KR20100102197A - 항 ｍｉｆ 항체 - Google Patents

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Abstract

본원은 대식세포 이동 억제 인자 (MIF)의 C-말단 또는 중심 구역에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 부분에 관한 것이다. 이들 항-MIF 항체 및 그의 항원-결합 부분은 인간 MIF의 생물학적 기능을 추가로 억제한다. 본원은 또한 항-MIF 항체로부터 유래된 단리된 중쇄 및 경쇄 면역글로불린, 및 상기 면역글로불린을 코딩하는 핵산 분자에 관한 것이다. 본원은 또한 항-MIF 항체를 확인하는 방법, 이들 항체를 포함하는 제약 조성물, 및 MIF-관련 병태의 치료를 위해 이들 항체 및 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이다.

Description

항 ＭＩＦ 항체{ANTI MIF ANTIBODIES}
본 발명은 대식세포 이동 억제 인자 (MIF)의 C-말단 또는 중심 구역에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체 및 그의 항원-결합 부분에 관한 것이다. 이들 항-MIF 항체 및 그의 항원-결합 부분은 인간 MIF의 생물학적 기능을 추가로 억제한다. 본 발명은 또한 항-MIF 항체로부터 유래된 단리된 중쇄 및 경쇄 면역글로불린, 및 상기 면역글로불린을 코딩하는 핵산 분자에 관한 것이다. 본 발명은 또한 항-MIF 항체를 확인하는 방법, 이들 항체를 포함하는 제약 조성물, 및 MIF-관련 병태의 치료를 위해 이들 항체 및 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이다.
대식세포 이동 억제 인자 (MIF)는 대식세포의 시험관내 무작위 이동을 방지하는 그의 능력에 기초하여 처음 단리된 시토킨이다 ([Bloom et al. Science 1966, 153, 80-2]; [David et al. PNAS 1966, 56, 72-7). MIF는 1966년 이래로 알려져 있었지만 대다수 세포에서 그의 정확한 기능을 알려져 있지 않았으나, MIF는 선천 및 획득 면역 반응의 중요한 상류 조절인자로 보인다.
인간 MIF cDNA는 1989년에 클로닝되었고 (Weiser et al., PNAS 1989, 86, 7522-6), 그의 게놈 위치는 염색체 22에 매핑 (mapping)되었다. MIF 유전자의 산물은 분자 질량이 12.5 kDa인 아미노산 단백질이다. 상기 단백질은 인간, 마우스, 래트 및 소 MIF 사이의 서열 상동성이 90 - 96%로 고도로 보존된다. 그러나, MIF는 임의의 다른 단백질에 유의한 서열 상동성을 갖지 않는다. MIF의 3차원 구조는 임의의 다른 시토킨 또는 뇌하수체 호르몬과 다르다. 상기 단백질은 동일한 하위단위 (subunit)들의 삼량체로서 결정화된다. 각각의 단량체는 4-가닥 베타-시트에 대해 채워진 2개의 역평행 (antiparallel) 알파-나선을 함유한다. 단량체는 인접한 하위단위의 베타-시트와 상호작용하여 단량체들 사이에 계면을 형성하는 추가의 2개의 베타-가닥을 갖는다. 3개의 베타-시트는 분자 3-폴드 (three-fold) 축을 따라 단백질의 중심을 통해 이어지는 용매-접근가능한 채널을 포함하는 원통을 형성하도록 배열된다 (Sun et al. PNAS 1996, 93, 5191-5196).
대식세포로부터 MIF의 분비는 매우 낮은 농도의 글루코코르티코이드에서 유도되었음이 보고되었다 (Calandra et al. Nature 1995, 377, 68-71). 그러나, 전염증 시토킨으로서, MIF는 또한 글루코코르티코이드의 효과를 역-조절 (counter-regulation)하고, 다른 시토킨, 예를 들어 종양 괴사 인자 TNF-α 및 인터류킨 IL-1β의 분비를 자극하고 (Baugh et al., Crit Care Med 2002, 30, S27-35), 따라서 염증 및 면역 질병의 발병에서 특정 역할을 담당한다. MIF는 또한 림프종, 흑색종, 및 결장암의 성장과 직접적으로 연관된다 (Nishihira et al. J Interferon Cytokine Res. 2000, 20:751-62).
MIF는 많은 병리학적 상태의 매개인자이고, 따라서 염증성 장 질병 (IBD), 류마티스 관절염 (RA), 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS), 천식, 사구체신장염, IgA 신장병증, 암, 심근경색 (MI) 및 패혈증을 포함한 다양한 질병과 연관된다.
재조합 인간 MIF에 대해 폴리클로날 및 모노클로날 항-MIF 항체가 개발되었다 ([Shimizu et al., FEBS Lett. 1996; 381, 199-202]; [Kawaguchi et al., J. Leukoc. Biol. 1986, 39, 223-232] 및 [Weiser et al., Cell. Immunol. 1985, 90, 167-78]).
항-MIF 항체는 TNF-α 방출을 억제하기 위해 치료 용도로 제안되었다. 문헌 [Calandra et al., J. Inflamm. 1995. 47, 39-51]에는 실험에 의해 유도된 그람-음성 및 그람-양성 패혈성 쇼크로부터 동물을 보호하기 위해서 항-MIF 항체를 사용하였음이 보고되어 있다. 항-MIF 항체는 패혈성 쇼크 및 다른 염증성 질병 상태에서 시토킨 생산을 조정하기 위한 치료 수단으로서 제안되었다.
US 6,645,493에는 MIF의 생물학적 활성을 중화시키는, 하이브리도마 세포로부터 유래된 모노클로날 항-MIF 항체가 개시되어 있다. 동물 모델에서 이들 마우스에서 유래된 항-MIF 항체가 내독소 유도 쇼크의 치료시에 유익한 효과를 보임이 밝혀질 수 있었다. 설명된 항-MIF 항체 (III.D.9, XIV.14.3 및 XIV.15.5)의 일부를 비교 실험을 위해 본 발명에서 사용하였다.
US 2003/0235584에는 MIF 유전자가 동종접합 낙아웃된 (homozygously knocked-out) 동물에서 MIF에 대한 고친화도 항체의 제조 방법이 개시되어 있다.
글리코실화-억제 인자 (GIF)는 문헌 [Galat et al., Eur. J. Biochem. 1994, 224, 417-21]에 기재된 단백질이다. MIF 및 GIF는 이제 동일한 것으로 인정된다. 문헌 [Watarai et al., PNAS 2000, 97, 13251-6]에서는 Ts 세포에서 GIF의 번역후 변형의 생화학적 성질을 확인하기 위해 상이한 GIF 에피토프에 결합하는 폴리클로날 항체를 설명하였다. 문헌 [Watarai et al., PNAS 2000, 97, 13251-6]에서는 GIF가 시험관 내에서 상이한 입체형태적 이소형으로 발생됨을 보고하였다. 한 종류의 이성질체는 단일 시스테인 잔기의 화학적 변형에 의해 발생한다. 화학적 변형은 GIF 단백질 내에서 입체형태적 변화를 일으키고, 그의 생물학적 기능을 변화시킨다.
각종 질병에서 MIF 관련성의 복잡도를 감안할 때, 에피토프-특이적 항-MIF 항체의 기능 및 치료 방법을 위한 그의 용도의 규명이 매우 바람직하다. 따라서, MIF에 의해 매개되는 질병 및 병태의 치료를 위해 인간 MIF의 생물학적 기능을 억제하는 에피토프-특이적 항-MIF 항체가 필요하다.
<발명의 개요>
본 발명은 대식세포 이동 억제 인자 (MIF)의 C-말단 또는 중심 구역에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 항원-결합 부분에 관한 것이다.
본 발명은 추가로 이들 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 코딩하는 핵산 분자, 및 그러한 핵산을 포함하는 벡터, 및 그러한 벡터를 포함하는 숙주세포, 및 상기 핵산 분자에 의해 코딩되는 폴리펩티드의 재조합 생산 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 항-MIF 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 제약 조성물은 또한 제약상 허용되는 담체 또는 다른 치료제를 포함할 수 있다.
본 발명은 또한 면역학적 질병, 예를 들어 염증성 질병 및 과다증식성 질환의 치료용 의약의 제조에 있어서 항-MIF 항체 또는 그의 항원-결합 부분의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 추가로 면역학적 질병, 예를 들어 염증성 질병 및 과다증식성 질환을 치료하는데 사용하기 위한 항-MIF 항체 또는 그의 항원-결합 부분에 관한 것이다.
본 발명은 또한 유효량의 항-MIF 항체, 또는 그의 항원 결합 부분을 사용하여 다양한 면역학적 질병 및 병태, 예를 들어 염증성 질병 및 과다증식성 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 진단 방법에 관한 것이다. 항-MIF 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 생물학적 샘플에서 MIF를 검출하기 위해 사용될 수 있다.
본 발명은 추가로 활성 MIF를 억제하고 동물 모델에서 유익한 효과를 유도할 수 있는 항-MIF 항체의 확인 방법에 관한 것이다.
도 1은 본 발명의 인간 항-MIF 항체의 경쇄 가변 구역의 아미노산 서열을 보여준다.
도 2는 본 발명의 인간 항-MIF 항체의 중쇄 가변 구역의 아미노산 서열을 보여준다.
도 3은 본 발명의 인간 항-MIF 항체의 경쇄 가변 구역의 DNA 서열 및 그의 번역을 보여준다.
도 4는 본 발명의 인간 항-MIF 항체의 중쇄 가변 구역의 DNA 서열 및 그의 번역을 보여준다.
도 5는 대조 항체 (C3) 및 항-MIF 항체 Bax94에 대한 쥐 III.D.9의 경쟁 실험을 보여준다. 항체 Bax94 양을 증가시킴으로써 명백한 경쟁을 관찰할 수 있다.
도 6은 항체 Bax94 (점선) 및 항체 Bax152 (파선)가 대조 항체 (C3)에 비해 복막염 동물 모델에서 증가된 생존 및 지연된 사멸 시간을 보였음을 보여준다.
도 7은 활성 MIF 및 비-활성 MIF에 대한 항체 Bax94의 차별적인 결합을 보여준다. 항체 Bax94는 직접적인 ELISA 포맷에서 활성 MIF에 결합하는 반면, 비-활성-MIF는 결합하지 않는다.
도 8은 인간 항-MIF 항체의 시험관내 특성을 요약하는 표이다.
도 9: 세포 기반 분석에서 항-MIF 항체의 세포자멸-촉진 (pro-apoptosis) 효과. PC-3 세포의 항체 처리 후에 세포성 카스파제-3 (효과기 카스파제) 활성을 보여준다. 분석은 삼중으로 수행하고, 데이타는 평균 ± SD로서 제시한다.
도 10: 항-MIF 항체의 항-침윤 효과. 마트리겔 (matrigel)-코팅된 Transwell™ 삽입체 (insert)의 공극을 통한 PC-3 전립선암 세포의 침윤을 조사한다. 시야당 침윤된 세포의 수를 계수한다 (400배 배율의 현미경). 데이타는 3-10의 시야 계수로부터 평균 ± SD로서 제시하고, 유의한 차이가 제시된다.
<정의 및 일반적인 기술>
본원에서 달리 규정하지 않으면, 본 발명과 관련하여 사용되는 학술 및 기술 용어는 당업자에게 통상적으로 이해되는 의미를 가질 것이다. 일반적으로, 본원에서 설명되는 세포 및 조직 배양, 분자 생물학, 면역학, 미생물학, 유전학 및 단백질 및 핵산 화학과 관련하여 사용되는 명명법 및 그에 대한 기술은 당업계에 잘 알려져 있고 일반적으로 사용되는 것이다. 본 발명의 방법 및 기술은 일반적으로 당업계에 잘 공지되어 있고 달리 나타내지 않으면 본 명세서 전체에서 언급되고 논의되는 다양한 일반적이고 보다 구체적인 참고문헌에 기재되어 있는 통상적인 방법에 따라 수행된다. 예를 들어, 본원에 참고로 포함되는 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1989)] 및 [Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992)], 및 [Harlow and Lane Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1990)]을 참고한다.
"MIF" 또는 "대식세포 이동 억제 인자"는 면역 및 염증 반응에서 중요한 매개인자로서, 특히 글루코코르티코이드의 역조절인자로서 알려진 단백질을 나타낸다. MIF는 포유동물 MIF, 구체적으로 인간 MIF (Swiss-Prot 1차 기탁 번호: P14174)를 포함하고, 여기서 단량체 형태는 115개 아미노산의 단백질로서 코딩되지만, 처음 메티오닌의 절단에 의해 114개 아미노산의 단백질로서 생산된다. "MIF"는 또한 "GIF" (글리코실화-억제 인자) 및 다른 형태의 MIF, 예를 들어 MIF의 융합 단백질을 포함한다. MIF 아미노산의 넘버링은 N-말단 메티오닌 (아미노산 1)에서 시작하여 C-말단 알라닌 (아미노산 115)에서 끝난다.
용어 "활성 MIF"는 MIF의 자연 발생하는 입체형태적 이소형을 나타내고, 이는 그의 생물학적 기능에 관련된 것이다. 활성 MIF는 세포의 표면 상에서 관찰될 수 있는 이소형 (예를 들어 THP1 등)을 포함한다. 활성 MIF는 또한 세균을 사용한 시험접종 후에 포유동물의 혈청에서 발생하는 MIF 이소형을 포함한다.
"항체"는 무손상 항체, 또는 특이적 결합을 위해 무손상 항체와 경쟁하는 항원-결합 부분을 나타낸다. 일반적으로, 참고로 포함되는 문헌 [Fundamental Immunology, Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989))]을 참조한다. 용어 항체는 유전공학 처리된 형태, 예를 들어 키메라 또는 인간화 항체를 포함한다.
용어 항체의 "항원-결합 부분"은 항원 (예를 들어, MIF)에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 단편을 나타낸다. 항원-결합 부분은 재조합 DNA 기술에 의해 또는 무손상 항체의 효소에 의한 절단 또는 화학적 절단에 의해 생산될 수 있다. 항원-결합 부분은 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 및 상보성 결정 구역 (CDR) 단편, 단일쇄 항체 (scFv), 키메라 항체, 디아바디 (diabody) 및 특이적인 항원 결합을 폴리펩티드에게 부여하기 충분한 항체의 일부를 적어도 함유하는 폴리펩티드를 포함한다. 성숙 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 모두는 N-말단에서 C-말단으로 구역 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 각각의 도메인에 대한 아미노산의 지정은 문헌 [Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 and 1991)], [Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)], 또는 [Chothia et al., Nature 342:878-883 (1989)]의 규정에 따라 이루어진다. 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 유도체화되거나 또는 다른 기능적 분자 (예를 들어, 또다른 펩티드 또는 단백질)에 연결된다. 예를 들어, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 하나 이상의 다른 분자 엔티티 (entity), 예를 들어 다른 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체 또는 디아바디), 검출가능한 물질, 세포독성제, 제약 물질 및/또는 연결 분자에 기능적으로 연결될 수 있다.
용어 "인간 항체"는 가변 및 불변 도메인 서열이 인간 서열인 임의의 항체를 의미한다. 이 용어는 인간 유전자로부터 유래되지만, 예를 들어 가능한 면역원성의 감소, 친화도 증가, 바람직하지 않은 폴딩 (folding)을 야기할 수 있는 시스테인의 제거 등을 위해 변경된 서열을 갖는 항체를 포함한다. 이 용어는 인간 세포에 일반적이지 않은 글리코실화를 부여할 수 있는, 비-인간 세포에서 재조합 방식으로 생산된 상기 항체를 포함한다.
용어 "인간화 항체"는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 서열을 함유하는 면역글로불린, 면역글로불린 사슬 또는 그의 단편 (예를 들어 Fv, Fab, Fab', F(ab')2 단편, 또는 항체의 다른 항원-결합 부분)을 나타낸다.
용어 "키메라 항체"는 2 이상의 상이한 종으로부터의 구역을 포함하는 항체를 의미한다.
용어 "단리된 항체" 또는 "단리된 그의 항원-결합 부분"은 항체 공급원, 예를 들어 파지 디스플레이 라이브러리 또는 B-세포 레퍼토리로부터 확인되고 선택된 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 의미한다.
용어 "KD"는 특정 항체의 Fab 부분의 각각의 항원에 대한 평형 해리 상수를 의미한다.
용어 MIF의 "중심 구역" 및 "C-말단 구역"은 각각 아미노산 35-68 및 86-115를 포함하는 인간 MIF의 구역을 의미한다.
용어 "에피토프"는 면역글로불린 또는 항체 단편에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 단백질 결정자를 포함한다. 에피토프 결정자는 대체로 분자의 화학적으로 활성인 표면기, 예를 들어 노출된 아미노산, 아미노당, 또는 다른 탄수화물 측쇄로 구성되고, 대체로 특이적 3차원 구조적 특징, 및 특이적 전하 특징을 갖는다.
용어 "벡터"는 그 벡터가 연결되는 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 나타낸다. 일부 실시태양에서, 벡터는 그 내부에 추가의 DNA 세그먼트가 라이게이팅될 수 있는 플라스미드, 즉, 환상 이중 가닥 DNA 루프이다.
용어 "숙주세포"는 발현 벡터를 도입한 후 재조합 단백질을 생산할 수 있는 세포주를 의미한다. 용어 "재조합 세포주"는 그 내부에 재조합 발현 벡터가 도입된 세포주를 의미한다. "재조합 세포주"는 특정 해당 세포주뿐만 아니라 상기 세포주의 자손체도 의미함을 이해하여야 한다. 돌연변이 또는 환경적인 영향에 의해 특정 변형이 후속 세대에서 발생할 수 있기 때문에, 상기 자손체는 사실상 모 세포와 동일하지 않을 수 있지만, 본원에서 사용되는 용어 "재조합 세포주"의 범위 내에 계속 포함된다.
용어 "제약상 허용되는 담체"는 생리학상 적합성인 임의의 모든 용매, 분산매, 코팅, 항균제 및 항진균제, 등장제 및 흡수지연제 등을 나타낸다.
항- MIF 항체
한 실시태양에서, 본 발명은 인간 MIF의 C-말단 또는 중심 구역에 특이적으로 결합하고 인간 MIF의 생물학적 기능을 추가로 억제하는 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 부분에 관한 것이다. 일부 실시태양에서 모노클로날 항체는 인간 모노클로날 항체이다. 다른 실시태양에서, 모노클로날 항체는 인간화 모노클로날 항체이다.
일부 실시태양에서, 항-MIF 항체의 경쇄는 항체 Bax8 (서열 1), 항체 Bax69 (서열 2), 항체 Bax74 (서열 3), 항체 Bax94 (서열 4), 항체 Bax152 (서열 5), 항체 BaxA1O (서열 6)의 VL의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열, 또는 상기 아미노산 서열에 85%, 바람직하게는 90% 서열 상동성을 갖는 아미노산을 포함한다. 일부 실시태양에서, 경쇄는 상기 항체의 임의의 하나의 CDR1의 개시부로부터 CDR3의 종결부까지의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시태양에서, 항-MIF 항체의 경쇄는 적어도 도 1에 제시된 아미노산 서열의 경쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3을 포함한다.
일부 실시태양에서, 중쇄는 항체 Bax8 (서열 7), 항체 Bax69 (서열 8), 항체 Bax74 (서열 9), 항체 Bax94 (서열 10), 항체 Bax152 (서열 11), 항체 BaxA10 (서열 12)의 가변 도메인 (VH)의 아미노산 서열, 또는 상기 아미노산 서열에 85%, 바람직하게는 90% 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시태양에서, 중쇄는 상기 항체의 임의의 하나의 CDR1의 개시부로부터 CDR3의 종결부까지의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시태양에서, 항-MIF 항체의 중쇄는 적어도 도 2에 제시된 아미노산 서열의 중쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3을 포함한다.
항- MIF 항체의 클래스 및 서브클래스
본 발명의 항-MIF 항체는 단리된 모노클로날 항체이다. 항-MIF 항체는 IgG, IgM, IgE, IgA, 또는 IgD 분자일 수 있다. 다른 실시태양에서, 항-MIF 항체는 IgG이고, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 서브클래스이다. 다른 실시태양에서, 항체는 서브클래스 IgG1 또는 IgG4이다. 다른 실시태양에서, 항체는 서브클래스 IgG4이다. 일부 실시태양에서, IgG4 항체는 세린 (세린228, 카바트 (Kabat) 넘버링 방식에 따름)을 프롤린으로 변경시키는 단일 돌연변이를 갖는다. 따라서, IgG4의 Fc 구역 내의 CPSC 하위 서열은 CPPC가 되고, 이것은 IgG1 내의 하위 서열이다 (Angal et al. Mol. Immunol. 1993, 30, 105-108).
항- MIF 항체에 의해 인식되는 MIF 에피토프
일부 실시태양에서, 본 발명은 각각 인간 MIF의 아미노산 35-68 또는 86-115에 걸치는 구역에 특이적으로 결합하는 항-MIF 항체 또는 그의 항원-결합 부분에 관한 것이고, 바람직하게는 항-MIF 항체는 각각 아미노산 50 내지 68, 또는 86 내지 102에 걸치는 구역에 특이적으로 결합하고, 인간 MIF의 생물학적 기능을 억제한다.
다른 실시태양에서, 본 발명은 활성 MIF에 특이적으로 결합하고 인간 MIF의 생물학적 기능을 추가로 억제하는 항-MIF 항체에 관한 것이다. 일부 실시태양에서, 활성 MIF는 막-결합형이다.
놀랍게도, 본 발명의 항-MIF 항체는 인간 MIF를 사용한 결합 연구에서 항-MIF 항체 III.D.9와 경쟁하는 놀라운 특성을 갖는 것으로 밝혀졌다. III.D.9의 경쟁은 실시예 5에 설명된 바와 같이 결정할 수 있다.
항- MIF 항체의 인간 MIF 에 대한 결합 친화도
본 발명은 인간 MIF에 5x10-7 M 이하의 KD로 결합하는 항-MIF 항체 또는 그의 항원-결합 부분에 관한 것이다. 다른 실시태양에서, 항체는 인간 MIF에 5x10-8 M 이하, 5x10-9 M 이하, 또는 5x10-10 M 이하의 KD로 결합한다.
항-MIF 항체 또는 그의 항원-결합 부분의 인간 MIF에 대한 결합 친화도는 당업계에 공지된 방법에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, 결합 친화도는 표면 플라즈몬 공명 (BIACORE (비아코어))에 의해 측정될 수 있다. 실시예 10은 비아코어 기술에 의해 항-MIF 항체의 친화도 상수를 결정하는 방법을 예시한다.
일부 실시태양에서, 본 발명은 추가로 활성 MIF에 500 nM 미만의 KD로 결합하고 인간 MIF의 생물학적 기능을 추가로 억제하는 항-MIF 항체 또는 그의 항원-결합 부분에 관한 것이다. 일부 실시태양에서, 항-MIF 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 활성 MIF에 50 nM 미만의 KD로 결합한다.
항- MIF 항체의 생산
본 발명에 따른 항-MIF 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 당업자에게 공지된 많은 방법, 예를 들어 항체 단편의 파지 디스플레이 라이브러리의 스크리닝 (screening)에 의해 제조할 수 있다. 상이한 포맷의 파지 디스플레이 라이브러리, 예를 들어 scFv 또는 Fab 단편 라이브러리 등을 이용할 수 있다. 파지 디스플레이 라이브러리를 특정 MIF 에피토프에 대한 목적하는 친화도를 갖는 항체 단편에 대해 스크리닝하고, 유전 물질은 적절한 클론으로부터 회수된다. 연속적인 라운드의 라이브러리 생성 및 스크리닝에서, 단리된 원래의 항체 단편의 친화도에 비해 증가된 친화도를 갖는 항체 단편이 단리될 수 있다. 확인된 항-MIF 단편의 친화도는 친화도 증진에 의해 더욱 향상될 수 있다.
핵산, 벡터, 숙주 세포, 및 항- MIF 항체의 재조합 제조 방법
본 발명은 추가로 본 발명에 따른 항-MIF 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 코딩하는 핵산 분자, 및 상기 핵산을 포함하는 벡터 및 상기 벡터를 포함하는 숙주세포 및 상기 핵산 분자에 의해 코딩되는 폴리펩티드를 재조합 방식으로 생산하는 방법에 관한 것이다.
일부 실시태양에서, 항-MIF 항체의 VL 구역을 코딩하는 DNA 서열은 도 3에 제시된 바와 같은 항체 Bax8 (서열 13), 항체 Bax69 (서열 14), 항체 Bax74 (서열 15), 항체 Bax94 (서열 16), 항체 Bax152 (서열 17), 항체 BaxA10 (서열 18)의 VL의 서열과 동일한 뉴클레오티드 서열, 또는 임의의 상기 뉴클레오티드 서열에 85%, 바람직하게는 90% 서열 상동성을 갖는 서열을 포함한다.
일부 실시태양에서, 항-MIF 항체의 VH 구역을 코딩하는 DNA 서열은 도 4에 제시된 바와 같은 항체 Bax8 (서열 19), 항체 Bax69 (서열 20), 항체 Bax74 (서열 21), 항체 Bax94 (서열 22), 항체 Bax152 (서열 23), 항체 BaxA10 (서열 24)의 VH의 서열과 동일한 뉴클레오티드 서열, 또는 임의의 상기 뉴클레오티드 서열에 85%, 바람직하게는 90% 서열 상동성을 갖는 서열을 포함한다.
본 발명에 따른 항-MIF 항체의 생산은 유전공학에 의해, 예를 들어 RNA의 역전사 및/또는 DNA의 증폭 및 발현 벡터 내로의 클로닝을 통한 재조합 DNA의 생성을 위한 임의의 방법을 포함한다. 일부 실시태양에서, 벡터는 바이러스 벡터이고, 여기서 추가의 DNA 세그먼트가 바이러스 게놈 내로 라이게이션될 수 있다. 일부 실시태양에서, 벡터는 그 내부로 벡터가 도입되는 숙주세포에서 자율 복제가 가능한 벡터 (예를 들어, 세균 복제 기점을 갖는 세균 벡터 및 에피좀 (episomal) 포유동물 벡터)이다. 다른 실시태양에서, 벡터 (예를 들어, 비-에피좀 포유동물 벡터)는 숙주 세포 내로 도입 시에 숙주세포의 게놈 내로 통합되어, 숙주 게놈과 함께 복제될 수 있다. 또한, 특정 벡터는 그 벡터가 작동가능하게 연결되는 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 상기 벡터는 본원에서 "재조합 발현 벡터" (또는 간단히, "발현 벡터")로서 언급된다.
항-MIF 항체는 통상적인 발현 벡터, 예를 들어 세균 벡터 (예를 들어, pBR322 및 그의 유도체), 또는 진핵생물 벡터에 의해 생산될 수 있다. 항체를 코딩하는 서열에는 숙주세포로부터의 복제, 발현 및/또는 분비를 조절하는 조절 서열이 제공될 수 있다. 상기 조절 서열은 예를 들어 프로모터 (예를 들어, CMV 또는 SV40) 및 신호 서열을 포함한다. 또한, 발현 벡터는 선택 및 증폭 마커, 예를 들어 디히드로폴레이트 리덕타제 유전자 (DHFR), 히그로마이신-B-포스포트랜스퍼라제, 및 티미딘-키나제를 포함할 수 있다. 사용되는 벡터의 성분, 예를 들어 선택 마커, 레플리콘, 인핸서는 상업적으로 입수되거나 통상적인 방법에 의해 제조될 수 있다. 다양한 세포 배양액, 예를 들어 포유동물 세포, 예를 들어 CHO, COS, HEK293, NS0, 섬유아세포, 곤충 세포, 효모 또는 세균, 예를 들어 이. 콜라이 (E. coli)에서의 발현을 위한 벡터가 구성될 수 있다. 일부 경우에, 발현된 단백질의 최적 글리코실화를 허용하는 세포가 사용된다.
항-MIF 항체 경쇄 유전자 및 항-MIF 항체 중쇄 유전자는 별개의 벡터 내로 삽입되거나 또는 두 유전자 모두가 동일한 발현 벡터 내로 삽입된다. 항체 유전자는 표준 방법, 예를 들어 항체 유전자 단편 및 벡터 상의 상보성 제한 부위의 라이게이션, 또는 제한 부위가 존재하지 않을 경우 블런트 (blunt) 단부 라이게이션에 의해 발현 벡터 내로 삽입된다.
항-MIF 항체 또는 그의 항원-결합 부분의 생산은 예를 들어 전기천공 또는 미세주사를 통한 형질감염에 의해 진핵생물 세포 내로 재조합 DNA를 도입하기 위한 당업계에 공지된 임의의 방법을 포함할 수 있다. 예를 들어, 항-MIF 항체의 재조합 발현은 항-MIF 항체 코딩 DNA 서열을 함유하는 발현 플라스미드를 적절한 형질감염 방법에 의해 하나 이상의 조절 서열, 예를 들어 강력한 프로모터의 제어 하에 적합한 숙주세포주 내로 도입하여, 도입된 서열이 게놈 내로 안정적으로 통합된 세포를 생성시킴으로써 달성될 수 있다. 리포펙션 (lipofection) 방법이 본 발명에 따라 사용될 수 있는 형질감염 방법의 예이다.
항-MIF 항체의 생산은 또한 상기 형질전환된 세포를 예를 들어 연속식 또는 배치식 (batchwise)으로 배양하고, 항-MIF 항체를 예를 들어 구성적으로 또는 유도 발현하기 위한 당업계에 공지된 임의의 방법을 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 숙주세포 종류는 임의의 진핵생물 세포일 수 있다. 한 실시태양에서, 세포는 항-MIF 항체의 번역후 변형을 수행하는 능력을 갖는 포유동물 세포이다. 예를 들어, 상기 포유동물 세포는 예를 들어 SkHep-, CHO-, HEK293-, 및 BHK-세포로 이루어지는 군 중에서 선택되는 세포주처럼 포유동물 세포주로부터 유래된다. 한 실시태양에서, 항-MIF 항체는 선택 마커로서 G418을 첨가하여 DHFR-결핍 CHO 세포주, 예를 들어 DXB11에서 발현된다. 항체 유전자를 코딩하는 재조합 발현 벡터를 포유동물 숙주 세포 내로 도입할 때, 항체는 숙주세포 내에서 항체의 발현 또는 숙주세포가 성장하는 배양 배지 내로 항체의 분비를 허용하기 위해 충분한 기간 동안 숙주세포를 배양함으로써 생산한다. 항-MIF 항체는 표준 단백질 정제 방법을 이용하여 배양 배지로부터 회수될 수 있다.
추가로, 항-MIF 항체의 생산은 항체의 정제를 위한 당업계에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 음이온 교환 크로마토그래피 또는 친화도 크로마토그래피를 포함할 수 있다. 한 실시태양에서, 항-MIF 항체는 크기 배제 크로마토그래피에 의해 세포 배양 상등액으로부터 정제될 수 있다.
항- MIF 항체의 특성
본 발명은 a) 인간 MIF의 C-말단 또는 중심 구역에 결합하고, b) 글루코코르티코이드 오버라이딩 (overriding) (GCO) 활성을 억제하고, c) 섬유아세포 또는 암 세포와 같은 세포주 (예를 들어 NIH/3T3 또는 PC-3)의 증식을 억제하고, d) 활성 MIF에 결합하고, e) 비-활성 MIF에 결합하지 않고, f) 마우스 항-MIF 항체 III.D.9와 경쟁하는 특성 중 적어도 하나의 특성을 갖는 항-MIF 항체 또는 그의 항원-결합 부분에 관한 것이다.
일부 실시태양에서, 활성 MIF는 약한 산화 시약, 예를 들어 시스틴을 사용한 인간 MIF의 처리에 의해 또는 인간 MIF를 지지체, 예를 들어 ELISA-플레이트 또는 비드 상에 고정함으로써 발생하는 활성 MIF의 이소형이다. 다른 실시태양에서, 활성 MIF는 동물을 세균으로 시험접종한 후 생체 내에서 발생하는 활성 MIF의 이소형이다. 다른 실시태양에서, 활성 MIF는 생체 내에서 세포의 표면 상에 발생하는 활성 MIF의 이소형 (예를 들어, THP1, CFB)이다.
일부 실시태양에서, 비-활성 MIF는 환원된 MIF (예를 들어, 실시예 7에서 설명되는 바와 같은) 또는 세포내 저장된 MIF이다.
다른 실시태양에서, 항-MIF 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 500 nM 미만의 KD로 활성 MIF에 결합한다.
항- MIF 항체의 제약 조성물 및 치료 방법
본 발명은 또한 MIF-관련 병태, 구체적으로 면역학적 질병, 예를 들어 염증성 질병 및 과다증식성 질환의 치료를 필요로 하는 대상의 치료를 위한, 항-MIF 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 포함하는 조성물에 관한 것이다.
일부 실시태양에서, 치료를 필요로 하는 대상은 인간이다. 본 발명의 항-MIF 항체에 의해 치료할 수 있는 과다증식성 질환, 예를 들어 암성 질병은 임의의 조직 또는 장기에 발병한 것일 수 있고, 뇌, 폐, 편평세포, 방광, 위, 췌장, 유방, 머리, 목, 간, 신장, 난소, 전립선, 직장결장, 식도, 부인과, 비인두, 또는 갑상선 암, 흑색종, 림프종, 백혈병 또는 다발 골수종을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 특히, 본 발명의 항-MIF 항체는 유방, 전립선, 결장 및 폐의 암종을 치료하기 위해 유용하다.
본 발명은 또한 치료 유효량의 항-MIF 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 그를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 인간을 포함한 대상에서 염증성 질병, 예를 들어 혈관염, 관절염, 패혈증, 패혈성 쇼크, 내독소 쇼크, 독성 쇼크 증후군, 후천성 호흡 곤란 증후군, 사구체신장염, 염증성 장 질병, 크론병, 궤양성 대장염, 복막염, 신장염, 아토피 피부염, 천식, 결막염, 열, 말라리아 또는 건선의 치료 방법을 포함한다.
다른 실시태양에서, 본 발명의 상기 항-MIF 항체를 포함하는 조성물은 사구체신장염, 염증성 장 질병, 신장염 및 복막염으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 염증성 질병의 치료를 위해 사용된다.
치료는 또한 본 발명의 하나 이상의 항-MIF 항체, 또는 그의 항원-결합 단편을 단독으로 또는 제약상 허용되는 담체와 함께 투여하는 것을 포함할 수 있다. 제약상 허용되는 담체의 일부 예는 물, 염수, 인산염 완충 염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등, 및 그의 조합물이다. 많은 경우에, 조성물에 등장화제, 예를 들어 당, 다가알콜, 예를 들어 만니톨, 소르비톨, 또는 염화나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 제약상 허용되는 물질의 추가의 예는 습윤제 또는 항체의 저장 수명 또는 효과를 향상시키는 소량의 보조 물질, 예를 들어 습윤제 또는 유화제, 보존제 또는 버퍼이다.
본 발명의 항-MIF 항체 및 이를 포함하는 제약 조성물은 하나 이상의 다른 치료제, 진단제 또는 예방제와 조합 투여될 수 있다. 추가의 치료제는 치료할 질병에 따라 다른 항-신생물제, 항-종양제, 항-혈관신생제, 화학치료제 또는 스테로이드를 포함한다.
본 발명의 제약 조성물은 다양한 형태, 예를 들어, 액체, 반고체 및 고체 투여형, 예를 들어 액체 용액 (예를 들어, 주사가능한 용액 및 주입가능한 용액), 분산액 또는 현탁액, 정제, 알약, 분말, 리포좀 및 좌제로 존재할 수 있다. 바람직한 형태는 의도되는 투여 방식 및 치료 용도에 따라 결정된다. 전형적인 바람직한 조성물은 주사가능한 또는 주입가능한 용액의 형태, 예를 들어 인간의 수동 면역화를 위해 사용되는 것과 유사한 조성물이다. 바람직한 투여 방식은 비경구 (예를 들어, 정맥내, 피하, 복강내, 근육내) 투여이다. 바람직한 실시태양에서, 항체는 정맥내 주입 또는 주사에 의해 투여된다. 다른 바람직한 실시태양에서, 항체는 근육내 또는 피하 주사에 의해 투여된다. 당업자에게 이해되는 바와 같이, 투여 경로 및/또는 방식은 목적하는 결과에 따라 상이할 것이다.
항-MIF 항체는 1회 투여될 수 있지만, 보다 바람직하게는 다수 회 투여된다. 예를 들어, 항체는 매일 3회 내지 6개월 또는 그 이상의 개월마다 1회 투여될 수 있다. 투여는 매일 3회, 매일 2회, 매일 1회, 2일마다 1회, 3일마다 1회, 매주 1회, 2주마다 1회, 매달 1회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회 및 6개월마다 1회와 같은 계획으로 투여될 수 있다.
본 발명은 또한 면역학적 질병, 예를 들어 염증성 질병 및 과다증식성 질환의 치료용 의약의 제조에서 항-MIF 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 용도를 포함한다.
본 발명은 추가로 면역학적 질병, 예를 들어 염증성 질병 및 과다증식성 질환의 치료에 사용하기 위한 항-MIF 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함한다.
본 발명은 또한 진단 방법에서 사용하기 위한 항-MIF 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함한다. 한 실시태양에서, 항-MIF 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 생물학적 샘플 내에서 인간 MIF를 검출하기 위해 사용될 수 있다. 또한, 항-MIF 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 조직 또는 조직으로부터 유래된 세포에서 세포 표면 MIF의 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시태양에서, 조직은 이환된 조직이다. 이어서, 조직을 예를 들어, 총 MIF 수준, MIF의 세포 표면 수준, 또는 MIF의 국재화를 결정하기 위해 면역분석에서 사용할 수 있다.
본 발명은 추가로 본 발명의 항-MIF 항체 또는 항원-결합 부분 또는 상기 항체 또는 부분을 포함하는 제약 조성물을 포함하는 키트에 관한 것이다. 키트는 항체 또는 제약 조성물에 추가로, 진단제 또는 치료제를 포함할 수 있다. 키트는 또한 진단 또는 치료 방법에 대한 사용 지시서를 포함할 수 있다.
본 발명은 추가로
a) 활성 MIF에 결합하고 비-활성 MIF에는 결합하지 않는 항체를 선택하고,
b) 상기 항체를 시험관내 분석, 예를 들어 글루코코르티코이드 오버라이딩 (GCO) 분석, 또는 세포 증식 분석에서 시험하고,
c) GCO 및/또는 세포 증식을 억제하는 항체를 선택하는 단계
를 수행함으로써, 인간 MIF의 생물학적 기능을 억제하고 동물 모델에서 유익한 효과를 유도할 수 있는 항-MIF 항체를 확인하는 방법에 관한 것이다.
결과는 활성 MIF에만 결합하고 비-활성 MIF에는 결합하지 않으며 GCO 및/또는 세포 증식을 추가로 억제하는 항-MIF 항체가 동물 모델에서 유익한 효과를 유도함을 보여주었다 (예를 들어, 실시예 6).
본 발명은 다음 실시예에 의해 추가로 예시되지만, 그 실시예로 제한되지 않는다.
실험 부분
실시예 1: 항체 선택
인간 항-MIF 항체 단편을 생성하기 위해 파지 디스플레이 기술을 사용한다. 파지 디스플레이 라이브러리로부터 출발하여 상이한 스크리닝 작업 (campaign)을 수행하였고, 이들 중 3개는 전장 MIF를 사용하여 실시하고 (인간 MIF 코팅 / 용액 중의 인간 MIF / 인간 - 쥐 MIF 교대), 다른 것은 전장 MIF와 교대로 6개의 MIF 유래 펩티드를 사용하여 수행하였다. 이들 6개의 펩티드는 약 15개의 아미노산의 스트레치가 중복되는 약 30개 아미노산의 6개의 펩티드로 MIF 단백질을 분할함으로써 설계된다. 수 회의 선택 라운드 후에, 특유한 바인더 (binder)가 확인되고, 모든 특유한 바인더는 인간 IgG4 항체로서 발현되고 정제된다. 이들 항체를 MIF의 시험관내 억제를 입증하기 위해 몇몇 분석에서 시험한다. MIF 단백질 내의 결합 구역을 결정하기 위해 에피토프 매핑을 수행한다. 193개의 항체를 시험하고, MIF를 억제하는 그들의 시험관내 활성에 따라 분류한다. 시험관내 분석을 아래에 설명한다. 3개의 쥐 항-MIF 항체를 대조군으로서 사용한다 (III.D.9, XIV.14.3 및 XIV.15.5).
실시예 2: MIF의 글루코코르티코이드 오버라이딩 (GCO) 활성의 억제.
본 방법은 내인성 MIF, 즉 사용되는 세포주에 의해 생산되는 MIF의 억제를 기초로 한다. 이 방법은 항체 스크리닝 및 용량 반응 곡선의 결정에 적용된다.
항체 스크리닝을 위한 GCO -분석:
THP1 현탁 배양액을 원심분리하고, 세포를 신선한 전체 배지 내에 106 세포/ml의 세포 밀도로 재현탁시킨다. 상기 배양액을 96-웰 마이크로플레이트의 웰 (90 ㎕/웰)에 옮기고, 항-MIF 항체를 75 ㎍/ml의 최종 농도로 첨가한다. 각각의 항체를 삼중으로 시험한다. 37℃에서 o/n 인큐베이션한 후에, 덱사메타손을 첨가하여 농도를 2 nM로 만들고, 37℃에서 1시간 인큐베이션한 후에 LPS를 첨가한다 (3 ng/ml 최종 농도). 37℃에서 추가로 6시간 인큐베이션한 후에, 상등액을 수거하고, IL-6 농도를 ELISA (시토세트 (Cytoset) 키트, 상업적으로 이용가능함)로 결정하였다. 삼중실험의 결과를 평균하고, IL-6 분비 비율을 대조 항체에 비해 결정한다. 75% 미만의 IL-6 분비를 일으키는 항체를 양성으로서 평가한다.
IC50 값의 결정을 위한 분석
실험 절차는 스크리닝 분석에 대해 설명된 바와 같이 수행하되, 증가량의 항체를 사용하였다 (일반적으로 1 - 125 nM). 생성되는 용량 반응 곡선은 음성 대조 항체에 비해 억제 %로서 표현된다. 상기 곡선은 항체의 최대 억제 효과 (%Inh max) 및 최대 억제 효과의 50%를 보이는 항체 농도 (IC50)의 계산을 위해 사용된다.
결과를 도 8, 컬럼 3 (IC50) 및 컬럼 4 (최대 억제)에 요약한다. 비교를 위해, 쥐 항체 XIV.14.3은 단지 GCO의 36% 억제만을 보인다 (데이타 미제시).
실시예 3: 세포 증식의 억제
혈청은 휴지 NIH/3T3에서 MIF의 분비를 자극하고, MIF는 이어서 세포 증식을 자극한다. 따라서, 상기 내인성 MIF를 억제하는 항체는 휴지 NIH/3T3 세포의 증식을 감소시킨다. 증식의 감소는 3H-티미딘의 포함에 의해 결정한다.
웰당 1000 NIH/3T3 세포를 96 웰 플레이트에서 주말에 걸쳐 37℃에서 10% 혈청을 함유하는 배지 내에서 인큐베이팅한다. 이어서, 세포를 0.5% 혈청을 함유하는 배지 내에서 37℃에서 철야 인큐베이팅함으로써 굶겼다. 0.5% 배지를 제거하고, 10% 혈청, 75 ㎍/ml 항체 및 5μCi/ml의 3H-티미딘을 함유하는 신선한 배지로 교체한다. 37℃에서 CO2 인큐베이터 (incubator) 내에서 16시간 인큐베이션한 후, 세포를 웰당 150 ㎕의 냉 PBS로 2회 세척한다. 멀티-채널 피펫을 사용하여, 웰당 150 ㎕의 5% (w/v) TCA 용액을 첨가하고, 30분 동안 4℃에서 인큐베이팅한다. 플레이트를 150 ㎕ PBS로 세척한다. 웰당 75 ㎕의 0.5M NaOH 용액 (0.5% SDS 함유)을 첨가하고, 혼합하고, 실온에서 저장한다. 샘플을 5 ml의 Ultima Gold (패카드 (Packard)) 및 75 ㎕ 샘플 용액을 혼합함으로써 β-계수기 (counter)에서 측정한다. 각각의 측정은 삼중으로 수행하고, 값을 t-검정에 의해 대조 항체의 값과 비교한다. 증식을 유의하게 감소시키는 항체 (P<0.05)를 양성으로서 평가한다. 결과를 도 8, 컬럼 5에 요약한다.
실시예 4: 결합 연구: 항-MIF 항체의 에피토프 결정
각각의 펩티드를 커플링 버퍼 내에 희석시켜 일반적으로 5 ㎍/ml의 펩티드 농도로 제공하고, 마이크로플레이트 (NUNC Immobilizer™ Amino Plate F96 Clear)에 첨가하고, 4℃에서 철야 인큐베이팅한다 (100 ㎕/웰). 대조군으로서, 재조합 전장 MIF 및 PBS를 사용한다. 플레이트를 200 ㎕ PBST로 3회 세척하고, 항체 (PBS 중 4 ㎍/ml)를 첨가하고 (100 ㎕/웰), 부드럽게 진탕하면서 2시간 동안 실온에서 인큐베이팅한다. 플레이트를 200 ㎕ PBST로 3회 세척하고, 검출 항체 (예를 들어, Fc 특이적 항-인간 IgG/HRP 표지됨, 시그마 (Sigma))를 첨가한다 (100 ㎕/웰). 부드럽게 진탕하면서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한 후, 플레이트를 200 ㎕ PBST로 3회 세척한다. 각각의 웰을 100 ㎕ TMB 용액 (T-0440, 시그마)과 함께 30분 동안 암소에서 인큐베이팅한다. 웰당 100 ㎕의 1.8 M H2SO4-용액을 첨가함으로써 염색 반응을 중지시킨다. 샘플을 450 nm에서 측정한다.
실시예 5: 인간 항-MIF 항체와 쥐 항-MIF 항체 III.D.9의 경쟁
항체 Bax94를 마우스 항MIF 항체 III.D.9와 경쟁을 위해 사용한다. 96 웰 플레이트 (NUNC Maxisorp)를 재조합 인간 MIF로 코팅한다. 쥐 항-MIF 항체 II.D.9 및 인간 항-MIF 항체를 TBST/2% BSA 내에 희석하고 혼합한 한편, III.D9의 최종 농도는 2 ㎍/ml에서 유지하고, 인간 항-MIF 항체의 농도는 0 ㎍/ml에서 일반적으로 32 ㎍/ml로 증가시킨다. 마이크로플레이트의 세척 후에, 항체를 적용하고, 실온에서 일반적으로 2시간 동안 인큐베이팅한다. 세척한 후에, 플레이트를 항마우스 IgG (Fc spec.) 퍼옥시다제 컨쥬게이트와 함께 인큐베이팅하고, 1시간 동안 실온에서 인큐베이팅한다. 세척 후에, 플레이트를 TMB-용액과 함께 인큐베이팅하고, H2SO4-용액을 첨가함으로써 염색 반응을 중지시킨다. 생성되는 경쟁 곡선의 피팅 (fitting)은 III.D.9 결합의 최대 억제의 계산을 가능하게 한다. 결과를 도 8, 컬럼 6에 요약한다.
실시예 6: 살아있는 이. 콜라이 복막염 동물 모델에서 항-MIF 항체의 증가된 생존.
실험은 문헌 [Calandra et al., Nature Immunology, 2000]에 따라, 15% 뮤신 및 4% 헤모글로빈 중 6000 CFU의 이. 콜라이 0111:B4 현탁액을 복강내 주사한 암컷 NMRI 마우스 (25-30 g, 6-10주령)를 사용하여 수행한다. 영양 아가 플레이트 배양으로부터 2 또는 3개의 콜로니 (이. 콜라이 0111:B04)를 10 ml의 TSB 내에 접종하고, 진탕하면서 36℃에서 철야 인큐베이팅한다. 배양액을 생리학적 염수 내에 요구되는 농도(들)로 희석하고 (철야 배양액은 일반적으로 2x109 CFU/ml에 도달함), 뮤신 및 헤모글로빈과 혼합하였다 (1 부피의 희석된 접종물, 2 부피의 15% 뮤신, 2 부피의 4% 헤모글로빈). 접종물로서, 혼합물은 침강하는 경향이 있으므로, 이를 주사 사이에 혼합한다. 주사 혼합물 내의 입자에 의해 바늘이 폐쇄되는 것을 방지하기 위해, 주사를 위해 큰 (예를 들어, 23 게이지) 바늘을 사용한다. 항체 Bax94 (IgG4) 및 이소형 매칭 대조 항체를 세균 시험접종 2시간 전에 복강내 투여한다. 항체 투여량은 일반적으로 800 ㎍/마우스이고, 20마리의 마우스를 각 군에 대해 사용한다. 인간 항-MIF 항체의 IgG1 및 IgG4 이소형에 대해 생존/사멸 시간에 대한 통계적으로 유의한 효과가 보여질 수 있다. 도 6은 항체 Bax94 및 항체 Bax152 (IgG4)에 대해 얻어진 결과를 보여준다. 생존 곡선의 평가를 위해 카플란-마이어 (Kaplan-Meier) 통계학을 이용한다.
실시예 7: 활성 MIF에 대한 결합 특이성
본 발명에서 설명되는 항-MIF 항체는 각각 약한 산화 또는 환원에 의해 생성되는 활성 및 비-활성 MIF를 식별할 수 있다. 이들 이형태체 (conformer)의 식별은 ELISA 또는 표면 플라즈몬 공명에 의해 평가한다.
항체의 차별적인 결합을 평가하기 위한 ELISA:
- 약한 산화에 의한 MIF의 그의 활성 입체형태로의 변환.
재조합 인간 MIF (PBS 중 0.5 mg/ml)를 PBS 중 L-시스틴의 포화 용액 (~ 0.4-0.5 mM L-시스틴) 3배 과량 (부피)과 함께 37℃에서 3h 동안 인큐베이팅한다. 이어서, MIF를 분자량 컷오프가 7 kDa인 Slide-A-Lyzer® 투석 카세트 (피어스 (Pierce))에서 PBS에 대해 2회 투석한다.
- MIF의 그의 비-활성 입체형태로의 전환.
MIF를 4℃에서 8-16 mM 디티오트레이톨 (최종 농도)과 함께 철야 인큐베이팅하여 0.5 mg/ml의 농도에서 환원시킨다.
- ELISA 프로토콜.
항-MIF 항체를 96-웰 마이크로플레이트 (NUNC Maxisorp™) 내에 5 ㎍/ml의 농도로 코팅한다 (코팅 버퍼 내에 희석). 플레이트를 TBST (0.1% Tween-20 (v/v)를 함유하는 Tris-완충 염수)로 세척하고 TBST/2% BSA (TBST 및 2% 소 혈청 알부민 (w/v))로 차단한 후, 활성 또는 비-활성 MIF의 연속 희석액을 첨가하고, 실온에서 1-2h 동안 인큐베이팅한다. 결합된 MIF를 폴리클로날 토끼 항-MIF 항체 및 양고추냉이 퍼옥시다제 표지된 염소-항-토끼 항체 (바이오라드 (Biorad))를 사용하여 검출한다. 비특이적 결합을 감소시키기 위해 TBST/2% BSA를 사용하여 MIF, 토끼 항-MIF 항체 및 퍼옥시다제 컨쥬게이트를 희석시킨다. 도 7은 항체 Bax94를 사용하여 얻은 ELISA 결과를 보여준다.
비아코어에 의한 항체의 차별적인 결합의 평가.
항체 Bax94에 대한 활성 및 비-활성 MIF의 결합 운동학을 비아코어 3000 시스템을 사용하는 표면 플라즈몬 공명 분석에 의해 검사한다. 따라서, 10000 반응 단위의 Bax94를 CM5 (=카르복시메틸화 덱스트란) 매트릭스가 있는 센서 칩 (sensor chip) 상에 고정하고, HBS-EP 버퍼 내에 4.8 mM GSH/0.2 mM GSSG (GSSG =산화된 글루타티온) 내지 5 mM GSSG 범위의 환원-촉진 및 산화-촉진 글루타티온 레독스 버퍼 (지이 헬스케어 (GE Healthcare)) 내에서 활성 또는 비-활성 MIF huMIF와 함께 인큐베이팅한다. 대조군으로서, MIF를 고정된 이소형 대조 항체를 함유하는 제2 유동 셀 내에서 결합 분석을 위해 사용한다. 대조 항체 및 항체 Bax94의 결합 반응 단위를 평가로부터 공제하였다.
실시예 8: THP-1 세포의 표면 상에서 활성 MIF의 검출
세포를 항-MIF 항체 Bax94와 함께 인큐베이팅한다. 세포를 빙냉 PBS로 세척하고, 냉 세포 용해 버퍼 (셀 시그날링 테크놀로지 (Cell Signaling Technology)®) 내에 재현탁시킨다. Magnetic Protein G Dynabeads® (인비트로겐 (Invitrogen))를 TBST + 5% 탈지분유 (w/v)로 차단하고, 세척하고, 용해된 세포에 첨가한다. 면역침전을 4℃ 철야 수행한다. 이어서, 비드를 세포 용해 버퍼 및 TBST로 세척하고, SDS PAGE 샘플 버퍼 (환원제 비-함유) 내에서 비등시킨다. 샘플을 웨스턴 블롯 (Western Blot) 분석을 위한 비-환원적 SDS PAGE에 적용한다.
실시예 9: 막 결합된 MIF에 대한 항-MIF 항체의 결합
THP-1 세포를 빙냉 PBS로 세척하고, 200 ㎍/ml 마우스 IgG를 보충한 냉 세포 염색 버퍼 (바이오레전드 (Biolegend)) 내에 재현탁시킨다. FITC- 또는 TRITC-표지된 항-MIF 항체를 일반적으로 200-500 nM의 최종 농도로 첨가하고, 4℃에서 인큐베이션을 수행한다. 이어서, 세포를 빙냉 세포 염색 버퍼로 세척하고, Via-Probe™ 세포 생육성 용액 (비디 바이오사이언시스 (BD Biosciences))을 보충한 세포 염색 버퍼 내에 재현탁시킨다. 세포를 FACS Canto™ II 유동 세포측정 시스템 (비디 바이오사이언시스)으로 측정하고, 생활가능 세포 집단의 중앙 FITC-/TRITC-쉬프트 (shift)를 염료-표지된 이소형 대조 항체와 비교한다.
실시예 10: 비아코어에 의한 항-MIF 항체의 Fab 단편의 친화도 결정
일반적으로, 40RU 단위의 인간 재조합 MIF를 CM5 (=카르복시메틸화 덱스트란) 매트릭스 (비아코어)가 있는 센서 칩 상에 고정시킨다. Fab 단편을 HBS-EP 내에 희석된 일반적으로 6-100 nM의 농도 범위에서 주사한다. 각각의 사이클 후에, 칩을 50 mM NaOH + 1 M NaCl로 재생시킨다. 친화도는 1:1 랑뮈어 (Langmuir) 모델에 따라 계산한다. 결과를 도 8, 컬럼 7에 요약한다.
실시예 11: 반월형 사구체신장염 동물 모델에서 항-MIF 항체의 유익한 효과
항-MIF 항체를 문헌 [Frederick W.K. Tam et. al., Nephrol Dial Transplant, 1999, 1658-1666]에 기재된 반월형 사구체신장염의 래트 모델에서 시험한다. 항-래트 사구체 기저막 혈청의 단일 정맥내 주사에 의해 수컷 위스타르 쿄토 (Wistar Kyoto) 래트에서 신독성 신장염을 유도한다. 실험의 예방 상황에서, 항-MIF 항체 및 이소형 매칭 대조 항체를 사용한 처리를 신장염 유도 시간 (제0일)에 항체의 복강내 주사에 의해 시작한다. 처리는 일반적으로 2일마다 반복하고, 조직학적 분석을 위해 제7일에 동물을 선택한다. 소변을 실험 전에 (기준선) 및 실험의 종료 전에 (제7일) 수집한다. 치료 상황에서, 항MIF 항체를 사용한 처리는 질병 유도 4일 후에 시작하고, 2일마다 반복한다. 래트를 일반적으로 제8일에 선택한다. 소변을 실험 전에 (기준선), 처리 개시 전에 (제4일), 및 동물 선택 전에 (제8일) 수집한다. 항체 투여량은 일반적으로 주사당 1 - 20 mg/kg이고, 6 내지 8마리의 래트를 각 군에 사용한다. 질병 심도는 단백뇨, 사구체 내로 대식세포 침윤 및 조직학적 손상 (반월 형성)을 측정함으로써 결정한다. 예방 실험에서, 7일 동안 항-MIF 항체 Bax69 (용량당 10 mg/kg)를 사용한 처리는 대조 항체 처리 동물에 비해 단백뇨를 47% 감소시킨다. 확립된 질병의 치료 (치료 실험)는 대조 항체 처리 동물에 비해 단백뇨의 용량 의존 감소를 16% (용량당 10 mg/kg Bax69) 및 34% (용량당 20 mg/kg Bax69) 일으킨다.
실시예 12: 궤양성 대장염 동물 모델에서 항-MIF 항체의 유익한 효과 (Rag -/- 마우스에서 나이브 (naive) T 세포의 인입 전달 (adoptive transfer))
C57BL/6 마우스를 희생시키고, CD45RBhi 세포 (나이브 T 세포)를 비장 세포 집단의 FACS 분류에 의해 단리한다. CD45RBhi 세포 (5x105)를 Rag-/- C57BL/6 마우스 (7-9주령)에 i.p. 주사하였고, 상기 마우스는 약 2주 후에 궤양성 대장염이 발병한다 (de Jong et al., Nature immunology., 2001, 1061-1066). 항-MIF 항체 및 이소형 대조 항체를 매주 2회 복강내 주사한다 (1 mg/마우스/용량). 예방 상황에서, 처리는 T-세포의 주사 시간에 시작한다. 치료 상황에서, 처리는 질병 유도 4주 후에 시작한다. 마우스를 체중 및 질병 발생에 대해 매주 모니터링한다. 일반적으로, Rag-/- C57BL/6 수여자 내로 CD4CD45RBhi 세포를 전달한 8주 후에, 질병 활성 지수 (DAI)를 계산하고, 조직학 지수 (HI) 스코어를 위해 결장 절편을 수집한다. 질병 활성 지수 (DAI) 및 조직학 지수 (HI)는 동물 모델의 종결시에 결정한다 (DAI는 4개 파라미터에 기초한다: 구부림 (hunching) 및 쇠약 (wasting) (스코어 0 또는 1), 결장 비후 (0-3) 및 대변 굳기 (0-3)). 치료 실험에서, 항-MIF 항체 Bax69 및 BaxA10을 확립된 질병의 치료를 위해 사용하였고, 평균 DAI는 이소형 대조군 처리 마우스에 비해 약 60% (Bax69) 및 약 40% (BaxA1O) 유의하게 감소된다. 또한, 평균 HI 스코어는 Bax69를 사용한 처리 후에 약 33% 감소된다.
실시예 13: 궤양성 대장염에 대한 동물 모델 (효능성 항-CD40 모델)에서 항-MIF 항체의 유익한 효과
상기 모델은 Rag1-/- 마우스에서 IBD와 유사한 장 병리학을 유도하는 효능성 항-CD40 항체에 의한 대식세포 및 수지상 세포의 활성화에 기초한다.
연령/성별 매칭된 Rag1-/- 마우스 (4-5주)를 잭슨 래보래토리스 (Jackson Laboratories)로부터 구입하여, 실험 전에 2주 동안 동물 시설에 유지시켰다. 효능제-CD40 모노클로날 항체 (FGK45, IgG2a) 또는 이소형 대조 래트 IgG2a를 PBS 내에 1 mg/ml로 용해시킨다. 5개의 군 (각 군당 10마리의 마우스)에 200 ㎍의 효능제 항-CD40 모노클로날 항체를 i.p 주사하고, 그 중 4개의 군을 제0일 및 제1일에 항-MIF 항체로 처리한다 (2x1 mg/마우스). 제6군 (10마리 마우스)에는 이소형 대조군 (래트 IgG2a, 건강한 대조군)만을 주사한다. 마우스를 다음 7일 동안 계량한다. 제7일에, 질병 활성 지수 (DAI)를 계산하고, 조직학 지수 (HI) 스코어를 위해 결장 절편을 수집하였다. DAI 스코어는 구부림 (0-1); 쇠약 (0-1), 대변 굳기 (0-3) 및 결장 비후 (0-3)에 기초하였다. 조직학 스코어는 두께 (0-3), 음와 (crypt) 연장, 염증 (0-3) 및 농양 (0-1)에 기초하였다. 항-MIF 항체 Bax94, BaxA10 및 Bax69를 사용한 처리는 이소형 대조군 처리 마우스에 비해 DAI 스코어를 유의하게 감소시킨다 (BaxA10: ~48% 감소; Bax94 ~62% 감소; Bax69 ~73% 감소). 또한, 평균 HI 스코어도 역시 이들 항체에 의해 감소된다.
실시예 14: 항MIF 항체에 의한 Mf1 누드 마우스에서 종양 성장의 억제
인간 전립선 선암종 세포 (PC-3)를 지수적으로 성장하는 배양액으로부터 수거하고, 성장 인자-결핍된 마트리겔과 혼합하였다. 0.25 ml 마트리겔 내의 2x106 세포를 Mf1 누드 마우스의 우측 옆구리 내로 피하 접종한다. 항-MIF 항체 Bax94 및 이소형 대조군 C3을 사용한 처리를 접종 (0.6 mg 항체/마우스/일) 1일 후에 시작하고, 2일마다 반복한다. 종양 크기의 측정은 일반적으로 세포 주사 2주 후에 시작하고, 2일마다 이루어진다. 부피는 식 V=0.5xaxb2 (여기서 "a"는 최장 직경이고, "b"는 최단 직경임)을 이용하여 계산한다. Bax94로 처리한 마우스의 종양 성장은 유의하게 감소되고, 종양 유도 28일 후에 분석된 종양의 평균 부피는 Bax94 처리군에 비해 이소형 대조군 처리군에서 4.3배 더 높다.
실험의 치료 상황에서, 항체 처리는 종양 이식 1주 후에 시작하였다. 용량당 50 mg/kg의 이소형 대조 항체 C3 및 항-MIF 항체 Bax69를 2일마다 복강내 주사한다. 처리 22일 후에, 종양 부피의 중앙값은 Bax69 처리군에 비해 C3 처리군에서 2.7배 더 높은 것으로 결정되었다.
실시예 15: 항-MIF 항체의 세포자멸-촉진 효과
항-MIF 항체 Bax94의 세포자멸-촉진 효과는 인간 전립선암 세포주 PC-3을 사용한 세포 기반 카스파제-3 분석으로 보여진다. PC-3 세포를 10% FCS의 존재 하에 10 cm 배양 접시 상에 접종한다 (~106 세포/접시). 100 nM 항체 Bax94 또는 100 nM 대조 항체 C3을 함유하는 신선한 배지를 24h 후에 첨가한다. 48h의 추가 인큐베이션 기간 후에, 세포성 용해물을 제조하고, 형광 표지된 카스파제 기질을 첨가함으로써 카스파제-3 활성을 측정한다 (도 9).
실시예 16: 종양 세포 침윤의 억제
항MIF 항체 Bax94 및 Bax69를 인간 전립선암 세포주 PC-3을 사용한 Transwell™ 침윤 분석으로 시험한다.
웰당 5x104개의 PC-3 세포를, 폴리카르보네이트 막의 저변부를 폴리D-라이신으로, Transwell™ 삽입체 표면을 성장-인자 결핍된 마트리겔로 코팅한 24 웰-Transwell™ 접시 (8 ㎛ 공극 크기) 내에 접종한다. 세포를 4h 동안 10% FCS의 존재 하에 부착시킨다. 그 후에, 배지를 무혈청 배지로 교체하고, 세포를 철야 (즉, 16h 동안) 굶겼다. 후속적으로, 화합물 (10 nM MIF, 500 nM 항체)을 하부 챔버에 첨가한다. 세포를 다공성 막을 통해 24h 동안 이동시킨다. 상기 인큐베이션 기간 후에, 막의 하부면의 부착된 이동된 세포를 Giemsa 용액으로 염색한다. 막의 하부면에 부착한 세포의 수를 독립 시야 내에서 400배 배율에서 계수한다 (도 10).
SEQUENCE LISTING <110> Kerschbaumer, Randolf Scheiflinger, Friedrich Rieger, Manfred Thiele, Michael Mudde, Geert C. Muellberg, Juergen Hoet, Rene <120> Anti MIF Antibodies <130> 20695C-015320US <140> US Not yet assigned <141> Not yet assigned <150> US 61/018,988 <151> 2008-01-04 <150> US 61/094,685 <151> 2008-09-05 <160> 24 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> anti macrophage migration inhibitory factor (MIF) monoclonal antibody Bax8 light chain variable region (V-L) <400> 1 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 2 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> anti 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300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 15 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> anti macrophage migration inhibitory factor (MIF) monoclonal antibody Bax74 light chain variable region (V-L) <400> 15 gacatccaga tgacccagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gggtgttagc agcagctcct tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtacatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgc gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactgcag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta ggtcactcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 16 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> anti macrophage migration inhibitory factor (MIF) monoclonal antibody Bax94 light chain variable region (V-L) <400> 16 gacatccaga tgacccagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gggtgttagc agcagctcct tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtacatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgc gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactgcag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta ggtcactcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 17 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> anti macrophage migration inhibitory factor (MIF) monoclonal antibody Bax152 light chain variable region (V-L) <400> 17 gacatccaga tgacccagtc tccagtcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcttgca gggccagtca gagtgttcgg agtagttact tagcctggta ccagcagaaa 120 cccggccaga ctcccaggct cctcatctat ggtgcctcca acagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtcta ttactgtcag cagtatggta actcactcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 18 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> anti macrophage migration inhibitory factor (MIF) monoclonal antibody BaxA10 light chain variable region (V-L) <400> 18 gacatccaga tgacccagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gggtgttagc agcagctcct tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtacatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgc gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactgcag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta ggtcactcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 19 <211> 378 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> anti macrophage migration inhibitory factor (MIF) monoclonal antibody Bax8 heavy chain variable region (V-H) <400> 19 gaagttcaat tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt 60 tcttgcgctg cttccggatt cactttctct atttacacta tggattgggt tcgccaagct 120 cctggtaaag gtttggagtg ggtttcttat atctctcctt ctggtggcaa tacttcttat 180 gctgactccg ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactctctac 240 ttgcagatga acagcttaag ggctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagtagacaa 300 tacgtattac gatattttga ctggtcggca gatgcttttg atatctgggg ccaagggaca 360 atggtcaccg tctcaagc 378 <210> 20 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> anti macrophage migration inhibitory factor (MIF) monoclonal antibody Bax69 heavy chain variable region (V-H) <400> 20 gaagttcaat tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt 60 tcttgcgctg cttccggatt cactttctct atttactcta tgaattgggt tcgccaagct 120 cctggtaaag gtttggagtg ggtttcttct atcggttctt ctggtggcac tacttattat 180 gctgactccg ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactctctac 240 ttgcagatga acagcttaag ggctgaggac acggccgtgt attactgtgc gggctcacag 300 tggctgtacg gtatggacgt ctggggccaa gggaccacgg tcaccgtctc aagc 354 <210> 21 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> anti macrophage migration inhibitory factor (MIF) monoclonal antibody Bax74 heavy chain variable region (V-H) <400> 21 gaagttcaat tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt 60 tcttgcgctg cttccggatt cactttctct aagtactata tgatttgggt tcgccaagct 120 cctggtaaag gtttggagtg ggtttcttgg atcggtcctt ctggtggctt tactttttat 180 gctgactccg ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactctctac 240 ttgcagatga acagcttaag ggctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagggacg 300 cccgactacg gtggtaactc ccttgaccac tggggccagg gcaccctggt caccgtctca 360 agc 363 <210> 22 <211> 381 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> anti macrophage migration inhibitory factor (MIF) monoclonal antibody Bax94 heavy chain variable region (V-H) <400> 22 gaagttcaat tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt 60 tcttgcgctg cttccggatt cactttctct atttacgcta tggattgggt tcgccaagct 120 cctggtaaag gtttggagtg ggtttctggt atcgttcctt ctggtggctt tactaagtat 180 gctgactccg ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactctctac 240 ttgcagatga acagcttaag ggctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagtgaac 300 gttatagcag tggctggtac tggatactac tactacggta tggacgtctg gggccaaggg 360 accacggtca ccgtctcaag c 381 <210> 23 <211> 381 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> anti macrophage migration inhibitory factor (MIF) monoclonal antibody Bax152 heavy chain variable region (V-H) <400> 23 gaagttcaat tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt 60 tcttgcgctg cttccggatt cactttctct atttacgcta tggattgggt tcgccaagct 120 cctggtaaag gtttggagtg ggtttctggt atcgttcctt ctggtggctt tactaagtat 180 gctgactccg ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactctctac 240 ttgcagatga acagcttaag ggctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagtgaac 300 gttatagcag tggctggtac tggatactac tactacggta tggacgtctg gggccaaggg 360 accacggtca ccgtctcaag c 381 <210> 24 <211> 381 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> anti macrophage migration inhibitory factor (MIF) monoclonal antibody BaxA10 heavy chain variable region (V-H) <400> 24 gaagttcaat tgttagagtc tggtggcggt cttgttcagc ctggtggttc tttacgtctt 60 tcttgcgctg cttccggatt cactttctct tggtacgcta tggattgggt tcgccaagct 120 cctggtaaag gtttggagtg ggtttctggt atctatcctt ctggtggccg tactaagtat 180 gctgactccg ttaaaggtcg cttcactatc tctagagaca actctaagaa tactctctac 240 ttgcagatga acagcttaag ggctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagtgaac 300 gttatagcag tggctggtac tggatactac tactacggta tggacgtctg gggccaaggg 360 accacggtca ccgtctcaag c 381

Claims (22)

  1. MIF의 C-말단 또는 중심 구역에 특이적으로 결합하고 인간 MIF의 생물학적 기능을 억제하는 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 부분.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 항원-결합 부분이 a) 글루코코르티코이드 오버라이딩 (overriding) (GCO) 활성을 억제하고, b) 암 세포 또는 섬유아세포의 증식을 억제하고, c) 활성 MIF에 결합하고, d) 비-활성 MIF에 결합하지 않고, e) 마우스 항-MIF 항체 III.D.9와 경쟁하는 특성 중의 적어도 하나의 특성을 갖는 것인 모노클로날 항체 또는 항원-결합 부분.
  3. 제1항 또는 2항에 있어서, 상기 항체 또는 항원-결합 부분이 인간 MIF에 500 nM 미만의 KD로 결합하는 것인 모노클로날 항체 또는 항원-결합 부분.
  4. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 상기 항원-결합 부분이 활성 MIF에 결합하는 것인 모노클로날 항체 또는 항원-결합 부분.
  5. 제1항 내지 4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 항체 Bax8, 항체 Bax69, 항체 Bax74, 항체 Bax94, 항체 Bax152 및 항체 BaxA10으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 모노클로날 항체 또는 항원-결합 부분.
  6. 제5항에 있어서, 상기 항체가 IgG4 하위 포맷 항체인 모노클로날 항체 또는 항원-결합 부분.
  7. 제6항에 있어서, 상기 IgG4 하위 포맷이 단일 돌연변이를 갖고, 이에 의해 IgG4의 Fc 구역 내의 CPSC 하위 서열이 CPPC가 되는 것인 모노클로날 항체 또는 항원-결합 부분.
  8. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 항원-결합 부분이
    a) 항체 Bax8, 항체 Bax69, 항체 Bax74, 항체 Bax94, 항체 Bax152 및 항체 BaxA10으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 항체의 중쇄로부터 독립적으로 선택되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3,
    b) 항체 Bax8, 항체 Bax69, 항체 Bax74, 항체 Bax94, 항체 Bax152 및 항체 BaxA10으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 항체의 경쇄로부터 독립적으로 선택되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3
    을 포함하는 것인 모노클로날 항체 또는 항원-결합 부분.
  9. 제1항에 있어서, 항체가
    c) 항체 Bax8, 항체 Bax69, 항체 Bax74, 항체 Bax94, 항체 Bax152 및 항체 BaxA10의 중쇄 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열;
    d) 항체 Bax8, 항체 Bax69, 항체 Bax74, 항체 Bax94, 항체 Bax152 및 항체 BaxA10의 경쇄 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열
    을 포함하는 것인 모노클로날 항체 또는 항원-결합 부분.
  10. 제1항 내지 9항 중 어느 한 항에 있어서, 염증성 질병 또는 과다증식성 질환인 면역학적 질병의 치료에 사용하기 위한 모노클로날 항체 또는 항원-결합 부분.
  11. 제10항에 있어서, 상기 염증성 질병이 혈관염, 관절염, 패혈증, 패혈성 쇼크, 내독소 쇼크, 독성 쇼크 증후군, 후천성 호흡 곤란 증후군, 사구체신장염, 염증성 장 질병, 크론병, 궤양성 대장염, 복막염, 신장염 및 건선으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 모노클로날 항체 또는 항원-결합 부분.
  12. 제1항 내지 9항 중 어느 한 항에 따른 모노클로날 항체 또는 항원-결합 부분 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
  13. 제12항에 있어서, 모노클로날 항체가 항체 Bax8, 항체 Bax69, 항체 Bax74, 항체 Bax94, 항체 Bax152 및 항체 BaxA10으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 항체인 제약 조성물.
  14. 치료를 필요로 하는 대상에게 치료 유효량의 제1항 내지 9항 중 어느 한 항에 따른 모노클로날 항체 또는 항원-결합 부분 또는 제12항 또는 13항에 따른 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 항체 또는 상기 항원 결합 부분이 인간 MIF의 생물학적 기능을 추가로 억제하는 것인, 인간을 포함하는 대상에서 염증성 질병 또는 과다증식성 질환으로부터 선택되는 면역학적 질병의 치료 방법.
  15. 제14항에 있어서, 상기 염증성 질병이 혈관염, 관절염, 패혈증, 패혈성 쇼크, 내독소 쇼크, 독성 쇼크 증후군, 후천성 호흡 곤란 증후군, 사구체신장염, 염증성 장 질병, 크론병, 궤양성 대장염, 복막염, 신장염 및 건선으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 것인 방법.
  16. 제1항 내지 9항 중 어느 한 항에 따른 모노클로날 항체 또는 항원-결합 부분을 생산하는 단리된 세포주.
  17. 제1항 내지 9항 중 어느 한 항에 따른 모노클로날 항체 또는 항원-결합 부분의 중쇄, 또는 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 핵산 분자.
  18. 제17항에 따른 핵산 분자를 포함하고, 상기 핵산 분자에 작동가능하게 연결된 발현 제어 서열을 임의로 포함하는 벡터.
  19. 제18항에 따른 벡터 또는 제17항에 따른 핵산 분자를 포함하는 숙주세포.
  20. 제19항에 있어서, 제1항 내지 9항 중 어느 한 항에 따른 모노클로날 항체 또는 항원-결합 부분의 중쇄를 코딩하는 핵산 분자 및 경쇄를 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 숙주세포.
  21. 제19항에 따른 숙주세포 또는 제16항에 따른 세포주를 적합한 조건 하에 배양하고, 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 회수하는 것을 포함하는, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 부분의 생산 방법.
  22. a) 활성 MIF에 결합하고 비-활성 MIF에는 결합하지 않는 항체를 선택하고,
    b) 상기 항체를 시험관내 분석에서 시험하고,
    c) GCO 및/또는 세포 증식을 억제하는 항체를 선택하는 단계
    를 수행함으로써, 인간 MIF의 생물학적 기능을 억제하고 동물 모델에서 유익한 효과를 유도할 수 있는 항-MIF 항체를 확인하는 방법.
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Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2231707B1 (en) * 2008-01-04 2014-12-24 Baxter International Inc. Anti mif antibodies
US9238689B2 (en) 2011-07-15 2016-01-19 Morpho Sys AG Antibodies that are cross-reactive for macrophage migration inhibitory factor (MIF) and D-dopachrome tautomerase (D-DT)
AU2012320597C1 (en) 2011-10-07 2015-10-15 Baxalta GmbH oxMIF as a diagnostic marker
JP2014530361A (ja) * 2011-10-07 2014-11-17 バクスター・ヘルスケヤー・ソシエテ・アノニムＢａｘｔｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＳＡ Ｃｈｏ−ｍｉｆ遺伝子およびタンパク質の特性評価およびその使用
AU2013202693B2 (en) * 2012-04-16 2015-01-22 Baxalta GmbH Combination Therapy of Anti-MIF Antibodies and Chemotherapeutics
AU2013203957B9 (en) * 2012-04-16 2015-10-15 Baxalta GmbH Combination Therapy of Anti-MIF Antibodies and Glucocorticoids
JP2015523572A (ja) 2012-07-10 2015-08-13 バクスター・ヘルスケヤー・ソシエテ・アノニムＢａｘｔｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＳＡ 抗ｍｉｆ免疫組織化学法
EP2929348B1 (en) * 2012-12-07 2017-05-10 Baxalta GmbH Anti-mif antibody cell migration assay
US10613100B2 (en) * 2014-01-03 2020-04-07 Baxalta Incorporated Anti-MIF immunohistochemistry
WO2016026956A1 (en) 2014-08-22 2016-02-25 Baxalta GmbH Detection of cho-mif contaminations
EP3277718B1 (en) 2015-03-31 2021-03-24 Baxalta GmbH Dosage regimen for anti-mif antibodies
EP3298039A1 (en) 2015-05-18 2018-03-28 Baxalta GmbH Anti-mif antibodies in the treatment of cancers containing mutant tp53 and/or mutant ras
US11098113B2 (en) 2016-09-15 2021-08-24 Vib Vzw Immunoglobulin single variable domains directed against macrophage migration inhibitory factor
CN109868311B (zh) * 2017-12-01 2023-10-20 上海市精神卫生中心 Mif及其预测二代抗精神病药物诱导的代谢不良反应的应用
JP2021526820A (ja) * 2018-06-07 2021-10-11 オンコワン・リサーチ・アンド・ディベロップメント・ゲゼルシャフト・ミト・ベシュレンクテル・ハフツング 癌治療のための抗ｏｘＭＩＦ／抗ＣＤ３抗体
EP3757252B1 (en) 2019-06-28 2022-03-30 Walter Ag A coated cutting tool
CN115943160A (zh) 2019-12-06 2023-04-07 翁科奥内研发有限责任公司 抗oxMIF/抗CD3双特异性抗体构建体
EP4222170B1 (en) 2020-10-02 2024-03-20 OncoOne Research & Development GmbH Improved anti-oxmif antibodies with reduced aggregation potential and reduced hydrophobicity
AU2022218320A1 (en) 2021-02-03 2023-07-27 Oncoone Research & Development Gmbh ANTI-oxMIF RADIOIMMUNOCONJUGATE
WO2023031397A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 Oncoone Research & Development Gmbh IMPROVED Fc SILENCED ANTI-oxMIF ANTIBODIES WITH REDUCED AGGREGATION POTENTIAL AND REDUCED HYDROPHOBICITY
WO2023133361A2 (en) * 2022-01-10 2023-07-13 Phenomic Ai Anti-cthrc1 fusion proteins and methods of using the same
CN114573693A (zh) * 2022-04-25 2022-06-03 中国人民解放军陆军军医大学 一种听觉发育中免疫调节分子mif抗体制备方法
CN115814069B (zh) * 2022-10-31 2023-07-21 四川大学华西医院 Mif基因敲除的肿瘤细胞在制备肿瘤疫苗中的用途

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998017314A1 (en) * 1996-10-24 1998-04-30 The Picower Institute For Medical Research Use of macrophage migration inhibitory factor antagonists for anti-cancer therapy
US6645493B1 (en) * 1993-05-17 2003-11-11 The Picower Institute For Medical Research Composition containing anti-MIF antibody
WO2007134538A1 (fr) * 2006-05-24 2007-11-29 Institute Of Biophysics Chinese Academy Of Sciences Anticorps monoclonal murin contre les facteurs d'inhibition de la migration des macrophages humains et application de celui-ci

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0977799A (ja) * 1995-09-13 1997-03-25 Sapporo Immuno Diagnostic Lab:Kk ヒト−マクロファージ遊走阻止因子（ヒト−ｍｉｆ）に対するモノクローナル抗体および該抗体を産生するハイブリドーマ
DK1156823T3 (da) * 1999-02-12 2009-01-19 Scripps Research Inst Fremgangsmåder til behandling af tumorer og metastaser ved anvendelse af en kombination af anti-angiogene terapier og immunoterapier
US20030235584A1 (en) * 2000-02-28 2003-12-25 Kloetzer William S. Method for preparing anti-MIF antibodies
AR045563A1 (es) * 2003-09-10 2005-11-02 Warner Lambert Co Anticuerpos dirigidos a m-csf
EP2231707B1 (en) * 2008-01-04 2014-12-24 Baxter International Inc. Anti mif antibodies

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6645493B1 (en) * 1993-05-17 2003-11-11 The Picower Institute For Medical Research Composition containing anti-MIF antibody
US20040156848A1 (en) * 1993-05-17 2004-08-12 Bucala Richard J. Therapeutic uses of factors which inhibit or neutralize MIF activity
WO1998017314A1 (en) * 1996-10-24 1998-04-30 The Picower Institute For Medical Research Use of macrophage migration inhibitory factor antagonists for anti-cancer therapy
WO2007134538A1 (fr) * 2006-05-24 2007-11-29 Institute Of Biophysics Chinese Academy Of Sciences Anticorps monoclonal murin contre les facteurs d'inhibition de la migration des macrophages humains et application de celui-ci

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