CN115943160A - 抗oxMIF/抗CD3双特异性抗体构建体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及抗oxMIF/抗CD3抗体，其包括至少一个特异性识别oxMIF的结合位点和一个特异性识别CD3的结合位点，该抗体为其中scFv仅与两条IgG重链中的一条融合的IgG，为其中一个Fab臂被双特异性T细胞接合剂(BiTE)替代的IgG，或为其中两个Fab臂均被具有不同结合特异性的scFv替代的IgG，以及还涉及该抗体在治疗过度增殖性疾病中的用途，具体为在治疗癌症中的用途。

Description

抗oxMIF/抗CD3双特异性抗体构建体
技术领域
本发明涉及抗oxMIF/抗CD3抗体，其包括至少一个特异性识别oxMIF的结合位点和一个特异性识别CD3的结合位点，该抗体为其中scFv仅与两条IgG重链中的一条融合的IgG，为其中一个Fab臂被双特异性T细胞接合剂(BiTE)替代的IgG，或为其中两个Fab臂均被具有不同结合特异性的scFv替代的IgG，以及还涉及该抗体在治疗过度增殖性疾病中的用途，具体为在治疗癌症中的用途。
背景技术
早在1966年细胞因子巨噬细胞移动抑制因子(MIF)就已经有所描述(David,J.R.,1966,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.56,72-77；Bloom B.R.及Bennet,B.,1966,Science153,80-82)。然而，MIF与其他细胞因子和趋化因子明显不同，因为它是组成型表达、储存在细胞质中并存在于健康受试者的循环中。由于这种蛋白质的普遍存在，MIF可被认为是不合适的治疗干预靶点。然而，MIF以两种免疫学上不同的构象亚型出现，称为还原型MIF(redMIF)和氧化型MIF(oxMIF)(Thiele M.et al.，J Immunol 2015；195:2343-2352)。研究发现RedMIF是MIF大量表达的亚型，其可以在任何受试者的细胞质和循环中找到。RedMIF似乎代表了一种潜在的非活性储存形式(Schinagl.A.et al.,Biochemistry.2018Mar 6；57(9):1523-1532)。
相比之下，oxMIF似乎是可在肿瘤组织中检测到的生理相关和疾病相关的亚型，特别是在结直肠癌、胰腺癌、卵巢癌和肺癌患者的肿瘤组织中(Schinagl.A.et al.,Oncotarget.2016 Nov 8；7(45):73486-73496)。
治疗癌症的成功药物靶点(如上述的oxMIF阳性指征)的数量是有限的。例如，300多个潜在的免疫肿瘤靶点已被描述，但许多临床研究集中在抗PD1和抗PDL1抗体上(TangJ.,et al.Ann Oncol.2018Jan 1；29(1):84-91)。因此，科学和医学界热切期待靶向肿瘤特异性抗原的潜在药物，以让预后不良的癌症患者有增多的治疗选择。
OxMIF似乎具有高度的肿瘤特异性，靶向oxMIF的抗体在体外和动物研究中显示出功效(Hussain F.et al.,Mol Cancer Ther.2013Jul；12(7):1223-34；Schinagl.A.etal.,Oncotarget.2016 Nov 8；7(45):73486-73496)。OxMIF特异性抗体在1期临床试验中表现出可接受的安全性、令人满意的组织穿透性和抗肿瘤活性的指征(Mahalingam D.etal.,2015,ASCO Abstract ID2518；Mahalingam D.et al.2020,Br J Clin Pharmacol,86(9),1836-1848)。然而，抗oxMIF抗体的作用方式似乎仅仅基于对oxMIF生物活性的中和。抗体未显示任何旁观者效应，例如补体依赖性细胞毒性(CDC)或抗体依赖性细胞毒性(ADCC)(Hussain F.et al.,Mol Cancer Ther.2013Jul；12(7):1223-34)。
Del Bano J.等对用于癌症免疫治疗的双特异性抗体进行了综述(ANTIBODIES,vol.5,no.1,2015,page 1)。
在WO 2009/086920 A1中描述了抗MIF抗体。
WO 2016/156489 A1涉及了抗MIF抗体的给药方案。
WO 2016/184886 A1描述了在包含突变TP53和突变RAS的肿瘤治疗中的抗MIF抗体。
KERSCHBAUMER R.J.等报告了全人源抗体对巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的中和作用(JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMITRY,vol.287,no.10,2012,pages 7446-7455)。
Douillard P.等公开了对氧化型巨噬细胞移动抑制因子(oxMIF)特异的人源抗体，其在癌症动物模型中与化疗药物的协同作用”(Cancer Research,2014,74(19 Suppl)Abstract 2654)。
Benonisson H.等报道了CD3/TYRP1/gp75和CD3/HIV-1 gp120的双特异性抗体(Molecular Cancer Therapeutics,18(2),2019,312-322)。
2020年5月5日公开的WO2019/234241 A1描述了抗oxMIF/抗CD3的双特异性抗体。
Klein C.等涉及了异二聚体抗体开发中的链结合问题(MABS,4(6),2012,pp.653-663)。
迫切需要解决如何开发具有增强特异性和有效性的免疫细胞介导疗法的问题。具体来说，在肿瘤学中克服治疗性抗体(例如抗oxMIF抗体)局限性的需求尚未得到满足。
发明内容
本发明的目的是提供针对oxMIF和CD3的具有改进生物活性的双特异性抗体形式。
该目的通过所要求保护的主题来实现。
根据本发明，提供了抗oxMIF/抗CD3抗体或其抗原结合片段，其包括至少一个特异性识别oxMIF的结合位点和一个特异性识别CD3的结合位点，该抗体选自由以下组成的组：
-IgG，其中scFv仅与两条重链中的一条融合，
-IgG，其中一个Fab臂被双特异性T细胞接合剂(BiTE)替代，一个Fab臂是IgG Fab臂，其中所述BiTE和IgG Fab臂通过铰链区连接到Fc部分(Fc-portion)；以及
-IgG，其中两个Fab臂被具有不同特异性的scFv替代，
该抗体包括至少一个特异性识别oxMIF的结合位点和一个特异性识别CD3的结合位点。
与结合oxMIF的单一抗体相比，本发明的抗oxMIF/抗CD3抗体具有有利的特性。具体地，本发明抗体的双特异性构成使肿瘤细胞和T细胞接近以使T细胞能够杀死肿瘤细胞，从而该抗体具有显著降低肿瘤和转移负担的潜力。
根据一个具体实施例，与抗oxMIF和抗CD3抗体的组合相比，该抗体诱导T细胞介导细胞毒性的程度更高。这种增加可以通过本领域已知的任何试验来确定，例如但不限于T细胞介导肿瘤细胞裂解试验。抗oxMIF/抗CD3双特异性抗体的T细胞介导细胞毒性也可以通过癌细胞体外试验来确定，癌细胞具体为实体瘤细胞，具体为结肠直肠癌细胞、胰腺癌细胞、卵巢癌细胞以及肺癌细胞。
具体地，本文所述的抗oxMIF/抗CD3抗体具有仅与两条重链中的一条融合的scFv，其提供以下益处：
-由于单个抗CD3结合位点，T细胞活化更加平衡，
-由于两个抗oxMIF结合位点，对靶点的亲和力更高，以及
-由于其Fc部分，使其具有对应于正常IgG的血清半衰期。
具体地，本文所述的抗oxMIF/抗CD3抗体，其中一个Fab臂被双特异性T细胞接合剂(BiTE)替代，一个Fab臂是IgG Fab臂，二者均通过铰链区连接到Fc部分，其提供以下益处：
-由于单个抗CD3结合位点，T细胞活化更加平衡，
-由于两个抗oxMIF结合位点，对靶点的亲和力更高，以及
-与BiTE相比，由于其Fc部分，使其具有对应于正常IgG的血清半衰期。
根据本发明，oxMIF结合位点对氧化型MIF具有特异性，并且不与还原型MIF结合。
根据实施例，本文所述的抗体或其抗原结合片段的结合位点包括至少一个特异性识别oxMIF的结合位点和一个特异性识别CD3的结合位点，该特异性识别oxMIF的位点包括
(a)包括序列SEQ ID NO 1至6的可变CDR，或与SEQ ID NO 1至6具有至少70％序列同一性的可变CDR区，或
(b)包括序列SEQ ID NO 7至12的可变CDR，或与SEQ ID NO 7至12具有至少70％序列同一性的可变CDR，或
(c)包括序列SEQ ID NO 13至18的可变CDR，或与SEQ ID NO 13至18具有至少70％序列同一性的可变CDR，或
(d)包括序列SEQ ID No.19至24的可变CDR，或与SEQ ID No.19至24具有至少70％序列同一性的可变CDR，或
(e)包括序列SEQ ID NO 26、27、21、28、23和24的可变CDR，或与SEQ ID NO 26、27、21、28、23和24具有至少70％序列同一性的可变CDR，或
(f)包括序列SEQ ID NO的19、20、21、138、25和153的可变CDR，或与SEQ ID NO19、20、21、138、25和153具有至少70％序列同一性的可变CDR。
根据具体实施例，该CDR序列包括0、1或2个点突变。
在另一个实施例中，本文所述的抗oxMIF/抗CD3抗体中特异性识别CD3的结合位点包括可变区，该可变区在以下每个CDR序列中包括0、1或2个点突变：
SEQ ID NO 77、78、149、83、84和151，或
SEQ ID NO 77、78、79、80、81和82，或
SEQ ID NO 77、78、79、83、84和85，或
SEQ ID NO 77、154、79、83、84和85，或
SEQ ID NO 86、87、88、89、90和91，或
SEQ ID NO 92、93、94、95、96和97，或
SEQ ID NO 167、168、169、178、179和180，或
SEQ ID NO 170、171、172、181、182和183。
根据具体实施例，本文所述的抗oxMIF/抗CD3抗体在序列SEQ ID NO 7、8、9、10、11、12、167、168、169、178、179和180中包括0或1个点突变。
根据另一个实施例，抗oxMIF/抗CD3抗体包括序列SEQ ID NO 7、8、9、10、11、12、77、78、149、83、84和151。
根据具体实施例，抗oxMIF/抗CD3抗体的IgG部分识别oxMIF，与其中一条重链融合的scFv识别CD3，该抗体还包括肽接头，该肽接头连接抗CD3的轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)链。
根据另一个具体实施例，抗oxMIF/抗CD3抗体的IgG Fab臂识别oxMIF，取代第二Fab臂的双特异性T细胞接合剂(BiTE)识别oxMIF和CD3。所述抗体还包括肽接头，该肽接头连接VL和VH链，即将双特异性T细胞接合剂部分的VL与VH链相互连接。
根据另一个具体实施例，抗oxMIF/抗CD3抗体的Fab臂被scFv替代，一个scFv靶向oxMIF，另一个scFv靶向CD3，所述抗体还包括肽接头，该肽接头连接VL和VH链。
本文进一步提供了本文所述的抗oxMIF/抗CD3抗体，其中特异性识别oxMIF的结合位点包括重链可变区和轻链可变区，该重链可变区与氨基酸序列SEQ ID NO 158具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更优选至少99％的序列同一性，该轻链可变区与氨基酸序列SEQ ID NO 134具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更优选至少99％的序列同一性。
在另一个实施例中，提供了本文所述的抗oxMIF/抗CD3抗体，其中特异性识别CD3的结合位点包括重链可变区和轻链可变区，该重链可变区与氨基酸序列SEQ ID NO 135具有至少80％，优选至少90％，更优选至少95％的序列同一性，该轻链可变区与氨基酸序列SEQ ID NO 136具有至少80％，优选至少90％，更优选至少95％的序列同一性。
根据又一个实施例，本文所述的抗oxMIF/抗CD3抗体包括氨基酸序列SEQ ID NO159、137、140、160、161、162、163、194、195、196或197，或与氨基酸序列SEQ ID NO 159、137、140、160、161、162、163、194、195、196或197中的任一个具有至少85％、90％，具体至少95％、具体至少99％序列同一性的氨基酸序列。
根据具体实施例，本发明具体设想使用以下任何抗体，该抗体包括oxMIF结合位点，该结合位点源自以下序列：重链可变区序列CDR1-H、CDR2-H、CDR3-H和/或轻链可变区序列CDR1-L、CDR2-L、CDR3-L；该抗体包括构建体，该构建体包括单个可变结构域，该可变结构域包括CDR1-H、CDR2-H、CDR3-H序列的组合，或CDR1-L、CDR2-L、CDR3-L序列的组合，或这类可变结构域对，例如VH、VHH或VH/VL结构域对。
根据具体实施例，本发明具体设想使用以下任何抗体，该抗体包括CD3结合位点，该结合位点源自以下序列：重链可变区序列CDR1-H、CDR2-H、CDR3-H和/或轻链可变区序列CDR1-L、CDR2-L、CDR3-L；该抗体包括构建体，该构建体包括单个可变结构域，该可变结构域包括CDR1-H、CDR2-H、CDR3-H序列的组合，或CDR1-L、CDR2-L、CDR3-L序列的组合，或这类可变结构域对，例如VH、VHH或VH/VL结构域对。
另一个具体实施例涉及抗oxMIF/抗CD3抗体，其中相应的重链可变区(VH)和相应的轻链可变区(VL)，从N末端到C末端排列，具体顺序为VL(oxMIF)-VH(oxMIF)-VH(CD3)-VL(CD3)、VL(CD3)-VH(CD3)-VH(oxMIF)-VL(oxMIF)、VH(CD3)-VL(CD3)-VL(oxMIF)-VH(oxMIF)、VH(oxMIF)-VL(oxMIF)-VL(CD3)-VH(CD3)、VL(oxMIF)-VH(oxMIF)、VH(oxMIF)-VL(oxMIF)、VH(CD3)-VL(CD3)或VL(CD3)-VH(CD3)。
根据另一个实施例，该抗体包括至少一个人源抗体结构域，或除人以外的哺乳动物来源的嵌合或人源化抗体结构域，优选人源化、鼠或骆驼来源的抗体结构域。
根据另一个实施例，如本文所述的抗体包括特异性结合oxMIF的单价或二价的结合部分，以及特异性结合CD3的单价结合部分。
根据本发明的另一个实施例，本文所述抗体的Fc结构域，具体为CH3结构域，包括本领域已知的(Ridgway J.B.B.et al.,Protein Engineering,1996,617-621)或由SEED技术(链交换工程域)产生的(SEEDbodies,Davis JH,et al.,Protein Eng.Des.Sel.,2010,23(4),195-202)杵臼结构突变(knob-into-hole mutations)。
根据另一个实施例，本文还提供了药物组合物，其包括抗oxMIF/抗CD3抗体以及药学上可接受的载体或赋形剂。
具体地，提供如本文所述的抗体或药物组合物用于治疗过度增殖性疾病，具体为涉及任何组织或器官的癌症，具体用于治疗头癌、颈癌、乳腺癌、肝癌、皮肤癌、胃癌、膀胱癌、肾癌、食道癌、妇科癌、支气管癌、鼻咽癌、甲状腺癌、前列腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肺癌以及纤维肉瘤。
具体地，如本文所述的抗体可用作药物。
具体地，提供了用于治疗过度增殖性疾病(具体为癌症)的方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的药物组合物。
本文还提供了分离的核酸分子，其编码本发明的抗oxMIF/抗CD3抗体形式。
在另一个实施例中，提供了表达载体，其包括如本文所述的核酸分子。
另一个实施例涉及宿主细胞，其包括所述载体。
本文还提供了制备本发明的抗oxMIF/抗CD3抗体的方法，其包括在宿主细胞中表达编码该抗体的核酸。
根据具体实施例，提供了检测细胞表达oxMIF的体外方法，该方法包括：使包括待检测人类细胞的生物样品与本发明的抗oxMIF/抗CD3抗体接触；以及检测所述抗体的结合；其中所述抗体的结合表明细胞表面存在oxMIF，从而检测细胞是否表达oxMIF。
具体地，生物样品包括完整的人类细胞、活组织检查样品、切除物、组织样品或待测试细胞的膜组分。
更具体地，抗oxMIF/抗CD3抗体用可检测标签进行标记，该可检测标签选自：放射性同位素、荧光标签、化学发光标签、酶标签以及生物发光标签。
根据另一方面，与可检测标签结合的抗体可用于诊断过度增殖性疾病(如癌症)，其中受试者的细胞表达oxMIF。
附图说明
图1：oxMIF和CD3的抗oxMIF/抗CD3双特异性抗体的示意图，该抗体使T细胞接近肿瘤细胞。
图2：实施例中使用的抗体形式的示意图。该图显示了其中scFv仅与两条重链中的一条融合的IgG(IgG-scFv，以C0086为例)，其中一个Fab臂被双特异性T细胞接合剂替代的IgG(Fab-BiTE-Fc，以C0061为例)，以及其中两个Fab臂均被具有不同结合特异性的scFv替代的IgG((scFv)2-Fc或scFv(oxMIF)-scFv(CD3)-Fc；以C0062为例)。
图3：抗oxMIF/CD3双特异性抗体C0061和C0062与oxMIF和CD3的同时结合。抗oxMIF单特异性抗体C0008用作阴性对照。
图4：在ELISA中，抗oxMIF/CD3双特异性抗体C0061和C0062与固定化oxMIF的结合。抗oxMIF/CD3单特异性抗体C0008用作阳性对照。
图5：抗oxMIF/CD3双特异性抗体C0061和C0062对T细胞的活化。抗oxMIF单特异性抗体C0008用作阴性对照。
图6：使用抗oxMIF/CD3双特异性抗体C0061和C0062，对HCT116结肠癌细胞的PBMC介导肿瘤细胞杀伤。此处使用抗oxMIF单特异性抗体C0008作为阴性对照。
图7：抗oxMIF/CD3双特异性抗体C0086和C0107与oxMIF和CD3的同时结合。抗oxMIF单特异性抗体C0008用作阴性对照。
图8：在ELISA中，抗oxMIF/CD3双特异性抗体C0086和C0107与固定化oxMIF的结合。抗oxMIF单特异性抗体C0008用作阳性对照。
图9：抗oxMIF/CD3双特异性抗体(A)C0061、C0062、C0086以及(B)C0107与oxMIF或redMIF的差异性结合。Imalumab(C0008)用作对照抗体，非特异性亚型IgG作阴性对照。
图10：抗oxMIF/CD3双特异性抗体与在CD3阳性Jurkat T细胞上表达的天然CD3的特异性结合，而在CD3阴性Jurkat T细胞上仅检测到背景染色。单特异性抗oxMIF抗体C0008用作阴性对照。
图11：在人类HCT116癌症靶点细胞存在或不存在的情况下，由抗oxMIF/CD3双特异性抗体C0061(A)或单特异性抗oxMIF抗体C0008(B，阴性对照)诱导的活化人类T细胞的IL-2分泌。
图12：使用抗oxMIF/CD3双特异性抗体，对呈现oxMIF的结肠癌细胞HCT116(A)和呈现oxMIF的人卵巢癌细胞A2780(B)的PMBC介导肿瘤细胞杀伤。抗oxMIF单特异性抗体C0008用作阴性对照。
图13：静脉注射NSG小鼠后，C0061在小鼠循环中的药代动力学(PK)。
图14：通过对携带皮下CALU-6肿瘤小鼠的体内红外成像，显示C0061的肿瘤穿透和积累。在注射IRDye 800CW标记抗体后的1小时、6小时、24小时、48小时、72小时、96小时、168小时拍摄照片。A：接受IRDye 800CW标记的C0061(5mg/kg)的小鼠；B：未处理的对照小鼠；A和B的比例尺相同。
具体实施方式
本文所用术语“包括”、“包含”、“具有”和“含有”可以作为同义词使用并且应理解为开放定义，允许进一步的成分或部分或元素。“由…组成”理解为最接近于没有构成定义特征的进一步元素的定义。因此，“包括”的范围更广泛并包含“由…组成”的定义。
本文所用术语“约”是指相同的值或与给定值相差+/-5％的值。
本发明的抗体包括至少一个特异性识别oxMIF的结合位点和一个特异性识别CD3的结合位点。
oxMIF结合位点对MIF的氧化形式具有特异性，即对人类的oxMIF特异，但对还原型MIF不显示显著的交叉反应性。OxMIF是与疾病相关的MIF结构亚型，可在患有炎症性疾病受试者的循环中，以及在癌症患者的肿瘤组织中被特异性且显著地检测到。
本发明的抗体还包括一个特异性识别CD3表位(具体为人类CD3表位)的结合位点，该CD3表位包括存在于细胞表面的CD3γ(伽马)链、CD3δ(德尔塔)链和两条CD3ε(伊普西隆)链。CD3在T细胞上的聚集(例如通过固定化的抗CD3抗体)导致T细胞活化，该T细胞活化类似于T细胞受体参与的活化，但不依赖于其克隆典型特异性。在某些实施例中，本文所述抗体的CD3结合结构域不仅表现出对人类CD3的CD3结合亲和力，而且还表现出与相应的食蟹猴CD3蛋白的优异交叉反应性。在一些情况下，抗体的CD3结合结构域与来自食蟹猴的CD3交叉反应。以较低亲和力结合CD3的抗体或其片段可以有效地触发T细胞活化和细胞毒性。这可能具有增加的治疗价值，因为它们优先定位于肿瘤细胞。在一个实施例中，抗CD3结合位点包括本文所述抗CD3结合结构域的一个或多个(例如，所有三个)轻链互补决定区，和/或本文所述抗CD3结合结构域的一个或多个(例如，所有三个)重链互补决定区，例如抗CD3结合结构域包括一个或多个(例如所有三个)LC CDR和一个或多个(例如所有三个)HC CDR。
本文术语“抗体”以最广泛的含义使用并且涵盖由抗体结构域组成或包括抗体结构域的多肽或蛋白质，该抗体结构域理解为免疫球蛋白的重链和/或轻链的恒定和/或可变结构域，该结构域具有或不具有接头序列。该术语涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)，以及只要表现出所需的抗原结合活性(即结合oxMIF和CD3表位)的抗体片段。
抗体结构域可以是天然结构或通过诱变或衍生化进行修饰，例如修饰其抗原结合特性或任何其他特性，例如稳定性或功能特性，例如结合Fc受体(例如FcRn和/或Fc-γ受体)的特性。如果多肽序列包括β桶状结构，该β桶状结构由抗体结构域结构的至少两条β链通过环序列连接组成，则认为该多肽序列是抗体结构域。
应当理解，术语“抗体”包括抗原结合衍生物及其片段。该衍生物是本发明的一种或多种抗体或抗体结构域和/或融合蛋白的任何组合，其中本发明抗体的任何结构域可以在任何位置与一种或多种其他蛋白质融合，例如其他抗体或抗体形式，例如包括以下结合结构：CDR环、受体多肽以及配体、支架蛋白、酶、标签、毒素等。
术语“抗体及其抗原结合片段”应特指表现出双特异性结合特性的多肽或蛋白质，即与靶点抗原oxMIF和CD3结合的特性。
“抗体片段”是指除了完整抗体之外的分子，该分子包括完整抗体的一部分，该部分能结合完整抗体分子结合的抗原。抗体片段的例子包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、Fab-scFv融合蛋白、Fab-(scFv)2融合蛋白、Fab-scFv-Fc、F(ab')2、ScFvFc、双抗体、交叉Fab片段；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。此外，抗体片段包括具有VH结构域特征(即能够与VL结构域组装在一起)或VL结构域特征(即能够与VH结构域组装在一起)的单链多肽，以得到功能性抗原结合位点，从而提供全长抗体的抗原结合特性。如本文所指的抗体片段还涵盖Fc结构域，该Fc结构域包括一个或多个结构环区，该结构环区包含抗原结合区，例如FcabTM或具有IgG结构的全长抗体形式，其中Fc区已被包含第二个不同抗原结合位点的Fcab替代。
如本文所用，“Fab片段或Fab”是指以下抗体片段：其包括轻链(该轻链包括VL结构域和轻链恒定结构域(CL))以及VH结构域和第一重链恒定结构域(CH1)。
如本文所用，“Fab臂”是指通过铰链区与Fc部分或Fc结构域连接的Fab片段。
术语“N末端”表示N末端的最后一个氨基酸。
术语“C末端”表示C末端的最后一个氨基酸。
“双特异性T细胞接合剂”(“BiTE”)是指以下人工单克隆抗体：该抗体是由不同抗体的两个单链可变片段(scFv)组成的融合蛋白，或由来自四个不同基因的氨基酸序列组成的融合蛋白，每条多肽单链约50千道尔顿。其中一个scFv通过CD3受体结合T细胞，另一个scFv通过oxMIF结合肿瘤细胞。
在具体实施例中，术语Fab-BiTE-Fc是指抗oxMIF/抗CD3抗体，该抗体是其中一个Fab臂被双特异性T细胞接合剂(BiTE)替代，而第二个IgG臂保留的IgG。在具体实施例中，Fab-BiTE-Fc具体包括序列SEQ ID NO 137，或者与SEQ ID NO 137具有至少70％，具体为75％、80％、85％、90％、95/或99％序列同一性的序列，SEQ ID NO 137为：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQRIMTYLNWYQQKPGKAPKLLIFVASHSQSGVPSRFRGSGSETDFTLTISGLQPEDSATYYCQQSFWTPLTFGGGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIYSMNWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGGTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGSQWLYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGQGLEWMGYINPSRGYTNYNQKFKDRVTLTTDKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARYYDDHYSLDYWGQGTLVTVSSGGSGGSGGSGGSGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQKPGKAPKRLIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLEIKGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO 137，C0061的多肽2)。
具体地，FaB-BiTE包括SEQ ID NO 137、159、140，具体包括序列SEQ ID NO 137、159、140，或者与SEQ ID NO 137、159、140具有至少70％，具体为75％、80％、85％、90％、95/或99％序列同一性的序列。
这导致与已知的BiTE相比更长的半衰期。
术语“IgG-scFv”是指一种双特异性抗体，其通过将一个scFv与单特异性免疫球蛋白G(IgG)融合而工程化为双特异性。IgG的特异性可以针对oxMIF，而scFv的特异性可以针对CD3，或者相反。此外，轻链或重链之一的氨基末端或C末端都可以附加scFv，从而产生不同类型的IgG-scFv双特异性抗体(BsAb)：(i)IgG(H)-scFv，scFv与全长IgG HC之一的C末端连接；(ii)scFv-(H)IgG，与IgG(H)-scFv相同，除了scFv与HC的N末端连接。(iii)IgG(L)-scFv或(iv)scFv-(L)IgG：scFv连接到IgG轻链的C或N末端，分别形成IgG(L)-scFv或scFv-(L)IgG。具体地，IgG-scFv在165kDa至185kDa的范围内，具体约为175kDa。
在具体实施例中，本发明的IgG-scFv(抗oxMIF IgG×抗CD3 scFv融合蛋白)包括序列SEQ ID NO 139和/或SEQ ID NO 140，或与SEQ ID NO 139和/或SEQ ID NO 140具有至少70％，具体为75％、80％、85％、90％、95/或99％序列同一性的序列，SEQ ID NO 139、SEQID NO 140分别为：
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIYSMNWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGGTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGSQWLYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGQGLEWMGYINPSRGYTNYNQKFKDRVTLTTDKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARYYDDHYSLDYWGQGTLVTVSSGGSGGSGGSGGSGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQKPGKAPKRLIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO 139，抗oxMIF重链-抗CD3 scFv融合蛋白，C0086的多肽1)。
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQRIMTYLNWYQQKPGKAPKLLIFVASHSQSGVPSRFRGSGSETDFTLTISGLQPEDSATYYCQQSFWTPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ IDNO 140，抗oxMIF轻链，C0086和C0061的多肽3)。
具体地，IgG-scFv(抗oxMIF IgG×抗CD3 scFv融合蛋白)包括序列SEQ ID NO139、140、163，或者与SEQ ID NO 139、140、163具有至少70％，具体为75％、80％、85％、90％、95/或99％序列同一性的序列。
在另一个具体实施例中，术语(scFv)2-Fc是指其中一个Fab臂被抗oxMIF scFv替代，而另一个Fab臂被抗CD3 scFv替代的IgG。在具体实施例中，(scFv)2-Fc包括序列SEQ IDNO 156或SEQ ID NO 157，或者与SEQ ID NO 156或SEQ ID NO 157具有至少70％，具体为75％、80％、85％、90％、95/或99％序列同一性的序列，SEQ ID NO 156或SEQ ID NO 157分别为：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQRIMTYLNWYQQKPGKAPKLLIFVASHSQSGVPSRFRGSGSETDFTLTISGLQPEDSATYYCQQSFWTPLTFGGGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIYSMNWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGGTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGSQWLYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO 156，不含链亲和素标签(Strep tag)的C0062的多肽1)。
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGQGLEWMGYINPSRGYTNYNQKFKDRVTLTTDKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARYYDDHYSLDYWGQGTLVTVSSGGSGGSGGSGGSGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQKPGKAPKRLIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLEIKGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO 157，不含多聚组氨酸标签(His tag)的C0062的多肽2)。
根据具体实施例，本文所述的抗体可包括一种或多种用于纯化和/或检测的标签，例如但不限于亲和标签、溶解度增强标签和监测标签。
具体地，亲和标签选自多聚组氨酸标签、多聚精氨酸标签、抗体的多肽底物、几丁质结合域、RNAse S多肽、蛋白A、β-半乳糖苷酶、FLAG标签、链亲和素II标签(Strep IItag)、链霉亲和素-结合多肽(SBP)标签、钙调蛋白结合多肽(CBP)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、麦芽糖结合蛋白(MBP)、S-标签、HA标签以及c-Myc标签，具体地标签为His标签，该His标签包括一个或多个H，更具体地它是六组氨酸标签。
亲和标签可以连接至本文所述抗体的任何结构域，具体地连接至Fc部分，更具体地连接至CH3结构域或连接至Fab结构域，具体地连接至VL。
“融合”或“连接”是指组分(例如Fab分子和Fc结构域亚基)直接通过肽键连接，或通过一个或多个肽接头进行连接。
本文所用术语“接头”是指肽接头，优选为具有特定氨基酸序列的多肽，该序列由1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16个或更多个氨基酸残基组成，具体地，接头由5个氨基残基或5个氨基酸的重复单元组成。设计用于连接各个结构域的多肽优选不干扰所连接结构域的折叠。具体地，接头序列包括甘氨酸和/或丝氨酸残基，更具体地，接头是(GGS)n或(GGGS)n(SEQ ID NO 166)，其中n为1、2、3或更大。
所述肽接头可以特异性地连接本文所述的抗体或抗原结合部分的VH和VL链。该肽接头也可以连接不同结合位点的两个VH序列，例如CD3 VH和oxMIF VH。
具体地，当IgG识别oxMIF而scFv识别CD3时，连接抗CD3轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)的肽接头包括序列GGGGS(SEQ ID NO 164)或GGS或其重复序列，具体为(GGGGS)n，其中n为1、2、3或更大，具体地n是3，或者为(GGS)n，其中n为1、2、3、4、5或更大，具体地n为5。
在一个可选实施例中，当IgG Fab臂识别oxMIF而双特异性T细胞接合剂识别oxMIF和CD3时，连接oxMIF和CD3结合区的VL和VH结构域的肽接头为序列(GGGS)n或(GGGGS)n或其任意组合，其中n为1、2、3、4、5或更大。也可存在用于连接oxMIF VH和CD3 VH的肽接头，具体包括序列GGSGGS(SEQ ID NO 165)、(GGS)n或(GGGGS)n，其中n为1、2、3、5或更大。
在另一个实施例中，当两个Fab臂均被scFv替代并且一个scFv靶向oxMIF而另一个scFV靶向CD3时，具体地，连接抗CD3 VL和VH链的肽接头可具有序列(GGS)n，其中n是1、2、3、4、5，具体地是n为5。肽接头也可以将Fc臂与抗CD3 VH连接，具体包括序列(GGGGS)n，其中n为1、2、3或更大，具体地n为3。
术语“免疫球蛋白”是指具有天然产生抗体结构的蛋白质。例如，IgG类免疫球蛋白是约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白，由两条轻链和两条重链通过二硫键键合组成。从N末端到C末端，每条重链具有可变区(VH)，也称为可变重结构域或重链可变结构域，其后是三个恒定结构域(CH1、CH2、CH3)，也称为重链恒定区。类似地，从N末端到C末端，每条轻链具有可变区(VL)，也称为可变轻结构域或轻链可变结构域，其后是恒定轻结构域(CL)，也称为轻链恒定区。IgG类的免疫球蛋白基本上由两个Fab分子(Fab臂)和Fc结构域组成，通过免疫球蛋白铰链区连接。免疫球蛋白的重链可归为五种类型之一，称为α(IgA)、δ(IgD)、ε(IgE)、γ(IgG)或μ(IgM)，其中某些类型可进一步分为亚型，例如γ1(IgG1)、γ2(IgG2)、γ3(IgG3)、γ4(IgG4)、α1(IgA1)以及α2(IgA2)。免疫球蛋白的轻链可以归为两种类型中的一种，称为kappa(κ)和lambda(λ)。
术语“嵌合抗体”是指其中重链和/或轻链的一部分源自特定来源或物种，而重链和/或轻链的其余部分源自不同来源或物种的抗体，通常通过重组DNA技术制备。嵌合抗体可以包括兔或鼠的可变区和人的恒定区。嵌合抗体是表达免疫球蛋白基因的产物，该免疫球蛋白基因包括编码免疫球蛋白可变区的DNA片段和编码免疫球蛋白恒定区的DNA片段。产生嵌合抗体的方法涉及本领域已知的常规重组DNA和基因转染技术(Morrison,SL,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.81(1984)6851-6855)。
“人源抗体”是具有以下氨基酸序列的抗体：该氨基酸序列与由人类或人类细胞产生的抗体相对应，或该氨基酸序列衍生自非人类来源的序列，且利用了人类抗体库或其他人类抗体编码序列。该人源抗体的定义具体排除了包括非人类抗原结合残基的人源化抗体。至于嵌合和人源化抗体，如本文所用的术语“人源抗体”还包括在恒定区中修饰的此类抗体，例如通过“类别转换”，即Fc部分的改变或突变(例如由IgG1变为IgG4和/或IgG1/IgG4突变)来修饰。
本文所用术语“重组人源抗体”旨在包括通过重组方式制备、表达、生产或分离的所有人源抗体，例如从宿主细胞(如HEK细胞、NS0或CHO细胞)中分离的抗体，或来自转基因(人免疫球蛋白基因)动物(例如小鼠)的抗体，或用重组表达载体转染到宿主细胞表达的抗体。重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列虽然来源于人类种系的VH和VL序列并且与之相关，但该序列可能不是天然存在于人类种系体内抗体的抗体库中。
“人类共有骨架”是代表在选择人免疫球蛋白VL或VH骨架序列中最常见的氨基酸残基的骨架。人免疫球蛋白VL或VH序列的选择通常来自可变结构域序列的亚组。该序列亚组通常为如Kabat等所述的亚组(Kabat et al.,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,Fifth Edition,NIH Publication 91-3242,Bethesda MD(1991),vols.1-3)。
“人源化”抗体所指的嵌合抗体包括来自非人源HVR的氨基酸残基和已被人源化的来自人骨架区(FR)的氨基酸残基。在某些实施例中，人源化抗体将基本上包括所有中的至少一个，通常为两个可变结构域，在该可变结构域中所有或基本上所有HVR(例如CDR)对应于非人源抗体的HVR，而所有或基本上所有FR对应于人源抗体的FR。人源化抗体可任选地包括源自人源抗体的抗体恒定区的至少一部分。本发明涵盖的其他人源化抗体的形式为以下形式：该形式中抗体的恒定区已经从原始抗体的恒定区经过额外修饰或改变以产生新的特性，例如关于Clq结合和/或Fc受体(FcR)结合的特性。
根据本发明的“双特异性抗体(Bsab)”是具有两种不同结合特异性的抗体。本发明的抗体对oxMIF和CD3具有特异性。如本文所用的术语双特异性抗体表示具有一个或两个oxMIF结合位点和一个CD3结合位点的抗体或其衍生物或其片段。双特异性抗体形式的实例可以是但不限于如Spiess C.等以及Brinkmann U.和Kontermann R.E.所述的双特异性IgG(BsIgG)、附加有额外抗原结合部分的IgG、BsAb片段、双特异性融合蛋白、BsAb结合物、杂交BsIgG、仅可变结构域双特异性抗体分子、CH1/CL融合蛋白、Fab融合蛋白、修饰的Fc与CH3融合蛋白、附加的IgG-HC融合物、附加的IgG-LC融合物、附加的IgG-HC&LC融合物、Fc融合物、CH3融合物、IgE/IgM CH2融合物、F(ab′)2融合物、CH1/CL、修饰的IgG、非免疫球蛋白融合蛋白、Fc修饰的IgG、双抗体等，(Spiess C.et al.,2015,Mol.Immunol.,67,95-106以及Brinkmann U.and Kontermann R.E.,2017,MABS,9,2,182-212)。
Fc部分可被修饰以包括杵臼结构(knob-into-hole)突变，以工程化CH3使其异二聚化。通过将CH3结构域之间界面上的小氨基侧链替换为较大的侧链来创建杵状结构，通过用较小的侧链替换大的侧链来构建臼状结构。具体地，根据EU编号方案，一个Fc臂可以包括突变S354C和T366W，另一个Fc臂可以包括突变Y349C、T366S、L368A、Y407V。作为可选方案，链交换工程域(SEED)技术可用于修饰Fc臂以生成不对称和双特异性抗体样分子。该技术基于在保守的CH3结构域内交换免疫球蛋白的结构相关序列。在SEED CH3结构域中来自人类IgA和IgG的交替序列可以产生两个不对称但互补的结构域，称为AG和GA。SEED设计允许有效生成AG/GA异二聚体，同时不利于AG和GA SEED CH3结构域的同二聚化(Muda M.et al.,2011,Protein Eng.Des.Sel.,24(5),447-54)。
本文所用术语“抗原”可与术语“靶点”或“靶点抗原”互换使用，是指被抗体结合位点识别的完整靶点分子或此类分子的片段。具体地，抗原的亚结构(例如多肽或碳水化合物结构)通常称为“表位”，例如免疫相关的B细胞表位或T细胞表位，该表位可以被此类结合位点识别。
本文所用术语“表位”应特指以下分子结构：该分子结构可以完全构成能与本发明抗体形式的结合位点特异性结合的配偶体，或作为该配偶体的一部分。表位可由碳水化合物，肽类结构，脂肪酸，有机、生化或无机的物质或其衍生物及以上任何组合组成。如果该表位包括在肽类结构中，例如肽、多肽或蛋白质，它通常包括至少3个氨基酸，优选5至40个氨基酸，具体为少于10个氨基酸，具体为4-10个氨基酸。表位可以是线性或构象表位。线性表位由多肽或碳水化合物链的一级序列的单个片段组成。线性表位可以是连续或重叠的。构象表位由氨基酸或碳水化合物组成，该氨基酸或碳水化合物通过折叠多肽形成三级结构来聚在一起，并且该氨基酸在线性序列中不一定彼此相邻。此类oxMIF表位可以是位于oxMIF中心区内的序列EPCALCS(SEQ ID NO 145)。然而，该表位也可能位于oxMIF的C末端。
术语“抗原结合结构域”或“结合结构域”或“结合位点”是指抗原结合部分的一部分，其包括与抗原的部分或全部特异性结合并与其互补的区域。在抗原较大的情况下，抗原结合分子可能仅与抗原的特定部分结合，该部分称为表位。抗原结合结构域可以由例如一个或多个抗体可变结构域(也称为抗体可变区)提供。优选地，抗原结合结构域包括抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)。
本文所用的关于本发明抗体的术语“结合位点”是指能够与抗原结合相互作用的分子结构。结合位点通常位于抗体的互补决定区(CDR)内，本文也称为“CDR结合位点”，其是具有不同结构的特定区域，该不同结构赋予结合各种抗原的功能。不同的结构可以源自天然的抗体库，例如鼠或人类抗体库，或者可以通过重组或合成产生，例如通过诱变，以及具体通过随机化技术产生。这些结构包括诱变的CDR区、抗体可变结构域的环区，特别是抗体的CDR环，例如任何VL和/或VH抗体结构域的CDR1、CDR2、CDR3环。根据本发明使用的抗体形式通常包括一个或多个CDR结合位点，每个CDR结合位点对抗原具有特异性。
术语“识别”、“靶向”或“结合”在本文中可以互换使用。
本文所用术语“特异性”或“双特异性”应指在异质分子群体中决定感兴趣的同源配体的结合反应。
在此，该结合反应是指至少与CD3抗原和oxMIF抗原的结合反应。因此，在指定条件下，例如免疫测定条件下，特异性结合其特定靶点的抗体不会大量结合样品中存在的其他分子，具体地，它不会显示出与还原型MIFA特异性结合位点的可检测结合，通常不会与其他靶点发生交叉反应。此外，特异性结合位点可以特异性结合靶点的一个或多个表位、靶点的亚型或变体，或与其他相关靶点抗原(例如同源物或类似物)发生交叉反应。
特异性结合是指该结合在选择的靶点同一性，高、中、低的结合亲和力或亲合力方面具有选择性。如果对于靶点抗原(如oxMIF和CD3)的结合常数或结合动力学与对于不是靶点抗原的抗原的结合常数或结合动力学相比，具有至少10倍的差异，优选为至少100倍，更优选为至少1000倍，则通常可以实现选择性结合。
本发明的双特异性抗体具体包括两个或三个具有特异性结合特性的位点，其中两种不同的靶点抗原CD3和oxMIF被抗体识别。因此，示例性的双特异性抗体形式可以包括两个结合位点，其中每个结合位点能够特异性结合不同的抗原(CD3和oxMIF)，或包括三个结合位点，其中两个结合位点结合oxMIF而一个结合位点结合CD3。
本申请所用术语“价”表示在抗体分子中存在的特定数量的结合位点。因此，术语“二价”、“四价”和“六价”分别表示在抗体分子中存在两个结合位点、四个结合位点以及六个结合位点。
根据本发明的双特异性抗体至少是“二价”的，也可以是“三价”的。
本文所用的关于抗体结合位点的术语“单价”应指仅包括一个针对靶点抗原的结合位点的分子。
具体地，本发明的抗体应理解为对于oxMIF是单价的或二价的而对于CD3是单价的，因此总共是二价的或三价的。
根据另一个实施例，抗体可以包括一个或多个额外的结合位点，该结合位点特异性识别在效应T细胞上表达的一种或多种抗原，具体是以下的一种或多种：ADAM17、CD2、CD4、CD5、CD6、CD8、CD11a、CD11b、CD14、CD16、CD16b、CD25、CD28、CD30、CD32a、CD40、CD 40L、CD44、CD45、CD56、CD57、CD64、CD69、CD74、CD89、CD90、CD137、CD177、CEAECAM6、CEACAM8、HLA-Dra cahin(人类白细胞抗原2链)、KIR、LSECtin或SLC44A2。
本文所用术语“高变区”或“HVR”是指抗体可变结构域的每个区域，该区域在序列上是高变的和/或形成结构上定义的环(“高变环”)。天然的四链抗体通常包括六个HVR；在VH中有3个(H1、H2、H3)，VL中有3个(L1、L2、L3)。HVR通常包括来自高变环和/或来自“互补决定区”(CDR)的氨基酸残基，后者具有最高的序列可变性和/或参与抗原识别(Kabat etal.,1991,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public HealthService,National Institutes of Health,Bethesda,MD)。高变区(HVR)也称为互补决定区(CDR)，这些术语在本文中可互换使用，指代形成抗原结合区的可变区的部分。包含特定CDR的确切残基数将根据CDR的序列和大小而变化。对于给定抗体可变区氨基酸序列，本领域技术人员可以通过常规技术确定哪些残基包括特定的CDR。
Kabat定义了适用于任何抗体的可变区序列编号系统。本领域普通技术人员可以明确地将这种“Kabat编号”系统分配给任何可变区序列，而不依赖于序列本身之外的任何实验数据。如本文所用，“Kabat编号”是指Kabat等提出的编号系统(Kabat et al.,1983,U.S.Dept.of Health and Human Services,"Sequence of Proteins of ImmunologicalInterest")。除非另有说明，提及抗体可变区中特定氨基酸残基位置的编号是根据Kabat编号系统。在具体实施例中，恒定区的编号是根据EU编号索引。
CDR还包括“特异性决定残基”或“SDR”，SDR是接触抗原的残基。SDR包含在CDR区内，称为小型CDR(abbreviated-CDR)或a-CDR。除非另有说明，可变结构域中的HVR残基和其他残基(例如FR残基)在本文中根据以上Kabat等的编号系统进行编号。
根据具体实施例，抗CD3结合位点包括互补决定区(CDR)，该互补决定区(CDR)选自由以下组成的组：莫罗莫那-CD3(muromonab-CD3，OKT3)、奥昔珠单抗(otelixizumab，TRX4)、替利组单抗(teplizumab，MGA031)、维西珠单抗(visilizumab，Nuvion)、福雷芦单抗(foralumab)、索利托单抗(solitomab)、博纳吐单抗(blinatumomab)、帕妥昔珠单抗(pasotuxizumab)、赛必妥单抗SP34(cibisatamab SP34)、X35、VIT3、BMA030(BW264/56)、CLB-T3/3、CRIS7、YTH12.5、F111-409、CLB-T3.4.2、TR-66、WT32、SPv-T3b、11D8、XIII-141、XIII-46、XIII-87、12F6、T3/RW2-8C8、T3/RW2-4B6、OKT3D、M-T301、SMC2、F101.01、UCHT-1、WT-31以及任何如果适用的以上CDR的人源化衍生物。
本发明的抗体具体包括一种或多种以下描述的序列：
表1，抗oxMIF重链序列
Figure BDA0003750713290000171
表2，抗oxMIF轻链序列
Figure BDA0003750713290000181
表3，抗CD3重链序列
Figure BDA0003750713290000182
Figure BDA0003750713290000191
表4，抗CD3轻链序列
Figure BDA0003750713290000192
Figure BDA0003750713290000201
抗oxMIF抗体的重链可变序列可以如下：
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIYSMNWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGGTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGSQWLYGMDVWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO 158)。
抗oxMIF抗体的轻链可变序列可以如下：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQRIMTYLNWYQQKPGKAPKLLIFVASHSQSGVPSRFRGSGSETDFTLTISGLQPEDSATYYCQQSFWTPLTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO 134)。
抗CD3抗体的重链可变序列可以如下：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGQGLEWMGYINPSRGYTNYNQKFKDRVTLTTDKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARYYDDHYSLDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO 135)。
抗CD3抗体的轻链可变序列可以如下：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQKPGKAPKRLIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO 136)。
抗CD3抗体的重链可变序列也可以如下：
EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO 190)。
抗CD3抗体的轻链可变序列还可以如下：
QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL(SEQ ID NO 191)。
在另一个可选实施例中，抗CD3抗体的重链可变序列也可以如下：
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO 192)。
在另一个可选实施例中，抗CD3抗体的轻链可变序列可以如下：
QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNYANWVQEKPGQAFRGLIGGTNKRAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGAQPEDEAEYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVL(SEQ ID NO 193)。
具体地，CD3的ε链可以包括以下序列：
MQSGTHWRVLGLCLLSVGVWGQDGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVCENCMEMDVMSVATIVIVDICITGGLLLLVYYWSKNRKAKAKPVTRGAGAGGRQRGQNKERPPPVPNPDYEPIRKGQRDLYSGLNQRRI(SEQ ID NO141)。
具体地，CD3的δ链可以包括以下序列：
MEHSTFLSGLVLATLLSQVSPFKIPIEELEDRVFVNCNTSITWVEGTVGTLLSDITRLDLGKRILDPRGIYRCNGTDIYKDKESTVQVHYRMCQSCVELDPATVAGIIVTDVIATLLLALGVFCFAGHETGRLSGAADTQALLRNDQVYQPLRDRDDAQYSHLGGNWARNK(SEQ ID NO 142)。
具体地，CD3的γ链可以包括以下序列：
MEQGKGLAVLILAIILLQGTLAQSIKGNHLVKVYDYQEDGSVLLTCDAEAKNITWFKDGKMIGFLTEDKKKWNLGSNAKDPRGMYQCKGSQNKSKPLQVYYRMCQNCIELNAATISGFLFAEIVSIFVLAVGVYFIAGQDGVRQSRASDKQTLLPNDQLYQPLKDREDDQYSHLQGNQLRRN(SEQ ID NO 143)。
根据一个具体实施例，被oxMIF结合位点特异性识别的oxMIF结构域包括以下序列：MPMFIVNTNVPRASVPDGFLSELTQQLAQATGKPPQYIAVHVVPDQLMAFGGSSEPCALCSLHSIGKIGGAQNRSYSKLLCGLLAERLRISPDRVYINYYDMNAANVGWNNSTFA(SEQ ID NO 144)。
具体地，SEQ ID NO 134至SEQ ID NO 144以及SEQ ID NO 158中的任一个可以包括1、2、3或4个点突变。
“点突变”特别理解为对聚核苷酸的工程化，其导致与非工程化氨基酸序列不同的氨基酸序列的表达，该不同在于用不同的氨基酸对一个或多个(或一对或多对)氨基酸进行替换或交换、删除或插入。优选的点突变是指具有相同极性和/或电荷的氨基酸的交换。在这方面，氨基酸是指由61种三联体密码子编码的20种天然存在的氨基酸。这20种氨基酸可分为带中性电荷、正电荷和负电荷的氨基酸：
“中性”氨基酸及其各自的三字母和单字母代码以及极性如下所示：
丙氨酸：(Ala，A)非极性，中性；
天冬酰胺：(Asn，N)极性，中性；
半胱氨酸：(Cys，C)非极性，中性；
谷氨酰胺：(Gln，Q)极性，中性；
甘氨酸：(Gly，G)非极性，中性；
异亮氨酸：(Ile，I)非极性，中性；
亮氨酸：(Leu，L)非极性，中性；
蛋氨酸：(Met，M)非极性，中性；
苯丙氨酸：(Phe，F)非极性，中性；
脯氨酸：(Pro，P)非极性，中性；
丝氨酸：(Ser，S)极性，中性；
苏氨酸：(Thr，T)极性，中性；
色氨酸：(Trp，W)非极性，中性；
酪氨酸：(Tyr，Y)极性，中性；
缬氨酸：(Val，V)非极性，中性；以及
组氨酸：(His，H)极性，带正电(10％)，中性(90％)。
“带正电”的氨基酸为：
精氨酸：(Arg，R)极性，带正电；以及
赖氨酸：(Lys，K)极性，带正电。
“带负电”的氨基酸为：
天冬氨酸：(Asp，D)极性，带负电；以及
谷氨酸：(Glu，E)极性，带负电。
关于本文认定的多肽序列的“序列同一性百分比(％)”定义为经过比对序列并引入间隙(如有需要，以实现最大百分比的序列同一性)后，在候选序列中与特定多肽序列中的氨基酸残基相同的的氨基酸残基百分比，该比对不考虑将任何保守置换作为序列同一性的一部分。本领域技术人员可以确定用于测量比对的适当参数，包括在被比较的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。
根据本发明，CDR或骨架区序列与本文所述各序列的序列同一性为至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％。
“受试者”为哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯养动物(例如牛、羊、猫、狗、马)、灵长类动物(例如人类和非人类灵长类动物，例如猴子)、兔子、啮齿动物(例如小鼠和大鼠)。在某些实施例中，个体或受试者为人类。
“分离的核酸”是指已经从其自然环境的组分中分离出来的核酸分子。分离的核酸包括包含在通常含有该核酸分子的细胞中的核酸分子，但该核酸分子存在于染色体外或存在于不同于其天然染色体位置的染色体位置。
“分离的编码抗oxMIF/抗CD3抗体的核酸”是指一种或多种编码抗体重链和轻链(或其片段)的核酸分子，包括在单个载体中或分离的载体中的此类核酸分子，以及存在于宿主细胞中一个或多个位置的此类核酸分子。
“没有显著的交叉反应性”是指分子(例如抗体)不识别或不特异性结合与分子的实际靶点抗原不同的抗原(例如与靶点抗原密切相关的抗原)，具体为还原型MIF，特别是与该靶点抗原相比时。例如，抗体与不同于实际靶点抗原的抗原结合可少于约10％至少于约5％，或者能以少于以下的量结合与实际靶点抗原不同的所述抗原：约10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.2％或0.1％，优选与实际靶点抗原不同的抗原的结合量少于约2％、1％或0.5％，最优选少于约0.2％或0.1％。结合可以通过本领域已知的任何方法来确定，例如但不限于ELISA或表面等离子共振。
本发明抗体的重组生产优选使用表达系统，例如包括表达构建体或载体，该表达构建体或载体包括编码抗体形式的核苷酸序列。
术语“表达系统”是指以下核酸分子：该分子包含所需的编码序列和可操作地连接的控制序列，使得用该序列转化或转染的宿主能够生产编码的蛋白质。为了实现转化，表达系统可以包含在载体上；然而，相关的DNA也可以被整合到宿主染色体中。可选地，表达系统可用于体外转录/翻译。
本文所用的“表达载体”定义为对于克隆重组核苷酸序列的转录(即重组基因及其mRNA在合适的宿主生物体中的翻译)所必需的DNA序列。表达载体包括表达盒并且通常还包括宿主细胞中自主复制的原点或基因组整合位点，一种或多种选择标记(例如氨基酸合成基因或赋予抗生素(如博莱霉素、卡那霉素、G418、潮霉素)抗性的基因，多种限制性酶切位点、合适的启动子序列以及转录终止子，以上组件可操作地连接在一起。本文所用术语“质粒”和“载体”包括自主复制的核苷酸序列以及基因组整合的核苷酸序列。
具体地，该术语是指载体，通过该载体可以将DNA或RNA序列(例如外源基因)，例如编码本发明抗体形式的核苷酸序列引入宿主细胞，从而转化宿主和促进引入序列的表达(例如转录和翻译)。质粒是本发明的优选载体。
载体通常包括外源DNA插入其中的可传播媒介DNA。将一段DNA插入另一段DNA的常用方法包括使用称为限制性内切酶的酶，该酶在称为限制性位点的特定位点(特定的核苷酸组)处切割DNA。
“盒”是指编码表达产物的DNA编码序列或DNA片段，该序列或片段可以在限定的限制性位点处插入载体中。该盒限制位点旨在确保盒的插入是在正确的阅读框中。外源DNA通常在载体DNA的一个或多个限制性位点处插入，然后由载体与可传播载体DNA一起携带到宿主细胞中。具有插入或添加DNA的DNA片段或序列，例如表达载体，也可以称为“DNA构建体”。常见的载体类型是“质粒”，质粒通常是一种独立的双链DNA分子，可以很容易地接受额外的(外源)DNA，并且可以很容易地导入合适的宿主细胞。本发明的载体通常包含编码DNA和表达控制序列，例如启动子DNA，并且具有一个或多个适合插入外源DNA的限制性位点。编码DNA是编码特定氨基酸序列的DNA序列，编码该氨基酸序列是为了得到特定的多肽或蛋白质(例如本发明的抗体形式)。启动子DNA是启动、调节或以其他方式介导或控制编码DNA表达的DNA序列。启动子DNA和编码DNA可以来自相同的基因或不同的基因，可以来自相同的生物体或不同的生物体。本发明的重组克隆载体通常包括一种或多种用于克隆或表达的复制系统、一种或多种用于在宿主中选择的标记(例如抗生素抗性)，以及一种或多种表达盒。
用于连接DNA序列的程序对本领域技术人员来说是众所周知的，例如参见以下描述(J.Sambrook et al.,"Molecular Cloning 2nd ed.",Cold Spring HarborLaboratory Press(1989))，这些程序例如为分别提供或编码用于本发明的因子和/或感兴趣的蛋白质、启动子、终止子以及其他序列，并将其插入至合适的载体中，该载体包含用于整合或宿主复制的必要信息。
宿主细胞具体理解为细胞、重组细胞或转染有表达构建体(例如根据本发明的载体)的细胞系。
本文所用术语“宿主细胞系”是指已建立的特定细胞类型的克隆，其已获得在长时间内内增殖的能力。术语宿主细胞系指用于表达内源或重组基因以生产多肽(例如本发明的重组抗体形式)的细胞系。
“生产宿主细胞”或“生产细胞”通常理解为以下细胞系或细胞培养物：其随时准备用于在生物反应器中培养以获得生产过程的产物(本发明的重组抗体形式)。根据本发明的宿主细胞类型可以是任何原核或真核细胞。
本文所用术语“重组”应指“通过基因工程制备”或“基因工程的结果”，例如具体采用异源序列并入重组载体或重组宿主细胞。
本发明的双特异性抗体可以使用任何已知的和已建立的表达系统和重组细胞培养技术来生产，例如通过在细菌宿主(原核系统)或真核系统(例如酵母、真菌、昆虫细胞或哺乳动物细胞)中表达。本发明的抗体分子可以在转基因生物体中生产，转基因生物体例如为山羊、植物或转基因小鼠、具有人免疫球蛋白基因座大片段并且小鼠抗体生产不足的工程化小鼠品系。抗体也可以通过化学合成生产。
根据具体实施例，宿主细胞是选自由以下组成的生产细胞系：CHO、PerC6、CAP、HEK、HeLa、NS0、SP2/0、杂交瘤和Jurkat。更具体地，宿主细胞由CHO细胞获得。
本发明的宿主细胞在无血清培养基中特异性培养或维持，该培养基例如包括其他成分，例如血浆蛋白、激素以及生长因子，以作为血清的替代物。
宿主细胞最优选在无血清条件下建立、适应，以及完全在无血清条件下培养，并且任选地在不含任何动物来源的蛋白质/多肽的培养基中培养。
可以使用标准蛋白质纯化方法从培养基中回收抗oxMIF/抗CD3抗体。
术语“药物制剂”是指以下制剂：该制剂的形式使得其中所含的活性成分的生物活性是有效的，并且不包含对施用该制剂的受试者来说具有不可接受毒性的额外组分。
“药学上可接受的载体”是指药物制剂中除活性成分外的对受试者无毒的成分。药学上可接受的载体的一些例子为水、盐水、磷酸缓冲盐、葡聚糖、甘油、乙醇等，以及以上物质的组合。在许多情况下，优选在组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇(例如甘露醇、山梨糖醇)或氯化钠。药学上可接受的物质的其他例子是润湿剂或少量辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲液，这些物质可提高抗体的保质期或有效性。
如本文所用，“治疗(treatment)”、“治疗(treat)”或“治疗(treating)”是指试图改变被治疗个体自然进程的临床干预，治疗可以在预防或在临床病理学过程中进行。治疗的理想效果包括但不限于预防疾病的发生或复发，减轻症状，减少疾病的任何直接或间接的病理后果，预防转移，降低疾病的发展速度，改善或缓解病情，缓解或改善预后。在一些实施例中，本发明的抗体用于延迟疾病的发展或减缓疾病的进展。
本发明的抗oxMIF/抗CD3抗体以及包括该抗体的药物组合物可以与一种或多种其他治疗剂、诊断剂或预防剂组合施用。额外的治疗剂包括其他抗肿瘤剂、抗癌药物、抗血管生成剂、化疗药物、类固醇或检查点抑制剂，这取决于待治疗的疾病。
本发明的药物组合物可以是多种形式，例如液体、半固体和固体剂型，例如液体溶液(例如可注射和可输注的溶液)、分散体或混悬剂、片剂、丸剂、粉剂、脂质体以及栓剂。优选的形式取决于预期的施用方式和治疗应用。典型的优选组合物是可注射或可输注溶液的形式，例如类似于用于人类被动免疫的那些组合物。优选的施用方式是肠胃外(例如静脉内、皮下、腹腔内、肌肉内)。在优选实施例中，抗体通过静脉输注或注射施用。在另一个优选实施例中，抗体通过肌肉内或皮下注射施用。如本领域技术人员可理解的，施用途径和/或方式将根据所需结果而变化。
抗oxMIF/抗CD3抗体可以施用一次，但更优选施用多次。例如，该抗体可以从每天施用三次至每六个月或更长时间施用一次。该施用可以按时间表进行，例如每天三次、每天两次、每天一次、每两天一次、每三天一次、每周一次、每两周一次、每月一次、每两个月一次、每三个月一次、每六个月一次。
本文所用术语“癌症”是指增殖性疾病，具体是实体癌，例如结肠直肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肺癌、黑色素瘤、鳞状细胞癌(SCC)(例如，头颈癌、食道癌和口腔癌)、肝细胞癌、结直肠腺癌、肾癌、甲状腺髓样癌、甲状腺乳头状癌、星形细胞瘤、神经母细胞瘤、尤文氏肉瘤、宫颈癌、子宫内膜癌、乳腺癌、前列腺癌以及恶性精原细胞瘤，包括上述癌症中的任何难治型，或上述癌症中的一种或多种的组合。
细胞表达oxMIF的检测可以用本文所述的抗体进行，所述抗体被标记以便可以检测oxMIF的特异性表达。可以根据本领域熟知的方法进行抗体标记。此类标签可以为但不限于放射性同位素、荧光标签、化学发光标签、酶标签以及生物发光标签。
本发明还包括以下项目：
1.抗oxMIF/抗CD3抗体或其抗原结合片段，其选自由以下组成的组：
IgG，其中scFv仅与两条重链中的一条融合，
IgG，其中一个Fab臂被双特异性T细胞接合剂(BiTE)替代，以及
IgG，其中两个Fab臂均被具有不同结合特异性的scFv替代，
其包括至少一个特异性识别oxMIF的结合位点和一个特异性识别CD3的结合位点，
以及其中该特异性识别oxMIF的位点包括：
(a)重链可变区，其包括：
CDR1-H1序列，其与选自由SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO19、SEQ ID NO 26组成的组中的任何序列具有至少70％的序列同一性，以及
CDR2-H1序列，其与选自由SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 8、SEQ ID NO 14、SEQ ID NO20、SEQ ID NO 27组成的组中的任何序列具有至少70％的序列同一性，以及
CDR3-H1序列，其与选自由SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO21组成的组中的任何序列具有至少70％的序列同一性，以及
(b)轻链可变区，其包括：
CDR1-L1序列，其与选自由SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 16、SEQ IDNO22、SEQ ID NO 28、SEQ ID NO 138组成的组中的任何序列具有至少70％的序列同一性，以及
CDR2-L1序列，其与选自由SEQ ID NO 5、SEQ ID NO 11、SEQ ID NO 17、SEQ IDNO23、SEQ ID NO 25组成的组中的任何序列具有至少70％的序列同一性，以及
CDR3-L1序列，其与选自由SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 18、SEQ IDNO24组成的组中的任何序列具有至少70％的序列同一性。
2.第1项的抗oxMIF/抗CD3抗体，其中IgG识别oxMIF，scFv识别CD3，该抗体还包括连接CD3轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)的肽接头。
3.第1项的抗oxMIF/抗CD3抗体，其中IgG Fab臂识别oxMIF，双特异性T细胞接合剂识别oxMIF和CD3，该抗体还包括连接VL和VH链的肽接头。
4.第1项的抗oxMIF/抗CD3抗体，其中两个Fab臂均被scFv替代，其中一个scFv靶向oxMIF，另一个scFv靶向CD3，该抗体还包括连接VL和VH链的肽接头。
5.第1项至第4项中任一项的抗oxMIF/抗CD3抗体，其在以下每个CDR序列中包括0、1或2个点突变：
CDR1-H1序列，其选自由SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO19、SEQ ID NO 26组成的组，以及
CDR2-H1序列，其选自由SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 8、SEQ ID NO 14、SEQ ID NO20、SEQ ID NO 27组成的组，以及
CDR3-H1序列，其选自由SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 21组成的组，以及
CDR1-L1序列，其选自由SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 16、SEQ ID NO22、SEQ ID NO 28、SEQ ID NO 138组成的组，以及
CDR2-L1序列，其选自由SEQ ID NO 5、SEQ ID NO 11、SEQ ID NO 17、SEQ ID NO23、SEQ ID NO 25组成的组，以及
CDR3-L1序列，其选自由SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO24、SEQ ID NO 153组成的组。
6.根据第1项至第4项中任一项所述的抗oxMIF/抗CD3抗体，其中特异性识别CD3的结合位点包括：
(a)重链可变区，其包括：
CDR1-H2序列，其与选自由SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 92组成的组中的任何序列具有至少70％的序列同一性，以及
CDR2-H2，其与选自由SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 93组成的组中的任何序列具有至少70％的序列同一性，以及
CDR3-H2，其与选自由SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO149组成的组中的任何序列具有至少70％的序列同一性，以及
(b)轻链，其包括：
CDR1-L2，其与选自由SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 95组成的组中的任何序列具有至少70％的序列同一性，以及
CDR2-L2，其与选自由SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 96组成的组中的任何序列具有至少70％的序列同一性，以及
CDR3-L2，其与选自由SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO97、SEQ ID NO 151组成的组中的任何序列具有至少70％的序列同一性。
7.根据第1项至第6项中任一项的抗oxMIF/抗CD3抗体，其在以下每个CDR序列中包括0、1或2个点突变：
CDR1-H2序列，其选自由SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 92组成的组，及
CDR2-H2序列，其选自由SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 93组成的组，及
CDR3-H2序列，其选自由SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO149组成的组，以及
CDR1-L2序列，其选自由SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO95组成的组，以及
CDR2-L2序列，其选自由SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO96组成的组，以及
CDR3-L2序列，其选自由SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO97、SEQ ID NO 151组成的组。
8.根据第1项至第7项中任一项的抗oxMIF/抗CD3抗体，其包括序列SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 8、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 11、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 149、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84和SEQ ID NO 151。
9.根据第1项至第8项中任一项的抗oxMIF/抗CD3抗体，其中特异性识别oxMIF的结合位点包括重链可变区和轻链可变区，该重链可变区与氨基酸序列SEQ ID NO 158具有至少70％，优选至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，更优选至少99.5％的序列同一性，该轻链可变区与氨基酸序列SEQ ID NO 134具有至少70％，优选至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，更优选至少99.5％的序列同一性。
10.根据第1项至第9项中任一项的抗oxMIF/抗CD3抗体，其中特异性识别CD3的结合位点包括重链可变区和轻链可变区，该重链可变区与氨基酸序列SEQ ID NO 135具有至少70％，优选至少80％，优选至少90％，更优选至少95％的序列同一性，该轻链可变区与氨基酸序列SEQ ID NO 136具有至少70％，优选至少80％，优选至少90％，更优选至少95％的序列同一性。
11.根据第1项至第10项中任一项的抗oxMIF/抗CD3抗体，其包括氨基酸序列SEQID NO 159、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 160、SEQ ID NO 161、SEQ ID NO162、SEQ ID NO 163，或者与氨基酸序列SEQ ID NO 159、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 160、SEQ ID NO 161、SEQ ID NO 162、SEQ ID NO 163中的任一个具有至少85％、90％，具体至少95％，具体至少99％序列同一性的氨基酸序列。
12.药物组合物，其包括第1项至第11项的抗oxMIF/抗CD3抗体以及药学上可接受的载体或赋形剂。
13.根据第1项至第11项中任一项的抗oxMIF/抗CD3抗体或权利要求12的药物组合物，其用于治疗癌症，具体为用于治疗结直肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肺癌。
14.根据第1项至第11项中任一项的抗oxMIF/抗CD3抗体用作药物。
15.分离的核酸分子，其编码根据第1项至第11项中任一项的抗oxMIF/抗CD3抗体。
16.表达载体，其包括第15项的核酸分子。
17.宿主细胞，其包括根据第18项的载体。
18.制备根据第1项至第11项中任一项的抗oxMIF/抗CD3抗体的方法，其包括在宿主细胞中表达编码抗体的核酸。
19.检测细胞表达oxMIF的体外方法，该方法包括：使包括待测人类细胞的生物样品与根据第1项至第11项中任一项的抗oxMIF/抗CD3抗体接触；检测所述抗体的结合；其中所述抗体的结合表明细胞上存在oxMIF，从而检测细胞是否表达oxMIF。
20.第21项的体外方法，其中该生物样品包括完整的人类细胞、组织、活检探针或感兴趣细胞的膜组分。
21.第19项或第20项的体外方法，其中该抗oxMIF/抗CD3抗体用可检测标签进行标记，该可检测标签选自由以下组成的组：放射性同位素、荧光标记、化学发光标记、酶标记以及生物发光标签。
22.根据第1项至第11项中的抗oxMIF/抗CD3抗体，其用于诊断癌症，该癌症在受试者中表达oxMIF，其中该抗体与可检测标签结合。
参考以下实施例将更充分地理解前述描述。然而，这些实施例仅代表实施本发明的一个或多个实施例的方法，不应理解为限制本发明的范围。
实施例
实施例1：
双特异性抗体的生化表征
该抗oxMIF/抗CD3抗体按以下描述的方法进行检测以确保其质量和功能。
1)同一性：方法：通过电喷雾电离MS(ESI-MS)
2)分子完整性：方法：SEC多角度光散射(SEC MALS)
3)纯度：方法：聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)
4)结合和亲和力：方法：酶联免疫吸附测定(ELISA)、大分子相互作用分析(Biacore)、流式细胞术(FACS)，具体如下所述：
ELISA根据Thiele M.et al.,2015,J Immunol 2015；195:2343-2352：为了确定对oxMIF的特异性，将抗oxMIF/抗CD3抗体包被到微孔板中，并与重组MIF(对照)、oxMIF或用DTT还原的oxMIF(对照)一起孵育。用兔抗MIF抗体和山羊抗兔IgG-HRP偶联物检测捕获的MIF或oxMIF。板用3,3',5,5'-四甲基联苯胺染色。为了确定对CD3的特异性，将抗oxMIF/抗CD3抗体包被到微孔板中，并与重组人类CD3-ε蛋白一起孵育。用兔抗CD3抗体和山羊抗兔IgG-HRP偶联物检测捕获的CD3。板用3,3',5,5'-四甲基联苯胺染色。
表面等离子共振(SPR，Biacore))根据Hoellriegl et al.,Eur JPharmacol.2018Feb5；820:206-216：抗oxMIF/抗CD3(抗oxMIF/CD3)双特异性抗体的结合亲和力和动力学常数通过使用抗体捕获形式(捕获在传感器芯片上的抗oxMIF/CD3双特异性抗体)或抗原捕获形式(捕获在传感器芯片上的重组MIF或重组CD3(ε、δ或γ链))的表面等离子共振来确定。在T200 Biacore仪器上进行测量。
具体地，使用标准胺偶联条件将抗oxMIF/抗CD3抗体或非结合的对照抗体固定在Biacore CM5光学传感器芯片(GE Healthcare,Piscataway,NJ)上。重组MIF在HBS-EP缓冲液(GE Healthcare)中稀释至以下浓度：50、75、100、150nM，该缓冲液中含有0.2％Proclin300(活性成分5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮；Sigma)以使MIF转化为oxMIF的替代形式(Thiele M.et al.,2015,J Immunol 2015；195:2343-2352)。Proclin300处理的MIF应用于固定化的抗oxMIF/抗CD3抗体，并用BiacoreTM 3000仪器(GE Healthcare)测量亲和力。浓度梯度的动力学通过对每条结合曲线的局部同时关联/解离拟合至迭代Langmuir 1:1相互作用模型来进行分析，其中传质补偿由BiaEvaluation软件(GE Healthcare)提供。
FACS：oxMIF阳性的癌细胞(例如PC3或A2780)与抗oxMIF/抗CD3双特异性抗体或对照抗体一起孵育。未标记的抗体用R-PE标记的山羊抗人IgG抗体(来自Sigma)检测。在FACSCanto II(BD Biosciences)上获取数据。
实施例2：
生物分布以及PK研究
抗oxMIF/抗CD3抗体的生物分布以及药代动力学(PK)通过PET成像确定。双特异性抗oxMIF/抗CD3抗体被标记，并且在携带皮下SKOV-3肿瘤或其他合适细胞系的SCID小鼠中测定该蛋白质在肿瘤、循环以及主要器官中的药代动力学。
探索性的PD研究
1)异种移植NOD/SCID SKOV-3模型：在NOD/SCID SKOV-3(应用于卵巢癌的人类淋巴细胞)异种移植小鼠模型中测定抗oxMIF/抗CD3双特异性抗体的剂量反应曲线(Xing,J.,et al.,Translational Oncology(2017)10,780–785)。
简而言之，将新鲜培养的SKOV-3细胞(1×106个)与新鲜分离的人PBMC(5×106个)混合于200μl的体积中，将其共同皮下移植入5周龄雄性NOD/SCID小鼠的右侧。肿瘤细胞注射后两小时，每3天通过腹腔注射抗oxMIF/抗CD3抗体来处理小鼠。抗oxMIF/抗CD3双特异性抗体以6个剂量进行施用，各自的对照双特异性抗体以最高剂量施用。将小鼠称重并使用卡尺每周2次测量肿瘤的生长。肿瘤体积计算为1/2(长×宽2)。
作为可选方案，通过生物发光监测抗oxMIF/抗CD3抗体的PD。简而言之，在第0天，30只5周龄NSG小鼠(The Jackson Laboratory)，每只腹腔内(ip)给予1×106个IGROV1-ffluc(萤火虫荧光素酶标记的人卵巢癌细胞)。在第2天，对这些动物腹腔注射150mg/kg的D-荧光素(15mg/mL的储备溶液；Biosynth)并按平均生物发光分为5组，每组6只动物。在第6天，对每只动物(除了未处理组)腹腔注射1×107个从健康供体PBMC扩增的原代T细胞，1小时后，注射4种不同剂量的抗oxMIF/CD3抗体或只注射PBS。每天重复腹腔注射，共10次(第6至第15天)。每3-4天，在ip注射150mg/kg D-荧光素后5分钟通过生物发光成像监测肿瘤生长。每1-4天测量一次小鼠的体重。
2)原发性卵巢人类异种移植模型：抗oxMIF/抗CD3双特异性抗体基本上如Schleret B.et al.,Cancer Res 2005；65(7):2882-9中所述进行测试。
简而言之，经病理证实的卵巢癌患者手术切除腹腔转移后，将原发性肿瘤样本切成50至100mm3的立方体并皮下移植入NOD/SCID小鼠中。用抗oxMIF/抗CD3双特异性抗体形式或对照抗体通过静脉注射(i.v.)处理动物。抗oxMIF/抗CD3双特异性抗体以3个剂量施用，各自的对照以最高剂量施用。使用卡尺每周2次在两个垂直维度上测量肿瘤大小，并根据肿瘤体积＝[(宽2×长)/2]计算肿瘤体积。
作为可选方案：从健康供体的肝素化新鲜全血中分离出1×106个人类PBMC，将其与5×105个原发性肿瘤起始细胞(TIC)混合，最终体积为200μl。将PBMC效应器/靶点细胞混合物(E:T为2:1)皮下注射入每只NOD/SCID小鼠的右侧。小鼠在接种3种不同剂量2小时后开始用抗oxMIF/CD3抗体或PBS对照载体进行静脉内处理。
为了通过用抗oxMIF/CD3抗体处理来消除NOD/SCID小鼠中建立的肿瘤，将5×106个TIC和1×107个人类PBMC的混合物接种入每组5只NOD/SCID小鼠中以允许实体瘤的形成。在第4天肿瘤建立后，在PBMC存在下用三种不同剂量的抗oxMIF/CD3抗体或用载体对照对小鼠进行静脉内处理14天。
实施例3：
实施例中使用的抗体的概述。图2示意性地描述了各个形式。
C0061(与Fc融合的抗oxMIF的Fab以及抗oxMIF/抗CD3的BiTE；Fab-BiTE-Fc)：
多肽1：
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIYSMNWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGGTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGSQWLYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO 159)
多肽2：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQRIMTYLNWYQQKPGKAPKLLIFVASHSQSGVPSRFRGSGSETDFTLTISGLQPEDSATYYCQQSFWTPLTFGGGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIYSMNWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGGTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGSQWLYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGQGLEWMGYINPSRGYTNYNQKFKDRVTLTTDKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARYYDDHYSLDYWGQGTLVTVSSGGSGGSGGSGGSGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQKPGKAPKRLIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLEIKGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO 137)多肽3：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQRIMTYLNWYQQKPGKAPKLLIFVASHSQSGVPSRFRGSGSETDFTLTISGLQPEDSATYYCQQSFWTPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQID NO 140)
C0062(与Fc融合的抗oxMIF的scFv以及抗CD3的scFv；scFv(oxMIF)-scFv(CD3)-Fc；(scFv)2-Fc)：
多肽1：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQRIMTYLNWYQQKPGKAPKLLIFVASHSQSGVPSRFRGSGSETDFTLTISGLQPEDSATYYCQQSFWTPLTFGGGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIYSMNWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGGTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGSQWLYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKASAWSHPQFEK(SEQ ID NO 160)
多肽2：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGQGLEWMGYINPSRGYTNYNQKFKDRVTLTTDKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARYYDDHYSLDYWGQGTLVTVSSGGSGGSGGSGGSGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQKPGKAPKRLIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLEIKGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKAAAHHHHHH(SEQ ID NO 161)
C0086(完整的抗oxMIF的IgG，其具有单一个与重链融合的抗CD3的scFv；IgG1-scFv融合蛋白；IgG-scFv)
多肽1：
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIYSMNWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGGTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGSQWLYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGQGLEWMGYINPSRGYTNYNQKFKDRVTLTTDKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARYYDDHYSLDYWGQGTLVTVSSGGSGGSGGSGGSGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQKPGKAPKRLIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO 162)
多肽2：
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIYSMNWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGGTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGSQWLYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO 163)
多肽3：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQRIMTYLNWYQQKPGKAPKLLIFVASHSQSGVPSRFRGSGSETDFTLTISGLQPEDSATYYCQQSFWTPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQID NO 140)
C0107(与Fc融合的抗oxMIF的Fab以及抗oxMIF/抗CD3的BiTE；Fab-BiTE-Fc)：
多肽1：
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYAMDWVRQAPGKGLEWVSGIYPSGGRTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVNVIAVAGTGYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPK(SEQ ID NO 194)
多肽2：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQRIMTYLNWYQQKPGKAPKLLIFVASHSQSGVPSRFRGSGSETDFTLTISGLQPEDSATYYCQQSFWTPLTFGGGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIYSMNWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGGTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGSQWLYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGQGLEWMGYINPSRGYTNYNQKFKDRVTLTTDKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARYYDDHYSLDYWGQGTLVTVSSGGSGGSGGSGGSGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQKPGKAPKRLIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLEIKGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO 137)多肽3：
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQGVSSSSLAWYQQKPGQAPRLLIYGTSSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGRSLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ IDNO 195)
C0111(与Fc融合的抗oxMIF的Fab以及抗oxMIF/抗CD3的BiTE；Fab-BiTE-Fc)：
多肽1：
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIYSMNWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGGTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGSQWLYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO 196)
多肽2：
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIYSMNWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGGTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGSQWLYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQRIMTYLNWYQQKPGKAPKLLIFVASHSQSGVPSRFRGSGSETDFTLTISGLQPEDSATYYCQQSFWTPLTFGGGTKVEIKSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO 197)
多肽3
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQRIMTYLNWYQQKPGKAPKLLIFVASHSQSGVPSRFRGSGSETDFTLTISGLQPEDSATYYCQQSFWTPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQID NO 140)
实施例4：oxMIF-CD3桥接ELISA
将PBS中1μg/ml的重组人类MIF固定在微孔板中(根据Thiele M.et al.,2015,JImmunol 2015；195:2343-2352将MIF转化为oxMIF)。封闭后，将双特异性抗体以4μg/ml的浓度添加到板中。加入梯度稀释的FLAG标记的靶点CD3-ε-δ-Fc融合蛋白，并使用单克隆鼠抗FLAG标记-HRP偶联物检测结合的CD3。在450nM下测量OD。
图3显示了双特异性抗体C0061和C0062与oxMIF和CD3的同时结合。
图3显示了抗oxMIF双特异性抗体C0061和C0062与oxMIF和CD3的同时结合。抗oxMIF单特异性抗体C0008用作阴性对照。
实施例5：与oxMIF的结合(ELISA)
将在PBS中稀释的重组人类MIF(1μg/ml)固定在微孔板中(根据Thiele M.et al.,2015,J Immunol 2015；195:2343-2352将MIF转化为oxMIF)。封闭后，将不同浓度的双特异性抗体添加到板中。使用蛋白质L-HRP偶联物检测结合的双特异性抗体。通过添加3 3′5 5′四甲基联苯胺(TMB)使板显色，并用H2SO4终止显色反应。在450nM下测量OD。
图4描绘了ELISA中抗oxMIF/CD3双特异性抗体C0061和C0062与固定化MIF(oxMIF)结合的结合曲线。单特异性抗oxMIF抗体C0008用作oxMIF结合的阳性对照。结合曲线的EC50值通过4参数拟合计算，该EC50值反映了粗略的KD估计值。实验以三个平行试验进行，平均的EC50值显示在表5中。
表5：双特异性抗体的EC50值(ELISA)：
实体 <![CDATA[EC<sub>50</sub>(nM)]]>
C0061 0.9
C0062 24.7
C0008 0.6
实施例6：C0061和C0062活化T细胞
T细胞活化生物测定根据Promega(普洛麦格公司)产品J1621的技术手册来进行，该产品通过使用基因工程化Jurkat T细胞(效应细胞)来进行测定，该细胞表达由NFAT反应元件驱动的荧光素酶报告基因。
图5显示了抗oxMIF/CD3双特异性抗体C0061和C0062对T细胞的活化。抗oxMIF单特异性抗体C0008用作对照。
实施例7：PBMC介导的肿瘤细胞杀伤
将CFSE(羧基荧光素琥珀酰亚胺酯)染色的HCT116人结肠直肠癌细胞接种于96孔平底板中。PBMC分离自从健康人类供体血液。将梯度稀释的抗oxMIF/CD3双特异性抗体与PBMC一起添加到肿瘤细胞中并孵育22小时(效应物与靶点细胞的比率：2.5:1)。除去培养基(包含PBMC)。对贴壁细胞进行胰蛋白酶处理，用死亡细胞染色试剂(SytoxTM)染色，并通过流式细胞术进行分析，从而计算对染色癌细胞的特异性杀伤。
在抗oxMIF/CD3双特异性构建体C0061和C0062的存在下，对HCT116人结肠癌细胞，PBMC介导的肿瘤细胞杀伤如图6所示。抗oxMIF单特异性抗体C0008用作对照。使用来自5个不同供体的PBMC重复该实验，计算特异性细胞杀伤(相对于总癌细胞的百分比)的平均值和标准偏差，并对应抗体浓度作图。
实施例8：C0086和C0107的oxMIF-CD3桥接ELISA
双特异性抗体C0086和C0107与oxMIF和CD3的同时结合按照实施例4所述进行测定，其中FLAG标记的CD3ε/δ-Fc融合蛋白的浓度如图7所示。
结果：从图7中明显看出，两种分子C0086和C0107都能够同时与oxMIF和CD3结合。
图7显示了抗oxMIF/CD3双特异性抗体C0086和C0107与oxMIF和CD3的同时结合。抗oxMIF单特异性抗体C0008用作阴性对照。
实施例9：与固定化oxMIF的结合(ELISA)
通过实施例5描述的ELISA来测定抗oxMIF/CD3双特异性抗体C0086和C0107与固定化MIF(oxMIF)的结合。单特异性抗oxMIF抗体C0008用作oxMIF结合的阳性对照，并且将在该抗体的最高浓度下获得的信号设置为100％，以标准化来自不同实验的数据集。
结果：从图8中明显看出，两种抗oxMIF/CD3双特异性抗体C0086和C0107都显示出与oxMIF相当的结合，二者在整个抗体浓度范围内获得了相似的结合曲线。
图8显示了在ELISA中，抗oxMIF/CD3双特异性抗体C0086和C0107与固定化的oxMIF的结合。抗oxMIF单特异性抗体C0008用作阳性对照。
实施例10：抗oxMIF/CD3双特异性抗体C0061、C0062、C0086、C0107对oxMIF或redMIF的差异性结合。
针对oxMIF的二价抗体和亚型对照抗体在4℃下以15nM的浓度在微孔板中固定过夜。针对oxMIF的单价分子以30nM的浓度固定。封闭后，将孔与50ng/ml的redMIF或oxMIF替代品NTB-MIF一起孵育(Schinagl et al.,2018)。用生物素化的多克隆兔抗MIF抗体和链霉亲和素-HRP偶联物(图9A)或非生物素化的多克隆兔抗MIF抗体和山羊抗兔-HRP偶联物(图9B)检测捕获的oxMIF。用四甲基联苯胺(TMB)对板进行染色，并通过添加30％H2SO4终止显色反应。在450nm下测量OD。
结果：结果清晰显示抗oxMIF/CD3双特异性抗体C0061、C0062、C0086以及C0107与oxMIF结合，但未检测到与redMIF的结合。因此，抗体保留了区分oxMIF和redMIF的能力(图9A和B)。两次或三次独立实验的平均值如图所示。
图9显示了抗oxMIF/CD3双特异性抗体(A)C0061、C0062、C0086以及(B)C0107与oxMIF或redMIF的差异性结合。Imalumab(C0008)用作参考抗体，非特异性亚型IgG作为阴性对照。
实施例11：双特异性抗体与在Jurkat T细胞上表达的天然CD3的结合。
将表达功能性CD3的CD3阳性(CD3+)Jurkat T细胞(ATCC,TIB-152)和缺乏CD3表达的CD3阴性(CD3-)Jurkat T细胞(ATCC,TIB-153)与浓度为33nM的双特异性抗体或C0008(抗oxMIF单特异性对照抗体)进行孵育，或仅使用二抗(对照)进行孵育。通过山羊抗人IgG(H+L)Alexa-Fluor 488偶联物(二抗)检测结合的抗体。Fixable Viability Dye eFluorTM 780(标记死亡细胞的活性染料)用于排除死亡细胞，并通过FACS分析样品。使用FlowJow软件分析数据，并显示染色活细胞的平均荧光强度(MFI)。
结果：图10明显显示了抗oxMIF/CD3双特异性抗体特异性结合在活Jurkat T细胞上表达的天然CD3，而在缺乏CD3表达的Jurkat T细胞上仅检测到背景染色。背景染色是通过测量仅用二抗染色的细胞来确定的。没有进一步观察到与单特异性抗oxMIF抗体(C0008)的结合。
图10显示了抗oxMIF/CD3双特异性抗体与在CD3阳性Jurkat T细胞上表达的天然CD3的特异性结合，而在CD3阴性Jurkat T细胞上仅检测到背景染色。单特异性抗oxMIF抗体C0008用作阴性对照。
实施例12：在靶点细胞存在下由抗oxMIF/CD3双特异性抗体活化的人类T细胞的IL-2分泌
在HCT116癌细胞存在或不存在的情况下，用oxMIF/CD3双特异性抗体C0061或抗oxMIF单特异性抗体C0008处理(浓度范围为0.01nM-10nM)从健康供体分离的人类PBMC(效应细胞与靶点细胞的比率为2.5:1)。在37℃下孵育24小时后，收集上清液，并使用基于LEGENDplex珠的免疫测定法(BioLegend)评估白细胞介素-2(IL-2)的浓度。
结果：IL-2由T细胞分泌，表明肿瘤细胞结合后T细胞活化。图11A表明T细胞通过C0061与HCT116肿瘤细胞交联而被活化，导致IL-2显著释放到细胞培养上清液中。在没有癌细胞的情况下，与C0061孵育的T细胞显示出大约10倍减少的IL-2分泌。无论是在癌细胞不存在还是在癌细胞存在的情况下，用作阴性对照的抗oxMIF单特异性抗体C0008没有诱导T细胞分泌任何IL-2(图11B)。数据显示为四个不同PBMC供体的平均值+/-SEM。
图11显示了在人类HCT116靶点细胞存在或不存在的情况下，由抗oxMIF/CD3双特异性抗体C0061活化的人类T细胞的IL-2分泌。
实施例13：对HCT116和A2780癌细胞(其中oxMIF在细胞表面的呈现增加)的PBMC介导肿瘤细胞杀伤。
A2780和HCT116细胞用HaloTag-HiBiT质粒(Promega#CS1956B17)转染，用杀稻瘟素(blasticidin)进行筛选并分类为细胞池。然后稳定的HiBiT表达细胞系用MIF-pDisplay质粒(Invitrogen)转染，用遗传霉素(geneticin)进行筛选，并分选以产生稳定表达细胞内HiBiT和膜锚定单体oxMIF的细胞系(称为A2780-HiBiT-pMIF和HCT116-HiBiT-pMIF)，即MIF以非天然的单体状态展示，这使得抗oxMIF抗体可接近该表位(Schinagl et al.,Biochemistry2018)。这些细胞系在细胞表面显示出增加的oxMIF呈现，因此是一种更灵敏的体外分析工具。
将A2780-HiBiT-pMIF或HCT116-HiBiT-pMIF细胞接种到96孔板中并使其贴壁过夜。在存在(浓度范围为0.001-100nM)或不存在抗oxMIF/CD3双特异性抗体或单特异性抗oxMIF抗体C0008的情况下，以效应物与靶点细胞的比率为2.5:1(A2780)或10:1(HCT116)加入从健康供体(n＝3)分离的PBMC。孵育24小时后，加入Nano-Glo HiBiT细胞外检测试剂(Promega#N2421)，并在Tecan读板器上测量发光信号。
结果：图12显示使用呈现oxMIF的人结肠癌细胞HCT116(图12A)和人卵巢癌细胞A2780(图12B)作为靶点细胞，由抗oxMIF/CD3双特异性抗体C0061、C0062、C0086以及C0107诱导的PBMC介导的肿瘤细胞杀伤。单特异性抗oxMIF抗体C0008用作对照以确定非特异性PBMC介导的癌细胞裂解。PBMC介导的癌细胞裂解(对于总癌细胞的百分比)表示为平均值+/-SEM，并对应抗体浓度作图。
图12：对呈现oxMIF的结肠癌细胞HCT116(A)和人卵巢癌细胞A2780(B)，由抗oxMIF/CD3双特异性抗体诱导的PMBC介导的肿瘤细胞杀伤。抗oxMIF单特异性抗体C0008用作阴性对照。
实施例14：C0061在NSG小鼠循环中的药代动力学(PK)。
在NSG小鼠中研究了C0061静脉注射后的药代动力学。NSG小鼠分别接受单次静脉内剂量为20、10或3mg/kg的C0061。4、10、24、48、72小时后，使用包覆K3-EDTA的采样管(K3-EDTA-coated
Figure BDA0003750713290000401
)通过尾静脉穿刺收集20μl血液，并转移至包含60μl PBS的包覆K3-EDTA的采样瓶(K3-EDTA-coated vial)中。离心后，使用上清液(＝1:4稀释的血浆)通过ELISA测定C0061浓度。简而言之，将在PBS中以1μg/ml稀释的重组人类MIF在4℃下于ELISA板中固定过夜(根据Thiele et al.,2015将MIF转化为oxMIF)。用2％鱼明胶/TBST封闭后，将稀释的小鼠血浆(1:100-1:10,000)添加到板中。通过将C0061(0.05-100ng/ml)的梯度稀释液添加到板中来获得标准曲线。最后，使用山羊抗人Fc-HRP偶联物和四甲基联苯胺(TMB)作为底物检测结合的C0061。用3M H2SO4终止显色反应，并在450nm下测量OD。使用GraphPadPrism的双曲线拟合，通过非线性回归从C0061标准曲线计算小鼠血浆中C0061的浓度。将所得数据拟合到GraphPad Prism中描述双指数衰减的方程，以确定C0061在NSG小鼠中的初始和终末半衰期。
结果：C0061的药代动力学曲线显示出预期的双指数衰减，初始半衰期为3小时，终末半衰期为30小时(图13)。此外，测得的C0061血浆浓度随着抗体剂量线性增加。
图13显示了静脉注射NSG小鼠后，C0061在小鼠循环中的药代动力学(PK)。
实施例15：抗oxMIF/CD3双特异性抗体C0061在携带CALU-6肺癌的NSG小鼠中的生物分布。
在携带人肺癌细胞系CALU-6皮下肿瘤的NSG小鼠异种移植模型中研究抗oxMIF/CD3双特异性抗体C0061的生物分布。雌性NSG小鼠接受单侧皮下注射含有5×106个CALU-6细胞的PBS(100μl/动物)。在达到150-300mm3的个体肿瘤体积后，将小鼠分配到处理组并接受单次静脉内剂量为5mg/kg的IRDye 800CW(红外染料)标记的C0061。两只未处理的小鼠作为“无信号”对照。
根据制造商的说明用IRDye 800CW标记C0061，使用购自LI-COR Biosciences的IRDye 800CW蛋白质标记试剂盒-高分子量(the IRDye 800CW Protein labelling kit-high MW)。在标记过程之后以及将标记抗体注射到小鼠体内之前，使用Nanodrop(微量分光光度计)技术测定IRDye 800CW标记抗体的蛋白质浓度和标记效率，并根据标记后的蛋白质浓度对小鼠进行给药。在施用标记抗体后的以下时间点：给药后1小时、6小时、24小时、48小时、72小时、96小时、168小时，在LI-COR
Figure BDA0003750713290000411
Trilogy成像装置中进行体内成像。
结果：确定了静脉内施用的800CW标记C0061的清晰肿瘤内分布(图14A)，在24小时达到峰值信号，肿瘤内的保留长达7天。这清晰地证明了C0061在肿瘤中的积累和保留，这是通过其CD3结合部分将细胞毒性T细胞募集到肿瘤的前提条件。在未处理的对照小鼠中未检测到信号(图14B)。
图14通过对携带皮下CALU-6肿瘤小鼠的体内红外成像，显示了C0061的肿瘤穿透和积累。在注射IRDye 800CW标记抗体后的1小时、6小时、24小时、48小时、72小时、96小时、168小时拍摄照片。A：接受IRDye 800CW标记的C0061(5mg/kg)的小鼠；B：未处理的对照小鼠；A和B的比例尺相同。
序列表
<110> 翁科奥内研发有限责任公司
<120> 抗oxMIF/抗CD3双特异性抗体构建体
<130> P22JM1WN00376AT
<150> EP19214037.4
<151> 2019－12－06
<160> 197
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR1 (CDR1-H1)
<400> 1
Ile Tyr Thr Met Asp
1               5
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR2 (CDR2-H1)
<400> 2
Tyr Ile Ser Pro Ser Gly Gly Asn Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210> 3
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR3 (CD3-H1)
<400> 3
Arg Gln Tyr Val Leu Arg Tyr Phe Asp Trp Ser Ala Asp Ala Phe Asp
1               5                   10                  15
Ile
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR1 (CDR1-L1)
<400> 4
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1               5                   10
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR2 (CDR2-L1)
<400> 5
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1               5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR3 (CDR3-L1)
<400> 6
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Trp Thr
1               5
<210> 7
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR1 (CDR1-H1)
<400> 7
Ile Tyr Ser Met Asn
1               5
<210> 8
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR2 (CDR2-H1)
<400> 8
Ser Ile Gly Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210> 9
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR3 (CD3-H1)
<400> 9
Ser Gln Trp Leu Tyr Gly Met Asp Val
1               5
<210> 10
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR1 (CDR1-L1)
<400> 10
Arg Ser Ser Gln Arg Ile Met Thr Tyr Leu Asn
1               5                   10
<210> 11
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR2 (CDR2-L1)
<400> 11
Val Ala Ser His Ser Gln Ser
1               5
<210> 12
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR3 (CDR3-L1)
<400> 12
Gln Gln Ser Phe Trp Thr Pro Leu Thr
1               5
<210> 13
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR1 (CDR1-H1)
<400> 13
Lys Tyr Tyr Met Ile
1               5
<210> 14
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR2 (CDR2-H1)
<400> 14
Trp Ile Gly Pro Ser Gly Gly Phe Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210> 15
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR3 (CD3-H1)
<400> 15
Gly Thr Pro Asp Tyr Gly Gly Asn Ser Leu Asp His
1               5                   10
<210> 16
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR1 (CDR1-L1)
<400> 16
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Tyr Leu Ser
1               5                   10
<210> 17
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR2 (CDR2-L1)
<400> 17
Ala Thr Ser Arg Leu Gln Ser
1               5
<210> 18
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR3 (CDR3-L1)
<400> 18
Gln Gln Thr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
1               5
<210> 19
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR1 (CDR1-H1)
<400> 19
Ile Tyr Ala Met Asp
1               5
<210> 20
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR2 (CDR2-H1)
<400> 20
Gly Ile Val Pro Ser Gly Gly Phe Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210> 21
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR3 (CD3-H1)
<400> 21
Val Asn Val Ile Ala Val Ala Gly Thr Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met
1               5                   10                  15
Asp Val
<210> 22
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR1 (CDR1-L1)
<400> 22
Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Ser Ser Leu Ala
1               5                   10
<210> 23
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR2 (CDR2-L1)
<400> 23
Gly Thr Ser Ser Arg Ala Thr
1               5
<210> 24
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR3 (CDR3-L1)
<400> 24
Gln Gln Tyr Gly Arg Ser Leu Thr
1               5
<210> 25
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR2 (CDR2-L1)
<400> 25
Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1               5
<210> 26
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR1 (CDR1-H1)
<400> 26
Trp Tyr Ala Met Asp
1               5
<210> 27
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR2 (CDR2-H1)
<400> 27
Gly Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Arg Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210> 28
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR1 (CDR1-L1)
<400> 28
Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Ser Ser Leu Ala
1               5                   10
<210> 29
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR1
<400> 29
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
            20                  25                  30
<210> 30
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR2
<400> 30
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1               5                   10
<210> 31
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR3
<400> 31
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1               5                   10                  15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser
            20                  25                  30
<210> 32
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR4
<400> 32
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
1               5                   10
<210> 33
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR1
<400> 33
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
            20
<210> 34
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR2
<400> 34
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1               5                   10                  15
<210> 35
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR3
<400> 35
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1               5                   10                  15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210> 36
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR4
<400> 36
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1               5                   10
<210> 37
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR1
<400> 37
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
            20                  25                  30
<210> 38
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR2
<400> 38
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1               5                   10
<210> 39
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR3
<400> 39
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1               5                   10                  15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Gly
            20                  25                  30
<210> 40
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR4
<400> 40
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1               5                   10
<210> 41
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR1
<400> 41
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
            20
<210> 42
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR2
<400> 42
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Phe
1               5                   10                  15
<210> 43
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR3
<400> 43
Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr
1               5                   10                  15
Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210> 44
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR4
<400> 44
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1               5                   10
<210> 45
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR1
<400> 45
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
            20                  25                  30
<210> 46
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR2
<400> 46
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1               5                   10
<210> 47
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR3
<400> 47
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1               5                   10                  15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
            20                  25                  30
<210> 48
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR4
<400> 48
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1               5                   10
<210> 49
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR1
<400> 49
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Pro Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
            20
<210> 50
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR2
<400> 50
Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Asn Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1               5                   10                  15
<210> 51
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR3
<400> 51
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Arg Phe Thr
1               5                   10                  15
Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys
            20                  25                  30
<210> 52
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR4
<400> 52
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
1               5                   10
<210> 53
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR1
<400> 53
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
            20                  25                  30
<210> 54
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR2
<400> 54
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1               5                   10
<210> 55
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR3
<400> 55
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1               5                   10                  15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
            20                  25                  30
<210> 56
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR4
<400> 56
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1               5                   10
<210> 57
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR1
<400> 57
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
            20
<210> 58
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR2
<400> 58
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1               5                   10                  15
<210> 59
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR3
<400> 59
Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1               5                   10                  15
Leu Thr Ile Ser Arg Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210> 60
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR4
<400> 60
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1               5                   10
<210> 61
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR1
<400> 61
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
            20                  25                  30
<210> 62
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR2
<400> 62
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1               5                   10
<210> 63
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR3
<400> 63
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1               5                   10                  15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
            20                  25                  30
<210> 64
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR4
<400> 64
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1               5                   10
<210> 65
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR1
<400> 65
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Val Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
            20
<210> 66
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR2
<400> 66
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Thr Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1               5                   10                  15
<210> 67
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR3
<400> 67
Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1               5                   10                  15
Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210> 68
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR4
<400> 68
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1               5                   10
<210> 69
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR1
<400> 69
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
            20                  25                  30
<210> 70
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR2
<400> 70
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1               5                   10
<210> 71
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR3
<400> 71
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1               5                   10                  15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
            20                  25                  30
<210> 72
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR4
<400> 72
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1               5                   10
<210> 73
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR1
<400> 73
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
            20
<210> 74
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR2
<400> 74
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1               5                   10                  15
<210> 75
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR3
<400> 75
Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1               5                   10                  15
Leu Thr Ile Ser Arg Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210> 76
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR4
<400> 76
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1               5                   10
<210> 77
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR1 (CDR1-H2)
<400> 77
Arg Tyr Thr Met His
1               5
<210> 78
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR2 (CDR2-H2)
<400> 78
Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1               5                   10                  15
Asp
<210> 79
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR3 (CDR3-H2)
<400> 79
Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr
1               5                   10
<210> 80
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR1 (CDR1-L2)
<400> 80
Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn
1               5                   10
<210> 81
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR2 (CDR2-L2)
<400> 81
Asp Thr Ser Lys Val Ala Ser
1               5
<210> 82
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR3 (CDR3-L2)
<400> 82
Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr
1               5
<210> 83
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR1 (CDR1-L2)
<400> 83
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn
1               5                   10
<210> 84
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR2 (CDR2-L2)
<400> 84
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser
1               5
<210> 85
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR3 (CDR3-L2)
<400> 85
Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr
1               5
<210> 86
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR1 (CDR1-H2)
<400> 86
Gly Tyr Gly Met His
1               5
<210> 87
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR2 (CDR2-H2)
<400> 87
Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210> 88
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR3 (CDR3-H2)
<400> 88
Gln Met Gly Tyr Trp His Phe Asp Leu
1               5
<210> 89
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR1 (CDR1-L2)
<400> 89
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210> 90
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR2 (CDR2-L2)
<400> 90
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1               5
<210> 91
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR3 (CDR3-L2)
<400> 91
Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Leu Thr
1               5                   10
<210> 92
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR1 (CDR1-H2)
<400> 92
Ser Phe Pro Met Ala
1               5
<210> 93
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR2 (CDR2-H2)
<400> 93
Thr Ile Ser Thr Ser Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210> 94
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR3 (CDR3-H2)
<400> 94
Phe Arg Gln Tyr Ser Gly Gly Phe Asp Tyr
1               5                   10
<210> 95
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR1 (CDR1-L2)
<400> 95
Thr Leu Ser Ser Gly Asn Ile Glu Asn Asn Tyr Val His
1               5                   10
<210> 96
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR2 (CDR2-L2)
<400> 96
Asp Asp Asp Lys Arg Pro Asp
1               5
<210> 97
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR3 (CDR3-L2)
<400> 97
His Ser Tyr Val Ser Ser Phe Asn Val
1               5
<210> 98
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR1
<400> 98
Asp Ile Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
            20                  25                  30
<210> 99
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR2
<400> 99
Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1               5                   10
<210> 100
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR3
<400> 100
Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln
1               5                   10                  15
Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
            20                  25                  30
<210> 101
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR4
<400> 101
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1               5                   10
<210> 102
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR1
<400> 102
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys
            20
<210> 103
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR2
<400> 103
Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
1               5                   10                  15
<210> 104
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR3
<400> 104
Gly Val Pro Tyr Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser
1               5                   10                  15
Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210> 105
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR4
<400> 105
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
1               5                   10
<210> 106
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR1
<400> 106
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
            20                  25                  30
<210> 107
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR1
<400> 107
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys
            20
<210> 108
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR3
<400> 108
Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser
1               5                   10                  15
Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210> 109
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR4
<400> 109
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn
1               5                   10
<210> 110
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR1
<400> 110
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
            20                  25                  30
<210> 111
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR2
<400> 111
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1               5                   10
<210> 112
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR3
<400> 112
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Ala Phe Leu Gln
1               5                   10                  15
Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Ala Arg
            20                  25                  30
<210> 113
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR4
<400> 113
Trp Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser
1               5                   10
<210> 114
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR1
<400> 114
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
            20
<210> 115
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR2
<400> 115
Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
1               5                   10                  15
<210> 116
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR3
<400> 116
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr
1               5                   10                  15
Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210> 117
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR4
<400> 117
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr
1               5                   10
<210> 118
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR1
<400> 118
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser
            20                  25                  30
<210> 119
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR2
<400> 119
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
1               5                   10
<210> 120
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR3
<400> 120
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1               5                   10                  15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
            20                  25                  30
<210> 121
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR4
<400> 121
Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1               5                   10
<210> 122
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR1
<400> 122
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
            20
<210> 123
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR2
<400> 123
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1               5                   10                  15
<210> 124
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR3
<400> 124
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1               5                   10                  15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210> 125
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR4
<400> 125
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1               5                   10
<210> 126
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR1
<400> 126
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
            20                  25                  30
<210> 127
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR2
<400> 127
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1               5                   10
<210> 128
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR3
<400> 128
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1               5                   10                  15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
            20                  25                  30
<210> 129
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR4
<400> 129
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1               5                   10
<210> 130
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR1
<400> 130
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Pro Asn Ser Val Ser Thr Ser Leu Gly Ser
1               5                   10                  15
Thr Val Lys Leu Ser Cys
            20
<210> 131
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR2
<400> 131
Trp Tyr Gln Leu Tyr Glu Gly Arg Ser Pro Thr Thr Met Ile Tyr
1               5                   10                  15
<210> 132
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR3
<400> 132
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Arg Ser Ser Asn Ser
1               5                   10                  15
Ala Phe Leu Thr Ile His Asn Val Ala Ile Glu Asp Glu Ala Ile Tyr
            20                  25                  30
Phe Cys
<210> 133
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR4
<400> 133
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
1               5                   10
<210> 134
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗oxMIF抗体的VL
<400> 134
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Arg Ile Met Thr Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Phe Val Ala Ser His Ser Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Phe Trp Thr Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
<210> 135
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD3抗体的HV
<400> 135
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
            20                  25                  30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115
<210> 136
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD3抗体的VL
<400> 136
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
            20                  25                  30
Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr
        35                  40                  45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65                  70                  75                  80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr
                85                  90                  95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105
<210> 137
<211> 717
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C0061的多肽 2
<400> 137
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Arg Ile Met Thr Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Phe Val Ala Ser His Ser Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Phe Trp Thr Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu
        115                 120                 125
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
    130                 135                 140
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr Ser Met Asn Trp Val Arg
145                 150                 155                 160
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ser Ile Gly Ser Ser
                165                 170                 175
Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile
            180                 185                 190
Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
        195                 200                 205
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Gly Ser Gln Trp Leu
    210                 215                 220
Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
225                 230                 235                 240
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val
                245                 250                 255
Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr
            260                 265                 270
Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln
        275                 280                 285
Gly Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn
    290                 295                 300
Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser
305                 310                 315                 320
Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
                325                 330                 335
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp
            340                 345                 350
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly
        355                 360                 365
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr
    370                 375                 380
Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile
385                 390                 395                 400
Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln
                405                 410                 415
Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu
            420                 425                 430
Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
        435                 440                 445
Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
    450                 455                 460
Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr
465                 470                 475                 480
Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
                485                 490                 495
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
            500                 505                 510
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
        515                 520                 525
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
    530                 535                 540
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
545                 550                 555                 560
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
                565                 570                 575
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
            580                 585                 590
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
        595                 600                 605
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser
    610                 615                 620
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys
625                 630                 635                 640
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
                645                 650                 655
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
            660                 665                 670
Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
        675                 680                 685
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
    690                 695                 700
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
705                 710                 715
<210> 138
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR1 (CDR1-L1)
<400> 138
Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210> 139
<211> 703
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗oxMIF重链 - 抗CD3 scFv融合蛋白
<400> 139
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr
            20                  25                  30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Ser Ile Gly Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Gly Ser Gln Trp Leu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
        115                 120                 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145                 150                 155                 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
                165                 170                 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
            180                 185                 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
        195                 200                 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
    210                 215                 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225                 230                 235                 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                245                 250                 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
            260                 265                 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
        275                 280                 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
    290                 295                 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305                 310                 315                 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
                325                 330                 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu
            340                 345                 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys
        355                 360                 365
Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
    370                 375                 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385                 390                 395                 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
                405                 410                 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
            420                 425                 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        435                 440                 445
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln
    450                 455                 460
Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser
465                 470                 475                 480
Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr
                485                 490                 495
Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
            500                 505                 510
Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
        515                 520                 525
Asp Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met
    530                 535                 540
Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
545                 550                 555                 560
Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
                565                 570                 575
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly
            580                 585                 590
Gly Ser Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
        595                 600                 605
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser
    610                 615                 620
Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
625                 630                 635                 640
Lys Arg Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser
                645                 650                 655
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
            660                 665                 670
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser
        675                 680                 685
Ser Asn Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
    690                 695                 700
<210> 140
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗-oxMIF轻链
<400> 140
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Arg Ile Met Thr Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Phe Val Ala Ser His Ser Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Phe Trp Thr Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
    210
<210> 141
<211> 207
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3
<400> 141
Met Gln Ser Gly Thr His Trp Arg Val Leu Gly Leu Cys Leu Leu Ser
1               5                   10                  15
Val Gly Val Trp Gly Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr
            20                  25                  30
Gln Thr Pro Tyr Lys Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr
        35                  40                  45
Cys Pro Gln Tyr Pro Gly Ser Glu Ile Leu Trp Gln His Asn Asp Lys
    50                  55                  60
Asn Ile Gly Gly Asp Glu Asp Asp Lys Asn Ile Gly Ser Asp Glu Asp
65                  70                  75                  80
His Leu Ser Leu Lys Glu Phe Ser Glu Leu Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr
                85                  90                  95
Val Cys Tyr Pro Arg Gly Ser Lys Pro Glu Asp Ala Asn Phe Tyr Leu
            100                 105                 110
Tyr Leu Arg Ala Arg Val Cys Glu Asn Cys Met Glu Met Asp Val Met
        115                 120                 125
Ser Val Ala Thr Ile Val Ile Val Asp Ile Cys Ile Thr Gly Gly Leu
    130                 135                 140
Leu Leu Leu Val Tyr Tyr Trp Ser Lys Asn Arg Lys Ala Lys Ala Lys
145                 150                 155                 160
Pro Val Thr Arg Gly Ala Gly Ala Gly Gly Arg Gln Arg Gly Gln Asn
                165                 170                 175
Lys Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg
            180                 185                 190
Lys Gly Gln Arg Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg Arg Ile
        195                 200                 205
<210> 142
<211> 171
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3
<400> 142
Met Glu His Ser Thr Phe Leu Ser Gly Leu Val Leu Ala Thr Leu Leu
1               5                   10                  15
Ser Gln Val Ser Pro Phe Lys Ile Pro Ile Glu Glu Leu Glu Asp Arg
            20                  25                  30
Val Phe Val Asn Cys Asn Thr Ser Ile Thr Trp Val Glu Gly Thr Val
        35                  40                  45
Gly Thr Leu Leu Ser Asp Ile Thr Arg Leu Asp Leu Gly Lys Arg Ile
    50                  55                  60
Leu Asp Pro Arg Gly Ile Tyr Arg Cys Asn Gly Thr Asp Ile Tyr Lys
65                  70                  75                  80
Asp Lys Glu Ser Thr Val Gln Val His Tyr Arg Met Cys Gln Ser Cys
                85                  90                  95
Val Glu Leu Asp Pro Ala Thr Val Ala Gly Ile Ile Val Thr Asp Val
            100                 105                 110
Ile Ala Thr Leu Leu Leu Ala Leu Gly Val Phe Cys Phe Ala Gly His
        115                 120                 125
Glu Thr Gly Arg Leu Ser Gly Ala Ala Asp Thr Gln Ala Leu Leu Arg
    130                 135                 140
Asn Asp Gln Val Tyr Gln Pro Leu Arg Asp Arg Asp Asp Ala Gln Tyr
145                 150                 155                 160
Ser His Leu Gly Gly Asn Trp Ala Arg Asn Lys
                165                 170
<210> 143
<211> 182
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3
<400> 143
Met Glu Gln Gly Lys Gly Leu Ala Val Leu Ile Leu Ala Ile Ile Leu
1               5                   10                  15
Leu Gln Gly Thr Leu Ala Gln Ser Ile Lys Gly Asn His Leu Val Lys
            20                  25                  30
Val Tyr Asp Tyr Gln Glu Asp Gly Ser Val Leu Leu Thr Cys Asp Ala
        35                  40                  45
Glu Ala Lys Asn Ile Thr Trp Phe Lys Asp Gly Lys Met Ile Gly Phe
    50                  55                  60
Leu Thr Glu Asp Lys Lys Lys Trp Asn Leu Gly Ser Asn Ala Lys Asp
65                  70                  75                  80
Pro Arg Gly Met Tyr Gln Cys Lys Gly Ser Gln Asn Lys Ser Lys Pro
                85                  90                  95
Leu Gln Val Tyr Tyr Arg Met Cys Gln Asn Cys Ile Glu Leu Asn Ala
            100                 105                 110
Ala Thr Ile Ser Gly Phe Leu Phe Ala Glu Ile Val Ser Ile Phe Val
        115                 120                 125
Leu Ala Val Gly Val Tyr Phe Ile Ala Gly Gln Asp Gly Val Arg Gln
    130                 135                 140
Ser Arg Ala Ser Asp Lys Gln Thr Leu Leu Pro Asn Asp Gln Leu Tyr
145                 150                 155                 160
Gln Pro Leu Lys Asp Arg Glu Asp Asp Gln Tyr Ser His Leu Gln Gly
                165                 170                 175
Asn Gln Leu Arg Arg Asn
            180
<210> 144
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> oxMIF
<400> 144
Met Pro Met Phe Ile Val Asn Thr Asn Val Pro Arg Ala Ser Val Pro
1               5                   10                  15
Asp Gly Phe Leu Ser Glu Leu Thr Gln Gln Leu Ala Gln Ala Thr Gly
            20                  25                  30
Lys Pro Pro Gln Tyr Ile Ala Val His Val Val Pro Asp Gln Leu Met
        35                  40                  45
Ala Phe Gly Gly Ser Ser Glu Pro Cys Ala Leu Cys Ser Leu His Ser
    50                  55                  60
Ile Gly Lys Ile Gly Gly Ala Gln Asn Arg Ser Tyr Ser Lys Leu Leu
65                  70                  75                  80
Cys Gly Leu Leu Ala Glu Arg Leu Arg Ile Ser Pro Asp Arg Val Tyr
                85                  90                  95
Ile Asn Tyr Tyr Asp Met Asn Ala Ala Asn Val Gly Trp Asn Asn Ser
            100                 105                 110
Thr Phe Ala
        115
<210> 145
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> oxMIF
<400> 145
Glu Pro Cys Ala Leu Cys Ser
1               5
<210> 146
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR1
<400> 146
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
            20                  25                  30
<210> 147
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR2
<400> 147
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
1               5                   10
<210> 148
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR3
<400> 148
Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1               5                   10                  15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
            20                  25                  30
<210> 149
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR3 (CDR3-H2)
<400> 149
Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr
1               5                   10
<210> 150
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR2
<400> 150
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr
1               5                   10                  15
<210> 151
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR3 (CDR3-L2)
<400> 151
Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro
1               5
<210> 152
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR4
<400> 152
Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1               5                   10
<210> 153
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR3 (CDR3-L1)
<400> 153
Gln Gln Tyr Gly Asn Ser Leu Thr
1               5
<210> 154
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR2 (CDR2-H2)
<400> 154
Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Val Lys
1               5                   10                  15
Asp
<210> 155
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR4
<400> 155
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1               5                   10
<210> 156
<211> 472
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 不含链亲和素标签的C0062的多肽1
<400> 156
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Arg Ile Met Thr Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Phe Val Ala Ser His Ser Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Phe Trp Thr Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu
        115                 120                 125
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
    130                 135                 140
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr Ser Met Asn Trp Val Arg
145                 150                 155                 160
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ser Ile Gly Ser Ser
                165                 170                 175
Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile
            180                 185                 190
Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
        195                 200                 205
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Gly Ser Gln Trp Leu
    210                 215                 220
Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
225                 230                 235                 240
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
                245                 250                 255
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
            260                 265                 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
        275                 280                 285
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
    290                 295                 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305                 310                 315                 320
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
                325                 330                 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
            340                 345                 350
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
        355                 360                 365
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr
    370                 375                 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385                 390                 395                 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
                405                 410                 415
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
            420                 425                 430
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
        435                 440                 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
    450                 455                 460
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465                 470
<210> 157
<211> 472
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 不含多聚组氨酸标签的C0062的多肽2
<400> 157
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
            20                  25                  30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
    130                 135                 140
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser
145                 150                 155                 160
Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
                165                 170                 175
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro
            180                 185                 190
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
        195                 200                 205
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp
    210                 215                 220
Ser Ser Asn Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
225                 230                 235                 240
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
                245                 250                 255
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
            260                 265                 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
        275                 280                 285
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
    290                 295                 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305                 310                 315                 320
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
                325                 330                 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
            340                 345                 350
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
        355                 360                 365
Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
    370                 375                 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385                 390                 395                 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
                405                 410                 415
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val
            420                 425                 430
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
        435                 440                 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
    450                 455                 460
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465                 470
<210> 158
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗oxMIF抗体的VH
<400> 158
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr
            20                  25                  30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Ser Ile Gly Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Gly Ser Gln Trp Leu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
        115
<210> 159
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C0061的多肽1
<400> 159
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr
            20                  25                  30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Ser Ile Gly Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Gly Ser Gln Trp Leu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
        115                 120                 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145                 150                 155                 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
                165                 170                 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
            180                 185                 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
        195                 200                 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
    210                 215                 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225                 230                 235                 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                245                 250                 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
            260                 265                 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
        275                 280                 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
    290                 295                 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305                 310                 315                 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
                325                 330                 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
            340                 345                 350
Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys
        355                 360                 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
    370                 375                 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385                 390                 395                 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
                405                 410                 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
            420                 425                 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        435                 440                 445
<210> 160
<211> 483
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C0062的多肽1
<400> 160
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Arg Ile Met Thr Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Phe Val Ala Ser His Ser Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Phe Trp Thr Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu
        115                 120                 125
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
    130                 135                 140
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr Ser Met Asn Trp Val Arg
145                 150                 155                 160
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ser Ile Gly Ser Ser
                165                 170                 175
Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile
            180                 185                 190
Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
        195                 200                 205
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Gly Ser Gln Trp Leu
    210                 215                 220
Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
225                 230                 235                 240
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
                245                 250                 255
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
            260                 265                 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
        275                 280                 285
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
    290                 295                 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305                 310                 315                 320
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
                325                 330                 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
            340                 345                 350
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
        355                 360                 365
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr
    370                 375                 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385                 390                 395                 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
                405                 410                 415
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
            420                 425                 430
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
        435                 440                 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
    450                 455                 460
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ala Ser Ala Trp Ser His Pro Gln
465                 470                 475                 480
Phe Glu Lys
<210> 161
<211> 481
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C0062的多肽2
<400> 161
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
            20                  25                  30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
    130                 135                 140
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser
145                 150                 155                 160
Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
                165                 170                 175
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro
            180                 185                 190
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
        195                 200                 205
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp
    210                 215                 220
Ser Ser Asn Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
225                 230                 235                 240
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
                245                 250                 255
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
            260                 265                 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
        275                 280                 285
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
    290                 295                 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305                 310                 315                 320
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
                325                 330                 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
            340                 345                 350
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
        355                 360                 365
Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
    370                 375                 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385                 390                 395                 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
                405                 410                 415
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val
            420                 425                 430
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
        435                 440                 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
    450                 455                 460
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ala Ala Ala His His His His His
465                 470                 475                 480
His
<210> 162
<211> 703
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C0086的多肽1
<400> 162
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr
            20                  25                  30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Ser Ile Gly Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Gly Ser Gln Trp Leu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
        115                 120                 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145                 150                 155                 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
                165                 170                 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
            180                 185                 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
        195                 200                 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
    210                 215                 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225                 230                 235                 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                245                 250                 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
            260                 265                 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
        275                 280                 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
    290                 295                 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305                 310                 315                 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
                325                 330                 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu
            340                 345                 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys
        355                 360                 365
Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
    370                 375                 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385                 390                 395                 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
                405                 410                 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
            420                 425                 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        435                 440                 445
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln
    450                 455                 460
Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser
465                 470                 475                 480
Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr
                485                 490                 495
Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
            500                 505                 510
Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
        515                 520                 525
Asp Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met
    530                 535                 540
Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
545                 550                 555                 560
Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
                565                 570                 575
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly
            580                 585                 590
Gly Ser Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
        595                 600                 605
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser
    610                 615                 620
Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
625                 630                 635                 640
Lys Arg Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser
                645                 650                 655
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
            660                 665                 670
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser
        675                 680                 685
Ser Asn Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
    690                 695                 700
<210> 163
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C0086的多肽2
<400> 163
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr
            20                  25                  30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Ser Ile Gly Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Gly Ser Gln Trp Leu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
        115                 120                 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145                 150                 155                 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
                165                 170                 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
            180                 185                 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
        195                 200                 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
    210                 215                 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225                 230                 235                 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                245                 250                 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
            260                 265                 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
        275                 280                 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
    290                 295                 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305                 310                 315                 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
                325                 330                 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
            340                 345                 350
Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys
        355                 360                 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
    370                 375                 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385                 390                 395                 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
                405                 410                 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
            420                 425                 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        435                 440                 445
<210> 164
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 164
Gly Gly Gly Gly Ser
1               5
<210> 165
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 165
Gly Gly Ser Gly Gly Ser
1               5
<210> 166
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 166
Gly Gly Gly Ser
1
<210> 167
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR1
<400> 167
Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn
1               5                   10
<210> 168
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HD-CDR2
<400> 168
Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
1               5                   10                  15
Val Lys Asp Ser
            20
<210> 169
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR3
<400> 169
Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr
1               5                   10                  15
<210> 170
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR1
<400> 170
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala Met Asn
1               5                   10
<210> 171
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR2
<400> 171
Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
1               5                   10                  15
Val Lys Gly
<210> 172
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-CDR3
<400> 172
Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr
1               5                   10                  15
<210> 173
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR1
<400> 173
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser
            20                  25
<210> 174
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR3
<400> 174
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln
1               5                   10                  15
Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210> 175
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR1
<400> 175
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
            20                  25
<210> 176
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR2
<400> 176
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1               5                   10
<210> 177
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HV-FR3
<400> 177
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1               5                   10                  15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210> 178
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR1
<400> 178
Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn
1               5                   10
<210> 179
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR2
<400> 179
Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro
1               5
<210> 180
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR3
<400> 180
Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val
1               5
<210> 181
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR1
<400> 181
Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn
1               5                   10
<210> 182
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR2
<400> 182
Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro
1               5
<210> 183
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-CDR3
<400> 183
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val
1               5
<210> 184
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR1
<400> 184
Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Thr Val Thr Leu Thr Cys
            20
<210> 185
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR2
<400> 185
Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly
1               5                   10                  15
<210> 186
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR3
<400> 186
Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala
1               5                   10                  15
Leu Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210> 187
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR1
<400> 187
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Thr Val Thr Leu Thr Cys
            20
<210> 188
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR2
<400> 188
Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly Leu Ile Gly
1               5                   10                  15
<210> 189
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LV-FR3
<400> 189
Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala
1               5                   10                  15
Leu Thr Leu Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210> 190
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区 CD3
<400> 190
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr
            20                  25                  30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
    50                  55                  60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp
            100                 105                 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120                 125
<210> 191
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区 CD3
<400> 191
Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly
            20                  25                  30
Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
        35                  40                  45
Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val
65                  70                  75                  80
Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn
                85                  90                  95
Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
            100                 105
<210> 192
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区 CD3
<400> 192
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
            20                  25                  30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
    50                  55                  60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
            100                 105                 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120                 125
<210> 193
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区 CD3
<400> 193
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
            20                  25                  30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly
        35                  40                  45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala
65                  70                  75                  80
Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
                85                  90                  95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
            100                 105
<210> 194
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C0107 多肽1
<400> 194
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Trp Tyr
            20                  25                  30
Ala Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Gly Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Arg Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Val Asn Val Ile Ala Val Ala Gly Thr Gly Tyr Tyr Tyr Tyr
            100                 105                 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala
        115                 120                 125
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
    130                 135                 140
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
145                 150                 155                 160
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
                165                 170                 175
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
            180                 185                 190
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
        195                 200                 205
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
    210                 215                 220
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
225                 230                 235                 240
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
                245                 250                 255
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
            260                 265                 270
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
        275                 280                 285
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
    290                 295                 300
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
305                 310                 315                 320
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
                325                 330                 335
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
            340                 345                 350
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu
        355                 360                 365
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
    370                 375                 380
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
385                 390                 395                 400
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
                405                 410                 415
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
            420                 425                 430
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
        435                 440                 445
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Lys
    450                 455
<210> 195
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C0107 多肽3
<400> 195
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Ser
            20                  25                  30
Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
        35                  40                  45
Ile Tyr Gly Thr Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65                  70                  75                  80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Arg Ser Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
    210
<210> 196
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C0111 多肽1
<400> 196
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr
            20                  25                  30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Ser Ile Gly Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Gly Ser Gln Trp Leu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
        115                 120                 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145                 150                 155                 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
                165                 170                 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
            180                 185                 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
        195                 200                 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
    210                 215                 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser
225                 230                 235                 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                245                 250                 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
            260                 265                 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
        275                 280                 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
    290                 295                 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305                 310                 315                 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
                325                 330                 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
            340                 345                 350
Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys
        355                 360                 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
    370                 375                 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385                 390                 395                 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
                405                 410                 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
            420                 425                 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        435                 440                 445
<210> 197
<211> 727
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C0111 多肽2
<400> 197
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr
            20                  25                  30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Ser Ile Gly Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Gly Ser Gln Trp Leu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
        115                 120                 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
    130                 135                 140
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln
145                 150                 155                 160
Arg Ile Met Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
                165                 170                 175
Pro Lys Leu Leu Ile Phe Val Ala Ser His Ser Gln Ser Gly Val Pro
            180                 185                 190
Ser Arg Phe Arg Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
        195                 200                 205
Ser Gly Leu Gln Pro Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser
    210                 215                 220
Phe Trp Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
225                 230                 235                 240
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
            260                 265                 270
Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
        275                 280                 285
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr
    290                 295                 300
Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg
305                 310                 315                 320
Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr
                325                 330                 335
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn
            340                 345                 350
Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
        355                 360                 365
Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
    370                 375                 380
Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro
385                 390                 395                 400
Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr
                405                 410                 415
Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
            420                 425                 430
Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro Ala
        435                 440                 445
Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser
    450                 455                 460
Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr
465                 470                 475                 480
Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
                485                 490                 495
Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
            500                 505                 510
Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
        515                 520                 525
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
    530                 535                 540
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
545                 550                 555                 560
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
                565                 570                 575
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
            580                 585                 590
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
        595                 600                 605
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
    610                 615                 620
Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
625                 630                 635                 640
Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
                645                 650                 655
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
            660                 665                 670
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser
        675                 680                 685
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
    690                 695                 700
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
705                 710                 715                 720
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
                725

Claims (22)

1.抗oxMIF/抗CD3抗体，其选自由以下组成的组：
(i)IgG，其中scFv仅与两条重链中的一条融合；
(ii)IgG，其中一个Fab臂被双特异性T细胞接合剂(BiTE)替代，一个Fab臂是IgG Fab臂，其中所述BiTE和IgG Fab臂通过铰链区连接到Fc部分；以及
(iii)IgG，其中两个Fab臂均被具有不同特异性的scFv替代；
所述抗oxMIF/抗CD3抗体包括至少一个特异性识别oxMIF的结合位点和一个特异性识别CD3的结合位点，
以及其中所述特异性识别oxMIF的位点包括：
(a)包括序列SEQ ID NO 1至6的可变CDR，或者与SEQ ID NO 1至6具有至少70％序列同一性的可变CDR区，或
(b)包括序列SEQ ID NO 7至12的可变CDR，或者与SEQ ID NO 7至12具有至少70％序列同一性的可变CDR，或
(c)包括序列SEQ ID NO 13至18的可变CDR，或者与SEQ ID NO 13至18具有至少70％序列同一性的可变CDR，或
(d)包括序列SEQ ID NO 19至24的可变CDR，或者与SEQ ID No.19至24具有至少70％序列同一性的可变CDR，或
(e)包括序列SEQ ID NO 26、27、21、28、23和24的可变CDR，或者与SEQ ID NO 26、27、21、28、23具有至少70％序列同一性的可变CDR，或
(f)包括序列SEQ ID NO的19、20、21、138、25和153的可变CDR，或者与SEQ ID NO 19、20、21、138、25和153具有至少70％序列同一性的可变CDR。
2.根据权利要求1所述的抗oxMIF/抗CD3抗体，其在每个CDR序列中包括0、1或2个点突变。
3.根据权利要求1或2所述的抗oxMIF/抗CD3抗体，其中特异性识别CD3的结合位点包括可变区，所述可变区在以下每个CDR序列中包括0、1或2个点突变：
SEQ ID NO 77、78、149、83、84和151，或
SEQ ID NO 77、78、79、80、81和82，或
SEQ ID NO 77、78、79、83、84和85，或
SEQ ID NO 77、154、79、83、84和85，或
SEQ ID NO 86、87、88、89、90和91，或
SEQ ID NO 92、93、94、95、96和97，或
SEQ ID NO 167、168、169、178、179和180，或
SEQ ID NO 170、171、172、181、182和183。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗oxMIF/抗CD3抗体，其在序列SEQ ID NO 7、8、9、10、11、12、167、168、169、178、179和180中包括0或1个点突变。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗oxMIF/抗CD3抗体，其包括序列SEQ ID NO 7、8、9、10、11、12、77、78、149、83、84和151。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗oxMIF/抗CD3抗体，其中IgG识别oxMIF，，与其中一条重链融合的scFv识别CD3，所述抗oxMIF/抗CD3抗体还包括肽接头，所述肽接头连接抗CD3的轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的抗oxMIF/抗CD3抗体，其中IgG Fab臂识别oxMIF，双特异性T细胞接合剂(BiTE)识别oxMIF和CD3，所述抗oxMIF/抗CD3抗体还包括肽接头，所述肽接头连接双特异性T细胞接合剂的VL和VH链。
8.根据权利要求1至5中任一项所述的抗oxMIF/抗CD3抗体，其中两个Fab臂均被scFv替代，其中一个scFv识别oxMIF，另一个scFv识别CD3，所述抗oxMIF/抗CD3抗体还包括肽接头，所述肽接头连接scFv的VL和VH链。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗oxMIF/抗CD3抗体，其中特异性识别oxMIF的结合位点包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区与氨基酸序列SEQ ID NO 158具有至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，更优选至少99％的序列同一性，所述轻链可变区与氨基酸序列SEQ ID NO 134具有至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，更优选至少99％的序列同一性。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的抗oxMIF/抗CD3抗体，其中特异性识别CD3的结合位点包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区与氨基酸序列SEQ ID NO 135具有至少80％，优选至少90％，更优选至少95％的序列同一性，所述轻链可变区与氨基酸序列SEQ ID NO 136具有至少80％，优选至少90％，更优选至少95％的序列同一性。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的抗oxMIF/抗CD3抗体，其包括氨基酸序列SEQID NO 159、137、140、160、161、162、163、194、195、196或197，或者与氨基酸序列SEQ ID NO159、137、140、160、161、162、163、194、195、196或197中的任一个具有至少85％、90％，具体至少95％，具体至少99％序列同一性的氨基酸序列。
12.药物组合物，其包括根据权利要求1至11中任一项所述的抗oxMIF/抗CD3抗体以及药学上可接受的载体或赋形剂。
13.根据权利要求1至11中任一项所述的抗oxMIF/抗CD3抗体或根据权利要求12所述的药物组合物，其用于治疗癌症，具体为用于治疗结直肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肺癌。
14.根据权利要求1至11中任一项所述的抗oxMIF/抗CD3抗体，其用作药物。
15.分离的核酸分子，其编码根据权利要求1至11中任一项所述的抗oxMIF/抗CD3抗体。
16.表达载体，其包括根据权利要求15所述的核酸分子。
17.宿主细胞，其包括根据权利要求16所述的载体。
18.制备根据权利要求1至11中任一项所述的抗oxMIF/抗CD3抗体的方法，其包括在宿主细胞中表达编码所述抗体的核酸。
19.检测细胞表达oxMIF的体外方法，所述方法包括：使包括待检测人类细胞的生物样品与根据权利要求1至11中任一项所述的抗oxMIF/抗CD3抗体接触；检测所述抗体的结合；其中所述抗体的结合表明细胞上存在oxMIF，从而检测细胞是否表达oxMIF。
20.根据权利要求19所述的体外方法，其中所述生物样品包括完整的人类细胞、组织、活检探针或感兴趣细胞的膜组分。
21.根据权利要求19或20所述的体外方法，其中所述抗oxMIF/抗CD3抗体用可检测标签进行标记，所述可检测标签选自：放射性同位素、荧光标签、化学发光标签、酶标签以及生物发光标签。
22.根据权利要求1至11中任一项所述的抗oxMIF/抗CD3抗体，其用于诊断在受试者中表达oxMIF的癌细胞，其中所述抗体与可检测标签结合。
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