KR20090126253A - 트리고넬린 및 4-하이드록시이소류신을 포함하는 약제학적 조성물 및 그 제조방법 - Google Patents

트리고넬린 및 4-하이드록시이소류신을 포함하는 약제학적 조성물 및 그 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 도파민 활성과 기타 관련 약제학적 활성을 가지며, 트리고넬린 또는 그 유도체(들) 및 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들), 선택적으로 부형제(들)을 포함하는, 약제학적 조성물; 트리고넬린 또는 그 유도체(들) 및 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들), 선택적으로 부형제(들)을 포함하는, 약제학적 조성물을 제조하는 공정, 여기서 상기 공정은 (a) 트리고넬린 및 4-하이드록시이소류신을 함유하는 투명한 용액을 식물 공급원으로부터 추출하는 단계; 및 (b) 선택적으로 트리고넬린 및 4-하이드록시이소류신을 상기 투명한 용액으로부터 침전시키고, 상기 조성물을 획득하는 단계를 포함함; 및 트리고넬린 또는 그 유도체(들) 및 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들)를 포함하는 조성물이 세포 수용체에 결합할 수 있도록 함으로써 시험관 내 도파민 수치 증가 또는 프로락틴 억제 방법에 관한 것이다.
트리고넬린, 파킨슨병, 4-하이드록시이소류신, MAO

Description

트리고넬린 및 4-하이드록시이소류신을 포함하는 약제학적 조성물 및 그 제조방법{PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS COMPRISING TRIGONELLINE AND 4-HYDROXYISOLEUCINE AND A PROCESS THEREOF}
본 발명은 천연 공급원으로부터의 신규한 조성물 및 그 제법에 관한 것이다. 또한 본 발명은 파킨슨 병을 포함한 도파민 관련 질병을 치료하는 데에 도파민제(Dopaminergic agent)로서 신규한 조성물을 적용하는 것에 관한 것이다.
본 발명은 또한 프로락틴 감소와 연관되어, 항-정신성 약물에 의해 야기된 부작용을 경감시키고, 프로락틴 증가에 의해 야기된 성기능 저하를 경감시키기 위해 프로락틴-억제 화합물, 근육이완제로서 적용하는 것, 및 정신적 주의력을 강화하는 화합물로서 적용하는 것에 관한 것이다.
도파민은 척추동물 및 무척추동물에 존재하는 호르몬 및 신경전달물질의 일종이다. 화학적으로는 뇌에 존재하는 페네틸아민(phenethylamine)의 일종이며, 특정 도파민 수용체 (D1-D5)를 활성화시키는 신경전달물질로 작용한다. 도파민은 뇌에서 다양한 기능을 가지는데, 행동 및 인지, 운동 활성, 동기화 및 보상, 젖 생산 조절, 수면, 기분, 주의, 및 학습에 있어서 중요한 역할을 포함한다. 도파민은 식욕, 사회성, 돌출, 행동 장애, 잠재성 억제 및 창의적 드라이브에 있어서 중대한 역할을 한다. 도파민은 또한 프로락틴 분비를 조절하는 데에도 관여한다.
부적절한 수준의 도파민은 떨림, 경직 및 운동감소증(bradykinesia, slowness of movement)와 같은 증상을 유발한다. 건강한 개체에서는 뉴런이 도파민을 뇌와 다른 신체 부위에 생산하고 방출한다. 도파민인 하나의 뉴런에 의해 방출되면, 다음 뉴런의 수용체에 의해 받아들여진다. 이러한 연쇄 반응으로 결국 신경 자극에 이르게 된다. 다양한 신경계 질환이 도파민 생산을 방행하고, 뇌에서의 노파민 수준을 떨어뜨리게 된다. 비정상적인 도파민 수준이 수많은 질환을 야기하기도 하는데, 그들 중 일부는 만성적 퇴행성 질환 (파킨슨 병 등)이다.
도파민은 뇌의 운동 및 사고 영역에 강한 영향을 미친다. 도파민 일 유형은 동작 및 운동 계에 작용한다. 도파민의 수준이 "정상 범위" 아래로 저하되면, 운동 및 대 동작(gross-movement) 문제가 발생하게 된다. 뇌의 운동 영역에서 도파민 수준이 매우 낮게 되는 것이 파킨슨 병을 형성한다고 알려져 있는데, 근육 경직 및 굳어짐, 자세 굳음/불안정, 균형 및 조화 저하, 도보 (걸음걸이 형태) 장애, 느린 동작 및 자발적 동작 곤란, 잰 걸음 도보/걷기, 근육통, 떨림 및 떨리는, 굳은, 마스크 같은 얼굴 표정, 느린, 단조로운 말투, 양호한 운동 능력 저하, 도보시 추락 및 인지/지적 능력 저하 등의 증상을 보인다.
낮은 수준의 도파민은 환경에 초점을 맞추거나, 업무, 활동, 또는 대화에 "몰입"하는 능력을 저하시킨다. 낮은 수준의 도파민은 집중 및 초점을 맞추는 것을 매우 어렵게 해서, 주의력 결핍 과잉행동 장애(ADHD)와 연관되기도 한다.
또한 도파민은 프로락틴 분비를 억제하는 데에 중요한 역할을 한다. 프로락 틴은 뇌하수체 내 락토트로프 세포에서 분비되는 일종의 펩티드 호르몬이다. 프로락틴은 젖 분비와 성욕(도파민 경우 낮은 수준에 의해 유발됨. 적정 수준의 도파민이 성적 자극 위해 필요함)을 유도하는 데에 중요한 역할을 한다. 도파민은 중대한 프로락틴-억제 인자로서 작용하며, 시상하부 뉴런에 의해 간문 혈액으로 분비되고, 락토트로프 상의 수용체에 결합하고, 프로락틴의 합성과 분비를 억제한다. 프로락틴의 수치가 증가하게 되면 불임, 다낭난소증후군(PCOS), 두통, 성욕 감퇴 및 시력 저하 등 악 영향을 갖게 된다. 높은 수준의 프로락틴은 신체적, 정신적 스트레스를 포함하는 많은 요인으로 인해 야기된다. 따라서 도파민 화합물 (도파민 수치를 증가시키는 물질)이 프로락틴의 수치를 조절(제한)하여 고 수준의 프로락틴에 의한 다양한 영향을 관리하는 데에 중대한 역할을 하게 될 것이다.
운동선수, 보디빌더, 스포츠맨들에 의한 만성적이고 힘든 운동 또한 프로락틴 수치를 증가시키는 것으로 밝혀졌다. 이렇게 증가된 프로락틴은 성욕을 감퇴시키고 성기능 저하를 유발하게 된다. 따라서 도파민제가 프로락틴 수치를 낮추어서, 생리학적 한도 내에서 이 호르몬을 보유함에 의한 부작용을 제거하는 데에 사용된다.
도파민제는 아세틸콜린에 의해 유발된 흥분을 억제하기 때문에 근육 이완제로 이용 가능하다. 이와 같이 본 발명에 따른 도파민성 물질은 운동 생리학, 마취(anesthesia) 및 근육 연축(muscle spasm) 경우에 근육 이완제로 사용 가능하다.
도파민 수치가 낮은 경우의 중대한 효과 중 하나가 동작 질환이다. 동작 질환은 동작을 생성하고 제어하는 능력에 영향을 주는 질환 및 증상의 하나의 그룹이 다. 단순 동작일지라도 임의의 동작 형태를 만들어 내기 위해서는 복합적인 신호 네트워크의 조화와 작용이 필요하다. 이 체계 중 어떠한 부위라도 훼손되면 사람에게 간단한 일에 대해 너무 약하거나, 너무 강하거나, 너무 부조화되거나, 너무 부조절된 동작을 만들도록 할 수 있다. 원하지 않은 동작은 휴식을 야기하거나, 의도된 동작이 불가능해 질 수도 있다. 이러한 상황을 동작 질환이라고 부른다.
몇몇 경우에, 상기 비정상적 동작들은 도파민 수치가 낮은 경우의 유일한 증상이다. 비정상적 동작을 야기하는 질환에는, 파킨슨 병, 약물이나 독물에 의해 야기된 파킨슨 증, 파킨슨-플러스 증후군 (진행성 핵상마비, 다계통 위축증, 피질 기저핵변성)이 포함된다.
이들 질환은 신경전달물질인 도파민이 부족하거나 과다하는 데서 야기된다. 약물 치료로 일부 기저핵 회로 불균형에 대한 보상을 도와줄 수 있다. 아세틸콜린은 흥분성 화학물질로, 뇌에서 도파민을 조절하는 것을 돕는다. 체내에서 신경 말단에서 방출된 아세틸콜린이 근 수축을 야기한다.
파킨슨 질환은 진행성 퇴행성 질환의 일종으로, 도파민-생성 세포를 파괴하고, 조화된 동작 측면에 문제를 일으킨다. 그것은 떨림, 경직, 무동, 자세 불안정이 특징이다. 주요한 생화학적 비정상 증상은 도파민 결핍으로, 아세틸콜린과 도파민 간에 불균형을 초래한다. 파킨슨 질환의 원인은 명확하게 알려져 있지 않다. 소수의 경우에서 유전적 연관성이 약하게 존재한다. 환경 독소이며 살충제로 사용되는 MPTP (메틸 페닐 테트라-하이드로 피리딘)에 의해서도 초래한다.
일반적으로 파킨슨 질환은 65세 이상에서 발생하는 장년층 질환이다. 외형상 어둡게 보이기 때문에 "흑색질(Substantia Nigra)" 또는 흑색물질이라 불리는 뇌 속의 신경 세포 그룹이 사멸함으로써 야기된다. 이들 세포로부터의 신경 프로세스는 선조체(striatum)라고 부르는 뇌의 다른 영역에까지도 확대되는데, 거기서 그들은 연결을 형성하고 그들의 신경전달자로서 도파민이라는 화학물질을 방출한다.
상기 흑색질 및 선조체는 동작을 개시하는 능력을 포함하여, 동작을 제어하는 데에 도움을 준다. 흑질선조체 경로(Nigrostriatal pathway)가 손실되면, 파킨슨 환자는 의자에서 일어나거나 걷기 시작하는 것과 같은 행동을 수행하는 데에 매우 곤란을 겪게 된다. 또한 그들은 떨림과 경직 근육이 늘어나게 된다.
현재 도파민 관련 질환 (예: 파킨슨 및 저 수준 도파민 관련 질환)을 치료하기 위한 방법들의 예는 하기와 같다:
L-Dopa (디하이드록시 페닐 알라닌)
파킨슨 질환의 원인이 도파민 방출 신경세포의 결핍에 있기 때문에, 이 질환을 치료하는 한 가지 접근방법은 뇌 속에 도파민 수준을 회복시키는 것이다. 도파민이 혈액으로부터 뇌 속으로 통과하지 않을 것이다. 신경 세포 내에서, 도파민은 효소 촉매를 통한 일련의 화학 반응으로 생성된다. 상기 과정의 마지막 단계는 아미노산 L-Dopa에서 도파민을 형성하는 것이다. L-Dopa는 혈액에서 뇌로 쉽게 통과한다. 파킨슨 질환의 가장 대중적이고 효과적인 치료는 L-Dopa를 타블렛 형태로 투여하는 것이다.
L-Dopa는 혈류에 진입해서 뇌로 통과한다. 뇌에서 도파 디카르복실라제(Dopa decarboxylase)가 이것을 도파민으로 전환시킨다. L-Dopa는 일상 동작, 얼굴 표정, 신체 자세에 매우 특징적인 개선을 가져온다. 하지만, 떨림, 연하, 균형, 느린 동작 개시에서는 효과가 매우 약하다.
다른 약물과 L-Dopa 조합
L-Dopa를 도파민으로 전환시키는 상기 도파 디카르복실라제 효소는 혈액과 체 조직들에 존재한다. 따라서, L-Dopa는 혈청에서는 90% 까지 줄어든다. 이는 상기 효소를 카르비도파 및 벤세라시드 같은 다른 약물에 의해 억제하는 것으로 차단될 수 있다. 이들이 L-Dopa와 혼합되어, 그 뇌 이용성을 증가시킨다. 카르비도파와 벤세라시드는 뇌로 통과하지 않는다.
톨카폰(Tolcapone) 및 엔타칼폰(Entacalpone)
L-Dopa는 또한 다른 효소인 COMT (카테콜 O - 메틸 전환효소)에 파괴된다. 이들 약물이 COMPT를 억제하고, L-Dopa이 뇌에서 이용 가능하게 한다. 하지만, 이들 약물은 L-Dopa와 장기간의 문제가 있다. L-Dopa를 장기간 투여할 때, 환자들은 효과에 있어서 기복을 경험할 수도 있다. 작용 발현이 더 지연되고, 약물 작용기간이 단축될 수도 있다. 환자들은 또한 점멸기를 경험한다. 이는 환자들이 약물 투여 후에 장시간 완벽하게 잘 기능할 수도 있고, 약물의 효과가 갑자기 중단하는 것을 경험할 수 있음을 의미한다.
L-Dopa의 부작용: 대부분의 환자들이 구토를 느낌; 장기간 사용시 정신분열증, 특히 환각 및 수면 방해 유발 가능함. 지속 사용시 느리고 비자발적 동작을 초래하기도 함.
MAO 억제 (모노아민 옥시다아제)
뇌에서 도파민 형성을 증가시키기 위한 대안은 L-Dopa를 투여해서 도파민 분해를 감소시키는 것이다. 도파민은 모노아민 옥시다아제(MAO) 효소, 특히 MAO-B에 의해 분해된다. 데프레닐(Deprenyl)이 MAO-B 억제한다.
수용체 작용제
도파민 수용체에 직접 작용하는 약물을 이용해서 도파민 손실을 보전하는 것이 가능하다. 브로모크립틴, 리스유리드 등의 약물이 수용체 작용제들이다. 이들은 도파민에 반응하는 수용체를 자극하고, 상기 흑질선조체 뉴런에 의해 일반적으로 방출되는 도파민을 대체하여 작용한다. 이들 약물은 비자발적인 동작을 유도하고, 뇌의 일부분으로서, 다양한 중요 호르몬 분비를 조절하는 뇌하수체에서 도파민 수용체에 작용한다. 프로락틴 호르몬의 방출을 억제하기 위한 도파민 수용체 활성화의 부작용은 불임과 월경장애이다.
항콜린성 약물
뇌의 선조체 내에서는, 도파민과 아세틸콜린 둘다 신경전달자이다. 도파민이 신경세포 억제의 원인이 되는 반면, 아세틸콜린은 그 자극의 원인이 된다. 뇌가 도파민 세포를 손실하게 되면, 아세틸콜린 활성이 완전해진다. 따라서 아세틸콜린을 줄이고 도파민의 효과와 함께 그 효과의 균형을 맞추는 것이 하나의 전략이다. 항콜린성 약물은 떨림을 줄이는 데에는 더욱 효과적이지만, 근육 경직과 동작 곤란에는 아무런 효과가 없다. 이들 약물은 입 건조, 시력 저하, 변비, 이뇨 장애 등과 같은 많은 부작용이 있다.
미국특허 4880816에는 도파민이 다른 분자 DHC에 화학적으로 결합되어 있는 화합물, 특히 뇌혈관문 투과능(blood brain barrier penetration property)을 갖는 트리고넬린(trigonelline)에 대해 개시하고 있다. 여기서 DHC 화합물은 도파민의 보조제로 작용하여 상기 뇌혈관문을 넘고, 분해되고, 제거된다. 이와 같이 트리고넬린에 대한 도파민 작용에 대해서는 전혀 한정하지 않고 있다.
현재의 치료는 증상 완화를 목표하고 있으며, 아무런 제제도 신경성 퇴행을 억제할 수 없다. 최소한의 부작용과 최대한의 효율성을 지니면서 장기간 치료를 위해 보다 친절하고 온화한 치료가 긴급하게 필요하다. 본 발명은 도파민 제품에 대한 이러한 긴급한 요구에 주목하고 있으며, 파킨슨 질환을 포함하여 도파민 부족과 연관된 질병 관리에 효과적으로 이용 가능하다.
항정신성 약물의 주된 문제점은 도파민의 D2 수용체를 차단하는 것이다. 이와 같이 이 약물은 뇌에서 도파민 수용체 D2의 차단과 연계된 동작 질환 부작용을 초래한다. 따라서 도파민제가 항정신성 약물의 부작용으로서 야기되는 부동에 대한 해답이 될 것이다.
발명의 목적
본 발명의 주된 목적은 도파민 활성 및 기다 관련 약제학적 활성을 가진 약제학적 조성물을 획득하는 것이다.
본 발명의 또 다른 주된 목적은 트리고넬린 또는 그 유도체(들) 및 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들)와, 선택적으로 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 획득하는 것이다.
본 발명은 또 다른 목적은 트리고넬린 또는 그 유도체(들) 및 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들)와, 선택적으로 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 제조하는 공정을 개발하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 트리고넬린과 4-하이드록시이소류신을 식물 공급원으로부터 추출하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 그것이 필요한 환자에서 도파민 관련 질환을 관리하기 위한 의약 제조에 상기 약제학적 조성물을 사용하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 그것이 필요한 환자에서 프로락틴으로 인해 야기된 나쁜 효과를 관리하기 위한 의약 제조에 상기 약제학적 조성물을 사용하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 그것이 필요한 환자에서 도파민 수용체 길항제로 인해 야기된 부작용을 관리하기 위한 의약 제조에 상기 약제학적 조성물을 사용하는 것이다.
발명의 개요
따라서, 본 발명은 도파민 활성과 기타 관련 약제학적 활성을 가지며, 트리고넬린 또는 그 유도체(들) 및 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들), 선택적으로 부형제(들)을 포함하는, 약제학적 조성물; 트리고넬린 또는 그 유도체(들) 및 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들), 선택적으로 부형제(들)을 포함하는, 약제학적 조성물을 제조하는 공정, 여기서 상기 공정은 (a) 트리고넬린 및 4-하이드록시이소류신을 함유하는 투명한 용액을 식물 공급원으로부터 추출하는 단계; 및 (b) 선택적으로 트리고넬린 및 4-하이드록시이소류신을 상기 투명한 용액으로부터 침전시키고, 상기 조성물을 획득하는 단계를 포함함; 트리고넬린 또는 그 유도체(들) 및 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들), 선택적으로 부형제(들)을 포함하는, 약제학적 조성물을 그것이 필요한 환자에서 도파민 관련 질환을 관리하기 위한 의약 제조에 이용하는 것; 트리고넬린 또는 그 유도체(들) 및 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들), 선택적으로 부형제(들)을 포함하는, 약제학적 조성물을 그것이 필요한 환자에서 프로락틴에 의해 야기된 나쁜 효과를 관리하기 위한 의약 제조에 이용하는 것; 및 트리고넬린 또는 그 유도체(들) 및 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들), 선택적으로 부형제(들)을 포함하는, 약제학적 조성물을 그것이 필요한 환자에서 도파민 수용체 길항제에 의해 야기된 부작용을 관리하기 위한 의약 제조에 이용하는 것에 관한 것이다.
도 1은 강경증 경감에 있어서 시험 약물의 투약 의존반응을 나타낸다. IBH-B는 본 발명의 시험 약물을 가리킨다. IBH-B(10,30 또는 100) + Hal (0.5) 및 L-DOPA (10) + Hal (0.5) 모든 값은 P < 0.001에서 중요하며, IBH-B (3) + Hal (0.5)는 각 시점에서 Hal (0.5)와 비교할 때 중요하지 않다. IBH-B 처리로 할로페리돌 유도 강경증이 상당히 줄어들었다.
도 2는 IBH-B로 표시된 시험 약물에 의해 떨림 계수에 있어서 중대한 감소를 보여준다.
도 3은 티라민 상승에 대한 시험 약물의 효과를 보여준다 (정밀 연구).
도 4는 티라민 상승에 대한 시험 약물의 효과를 보여준다 (지속 연구).
도 5는 시험 화합물에 의한 MAO-B의 선택적 억제를 나타내는 반응곡선이다.
본 발명은 도파민 활성 및 기타 관련 약제학적 활성을 가지며, 트리고넬린 또는 그 유도체(들) 및 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들)와, 선택적으로 부형제(들)을 포함하는, 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 트리고넬린 또는 그 유도체(들)의 농도는 30% 내지 90% 범위이며, 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들)의 농도는 10% 내지 30% 범위이다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 트리고넬린은 식물이나 동물 공급원으로부터 획득된다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 트리고넬린은 트리고넬라 포이넘 그라쿰(Trigonella foenum graecum) 및 커피 아라비카(Coffee arabica)로부터 획득된다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 트리고넬린의 상기 유도체(들)는 염화수소 유도체, 아세트산 유도체, 시트르산 유도체, 벤조산 유도체, 염 유도체 및 산 유도체를 포함하는 군, 바람직하게는 염화수소 유도체로부터 선택된다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 4-하이드록시이소류신은 식물 공급원, 바람직하게는 트리고넬라 포이넘 그라쿰(Trigonella foenum graecum) 에서 획득된 다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 4-하이드록시이소류신의 상기 유도체(들)는 염화수소 유도체, 아세트산 유도체, 시트르산 유도체, 벤조산 유도체, 염 유도체 및 산 유도체를 포함하는 군, 바람직하게는 염화수소 유도체로부터 선택된다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 부형제(들)는 과립화제, 결합제, 윤활제, 붕괴제, 감미제, 유동화제, 항고착제, 정전기 방지제, 계면활성제, 항산화제, 점성물질, 코팅제, 착색제, 풍미제, 가소제, 보존제, 현탁제, 유화제 및 구형 과립화제를 포함하는 군으로부터 선택된다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 조성물은 정제, 트로키, 당의정, 수성 또는 유성 현탁제, 연고, 패치, 겔, 로션, 치약, 캡슐, 에멀션, 크림, 분무제, 점적액, 분산성 분말 또는 과립, 경질 또는 연질 겔 캡슐 중의 에멀션, 시럽, 엘릭시르제, 파이토슈티칼(phytoceutical), 기능식품 및 음식물을 포함하는 군으로부터 선택된 단위용량 형태로 제형된다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 기타 관련 약제학적 활성은 프로락틴 억제, 근육 이완, 카테콜아민 전구체 작용 및 성기능 저하 및 항정신성 약물에 의한 부작용 경감을 포함하는 군으로부터 선택된다.
본 발명은 또한
트리고넬린 또는 그 유도체(들) 및 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들)와, 선택적으로 부형제(들)를 포함하는, 약제학적 조성물을 제조하는 공정으로서, 여기서 상기 공정은
a) 트리고넬린 및 4-하이드록시이소류신을 함유하는 투명한 용액을 식물 공급원으로부터 추출하는 단계; 및
b) 선택적으로 트리고넬린 및 4-하이드록시이소류신을 상기 투명한 용액으로부터 침전시키고, 상기 조성물을 획득하는 단계를 포함한다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 트리고넬린 또는 그 유도체(들)의 농도는 30% 내지 90% 범위이며, 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들)의 농도는 10% 내지 30% 범위이다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 부형제(들)는 과립화제, 결합제, 윤활제, 붕괴제, 감미제, 유동화제, 항고착제, 정전기 방지제, 계면활성제, 항산화제, 점성물질, 코팅제, 착색제, 풍미제, 가소제, 보존제, 현탁제, 유화제 및 구형 과립화제를 포함하는 군으로부터 선택된다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 유도체(들)는 염화수소 유도체, 아세트산 유도체, 시트르산 유도체, 벤조산 유도체, 염 유도체 및 산 유도체를 포함하는 군, 바람직하게는 염화수소 유도체로부터 선택된다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 투명한 용액은 식물 트리고넬라 포이넘 그라쿰(Trigonella foenum graecum) 및/또는 커피 아라비카(Coffee arabica)로부터 추출하는데, 하기 단계를 포함한다:
a. 트리고넬라(Trigonella) 및/또는 커피 아라비카(Coffee arabica) 종자를 분쇄한다;
b. 헥산 용매를 사용하여 분쇄된 트리고넬라 종자를 탈지시킨다;
c. 지방족 알코올과 물의 용매 혼합액을 상기 분쇄된 종자에 통과시켜, 트리고넬린과 아미노산을 함유하는 용매를 추출한다;
d. 상기 용매를 진공 농축시켜 반고형물을 얻는다;
e. 상기 반고형물을 탈이온수에 녹여서, 투명한 용액을 얻는다;
f. 상기 (e) 단계의 투명한 용액을 이온교환 수지 칼럼에 통과시켜, 상기 아미노산과 상기 트리고넬린을 보유시킨다;
g. 상기 칼럼을 용출시키고, 상기 용출액을 농축시켜 결과물을 얻는다;
h. 상기 결과물의 투명한 용액을 건조시켜, 자유 흐름 분말을 얻는다; 그리고
i. 상기 분말을 용매에 녹여 트리고넬린과 아미노산을 함유하는 상기 투명한 용액을 얻는다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 종자는 바람직하게는 약 2mm 두께로 분쇄된다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 용매 혼합액은 지방족 알코올과 물을 1:9 내지 9:1, 바람직하게는 7:3 비율로 포함한다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 지방족 알코올은 에탄올이다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 칼럼은 암모니아수 또는 암모니아 알코올 용액으로 용출된다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 용매는 헤테로고리형 방향족 화합물, 지방족 화합물, 케톤, 시안화물, 알코올, 니트릴, 에스테르, 에테르 및 그것들 중 하나 또는 그 이상의 혼합물을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 용매는 에탄올이다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 농축은 40℃ 내지 80℃ 에서 실시된다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 아미노산은 4-하이드록시이소류신이다.
또한 본 발명은 트리고넬린 또는 그 유도체(들) 및 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들), 선택적으로 부형제(들)을 포함하는, 약제학적 조성물을 그것이 필요한 환자에서 도파민 관련 질환을 관리하기 위한 의약 제조에 이용하는 것에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 환자는 인간을 포함하는 동물이다.
또한 본 발명은 트리고넬린 또는 그 유도체(들) 및 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들), 선택적으로 부형제(들)을 포함하는, 약제학적 조성물을 그것이 필요한 환자에서 프로락틴에 의해 야기된 나쁜 효과를 관리하기 위한 의약 제조에 이용하는 것에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 프로락틴에 의해 야기된 나쁜 효과는 불임, 다낭난소증후군 및 젖 분비 증가를 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 환자는 인간을 포함하는 동물이다.
또한 본 발명은 트리고넬린 또는 그 유도체(들) 및 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들), 선택적으로 부형제(들)을 포함하는, 약제학적 조성물을 그것이 필요한 환자에서 도파민 수용체 길항제에 의해 야기된 부작용을 관리하기 위한 의약 제조에 이용하는 것에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 부작용은 도파민 수용체 길항제에 의한 도파민 수용체 차단으로 야기되는 동작 질환이다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 환자는 인간을 포함하는 동물이다.
본 발명의 하나의 실시예는 도파민 활성을 갖는 의약 제조를 위해, 트리고넬린, 그 유도체들, 4-하이드록시이소류신, 그 유도체들 및 선택적으로 부형제(들)을 포함하는, 조성물을 이용하는 것에 관한 것이다. 상기 트리고넬린은 식물과 동물 공급원으로부터 유도될 수 있다. 이 조성물은 뇌에서 도파민 농도를 늘리기 위해 사용되며, 이에 따라 저 수준의 도파민과 연관된 환경, 예를 들면 파킨슨 병, 동작 질환 등을 개선한다. 이 조성물은 프로락틴 억제, 젖 분비 중지, 근육 이완, 성기능 장애 경감, 정신적 주의력 증대 및 기타 도파민 관련 기능과 관련한 활성을 위해 이용된다. 본 발명의 다른 측면은 도파민 활성을 갖는 조성물이 물질들을 함유한 티라민(Tyramine)과 상호작용하지 않아서, 환자가 고 수준의 티라민을 함유한 재료를 복용할 때 혈압을 증가시키지 않는 것이다.
본 발명의 또 다른 실시예는 그것이 필요한 환자에게 프로락틴 수치를 억제할 수 있는 도파민 활성을 갖는 의약 제조를 위해 조성물을 이용하는 것에 관한 것이다. 본 발명의 또 다른 측면은 다낭난소질환 치료를 위해 상기 조성물을 이용하는 것에 관한 것이다. 본 발명의 또 다른 측면은 불임 치료를 위한 의약 제조에 상기 조성물을 이용하는 것에 관한 것이다. 본 발명의 또 다른 측면은 사람의 성 호르몬 조절을 위한 의약 제조에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 실시예는 도파민 수용체 길항제에 의해 야기되는 피해를 최소화하여 부동을 유도하는 의약 제조를 위해 도파민 활성을 갖는 조성물을 이용하는 것에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 실시예는 도파민성 및 약제학적 활성을 갖고, 트리고넬린, 트리고넬린 유도체들, 4-하이드록시이소류신, 그 유도체들 및 부형제들을 포함하는, 조성물에 관한 것이다.
트리고넬린 또는 그 유도체(들) 및 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들), 선택적으로 부형제(들)을 포함하는, 본 발명의 조성물은 여기에서 시험 약물 또는 시험 화합물 또는 시험 약물 화합물로 부르기도 한다.
본 발명의 본 실시예들의 주된 이점은 상기 시험 약물이 모노아민 옥시다아제-B(Monoamine Oxidase-B) 억제자라는 것이다. 이러한 선택성 덕분에, 식용 티라민과의 반응을 유도하지 않게 되어, 비-선택성 MAO 억제자의 주된 부작용인 "치즈 반응"을 차단하게 된다. 두번째 이점은 도파민 활성을 갖는 본 조성물이 항정신성 약물의 부작용을 경감시킬 수 있다는 사실이다. 세번째 이점은, 본 조성물이 주요 이점인 프로락틴 분비를 억제할 수 있다는 것이다.
본 발명은 트리넬라 포이넘 그라쿰 및 커피 아라비카 (식물명) 등의 식물로부터 화학적 마커를 분리하고 정제하는 공정에 대해 상세하게 설명한다. 상기 화학적 마커는 트리고넬라 알칼로이드이며, 그것의 염화수소, 아세트산염, 시트르산염, 설폰산염, 메실산염(mesylate), 하이드로요오드 벤조산염 또는 무기 유기 산염, 바람직하게는 염화수소로 추출된다. 이렇게 정제된 추출물은 다양한 분류학상의 동물 모델에서의 그 생물활성에 대해 연구된다. 이 화합물의 신규한 측면은 승인된 프로 토콜에 의해 여러 특정 동물 실험에서 확인된 것처럼 그것이 도파민 유사 활성을 갖는다는 것이다. 이와 같이 트리고넬린 화합물이 도파민 활성을 나타낸다는 사실이 본 발명을 통해 최초로 증명되었다.
하나의 실시예에 대한 간단히 요약하면 다음과 같다:
a. 호로파(fenugreek) 씨 또는 커피 아라비카 씨 등의 종자를 함유하는 트리고넬린을 분쇄해, 안쪽 심부를 노출시켜 효과적인 탈지, 추출, 가공을 확보하도록 한다.
b. 헥산 용매를 상기 호로파 베드에 반복해서 통과시켜서, 효과적으로 상기 호로파 탈지를 수행한다.
c. 상기 분쇄한 종자를 추출기(percolater)에 로딩하고, 지방족 알코올과 물로 이루어진 용매 혼합액을 상기 층에 통과시켜서 상기 트리고넬린과 아미노산 (4 하이드록시이소류신)을 사포닌과 함께 효과적으로 추출한다.
d. 상기 용매를 보다 낮은 온도에서 진공 농축시켜서 상기 물질의 원래 상태를 보전하고, 그 결과물을 탈이온수에 녹여 투명한 용액을 얻는다.
e. 상기 얻어진 투명한 용액을 겔 형태로 된 강산 양이온 교환수지에 통과시켜서 상기 아미노산과 트리고넬린을 보존시킨다.
f. 상기 칼럼을 불순물과 색이 모두 제거되도록 탈이온수로 세척하고, 상기 칼럼을 5N 농도를 갖는 암모니아수 용액 또는 암모니아 알코올 용액으로 용출시 킨다.
g. 상기 용매 용출액 내에서 상기 용출시킨 화합물을 진공 하에서 농축시켜서, 물과 용매를 제거하고, 그 결과 물질을 녹이고 여과시켜 투명한 용액을 얻는다.
h. 상기 얻어진 투명한 용액을 스프레이 건조시켜서 자유흐름 분말을 얻고, 그 상태로 이용할 수도 있다.
i. 상기 분말을 이소프로필 알코올 또는 에틸 알코올에서 다시 녹여서 투명한 용액을 얻는다.
j. 정제된 추출액을 HPLC 측정을 수행하여 분석물을 확인한다.
또한, 상기 투명한 알코올 용액을 선택적으로 염화수소 기류를 통하게 해서, 트리고넬린과 4-하이드록시이소류신을 그들 각각의 염화수소 유도체로 전환시킨다.
트리고넬린 및/또는 그 유도체 및 4-하이드록시이소류신 및/또는 그 유도체로서 상기 화합물의 정제 추출물을 스위스 알비노 생쥐에 할로페리돌(Haloperidol) 프로토콜에 따라서 투여한다. 이는 파킨슨 증후군을 유도한다. 이 추출물은 투약 의존방식으로 이들 증후군을 역전시켜서 이 추출물의 도파민성 또는 도파민 유사 활성을 확인시킨다.
트리고넬린 및/또는 그 유도체 및 4-하이드록시이소류신 및/또는 그 유도체로서 상기 화합물의 정제 추출물을 스위스 알비노 생쥐에 투여해서, 이것의 영향을 옥소트레모린 길항(Oxotremorine Antagonism) 메커니즘으로 검증한다. 이로써 온화한 항콜린성 활성을 확인시키고, 이를 파킨슨 치료에 극히 적합하게 만든다.
온화한 항콜린성 효과와 조합된 도파민 효과는 파킨슨 병을 포함하는 도파민 관련 질환의 치료에 최적의 방법이다. 파킨슨 병은 도파민 결핍에 의해 발병할 뿐만 아니라, 도파민과 아세틸콜린의 불균형에 의해 유발된다.
도파민은 에피네프린과 노르에피네프린에 대한 전구체이다. 이와 같이, 이 화합물은 에피네프린의 농도를 증가시키고 정신적 주의력과 성취감을 증가시킬 수 있다. 도파민은 억제적 신경전달자이며, 아세틸콜린의 효과를 조절할 수 있다. 제시된 추출물과 화합물은 운동 생리학에서 근육 이완을 위해 사용 가능하다.
도파민성 물질은 프로락틴 호르몬 수치를 떨어뜨린다. 프로락틴은 성기능 저하에 연관된다. 이 화합물은 프로락틴을 억제하기 위해 사용 가능하다. 프로락틴은 수유모들에서 젖 분비를 유도한다. 도파민성 물질은 프로락틴을 억제하며, 이 화합물은 젖 분비를 중지시키는 데에 사용 가능하다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 도파민 활성을 갖는 조성물은 식물 공급원으로부터 유도된다.
1. 커피 아라비카와 같이 트리고넬린을 함유하는 호로파 씨나 기타 종자를 롤러 분쇄기계를 이용하여 1mm 내지 4mm 사이 두께로 분쇄한다. 안쪽 심부를 효과적으로 노출시키려면 2mm 두께로 분쇄하는 것이 바람직하다. 상기 분쇄한 종자를 적절한 메쉬 크기, 바람직하게는 100 메쉬의 바닥 필터로 고정한 추출기에 채워서, 상기 종자 가루(meal)가 용매를 따라 이동할 수 없음을 보장한다. 상기 채워진 종자 층을 추출하기 위해서는 헥산이 가능하다.
2. 상기 추출한 용매를 8 내지 10시간에 걸쳐 효율적으로 재사용해서, 그 결과물인 호로파 가루에 오일과 지질이 없도록 한다. 이러한 탈지질화 과정은 커피 아라비카 종자에서는 실시하지 않아도 된다.
3. 상기 헥산 추출 가루를 1:9 내지 9:1비의 수용성 지방족 알코올을 포함하는 용매 혼합액으로 재추출한다. 바람직하게는 용매로서 7:3. 커피 아라비카 종자의 경우에는 상기 알코올 용매를 줄여서, 알코올 최소 조성물, 즉 알코올 한 부분 대비 물 아홉 부분을 갖도록 할 수 있다.
상기 알코올은 알코올성 용매로서 메틸 알코올, 에틸 알코올, 이소프로파놀 및 바람직하게는 에탄올일 수 있다. 상기 수용성 알코올 혼합액은 추출기에서 호로파 층을 상부에서부터 기저부까지 통과된다. 상기 용매를 재사용하는 공정이 8시간 내지 10시간, 바람직하게는 8시간 동안 실온에서 계속된다. 상기 추출기의 기저부로부터의 맑은 추출물을 육안으로 임의의 분말에 대해 검사하며, 필요시 재여과시킨다.
4. 상기 맑은 여과물을 50℃ 내지 75℃, 바람직하게는 55℃ 에서 페이스트 물질로 진공 농축시키고, 용매는 회수한다. 상기 페이스트는 탈이온수에 녹여서 약 5% 고형성분으로 이루어진 투명한 용액을 얻는다.
5. 상기 투명한 용액을 강산 양이온으로 이루어진 겔 형태 이온교환수지칼럼에 통과시키고, 5N 수용성 암모니아 용액으로 용출시킨다. 상기 칼럼을 수용성 알코올 암모니아용액, 바람직하게는 에탄올, 이소프로파놀, 또는 1:1 비율의 메탄올로 용출시킬 수도 있다.
6. 상기 탈리된 용액을 50% 고형성분으로 진공 농축시키고, 동류(co- current) 스프레이 건조기에서 스프레이 건조시켜 분말화한다. 선택적으로 상기와 같이 얻어진 분말을 에틸 알코올 또는 이소프로필 알코올에 알코올 대 분말을 1:20비율로 녹인 다음, 여과시킨다.
7. 선택적으로, 상기 투명한 여과물을 0℃ 내지 5℃, 바람직하게는 0℃의 저온으로 냉각시키고, 염화수소 기체의 건조 기류를 통과시켜서 트리고넬린과 4 하이드록시이소류신을 그들 각각의 염화수소 유도체로 침전시킨다. 상기 침전시킨 유도체들을 여과시키고, 세척하여 불순물을 없애고, 진공 하에서 60℃ 내지 90℃에서 건조시킨다.
본 발명은 하기 실시예들의 도움으로 더욱 상세히 설명된다. 하지만, 이들 실시예들은 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안된다.
실시예 1:
5% 미만의 수분 함량을 가진 호로파 씨 1000g을 롤러 분쇄기로 분쇄시켜 두께 2mm로 만든다. 상기 분쇄시킨 재료를 300mm 베드 높이의 칼럼에 고정시킨다. 헥산 5L를 호로파 층에 통과시키고, 바닥에서 수집한 용출액을 상기 호로파 층을 통해 10시간 동안 35℃에서 재사용한다. 10시간 후 상기 호로파 층을 배수하여 헥산을 제거한다. 이소프로필 알코올과 물이 4:1 비율로 혼합된 용매 혼합액 (8L)를 8시간 동안 35 ℃에서 상기 용출액을 재사용하여 통과시킨다. 8시간 후 상기 호로파 베드를 배수시켜 추출액을 제거하고, 수집된 모든 추출액을 진공 하에서 50℃에서 반고형 물질로 농축시킨다. 상기 농축시킨 물질을 탈이온수 5L에 다시 녹여서 투명 한 용액을 얻는다. 상기 투명한 수용액을 강산 양이온 교환 겔 타입 수지 400ml를 포함하는 칼럼에 2시간 동안 통과시킨다. 실리카 겔 도포 판 F254 (1.05554.007) 위에 이동상으로서 12:8:4 비율의 n-부탄올 : 아세트산 : 물로 이루어진 시스템을 이용하여, 트리고넬린 부존재에 대해 TLC 스크리닝법이 상기 칼럼 용출액 상에서 UV 254nm 에서 관찰하여 확인하였다. 상기 칼럼이 포화되고 난 후, 상기 수지 베드를 탈이온수 4L로 세척하여 무색으로 만들고 부착 불순물을 제거시켰다. 상기 칼럼을 5N 세기의 암모니아수 800ml로, 시간당 400ml 속도로 탈리시킨다. 상기 용출시킨 혼합액을 진공 하에서 45℃에서 반고형 물질로 농축시킨다.
건조된 물질을 탈이온수 150ml로 다시 녹이고, 불용성 성분이 없도록 여과시킨다. 상기 용액을 진공 하에서 50℃에서 고형성분 20% 함량으로 농축시키고, 동류 간접 열풍 에어 스프레이 건조기에서 하기 조건에서 스프레이 건조시킨다.
유입온도: 160℃
유출온도: 80℃
분무기 RPM: 12000
수율은 9gms이다. (HPLC가 25% 트리고넬린 및 35% 아미노산을 나타내었음)
상기 재료를 에틸 알코올 250ml에서 다시 녹이고, 41 와트먼 여과지에 여과시키고, 0℃로 냉각시킨다. 그 온도에서 염화수소 기체의 건조 기류를 여기에 통과시켜서, 트리고넬린 염화수소를 침전시킨다. 상기 침전물을 여과지 위에서 여과시켜 버리고, 찬 에틸 알코올로 세척하고, 진공 하에서 60℃에서 건조시킨다.
실시예 2:
5% 미만의 수분 함량을 가진 호로파 씨 1000g을 롤러 분쇄기로 분쇄시켜 두께 2mm로 만든다. 상기 분쇄시킨 재료를 300mm 베드 높이의 칼럼에 고정시킨다. 헥산 5L를 호로파 층에 통과시키고, 바닥에서 수집한 용출액을 상기 호로파 층을 통해 10시간 동안 35℃에서 재사용한다. 10시간 후 상기 호로파 층을 배수하여 헥산을 제거한다. 이소프로필 알코올과 물이 4:1 비율로 혼합된 용매 혼합액 (8L)를 8시간 동안 35 ℃에서 상기 용출액을 재사용하여 통과시킨다. 8시간 후 상기 호로파 베드를 배수시켜 추출액을 제거하고, 수집된 모든 추출액을 진공 하에서 50℃에서 반고형 물질로 농축시킨다.
상기 농축시킨 물질을 탈이온수 5L에 다시 녹여서 투명한 용액을 얻는다. 상기 투명한 수용액을 강산 양이온 교환 겔 타입 수지 400ml를 포함하는 칼럼에 2시간 동안 통과시킨다. 실리카 겔 도포 판 F254 (1.05554.007) 위에 이동상으로서 12:8:4 비율의 n-부탄올 : 아세트산 : 물로 이루어진 시스템을 이용하여, 트리고넬린 부존재에 대해 TLC 스크리닝법이 상기 칼럼 용출액 상에서 UV 254nm 에서 관찰하여 확인하였다. 상기 칼럼이 포화되고 난 후, 상기 수지 베드를 탈이온수 4L로 세척하여 무색으로 만들고 부착 불순물을 제거시켰다. 상기 칼럼을 5N 세기의 암모니아수 800ml로, 시간당 400ml 속도로 탈리시킨다. 상기 탈리시킨 혼합액을 진공 하에서 45℃에서 반고형 물질로 농축시킨다.
건조된 물질을 탈이온수 150ml로 다시 녹이고, 불용성 성분이 없도록 여과시 킨다. 상기 용액을 진공 하에서 50℃에서 고형성분 20% 함량으로 농축시키고, 동류 간접 열풍 에어 스프레이 건조기에서 하기 조건에서 스프레이 건조시킨다.
유입온도: 160℃
유출온도: 80℃
분무기 RPM: 12000
수율은 9gms이다. (HPLC가 35% 트리고넬린 및 20% 4-하이드록시이소류신을 나타내었음)
실시예 3:
5% 미만의 수분 함량을 가진 호로파 씨 1000g을 롤러 분쇄기로 분쇄시켜 두께 2mm로 만든다. 상기 분쇄시킨 재료를 300mm 베드 높이의 칼럼에 고정시킨다. 헥산 5L를 호로파 층에 통과시키고, 바닥에서 수집한 용출액을 상기 호로파 층을 통해 10시간 동안 35℃에서 재사용한다. 10시간 후 상기 호로파 층을 배수하여 헥산을 제거한다. 에틸 알코올과 물이 3.5:1 비율로 혼합된 용매 혼합액 (8L)를 8시간 동안 35℃에서 상기 용출액을 재사용하여 통과시킨다. 8시간 후 상기 호로파 베드를 배수시켜 추출액을 제거하고, 수집된 모든 추출액을 진공 하에서 50℃에서 반고형 물질로 농축시킨다.
상기 농축시킨 물질을 탈이온수 5L에 다시 녹여서 투명한 용액을 얻는다. 상기 투명한 수용액을 강산 양이온 교환 겔 타입 수지 400ml를 포함하는 칼럼에 2시간 동안 통과시킨다. 실리카 겔 도포 판 F254 (1.05554.007) 위에 이동상으로서 12:8:4 비율의 n-부탄올 : 아세트산 : 물로 이루어진 시스템을 이용하여, 트리고넬린 부존재에 대해 TLC 스크리닝법이 상기 칼럼 용출액 상에서 UV 254nm 에서 관찰하여 확인하였다. 상기 칼럼이 포화되고 난 후, 상기 수지 베드를 탈이온수 4L로 세척하여 무색으로 만들고 부착 불순물을 제거시켰다. 상기 칼럼을 5N 세기의 암모니아수 800ml로, 시간당 400ml 속도로 탈리시킨다. 상기 탈리시킨 혼합액을 진공 하에서 45℃에서 반고형 물질로 농축시킨다.
건조된 물질을 탈이온수 150ml로 다시 녹이고, 불용성 성분이 없도록 여과시킨다. 상기 용액을 진공 하에서 50℃에서 고형성분 20% 함량으로 농축시키고, 동류 간접 열풍 에어 스프레이 건조기에서 하기 조건에서 스프레이 건조시킨다.
유입온도: 160℃
유출온도: 80℃
분무기 RPM: 12000
수율은 10gms이다. (HPLC가 35% 트리고넬린 및 18% 4-하이드록시이소류신 아미노산을 나타내었음)
상기 재료를 에틸 알코올 250ml에서 다시 녹이고, 41 와트먼 여과지에 여과시키고, 0℃로 냉각시킨다. 그 온도에서 염화수소 기체의 건조 기류를 여기에 통과시켜서, 트리고넬린 염화수소를 침전시킨다. 상기 침전물을 여과지 위에서 여과시 켜 버리고, 찬 에틸 알코올로 세척하고, 진공 하에서 60℃에서 건조시킨다.
실시예 4:
15% 미만의 수분 함량을 가진 녹색 커피 아라비카 씨 1000g을 롤러 분쇄기로 분쇄시켜 두께 2mm로 만든다. 상기 분쇄시킨 재료를 500mm 베드 높이의 칼럼에 고정시킨다. 물과 에틸 알코올이 9:1 비율로 혼합된 용매 혼합액 (8L)를 8시간 동안 35℃에서 상기 용출액을 재사용하여 통과시킨다. 8시간 후 상기 커피 아라비카 베드를 배수시켜 추출액을 제거하고, 수집된 모든 추출액을 진공 하에서 50℃에서 반고형 물질로 농축시킨다.
상기 농축시킨 물질을 탈이온수 5L에 다시 녹여서 투명한 용액을 얻는다.
상기 투명한 수용액을 강산 양이온 교환 겔 타입 수지 400ml를 포함하는 칼럼에 2시간 동안 통과시킨다. 실리카 겔 도포 판 F254 (1.05554.007) 위에 이동상으로서 12:8:4 비율의 n-부탄올 : 아세트산 : 물로 이루어진 시스템을 이용하여, 트리고넬린 부존재에 대해 TLC 스크리닝법이 상기 칼럼 용출액 상에서 UV 254nm 에서 관찰하여 확인하였다. 상기 칼럼이 포화되고 난 후, 상기 수지 베드를 탈이온수 4L로 세척하여 무색으로 만들고 부착 불순물을 제거시켰다. 상기 칼럼을 5N 세기의 암모니아수 800ml로, 시간당 400ml 속도로 탈리시킨다. 상기 탈리시킨 혼합액을 진공 하에서 45℃에서 반고형 물질로 농축시킨다.
건조된 물질을 탈이온수 150ml로 다시 녹이고, 불용성 성분이 없도록 여과시킨다. 상기 용액을 진공 하에서 50℃에서 고형성분 20% 함량으로 농축시키고, 동류 간접 열풍 에어 스프레이 건조기에서 하기 조건에서 스프레이 건조시킨다.
유입온도: 160℃
유출온도: 80℃
분무기 RPM: 12000
수율은 5gms이다. (HPLC가 60% 트리고넬린 및 나머지 아미노산을 나타내었음)
상기 재료를 에틸 알코올 200ml에서 다시 녹이고, 41 와트먼 여과지에 여과시키고, 0℃로 냉각시킨다. 그 온도에서 염화수소 기체의 건조 기류를 여기에 통과시켜서, 트리고넬린 염화수소를 침전시킨다. 상기 침전물을 여과지 위에서 여과시켜 버리고, 찬 에틸 알코올로 세척하고, 진공 하에서 60℃에서 건조시킨다.
실시예 5:
껍질 없는 녹색 커피 아라비카 씨 1000g을 커뮤팅 밀(Commuting mill)로 분쇄해서 20 메쉬에 100% 통과하도록 만든다. 상기 분쇄한 씨앗을 탈이온수 6L에서 95 내지 100 ℃ 에서 4시간 삶고, 여과지로 여과해서 불용성 물질을 전부 제거한다. 투명한 용액을 실온으로 해열시키고, 신선 재생된 강산 양이온 교환수지 500mL를 함유하는 이온교환수지 칼럼에 3시간 동안 통과시킨다. 10:8:5 비율의 N-부탄올 : 아세트산 : 물로 이루어진 TLC 시스템을 이용하여 바닥 용출액에 대해 트리고넬린 부존재 여부를 UV 254nm 에서 관찰하여 확인하였다.
비물질화수 5L를 사용해서 상기 칼럼을 세척하여 색과 불순물을 전부 제거하 였다. 상기 칼럼을 6% 암모니아 용액 600mL로 용출시키고, 상기 언급한 TLC 시스템으로 용출 완결여부를 확인한다. 상기 용출액을 진공 하에서 50℃에서 페이스트로 농축시킨다. 상기 페이스트를 이소프로필 알코올 내 20% 염산 가스 100mL로 75℃에서 3시간 동안 가루로 만들고, 실온으로 해열시킨다. 그 결과 침전물을 여과하고, 이소프로필 알코올 500mL로 세척해서 무색으로 만든다. 상기 고형분을 80 ℃에서 진공 건조시켜, 자유흐름 분말 10g을 얻는다.
트리고넬린 유도체 (염화수소)와 4 HI 유도체 (염화수소) 뿐만 아니라, 트리고넬린과 4 HI를 포함하는 신규한 조성물을 가지고 하기 실시예들을 수행하였다.
실시예 6: 마우스에서 할리페리돌 유도 강경증(Haloperidol induced catalepsy).
할로페리돌은 뇌에서 도파민 D2 수용체를 차단하는 신경차단제로, 마우스 강경증 바 테스트로 측정 가능한 추체외로부작용(extra-pyramidal side effect)을 촉진한다. 마우스 강경증은 오랜 시간에 걸쳐서 외형적으로 부여된 비정상적 자세를 교정하지 못하는 것을 의미한다. 이러한 마우스 근육경직은 파킨슨 병 환자들에게서 보이는 운동 마비, 근육 경직, 떨림 현상에 비할 수 있다. 할로페리돌 유도 강경증은 그것이 경쟁적 길항작용을 증대시키기 때문에 도파민성 약물이 뇌 선조체에 도파민을 공급하는 경우에 역전될 수 있다.
과정: 성별과 관계없이 체중이 23 내지 28g인 스위스 알비노 마우스를 사용하였다. 할리페리돌(0.5 mg/kg i.p.) 에 의해 강경증을 유도하고, 바 테스트로 3시 간까지 관찰했다. 6마리의 동물을 염, 시험 약물 및 표준 약물로 복막내에 투약하였다. 동물들을 나무못이 상자 바닥에서 수평적으로 2.5cm 설치되어 있는 반투명 플라스틱 상자 안에 놓아둔다. 동물들을 2분 동안 상자에 적응할 수 있게 한다. 그런 다음, 각 동물을 어깨 주변과 앞발 아래를 부드럽게 붙잡아서, 조심스럽게 상기 나무못 위에 놓는다. 바 위에서 적어도 앞발 하나로 보낸 시간을 관찰한다. 동물이 앞발을 떼면, 그 시간을 기록하고, 그 마우스는 바 위에 다시 놓여진다. 각 그룹에 6마리씩으로, 각 동물마다 30, 60, 120, 360분에 3번 시도한다.
상기 시험 약물이 강경증 경감에 있어서 중대한 투약 의존 반응을 나타냈다 (도 1). 상기 표준 약물 L-Dopa를 10 mg/kg 투약한 효과가 상기 시험 약물을 100 mg/kg 투약시킨 경우보다 더 효과적인 것으로 나타났다. 이 차이가 중요함에도 불구하고, 상기 시험 약물이 신속하게 작용하고, 표준 약물에 있는 “ON-OFF” 작용이 없는 것으로 입증되었다. 또한 상기 표준 약물은 강경증에 대한 초기 효과 이후에 강경증 감소에 있어서 후퇴하는 양상을 나타냈다. 이로써 상기 시험 약물의 도파민 작용을 입증한다 (도 1). 따라서 상기 시험 약물이 할리페리돌에 의해 유동된 파킨슨 증후군을 되돌린다고 볼 수 있다.
상기 할리페리돌 유도 강경증 역전현상으로 상기 시험 약물 조성물의 도파민 수용체 길항제인 할리페리돌에 의해 야기된 부작용 최소화 능력을 입증한다. 이와 같이, 상기 약물이 항정신성 약물을 포함하는 도파민 수용체 길항제들의 영향을 최소화하는 데에 사용 가능한 도파민제라는 사실을 보여준다.
실시예 7: 옥소트레모린 길항작용(Oxotremorine Antagonism)
옥소트레모린은 콜린성 약물로서, 무스카린 작용제이며 떨림, 운동 실조, 근경축, 타액 과다분비, 낙루, 저체온증 등 파킨슨증 유사 신호를 유발한다. 옥소트레모린은 콜린성 약물로서, 마우스에서 떨림 과다를 유발한다. 만약 어떤 약물이 아트로핀(atropine)처럼 항콜린성 특성을 보유하고 있다면, 상기 떨림이 줄어들게 될 것이다.
과정: 체중이 18 내지 22g인 6 내지 10마리 NMRI 마우스 그룹을 사용하고, 옥소트레모린 0.5 mg/kg 투약 1시간 전에, 시험 화합물 또는 표준 화합물 (벤즈아트로핀 메실레이트 5mg/kg)을 경구 투여한다. 옥소트레모린 복용 후 1시간 동안 5분 간격으로 떨림을 계수한다. 옥소트레모린 0.5 mg/kg 투약 후, 15분 내에 떨림이 시작되고, 30분간 지속되었다.
매개변수:
떨림 계수 옥소트레모린 주사 30분 경과후 타액 과다분비 및 낙루
없음 0 없음 0
약함 1 약함 1
중간 2 중간 2
심함 3 심함 3
각 그룹에 사용된 동물 수 n=6
떨림 계수
구 분 떨림계수 5 분 떨림계수 15 분 떨림계수 30 분 떨림계수 45 분
컨트롤 군, 옥소트레모린 만 n = 6 3.0 2.8 2.7 2.6
시험 화합물 군, 30 mg/kg 및 옥소트레모린 n = 6 2.7 2.6 2.5 2.5
시험 화합물 군, 100 mg/kg 및 옥소트레모린 n = 6 1.6 1.6 1.8 1.9
시험 화합물 군, 200 mg/kg 및 옥소트레모린 n = 6 1.6 1.6 1.7 1.6
양성 컨트롤 아트로핀 5 mg/kg 및 옥소트레모린 n = 6 0.9 0.9 1.0 1.3
시험 화합물은 100 mg/kg 와 200 mg/kg 투약 시에 떨림 계수가 줄어드는 중대한 활성을 나타냈고, 이 활성이 일관되고 45분까지 지속되었다. 30 mg/kg 투약 시에는 상기 활성이 낮았다. 양성 컨트롤 아트로핀은 상기 시험 활성을 지니지만, 시간이 경과하면서 줄어든다. 이와 같이 시험 약물이 온화한 항콜린성 활성으로 파킨슨 증후군을 역전시키고 있다.
타액 과다분비 및 낙루 계수
구 분 30 분에서 타액 과다분비 계수 30분에서 낙루 계수
컨트롤 군, 옥소트레모린 만 n = 6 3.0 2.9
시험 화합물, 30 mg/kg 2.5 2.6
시험 화합물, 100 mg/kg 1.6 1.7
아트로핀 0.8 0.6
시험 화합물은 타액 과다분비 계수에서 감소증상을 나타냈다. 하지만, 아트로핀 만큼 강력하지는 않아서, 온화한 항콜린성 효과 정도를 보여주었다. 낙루 또한 줄어들었다. 하지만, 아트로핀 만큼 강력하지는 않았다.
아트로핀 1mg/kg과 상기 시험 약물 100, 200 및 400 mg/Kg는 떨림 강도에서 상당한 감소의 원인이 되고 (도 2), 30 mg/kg에서는 그다지 효과가 크지 않다. 상기 약물은 30분 시점에 최대 효과를 보여주며, 45분 경과시 역전되기 시작한다. 이 와 같이 상기 시험 약물은 매우 높은 투약량일 때 항콜린성 특성을 갖는다.
실시예 8: 6-하이드록시도파민(6-Hydroxydopamine) 모델
6-하이드록시도파민(6-OHDA)는 일종의 신경독소로, 도파민성 흑질선조체 경로의 일방에 손상을 일으켜서, 손상된 면의 선조체에서 시냅스 후 도파민 수용체의 과민증을 유도한다. 손상된 부위 쪽(동측)으로 마우스가 회전하는 암페타민 같은 간접 작용 화합물을, 반대측으로 회전하도록 야기하는 직접 작용 도파민성 약물이 투여될 때와 반대측에 투여한다. 따라서, 이 시험은 중추 도파민 기능과, 도파민 길항제와 작용제 평가, 특히 신규한 항-파킨슨증 약물 활성에 대한 연구에 이용 가능하다. 상기 시험으로 도파민 수용체 작용제 활성을 우세하게 보유한 약물을 상기 약물의 도파민 방출 활성을 우세하게 보유한 약물과 명백하게 구별짓는다.
과정: 수술 시에 체중이 200 내지 250g인 수컷 위스타(Wistar) 마우스를 사용하였으며, 음식과 물에 자유 접근이 가능하도록 조절된 환경 속에 각각 수용시킨다. 상기 동물들을 펜토바비탈나트륨(sodium pentobarbital)으로 마취시킨다. 머리를 정위 장치(stereotaxic device)(DKI 900)에 놓고, 코니그와 클리펠(Konig and Klippel) 방법에 따라 위치시킨다. 두개골의 피부에 시상 컷을 내고 나서, 전기 천공기로 2mm 너비의 구멍을 낸다. 뇌수막을 손상시키지 않도록 주의한다. 해밀턴 주사기에 연결된 30 게이지 스테인리스스틸 캐뉼라를 흑색질의 앞쪽 치밀부분(anterior zona compacta)에 겨눈다 (영점에서 전면 1.88mm, 후면 2.0mm, 후복부면 -8.2mm 구성). 염 4γ/L 내 총 8 ㎍ 6-HAD 을 1 γ/L/min 속도로 주입한다. 상 기 경두개내 주사(intra-cranial injection) 후에, 상처부위를 덮는다.
상기 동물에 수 주간의 상처 회복 및 진전시간을 갖도록 한다. 고상의 프로그래밍 장비에 부착된 특별히 구성한 불투명 플라스틱 구가 시험 챔버 역할을 한다. 상기 상기 상처와 동측이든 반대측이든 상관없이, 한 바퀴 완전 회전의 개수가 1 내지 2 시간 시험 기간 동안 매 15분마다 자동 출력카운터 위에 기록된다. 동측 회전의 컨트롤 값을 정하기 위해, 각각의 환자에 d 암페타민 2.5 mg/kg을 투여하고, 즉시 회전 챔버에 2시간 동안 놓아둔다. 반대측 회전의 컨트롤 값은 아포모르핀을 1 mg/kg s.c. 주사하고 1시간 동안 쥐의 회전을 기록해서 결정한다. 시험 화합물들은 i.p 또는sc.로 투여한다. 그리고, 동물들을 회전 챔버에 놓는다. 1시간에 걸쳐서 회전 동작을 기록한다. 30마리 동물에 대해 이 실험을 진행하고, 그 평균을 표에 나타낸다.
약물 & 투약량 반대측 회전 동측 회전
증류수 1 0.33
시험 약물 (10 mg/kg) 0.67 5.33
시험 약물 (30 mg/kg) 0.83 30.67
시험 약물 (100 mg/kg) 0.35 10.4
아포모르핀 (0.3 mg/kg) 169.33 0.67
L-Dopa (10 mg/kg) 45.67 0.83
시험 약물은 30 mg /kg (P<0.001) 및 10mg/kg (P<0.05)에서 동측 회전을 상당히 유도했다. 이 시험은 도파민 고갈 및 결과적으로 파킨슨 병을 흉내낸다. 항-파킨슨 화합물이 반대측 또는 동측 회전을 보일 수 있다. 암페타민 같은 약물은 동측 회전을 유도한다. 반면 L-Dopa, 아포모르핀, 브로모크립틴 같은 약물은 반대측 회전을 유도한다. Selgiline 같은 모노아민 옥시다아제 B(Monoamine Oxidase B) 억제자는 동측 회전을 유도한다. COMT 억제자는 반대측 회전을 유도한다.
상기 시험 약물은 암페타민 또는 모노아민 옥시다아제 (MAO-B) 억제자처럼 행동한다. 이와 같이 상기 시험 약물은 컨트롤과 비교할 만큼 중대한 도파민 방출 특성을 가질 수도 있다.
이 모델은 화합물이 도파민 화합물인지, 도파민 수용체 상에서 작용하는 화합물인지 결정하기 위해 중요하다. 상기 시험 화합물의 동측 회전이 그 도파민 활성을 보여준다. 반대측 회전을 나타내는 현존하는 약물 군과 달리, 상기 시험 화합물은 도파민제이고, 수용체 작용제가 아니다.
이 실험은 상기 시험 약물의 독점적인 도파민 활성을 제공한다. 따라서 이 도파민 화합물은 도파민 수치 증가와 연관된 적용을 발견할 수 있다. 증가된 도파민 수치는 프로락틴 수치에 억제적 영향을 갖는다. 증가된 프로락틴 수치는 PCOS와 불임의 원인 중 하나이다. 이러한 도파민 화합물이 도파민 수치를 증가시킴으로써 프로락틴 수치를 억제한다.
이 도파민 화합물은 또한 근육 이완 등의 적용을 발견한다.
실시예 9: MPTP 처리 마우스에서 시험 약물의 효과 시험
이 시험은 MPTP(메틸 페닐 테트라피리딘) 처리 마우스에서 MPTP가 먼저 처리되고 시험약물이 나중 처리되는 경우의 운동 활성에 미치는 효과를 결정한다.
MPTP가 조직 경로에 투여될 때, 일시적 도파민 시스템 기능손상을 일으킨다. 이 시험은 신경촉진 치료제 및 신경보호 치료제 효과뿐만 아니라, 신경퇴행 경로의 병리생리기전을 결정하도록 도와준다.
MPTP는 마우스의 운동 활성을 상당히 감퇴시킨다. 시험 약물의 효율성은 MPTP 처리 마우스에서의 운동 활성의 백분율 증가에 기초하여 측정된다.
상기 운동 활성은 하기와 같이 측정된다:
1. 수의적 운동 활성
처리 평균 ± SEM 증가%
미처리 868.166±17.377 -
MPTP 290.166±18.679### -
시험 약물 (사전): 예방적 564.166±24.106*** 94.43%
시험 약물 (사후): 치료적 280.500±23.891 ns -3.33%
마우스를 시험 약물로 사전 처리한 경우 MPTP 효과를 상당하게 감소시켰다. 상기 사전 처리의 경우에 양호한 결과를 나타냈지만, 마우스를 시험 약물 처리, MPTP 사후 처리한 경우에는 운동 활성에서 증가를 나타내지 않았다.
2. 개방필드에서의 표시된 구역의 수
처리 평균 ± SEM 증가%
미처리 465.500±18.005 -
MPTP 122.333±8.151### -
시험 약물 (사전): 예방적 250.166±12.908*** 104.49%
시험 약물 (사후): 치료적 143.166±12.475 ns 17.03 %
시험 약물로 사전 처리한 경우 마우스에 의해 표시된 구역의 수를 상당히 감소시켰다. 반면, 시험 약물로 사후 처리한 경우에는 매우 중대한 증가를 나타내지 않았다.
3. 개방필드에서의 총 이동거리
처리 평균±SEM 증가%
미처리 698.250±27.008 -
MPTP 183.500± 12.227 ### -
시험 약물 (사전): 예방적 375.250± 19.363 *** 104.49%
시험 약물 (사후): 치료적 214.750± 18.713 ns 17.03 %
시험 약물로 사전 처리한 경우 마우스에 의해 이동한 거리를 상당히 감소시켰다. 반면, 시험 약물로 사후 처리한 경우에는 매우 중대한 증가를 나타내지 않았다.
4. 개방필드에서의 총 이동시간
처리 평균 ± SEM 증가%
미처리 233.420± 7.322 -
MPTP 217.330± 8.979 -
시험 약물 (사전): 예방적 235.350± 9.001 8.29 %
시험 약물 (사후): 치료적 242.790± 13.503 11.71 %
MPTP 처리 마우스에 시험 약물을 사전/사후 처리한 동안 아무런 중요한 시간 변화가 관찰되지 않았다.
5. 개방필드에서의 평균 속도
처리 평균 ± SEM 증가%
미처리 2.999± 0.124 -
MPTPMPTP 0.846± 0.051 -
시험 약물 (사전): 예방적 1.595± 0.059*** 88.53%
시험 약물 (사후): 치료적 0.890± 0.079 ns 5.2 %
시험 약물로 사전 처리한 경우 마우스의 평균속도를 상당하게 증가시켰다. 반면, 사후 처리한 경우에는 아무런 속도 증가를 나타내지 않았다.
이와 같이 상기 실험에 의해서, 상기 언급한 과정으로 준비한 조성물이 강력 한 도파민 활성을 가지며, MAO 억제자임이 관찰된다. 상기 약물을 최적량 복용시, 매우 높은 복용량에서 나타나는 항-콜린성 활성을 나타내지 않는다.
실시예 10: 티라민 상승에 미치는 시험 약물의 효과
비-선택적 MAO 억제자들은 신경정신병학적 약물로 사용시 티라민 상승이라 불리는 조건을 야기시킨다. 티라민은 아미노산으로, 모노 아민 노르아드레날린의 전구체이다. 모노아민 옥시다아제-A(MAO-A)는 티라민이 노르아드레날린으로 전환되는 것을 막는다. 이와 같이 MAO-A 억제자처럼 작용하는 약물의 존재 하에서는, 노르아드레날린 수치가 높다. 치즈, 와인 등의 대부분의 가공 식품이 높은 티라민 백분율을 갖는다. 따라서 이들과 같은 식품이 MAO-A 억제자를 소비하는 환자에 의해 섭취되면, 티라민 수치가 갑자기 폭증하게 되고, 이어서 노르아드레날린 수치 또한 증가하게 된다. 이러한 노르아드레날린 수치의 급증이 혈압을 증가시키고, 치명적인 결과를 가져올 수 있다.
티라민 상승 시험은 MAO-A/B에 대한 시험 약물의 선택성을 결정하기 위해 진행된다. 이 시험의 정확한 결정을 위해, 정밀하고 지속적인 약물 환경 속에서 연구가 진행되었다.
정밀 연구:
정밀 연구에서는, 수컷 위스타 쥐 (n=5)를 사용하였고, 우레탄 용액(1.25 g/kg, i.p.)을 주입해서 마취시켰다. 체온을 37oC로 유지키시고, 기관지를 침습해서 기로(airway)를 유지한다. 혈압 모니터링 및 약물 투여 각각을 위해서, (혈압) 장비를 좌측 경동맥과 경정맥에 카눌라 속에 삽입하였다. 동맥 카테터를 변압기에 연결하여, 4개 채널 생리학적 기록계를 이용해서 혈압을 측정하였다. 티라민 (5mg/kg i.v.)에 대한 시험 약물(30 mg/kg p.o.)의 영향을 기록하였다 (도 3).
연구는 3 그룹으로 실시된다:
1 그룹: 일반
2 그룹: 티라민 + 시험 약물
3 그룹: 티라민 단독
지속 연구:
수컷 위스타 쥐 (n=5)를 사용하였고, 1달간 시험 약물 (30mg/kg p.o.)을 투여했다. 체온을 37oC로 유지키시고, 기관지를 침습해서 기로(airway)를 유지한다. 혈압 모니터링 및 약물 투여 각각을 위해서, 장비를 좌측 경동맥과 경정맥에 카눌라 속에 삽입하였다. 동맥 카테터를 변압기에 연결하여, 4개 채널 생리학적 기록계를 이용해서 혈압을 측정하였다. 티라민 (5mg/kg i.v.)에 대한 시험 약물(30 mg/kg p.o.)의 영향을 기록하였다 (도 4).
연구는 3 그룹으로 실시된다:
1 그룹: 일반
2 그룹: 티라민 + 시험 약물
3 그룹: 티라민 단독
상기 정밀연구 및 지속연구 모두에서, 상기 시험 약물은 혈압상승을 나타내지 않았으며, 이들이 MAO-A 억제자가 아님을 입증하였다. 티라민은 혈압에서 약간의 상승을 일으키며, 현존하는 MAOI 그룹은 일반적으로 혈압을 상당히 증가시킨다 (티라민 상승작용).
이와 같이 시험 약물은 MAO-B 억제자인 것으로 간주되며, 티라민 상승작용을 야기하지 않으며, 식품과 함께 음식으로 섭취된 티라민과 상호작용하지 않는다. 이것이 현존하는 약물 군에 대해 시험 약물의 중대한 이점이다.
실시예 11: 시험 약물의 효소 실험 평가
이 실험에 대한 억제 곡선이 도 5에 나타나 있다. 이 효소 실험은 하기 참조에 따라 수행되었다.
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이 실험은 모노아민 옥시다아제 효소의 억제에 있어서 시험 약물 조성물 F-1의 능력을 측정한다. MAO류는 모노아민의 산화를 촉진하는 효소이다. 인간의 경우, 두 가지 종류의 MAO류, 즉 MAO A 및 MAO B가 있다. 이들 두 효소 모두 CNS 외부뿐만 아니라, 뉴런과 astroglia에서 발견된다. 상기 CNS 외부에서, MAO류는 하기에서 발견된다:
MAO-A: 간, 위장, 태반
MAO-B: 혈소판
MAO류 모두는 또한 모노아민류 신경전달물질의 불활성화에 필수적이며, 다양한 특성을 발현한다.
＊ MAO-A: 세로토닌, 노르에피네프린 (노르아드레날린) 및 에피네프린(아드레날린) 분해.
?＊ MAO-B: 펜에틸아민 분해.
MAO류의 두 형태 모두 도파민을 분해한다.
현존하는 MAO 억제자 군은 치즈, 피클 식품, 초콜렛, 맥주, 와인 및 특정 육류처럼 높은 티라민 수치를 갖는 식품류와 상호작용하는 것이 일반적이다. 티라민과 MAOI류의 상호작용은 혈압을 위험할 정도로 상승시키며, 졸도에 이를 수 있다.
시험 화합물에 의해 MAO-B의 선택적 억제를 나타내는 반응곡선이 도 5에 나타나 있다. 이 그래프는 파킨슨병을 포함하는 도파민 관련 질환을 치료하는 데에 매우 유용한 시험 약물에 의해 MAO-B를 억제하는 것을 보여준다.
실시예 10에서 실시된 티라민 상승 실험으로 시험 약물이 혈압 상승 효과를 갖지 않아서, 그것을 필요로 하는 환자에게 사용하기에 안전하다는 것을 보여준다.
실시예 12:
인간 투여 목적
1) 파킨슨병 관리의 치료 용도 목적, 매일 1회에 0.5 mg/kg 내지 20mg/kg 또는 1일 3회분으로 분쇄하여 투여.
2) 성욕 감퇴 및 성기능 저하에 연관된 프로락틴 수치 감소 측면에서 치료 목적, 매일 1회에 체중의 0.5 mg/ kg 내지 25mg/kg 투여 또는 1일 3회분으로 분쇄하여 투여 추천함.
3) 수유모의 젖분비 중지 위한 치료 목적, 매일 체중의 0.5mg/kg 내지 20mg/kg 투여.
4) 운동 생리기전에서 근육 이완 목적, 매일 체중의 0.25mg/kg 내지 17mg/kg 투여 추천함.
5) 정신 주의력 및 성취감 강화 목적, 매일 체중의 0.25mg/kg 내지 15mg/kg 투여 추천함.

Claims (31)

  1. 도파민 활성 및 기타 관련 약제학적 활성을 가지며, 트리고넬린 또는 그 유도체(들) 및 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들), 선택적으로 부형제(들)을 포함하는, 약제학적 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 트리고넬린 또는 그 유도체(들)의 농도는 30% 내지 90% 범위이고, 상기 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들)의 농도는 10% 내지 30% 범위인, 약제학적 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 트리고넬린은 식물이나 동물 공급원으로부터 획득되는, 약제학적 조성물.
  4. 제 1 항에 있어서,
    상기 트리고넬린은 트리고넬라 포이넘 그라쿰(Trigonella foenum graecum) 및 커피 아라비카(Coffee arabica)로부터 획득되는, 약제학적 조성물.
  5. 제 1 항에 있어서,
    트리고넬린의 상기 유도체(들)는 염화수소 유도체, 아세트산 유도체, 시트르산 유도체, 벤조산 유도체, 염 유도체 및 산 유도체를 포함하는 군, 바람직하게는 염화수소 유도체로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
  6. 제 1 항에 있어서,
    상기 4-하이드록시이소류신은 식물 공급원, 바람직하게는 트리고넬라 포이넘 그라쿰(Trigonella foenum graecum) 에서 획득되는, 약제학적 조성물.
  7. 제 1 항에 있어서,
    4-하이드록시이소류신의 상기 유도체(들)는 염화수소 유도체, 아세트산 유도체, 시트르산 유도체, 벤조산 유도체, 염 유도체 및 산 유도체를 포함하는 군, 바람직하게는 염화수소 유도체로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
  8. 제 1 항에 있어서,
    상기 부형제(들)는 과립화제, 결합제, 윤활제, 붕괴제, 감미제, 유동화제, 항고착제, 정전기 방지제, 계면활성제, 항산화제, 점성물질, 코팅제, 착색제, 풍미제, 가소제, 보존제, 현탁제, 유화제 및 구형 과립화제를 포함하는 군으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
  9. 제 1 항에 있어서,
    상기 조성물은 정제, 트로키, 당의정, 수성 또는 유성 현탁제, 연고, 패치, 겔, 로션, 치약, 캡슐, 에멀션, 크림, 분무제, 점적액, 분산성 분말 또는 과립, 경질 또는 연질 겔 캡슐 중의 에멀션, 시럽, 엘릭시르제, 파이토슈티칼(phytoceutical), 기능식품 및 음식물을 포함하는 군으로부터 선택된 단위용량 형태로 제형되는, 약제학적 조성물.
  10. 제 1 항에 있어서,
    상기 기타 관련 약제학적 활성은 프로락틴 억제, 근육 이완, 카테콜아민 전구체 작용 및 성기능 저하 및 항정신성 약물에 의한 부작용 경감을 포함하는 군으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
  11. 트리고넬린 또는 그 유도체(들) 및 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들), 선택적으로 부형제(들)를 포함하는, 약제학적 조성물을 제조하는 방법으로서, 여기서 상기 공정은
    i. 트리고넬린 및 4-하이드록시이소류신을 함유하는 투명한 용액을 식물 공급원으로부터 추출하는 단계; 및
    ii. 선택적으로 트리고넬린 및 4-하이드록시이소류신을 상기 투명한 용액으로부터 침전시키고, 상기 조성물을 획득하는 단계를 포함하는, 약제학적 조성물 제조 방법.
  12. 제 11 항에 있어서,
    상기 트리고넬린 또는 그 유도체(들)의 농도는 30% 내지 90% 범위이고, 상기 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들)의 농도는 10% 내지 30% 범위인, 방법.
  13. 제 11 항에 있어서,
    상기 부형제(들)는 과립화제, 결합제, 윤활제, 붕괴제, 감미제, 유동화제, 항고착제, 정전기 방지제, 계면활성제, 항산화제, 점성물질, 코팅제, 착색제, 풍미제, 가소제, 보존제, 현탁제, 유화제 및 구형 과립화제를 포함하는 군으로부터 선택되는, 방법.
  14. 제 11 항에 있어서,
    상기 유도체(들)는 염화수소 유도체, 아세트산 유도체, 시트르산 유도체, 벤조산 유도체, 염 유도체 및 산 유도체를 포함하는 군, 바람직하게는 염화수소 유도체로부터 선택되는, 방법.
  15. 제 11 항에 있어서,
    상기 투명한 용액은 식물 트리고넬라 포이넘 그라쿰(Trigonella foenum graecum) 및/또는 커피 아라비카(Coffee arabica)로부터 추출하고,
    a) 트리고넬라(Trigonella) 및/또는 커피 아라비카(Coffee arabica) 종자를 분쇄하는 단계;
    b) 헥산 용매를 사용하여 분쇄된 트리고넬라 종자를 탈지시키는 단계;
    c) 지방족 알코올과 물의 용매 혼합액을 상기 분쇄된 종자에 통과시켜, 트리고넬린과 아미노산을 함유하는 용매를 추출하는 단계;
    d) 상기 용매를 진공 농축시켜 반고형물을 얻는 단계; 및
    e) 상기 반고형물을 탈이온수에 녹여서, 투명한 용액을 얻는 단계;
    f) 상기 (e) 단계의 투명한 용액을 이온교환 수지 칼럼에 통과시켜, 상기 아미노산과 상기 트리고넬린을 보유시키는 단계;
    g) 상기 칼럼을 용출시키고, 상기 용출액을 농축시켜 결과물을 얻는 단계;
    h) 상기 결과물의 투명한 용액을 건조시켜, 자유 흐름 분말을 얻는 단계; 및
    i) 상기 분말을 용매에 녹여 트리고넬린과 아미노산을 함유하는 상기 투명한 용액을 얻는 단계를 포함하는, 방법.
  16. 제 15 항에 있어서,
    상기 종자는 바람직하게는 약 2mm 두께로 분쇄되는, 방법.
  17. 제 15 항에 있어서,
    상기 용매 혼합액은 지방족 알코올과 물을 1:9 내지 9:1, 바람직하게는 7:3 비율로 포함하는, 방법.
  18. 제 15 항에 있어서,
    상기 지방족 알코올은 에탄올인, 방법.
  19. 제 15 항에 있어서,
    상기 칼럼은 암모니아수 또는 암모니아 알코올 용액으로 용출되는, 방법.
  20. 제 15 항에 있어서,
    상기 용매는 헤테로고리형 방향족 화합물, 지방족 화합물, 케톤, 시안화물, 알코올, 니트릴, 에스테르, 에테르 및 그것들 중 하나 또는 그 이상의 혼합물을 포함하는 군으로부터 선택되는, 방법.
  21. 제 15 항에 있어서,
    상기 용매는 에탄올인, 방법.
  22. 제 15 항에 있어서,
    상기 농축은 40℃ 내지 80℃ 에서 실시되는, 방법.
  23. 제 15 항에 있어서,
    상기 아미노산은 4-하이드록시이소류신인, 방법.
  24. 트리고넬린 또는 그 유도체(들) 및 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체 (들), 선택적으로 부형제(들)을 포함하는, 약제학적 조성물을 그것이 필요한 환자에서 도파민 관련 질환을 관리하기 위한 의약 제조에 이용하는 방법.
  25. 제 24 항에 있어서,
    상기 환자는 인간을 포함하는 동물인, 방법.
  26. 트리고넬린 또는 그 유도체(들) 및 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들), 선택적으로 부형제(들)을 포함하는, 약제학적 조성물을 그것이 필요한 환자에서 프로락틴에 의해 야기된 나쁜 효과를 관리하기 위한 의약 제조에 이용하는 방법.
  27. 제 26 항에 있어서,
    상기 프로락틴에 의해 야기된 나쁜 효과는 불임, 다낭난소증후군 및 젖 분비 증가를 포함하는 군으로부터 선택되는, 방법.
  28. 제 26 항에 있어서,
    상기 환자는 인간을 포함하는 동물인, 방법.
  29. 트리고넬린 또는 그 유도체(들) 및 4-하이드록시이소류신 또는 그 유도체(들), 선택적으로 부형제(들)을 포함하는, 약제학적 조성물을 그것이 필요한 환자 에서 도파민 수용체 길항제에 의해 야기된 부작용을 관리하기 위한 의약 제조에 이용하는 방법.
  30. 제 29 항에 있어서,
    상기 부작용은 도파민 수용체 길항제에 의한 도파민 수용체 차단으로 야기되는 동작 질환인, 방법.
  31. 제 29 항에 있어서,
    상기 환자는 인간을 포함하는 동물인, 방법.
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