었다. 하이드록사메이트는 arNOX 억제에 도움이 되는 것으로 생각되기도 하는 화학적 성질을 갖고 있다. 평가용으로 가장 쉽게 이용할 수 있는 하이드록사메이트는 살리실 하이드록사메이트(나락틴 1)로, 식물의 대체 옥시다제의 공지된 억제제인 SHAM으로도 알려져 있다. SHAM은 검사 결과 엔.타제타 분말의 arNOX 억제 반응을 증강시키는 것으로 발견되었다. 소량의 SHAM으로 증강된 엔.타제타 분말은 90% 이상의 억제 수준을 나타냈다. 엔.타제타 구근은 활성 성분의 특성화를 완성하기에는 불충분했지만, 엔.타제타 분말(추출물)로 연구가 계속되었다(Xi'an Aojing Science and Technology Developing Co., Ltd., Xi'an, Shaanxi, China; 20:1 구근 및 꽃 추출물에서 이용가능함). 엔.타제타 분말은 엔.타제타 구근으로부터 제조된 추출물보다 훨씬 적은 수준으로 소량의 자연발생의 하이드록사메이트를 함유하는 것으로 나타난다.

제기된 의문은 하이드록사메이트 또는 살리실산 부위가 arNOX 억제제 활성에 가장 중요한지였다. 결과는 둘 다 중요하다는 것을 시사한다. 살리실산(나락틴 2)은 그 자체가 제2철계 철과 반응했을 때 역시 적색을 제공하는 매우 강력한 arNOX 억제제이다. 살리실산 또는 아스피린의 에스테르는 arNOX를 억제하지 않는다. 살리실레이트의 자연 급원인 버드나무 껍질의 수성 추출물을 검사한 결과, 역시 arNOX를 억제하는 것으로 밝혀졌다. 버드나무 껍질의 주요 살리실레이트인, 살리신, 배당체 역시 억제제로써 효과적이었다(나락틴 3).

따라서, 한 예시적 구체예에서 본 발명은 적어도 하나의 arNOX 억제제의 유효량을 함유하는 노화 효과를 개선하는데 유용한 국소 조성물을 포함한다. 이러한 예시적 구체예에 따르면, arNOX 억제제는 나락틴이고, 이 나락틴은 노화 효과를 감소시키는데 효과적이다. 본 발명에 따른 일부 예시적 구체예에서, 나락틴은 엔.타제타, 버드나무, 옥수수, 크레피스, 포플러, 비부남, 곰팡이, 특히 아스퍼질러스, 박쥐나무, 자작나무, 시호, 콜키쿰, 등대풀, 필리펜둘럼, 치자나무, 지치, 담배 또는 겨우살이로부터 정제된다.

다양한 다른 예시적 구체예에서, 나락틴은 살리실레이트 또는 이의 유도체이다. 일부 예시적 구체예에서, 살리실레이트는 살리신, 살리실산, 살리실 하이드록사메이트, 이들의 유도체 또는 배합물이다. 다양한 예시적 양태에서, 나락틴은 알란지움 치넨스, 에이.플라타니폴리움, 에이.프렘니폴리움, 아스퍼질러스 나이거, 베툴라 알바, 부플루럼 팔카텀, 카타란투스 로제우스, 초세니아 브락테오사, 콜치쿰 오텀날레, 크레피스 훼티다, 씨.뢰아디폴리아, 다투라 이녹시아, 두보이시아 미오포로이데스, 엘루테로코커스 세추엔시스, 유포비아 살리시폴리아, 필리펜둘라 울마리아, 포에니컬럼 불가레, 가데니아 자스미노이데스, 리토스퍼뭄 에리스로리존, 니코티아나 타바쿰, 포풀러스 알바, 피.발사미페라, 피.다비디아나, 피.델토이데스, 피.유프라티카, 피.그란디덴타타, 피.헤테로필라, 피.라시오카파, 피.맥시모윅지, 피.니그라, 피.시에볼디, 피.시모니, 피.타카마하카, 피.토멘토사, 피.트레물라, 피.트레물로이데스, 피.트리초카파, 살릭스 아쿠티폴리아, 에스.알바, 에스.아메리카나, 에스.악티카, 에스.아우리타, 에스.바빌로니카, 에스.바스포디아나, 에스.카에시아, 에스.칼로덴드론, 에스.카피타타, 에스.카프레아, 에스.차에노멜로이데스, 에스.시네레아, 에스.다프노이데스, 에스.프라질리스, 에스.제미나타, 에스.그라실리스, 에스.그라실리스틸라, 에스.그라실리스틸로이데스, 에스.짐노레피스, 에스.하스타타, 에스.허바세아, 에스.인카나, 에스.코리야나기, 에스.라포눔, 에스.라시안드라, 에스.라시오레피스, 에스.마추다나, 에스.미르시니폴리아, 에스.니그리칸스, 에스.오레스테라, 에스.펜탄드라, 에스.펜탄드로이데스, 에스.페티올라리스, 에스.필리시폴리아, 에스.퍼퓨레아, 에스.레펜스, 에스.루브라, 에스.쉬웨리니, 에스.스코울레리아나, 에스.스미티아나, 에스.송가리카, 에스.스페시스, 에스.스티풀라리스, 에스.테트라스퍼마, 에스.트레물로이데스, 에스.트리안드라, 에스.비미날리스, 토이수수 어바니아나, 비버눔 헨리, 브이.프루니폴리움, 브이.리티도필럼 또는 비스쿰 알붐 유래인 것이다.

다양한 다른 예시적 구체예에서, 조성물은 추가로 화장품학적으로 또는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 일부 예시적 구체예에서, 나락틴 억제제는 자연발생의 급원, 예컨대 브로콜리, 표고버섯, 콜레우스, 로즈마리, 연, 아티초크, 씨 로즈, 탠저린, 달맞이꽃, 아스타잔틴, 레드 오렌지, 오미자, 로니세라, 메밀, 당근 또는 올리브 등에서 유래하는 다른 arNOX 억제제와 함께 제공된다. 다양한 예시적 구체예에서, 나락틴은 추가의 arNOX 억제제의 효과를 증강시킨다.

또 다른 예시적 구체예에서, 본 발명은 노화 효과를 개선하기 위해 NADH 옥시다제의 노화-관련 이소폼에 의한 활성산소종의 생성을 억제하는 방법으로, 살리신, 살리실산, 살리실 하이드록사메이트 중 적어도 하나를 함유하는 조성물의 치료학적 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하여, NADH 옥시다제의 노화-관련 이소폼에 의한 활성산소종의 생성이 억제되고 노화 효과가 개선되도록 하는 방법을 포함한다. 다양한 예시적 구체예에서, 이 방법은 추가로 브로콜리, 표고버섯, 콜레우스, 로즈마리, 연, 아티초크, 씨 로즈, 탠저린, 달맞이꽃, 아스타잔틴, 레드 오렌지, 오미자, 로니세라, 메밀, 당근, 나르시서스 타제타, 올리브, 버드나무, 귀리, 옥수수, 크레피스, 포플러, 비부남, 곰팡이, 특히 아스퍼질러스, 박쥐나무, 자작나무, 시호, 콜키쿰, 등대풀, 필리펜둘럼, 치자나무, 지치, 담배 또는 겨우살이 중 적어도 하나로부터의 추출물 또는 정제된 추출물을 포함한다. 본 발명에 따른 다양한 예시적 구체예에서, 조성물은 크림제, 밀크제, 로션제, 젤제, 지질 또는 고분자 미소구체 또는 나노구체 또는 소포의 현탁액제, 비누제, 샴푸제, 엘릭시르 또는 선스크린제로서 도포된다. 이러한 예시적 구체예에서, 노화 효과로는 잔주름, 주름, 과색소침착, 탈수, 탄력 상실, 혈관종, 건조, 가려움, 모세혈관확장증, 광선 자반증, 지루성 각화증, 수화 부족, 콜라겐 감소 또는 광선 각화증을 포함하나, 이에 국한되는 것은 아니다.

또 다른 예시적 구체예에서, 본 발명은 arNOX을 억제하기에 충분한 나락틴의 유효량을 함유하는 화장품 조성물을 피부에 도포하는 것을 포함하여, 적어도 하나의 arNOX 매개의 노화 효과를 억제하는, 노화 효과를 개선하기 위한 화장 방법을 포함한다. 이러한 구체예에서, 나락틴은 살리실레이트 염 또는 이의 유도체이다. 다양한 예시적 구체예에서, 살리실레이트는 살리신, 살리실 하이드록사메이트 또는 살리실산이다. 본 발명에 따른 방법의 다양한 다른 구체예에서, 화장품 조성물은 추가로 당근 추출물, 올리브 추출물, 브로콜리 추출물, 표고버섯 추출물, 콜레우스 추출물, 로즈마리 추출물, 연 추출물, 아티초크 추출물, 씨 로즈 추출물, 탠저린 추출물, 달맞이꽃 추출물, 레드 오렌지 추출물, 오미자 추출물, 로니세라 추출물, 메밀 추출물, 버드나무 추출물, 옥수수, 크레피스, 포플러, 비부남, 곰팡이, 특히 아스퍼질러스, 박쥐나무, 자작나무, 시호, 콜키쿰, 등대풀, 필리펜둘럼, 치자나무, 지치, 담배, 겨우살이, 귀리 또는 나르시서스 타제타 추출물을 함유하는 식물 추출물을 포함한다. 이러한 예시적 구체예에서, 나락틴은 화장품학적으로 허용되는 담체와 함께 제공된다.

본 명세서에 정의된 항산화제, 세포 성분 및 표적 단백질은 다음과 같이 약칭된다:

본 발명

본 발명은 나르시서스 타제타(Narcissus tazetta) 구근 및 옥수수로부터 동정 및 정제된 자연 발생의 제제에 관한 것으로, 내부 또는 국소 투여될 수 있다. 이 제제는 arNOX를 특이적으로 억제하고 이의 노화 관련 효과 중 일부를 개선시킨다. 이러한 제제들은 분리 제제 형태이거나 또는 식물 추출물일 수 있다. 또한, arNOX 억제제는 단독으로 사용할 수 있지만, 복수의 arNOX 억제제 및/또는 신체에 다른 유익한 효과를 나타내는 화합물을 비롯한 제형을 포함하는 조성물로 사용될 수도 있다. 구체적으로, 본 발명자들은 arNOX 억제제를 화장품에 첨가함으로써 이 억제제가 정상 피부 보호 요법을 증강시키는 유익한 효과를 미칠 수 있다는 것을 발견했다.

또 다른 예시적 구체예에서, 본 발명은 피부에서 노화 효과를 감소시키는데 효과적인 적어도 하나의 arNOX 억제제의 화장품학적 유효량을 포함하여, 노화 효과를 개선하기 위한 화장품 조성물을 포함한다. 이러한 예시적 구체예의 한 변형에서, 본 발명은 화장품학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 이 구체예에서, 담체는 분말, 연화제, 로션제, 크림제, 액제 등을 포함할 수 있다. 일부 예시적 구체예에서, arNOX 억제제는 식물 유래인 것이다. 특별한 예시적 구체예에서, 식물은 브로콜리, 표고버섯, 콜레우스, 로즈마리, 연, 아티초크, 씨 로즈, 탠저린, 달맞이꽃, 아스타잔틴, 레드 오렌지, 오미자, 로니세라, 메밀, 당근, 나르시서스 타제타, 버드나무, 옥수수, 크레피스, 포플러, 비부남, 곰팡이, 특히 아스퍼질러스, 박쥐나무, 자작나무, 시호, 콜키쿰, 등대풀, 필리펜둘럼, 치자나무, 지치, 담배, 겨우살이, 귀리 또는 올리브 중에서 선택된다.

이 예시적 구체예에 따른 화장품 조성물은 모든 예시 방식으로 투여될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 일부 예시적 구체예에서, 본 발명에 따른 화장품 조성물은 국소, 경구, 비경구, 경피 또는 직장으로 적용될 수 있다. 일부 예시적 구체예에서, 본 조성물은 크림제, 밀크제, 로션제, 젤제, 지질 또는 고분자 미소구체 또는 나노구체 또는 소포의 현탁액제, 비누제 또는 샴푸제로서 제형화된다.

또 다른 예시적 구체예에서, 본 발명은 arNOX 억제제의 유효량을 함유하는 화장품 조성물을 피부에 도포하는 것을 포함하여 적어도 하나의 arNOX 매개의 노화 효과를 억제하는, 노화 효과를 개선하기 위한 화장 방법을 포함한다. 본 발명에 따른 일부 예시적 구체예에서, arNOX 억제제는 식물 추출물이다. 다른 예시적 구체예에서, arNOX 억제제는 식물 추출물로부터 정제된다. 본 발명에 따른 다양한 예시적 구체예에서, arNOX 억제제는 약 5 ㎍/ml 내지 약 500 ㎍/ml의 농도로 존재한다. 다양한 예시적 구체예에서, 활성제의 농도는 약 15 내지 100 ㎍/ml의 농도로 존재한다. 일부 예시적 구체예에서, 본 발명에 따른 화장품 조성물은 국소, 경구, 비경구, 경피, 직장 또는 임의의 유효 방법으로 적용된다. 일부 예시적 구체예에서, 조성물은 크림제, 밀크제, 로션제, 젤제, 지질 또는 고분자 미소구체 또는 나노구체 또는 소포의 현탁액제, 비누제 또는 샴푸제로서 제형화된다.

또 다른 예시적 구체예에서, 본 발명은 키트를 포함한다. 이러한 구체예에서, 키트는 다량의 arNOX 억제제 및 사용설명서를 포함할 수 있다. 다양한 예시적 구체예에서, 키트는 추가로 사용 전에 arNOX 억제제가 첨가될 수 있는 화장품 제제를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 일부 예시적 구체예에서는 하나의 arNOX 억제제가 사용되지만, 다른 예시적 구체예에서는 1 이상의 추출물 또는 arNOX 억제제가 함께 사용되기도 하는 것으로 이해되어야 한다. 또한, 본 발명의 다양한 예시적 구체예에서는 하나 또는 다양한 arNOX 억제제가 다양한 방식으로 적용 또는 투여될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 그 예를 들면, 크림제, 밀크제, 로션제, 젤제, 지질 또는 고분자 미소구체 또는 나노구체 또는 소포의 현탁액제, 비누제, 샴푸제 또는 선스크린제 형태의 국소 투여, 및 차 또는 캡슐 형태 또는 임의의 다른 유효 방식이 있다.

원형질막 하이드로퀴논 ( NADH ) 옥시다제 ( NOX ):

원형질막 NADH 옥시다제(NOX)는 정상적으로 호르몬 및 성장인자에 반응하는, 하이드로퀴논(NADH) 옥시다제 활성 및 단백질 디설파이드-티올 상호교환 활성이 있는 독특한 세포 표면 단백질이다. 또한, tNOX라 지칭되는 활성의 호르몬 둔감성 및 약물 반응성 형태도 소개되어 있고, 이것은 암 세포에 특이적이다. 특정 조건 하에서는 NOX 단백질이 ROS를 생산할 수 있다는 증거가 있다. 예를 들어, 배양 세포에서 산화적 스트레스의 근원으로, 자외선이 초과산화물 생성을 개시시키는데 사용된다(Morre et al., 1999, Biofactors 9: 179-187)(전문이 참고인용된 미국 특허 5,605,810호 참조).

엔. 타제타로부터 arNOX 억제제의 분리 및 특성화

본 발명을 야기하는 일련의 연구는 시판 엔.타제타 추출물(IBR-Dormin®로 입수가능, IBR Inc., 이스라엘)의 특정 시료가 종종 arNOX에 강하게 억제성인 반면, 묶음은 다르지만 제제의 종류는 동일한 다른 시료 y는 그렇지 않다는 관찰에 의해 촉진되었다. 본 발명자들은 arNOX 억제가 특정 보존제의 부재 하에서 불안정한 무엇인가에 의하거나, 또는 활성 제제의 arNOX 억제 성분이 추출물 정제 동안 비활성 제제로부터 상실된 것으로 가정했다. 최근 IBR-Dormin®으로 알려진 제품이 식물 유래의 증식억제제와 관련이 있는 것으로 소개된 점도 주목해야 한다(미국 특허 출원 공개번호 20060160702, 출원번호 11/289,156('156 출원), Soudant et al. 참조). '156 출원에 따르면, 증식억제제는 식물 기관을 휴면 상태로 유도할 수 있는 식물에서 발견된다(요약서). 따라서, "도민"이라 불리는 증식억제제는 세포 증식의 지연을 통해 노화를 지연시켜 작용하는 것을 시사한다. "도민"은 휴면기에 들어간 식물의 추출물을 제조함으로써 수거한다. 따라서, 휴면 식물의 추출물만이 이러한 성질의 "도민"으로 사용될 수 있다.

본 발명자들은 구근 및 꽃의 시판 엔.타제타 분말의 여러 엔.타제타 추출물(Xian Aojing Science and Technology Developing CO., LTD, Xian, CN)이 다양한 arNOX 억제도를 나타낸다는 것을 인지했기 때문에, 본 발명자들은 arNOX 억제 물질을 동정하는 일련의 실험을 수행했다. 상기 가능성을 검사하기 위해, 페이퍼 화이트(엔.타제타) 나르시서스의 구근은 상업적 정원업자(Brent and Becky's bulbs, Gloucester, VA)로부터 입수했다. 대부분 활성이 없는, 엔.슈도-나르시서스(수선화) 및 엔.종퀼라(노랑수선화)로 비교했다. 활성은 자연발생의 하이드록사메이트의 특징인, 제2철계 철의 첨가로 증가된 적색 착색과 상관성이 있었다. 평가용으로 가장 쉽게 이용할 수 있는 하이드록사메이트는 살리실 하이드록사메이트(SHAM)(나락틴 1)였다. 물 및 에탄올성 추출물을 제조했는데, 이것은 arNOX를 억제하고 활성이 낮은 꽃 유래의 엔.타제타 분말과 배합했을 때 상기 억제를 증강시켰다(도 1a 참조). 도 1b는 물에 의해 추출된 구근(Xian Aojing, LTD)으로부터 유래되고 살리신(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)(나락틴 3)을 이용해 증강시킨, 엔.타제타 분말의 증강을 보여주는 1a와 유사하다. arNOX 억제 활성이 전적으로 부족한 나르시서스 슈도-나르시서스(수선화) 및 나르시서스 종퀼라(노랑수선화) 추출물의 유사 추출물로 비교를 실시했다.

도 2에 예시한 바와 같이, 엔.타제타 추출물의 활성은 역시 arNOX를 억제하는 옥수수(도 3) 및 귀리(도시되지 않음) 실생식물에서 발견되는 것과 같은 자연발생의 하이드록사메이트의 특징인 제2철계 철의 첨가에 의해 증가된 적색 착색과 상관성이 있었다(도 4). 자연 발생의 하이드록사메이트를 포함하는 엔.타제타 추출물의 활성 성분의 가능한 능력에 대한 추가의 증거는 박층 크로마토그래피 분석(도 5), 옥수수 뿌리의 스틸(도 2에 예시된 엔.타제타 구근의 잠재적 하이드록사메이트-풍부 줄기 맥관구조에 해당하는, 하이드록사메이트가 농축된 옥수수 뿌리의 중심 맥관구조) 유래의 철 첨가생성물의 분광 연구로부터(도 6) 시판 하이드록사메이트(예컨대 Sigma-Aldrich, St. Louis, MO에서 시판하는 살리실 하이드록사메이트(SHAM))와의 비교에 의해 제공했다.

SHAM은 arNOX 활성의 억제에 대해 시험한 결과, 1mg/ml의 농도에서 72세 남성 타액에서 arNOX 활성의 90% 이상의 억제가 수득되었다(도 7). 또한, SHAM은 부분 활성인 엔.타제타 분말의 arNOX 활성 억제를 증강시키는 것으로 발견되었다(도 1). 시판 엔.타제타 분말은 자연 발생의 하이드록사메이트 수준이 아마도 SHAM과 유사하지만 갓 제조한 엔.타제타 구근으로부터 제조된 추출물에서 발견되는 수준보다는 훨씬 적은 수준을 함유하는 것으로 보인다(도 5a 및 도 5b).

안정화된 살리실 하이드록사메이트의 살리실 부분이 arNOX 활성의 억제에 중요한지 아닌지를 해명하기 위해, 살리실산(나락틴 2, 예컨대 Sigma-Aldrich(St. Louis, MO)의 시판품)을 타액(72세 남성)의 arNOX 활성 억제제로 시험한 결과 arNOX를 억제하는 것으로 발견되었다(도 8). 또한, 살리실산은 하이드록사메이트에 의해 제공되는 것과 유사한 제2철계 철과 반응했을 때 적색을 제공했다. 살리실산 및/또는 아스피린의 에스테르는 arNOX를 억제하지 않았다. 살리실레이트의 천연 급원인 버드나무 껍질의 수성 추출물은 시험한 결과, 또한 arNOX를 억제하는 것으로 발견되었다. 이어서, 버드나무 껍질의 주요 살리실레이트인 살리신(Sigma-Aldrich, St Louis, Mo)(나락틴 3으로 명명)을 시험한 결과, SHAM(나락틴 1) 또는 살리실산(나락틴 2)보다 10배 낮은 농도에서 활성인 것으로 발견되었다(도 9).

살리신은 단독 제제로서 활성일 뿐만 아니라(도 9), 오미자 분말 및 엔.타제타 분말 등과 같은 자연 급원 유래의 다른 arNOX 억제제 혼합물의 arNOX 억제를 증강시키는 데에도 활성적이었다(도 10a 및 10b). 동정 및 시험된 3가지 화학적으로 순수한 나락틴(엔.타제타 분말에 존재하거나 엔.타제타 분말을 가장 활성적인 갓 제조한 엔.타제타 추출물과 비슷한 억제 수준으로 증강시킬 수 있는 여러 자연 발생의 arNOX 억제제 중 어느 하나를 나타내는데 사용되는 용어) 중에서, 살리신은 가장 유망한 것으로 나타났다. 또한, 살리신은 안정하고, 수용성이며, 비자극성이고 비교적 저렴하다.

일반적으로, 노화된 세포의 특징은 arNOX를 발현하고/하거나 방출하는 것을 포함하며, 다음 특징들 중 하나 이상을 나타내는 것을 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다: 연령-관련 PMOR 시스템, 활성산소종을 발생시키는 능력, 및 기능적 결손성 미토콘드리아를 보유하는 것. 본 발명의 한 구체예는 노화 세포의 부정적인 효과를 감소시키는 제제의 활용이다.

노화 피부의 증상으로는 건조, 가려움, 피부의 박막화 또는 비후화, 주름 및 잔주름, 과색소침착(노화 점 또는 검버섯이라 불림), 및 얼룩진 외양을 포함한다. 노화 피부는 콜라겐 감소 및 이에 동반하는 탄력성의 감소를 나타내는 것으로 밝혀져 있다. 또한, 노화 피부는 절단된 콜라겐 및 가교된 단백질의 증가량을 갖고 있다. 이들 과정에서 초과산화물 라디칼이 나타났다. 이 피부는 상처를 입었을 때 치료에 더 많은 시간이 걸린다. 혈관은 나이가 들어감에 따라 팽창되어 가기도 하기 때문에 박막화 피부를 통해 관찰하기가 더 쉬워진다. 이러한 혈관은 피부에 적색 돔형 형체(체리 혈관종)로, 또는 얼굴에 모세혈관 파열(모세혈관확장증)로 관찰할 수 있다. 많은 사람들은 피부에서 소량의 출혈에 의해 생긴 피부 상의 자주색 반점 또는 반(patch)인 노인성 또는 광선 자반병을 발생시킨다. 노인 피부는 멜라닌세포라 불리는 보호 세포가 나이가 들수록 감소하기 때문에 광 손상에 대해 적은 보호효과를 나타낸다. 또한, 노화 피부는 다양한 양성 및 전암성 성장, 예컨대 지루성 및 광선 각화증 등을 발생시킬 가능성이 크다. 지루성 각화증은 종종 거친 갈색 외양을 나타내고 사마귀처럼 보인다. 이들은 양성이다. 광선 각화증은 광 노출을 받은 피부 부위 상의 작은 비늘 모양의 성장이다. 이것은 피부암의 초기 증상이다.

본 발명은 피부 생명력을 유지하기 위해 천연 식물 추출물을 단독으로 또는 크림 연화제, 로션제, 젤제, 연화제 등의 형태로 국소 투여하는 용도를 포함한다. 본 발명의 바람직한 구체예는 피부 생명력의 유지 및 향상을 위해 arNOX 억제 추출물을 포함하는 크림제를 환자의 피부에 국소 투여하는 것을 포함한다.

피부의 화장품 처치

본 발명은 피부 손상 및 관련 상태, 구체적으로 노화에서 산출되고 arNOX와 연관이 있는 상태를 예방 및/또는 개선시키는 활성 제제(들)를 함유하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 상기 조성물을 이용하는 방법도 포함한다. 각질층은 상부 표면층을 형성하고 수분 및 피부의 안팎으로 물질의 흐름을 제어하면서 피부를 보호하는 작용을 하는 피부 층이다. 이러한 장벽 기능이 파손될 때, 피부는 손상 효과를 겪고, 또한 이는 조기 노화에 기여한다. 이러한 피부의 조기 노화를 유발하는 손상 효과는 건강하고 어리게 보이는 느낌의 피부를 유지하기를 희망하는 많은 개인들의 관심이다. 활성산소종은 세포에 잠재적으로 치명적인 다수의 파괴 반응에 참여한다. 활성산소종은 유해한 세포 상호작용, 예컨대 건강한 콜라겐 및 엘라스틴을 생산하는 섬유아세포 능력의 장애를 비롯한 유해한 세포 상호작용에 부분적으로 책임이 있다. 더욱이, 피부는 피부 장애, 환경 학대(바람, 냉난방장치, 중앙 난방), 또는 정상 노화 과정(세월에 따른 노화)을 통해 황폐해지고, 이것은 태양에 대한 피부 노출(광노화)에 의해 가속화될 수 있다.

본 발명의 바람직한 구체예는 조직, 특히 피부에 대한 arNOX 관련 손상을 치료하기 위한 식물 유래의 자연발생의 활성 제제를 제공한다. 이 활성 제제는 피부 손상 및 관련 상태를 예방 및/또는 개선시킨다. 본 발명의 한 구체예에서, 가공처리된 식물 산물은 arNOX 활성을 은폐시킨다. 본 발명의 다른 구체예에서, 가공처리된 식물 산물은 활성산소종을 억제한다. 다른 구체예에서, 본 발명의 제제 및 방법은 피부의 건강을 예방 및/또는 향상시킨다. 예를 들어, 제제는 피부 긴축성, 색상 및 구멍의 출현, 탄력성, 수화를 향상시킬 수 있고/있거나 잔주름 및 노화의 가시적 징후의 출현을 감소시키는데 도움을 줄 수 있다. 본 발명의 다른 예시적 구체예에서, 제제는 신체의 콜라겐 및 엘라스틴의 자연 생산에 긍정적인 영향을 미친다. 다른 구체예에서, 본 발명의 제제는 오염, 태양, 유리 라디칼 및 스트레스와 같은 환경 선동자의 효과를 최소화한다.

본 발명의 한 구체예는 피부 장애 및 이의 효과를 예방 및/또는 개선시키기 위한 조성물, 및 이의 사용 방법을 제공한다.

본 발명의 한 구체예는 활성산소종의 생산 효과를 예방 및 감소시키기 위한 조성물 및 이의 사용 방법을 제공한다. 예를 들어, 본 발명은 arNOX 활성을 적어도 부분적으로 은폐하거나 또는 억제하는 식물 유래의 활성 제제의 사용을 포괄한다. 또한, 본 발명은 arNOX 활성을 은폐하는 다른 합성 및 천연 화합물의 사용을 고찰한다.

본 발명은 주름, 잔주름, 늘어짐, 과색소침착 및 노화점과 같은 실제 노화 및 기후로 인해 손상된 피부의 가시적 징후를 지연시키고 피부를 치료하는 조성물을 개시한다. 또한, 본 발명은 민감성, 건조 및/또는 박피성 피부의 출현 및 상태를 감소시키고 발적, 및/또는 자극받은 피부를 진정시키는 작용을 하고 반점, 여드름, 흠 및 다른 피부 불순을 치료한다.

본 발명은 노화 세포에 의해 혈청으로 방출된, 노화-관련 NADH 옥시다제 이소폼(arNOX)을 표적으로 하여 노화를 초래하는 세포에서 산화적 변화로 인한 장애를 치료하기 위한 약제학적 또는 화장품 조성물, 사용 방법 및 약제학적 또는 화장품 키트를 제공한다. 조성물은 식물로부터 추출된 제제를 함유할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조성물은 단독이든 또는 다른 억제제와 배합되든지 간에 arNOX 활성을 억제하고, 적어도 부분적으로 노화 세포에 의해 혈청 내로 방출된 NADH 옥시다제의 노화 관련 이소폼의 활성을 억제하거나 차단하는 것으로 밝혀진 적어도 하나의 추출물을 포함할 수 있다. 이 조성물은 유비퀴논, 천연 추출물 또는 이로부터 유래되는 arNOX의 억제에 유용한 활성 제제를 포함하는 것으로 알려진 제제를, 크림제, 로션제, 연화제, 젤제 등의 제조에 당업계에 공지된 다른 화합물과 함께 포함할 수 있다. 이러한 다른 화합물로는 검, 충전재, 보존제 등을 포함할 수 있다.

한 구체예에서, 이러한 성분의 일부 또는 전부는 노화 방지 및 복구 혈청 제형에서 일반적으로 발견되는 다른 성분과 배합될 수 있다. 물 외에 다른 비히클 또는 물과 더불어 비히클은 액체 또는 고체 연화제, 용매, 습윤제, 증점제 및 분말을 포함할 수 있다. 비히클은 조성물의 중량을 기준으로 0.1% 내지 99.9%, 바람직하게는 25% 내지 80%일 수 있고, 다른 화장품 보조제가 없으면 조성물의 나머지를 형성할 수 있다. 한 구체예에서, 비히클은 비히클의 중량을 기준으로 적어도 80%가 물이다. 다른 구체예에서, 물은 중량 기준으로 조성물의 약 50% 내지 85%로 포함된다. 또 다른 구체예에서, 물은 조성물의 중량 기준으로 약 0.1% 내지 55%로 존재한다. 다른 구체예에서, 다른 비히클이 상기 언급한 농도로 사용된다.

오일 또는 유성 물질은 유화제와 함께 존재할 수도 있어, 주로 이용된 유화제의 평균 친수성-친지성 평형가(HLB)에 따라 유중수 에멀젼 또는 수중유 에멀젼을 제공한다.

본 발명의 조성물은 또한 선스크린제를 포함할 수 있다. 선스크린제는 자외선을 차단하는데 통용되는 물질을 포함한다. 화합물의 예는 PABA, 신나메이트 및 살리실레이트의 유도체이다. 예를 들어, 옥틸 메톡시신나메이트 및 2-하이드록시-4-메톡시 벤조페논(옥시벤존이라고도 알려짐)이 사용될 수 있다. 옥틸 메톡시신나메이트 및 2-하이드록시-4-메톡시 벤조페논은 각각 상표명 Parsol MCX 및 Benzophenone-3으로 시판되고 있다. 에멀젼에 사용되는 선스크린제의 정확한 양은 태양의 자외선에 대한 희망하는 보호 정도에 따라 달라질 수 있다.

연화제는 추가로 본 발명의 화장품 조성물에 첨가될 수 있다. 이러한 연화제의 수준은 총 조성물의 중량을 기준으로 0.5% 내지 50% 범위, 바람직하게는 5% 내지 30% 범위일 수 있다. 연화제는 에스테르, 지방산 및 알콜, 폴리올 및 탄화수소와 같은 일반 화학적 카테고리에 따라 분류될 수 있다.

에스테르는 모노에스테르 및 디에스테르일 수 있다. 지방 디에스테르의 허용되는 예로는 디부틸 아디페이트, 디에틸 세바세이트, 디이소프로필 다이머레이트 및 디옥틸 석시네이트를 포함한다. 허용되는 분지형 지방산 에스테르로는 2-에틸-헥실 미리스테이트, 이소프로필 스테아레이트 및 이소스테아릴 팔미테이트를 포함한다. 허용되는 삼염기성 에스테르로는 트리이소프로필 트리리놀레이트 및 트리라우릴 시트레이트를 포함한다. 허용되는 직쇄형 지방산 에스테르로는 라우릴 팔미테이트, 미리스틸 락테이트 및 스테아릴 올레에이트를 포함한다. 바람직한 에스테르로는 코코-카프릴레이트/카프레이트(코코-카프릴레이트와 코코-카프레이트의 블렌드), 프로필렌 글리콜 미리스틸 에테르 아세테이트, 디이소프로필 아디페이트 및 세틸 옥타노에이트를 포함한다.

적당한 지방 알콜 및 산으로는 탄소원자 10 내지 20개를 보유하는 화합물을 포함한다. 특히, 세틸, 미리스틸, 팔미트 및 스테아릴 알콜 및 산과 같은 화합물이 바람직하다.

연화제로 작용할 수 있는 폴리올 중에는 직쇄형 및 분지형 알킬 폴리하이드록실 화합물이 있다. 예를 들어, 프로필렌 글리콜, 소르비톨 및 글리세린이 바람직하다. 또한, 고분자 폴리올, 예컨대 폴리프로필렌 글리콜 및 폴리에틸렌 글리콜이 유용할 수 있다. 부틸렌 및 프로필렌 글리콜이 또한 투과 향상제로서 특히 바람직하다.

연화제로 작용할 수 있는 탄화수소의 예는 임의로 탄소원자 12 내지 30개의 탄화수소 쇄를 보유하는 것이다. 구체예로는 광유, 석유 젤리, 스쿠알렌 및 이소파라핀을 포함한다.

본 발명의 조성물의 다른 구체예는 증점제를 포함한다. 증점제는 보통 조성물의 0.1 내지 20 중량%, 바람직하게는 약 0.5 내지 10중량%의 임의의 양으로 존재할 수 있다. 증점제의 예는 B.F. Goodrich Co.에서 상표명 CARBOPOL®로 판매하는 가교 폴리아크릴레이트 물질이다. 검은 잔탄, 카라기난, 젤라틴, 카라야, 펙틴 및 로커스트 빈 검 등이 이용될 수 있다. 특정 상황 하에, 증점 기능은 실리콘 또는 연화제로도 작용하는 물질에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, 10 센티스트로크 초과의 실리콘 검 및 글리세롤 스테아레이트와 같은 에스테르는 이중 기능성을 갖고 있다.

분말은 본 발명의 화장품 조성물에 첨가될 수 있다.

이러한 분말로는 초크, 탈크, 카올린, 전분, 스멕타이트 점토, 화학변형 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 유기적으로 변형된 몬트모릴로나이트 점토, 수화된 알루미늄 실리케이트, 발연 실리카, 알루미늄 전분 옥테닐 석시네이트 및 이들의 혼합물을 포함한다.

또한, 다른 부가 미량 성분도 화장품 조성물에 첨가될 수 있다. 이러한 성분으로는 착색제, 불투명화제 및 향료를 포함할 수 있다. 이러한 다른 부가 미량 성분의 양은 조성물의 0.001 내지 최고 20 중량% 범위일 수 있다.

본 발명의 조성물은 피부의 조정, 보습 및 연화를 위한 제제, 유연성 및 탄력성을 위한 제제 및 주름진, 잔주름진 또는 노화된 피부의 출현을 예방하거나 감소시키기 위한 제제로서, 사람 피부에 국소 도포하는데 사용될 수 있다. 본 발명의 제형은 피부 색조 상실에 대한 반응을 제공하고, 피부 표면층의 수화 및 단단함을 효과적으로 자극하는 유익을 촉진하는데, 이들은 모두 항산화제 및 다른 유익 성분에 의한 피부의 기본 층을 복구하는 작업 동안 이루어져, 잔주름 및 주름의 출현을 감소시키는 것을 돕고 가시적 색조 및 탄력성을 복원한다. 일부 예시적 구체예에서, 이러한 항산화제는 특히 arNOX를 억제하는 것이다.

한 구체예에서, 활성제 약 1 내지 1000ml로 이루어진 조성물의 소량이 피부에 도포된다. 예시적 구체예에서, 활성제 약 1 내지 100ml를 함유하는 조성물의 양이 피부에 도포된다. 이 과정은 임의의 기간 동안 매일 여러 번 반복할 수 있다. 조성물은 아침에 한번, 저녁에 한번 피부에 도포하는 것이 바람직하다.

본 발명의 국소 피부 보호 조성물은 로션제, 크림제, 젤제 등으로서 제형화될 수 있다. 조성물은 소비자가 의도한 용도 및 점도에 적합하도록 적당한 용기에 포장될 수 있다. 예를 들어, 로션제 또는 크림제는 병이나 롤-볼 어플리케이터, 또는 분사제-구동식 에어로졸 장치 또는 손 조작에 적합한 펌프가 장착된 용기에 포장될 수 있다. 조성물이 크림제일 때에는 튜브 또는 뚜껑이 있는 병과 같은 비-변형성 병이나 압착 용기에 간단하게 보관될 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한 본 명세서에 정의된 화장품학적으로 허용되는 조성물을 함유하는 밀폐 용기를 제공한다.

이하 실시예는 제한이 아닌 예증을 위해 제공한다.

실시예

실시예 1

나르시서스 타제타 추출물의 특성화

엔.타제타가 arNOX 억제제를 보유할 수 있는 가설을 시험하기 위해, 페이퍼 화이트(나르시서스 타제타) 나르시서스의 구근을 시판업자(Brent and Becky's Bulbs, Gloucester, VA)로부터 수득했다. 물 추출물 및 에탄올성 추출물을 제조했고, 이는 arNOX 활성을 억제하고 활성이 낮은 나르시서스 타제타 분말(Xian Aojing Science and Technology Developing CO., LTD, Xian, CN)과 배합했을 때, 상기 억제를 증강시켰다. 엔.타제타 구근 유래의 분말의 SHAM(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)에 의한 증강은 도 1a에 도시했다. arNOX 억제를 증강시키는 나락틴 능력의 확인은 같은 프로토콜에 따르지만, arNOX 억제를 증강시키기 위해 살리신(Sigma-Aldrich) 및 꽃 유래의 엔.타제타 분말(Xian Aojing Science and Technology Developing CO., LTD, Xian, CN)을 이용하여 수행했다(도 1b). 비교는 arNOX 억제 활성이 부족한 나르시서스 슈도-나르시서스(수선화) 및 나르시서스 종퀼라(노랑수선화) 추출물의 유사 추출물로 이루어졌다. 도 2에 예시한 바와 같이, 엔.타제타 추출물의 활성은 역시 arNOX를 억제하는 옥수수(도 3) 및 귀리(도시되지 않음) 실생식물에서 발견되는 것처럼 특징적인 자연발생의 하이드록사메이트인, 제2철계 철의 첨가에 의해 증강된 적색 착색과 상관성이 있었다(도 4). 또한, 자연발생의 하이드록사메이트를 나타내는 엔.타제타 추출물의 활성 성분의 잠재적 능력에 대한 추가의 증거는 박층 크로마토그래피 분석(도 5) 및 옥수수 뿌리의 스틸(도 2에 예시된 엔.타제타 구근의 잠재적 하이드록사메이트-풍부 줄기 맥관구조에 해당하는, 하이드록사메이트가 농축된 옥수수 뿌리의 중심 맥관구조) 유래의 철 첨가생성물의 분광 연구로부터(도 6) 시판 하이드록사메이트(Sigma-Aldrich에서 시판하는 살리실 하이드록사메이트(SHAM))와의 비교에 의해 제공했다.

식물의 대체 옥시다제 활성의 공지된 억제제인 SHAM은 arNOX 활성의 억제에 대해 시험했고, 72세 남성의 타액에서 arNOX 활성의 90% 이상의 억제가 1mg/ml 농도에서 수득되었다(도 7). 또한, SHAM은 부분 활성인 나르시서스 타제타 분말의 arNOX 활성 억제를 증강시키는 것으로 발견되었다(도 1). 시판 나르시서스 타제타 분말(IBR-DORMIN®, Israel)은 아마도 SHAM과 비슷한 낮은 수준이지만 갓 제조한 나르시서스 타제타 구근으로부터 제조된 추출물에서 발견되는 수준보다는 훨씬 낮은 수준의 자연발생의 하이드록사메이트를 함유하는 것으로 나타난다(도 5a 및 5b).

실시예 2

arNOX 억제제의 동정

안정화된 살리실 하이드록사메이트의 살리실 부위가 arNOX 활성 억제에 중요한지 아닌지의 질문에 답하기 위해, 72세 남성의 타액에서 arNOX 활성의 억제제로서 살리실산(나락틴 2)을 시험했고 arNOX 활성을 억제하는 것으로 발견되었다(도 8). 또한, 살리실산은 하이드록사메이트와 마찬가지로 제2철계 철과 반응했을 때 적색을 제공했다. 살리실산 및/또는 아스피린의 에스테르는 arNOX 활성을 억제하지 않았다. 살리실레이트의 천연 급원인 버드나무 껍질의 수성 추출물은 시험한 결과, 또한 arNOX를 억제하는 것으로 발견되었다. 이어서, 버드나무 껍질의 주요 살리실레이트인 배당체 살리신(나락틴 3)을 시험한 결과, SHAM(나락틴 1) 또는 살리실산(나락틴 2)보다 10배 낮은 농도에서 활성인 것으로 발견되었다(도 9).

실시예 3

살리실레이트 생산 식물의 동정

살리실레이트의 자연 생산자인 식물을 동정하기 위한 조사를 수행했다. 이 조사는 시카고 일리노이 대학에서 만든 천연산물 데이터베이스를 이용하여 Norman Farnsworth 교수가 수행했다(napralert.org에서 입수가능). 본 조사에서는 동정된 다양한 조직에서 살리실레이트를 생산하는 다음 식물들을 동정했다: 에이.치넨스(박쥐나무과) 말린 잎 중국, 에이.치넨스(박쥐나무과) 말린 잎 일본(cult), 에이.플라타니폴리움(박쥐나무과) 말린 잎 프랑스, 에이.플라타니폴리움 변종 플라타니폴리움(박쥐나무과) 말린 잎 일본, 에이.플라타니폴리움 변종 트릴로붐(박쥐나무과) 말린 잎 일본, 에이.플라타니폴리움 변종 트릴로붐(박쥐나무과) 말린 잎 일본, 에이.프렘니폴리움(박쥐나무과) 잎 일본, 에이.프렘니폴리움(박쥐나무과) 말린 줄기 일본, 아스퍼질러스 나이거(총생균류) 배양물 여액 대한민국, 베툴라 알바(자작나무과) 말린 껍질 독일, 부플루럼 팔카텀(산형과) 실생식물의 현탁 배양물 일본, 카타란투스 로제우스(협죽도과) 잎의 현탁 배양물 일본, 초세니아 브락테오사(버드나무과) 말린 껍질 일본, 콜치쿰 오텀날레(백합과) 신선 구경 일본, 크레피스 훼티다(국화과) 말린 뿌리 폴란드, 크레피스 뢰아디폴리아(국화과) 말린 뿌리 폴란드(cult), 다투라 이녹시아(가지과) 꽃밥의 현탁 배양물 일본, 디.이녹시아(가지과) 뿌리의 현탁 배양물 일본, 두보이시아 미오포로이데스(가지과) 잎의 현탁 배양물 일본, 엘루테로코커스 셋추엔시스(두릅나무과) 말린 줄기 중국, 유포비아 살리시폴리아(대극과) 신선 전체 식물 헝가리, 필리펜둘라 울마리아(장미과) 말린 기중 부분 유럽, 에프.울마리아(장미과) 말린 전체 식물, 에프.울마리아(장미과) 말린 전체 식물 스위스, 에프.울마리아(장미과) 말린 꽃 USSR, 포에니쿨럼 불가레(산형과) 열매의 시판 샘플 중국, 가데니아 자스미노이데스(꼭두서니과) 잎의 현탁 배양물 일본, 리토스퍼뭄 에리트로리존(지치과) 실생식물의 현탁 배양물 일본, 니코티아나 타바쿰(가지과) 뿌리의 현탁 배양물 일본, 피.알바(버드나무과) 말린 껍질 USA, 피.발사미페라(버드나무과) 말린 껍질 USA-WI, 피.발사미페라(버드나무과) 신선 껍질 USA-WI, 피.발사미페라(버드나무과) 말린 껍질 + 잔가지 USA-WI, 피.발사미페라(더브나무과) 말린 싹 프랑스, 피.발사미페라(버드나무과) 동결건조 잎 USA-AK, 피.발사미페라(버드나무과) 신선 잎 USA-WI, 피.발사미페라(버드나무과) 오븐 건조된 잎 핀란드(cult), 피.발사미페라(버드나무과) 말린 몸통 껍질 USA-WI, 피.다비디아나(버드나무과) 말린 껍질 중국, 피.다비디아나(버드나무과) 말린 줄기 껍질 대한민국, 피.델토이데스(버드나무과) 말린 껍질 USA-WI, 피.델토이데스(버드나무과) 신선 껍질 USA-WI, 피.델토이데스(버드나무과) 신선 잎 USA-WI, 피.델토이데스 변종 델토이데스(버드나무과) 말린 껍질 캐나다(cult), 피.델토이데스 변종 옥시덴탈리스(버드나무과) 말린 껍질 캐나다(cult), 피.유프라티카(버드나무과) 말린 껍질 중국, 피.유프라티카(버드나무과) 말린 싹 터키, 피.그랜디덴타타(바드나무과) 말린 껍질 USA-WI, 피.그랜디덴타타(버드나무과) 말린 잎 USA-WI, 피.헤테로필라(버드나무과) 말린 껍질 USA-WI, 피.라시오카파(버드나무과) 말린 싹 영국, 피.맥시모윅지(버드나무과) 말린 외피 일본, 피.니그라(버드나무과) 신선 껍질 독일, 피.니그라(버드나무과) 말린 잎 영국(cult), 피.니그라(버드나무과) 말린 잎 독일, 피.시에볼디(버드나무과) 말린 싹 일본, 피.시모니(버드나무과) 말린 껍질 중국, 피.타카마하카(버드나무과) 말린 껍질 USA-WI, 피.토멘토사(버드나무과) 말린 껍질 중국, 피.토멘토사(버드나무과) 전체 식물 중국, 피.토멘토사(버드나무과) 말린 잎 중국, 피.트레물라(버드나무과) 말린 껍질 독일, 피.트레물라(버드나무과) 말린 잎 스위스, 피.트레물라(버드나무과) 오븐 건조된 잎 핀란드, 피.트레물라(버드나무과) 진균 감염된 줄기 껍질 프랑스, 피.트레물라(버드나무과) 말린 잔가지 핀란드, 피.트레물로이데스(버드나무과) 말린 껍질 USA, 피.트레물로이데스(버드나무과) 말린 껍질 USA-WI, 피.트레물로이데스(버드나무과) 어린 전체 식물, 피.트레물로이데스(버드나무과) 동결건조된 마디사이 USA-AK, 피.트리물로이데스(버드나무과) 말린 잎 USA-WI, 피.트레물로이데스 3배체(버드나무과) 신선 잎 USA-WI, 피.트레물로이데스 3배체형(버드나무과) 말린 껍질 USA-WI, 피.트리초카파(버드나무과) 말린 껍질 USA-WA, 피.트리초카파(버드나무과) 말린 껍질 USA-WI, 피.트리초카파(버드나무과) 신선 잎 USA-WI, 피.트리초카파 x 피.델토이데스(버드나무과) 신선 잎 벨기에(cult), 에스.아큐티폴리아(버드나무과) 말린 껍질 러시아, 에스.알바(버드나무과) 말린 껍질, 에스.알바(버드나무과) 말린 껍질 프랑스, 에스.알바(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.알바(버드나무과) 말린 껍질 USA, 에스.알바(버드나무과) 말린 껍질 USA-AR, 에스.알바(버드나무과) 말린 껍질 USA-UT, 에스.알바(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.알바(버드나무과) 오븐 건조된 잎 핀란드(cult), 에스.알바 cv. 카디날리스(버드나무과) 말린 잎 영국, 에스.알바 암나무(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.알바 숫나무(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.알바 x 에스.바빌로니카(에스.세퓰라(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.알바 x 에스.프라질리스(에스.러셀리아(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.알바 x 에스.펜타드라(에스.에르하르트(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.알바 x 에스.바빌로니카(버드나무과) 전체 식물 USSR, 에스.아메리카나(버드나무과) 말린 잎 영국, 에스.악티카(버드나무과) 말린 잎 아이슬랜드, 에스.아우리타(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.아우리타(버드나무과) 오븐 건조된 잎 핀란드, 에스.아우리타 암나무(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.바빌로니카(버드나무과) 말린 잎 인도, 에스.바빌로니카(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.바빌로니카 cv. 파든 위핑(버드나무과) 말린 잎 영국, 에스.바빌로니카 x 에스.프라질리스(에스.블란다)(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.바스포디아나(버드나무과) 새 잎 영국, 에스.바스포디아나(버드나무과) 동결 잎, 에스.케시아(버드나무과) 새 가지 프랑스, 에스.케시아(버드나무과) 새 줄기 프랑스, 에스.칼로덴드론(버드나무과) 새 잎 영국, 에스.칼로덴드론(버드나무과) 동결 잎, 에스.카피타타(버드나무과) 말린 잎 중국, 에스.카프레아(버드나무과) 말린 껍질 핀란드, 에스.카프레아(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.카프레아(버드나무과) 말린 껍질 멕시코, 에스.카프레아(버드나무과) 말린 잎 멕시코, 에스.카프레아(버드나무과) 말린 잎 USSR, 에스.카프레아(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.카프레아(버드나무과) 오븐 건조된 잎 핀란드, 에스.카프레아 암나무(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.카프레아 숫나무(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.카프레아 변종 라나타(버드나무과) 말린 잎 영국, 에스.카프레아 x 에스.라나타(에스.발푸리)(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.카프레아 x 에스.비미날리스(에스.세리칸(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.체노멜로이데스(버드나무과) 말린 잎 일본, 에스.시네레아(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.시네레아(버드나무과) 말린 껍질 스위스, 에스.시네레아(버드나무과) 오븐 건조된 꽃 핀란드, 에스.시네레아(버드나무과) 말린 잎 영국, 에스.시네레아(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.시네레아 암나무(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.시네레아 숫나무(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.다프노이데스(버드나무과) 말린 껍질, 에스.다프노이데스(버드나무과) 말린 껍질 스위스, 에스.다프노이데스(버드나무과) 새 잎 영국, 에스.다프노이데스(버드나무과) 동결 잎, 에스.다프노이데스 클론 1(버드나무과) 말린 잔가지 핀란드, 에스.다프노이데스 클론 2(버드나무과) 말린 잔가지 핀란드, 에스.다프노이데스 아종 코다프(버드나무과) 말린 껍질 마데이라, 에스.다프노이데스 변종 아큐티폴리아(버드나무과) 말린 잎 영국, 에스.프라질리스(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.프라질리스(버드나무과) 말린 잎 영국, 에스.프라질리스(버드나무과) 말린 잎 독일, 에스.프라질리스(버드나무과) 새 잎 영국, 에스.프라질리스(버드나무과) 동결 잎, 에스.프라질리스(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.프라질리스(버드나무과) 오븐 건조된 잎 핀란드(cult), 에스.프라질리스(버드나무과) 말린 잔가지 핀란드, 에스.프라질리스 숫나무(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.프라질리스 숫나무(버드나무과) 말린 잎 독일, 에스.프라질리스 변종 라티폴리아(버드나무과) 새 잎 영국, 에스.프라질리스 변종 라티폴리아(버드나무과) 동결 잎, 에스.프라질리스 x 에스.펜탄드라(에스.메이어란(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.프라질리스 x 에스.트리안드라(에스.데시피엔(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.제미나타 하이브리드(버드나무과) 말린 잎 영국, 에스.제미나타 하이브리드(에스.시네레아 x 에스.비(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.그라실리스 변종 텍스토리스(버드나무과) 오븐 건조된 껍질 캐나다, 에스.그라실리스틸라(버드나무과) 말린 껍질 일본, 에스.그라실리스틸라(버드나무과) 말린 잎 일본, 에스.그리실리스틸로이데스(버드나무과) 말린 껍질 일본, 에스.짐노레피스(버드나무과) 말린 껍질 일본, 에스.하스타타(버드나무과) 말린 껍질 스위스, 에스.허바세아 x 에스.필리시폴라(에스.무어(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.인카나(버드나무과) 말린 잎 영국, 에스.코리야나기(버드나무과) 말린 껍질 일본, 에스.라포눔(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.라포눔(버드나무과) 오븐 건조된 잎 핀란드, 에스.라포눔(버드나무과) 말린 잔가지 핀란드, 에스.라시안드라(버드나무과) 동결건조된 잎 + 줄기 USA-AK, 에스.라시오레피스(버드나무과) 말린 잎 USA-CA, 에스.마추다나(버드나무과) 말린 잎 중국, 에스.미르시니폴리아(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.미르시니폴리아(버드나무과) 말린 잎 핀란드(cult), 에스.미르시니폴리아(버드나무과) 말린 잎 독일, 에스.미르시니폴리아(버드나무과) 새 잎 핀란드, 에스.미르시니폴리아(버드나무과) 오븐 건조된 잎 핀란드, 에스.미르시니폴리아(버드나무과) 말린 줄기 핀란드(cult), 에스.미르시니폴리아(버드나무과) 새 줄기 핀란드, 에스.미르시니폴리아(버드나무과) 말린 잔가지 핀란드, 에스.미르시니폴리아 숫나무(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.니그리칸스(버드나무과) 말린 잎 영국, 에스.니그리칸스(버드나무과) 말린 잎 스위스, 에스.니그리칸스(버드나무과) 새 잎 영국, 에스.니그리칸스(버드나무과) 동결 잎, 에스.오레스테라(버드나무과) 말린 잎 USA-CA, 에스.펜탄드라(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.펜탄드라(버드나무과) 잎 USA, 에스.펜탄드라(버드나무과) 말린 잎 독일, 에스.펜탄드라(버드나무과) 새 잎 영국, 에스.펜탄드라(버드나무과) 동결 잎, 에스.펜탄드라(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.펜탄드라(버드나무과) 오븐 건조된 잎 핀란드, 에스.펜탄드라(버드나무과) 말린 잔가지 핀란드. 에스.펜탄드라 cv. 럼리(버드나무과) 말린 잎 영국, 에스.펜탄드라 암나무(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.펜탄드라 x 에스.프라질리스(버드나무과) 새 잎 영국, 에스.펜탄드라 x 에스.프라질리스(버드나무과) 동결 잎, 에스.펜탄드로이데스(버드나무과) 말린 잎 USSR, 에스.펜탄드로이데스(버드나무과) 새 뿌리 껍질 USSR, 에스.페티오라리스(버드나무과) 말린 껍질 캐나다, 에스.필리시폴리아(버드나무과) 말린 잎 영국, 에스.필리시폴리아(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.필리시폴리아(버드나무과) 오븐 건조된 잎 핀란드, 에스.필리시폴리아(버드나무과) 말린 잔가지 핀란드, 에스.필리시폴리아 x 에스.미리시니폴리아(버드나무과) 오븐 건조된 잎 핀란드, 에스.퍼퓨레아(버드나무과) 말린 껍질, 에스.퍼퓨레아(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.퍼퓨레아(버드나무과) 말린 껍질 스위스, 에스.퍼퓨레아(버드나무과) 말린 잎 독일, 에스.퍼퓨레아(버드나무과) 말린 잎 독일(cult). 에스.퍼퓨레아(버드나무과) 말린 잎 스위스, 에스.퍼퓨레아(버드나무과) 새 잎, 에스.퍼퓨레아(버드나무과) 새 잎 영국, 에스.퍼퓨레아(버드나무과) 동결 잎, 에스.퍼퓨레아(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.퍼퓨레아 암나무(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.퍼퓨레아 암나무(버드나무과) 말린 잎 독일, 에스.퍼퓨레아 숫나무(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.퍼퓨레아 변종 골드스톤(버드나무과) 말린 잎 영국, 에스.퍼퓨레아 x 에스.트리안드라(에스.레이오필(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.레펜스(버드나무과) 말린 껍질 프랑스, 에스.레펜스(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.레펜스(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.레펜스(버드나무과) 새 잎 영국, 에스.레펜스(버드나무과) 동결 잎, 에스.레펜스 암나무(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.레펜스 숫나무(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.루브라 하이브리드(버드나무과) 말린 잎 영국, 에스.루브라 하이브리드(에스.퍼퓨레아 x 비미(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.슈웨리니(버드나무과) 말린 껍질 USSR, 에스.스쿨레리아나(버드나무과) 말린 껍질 USA-UT, 에스.스미티아나(버드나무과) 말린 잎 영국, 에스.송가리카(버드나무과) 잎 USSR, 에스.송가리카(버드나무과) 말린 잎 USSR, 에스.스페시스(버드나무과) 말린 전체 식물 스위스, 에스.스페시스(버드나무과) 말린 줄기 껍질 프랑스, 에스.스티풀라리스 하이브리드(에스.비미날리스 x 언(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.테트라스페르마(버드나무과) 말린 뿌리 태국, 에스.테트라스페르마(버드나무과) 말린 줄기 껍질 태국, 에스.트레물로이데스(버드나무과) 말린 껍질 USA, 에스.트리안드라(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.트리안드라(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.트리안드라 cv. 블랙 마울(버드나무과) 말린 잎 영국, 에스.트리안드라 암나무(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.트리안드라 숫나무(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.트리안드라 x 에스.비미날스(에스.히포파)(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.비미날리스(버드나무과) 말린 껍질 독일, 에스.비미날리스(버드나무과) 말린 잎 영국, 에스.비미날리스(버드나무과) 오븐 건조된 잎 영국, 에스.비미날리스(버드나무과) 오븐 건조된 잎 핀란드(cult), 에스.비미날리스(버드나무과) 말린 잔가지 핀란드(cult), 에스.비미날리스 cv. 아쿠아티카(버드나무과) 오븐 건조된 잔가지 핀란드(cult), 에스.비미날리스 암나무(버드나무과) 말린 껍질 독일, 토이수수 어바니아나(버드나무과) 말린 껍질 일본, 비버눔 헨리(인동과) 잎, 비버눔 프루니폴리움(인동과) 뿌리껍질 USA, 비버눔 리티도필럼(인동과) 말린 꽃 이집트, 비스쿰 알붐 e/에스.알바(꼬리겨우살이과) 잎 줄기 프랑스.

실시예 4

arNOX 억제제의 증강작용

살리신은 단독 제제로서 활성적일 뿐만 아니라(도 9), 오미자 분말 및 엔.타제타 분말과 같은 천연 급원 유래의 다른 arNOX 억제제의 혼합물에 의한 arNOX 억제를 증강시키는 데에도 활성적이었다(도 10a 및 10b). 도 10a에 도시된 바와 같이 4mg/ml 쉬잔드라 분말 + 엔.타제타 추출물(20 ㎕)의 혼합물은 첨가된 1mg/ml 살리신과 함께 arNOX 억제를 나타낸다. 도 1b는 살리신 1mg/ml의 존재 하에 쉬잔드라 분말 4mg/ml + 엔.타제타 분말 1mg/ml의 혼합물에 의한 arNOX 억제를 예시하고 있다. 동정 및 시험된 3가지 화학적으로 순수한 "나락틴"(이 용어는 가장 활성적인 새 엔.타제타 추출물과 비슷한 억제 수준으로 나스시서스 타제타 분말을 증강시킬 수 있거나 엔.타제타 분말에 존재하는 여러 자연발생의 arNOX 억제제 중 어느 하나를 나타낸다) 중에서, 살리신은 가장 유망한 것으로 나타났다. 살리신은 안정하고, 수용성이며, 비자극성이고 비교적 저렴하고, 많은 제조업체, 예컨대 Sigma-Aldrich, St. Louis, MO.에서 입수가능하다. 또한, 낮은 활성의 엔.타제타 분말의 증강은 SHAM 및 살리신이 모두 특히 arNOX 활성을 저하시킨다는 것이 도 1a 및 도 1b에 명시되고 있다.

실시예 5

arNOX 의 특성화

백혈구연층에 의한 초과산화물 생산: 백혈구 연층, 림프구와 혈소판의 혼합물. 이러한 백혈구 연층은 예컨대 Rockland ImmunoChemicals(Gilbertsville, PA)에서 입수할 수 있다. 혈액 시료는 수집 및 분석 전에 4℃에서 유지시켰다. 약 10⁷ 세포를 각 분석에 첨가했다. 세포 수는 혈구계를 이용해 측정했다.

초과산화물에 의한 제2철계 사이토크롬 c의 환원은 초과산화물 형성의 표준 측정법으로 이용했다(Mayo, L.A. and Cumutte, J.(1990) Meth. Enzyme. 186, 567-575. 7 Butler, J, Koppenol, W.H. and Margollash, E.(1982) J. Biol. Chem. 257, 10747). 이것은 초과산화물 생성을 측정하기 위한 초과산화물 디스뮤타제 억제와 연합해서 가장 널리 인정받고 있는 방법이다. 이 분석은 혈청 150㎕ 또는 백혈구연층 40㎕를 PBSG 완충액(8.06g NaCl, 0.2g KCl, 0.18g Na₂HPO₄, 0.26g KH₂PO₄, 0.13g CaCl₂, 0.1g MgCl₂, 1.35g 글루코스를 1000ml 탈이온수에 용해하고 pH 7.4로 조정한 뒤, 여과하고 4℃에 보관했다) 중에 포함한다. 환원율은 1.5분 마다 1분 동안 연속 측정하는 이중 파장 작업 방식의 SLM Aminco DW-2000 분광광도계(Milton Roy, Rochesterm NY, USA)를 이용하여 측정했다. 45분 후, 시험 화합물을 첨가하고, 반응을 45분 동안 지속했다. 45분 후, 환원된 페리사이토크롬 c에 대해 19.1 cm^-1의 밀리몰 소광 계수를 사용했다. 시험 화합물의 결과는 표 1에 제시했다. 추출물은 다른 언급이 없는 한 화합물의 수용액으로 제조했다.

표 1은 일부 arNOX 억제 실험의 결과를 제공한다.

실시예 6

국소 화장품 제제

8주간 분할 얼굴에 대조군 포함 임상 용법 연구를 수행하여 arNOX 억제 성질이 있는 식물 추출물을 함유하는 4종의 프로토타입 노화 방지 제형을 각각의 효능과 허용성에 대해 2종의 비히클 대조군 대비로 선별했다. 효능은 임상 등급성 바이오-기구 측정(Chroma Meter, Corneometer, Cutometer) 및 자가-평가 질문지로 평가했다. 허용성은 자극 등급화 및 부작용에 대한 모니터링으로 평가했다.

총 23명의 피검자는 연구 참여를 마쳤다. 피검자는 눈주위에 미약 내지 중간의 잔주름 및 거친 주름을 보유하고 얼굴의 우측과 좌측에 과색소침착을 보유하면 연구 참여의 자격이 있었다. 피검자는 무작위 설계에 따라 다음과 같은 2종의 시험 물질(하나는 대조군, 하나는 시험 물질)에 할당했다.

대조군

A. arNOX 대조군 젤 A(표지 없음) AB-87-04A, 무색 투명 젤(12명의 피검자)

B. arNOX 대조군 젤 B(적색 표지) JZ-91-40 무색 투명 젤(글리세린 함유)(11명의 피검자)

시험 물질:

1. arNOX 대조군 젤 A + 쉬잔드라(캡슐화되지 않음), 엔.타제타 추출물 및 살리신(녹색 표지) JZ 91-39, 복숭아색, 투명 젤(6명의 피검자)

2. arNOX 대조군 젤 A + 쉬잔드라(청색 표지) TL-90-59, 무색 투명 젤(6명의 피검자)

3. arNOX 대조군 젤 B + 쉬잔드라(캡슐화되지 않음), 엔.타제타 추출물 및 살리신(황색 표지) TL-90-58(글리세린 함유), 복숭아색, 투명 젤(6명의 피검자).

4. arNOX 대조군 젤 B + 살리신(절반은 황색, 절반은 흑색 표지) KK-89-49, 무색 투명 젤(글리세린 함유)(피검자 5명)

피검자에게 지정된 시험 물질을 얼굴의 오른쪽 또는 왼쪽에 도포하고 지정된 대조군을 반대쪽 얼굴에 매일 2회씩(아침과 저녁에) 세안 후 도포하도록 지시했다.

임상 평가는 기준선(방문 1), 4주(방문 2) 및 8주(방문 3)에 수행했다. 피검자는 각 방문 시마다 다음과 같은 임상 등급화 및 기구 절차에 참여했다(다른 표시가 없다면).

효능/성능 파라미터

피검자는 얼굴의 우측 및 좌측에서 다음과 같은 파라미터에 대해 임상적으로 등급화했다: 잔주름(눈주위), 굵은 주름(눈주위), 피부 촉감(뺨), 전반적인 변색, 밝기(뺨), 피부 투명도, 구멍 크기(이마 및 코 부위), 구멍 분포/구조 및 전반적인 피부 광채.

자극/안전성 파라미터 등급화

피검자는 얼굴의 우측과 좌측에서 객관적 자극 파라미터(홍반, 부종, 박피) 및 주관적 자극 파라미터(햇볕에 탄 정도, 찌름, 가려움, 당김, 따끔거림)에 대해 임상적인 등급을 매겼다.

피부 표면 수화 측정

피부 표면 수화 측정에는 Corneometer® CM 825(Courage + Khazaka, 독일) 수화 분석기를 이용했다. 측정은 각질층의 수분 함량을 정량하기 위해 좌측 및 우측 뺨의 하부 중간에서 실시했다(3반복).

피부 발광 측정

피부 발광 측정은 Chroma Meter CR400(Konica-Minolta, Japan) 피부 발광 분석기를 이용해 3반복으로 실시하고 얼굴 우측 및 좌측 상의 색소착색된 병변(연구자가 선택함)에서 측정하여 피부 색/색조의 변화를 기구 평가했다. 추가의 피부 발광 측정은 얼굴 한쪽 면에서 색소침착되지 않은(정상) 부위에서 실시했다.

피부 점탄력성 측정

단일 점탄력성 측정은 Cutometer® SEM 575 (Courage + Khazaka, Germany) 점탄력성계로 실시했다. 측정은 각 피검자의 우측 및 좌측 뺨 중간에서 실시하여 피부의 점탄력성을 평가했다.

질문지

피검자는 4주 및 8주째에 다음과 같은 질문지를 완성했다.

연구 개시 이래로 피부 조건 파라미터의 변화에 관한 피검자 피부 변화 평가 질문지

피부 상태 매개변수의 현 상태 및 시험 물질 속성 및 허용성에 관한 피검자 평가 질문지

종합하면, 본 연구 결과는 모든 시험 물질과 대조군이 잔주름, 촉감이 있는 거칠음, 피부 색조 및 전반적인 변색/과색소침착의 출현에 있어서 기준 점수와 비교했을 때 상당히 개선을 나타냈다는 것을 보여준다; 시험 물질 1, arNOX 대조군 겔 A + 쉬잔드라(캡슐화되지 않음), 엔.타제타 추출물 및 살리신(녹색 표지) JZ-91-39 및 시험 물질 3. arNOX 대조군 젤 B + 쉬잔드라(캡슐화되지 않음), 엔.타제타 추출물 및 살리신(황색 표지) TL-90-58(글리세린 함유)은 굵은 주름의 출현을 개선시켰다. 어떤 시험 물질이나 대조군에 의해서도 주관적 또는 객관적 자극의 유의적인 증가가 관찰되지 않았다.

피부 발광 측정은 오로지 시험 물질 1, arNOX 대조군 젤 A + 쉬잔드라(캡슐화되지 않음), 엔.타제타 추출물 및 살리신(녹색) JZ-91-39만이 8주째 색소침착되지 않은 부위에서 b^* 값의 유의적인 감소를 제공한다는 것을 보여준다. 색소침착된 병변 부위에서 측정한 피부 발광 b^* 값은 시험 물질 1. arNOX 대조군 Gel A + 쉬잔드라(캡슐화되지 않음), 엔.타제타 추출물 및 살리신(녹색) JZ-91-39가 시험 물질 2, arNOX 대조군 젤 A + 쉬잔드라(청색) TL-90-59 및 시험 물질 3. arNOX 대조군 젤 B + 쉬잔드라(캡슐화되지 않음), 엔.타제타 추출물 및 살리신(황색) TL-90-58(글리세린 함유)보다 병변 암색화 감소에 우수하다는 것을 보여준다. 피부 표면 수화 측정에서는 모든 시험 물질 및 대조군이 4주째에 피부 수화를 유의적으로 향상시켰음을 보여준다. 점탄력성 측정은 시험 물질과 대조군 간에 어떠한 의미있는 차이를 나타내지 않았다.

동의 고지

21 CFR 50.25(연방정부의 규칙 코드)에 부응하는 서면 고지 동의서를 연구 입회 전에 각 피검자로부터 받았다. 본 연구에 참여하는 각 피검자가 고지한 동의 계약서에 서명한 원본은 연구파일에 보관한다. 계약서 사본은 각 피검자에게 제공했다(시료 형태에 대해서는 부록 IV를 참조).

인원감소

23명의 피검자는 연구를 마쳤다. 연구에 참여 등록한 피검자는 26명이었지만, 3명의 피검자는 다음과 같은 이유로 인해 연구를 중단했다:

· 자진 중단/부작용: 피검자 021

· 계획된 방문(들)에 불출석: 피검자 004 및 026

· 자진 중단/계획 차질: 020, 022, 029

· 계획된 방문 불출석: 009, 034

· 조사자 판단: 010

피검자 인구통계

23명의 여성 피검자는 연구를 마쳤다. 표 2는 모든 피검자의 인구통계적 정보(연령, 인종 및 피츠패트릭(Fitzpatrick) 피부 분류)를 정리한 것이다. 인종 및 피츠패트릭 피부 종류는 각 카테고리의 피검자 수를 피검자 집단의 백분율로 괄호안에 기재했다. 인종 정보는 각 피검자의 적격성 및 건강 질문지에서 입수했다.

피츠패트릭 피부 분류는 광선 노출이 없는 동계 시즌 후에 처음 30 내지 45분간 광선 노출에 대한 피부의 미보호 반응에 기초한다. 피부 종류의 카테고리는 다음과 같다:

타입 I. 항상 쉽게 탄다; 결코 그을리지 않음.

타입 II. 항상 쉽게 탄다; 약하게 그을림.

타입 III. 보통으로 탄다; 점차 그을림.

타입 IV. 약간 탄다; 항상 잘 그을림.

타입 V. 거의 타지 않는다; 심하게 탄다.

타입 VI. 절대 타지 않는다; 깊게 색소침착됨.

피츠패트릭은 구강주위 및 안와주위(눈주위) 주름(안면주름) 정도를 평가하는데 유용한 대체 분류 시스템을 보고했다:

클래스 I - 미세 주름;

클래스 II - 미세 내지 중간 깊이의 주름 및 중간 주름선의 수;

클래스 III - 미세 내지 깊은(굵은) 주름, 다수의 주름 선 및 아마도 수배 많이 존재함

실시예 7

절차 및 방법

본 연구를 개시하기 전에 가능한 피검자는 3일간 세정 기간을 갖고, 그 동안 얼굴에 안면 보습제는 도포하지 않았다.

기준선(방문 1)에서, 가능한 피검자는 병원에 도착하기 적어도 30분 전에 세안하고 화장을 모두 제거했다. 가능한 피검자에게 적합성 고려를 위해 자신의 일상적인 피부 보호 처치 제품을 가져오게 했다. 피검자는 적합성 및 건강 설문지를 완성하고 고지 동의 계약서, 기밀 계약서 및 사진 공개 양식에 서명했다.

피검자는 다음과 같은 임상 등급화 절차에 참여했다:

효능/성능 파라미터

피검자는 다음 파라미터들에 대해 얼굴 우측과 좌측에서 임상적 등급을 매겼다:

미세 주름 - 눈주위 부위

굵은 주름 - 눈주위 부위

피부 촉감(육안 관찰) - 뺨

촉감이 있는 거칠음 - 뺨

전반적인 변색

전반적인 피부 광채

효능/성능 파라미터 등급화의 결과는 다음 1 내지 10점의 스케일로 기록했다:

1 = 양성(1 내지 3 = 양호/바람직함)

10 = 음성(8 내지 10 = 바람직하지 않음)

반점의 점수는 필요하면 사용했다.

피검자는 얼굴의 우측과 좌측에서 눈주위 잔주름이 3 내지 7; 눈주위 굵은 주름이 2 내지 5; 과색소침착이 2 내지 7로, 약함 내지 중간 점수이면 계속적인 연구 참여의 자격을 주었다.

자극/안전성 파라미터 등급화

피검자는 객관적 자극 파라미터(홍반, 부종, 박피) 및 주관적 자극 파라미터(햇볕에 탄 정도, 찌름, 가려움, 당김, 따끔거림)에 대해 얼굴 우측 및 좌측에서 임상적 등급을 매겼다. 자극 등급화 결과는 다음 스케일을 이용해 기록했다:

0 = 없음

1 = 미약

2 = 중간

3 = 심함

반점은 필요한 경우 사용했다.

자격이 있는 피검자는 다음 기구 측정에 참여했다:

실시예 8

피부 표면의 수화 측정

피부 표면 수화 측정은 Corneometer^® CM 825(Courage + Khazaka, 독일) 수화 분석기를 이용해 실시했다. 측정은 3반복으로 이루어졌고 각질층의 수분 함량을 정량하기 위해 왼쪽과 오른쪽 뺨의 중심 밑에서 실시했다. Corneometer^®의 측정 원리는 유전 매질의 정전용량 측정을 기초로 한다. 피부 표면 수화 변동으로 인한 유전 상수의 임의의 변화는 정밀 계측 축전지의 정전용량을 변경한다. 이러한 측정은 피부 수화 수준의 아주 미량의 변화도 매우 높은 재현율로 검출할 수 있다. 판독은 피부의 수화도 커질수록 피부의 전기 정전용량 및 측정값의 증가에 정비례한다.

실시예 9

피부 발광 측정

피부 발광 측정은 Chroma Meter CR400(Konica-Minolta, Japan) 피부 발광 분석기를 이용해 3반복으로 실시하고 얼굴 우측 및 좌측 상의 색소착색된 병변(연구자가 선택함)에서 측정했다. Chroma Meter는 피부 색/색조의 변화를 기구적(및 객관적)으로 평가한다. 추가의 Chroma Meter 측정은 얼굴 한쪽 면에서 색소침착되지 않은(정상) 부위에서 실시했다. Chroma Meter는 색차 표적 색들의 세팅 및 보정을 허용하는 민감한 비색계이다. Chroma Meter는 선택 부위의 용이하고 독립적인 분석을 위해 분리가능한 헤드를 보유한다. 다음과 같은 값이 기록되었다:

L*: 상대적 명도는 흑색부터 백색까지 그레이 스케일로 기술함; 피부가 밝아질수록 수치 증가

a*: 적색부터 녹색 범위의 색상을 설명함: 수치의 증가는 피부 혈관화의 개선, 혈류 증가 및 피부 색조의 개선을 나타낸다.

b*: 청색부터 황색 범위의 색상을 설명함: 이 수치는 일반적으로 피부가 밝을수록 감소한다.

다른 피부 발광 측정은 각 피검자의 얼굴 한면에서 색소침착이 없는(정상) 부위에서 실시했다.

실시예 10

피부 점탄력성 측정

단일 점탄력성 측정은 Cutometer® SEM 575 (Courage + Khazaka, Germany) 점탄력성계로 실시했다. 측정은 각 피검자의 우측 및 좌측 뺨 중간에서 실시하여 피부의 점탄력성을 평가했다. 측정 원리는 흡입을 기초로 한다. 장치에 음압이 형성되고 피부가 프로브의 구멍내로 유입된다. 프로브 내의 침투 깊이는 비접촉 광학 측정 시스템으로 측정한다. 피부의 침투 깊이에 따라 광선 세기가 달라진다. 음압에 의해 흡입되는 피부의 저항성(단단함 및 원 위치로 복귀하려는 능력(탄력성))은 각 측정 마지막에 곡선으로 기구에 표시되었다. 300mbar의 음압이 적용되고 8mm 프로브를 통해 해제되었다. 프로브 내외로의 피부의 이동은 흡입 적용 및 해제 동안 기록하고 탄성 및 신장성을 계산했다.

피검자는 무작위 설계에 따라 다음 시험 물질 그룹 중 하나에 할당했다:

대조군

A. arNOX 대조군 젤 A(표지 없음) AB-87-04A

B. arNOX 대조군 젤 B(적색 표지) JZ-91-40 (글리세린 함유)

시험 물질:

1. arNOX 대조군 젤 A + 쉬잔드라(캡슐화되지 않음), 엔.타제타 추출물 및 살리신(녹색 표지) JZ 91-39

2. arNOX 대조군 젤 A + 쉬잔드라(청색 표지) TL-90-59

3. arNOX 대조군 젤 B + 쉬잔드라(캡슐화되지 않음), 엔.타제타 추출물 및 살리신(황색 표지) TL-90-58(글리세린 함유)

4. arNOX 대조군 젤 B + 살리신(절반은 황색, 절반은 흑색 표지) KK-89-49(글리세린 함유)

피검자에게 다음과 같은 용법 지시에 따라 지정된 시험 물질을 얼굴의 오른쪽 또는 왼쪽에 도포하고 지정된 대조군을 반대쪽 얼굴에 도포하도록 지시했다:

매일 세안한 후 아침과 저녁에 2회 얇게 도포한다.

시험 물질 도포 후에는 보습제 및 화장품을 도포할 수 있다.

피검자에게 사용설명서, 향후 방문 달력 및 시험 물질 도포 시간 및 코멘트를 기록하는 일기장을 제공했다.

피검자는 각 방문 전 적어도 30분 전에 세안하고 화장을 모두 지운 후 4주(방문 2) 및 8주(방문 3)째 병원에 방문하게 했다. 일기장과 시험 물질은 병원에 반납하고 용법 추종에 대해 점검을 받았으며; 새 일기장(및 시험 물질, 필요한 경우)은 4주째 배포했다. 피검자는 임상 등급화 및 바이오-기구 측정(Chroma Meter, Corneometer and Cutometer)을 기준선 절차에 따라 받았다. 또한, 각 피검자는 얼굴의 우측과 좌측에 대한 시험 물질 속성, 허용성 및 피부 상태의 개선에 관한 피검자 평가 질문지 및 피검자 피부 변화 평가 질문지를 완성했다.

각 조성물의 제형은 이하 표 3에 제시했다.

피검자에게는 사용 설명서, 향후 방문 달력 및 시험 물질의 도포 시간 및 코멘트를 기록하는 일기장을 제공했다.

피검자는 4주(방문 2) 및 8주(방문 3)째 병원에 방문하게 했다. 피검자는 각 방문마다 시험 시설에 오기 적어도 30분 전에 세안하고 화장을 제거했다. 또한, 피검자는 각 방문마다 시험 물질을 가져오게 하여 용법 추종에 대해 점검을 받았다. 피검자는 각 방문마다 다음과 같은 절차에 참여시켰다:

효능/성능 파라미터 등급화

자극/안전성 파라미터 등급화

피부 표면 수화(Corneometer®) 측정

피부 발광(Chroma Meter) 측정

피부 점탄력성(Cutometer®) 측정

또한, 피검자는 얼굴의 우측과 좌측에 대한 시험 물질 속성, 허용성 및 피부 상태의 개선에 관한 피검자 평가 질문지 및 피검자 피부 변화 평가 질문지를 완성했다.

일기장은 각 방문 시마다 진료소에 반환했고, 새 일기장은 방문 2번째에 배포했다. 피검자는 연구 완료 시에 진료소에 시험 물질 단위를 반환했다. 일기장은 임상의가 검토했고, 각 방문 시마다 시험 물질 단위를 칭량하여 순응을 확인했다.

실시예 11

생물통계학 및 데이터 처리

4주(방문 2) 및 8주(방문 3)째에 임상 등급화 및 기구 측정의 평균값은 p≤0.05 유효 수준에서 대응표본 t-검정을 이용하여 기준선(방문 1) 평균값과 통계 비교했다. 기준선으로부터의 평균 변화율 및 개선 발생률은 모든 속성마다 계산했다. 시험 물질과 대조군 간의 비교는 대응표본 비교(피셔의 LSD)와 함께 분산분석(ANOVA)로 실시했다.

4주 및 8주째에 피검자에 의해 완성된 자가 평가 질문지는 표로 작성하고 톱 박스 분석을 수행했다.

실시예 12

국소 도포 데이터

기준선(방문 1), 4주(방문 2) 및 8주(방문 3)에서 피검자는 얼굴에 임상 등급화 및 생물-기구 측정(Chroma Meter, Corneometer 및 Cutometer)을 받았다. 표 4는 각 시험 물질 및 대조군의 결과를 나타낸다. 유의적 차이에 대해 4주 및 8주째의 평균값을 기준선 평균값과 통계 비교했다. 기준선으로부터의 평균 변화율은 괄호 안에 기재했다.

실시예 13

기준선으로부터의 평균 변화율

표 5는 임상 등급화 및 기구 연구의 기준선으로부터의 평균 변화를 비교한 것이다.

실시예 14

그룹간 비교

기준선으로부터의 평균 변화를 기초로 한 비교는, 대응표본 비교(피셔의 LSD)와 함께 분산분석(ANOVA)을 이용하여 처리(시험 물질 및 대조군) 간에 이루어졌다. 다음 표 6에 제시한 등급화는 실험 그룹 간에 통계적으로 유의적인(p≤0.05) 차이를 나타낸다. 등급화는 개선의 최대 수준부터 최소 수준 순으로 나타냈고, 유의적 차이가 없는 파라미터는 기재하지 않았다. 기준선으로부터의 평균 변화율은 각 처리 밑에 기재했다.

실시예 15

기구 측정의 통계적 비교 결과

피검자를 얼굴의 우측과 좌측에서 잔주름(눈주위), 굵은 주름/피부 주름(눈주위), 촉감이 있는 거칠음(뺨), 피부 색조, 전반적인 변색/과색소침착 및 전반적인 피부 광채에 대해 등급화했다. 임상 등급화의 결과는 표 7에 제시한 기준선과 비교했을 때 다음과 같은 유의적인 개선을 밝혀냈다.

실시예 16

자극/안전성

피검자는 홍반, 부종, 박피, 햇볕에 탄 정도, 찌름, 가려움, 당김 및 따끔거림에 대해 얼굴의 우측과 좌측에서 등급화했다.

임상 등급화 결과는 예컨대 표 8에 제시한 바와 같이 기준선과 비교 시, 유의적인 개선을 나타냈다:

실시예 17

피부 발광 측정

피부 발광은 피부 발광 분석기(Chroma Meter CR400, Konica-Minolta, 일본)를 이용하여 3반복으로 측정했다. 측정은 피부 색/색조의 변화를 기구로 평가하기 위해 얼굴의 우측과 좌측에서 과색소침착된 병변(연구자가 선택) 상에서 실시되었다. 추가로 얼굴 한쪽의 색소침착되지 않은(정상) 부위에서 피부 발광 측정을 실시했다.

피부 발광 측정의 결과는 표 9에 제시했고, 예컨대 기준선과 비교했을 때 유의적인 차이를 드러냈다.

실시예 18

피부 표면 수화 측정

피부 표면 수화 측정은 3반복으로 실시했다(Corneometer CM 825, Courage + Khazaka, 독일). 측정은 각질층의 수분 함량을 정량하기 위해 우측 및 좌측 뺨 아래 중심에서 실시했다.

피부 표면 수화 측정 결과는 기준선 대비 4주째 각 처리마다 수분율의 유의적인 증가(개선)를 나타냈다. 8주째에는 유의적인 차이가 관찰되지 않았다.

실시예 19

피부 점탄력성 측정

단일 점탄력성 측정은 Cutometer® MPA 580 (Courage + Khazaka, Germany) 점탄력성계로 실시했다. 피부의 점탄력성을 평가하기 위해 측정은 각 피검자의 우측 및 좌측 뺨 중간에서 실시했다.

표 10에 제시한 점탄력성 측정 결과는 예컨대 기준선과 비교했을 때 다음과 같은 유의적 차이를 나타냈다:

실시예 19

총 결론

본 파일럿 연구의 결과는 모든 시험물질과 대조군이 기준선 점수와 비교했을 때 잔주름, 촉감이 있는 거칠음, 피부 색조 및 전반적인 변색/과색소침착의 외관에 유의적인 개선을 제공한다는 것을 나타낸다. 특히, 시험물질 1, arNOX 대조군 젤 A + 쉬잔드라(캡슐화되지 않음), 엔.타제타 추출물 및 살리신(녹색 표지) JZ-91-39 및 시험물질 3, arNOX 대조군 젤 B + 쉬잔드라(캡슐화되지 않음), 나르시서스 타제타 추출물 및 살리신(황색 표지) TL-90-58(글리세린 함유)은 심지어 굵은 주름의 외양에 양성 효과를 나타내어, 4주(시험물질 3, 황색 표지) 및 8주(시험물질 1, 녹색 표지, 및 3, 황색 표지)에 유의적인 개선을 보여주었다. 객관적 또는 주관적 자극에서는 어떠한 시험물질 또는 대조군에 의해서도 유의적인 증가가 없었다.

피부 발광 측정은 시험물질 1, arNOX 대조군 젤 A + 쉬잔드라(캡슐화되지 않음), 엔.타제타 추출물 및 살리신(녹색 표지) JZ-91-39만이 8주째 비-착색 부위에서 b*값의 유의적인 감소를 제공하는 것으로 나타난다. 착색 병변 부위에서 측정한 피부 발광 b* 값은 시험물질 1, arNOX 대조군 젤 A + 쉬잔드라(캡슐화되지 않음), 엔.타제타 추출물 및 살리신(녹색 표지) JZ-91-39가 시험물질 2, arNOX 대조군 젤 A + 쉬잔드라(청색 표지) TL-90-59 및 시험물질 3, arNOX 대조군 젤 B + 쉬잔드라(캡슐화되지 않음), 엔.타제타 추출물 및 살리신(황색 표지) TL-90-58(글리세린 함유)보다 병변의 암색을 감소시키는데 우수한다는 것을 보여준다.

피부 표면 수화 측정은 모든 시험물질 및 대조군이 4주째 유의적으로 개선된 피부 수화를 제공하는 것으로 나타났다.

피부 점탄력성 측정은 시험물질과 대조군 간에 어떠한 의미있는 차이도 없었다.

시험물질과 대조군 간에 ANOVA 비교는 시험물질 1(arNOX 대조군 젤 A + 쉬잔드라(캡슐화되지 않음), 나르시서스 타제타 추출물 및 살리신(녹색 표지) JZ-91-39) 및 시험물질 2(arNOX 대조군 젤 A + 쉬잔드라(청색 표지) TL-90-59)가 대조군 A(arNOX 대조군 젤 A(표지 없음) AB-87-04A) 및 대조군 B(arNOX 대조군 젤 B(적색 표지) JZ-91-40(글리세린 함유))보다 4주째 전반적인 변색을 개선시키는 데 있어서 우수하다는 것을 보여준다. 또한, 시험물질 1 및 2는 8주째 대조군 B(arNOX 대조군 젤 B(적색 표지) JZ-91-40(글리세린 함유))보다 우수했다. 시험물질 2(arNOX 대조군 젤 A + 쉬잔드라(청색 표지) TL-90-59), 시험물질 3(arNOX 대조군 젤 B + 쉬잔드라(캡슐화되지 않음), 나르시서스 타제타 추출물 및 살리신(황색 표지) TL-90-58(글리세린 함유)) 및 시험물질 4(arNOX 대조군 젤 B + 살리신(절반은 황색, 절반은 흑색 표지) KK-89-49(글리세린 함유))가 대조군 A(arNOX 대조군 젤 A(표지 없음) AB-87-04A) 및 대조군 B(arNOX 대조군 젤 B(적색 표지) JZ-91-40(글리세린 함유))보다 8주째 외관을 개선시키는 데 있어서 우수했다.

Claims

적어도 하나의 arNOX 억제제의 유효량을 포함하는, 노화 효과의 개선에 유용한 국소 조성물로서, 상기 arNOX 억제제가 나락틴(naractin)이고 상기 나락틴이 노화 효과를 감소시키는데 효과적인, 국소 조성물.
제1항에 있어서, 상기 나락틴이 식물 추출물에서 유래되는 국소 조성물.
제2항에 있어서, 상기 나락틴이 살리실레이트 또는 이의 유도체인 국소 조성물.
제2항에 있어서, 상기 나락틴이 엔.타제타(N. tazetta), 버드나무, 옥수수, 크레피스(crepis), 포플러, 비부남(viburnam), 아스퍼질러스(Aspergillus), 박쥐나무, 자작나무, 시호(bupleurum), 콜키쿰(colchicum), 등대풀(spurge), 필리펜둘럼(filipendulum), 치자나무, 지치, 담배 또는 겨우살이로부터 정제된 국소 조성물.
제3항에 있어서, 상기 살리실레이트가 살리신, 살리실산, 살리실 하이드록사메이트 또는 이들의 배합물인 국소 조성물.
제1항에 있어서, 화장품학적으로 또는 약제학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함하는 국소 조성물.
제1항에 있어서, 하나보다 많은 arNOX 억제제가 존재하고 상기 하나보다 많은 arNOX 억제제가 식물 추출물 형태인 국소 조성물.
제7항에 있어서, 상기 식물이 브로콜리, 표고버섯, 콜레우스(coleus), 로즈마리, 연(lotus), 아티초크(artichoke), 씨 로즈(sea rose), 탠저린(tangerine), 달맞이꽃(Oenothera biennis), 아스타잔틴, 레드 오렌지, 오미자(Schisandra chinensis), 로니세라(Lonicera), 메밀(Fagopyrum), 당근, 나르시서스 타제타(Narcissus tazetta), 올리브, 버드나무, 귀리 또는 옥수수 중에서 선택되는 국소 조성물.
제8항에 있어서, 상기 로니세라가 로니세라 자포니카(Lonicera japonica) 또는 로니세라 카프리폴리움(Lonicera caprifolium)인 국소 조성물.
제7항에 있어서, 상기 arNOX 억제제가 β-카로틴 또는 아스타잔틴인 국소 조성물.
제7항에 있어서, 상기 나락틴이 추가의 arNOX 억제제의 효과를 증강시키는 국소 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물이 크림제, 밀크제, 로션제, 젤제, 지질 또는 고분자 미소구체 또는 나노구체 또는 소포의 현탁액제, 비누제, 샴푸제 또는 선스크린제로서 투여되는 국소 조성물.
제1항에 있어서, 상기 노화 효과가 잔주름, 주름, 과색소침착, 탈수, 탄력성 상실, 혈관종, 건조, 가려움, 모세혈관확장증, 광선 자반증, 지루성 각화증, 수화 부족, 콜라겐 감소 또는 광선 각화증을 포함하는 국소 조성물.
제1항에 있어서, 상기 arNOX 억제제가 약 5 ㎍/ml 내지 약 500 ㎍/ml의 농도로 제공되는 국소 조성물.
노화 효과의 개선을 위해 NADH 옥시다제의 노화-관련 이소폼(isoform)에 의한 활성산소종의 생성을 억제하는 방법으로서,
살리신, 살리실산, 살리실 하이드록사메이트 중 적어도 하나를 포함하는 조성물의 치료학적 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함을 포함하여, NADH 옥시다제의 노화-관련 이소폼에 의한 활성산소종의 생성이 억제되고 노화 효과가 개선되는, 방법.
제15항에 있어서, 상기 조성물이 브로콜리, 표고버섯, 콜레우스, 로즈마리, 연, 아티초크, 씨 로즈, 탠저린, 달맞이꽃, 아스타잔틴, 레드 오렌지, 오미자, 로니세라, 메밀, 당근, 나르시서스 타제타, 올리브, 버드나무, 귀리 또는 옥수수 중 적어도 하나로부터의 추출물을 추가로 포함하는 방법.
제15항에 있어서, 상기 조성물이 크림제, 밀크제, 로션제, 젤제, 지질 또는 고분자 미소구체 또는 나노구체 또는 소포의 현탁액제, 비누제, 샴푸제 또는 선스크린제로서 도포되는 방법.
제15항에 있어서, 상기 노화 효과가 잔주름, 주름, 과색소침착, 탈수, 탄력성 상실, 혈관종, 건조, 가려움, 모세혈관확장증, 광선 자반증, 지루성 각화증, 수화 부족, 콜라겐 감소 또는 광선 각화증을 포함하는 방법.
arNOX를 억제하기에 충분한 나락틴의 유효량을 포함하는 화장품 조성물을 피부에 도포함을 포함하는, 노화 효과를 개선시키기 위한 화장 방법으로서, 적어도 하나의 arNOX 매개의 노화 효과가 억제되는, 화장 방법.
제19항에 있어서, 상기 나락틴이 살리실레이트인 화장 방법.
제20항에 있어서, 상기 살리실레이트가 살리신, 살리실 하이드록사메이트 또는 살리실산인 화장 방법.
제19항에 있어서, 상기 화장품 조성물이 당근 추출물, 올리브 추출물, 브로콜리 추출물, 표고버섯 추출물, 콜레우스 추출물, 로즈마리 추출물, 연 추출물, 아티초크 추출물, 씨 로즈 추출물, 탠저린 추출물, 달맞이꽃 추출물, 레드 오렌지 추출물, 오미자 추출물, 로니세라 추출물, 메밀 추출물, 버드나무 추출물, 옥수수 스틸(corn steele), 귀리 스틸 또는 나르시서스 타제타 추출물을 포함하는 식물 추출물을 추가로 포함하는 화장 방법.
제19항에 있어서, 상기 나락틴이 화장품학적으로 허용되는 담체와 함께 제공되는 화장 방법.
제19항에 있어서, 상기 노화 효과가 잔주름, 주름, 과색소침착, 탈수, 탄력성 상실, 혈관종, 건조, 가려움, 모세혈관확장증, 광선 자반증, 지루성 각화증, 수화 부족, 콜라겐 감소 또는 광선 각화증을 포함하는 화장 방법.
제19항에 있어서, 상기 나락틴이 하루에 1회 이상 도포되는 화장 방법.
제19항에 있어서, 상기 나락틴이 약 5 ㎍/ml 내지 약 500 ㎍/ml의 농도로 화장품 제제에 제공되는 화장 방법.
제19항에 있어서, 상기 조성물이 크림제, 밀크제, 로션제, 젤제, 지질 또는 고분자 미소구체 또는 나노구체 또는 소포의 현탁액제, 비누제, 샴푸제 또는 선스크린제로서 투여되는 화장 방법.
적어도 하나의 나락틴; 및
사용 설명서
를 포함하는, 노화 효과의 개선에 유용한 화장품을 도포하기 위한 키트.
제28항에 있어서, 적어도 하나의 arNOX 억제성 식물 추출물의 담체로서 적합한 화장품 제제를 추가로 포함하는 키트.