CN111751473B - 益诺胶囊药效成分检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了益诺胶囊药效成分检测方法，包括如下步骤：对照品、供试样品制备；取步骤(1)制得的对照品、供试样品进行HPLC‑DAD分析，分析条件如下：SCX色谱柱，以磺酸基键和硅胶为填充剂，流动相：浓度为15mmol/L的磷酸二氢钾溶液和乙腈的混合物，按体积比来计，磷酸二氢钾溶液：乙腈＝80：20；流速：1.0ml/min；柱温：25～40℃；进样量：5μl；检测波长：192nm～400nm。本发明的优点包括：能够同时定量检测盐酸水苏碱、盐酸益母草碱、葫芦巴碱等生物碱。该方法具有快速、稳定、准确、重现性佳等优点。

Description

益诺胶囊药效成分检测方法
技术领域
本发明涉及一种物质成分检测技术领域，尤其涉及益诺胶囊有效成分检测技术。
背景技术
益诺胶囊，成分主要由益母草总碱组成，益母草总碱是使用先进的技术从益母草中提取的有效成分。其具有化瘀止血的功效，适用于药物流产后异常出血、剖宫产及阴道分娩后促进子宫复旧、防治产褥感染等，能有效解决人工流产后伴随着出血量多，出血时间长等一系列问题。为了获得深入研究益诺胶囊的药效物质基础，需要研究其化学成分并进一步提高产品的质量标准。
现有技术可以从益诺胶囊的中间体中分离并鉴定盐酸益母草碱、盐酸水苏碱、葫芦巴碱、氯化胆碱等生物碱，以上生物碱不仅对子宫活动具有调节作用，而且对心血管系统、抗血小板聚集等方面具有明显的生物活性，对其进一步的研究开发具有广阔的前景。然而由于这些成分的结构特殊性，对定量分析带来一定困难，限制了开发利用。
以往国内测定益母草制剂中总生物碱含量，常用雷氏盐比色法间接定量总生物碱。主要操作是：精密量取对照品溶液10ml，置25ml量瓶中；另精密量取供试品溶液20ml置25ml量瓶中(作为供试样品Ⅰ)；再取0.1mol/L盐酸溶液20ml，置25ml量瓶中。在上述三个量瓶中，各精密加入临用新制的2％硫氰酸铬铵溶液3ml，摇匀，加0.1mol/L的盐酸溶液稀释至刻度，摇匀；再精密量取供试品溶液20ml，置25ml量瓶中(作为供试样品Ⅱ)，加0.1mol/L的盐酸溶液稀释至刻度，摇匀；将上述四个量瓶置冰水浴中放置1小时，用干燥滤纸滤过，取续滤液，以0.1mol/L盐酸溶液为空白，照“紫外分光光度法操作规程”在520nm的波长处分别测定吸收度，全部操作应在30分钟内完成。然而复杂的前处理引入了许多影响定量分析的因素，所以重现性差。且紫外分光光度法受到检测器影响，无法对益诺胶囊中具体的药效成分(如盐酸益母草碱、盐酸盐酸水苏碱、葫芦巴碱)定量。
因此研发一种稳定的能够同时对益诺胶囊中多种药效成分进行定量分析的方法，是具有重大意义的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种益诺胶囊药效成分检测方法，以解决现有技术中对益诺胶囊药效成分检测分析受较大影响，导致定量分析受影响，重现性差的问题。
为了达到上述目的本发明采用如下技术方案：
益诺胶囊药效成分检测方法，包括如下步骤：
(1)对照品、供试样品制备；
(2)取步骤(1)制得的供试样品进行HPLC-DAD分析，分析条件如下：
SCX色谱柱，以磺酸基键和硅胶为填充剂；
流动相：磷酸二氢钾溶液和乙腈混合物；
流速：1.0ml/min；
柱温：25～40℃；
进样量：5μl；
检测波长：192nm～400nm。
进一步地，所述SCX色谱柱size:250×4.6mm,5μm,SCX。
进一步地，所述步骤(1)供试样品的制备方法包括如下步骤：取益诺胶囊0.2g，研细，精密称定重量1，置具塞锥形瓶中，精密加乙醇100ml，称定重量2，超声处理45分钟，超声功率为250W，频率为40kHz，放冷，再称定重量3，用乙醇补足重量3与重量2相比减失的重量，摇匀，趁热过滤，将滤液全部干燥后，加流动相溶解，转移至5mL量瓶中，并继续加入流动相稀释至刻度，摇匀，用0.22μm滤膜滤过，取续滤液，即得供试品。
进一步地，所述步骤(1)对照品的制备方法包括以下步骤：分别取盐酸水苏碱标准品、盐酸益母草碱标准品、葫芦巴碱标准品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成浓度分别为0.25mg/ml、0.04mg/ml、0.25mg/ml的混合溶液，即得。
进一步地，流动相是浓度为15mmol/L的磷酸二氢钾溶液和乙腈的混合物。
进一步地，所述流动相，按体积计，磷酸二氢钾溶液:乙腈＝80：20。
进一步地，所述磷酸二氢钾溶液含有质量分数为0.04％三乙胺和质量分数为0.15％磷酸。
进一步地，所述乙醇是体积分数为95％乙醇。
进一步地，所述供试样品中盐酸水苏碱、葫芦巴碱的检测波长均为192nm。
进一步地，所述供试样品中盐酸益母草碱的检测波长为277nm。
本发明的优点包括：前处理避免引入许多影响定量分析的因素，能够同时定量检测盐酸水苏碱、盐酸益母草碱、葫芦巴碱等生物碱。该方法具有快速、稳定、准确、重现性好等优点。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本申请的一部分，并不构成对本发明的不当限定，在附图中：
图1是盐酸益母草碱图谱；
图2是盐酸水苏碱、葫芦巴碱图谱。
具体实施方式
下面将结合附图以及具体实施例来详细说明本发明，在此以本发明的示意性实施例及说明用来解释本发明，但并不作为对本发明的限定。
实施例一
(1)准备对照品：分别取盐酸水苏碱标准品、盐酸益母草碱标准品、葫芦巴碱标准品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成浓度分别为0.25mg/ml、0.04mg/ml、0.25mg/ml的混合溶液，即得；
(2)供试品制备：取益诺胶囊0.2g，研细，精密称定重量1，置具塞锥形瓶中，精密加体积分数为95％的乙醇100ml，称定重量2，超声处理45分钟，超声功率为250W，频率为40kHz，放冷，再称定重量3，用体积分数为95％的乙醇补足重量3与重量2相比减失的重量，摇匀，趁热过滤，将滤液全部干燥后，加流动相溶解，转移至5mL量瓶中，并继续加入流动相稀释至刻度，摇匀，用0.22μm滤膜滤过，取续滤液，即得供试品。
流动相采用浓度为15mmol/L的磷酸二氢钾溶液和乙腈的混合物，按体积比来计，磷酸二氢钾溶液：乙腈＝80：20，磷酸二氢钾溶液中含有质量分数为0.04％三乙胺和质量分数为0.15％磷酸。
取对照品、供试样品进行HPLC-DAD分析，分析条件如下：
SCX色谱柱，以磺酸基键和硅胶为填充剂，size:250×4.6mm,5μm,SCX；
流动相：浓度为15mmol/L的磷酸二氢钾溶液和乙腈的混合物，按体积比来计，磷酸二氢钾溶液：乙腈＝80：20，磷酸二氢钾溶液中含有质量分数为0.04％三乙胺和质量分数为0.15％磷酸；
流速：1.0ml/min；
柱温：40℃；
进样量：5μl；
检测波长：192nm～400nm。
检测波长采用277nm时，得到图谱如图1所示，检测波长采用192nm时，得到图谱如图2所示，通过液相分析，与标准品比对保留时间和紫外特征图谱，确定了图1中显示的化学成分为：盐酸益母草碱；图2中显示的化学成分分别为盐酸水苏碱、葫芦巴碱。
本发明是采用外标法，初步含量测定含盐酸益母草碱0.065％；盐酸水苏碱21.62％；葫芦巴碱1.33％；
除了上述实施例采用的40℃柱温情况下，本发明还分别在未打开柱温箱、30℃、35℃的不同温度条件下分别对样品分析，结果相差不大。说明目标物质在上述其他色谱条件下，对温度没有严苛的要求。
本发明考虑益诺胶囊的化学成分特点，从分析的色谱柱、流动相入手：SCX色谱柱能够克服生物碱结构中碱性氮原子和固定相中酸性硅醇基的相互作用，流动相加入适量乙腈改变流动相的极性，实现使用HPLC-DAD同时定量检测盐酸水苏碱、盐酸益母草碱、葫芦巴碱等生物碱。该方法具有快速、稳定、准确等优点，以及用HPLC的手段同时定量极性不同的多种生物碱。
以上对本发明实施例所提供的技术方案进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明实施例的原理以及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只适用于帮助理解本发明实施例的原理；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明实施例，在具体实施方式以及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。

Claims (5)

1.益诺胶囊药效成分检测方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）对照品、供试样品制备，所述对照品为盐酸水苏碱标准品、盐酸益母草碱标准品、葫芦巴碱标准品；
（2）取步骤（1）制得的对照品、供试样品进行HPLC-DAD分析，分析条件如下：
SCX色谱柱，以磺酸基键合 硅胶为填充剂；
流动相：浓度为15 mmol/L的磷酸二氢钾溶液和乙腈混合物，按体积计，磷酸二氢钾溶液：乙腈 = 80 ：20；所述磷酸二氢钾溶液含有质量分数为0.04%三乙胺和质量分数为0.15%磷酸；
流速：1.0 ml/min；
柱温：25~40℃；
进样量：5 μl；
检测波长：192 nm或277nm。
2.根据权利要求1所述的益诺胶囊药效成分检测方法，其特征在于：
所述SCX色谱柱size: 250 × 4.6 mm, 5 µm, SCX。
3.根据权利要求1所述的益诺胶囊药效成分检测方法，其特征在于：
所述步骤（1）供试样品的制备方法包括如下步骤：取益诺胶囊0.2 g，研细，精密称定重量1，置具塞锥形瓶中，精密加乙醇100 ml，称定重量2，超声处理45分钟，超声功率为250 W，频率为40 kHz，放冷，再称定重量3，用乙醇补足重量3与重量2相比减失的重量，摇匀，趁热过滤，将滤液全部干燥后，加流动相溶解，转移至5mL量瓶中，并继续加入流动相稀释至刻度，摇匀，用0.22μm滤膜滤过，取续滤液，即得供试品。
4.根据权利要求1或3所述的益诺胶囊药效成分检测方法，其特征在于：
所述步骤（1）对照品的制备方法包括以下步骤：分别取盐酸水苏碱标准品、盐酸益母草碱标准品、葫芦巴碱标准品精密称定，用流动相溶解并稀释制成浓度分别为0.25mg/ml、0.04mg/ml、0.25mg/ml的混合溶液。
5.根据权利要求3所述的益诺胶囊药效成分检测方法，其特征在于：
所述乙醇是体积分数为95%乙醇。
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