KR20100012927A

KR20100012927A - Ｈｉｖ-1 단백질 분해효소의 활성에 대한 저해효과를 갖는관중 추출물로부터 분리되는 화합물을 유효성분으로함유하는 후천성면역결핍증의 예방 및 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20100012927A
Application number: KR1020080074370A
Authority: KR
Inventors: 이지숙; 하또리 마사오; 나까무라 노리오; 히로뜨구 미야시로
Original assignee: 이지숙
Priority date: 2008-07-30
Filing date: 2008-07-30
Publication date: 2010-02-09

Abstract

본 발명은 관중 (Dryopteris crassirhizoma NAKAI) 추출물로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 후천성면역결핍증의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 본 발명의 화합물은 HIV-1 단백질 분해효소의 활성에 대한 강력한 저해효과를 나타내므로, 후천성면역결핍증의 예방 및 치료용 약학조성물 및 건강기능식품으로 유용하게 이용될 수 있다.

관중(Dryopteris crassirhizoma NAKAI), HIV-1 단백질 분해효소, 후천성면역결핍증

Description

ＨＩＶ-1 단백질 분해효소의 활성에 대한 저해효과를 갖는 관중 추출물로부터 분리되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 후천성면역결핍증의 예방 및 치료용 조성물 {A composition comprising the compound isolated from Dryopteris crassirhizoma NAKAI suppressing of HIV-1 protease activity for preventing and treating acquired immune deficiency syndrome}

본 발명은 HIV-1 단백질 분해효소의 활성에 대한 억제효과를 갖는 관중으로부터 분리되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 후천성면역결핍증의예방 및 치료용 약학조성물 및 건강기능식품에 관한 것이다.

[문헌 1] 김 과 최, HIV 감염, 군자출판사, 2007

[문헌 2] Meadows D C., et al., Current developments in HIV Chemotherapy, Chem Med . Chem ., 1, pp 16-29, 2006

[문헌 3] 정 과 신, 향약대사전, 영림사, pp 77-79, 서울 1990,

[문헌 4] Ma et al ., Inhibitory effects of constituents from Cynomorium songaricum and related triterpene derivatives on HIV-1 protease, Chem . Pharm . Bull., 47, pp 141-5, 1999

후천성면역결핍증(acquired immune deficiency syndrome)은 사람면역결핍증바이러스, 즉 HIV(human immunodeficiency virus)바이러스 감염증으로 인해 세포성 면역기능에 이상이 발생하여 피부증세, 신경증세, 급성 신부전증(acute renal failure), 치매(dementia), 뇌장애(encephalopathy), 심장질환, 전신성 소모증후군 등 다양한 증세가 나타나는 질환으로, 1981년 6월에 미국의 동성연애자들에서 처음으로 발견되었으며, 이후부터 전 세계의 후천성면역결핍증 환자의 수가 계속적으로 증가하고 있는 추세이다. WTO에 따르면 2004년 전 세계 HIV 바이러스 감염자는 약 3940만 명에 이르며, 한 해 동안 약 490만 명이 새로 감염되고, 약 310만 명이 후천성면역결핍증으로 사망하는 것으로 추정하고 있다. 우리나라의 경우에는 1985년 HIV 바이러스 감염자가 첫 발견된 이 후 매년 35% 정도의 꾸준한 증가를 보여, 2004년 12월 3,153 명의 감염자가 확인되었으나, 실제로는 약 8,300여 명의 감염자가 있을 것으로 추정하고 있다. 전체 후천성면역결핍증 환자의 HIV 감염경로는 첫째, 성관계에 의한 전염이 70% 이상으로 가장 높고, 두 번째로 수혈, 주사바늘의 공동사용, 장기이식에 의한 감염이며, 마지막으로 HIV 바이러스의 감염자의 임신/출산/수유 과정에서 감염되는 경우이다(김 과 최, HIV 감염, 군자출판사, 2007).

HIV 바이러스는 레트로 바이러스(retrovirus)의 일종으로서 RNA를 유전자로 갖고 있으며, 유전자 구성은 구조 유전자인 gag, pol와 조절유전자인 tat, vif, vpr, nef, rev, vpu, vpx로 구성 되어있고, 게놈(genome)의 크기는 LTR(long terminal repeats)부분을 포함해서 약 9.8kb이다. 또한 HIV 바이러스는 유전자 변이에 따라 크게 HIV-1과 HIV-2 나뉠 수 있으며, 이 중 HIV-1은 병인적인 특성으로 전 세계적으로 널리 전파되어 있으며 내부의 유전적 변이가 심한 반면, HIV-2는 상대적으로 낮은 병원성을 지니고 있으며, 주로 서아프리카와 같은 제한적인 지역에서 유행하는 것으로 알려져 있다. HIV-1 바이러스는 다음과 같은 6단계의 경로를 통해서 숙주 세포인 CD4⁺ T 세포를 감염시킨다. 제 1단계(결합)에서는 HIV-1 바이러스의 외피분자인 gp120과 숙주세포의 표면분자인 CD4가 상호 작용을 통해 융합되어 HIV-1 바이러스가 숙주세포 속으로 들어간다. 제 2단계(역전사)에서는 HIV-1 바이러스가 역전사 효소(Reverse transcriptase)를 이용하여 자기 자신의 RNA를 주형으로 하여 상보적인 DNA를 합성한다. 제 3단계(통합)에서는 상기 제 2단계에서 합성된 HIV-1 바이러스의 DNA가 숙주 세포의 핵 내로 이동하여 자기 자신의 통합효소 (Integrase)를 이용하여 숙주세포의 DNA에 융합된다. 이와 같이 융합된 HIV-1 바이러스 DNA를 프로바이러스라 불으며, 이는 숙주세포가 세포분열 할 때마다 복제된다. 제 4단계(전사)에서는 숙주세포의 DNA에 융합된 HIV-1 바이러스의 DNA가 전사를 통해 대량의 mRNA를 생성한다. 제 5단계(번역)에서는 상기 제 4단계를 통해 합성된 mRNA가 숙주세포의 리보솜, 아미노산, tRNA, 에너지를 이용하여 바이러스의 구성성분인 단백질을 만든다. 제6단계(조립)에서는 단백질 분해효소에 의해서 상기 제 5단계에서 만들어진 단백질의 긴 체인이 작은 조각(역전사효소, 단백질 분해효소, 통합효소 등)들로 잘려져 HIV-1 바이러스의 유전정보와 조립된다. 완전히 조립 된 HIV-1 바이러스들은 숙주세포의 표면에서 떨어져 나가면서 숙주세포의 세포막에 구멍이 생겨 세포질이 유출되고 결국 숙주세포는 사멸하게 된다. 상기와 같은 경로를 통해 지속적인 HIV-1 바이러스 감염이 발생하게 된다 (Meadows D C., et al., Current developments in HIV Chemotherapy, Chem . Med . Chem ., 1, pp 16-29, 2006).

현재까지 개발된 항 HIV-1 치료제로는 I) HIV-1 바이러스의 역전사효소억제제로 AZT(azidothymidine), 에파비렌즈(efavirenz), 네비라핀(nevirapine), 델라비르딘 메실레이트(delavirdine mesylate) 등이 있으며, Ⅱ) HIV 바이러스의 단백질 분해 효소억제제로는 사퀴나비어 메실레이트(saquinavir mesylate), 레토나비어(retonavir), 인디나비어 설페이트(indinavir sulfate), 넬피나비어 메실레이트(nelfinavir mesylate), 엠프레나비어(amprenavir), 로피나비어(lopinavir), 리토나비어(ritonavir) 등이 개발되어 있고, Ⅲ) 역전사 핵산분해효소억제제로는 나프토퀴논스(naphtoquinones), 폴리페놀릭스(polyphenolics), 일리마퀴논(illimaquinone), 노베나민스(novenamines), 세팔로스포린(cephalosporine), 폴리에틸렌설폭닌산(polyethylenesulphonic acid), 아지도티미딜레이트(azidothymidylate) 및 설페이트 포리아니온스(sulphated polyanions)이 개발되어 있다. 이외에도 Ⅳ) HIV-1 바이러스가 숙주세포에 결합하는 단계 억제제, Ⅴ) HIV-1 바이러스의 출아 억제제등이 있다. 하지만 현재까지 개발된 후천성면역결핍증 치료제는 내성인 돌연변이 HIV-1 바이러스의 출현으로 인하여 치료에 한계를 나타내므로 새로운 골격의 억제제의 개발이 절대적으로 필요하다 (Meadows D C., et al., Current developments in HIV Chemotherapy, Chem . Med . Chem ., 1, pp 16-29, 2006).

관중(Dryopteris crassirhizoma NAKAI)은 양치식물 면마과에 속하는 식물로 한국, 일본, 중국에 분포하며, 꽃, 잎, 열매, 뿌리, 줄기 등으로 구성되어 있다. 관중의 근경은 그 성분으로 필마론(filmaron), 플론정(phloroglucinol)등이 알려져 있으며, 그 약리효과로는 조충치료제, 감기치료제 등이 알려져 있다 (정 과 신, 향약대사전, 영림사, pp 77-79, 서울 1990).

그러나 상기 문헌 중 어디에서도 관중의 추출물로부터 분리된 화합물에 의한 HIV-1 단백질 분해효소의 활성 저해효과에 대해 교시되거나 기재된 바 없다.

이에 본 발명자들은 한방에서 많이 사용되는 생약을 이용한 HIV-1 단백질 분해효소 저해제를 개발하기 위한 연구를 통하여 관중으로부터 분리된 화합물이 강력하게 HIV-1 단백질 분해효소의 활성을 저해하는 효과를 확인함으로써 본 발명을 완성하였다 .

상기 목적을 수행하기 위하여, 본 발명은 관중(Dryopteris crassirhizoma NAKAI) 추출물로부터 분리된 하기 일반식 (a) 또는 (b)로 표기되는 신규 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염;

(a)

상기식에서,

R¹은 수소원자, 히드록시기, 아세테이트기, 할로겐원자, C₁ 내지 C₄ 저급 알킬기, 저급 알콕시기, 저급 알킬 에스테르 및 저급 알킬 카르복시기로부터 구성되는 군으로부터 선택된 치환기이다.

본원에서 정의되는 일반 식 (a)의 바람직한 화합물로는 R¹이 수소원자, 히드록시기, 메틸기, 에틸기, 메톡시기, 에톡시기 및 아세틸 기로 구성된 군으로부터 선택된 치환기인 화합물군임을 특징으로 한다.

본원에서 정의되는 일반식 (a)의 가장 바람직한 화합물로는 2β-하이드록시-21βH-호프-22(29)-엔-24-오인산 (2β-hydroxy-21βH-hop-22(29)-ene-24-oic acid) 또는 2-Ο-아세틸-21βH-호프-22(29)-엔-24-오인산 (2-Ο-acetyl-21βH-hop-22(29)-ene-24-oic acid)를 포함하는 것을 특징으로 한다.

(b)

상기식에서,

R²는 수소원자, 히드록시기, 아세테이트기, 할로겐원 자, C₁ 내지 C₄ 저급 알킬기, 저급 알콕시기, 저급 알킬 에스테르 및 저급 알킬 카르복시기로부터 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기이다.

본원에서 정의되는 일반식 (b)의 바람직한 화합물로는 R²가 수소원자, 히드록시기, 메틸기, 에틸기, 메톡시기, 에톡 시기 및 아세틸기로 구성된 군으로부터 선택된 치환기인 화합물군임을 특징으로 한다.

본원에서 정의되는 일반식 (b)의 가장 바람직한 화합물로는 2β-하이드록시-21βH-호프-22(29)-엔-23-오인 산(2β-hydroxy-21βH-hop-22(29)-ene-23-oic acid) 또는 2-Ο-아세틸-21βH-호프-22(29)-엔-23-오인 산(2-Ο-acetyl-21βH-hop-22(29)-ene-23-oic acid)를 포함하는 것을 특징으로 한다.

상기 일반식 (a) 또는 (b)로 표시되는 화합물은 당해 기술분야에서 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용가능한 염으로 제조될 수 있다.

염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산 (free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조한다. 동몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올 (예, 글리콜 모노메틸에테르)을 가열하고 이어서 상기 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나 또는 석출된 염을 흡인 여과시킬 수 있다.

이 때, 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 인산, 황산, 질산, 주석산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 시트르산, 말레인산 (maleic acid), 숙신산, 옥살산, 벤조산, 타르타르산, 푸마르산, 만 데르산, 프로피온산 (propionic acid), 구연산 (citric acid), 젖산 (lactic acid), 글리콜산 (glycollic acid), 글루콘산 (gluconic acid), 갈락투론산, 글루탐산, 글루타르산 (glutaric acid), 글루쿠론산 (glucur onic acid), 아스파르트산, 아스코르브산, 카본산, 바닐릭산, 히드로 아이오딕산 등을 사용할 수 있다.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리토금속염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리토 금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이 때, 금속염으로서는 특히 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하며, 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염을 적당한 은염 (예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.

상기의 일반 식 (a) 또는 (b) 화합물의 약학적으로 허용가능한 염은, 달리 지시되지 않는 한, 일반식 (a) 또는 (b) 화합물에 존재할 수 있는 산성 또는 염기성기의 염을 포함한다. 예를 들면, 약학적으로 허용가능한 염으로는 히드록시기의 나트륨, 칼슘 및 칼륨 염이 포함되며, 아미노기의 기타 약학적으로 허용가능한 염으로는 히드로 브로마이드, 황산염, 수소 황산염, 인산염, 수소 인산염, 이수소 인산염, 아세테이트, 숙시네이트, 시트레이 트, 타르트레이트, 락테이트, 만델레이트, 메탄설포네이트 (메실레이트) 및 p-톨루엔설포네이트 (토 실레이트) 염이 있으며, 당업계에서 알려진 염의 제조방법이나 제조과정을 통하여 제조될 수 있다.

본 발명은 관중(Dryopteris crassirhizoma NAKAI) 추출물로부터 분리된 상기 일반식 (a) 또 는 (b)로 표기되는 신규 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 후천성면역결핍증의 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명은 관중(Dryopteris crassirhizoma NAKAI) 추출물로부터 분리된 하기 일반식 (c) 또는 (r)로 표기되는 데스메토시마튜시놀 (desmethoxymatteucinol), 마튜시놀(matteucinol), 메토시마튜신( methoxymatteucin), 카엠프페롤 7-O -α-L-람노피라노시드 (kaempferol 7-O-α-L-rhamnopyranoside)), 카엠프페롤 3-O-α-L-람노피 라노시드 (kaempferol 3-O-α-L-rhamnopyranoside), 카엠프페롤 3-O-α-L-람노피라노시드-7- O-α-L-람노피라노시드 (kaempferol 3-O-α-L-rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranosi de), 카엠프페롤 아세틸람노시드 3-O-α-L-(4-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드(kaempferol 3-O-α-L- (4-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyra noside ), 카엠프페롤 3-O-α-L-(2,4-디-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라 노시드 (kaempferol 3-O-α-L-(2,4-di-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyr anoside), 카엠프페롤 3-O-α-L-(3,4-디-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라 노시드(kaempferol 3-O-α-L-(3,4-di-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyr anoside), 카엠프페롤 3-O-α-L-2,3-디-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노 시드 (kaempferol 3-O-α-L-(2,3-di-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyran oside), 3,4-디하이드로실벤잘데하이드 (3,4-dihydroxybenzaldehyde), 16β,17-디하이드록시카우란-18-오인 산(16β,17-dihydroxykauran-18-oic acid), 우르솔린 산(ursolic acid), 스태린 산(stearic acid), β-시토스데롤(β-sitosterol) 또는 β-시토스테롤 글루코시드(β-sitosterol glucoside)로부터 선택된 화합물을 유효성분으로 함유하는 후천성면역결핍증의 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 관중(Dryopteris crassirhizoma NAKAI) 추출물로부터 분리된 상기 일반식 (a) 또는 (b)로 표기되는 신규 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 후천성면역결핍증의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명은 관중(Dryopteris cr assirhizoma NAKAI) 추출물로부터 분리된 하기 일반식 (c) 또는 (r)로 표기되는 데스메토시마튜시놀(d esmethoxymatteucinol), 마튜시놀(matteucinol), 메토시마튜신( methoxymatteucin), 카엠프페롤 7-O -α-L-람노피라노시드 (kaempferol 7-O-α-L-rhamnopyranoside)), 카엠프페롤 3-O-α-L- 람노피 라노시드 (kaempferol 3-O-α-L-rhamnopyranoside), 카엠프페롤 3-O-α-L-람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드 (kaempferol 3-O-α-L-rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside), 카엠프페롤 아세틸람노시드 3-O-α-L-(4-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-a-L-람노피라노시드(kaempferol 3-O-α-L-(4-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyra noside), 카엠프페롤 3-O-α-L-(2,4-디-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드 (kaempferol 3-O-α-L-(2,4-di-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyr anoside), 카엠프페롤 3-O-α-L-(3,4-디-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라 노시드 (kaempferol 3-O-α-L-(3,4-di-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyr anoside), 카엠프페롤 3-O-α-L-2,3-디-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드 (kaempferol 3-O-α-L-(2,3-di-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyran oside), 3,4-디하이드로실벤잘데하이드 (3,4-dihydroxybenzaldehyde), 16β,17-디하이드록시카우란-18-오인 산 (16β,17-dihydroxykauran-18-oic acid), 우르솔린 산(ursolic acid), 스태린 산(stearic acid), β-시토 스데롤(β-sitosterol) 또는 β-시토스테롤 글루코시드(β-sitosterol glucoside)로부터 선택된 화합물을 유효성분으로 함유하는 후천성면역결핍증의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

데스메토시마튜시놀(desmethoxymatteucinol)

(c)

마튜시놀(matteucinol)

(d)

메토시마튜신(methoxymatteucin)

(e)

카엠프레롤 7-O-α-L-람노피라노시드(7-O-α-L-rhamnopyranoside)

(f)

카엠프페롤3-O-α-L-람노피라노시드(kaempferol 3-O-α-L-rhamnopyranoside)

(g)

카엠프페롤 3-O-α-L-람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드(kaempferol 3-O-α-L-rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside)

(h)

카엠프페롤 아세틸람노시드 3-O-α-L-(4-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L- 람노피라노시드 (kaempferol 3-O-α-L-(4-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside )

(i)

카엠프페롤 3-O-α-L-(2,4-디-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드 (kaempferol 3-O-α-L-(2,4-di-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside)

(j)

카엠프페롤 3-O-α-L-(3,4-디-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드(kaempferol 3-O-α-L-(3,4-di-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside)

(k)

카엠프페롤 3-O-α-L-(2,3-디-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드 (kaempferol 3-O-α-L-(2,3-di-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L- rhamnopyranoside)

(l)

3,4-디하이드로실벤잘데하이드(3,4-dihydroxybenzaldehyde)

(m)

16β,17-디하이드록시카우란-18-오인 산 (16β,17-dihydroxykauran-18-oic acid)

(n)

우르솔린 산(ursolic acid)

(o)

스태린 산(stearic acid)

(p)

β-시토스테롤(β-sitosterol)

(q)

β-시토스테롤 글루코시드(β-sitosterol glucoside)

(r)

본원에서 정의되는 “관중 추출물”은 관중의 꽃, 잎, 열매, 뿌리 또는 줄기, 바람직하게는 관중의 뿌리로부터 추출되는 것임을 특징으로 한다.

본원에서 정의되는 “관중 추출물”은 조추출물, 극성용매 추출물 또는 비극성용매 추출물임을 특징으로 한다.

본원에서 정의되는 “조추출물”은 정제수를 포함한 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 및 이들의 혼합용매로 구성된 군으로부터 선택된 용매, 바람직하게는 물 및 메탄올, 더 바람직하게는 100~50% 메탄올에 가용한 추출물을 포함한다.

본원에서 정의되는 “비극성용매 가용 추출물”은 헥산, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 부탄올, 글리세린 및 부틸렌글리콜로 구성된 군으로부터 선택된 용매, 바람직하게는 클로로포름, 에틸아세테이트 또는 부탄올에 가용한 추출물임을 특징으로 한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 화합물은 관중의 지하부를 음건하여 마쇄한 후, 건조 중량의 약 1 내지 100배, 바람직하게는 약 2내지 5배 부피의 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매, 바람직하게는 물 및 메탄올의 혼합용매, 더 바람직하게는 50~100 % 메탄올로, 0 내지 100℃ 온도, 바람직하게는 20 내지 40℃ 온도에서 약 0.1 내지 20시간, 바람직하게는 1 내지 10시간 동안 교반추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 추출방법, 바람직하게는 초음파추출방법으로 추출한 후 수득한 추출액을 감압농축하고 동결 건조하여 관중의 조추출물을 수득하는 제 1단계; 상기 제 1단계의 제조공정을 통해 얻은 관중 조추출물 중량의 1 내지 20배, 바람직하게는 3 내지 7배 부피의 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올을 순차적으로 가하여 상온에서 1시간 내지 24시간, 바람직하게는 2 내지 5 시간 동안 교반하여 분취한 클로로포름층, 에틸아세테이트층 및 부탄올층을 진공 건조하여 관중의 비극성 가용 추출물들을 수득하는 제 2단계; 상기 제 2단계의 제조공정을 통해 얻은 클로로포름 추출물, 에틸아세테이트 추출물 및 부탄올 추출물로부터 순상 실리카겔 컬럼, 역상 실리카겔 컬럼, 세파텍스 LH-20, 디아이온(Diaion) HP-20, 세프-파크(sep-pak) 또는 분취 HPLC를 이용하여 본 발명의 신규화합물 1 내지 2 및 기존에 공지된 화합물 3 내지 20을 수득할 수 있었다.

본 발명의 후천성면역결핍증의 예방 및 치료용 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 화합물을 0.1 내지 50% 중량으로 포함된다.

그러나 상기와 같은 조성은 반드시 이에 한정되는 것은 아니고, 환자의 상태 및 질환의 종류 및 진행 정도에 따라 변할 수 있다.

본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 화합물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들 면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 화합물은 1일 0.01 mg/kg 내지 10 g/kg으로, 바람직하게는 1 mg/kg 내지 1 g/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다. 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명은 관중(Dryopteris crassirhizoma NAKAI) 추출물로부터 분리된 상기 일반식 (c) 또는 (r)로 표기되는 데스메토시마튜시놀(desmethoxymatteucinol), 마튜시놀(matteucinol), 메토시마튜신( methoxymatteucin), 카엠프페롤 7-O-α-L-람노피라노시드 (kaempferol 7-O-α-L-rhamnopyranoside), 카엠프페롤 3-O-α-L-람노피라노시드(kaempferol 3-O-α-L-rhamnopyranoside), 카엠프페롤 3-O-α-L-람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드(kaempferol 3-O-α-L-rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside), 카엠프페롤 아세틸람노시드 3-O-α-L-(4-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-a-L-람노피라노시드(kaempferol 3-O-α-L-(4-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside), 카엠프페롤 3-O-α-L-(2,4-디-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드 (kaempferol 3-O-α-L-(2,4-di-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside), 카엠프페롤 3-O-α-L-(3,4-디-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드 (kaempferol 3-O-α-L-(3,4-di-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside), 카엠프페롤 3-O-α-L-2,3-디-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드 (kaempferol 3-O-α-L-(2,3-di-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside), 3,4-디하이드로실벤잘데하이드 (3,4-dihydroxybenzaldehyde), 16β,17-디하이드록시카우란-18-오인 산 (16β,17-dihydroxykauran-18-oic acid), 우르솔린 산(ursolic acid), 스태린 산(stearic acid), β-시토스데롤(β-sitosterol) 또는 β-시토스테롤 글루코시드(β-sitosterol glucoside)로부터 선택된 화합물을 유효성분으로 함유하는 후천성면역결핍증의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은 후천성면역결핍증의 예방 및 개선을 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 화합물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

본 발명의 화합물은 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.

본 발명의 상기 화합물은 후천성면역결핍증의 예방 및 개선을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물 의 양은 일반적으로 본 발명의 건강식품 조성물은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 것 외에 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르 탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명의 화합물은 강력한 HIV-1 단백질 분해효소 활성의 저해효과를 나타내므로, 후천성면역결핍증의 예방 및 치료용 약학조성물 및 건강기능식품으로 유용하게 이용될 수 있음을 확인할 수 있었다.

이하, 본 발명을 참고예, 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 참고예, 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 참고예, 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

참고예 1. 재료의 준비

관중(Dryopteris crassirhizoma NAKAI)의 지하경은 중화인민공화국 내몽고에 소재한 중산로 의약품상(중국 내몽고 중산시)에서 구입하여 일본 도야마대학 화한약연구소의 가추고 고마추(Katsuko Komatsu)박사가 동정하였으며, 그 표준품(TMPW No. 19159)은 도야마대학의 의약품박물관에 보관하였다.

또한, 재조합 HIV-1 단백질분해효소 및 헵타펩타이드(heptapeptide)는 BACHEM Feinchemikalien AG (Bubendorf, Switwerland)로부터 제공받아 하기 실험예에 사용하였다.

실시예 1. 관중 조추출물 제조

관중의 지하경 5.0 kg을 건조하여 분쇄한 후 80% 메탄올 15ℓ을 가하여 실온에서 3시간 동안 초음파 추출하였다. 상기 추출액을 여과지(Watman)로 여과하여 감압농축하고 동결 건조하여 관중 조추출물 85.4g를 수득하였으며, 이를 하기 실시예 2의 시료로 사용하였다.

실시예 2. 관중의 비극성 가용 추출물 제조

2-1. 클로로포름 추출물의 제조

상기 실시예 1의 방법으로 획득한 관중 조추출물 85.4g를 물 5ℓ에 현탁한 후 클로로포름 5ℓ를 가하여 상온에서 3시간 동안 교반한 다음 분획깔때기를 이용 하여 클로로포름층과 수층을 분취하고, 클로로포름층만을 진공 건조하였다. 상기 과정을 3회 반복하여 클로로포름 추출물 31.4g를 수득하였으며, 이를 하기 실시예 3의 시료로 사용하였다.

2-2. 에틸아세테이트 추출물의 제조

상기 실시예 2-1의 수층에 에틸아세테이트 5ℓ를 가하여 3시간 동안 교반한 다음 분획깔때기를 이용하여 에틸아세테이트층과 수층을 분취하고, 에틸아세테이트층만을 진공 건조하였다. 상기 과정을 3회 반복하여 에틸아세테이트 추출물 32.6g를 수득하였으며, 이를 하기 실시예 3의 시료로 사용하였다.

2-3. 부탄올 추출물의 제조

상기 실시예 2-2의 수층에 부탄올 5ℓ를 가하여 3시간 동안 교반한 다음 분획깔때기를 이용하여 부탄올층과 수층을 분취하고, 부탄올층만을 진공 건조하였다. 상기 과정을 3회 반복하여 부탄올 추출물 13.2g를 수득하였으며, 이를 하기 실시예 3의 시료로 사용하였다.

실시예 3. 화합물들의 분리

3-1. 클로로포름 추출물로부터 화합물 분리

상기 실시예 2-1에서 수득한 관중 클로로포름 조추출물 31.4g을 실리카겔 (클로로포름-메탄올 100:1 →2:1 (v/v), 500g)칼럼 크로마토그래피를 반복 실시하였다. 또한, 세파덱스 LH-20 (헥산-클로로포름-메탄올 10:10:1, 5:5:1 (v/v), 100g)을 충진한 크로마토그래피를 반복 실시하였다. 그 결과, 하기 일반식 (1) 내지 (2)로 표기되는 2종의 신규화합물인, 화합물 1(8.2mg) 및 화합물 2(32.5mg)와 하기 일반식 (5) 내지 (13)로 표기되는 기존에 공지된 화합물들인, 화합물 5(2.5mg), 6(8.0mg), 7(13.1mg), 8(15.1mg), 9(54.5mg), 10(10.1mg), 11(300.5mg), 12(50.2mg) 및 화합물 13(64.0mg)을 각각 분리하였다.

3-2. 에틸아세테이트 추출물로부터 화합물들의 분리

상기 실시예 2-2에서 수득한 관중 에틸아세테이트 추출물 32.6 g을 순상 또는 역상 실리카겔 컬럼크로마토그래피, TSK-겔 ODS-80TM을 충전한 HPLC를 연속적으로 실시하여 하기 일반식 (14) 내지 일반식 (20)으로 표기되는 기존에 공지된 화합물들인, 화합물 14 (12.1 mg), 15 (66.3 mg), 16 (200.5 mg), 17 (2.6 mg), 18 (2.5 mg), 19 (1.5 mg) 및 20 (2.1 mg)을 각각 분리하였다.

3-3. 부탄올 추출물로부터 화합물들의 분리

상기 실시예 2-3에서 수득한 관중 부탄올 추출물 13.2g을 디아이온(Diaion) HP-20, 역상 실리카겔 컬럼크로마토그래피 및 세파덱스(Sephadex) LH-20 젤을 충진한 칼럼 크로마토그래피를 연속적으로 실시하여 하기 일반식 (9) 내지 일반식 (10)으로 표기되는 기존에 공지된 화합물들인, 화합물 9 (5.2 mg)과 10 (35.1 mg)을 각 각 분리하였다.

하기 화합물 1 내지 2 및 화합물 5 내지 20은 mM농도가 되도록 DMSO에 녹여 하기 실험예의 시료로 사용하였다.

화합물 (1): 2β-하이드록시-21βH-호프-22(29)-엔-24-오인산 (이하 "Dryopteric acids A"로 명명함)

m.p: 235.3-247.7℃

¹H-NMR (pyridine-d ₅ , 500 MHz): d 4.89 (2H, m, H-29), 4.34 (1H, m, H-2a), 2.72 (1H, t, J=5.0 Hz, H-21), 2.62 (1H, dd, J=15.0, 4.0 Hz, H-3b), 2.30 (1H, dd, J=13.5, 5.5 Hz, H-1b), 2.16 (1H, m, H-5a), 1.75 (3H, s, CH₃-30), 1.56 (1H, m, H-3a), 1.43 (3H, s, CH₃-23), 1.39 (3H, s, CH₃-25), 1.19 (1H, m, H-1a), 0.98 (3H, s, CH₃-26), 0.94 (3H, s, CH₃-27) 0.73 (3H, s, CH₃-28);

¹³C-NMR (pyridine-d ₅ , 125 MHz): d 47.4, 66.7, 43.4, 44.4, 56.4, 19.8, 33.5, 42.1, 50.7, 37.9, 22.0, 24.3, 49.7, 42.4, 33.7, 21.7, 54.9, 44.9, 41.9, 27.8, 46.7, 148.7, 29.7, 183.1, 16.3, 16.8, 16.7, 16.4, 110.7, 25.2

화합물 (2): 2β-하이드록시-21βH-호프-22(29)-엔-23-오인산 (이하 "Dryopteric acids B"로 명명함)

¹H-NMR (pyridine-d ₅ , 500 MHz): d 4.88 (2H, m, H-29), 4.68 (1H, m, H-2a), 2.60 (1H, t, J=4.5 Hz, H-21), 2.57 (1H, dd, J=13.5, 4.0 Hz, H-3a), 2.24 (1H, dd, J=13.5, 5.5 Hz, H-3b), 2.15 (1H, dd, J=12.0, 2.0 Hz, H-1a), 1.81 (3H, s, CH₃-24), 1.74 (3H, s, CH₃-30), 1.52 (1H, m, H-1b), 1.42 (3H, s, CH₃-25), 1.02 (3H, s, CH₃-27), 0.91 (3H, s, CH₃-26), 0.72 (3H, s, CH₃-28);

¹³C-NMR (pyridine-d ₅ , 125 MHz): d 47.4, 66.7, 43.4, 47.2, 49.4, 19.7, 33.1, 42.4, 51.5, 37.5, 21.9, 24.3, 49.8, 42.4, 33.8, 21.6, 54.9, 44.9, 42.1, 27.6, 46.7, 148.3, 182.3, 20.1, 19.2, 16.8, 16.9, 16.3, 110.6, 25.1;

화합물 (5) : 데스메토시마튜시놀

m.p: 185.5-215.3℃

¹H-NMR (CDCl₃, 400MHz): d 12.26 (1H, s, OH-5), 7.4 (5H, m, H-2', 6'), 5.40 (1H, dt, J =8.5, 1.8Hz, H-3', 5'), 5.42 (1H, s, OH-7), 5.33 (1H, dd, J =12.8, 3.1Hz, H-2), 3.04 (1H, dd, J =17.1, 12.8Hz, H-3), 2.83 (1H, dd, J =17.1, 3.1Hz, H-3), 2.08 (3H, s, CH₃-6), 2.07 (3H, s, CH₃-8);

¹³C-NMR (CDCl₃, 100 MHz): d 6.8 (CH₃-8), 7.6 (CH₃-6), 43.5 (C-3), 78.7 (C-2), 102.0 (C-8), 102.8 (C-6), 103.0 (C-10), 125.9 (C-2', 6'), 128.8 (C-3', 5'), 128.5 (C-4'), 138.9 (C-1'), 157.6 (C-9), 159.3 (C-7), 160.8 (C-5), 196.3 (C-4);

화합물 (6): 마튜시놀

m.p: 163.4-213.6 ℃

¹H-NMR (CDCl₃, 400MHz): d 12.26 (1H, s, OH-5), 7.37 (1H, dt, J = 8.5, 1.8Hz, H-2', 6'), 6.93 (1H, dt, J = 8.5, 1.8Hz, H-3', 5'), 5.42 (1H, s, OH-7), 5.33 (1H, dd, J =12.9, 3.1Hz, H-2), 3.81 (3H, s, OCH₃-4'), 3.03 (1H, dd, J =17.2, 12.9Hz, H-3), 2.79 (1H, dd, J =17.2, 3.1Hz, H-3), 2.05 (3H, s, CH₃-6), 2.03 (3H, s, CH₃-8);

¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz): d 6.8 (CH₃-8), 7.6 (CH₃-6), 43.3 (C-3), 55.0 (OCH₃-4'), 78.7 (C-2), 102.5 (C-8), 103.2 (C-6), 103.7 (C-10), 114.2 (C-3', 5'), 127.5 (C-2', 6'), 133.1 (C-1'), 157.7 (C-9), 158.7 (C-4'), 159.3 (C-7), 162.2 (C-5), 196.4 (C-4);

화합물 (7): 메토시마튜신

m.p: 173.5-205.8℃

¹H-NMR (CDCl₃, 400MHz): d 13.10 (1H, s, OH-5), 7.56 (1H, d, J = 3.2Hz, H-6’), 7.01 (1H, d, J = 8.5Hz, H-3’), 6.94 (1H, dd, J = 8.5, 3.2Hz, H-4’), 6.16 (1H, dd, J = 10.0, 3.3Hz, H-2), 3.75 (3H, s, OCH₃-5’), 3.31 (1H, dd, J = 17.6, 3.6Hz, H-3), 3.21 (1H, dd, J = 17.6, 12.4Hz, H-3), 2.42 (3H, s, CH₃-8), 2.36 (3H, s, CH₃-6);

¹³C-NMR (CDCl₃, 100 MHz): d 8.4 (CH₃-8), 8.9 (CH₃-6), 42.6 (C-3), 55.7 (OCH₃-5'), 75.1 (C-2), 102.9 (C-8), 1 03.8 (C-6), 104.6 (C-10), 112.9 (C-6'), 114.6 (C-4'), 116.7 (C-3'), 128.0 (C-4'), 149.1 (C-1'), 158.3 (C-9), 153.6 (C-5'), 160.1 (C-7), 164.1 (C-5), 197.4 (C-4);

화합물 (8): 카엠프페롤 7-O-α-L-람노피라노시드

¹H-NMR (pyridine-d ₅ , 400MHz): d 7.05 (1H, d, H-6), 6.80 (1H, d, H-8), 8.51 (1H, dt, H-2', 6'), 7.33 (1H, dt, H-3', 5'), 6.25 (1H, d, H-1'''), 4.69 (1H, dd, H-2'''), 4.63 (1H, dd, H-3'''), 4.37 (1H, t, H-4'''), 4.26 (1H, m, H-5'''), 1.61 (1H, d, H-6''')

¹³C-NMR (pyridine-d ₅ , 100MHz): d 148.2 (C-2), 138.2 (C-3), 177.4 (C-4), 161.3 (C-5), 100.0 (C-6), 162.5 (C-7), 94.7 (C-8), 156.8 (C-9), 106.0 (C-10), 123.1 (C-1'), 130.6 (C-2'), 116.4 (C-3'), 160.9 (C-4'), 16.4 (C-5'), 130.6 (C-6'), 99.7 (C-1'''), 71.7 (C-2'''), 72.4 (C-3'''), 73.6 (C-4'''), 71.4 (C-5'''), 18.6 (C-6''')

화합물 (9): 카엠프페롤 3-O-a-L-람노피라노시드

¹H-NMR (pyridine-d ₅ , 400MHz): d 6.65 (1H, d, H-6), 6.65 (1H, d, H-8), 7.99 (1H, dt, H-2',6'), 7.24 (1H, dt, H-3',5'), 6.25 (1H, d, H-1''), 5.05 (1H, dd, H-2''), 4.56 (1H, dd, H-3''), 4.23 (1H, t, H-4''), 4.13 (1H, m, H-5''), 1.12 (1H, d, H-6'')

¹³C-NMR (pyridine-d ₅ , 100MHz): d 161.6 (C-2), 135.9 (C-3), 179.0 (C-4), 162.9 (C-5), 99.7 (C-6), 165.8 (C-7), 94.6 (C-8), 157.7 (C-9), 105.5 (C-10), 121.8 (C-1'), 131.5 (C-2'), 116.4 (C-3'), 157.9 (C-4'), 116.4 (C-5'), 131.5 (C-6'), 103.8 (C-1''), 72.0 (C-2''), 72.5 (C-3''), 73.2 (C-4''), 72.0 (C-5''), 18.3 (C-6'')

화합물 (10):, 카엠프페롤 3-O-α-L-람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드

¹H-NMR (pyridine-d ₅ , 400MHz): d 6.74 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-6), 6.92 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-8), 8.02 (1H, dt, J = 5.0, 0.1 Hz, H-2',6'), 7.27 (1H, dt, J = 5.0, 0.1 Hz, H-3',5'), 6.25 (1H, d, J = 0.1 Hz, H-1''), 5.06 (1H, dd, J = 0.1, 0.1 Hz, H-2''), 4.58 (1H, dd, J = 5.0, 0.1 Hz, H-3''), 4.27 (1H, t, J = 5.0 Hz, H-4''), 4.14 (1H, dq, J = 5.0, 5.0 Hz, H-5''), 1.40 (1H, d, J = 5.0 Hz, H-6'') 6.22 (1H, d, J = 0.1 Hz, H-1'''), 4.68 (1H, dd, J = 0.1, 0.1 Hz, H-2'''), 4.62 (1H, dd, J = 5.0, 0.1 Hz, H-3'''), 4.36 (1H, t, J = 5.0 Hz, H-4'''), 4.25 (1H, dq, J = 5.0, 5.0 Hz, H-5'''), 1.61 (1H, d, J = 5.0 Hz, H-6''')

¹³C-NMR (pyridine-d ₅ , 100MHz): d 161.7 (C-2), 135.9 (C-3), 179.1 (C-4), 162.2 (C-5), 100.2 (C-6), 162.6 (C-7), 94.7 (C-8), 156.9 (C-9), 106.9 (C-10), 121.4 (C-1'), 131.4 (C-2'), 116.3 (C-3'), 158.3 (C-4'), 116.3 (C-5'), 131.4 (C-6'), 103.7 (C-1''), 71.8 (C-2''), 72.4 (C-3''), 73.0 (C-4''), 72.2 (C-5''), 18.2 (C-6''), 99.8 (C-1'''), 71.4 (C-2'''), 72.0 (C-3'''), 73.4 (C-4'''), 71.3 (C-5'''), 18.5 (C-6''')

화합물 (11):, 카엠프페롤 아세틸람노시드 3-O-α-L-(4-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드(이하 “sutchuenoside A” 명명함)

¹H-NMR (pyridine-d ₅ , 400MHz): d 6.76 (1H, d, H-6), 6.93 (1H, d, H-8), 9.01 (1H, dt, H-2', 6'), 7.29 (1H, dt, H-3', 5'), 6.15 (1H, d, H-1''), 4.99 (1H, dd, H-2''), 4.62 (1H, d, H-3''), 5.74 (1H, t, H-4''), 4.12 (1H, m, H-5''), 1.15 (1H, d, H-6''), 6.23 (1H, d, H-1'''), 4.68 (1H, d, H-2'''), 4.62 (1H, t, H-3'''), 4.36 (1H, m, H-4'''), 4.25 (1H, d, H-5'''), 1.61 (1H, s, H-6'''), 1.95 (3H, s, COCH₃-4'')

¹³C-NMR (pyridine-d ₅ , 100MHz): d 161.8 (C-2), 136.0 (C-3), 178.8 (C-4), 162.7 (C-5), 100.3 (C-6), 162.3 (C-7), 94.8 (C-8), 156.9 (C-9), 106.9 (C-10), 121.2 (C-1'), 131.4 (C-2'), 116.4 (C-3'), 158.4 (C-4'), 116.4 (C-5'), 131.4 (C-6'), 103.3 (C-1''), 71.8 (C-2''), 69.6 (C-3''), 74.9 (C-4''), 69.2 (C-5''), 17.7 (C-6''), 99.8 (C-1'''), 71.8 (C-2'''), 72.3 (C-3'''), 73.4 (C-4'''), 71.4 (C-5'''), 18.5 (C-6'''), 170.5 (CO-4''), 20.9 (CH₃-4'')

화합물 (12):카엠프페롤 3-O-α-L-(2,4-디-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드 (이하 “crassirhizomoside A”라 명명함)

¹H-NMR (pyridine-d ₅ , 400MHz): d 6.73 (1H, d, H-6), 6.46 (1H, d, H-8), 7.79 (1H, dt, H-2', 6'), 6.96 (1H, dt, H-3', 5'), 5.61 (1H, d, H-1''), 4.34 (1H, dd, H-2''), 5.15 (1H, d, H-3''), 4.99 (1H, t, H-4''), 3.29 (1H, m, H-5''), 0.81 (1H, d, H-6''), 5.55 (1H, d, H-1'''), 4.01 (1H, d, H-2'''), 3.82 (1H, t, H-3'''), 3.47 (1H, m, H-4'''), 3.60 (1H, d, H-5'''), 1.26 (1H, s, H-6'''), 2.06 (3H, s, COCH₃-3''), 1.97 (3H, s, COCH₃-4'')

¹³C-NMR (pyridine-d ₅ , 100MHz): d 159.9 (C-2), 135.4 (C-3), 179.5 (C-4), 163.0 (C-5), 100.6 (C-6), 163.6 (C-7), 95.7 (C-8), 158.1 (C-9), 107.5 (C-10), 122.2 (C-1'), 132.0 (C-2'), 116.7 (C-3'), 161.9 (C-4'), 116.7 (C-5'), 132.0 (C-6'), 102.9 (C-1''), 69.4 (C-2''), 72.7 (C-3''), 71.8 (C-4''), 69.6 (C-5''), 17.5 (C-6''), 99.9 (C-1'''), 71.7 (C-2'''), 72.1 (C-3'''), 73.6 (C-4'''), 71.3 (C-5'''), 18.1 (C-6'''), 172.1 (CO-2''), 20.8 (CH₃-2''), 172.1 (CO-3''), 20.8 (CH₃-3''), 171.7 (CO-4''), 20.7 (CH₃-4'')

화합물 (13):카엠프페롤 3-O-α-L-(3,4-디-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드 (이하 “crassirhizomoside B”라 명명함)

¹H-NMR (pyridine-d ₅ , 400MHz): d 6.74 (1H, d, H-6), 6.47 (1H, d, H-8), 7.84 (1H, dt, H-2', 6'), 6.95 (1H, dt, H-3', 5'), 5.52 (1H, d, H-1''), 5.61 (1H, dd, H-2''), 5.08 (1H, d, H-3''), 3.45 (1H, t, H-4''), 3.43 (1H, m, H-5''), 0.98 (1H, d, H-6''), 5.55 (1H, d, H-1'''), 4.01 (1H, d, H-2'''), 3.82 (1H, t, H-3'''), 3.47 (1H, m, H-4'''), 3.59 (1H, d, H-5'''), 1.26 (1H, s, H-6'''), 2.07 (3H, s, COCH₃-2''), 2.02 (3H, s, COCH₃-3'')

¹³C-NMR (pyridine-d ₅ , 100MHz): d 159.8 (C-2), 135.6 (C-3), 179.6 (C-4), 163.0 (C-5), 100.7 (C-6), 163.6 (C-7), 95.6 (C-8), 158.1 (C-9), 107.5 (C-10), 122.2 (C-1'), 132.2 (C-2'), 116.8 (C-3'), 162.0 (C-4'), 116.8 (C-5'), 132.0 (C-6'), 100.1 (C-1''), 70.8 (C-2''), 73.0 (C-3''), 72.2 (C-4''), 70.5 (C-5''), 17.7 (C-6''), 99.9 (C-1'''), 72.0 (C-2'''), 72.1 (C-3'''), 73.6 (C-4'''), 71.3 (C-5'''), 18.1 (C-6'''), 171.5 (CO-2''), 20.6 (CH₃-2''), 172.3 (CO-3''), 20.8 (CH₃-3'')

화합물 (14): 카엠프페롤 3-O-α-L-2,3-디-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드 (crassirhizomoside C)

¹H-NMR (pyridine-d ₅ , 400MHz): d 6.72 (1H, d, H-6), 6.45 (1H, d, H-8), 7.76 (1H, dt, H-2', 6'), 6.95 (1H, dt, H-3', 5'), 5.53 (1H, d, H-1''), 5.43 (1H, dd, H-2''), 4.03 (1H, d, H-3''), 4.75 (1H, t, H-4''), 3.32 (1H, m, H-5''), 0.81 (1H, d, H-6''), 5.55 (1H, d, H-1'''), 4.01 (1H, d, H-2'''), 3.82 (1H, t, H-3'''), 3.47 (1H, m, H-4'''), 3.59 (1H, d, H-5'''), 1.25 (1H, s, H-6'''), 2.03 (3H, s, COCH₃-2''), 2.10 (3H, s, COCH₃-4'')

¹³C-NMR (pyridine-d ₅ , 100MHz): d 159.9 (C-2), 135.3 (C-3), 179.4 (C-4), 163.0 (C-5), 100.7 (C-6), 163.6 (C-7), 95.6 (C-8), 158.1 (C-9), 107.5 (C-10), 122.1 (C-1'), 132.0 (C-2'), 116.7 (C-3'), 162.0 (C-4'), 116.7 (C-5'), 132.0 (C-6'), 99.5 (C-1''), 73.0 (C-2''), 68.3 (C-3''), 74.7 (C-4''), 69.6 (C-5''), 17.6 (C-6''), 99.9 (C-1'''), 71.9 (C-2'''), 72.1 (C-3'''), 73.6 (C-4'''), 71.3 (C-5'''), 18.1 (C-6'''), 172.2 (CO-2''), 20.8 (CH₃-2''), 171.8 (CO-3''), 20.8 (CH₃-3'')

화합물 (15): 3,4-디하이드로실벤잘데하이드

¹H-NMR (pyridine-d ₅ , 400 MHz): d 9.76 (1H, s, -CHO), 7.66 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-2), 7.29 (1H, dd, J = 8.0, 1.9 Hz, H-5), 7.07 (1H, d, J =8.0 Hz, H-6)

¹³C-NMR (pyridine-d ₅ , 100 MHz): d 190.9 (C-CHO), 154.3 (C-1), 147.9 (C-3), 130.2 (C-4), 125.3 (C-6), 116.4 (C-2), 115.4 (C-5)

화합물 (16):16β,17-디하이드록시카우란-18-오인산

¹H-NMR (pyridine-d ₅ , 400MHz): d 3.63 (1H, d, J =10.7Hz, H-17a), 3.56 (1H, d, J =10.7Hz, H-17b), 1.17 (3H, s, H-19), 1.01 (3H, s, H-20)

¹³C-NMR (pyridine-d ₅ , 100MHz): d 42.5 (c-1), 19.5 (c-2), 38.7 (c-3), 43.9 (c-4), 57.1 (c-5), 22.5 (c-6), 41.2 (c-7), 43.9 (c-8), 56.8 (c-9), 40.1 (c-10), 19.9 (c-11), 27.6 (c-12), 41.7 (c-13), 38.6 (c-14), 53.4 (c-15), 79.8 (c-16), 70.5 (c-17), 180.2 (c-18), 29.4 (c-19), 15.9 (c-20)

화합물 (17): 우르솔린 산

m.p. 290℃ (uncorrected)

¹H-NMR (DMSO-d ₆ , 400MHz): d 5.49 (1H, s, H-12), 3.44 (3H, t, H-3), 2.62 (1H, d, H-18)

¹³C-NMR (DMSO-d ₆ , 100MHz): d 39.4 (c-1), 21.4 (c-2), 78.2 (c-3), 33.6 (c-4), 53.6 (c-5), 16.6 (c-6), 30.0 (c-7), 40.0 (c-8), 50.1 (c-9), 39.1 (c-10), 23.7 (c-11), 125.7 (c-12), 139.3 (c-13), 42.5 (c-14), 28.1 (c-15), 18.8 (c-16), 48.1 (c-17), 55.9 (c-18), 37.3 (c-19), 37.5 (c-20), 28.7 (c-21), 39.5 (c-22), 28.8 (c-23), 17.8 (c-24), 17.5 (c-25), 15.7 (c-26), 23.9 (c-27), 180.0 (c-28), 18.7 (c-29), 24.9 (c-30)

화합물 (18): 스태린 산

m.p. 68-70℃ (uncorrected)

¹H-NMR (CDCl₃, 400MHz): d 2.36 (2H, t, J= 8.2Hz, H-2), 1.66 (2H, m, H-3), 1.26 (28H, m, H-4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17), 0.91 (3H, t, J= 8.2Hz, H-18)

¹³C-NMR (CDCl₃, 100MHz): d 180.5 (c-1), 34.1 (c-2), 32.0 (c-3), 29.7 (5C), 29.8, 29.6, 29.5, 29.3, 29.3, 29.1, 24.7 (c-16), 22.7 (c-17), 14.2 (c-18)

화합물 (19):β-시토스데롤

m.p. 134℃ (uncorrected)

¹H-NMR (CDCl₃, 400MHz): d 0.69 (3H, s, CH₃-18), 1.01 (3H, s, CH₃-19), 3.52 (1H, m, H-3), 5.34 (1H, br.d. H-6)

¹³C-NMR (CDCl₃, 100MHz): d 37.3 (c-1), 31.6 (c-2), 71.8 (c-3), 42.3 (c-4), 141.5 (c-5), 121.7 (c-6), 31.9 (c-7), 31.9 (c-8), 50.1 (c-9), 36.5 (c-10), 21.0 (c-11), 39.8 (c-12), 42.3 (c-13), 56.8 (c-14), 24.3 (c-15), 28.2 (c-16), 56.0 (c-17), 11.8 (c-18), 19.4 (c-19), 36.1 (c-20), 18.8 (c-21), 34.0 (c-22), 26.1 (c-23), 45.8 (c-24), 29.1 (c-25), 19.8 (c-26), 19.1 (c-27), 23.1 (c-28), 12.0 (c-29)

화합물 (20): β-시토스테롤 글루코시드

m.p. 283-288℃ (uncorrected)

¹H-NMR (pyridine-d ₅ , 400MHz): d 0.67 (3H, s, CH₃-18), 0.86-1.01 (15H, s, CH₃-19, 21, 26, 27, 29), 5.08 (1H, d, J =7.5Hz, H-1)

5.37 (1H, br .d. H-6)

¹³C-NMR (pyridine-d ₅ ,, 100MHz): d 37.5 (c-1), 30.3 (c-2), 78.6 (c-3), 39.4 (c-4), 141.9 (c-5), 121.9 (c-6), 32.2 (c-7), 32.1 (c-8), 50.4 (c-9), 36.9 (c-10), 21.4 (c-11), 40.0 (c-12), 42.5 (c-13), 56.8 (c-14), 24.5 (c-15), 28.5 (c-16), 56.3 (c-17), 12.0 (c-18), 19.4 (c-19), 36.4 (c-20), 19.0 (c-21), 34.2 (c-22), 26.4 (c-23), 46.1 (c-24), 29.5 (c-25), 19.2 (c-26), 20.0 (c-27), 23.4 (c-28), 12.2 (c-29), 102.6 (c-1'), 75.4 (c-2'), 78.1 (c-3'), 71.7 (c-4'), 78.5 (c-5'), 62.9 (c-6')

실시예 4. 아세틸화된 화합물들의 제조

실시예 3-1에서 획득한 신규화합물들인 화합물 1 (4.6mg)과 화합물(5.1mg)을 각각 피리딘 : 무수아세트산 (pyridine : acetic anhydride=1:1) 용액 200ml에 녹여 교반한 후 실온에서 14시간 반응시켰다. 이 후, 박층크로마토그래피로 상기 반응의 완결을 확인한 다음 반응혼합액에 증류수를 가하여 물층을 분리하였다. 분리된 물층을 디클로로메탄으로 3회 추출 · 농축한 후 질소로 완전히 건조하여 아 세틸화된 화합물 1, 즉 화합물 3(3.4 mg)과 아세틸화된 화합물 2, 즉 화합물 4(3.5 mg)를 각각 얻을 수 있었다.

화합물 (3): 2-Ο-아세틸-21βH-호프-22(29)-엔-24-오인산 (이하 "2-O-Acetyldryopteric acids A"로 명명함)

¹H-NMR (pyridine-d ₅ , 400 MHz): d 5.04 (1H, m, H-2a), 4.78 (2H, m, H-29), 2.72 (1H, t, J=15.3 Hz, H-3b), 2.69 (1H, t, J=4.5 Hz, H-21), 2.15 (1H, d, J=13.4 Hz, H-1b), 1.98 (3H, s, OCOCH₃-2), 1.74 (3H, s, CH₃-30), 1.30 (3H, s, CH₃-25), 1.01 (3H, s, CH₃-23), 0.93 (3H, s, CH₃-26), 0.92 (3H, s, CH₃-27), 0.71 (3H, s, CH₃-28).

화합물 (4): 2-Ο-아세틸-21βH-호프-22(29)-엔-23-오인산 (이하 "2-O-Acetyldryopteric acids B"로 명명함)

¹H-NMR (pyridine-d ₅ , 400 MHz): d 5.53 (1H, m, H-2a), 4.87 (2H, m, H-29), 2.60 (1H, t, J=4.5 Hz, H-21), 2.44 (1H, dd, J=13.5, 4.0 Hz, H-3a), 2.15 (1H, dd, J=13.5, 5.5 Hz, H-3b), 2.10 (1H, dd, J=12.0, 2.0 Hz, H-1b), 2.02 (3H, s, OCOCH₃-2), 1.74 (3H, s, , CH₃-30), 1.62 (3H, s, CH₃-24), 1.18 (3H, s, CH₃-25), 0.98 (3H, s, CH₃-26), 0.87 (3H, s, CH₃-27), 0.68 (3H, s, CH₃-28).

실험예 1. 화합물에 의한 HIV -1 단백질 분해효소의 활성 측정

상기 실시예 3의 공정으로 분리한 화합물 1-20에 의한 HIV-단백질분해효소 활성 저해효과를 알아보기 위해서, 문헌에 기재된 방법을 이용하여 하기와 같이 실험을 수행하였다 (Ma et al ., Inhibitory effects of constituents from Cynomorium songaricum and related triterpene derivatives on HIV-1 protease. Chem Pharm Bull, 47, 141-5, 1999).

HIV-단백질분해효소의 기질로 합성된 헵타펩타이드 (heptapeptide ; His-Lys-Ala-Arg-Val-Leu-(pNO₂-Phe)-Glu-Ala-Nle-Ser-NH₂)를 사용하여 기질 2.5μg 및 대조군 또는 실시예 3에서 획득한 각각의 화합물(2.5μl; 화합물 1 내지 20)을 포함하는 반응혼합액 (25μl)에 pH 5.0의 50mM 아세테이트 완충용액속의 재조합 HIV-단백질분해효소 0.175μg를 첨가하여 37°C에서 15분 동안 반응시킨 후 10% TFA (trifluoroacetic acid; Merck) 2.5μl를 첨가하여 반응을 정지시켰다. 이 후 HPLC를 이용하여 상기 반응의 결과물인 가수분해산물과 잔량의 기질을 정량적으로 분석하다. 이 때 사용한 컬럼은 RP-18 (4.6 x 150 mm, YMC)을 사용하였고, 검출기는 SPD-6A UV 분광광도 탐지기(spectrophotometric detector; Schimadzu)를 사용하였으며, 구체적으로 상기 반응용액 5ml를 RP-18 (4.6 x 150 mm, YMC)에 주입하고 0.1% TFA (trifluoroacetic acid)를 함유하는 아세토니트릴 (acetonitrile; 15- 40%)용액을 증감시키면서 1.0 mL/min의 유속으로 용출시켜 280 nm에서 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다. 이때 대조군으로는 아세틸-펩스타틴(acetyl-pepstatin)을 사용하여 하였다.

시 료		IC ₅₀ 값 (mM) ^a ⁾
화합물 1	Dryopteric acid A	26.5
화합물 2	Dryopteric acid B	44.5
화합물 3	2-O-Acetyldryopteric acid A	1.7
화합물 4	2-O-Acetyldryopteric acid B	10.8
화합물 5	Desmethoxymatteucinol	105.9
화합물 6	Matteucinol	64.3
화합물 7	Methoxymatteucin	100.9
화합물 8	Kaempferol 7-O-α-L-rhamnopyranoside	146.6
화합물 9	Kaempferol 3-O-α-L-rhamnopyranoside	>300
화합물 10	Kaempferol 3-O-α-L-rhamnopyranoside-7-O-α -L-rhamnopyranoside	>300
화합물 11	Sutchuenoside A	88.0
화합물 12	Crassirhizomoside A	>300
화합물 13	Crassirhizomoside B	>300
화합물 14	Crassirhizomoside C	100.1
화합물 15	3, 4-Dihydroxybenzaldehyde	27.5
화합물 16	16β,17-Dihydroxykauran-18-oic acid	>300
화합물 17	Ursolic acid	8.9
화합물 18	Stearic acid	>300
화합물 19	β-Sitosterol	>300
화합물 20	β-Sitosterol glucoside	>300
양성표준물질(대조군)	Acetyl-pepstatin	0.09
^a ⁾50%저해활성농도 (IC₅₀)는 p-NO₂-Phe-를 함유하는 가수분해산물의 피크를 대조군에 대하여 50% 감소시키는데 요구되는 농도

그 결과, 상기 표 1에 나타나는 바와 같이, 화합물 1-20에 의한 HIV-1 단백질분해효소 저해활성효과는 화합물 5 (IC₅₀ 105.9 mM), 6 (IC₅₀ 64.4 mM) 및 7 (IC₅₀ 106.9 mM), 화합물 8 (IC₅₀ 146.6 mM), 11 (IC₅₀ 88.0 mM) 및 14 (IC₅₀ 100.1 mM)에서 약하게 나타난 반면, 화합물 1 (IC₅₀ 26.5 mM), 2 (IC₅₀ 1.7 mM), 3 (IC₅₀ 44.5 mM), 4 (IC₅₀ 10.8 mM), 15 (IC₅₀ 27.5 mM) 및 17 (IC₅₀ 8.9 mM)에서는 강하게 나타났다. 그 중에서도 24번 위치에 카르복실기를 가진 화합물 1 (Dryopteric acid A)은 23번 위치에 카르복실기를 가진 화합물 3 (Dryopteric acid B)보다 강력한 HIV-1 단백질 분해효소 억제활성을 갖는 것으로 나타났고, 특히 화합물 1 및 3의 2β수산기를 아세틸화한 화합물 2 및 4의 HIV-1 단백질 분해효소 억제활성은 화합물 1 및 3 보다 4 및 15배 증가하는 것으로 나타났다. 따라서 이 결과를 통해, hopane 시리즈의 triterpene acid에서 24번 위치의 카르복실기와 2번 위치의 아세틸기가 사람면역결핍바이러스 단백질 분해효소의 저해활성에 중요한 역할을 함을 알 수 있었다 (표 1 참조).

하기에 본 발명의 추출물을 포함하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 정제의 제조

화합물 1 100mg

유당 50mg

전분 10mg

스테아린산 마그네슘 적량

상기의 성분을 혼합하고 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

제제예 2. 산제의 제조

화합물 2 25mg

DDB 50mg

유당 30mg

전분 20mg

스테아린산 마그네슘 적량

상기의 성분을 긴밀히 혼합하고 폴리에틸린이 코팅된 포에 충진하고 씰링하여 산제를 제조하였다.

제제예 3. 캅셀제의 제조

화합물 3 25mg

DDB 50mg

유당 30mg

전분 28mg

탈크 2mg

스테아린산 마그네슘 적량

상기의 성분을 혼합하고 통상의 방법으로 캅셀제의 제조방법에 따라서 젤라틴 경캅셀에 충진하여 캅셀제를 제조하였다.

제제예 4. 현탁제의 제조

화합물4 500mg

이성화당 10g

설탕 30mg

나트륨 CMC 100mg

레몬향 적량

정제수 적량 가하여 전체 100ml

상기의 성분을 통상의 현탁제의 제조방법에 따라 현탁제를 제조하고 100ml 용량의 갈색병에 충진하고 멸균하여 현탁제를 제조하였다.

제제예 5. 연질캅셀제의 제조 ( 연질캅셀제 1정 중 함량)

화합물 5 500mg

폴리에틸렌글리콜 400 400mg

농글리세린 55mg

정제수 35mg

폴리에틸렌글리콜과 농글리세린을 혼합한 다음 정제수를 투입하고 이 혼합물을 약 60℃로 유지한 상태에서 플라본을 넣고 교반기로 약 1,500rpm으로 교반하면서 균일하게 혼합한 후 서서히 교반하면서 실온으로 냉각하고 진공펌프를 사용하여 기포를 제거하고 연질캅셀의 내용물로 한다.

연질캅셀의 피막은 일반적으로 널리 알려진 젤라틴, 가소제의 소프트 처방으로 하여 1캅셀당 젤라틴 132mg, 농글리세린 52mg, 디솔비톨액 70% 6mg 및 착향제로 에틸바닐린 적량, 코팅기제로 카르나우바납을 사용하여 통상의 조제방법으로 제조한다.

제제예 6. 주사제의 제조

화합물 6 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

Na₂HPO₄ _·12H₂O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다

제제예 7. 건강식품의 제조

화합물 7 1000 ㎎

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 B₁ 0.13 ㎎

비타민 B₂ 0.15 ㎎

비타민 B₆ 0.5 ㎎

비타민 B₁₂ 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 8. 건강 음료의 제조

화합물 8 100 ㎎

비타민 C 15 g

비타민 E(분말) 100 g

젖산철 19.75 g

산화아연 3.5 g

니코틴산아미드 3.5 g

비타민 A 0.2 g

비타민 B₁ 0.25 g

비타민 B₂ 0.3g

물 정량

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

Claims

관중(Dryopteris crassirhizoma NAKAI) 추출물로부터 분리된 하기 일반식 (a)로 표기되는 신규 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염;

(a)

상기식에서,

R¹은 수소원자, 히드록시기, 아세테이트기, 할로겐원자, C₁ 내 지 C₄ 저급 알킬기, 저급 알콕시기, 저급 알킬 에스테르 및 저급 알킬 카르복시기로부터 구성 되는 군으로부터 선택된 치환기이다.
제 1항에 있어서, 일반식 (a) 화합물은 R¹ 치환기가 수소원자, 히드록시기, 메틸기, 에틸기, 메톡시기, 에톡시기 및 아세틸기로부터 선택된 치환기인 화합물 또는 그 염.
제 2항에 있어서, 일반식 (a) 화합물은 2β-하이드록시-21βH-호프-22(29)-엔-24-오인 산 (2β-hydroxy-21βH-hop-22(29)-ene-24-oic acid) 또는 2-Ο-아세틸-21βH-호프-22(29)-엔-24-오인 산 (2-Ο-acetyl-21βH-hop-22(29)-ene-24-oic acid)인 화합물 또는 그 염.
관중(Dryopteris crassirhizoma NAKAI) 추출물로부터 분리된 하기 일반식 (b)로 표기되는 신규 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염;

(b)

상기식에서,

R²는 수소원자, 히드록시기, 아세테이트기, 할로겐원자, C₁ 내지 C₄ 저급 알킬기, 저급 알콕시기, 저급 알킬 에스테르 및 저급 알킬 카르복시기 로부터 구성되는 군으로부터 선택된 치환기이다.
제 4항에 있어서, 일반식 (b) 화합물은 R² 치환기가 수소원자, 히드록시기, 메틸기, 에틸기, 메톡시기, 에톡시기 및 아세틸기로부터 선택된 치환기인 화합물 또는 그 염.
제 5항에 있어서, 일반식 (b) 화합물은 2β-하이드록시-21βH-호프-22(29)-엔-23-오인 산 (2β-hydroxy-21βH-hop-22(29)-ene-23-oic acid) 또는 2-Ο-아세틸-21βH-호프-22(29)-엔-23-오인 산 (2-Ο-acetyl-21βH-hop-22(29)-ene-23-oic acid)인 화합물 또는 그 염.
관중(Dryopteris crassirhizoma NAKAI) 추출물로부터 분리된 제 1항 또는 제4항의 일반식 (a) 또는 (b)로 표기되는 신규 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 후천성면역결핍증의 예방 및 치료용 약학 조성물.
관중(Dryopter is crassirhizoma NAKAI) 추출물로부터 분리된 데스메토시마튜시놀(desmethoxymatteucinol), 마튜시놀(matteucinol), 메토시마튜신( methoxymatteucin), 카엠프페롤 7-O-α-L-람노피라노시드(kaempferol 7-O-α-L-rhamnopyranoside)), 카엠프페롤 3-O-α-L-람노피라노시드(kaempferol 3-O- α-L-rhamnopyranoside), 카엠프페롤 3-O-α-L-람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드(kae mpferol 3-O-α-L-rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside), 카엠프페롤 아세틸람노시드 3-O-α-L-(4-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-a-L-람노피라노시드(kaempferol 3-O -α-L-(4-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside ), 카엠프페롤 3-O- α-L-(2,4-디-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드(kaempferol 3-O-α- L-(2,4-di-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside), 카엠프페롤 3-O- α-L-(3,4-디-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드(kaempferol 3-O-α- L-(3,4-di-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside), 카엠프페롤 3-O- α-L-2,3-디-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드(kaempferol 3-O-α-L -(2,3-di-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside), 3,4-디하이드로실벤잘데하 이드 (3,4-dihydroxybenzaldehyde), 16β,17-디하이드록시카우란-18-오인산(16β,17-dihydroxykauran-18-oi c acid), 우르솔린 산(ursolic acid), 스태린 산(stearic acid), β-시토스데롤(β-sitosterol) 또는 β-시 토스테롤 글루코시드(β-sitosterol glucoside)로부터 선택된 화합물을 유효성분으로 함유하는 후천성면역결핍증의 예방 및 치료용 약학 조성물.
관중(Dryopteris crassirhizoma NAKAI) 추출물로부터 분리된 제 1항 또는 제4항의 일반식 (a) 또는 (b)으로 표기되는 신규 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 후천성면역결핍증의 예방 및 개선용 건강기능식품.
관중(Dryopteris crassirhizoma NAKAI) 추출물로부터 분리된 데스메토시마튜시놀(desmethoxymatteucinol), 마튜시놀(matteucinol), 메토시마튜신( methoxymatteucin), 카엠프페롤 7-O-α-L-람노피라노 시드(kaempferol 7-O-α-L-rhamnopyranoside)), 카엠프페롤 3-O-α-L-람노피라노시드(kaempferol 3-O-α-L-rhamnopyranoside), 카엠프페롤 3-O-α-L-람노피라노시드-7-O-α-L-람 노피라노시드 (kaempferol 3-O-α-L-rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside), 카엠프페롤 아세틸람노시드 3-O-α-L-(4-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-a-L-람노피라노시드 (kaempferol 3-O-α-L-(4-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside ), 카엠프페롤 3-O-α-L-(2,4-디-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드 (kaempferol 3-O-α-L-(2,4-di-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside), 카엠 프페롤 3-O-α-L-(3,4-디-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드 (kaempferol 3-O-α-L-(3,4-di-O-acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside), 카엠프페롤 3-O-α-L-2,3-디-O-아세틸)람노피라노시드-7-O-α-L-람노피라노시드 (kaempferol 3-O-α-L-(2,3-di-O- acetyl)rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside), 3,4-디 하이드로실벤잘데하이드 (3,4-dihydroxybenzaldehyde), 16β,17-디하이드록시카우란-18-오인 산 (16β,17-dih ydroxykauran-18-oic acid), 우르솔린 산(ursolic acid), 스태린 산(stearic acid), β-시토스데롤(β-sito sterol) 또는 β-시토스테롤 글루코시드(β-sitosterol glucoside)로부터 선택된 화합물을 유효성분으로 함유하는 후천성면역결핍증의 예방 및 개선용 건강기능식품.
제 9항 또는 제10항에 있어서, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태인 건강기능식품.