KR20100056488A - Ｃｄｄｏ 메틸 에스테르의 신규한 형태 - Google Patents

Abstract

트리테르페노이드 화합물인 메틸 2-시아노-3,12-디옥솔리아나-1,9(11)-디엔-28-오에이트 (CDDO 메틸 에스테르)는 예를 들어, 포화된 메탄올 용액으로부터 제조될 수 있는 비-결정성의 유리상 고체 형태 및 비-수화된 결정성 형태를 갖는다. 유리상 형태는 비-수화된 결정성 형태보다 증진된 생체이용율을 나타낸다. CDDO 메틸 에스테르의 각각의 형태는 일반적으로 염증과 연관된 다양한 질병 상태를 치료하기 위하여, 전형적으로는 고체 투약형으로 사용하기 위한 우수한 후보물질이다.

Description

ＣＤＤＯ 메틸 에스테르의 신규한 형태{NOVEL FORMS OF CDDO METHYL ESTER}

관련된 특허 출원에 대한 교차-참조

본 출원은 본 명세서에 온전히 참고로 포함된 미국 가출원 제60/955,939호 (2007년 8월 15일에 출원됨)를 우선권으로 주장한다.

트리테르페노이드는 스쿠알렌의 고리화에 의해 식물 내에서 생합성된다. 이들 천연적으로 존재하는 분자는 의학적 용도를 위한 후보물질이긴 하지만, 비교적 약한 생물학적 활성을 나타낸다. 따라서, 화학자들은 증진된 효력의 유사체를 합성하기 위해 시도하였다 [Honda et al ., 1997 & 1998].

몇 가지의 합성 유사체가 IFN-γ또는 LPS에 의해서 자극된 대식세포에서 iNOS 및 COX-2의 새로운 형성을 억제하는 것으로 보고되었다 [Suh et al ., 1998; Honda et al ., 2002]. 또 다른 합성 트리테르페노이드인 2-시아노-3,12-디옥솔리아나-1,9(11)-디엔-28-오에이트 (CDDO)는 항-염증성 및 항-증식성 활성을 나타낸다 [Honda et al ., 1998 & 2000].

보어 (Bore) 등 (2002)은 메틸 2-시아노-3,12-디옥솔리아나-1,9(11)-디엔-28-오에이트 (CDDO 메틸 에스테르)인 CDDO의 메틸 에스테르를 연구하여 결정 구조를 결정하였다. 수화된 이 형태에서, 물은 특정한 결정 패킹(packing) 및 구조를 발생시키는 상호 작용을 조정한다.

본 발명의 한가지 구체예에서는, CDDO 메틸 에스테르의 비-수화 결정성 형태가 제공된다. 비-수화 결정형은 바람직하게는 a=14.2Å b=14.2Å 및 c=81.6Å 단위격자 크기(unit cell dimension)를 갖는 P4₃ 2₁2의 공간 그룹(space group)을 갖는다. 본 발명은 또한, (i) 치료학적 유효량의 CDDO 메틸 에스테르의 비-수화 결정성 형태와 함께 (ii) 식용 담체를 포함하는, 고체 투약형의 약제학적 조성물을 의도한다.

추가로, 본 발명은 도 2C에 나타낸 바와 같이 약 13.5 °2θ 할로 피크를 갖는 x-선 분말 회절 패턴, 및 유리 전이 온도(glass transition temperature)(T_g)를 갖는 CDDO 메틸 에스테르의 유리상 고체 형태(glassy solid form)로 구체화된다. 특정한 구체예에서, T_g는 약 120℃ 내지 약 135℃의 범위일 수 있다. 또 다른 구체예에서, T_g는 약 125℃ 내지 약 130℃의 범위이다. CDDO-메틸 에스테르의 유리상 고체 형태는 약 5Å에서 약 20Å까지 도 28과 유사한 피크를 갖는 PDF 스펙트럼을 가질 수 있다.

더욱이, 본 발명은 (i) 치료학적 유효량의 CDDO 메틸 에스테르의 유리상 고체 형태와 함께 (ii) 식용 담체를 포함하는, 고체 투약형의 약제학적 조성물을 제공한다. 이에 관해서, 본 발명은 이러한 약제학적 조성물을 암 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 환자를 치료하는 방법론을 고려한다. 본 발명은 또한, CDDO-메틸 에스테르의 유리상 형태와 함께 또 다른 항암 약물을 투여하는 것을 고려한다. 예를 들어, 항암 약물은 젬시타빈일 수 있고, 암은 췌장암일 수 있다. 본 발명은 마찬가지로, 급성 또는 만성 산화적 스트레스 및 염증을 수반하는 질병 또는 장애, 특히 부분적으로 유도성 산화질소 신타제 (iNOS) 또는 유도성 사이클로옥시게나제 (COX-2)의 과발현을 특징으로 하는 것들의 치료를 위한 방법론을 포함한다.

또한, 본 발명은 표 18에 나타낸 바와 같은 특징적 피크를 갖는 x-선 분말 회절 패턴 및 도 24에 나타낸 바와 같은 DSC 패턴을 갖는 CDDO-메틸 에스테르의 디메탄올 용매화물을 제공한다. 본 발명에 따라서, 디메탄올 용매화물 형태는 CDDO 메틸 에스테르의 유리상 고체 형태의 생산을 위한 중간체로 사용될 수 있다. 디메탄올 용매화물 형태를 통해서 CDDO-메틸 에스테르의 유리상 고체 형태를 생산하는 방법은 CDDO-메틸 에스테르의 디메탄올 용매화물 형태를 제조하는 단계, 및 디메탄올 용매화물 형태를 건조시키는 단계를 포함한다.

또 다른 구체예에 따라, 본 발명은 가온된 무수 메탄올 중의 정제된 CDDO 메틸 에스테르의 용액을 제조하는 단계, 가온된 용액을 냉각된 메탄올의 용기에 첨가하는 단계, 생성된 결정을 여과하는 단계를 포함하는, CDDO 메틸 에스테르 디메탄올레이트의 결정을 성장시키는 방법을 유도한다.

또 다른 구체예에 따라, 본 발명은 (i) 치료학적 유효량의 CDDO-메틸 에스테르 및 (ii) 조성물이 T_g를 갖도록 하는 유리 형성제(glassy former)인 부형제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.

부형제는 예를 들어, (A)　탄수화물, 탄수화물 유도체, 또는 탄수화물 폴리머, (B) 합성 유기 폴리머, (C) 유기산 염, (D) 단백질, 폴리펩타이드 또는 펩타이드, 및 (E) 고분자량 폴리사카라이드로 구성된 그룹으로부터 선택될 수 있다. 합성 유기 폴리머 부형제의 부류의 실례는 하이드록시프로필 메틸 셀룰로즈 프탈레이트 에스테르와 같은 하이드록시프로필 메틸 셀룰로즈, PVP/VA와 같은 폴리[1-(2-옥소-1-피롤리디닐)에틸렌 또는 그의 코폴리머, 및 메타크릴산 - 에틸 아크릴레이트 코폴리머 (1:1)와 같은 메타크릴산 코폴리머이다.

이점에 있어서의 또 다른 예시적 부형제는 1-비닐-2-피롤리돈-비닐 아세테이트 코폴리머 (3:2)인 코포비돈이다.

언급한 바와 같이, iNOS 활성의 억제제로서, 및 특히 NO 생산의 억제에 있어서의 트리테르페노이드의 연구는 CDDO 및 CDDO 메틸 에스테르의 높은 효력을 입증하였다 (IC₅₀　<1 nM 레벨) [참조: Honda et al . (2000)]. 이들 연구는 가용화된 CDDO 메틸 에스테르에 대해 집중되어 CDDO 메틸 에스테르 고체의 약간의 특징을 제공하였다. 보어 (Bore) 등의 연구 (2002)는 트리테르페노이드에 대해 처음 공개된 CDDO 메틸 에스테르의 단일 용매화된 결정성 형태의 구조를 해명하였다.

도 1 (화학적 구조) 및 도 12 (ORTEP 그림)에 도시된 CDDO 메틸 에스테르의 치료학적 잠재력을 알기 위해서, 본 발명자들은 적합한 약력학을 갖는 의학적 생성물을 개발하는데 유리한 더 큰 수 용해도(aqueous solubility) 및 화학적 안정성과 같은 특성을 갖는 화합물의 다른 형태를 조사하였다. 결과적으로, 본 발명자들은 이러한 특징을 가지며, 따라서 당연히 약물 개발을 위한 후보물질이 되는 것으로, 보어 (Bore) 등 (2002)에 의해서 해명된 결정형과는 상이한 CDDO 메틸 에스테르의 두 가지 형태를 발견하였다.

CDDO 메틸 에스테르의 발명된 "A 형"은 비용매화되고 (비-수화됨), 도 29에 나타낸 P4₃ 2₁2 (no. 96)의 공간 그룹, a = 14.2Å, b = 14.2 Å 및 c = 81.6 Å 단위격자 크기를 갖는 독특한 결정 구조, 및 도 14-16에 도시된 패킹 구조를 특징으로 하며, 이에 의해 3 개의 분자는 결정학적 b 축 아래에 나선형 양식으로 패킹된다. 이하의 표 10은 결정학적 데이터-수집 파라미터와 함께 A 형에 대한 추가의 결정 데이터를 열거한다.

본 발명의 다른 "B 형"은 단일 상으로 존재하지만, 이러한 확정된 결정 구조는 없다. 오히려, B형은 A 형과는 다른 x-선 분말 회절 (XRPD) 스펙트럼을 특징으로 나타낸다 (참조: 무엇보다도 도 2). 더구나, B 형은 A 형의 생체이용율보다 놀랄 만큼 더 우수한 생체이용율을 나타낸다 (참조: 실시예 7).

CDDO 메틸 에스테르의 합성을 위한 방법론은 공개되어 있다 [참조: 미국 특허 제6,326,507호, Honda et al . (1998), 및 Honda et al . (2000)]. 본 발명자들은, CDDO 메틸 에스테르의 A 형 및 B 형이 둘 다 이하의 표 3-5에 상세히 기술된 것에 의해서 예시된 다양한 화합물의 용액으로부터 쉽게 제조된다는 것을 발견하였다. 특히, B 형은 MTBE, THF, 톨루엔 또는 에틸 아세테이트에서 빠른 증발 또는 느린 증발에 의해서 제조될 수 있다. 마찬가지로, A 형은 에탄올 또는 메탄올 중의 CDDO 메틸 에스테르 용액의 빠른 증발, 느린 증발, 또는 느린 냉각에 의해서 제조될 수 있다. 아세톤 중에서 CDDO 메틸 에스테르의 제조는 빠른 증발을 사용하여 A 형, 또는 느린 증발을 사용하여 B 형을 생산할 수 있다. 추가의 제조방법은 여기에 제공된 표를 포함하여 이하에 기술된다.

B 형은 확정된 결정 구조를 갖지 않기 때문에, B 형은 마찬가지로 A 형의 특징인 독특한 XRPD 피크가 없고, 대신에 일반적인 "할로" XRPD 패턴을 특징으로 나타낸다. 특히, 비-결정성 B 형은 그의 XRPD 패턴이 3 개 또는 그보다 적은 일차 회절 할로를 나타내기 때문에 (참조: 예를 들어, 도 10) "x-선 무정형" 고체의 카테고리에 속한다. 이 카테고리 내에서, B 형은 "유리상(glassy)" 물질이다: PDF에 의해서 나타낸 바와 같이, 가장 가깝게 이웃하는 원자-원자 상호작용은 결정성 A 형에 대해 관찰된 것에 필적하지만, 여기에는 명시된 장거리 질서 (long-range order)가 없기 때문에 평균 단위격자의 개념은 적용하지 않는다.

따라서, A 형과는 달리 B 형의 샘플은 장거리 즉 대략 20 Å이상에서 분자 상관관계를 나타내지 않는다 (참조: 도 27). 더구나, B 형 샘플의 열 분석은 유리전이 온도 (T_g)를 나타낸다. 대조적으로, 무질서형 나노결정성 물질은 T_g를 나타내지 않지만, 대신에 그 이상에서 결정성 구조가 액체가 되는 융점 (T_m) 만을 나타낸다.

본 발명은 또한, B 형을 제조하기 위해서 사용될 수 있는 CDDO-메틸 에스테르 디메탄올 용매화물 형태를 특징으로 한다 (참조: 실시예 9). 또한, 여기에서는 CDDO-메틸 에스테르 헤미벤젠에이트 형태를 특징으로 한다 (참조: 실시예 8).

그 밖의 다른 결정성 물질의 미분화는 XRPD 스펙트럼에 영향을 미치는 것으로 밝혀졌지만, 미분화된 A 형의 XRPD 분석은 비-미분화된 A 형과 유사한 스펙트럼을 제공한다. 비-미분화된 A 형, 미분화된 A 형 및 B 형 CDDO 메틸 에스테르의 병렬식 (side-by-side) 비교에 대한 도 2를 참고로 한다.

특정화의 다양한 방법을 함께 사용하여 A 형 및 B 형 CDDO 메틸 에스테르를 서로 및 다른 형태의 CDDO 메틸 에스테르로부터 구별할 수 있다. 이러한 목적에 적합한 기술의 예는 고체 상태 핵자기공명 (NMR), X-선 분말 회절, X-선 결정학, 시차 주사 열량법 (DSC), 동적 증기 수착/탈착 (DVS), 칼피셔 (Karl Fischer) 분석 (KF), 고온 스테이지 현미경 검사, 변조된 시차 주사 열량법, FT-IR, 및 라만 (Raman) 분광법이다.

특히, XRPD 및 DSC 데이터의 분석은 CDDO-메틸 에스테르의 A 형,　B 형, 및 헤미벤젠에이트 형태를 구별할 수 있다.

본 발명의 CDDO 메틸 에스테르 형태의 특성은 상기 언급한 바와 같이, 독특할 뿐만 아니라, 그들의 의약적 약제로서의 용도에도 도움이 된다. 예를 들어, B 형 및 A 형 CDDO 메틸 에스테르의 생체이용율은, 원숭이에게 두 가지 형태를 젤라틴 캅셀 내의 동등한 투약량으로 경구 투여한 경우에 원숭이에게서 서로 상이하였다. 실시예 7을 참고로 한다. 또한, 새롭게 확인된 CDDO-메틸 에스테르 형태의 안정성은 약제학적 조성물의 생산에 유용할 수 있다.

A 형 및 B 형 CDDO 메틸 에스테르를 서로 및 다른 형태의 CDDO 메틸 에스테르로부터 구별하는 것과 유사한 방식으로, 이하에 더 상세하게 기술된 바와 같은 “x-선 무정형”특징을 보유하는 CDDO 메틸 에스테르 분산액은 XRPD 및 DSC 분석을 포함한 다양한 기술에 의해서 결정성 A 형 CDDO 메틸 에스테르를 함유하는 분산액으로부터 구별할 수 있다. 따라서, A 형 결정성 CDDO 메틸 에스테르를 함유하는 분산액은 일반적으로, 순수한 A 형 CDDO 메틸 에스테르의 특징적인 별개의 피크, 특히 약 13.35 및 8.78 (°2θ)에서 나타나는 것을 표시한다 (예를 들어, 이하의 표 17을 참조).

본 발명의 CDDO 메틸 에스테르 폴리머 부형제 분산액의 특성은 독특할 뿐만 아니라, 그들의 의약적 약제로서의 용도에도 도움이 된다. 예를 들어, 추가의 불활성 첨가제를 사용하여 제제화된 선택된 CDDO 메틸 에스테르 분산액의 생체이용율은, 원숭이에게 젤라틴 캅셀 내의 분산액의 동등한 투약량을 투여한 경우에 원숭이에게서 서로 상이하였다. 이하의 실시예 7의 2 및 3 시험상을 참고로 한다. 몇 가지의 경우에, CDDO 메틸 에스테르 부형제 분산액을 함유하는 제제는 순수한 B 형 CDDO 메틸 에스테르로부터 생산된 제제에 비해서도, 생체이용율에서 놀라운 추가의 증진을 제공하였다.

약제학적 고체에서 다형체를 포함한 다수의 형태가 존재하는 것은 이전에, 예를 들어, 쿠이 (Cui) (2007)에 의해서 기술되었다. 화합물의 결정성 및 무정형 형태는 상이한 물리적 및 화학적 특징을 나타낼 수 있다. 예를 들어, 무정형 형태는 결정성 형태에 비해서 더 큰 용해도를 가질 수 있다. 모든 화합물은 이에 관해서 독특하지만, 무정형 물질이 결정성 상태와 상이한 정도는 사례별로 조사되어야 하며, 연역적으로 예상될 수 없다. 또한, 일부의 무정형 물질은 재-결정화하는 경향이 있다.

본건과 관련하여, 데이터 수집에서 있어서의 가변성은 수많은 인자에 기인하여 발생할 수 있다. 따라서, 본 명세서에서는 용어 "약" 또는 "대략" 사용하여 CDDO-메틸 에스테르 형태를 기술하기 위해 사용된 데이터에서의 변이를 나타낸다. 예를 들어, 융점은 계측장비 또는 조건에 기초하여 달라질 수 있다. 측정의 정밀도에 관하여, USP ＜891＞은 “융점의 경우에, “개시(onset)”및 “피크” 온도는 둘 다 종종 몇 십도 내에서 객관적으로 및 재현성 있게 측정될 수 있다"라고 언급하고 있다. 실제적인 경험은 이것이 물질의 T_g를 측정하는데 사실이 아님을 시사한다. T_g는 샘플이 어떻게 제조되었는지, 샘플의 열 이력 (이완), T_g 이전에 휘발할 수 있거나 없는 잔류 용매, 기구, 샘플 제조 (샘플 질량, 입자 크기, 패킹, 희석제), T_g를 측정하기 위해서 사용된 파라미터 (특히 주사속도), T_g의 위치를 측정하기 위해서 사용된 파라미터 (개시 온도, 중간점 온도, 변곡점 온도, 또는 오프셋 (offset) 온도), 이완 흡열이 T_g에서 존재하는지 여부, 및 그 밖의 인자와 같은 다수의 인자에 따라 좌우될 것이다. 일부의 인자는 T_g를 저하시킬 수 있지만 (잔류하는 물/용매에 기인한 가소화), 다른 것은 T_g를 상승시킬 수 있고 (더 빠른 주사속도, 이완), 10-15℃만큼 이렇게 될 수 있다. T_g에서 열용량의 변화 (△Cp)는 문헌 [Zhou et al ., J. Pharmaceutical Sciences 91: 1863-2 (2002)]에 보고된 바와 같이 중요할 수 있다.

본 명세서에서는 이들의 "특징적" 피크의 관점에서 상이한 패턴을 언급하고 있다. 이러한 피크의 집합 또는 그룹은 각각, 개별적인 기구 및 실험 조건에 기인할 수 있는 불확정성 내에서 소정의 다형체 형태에 대해서 독특하다.

각각의 결정성 형태에 관하여 5 개의 특징적 피크의 그룹은 이하의 표 17-19에 열거하였다. 대표적인 변이는 ±0.1 °2θ 일 수 있지만, 피크 위치는 일부의 실험에서 ±0.2 °2θ또는 그 이상까지 달라질 수 있다.

- A형

피크 위치 (°2θ)

13.35

8.78

17.4

12.94

14.18

- 디메탄올레이트

피크 위치 (°2θ)

8.87

11.26

16.63

16.9

13.72

- 헤미벤젠에이트

피크 위치 (°2θ)

14.17

9.25

16.32

14.62

17.11

유리상 물질 (B 형)의 XRPD 패턴은 대략 13.5 °2θ 광범위한 할로 피크를 나타내는데, 이것은 B 형의 특징인 것으로 보인다. 그 밖의 다른 할로는 잘-확정되어 있지 않으며, 이 패턴의 형상/위치는 기구 및 실험 조건의 함수로서 변화할 수 있다. 이 광범위한 피크의 위치에 있어서의 변이는 각각의 결정성 형태의 특징적 피크의 경우보다 더 클 것이다. 특히, B 형의 광범위한 피크에 대한 ±1°2θ 까지의 변이는 특정의 기구에서 예상될 수 있다.

CDDO 메틸 에스테르 부형제 분산액으로 생산된 유리상 물질의 XRPD 패턴은 또한, 일반적으로 대략 13.5 °2θ에 중심이 있는 광범위한 할로 피크를 나타낸다. 마찬가지로, 이들 물질은 변조된 시차 주사 열량법 (mDSC)에 의한 T_g를 나타낸다. 순수한 B 형 CDDO 메틸 에스테르 샘플과 유사하게, 부형제 분산액에 대한 XRPD 패턴의 형상 및 위치는 사용된 기구, 및 실험 조건, 및 분산액을 생산하기 위해서 이용된 특정 부형제의 함수로서 변화할 수 있다.

본 발명은 추가로, 암성 상태(cancerous condition) 및 중추신경계를 침범한 다양한 병리학을 포함하는 염증과 연관된 질병을 치료하기 위한, CDDO 메틸 에스테르의 A 형, B 형, 및 유리상 XRPD-무정형 부형제 분산액 각각의 용도에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 이들 질병의 치료는 치료가 필요한 개체에게 본 발명에 열거된 신규한 CDDO 메틸 에스테르 형태의 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 이들 화합물은 암, 알츠하이머병 (AD), 파킨슨병 (PD), 다발성 경화증 (MS), 근위축성 축삭 경화증 (ALS), 류마티스성 관절염 (RA) 및 그 밖의 다른 자가면역질환의 병인론에 수반되는 염증, 염증성 장 질환, 및 산화질소(nitric oxide) 또는 프로스타글란딘의 과도한 생산에 관련된 그 밖의 다른 병리학적 상태를 개선시키거나 예방하는데 유용성을 갖는다.

이미 언급한 바와 같이, 사이클로옥시게나제-2 (COX-2) 또는 유도성 산화질소 신타제 (iNOS)의 비정상적이거나 과도한 발현은 결장에서의 발암현상을 포함한 다수의 질병 과정의 병인론에 연루된다. CDDO 메틸 에스테르를 포함한 트리테르페노이드의 몇 가지 합성 유사체는 iNOS 발현을 억제하는 것으로 보고되었다. 관련된 연구는 IFN-γ 또는 LPS에 의해서 자극된 대식세포에서의 iNOS 및 COX-2 둘 다의 발현의 트리테르페노이드 억제를 보여주었다 [Suh et al ., 1998; Honda et al ., 2002]. 따라서, CDDO 메틸 에스테르 형태를 투여하는 치료방법은 iNOS 및 COX-2 억제에 영향을 미치는 것으로 예상된다.

COX-2에 대한 유전자의 과발현은 결장 발암 현상에서 초기의 중추적인 현상이다 [Prescott and White, 1996; Dubois et al ., 1996]. APC (선종성 결장 폴립증 (adenomatous polyposis coli)) 유전자에 결함이 있는 마우스는 초기 단계에서 다수의 장내 폴립을 발생시키고, COX-2 효소 레벨에 있어서의 뚜렷한 증가가 이들 폴립에서 발견되었다. 이들 동물에서의 연구 결과는 다수의 인간 일차 결장암 및 결장암 세포주에서 COX-2 mRNA 및 단백질의 상승된 레벨의 연구결과와 서로 연관되며 [Prescott and White, 1996], COX-2에 있어서의 이러한 상승은 통상적으로 전-신생물성(pre-neoplastic) 세포의 사망을 이끌어 낼 수 있는 세포 소멸의 억제를 유도하는 것으로 믿어진다 [Tsujii and DuBois, 1996]. 장내 종양 발생에 대한 COX-2의 기능적 연관성은 COX-2 유전자의 녹아웃 (knockout)에 의해서 입증되었다 [Oshima et al ., 1996]. 이러한 녹아웃을 지니는 마우스를 APC 유전자에서 병변을 갖는 폴립-형성 마우스와 교배시켰으며; COX-2 녹아웃은 자손에게서 폴립의 수에 있어서의 극적인 감소를 야기하였다. 더욱이, 선택적 COX-2 억제제 또는 비-선택적 COX-1/COX-2 억제제에 의한 실험 동물의 처리는 장암의 화학적 예방에 대한 강력한 접근방법인 것으로 보고되었다 [Marnett, 1992; Oshima et al ., 1996; Boolbol et al ., 1996; Reddy et al ., 1996; Sheng et al ., 1997]. 발암 현상에 있어서의 iNOS의 역할에 관해서는, NO가 강력한 돌연변이 유발원이고 [Tamir and Tannebaum, 1996], 산화 질소는 또한 COX-2를 활성화시킬 수 있다는 것은 [Salvemini et al ., 1993, 1994] 명백하다. 또한, 발암원인 아족시메탄에 의해서 유도된 랫트 결장암에서 iNOS의 현저한 증가가 있다 [Takahashi et al ., 1997]. 마찬가지로, 인간 종양에서 iNOS의 과발현은 부정적인 예후인자인 것으로 보고되었다 [예를 들어, Ekemekcioglu et al ., 2006].

안지오텐신 II에 의해서 유도되는 것과 같은 염증 신호전달 경로 및 그 밖의 다른 질병-연관된 신호전달 경로는 종종 슈퍼옥사이드, 과산화수소, 산화질소 및 퍼옥시니트라이트를 포함한 반응성 산소 또는 질소 종 (RONS)의 과도한 생성을 자극한다. CDDO 메틸 에스테르는 다수의 상이한 세포 유형에서 항산화제 활성의 강력한 유도제 및 염증과정의 강력한 억제제인 것으로 나타났다 [Dinkova-Kostova et al ., 2005; Liby et al ., 2006; Ahmad et al., 2006; Shishodia et al ., 2006]. 감염, 외상, 화상 및 화학적 노출을 포함한 다양한 원인에 기인한 중증의 급성 염증은 생명에 치명적일 수 있으며, 간부전, 신부전, 호흡부전 또는 심부전을 야기할 수 있다. 만성 염증 및 연관된 산화적 스트레스는 자가면역 질환 (예를 들어, 류마티스성 관절염, 낭창(lupus), 건선 및 다발성 경화증), 심혈관 질환 (예를 들어, 아테롬성 경화증 및 심부전), 당뇨병 (제I 및 제II 형), 호흡기 질환 (예를 들어, 만성 폐쇄성 폐 질환 및 천식), 만성 신장 질환, 신부전, 간부전, 및 통증 증후군 (예를 들어, 신경병증성 통증, 섬유근육통 및 편두통)을 포함하는 다수의 중요한 질병의 병인론의 원인이다. 또한, 트리테르페노이드는 대식세포에서 HIV-1의 복제를 억제하는 것으로 나타났으며 [Vazquez et al ., 2005], 따라서 바이러스성 질병, 특히 중요한 이환율이 기관 또는 조직 염증에 의해서 야기되는 것 (예를 들어, 바이러스성 간염, 인플루엔자, 단순 포진)의 치료에 유용할 수 있다.

MS는 중추신경계의 염증성 상태인 것으로 알려져 있다 [Williams, Ulvestad and Hickey, 1994; Merrill and Beneviste, 1996; Genain and Nauser, 1997]. 염증성, 산화적 또는 면역 기전은 MS, AD, PD, 및 ALS의 병인론에 포함될 수 있다 [Bagasra et al ., 1995; Griffin et al., 1995; McGeer and McGeer, 1995; Good et al ., 1996; Simonian and Coyle, 1996; Kaltschmidt et al ., 1997]. 반응성 성상세포 및 활성화된 미세아교세포 (microglia)는 둘 다 NDD/NID의 발생에 관련되어 있으며; 각각의 효소 iNOS 및 COX-2의 생성물로서 NO 및 프로스타글란딘 둘 다를 합성하는 세포로서 미세아교세포에 특별한 중점을 두었다. 이들 효소의 새로운 형성은 인터페론-감마 또는 인터루킨-1과 같은 염증성 사이토킨에 의해서 유도될 수 있다. 다음에, NO의 과도한 생성은 AD 및 MS, 및 아마도 PD 및 ALS에서 결과적인 증상을 갖는 신경계의 뉴런 및 희소돌기아교세포(oligodendrocyte)를 포함하는 다수의 기관의 세포 및 조직에서 염증성 캐스케이드 (cascades) 및/또는 산화적 손상을 유도할 수 있다 [Coyle and Puttfarcken, 1993; Goodwin et al ., 1995; Beal, 1996; Good et al ., 1996; Merrill and Benvenist, 1996; Simonian and Coyle, 1996; Vodovotz et al ., 1996]. 역학 데이터는 아라키도네이트로부터 프로스타글란딘의 합성을 차단하는 NSAID의 만성적 사용이 AD의 발생 위험을 현저하게 저하시킴을 시사한다 [McGeer et al ., 1996; Stewart et al ., 1997]. 따라서, NO 및 프로스타글란딘의 형성을 차단하는 약제로서 CDDO 메틸 에스테르의 A 형 및 B 형은 NDD를 치료 또는 예방하기 위한 치료학적 접근방법에 유용할 것이다.

상술한 바와 같이, 다양한 전임상 연구에서 CDDO-Me는 염증 및 발암현상 둘 다와 연관된 효소인 COX-2 및 iNOS의 발현을 억제하는 능력을 나타내었다. CDDO-Me는 또한, 핵 인자-카파 B (NF-κB) 및 STAT3 (Signal Transducer and Activator of Transcription 3), 염증, 종양 진행, 및 치료에 대한 종양 저항성과 연관된 전사 인자의 활성화를 억제하는 것으로 나타났다. 초기 연구는, CDDO-Me가 다수의 암 세포주의 성장을 억제하였음을 입증하였으며; NCI-60 종양 세포주에서 CDDO-Me의 평균 IC₅₀ 값은 대략 35 nM이었다. 생체내 연구는, CDDO-Me가 설치류에 이식된 인간 종양 세포주 또는 설치류에 이식된 동계의(syngeneic) 암 세포주에 의해서 형성된 종양의 성장을 효과적으로 억제하였음을 확인하였다 (표 16). 이들 연구에서 사용된 용량은 일반적으로 종, 균주 (strain), 및 투여의 방법에 따라 10 내지 100 mg/kg/일의 범위였다.

이하에 상세히 설명한 연구는 암성 상태를 앓고 있는 환자에 대한 CDDO-메틸 에스테르의 유익한 효과를 반영하는 인간 데이터를 제공한다. 실시예 10을 참고로 한다.

전술한 바에 비추어, 본 발명은 CDDO 메틸 에스테르 형태를 함유하는 안정한 제어 방출 투약 제형을 포함한다. 본 발명의 투약 제형은 1일 1 회 투여, 지연 방출, 또는 박동성 방출을 위한 것이어서 약력학적 수행과 약동학적 필요성을 부합시킴으로써 치료를 최적화할 수 있다.

CDDO 메틸 에스테르의 B 형, A 형, 및 부형제 분산액을 함유하는 제제 중의 어떤 것이라도 경구로 투여될 수 있다. 활성 화합물은 산, 및 화합물을 불활성화시킬 수 있는 그 밖의 다른 천연 조건의 작용으로부터 화합물을 보호하기 위한 물질 중에서 코팅될 수 있다. 국소, 피하, 정맥내 및 복강내와 같은 다른 투여의 모드도 또한 본 발명의 일부분이다.

치료학적 화합물을 투여하기 위해서는, 화합물을 그의 불활성화를 방지하는 물질로 코팅하거나, 화합물을 그러한 물질과 공동-투여하는 것이 필요할 수 있다. 따라서, B 형 또는 A 형 CDDO 메틸 에스테르는 리포좀과 같은 적절한 담체, 또는 희석제 중에서 개체에게 투여될 수 있다. 약제학적으로 허용되는 희석제에는 식염수 및 완충제 수용액이 포함된다. 리포좀은 통상적인 리포좀뿐만 아니라 수중유중수 (water-in-oil-in-water) CGF 에멀젼을 포함한다 [참조: 예를 들어, Strejan et al ., J. Neuroimmunol . 7: 27(1984)].

치료학적 화합물은 약제학적 조성물을 형성시키기 위한 불활성 희석제, 첨가제 또는 식용 담체와 함께 경구로 투여될 수 있다. 이것을 위하여, 본 발명의 치료학적 화합물은 다른 성분과 함께 경질 또는 연질 외피 젤라틴 캅셀 내에 봉입되거나, 정제로 압축시키거나, 개체의 음식물에 직접 혼입시킬 수 있다. 치료학적 경구 투여를 위해서는, A 형 또는 B 형을 부형제와 결합시키고, 복용가능한 정제, 구강 정제 (buccal tablets), 트로키(troche), 캅셀제, 엘릭시르(elixir), 현탁제, 시럽, 웨이퍼 (wafer) 등의 형태로 사용될 수 있다. 마찬가지로, 본 발명의 부형제 분산액은 A 형 또는 B 형에 대해 본 명세서에 기술된 것을 포함한 다양한 투약 제형의 유형으로 제공될 수 있다. 조성물 및 제제 내의 치료학적 화합물의 백분율은 활성 약제의 적합한 투약량을 성취하도록 통상적인 관례에 따라 변화될 수 있다.

추가로, 본 발명은 하나 또는 그 이상의 약제학적으로 허용되는 무독성 담체 및/또는 희석제, 및 필요한 경우에, 다른 활성 성분과 함께 유효량의 B 형 CDDO 메틸 에스테르 또는 A 형을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 상기 언급한 바와 같이, 활성 화합물은 B 형 또는 A 형으로부터 출발하여 균질한 부형제 분산액으로 생산될 수 있다. 이러한 CDDO 메틸 에스테르 부형제 분산액은 고체 용액이며, 분자 레벨에서 균질한 분산액으로 간주될 수 있다. 이러한 분산액은 유리하게는, 다른 약제학적으로 허용되는 첨가제와 함께 제제화되어 활성 화합물을 안정화시키고, 일부의 경우에는 생체이용율을 더 개선시킬 수 있다.

CDDO 메틸 에스테르를 부형제 분산액으로 제제화할 때에, 분산액을 위한 부형제의 선택은 부형제가 우수한 "유리 형성제" 뿐만 아니라, 약제학적으로 허용된다는 기준에 의해서 유도된다. 더욱 일반적으로, 부형제는 통상적인 주위 온도 저장조건 이상의 T_g를 제공함으로써 분산액을 안정화시키는 안정하고 균질한 유리상 매트릭스를 형성하여야 한다. 이에 관한 추가의 기준은 분산액을 위해서 사용된 부형제가 원하는 기능적 특성을 부여하기 위해서 최종 제제에서 이용될 수 있는 결합제, 충진제, 윤활제, 유동화제(glidant) 등과 같은 다른 첨가제와 화학적으로 화합할 수 있어야 한다는 것이다.

이들 기준의 충족 시에, 본 발명에 따라, 부형제는 (A) 탄수화물, 탄수화물 유도체, 및 탄수화물 폴리머, (B) 합성 유기 폴리머, (C) 유기산 염, (D) 단백질, 폴리펩타이드, 및 펩타이드, 및 (E) 황산화된(sulfated) 폴리사카라이드인 헤파린, 및 뮤코폴리사카라이드인 히알우론산과 같은 고분자량 폴리사카라이드와 같이 적절하게 높은 T_g 값을 특징으로 하는 다수의 화합물로부터 선택될 수 있다.

분류 (A)의 실례는 다음과 같다: 하이드록시프로필 셀룰로즈 (HPC), 하이드록시프로필 메틸 셀룰로즈 (HPMC), 및 에틸 셀룰로즈와 같은 셀룰로즈 유도체; 라피노즈, 말토트리오즈, 스타키오즈, 덱스트린 (그 중에서 특히, 말토덱스트린 및 사이클로덱스트린을 포함), 덱스트란, 및 가용성 전분과 같은 폴리사카라이드; 만니톨, 자일리톨 및 소르비톨과 같은 알디톨; 및 락토즈, 트레할로즈, 말토즈 및 수크로즈와 같은 디사카라이드. 이 분류 중에서 바람직한 부형제는 하이드록시프로필 메틸 셀룰로즈 프탈산 에스테르 (HPMC-P)이다.

분류 (B)는 별칭이 포비돈 또는 폴리비닐피롤리돈 (PVP)인 폴리[1-(2-옥소-1-피롤리디닐)에틸렌, 및 PVP/VA와 같은 다양한 분자량의 관련된 코폴리머로 예시된다. 또한, 이 부류에는 메타크릴산 코폴리머 C 형 (USP/NF)과 같은 코폴리머의 메타크릴산 패밀리가 포함된다.

분류 (C)는 각각 락트산, 아스코르브산, 말레산, 옥살산, 말론산, 말산, 숙신산, 시트르산, 글루콘산, 및 글루탐산의 나트륨, 칼륨, 칼슘 및 마그네슘 염과 같은 염류로 예시된다. 따라서, 이에 관해서 대표적인 염은 나트륨 시트레이트, 나트륨 락테이트, 나트륨 말리에이트, 마그네슘 글루코네이트, 및 나트륨 아스코르베이트이다.

예시적인 분류 (D) 부형제는 다음과 같다: 인간 혈청 알부민; 폴리아미노산, 예를 들어, 폴리알라닌, 폴리아르기닌, 폴리글리신, 및 폴리글루탐산; 카제인; 콜라겐; 젤라틴 및 정제된 젤라틴 단백질; 및 인슐린과 같은 특정의 약물학적으로 활성인 화합물.

부형제는 언급한 바와 같은 약제학적 제제의 물리적 특징 중의 일부를 변화시킬 수 있다. 예를 들어, 다양한 폴리머성 부형제 내의 분산액은 제제의 관찰된 T_g에 있어서의 감소를 유도할 수 있다. 통상적으로, T_g는 포함된 물질의 비율에 기초하는 부가적 특성이다. 따라서, 무정형 B 형의 경우보다 작은 T_g 값을 갖는 폴리머를 이용하는 경우에는, 분산액 (혼합물)에 대해서 관찰된 T_g에 있어서의 감소가 예상된다. 추가로, 수분 또는 미량의 잔류하는 유기용매가 종종 존재하며, 이것은 역시 T_g를 감소시키는 경향이 있다.

고체 CDDO-Me 분산액을 생성시킬 목적으로, 부형제의 최적의 선택은 일반적으로, 경험적으로 결정되어야 한다. 예를 들어, PEG 6000과 같은 부형제의 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 패밀리를 사용하여 유리상의 XRPD-무정형 분산액을 생성시키고자 하는 시도는 A 형 CDDO 메틸 에스테르의 존재와 연관된 특징적 피크를 함유하는 혼합물을 생산하였다. 유사한 결과는 d-알파-토코페릴산 숙시네이트를 폴리에틸렌 글리콜 1000으로 에스테르화시킴으로써 생산된 부형제인 비타민 E - TPGS를 사용하는 것뿐만 아니라 플루로닉 (Pluronic®)과 같은 에틸렌 옥사이드 - 프로필렌 옥사이드 코폴리머를 사용하여서도 수득되었다. 이하의 실시예에서 예시된 바와 같이, 본 발명에 따라 CDDO-Me에 의한 분산액을 형성시키기 위해서 사용된 특정의 폴리머성 부형제는 순수한 B 형 약물 기질에 비해서 경구 생체이용율에 있어서 놀라운 개선을 나타낸다.

약제학적으로 허용되는 부형제와 CDDO-Me의 균질한 유리상의 X-선 무정형 분산액을 제조하기 위한 방법은 다양할 수 있으며, 본 명세서에 제시된 예는 분무 건조를 이용하여 이러한 분산액을 생성시킨다. 그 밖의 다른 제조방법을 사용하여 동등한 특성 및 유용성을 갖는 본 발명의 분산액을 생산할 수 있다 [참조: Repka et al ., 2002, 및 여기에 인용된 문헌들]. 이러한 다른 방법에는 용매 증발 및 압출, 예를 들어, 고온 용융 압출이 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다.

부형제 이외에도 다른 첨가제가 활성성분의 안정성을 돕고, pH를 조정하고 (즉, 완충제), 분산성을 개선시키고, 전달의 균일성을 제공하는 것을 돕고, 약제학적 제제에 대해서 원하는 다른 특징을 달성하기 위해서 포함될 수 있다.

본 발명의 화합물 또는 조성물의 투여된 양은 환자 및 투여의 모드에 따라 달라질 수 있으며, 어떤 유효량이라도 될 수 있다.

본 발명의 조성물의 투여를 위한 소정의 치료 계획은 다른 인자들 중에서 그의 상세한 사항이 치료학적 적응증의 함수인 표준적이고 일상적인 전 임상 및 임상 시험에 의해서 개발될 수 있다. 투여된 활성 약제의 양은 광범한 범위에 걸쳐서 변화할 수 있으며, 이에 의하여 단위 투약량 내에 환자의 체중을 기초로 한 1일의 약물학적 유효량을 제공하여 원하는 효과를 달성하도록 할 수 있다. 바람직한 투약량은 또한, 치료할 상태에 따라 달라질 수도 있다. 예를 들어, 급성 암의 치료는 관절염과 같은 염증성 상태의 치료시보다 훨씬 더 많은 용량을 필요로 할 수 있다.

특히, 본 발명의 조성물은 단위 용량으로 제공되며, 원하는 효과를 달성하기 위해서 바람직하게는 1일에 1 내지 3 회, 가장 바람직하게는 1일에 1 회 섭취한다.

또한, 본 발명의 조성물은 매 2일 마다, 매 3일 마다, 매 4일 마다, 매 5일 마다, 매 6일 마다 또는 일주일에 한 번 섭취할 수 있다.

본 발명의 조성물은 또한, 단독으로 또는 환자의 특정한 필요에 따라서 다른 약물과 함께 투여될 수 있다. 특히, 본 발명의 조성물은 치료 계획의 일부로서 항암제와 함께 투여될 수 있다. 예를 들어, CDDO-메틸 에스테르는 췌장암과 같은 암의 치료 중에 젬시타빈, 또는 다른 약제와 함께 투여될 수 있다.

일반적으로, 본 발명의 약제학적 조성물은 통상적인 물질 및 혼합, 블렌딩 (blending) 등과 같은 통상적인 기술을 사용하여 제조된다. 더구나, A 형 또는 B 형을 함유하는 의약은 또한, 적합한 보조제, 담체, 부형제 및 안정화제 등을 포함하는 (단, 이들로 제한되지 않는다) 다른 성분들을 함유할 수 있다. 본 발명의 치료학적 제제는 바람직하게는 고체이지만, 원칙적으로는 현탁액 또는 에멀젼과 같은 액체일 수 있다.

본 발명에 따라, 경구 유지 투약량은 일반적으로 약 0.1　mg 내지 약 1000 mg이며, 바람직하게는 1일에 한 번 제공된다. 투약량은 개체 체중에 따라 변화되거나 조정될 수 있다. 대표적인 투약량은 약 0.01 mg/kg 내지 100 mg/kg일 수 있으며, 바람직한 단위 투약형에는 정제 및 캅셀제가 포함된다.

도 1은 CDDO 메틸 에스테르의 화학적 구조를 도시한 것이다.
도 2는 A 형 (상부) 및 B 형 (하부)의 XRPD 패턴을 나타낸다. 상부로부터 하부까지: 비-미분화된 A 형; 미분화된 A 형; 및 B 형.
도 3은 CDDO 메틸 에스테르 (A 형)의 DSC 및 TG 곡선을 나타낸다.
도 4는 비-미분화된 A 형의 고온 스테이지 (hot stage) 분석을 나타낸다.
도 5는 비-미분화된 A 형의 동적 증기 수착 등온선 (dynamic vapor sorption isotherm)을 나타낸다.
도 6은 비-미분화된 A 형의 SEM 영상을 나타낸다.
도 7은 195℃에서의 응력 전 (상부) 및 후 (하부)의 A 형을 나타낸다.
도 8은 비-미분화된 A 형의 NMR 스펙트럼을 나타낸다.
도 9는 B 형 CDDO 메틸 에스테르의 MDSC 곡선을 나타낸다.
도 10은 60 분 동안 200℃/주위 RH에서의 열응력 전 (상부) 및 후 (하부)의 B 형 CDDO 메틸 에스테르를 나타낸다.
도 11은 B 형 CDDO 메틸 에스테르의 NMR 스펙트럼을 나타낸다.
도 12는 라벨링된 단일 A 형 분자의 ORTEP 그림을 나타낸다. 원자는 50% 확률 비등방성 열 타원체 (anisotropic thermal ellipsoids )에 의해서 표현된다.
도 13은 A 형 결정의 비대칭적 유니트의 내용물의 ORTEP 그림을 나타낸다. 원자는 50% 확률 비등방성 열 타원체에 의해서 표현된다.
도 14는 결정학적 a 축 아래에서 관측된 A 형 결정의 패킹 그림을 나타낸다.
도 15는 결정학적 b 축 아래에서 관측된 A 형 결정의 패킹 그림을 나타낸다.
도 16은 결정학적 c 축 아래에서 관측된 A 형 결정의 패킹 그림을 나타낸다.
도 17은 A 형의 계산된 X-선 분말 패턴을 나타낸다.
도 18은 A 형의 실험적 XRPD을 나타낸다.
도 19는 A 형 CDDO 메틸 에스테르의 계산된 XRPD 패턴 및 실험적 XRPD 패턴의 비교를 나타낸다.
도 20은 시노몰구스 (cynomolgus) 원숭이에게 4.1 mg/kg을 경구 투여한 후에 A 형 및 B 형에 대한 곡선하 면적의 대표적 플롯을 나타낸다. 각각의 데이터 포인트 (datum point)는 8 마리의 동물에서 CDDO 메틸 에스테르의 평균 혈장 농도를 나타낸다. 오차 막대 (error bars)는 샘플링된 집단 내에서의 표준 편차를 나타낸다.
도 21은 동물 #505M (상부 패널) 및 동물 #507F (하부 패널)에서 B 형 CDDO 메틸 에스테르 대 A 형의 혈장 농도의 비교를 나타낸 것이다.
도 22는 동물 #508F (상부 패널) 및 동물 #502M (하부 패널) 사이에서 B 형 CDDO 메틸 에스테르 대 A 형의 혈장 농도의 비교를 나타낸 것이다.
도 23은 CDDO 메틸 에스테르 헤미벤젠 용매화물의 열분석도를 나타낸다.
도 24는 CDDO-메틸 에스테르 디메탄올 용매화물의 열분석도를 나타낸다.
도 25는 CDDO 메틸 에스테르 디메탄올 용매화물에 관한 TGIR 데이터를 도시한 것이다.
도 26은 TGIR 분석 (140℃까지) 전 (상부) 및 후 (하부)의 CDDO 메틸 에스테르 디메탄올 용매화물의 XRPD 패턴을 나타낸다.
도 27은 A 형 대 B 형에 대한 PDF 데이터의 오버레이 표시 (overlay representation)이다. 부분 질서 (local order)는 약 5Å으로부터 약 20Å까지 유사하다.
도 28은 제제들 중에서 실질적인 균일성을 나타내는 B 형의 다양한 제제에 대한 X-선 무정형 패턴의 오버레이 표시이다.
도 29는 공간 그룹 P4₃2₁2 (#96)의 개략적 표시이다.
도 30은 수컷 시노몰구스 원숭이에게 CDDO-메틸 에스테르 캅셀제를 단일 경구 투여한 후에 CDDO-메틸 에스테르의 평균 혈중 농도를 나타낸다 (2 및　3 상).

이하의 실시예는 단지 설명적인 것이며, 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니다. 실시예에서 사용된 재료 및 방법은 이하에 개략적으로 나타낸다:

a. 재료

용매 및 그 밖의 다른 시약은 상업적 공급원으로부터 구입하였으며, HPLC 또는 ACS 등급이었다.

b. 실험 방법

i. 근사 용해도(approximate solubility)- 용매 첨가 방법

무게를 잰 샘플을 실온에서 시험 용매의 분취액으로 처리하였다. 시험 물질의 완전한 용해는 시각적 검사에 의해서 결정되었다. 용해도는 완전한 용해를 제공하기 위해서 사용된 총 용매에 기초 하여 평가되었다. 실제 용해도는 너무 많은 용매 분취액의 사용 때문에, 또는 느린 용해속도에 기인하여 계산된 값보다 더 클 수 있다. 실험 중에 용해가 일어나지 않았다면, 용해도는 "보다 작은" 것으로 표현된다. 완전한 용해가 단지 한번의 분취액 첨가의 결과로 달성되었다면, 용해도는 "보다 큰" 것으로 표현된다.

ii. 다형체(polymorph) 스크린

열역학적 및 동적 결정화 기술 둘 다가 사용되었다. 이들 기술은 이하에 더 상세하게 기술된다. 일단 고체 샘플을 결정화 시도로부터 수확하면, 이들을 형태학에 관한 현미경 하에서 검사하거나, 육안으로 관찰하였다. 어떤 결정성 형상이라도 표시되었지만, 때때로 고체는 작은 결정 크기로 인하여 미지의 형태학을 나타내었다. 그 후, 고체 샘플을 XRPD에 의해 분석하였으며, 패턴을 서로 비교하여 새로운 결정성 또는 비-결정성 형태를 확인하였다.

(i) 냉침전 (CP)

용액은 상승된 온도에서 다양한 용매 중에서 제조되었다. 그 후, 용액을 실온-하 온도에서 0.2-㎛ 나일론 또는 PTFE 필터를 통해 역용매 (antisolvent) 내로 여과하였다. 고체의 존재 또는 부재를 표시하였다. 고체가 존재하지 않았거나, 고체의 양이 XRPD 분석하기에는 너무 적은 것으로 판단되었다면, 바이알을 냉동기 내에 배치하였다. 생성된 고체를 여과에 의해서 분리하고, 분석하기 전에 건조시켰다.

(ii) 빠른 증발 (FE)

용액은 다양한 용매 중에서 제조되었으며, 분취액 첨가 사이에 초음파 처리하여 용해를 도와주었다. 시각적 관찰에 의해서 판단되는 바와 같이 일단 혼합물이 완전한 용해에 도달하면, 용액을 0.2-㎛ 나일론 필터를 통해서 여과하였다. 여과된 용액을 마개를 벗긴 바이알 내의 실온에서 증발하도록 두었다. 형성된 고체를 분리하여 분석하였다.

(iii) 동결 건조 (FD)

1,4-디옥산 용액을 제조하고, 0.2-㎛ 나일론 필터를 통해서 여과하고, 드라이 아이스를 사용하여 동결시켰다. 동결된 샘플을 FTS시스템 플렉시-드라이 (Flexi-Dry)를 사용하여 동결건조시켰다. 동결건조 온도는 조절되지 않았다.

(iv) 미분화

재료의 미분화는 유체 에너지 밀 (fluid energy mills) 중에서 수행될 수 있으며, 입자 크기를 1 내지 20 미크론으로 감소시킬 수 있다. 이들 방법에 대한 추가의 설명은 문헌 [Perry's Chemical Engineers'Handbook, 7^th ed. (McGraw Hill, 1998)]에서 볼 수 있다.

(v) 분쇄

고체 샘플을 소형 금속 볼을 갖는 스테인레스 스틸 밀링 로터 (milling rotor)에 배치하였다. 일부의 샘플은 첨가된 소량의 물을 가졌다 (습식 분쇄). 그 후, 샘플을 대략 20 분 동안 레테쉬 형 (Retesh type) MM220 믹서밀 (mixermill) 상에서 30 Hz로 분쇄하였다. 생성된 고체를 분리하여 분석하였다.

(vi) 동결분쇄 (cryogrinding)

고체 샘플을 분쇄 막대가 있는 스테인레스 스틸 분쇄 병에 배치하였다. 그 후, 샘플을 설정된 양의 시간 동안 SPEX 서티프레프 (Certiprep) 모델 6750 크리오밀 (cryomill) 상에서 15 Hz로 분쇄하였다. 분쇄 병은 실험 중에 액체 질소의 욕(bath) 중에 침지시켰다. 고체를 분리하여 분석하였다.

(vii) 용융/켄칭(quenching)

고체 샘플을 유리 현미경 슬라이드 상에 배치하고, 평평하게 하였다. 그 후, 슬라이드를 고체가 용융할 때까지 설정된 온도의 핫 플레이트 (hot plate) 상에 배치하였다. 용융되면, 슬라이드를 핫 플레이트로부터 꺼내고, 콜드 카운터 탑 (cold counter top) 상에 배치하여 신속하게 냉각시켰다. 생성된 고체를 질소 하에서 건조시키고, 분석하였다.

(viii) 회전 증발

용액을 다양한 용매 중에서 제조하고, 0.2-㎛ 나일론 필터를 통해서 여과하였다. 샘플을 회전 증발기 상에 배치하고, 건조하면 꺼내었다. 생성된 고체를 분리하여 분석하였다.

(ix) 느린 증발 (SE)

용액을 다양한 용매 중에서 제조하고, 분취액 첨가 사이에 초음파 처리하여 용해를 도와주었다. 시각적 관찰에 의해서 판단되는 바와 같이 일단 혼합물이 완전한 용해에 도달하면, 용액을 0.2-㎛ 나일론 필터를 통해서 여과하였다. 여과된 용액을 핀홀 (pinhole)로 구멍을 뚫은 알루미늄 호일로 덮은 바이알 내에서 실온에서 또는 질소 하에서 증발하도록 두었다. 이렇게 형성된 고체를 분리하여 분석하였다.

(x) 느린 냉각 (SC)

포화된 용액을 대략 60℃에서 다양한 용매 중에서 제조하고, 여전히 가온된 상태로 0.2-㎛ 나일론 필터를 통해서 개방 바이알 내로 여과하였다. 바이알을 덮고, 서서히 실온으로 냉각하도록 두었다. 고체의 존재 또는 부재를 표시하였다. 고체가 존재하지 않았거나, 고체의 양이 XRPD 분석하기에는 너무 작은 것으로 판단되었다면, 바이알을 냉동기 내에 배치하였다. 다시, 고체의 존재 또는 부재를 표시하고, 고체가 없다면 바이알을 냉동기 내에 배치하였다. 형성된 고체를 여과에 의해서 분리하고, 분석하기 전에 건조하도록 하였다.

(xi) 슬러리 실험

용액을 소정의 용매에 충분한 고체를 첨가하여 과잉의 고체가 존재하도록 함으로써 제조하였다. 그 후, 혼합물을 실온에서 밀봉된 바이알 내에서 진탕하였다. 7 또는 10일 후에, 고체를 진공 여과에 의해서 분리하고 분석하였다.

(xii) 응력 실험

측정된 시간 동안 상이한 온도 및/또는 상대습도 (RH) 환경 하에서 고체에 응력을 가하였다. 특정 RH 값은 샘플을 포화된 염 용액을 함유하는 밀봉된 챔버 내부에, 또는 ESPEC 온도 및 습도 캐비닛 내부에 배치함으로써 달성되었다. 염 용액을 ASTM 표준 절차에 따라서 선택하고 제조하였다. 샘플을 응력 환경으로부터 분리시킨 직후에 XRPD에 의해서 분석하였다.

iii. 단일 결정구조 측정

(i) 샘플 제조

CDDO 메틸 에스테르의 포화 용액을 ~60℃의 메탄올 중에서 제조하고, 여전히 가온된 상태로 0.2-㎛ 필터를 통해서 개방 바이알 내로 여과하였다. 바이알을 덮고, 실온으로 서서히 냉각하도록 두었다. 피라미드형 정제의 존재가 1일 후에 관찰되었다.

(ii) 데이터 수집

양면 상에서 0.01 x 0.01 mm의 적절한 크기를 갖는 CDDO-Me (C₃₂H₄₃NO₄)의 무색 플레이트를 무작위적인 배향으로 유리 섬유 상에 설치하였다. 예비 검사 및 데이터 수집은 흑연 결정, 입사 빔 단색광기가 장치된 노니우스 카파CCD (Nonius KappaCCD) 회절계 상에서 Mo K _α 방사선 (λ = 0.71073 Å)을 사용하여 수행하였다. 정련 (refinement)은 SHELX97 (Sheldrick, 1997) [1]을 사용하여 리눅스 (LINUX) PC 상에서 수행되었다.

데이터 수집을 위한 세포 상수 (cell constant) 및 배향 매트릭스(orientation matrix)는 2°< θ <　22°범위에서 46742 반사의 설치각 (setting angle)을 사용하여 최소-자승 정련으로부터 수득되었다. DENZO/SCALEPACK [2]로부터 정련된 뒤틀림정도 (mosaicity)는 우수한 결정 품질을 시사하는 0.32°이었다.공간 그룹은 프로그램 XPREP [3]에 의해서 측정되었다. 다음 조건 h00 h=2n, 00l l=4n의 체계적 존재로부터, 및 후속 최소-자승 정련으로부터 공간 그룹은 P4₃2₁2 (no. 96)인 것으로 측정되었다.

데이터는 150±1　K의 온도에서 44.43°최대 2θ값으로 수집되었다.

(iii) 데이터 정리

프레임 (frames)은 DENZO-SMN [2]에 의해서 적분되었다. 총 46742 반사가 수집되었으며, 이 중에서 9168 개가 독특하였다. 데이터에 로렌츠 (Lorentz) 및 편극 보정을 적용하였다. 선형 흡수 계수는 Mo K _α 방사선에 대해서 0.074 mm^-1이다. SCALEPACK [2]을 사용한 실험적 흡수 보정을 적용하였다. 투과 계수는 0.9995 내지 0.9999의 범위였다. 동등한 반사의 강도에 대해 평균을 구하였다. 평균치에 대한 일치 인자 (agreement factor)는 강도를 기준으로 하여 9.3%였다.

(iv) 구조 해석 및 정련(refinement)

구조를 SHELXS97 [1]을 사용한 직접적 방법에 의해서 해석하였다. 나머지 원자들은 이어지는 차등 푸리에 합성 (difference Fourier syntheses)에서 위치하였다. 수소 원자는 정련에 포함되었지만, 이들이 결합된 원자 상에 얹혀지도록 억제되었다. 구조는 다음의 함수를 최소화시킴으로써 전체-매트릭스 최소-자승 (full-matrix least-squares)으로 정련되었다:

중량 w는 1/[σ²(F _o ²) + (0.0176P)² +(0.0000P)]로 정의되며, 여기에서 P= (F _o ² +2F _c ²)/3이다.

산란인자는 문헌 ["International Tables for Crystallography" [5]]으로부터 채택하였다. 정련에 사용된 9168 반사 중에서, 단지 F _o ² > 2σ(F _o ²)를 갖는 반사만이 R을 계산하는데 사용되었다. 총 5421 반사가 계산에 사용되었다. 정련의 최종 주기는 1024개의 가변적 파라미터를 포함하였으며, 다음과 같은 단순 (unweighted) 및 가중 (weighted) 일치 인자를 가지고 집중되었다 (최대 파라메터 이동은 그의 추정된 표준 편차의 <　0.01 배였다:

단위 중량의 관찰의 표준 편차는 1.05였다. 최종 차등 푸리에에서 최고 피크는 0.22e/Å3의 높이를 가졌다. 최소 네가티브 피크는 -0.25e/ų의 높이를 가졌다.

(v) 계산된 X-선 분말 회절 (XRPD) 패턴

계산된 XRPD 패턴은 파우더셀 (PowderCell) 2.3 [6] 및 단일 결정 데이터로부터의 원자 좌표, 공간 그룹 및 단위 격자 파라메터를 사용하여 Cu 방사선에 대해서 생성되었다.

(vi) ORTEP 및 패킹 그림

ORTEP 그림은 ORTEP III [7][9]를 사용하여 작성되었다. 원자는 50% 확률 비등방성 열 타원체에 의해서 표시된다. 패킹 그림은 카메론 (CAMERON) [8] 모델링 소프트웨어를 사용하여 작성되었다. 추가의 도면 및 BFDH 형태학 예견은 머큐리 (Mercury) 1.4.1 [4]를 사용하여 생성되었다.

c. 도구적 기술

i. 시차 주사 열량법 (DSC)

분석은 TA 도구 시차 주사 열량계 2920 또는 Q1000 상에서 수행하였다. 도구는 표준물질로서 인듐을 사용하여 검정하였다. 샘플을 주름진 뚜껑 (crimped lid) 배열을 갖는 표준 알루미늄 DSC 팬 내에 배치하고, 중량을 정확하게 기록하였다. 샘플 세포를 25℃에서 평형화시키고, 질소 퍼지 하에서 10℃/분의 속도로 250℃의 최종 온도까지 가열하였다.

ii.동적 증기 수착/탈착 (DVS)

수분 수착/탈착 데이터는 VTI SGA-100 증기 수착 분석기 (Vapor Sorption Analyzer) 상에서 수집하였다. 수착 및 탈착 데이터는 질소 퍼지 하에서 10% RH 간격으로 5% 내지 95% 상대습도 (RH)의 범위에 걸쳐서 수집하였다. 샘플은 분석하기 전에 건조시키지 않았다. 분석을 위해서 사용된 평형 기준은 5 분 내에 0.010% 미만의 중량 변화였으며, 중량 기준이 충족되지 않았다면 최대 평형시간은 3 시간이었다. 데이터는 샘플의 초기 수분 함량에 대해서 보정하지 않았다. 염화나트륨 및 폴리비닐피롤리딘이 검정 표준물로 사용되었다.

iii. 칼피셔 (KF)

수분 측정을 위한 전해식 칼피셔 (KF) 분석은 메틀러 톨레도 (Mettler Toledo) DL39 칼피셔 적정기를 사용하여 수행되었다. 대략 24-32 ㎎의 샘플을 하이드라날 (Hydranal)-코울로매트 (Coulomat) AD를 함유하는 KF 적정 용기 내에 배치하였다. 그 후, 샘플을 전기화학적 산화반응에 의해서 요오드를 생산하는 발전기 전극을 이용하여 적정하였다:

2 I-　　=>　I₂　+　2e. 3 개의 반복물을 수득하여 재현성을 보장하였다.

iv. 고온 스테이지 현미경 검사

고온 스테이지 현미경 검사는 라이카 (Leica) DM LP 현미경 상에 장착된 링캄 (Linkam) 고온 스테이지 (모델 FTIR 600)를 사용하여 수행되었다. 샘플은 교차 편광기 (cross polarizers: CP) 및 람다(λ) 보정판을 갖는 20 x 대물렌즈(obj.) 를 사용하여 관찰되었다. 샘플을 커버슬립(coverslip) 상에 배치하였다. 그 후 두 번째 커버슬립을 샘플 상에 배치하였다. 각각의 샘플은 스테이지를 가열함에 따라서 시각적으로 관찰되었다. 영상은 스포트(SPOT) 소프트웨어 v. 4.5.9를 갖는 스포트 인사이트 (SPOT Insight ^TM) 칼라 디지털 카메라(color digital camera)를 사용하여 획득하였다. 고온 스테이지는 USP 융점 표준을 사용하여 검정하였다.

v. 변조된 시차 주사 열량법 (MDSC)

변조된 시차 주사 열량법의 데이터는 동결된 냉각 시스템 (RCS)이 장치된 TA 도구 시차 주사 열량계 상에서 수득되었다. 샘플을 알루미늄 DSC 팬 내에 배치하고, 중량을 정확하게 기록하였다. 팬을 뚜껑으로 덮고, 주름지게 하였다. MDSC 데이터는 -25℃로부터 250℃까지 2℃/분의 기본 가열속도로 60 초의 기간 및 +/- 0.8℃의 변조 진폭(modulation amplitude)을 사용하여 수득하였다. 온도 및 열 용량은 각각 검정 표준물로서 인듐 금속 및 사파이어를 사용하여 검정하였다. 보고된 유리 전이 온도는 가역적 열유동 대 온도 곡선에서의 단계 변화의 변곡으로부터 수득된다.

vi. 핵자기공명 (NMR)

용액상 ¹H NMR 스펙트럼은 스펙트라 데이터 서비시즈, 인코포레이티드 (Spectra Data Services, Inc.)로부터 수집하였다. 획득 파라메터를 각각의 스펙트럼 상에 찍는다. 스펙트럼은 0.0 ppm에서 내부 테트라메틸실란을 참조로 한다.

vii. 광학 현미경 검사

광학 현미경 검사에 의해서 이루어진 관찰 결과는 4x의 배율로 울프 (Wolfe) 편광 광학 현미경 상에서 수집되었다. 교차 편광기 (CP)를 사용하여 샘플 내에서의 복굴절을 관찰하였다.

viii. 주사 전자 현미경 검사 (SEM)

주사 전자 현미경 검사 (SEM)는 FEI 콴타 (Quanta) 200 주사 전자 현미경을 사용하여 수행되었다. 고진공 모드 하에서, 고체상태 후방산란 (Etd) 검출기가 사용되었다. 빔 전압은 5.0 kV였다. 샘플을 75 초 동안 ~20 mA 및 ~0.13 mbar (Ar)에서 크레싱톤 108아우토 스퍼터 코팅기 (Cressington 108auto Sputter Coater)를 사용하여 Au/Pd로 스퍼터 코팅하였다. 샘플을 알루미늄 샘플 마운트 (mount)에 고정된 탄소 이중-스틱 테이프 상에 소량을 배치함으로써 분석을 위해서 준비하였다. 도구는 NIST 표준을 사용하여 배율에 대해서 검정하였다. 데이터는 xTm (v. 2.01), 빌드 번호 (build number) 1564를 사용하여 수집하고, XT Docu (v. 3.2)를 사용하여 분석하였다. SEM 영상에 관하여 보고된 배율은 초기 데이터 획득 시에 계산하였다. 각각의 영상의 하부에 보고된 스케일바 (scale bar)는 영상을 리사이징 (resizing)하면 정확하며, 크기 측정을 할 때에 이용되어야 한다.

ix. 열중량법 (TG)

분석은 TA 도구 2950 열중량 분석기 상에서 수행되었다. 검정 표준은 니켈 및 알루멜 (Alumel^TM)이었다. 각각의 샘플을 알루미늄 샘플 팬 내에 배치하고, TG 로 (furnace) 내에 삽입하였다. 샘플을 우선 25℃에서 평형화시킨 다음에, 다른 식으로 명시되지 않는 한은 350℃의 최종 온도까지 10℃/분의 가열 속도로 질소의 스트림 하에서 가열하였다.

x. X-선 분말 회절 (XRPD)

(i) 인넬 (Inel) XRG-3000

X-선 분말 회절 분석은 또한, 120°의 2θ 범위를 갖는 만곡된 위치-민감성 검출기가 장치된 인넬 (Inel) XRG-3000 회절계 상에서 수행되었다. 실시간 데이터는 0.03°2θ의 분해능에서 Cu Kα 방사선을 사용하여 수집하였다. 튜브 전압 및 암페어수는 각각 40 kV 및 30 mA로 설정되었다. 패턴은 직접 패턴 비교를 용이하게 하기 위해서 2.5로부터 40°2θ까지 표시된다. 샘플은 이들을 얇은 벽의 유리 모세관 내로 충진시킴으로써 분석을 위해서 준비하였다. 각각의 모세관을 데이터 획득 중에 모세관의 스피닝 (spinning)을 허용하도록 모터를 장치한 측각기(goniometer) 헤드 (head) 상에 장착하였다. 도구 검정은 실리콘 참조 표준물을 사용하여 매일 수행되었다.

d. 추가의 계산 기술

i. PDF

x-선 무정형 데이터의 컴퓨터 분석에 사용된 한가지 기술은 짝 분포 함수 (Pair Distribution Function; PDF)이다. 명칭이 시사하는 바와 같이, PDF는 물질들 내에서 모든 간섭성 원자-원자 상호작용의 일차 합계 (linear sum)로부터 구성된다. 결함이 있는 (무질서한) 물질은 결정성 상과 동일한 원자-원자 상호작용을, 그러나 감소된 길이 스케일에 걸쳐서 나타낼 것이다. 따라서, 이러한 물질은 처음 몇 나노미터에 걸쳐 PDF 내의 피크를 검사함으로써 모 결정성(parent crystalline) 물질과 비교할 수 있다. 0 Å 내지 약 5 Å의 범위에서 스펙트럼의 비교는 이 부분에서의 결함으로 인하여 어렵다.

유리상 물질의 형성 시에, PDF 피크는 분자가 이들의 위치를 이완함에 따라서 결정성 피크 위치로부터 약간의 이동을 나타낼 것이다. 이것은, 비록 PDF 피크가 약간 이동하더라도 상대적 피크 강도는 원래의 결정성 물질과 관련되는 것으로 여전히 인식 가능할 수 있는 열 팽창/수축 현상과 유사하다. 물질이 열역학적 무정형 상태로 들어감에 따라서, 포인트 그룹 대칭관계의 일부는 상실되어 감소된 복잡성의 PDF 를 제공할 것이다. 또한, 여기에서는 약간의 피크 이동이 있을 수 있다. 유리상/무정형 물질은 2 내지 3 개의 가장 가까운 이웃한 (nearest neighbor; NN) 간격에 걸쳐 0으로 빠르게 떨어질 수 있는 PDF를 나타낼 것이다.

x-선 패턴에서 배경을 최소화시키기 위한 측정 조건이 사용되며, 측정된 x-선 데이터로부터 PDF를 계산하기 위한 알고리즘이 사용된다. PDF는 모든 샘플에 대해 측정된 데이터의 전체 범위를 사용하는 패턴매치 (PatternMatch) v 2.2.1을 사용하여 계산하였다.

실시예 1 - 용해도 평가

근사 용해도는 실온에서 다양한 용매 중에서 측정되었으며, 표 2에 제시된 바와 같은 결과를 가졌다. CDDO 메틸 에스테르는 사용된 대부분의 유기 용매 중에서 높은 용해도를 나타낸다. 물 중에서의 용해도는 0.1　mg/mL 미만인 것으로 보인다.

실시예 2 - 다형체 스크린 결과

대략 50 개의 다형체 스크린 실험이 수행되었다. A 형은 샘플 중 대략 50%로부터 관찰되었다. A 형의 형성은 특별한 결정화 조건에 한정되지 않았으며, 다양한 상이한 실험 및 용매로부터 제조되었다. B 형 물질은 동결건조, 용융/켄칭(quenching), 및 몇 가지의 증발 실험으로부터 제조되었다.

다형체 스크린 샘플은 사용된 용매 별로 표 3-5에 알파벳순으로 열거하였다. A 형 및 B 형 물질의 대표적인 XRPD 패턴은 도 2에서 비교하였다. 형태들의 특징적인 데이터는 이하의 실시예에서 요약하였다.

실시예 3 - CDDO - 메틸 에스테르의 특정화 - A 형 (비-미분화됨)

A 형은 용매화되지 않는다 (표 6). A 형의 단일 결정 구조는 상술한 방법을 기초로 측정되었다. CDDO-메틸 에스테르의 결정을 성장시켜 단일 결정 구조 분석을 위해서 제출하였다. 결정 구조는 단일 결정 X-선 회절에 의해서 측정되었다. CDDO-메틸 에스테르의 제안된 구조는 도 1에 나타내었다.

사각형 세포 파라미터 및 계산된 용적은 다음과 같다: a = 14.21620(10) Å b　=　14.21620(10) Å, c = 81.5875(12) Å, α = 90.00°, β = 90.00°, γ= 90.00°, V = 16488.9(3)　Å. CDDO 메틸 에스테르의 분자량은 505.70 g/mol이고, Z = 24로 1.222 g cm^-3의 계산된 밀도를 제공한다. 공간 그룹은 P4₃2₁2 (no. 96)인 것으로 측정되었다. 결정 데이터 및 결정학적 데이터 수집 파라미터의 요약은 표 10에 제시된다.

수득된 구조의 품질은 0.051 (5.1%)의 R-값에 의해서 나타나는 바와 같이 높다. 통상적으로 0.02 내지 0.06 범위의 R-값은 가장 신뢰할 수 있게 결정된 구조에 대해서 인용된다.

단일 CDDO 메틸 에스테르 분자의 ORTEP 그림은 도 12에 나타내었다. 도 13에 나타낸 비대칭적 유니트는 3 개의 CDDO 메틸 에스테르 분자를 함유한다. 분자는 도 1에서 제안된 구조와 동일하다.

a, b, 및 c 결정학적 축을 따라서 관측된 패킹 그림은 각각 도 14-16에 나타내었다. 결정 구조는 수소 결합이 없이 다수의 반 데어 발스 (van der Waals) 상호작용을 포함한다. 결정학적 b 축 아래에서의 관측 (도 15)은 사각형 스크류 축의 패킹 정렬의 나선형 성질 및 예견된 BFDH 형태학을 강조한다. 예견된 형태학은 데이터 수집에 사용된 단일 결정의 관찰된 성질과 잘 일치한다.

단일 결정 데이터로부터 생성된 CDDO 메틸 에스테르의 계산된 XRPD 패턴은 도 17에 제공된다. CDDO 메틸 에스테르의 실험적 XRPD 패턴은 도 18에 제공된다. A 형 XRPD 패턴의 특징적인 피크는 표 17에 제공된다. 계산된 패턴과 실험적인 XRPD 패턴의 비교 (도 19)는 실험적 패턴 내의 모든 피크가 계산된 XRPD 패턴에 표시되는 것을 보여주며, 이것은 벌크 물질이 단일상일 것 같음을 시사한다. 피크 위치에서 관찰된 약간의 일관된 이동은, 실험적 분말 패턴이 실온에서 수집되었으며, 단일 결정 데이터는 150°K에서 수집되었다는 사실에 기인하는 것 같다. 단일 결정 분석에 저온을 사용하여 구조의 품질을 개선시킨다.

요약하면, CDDO 메틸 에스테르 A 형의 단일 결정 구조는 제안된 분자 구조와 일치하는 것으로 결정되었다. 공간 그룹은 P4₃2₁2 (no. 96)인 것으로 결정되었다. CDDO 메틸 에스테르의 구조는 결정학적 b 축 아래에서 나선형 성질로 패킹된 3 개의 분자로 구성된다. 실험적 패턴 내의 모든 피크는 계산된 XRPD 패턴에 표시되며, 이것은 벌크 물질이 단일상일 것 같음을 시사한다.

A 형의 열 데이터는 도 3에 나타내었다. DSC 곡선은 대략 157℃에서 기준선 이동 및 대략 222℃의 개시 온도 (~224℃에서 시그날 최대)를 갖는 흡열을 나타낸다. ~224℃에서의 현상은 고온 스테이지 현미경 검사에 의한 용융으로 확인되었다 (도 4). 열중량법 (TG) 곡선은 150℃까지 0.34%의 무시할 수 있는 중량 손실에 이어서 150 내지 210℃에서 1.2%의 중량 손실을 나타낸다. 칼피셔 데이터는 물질이 대략 0.38% 잔류 수분을 함유하는 것을 나타내며, 이것은 TG에 의해서 관찰된 초기 중량 손실과 일치한다.

DVS 데이터는 A 형이 흡습성이 아님을 시사한다 (도 5). 이 물질은 실험 전체에 걸쳐서 무시할 수 있는 중량 변화를 나타낸다. 생성된 물질은 XRPD에 의해서 분석하였으며, A 형이다.

SEM 영상은 도 6에 나타내었다. 피라미드, 정제 및 플레이트-유사성을 포함한 몇 가지의 성질이 관찰된다.

다양한 조건에서 A 형의 물리적 안정성을 조사하였다 (표 7). 7일 동안 25℃/60% RH 또는 40℃/75% RH로 응력을 받은 샘플은 무시할 수 있는 중량 변화 (각각, 0.6% 손실 및 0.2% 증가)를 나타내었으며, 이것은 A 형이 흡습성이 아님을 암시한다. 2 개의 샘플을 대략 20 분 동안 볼 밀 상에서 분쇄하였으며, 하나는 건조하고, 하나는 소량의 물을 포함하였다. 모든 샘플을 XRPD에 의해서 재분석하였으며, A 형으로 잔류하였다. 샘플에게 15 분 동안 195℃에서 응력을 가하였으며, 2% 중량 손실을 나타내었다. 생성된 물질의 XRPD는 A 형의 것과 유사하지만, 기준선 노이즈 (noise)의 증가가 명백하다 (도 7).

용액 NMR 스펙트럼은 도 8에 나타내었다. 스펙트럼은 CDDO 메틸 에스테르의 구조와 일치한다. 대략 1.6 및 7.3 ppm에서의 피크는 각각 물 및 클로로포름으로 (교환으로 인함) 확인된다.

A 형은 용매화되지 않으며, 흡습성이 아니고, 따라서 이것은 고온 스테이지 현미경 검사의 관찰결과를 기초로 할 때 대략 228℃에서 용융한다.

실시예 4 - CDDO - 메틸 에스테르의 특정화 - A 형 (미분화됨)

미분화된 A 형 CDDO 메틸 에스테르는 XRPD에 의해서 A 형인 것으로 결정되었다 (도 2, 표 1). 미분화된 물질은 에어 젯트 밀링 (air jet milling)과 같이 본 기술분야에서 잘 알려진 통상적인 방법에 의해서 생산될 수 있다. 이들 관찰결과는, 미분화가 그의 XRPD 패턴을 변화시키도록 A 형에 영향을 미치지 않았음을 시사한다.

실시예 5 - CDDO - 메틸 에스테르의 특정화 - B 형

B 형 물질은 표 3에 제시된 바와 같이 동결건조, 용융/켄칭, 및 몇 가지의 다른 증발 실험으로부터 제조될 수 있다.

변조된 DSC (MDSC) 데이터는 도 9에 나타내었다. 가역적 곡선은 대략 125℃에서 유리 전이 온도 (Tg)를 나타낸다. 비-가역적 곡선은 195℃에서 시그날 최대를 갖는 발열 및 223℃에서 시그날 최대를 갖는 흡열을 나타낸다. 비-가역적 현상은 아마도 B 형 물질의 결정화 (발열)에 이은 결정화된 물질의 용융 (흡열)에 기인하는 것 같다.

다양한 조건에서 B 형 물질의 물리적 안정성이 조사되었다 (표 9). 22℃/97% RH, 40℃/ 75% RH, 80℃/0% RH, 및 195℃/주위 RH에서 응력을 받은 샘플은 B 형으로 잔류하였다. 물질에 대해 200℃/주위 RH에서 60 분 동안 응력을 가하면 A 형 물질과 함께 미량의 B 형 물질이 생성되었다 (도 10).

용액 NMR 스펙트럼은 도 11에 나타내었다. 스펙트럼은 CDDO 메틸 에스테르의 구조와 일치한다. 대략 1.6, 5.3, 및 7.3 ppm에서의 피크는 각각 물, 디클로로메탄, 및 클로로포름으로 지정된다.

B 형은 흡습성이 아니며, 대략 200℃에서 A 형으로 결정화하고, 대략 125℃-130℃의 유리 전이 온도 (Tg)를 갖는다.

요약하면, B 형은 흡습성이 아니다. MDSC 데이터는 B 형의 유리전이온도 (Tg)가 대략 125℃ - 130℃임을 나타낸다. B 형 물질은 약 200℃에서 응력을 가하면 A 형으로 결정화한다.

실시예 6 - B 형 CDDO - 메틸 에스테르 및 CDDO - 메틸 에스테르 폴리머 부형제 분산액에 대한 안정성 시험

(i) 정제된 B 형 시험

B 형 CDDO-메틸 에스테르를 다양한 응력 조건에 적용하였다. 표 15는 이들 시험으로부터의 결과의 일부를 제공한다. 용매로서 에틸 아세테이트의 사용을 수반하는 본 발명의 유용하지만 덜 바람직한 구체예에 의해서 생산된 B 형 CDDO-메틸 에스테르는 상당한 안정성을 나타낸다. 그럼에도 불구하고, 에틸 아세테이트의 존재 하에서 생산된 B 형 샘플의 시험은 60℃ 및 그 이상의 온도에서 저장한 지 28일 후에 A 형이 형성되는 것을 나타내었다. 그에 반해서, 이하의 실시예 11로 예시되는 본 발명의 바람직한 구체예에 따라 생산된 모든 샘플은 특별히 혹독한 조건 하에서 응력 시험한 후에 무정형 특징을 유지하였다 (참조: 표 15). 이들 시험은, 특히 상기 언급한 바람직한 구체예에 따라 제조되는 경우의 B 형 물질의 놀라운 안정성을 나타낸다.

또한, 다양한 조건 하에서 제조된 B 형 샘플은, 이들이 유사한 화학적 특성을 갖는지 여부를 측정하기 위해서 분석하였다. 상술한 바와 같이, 즉 B 형 샘플은 동결분쇄, 용융 켄칭, 및 분무 건조방법에 의해서 제조되었다. 또한, 비-미분화된 B 형을 미분화하여 미분화된 B 형을 생산하였다. 성질이 유리상인 것으로 측정된 샘플 (도 28)에 대해서 PDF 분석을 수행하였다.

(ii) CDDO-Me 분산액 제제에 의한 시험

시험은 분무 건조에 의해서 생산된 다양한 B 형:폴리머 고체 분산액의 성능을 비교하기 위해서 수행되었다. 시험한 생성물 속성은 안정성 및 약물 용해 프로필을 포함하였다.

상이한 폴리머를 3 가지 활성 약제학적 성분 (API) 대 폴리머 비 (20:80; 40:60 및 60:40 %w/w)로 사용하였다.

이하의 3 가지 폴리머가 선택되었다:

메타크릴산 - 에틸 아크릴레이트 코폴리머 (1:1)

코포비돈 [1-비닐-2-피롤리돈-비닐 아세테이트 코폴리머 (3:2)]

하이프로멜로즈 프탈레이트.

A 형 결정성 물질 또는 B 형 물질인 CDDO-Me, 및 시험을 위해서 선택된 폴리머의 용액을 적절한 중량비로, 전형적으로는 용액 중에서 10-20 중량%의 고체를 제공하는 비로 적합한 용매에 용해시켰다. 전형적으로 사용된 용매는 아세톤이었다. 생성된 용액을 건조 및 담체 가스로서 질소를 사용하여 2-유체 노즐이 장치된 실험실 규모 분무 건조기 (BUCHI, 모델 B-290)에 의해서 분무 건조하였다. 전형적으로 65-85℃의 담체 가스 유입 온도 및 50-60℃의 유출 온도가 사용되었다. 고체를 수집하고, 분무 건조된 분말을 진공 하에서 후 건조시켜 유기 용매의 레벨을 더 감소시켰다.

분무 건조된 분말을 잔류 유기 용매의 레벨, 유리전이온도 (T_g) 및 벌크 밀도에 대해서 분석하였다. 후-건조시킨 후에, 분말을 또한 순도, 수분 함량, 평균 입자 크기, X-선 분말 회절 (XRPD)에 의한 결정성 물질의 부재 및 용해 프로파일에 대해서도 분석하였다.

분산액의 물리화학적 특징은 단기간 응력을 가한 후에 (40℃/75% RH로 5일 후에) XRPD 및 변조된 시차 주사 열량법 (mDSC)에 의해서 평가하였다.

이들 시험은 유리전이온도 T_g가 단기간 응력 후에, 아마도 응력의 과정에 걸친 수분의 흡수로 인하여 감소하였음을 나타내었다. 감소는 낮은 CCDO 메틸 에스테르　:　폴리머 비를 갖는 제제에 의해서 더 현저하였다. 단기간 응력을 가하기 전의 샘플에 대해서 하나 또는 두 개의 흡열적 전이가 더 고온에서 관찰되었지만, 이들 온도는 초기에 관찰된 것보다는 다소 더 낮다. 이들 전이와 연관된 엔탈피 (enthalpy)는 폴리머 함량이 감소함에 따라서 감소하였다. 이것은 이 전이가 필경 결정성 형태의 용융이 아니라 폴리머와 연관되는 것임을 시사하는 것이다. 실제로, PVP/VA에 의해서 생산된 분산액의 경우에, 이 흡열적 전이의 온도는 제조자로부터 받은 순수한 부형제에 대해서 관찰된 것과 유사하였다. 각각의 경우에, 응력을 가한 후의 XRPD 프로파일은 계속해서 13.5 °2θ에서 중심이 되는 특징적인 할로 패턴이었으며, 결정성 형태와 연관된 피크는 검출되지 않았다.

두 가지 제제에 대한 추가의 분무 건조 시험을 더 큰 규모의 분무 건조장치를 사용하여 수행하였다. 이들 경우에는, 니로 (Niro) 파일롯 규모 건조기 모델 PSD-1 (mobile minor 2000)이 사용되었다. 또한, 상술한 것과 동등한 노즐 및 분무 건조 조건이 사용되었다. 표 20 및 21에는 분무 건조를 위해서 제조된 용액 및 분무 건조한 후의 이들의 특징을 요약하였다. 제제는 B 형보다 더 낮은 T_g를 갖는 폴리머를 포함하는 제제로 인하여 순수한 B 형에 비해 더 낮은 T_g를 나타내었다.

실시예 7 - CDDO 메틸 에스테르의 투여:

시노몰구스 원숭이에게서 B 형 대 A 형

이 시험의 1 상에서는, 순수한 미분화된 A 형 CDDO-Me 또는 순수한 미분화된 B 형 CDDO-Me를 함유하는 일정량의 경질 젤라틴 캅셀제를 (i)　적절하게 무게를 잰 함량의 순수한 형태의 약물 성분을 1 호 경질 젤라틴 캅셀에 첨가한 다음에, (ii) 캅셀을 밀폐시킴으로써 제조하였다. 추가의 부형제는 사용되지 않았다. CDDO 메틸 에스테르 B 형 또는 A 형은 젤라틴 캅셀 내에 넣어 시노몰구스 원숭이에게 경구로 투여되었다 (투약량 = 모든 경우에 4.1 mg/kg).

CDDO 메틸 에스테르 B 형의 투여는 원숭이에게서 CDDO 메틸 에스테르 A 형의 동등한 투약량보다 대략 520% 더 큰 중앙 노출 (median exposure)을 제공하였다. 표 11은 개개 동물의 약물 노출을 비교하였다. 크로스오버 (crossover) 디자인이 이 시험에서 수행되어 'n' 값을 증가시키고, 데이터 신뢰성을 증진시켰다. 크로스오버 중에는 1 주일의 배설기간 (wash-out period)을 두었다. 도 20은 샘플링된 집단에서 시간에 걸친 CDDO 메틸 에스테르의 두 가지 형태 모두의 도달된 혈장 농도를 나타낸다. 도 21은 동물 #505M 및 #507F의 비교 CDDO 메틸 에스테르 혈장 농도를 나타낸다. 도 22는 동물 #508F 및 #502M의 비교 CDDO 메틸 에스테르 혈장 농도를 나타낸다.

CDDO-메틸 에스테르 부형제 분산액을 함유하는 것을 포함한 CDDO-메틸 에스테르의 경구 투약 제형의 비교 생체이용율을 더 평가하기 위해서, 이하에 상세히 설명하는 두 가지 추가의 2 및 3 상 시험을 수행하였다. 이들 시험에는 실시예 6에 기술된 CDDO-Me B 형-폴리머 분산액 중의 일부가 포함되었다. 모든 제제는 통상적으로 사용되는 제제 첨가제를 포함하였다.

2 상:

나노결정성 CDDO-Me의 수성 현탁액은 미분화된 A 형 물질의 샘플로부터 출발하여 생산되었다. 2 mm 평균 크기의 지르코니아 볼을 함유하는 레츠쉬 플라나토리 볼 밀 (Retsch^® Planatory Ball Mill) 모델 PM 400에 25 gm의 미분화된 CDDO-Me (평균 입자 크기 분포 6.1 uM), 5 gm의 도쿠세이트 나트륨, 1 gm의 트윈 (Tween) 80, 및 68.3 gm의 물로 충진하였다. 분쇄는 대략 400 RPM에서 시작하였으며, 2 시간 동안 계속하였다. 레이저 광 입도계 (laser light granulometer)를 사용한 입자 크기 분포 (PSD) 측정은 0.37 μM의 평균 PSD가 수득되었음을 나타내었다. 이러한 농후한 현탁액에 1 gm의 미세결정성 셀룰로즈 및 0.2 gm의 크산탄 고무를 단시간 혼합하면서 첨가하고, 현탁액을 냉동 저장하였다.

볼 밀링된 나노 현탁액을 0.4 mm의 분무 노즐 크기를 갖는 상부 분무 조립체로 실험실 규모 에어로마틱 스트레아 (Aeromatic Strea) 1 유동상 내의 건조 부형제 블렌드 상에 분무 건조시켰다. 유입 온도는 55℃로 설정하였다. 분무 중에 배기 온도 범위는 32 내지 35℃였다. 생성된 과립을 배기 온도가 38℃에 도달할 때까지 대략 5 분 동안 건조시켰다 (첨부 3-5). 코팅된 물질의 조성은 이하에 제시된다.

생성된 건조 과립을 HPLC 분석을 위해서 제공하여 활성성분의 함량을 측정하였다. 이 함량은 14.4% (wt/wt)인 것으로 측정되었으며, 이것은 이론적 값 (5.7%)보다 실질적으로 더 큰 것이다. HPLC 분석을 기초로 하여, 캅셀은 30 mg의 순 CDDO-Me 함량이 제공되도록 충진되었다.

결정성 미분화된 A 형 및 무정형 미분화된 B 형 제제는 첨가제로서 미세결정성 셀룰로즈, 프리젤라틴화된(pregelatinized) 전분, 크로스포비돈 (붕해제로 작용함), 콜로이드성 이산화규소, 및 식물 등급의 마그네슘 스테아레이트를 사용하여 통상적인 건조 분말 블렌딩 방법에 의해서 생산되었다. 평균 PSD 6.1 μM의 미분화된 CDDO-Me A 형이 A 형 제제에 사용되었으며, 반면에 평균 PSD 10.8 μM의 미분화된 CDDO-Me B 형이 상응하는 CDDO-Me B 형 제제에 사용되었다. 이하의 표는 두 가지 제제 모두의 정량적 조성을 나타내는 것이다.

각각 15 마리의 수컷 시노몰구스 원숭이 (Macaca fascicularis)에게 10 mg/kg의 표적 용량 레벨로 CDDO-메틸 에스테르 (3 가지 상이한 제제, 제제당 5 마리의 원숭이)를 단일 경구 투여하였다. 원숭이는 연령이 1-3 세이고, 크기는 2.5-3.5 kg의 범위였다. 혈액 샘플은 투약-후 72 시간까지 수집하였다.

3 상 :

실시예 6에 기술된 CDDO-Me 부형제 분산액은 첨가제로서 미세결정성 셀룰로즈, 락토즈 일수화물, 크로스포비돈 (붕해제로 작용함), 및 나트륨 라우릴 설페이트를 사용하여 통상적인 건조 분말 블렌딩 방법에 의해서 더 제제화되었다. 각각의 제제의 정량적 조성은 이하에 나타내었다.

적합한 배설기간 (7 내지 10일) 후에, 2 상에서 사용된 동일한 15 마리의 수컷 시노몰구스 원숭이 각각에게 10　mg/kg의 표적 용량 레벨로 CDDO-메틸 에스테르 (3 가지 상이한 제제, 제제당 5 마리의 원숭이)를 단일 경구 투여하였다. 혈액 샘플은 투약-후 72 시간까지 수집하였다.

이하의 도표에는 시험의 각각의 상을 요약하였다.

수컷 시노몰구스 원숭이에게 투여된 평균 정맥 내 및 경구 용량, 및 CDDO-메틸 에스테르의 평균 농도는 이하에 요약하였다:

젤라틴 캅셀 2 호가 2 상에서 제제를 전달하기 위해서 사용되었으며, 젤라틴 캅셀 1 호가 3 상에서 전달을 위해서 사용되었다. 각각의 캅셀제에서 순수한 약물 함량은 각각의 원숭이의 체중이 3 kg이었다는 전제를 기초로 하여 약물의 10　mg/kg 투약량에 상응하는 30 mg이었다. 캅셀제를 위관 영양법을 위한 고무관 (gavage)에 부착시키고, 동물에게 위관 영양법을 실시하고, 캅셀제를 빈 시린지로부터 공기 압력에 의해서 상기 고무관의 말단으로부터 방출시켰다. 마지막 캅셀제를 투여한 후에 소량의 물 (약 10　mL)을 경구로 제공하였다.

일련의 혈액 샘플 (대략 1　mL)을 이하의 시점 각각에 각각의 동물의 대퇴 정맥 또는 동맥으로부터 분리하여 K₂-EDTA를 함유하는 튜브 내로 옮겼다 (실제 시간을 기록하였다):

2 상 투약-전, 투약-후 1, 2, 4, 8, 16, 24, 48 및 72　시간

3 상 투약-전, 투약-후 1, 2, 4, 8, 16, 24, 48 및 72 시간

모든 샘플을 수집한 후에 완전히 혼합시키고, 대략 4℃에서 냉장하기 전에 습윤 얼음 상에 배치하였다. 혈액 중의 CDDO-메틸 에스테르 농도는 HPLC-MS/MS에 의해서 분석하였다.

결과는 표 22 및 도 30에 제시하였다. 2 상의 경우에, B 형은 시험한 2 가지 A 형 제제에 비해 상당히 더 우수한 생체이용율을 나타내었다. 3 상 결과는 각각의 CDDO-Me　:　폴리머 분산액-기본 제제가 미분화된 A 형 또는 나노결정성 A 형 제제보다 훨씬 더 큰 생체이용율을 가졌음을 나타낸다. 메타크릴산 코폴리머 C 형 및 HPMC-P 제제는 대상 원숭이에게서 최대 생체이용율을 나타내었다.

실시예 8- CDDO - 메틸 에스테르의 헤미벤젠에이트 형태의 특정화

CDDO 메틸 에스테르의 합성으로부터 최종 회수 단계를 반복하는 다양한 실험을 수행하였다 [Honda et al ., 2000]. 목적은 벤젠/아세톤 (10:1)의 용액 혼합물로부터 결정성 물질의 분리였다.

대략 100 mg의 CDDO-메틸 에스테르를 300 ㎕의 벤젠/아세톤 (10:1)에 용해시키고, 0.2-㎛ 나일론 필터를 통해서 여과하였다. 그 후, 용액을 10 분 동안 초음파 프로세서 (ultrasonic processor)를 사용하여 초음파 처리하고, 마개를 하지 않은 바이알 내에서 밤새 실온에서 증발하도록 두었다. 투명한 겔을 형성하였으며, 100 ㎕의 벤젠/아세톤 (10:1)을 첨가하였다. 용액을 대략 30 분 동안 초음파 프로세서 상에서 초음파 처리하도록 제공하였다. 백색 침전이 형성되었다. 고체를 공기 건조하도록 두었다.

다른 실험에서는, 대략 200 mg의 CDDO-메틸 에스테르를 0.8 mL의 벤젠/아세톤 (10:1)에 용해시키고, 0.2-㎛ 나일론 필터를 통해서 여과하였다. 그 후, 용액을 2 개의 1-드램 바이알 내로 균등하게 분할하였다. 그 후, 샘플 A 및 B를 실온에서 몇 시간 동안 빠르게 증발하도록 두었다. 샘플 A는 마개를 하여 냉동고 내에 배치하였다. 샘플이 동결한 후에, 샘플은 실온에서 해동하도록 두었다. 작은 스크래치 (scratch)를 약수저 (spatula)를 사용하여 도입시키고, 샘플을 실온에서 증발하도록 두었다. 백색 고체가 형성되었으며, 공기 건조하도록 두었다. 샘플 B는 마개를 하고, 실온에서 방치하고, 실온에서 밤새 정치시킨 후에 투명한 용액이 되었다. 작은 스크래치를 약수저를 사용하여 도입시키고, 샘플을 실온에서 증발하도록 두었다. 백색 고체가 형성되었으며, 공기 건조하도록 두었다.

헤미벤젠에이트인 것으로 측정된 결정성 물질은 이들 실험 중의 몇 가지로부터 수득되었다. 상술한 바와 같이, 초음파 처리 또는 단순히 회수 용기 내에서 작은 스크래치의 도입과 같은 사소한 동요(disturbance)는 벤젠 용매화물의 결정화를 용이하게 할 수 있다 (표 12).

헤미벤젠에이트의 특정화 데이터는 표 13에 요약하였다. 헤미벤젠에이트 XRPD 패턴에 대한 특징적인 피크는 표 19에 제시되었다. DSC 곡선은 TG 열분석도 (thermograph) 도 23에서 ~7.0%의 중량 손실과 연관된 133℃ 근처에서의 광범위한 흡열을 나타낸다. 중량 손실은 벤젠의 휘발에 기인하는 것 같으며 (참조: 이하의 NMR 설명), CDDO-메틸 에스테르의 각 몰에 대해서 0.5 몰의 벤젠에 해당한다. 223℃ 근처에서 관찰된 DSC 흡열은 필시 탈용매화된 물질의 용융으로 인한 것이다.

이들 데이터는 이전에 분리된 CDDO-메틸 에스테르의 형태를 본 발명과 구별하는 것이다.

실시예 9 - CDDO - 메틸 에스테르의 신규한 디메탄올레이트 형태의 특정화

CDDO-메틸 에스테르 디메탄올 용매화물은 이하의 절차에 따라서 제조되었다. 대략 500 mg의 CDDO-메틸 에스테르를 60℃에서 20 mL의 메탄올에 용해시켰다. 그 후, 용액을 진탕하면서 -10℃에서 20 mL의 냉 메탄올에 서서히 첨가하였다. 백색 고체를 진공 여과에 의해서 수집한 다음에, 냉동고 내에서 저장하였다.

특정화 데이터는 표 14에 요약하였다. 디메탄올레이트 XRPD 패턴에 대한 특징적 피크는 표 18에 제시하였다.

DSC 곡선은 TG 열분석도 (도 24)에서 ~11%의 중량 손실과 연관된 102℃ 근처에서의 광범위한 흡열을 나타낸다. TGIR 데이터는 중량 손실이 ~2.0 몰의 메탄올의 휘발에 기인함을 뒷받침한다 (도 25). TGIR 실험으로부터 생성된 물질을 회수하였으며, XRPD에 의할 때 무정형이었다 (도 26). 대략 130℃에서의 기준선 이동, 203℃ 근처에서의 광범위한 흡열에 이은 급격한 흡열 (개시: 223℃)이 또한 DSC 곡선에서 관찰된다. 이들 현상은 필시, 디메탄올 용매화물의 탈용매화에 이은 무정형 물질의 A 형으로의 결정화 및 이 결정성 물질의 용융을 통해서 수득된 무정형 물질 (B 형)의 Tg를 암시하는 것이다.

용액 양자 NMR 스펙트럼이 수득되었다. 화학적 지정은 수행되지 않았다; 그러나 이것은 CDDO-메틸 에스테르의 화학적 구조와 일치하는 것으로 보인다. ~3.51 ppm에서의 피크는 메탄올로 지정되며, ~1.7 몰에 해당한다. 이 결과는 상술한 열 데이터와 일치한다.

실시예 10 - CDDO - 메틸 에스테르에 의한 임상시험

미분화된 A 형을 사용하여 제제화된 CDDO-Me를 임상적 개발을 위해서 선택하였으며, 이전의 치료법에 대해서 적절하게 반응하지 못하였던 진행 암이 있는 환자에게서의 I 상 안전성-지향된 시험에서 시험하였다. 이러한 I 상 투약량-증량식(dose-escalation) 실험에서는, CDDO-Me를 다양한 형태의 진행 (전이성) 암이 있는 21 명의 성인 환자에게 투여하였다. 환자에게 5 내지 900 mg/일 (구체적으로는 5, 10, 20, 40, 80, 150, 300, 600, 또는 900 mg/일) 범위의 용량으로 CDDO-Me 캅셀제의 1일 용량을 투여하였다. CDDO-Me는 환자가 허용할 수 없는 독성을 경험하거나, 질병 진행의 증거를 나타낼 때까지 반복된 주기(cycle)로 투여되었다. 이 시험에서, CDDO-Me의 하나의 주기는 연속 21일의 투약에 이어서 7일 휴지기(이후에 환자는 다음 주기를 시작하기에 적합하였다)로 구성된다. CDDO-Me의 안전성 및 항-종양 활성 둘 다를 검토하였다. 또한, CDDO-Me의 생물학적 효과를 특정화하였다. CDDO-Me는 이들 환자에게서 매우 잘 허용되었으며, 상당한 약물-관련된 부작용은 보고되지 않았다. 몇 명의 환자 (평가할 수 있는 환자 중의 대략 75%)는 제2 치료 주기의 완료 후에 처음 평가 시점에 안정한 질병 (표준 방사선학적 및 임상적 기준을 기초로 하여)을 갖는 것으로 생각되었다. 제2 주기를 완료하기 전에 진행성 질병의 증거를 갖는 것으로 확인된 환자는 공식적으로 평가되지 않았으며, 평가할 수 있는 환자의 그룹에 포함되지 않았다. 흑색종 및 신세포암이 있는 환자를 포함한 5 명의 환자는 계속해서 안정한 질병을 나타내었으며, 일부는 치료의 4 주기 후에 개별적인 종양 병소의 퇴행의 증거를 나타냈다. 4 명의 환자는 적어도 치료의 6 주기 후에 안정한 질병을 갖는 것으로 생각되었다. 규정된 스케줄에 따라 1일에 적어도 40 mg CDDO-Me의 용량을 투여한 어떤 환자에게서도 새로운 전이는 발현되지 않았다.

CDDO-Me의 알려진 항-염증 활성을 기초로 하여, I 상 실험에서는 순환하는 염증성 사이토킨을 환자에게서 평가하였다. 5 mg/일 정도의 낮은 용량에서는, MMP-9, TNFα, IL-8, 및 VEGF를 포함한 몇 가지의 순환하는 전-염증성(pro-inflammatory) 사이토킨 및 케모킨의 감소가 있었다. 특히, 류마티스성 관절염과 같은 질병의 염증성 과정에서 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 TNFα는 상승된 기준선 TNF 레벨을 갖는 3 명의 환자에게서 실질적으로, 또는 검출할 수 있는 한계 이하로 감소되었다 (1일에 10, 20, 및 40 mg의 치료 용량에서 각각 1 명의 환자). 표적에 결합하고 표적을 불활성이 되도록 하는 항-TNF 모노클로날 항체와는 달리, CDDO-Me는 TNFα 생산 및 결과적인 TNFα 순환 레벨을 감소시킨다.

추가로, 항산화제 및 해독 효소를 포함하는 2 상 유전자 생성물은 I 상 시험에서 환자의 말초혈액 단핵세포 내에서 모니터되었다. 2 상 전사활성의 마커인 NQO1 (NAD(P)H:퀴논 산화환원효소)의 상당한 유도는 10 mg/일 및 그 이상의 용량에서 나타났다.

CDDO-Me에 의한 치료의 2 주기 후에 채택한 몇 명의 환자로부터의 종양 생검 데이터는 사이클로옥시게나제-2 (COX-2), 유도성 산화질소 신타제 (iNOS), 및 포스포릴화된 STAT3 (pSTAT3)의 종양조직 레벨에서 현저한 감소를 나타내었다. 이들 단백질 각각의 발현의 높은 레벨은 종양 진행 및 좋지 않은 임상적 결과와 상관관계가 있는 것으로 알려져 있다. 몇 명의 환자에게서 종양 생검 데이터는 또한, CDDO-Me에 의한 치료의 2 주기 후에 현저한 정도의 종양세포 사망을 나타내었다. 이 시험에서, 21일째에는 혈청 크레아티닌의 레벨은 환자의 80% 이상에서 치료-전 기준선 레벨에 비해 상당히 더 낮았다. 다수의 주기 동안 치료를 계속한 다수의 환자는 혈청 크레아티닌에서의 연속적인 감소를 나타내었다. 혈청 크레아티닌은 광범위하게 사용되는 신장 기능의 지표이기 때문에, 이들 관찰결과는 CDDO-Me에 의한 치료가 신장 기능을 개선시킴을 시사한다.

이들 시험은 암을 앓고 있는 환자에 대한 CDDO-메틸 에스테르의 유익한 효과를 나타내는 인간 암 환자에게서의 데이터를 제공한다. 데이터는 추가로, CDDO-Me가 신장 기능부전(renal dysfunction)을 포함한 다른 염증-관련된 질병을 앓고 있는 환자에게서 임상적으로 유용한 효과를 가질 것 같음을 시사한다.

실시예 11 - 디메탄올 용매화물 중간체를 사용한 B 형의 대규모 생산

1 킬로그램의 A 형 CDDO-Me를 60±5℃ 메탄올에 용해시켜 완전한 용액을 수득하였다. 생성된 CDDO-Me의 뜨거운 용액을 진탕, 및 첨가하는 과정 전체에 걸쳐 -5℃ 내지 -15℃의 온도를 유지하면서 냉 -5℃ 내지 -15℃ 메탄올을 함유하는 용기에 첨가하였다. 생성된 CDDO-Me의 결정성 디메탄올 용매화물의 현탁액을 여과하였다. 도 26에 나타낸 것과 일치하는 XRPD 패턴을 나타내는 (TGIR 분석 전에) 생성된 고체를 70±5℃의 오븐 내에서 건조시켰다. 건조는 XRPD 프로파일이 결정성 물질의 특징적인 반사를 나타내지 않을 때까지 계속하였다. 생성된 XRPD 무정형 CDDO-Me 고체를 체를 통해서 통과시키고 포장하였다. 생성물 회수는 65-95% 범위이다.

실시예 12 - 동결분쇄된 A 형 및 B 형

A 형을 동결분쇄하고 분석하였다. 동결분쇄 (2 시간)를 통해서 수득된 샘플의 측정된 x-선 데이터는 대략 13.5 °2θ 피크의 약간의 확장(broadening)을 나타내었다. 동결분쇄된 A 형의 PDF 분석은 B 형 분석과 유사한 결과를 제공하였다. 이들 결과는 동결분쇄된 A 형이 유리상 물질이고, 동결분쇄는 B 형을 생산하는 대체 방법을 제공할 수 있음을 시사한다.

B 형을 동결분쇄하고 분석하였다. 동결분쇄 (1 시간)를 통해서 수득된 샘플의 측정된 x-선 데이터는 출발 B 형 물질과 유사하였다. 이들 결과는 B 형이 안정하고, 동결건조로 인하여 형태를 변화시키지 않는다는 것을 나타낸다.

- 샘플 정보

샘플 정보	설명	XRPD 결과
비-미분화됨	백색 분말	A
미분화됨		A

- CDDO 메틸 에스테르의 근사 용해도

용매	용해도 (mg/mL)a a 용해도는 용액을 제공하기 위해서 사용된 총 용매를 기준으로 하여 계산되며; 실제 용해도는 사용된 용매 부분의 용적 및 느린 용해속도로 인하여 더 클 수 있다. 용해도는 가장 가까운 mg/mL으로 사사오입한다.
아세톤	70
ACN (아세토니트릴)	66
DCM (디클로로메탄)	> 194
1,4-디옥산	21
EtOH (에탄올)	4
EtOAc (에틸 아세테이트)	36
헥산	< 1
(10:1) 이소프로판올/물	4
MeOH (메탄올)	8
MTBE (터트-부틸 메틸 에테르)	4
THF (테트라하이드로푸란)	97
톨루엔	38
물	< 0.1

a 용해도는 용액을 제공하기 위해서 사용된 총 용매를 기준으로 하여 계산되며; 실제 용해도는 사용된 용매 부분의 용적 및 느린 용해 속도로 인하여 더 클 수 있다. 용해도는 가장 가까운 mg/ml으로 사사오입한다.

- CDDO 메틸 에스테르에 대한 결정화 시험

용매	조건a a FE = 빠른 증발, SE = 느린 증발, SC = 느린 냉각, 온도는 근사치이다, FD = 동결 건조, rotovap = 회전 증발	성질/설명	XRPD 결과
아세톤	FE	백색 덩어리	A
	SE	백색의 파쇄된 유리	B 형
(3:10) 아세톤/헥산	SC	고체 없음
ACN	FE	백색의 파쇄된 유리	A + B 형
	SE	백색 덩어리	A
(7:5) ACN/물	SC	소형 백색 블레이드	A
DCM	Rotovap	백색의 파쇄된 유리	B 형
	FE	파쇄된 유리	B 형
	SE	백색의 파쇄된 유리	B 형
(1:5) DCM/헥산	SC	고체 없음
1,4-디옥산	FD	솜털 같은 백색 고체	B 형
EtOH	FE	백색 덩어리	A
	SE	백색 부정형	A
	SC	소형 백색 정제	A
EtOAc	FE	백색의 파쇄된 유리	B 형
	SE	백색의 파쇄된 유리	B 형
	SC	고체 없음
(10:1) IPA/물	SC	소형 백색 정제	A
MeOH	FE	백색 덩어리	A
	SE	백색 정제, 부정형	A
	SC	피라미드형 정제	Ab b 단일 결정 구조 측정
MTBE	FE	백색의 파쇄된 유리	B 형
	SE	백색의 파쇄된 유리	B 형
	SC	고체 없음
THF	FE	백색 덩어리	B 형
	SE	백색의 파쇄된 유리	B 형
(1:2) THF/헥산	SC	고체 없음
톨루엔	FE	백색의 파쇄된 유리	B 형
	SE	백색의 파쇄된 유리	B 형
	SC	고체 없음
	용융/켄칭	투명한 파쇄된 유리	B 형

a FE = 빠른 증발, SE = 느린 증발, SC = 느린 냉각, 온도는 근사치이다. FD = 동결 건조, rotovap = 회전 증발

b 단일 결정 구조 측정

- CDDO 메틸 에스테르의 슬러리 실험

용매	시간 (일)	성질/설명	XRPD 결과
(10:1) IPA/물	7	백색 조각	A
MTBE	10	백색 덩어리	A
MeOH	10	백색 덩어리	A

- CDDO 메틸 에스테르의 냉침전 실험

용매	역용매	성질/설명	XRPD 결과
아세톤	헥산	고체 없음
	물	백색 고체	A
DCM	헥산	고체 없음
THF	물	백색 고체	A

- A 형의 특정화 데이타

분석 기술	결과a
XRPD	A
DSC	기준선 이동 157℃, 흡열 224℃
TGA	150℃까지 0.3% 중량 손실 150 내지 210℃에서 1.2% 중량 손실
KF	0.38%
고온 스테이지	28.9: 가열의 시작 150.1: - 176.4: - 200.2: 변화 없음 225.9: 용융 227.9: 융점
MB	실험 전체에 걸쳐서 무시할 수 있는 중량 변화
MB XRPD 후	A
SEMb	피라미드, 정제 및 플레이트
NMR(CDCl3)	구조와 일치함

a 모든 온도는 ℃로 표시한다, endo = 흡열

b 채택된 영상을 기본으로 한 결과

- A 형의 응력 시험

조건a	성질/설명	XRPD 결과
25℃/60% RH 3 일: 1.5% 손실 7 일: 0.6% 손실	백색 분말	A
40℃/75% RH 3 일: 1.4% 손실 7 일: 0.2% 증가	백색 분말	A
195℃b 15 분: 2% 손실	백색 분말	A
20 분 분쇄, 건조	백색 분말	A
20 분 습식 분쇄, 물	백색 분말	A

- B 형 CDDO 메틸 에스테르의 특정화 데이터

분석 기술	결과a
XRPD	B 형
MDSC	Tg ~125℃
NMR (CDCl3)	구조와 일치함

- B 형 CDDO 메틸 에스테르의 응력 시험

조건 a	성질/설명	XRPD 결과c
22℃/97% RH 7 일	파쇄된 유리	B 형
40℃/75% RH 8 일	파쇄된 유리	B 형
80℃/0% RH ~24 시간	백색 파쇄된 유리, 투명하고 둥글게 된 덩어리	B 형
195℃b 5 분	백색 미세물질	B 형
200℃b 60 분	백색 복굴절 조각	A + B 형 (min)

a RH = 상대 흡도, Tg = 유리 전이 온도

b 주위 실험실 습도는 74%RH로 측정되었다.

c min = 미미함.

- A 형에 대한 결정 데이터 및 데이터 수집 파라메터

화학식	C32H43NO4
화학식량	505.70
공간 그룹	P 43 21 2 (No. 96)
a, Å	14.21620(10)
c, Å	81.5875(12)
V, Å3	16488.9(3)
Z	24
dcalc, g cm-3	1.222
결정 크기, mm	0.01 x 0.01 x 0.00b
온도, K	150.
방사선 (파장, Å)	Mo Kα(0.71073)
단색광기	graphite
선형흡수계수, mm-1	0.074
적용된 흡수 보정	empiricala
투과계수: min, max	0.9995, 0.9999
회절계	Nonius KappaCCD
h, k, l 범위	-15 to 15 -10 to 10 -86 to 72
2θ범위, deg	4.08-44.43
뒤틀림도, deg	0.32
사용된 프로그램	SHELXTL
F 000	6576.0
중량 1/[[2(F o 2)+(0.0176P)2+0.0000P], 여기에서 P=( F o 2+2F c 2)/3
수집된 데이터	46742
독특한 데이터	9168
R int	0.093
정련에 사용된 데이터	9168
R-인자 계산에 사용된 컷오프	F o 2>2.0σ(F o 2)
I>2.0[ (I)를 갖는 데이타	5421
변수의 수	1024
최종 주기에서의 최대 이동/esd	0.00
R(F o)	0.051
R w(F o 2)	0.085
적합도	1.045

a Otwinowski Z. & Minor, W. Methods Enzymol., 1997, 276, 307.

b 결정 크기는 근사치이다.

- 시험한 모든 동물에서 혈장 농도 하 면적 (AUC) 대비 시간의 요약 (n=8)

CDDO 메틸 에스테르 제제화 시험 -모화합물
원숭이 개체 #	A 형 AUC (ng/ml*hr)	B 형 AUC (ng/ml*hr)	A 형에 대한 B 형의 %
501M	37.5	203.4	542
502M	28.3	204.7	723
503F	21.3	107.3	504
504F	N/A	175	N/A
505M	60.4	158.3	262
506M	N/A	N/A	N/A
507F	57.3	164	286
508F	37.3	228	611
평균	40.4	177.2	439
중앙값	37.4	175.0	523
범위 (min-max)	21 - 60.4	158 - 228	262 - 723%
N/A - 측정되지 않음.

- CDDO-메틸 에스테르의 결정화 실험.

용매	조건a	설명	XRPD 결과
10:1 벤젠/아세톤	RE, 실온	백색 고체	X-선 무정형
10:1 벤젠/아세톤	FE에 이어서 60℃에서 건조	투명한 겔
10:1 벤젠/아세톤	FE w/모세관	투명한 필름
10:1 벤젠/아세톤	FE, 마개를 하고, 밤새 냉동고 내에 넣고, 금속 약수저를 사용하여 바이알을 긁고, 실온에서 증발하도록 둠.	백색 고체	벤젠 용매화물
10:1 벤젠/아세톤	FE, 마개를 하고, 실온에서 밤새 정치하고, 금속 약수저를 사용하여 바이알을 긁고, 실온에서 증발하도록 둠.	백색 고체	벤젠 용매화물
10:1 벤젠/아세톤	FE w/ 초음파 처리	백색 고체	벤젠 용매화물

a RE = 회전 증발, FE = 빠른 증발

- CDDO-메틸 에스테르 헤미벤젠 용매화물의 특정화

분석 기술	결과
XRPD	헤미벤젠 용매화물
DSC, 10℃/분	흡열 133℃ 흡열 223℃ (개시 221℃)
TG, 10℃/분	160℃까지 7.0% 중량 손실 0.5 몰의 벤젠에 해당함
1H NMR (CDCl3)	구조와 일치함 ~0.5 몰의 벤젠이 명백함

- CDDO-메틸 에스테르 디메탄올 용매화물의 특정화

분석 기술	결과
XRPD	디메탄올 용매화물
DSC, 10℃/분	흡열 102℃ 기준선 이동 130℃ 광범위한 발열 203℃ 흡열 225℃ (개시: 223℃)
TG, 10℃/분	110℃까지 11% 중량 손실 ~2.0 몰의 메탄올에 해당함
TGIR, 20℃/분	110℃까지 9.8% 중량 손실 ~1.7몰의 메탄올에 해당함 휘발성 물질은 메탄올로 확인됨
후 TGIR XRPD	X-선 무정형
IR	구조와 일치함
1H NMR (CDCl3)	구조와 일치함 ~1.7 몰의 메탄올이 명백함

- 미분화된 B 형 CDDO-메틸 에스테르의 응력 시험

	실시예 11의 절차를 통해서 생산된 B 형		에틸 아세테이트와 에탄올 혼합물로부터 분리함으로써 생산된 B 형
응력 조건a	XRPD 결과	KF 결과	XRPD 결과	KF 결과
80℃/P2O5 , 14d	B 형	NP	NP	NP
80℃/P2O5 , 28 d	B 형	1.10	100% A 형	0.37
60℃/23% RH, 28d	B 형	0.04	~ 50% A 형 + B 형	0.02
40℃/48% RH, 28d	B 형	0.00b	B 형	0.39
25℃/75% RH, 14d	B 형	NP	NP	NP
25℃/75% RH, 28d	B 형	0.77	B 형	0.58

a RH = 상대 습도

b 실제 값은 네가티브였다.

- CDDO-Me 단일 약제 항암 활성

모델	약제/경로	약물 활성	주석
NCI-H460 폐암 이종이식 (누드 랫트)	CDDO-Me, p.o.	78% TGI1	용량-의존적 효과. 방사선과 같이 효과적인 CDDO-Me
MCF-7/Her-2 유방암 이종이식 (누드 마우스)	CDDO-Me, i.v.	15% 퇴행	Her-2를 과발현하는 종양에서 달성된 우수한 결과a
4T1 동계 유방암 전이 모델 (마우스)-초기 치료	CDDO-Me, i.v.	100% 억제	모든 동물은 85일에 희생시켰을 때 무-종양으로 유지되었다b.
4T1 동계 유방암 전이 모델 (마우스)-지연된 치료	CDDO-Me, i.v.	67% 억제	95일에 희생시켰을 때 33%의 동물은 무-종양이었다2.
L3.6PL 췌장암 이종이식 (누드 마우스)	CDDO-Me, i.v.	51% TGI	CDDO-Me는 젬시타빈보다 우수하였다
DU-145 전립선암 이종이식 (누드 랫트)	CDDO-Me, p.o.	77% TGI	시험한 다중 스케쥴-TGI 60-77%
1TGI = 종양 성장 억제 제시된 데이타는 MTD (≤10% 사망율 및 ≤20% 중량 손실로 정의됨) 또는 그 이하의 용량에 기인함.

a Konopleva, et al., "Synthetic triterpenoid 2-cyano-3,12-dioxooleana-1,9-dien-28-oic acid induces growth arrest in HER2-overexpressing breast cancer cells", Mol Cancer Ther . 2006, 5:317-28.

b Ling, et al., "The novel triterpenoid C-28 methyl ester of 2-cyano-3,12-dioxoolen-1,9-dien-28-oic acid inhibits metastatic murine breast tumor growth through inactivation of STAT3 signaling", Cancer Res. 2007, 67:4210-8.

- 분무 건조를 위해서 제조된 용액

고체 비	40% B 형, 60% 폴리머	60% B 형, 40% 폴리머
폴리머	메타크릴산 코폴리머 C 형	HPMCP HP-55
용매	아세톤	아세톤
농도 % w/w	10	10
온도℃	-20	-20
관찰결과	폴리머의 변경 후에 용액은 약간의 혼탁함을 나타내었다. 용액의 샘플을 35/40℃까지 가열하였지만, 혼탁함은 사라지지 않았으며, 약간의 응집이 관찰되었다.	폴리머의 변경 후에 용액은 완전히 투명하였다. 수행된 2 회의 작업은 용액을 제조한 날과 동일한 날에 용액을 사용하였다.

- 시험한 제제의 특징

폴리머	메타크릴산 코폴리머, C 형	HPMCP HP-55
시험
설명	백색 고체	백색 고체
X-선 분말 회절	결정성 피크는 검출되지 않았다	결정성 피크는 검출되지 않았다
물	1.50% w/w
DSC - Tg (변곡점)	106℃	118℃
분석 (HPLC에 의함)	409% w/w (무수물 및 용매 부재를 기초로 계산됨)	59.4% w/w (무수물 및 용매 부재를 기초로 계산됨)
총 불순물 (HPLC)ti	1.14% 면적	0.42% 면적
		5.6 pm
입자 크기 (D50)	21 pm
벌크 밀도	0.18g/cm3 (4g의 생성물로 계산됨)	0.19 g/cm 3 (4g의 생성물로 계산됨)

인용된 문헌:

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18. Repka et al ., Hot-melt extrusion technology In: Enclopedia of Pharmaceutical Technology, 2^nd ed (Marcel Dekker, 2002), pages 203-06.

Claims (18)

1. 도 2C에 나타낸 바와 같이 대략 13.5 °2θ에서 할로(halo) 피크를 갖는 x-선 분말 회절 패턴, 및 T_g를 갖는 CDDO-메틸 에스테르의 유리상 고체 형태.
2. 표 18에 나타낸 바와 같은 특징적 피크를 갖는 x-선 분말 회절 패턴 및 도 24에 나타낸 바와 같은 DSC 패턴을 갖는 CDDO-메틸 에스테르의 디메탄올 용매화물 형태.
3. (i) 치료학적 유효량의 제1항의 CDDO-메틸 에스테르의 유리상 고체 형태와 함께 (ii) 식용 담체를 포함하는, 고체 투약형인 약제학적 조성물.
4. (a) 표 18에 나타낸 바와 같은 특징적 피크를 갖는 x-선 분말 회절 패턴 및 도 24에 나타낸 바와 같은 DSC 패턴을 갖는 CDDO-메틸 에스테르의 디메탄올 용매화물 형태를 제조하는 단계, 및 (b) 디메탄올 용매화물 형태를 건조시켜 유리상 고체 형태를 수득하는 단계를 포함하는, 제1항의 CDDO-메틸 에스테르의 유리상 고체 형태를 생산하는 방법.
5. 제1항에 있어서, 약 5 Å 내지 약 20 Å에서 도 28의 특징적 피크가 있는 PDF 스펙트럼을 갖는 것인 CDDO-메틸 에스테르의 유리상 고체 형태.
6. 유효량의 제3항의 약제학적 조성물을 암성 상태를 앓고 있는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 치료학적 방법.
7. 제6항에 있어서, 상기의 개체에게 또 다른 항암 약물을 투여하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
8. 제7항에 있어서, 상기 다른 항암 약물이 젬시타빈이고, 상기 암성 상태가 췌장암인 것인 방법.
9. 제1항에 있어서, 약 120℃ 내지 약 135℃의 범위의 T_g 값을 갖는 것인 CDDO 메틸 에스테르의 유리상 고체 형태.
10. 제1항에 있어서, 약 125℃ 내지 약 130℃의 범위의 T_g 값을 갖는 것인 CDDO 메틸 에스테르의 유리상 고체 형태.
11. (i) 치료학적 유효량의 CDDO-메틸 에스테르 및 (ii) 조성물이 T_g를 갖도록 하는 유리 형성제(glass former)인 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
12. 제11항에 있어서, 상기 부형제가 (A) 탄수화물, 탄수화물 유도체, 또는 탄수화물 폴리머, (B) 합성 유기 폴리머, (C) 유기산 염, (D) 단백질, 폴리펩타이드, 또는 펩타이드, 및 (E) 고분자량 폴리사카라이드로 구성된 그룹으로부터 선택되는 것인 약제학적 조성물.
13. 제12항에 있어서, 상기 부형제가 합성 유기 폴리머인 것인 약제학적 조성물.
14. 제13항에 있어서, 상기 부형제가 하이드록시프로필 메틸 셀룰로즈, 폴리[1-(2-옥소-1-피롤리디닐)에틸렌 또는 그의 코폴리머, 및 메타크릴산 코폴리머로 구성된 그룹으로부터 선택되는 것인 약제학적 조성물.
15. 제14항에 있어서, 상기 부형제가 하이드록시프로필 메틸 셀룰로즈 프탈레이트 에스테르인 것인 약제학적 조성물.
16. 제14항에 있어서, 상기 부형제가 PVP/VA인 것인 약제학적 조성물.
17. 제14항에 있어서, 상기 부형제가 메타크릴산-에틸 아크릴레이트 코폴리머 (1:1)인 것인 약제학적 조성물.
18. 제13항에 있어서, 상기 부형제가 코포비돈인 것인 약제학적 조성물.

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