KR20090115743A

KR20090115743A - 알파-갈락토시다아제를 포함하는 세정 조성물

Info

Publication number: KR20090115743A
Application number: KR1020097017921A
Authority: KR
Inventors: 휴 씨. 맥도날드; 애이루카란 제이 풀로즈
Original assignee: 다니스코 유에스 인크.
Priority date: 2007-02-28
Filing date: 2008-02-26
Publication date: 2009-11-05
Also published as: CN101663384B; US20100137184A1; CN101663384A; WO2008106093A1; CA2679375A1; HK1142091A1; NZ578886A; EP2121891A1; RU2009135827A; MX2009008903A; BRPI0808155A2; JP2010520323A; AU2008219739A1

Abstract

본 발명은 단리된 알파-갈락토시다아제 효소를 포함하는 세정 조성물을 제공한다. 특히 바람직한 일부 구현예에서, 단리된 알파-갈락토시다아제 효소는 트 리코더마 레세이의 알파-갈락토시다아제에 관련된 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명은 또한 세정 용품에서 알파-갈락토시다아제를 사용하는 방법을 제공한다.

Description

알파-갈락토시다아제를 포함하는 세정 조성물{CLEANING COMPOSITIONS COMPRISING ALPHA-GALACTOSIDASE}

본 발명은 단리된 알파-갈락토시다아제 효소를 포함하는 세정 조성물을 제공한다. 특히 바람직한 일부 구현예에서, 단리된 알파-갈락토시다아제 효소는 트리코더마 레세이(Trichoderma reesei)의 알파-갈락토시다아제와 관련된 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명은 또한 세정 용품에서 알파-갈락토시다아제를 이용하는 방법을 또한 제공한다.

세제와 기타 세정 조성물에는 종종 활성 성분의 복잡한 조합물이 포함된다. 예를 들어, 특정 세정 제품에는 예를 들어, 계면활성제 시스템, 세정용 효소, 표백제, 강화제(builder), 비누거품 억제제(suds suppressor), 오점 현탁화제, 방오제 (soil release agent), 형광 발광제, 유연제, 분산제, 염료 전이 억제 화합물(dye transfer inhibition compound), 연마재, 살균제, 및 향료가 함유된다. 현재 세제가 이와 같이 복잡하여도, 제거하기 어려운 얼룩이 많다.

본 발명의 요약

본 발명은 단리된 알파-갈락토시다아제 효소를 포함하는 세정 조성물을 제공한다. 특히 바람직한 일부 구현예에서, 단리된 알파-갈락토시다아제 효소는 트리코더마 레세이의 알파-갈락토시다아제와 관련된 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명은 또한 세정 용품에서 상기 동일한 알파-갈락토시다아제를 사용하는 방법을 또한 제공한다. 일부 구현예에서, 세정 조성물은 하나 이상의 계면활성제를 추가로 포함한다. 일부 바람직한 구현예에서, 세정 조성물의 작동(working) pH 는 약 pH 5.0 이상이다. 본 발명은 또한 본 발명의 세정 조성물을 사용하여 대상체를 세정하는 방법을 제공한다.

일부 구현예에서, 알파-갈락토시다아제 효소는 트리코더마 레세이의 알파-갈락토시다아제와 약 70 % 이상, 약 80 % 이상, 약 90 % 이상, 약 95 % 이상, 또는 약 98 % 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 다른 구현예에서, 알파-갈락토시다아제 효소는 트리코더마 레세이의 알파-갈락토시다아제와 면역학적으로 교차-반응성이다.

일부 구현예에서, 본 발명의 세정 조성물은 고체 (예를 들어, 분말 또는 정제)이고, 반면 다른 구현예에서 세정 조성물은 액체, 겔, 거품 또는 기타 형태이다. 일부 바람직한 구현예에서, 세정 조성물은 세탁 세제, 식기세척 세제, 또는 세탁 첨가제로서 제형화된다. 일부 바람직한 구현예에서, 세정 조성물은 비-전분 식품 다당류의 분해에 유용한, 헤미셀룰라아제, 만나나아제, 펙티나아제, 또는 자일라나아제와 같은 효소를 포함하나 이에 한정되지 않은 하나 이상을 추가로 포함한다. 일부 또 다른 구현예에서, 세정 조성물은 기타 얼룩 성분을 분해시키기 위한, 프로테아제, 아밀라아제, 셀룰라아제, 리파아제, 큐티나아제, 또는 옥시도-리덕타아제와 같은 효소를 포함하나 이에 한정되지 않는 하나 이상을 추가로 포함한다. 실제로, 본 발명의 알파-갈락토시다아제와의 조합물에서 유용함을 발견한 적합한 효소는 헤미셀룰라아제 (hemicellulase), 퍼옥시다아제 (peroxidase), 프로테아제 (protease), 셀룰라아제 (cellulase), 자일라나아제 (xylanase), 리파아제 (lipase), 포스포리파아제 (phospholipase), 에스테라아제 (esterase), 큐티나아제 (cutinase), 펙티나아제 (pectinase), 케라티나아제 (keratinase), 리덕타아제 (reductase), 옥시다아제 (oxidase), 페놀옥시다아제 (phenoloxidase), 리폭시게나아제 (lipoxygenase), 리그니나아제 (ligninase), 풀룰라나아제 (pullulanase), 탄나아제 (tannase), 펜토사나아제 (pentosanase), 말라나아제 (malanase), β-글루카나아제 (β-glucanase), 아라비노시다아제 (arabinosidase), 히알루로니다아제 (hyaluronidase), 콘드로이티나아제 (chondroitinase), 라카아제 (laccase) 및 아밀라아제 (amylase) 또는 이들의 혼합물을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 알파-갈락토시다아제와 함께 프로테아제, 리파아제, 큐티나아제 및/또는 셀룰라아제와 같은 적용가능한 통상의 효소를 포함하는 효소들의 조합 (즉, "칵테일") 이 사용된다.

본 발명은 대상체(예를 들어, 직물 또는 식기)를 알파-갈락토시다아제 효소의 활성에 적합한 조건하에서 단리된 알파-갈락토시다아제 효소와 상기 대상체를 접촉시켜 세정시키는 단계를 포함하는 세정 방법을 또한 제공한다. 일부 구현예에서, 알파-갈락토시다아제 효소는 약 pH 5 이상인 pH (예를 들어 약 pH 5 내지 약 pH 6.5, 약 pH 6.5 내지 약 pH 7.5, 약 pH 7.5 내지 약 pH 8.5, 약 pH 9.5 내지약 pH 10.5, 또는 약 pH 10.5 내지 약 pH 11.5 의 pH 범위) 로 대상체와 접촉시킨다.

일부 구현예에서, 대상체는 비-전분 식품 다당류 (예를 들어, 구아검 또는 리마콩 검과 같은 갈락토만난 검)를 함유한 오염된 대상체(예를 들어, 식료품으로 얼룩진 대상체) 이다. 상기 식료품에는 샐러드 드레싱, 아이스 크림, 밀크쉐이크, 샐러드 크림 및 초콜렛 크림이 포함되나 이에 한정되지 않는다.

다른 바람직한 구현예에서, 본 발명의 세정 조성물은 특정 알파-갈락토시다아제를 함유하지 않은 동등한 세정 조성물보다 더욱 효과적으로 대상체의 얼룩을 제거한다.

발명의 설명

본 발명은 단리된 알파-갈락토시다아제 효소를 포함하는 세정 조성물을 제공한다. 특히 바람직한 일부 구현예에서, 단리된 알파-갈락토시다아제 효소는 트 리코더마 레세이의 알파-갈락토시다아제와 관련되 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명은 세정 용품에서 알파-갈락토시다아제를 이용하는 방법을 제공한다.

달리 언급이 없는 한, 본 발명의 실시는 당업계에 내포된 분자 생물학, 미생물학 및 재조합된 DNA 에 사용되는 일반적인 통상의 기술을 수반한다. 그러한 기술은 당업자에게 공지되어 있으면서, 당업자에게 널리 공지된 수많은 문헌 및 참고 자료에 기재되어 있다. 본원 상기 및 하기 모두에서 언급된 모든 특허, 특허 출원, 논문 및 간행물은 본원에 명백하게 참조인용된다. 본원에 다르게 정의되어 있지 않은 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어들은 본 발명이 속한 당업자 중 하나가 일반적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 물질이 본 발명을 실시함에 있어 유용함을 발견하더라도, 바람직한 방법 및 물질이 본원에 기재된다. 따라서, 바로 하기에 정의된 용어는 명세서 전체에 참고로 충분히 기재되어 있다.

또한, 본원에 사용되는 바와 같이, 단수 용어는 문맥상 명확히 다르게 지시되어 있지 않은 한 복수 기준을 포함한다. 수치 범위는 범위를 한정하는 수를 포함한다. 달리 지시되지 않는 한, 핵산은 5' 에서 3' 방향으로 왼쪽에서 오른쪽으로 표기하며; 아미노산 서열은 아미노에서 카르복시 방향으로 왼쪽에서 오른쪽으로 각각 표기한다. 본 발명은 기재된 특정 방법론, 프로토콜 및 시약이 당업자에 의해 사용되는 문맥에 따라 다양할 수 있기 때문에 이에 한정되지 않는 것이 당연하다.

또한, 본원에 제공된 표제는 본 발명의 다양한 양상 또는 구현예를 한정하지 않고, 명세서 전체에서 참고로 수득할 수 있다. 따라서, 바로 하기에 정의된 용어는 명세서 전체에 참고로 충분히 정의되어 있다. 그럼에도, 본 발명을 쉽게 이해하도록 다수의 용어를 하기에 정의하였다.

본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최대 수치 한도는, 그 수치의 하한이 명백히 본원에 기재되어 있는 것처럼 모든 하한 수치를 포함하는 것으로 의도된다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최소 수치 한도는, 그 수치의 상한이 명백히 본원에 기재되어 있는 것처럼, 모든 상한 수치를 포함할 것이다. 본 명세서에 주어진 모든 수치 범위는, 더 좁은 수치 범위가 모두 본원에 기재되어 있는 것처럼, 더 넓은 상기 수치 범위 내에 존재하는 더 좁은 수치 범위 모두를 포함할 것이다.

인용된 모든 문헌은 본원에서 관련된 부분에 참고인용된다; 임의의 문헌 인용은 본 발명에 관한 종래기술인 것을 인정하는 것으로 파악되는 것은 아니다.

용어 "재조합체" 란, 숙주 세포에서 자연적으로 발생하지 않는 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 지칭한다. 재조합체 분자는, 자연적으로 발생하지 않는 방식으로 함께 연결된 둘 이상의 자연-발생 서열을 포함할 수 있다. 재조합 세포는 재조합 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 포함한다.

용어 "이종성" 이란, 일반적으로 상호간에 결합되지 않는 요소들에 지칭한다. 예를 들어, 숙주 세포가 이종성 단백질을 생성한다면, 상기 단백질은 일반적으로 상기 숙주 세포에서 생성되지 않는 단백질이다. 마찬가지로, 이종성 코딩 서열에 동작가능하게 연결된 촉진자는 야생형 숙주 세포 내에서 보통 동작가능하게 연결되지 않는 코딩 서열에 동작가능하게 연결된 촉진자이다. 폴리뉴클레오티드 또는 단백질과 관련하여, 용어 "동종성" 은 숙주 세포에서 자연적으로 발생하는 폴리뉴클레오티드 또는 단백질을 지칭한다.

용어 "단백질" 및 "폴리펩티드"가 본원에서 상호 교환가능하게 사용된다.

"신호 서열" 은 세포 밖 성숙형태 단백질의 분비를 용이하게 하는 단백질의 N-말단 부분에 존재하는 아미노산의 서열이다. 신호 서열은 기능적인 정의이다. 성숙형태의 세포밖 단백질에는 분비 과정 중 분열되는 신호 서열이 부족한다.

"코딩 서열" 은 폴리펩티드를 인코드하는 DNA 단편이다.

용어 "핵산" 은 DNA, RNA, 단일 가닥 또는 이중 가닥 및 이의 화학적 변형을 포함한다. 용어 "핵산" 및 "폴리뉴클레오티드" 는 본원에서 상호 교환가능하게 사용된다.

"벡터" 는 하나 이상의 숙주 세포에 핵산을 도입시켜 설계된 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 벡터는 상이한 숙주 세포에서 자발적으로 복제될 수 있고, 클로닝 벡터, 발현 벡터, 셔틀 벡터, 플라스미드, 파지 입자, 카세트 등을 포함한다.

본원에 사용된 "발현 벡터" 는 적합한 숙주 세포에서 단백질의 발현을 초래할 수 있는 적합한 제어 서열에 동작가능하게 연결되는 단백질-코딩 부위를 포함하는 DNA 구조체를 의미한다. 상기 제어 서열은 전사를 초래하는 촉진자, mRNA 를 생성하기 위한 전사를 제어하는 임의의 작동자 서열, mRNA 에 적합한 리보솜 결합 부위를 인코드하는 서열, 및 전사와 번역의 말단을 제어하는 인핸서(enhancer) 및 서열을 포함할 수 있다.

"촉진자" 는 다운스트림 핵산의 전사를 시작하는 조절 서열이다.

용어 "동작가능하게 연결된" 은 기능적으로 연관되도록 하는 원소의 배열을 지칭한다. 예를 들어, 촉진자는 서열의 전사를 제어하는 경우 코딩 서열에 기능적으로 연결된다.

용어 "선택 표지" 는 도입된 핵산 또는 벡터를 함유하는 상기 숙주의 선택을 용이하게 하는 숙주에서 발현가능한 단백질을 지칭한다. 선택 표지의 예에는 항균제 (예를 들어, 하이그로마이신, 블레오마이신, 또는 클로람페니콜) 및/또는 숙주 세포에 신진대사 이익, 예컨대 영양적 이익을 주는 유전자가 포함되나, 이에 한정되지 않는다.

용어 "유도된" 에는 용어 "로부터 유래된", "수득된", "로부터 수득가능한" 및 "로부터 단절된" 이 포함된다.

"비-병원성" 유기체는 인간에 병원성이 아닌 유기체이다.

본원에 사용된 용어 "회수된," "단절된," 및 "분리된" 은 자연적으로 결합되는 하나 이상의 성분으로부터 제거된 단백질, 세포, 핵산 및 아미노산에 지칭된다.

본원에 사용된 바와 같이, 세포에 관련하여 사용된 용어 "형질전환," "안정적으로 형질전환된" 및 "이식유전자" 는, 세포가 이의 게놈으로 통합되는 비-고유 (예를 들어, 이종성) 핵산 서열을 갖거나, 다세대를 통해 유지되는 에피솜 플라스미드를 의미한다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "발현" 은 폴리펩티드가 유전자의 핵산 서열에 기초하여 생성되는 과정을 지칭한다. 과정은 전사 및 번역 모두를 포함한다.

세포로 핵산 서열이 삽입하는 문맥에서 용어 "도입된" 은, "형질감염" "형질전환" 또는 "형질도입"을 의미하고, 핵산 서열이 진핵 또는 원핵 세포로 편입하는 것과 관련하여 포함하고, 여기서 핵산 서열은 세포의 게놈 (예를 들어, 염색체, 플라스미드, 색소체, 또는 미토콘드리아 DNA) 으로 편입되거나, 자발적인 레플리콘으로 전환되거나, 일시적으로 발현된다(예를 들어, 형질감염된 mRNA).

용어 "교잡" 은 당업계에 공지된 바와 같이 염기쌍을 통해 상보적인 가닥과 핵산의 가닥이 결합하는 과정을 나타낸다. 핵산은 기준 핵산 서열과 "선택적인 교잡가능한" 것으로 여겨지는데, 이는 2개의 서열이 중도에서 매우 엄격한 교잡 및 세척 조건 하에서 서로 특이적으로 교잡하는 경우이다. 중도 및 매우 엄격한 교잡 조건은 당업자에게 널리 공지되어 있다. 매우 엄격한 조건의 예는 약 42 ℃ 로 50 % 포름아미드, 5X SSC, 5X Denhardt 용액, 0.5% SDS 및 100 ug/ml 변성된 담체 DNA 에서 교잡을 하고, 실온에서 2X SSC 및 0.5% SDS 으로 2 회, 42 ℃ 로 0.1 X SSC 및 0.5% SDS 에서 2 회 세척하는 것을 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "세정 조성물" 및 "세정 제형물" 이란, 직물, 식기, 콘택트 렌즈, 기타 고체 기질, 헤어 (샴푸), 스킨 (비누 및 크림), 치아 (구강세척제, 치약) 등과 같이 세정되는 아이템에서 원하지 않는 화합물을 제거하는데 있어서 유용함이 발견되는 조성물을 지칭한다. 상기 용어는 조성물이 아실트랜스퍼라아제 및 임의의 기타 효소(들) 및/또는 조성물 내에 존재하는 성분들과 혼화가능하는 한, 특정 유형의 원하는 세정 조성물 및 제품 형태 (예를 들어, 액체, 젤, 과립 또는 분무 조성물) 을 위해 선택되는 임의의 물질/화합물을 포함한다. 세정 조성물 물질의 특정 선별은, 세정될 대상체/표면 및 이용하는 동안 활용되는 세정 조건에 있어서 조성물의 바람직한 형태를 고려함으로써 용이하게 이루어진다.

상기 용어는 임의의 대상체 및/또는 표면을 세정, 표백, 소독 및/또는 살균하기에 적합한 임의의 조성물을 추가로 지칭한다. 상기 용어는 세제 조성물 (예를 들어, 액체 및/또는 고체 세탁물 세제 및 극세사 직물 (fine fabric) 세제; 유리, 목재, 세라믹 및 금속 주방용 조리대 및 창문 등을 세정하는데 사용하기에 적합한 경질 표면 세정용 제형물; 카페트 클리너; 오븐 클리너; 직물 청정제; 직물 연화제; 및 피륙 (textile) 및 세탁물 예비 얼룩 제거제 (pre-spotter), 및 접시 세제) 을 포함하나, 이에 제한되지 않는 것으로 의도된다.

실제로, 용어 "세정 조성물" 은 다르게 지시되지 않는 한, 본원에서 사용되는 바와 같이, 과립, 정제 또는 분말 형태의 다목적 또는 대량용(heavy-duty) 세척제 (wasing agent), 특히 세정 세제; 액체, 겔 또는 페이스트-형태의 다목적 세척제, 특히 대량용 액체 (HDL) 유형; 액체 극세사 세제; 손 식기세척제 또는 경량용의 세척제, 특히 고발포 유형의 것들; 가구 및 기관용 각종 정제, 과립, 액체 및 헹굼보조 유형을 포함하는 기계식 식기세척제; 항균 핸드워시 유형, 세정 바 (bar), 구강세척제, 의치 세정제, 자동차 또는 카페트 샴프, 목욕실 클리너를 포함하는 액체 세정제 및 소독제; 헤어 샴프 및 헤어 린스; 샤워젤 및 거품목욕제 및 금속 클리너; 및 표백 첨가제 및 "얼룩-스틱", "예비 처리" 및/또는 "세탁 첨가제" 와 같은 세정 보조제를 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "세제 조성물" 및 "세제 제형물" 은 오염된 대상체의 세정용 세척 매질에서, 사용되도록 제형화된 조성물과 관련되어 사용된다. 특정 구현예에서, 상기 용어는 직물 및/또는 의복을 세탁하는 것과 관련하여 사용된다 (예를 들어, "세탁물 세제"). 대안적인 구현예에서, 상기 용어는 기타 세제, 예컨대 접시, 칼붙이 등을 세정하는데 사용되는 것 (예를 들어 "식기세척 세제") 를 지칭한다. 본 발명은 임의의 특정 세제 제형물 또는 조성물에 국한해야 하는 것으로 의도되지 않는다. 실제로, 일부 구현예에서 세제 조성물은 알파-갈락토시다아제 이외에, 계면활성제, 다른 트랜스퍼라아제(들), 가수분해효소, 옥시도 리덕타아제, 증진제, 표백제, 표백 활성화제, 청색화제 (bluing agent) 및 형광 염료, 케이크 저해제, 차폐제, 효소 활성화제, 항산화제 및/또는 가용화제 등을 함유한다.

본원에 사용되는 바와 같이, 세정 조성물에서 "향상된 성능" 은 얼룩의 세정 (예를 들어, 제거 및/또는 탈색)을 증가시키는 것으로 정의된다. 일부 바람직한 구현예에서, 얼룩은 표준 세척 순환 후 통상의 평가에 의해 측정되는 바와 같이, 갈락토만난-관련 얼룩 (예를 들어, 초콜렛 크림, 셀러드 드레싱, 구아 등)이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "경질 표면 세정 조성물" 이란, 층계, 벽, 타일, 목욕실 및 부엌 설비 등과 같은 경질 표면을 세정하기 위한 세제 조성물을 지칭한다. 이러한 조성물은 고체, 액체, 에멀젼 등을 포함하나 이에 한정되지 않는 임의의 형태로 제공된다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "식기세척 조성물" 이란, 과립, 겔, 에멀전 및 액체를 포함하나 이에 한정되지 않는 모든 적합한 형태의 접시 세정용 조성물을 지칭한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "직물 세정 조성물" 은 과립, 액체, 겔, 에멀전 및 바를 포함하나, 이에 한정되지 않는, 직물을 세정하기 위한 모든 형태의 세제 조성물을 지칭한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "피륙" 은 직포뿐 아니라, 방사, 직포, 니트 및 부직포로 전환 또는 이로서 사용되는데 적합한 짧은 섬유 및 필라멘트을 지칭한다. 상기 용어는 천연 및 합성 (예를 들어 제작된) 섬유로 만들어진 방사를 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "피륙 물질" 은 섬유, 방사 중간체, 방사, 직물 및 직물로 만들어진 제품 (예를 들어, 의복 및 기타 성형품) 의 일반 용어이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "직물" 은 임의의 피륙 물질을 포함한다. 따라서, 상기 용어는 의복뿐 아니라, 직물, 방사, 섬유, 부직포 물질, 천연물, 합성물 및 임의의 기타 피륙물을 포함하는 것으로 의도된다.

본원에 사용되는 바와 같이, "알파-갈락토시다아제의 효과적인 양" 은 특수 용품 (예를 들어, 세정 조성물 등) 에 필요한 효소 활성을 달성하기 위해 필요한 알파-갈락토시다아제 효소의 양을 지칭한다. 상기 효과적인 양은 당업계의 통상의 기술 중 하나에 의해 용이하게 확인되고, 많은 요인, 예컨대 사용된 다양한 특이 효소, 세정 용품, 세정 조성물의 특정 조성물, 및 액체 또는 건조 (예를 들어, 과립, 바) 조성물이 필요한지 여부 등에 기초한다.

용어 "α-갈락토시다아제" 및 알파-갈락토시다아제는 갈락토스 올리고당 및 갈락토만난을 포함하는 알파-D-갈락토시드에서 말단, 비-감소 알파-D-갈락토스 잔기를 가수분해하는 효소를 나타낸다. 본원에 기재된 알파-갈락토시다아제는 IUBMB 효소 명명법에 따라 EC 3.2.1.22 으로 기재된 활성을 갖는다. 본원에 기재된 알파-갈락토시다아제의 계통명은 알파-D-갈락토시드 갈락토 가수분해효소이다.

용어 "오염된 대상체" 는 대상체 (예를 들어, 직물 또는 식기)를 지칭하고, 이는 2차 조성물로 오염(예를 들어, 얼룩)된 것이다. 용어 "오염된 대상체" 에 포함된 더러운 직물은, 예컨대 비-전분 식품 다당류를 함유하는 식료품으로 얼룩진 더러운 의류, 린넨, 및 직물이다. 특정 구현예에서, 얼룩은 눈에 보이는 색이다.

용어 "비-전분 식품 다당류" 는 많은 식료품 (예를 들어, 소스, 크림, 유제품, 아이스 크림, 무스, 밀크쉐이크 및 샐러드 드레싱)에서 충전제, 증점제, 안정제 또는 결합제로서 사용한 물이 없는 비-전분 다당류를 지칭한다. 구아검, 콩과 구아콩 관목에서 추출한 식용 증점제, 및 쥐엄 나무의 종자에서 추출한 로커스트빈 검은 비-전분 식품 다당류의 예들이다.

용어 "비-전분 식품 다당류 분해 효소" 는 비-전분 식품 다당류를 분해하는 효소를 지칭한다. 대표적인 효소에는 헤미셀룰라아제, 만나나아제, 펙티나아제, 자일라나아제, 베타-갈락토시다아제 및 알파-갈락토시다아제가 포함되나, 이에 한정되지 않는다.

용어 "갈락토만난 검" 은 갈락토스 및 만노스 잔기를 함유하는 중합체로 이루어진 식물-유도 다당류를 지칭한다. 갈락토만난 검의 종류에는 구아검, 타라검, 호로파(fenugreek) 검, 및 콩검 (bean gum) 이 있다.

용어 "작동 pH" 는 사용 중 세제의 pH 를 지칭한다. 예를 들어, 세탁 세제의 작동 pH 는 세탁기에서 또는 손세탁 중 직물을 세척하기 위해 사용될 때 세제의 pH 이다. 마찬가지로, 식기세척용 세제의 작동 pH 는 식기세척기에서 또는 손 식기세척에서 사용되는 세제의 pH 이다. 일부 구현예에서, 농축 또는 고체 형태의 세제는 희석되거나 용해된 후 상기 세제의 pH 가 작동 pH 가 된다.

용어 "작동 농도" 는 사용 중 세제에서 효소의 농도를 지칭한다. 예를 들어, 세탁 세제에서 효소의 작동 농도는, 세탁 세제가 세탁기에서 또는 손세탁 중 직물을 세탁하기 위해 사용될 때 상기 효소의 농도이다. 마찬가지로, 식기세척용 세제에서 효소의 작동 농도는 식기세척기에서 또는 손 식기세척 중 사용될 때 세제에서의 상기 효소의 농도이다. 일부 구현예에서, 농축되건 고체 형태의 세제는 희석되거나 용해된 후 세제에서 효소의 농도가 이의 작동 농도가 된다.

본 발명은 트리코더마 레세이의 알파-갈락토시다아제와 (예를 들어 약 90 % 이상 동일한) 연관된 아미노산 서열을 포함하는 단리된 알파-갈락토시다아제 효소를 포함하는 세정 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 세정 조성물은 하나 이상의 계면활성제를 포함한다. 일부 구현예에서, 세정 조성물의 작동 pH 는 약 pH 5 이상이다. 본 발명은 또한 세정 대상체에 본원에 제공된 세정 조성물을 세정 대상체에 이용하는 방법을 제공한다.

표본이 되는 구현예를 더욱 상세히 기술하기 전에, 본 발명은 물론 다양할 수 있기 때문에 기술되는 특정 구현예에 한정하지 않는 것은 당연하다. 또한, 본원에 사용된 용어는 오직 특정 구현예를 설명하는 목적이고, 한정되는 것으로 의도되지 않고, 본 발명의 범위가 첨부된 청구항에 의해서만 한정될 것이다.

값의 범위가 제공되는 경우, 범위의 상한 및 하한 사이에, 문맥이 달리 명확하게 지시하지 않은 한 하한 단위의 10분의 1로 각 개재값은 또한 상세히 개시된다. 명시된 범위에서 임의의 표시값 또는 개재값과 상기 명시된 범위에서 임의의 다른 표시값 또는 개재값은 본 발명에 포함된다. 상기 더 작은 범위의 상한 및 하한은 독립적으로 그 범위에 포함되거나 배재되고, 한도 중 어느 하나, 둘 모두, 또는 어느 것도 아닌 것을 더 작은 범위에 포함되는 경우의 각 범위는 또한 본 발명, 설명된 범위에서 임의의 특정 배재된 한도에 요지에 포함된다. 명시된 범위가 한도 중 하나 또는 둘 모두를 포함하는 경우, 그들이 포함된 한도 중 하나 또는 둘 모두를 배재한 범위는 본 발명에 또한 포함된다.

본원에 기재된 방법 및 물질과 유사하거나 동등한 임의의 것이 본 발명을 실시하거나 시험하는 데 있어 사용될 수 있지만, 예가 되고 바람직한 방법 및 물질은 지금부터 기재한다. 본원에 언급된 모든 공개물은 공개물이 인용되는 것과 연관하여 방법 및/또는 물질을 개시하고 기재하기 위해 참고인용된다.

알파- 갈락토시다아제 효소

상기 명시된 바와 같이, 본 발명은 알파-갈락토시다아제 효소를 포함하는 세정 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 알파-갈락토시다아제 효소는 야생형 트리코더마 레세이 알파-갈락토시다아제의 아미노산 서열과 약 70 % 이상, 약 80 % 이상, 약 85 % 이상, 약 90 % 이상, 약 91 % 이상, 약 92 % 이상, 약 93 % 이상, 약 94 % 이상, 약 95 % 이상, 약 96 % 이상, 약 97 % 이상, 약 98 % 이상, 약 99 % 이상 또는 약 100 % 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 상기 효소의 세개의 예에 대한 아미노산 서열은 당업계에 공지되어 있다 (Margolles-Clark et al., Eur. J. Biochem., 240:104-11 [1996] 참조). 트리코더마 레세이 알파-갈락토시다아제 효소 1, 2 및 3 을 인코드하는 mRNA 의 뉴클레오티드 서열뿐만 아니라 상기 효소의 아미노산 서열은, NCBI's GENBANK® 데이타베이스에 수탁 번호 Z69253 (GID: 1580815), Z69254 (GID: 1580817) 및 Z69255 (GID: 1580811)로서 각각 기탁 되었다. 상기 GENBANK® 데이타베이스 수탁 번호는 본원에 핵산 및 단백질 서열 및 상기 서열의 주석을 포함하여 온전히 참고인용된다.

500 개 초과의 상이한 알파-갈락토시다아제에 대한 아미노산 서열은 공지되어 있고, 동물 (예를 들어, 수탁 번호 CAA29232; GID: 757912 참조), 식물 (예를 들어, 수탁 번호 NP_974447; GID: 42572703 참조), 및 박테리아 (예를 들어, 수탁 번호 BAB38524; GID: 13364578 참조) 의 것을 포함하는 NCBI's GENBANK® 데이터베이스에 기탁되었다. 또한, 인간, 벼 및 T. 레세이 (예를 들어, Golubev et al, J. Mol. Biol., 339: 413-422 [2004] 참조)의 것을 포함하여, 5 개 이상의 알파-갈락토시다아제 효소의 원자 좌표가 공지되어 있다. T. 레세이의 것을 포함하여 알파-갈락토시다아제 효소에서 보존되는 아미노산 또한 공지되어 있다 (예를 들어, Margolles-Clark et al supra; 및 NCBI 의 보존된 도메인 수탁 번호. COG3345.2 참조).

일부 다른 구현예에서, 알파-갈락토시다아제 효소는 면역학적으로 야생형 트리코더마 레세이 알파-갈락토시다아제, 분자 생물학계에 널리 공지된 동정 방법에 관한 것이다.

본 발명의 알파-갈락토시다아제 효소는 임의의 적합한 방법을 사용하여 생성하는 것을 목적으로 한다. 예를 들어, (예를 들어, E. coli 과 같은 그램-음성균에 의해) 페리플라즘으로, 또는 예를 들어 그램-양성균, (예컨대 바실루스( Bacillus ) 및 악티노마이세테스 ( Actinomycetes )), 또는 진핵 숙주 (예를 들어, 트리코데르마( Trichoderma ), 아스퍼질러스( Aspergillus ), 사카로미세스 ( Saccharomyces ), 및 피치아( Pichia ))에 의해 세포외 공간내로 분비된다.

일부 구현예에서, 알파-갈락토시다아제 효소는 T. 레세이 숙주 세포에서 알파-갈락토시다아제 효소에 작동가능하게 연결된 신호 서열을 함유하는 융합 단백질을 발현시킴으로써 생성된다. 상기 구현예 중 일부에서, 알파-갈락토시다아제 효소는 채취된 것으로부터 배지에 분비된다. 대상 융합 단백질의 신호 서열은 트리코데르마 숙주 세포로부터 단백질 분비를 촉진시키는 임의의 신호 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이용되는 신호 서열은 트리코데르마 숙주 세포에 내생적이고, 반면 다른 구현예에서는 비내생적이다. 일부 다른 구현예에서, 이는 트리코데르마 sp. 숙주 세포로부터 많이 분비되는 것으로 알려진 단백질의 신호서열이다. 상기 신호 서열은 셀로바이오하이드로라제(cellobiohydrolase) I, 셀로바이오하이드로라제 II, 엔도글루카나제(endoglucanase) I, 엔도글루카나제 II, 엔도글루카나제 III, 알파-아밀라아제, 아스파르틸 프로테아제, 글루코아밀라아제, 만나나아제, 글루코시다아제 및 보리(barley) 엔도펩티다아제 B (예를 들어, Saarelainen, Appl. Environ. Microbiol., 63: 4938-4940 [1997] 참조) 의 신호 서열을 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다. 일부 구현예에서, 실시예에서 추가로 기술될 바와 같이, 알파-갈락토시다아제는 자신의 신호 서열 (즉, 상기 Margolles-Clark et al 에 기술된 바와 같은 AGL1, AGL2 또는 AGL3 신호 서열) 을 사용하여 분비된다.

일부 구현예에서, 알파-갈락토시다아제는 알파-갈락토시다아제-인코딩 핵산에 동작가능하게 연결된 신호 서열-인코딩 핵산 (여기서 핵산의 전이는 트리코데르마 숙주 세포로부터 알파-갈락토시다아제 부분의 분비에 대한 N-말단 신호 서열을 갖는 알파-갈락토시다아제 부분을 포함하는 융합 단백질을 생성함) 을 포함하는 핵산을 사용하여 생성된다.

일부 구현예에서, 융합 단백질은 신호 서열 이외에, T. 레세이 sp. 숙주 세포에 의해 많이 분비되고, 이에 내생적인 단백질의 부분인 "담체 단백질" 을 추가로 포함한다. 적합한 담체 단백질은 T. 레세이 만나나아제 I (Man5A, 또는 MANI), T. 레세이 셀로바이오하이드로라제 II (Cel6A 또는 CBHII) (예를 들어, Paloheimo et al, Appl. Environ. Microbiol., 69:7073-7082 [2003] 참조) 또는 T. 레세이 셀로바이오하이드로라제 I (CBHI) 의 것을 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다. 일부 구현예에서, 담체 단백질은 CBHl 코어 부위 및 CBHl 연결 부위의 일부를 포함하는 절단된 T. 레세이 CBHl 단백질이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 동작가능한 연결로 아미노-말단에서 카르복시-말단까지, 신호 서열, 담체 단백질 및 알파-갈락토시다아제를 함유하는 융합 단백질을 인코딩하는 핵산을 포함한다.

일부 구현예에서, 알파-갈락토시다아제의 코딩 서열은 사용되는 숙주 세포에서 알파-갈락토시다아제의 발현을 위해 최적화된 코돈이다. 트리코더마 레세이를 포함하는, 많은 숙주 세포에서 각 코돈의 사용을 나열한 코돈 사용표는 당업계 (예를 들어, Nakamura et al, Nucl. Acids Res., 28: 292 [2000] 참조) 에 공지되어 있거나, 용이하게 추론가능하기 때문에, 상기 핵산은 발현되는 알파-갈락토시다아제의 아미노산 서열을 제공하기 위해 용이하게 설계된다.

일부 구현예에서, 코딩 서열 이외에, 핵산은 숙주 세포에서 알파-갈락토시다아제 효소의 발현에 필요한 기타 원소를 추가로 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 핵산은 코딩 서열의 전사를 위한 촉진자, 및 전사 종결자를 함유한다. 전형적인 촉진자는 T. 레세이 cbh1, cbh2, egl1, egl2, eg5, xln1 및 xln2 촉진자, 또는 이의 이종 또는 절단 형태(truncated version)를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 촉진자는 T. 레세이 cbh1 촉진자이다. 적합한 종결자는 T. 레세이 cbh1, cbh2, egl1, egl2, eg5, xln1 및 xln2 종결자, 및 예를 들어 A. 니거 (A. niger ) 또는 A. 아와모리 (A. awamori ) 글루코아밀라아제 유전자 (상기 Nunberg et al., [1984]; 및 상기 Boel et al., [1984] 참조), 아스퍼질러스 니둘란스 ( Aspergillus nidulans ) 안트라닐레이트 신타아제 유전자, 아스퍼질러스 오라이재 ( Aspergillus oryzae ) TAKA 아밀라아제 유전자, 또는 A. 니둘란스 trpC (Punt et al., Gene 56: 117-124 [1987]) 의 종결자를 포함하는 다양한 종결자를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 일부 구현예에서, 촉진자 및/또는 종결자는 트리코데르마 sp . 숙주 세포에 고유(native)하고, 한편 다른 구현예에서, 그들은 비-내생적이다.

일부 구현예에서, T. 레세이 숙주 세포는 알파-갈락토시다아제 효소의 발현에 이용된다. 일부 바람직한 구현예에서, 세포는 유전학적으로 변형되어 상기 세포에 내생적인 분비된 단백질의 발현을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 세포는 결실되거나 비활성적인, 하나 이상의 고유 유전자, 특히 분비된 단백질을 인코드하는 유전자를 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 하나 이상의 프로테아제-인코딩 유전자 (예를 들어, 아스파르틸 프로테아제-인코딩 유전자; Berka et al., Gene 86:153-162 [1990]; 및 미국 특허 제 6,509,171 참조) 또는 셀룰라아제-인코딩 유전자는 결실되거나 비활성화된다. 일부 구현예에서, 트리코데르마 sp. 숙주 세포는 WO 05/001036 에 기재된 바와 같이, cbh1 , cbh2 및 egl1, 및 egl2 유전자에서 비활성화 결실을 함유하는 T. 레세이 숙주 세포이다. 일부 구현예에서, 상기 기술된 핵산은 트리코데르마 sp . 숙주 세포의 핵 게놈에 존재하고, 한편 다른 구현예에서, 트리코데르마 숙주 세포에서 복제된 플라스미드에 존재한다.

핵산은 다수의 적합한 기술 (예를 들어, 전기 천공법, 핵 미세주사법(nuclear microinjection), 형질도입, 형질감염, [예를 들어, 리포펙션(lipofection) 매개성 및 DEAE-덱스트린 매개성 형질감염], 인산칼슘 DNA 침전물로 인큐베이션, DNA-코팅 미세투사(microprojectile)로 고속 조사(high velocity bombardment), 및 원형질체 융합) 중 임의의 하나를 사용하여 트리코데르마 숙주 세포에 도입되는 것으로 의도된다. 유전자 형질전환 기술은 종래기술에 공지되어 있다 (예를 들어, WO 05/001036; 미국 특허 제 6,022,725 호; 미국 특허 제 6,103,490 호; 미국 특허 제 6,268,328 호; 및 공개 미국 특허 출원 제 20060041113 호, 20060040353 호, 20060040353 호 및 20050208623 호, 이들 모두는 본원에 참고인용됨). 일부 구현예에서, 형질전환을 위한 트리코데르마의 제조법은 균질의 균사체로부터 원형질체의 제조법을 포함한다. (Campbell et al., Curr. Genet. 16:53-56 [1989] 참조). 일부 구현예에서, 균사체는 발아 영양 포자(vegetative spore)으로부터 수득된다.

일부 구현예에서, 배지에 분비되면, 알파-갈락토시다아제 효소는 당업계에서 공지된 임의의 통상적인 방법 (예를 들어, 침전법, 원심분리법, 친화력법, 여과법 또는 기타 방법) 을 사용하여 회수된다. 예를 들어, 친화력 크로마토그래피 (Tilbeurgh et al, FEBS Lett., 16:215 [1984]); 높은 분해력이 있는 물질을 사용한 이온교환(Medve et ct\., (J. Chromatography A 808: 153 [1998])을 포함하는 이온-교환 크로마토그래피법 (Goyal et al, Biores. Technol., 36:37 [1991]; Fliess et al, Eur. J. Appl. Microbiol. Biotechnol., 17:314 [1983]; Bhikhabhai et al, J. Appl. Biochem. 6:336 [1984]; 및 Ellouz et al, Chromatography 396:307 [1987]); 소수성 상호작용 크로마토그래피(Tomaz and Queiroz, J. Chromatography A 865:123 [1999]; 2 상 분배 (Brumbauer et al, (Bioseparation 7:287 [1999]); 에탄올 침전; 역상 HPLC; 실리카 또는 양이온-교환 수지 상 크로마토그래피 (예를 들어, DEAE); 크로마토포커싱; SDS-PAGE; 황산암모늄 침전; 또는 겔 여과법 이용 (예를 들어, Sephadex G-75)에서 유용함을 발견하였다. 일부 구현예에서, 알파-갈락토시다아제는 배지의 기타 성분으로부터 정제없이 사용된다. 이들 구현예 중 일부에서, 배지는 간단히 농축시키고 나서, 성장 배지의 성분으로부터 단백질의 추가 정제 없이 사용되거나 임의의 추가 변형 없이 사용된다.

세정 조성물

본 발명은 전술된 알파-갈락토시다아제 효소를 포함하는 세정 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 세정 조성물은 직물 세정 조성물 (즉, 세탁물 세제), 표면 세정 조성물, 식기류 세정 조성물 또는 자동 식기세척기 세제 조성물이다. 예가 되는 세정 조성물의 제형물은 본원에 참조 인용되고 있는 WO0001826 에 상세히 기술되어 있다.

일부 구현예에서, 요지인 세정 조성물은 약 1 중량% 내지 약 80 중량% (약 5 중량% 내지 약 50 중량% )의 계면활성제 (예를 들어, 비이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 음이온성 계면활성제 또는 쯔비터이온성 계면활성제 또는 이의 임의의 혼합물)를 하나 이상 함유한다. 예가 되는 계면활성제에는 이에 제한되는 것은 아니지만, 선형 알킬 벤젠 술포네이트 및 선형 알킬 나트륨 술포네이트를 포함하는 알킬 벤젠 술포네이트 (ABS), 알킬 페녹시 폴리에톡시 에탄올 (예를 들어, 노닐 페녹시 에톡실레이트 또는 노닐 페놀), 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 및 모노에탄올아민이 포함되나, 이에 한정되는 것은 아니다. 세제, 특히 세탁물 세제에서 존재될 수 있는 예가 되는 계면활성제는, U.S. 특허 제 3,664,961 호, 제 3,919,678 호, 제 4,222,905 호, 및 제 4,239,659 호에 기술되어 있다.

일부 구현예에서, 세정 조성물은 고형 (예를 들어, 분말 또는 정제 형태) 또는 액체 형태이다. 일부 다른 구현예에서, 세정 조성물은 하나 이상의 버퍼 (예를 들어, 탄산나트륨, 중탄산나트륨), 세제 세척 강화제, 표백제, 표백제 활성제, 효소, 효소 안정화제, 비누거품 부스터, 억제제, 항변색제, 항부식제, 오점 현탁화제, 방오제 (soil release agent), 살균제, pH 조절제, 비강화제 알칼리원, 킬레이트제, 유기 또는 무기 충전제, 용매, 하이드로트롭 (hydrotrope), 형광 발광제 (optical brightener), 염료, 향료 등을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 세정 조성물은 세제와 조합하여 세탁 첨가제로서 사용된다.

일부 구현예에서, 요지의 세정 조성물은 기타 얼룩을 제거하기 위해, 비-전분 식품 다당류 분해 효소 (예를 들어, 헤미셀룰라아제, 만나나아제, 펙티나아제, 자일라나아제, 또는 펙테이트 리아제(pectate lyase)) 및 임의로 프로테아제, 예컨대 서브틸리신 프로테아제 및/또는 SSI 단백질, 리파아제, 아밀라아제, 셀룰라아제, 큐티나아제, 리파아제, 옥시도-리덕타아제 등과 같은 하나 이상의 추가 효소를 추가로 함유한다.

기타 활성 성분, 담체, 하이드로트롭, 가공 보조제, 염료 또는 안료, 액체 제형물용 용매 등이 포함하는, 세제 세정 조성물에서 유용한 광범위한 종류의 기타 성분들의 유용함을 또한 본원 조성물에서 발견하였다. 추가 거품이 바람직한 구현예에서, C₁₀-C₁₆ 알콜아미드와 같은 비누거품 부스터가 전형적으로 약 1% 내지 약 10 % 수준으로 조성물에 혼입된다.

일부 구현예에서, 세제 조성물은 물 및 담체와 같은 기타 용매를 함유한다. 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 이소프로판올로 예시되는 저분자량 1 차 또는 2 차 알코올이 사용하기 적합하다. 1가 (Monohydric) 알코올이 계면활성제를 용해하는데 바람직하나, 약 2 내지 약 6 개 탄소수 및 약 2 내지 약 6 개의 히드록시기를 포함하는 폴리올 (예를 들어, 1,3-프로판디올, 에틸렌 글리콜, 글리세린 및 1,2-프로판디올) 에서 유용함이 또한 발견된다. 일부 구현예에서, 조성물은 약 5 % 내지 약 90 % (전형적으로 약 10 % 내지 약 50 %) 의 상기 담체를 포함한다.

일부 구현예에서, 본원의 세제 조성물은 수성 세정 작업 중에 사용되는 동안, 세정수의 pH 가 약 5.0 내지 약 11.5 이 되도록 제형된다. 따라서, 완제품은 전형적으로 상기 범위 내로 제형된다. 권고되는 취급값으로 pH 를 조절하는 기술에는, 버퍼, 알칼리, 산 등을 이용하는 것이 포함되고, 이는 익히 당업자에게 공지되어 있다. 일부 구현예에서, 세정 조성물은 작동 pH 가 약 pH 9.0 내지 약 pH 11.5, 약 pH 9.0 내지 약 pH 9.5, 약 pH 9.5 내지 약 pH 10.0, 약 pH 10.0 내지 약 pH 10.5, 약 pH 10.5 내지 약 pH 11.0, 또는 약 pH 11.0 내지 약 pH 11.5 의 범위에 있는 자동 식기세척기 세제를 포함한다. 일부 기타 구현예에서, 세정 조성물은 작동 pH 가 약 pH 7.5 내지 약 pH 8.5, 약 pH 7.5 내지 약 pH 8.0, 또는 약 pH 8.0 내지 약 pH 8.5 의 범위에 있는 액체 세탁 세제이다. 일부 기타 구현예에서, 세정 조성물은 작동 pH 가 약 pH 9.5 내지 약 pH 10.5, 약 pH 9.5 내지 약 pH 10.0, 또는 약 pH 10.0 내지 약 pH 10.5 의 범위에 있는 고체 세탁 세제를 포함한다.

본원에서 세정 조성물은 유효량의 알파-갈락토시다아제를 필요로한다. 일부 구현예에서, 요지의 알파-갈락토시다아제 효소의 세정 조성물 내 작용 농도는 약 0.01 ppm (100 만분의 1, w/v) 내지 약 1000 ppm, 약 0.01 ppm 내지 약 0.05 ppm, 약 0.05 ppm 내지 약 0.1 ppm, 약 0.1 ppm 내지 약 0.5 ppm, 약 0.5 ppm 내지 약 1 ppm, 약 1 ppm 내지 약 5 ppm, 약 5 ppm 내지 약 10 ppm, 약 10 ppm 내지 약 100 ppm 이다.

과탄산염, 과붕산염 등과 같은 각종 표백 화합물이 또한 본 발명의 세정 조성물에서 유용함이 또한 발견된다. 일부 구현예에서, 이들은 전형적으로는 약 1 중량% 내지 약 15 중량% 의 수준으로 존재한다. 일부 추가 구현예에서, 상기 조성물은 또한 표백 활성화제 (예를 들어, 테트라아세틸 에틸렌디아민, 노나노일옥시벤젠 술포네이트 등)를 포함하며, 이는 당업계에 공지되어 있다. 취급값은 전형적으로 약 1 중량% 내지 약 10 중량% 범위이다.

각종 방오제, 특히 음이온성 올리고에스테르 유형의 방오제, 각종 킬레이트제, 특히 아미노포스포네이트 및 에틸렌디아민디숙시네이트, 각종 점토 오점 제거제 (clay soil removal agent), 특히 에톡실레이트화 테트라에틸렌 펜타민, 각종 분산제, 특히 폴리아크릴레이트 및 폴리아스파라테이트, 각종 발광제, 특히 음이온성 발광제, 각종 비누거품 억제제, 특히 실리콘 및 2 차 알코올, 각종 직물 연화제, 특히 스멕타이트 점토 (smectite clay) 등이 약 1 중량% 내지 약 35 중량% 의 범위 값으로 본 조성물에서 유용함이 발견된다. 표준 제형 방식이 당업자에게는 익히 공지되어 있다.

효소 안정화제 또한 본 발명의 세정 조성물의 일부 구현예에서 유용함이 발견된다. 이러한 안정화제에는 프로필렌 글리콜 (바람직하게는 약 1 % 내지 약 10 %), 나트륨 포르메이트 (바람직하게는 약 0.1 % 내지 약 1 %), 및 칼슘 포르메이트 (바람직하게는 약 0.1% 내지 약 1%) 이 포함되나, 이에 한정되는 것은 아니다.

일부 구현예에서, 경질의 표면 세정 조성물 및 직물 세정 조성물은 약 5 중량% 내지 약 50 중량% 의 값의 각종 강화제를 추가로 포함한다. 전형적인 강화제에는, 1-10 미크론 제올라이트, 폴리카르복실레이트, 예컨대 시트레이트 및 옥시디숙시네이트, 층을 이룬 실리케이트, 포스페이트 등이 포함된다. 기타 통상적인 강화제는 표준 제형 방식에 기술되어 있다.

기타 임의의 성분들에는 킬레이트제, 점토 오점 제거/재퇴적 방지제, 중합체성 분산제, 표백제, 광택제, 비누거품 억제제, 용매 및 미용제가 포함된다.

본 세정 조성물은 적합한 세정 방법에서 유용함이 발견된다. 일부 구현예에서, 세정 방법은 상기 알파-갈락토시다아제 효소의 활성에 적합한 조건하에서 트리코더마 레세이의 알파-갈락토시다아제에 관련된 아미노산 서열을 포함하는 단리된 알파-갈락토시다아제 효소와 대상체 (예를 들어, 직물 또는 식기) 을 접촉시켜 대상을 세정하는 단계를 포함한다. 이용되는 세정 조성물의 작동 pH 에 따라, 알파-갈락토시다아제 효소는 예를 들어, 약 pH 5 내지 약 6.5, 약 pH 6.5 내지 약 7.5, 약 pH 7.5 내지 약 8.5, 약 pH 9.5 내지 약 10.5, 또는 약 pH 10.0 내지 약 11.5 의 pH 에서 대상체와 접촉된다. 일부 구현예에서, 대상체는 오염된 대상체이고, 일부 다른 구현예에서, 대상체는 갈락토만난 검 (예를 들어, 구아검 또는 리마콩 검 등)와 같은 비-전분 식품 다당류를 함유하는 식료품으로 얼룩지게 한다. 일부 다른 구현예에서, 대상체는 초콜렛 크림, 아이스 크림 또는 샐러드 드레싱으로 얼룩져 있다.

본원에 기재된 세정 조성물은 알파-갈락토시다아제를 함유하지 않은 동등한 세정 조성물보다 특정 얼룩(예를 들어, 갈락토만난 다당류를 함유하는 식료품 얼룩) 제거에 더욱 효과적이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 세정 조성물은 알파-갈락토시다아제 효소를 함유하지 않은 다른 동등한 세정 조성물과 비교하였을 때 얼룩 제거에 더욱 효과적이다. 실시예 4 에 기술된 바와 같이 표준 반사계-기초 어세이를 따르면, 예를 들어 본 발명의 일부 세정 조성물은 알파-갈락토시다아제를 함유하지 않은 동등한 세정 조성물보다 약 20 % 이상, 약 40 % 이상, 약 60 % 이상, 약 80 % 이상 또는 약 90 % 이상 더 얼룩을 제거하고/하거나 탈색시킨다.

하기의 실시예는 통상의 기술자가 본 발명을 제조하고 사용하는 방법에 대한 완전한 개시 및 설명과 함께 제공되는 것이고, 본 발명의 범주를 한정하거나 하기 실험이 수행되는 전부 또는 유일한 실험인 것을 나타내는 것으로 의도되는 것이 아니다. 사용되는 수 (예를 들어, 양, 온도 등)에 관한 정확성을 증명하기 위해 노력하지만, 일부 실험오차 및 편차가 고려되어야 한다. 달리 언급되지 않은 한, 부는 중량부이고, 분자량은 중량 평균 분자량이며, 온도는 섭씨 온도이고, 압력은 대기압이거나 이에 근접하다.

실시예 1

알파- 갈락토시다아제 유전자의 클로닝

트리코데르마 레세이 가닥 QM6A 의 agl1, agl2, agl3 및 manl 유전자의 코딩 서열을 하기 프라이머를 이용하여 PCR 로 증폭시키고, GATEWAY™ 재조합 시스템 (Invitrogen Corporation, Carlsbad, CA) 을 이용하여 pTREX3g 벡터로 클론화되었다:

pTREX3g 는 WO05/001036 의 실시예 6 에 상세히 기술되어 있다.

실시예 2

T. 레세이 세포의 형질전환

RL-P37 (Sheir-Neiss et al, Appl. Microbiol. Biotechnol., 20:46-53 [1984]; 미국 특허 제4,797,361호)로부터 본래 유도된 쿼드(quad) 결실된 (Δchb1, Δc h b2, Δegl1, 및 Δegl2) T. 레세이 가닥 (WO 05/001036) 또는 1A52pyr4^- 가닥으로 모든 벡터를 유전자총(particle bombardment)에 의해 전이시켰다.

형질전환된 트리코데르마 가닥으로부터 포자 현탁액 (대략 5×10⁸ 포자/ml) 을 제조하였다. 포자 현탁액 lOOul - 200ul 을 MM 아세트아미드 배지 (MM 아세 트아미드 배지는 하기 조성물을 포함한다: 0.6 g/L 아세트아미드; 1.68 g/L CsCl; 20 g/L 글루코오스; 20 g/L KH₂PO₄; 0.6 g/L CaCl₂.2H₂O; 1 ㎖/L 1OOOX 미량원소 용액; 20 g/L 노블레 아가(Noble agar); pH 5.5. 1OOOX 미량원소 용액 함유 5.0 g/l FeSO₄.7H₂O, 1.6 g/l MnSO₄.H₂O, 1.4 g/1 ZnSO₄.7H₂O 및 1.0 g/l CoCl₂.6H₂O) 의 플레이드 중심에 뿌렸다. MM 아세트아미드 배지의 표면의 포자 현탁액을 건조시켰다.

트리코데르마 세포의 생탄도법(biolistic) 형질전환은 제조자의 사용설명서에 따라 Bio-Rad (Hercules, CA) 사의 Biolistic® PDS-1000/he Particle Delivery System 을 사용하여 달성하였다 (예를 들어, WO 05/001036 및 미국 특허 공개 제 2006/0003408 호 참조).

실시예 3

효소 활성 분석

agl1, agl2, agl3 및 man1 에 대한 벡터를 함유하는 세포 배양액을 배양 플라스크에서 성장시키고, 각 배양액의 상등액을 SDS PAGE 를 사용하여 분석하였다. 각 배양 상등액의 경우, 알파-갈락토시다아제 활성을 기질로서 4-니트로페닐-알파-D-갈락토피라노시드를 사용하여 맥클베인(Mcllvaine) 버퍼에서 측정하였다. 하기 간략히 기재된 바와 같이, Sigma 프로토콜 (Enzymatic Assay of Alph-Galactosidase, Sigma Product Information; 또한 McCleary, Meth. Enzymol., 160:627-632 [1988]; 및 A. niger 및 Guar Seed, Megazyme 의 알카-갈라토시다아제 기술 데이터 시트 참조) 을 사용하여 효소 활성 어세이를 수행하였다.

우선, 기질 0.10 ㎖ 을 16 x 125 ㎜ 유리관에 투입하고, 수조에서 바람직한 온도로 5' 이상을 인큐베이트 함으로써 온도로 가열하였다. 그 후, 희석된 효소 0.10 ㎖ 를 15 초 간격으로 각 관에 투입하고, 보텍스를 발생시켜 효소와 기질을 혼합하였다. 상기 혼합물을 정해진 시험 온도 (3O ℃, 37 ℃, 4O ℃, 45 ℃, 6O ℃ 및 75 ℃) 에서 5' 에 대해 인큐베이트 하였다. 반응을 중지시키기 위해, 2% 탄산나트륨 3.0 ㎖ 를 동일한 15 초 간격으로 투입하였다. 용액을 혼합하고, 41O nm 에서 판독하기 위해 수조에서 튜브를 제거하였다.

이러한 실험에서, 효소 희석액은 각 pH (pH 가 2.1, 2.5, 3, 4, 5, 6, 7 인 Mcllvaine; 80. pH 4.5인 IM 나트륨 아세테이트) 인 적절한 버퍼로 10 mM 까지 제조하였다. 초기 시험에 대한 효소 기질은 4-니트로페닐-알파-D-갈락토피라노시드 (Sigma, cat: N0877, MW: 301.25) 이었다. 공시험에는 기질, 중지 시약 및 효소 공액(p-니트로페놀을 기질 기준으로 사용하였음)을 포함하는 각 시험을 포함시켰다.

SDS-PAGE 겔을 도에 나타내었다. 2-4 는, 각 상등액에 대한 대략 알맞은 크기의 단백질을 제조하였음을 나타낸다. 사용된 어세이 조건 하에서, AGL1 (예측분자량은 45.7 kDa 임) 의 최적 pH 가 pH 5 이고, 최적 온도가 약 6O ℃ (도 2)이며, AGL2 (예측분자량은 79.5 kDa 임) 의 최적 pH 는 pH 4-5 이고, 최적 온도는 약 6O ℃ (도 3) 이며, AGL3 (예측분자량은 66.3 kDa 임) 의 최적 pH 는 pH 2-4 이고, pH 4.5 에서 최적 온도는 약 6O ℃ 이며, pH 2.5 에서 최적 온도는 45 ℃ 이 다(도 4).

실시예 4

트리코데르마 알파- 갈락토시다아제 단백질의 세정 활성에 대한 디스크 어세이 분석

하기 방법을 사용하여, 초콜렛 크림, 샐러드 드레싱, 및 구아-색소로 얼룩진 천 조각을 세정하기 위한 AGL1, AGL2 및 AGL3 의 능력을 시험하였다.

색소가 들어있는 샐러드 드레싱 (STC CFT CS-6), 초콜렛 크림 (STC EMPA 160) 및 구아-색소 (STC CFT CS-43) 으로 면 조각을 오염시켰다 (Test Fabrics, Inc. West Pittston, PA, USA). 초콜릿 아이스 크림 원 (10 ㎝ 면 조각에 4 ㎝ 오염) 을 Warwick-Equest Limited, Consett, County Durham, England 로부터 수득하였다.

마이크로플레이트 어세이를 위해 천 조각을 5/8" 다이 커터가 장착된 피륙 Punch Press Model B로 15 ㎝ 원 (디스크)를 절단하였다. 싱글 디스크를 24-웰 마이크로플레이트 (Costar 3526) 의 각 웰에 두었다. 리터 당 함유하는 세척 용액 1 (1) ㎖, AATCC HDL (표준 액체 세제) 세제 1.5 ㎖, pH 7.4 Hepes 버퍼 50 ㎜ 를 각 웰이 첨가하였다. 희석된 효소 1 내지 20 ug 를 용적식(positive displacement) 피펫으로 첨가하였다. AATCC 2003 표준 액체 세제에는 12% 선형 알킬 설포네이트, 8% 알코올 에톡실레이트, 8% 프로판디올, 1.2% 시트르산, 4% 지방산, 4% 수산화나트륨, 및 나머지는 물이 함유되어 있었다. 대조 웰은 효소를 함유하지 않았다. 마이크로플레이트를 플라스틱 뚜껑으로 덮고, 100 rpm 으로 천천히 회전시키면서 37 ℃ 에서 인큐베이트 하였다. 4-16 시간 후, 상등액을 흡입 제거하고, 각 웰을 pH 7.3 Dulbecco's PBS 1.5 ㎖ 으로 3 회, 증류수 1.5 ㎖ 로 3 회 세척하였다. 웰에서 각 디스크를 제거하고, 공기 중에 밤새 건조시켰다. 디스크를 외관상으로 검사하고, 표준 백색 타일에 눈금이 표시된 Minolta 반사계 CR-200 로 분석하였다. 대조군 및 시험 샘플 당 일반적으로 4 개 복제를 갖는 데이타의 백분율 표준편차로 평균 L 값을 계산하였다.

인산염 없이 pH 10 인 AATCC HDD 0.015% 내지 0.1% 및 인산염이 없는 WFK ADW 세제 유형 B 0.015% 내지 0.1% 이 사용된 중량 세제 (HDD) 또는 자동 식기 세척 (ADW) 세제를 사용하여 실험을 수행하였다. 광택제가 없는 AATCC 1993 표준 참고 중량 세제에는 선형 알킬 설포네이트 18 %, 선형 지방 알코올 에톡실레이트 2 % 및 탄산나트륨은 100 % 가 될 때까지, 제올라이트 A 25 %, 소다회 18 %, 규산나트륨 0.5 %, 황산나트륨 22.13 %, 수분 10 % 및 공중합체, 효소, 또는 카르복실 메틸 셀룰로오스를 위한 공간 (6.28%)이 포함되었다. 광택제 및 인산염이 없는 WFK 자동 식기세척 세제 타입 B 에는 무수 구연산나트륨 30 %, 말레산 나트륨염 12 %, 과붕산나트륨 모노하이드레이트, 테트라아세틸 에틸렌디아민 2 %, 규산나트륨 25 %, 선형 지방 알코올 에톡실레이트 2 %, 및 무수 탄산나트륨은 100 % 가 될 때까지 포함시켰다.

하기 실시예 및 수반하는 도에서, AGL1 이 함유된 단백질 추출물은 NSP-6 로 칭하고, AGL2 이 함유된 단백질은 NSP-8 로 칭하며, AGL3 이 함유된 단백질 추출물은 NSP-9 으로 칭하였다.

도 5 에서 보이는 바와 같이, NSP-6 (알파-갈락토시다아제 1), NSP-8 (알파-갈락토시다아제 2), 및 NSP-9 (알파-갈락토시다아제 3) 은 마이크로플레이트 디스크 방법을 사용하여 0.15% AATCC 강력 액체 세제에서 초콜렛 크림 얼룩에 대한 우수한 세정력을 나타내었다. NSP-20, 베타-만난나아제 CWDE 는 세포벽 분해 효소(cell-wall degrading enzyme)의 약어이다. 도 6 은 pH 7.4 인 0.022% AATCC 중량 액체 세제에서 샐러드 드레싱 얼룩에 대한 알파-갈락토시다아제 1 세정력을 보여준다. 도 7 은 저농도 (0.5 내지 1.0 ppm)의 NSP-8 (알파-갈락토시다아제 2)으로 0.15% AATCC 강력 액체 세제에서 구아-색소 기술 얼룩에 대한 유의한 세정력을 나타냄을 보여준다.

실시예 5

트리코데르마 알파- 갈락토시다아제 단백질의 세정 활성에 대한 터그오미터(Tergotometer ) 분석

터그오미터 시험에 37 ℃ 로 유지된 6 팟(pot) Tergotometer Model 7243S (U. S. Testing, Co. Inc. Hoboken, N. J.) 을 사용하였다. 교반 속도를 100 rpm 로 설정하였다. 초콜렛 아이스 크림으로 6개의 원을 그린 면 천 조각을 경도가 6 gpg (1.735 M 염화칼슘 및 0.67 M 염화마그네슘을 함유한 스톡 15000 gpg 경도 용액으로 희석됨) 이고, pH 7.4 인 5OmM Hepes 버퍼를 함유한 AATCC HDL 세제 1 리터에 넣었다.

도 8 은 30 분이내에 터그오미터 조건하에서 아이스 크림 얼룩 천 조각에 대한 효소 1 ppm 를 포함한 알파-갈락토시다아제 2 (NSP-8) 의 세정력을 보여준다.

도 9 는 알파-갈락토시다아제 셋 모두, 특히 알파-갈락토시다아제 2 (NSP-8) 가 pH 10.5 인 0.015% 자동 식기세척 세제 (WFK) 또는 pH 10.2 인 0.015% AATCC 고형 세탁 세제에 20 ppm 으로 함유될 때 마이크로플레이트 디스크 방법 (실시예에서 보여지는 바와 같음) 에서 유의한 세정력을 나타냄을 보여준다.

상기 실시예를 통해 트리코더마 레세이 알파-갈락토시다아제 효소가 샐러드 드레싱, 초콜렛 크림, 아이스 크림 및 구아-색소 얼룩으로 얼룩진 면 천조각으로부터 오염을 효과적으로 제거한다는 것을 증명하였다. 인위적인 구아 얼룩에 대한 활성은 샐러드 드레싱 및 아이스 크림이 성분으로서 구아검을 함유하는 것과 같은 세정력에 근거할 수 있다. 시험한 알파-갈락토시다아제 효소는 pH 범위내에서 기대 이상으로 잘 수행하였다.

상기 상세한 설명에서 언급된 모든 공개물 및 특허는 본원에서 참조인용된다. 본 발명의 기재된 방법 및 시스템에 있어 다양한 변형 및 변경은 본 발명의 범주 및 사상으로부터 벗어나지 않고, 당업자에게 명확할 것이다. 본 발명이 특정 바람직한 구현예와 관련하여 기재되더라도, 그러한 특정 구현예에 지나치게 한정되지 않아야 하는 것이 당연하다. 실제로, 당업계 및/또는 관련된 분야에서 의 기술자에게 명확한, 본 발명을 실행하기 위한 기재된 방식의 다양한 변형은 본 발명의 범위 내에 있음을 의도한다.

본 발명의 예가 되는 구현예를 기재함에 있어, 개시된 구현예를 다양하게 변형이 이뤄질 수 있고, 이러한 변형은 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 의도된다는 것을 당업자에게는 자명할 것이다.

당업자는 본 발명이 목적을 달성하고, 언급된 결과 및 장점뿐 아니라 고유의 것을 수득하기 위해 잘 조정된다는 것을 쉽게 인지한다. 본원에 기재된 조성물 및 방법은 대표적이고, 본 발명의 범주를 한정하는 것으로 의도된 것은 아니다. 본 발명의 범주 및 사상을 벗어나지 않고 본원에 개시된 본 발명에 다양한 치환 및 변형이 이뤄질 수 있다는 것을 당업자는 매우 명백하다.

본원에 설명으로 기재된 본 발명은 본원에 구체적으로 개시되지 않은 임의의 요소 또는 요소들, 한정 또는 한정들이 없어도 적합하게 실시될 수 있다. 사용된 용어 및 표현은 상세한 설명의 용어로서 사용되고 한정되지 않으며, 그러한 용어 및 표현의 사용에 있어서, 제시되고 기재된 특징 또는 그의 일부의 임의의 동등물을 배제하려는 의도가 없으나, 청구된 본 발명의 범주 내에서 다양한 변형이 가능하다는 것이 인지된다. 그러므로, 본 발명이 일부의 구현예 및 임의의 특징을 참고로 하여 구체적으로 개시되어 있다 하더라도, 본원에 개시된 개념의 변형 및 변경이 당업자에 의해 재분류될 수 있고, 이러한 변형 및 변경은 청구의 범위에 의해 정의된 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 고려되는 것으로 이해되어야만 한다.

본 발명은 본원에 광범위하고 일반적으로 기재되어 있다. 일반적인 개시 내에 포함되는 조금 더 좁은 종 및 하부 속명 그룹 각각이 또한 본 발명의 일부를 형성한다. 여기에는, 종으로부터 임의의 요지 물질을 제거하는 부정적인 한정이나 조건과 함께, 본 발명의 종명 기재가, 시행된 물질이 본원에서 구체적으로 언급이 되었든 그렇지 않든 간에 상관없이 포함된다.

상기 상세한 설명의 특정 양상은 수반하는 도면과 함께 해석할 때 가장 쉽게 이해될 수 있다. 관행에 따라, 도면의 다양한 특징은 일정한 비율이 아닌 것을 강조한다. 반대로, 다양한 특징의 치수는 임의로 확장되거나 명확히 하기 위해 감소된다. 도면에 포함되어 있는 도는 하기와 같다:

도 1 은 pTrex3g 벡터 지도를 나타낸다.

도 2 는 AGL1 효소의 분석 결과를 보여주는 SDS PAGE 겔 및 두개의 그래프를 나타낸다.

도 3 은 AGL2 효소의 분석 결과를 보여주는 SDS PAGE 겔 및 두개의 그래프를 나타낸다.

도 4 는 AGL3 효소의 분석 결과를 보여주는 SDS PAGE 겔 및 두개의 그래프를 나타낸다.

도 5 는 초콜렛 크림 얼룩에 대한 베타-만나나아제 (NSP-20), AGL1 (NSP-6), AGL2 (NSP-8) 및 AGL3 (NSP-9)의 세정 활성을 보여주는 그래프이다.

도 6 은 샐러드 드레싱 얼룩에 대한 베타-만나나아제 (NSP-20) 및 AGL1 (NSP-6) 의 세정 활성을 보여주는 그래프이다.

도 7 은 구아 색소 얼룩에 대한 AGL2 (NSP-8) 의 세정 활성을 보여주는 그래프이다.

도 8 은 초콜렛 아이스 크림 얼룩에 대한 베타-만나나아제 (NSP-20) 및 AGL2 (NSP-8) 의 세정 활성을 보여주는 그래프이다.

도 9 는 WFK 자동 식기세척 세제 (ADW) 및 AATCC 세탁 세제에서 구아 색소 얼룩에 대한 베타-만나나아제 (NSP-20), AGL1 (NSP-6), AGL2 (NSP-8) 및 AGL3 (NSP-9)의 세정 활성을 보여주는 그래프이다.

<110> Danisco US Inc., Genencor Division MACDONALD, Hugh C. POULOSE, Ayrookaran J. <120> Cleaning Compositions Comprising Alpha-Galactosidase <130> 30962WO <140> PCT/US2008/002473 <141> 2008-02-26 <150> US 60/904,141 <151> 2007-02-28 <160> 8 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic primer <400> 1 ggggacaagt ttgtacaaaa aagcaggcta tgacccctca ctcgattgac c 51 <210> 2 <211> 52 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic primer <400> 2 ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtt caccagtttc ggcacttctt gc 52 <210> 3 <211> 49 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic primer <400> 3 ggggacaagt ttgtacaaaa aagcaggcta tgctcggcgc tccctctcc 49 <210> 4 <211> 54 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic primer <400> 4 ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtt catgtctgct tctccaaaaa cacc 54 <210> 5 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic primer <400> 5 ggggacaagt ttgtacaaaa aagcaggcta tgtcgcccag tgctgcagtt c 51 <210> 6 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic primer <400> 6 ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtc tagtgagtcc ttttcaggcg c 51 <210> 7 <211> 54 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic primer <400> 7 ggggacaagt ttgtacaaaa aagcaggcta tgatgatgct ctcaaagagt ctcc 54 <210> 8 <211> 55 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic primer <400> 8 ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtt catgtattca ggcattgcga gtacc 55

Claims

트리코더마 레세이의 알파-갈락토시다아제와 약 90 % 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 단리된 알파-갈락토시다아제 효소를 포함하는 세정 조성물.
제 1 항에 있어서, 하나 이상의 계면활성제를 추가로 포함하는 세정 조성물.
제 1 항에 있어서, 작동 pH 가 약 pH 5 초과인 세정 조성물.
제 1 항에 있어서, 고체인 세정 조성물.
제 1 항에 있어서, 액체인 세정 조성물.
제 1 항에 있어서, 세탁 세제를 포함하는 세정 조성물.
제 1 항에 있어서, 식기세척 세제를 포함하는 세정 조성물.
제 1 항에 있어서, 하나 이상의 추가 효소를 추가로 포함하는 세정 조성물.
제 8 항에 있어서, 추가 효소는 헤미셀룰라아제(hemicellulase), 만나나아 제(mannanase), 펙티나아제(pectinase), 아밀라아제(amylase), 자일라나아제(xylanase), 펙틴 리아제(pectin lyase), 프로테아제(protease), 셀룰라아제(cellulase), 큐티나아제(cutinase), 리파아제(lipase) 및 옥시도-리덕타아제(oxidoreductase)로부터 선택되는 세정 조성물.
제 1 항에 있어서, 단리된 알파-갈락토시다아제 효소가 트리코더마 레세이의 알파-갈락토시다아제와 면역학적으로 교차-반응성인 세정 조성물.
알파-갈락토시다아제 효소의 활성에 적합한 조건하에서 트리코더마 레세이의 알파-갈락토시다아제와 약 90 % 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 단리된 알파-갈락토시다아제 효소와 대상체를 접촉시켜, 상기 대상체를 세정시키는 단계를 포함하는 세정 방법.
제 11 항에 있어서, 약 pH 5 초과의 pH 에서 알파-갈락토시다아제를 상기 대상체와 접촉시키는 방법.
제 11 항에 있어서, 대상체가 오염된 대상체인 방법.
제 13 항에 있어서, 오염된 대상체가 비-전분 식품 다당류를 포함하는 방법.
제 14 항에 있어서, 비-전분 식품 다당류가 갈락토만난 검인 방법.
제 14 항에 있어서, 비-전분 식품 다당류가 구아검 또는 리마콩 검인 방법.
제 13 항에 있어서, 오염된 대상체가 초콜렛 크림, 아이스 크림 또는 샐러드 드레싱으로 얼룩져 있는 방법.
제 11 항에 있어서, 대상체가 직물인 방법.
제 11 항에 있어서, 대상체가 식기류인 방법.