CN104007216B - 心脑宁胶囊的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了心脑宁胶囊的检测方法，在现有质量标准的基础上增加薄层色谱法对薤白、小叶黄杨的定性鉴别和高效液相色谱对丹参中丹酚酸B的定量测定。该方法稳定可靠，专一性强，提高了对产品质量的控制。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药，特别涉及一种心脑宁胶囊的检测方法。
背景技术
心脑宁胶囊为一中药胶囊制剂，由银杏叶、小叶黄杨、丹参、大果木姜子、薤白构成，具有活血化气，通络止痛的作用。用于气滞血瘀的胸痹，头痛，眩晕，症见：胸闷刺痛，心悸不宁，头晕目眩等，以及冠心病、脑动脉硬化见上述症状者。
原质量标准中仅对银杏叶、丹参、大果木姜子做定性鉴别及对药品中的总黄酮醇苷含量进行测定，其不能很好的代表产品的质量。
发明内容
本发明提供一种心脑宁胶囊的检测方法，目的是解决现有技术问题，在原有质量标准的基础上增加了对薤白、小叶黄杨进行定性鉴别和利用高效液相色谱对丹参中丹酚酸B的定量测定，提高了产品质量。
本发明解决问题采用的技术方案是：
心脑宁胶囊的检测方法，利用薄层色谱法对薤白、小叶黄杨进行定性鉴别和利用高效液相色谱对丹参中丹酚酸B的定量测定。
对薤白的定性鉴别包括以下步骤：取本品内容物4.5g，加正己烷20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取薤白对照药材4g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2010年版一部附录VIB中薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯10:1.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
对小叶黄杨的定性鉴别包括以下步骤：取本品内容物6g，加5ml浓氨试液与50ml甲醇，摇匀，加热回流3小时；冷却，滤过，滤液蒸干，残渣加25ml水加热溶解，用氨水调节pH至9，用三氯甲烷提取3次，每次25ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加5ml三氯甲烷溶解，转移至100～200目、2g、内径1～1.5cm的中型氧化铝柱，用10ml甲醇:三氯甲烷6:4洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加1.5ml三氯甲烷溶解，即得供试品溶液。另取小叶黄杨对照药材1.5g，同法制成对照药材溶液；再取黄维黄杨星D对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品溶液，对照药材溶液各10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-氨水10:5:0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液和亚硝酸钠试液，晾干，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照药材溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
对丹参中丹酚酸B的定量测定包括以下步骤：照中国药典2010年版附录VID高效液相色谱法；
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-1.7％甲酸溶液(20:10:70)为流动相；检测波长为286nm；理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：精密称取丹酚酸B对照品，加水制成每1ml分别含60μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，精密称取0.3g于25ml量瓶中，加入水10ml，超声处理(功率150W，频率20kHz)15分钟，放冷，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定；本品每粒含丹参以丹酚酸B(C36H30O16)计，不得少于0.9mg。
本发明的有益效果：在原有质量标准的基础上增加了对薤白、小叶黄杨进行定性鉴别和利用高效液相色谱对丹参中丹酚酸B的定量测定，提高了产品质量。
附图说明
图1是心脑宁胶囊中薤白的TLC鉴别色谱一；
图2是心脑宁胶囊中薤白的TLC鉴别色谱二；
图3是心脑宁胶囊中薤白的TLC鉴别色谱三；
图4是心脑宁胶囊中薤白的TLC鉴别色谱四；
图5是心脑宁胶囊中小叶黄杨的TLC鉴别色谱一；
图6是心脑宁胶囊中小叶黄杨的TLC鉴别色谱二；
图7是心脑宁胶囊中小叶黄杨的TLC鉴别色谱三；
图8是心脑宁胶囊中小叶黄杨的TLC鉴别色谱四；
图9是心脑宁胶囊中小叶黄杨的TLC鉴别色谱五；
图10是心脑宁胶囊中小叶黄杨的TLC鉴别色谱六；
图11是心脑宁胶囊中小叶黄杨的TLC鉴别色谱七；
图12是丹酚酸B线性图。
具体实施方式
心脑宁胶囊
处方：银杏叶400g、小叶黄杨400g、丹参400g大果木姜子400g、薤白400g，制成1000粒胶囊，每粒产品0.45g。
针对增加的三个检测项目，分别做了如下的测定试验：
薤白鉴别
方法为：取本品内容物4.5g，加正己烷20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取薤白对照药材4g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(10:1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，阴性样品无干扰。故列入正文。
1.1.1专属性
以上述供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照溶液照薄层色谱法(中国药典2010年版附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液10μl，阴性对照溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(10:1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，阴性样品无干扰，专属性好。
1.1.2重现性
同法处理3个批号的样品，用上述确定的方法展开，斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，阴性样品无干扰，重现性好。
1.1.3耐用性
1.1.3.1薄层板比较
比较了青岛海洋化工厂分厂硅胶板商品板、高效板和自制含0.5％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板。斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，阴性无干扰。两种薄层板均能得到较好的鉴别色谱。
1.1.3.2温度的比较
比较了低温(4℃)和室温环境条件下商品板展开效果。斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，阴性无干扰。两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
(1)低温(4℃)条件下检测该定性方法的耐用性。其中，薄层色谱条件如下所示：
薄层板：商品硅胶G薄层板
规格：100×100mm
活度：三色分开
点样：样品10μl，对照药材10μl，阴性10μl
点样方式：点状
展开剂：正己烷-乙酸乙酯(10:1.5)
展开剂用量：10ml
展开方式：双槽展缸(13×12cm)
展距：9㎝
温度：4℃
湿度：48％
薄层板上从左到右点样顺序为：
1-心脑宁胶囊(批号20130307)2-心脑宁胶囊(批号20130316)
3-薤白对照药材4-心脑宁胶囊(批号20130325)
5-心脑宁胶囊阴性样品(缺薤白)
薄层色谱结果见图1。
(2)室温条件下检测该定性方法的耐用性。其中，薄层色谱条件如下所示：
薄层板：商品硅胶G薄层板
规格：100×100mm
活度：三色分开
点样：样品10μl，对照药材10μl，阴性10μl
点样方式：点状
展开剂：正己烷-乙酸乙酯(10:1.5)
展开剂用量：10ml
展开方式：双槽展缸(13×12cm)
展距：9㎝
温度：20℃
湿度：48％
薄层板上从左到右点样顺序为：
1-心脑宁胶囊(批号20130307)2-心脑宁胶囊(批号20130316)
3-薤白对照药材4-心脑宁胶囊(批号20130325)
5-心脑宁胶囊阴性样品(缺薤白)
薄层色谱结果见图2。
1.1.3.3湿度的比较
比较了低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下商品板展开效果。斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，阴性无干扰。两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
(1)低湿(32％)条件下检测该定性方法的耐用性。其中，薄层色谱条件如下所示：
薄层板：商品硅胶G薄层板
规格：100×100mm
活度：三色分开
点样：样品10μl，对照药材10μl，阴性10μl
点样方式：点状
展开剂：正己烷-乙酸乙酯(10:1.5)
展开剂用量：10ml
展开方式：双槽展缸(13×12cm)
展距：9㎝
温度：20℃
湿度：32％
薄层板上从左到右点样顺序为：
1-心脑宁胶囊(批号20130307)2-心脑宁胶囊(批号20130316)
3-薤白对照药材4-心脑宁胶囊(批号20130325)
5-心脑宁胶囊阴性样品(缺薤白)
薄层色谱结果见图3。
(2)高湿(72％)条件下检测该定性方法的耐用性。其中，薄层色谱条件如下所示：
薄层板：商品硅胶G薄层板
规格：100×100mm
活度：三色分开
点样：样品10μl，对照药材10μl，阴性10μl
点样方式：点状
展开剂：正己烷-乙酸乙酯(10:1.5)
展开剂用量：10ml
展开方式：双槽展缸(13×12cm)
展距：9㎝
温度：20℃
湿度：72％
薄层板上从左到右点样顺序为：
1-心脑宁胶囊(批号20130307)2-心脑宁胶囊(批号20130316)
3-薤白对照药材4-心脑宁胶囊(批号20130325)
5-心脑宁胶囊阴性样品(缺薤白)
薄层色谱结果见图4。
小叶黄杨鉴别
方法为：取本品内容物6g，加5ml浓氨试液与50ml甲醇，摇匀，加热回流3小时。冷却，滤过，滤液蒸干，残渣加25ml水加热溶解，用氨水调节pH至9，用三氯甲烷提取3次，每次25ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加5ml三氯甲烷溶解，转移至中型氧化铝柱(100～200目，2g，内径1～1.5cm)，用甲醇:三氯甲烷(6:4)10ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加1.5ml三氯甲烷溶解，即得供试品溶液。另取小叶黄杨对照药材1.5g，同法制成对照药材溶液。再取黄维黄杨星D对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液，对照药材溶液各10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-氨水(10:5:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液和亚硝酸钠试液，晾干，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，阴性样品无干扰。故列入正文。
薄层色谱条件如下所示：
薄层板：高效硅胶G薄层板
规格：100×100mm
活度：三色分开
点样：样品10μl，对照药材10μl，对照品5μl，阴性10μl
点样方式：条状
展开剂：乙酸乙酯-甲醇-氨水(10:5:0.5)
展开剂用量：10ml
展开方式：双槽展缸(13×12cm)
展距：9㎝
温度：20℃
湿度：48％
薄层板上从左到右点样顺序为：
1-心脑宁胶囊(批号20130313)2-心脑宁胶囊(批号20130120)
3-心脑宁胶囊(批号20130325)4-环维黄杨星D
5-小叶黄杨对照药材6-心脑宁胶囊阴性样品(缺小叶黄杨)
薄层色谱结果见图5。
2.2.1专属性
以上述供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液和阴性对照溶液照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液10μl，对照品溶液5μl，阴性对照溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-氨水(10:5:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液和亚硝酸钠试液，晾干，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，阴性样品无干扰，专属性好。
薄层色谱条件如下所示：
薄层板：高效硅胶G薄层板
规格：100×100mm
活度：三色分开
点样：样品10μl，对照药材10μl，对照品5μl，阴性10μl
点样方式：条状
展开剂：乙酸乙酯-甲醇-氨水(10:5:0.5)
展开剂用量：10ml
展开方式：双槽展缸(13×12cm)
展距：9㎝
温度：20℃
湿度：48％
薄层板上从左到右点样顺序为：
1-心脑宁胶囊(批号20130313)2-心脑宁胶囊(批号20130120)
3-心脑宁胶囊(批号20130325)4-环维黄杨星D
5-小叶黄杨对照药材6-心脑宁胶囊阴性样品(缺小叶黄杨)
薄层色谱结果见图5，从结果中可看出，该鉴别小叶黄杨的方法具有良好的专属性。
2.1.2重现性
同法处理3个批号的样品，用上述确定的方法展开，斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，阴性样品无干扰，重现性好。
薄层色谱条件如下所示：
薄层板：高效硅胶G薄层板
规格：100×100mm
活度：三色分开
点样：样品10μl，对照药材10μl，对照品5μl，阴性10μl
点样方式：条状
展开剂：乙酸乙酯-甲醇-氨水(10:5:0.5)
展开剂用量：10ml
展开方式：双槽展缸(13×12cm)
展距：9㎝
温度：20℃
湿度：48％
薄层板上从左到右点样顺序为：
1-心脑宁胶囊(批号20130313)2-心脑宁胶囊(批号20130120)
3-心脑宁胶囊(批号20130325)4-环维黄杨星D
5-小叶黄杨对照药材6-心脑宁胶囊阴性样品(缺小叶黄杨)薄层色谱结果见图5，从结果中可看出，该鉴别小叶黄杨的方法具有良好的重现性。
2.2.3耐用性
2.2.3.1薄层板比较
比较了青岛海洋化工厂分厂商品硅胶板、高效硅胶G薄层板。发现商品硅胶板斑点不清晰，分离符合要求，Rf值适中，阴性无干扰。高效硅胶G薄层板斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，阴性无干扰。因此采用高效硅胶G薄层板。
薄层色谱条件如下所示：
薄层板：1.商品硅胶G薄层板2.高效商品硅胶G薄层板
规格：100×100mm
活度：三色分开
点样：样品10μl，对照药材10μl，对照品5μl，阴性10μl
点样方式：条状
展开剂：乙酸乙酯-甲醇-氨水(10:5:0.5)
展开剂用量：10ml
展开方式：双槽展缸(13×12cm)
展距：9㎝
温度：20℃
湿度：48％
分别在商品硅胶G薄层板和高效商品硅胶G薄层板上点样，其每块薄层板上从左至右的点样顺序如下所示：
1-心脑宁胶囊(批号20130313)2-心脑宁胶囊(批号20130120)
3-心脑宁胶囊(批号20130325)4-环维黄杨星D
5-小叶黄杨对照药材6-心脑宁胶囊阴性样品(缺小叶黄杨)
薄层色谱结果分别见图6(采用商品硅胶G薄层板)、图7(采用高效商品硅胶G薄层板)，从结果中可看出，高效硅胶G薄层板斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，阴性无干扰。因此采用高效硅胶G薄层板。
2.2.3.2温度的比较
比较了低温(4℃)和室温环境条件下商品板展开效果。斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，阴性无干扰。两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
(1)低温(4℃)条件下检测该定性方法的耐用性。其中，薄层色谱条件如下所示：
薄层板：高效商品硅胶G薄层板
规格：100×100mm
活度：三色分开
点样：样品10μl，对照药材10μl，对照品5μl，阴性10μl
点样方式：条状
展开剂：乙酸乙酯-甲醇-氨水(10:5:0.5)
展开剂用量：10ml
展开方式：双槽展缸(13×12cm)
展距：9㎝
温度：4℃
湿度：48％
薄层板上从左至右的点样顺序如下所示：
1-心脑宁胶囊(批号20130313)2-心脑宁胶囊(批号20130120)
3-心脑宁胶囊(批号20130325)4-环维黄杨星D
5-小叶黄杨对照药材6-心脑宁胶囊阴性样品(缺小叶黄杨)
薄层色谱结果见图8，证明该检测方法在低温条件下具有良好的耐用性。
(2)室温条件下检测该定性方法的耐用性。其中，薄层色谱条件如下所示：
薄层板：高效商品硅胶G薄层板
规格：100×100mm
活度：三色分开
点样：样品10μl，对照药材10μl，对照品5μl，阴性10μl
点样方式：条状
展开剂：乙酸乙酯-甲醇-氨水(10:5:0.5)
展开剂用量：10ml
展开方式：双槽展缸(13×12cm)
展距：9㎝
温度：20℃
湿度：48％
薄层板上从左至右的点样顺序如下所示：
1-心脑宁胶囊(批号20130313)2-心脑宁胶囊(批号20130120)
3-心脑宁胶囊(批号20130325)4-环维黄杨星D
5-小叶黄杨对照药材6-心脑宁胶囊阴性样品(缺小叶黄杨)
薄层色谱结果见图9，证明该检测方法在低温条件下具有良好的耐用性。
2.2.3.3湿度的比较
比较了低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下商品板展开效果。斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，阴性无干扰。两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
(1)低湿(32％)条件下检测该定性方法的耐用性。其中，薄层色谱条件如下所示：
薄层板：高效商品硅胶G薄层板
规格：100×100mm
活度：三色分开
点样：样品10μl，对照药材10μl，对照品5μl，阴性10μl
点样方式：条状
展开剂：乙酸乙酯-甲醇-氨水(10:5:0.5)
展开剂用量：10ml
展开方式：双槽展缸(13×12cm)
展距：9㎝
温度：20℃
湿度：32％
薄层板上从左至右的点样顺序如下所示：
1-心脑宁胶囊(批号20130313)2-心脑宁胶囊(批号20130120)
3-心脑宁胶囊(批号20130325)4-环维黄杨星D
5-小叶黄杨对照药材6-心脑宁胶囊阴性样品(缺小叶黄杨)
薄层色谱结果见图10，证明该检测方法在低湿条件下具有良好的耐用性。
(2)高湿度(72％)条件下检测该定性方法的耐用性。其中，薄层色谱条件如下所示：
薄层板：高效商品硅胶G薄层板
规格：100×100mm
活度：三色分开
点样：样品10μl，对照药材10μl，对照品5μl，阴性10μl
点样方式：条状
展开剂：乙酸乙酯-甲醇-氨水(10:5:0.5)
展开剂用量：10ml
展开方式：双槽展缸(13×12cm)
展距：9㎝
温度：20℃
湿度：72％
薄层板上从左至右的点样顺序如下所示：
1-心脑宁胶囊(批号20130313)2-心脑宁胶囊(批号20130120)
3-心脑宁胶囊(批号20130325)4-环维黄杨星D
5-小叶黄杨对照药材6-心脑宁胶囊阴性样品(缺小叶黄杨)
薄层色谱结果见图11，证明该检测方法在高湿条件下具有良好的耐用性。丹参中丹酚酸B的含量测定。
3.1.1仪器与试剂高效液相色谱仪：美国戴安3000高效液相色谱仪，带四元泵；VWD可变波长紫外检测器；在线真空脱气机；智能化柱温箱；色谱柱：ThermoC18150×4.6mm
丹酚酸B对照品(供含量测定用)：购于中国药品生物制品检定所，批号111562-201212
甲醇为色谱纯；水为重蒸馏水；其它试剂为分析纯。
3.1.2丹酚酸B对照品溶液的制备：精密称取丹酚酸B(含量以95.4％计)对照品5.920mg，置100ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含丹酚酸B56.477μg)。
3.1.3供试品溶液制备方法的选择
取本品装量差异项下的内容物，混匀，精密称取0.3g于25ml量瓶中，加入水10ml，分别超声处理(功率150W，频率20kHz)15分钟和30分钟，放冷，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
表1提取方法的选择
3.1.4回收率试验
采用加样回收法。取已知含量的样品(批号：20130307，含量：4.22mg/g)6份，每份精密称取0.3g，精密加入丹酚酸B对照品溶液(浓度：0.6540624mg/ml)1ml，加水10ml，按正文供试品制备方法制备供试品溶液，正文条件试验，按下式计算回收率：
结果见表2：
表2回收率试验的结果
结果表明，本法有良好的回收率，且回收率的相对标准偏差小于3％。
3.1.5线性关系考察
取丹酚酸B对照品(56.477μg/ml)，各精密量取2μl、6μl、10μl、14μl、16μl、18μl和20μl分别进样，按正文色谱条件试验，结果见表3：
表3线性关系考察的结果
以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线，得到图12，其回归方程为：
Y＝926.07992X+15.52812R＝0.9999
从图1中的线性关系图中可得知，丹酚酸B在0.1129536～1.129536μg范围内具有良好的线性关系。
3.1.6精密度试验
精密吸取浓度为56.477μg/ml的丹酚酸B对照品溶液重复6次进样，每次10μl，按正文色谱条件试验，结果见表4：
表4精密度试验的结果
结果表明：峰面积的相对标准偏差小于2％，精密度良好。
3.1.7稳定性试验
精密称取样品(批号：20130307)0.3g，按正文含量测定方法制备成供试品溶液，进行试验，每隔一定时间测定一次峰面积，结果见表5：
表5稳定性试验的结果
结果表明，4小时峰面积比2小时峰面积减少7.8％。
3.1.8重复性试验
精密称取样品(批号：20130307)6份，每份0.3g，按正文含量测定方法试验，结果见表6：
表6重复性试验的结果
结果表明，含量的相对标准偏差小于5％，重复性良好。
3.1.9耐受性试验
分别采用了3种不同品牌色谱柱对按正文方法同一批号(批号：20130307)样品进行测定，结果见表7：
表7耐受性试验的结果
结论：分析上表试验结果，3个不同品牌色谱柱对样品含量测定结果无显著影响。
3.1.10样品测定
按正文含量测定方法和条件测试样品，按下式分别计算样品中丹酚酸B含量：
表8样品测定的结果
3.1.11限度的确定
表910批样品测定的结果
根据10批数据，心脑宁胶囊每粒含丹参以丹酚酸B计，不得少于0.9mg。注：耐用性及10批样品丹酚酸B对照品浓度：精密称取丹酚酸B(含量以95.4％计)对照品6.856mg，置100ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含丹酚酸B65.406μg)。
上述试验结果表明，增加的检测项目其检测方法稳定可靠，专一性强，能有效的控制产品质量。
Claims (1)
1.心脑宁胶囊的检测方法，其特征在于：利用薄层色谱法对薤白、小叶黄杨的定性鉴别和利用高效液相色谱对丹参中丹酚酸B的定量测定；
对薤白的定性鉴别包括以下步骤：取本品内容物4.5g，加正己烷20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取薤白对照药材4g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯10:1.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；
对小叶黄杨的定性鉴别包括以下步骤：取本品内容物6g，加5ml浓氨试液与50ml甲醇，摇匀，加热回流3小时；冷却，滤过，滤液蒸干，残渣加25ml水加热溶解，用氨水调节pH至9，用三氯甲烷提取3次，每次25ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加5ml三氯甲烷溶解，转移至100～200目、2g、内径1～1.5cm的中型氧化铝柱，用10ml甲醇:三氯甲烷6:4洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加1.5ml三氯甲烷溶解，即得供试品溶液；另取小叶黄杨对照药材1.5g，同法制成对照药材溶液；再取黄维黄杨星D对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品溶液，对照药材溶液各10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-氨水10:5:0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液和亚硝酸钠试液，晾干，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照药材溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；
对丹参中丹酚酸B的定量测定包括以下步骤：
照高效液相色谱法；
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-1.7％甲酸溶液20:10:70为流动相；检测波长为286nm；理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：精密称取丹酚酸B对照品，加水制成每1ml分别含60μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，精密称取0.3g于25ml量瓶中，加入水10ml，超声处理，功率150W，频率20kHz15分钟，放冷，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜0.45μm滤过，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。
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