CN100554956C - 一种丹参酮ⅱa磺酸钠的高效液相分析方法 - Google Patents

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Abstract

本发明为一种丹参酮IIA磺酸钠的高效液相分析方法，该方法采用反相色谱梯度洗脱法，在0分钟～8至20分钟时，有机相和水相比例为0～80∶20～40，在8至20分钟～20至40分钟时，有机相和水相为为80～95∶5～20。本方法可把丹参酮IIA磺酸钠中的丹参酮IIA、丹参酮I磺酸钠及其它有关物质同时检出，解决了一般液相分析的不足，能全面有效的控制丹参酮IIA磺酸钠原料及制剂的质量，快速、便捷的检测出丹参酮IIA磺酸钠原料及制剂的有关物质。

Description

一种丹参酮ⅡA磺酸钠的高效液相分析方法
技术领域
本发明涉及一种丹参酮IIA磺酸钠的高效液相分析方法，对该药物的有关物质控制及药物质量标准的提高具有很好的作用，属于医药技术领域。
背景技术
丹参为唇型科植物丹参的干燥根及根茎，具有祛瘀止血、活血调经、清心除烦的功效，活血化瘀的常用中药，其有效成分为脂溶性的二萜化合物和水溶性的酚酸类化合物。中医有“一味丹参饮，功同四物汤”之说，其功效可见一斑。丹参是广泛应用于心血管等中药复方中，以丹参为主要的中药制剂开发也相当活跃。
脂溶性丹参酮中主要有丹参酮IIA、隐丹参酮、丹参酮I、去氢丹参酮I等成分。上世纪60年代，Kakisawa确定了丹参酮IIA的结构式；随后，Baidlre等人合成了丹参酮IIA。由于丹参酮IIA肠道吸收差，临床起效慢，故植物化学家钱名坤等人半合成了丹参酮IIA磺酸钠，并由上海制药一厂、中药三厂等制备成注射液。注射液推向市场后，其确切的疗效得到广大医患者的欢迎.。
丹参酮IIA磺酸钠原料及丹参酮IIA磺酸钠注射液上市后的质量标准较为粗劣，有效控制有关物质的质量标准的方法低下。
丹参酮IIA磺酸钠有关物质的检查方法为薄层层析，原文如下：
取本品，加水制成每1ml中含有5mg的溶液，作为供试品溶液；另取丹参酮IIA对照品，加氯仿制成每1ml含有0.2mg的溶液，作为对照品溶液(1)；取丹参酮I磺酸钠对照品，加水制成每1ml含有0.2mg的溶液作为对照品溶液(2)；照薄层色谱法(中国药典2000年版二部附录VB)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(3∶1)为展开剂，展开后，晾干，置荧光灯下检视，供试品溶液除红色主斑点外，如显杂质斑点，与对照品溶液(1)、(2)比较均不得更深。
原料含量测定，采用紫外检测，原文如下：
取本品约25mg，精密称定，置250ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IVA)，在波长271nm处测定吸收度，按C19H17NaO6S的吸收度
Figure C20051009484300041
为767计算，即得。
丹参酮IIA磺酸钠注射液有关物质不控制，含量测定也采用紫外测定法，原文如下：
精密称取本品适量，用水稀释制成每1ml中含丹参酮IIA磺酸钠5μg的溶液，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IVA)，在波长271nm处测定吸收度，按C19H17NaO6S的吸收系数
Figure C20051009484300042
为767计算，即得。
薄层分析法控制药品的有关物质，肉眼评判颜色深浅，精密度和灵敏度很差，而且检验发现丹参酮IIA磺酸钠和丹参酮I磺酸钠薄层上分离很差。含量测定原料和制剂均采用紫外测定法，杂质丹参酮I磺酸钠和丹参酮IIA和主药丹参酮IIA磺酸钠结构相近，其紫外吸收基团完全一样，专属性差，灵敏度低，精密度更无从谈起。
现在随着分析技术和设备的进步，丹参酮IIA磺酸钠原料销售商大都用高效液相分析方法控制含量，采用该含量测定的高效液相分析条件，丹参酮IIA不出峰，原质量标准中有关物质丹参酮IIA也有并应该加于控制，所以简单的采用该含量测定的高效液相分析条件不能有效的分析本品中所有的有关物质，应该采用其他办法。高效液相分析法对本品有关物质的控制也未见有任何报道。
发明内容
本发明是提供一种丹参酮IIA磺酸钠的高效液相分析方法，该方法体现是用一种流动相梯度洗脱的高效液相条件能更有效、科学、便捷的控制丹参酮IIA磺酸钠药物原料及制剂的有关物质，为本药物有关物质的质量标准的提高提供了一个有效的方法。
本发明的高效液相条件为：
分析柱：反相色谱柱，C18柱或C8柱等。
检测波长：271nm或228nm。
流速：0.5ml/min-1.5ml/min
本发明的高效液相流动相条件：有机相可以是甲醇或乙腈，水相可以是磷酸盐缓冲液或离子对试液；
水相磷酸缓冲盐为1～100mmol/L的磷酸盐溶液、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾，磷酸二氢铵等磷酸盐中的一种或几种，磷酸调PH值至2.5～4.0。
水相的离子对试剂溶液为1～100mmol/L的离子对试剂四丁基溴化铵、四甲基溴化铵。
梯度洗脱在0分钟～8至20分钟时，有机相和水相比例为0～80∶20～40，在8至20分钟～20至40分钟时，有机相和水相为为80～95∶5～20。
采用该液相色谱条件，能有效的分析出丹参酮IIA磺酸钠原料及制剂中的有关物质，原质量标准中丹参酮IIA、丹参酮I磺酸钠等有关物质均能在一张图谱上分析出，做到同时检出，所以该方法能更有效、科学、便捷的控制丹参酮IIA磺酸钠原料及制剂的质量。
具体实施例
实施例1丹参酮IIA磺酸钠原料及制剂的液相分析。
取本品原料或制剂适量，流动相配成0.5mg/ml的溶液，供测试。
分析柱：反相色谱柱，C18柱或C8柱等。
检测波长：271nm或228nm。
流速：0.5ml/min-1.5ml/min
高效液相流动相条件：有机相可以是甲醇或乙腈，水相可以是磷酸盐缓冲液或离子对试液；
水相磷酸缓冲盐为1～100mmol/L的磷酸盐溶液、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾，磷酸二氢铵等磷酸盐中的一种或几种，磷酸调PH值至2.5～4.0。
水相的离子对试剂溶液为1～100mmol/L的离子对试剂四丁基溴化铵、四甲基溴化铵。
梯度洗脱在0分钟～8至20分钟时，有机相和水相比例为0～80∶20～40，在8至20分钟～20至40分钟时，有机相和水相为为80～95∶5～20。
结果显示，丹参酮IIA磺酸钠原料及制剂原质量标准中丹参酮IIA、丹参酮I磺酸钠等有关物质均能在一张图谱上分析出。
实施例2原料丹参酮IIA磺酸钠有关物质专属性实验。
以流动相甲醇∶20mmol/l磷酸二氢钠溶液PH值3.5(70∶30)为溶剂，分别配制下列溶液：
①取相当于约5mg的丹参酮IIA磺酸钠原料，加1mol/L盐酸溶液1ml，放置2-3小时，加流动相稀释至10ml；
②取相当于约5mg的丹参酮IIA磺酸钠原料，加1mol/L氢氧化钠溶液1ml，放置2～3小时，加流动相稀释至10ml；
③取丹参酮IIA磺酸钠原料约5mg，加3％过氧化氢溶液1ml，放置2-3小时，加流动相稀释至10ml；
④取丹参酮IIA磺酸钠原料配制相当于0.5mg/ml的丹参酮IIA磺酸钠溶液在100℃放置1.5小时；
⑤取本品配制相当于0.5mg/ml的丹参酮IIA磺酸钠溶液在3000Lx光照条件下照射2小时；
⑥取本品配制相当于0.5mg/ml的丹参酮IIA磺酸钠溶液；
取上述过滤后溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，检测波长271nm，流速1ml/min，梯度洗脱，0～12分钟甲醇∶20mmol/l磷酸二氢钠溶液PH值3.5(70∶30)，12分钟～15分钟流动相从70∶30变为85∶15，15分钟～40分钟甲醇∶20mmol/l磷酸二氢钠溶液PH值3.5为85∶15，记录色谱图，并考察分离度。结果该色谱系统可将中的杂质和酸、碱、氧化、热、光、条件下的主要降解产物较好地分离，空白辅料没有干扰，在上述各图中丹参酮IIA磺酸钠制剂峰与相邻峰的分离度均大于2.0，丹参酮IIA也在32分钟左右出峰，表明该色谱系统的灵敏度、专属性良好。
实施例3丹参酮IIA磺酸钠原料有关物质的测定。
取三批丹参酮IIA磺酸钠原料，生产厂家上海紫源制药有限公司，精密称取适量(约相当于5mg)，置10ml量瓶中，加流动相约10ml，超声20分钟使丹参酮IIA磺酸钠原料溶解，再加流动相至刻度，摇匀，滤过。精密量取续滤液适量，用流动相稀释成每1ml含丹参酮IIA磺酸钠0.5mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，作为对照溶液；取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的高度约为满量程的20％。精密量取供试品溶液和对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，检测波长271nm，流速1ml/min，梯度洗脱，0～12分钟甲醇∶20mmol/l磷酸二氢钠溶液PH值3.5(70∶30)，12分钟～15分钟流动相从70∶30变为85∶15，15分钟～40分钟甲醇∶20mmol/l磷酸二氢钠溶液PH值3.5为85∶15，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。结果如下：
Figure C20051009484300071
实施例4丹参酮IIA磺酸钠注射液有关物质专属性实验。
以流动相甲醇∶20mmol/l磷酸二氢钠溶液PH值3.5(70∶30)为溶剂，分别配制下列溶液：
①取相当于约5mg的本品，加1mol/L盐酸溶液1ml，放置2-3小时，加流动相稀释至10ml；
②取相当于约5mg的本品，加1mol/L氢氧化钠溶液1ml，放置2-3小时，加流动相稀释至10ml；
③取相当于丹参酮IIA磺酸钠制剂约5mg，加3％过氧化氢溶液1ml，放置2-3小时，加流动相稀释至10ml；
④取本品配制相当于0.5mg/ml的丹参酮IIA磺酸钠溶液在100℃放置1.5小时；
⑤取本品配制相当于0.5mg/ml的丹参酮IIA磺酸钠溶液在3000Lx光照条件下照射2小时；
⑥取本品配制相当于0.5mg/ml的丹参酮IIA磺酸钠溶液；
取上述过滤后溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，检测波长271nm，流速1ml/min，梯度洗脱，0～12分钟甲醇∶20mmol/l磷酸二氢钠溶液PH值3.5(70∶30)，12分钟～15分钟流动相从70∶30变为85∶15，15分钟～40分钟甲醇∶20mmol/l磷酸二氢钠溶液PH值3.5为85∶15，记录色谱图，并考察分离度。结果该色谱系统可将中的杂质和酸、碱、氧化、热、光、条件下的主要降解产物较好地分离，空白辅料没有干扰，在上述各图中丹参酮IIA磺酸钠制剂峰与相邻峰的分离度均大于2.0，丹参酮IIA也在32分钟左右出峰，表明该色谱系统的灵敏度、专属性良好。
实施例5丹参酮IIA磺酸钠注射液有关物质的测定。
取三批丹参酮IIA磺酸钠注射液，生产厂家上海第一生化药业有限公司，精密量取适量(约相当于5mg)，置10ml量瓶中，加流动相约10ml，超声20分钟使丹参酮IIA磺酸钠原料溶解，再加流动相至刻度，摇匀，滤过。精密量取续滤液适量，用流动相稀释成每1ml含丹参酮IIA磺酸钠0.5mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，作为对照溶液；取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的高度约为满量程的20％。精密量取供试品溶液和对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，检测波长271nm，流速1ml/min，梯度洗脱，0～12分钟甲醇∶20mmol/l磷酸二氢钠溶液PH值3.5(70∶30)，12分钟～15分钟流动相从70∶30变为85∶15，15分钟～40分钟甲醇：20mmol/l磷酸二氢钠溶液PH值3.5为85∶15，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。结果如下：
Figure C20051009484300081

Claims (1)

1、一种丹参酮IIA磺酸钠的高效液相分析方法，色谱条件条件为反相色谱柱，检测波长为271nm或228nm，流动相流速为0.5ml/min～1.5ml/min，其特征是该方法采用高效液相色谱仪按反相色谱法进行梯度洗脱，流动相由有机相和水相混合而成，梯度洗脱的过程是：0～12分钟，流动相的有机相和水相比例为70∶30；12～15分钟流动相的有机相和水相比例从70∶30变为85∶15，15～40分钟流动相的有机相和水相比例为85∶15，其中流动相的有机相为甲醇或乙腈；流动相的水相为1～100mmol/L的磷酸二氢钠或磷酸氢二钠或磷酸二氢钾或磷酸氢二钾或磷酸二氢铵，磷酸调PH值至2.5～4.0；或流动相的水相为1～100mmol/L的四丁基溴化铵或四甲基溴化铵溶液。
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