KR20090114391A

KR20090114391A - 베타２아드레날린성 수용체 효능성 벤조티아졸론의 조합물

Info

Publication number: KR20090114391A
Application number: KR1020097016587A
Authority: KR
Inventors: 엘라인 브리젯 캐도간; 스테븐 코놀리; 데이비드 존 니콜스; 캐서린 엘리자베스 윌리; 알란 영
Original assignee: 아스트라제네카 아베
Priority date: 2007-02-08
Filing date: 2008-02-06
Publication date: 2009-11-03
Also published as: ES2368967T3; US20080242649A1; RU2009133255A; CO6210723A2; PE20081759A1; EP2117542A1; ATE520401T1; CY1111932T1; CN101652137A; PL2117542T3; TW200843750A; HRP20110695T1; DK2117542T3; EP2117542B1; EP2364704A1; RS51956B; PT2117542E; AR065277A1; GB0702456D0; JP2010518056A

Abstract

본 발명은 제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 또는 그의 염, 및 제2 활성 성분으로서 비스테로이드성 글루코코르티코이드 수용체 (GR 수용체) 효능제; 항산화제; CCR1 길항제; 케모카인 길항제 (CCR1이 아님); 코르티코스테로이드; CRTh2 길항제; DP1 길항제; 히스톤 디아세틸라제 유도제; IKK2 억제제; COX 억제제; 리폭시게나제 억제제; 류코트리엔 수용체 길항제; MPO 억제제; 아클리디늄 브로마이드, 글리코피롤레이트, 옥시트로퓸 브로마이드, 피렌제핀, 텔렌제핀, 티오트로퓸 브로마이드, 3(R)-(2-히드록시-2,2-디티엔-2-일아세톡시)-1-(3-페녹시프로필)-1-아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드, 3(R)-1-페네틸-3-(9H-크산텐-9-카르보닐옥시)-1-아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 또는 (3R)-3-[(2S)-2-시클로펜틸-2-히드록시-2-티엔-2-일아세톡시]-1-(2-페녹시에틸)-1-아조니아비시클로[2.2.2]악탄 브로마이드인 무스카린 길항제; p38 억제제; PDE 억제제; PPARγ 효능제; 프로테아제 억제제; 스타틴; 트롬복산 길항제; 혈관확장제; 또는 ENAC 차단제 (상피 나트륨 채널 차단제)로부터 선택된 것을 포함하는 제약 생성물, 및 호흡기 질환의 치료에 있어서의 그의 용도를 제공한다.

호흡기 질환, 만성 폐색성 폐 질환, 천식, 아드레날린성 수용체, 조합물

Description

베타２아드레날린성 수용체 효능성 벤조티아졸론의 조합물 {COMBINATIONS OF BETA-2-ADRENOCEPTOR AGONISTIC BENZOTHIAZOLONE}

본 발명은 호흡기 질환 (예를 들어, 만성 폐색성 폐 질환 (COPD) 또는 천식)을 치료하는데 사용하기 위한 2 이상의 제약 활성 물질의 조합물에 관한 것이다.

폐의 본질적인 기능은 취약한 구조를 필요로 하며, 이는 오염물질, 미생물, 알레르겐 및 발암물질을 비롯한 환경에 대해 수없이 노출된다. 생활 양식의 선택 및 유전적 구성의 상호작용으로부터 발생된 숙주 인자는 이러한 노출에 대한 반응에 영향을 미친다. 폐의 상해 또는 감염은 다양한 호흡계 질환 (또는 호흡기 질환)을 일으킬 수 있다. 다수의 이러한 질환은 공중 보건의 중요성을 높인다. 호흡기 질환에는 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS), 직업성 폐 질환, 폐암, 결핵, 섬유증, 진폐증, 폐렴, 기종, 만성 폐색성 폐 질환 (COPD) 및 천식이 포함된다.

상기한 것 중에서 가장 일반적인 호흡기 질환은 천식이다. 천식은 일반적으로 간헐적 기류 폐색으로부터 발생하는 임상 증상을 갖는 기도의 염증성 장애로서 정의된다. 이것은 씨근거림(wheezing), 호흡곤란 및 기침의 발작을 임상적 특징으로 한다. 이것은 유병율 및 중증도가 증가되고 있는 것으로 나타난 만성 무력 장 애이다. 개발도상국 인구 중 15％의 어린이 및 5％의 성인이 천식에 걸린 것으로 평가된다. 따라서, 치료는 증상을 제어하는 것을 목적으로 하여, 정상적인 생활을 가능하게 하고, 동시에 근본적인 염증을 치료하기 위한 기초를 제공해야 한다.

COPD는 정상 호흡을 방해할 수 있는 거대군의 폐 질환을 지칭하는 용어이다. 현행 임상학적 지침에서 COPD는 완전히 가역적이지는 않은 기류 제한을 특징으로 하는 질환 상태로서 정의된다. 기류 제한은 일반적으로 유독성 입자 및 기체에 대한 폐의 이상 염증성 반응과 연관되며 진행성이다. 이러한 입자 및 기체의 가장 주된 기여 원인은 적어도 서구 세계에서는 담배 연기이다. COPD 환자는 기침, 숨가쁨 및 과량의 담 생성을 비롯한 다양한 증상을 갖고; 이러한 증상은 호중구, 대식세포 및 상피 세포를 비롯한 다수의 세포 구획의 기능이상으로부터 발생한다. COPD에 포함되는 가장 중요한 2가지 상태는 만성 기관지염 및 기종이다.

만성 기관지염은 점액 생성의 증가 및 다른 변화를 야기하는 장기-정체성 기관지 염증이다. 환자의 증상은 기침 및 객담(expectoration of sputum)이다. 만성 기관지염은 보다 빈번하고 심각한 호흡기 감염, 기관지 협착 및 막힘, 호흡 곤란 및 무력화를 유도할 수 있다.

기종은 폐포 및/또는 가장 작은 기관지의 말단에 영향을 미치는 만성 폐 질환이다. 폐는 그의 신축성을 잃고, 따라서 폐의 이러한 영역은 확장된다. 이러한 확장된 영역은 탁한 공기를 포획하고, 이것을 신선한 공기와 효과적으로 교환하지 못한다. 이것은 호흡곤란을 일으키고, 혈액으로 전달되는 산소를 불충분하게 할 수 있다. 기종에 걸린 환자에서의 주된 증상은 숨가쁨이다.

호흡기 질환의 치료에 사용되는 치료제에는 코르티코스테로이드가 포함된다. 코르티코스테로이드 (글루코코르티코스테로이드 또는 글루코코르티코이드라고도 함)는 강력한 항염증제이다. 그의 정확한 작용 기작은 분명하지 않지만, 코르티코스테로이드 치료의 최종 결과로 염증성 세포의 수, 활성, 및 그의 기관지 점막밑층으로의 이동이 감소되어, 기도 반응성이 감소된다. 코르티코스테로이드는 또한 기관지 상피 내층의 박리, 혈관 투과성, 및 점액 분비를 감소시킬 수 있다. 코르티코스테로이드 치료가 중요한 이점들을 제공할 수는 있지만, 이들 작용제의 효능은 종종 만족스럽지 못하고 특히 COPD에 있어서 그러하다. 게다가, 스테로이드의 이용은 치료 효과를 야기할 수 있지만, 정기적인 투여와 관련될 수 있는 바람직하지 않은 부작용의 발생 및 그의 심각성을 최소화하기 위해 스테로이드를 적은 투여량으로 사용할 수 있는 것이 바람직하다. 최근의 연구들은 또한 호흡기 질환을 앓는 환자들 중에서의 스테로이드 내성 획득의 문제를 강조한다. 예를 들어, 천식이 있는 흡연자들은 단기 흡입 코르티코스테로이드 치료법에 둔감한 것이 확인되었지만, 높은 투여량으로의 코르티코스테로이드 흡입으로 인해 흡연자 및 비흡연자 사이의 반응의 격차가 감소되는 것으로 나타났다 (문헌 [Tomlinson et al., Thorax 2005; 60:282-287]).

호흡기 질환의 치료에 사용되는 추가의 치료제 계열은 기관지확장제이다. 기관지확장제는 기관지 평활근을 이완시키고, 기도 폐색을 감소시키고, 폐의 과다팽창을 줄이고, 숨가쁨을 감소시켜, 호흡기 질환의 증상을 완화하는데 사용될 수 있다. 임상용 기관지확장제의 유형에는 β₂ 아드레날린성 수용체 효능제, 무스카린 수용체 길항제 및 메틸크산틴이 있다. 기관지확장제는 주로 증상 경감을 위해 처방되고, 호흡기 질환의 병력을 변화시키는 것으로 여겨지지는 않는다.

N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 및 그의 디히드로클로라이드 및 디히드로브로마이드 염은 β2 아드레날린성 수용체 효능제이며, 그러한 내용은 PCT/SE2006/000927 (WO 2007/018461로 공개됨, 실시예 7, 15 및 16 참조)에 개시되어 있다. 화합물 및 그의 염은 아드레날린 α1D 활성, 아드레날린 β1 활성 및 도파민 D2 활성에 비해 적어도 10배의 β2 아드레날린성 수용체 효능 선택성을 나타낸다.

β₂ 아드레날린성 수용체 효능제 및 코르티코스테로이드를 포함하는 조합 생성물을 이용할 수 있다. 그러한 생성물 중 하나가 부데소니드 및 포르모테롤 푸마레이트의 조합물 (심비코르트(Symbicort, 등록상표)라는 상표명으로 아스트라제네카(AstraZeneca) 사에서 판매됨)로, 많은 환자에게서 천식 및 COPD를 제어하고 삶의 질을 향상시키는데 효과가 있는 것으로 밝혀졌다.

호흡기 질환, 예컨대 천식 및 COPD의 복잡성의 관점에서, 어느 하나의 매개체가 단독으로 질환을 만족스럽게 치료할 수 있을 것으로 보이지는 않는다. 또한, β₂ 아드레날린성 수용체 효능제 및 코르티코스테로이드를 이용한 조합물 치료법이 환자에게 유의한 이점들을 제공한다 하더라도, 천식 및 COPD와 같은 호흡기 질환에 대한 새로운 치료법, 특히 잠재성이 개조된 질환으로의 치료법에 대한 의학적 요구는 여전히 남아있다.

따라서, 본 발명은 제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 또는 그의 염과, 제2 활성 성분으로서 하기로부터 선택된 것을 조합물로 포함하는 제약 생성물을 제공한다:

비스테로이드성 글루코코르티코이드 수용체 (GR 수용체) 효능제;

항산화제;

CCR1 길항제;

케모카인 길항제 (CCR1이 아님);

코르티코스테로이드;

CRTh2 길항제;

DP1 길항제;

히스톤 디아세틸라제 유도제;

IKK2 억제제;

COX 억제제;

리폭시게나제 억제제;

류코트리엔 수용체 길항제;

MPO 억제제;

아클리디늄 브로마이드, 글리코피롤레이트 (예컨대 R,R-, R,S-, S,R-, 또는 S,S-글리코피로늄 브로마이드), 옥시트로퓸 브로마이드, 피렌제핀, 텔렌제핀, 티오트로퓸 브로마이드, 3(R)-(2-히드록시-2,2-디티엔-2-일아세톡시)-1-(3-페녹시프로필)-1-아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드, 3(R)-1-페네틸-3-(9H-크산텐-9-카르보닐옥시)-1-아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 또는 (3R)-3-[(2S)-2-시클로펜틸-2-히드록시-2-티엔-2-일아세톡시]-1-(2-페녹시에틸)-1-아조니아비시클로[2.2.2]악탄 브로마이드인 무스카린 길항제;

p38 억제제;

PDE 억제제;

PPARγ 효능제;

프로테아제 억제제;

스타틴;

트롬복산 길항제;

혈관확장제; 또는

ENAC 차단제 (상피 나트륨 채널 차단제).

일 특정 측면에서, 본 발명은 제1 및 제2 활성 성분이 경구 투여 (예를 들어, 폐 및/또는 기도로의 전달을 위함)에 적합한 형태인 제약 생성물을 제공한다.

본 발명의 제약 생성물은 제1 활성 성분 및 제2 활성 성분을 포함하고, 제3 활성 성분을 포함할 수 있다. 제3 활성 성분은 제2 활성 성분 목록으로부터 선택될 수 있지만, 통상적으로 다른 작용 기작을 가질 것이다. 따라서, 예를 들어 제2 활성 성분은 무스카린 길항제일 수 있고, 제3 활성 성분은 비스테로이드성 글루코코르티코스테로이드 수용체 효능제, 코르티코스테로이드, CCR1 길항제 또는 PDE4 억제제일 수 있다.

N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드의 적합한 염은, 예를 들어 히드로클로라이드, 히드로브로마이드 (예컨대, 디히드로브로마이드), 트리플루오로아세테이트, 술페이트, 포스페이트, 아세테이트, 푸마레이트, 말레에이트, 타르트레이트, 락테이트, 시트레이트, 피루베이트, 숙시네이트, 옥살레이트, 메탄술포네이트, p-톨루엔술포네이트, 바이술페이트, 벤젠술포네이트, 에탄술포네이트, 말로네이트, 지나포에이트, 아스코르베이트, 올레에이트, 니코티네이트, 사카리네이트, 아디페이트, 포르메이트, 글리콜레이트, L-락테이트, D-락테이트, 아스파르테이트, 말레이트, L-타르트레이트, D-타르트레이트, 스테아레이트, 2-푸로에이트, 3-푸로에이트, 나파디실레이트 (나프탈렌-1,5-디술포네이트 또는 나프탈렌-1-(술폰산)-5-술포네이트), 에디실레이트 (에탄-1,2-디술포네이트 또는 에탄-1-(술폰산)-2-술포네이트), 이세티오네이트 (2-히드록시에틸술포네이트), 2-메시틸렌술포네이트 및 2-나프탈렌술포네이트이다.

일 측면에서, 본 발명은 제1 활성 성분이 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드인 제약 생성물을 제공한다.

제1 및 제2 활성 성분은 (단일 제약 제제 (즉, 활성 성분이 혼합물임)로, 또는 별개의 제제로) 동시에 투여될 수 있거나, 별개의 제약 제제에 의해 순차적으로, 또는 별도로 투여될 수 있다.

비스테로이드성 글루코코르티코이드 수용체 (GR) 효능제는, 예를 들어 WO 2006/046916에 개시되어 있는 화합물이다.

항산화제는, 예를 들어 알로퓨리놀, 에르도스테인, 만니톨, N-아세틸 시스테인 콜린 에스테르, N-아세틸 시스테인 에틸 에스테르, N-아세틸시스테인, N-아세틸시스테인 아미드 또는 니아신이다.

CCR1 길항제는, 예를 들어 WO2001/062728 또는 WO2001/098273에 개시되어 있는 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예컨대, 히드로클로라이드, 트리플루오로아세테이트, 술페이트, (헤미)푸마레이트, 벤조에이트, 푸로에이트 또는 숙시네이트 염); BX471 ((2R)-1-[[2-[(아미노카르보닐)아미노]-4-클로로페녹시]아세틸]-4-[(4-플루오로페닐)메틸]-2-메틸피페라진 모노히드로클로라이드) 또는 CCX634이다.

또한, CCR1 길항제는, 예를 들어 WO2001/062728 또는 WO2001/098273에 개시되어 있는 화합물 [예컨대 N-(2{(2S)-3[{(3R)-1-[(4-클로로페닐)메틸]-3-피롤리디닐}아미노]-2-히드록시프로폭시}-4-플루오로페닐)아세트아미드, N-(2{(2S)-3[{(3S)-1-[(4-클로로페닐)메틸]-3-피롤리디닐}아미노]-2-히드록시프로폭시}-4-플루오로페닐)아세트아미드, N-(2-{(2S)-3-[1-{(4-클로로벤조일)-4-피페리디닐}아미노]-2-히드록시프로폭시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, (2-{[(2S)-3-{[(2R,5S)-1-(4-클로로벤질)-2,5-디메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(3S,4R)-1-(4-클로로벤질)-3-메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(3R,4R)-1-(4-클로로벤질)-3-메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(2R,4S,5S)-1-(4-클로로벤질)-2,5-디메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(2R,4R,5S)-1-(4-클로로벤질)-2,5-디메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(2S,4R,5R)-1-(4-클로로벤질)-2,5-디메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(2S,4S,5R)-1-(4-클로로벤질)-2,5-디메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, 메틸 (2-{[(2S)-3-{[1-(4-클로로벤질)피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시프로필]옥시}-4-플루오로페닐)프로파노에이트, N-[2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시프로폭시)-4-클로로페닐 아세트아미드, N-[2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시-2-메틸프로폭시)-4-히드록시페닐]아세트아미드, N-[2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시-2-메틸프로폭시)-4-플루오로페닐]아세트아미드, N-[5-클로로-[2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시-2-메틸프로폭시)-4-히드록시페닐]아세트아미드, N-[5-클로로-[2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시-2-메틸프로폭시)-4-히드록시페닐]프로판아미드, (2-{[(2S)-3-{[1-(4-클로로벤질)피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)메탄술폰산, N-5-클로로-(2-{(2S)-3-[1-{(4-클로로벤질)-4-피페리디닐}아미노]-2-히드록시프로폭시}-4-히드록시페닐)-N'-시클로프로필-우레아, N-(2-{(2S)-3-[1-{(4-클로로벤질)-4-피페리디닐}아미노]-2-히드록시프로폭시}-페닐)-N'-에틸-우레아, (2S)-1-(2-에틸페녹시)-3[(1-[4-클로로벤질]4-피페리디닐)아미노]프로판-2-올, (2S)-1-[2-(-히드록시에틸)페녹시]-2-메틸-3[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]프로판-2-올, 2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시-2-메틸프로폭시)벤즈알데히드, 2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시프로폭시)-N-시클로프로필벤즈아미드, 메틸 2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시프로폭시)-4-플루오로벤조에이트, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H-스피로[1,3-벤조디옥솔-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, 2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시-N-메틸벤즈아미드, 2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시벤조산, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[2-벤조푸란-1,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드; 2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[2-벤조푸란-1,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시-N-메틸벤즈아미드, N-(2-{[(2S)-3-(5-플루오로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, 2-{[(2S)-3-(5-플루오로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시-N-메틸벤즈아미드, N-[2-({(2S)-3-[(2R)-5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,3'-피롤리딘]-1'-일]-2-히드록시프로필}옥시)-4-히드록시페닐]아세트아미드, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)우레아, 4-플루오로-2-{[(2S)-3-(5-플루오로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}벤조산, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-플루오로페닐)우레아, N-(2-{[(2S)-2-아미노-3-(5-플루오로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, 2-[(2S)-3-(5-클로로스피로[벤조푸란-2(3H),4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로폭시]-벤즈알데히드, (αS)-5-클로로-α-[[2-(2-히드록시에틸)페녹시]메틸]-스피로[벤조푸란-2(3H),4'-피페리딘]-1'-에탄올, (αS)-5-클로로-α-[[2-(히드록시메틸)페녹시]메틸]-스피로[벤조푸란-2(3H),4'-피페리딘]-1'-에탄올, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-5-클로로-4-히드록시페닐)아세트아미드, 2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-(4-{아세틸아미노}페녹시)아세트산, 5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-(4-{아세틸아미노}페녹시)아세트산, {2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-[(메틸아미노)카르보닐]페녹시}아세트산, 2-{2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-[(메틸아미노)카르보닐]페녹시}-2-메틸프로판산, (2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-{[(3S)-3-히드록시피롤리딘-1-일]카르보닐}페녹시)아세트산, 5-클로로-2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-(시아노메톡시)벤조산, 2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-5-클로로-4-(2,2-디플루오로에톡시)벤조산, 5-클로로-2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-(3,3,3-트리플루오로프로폭시)벤조산, N-(2-{3-[5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일]프로폭시}페닐)아세트아미드, 메틸 3-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-플루오로페닐)프로판산, N-(2-{[(2S)-3-({스피로[인돌-2-4'-피페리딘]-3(1H)-온}-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, 또는 (2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-플루오로페닐)메탄술폰산, 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들면, 상기에서 기재한 바와 같음 (예컨대 히드로클로라이드, 트리플루오로아세테이트, 술페이트, (헤미)푸마레이트, 벤조에이트, 푸로에이트 또는 숙시네이트 염))]; BX471 ((2R)-1-[[2-[(아미노카르보닐)아미노]-4-클로로페녹시]아세틸]-4-[(4-플루오로페닐)메틸]-2-메틸피페라진 모노히드로클로라이드); 또는 CCX634이다.

또한, CCR1 길항제는, 예를 들어 N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-클로로벤질)피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필)옥시]-4-히드록시페닐}아세트아미드 (WO 2003/051839 참조), 또는 2-{2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-[(메틸아미노)카르보닐]페녹시}-2-메틸프로판산 (PCT 공개공보 제WO 2008/010765호 참조), 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어, 히드로클로라이드, 술페이트, (헤미)푸마레이트, 벤조에이트, 푸로에이트 또는 숙시네이트 염)이다.

케모카인 길항제 (CCR1 길항제가 아닌 것)는, 예를 들어 656933 (N-(2-브로모페닐)-N'-(4-시아노-1H-1,2,3-벤조트리아졸-7-일)우레아), 766994 (4-({[({[(2R)-4-(3,4-디클로로벤질)모르폴린-2-일]메틸}아미노)카르보닐]-아미노}메틸)벤즈아미드), CCX-282, CCX-915, 시아노비린 N, E-921, INCB-003284, INCB-9471, 마라비록, MLN-3701, MLN-3897, T-487 (N-{1-[3-(4-에톡시페닐)-4-옥소-3,4-디히드로피리도[2,3-d]피리미딘-2-일]에틸}-N-(피리딘-3-일메틸)-2-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]아세트아미드) 또는 비크리비록이다.

코르티코스테로이드는, 예를 들어 알클로메타손 디프로피오네이트, 아멜로메타손, 베클로메타손 디프로피오네이트, 부데소니드, 부틱소코르트 프로피오네이트, 시클레소니드, 클로베타솔 프로피오네이트, 데스이소부티릴시클레소니드, 에티프레드놀 디클로아세테이트, 플루오시놀론 아세토니드, 플루티카손 푸로에이트, 플루티카손 프로피오네이트, 로테프레드놀 에타보네이트 (국소) 또는 모메타손 푸로에이트이다.

CRTh2 길항제는, 예를 들어 WO 2004/106302 또는 WO 2005/018529로부터의 화합물이다.

DP1 길항제는, 예를 들어 L888839 또는 MK0525이다.

히스톤 디아세틸라제 유도제는, 예를 들어 ADC4022, 아미노필린, 메틸크산틴 또는 테오필린이다.

IKK2 억제제는, 예를 들어 2-{[2-(2-메틸아미노-피리미딘-4-일)-1H-인돌-5-카르보닐]-아미노}-3-(페닐-피리딘-2-일-아미노)-프로피온산이다.

COX 억제제는, 예를 들어 셀레콕시브, 디클로페낙 나트륨, 에토돌락, 이부프로펜, 인도메타신, 멜록시캄, 니메술리드, OC1768, OC2125, OC2184, OC499, OCD9101, 파레콕시브 나트륨, 피세아타놀, 피록시캄, 로페콕시브 또는 발데콕시브이다.

리폭시게나제 억제제는, 예를 들어 아줄렘산, 다르부펠론, 다르부펠론 메실레이트, 데시부프로펜 리신 (1수화물), 에탈로시브 나트륨, 리코펠론, 리나졸라스트, 로나팔렌, 마소프로콜, MN-001, 테폭살린, UCB-35440, 벨리플라폰, ZD-2138, ZD-4007 또는 질류톤 ((±)-1-(1-벤조[b]티엔-2-일에틸)-1-히드록시우레아)이다.

류코트리엔 수용체 길항제는, 예를 들어 아블루카스트, 이랄루카스트 (CGP 45715A), 몬텔루카스트, 몬텔루카스트 나트륨, 온타졸라스트, 프란루카스트, 프란루카스트 히드레이트 (모노 Na 염), 베를루카스트 (MK-679) 또는 자피를루카스트이다.

무스카린 길항제는 아클리디늄 브로마이드, 글리코피롤레이트 (예컨대 R,R-, R,S-, S,R-, 또는 S,S-글리코피로늄 브로마이드), 옥시트로퓸 브로마이드, 피렌제핀, 텔렌제핀, 티오트로퓸 브로마이드, 3(R)-(2-히드록시-2,2-디티엔-2-일아세톡시)-1-(3-페녹시프로필)-1-아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (WO 01/04118 참조), 3(R)-1-페네틸-3-(9H-크산텐-9-카르보닐옥시)-1-아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 또는 (3R)-3-[(2S)-2-시클로펜틸-2-히드록시-2-티엔-2-일아세톡시]-1-(2-페녹시에틸)-1-아조니아비시클로[2.2.2]악탄 브로마이드 (WO 01/04118 참조)이다. 본 발명의 일 측면에서, 무스카린 길항제는 아클리디늄 브로마이드, 글리코피롤레이트 (예컨대 R,R-, R,S-, S,R-, 또는 S,S-글리코피로늄 브로마이드), 옥시트로퓸 브로마이드, 피렌제핀, 텔렌제핀 또는 티오트로퓸 브로마이드이다.

MPO 억제제는, 예를 들어 히드록삼산 유도체 (N-(4-클로로-2-메틸-페닐)-4-페닐-4-[[(4-프로판-2-일페닐)술포닐아미노]메틸]피페리딘-1-카르복스아미드), 피세아타놀 또는 레스베라트롤이다.

p38 억제제는, 예를 들어 WO 2005/042502로부터의 화합물, 681323, 856553, AMG548 (2-[[(2S)-2-아미노-3-페닐프로필]아미노]-3-메틸-5-(2-나프탈레닐)-6-(4-피리디닐)-4(3H)-피리미디논), 어레이-797, 도라마피모드, KC-706, PH 797804, R1503, SC-80036, SCIO469, 6-클로로-5-[[(2S,5R)-4-[(4-플루오로페닐)메틸]-2,5-도메틸-1-피페라지닐]카르보닐]-N,N,1-트리메틸-α-옥소-1H-인돌-3-아세트아미드, VX702 또는 VX745 (5-(2,6-디클로로페닐)-2-(페닐티오)-6H-피리미도[1,6-b]피리다진-6-온)이다.

PDE 억제제는, 예컨대 PDE4 억제제, 예를 들어 256066, 아로필린 (3-(4-클로로페닐)-3,7-디히드로-1-프로필-1H-퓨린-2,6-디온), AWD 12-281 (N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-1-[(4-플루오로페닐)메틸]-5-히드록시-α-옥소-1H-인돌-3-아세트아미드), BAY19-8004 (바이엘(Bayer)), CDC-801 (칼젠(Calgene)), 셀진(Celgene) 화합물 ((βR)-β-(3,4-디메톡시페닐)-1,3-디히드로-1-옥소-2H-이소인돌-2-프로판아미드), 실로밀라스트 (시스-4-시아노-4-[3-(시클로펜틸옥시)-4-메톡시페닐]-시클로헥산카르복실산), 일본 교와 하꼬 고교 사(Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd.)의 WO2006098353의 화합물, 2-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-1-(7-메톡시스피로[1,3-벤조디옥솔-2,1'-시클로펜탄]-4-일)에타논 (CAS 번호 185406-34-2)), 화이자(Pfizer)로부터의 화합물 (2-(3,4-디플루오로페녹시)-5-플루오로-N-[시스-4-[(2-히드록시-5-메틸벤조일)아미노]시클로헥실]-)-3-피리딘카르복스아미드), 화이자로부터의 화합물 (2-(3,4-디플루오로페녹시)-5-플루오로-N-[시스-4-[[2-히드록시-5-(히드록시메틸)벤조일]아미노]시클로헥실]-3-피리딘카르복스아미드), CT2820, GPD-1116, 이부딜라스트, IC 485, KF 31334, KW-4490 (교와 하꼬 고교), 리리밀라스트 ([2-(2,4-디클로로벤조일)-6-[(메틸술포닐)옥시]-3-벤조푸라닐])-우레아), 머크(Merck) 화합물 (N-시클로프로필-1,4-디히드로-4-옥소-1-[3-(3-피리디닐에티닐)페닐]-)-1,8-나프티리딘-3-카르복스아미드), 오글레밀라스트 (N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-4-(디플루오로메톡시)-8-[(메틸술포닐)아미노])-1-디벤조푸란카르복스아미드), ONO6126, ORG 20241 (4-(3,4-디메톡시페닐)-N-히드록시-)-2-티아졸카르복스이미드아미드), PD189659/PD168787 (파케-데이비스(Parke-Davis)), 펜톡시필린 (3,7-디히드로-3,7-디메틸-1-(5-옥소헥실)-)-1H-퓨린-2,6-디온), 화이자 화합물 (5-플루오로-N-[4-[(2-히드록시-4-메틸-벤조일)아미노]시클로헥실]-2-(티안-4-일옥시)피리딘-3-카르복스아미드), 화이자 UK 500,001, 피클라밀라스트 (3-(시클로펜틸옥시)-N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-4-메톡시-벤즈아미드), PLX-369 (WO 2006026754), 로플루밀라스트 (3-(시클로프로필메톡시)-N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-4-(디플루오로메톡시)벤즈아미드), SCH 351591 (N-(3,5-디클로로-1-옥시도-4-피리디닐)-8-메톡시-2-(트리플루오로메틸)-5-퀴놀린카르복스아미드), SelCID(TM) CC-10004 (칼젠), T-440 (타나베(Tanabe)), 테토밀라스트 (6-[2-(3,4-디에톡시페닐)-4-티아졸릴]-2-피리딘카르복실산), 토피밀라스트 (9-시클로펜틸-7-에틸-6,9-디히드로-3-(2-티에닐)-5H-피라졸로[3,4-c]-1,2,4-트리아졸로[4,3-a]피리딘), TPI 1100, UCB 101333-3 (N,2-디시클로프로필-6-(헥사히드로-1H-아제핀-1-일)-5-메틸-4-피리미딘아민), V-11294A (나프(Napp)), VM554/VM565 (베르날리스(Vernalis)), 또는 자르다베린 (6-[4-(디플루오로메톡시)-3-메톡시페닐]-3(2H)-피리다지논); 또는 PDE5 억제제, 예를 들어 감마-글루타밀[s-(2-요오도벤질)시스테닐]글리신, 타달라필, 바르데나필, 실데나필, 4-페닐-메틸아미노-6-클로로-2-(1-이미다졸릴)-퀴나졸린, 4-페닐-메틸아미노-6-클로로-2-(3-피리딜)-퀴나졸린, 1,3-디메틸-6-(2-프로폭시-5-메탄술포닐아미도페닐)-1,5-디히드로피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-온 또는 1-시클로펜틸-3-에틸-6-(3-에톡시-4-피리딜)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-온이다.

PPARγ 효능제는, 예를 들어 피오글리타존, 피오글리타존 히드로클로라이드, 로시글리타존 말레에이트, 로시글리타존 말레에이트 ((-)-거울상이성질체, 유리 염기), 로시글리타존 말레에이트/메트포르민 히드로클로라이드 또는 테사글리티잘이 있다.

프로테아제 억제제는, 예를 들어 알파1-안티트립신 프로테이나제 억제제, EPI-HNE4, UT-77, ZD-0892 또는 WO 2006/004532, WO 2005/026123, WO 2002/0744767 또는 WO 22002/074751로부터의 화합물; 또는 TACE 억제제 (예를 들어, DPC-333, Sch-709156 또는 독시시클린)이다.

스타틴은, 예를 들어 아톨바스타틴, 로바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴 또는 심바스타틴이다.

트롬복산 길항제는, 예를 들어 라마트로반 또는 세라트로다스트이다.

혈관확장제는, 예를 들어 A-306552, 암브리센탄, 아보센탄, BMS-248360, BMS-346567, BMS-465149, BMS-509701, 보센탄, BSF-302146 (암브리센탄), 칼시토닌 유전자-관련 펩티드, 다글루트릴, 다루센탄, 판도센탄 칼륨, 파수딜, 일로프로스트, KC-12615 (다글루트릴(Daglutril)) , KC-12792 2AB (다글루트릴), 리포소말 트레프로스티닐, PS-433540, 시탁센탄 나트륨, 나트륨 페룰레이트, TBC-11241 (시탁센탄), TBC-3214 (N-(2-아세틸-4,6-디메틸페닐)-3-[[(4-클로로-3-메틸-5-이속사졸릴)아미노]술포닐]-2-티오펜카르복스아미드), TBC-3711, 트라피딜, 트레프로스티닐 디에탄올아민 또는 트레프로스티닐 나트륨이다.

ENAC (상피 나트륨 채널 차단제)는, 예를 들어 아밀로리드, 벤자밀, 트리암테렌, 552-02, PSA14984, PSA25569, PSA23682 또는 AER002이다.

상기 모든 활성 성분은 용매화물, 예를 들어 수화물의 형태일 수 있다.

일 특정 측면에서, 본 발명은 제1 및 제2 활성 성분을 혼합물로 포함하는 제약 생성물을 제공한다. 이와 달리, 제약 생성물은, 예를 들어 제1 활성 성분 제제 및 제2 활성 성분 제제를 포함하고, 임의로는 상기 제제의 투여가 필요한 환자에게 상기 제제를 동시에, 순차적으로, 또는 별개로 투여하기 위한 지침서를 포함하는 키트일 수 있다.

다른 측면에서, 본 발명은 제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드, 및 제2 활성 성분으로서 하기로부터 선택된 것을 조합물로 포함하는 제약 생성물을 제공한다:

CCR1 길항제;

케모카인 길항제 (CCR1이 아님);

코르티코스테로이드;

IKK2 억제제;

p38 억제제; 또는

PDE 억제제.

다른 측면에서, 본 발명은 제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드, 및 제2 활성 성분으로서 비스테로이드성 글루코코르티코이드 수용체 (GR) 효능제, 예를 들어 WO 2006/046916에 개시되어 있는 화합물을 조합물로 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드, 및 제2 활성 성분으로서 CCR1 길항제, 예를 들어 WO2001/062728 또는 WO2001/098273에 개시되어 있는 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예컨대 히드로클로라이드, 트리플루오로아세테이트, 술페이트, (헤미)푸마레이트, 벤조에이트, 푸로에이트 또는 숙시네이트 염); BX471 ((2R)-1-[[2-[(아미노카르보닐)아미노]-4-클로로페녹시]아세틸]-4-[(4-플루오로페닐)메틸]-2-메틸피페라진 모노히드로클로라이드) 또는 CCX634를 조합물로 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

또다른 측면에서, 본 발명은 제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드, 및 제2 활성 성분으로서 CCR1 길항제, 예를 들어 WO2001/062728 또는 WO2001/098273에 개시되어 있는 화합물 [예컨대 N-(2{(2S)-3[{(3R)-1-[(4-클로로페닐)메틸]-3-피롤리디닐}아미노]-2-히드록시프로폭시}-4-플루오로페닐)아세트아미드, N-(2{(2S)-3[{(3S)-1-[(4-클로로페닐)메틸]-3-피롤리디닐}아미노]-2-히드록시프로폭시}-4-플루오로페닐)아세트아미드, N-(2-{(2S)-3-[1-{(4-클로로벤조일)-4-피페리디닐}아미노]-2-히드록시프로폭시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, (2-{[(2S)-3-{[(2R,5S)-1-(4-클로로벤질)-2,5-디메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(3S,4R)-1-(4-클로로벤질)-3-메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(3R,4R)-1-(4-클로로벤질)-3-메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(2R,4S,5S)-1-(4-클로로벤질)-2,5-디메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(2R,4R,5S)-1-(4-클로로벤질)-2,5-디메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(2S,4R,5R)-1-(4-클로로벤질)-2,5-디메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(2S,4S,5R)-1-(4-클로로벤질)-2,5-디메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, 메틸 (2-{[(2S)-3-{[1-(4-클로로벤질)피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시프로필]옥시}-4-플루오로페닐)프로파노에이트, N-[2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시프로폭시)-4-클로로페닐 아세트아미드, N-[2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시-2-메틸프로폭시)-4-히드록시페닐]아세트아미드, N-[2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시-2-메틸프로폭시)-4-플루오로페닐]아세트아미드, N-[5-클로로-[2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시-2-메틸프로폭시)-4-히드록시페닐]아세트아미드, N-[5-클로로-[2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시-2-메틸프로폭시)-4-히드록시페닐]프로판아미드, (2-{[(2S)-3-{[1-(4-클로로벤질)피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)메탄술폰산, N-5-클로로-(2-{(2S)-3-[1-{(4-클로로벤질)-4-피페리디닐}아미노]-2-히드록시프로폭시}-4-히드록시페닐)-N'-시클로프로필-우레아, N-(2-{(2S)-3-[1-{(4-클로로벤질)-4-피페리디닐}아미노]-2-히드록시프로폭시}-페닐)-N'-에틸-우레아, (2S)-1-(2-에틸페녹시)-3[(1-[4-클로로벤질]4-피페리디닐)아미노]프로판-2-올, (2S)-1-[2-(-히드록시에틸)페녹시]-2-메틸-3[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]프로판-2-올, 2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시-2-메틸프로폭시)벤즈알데히드, 2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시프로폭시)-N-시클로프로필벤즈아미드, 메틸 2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시프로폭시)-4-플루오로벤조에이트, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H-스피로[1,3-벤조디옥솔-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, 2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시-N-메틸벤즈아미드, 2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시벤조산, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[2-벤조푸란-1,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드; 2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[2-벤조푸란-1,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시-N-메틸벤즈아미드, N-(2-{[(2S)-3-(5-플루오로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, 2-{[(2S)-3-(5-플루오로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시-N-메틸벤즈아미드, N-[2-({(2S)-3-[(2R)-5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,3'-피롤리딘]-1'-일]-2-히드록시프로필}옥시)-4-히드록시페닐]아세트아미드, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)우레아, 4-플루오로-2-{[(2S)-3-(5-플루오로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}벤조산, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-플루오로페닐)우레아, N-(2-{[(2S)-2-아미노-3-(5-플루오로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, 2-[(2S)-3-(5-클로로스피로[벤조푸란-2(3H),4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로폭시]-벤즈알데히드, (αS)-5-클로로-α-[[2-(2-히드록시에틸)페녹시]메틸]-스피로[벤조푸란-2(3H),4'-피페리딘]-1'-에탄올, (αS)-5-클로로-α-[[2-(히드록시메틸)페녹시]메틸]-스피로[벤조푸란-2(3H),4'-피페리딘]-1'-에탄올, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-5-클로로-4-히드록시페닐)아세트아미드, 2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-(4-{아세틸아미노}페녹시)아세트산, 5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-(4-{아세틸아미노}페녹시)아세트산, {2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-[(메틸아미노)카르보닐]페녹시}아세트산, 2-{2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-[(메틸아미노)카르보닐]페녹시}-2-메틸프로판산, (2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-{[(3S)-3-히드록시피롤리딘-1-일]카르보닐}페녹시)아세트산, 5-클로로-2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-(시아노메톡시)벤조산, 2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-5-클로로-4-(2,2-디플루오로에톡시)벤조산, 5-클로로-2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-(3,3,3-트리플루오로프로폭시)벤조산, N-(2-{3-[5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일]프로폭시}페닐)아세트아미드, 메틸 3-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-플루오로페닐)프로판산, N-(2-{[(2S)-3-({스피로[인돌-2-4'-피페리딘]-3(1H)-온}-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, 또는 (2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-플루오로페닐)메탄술폰산, 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어, 상기한 바와 같음 (예컨대 히드로클로라이드, 트리플루오로아세테이트, 술페이트, (헤미)푸마레이트, 벤조에이트, 푸로에이트 또는 숙시네이트염))]; BX471 ((2R)-1-[[2-[(아미노카르보닐)아미노]-4-클로로페녹시]아세틸]-4-[(4-플루오로페닐)메틸]-2-메틸피페라진 모노히드로클로라이드); 또는 CCX634를 조합물로 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

다른 측면에서, CCR1 길항제는 N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-클로로벤질)피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필)옥시]-4-히드록시페닐}아세트아미드 또는 2-{2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-[(메틸아미노)카르보닐]페녹시}-2-메틸프로판산, 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어, 히드로클로라이드, 술페이트, (헤미)푸마레이트, 벤조에이트, 푸로에이트 또는 숙시네이트염)이다. 예를 들어, 벤조에이트 염으로서 N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-클로로벤질)피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필)옥시]-4-히드록시페닐}아세트아미드, 또는 유리 산으로서 2-{2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-[(메틸아미노)카르보닐]페녹시}-2-메틸프로판산.

다른 측면에서, 본 발명은 제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드, 및 제2 활성 성분으로서 케모카인 길항제 (CCR1이 아님), 예를 들어 656933 (N-(2-브로모페닐)-N'-(4-시아노-1H-1,2,3-벤조트리아졸-7-일)우레아), 766994 (4-({[({[(2R)-4-(3,4-디클로로벤질)모르폴린-2-일]메틸}아미노)카르보닐]-아미노}메틸)벤즈아미드), CCX-282, CCX-915, 시아노비린 N, E-921, INCB-003284, INCB-9471, 마라비록, MLN-3701, MLN-3897, T-487 (N-{1-[3-(4-에톡시페닐)-4-옥소-3,4-디히드로피리도[2,3-d]피리미딘-2-일]에틸}-N-(피리딘-3-일메틸)-2-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]아세트아미드) 또는 비크리비록을 조합물로 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드, 및 제2 활성 성분으로서 코르티코스테로이드, 예를 들어 알클로메타손 디프로피오네이트, 아멜로메타손, 베클로메타손 디프로피오네이트, 부데소니드, 부틱소코르트 프로피오네이트, 시클레소니드, 클로베타솔 프로피오네이트, 데스이소부티릴시클레소니드, 에티프레드놀 디클로아세테이트, 플루오시놀론 아세토니드, 플루티카손 푸로에이트, 플루티카손 프로피오네이트, 로테프레드놀 에타보네이트 (국소) 또는 모메타손 푸로에이트를 조합물로 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

본 발명의 일 실시양태에서, 코르티코스테로이드는 부데소니드, 플루티카손 프로피오네이트, 플루티카손 프루오에이트, 모메타손 푸로에이트, 베클로메타손 디프로피오네이트 또는 부틱소코르트 프로피오네이트 에스테르로부터 선택된다.

다른 측면에서, 본 발명은 제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드, 및 제2 활성 성분으로서 코르티코스테로이드, 예를 들어 부데소니드, 플루티카손 푸로에이트 또는 플루티카손 프로피오네이트를 조합물로 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

본 발명의 일 실시양태에서, 코르티코스테로이드는 부데소니드이다. 부데소니드 및 그의 제제는, 예를 들어 문헌 [Arzneimittel-Forschung (1979), 29 (11), 1687-1690], DE 2,323,215 및 US 3,929,768에 기재되어 있다. 현재 이용가능한 부데소니드 제형은 엔토코르트(Entocort, 등록상표)라는 상표명으로 판매되고 있다.

다른 측면에서, 본 발명은 제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드, 및 제2 활성 성분으로서 IKK2 억제제, 예를 들어 2-{[2-(2-메틸아미노-피리미딘-4-일)-1H-인돌-5-카르보닐]-아미노}-3-(페닐-피리딘-2-일-아미노)-프로피온산을 조합물로 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

또다른 측면에서, 본 발명은 제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드, 및 제2 활성 성분으로서 아클리디늄 브로마이드, 글리코피롤레이트 (예컨대 R,R-, R,S-, S,R-, 또는 S,S-글리코피로늄 브로마이드), 옥시트로퓸 브로마이드, 피렌제핀, 텔렌제핀, 티오트로퓸 브로마이드, 3(R)-(2-히드록시-2,2-디티엔-2-일아세톡시)-1-(3-페녹시프로필)-1-아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (WO 01/04118 참조), 또는 3(R)-1-페네틸-3-(9H-크산텐-9-카르보닐옥시)-1-아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 또는 (3R)-3-[(2S)-2-시클로펜틸-2-히드록시-2-티엔-2-일아세톡시]-1-(2-페녹시에틸)-1-아조니아비시클로[2.2.2]악탄 브로마이드 (WO 01/04118 참조)인 무스카린 길항제를 조합물로 포함하는 제약 생성물을 제공한다. 본 발명의 일 측면에서, 무스카린 길항제는 아클리디늄 브로마이드, 글리코피롤레이트 (예컨대 R,R-, R,S-, S,R-, 또는 S,S-글리코피로늄 브로마이드), 옥시트로퓸 브로마이드, 피렌제핀, 텔렌제핀 또는 티오트로퓸 브로마이드이다.

또다른 측면에서, 본 발명은 제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드, 및 제2 활성 성분으로서 무스카린 길항제, 예를 들면 아클리디늄 브로마이드, 글리코피롤레이트 (예컨대 R,R-, R,S-, S,R-, 또는 S,S-글리코피로늄 브로마이드), 옥시트로퓸 브로마이드, 피렌제핀, 텔렌제핀 또는 티오트로퓸 브로마이드를 조합물로 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

본 발명의 일 측면에서, 무스카린 수용체 길항제는 장기 작용형 무스카린 수용체 길항제, 즉 활성이 12 시간을 초과하여 지속되는 무스카린 수용체 길항제이다. 장기 작용형 무스카린 수용체 길항제의 예로 티오트로퓸 브로마이드가 있다.

다른 측면에서, 본 발명은 제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드, 및 제2 활성 성분으로서 티오트로퓸 브로마이드를 조합물로 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드, 및 제2 활성 성분으로서 p38 억제제, 예를 들어 WO 2005/042502로부터의 화합물, 681323, 856553, AMG548 (2-[[(2S)-2-아미노-3-페닐프로필]아미노]-3-메틸-5-(2-나프탈레닐)-6-(4-피리디닐)-4(3H)-피리미디논), 어레이-797, 도라마피모드, KC-706, PH 797804, R1503, SC-80036, SCIO469, 6-클로로-5-[[(2S,5R)-4-[(4-플루오로페닐)메틸]-2,5-도메틸-1-피페라지닐]카르보닐]-N,N,1-트리메틸-α-옥소-1H-인돌-3-아세트아미드, VX702 또는 VX745 (5-(2,6-디클로로페닐)-2-(페닐티오)-6H-피리미도[1,6-b]피리다진-6-온)를 조합물로 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드, 및 제2 활성 성분으로서 PDE 억제제: 예컨대 PDE4 억제제 {예를 들어, 256066, 아로필린 (3-(4-클로로페닐)-3,7-디히드로-1-프로필-1H-퓨린-2,6-디온), AWD 12-281 (N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-1-[(4-플루오로페닐)메틸]-5-히드록시-α-옥소-1H-인돌-3-아세트아미드), BAY19-8004 (바이엘), CDC-801 (칼젠), 셀진 화합물 ((βR)-β-(3,4-디메톡시페닐)-1,3-디히드로-1-옥소-2H-이소인돌-2-프로판아미드), 실로밀라스트 (시스-4-시아노-4-[3-(시클로펜틸옥시)-4-메톡시페닐]-시클로헥산카르복실산), 일본 교와 하꼬 고교 사의 WO2006098353의 화합물, 2-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-1-(7-메톡시스피로[1,3-벤조디옥솔-2,1'-시클로펜탄]-4-일)에타논 (CAS 번호 185406-34-2)), 화이자로부터의 화합물 (2-(3,4-디플루오로페녹시)-5-플루오로-N-[시스-4-[(2-히드록시-5-메틸벤조일)아미노]시클로헥실]-)-3-피리딘카르복스아미드), 화이자로부터의 화합물 (2-(3,4-디플루오로페녹시)-5-플루오로-N-[시스-4-[[2-히드록시-5-(히드록시메틸)벤조일]아미노]시클로헥실]-3-피리딘카르복스아미드), CT2820, GPD-1116, 이부딜라스트, IC 485, KF 31334, KW-4490 (교와 하꼬 고교), 리리밀라스트 ([2-(2,4-디클로로벤조일)-6-[(메틸술포닐)옥시]-3-벤조푸라닐])-우레아), 머크 화합물 (N-시클로프로필-1,4-디히드로-4-옥소-1-[3-(3-피리디닐에티닐)페닐]-)-1,8-나프티리딘-3-카르복스아미드), 오글레밀라스트 (N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-4-(디플루오로메톡시)-8-[(메틸술포닐)아미노])-1-디벤조푸란카르복스아미드), ONO6126, ORG 20241 (4-(3,4-디메톡시페닐)-N-히드록시-)-2-티아졸카르복스이미드아미드), PD189659/PD168787 (파케-데이비스), 펜톡시필린 (3,7-디히드로-3,7-디메틸-1-(5-옥소헥실)-)-1H-퓨린-2,6-디온), 화이자 화합물 (5-플루오로-N-[4-[(2-히드록시-4-메틸-벤조일)아미노]시클로헥실]-2-(티안-4-일옥시)피리딘-3-카르복스아미드), 화이자 UK 500,001, 피클라밀라스트 (3-(시클로펜틸옥시)-N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-4-메톡시-벤즈아미드), PLX-369 (WO 2006026754), 로플루밀라스트 (3-(시클로프로필메톡시)-N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-4-(디플루오로메톡시)벤즈아미드), SCH 351591 (N-(3,5-디클로로-1-옥시도-4-피리디닐)-8-메톡시-2-(트리플루오로메틸)-5-퀴놀린카르복스아미드), SelCID(TM) CC-10004 (칼젠), T-440 (타나베), 테토밀라스트 (6-[2-(3,4-디에톡시페닐)-4-티아졸릴]-2-피리딘카르복실산), 토피밀라스트 (9-시클로펜틸-7-에틸-6,9-디히드로-3-(2-티에닐)-5H-피라졸로[3,4-c]-1,2,4-트리아졸로[4,3-a]피리딘), TPI 1100, UCB 101333-3 (N,2-디시클로프로필-6-(헥사히드로-1H-아제핀-1-일)-5-메틸-4-피리미딘아민), V-11294A (나프), VM554/VM565 (베르날리스), 또는 자르다베린 (6-[4-(디플루오로메톡시)-3-메톡시페닐]-3(2H)-피리다지논); 또는 PDE5 억제제, 예를 들어 감마-글루타밀[s-(2-요오도벤질)시스테닐]글리신, 타달라필, 바르데나필, 실데나필, 4-페닐-메틸아미노-6-클로로-2-(1-이미다졸릴)-퀴나졸린, 4-페닐-메틸아미노-6-클로로-2-(3-피리딜)-퀴나졸린, 1,3-디메틸-6-(2-프로폭시-5-메탄술포닐아미도페닐)-1,5-디히드로피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-온 또는 1-시클로펜틸-3-에틸-6-(3-에톡시-4-피리딜)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-온}을 조합물로 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 제1 활성 성분로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드, 및 제2 활성 성분으로서 PDE4 억제제, 예를 들어 256066, 아로필린 (3-(4-클로로페닐)-3,7-디히드로-1-프로필-1H-퓨린-2,6-디온), AWD 12-281 (N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-1-[(4-플루오로페닐)메틸]-5-히드록시-α-옥소-1H-인돌-3-아세트아미드), BAY19-8004 (바이엘), CDC-801 (칼젠), 셀진 화합물 ((βR)-β-(3,4-디메톡시페닐)-1,3-디히드로-1-옥소-2H-이소인돌-2-프로판아미드), 실로밀라스트 (시스-4-시아노-4-[3-(시클로펜틸옥시)-4-메톡시페닐]-시클로헥산카르복실산), 일본 교와 하꼬 고교 사의 WO2006098353의 화합물, 2-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-1-(7-메톡시스피로[1,3-벤조디옥솔-2,1'-시클로펜탄]-4-일)에타논 (CAS 번호 185406-34-2)), 화이자로부터의 화합물 (2-(3,4-디플루오로페녹시)-5-플루오로-N-[시스-4-[(2-히드록시-5-메틸벤조일)아미노]시클로헥실]-)-3-피리딘카르복스아미드), 화이자로부터의 화합물 (2-(3,4-디플루오로페녹시)-5-플루오로-N-[시스-4-[[2-히드록시-5-(히드록시메틸)벤조일]아미노]시클로헥실]-3-피리딘카르복스아미드), CT2820, GPD-1116, 이부딜라스트, IC 485, KF 31334, KW-4490 (교와 하꼬 고교), 리리밀라스트 ([2-(2,4-디클로로벤조일)-6-[(메틸술포닐)옥시]-3-벤조푸라닐])-우레아), 머크 화합물 (N-시클로프로필-1,4-디히드로-4-옥소-1-[3-(3-피리디닐에티닐)페닐]-)-1,8-나프티리딘-3-카르복스아미드), 오글레밀라스트 (N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-4-(디플루오로메톡시)-8-[(메틸술포닐)아미노])-1-디벤조푸란카르복스아미드), ONO6126, ORG 20241 (4-(3,4-디메톡시페닐)-N-히드록시-)-2-티아졸카르복스이미드아미드), PD189659/PD168787 (파케-데이비스), 펜톡시필린 (3,7-디히드로-3,7-디메틸-1-(5-옥소헥실)-)-1H-퓨린-2,6-디온), 화이자 화합물 (5-플루오로-N-[4-[(2-히드록시-4-메틸-벤조일)아미노]시클로헥실]-2-(티안-4-일옥시)피리딘-3-카르복스아미드), 화이자 UK 500,001, 피클라밀라스트 (3-(시클로펜틸옥시)-N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-4-메톡시-벤즈아미드), PLX-369 (WO 2006026754), 로플루밀라스트 (3-(시클로프로필메톡시)-N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-4-(디플루오로메톡시)벤즈아미드), SCH 351591 (N-(3,5-디클로로-1-옥시도-4-피리디닐)-8-메톡시-2-(트리플루오로메틸)-5-퀴놀린카르복스아미드), SelCID(TM) CC-10004 (칼젠), T-440 (타나베), 테토밀라스트 (6-[2-(3,4-디에톡시페닐)-4-티아졸릴]-2-피리딘카르복실산), 토피밀라스트 (9-시클로펜틸-7-에틸-6,9-디히드로-3-(2-티에닐)-5H-피라졸로[3,4-c]-1,2,4-트리아졸로[4,3-a]피리딘), TPI 1100, UCB 101333-3 (N,2-디시클로프로필-6-(헥사히드로-1H-아제핀-1-일)-5-메틸-4-피리미딘아민), V-11294A (나프), VM554/VM565 (베르날리스), 또는 자르다베린 (6-[4-(디플루오로메톡시)-3-메톡시페닐]-3(2H)-피리다지논)을 조합물로 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드, 및 제2 활성 성분으로서 PDE4 억제제, 예를 들어 AWD 12-281 (N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-1-[(4-플루오로페닐)메틸]-5-히드록시-α-옥소-1H-인돌-3-아세트아미드) 또는 로플루밀라스트를 조합물로 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드, 및 제2 활성 성분으로서 로플루밀라스트를 조합물로 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

본 발명의 제약 생성물의 제1 활성 성분 및 제2 활성 성분은 호흡기 질환의 치료를 위해 동시에, 순차적으로, 또는 별개로 투여될 수 있다. 동시라는 의미는 활성 성분들이 혼합물이거나, 그들이 동일한 흡입기의 별개 챔버 내에 있을 수 있다는 것을 의미한다. 순차적이라는 의미는 활성 성분이 임의의 순서로, 하나가 투여된 직후에 다른 하나가 투여되는 것을 의미한다. 그러나, 일반적으로는 4 시간 미만의 간격, 알맞게는 2 시간 미만의 간격, 보다 알맞게는 30분 미만의 간격, 가장 알맞게는 10분 미만의 간격, 예를 들어 하나를 투여한 직후에 다른 하나를 투여하지 않고 10분 미만의 간격의 방식으로 투여하는 경우, 이들을 별개로 투여하여도 여전히 목적하는 효과를 갖는다.

본 발명의 활성 성분은, 정제, 캡슐제, 환제, 산제, 수성 또는 유성 용액제 또는 현탁액제, 유액제 및 멸균 주사가능한 수성 또는 유성 용액제 또는 현탁액제와 같은 통상의 전신 투여 형태를 이용하여, 경구 또는 비경구 (예를 들어 정맥내, 피하, 근육내 또는 관절내) 투여로 투여될 수 있다. 활성 성분은 용액제, 현탁액제, 에어로졸 및 건식 분말 제형의 형태로 경구 투여를 통해 폐 및/또는 기도로 전달될 수 있다. 이러한 투여 형태는 일반적으로, 예를 들어, 보조제, 담체, 결합제, 윤활제, 희석제, 안정화제, 완충제, 유화제, 점도-조절제, 계면활성제, 보존제, 향미제 또는 착색제로부터 선택될 수 있는 하나 이상의 제약상 허용되는 성분을 포함할 것이다. 당업자들이 이해할 것과 같이, 활성 성분의 가장 적절한 투여 방법은 다수의 인자에 의존적이다.

다른 실시양태에서, 제1 및 제2 활성 성분은 단일 제약 조성물로 투여된다 (즉, 제1 및 제2 활성 성분이 혼합물임). 따라서, 본 발명은 추가로, 제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드, 및 상기에서 정의한 바와 같은 제2 활성 성분을 혼합물로 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 임의로는, 상기 제약 조성물은 제약상 허용되는 보조제, 희석제 또는 담체를 추가로 포함한다.

본 발명의 제약 조성물은 제1 활성 성분을 제2 활성 성분 및 제약상 허용되는 보조제, 희석제 또는 담체와 혼합하는 것에 의해 제조될 수 있다. 따라서, 본 발명의 추가의 측면에서는 제1 및 제2 활성 성분을 제약상 허용되는 보조제, 희석제 또는 담체와 혼합하는 것을 포함하는 제약 조성물의 제조 방법을 제공한다.

본 발명에 따라 투여되는 각 활성 성분의 치료량은 사용하는 특정 활성 성분, 상기 활성 성분이 투여되는 방식, 및 치료하고자 하는 상태 또는 장애에 따라 달라질 것임이 이해될 것이다.

본 발명의 일 실시양태에서, 제1 활성 성분은 흡입을 통해 투여된다. 흡입을 통해 투여될 경우 제1 활성 성분의 투여량은 일반적으로 0.1 마이크로그램 (㎍) 내지 5000 ㎍, 0.1 내지 1000 ㎍, 0.1 내지 500 ㎍, 0.1 내지 100 ㎍, 0.1 내지 50 ㎍, 0.1 내지 5 ㎍, 5 내지 5000 ㎍, 5 내지 1000 ㎍, 5 내지 500 ㎍, 5 내지 100 ㎍, 5 내지 50 ㎍, 5 내지 10 ㎍, 10 내지 5000 ㎍, 10 내지 1000 ㎍, 10 내지 500 ㎍, 10 내지 100 ㎍, 10 내지 50 ㎍, 20 내지 5000 ㎍, 20 내지 1000 ㎍, 20 내지 500 ㎍, 20 내지 100 ㎍, 20 내지 50 ㎍, 50 내지 5000 ㎍, 50 내지 1000 ㎍, 50 내지 500 ㎍, 50 내지 100 ㎍, 100 내지 5000 ㎍, 100 내지 1000 ㎍ 또는 100 내지 500 ㎍의 범위일 것이다. 상기 투여량은 일반적으로 하루에 1회 내지 4회 투여될 것이고, 알맞게는 하루에 1회 또는 2회, 가장 알맞게는 하루에 1회 투여될 것이다.

본 발명의 일 실시양태에서, 제2 활성 성분은 흡입을 통해 투여된다. 흡입을 통해 투여될 경우 제2 활성 성분의 투여량은 일반적으로 0.1 마이크로그램 (㎍) 내지 5000 ㎍, 0.1 내지 1000 ㎍, 0.1 내지 500 ㎍, 0.1 내지 100 ㎍, 0.1 내지 50 ㎍, 0.1 내지 5 ㎍, 5 내지 5000 ㎍, 5 내지 1000 ㎍, 5 내지 500 ㎍, 5 내지 100 ㎍, 5 내지 50 ㎍, 5 내지 10 ㎍, 10 내지 5000 ㎍, 10 내지 1000 ㎍, 10 내지 500 ㎍, 10 내지 100 ㎍, 10 내지 50 ㎍, 20 내지 5000 ㎍, 20 내지 1000 ㎍, 20 내지 500 ㎍, 20 내지 100 ㎍, 20 내지 50 ㎍, 50 내지 5000 ㎍, 50 내지 1000 ㎍, 50 내지 500 ㎍, 50 내지 100 ㎍, 100 내지 5000 ㎍, 100 내지 1000 ㎍ 또는 100 내지 500 ㎍의 범위일 것이다. 상기 투여량은 일반적으로 하루에 1회 내지 4회 투여될 것이고, 알맞게는 하루에 1회 또는 2회, 가장 알맞게는 하루에 1회 투여될 것이다.

다른 실시양태에서, 본 발명은 제1 활성 성분 대 제2 활성 성분의 몰비가 1:1000 내지 1000:1, 예컨대 1:100 내지 100:1, 예를 들어 1:50 내지 50:1, 예를 들어 1:20 내지 20:1인 제약 생성물을 제공한다.

일 실시양태에서, 본 발명은 상기에서 정의한 바와 같은 제1 활성 성분 및 상기에서 정의한 바와 같은 제2 활성 성분을 조합물로 포함하는 제약 생성물을 제공하며, 이때 각 활성 성분은 흡입 투여를 위해 제형화된다. 이 실시양태의 추가의 측면에서, 제약 생성물은 제1 및 제2 활성 성분을 혼합물로 포함하는 제약 조성물의 형태이고, 이 조성물은 흡입 투여를 위해 제형화된다.

본 발명의 활성 성분은 용액제, 현탁액제, 에어로졸 또는 건식 분말 (예컨대 불규칙 또는 규칙 혼합물) 제형의 형태로 흡입에 의한 경구 투여를 통해 폐 및/또는 기도로 알맞게 전달된다. 예를 들어, 추가적인 부형제, 예컨대 에탄올, 계면활성제, 윤활제, 항산화제 또는 안정화제의 존재 또는 부재하에 적합한 추진제 중에 분산된 활성 성분을 투여하는데 정량식 흡입 장치를 사용할 수 있다. 적합한 추진제로는, 탄화수소, 클로로플루오로카본, 또는 히드로플루오로알칸 (예를 들어, 헵타플루오로알칸) 추진제, 또는 예를 들어 가압 정량식 흡입기 (pMDI) 내의 임의의 이러한 추진제의 혼합물이 있다. 바람직한 추진제는 P134a 및 P227이고, 이들 각각은 단독으로 또는 기타 추진제 및/또는 계면활성제 및/또는 기타 부형제와의 조합물로 사용될 수 있다. 분무된 수성 현탁액제 또는, 바람직하게는, 용액제는 또한 적합한 pH 및/또는 탄성을 조정하거나 하지 않고 단위-투여량 또는 다중-투여량 제형으로서 사용될 수 있다. 건식 분말의 전달을 위한 적합한 장치는 터뷰할러(Turbuhaler, 등록상표)이다.

본 발명의 제약 생성물은, 예를 들어 제1 및 제2 활성 성분을 흡입기의 별개의 챔버 내에 포함하여 투여시에 활성 성분들이 흡입기의 마우스피스 또는 환자의 구강 또는 둘 모두에서 혼합되도록 한 흡입기를 통해 (동시 사용을 위함); 또는 제1 및 제2 활성 성분이 별개의 흡입기 내에 존재하는 별개의 흡입기를 통해 (별개의 사용 또는 순차적 사용을 위함); 또는 제1 및 제2 활성 성분이 흡입기가 환자에게 제공될 때 흡입기 내에서 혼합물로 존재하는 흡입기를 통해 (동시 사용을 위함) 투여될 수 있다.

건식 분말 흡입기는 활성 성분을 단독으로, 또는 제약상 허용되는 담체 (예컨대 락토스)와의 조합물로 투여하는데 사용될 수 있고, 후자의 경우 미분된 분말로서 또는 규칙 혼합물로서 투여하는데 사용될 수 있다. 건식 분말 흡입기는 단위 투여량 또는 다중-투여량일 수 있고, 건식 분말 또는 분말-함유 캡슐을 사용할 수 있다.

정량식 흡입기, 네뷸라이저 및 건식 분말 흡입 장치는 널리 공지되어 있고, 이러한 다양한 장치가 사용가능하다.

본 발명의 제약 생성물은 기도의 폐색성 질환, 예컨대 천식, 예를 들면 기관지 천식, 알레르기성 천식, 내인성 천식, 외인성 천식, 운동-유도된 천식, 약물-유도된 천식 (아스피린 및 NSAID-유도된 천식 포함) 및 먼지-유도된 천식 (간헐성 및 지속성 천식 및 모든 중증도의 천식 포함), 및 기도 과민반응의 다른 원인; 만성 폐색성 폐 질환 (COPD); 기관지염, 예컨대 감염성 및 호산구성 기관지염, 및 만성 기관지염; 기종; 기관지확장증; 낭포성 섬유증; 유육종증; 농부 폐 및 관련 질환; 과민성 폐렴; 폐 섬유증, 예컨대 잠재성 섬유화 폐포염, 특발성 간질성 폐렴, 항-신생물 치료법의 합병증으로 나타나는 섬유증, 및 만성 감염, 예컨대 결핵 및 아스페르길루스증, 및 다른 진균성 감염; 폐 이식의 합병증; 폐 혈관의 혈관염성 및 혈전성 장애, 및 폐 고혈압; 진해 활성, 예컨대 기도의 염증성 및 분비성 증상과 관련된 만성 기침, 및 의인성 기침의 처치; 급성 및 만성 비염, 예컨대 약물성 비염 및 혈관운동성 비염; 통년성 및 봄철 알레르기성 비염, 예컨대 신경성 비염 (건초열); 비강 폴립증; 급성 바이러스 감염, 예컨대 통상적인 감기, 및 호흡기 세포융합 바이러스, 인플루엔자, 코로나바이러스 (SARS 포함) 또는 아데노바이러스에 의한 감염과 같은 호흡기 질환을 치료하는데 사용될 수 있다.

따라서, 본 발명은 추가로 치료법에 동시적으로, 순차적으로 또는 별개로 사용하기 위한 본 발명에 따른 제약 생성물을 제공한다.

본 발명은 추가로 호흡기 질환, 특히 만성 폐색성 폐 질환, 천식, 비염, 기종 또는 기관지염 (예컨대 만성 폐색성 폐 질환 또는 천식; 예를 들어, 만성 폐색성 폐 질환)을 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서의 본 발명에 따른 제약 생성물의 용도를 제공한다.

본 발명은 추가로

(a) 상기에서 정의한 바와 같은 제1 활성 성분의 치료상 유효량; 및

(b) 상기에서 정의한 바와 같은 제2 활성 성분의 치료상 유효량

을 호흡기 질환의 치료가 필요한 환자에게 동시에, 순차적으로, 또는 별개로 투여하는 것을 포함하는, 호흡기 질환의 치료 방법을 제공한다.

추가의 측면에서, 본 발명은 호흡기 질환, 특히 만성 폐색성 폐 질환, 천식, 비염, 기종 또는 기관지염 (예컨대 만성 폐색성 폐 질환 또는 천식; 예를 들어, 만성 폐색성 폐 질환)을 치료하기 위한, 상기에서 기재한 바와 같은 제약 생성물, 키트 또는 조성물의 용도를 제공한다.

본 상세한 설명의 내용 중, 용어 "치료법"에는 반대되는 특별한 언급이 없는 한 "예방"도 역시 포함된다. 용어 "치료상" 및 "치료적"도 이와 마찬가지로 해석되어야 한다. 예방은 특히 해당 상태 또는 장애의 사전 에피소드를 경험하였거나, 또는 해당 상태 또는 장애에 걸릴 위험이 높아진 것으로 생각되는 사람의 치료에 적합할 것으로 예상된다. 특정 상태 또는 장애가 발생할 위험이 있는 사람으로는 일반적으로 그 상태 또는 장애의 가족력이 있는 사람 또는 유전자 시험 또는 스크리닝에 의해 특히 상태 또는 장애가 발생하기 쉬운 것으로 확인된 사람이 포함된다.

일반적 제조 방법

이하에서는 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드의 제조 방법 (제조예 1 및 2), 및 상기 화합물 (이하의 검정 및 표 1에서는 화합물 A라 칭함)의 검정 및 그 활성을 나타내는 데이타를 제공한다.

아래의 검정에서, 화합물 X는 벤조에이트 염으로서 N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-클로로벤질)피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필)옥시]-4-히드록시페닐}아세트아미드이고, 화합물 W는 유리 산으로서 2-{2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-[(메틸아미노)카르보닐]페녹시}-2-메틸프로판산이다.

¹H NMR 스펙트럼은 베리언 이노바(Varian Inova) 400 MHz 또는 베리언 머큐리-VX(Varian Mercury-VX) 300 MHz 기기 상에서 기록하였다. 클로로포름-d (δ_H 7.27 ppm), 디메틸술폭시드-d₆ (δ_H 2.50 ppm), 아세토니트릴-d₃ (δ_H 1.95 ppm) 또는 메탄올-d₄ (δ_H 3.31 ppm)의 중앙 피크를 내부 참조 기준으로 사용하였다. 실리카 겔 (0.040-0.063 mm, 머크)을 사용하여 컬럼 크로마토그래피를 수행하였다. 달리 언급하지 않는 한, 출발 물질은 상업적으로 입수가능하였다. 모든 용매 및 시판되는 시약은 실험실 등급의 것으로, 입수한대로 사용하였다.

LC/MS 분석에 다음과 같은 방법을 이용하였다:

인스트루먼트 아질런트(Instrument Agilent) 1100; 컬럼 워터스 시메트리(Column Waters Symmetry) 2.1×30 mm; 질량 APCI; 유속 0.7 ml/분; 파장 254 nm; 용매 A: 물 + 0.1％ TFA; 용매 B: 아세토니트릴 + 0.1％ TFA; 구배 15-95％/B (8 분), 95％ B (1 분).

분석용 크로마토그래피는 입자 크기가 3.5 ㎛인 시메트리 C₁₈-컬럼 2.1×30 mm 상에서, 이동상으로서 아세토니트릴/물/0.1％ 트리플루오로아세트산을 5％→95％ 아세토니트릴의 구배로 8 분에 걸쳐 유속 0.7 ml/분으로 수행하였다.

실시예에 사용된 약어 또는 용어는 다음과 같은 의미를 갖는다:

SCX: 술폰산 흡착제를 사용하는 고상 추출

HPLC: 고성능 액체 크로마토그래피

DMF: N,N-디메틸포름아미드

제조예 1

N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드

a) tert-부틸 3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로파노에이트

1-나프탈렌 에탄올 (10 g)을 벤질트리메틸암모늄 히드록시드 (트리톤 B(Triton B, 등록상표); 메탄올 중의 40％ 용액 0.9 mL)로 처리하고, 생성된 혼합물을 진공하에 30 분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 0℃로 냉각시키고, tert-부틸 아크릴레이트 (8.19 g)로 처리하였다. 생성된 혼합물을 천천히 실온으로 가온하고, 밤새 교반하였다. 이어서, 조 혼합물을 산화 알루미늄 (30 g) 상에 흡수시키고, 디에틸에테르 (200 mL)로 용출시켰다. 유기물을 농축시켜 조 물질 (16.6 g)을 수득하였고, 이것을 1:8 디에틸에테르:헥산으로 용출하는 플래쉬 실리카 크로마토그래피로 정제하여, 부제 화합물 (12.83 g)을 수득하였다.

b) 3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판산

tert-부틸 3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로파노에이트 (6.19 g)를 디클로로메탄 (30 mL)에 녹이고, 트리플루오로아세트산 (5 mL)으로 처리하였다. 생성된 용액을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 트리플루오로아세트산을 1 mL 더 첨가하고, 용액을 밤새 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 2 M 수산화 나트륨 용액 (30 mL)에 녹이고, 에테르로 세척하였다 (2×20 mL). 이어서, 수성층을 산성화하고 (1 M 염산을 이용), 에테르로 추출하였다 (2×30 mL). 합한 유기물을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축시켜, 부제 화합물 (5.66 g)을 맑은 오일로 수득하였다.

c) N-(2-디에틸아미노에틸)-N-(2-히드록시에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]-프로판아미드

옥살릴 클로라이드 (0.33 g)를 디클로로메탄 (10 mL) 중의 3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판산 (0.53 g) 용액에 적가하고, 디메틸포름아미드 (1 소적)를 첨가하고, 실온에서 1 시간 동안 연속 교반하였다. 이어서, 혼합물을 농축시키고, 디클로로메탄 (10 mL)에 다시 용해시키고, 디클로로메탄 (10 mL) 중의 2-(2-디에틸아미노에틸아미노)에탄올 (0.35 g) 및 디이소프로필에틸아민 (0.56 g) 용액에 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고, 희석하고 (디클로로메탄, 50 mL), 물 (2×20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하고, 황산 마그네슘 상에서 건조시키고 농축시켜 조 생성물 (0.91 g)을 수득하였고, 이것을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (디클로로메탄 중의 5 내지 7％ 메탄올로 용출) 부제 화합물 0.63 g을 수득하였다.

d) N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드

디클로로메탄 (1 mL) 중의 디메틸술폭시드 (0.097 g)의 용액을 -78℃에서 디클로로메탄 (10 mL) 중의 옥살릴 클로라이드 (0.079 g)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 15 분 동안 교반한 후에 디클로로메탄 (1 mL + 1 mL 세척액) 중의 N-(2-디에틸아미노에틸)-N-(2-히드록시에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]-프로판아미드 (0.22 g)의 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 15 분 더 교반하였다. 트리에틸아민 (0.29 g)을 첨가하고, 반응물을 1 시간에 걸쳐 실온으로 가온한 후, 혼합물을 희석하고 (디클로로메탄 30 mL), 유기물을 중탄산나트륨 (20 mL), 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축시켜 부제 화합물 (0.21 g)을 수득하였다.

조 생성물을 메탄올 (10 mL)에 용해시키고, 7-(2-아미노에틸)-4-히드록시-1,3-벤티아졸-2(3H)-온 히드로클로라이드 (문헌 [Organic Process Research ＆ Development 2004, 8(4), 628-642]에 개략된 절차에 따라 제조함; 0.131 g)를 아세트산 (0.1 mL) 및 물 (0.1 mL)과 함께 첨가하였다. 실온에서 30 분 동안 교반한 후에, 나트륨 시아노보로히드라이드 (0.020 g)를 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 암모니아 (메탄올 중 7N, 1 mL)를 첨가하고, 혼합물을 농축시켰다. 조 잔류물을 1％ 암모니아; 디클로로메탄 중 5％ 내지 7％ 메탄올로 용출하는 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 조 생성물을 다음 단계에 바로 사용하였다.

e) N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드

N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 (0.052 g)를 에탄올 (1.5 mL)에 용해시키고, 48％ 브롬화수소산 (21 ㎕)으로 처리하였다. 이를 여과하여 백색 고체 디히드로브로마이드 염 (0.058 g)을 수집하였다.

NMR은 298K에서 대략 2:1의 회전 이성질체 혼합물을 나타내었다.

제조예 2

a) N'-(2,2-디메톡시에틸)-N,N-디에틸-에탄-1,2-디아민

메탄올 (500 mL) 중의 N,N-디에틸-에틸렌디아민 (150 g)의 용액을 10 내지 15℃에서 글리옥살 디메틸아세탈 (물 중 60 중량％ 용액, 225 g)을 빠르게 적가하여 처리하였다. 첨가가 완료된 후에 용액을 15℃로 가온하고, 이어서 22℃로 가온하고 이 온도에서 16 시간 동안 방치하였다. 반응 혼합물을 탄소상 5％ 팔라듐 (존슨-매티(Johnson-Matthey) 유형 38H 페이스트, 15 g)으로 처리하고, GC/MS에 의한 판단으로 반응이 완료될 때까지 6 bar에서 수소화시켰다. 촉매를 여과에 의해 제거하고, 여과물을 증발 건조시켜 (톨루엔 공비, 2.5 L) 부제 화합물 196.2 g을 수득하였다.

b) N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2,2-디메톡시에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드

옥살릴 클로라이드 (151 mL)를 디클로로메탄 (2.1 L) 및 DMF (0.5 mL) 중의 3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판산 (389 g) (실시예 7의 단계 b))의 용액에 45 분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 16 시간 더 교반하였다. 이후에 혼합물을 농축시키고, DCM (1.7 L)에 다시 용해시키고, DCM (1.7 L) 중의 N'-(2,2-디메톡시에틸)-N,N-디에틸에탄-1,2-디아민 (325 g) 및 이소프로필디에틸아민 (551 mL)의 용액에 0℃에서 1.75 시간에 걸쳐 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하고, 수성 포화 중탄산나트륨 용액 (5×1 L), 및 물 (1.5 L)로 세척하고, 황산 나트륨 상에서 건조시키고 농축시켜, 부제 화합물 650 g을 수득하였다.

m/e 431 (M+H⁺, 100％)

c) N-[2-(디에틸아미노)에틸]-3-[2-(1-나프틸)에톡시]-N-(2-옥소에틸)프로판아미드

DCM (270 mL) 중의 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2,2-디메톡시에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 (93 g)의 용액을 트리플루오로아세트산 (270 mL)으로 0℃에서 1.5 시간에 걸쳐 적가하여 처리하였다. 첨가한 후에 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 1 시간 더 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 수성 포화 중탄산나트륨 용액 (1800 mL, 주의)에 부었다. 수성 혼합물을 DCM으로 추출하고 (4×400 mL), 합한 추출물을 황산 마그네슘 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 다음 반응에 바로 사용하였다.

d) N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드

무수 NMP (216 mL) 중의 7-(2-아미노-에틸)-4-히드록시-3H-벤조티아졸-2-온 히드로클로라이드 (53 g)의 현탁액을 60℃로 가열하고, 메탄올 (102 mL) 중의 NaOH (8.2 g)의 용액으로 한 번에 처리하였다. 밝은 오렌지색 현탁액을 실온으로 냉각시키고, 디클로로메탄 (475 mL) 중의 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-3-[2-(1-나프틸)에톡시]-N-(2-옥소에틸)프로판아미드의 용액을 20 분에 걸쳐 적가하여 처리하였다. 반응물이 25 분 동안 교반되도록 두었다. 이어서, 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드 (91.5 g)를 20 분에 걸쳐 나누어 첨가한 후에 혼합물을 50 분 더 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (1.8 L)에 붓고, 산성 용액 (pH 5)을 tert-부틸 메틸 에테르 (TBME)로 세척하였다 (3×500 mL). 수성상을 고체 탄산칼륨을 첨가하여 pH 8로 염기화시키고, 디클로로메탄으로 추출하고 (3×750 mL), 합한 유기 추출물을 황산 마그네슘 상에서 건조시키고 농축시켜, 어두운 색 오일을 수득하였다. 이를 에탄올 (200 mL)에 용해시키고, 48％ 수성 브롬화수소산 (73 mL)을 첨가하였다. 용액을 30 분 동안 숙성시킨 후에 증발 건조시켰다. 잔류물을 에탄올 (560 mL)로 분쇄시키고, 생성된 고체를 여과에 의해 수집하고, 50℃에서 진공하에 건조시켰다. 점착성 고체를 끓고 있는 에탄올 (100 mL)에 현탁시키고, 고온 여과하였다. 수집한 고체를 50℃에서 진공하에 건조시켰다. 이 물질을 에탄올/물 (3:1, 500 mL)로부터 재결정화시켰다. 밤새 정치시킨 후에 생성된 고체를 여과하여 수집하고, 빙냉 에탄올 (75 mL)로 세척하였다. 50℃에서 24 시간 동안 진공하에 건조시켜 표제 화합물 57 g을 수득하였다.

용매 중의 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드를 적합한 산과 혼합하여, N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드의 다른 염을 제조할 수 있다. 그 실시예를 이하에 제공한다.

제조예 3

N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 시트레이트

시트르산 (248.96 mg)을 메탄올 (5 mL) 중의 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 (0.5 g)의 용액에 첨가하였다. 즉시 맑은 용액이 탁해졌고, 오렌지색 오일이 가라앉았다. 이 혼합물을 60℃의 외부 온도에서 가열하여 맑은 용액을 형성하였고, 이후 이것을 실온으로 냉각시키고 48 시간 동안 교반하였다. 생성된 침전물을 여과하여 수집하고, 메탄올 (1 mL) 및 디에틸 에테르 (1 mL)로 세척하였다. 이어서, 고체를 4 시간 동안 실온에서 진공하에 건조시켜 표제 화합물 (0.3 g)을 수득하였다.

제조예 4

N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디토실레이트

p-톨루엔술폰산 1수화물 (667.33 mg)을 메탄올 (10 mL) 중의 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 (1 g)의 용액에 한 번에 첨가하여 맑은 용액을 생성하였다. 이것을 실온에서 30 분 동안 교반한 후, 용매를 진공하에 제거하였다. 잔류물을 디에틸 에테르 (20 mL) 중에서 실온에서 16 시간 동안 교반한 다음, 용매를 제거하고, 메틸 t-부틸 에테르 (20 mL)를 첨가하였다. 이어서, 이 혼합물을 실온에서 16 시간 동안 교반한 후, 생성된 고체를 여과하여 수집하고, 메틸 t-부틸 에테르 (5 mL)로 세척하였다. 표제 화합물을 실온에서 16 시간 동안 진공하에 건조시켜 표제 화합물을 고체 (1.18 g)로 수득하였다.

제조예 5

N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 포스페이트 디-헤미-히드레이트

인산 (199.19 mg)을 메탄올 (10 mL) 중의 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 (1 g)의 용액에 첨가하여 검을 생성하였다. 혼합물을 가열 환류하고, 연속 교반하여 가동성 고체를 수득하였다. 현탁액을 천천히 실온으로 냉각시킨 다음 여과하고, 케이크를 메탄올 (2 mL)로 세척하였다. 표제 화합물 (0.93 g)을 필터 상에서 건조시켰다.

제조예 6

N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디지나포에이트 2수화물

메탄올 (3 mL) 중의 1-히드록시-2-나프토산 (328.42 mg)의 현탁액을 메탄올 (3 mL) 중의 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판-아미드 (0.5 g)의 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 가열 환류한 다음, 실온으로 냉각시키고 16 시간 동안 교반하였다. 표제 화합물을 여과하고, 메탄올 (1 mL)로 세척하고, 진공하에 실온에서 1 시간 동안 건조시켰다 (0.47 g).

제조예 7

N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디지나포에이트 디-헤미-히드레이트

2수화물 다형체 A (제조예 6) 20 mg을 한 주 동안 물 (0.5 ml) 중에 슬러리화시켰다. 생성된 현탁액을 원심분리하고, 상청액을 고체 물질로부터 분리시킨 후, 흄 후드 내에서 밤새 공기 건조되도록 두었다.

제조예 8

N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 술페이트

진한 황산 (23.98 ㎕)을 메탄올 (2.5 mL) 중의 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 (0.25 g)의 용액에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 20 분 동안 교반한 다음, 60℃의 외부 온도에서 가열하고, 다시 실온으로 냉각시켰다. 이어서, 메틸 t-부틸 에테르 (0.5 mL)를 첨가하고, 혼합물을 60℃의 외부 온도에서 가열한 다음, 실온으로 냉각시켰다. 메탄올을 이용하여 상기 혼합물을 용해시켜 다른 플라스크로 옮긴 다음, 용매를 진공하에 제거하였다. 메틸 t-부틸 에테르 (10 mL)를 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 16 시간 동안 교반하였다. 표제 화합물을 여과하여 수집하고, 필터 상에서 건조시켰다 (0.24 g).

제조예 9

N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 모노 벤조에이트

벤조산 (52.75 mg)을 메탄올 (2.5 mL) 중의 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 (0.25 g)의 용액에 한 번에 첨가하여 맑은 용액을 생성하였다. 이것을 실온에서 1 시간 동안 교반한 다음, 용매를 진공하에 제거하였다. 잔류물을 아세토니트릴 (5 mL) 중에서 실온에서 16 시간 동안 교반한 다음, 용매를 제거하고, 메틸 t-부틸 에테르 (10 mL)를 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반한 후, 표제 화합물을 여과하여 수집하였다. 상기 표제 화합물을 고체로 단리하였다.

제조예 10

결정형으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 모노 벤조에이트

제조예 9로부터의 고체 모노-벤조에이트 염 20 mg을 프로판-2-올 1 ml에 용해시켰다. 생성된 용액이 천천히 증발되도록 흄 후드 내의 실온에서 방치하여 회백색 고체를 잔류시켰다.

제조예 11

N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 모노 푸마레이트

푸마르산 (168.31 mg)을 메탄올 (2 mL) 중의 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 (0.84 g)의 용액에 첨가하여, 탁한 혼합물을 형성하였다. 상기 혼합물을 60℃의 외부 온도에서 가온한 다음, 실온으로 냉각시키고, 16 시간 동안 교반하였다. 증발 건조시킨 후, 표제 화합물을 발포체로 수득하였다.

제조예 12

N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 모노 베실레이트

벤젠술폰산 (158.51 mg)을 메탄올 (5.8 mL) 중의 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 (0.58 g)의 용액에 첨가하여 맑은 용액을 생성하였다. 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 증발 건조시킨 후, 표제 화합물을 고체로 수득하였다.

아드레날린성 β2 매개 cAMP 생성

세포 제조

H292 세포를 10％(v/v) FBS (태아 소 혈청) 및 2 mM L-글루타민을 함유하는 RPMI 배지내에서, 37℃, 5％ CO₂ 하의 225 cm² 플라스크 인큐베이터에서 성장시켰다.

실험 방법

부착된 H292 세포를 어큐타제(Accutase; 상표명) 세포 분리 용액으로 15 분 동안 처리하여 조직 배양 플라스크로부터 떼어내었다. 플라스크를 37℃, 5％ CO₂ 하의 가습 인큐베이터에서 15 분 동안 인큐베이션하였다. 탈착된 세포를 RPMI 배지 (10％(v/v) FBS 및 2 mM L-글루타민 함유)에 0.05×10⁶개 세포/mL로 재현탁시켰다. 100 ㎕ 중의 5000개의 세포를 조직-배양-처리된 96-웰 플레이트의 각각의 웰에 첨가하고, 세포를 37℃, 5％ CO₂ 하의 가습 인큐베이터에서 밤새 인큐베이션하였다. 배양 배지를 꺼내어, 세포를 검정 완충액 100 ㎕로 2회 세척하고, 검정 완충액 (10 mM HEPES pH 7.4 및 5 mM 글루코스 함유 HBSS 용액) 50 ㎕로 교체하였다. 세포를 실온에서 20 분 동안 휴지시킨 후에, 롤리프람 (1.2 mM, 2.4％(v/v) 디메틸술폭시드를 함유하는 검정 완충액으로 제조) 25 ㎕를 첨가하였다. 세포를 롤리프람과 함께 10 분 동안 인큐베이션한 후에 화합물 A를 첨가하고, 세포를 실온에서 60 분 동안 인큐베이션하였다. 검정에서 최종 롤리프람 농도는 300 μM이었으며, 최종 비히클 농도는 1.6％(v/v) 디메틸술폭시드였다. 상청액을 제거하고, 검정 완충액 100 ㎕로 1회 세척하고, 용해 완충액 50 ㎕로 교체하여 반응을 중단시켰다. 세포 단일층을 -80℃에서 30 분 동안 (또는 밤새) 동결시켰다.

알파스크린(AlphaScreen; 상표명) cAMP 검출

세포 용해물 중 cAMP (시클릭 아데노신 모노포스페이트)의 농도를 알파스크린(상표명) 방법을 이용하여 결정하였다. 동결된 세포 플레이트를 플레이트 진탕기 상에서 20 분 동안 해동시킨 다음, 세포 용해물 10 ㎕를 96-웰 백색 플레이트로 옮겼다. 비오티닐화된 cAMP와 예비 인큐베이션시킨 혼합 알파스크린(상표명) 검출 비드 40 ㎕를 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 암실에서 10 시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 알파스크린(상표명) 신호는 제조업자가 제안한 설정으로 엔비젼(EnVision) 분광광도계 (퍼킨-엘머 인크.(Perkin-Elmer Inc.))를 이용하여 측정하였다. cAMP 농도는 표준 cAMP 농도를 사용한 동일한 실험에서 결정된 검량선을 참조하여 결정하였다. 화합물 A에 대한 농도 반응 곡선을 구축하고, 데이터를 4 가지 파라미터의 로지스틱 방정식에 피팅시켜 pEC₅₀ 및 내재 활성을 모두 결정하였다. 내재 활성은 각각의 실험에서 포르모테롤에 대해 결정된 최대 활성에 비례하는 분율로 표시하였다. 화합물 A에 대한 결과를 아래 표 1에 나타내었다.

선택성 검정

아드레날린성 α1D

막 제조

재조합 인간 α1_D 수용체를 발현하는 인간 배아 신장 293 (HEK293) 세포로부터 막을 제조하였다. 이들을 검정 완충액 (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 0.1％ 젤라틴, pH 7.4)으로 희석하여 최대 특이적 결합 및 최소 특이적 결합 사이에 클리어 윈도우(clear window)를 제공하는 막의 최종 농도를 제공하였다.

실험 방법

검정은 U-바닥형 96-웰 폴리프로필렌 플레이트에서 수행하였다. [³H]-프라조신 (0.3　nM 최종 농도) 10 ㎕ 및 화합물 A (10× 최종 농도) 10　㎕를 각각의 시험 웰에 첨가하였다. 각각의 검정 플레이트에서, 비히클 (검정 완충액 중 10 ％(v/v) DMSO; 최대 결합을 정의함) 10 ㎕ 또는 BMY7378 (10 μM 최종 농도; 비-특이적 결합 (NSB)을 정의함) 10 ㎕의 존재하의 [³H]-프라조신 결합을 위한 8개의 복제물을 수득하였다. 이어서, 막을 첨가하여 최종 부피가 100 ㎕가 되도록 하였다. 플레이트를 실온에서 2 시간 동안 인큐베이션한 후에 96-웰 플레이트 톰텍(Tomtec) 세포 수확기를 이용하여 검정 완충액 중에서 1 시간 동안 예비 침지시킨 PEI 코팅된 GF/B 필터 플레이트 상에서 여과하였다. 4℃에서 세척 완충액 (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, pH 7.4) 250　㎕로 5회 세척하여 결합되지 않은 방사능을 제거하였다. 플레이트를 건조시킨 후, 팩커드(Packard) 플레이트 실러(sealer)를 이용하여 아래 부분부터 밀봉하고, 마이크로신트-O(MicroScint-O) (50　㎕)를 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 밀봉하고 (탑실 A(TopSeal A)), 필터-결합된 방사능을 섬광 계수기 (탑카운트(TopCount), 팩커드 바이오사이언스(Packard BioScience))로 3-분 카운팅 프로토콜을 이용하여 측정하였다.

전체 특이적 결합 (B₀)은 평균 최대 결합으로부터 평균 NSB를 감하여 결정하였다. NSB 값은 또한 다른 모든 웰로부터의 값으로부터 감하였다. 이들 데이타는 B₀의 백분율로 나타내었다. 화합물 농도-효과 곡선 ([³H]-프라조신 결합의 억제)은 전형적으로 0.1 nM 내지 10 μM 범위의 연속 희석액을 사용하여 결정하였다. 데이타를 4가지 파라미터의 로지스틱 방정식에 피팅시켜 화합물 효능을 결정하였고, 이를 pIC50 ([³H]-프라조신 결합의 50％ 억제를 유도하는 네거티브 로그 몰 농도(negative log molar concentration))으로 나타내었다. 결과를 아래 표 1에 나타내었다.

아드레날린성 β1

막 제조

재조합 인간 아드레날린성 β1 수용체를 함유하는 막을 유로스크린(Euroscreen)으로부터 수득하였다. 이들을 검정 완충액 (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 120 mM NaCl, 0.1％ 젤라틴, pH 7.4)으로 희석하여 최대 특이적 결합 및 최소 특이적 결합 사이에 클리어 윈도우를 제공하는 막의 최종 농도를 제공하였다.

실험 방법

검정은 U-바닥형 96-웰 폴리프로필렌 플레이트에서 수행하였다. [¹²⁵I]-요오도시아노핀돌롤 (0.036　nM 최종 농도) 10 ㎕ 및 화합물 A (10× 최종 농도) 10　㎕를 각각의 시험 웰에 첨가하였다. 각각의 검정 플레이트에서, 비히클 (검정 완충액 중 10％(v/v) DMSO; 최대 결합을 정의함) 10 ㎕ 또는 프로프라놀롤 (10 μM 최종 농도; 비-특이적 결합 (NSB)을 정의함) 10 ㎕의 존재하의 [¹²⁵I]-요오도시아노핀돌롤 결합을 위한 8개의 복제물을 수득하였다. 이어서, 막을 첨가하여 최종 부피가 100 ㎕가 되도록 하였다. 플레이트를 실온에서 2 시간 동안 인큐베이션한 후에 96-웰 플레이트 톰텍 세포 수확기를 이용하여 검정 완충액 중에서 1 시간 동안 예비 침지시킨 PEI 코팅된 GF/B 필터 플레이트 상에서 여과하였다. 4℃에서 세척 완충액 (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 120 mM NaCl, pH 7.4) 250　㎕로 5회 세척하여 결합되지 않은 방사능을 제거하였다. 플레이트를 건조시킨 후, 팩커드 플레이트 실러를 이용하여 아래 부분부터 밀봉하고, 마이크로신트-O (50　㎕)를 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 밀봉하고 (탑실 A), 필터-결합된 방사능을 섬광 계수기 (탑카운트, 팩커드 바이오사이언스)로 3-분 카운팅 프로토콜을 이용하여 측정하였다.

전체 특이적 결합 (B₀)은 평균 최대 결합으로부터 평균 NSB를 감하여 결정하였다. NSB 값은 또한 다른 모든 웰로부터의 값으로부터 감하였다. 이들 데이타는 B₀의 백분율로 나타내었다. 화합물 농도-효과 곡선 ([¹²⁵I]-요오도시아노핀돌롤 결합의 억제)은 전형적으로 0.1 nM 내지 10 μM 범위의 연속 희석액을 사용하여 결정하였다. 데이타를 4가지 파라미터의 로지스틱 방정식에 피팅시켜 화합물 효능을 결정하였고, 이를 pIC₅₀ ([¹²⁵I]-요오도시아노핀돌롤 결합의 50％ 억제를 유도하는 네거티브 로그 몰 농도)으로 나타내었다. 결과를 아래 표 1에 나타내었다.

도파민 D2

막 제조

재조합 인간 도파민 서브타입 D2 수용체를 함유하는 막을 퍼킨 엘머사로부터 구입하였다. 이들을 검정 완충액 (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 120 mM NaCl, 0.1％ 젤라틴, pH 7.4)으로 희석하여 최대 특이적 결합 및 최소 특이적 결합 사이에 클리어 윈도우를 제공하는 막의 최종 농도를 제공하였다.

실험 방법

검정은 U-바닥형 96-웰 폴리프로필렌 플레이트에서 수행하였다. [³H]-스피페론 (0.16　nM 최종 농도) 30 ㎕ 및 화합물 A (10× 최종 농도) 30　㎕를 각각의 시험 웰에 첨가하였다. 각각의 검정 플레이트에서, 비히클 (검정 완충액 중 10 ％(v/v) DMSO; 최대 결합을 정의함) 30 ㎕ 또는 할로페리돌 (10 μM 최종 농도; 비-특이적 결합 (NSB)을 정의함) 30 ㎕의 존재하의 [³H]-스피페론 결합을 위한 8개의 복제물을 수득하였다. 이어서, 막을 첨가하여 최종 부피가 300 ㎕가 되도록 하였다. 플레이트를 실온에서 2 시간 동안 인큐베이션한 후에 96-웰 플레이트 톰텍 세포 수확기를 이용하여 검정 완충액 중에서 1 시간 동안 예비 침지시킨 PEI 코팅된 GF/B 필터 플레이트 상에서 여과하였다. 4℃에서 세척 완충액 (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 120 mM NaCl, pH 7.4) 250　㎕로 5회 세척하여 결합되지 않은 방사능을 제거하였다. 플레이트를 건조시킨 후에 팩커드 플레이트 실러를 이용하여 아래 부분부터 밀봉하고, 마이크로신트-O (50　㎕)를 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 밀봉하고 (탑실 A), 필터-결합된 방사능을 섬광 계수기 (탑카운트, 팩커드 바이오사이언스)로 3-분 카운팅 프로토콜을 이용하여 측정하였다.

전체 특이적 결합 (B₀)은 평균 최대 결합으로부터 평균 NSB를 감하여 결정하였다. NSB 값은 또한 다른 모든 웰로부터의 값으로부터 감하였다. 이들 데이타는 B₀의 백분율로 나타내었다. 화합물 농도-효과 곡선 ([³H]-스피페론의 결합의 억제)은 전형적으로 0.1 nM 내지 10 μM 범위의 연속 희석액을 사용하여 결정하였다. 데이타를 4가지 파라미터의 로지스틱 방정식에 피팅시켜 화합물 효능을 결정하였고, 이를 pIC₅₀ ([³H]-스피페론 결합의 50％ 억제를 유도하는 네거티브 로그 몰 농도)으로 나타내었다. 화합물 A에 대한 결과를 아래 표 1에 나타내었다.

화합물	β2 pEC50	β2 Int Act	α1 결합 pIC50	β1 결합 pIC50	D2 결합 pIC50
A	8.2	0.8	6.6	<5	6.1

이하에서는 설명적 실시예를 들어 본 발명을 더욱 상세하게 설명할 것이다. 특정 실시예는 이하의 도면을 참조한다.

도 1은 LPS 접종 (10 ㎍/kg) 후 CRL:CD 래트에서 LPS-유도된 폐포내 호중구증가를 보여준다. LPS를 접종하기 30 분 전에 래트에 비히클, 화합물 A (0.2 ㎍/kg), 부데소니드 (0.1 ㎍/kg), 또는 화합물 A (0.2 ㎍/kg) 및 부데소니드 (0.1 ㎍/kg)의 조합물을 투여하였다.

도 2는 LPS 접종 (10 ㎍/kg) 후 CRL:CD 래트에서 LPS-유도된 폐포내 호중구증가를 보여준다. LPS를 접종하기 30 분 전에 래트에 비히클, 화합물 A (0.1 ㎍/kg), 화합물 X (30 ㎍/kg), 또는 화합물 A (0.1 ㎍/kg) 및 화합물 X (30 ㎍/kg)의 조합물을 투여하였다.

도 3은 LPS 접종 (10 ㎍/kg) 후 CRL:CD 래트에서 LPS-유도된 폐포내 호중구증가를 보여준다. LPS를 접종하기 30 분 전에 래트에 비히클, 화합물 A (0.1 ㎍/kg), 화합물 W (3 ng/kg), 또는 화합물 A (0.1 ㎍/kg) 및 화합물 W (3 ng/kg)의 조합물을 투여하였다.

도 4는 기니아 피그에서 히스타민-유도된 기관지수축을 보여준다. 히스타민을 접종하기 2 시간 전에 기니아 피그에 비히클, 화합물 A 1 ㎍/kg 및 27㎍/kg, 로플루밀라스트 1 mg/kg, 또는 화합물 A 1 ㎍/kg 및 로플루밀라스트 1 mg/kg의 조합물을 투여하였다.

도 5는 기니아 피그에서 메타콜린-유도된 기관지수축을 보여준다. 메타콜린을 접종하기 2 시간 전에 기니아 피그에 비히클, 화합물 A 1 ㎍/kg 및 27 ㎍/kg, 티오트로퓸 브로마이드 0.03 ㎍/kg, 또는 화합물 A 1 ㎍/kg 및 티오트로퓸 브로마이드 0.03 ㎍/kg의 조합물을 투여하였다.

도 6은 시험관내 기니아 피그 기관에 대한 로플루밀라스트 (1 μM), 화합물 A (3 nM), 및 로플루밀라스트 (1 μM)의 존재하의 화합물 A (3 nM)의 개시 시간을 보여준다.

도 7은 화합물 A의 상승 농도 하에서의 로플루밀라스트 (30 nM)에 의한 PBMC에서의 LPS-유도된 TNFα 생산의 최대 억제를 보여준다.

실시예 1

CRL:CD 래트에의 리포폴리사카라이드 (LPS) 기관내 접종 이후 폐포내 호중구 이동에 대한 화합물 활성의 평가

CRL:CD 래트에의 LPS 접종은 호중구가 폐로 유입되게 한다. 회복가능한 기체 마취 (산소 중 이소플루란 5％) 하에, 래트에게 LPS 10 ㎍/kg을 기관내 투여로 접종하기 30 분 전에, 비히클 (0.05 M 포스페이트, 0.1％ 트윈(Tween) 80, 0.6％ 염수, pH 6) 또는 화합물을 기관내 경로를 통해 투여하였다.

LPS 접종 4 시간 후, 펜토바르비톤 나트륨 1 mL로 래트 (250 내지 400 g)를 안락사시켰다. 기관을 절개하여 캐뉼라를 삽입하였다. 이어서, 실온에서 이소톤(Isoton) 3 mL를 사용하여 기도를 세척하였다. 기도에서 이소톤 (영국 하이 위컴 소재의 베크만쿨터(BeckmanCoulter)사 제)을 제거하기 전에 10 초간 그대로 두었다. 염증 세포를 함유하는 기관지-폐포 세척액 (BAL)을 15 mL 원심분리용 튜브에 넣고 얼음 위에 놓아두었다. 이 과정을 3회 반복하였다. BAL 액의 분취량을 덜어내어 시스멕스(Sysmex)(영국 밀턴 케인즈 소재의 시스멕스 유케이(Sysmex UK)사 제) 상에서 염증 세포를 계수하였다. 호중구를 백만/동물 (평균±평균의 표준 오차)로 나타내었다.

화합물 A 및 부데소니드 조합물:

래트에 비히클, 화합물 A (0.2 ㎍/kg), 부데소니드 (0.1 ㎍/kg), 또는 화합물 A (0.2 ㎍/kg) 및 부데소니드 (0.1 ㎍/kg)의 조합물을 투여하였다. 화합물 비히클/염수 그룹 내 호중구의 수치는 0.61±0.11 백만/동물 (n=8)이었고, 화합물 비히클/LPS 접종 그룹 내에서는 14±1.6 백만/동물 (n=20)이었다. LPS 접종 30 분 전에 화합물 A를 0.2 ㎍/kg으로 기관내 투여한 것은 호중구증가를 45％ 억제하였다 (7.8±0.71 백만/동물, n=20). 부데소니드 (0.1 ㎍/kg)는 LPS-유도 호중구증가를 51％ 억제하였고 (7.1±0.77 백만/동물, n=19), 화합물 A (0.2 ㎍/kg) 및 부데소니드 (0.1 ㎍/kg) 조합물은 55％ 억제하였다 (6.6±0.63 백만/동물, n=19) (도 1).

화합물 A 및 화합물 X 조합물:

래트에 비히클, 화합물 A 0.1 ㎍/kg, 화합물 X 30 ㎍/kg, 또는 화합물 A (0.1 ㎍/kg) 및 화합물 X (30 ㎍/kg)의 조합물을 투여하였다. 화합물 비히클/염수 그룹 내 호중구의 수치는 0.35±0.08 백만/동물 (n=4)이었고, 화합물 비히클/LPS 접종 그룹 내에서는 12±1.7 백만/동물 (n=10)이었다. LPS 접종 30 분 전에 화합물 A를 0.1 ㎍/kg으로 기관내 투여한 것은 호중구증가를 26％ 억제하였다 (9.1±1.1 백만/동물, n=10). 화합물 X (30 ㎍/kg)는 LPS-유도 호중구증가를 30％ 억제하였고 (8.5±0.75 백만/동물, n=10), 화합물 A (0.1 ㎍/kg) 및 화합물 X (30 ㎍/kg)의 조합물은 36％ 억제하였다 (7.9±0.97 백만/동물, n=10) (도 2).

화합물 A 및 화합물 W 조합물:

래트에 비히클, 화합물 A 0.1 ㎍/kg, 화합물 W 3 ng/kg, 또는 화합물 A (0.1 ㎍/kg) 및 화합물 W (3 ng/kg)의 조합물을 투여하였다. 화합물 비히클/염수 그룹 내 호중구의 수치는 0.68±0.12 백만/동물 (n=4)이었고, 화합물 비히클/LPS 접종 그룹 내에서는 11±1.8 백만/동물 (n=10)이었다. LPS 접종 30 분 전에 화합물 A를 0.1 ㎍/kg으로 기관내 투여한 것은 호중구증가를 43％ 억제하였다 (5.0±0.70 백만/동물, n=10). 화합물 W (3 ng/kg)는 LPS-유도 호중구증가를 56％ 억제하였고 (6.3±1.1 백만/동물, n=10), 화합물 A (0.1 ㎍/kg) 및 화합물 W (3 ng/kg)의 조합 물은 70％ 억제하였다 (3.6±0.55 백만/동물, n=10) (도 3).

실시예 2

기니아 피그에의 리포폴리사카라이드 (LPS) 에어로졸 접종 이후 폐포내 호중구 이동에 대한 화합물 활성의 평가

수컷 던킨-할틀리(Dunkin-Hartley) 기니아 피그 (300 내지 600 g)를 실린더형 에어로졸 챔버가 무작위로 주위에 부착된 전면 개방형 기니아 피그 수용 원뿔체에 넣어두었다. 기니아 피그를 접종 원뿔체 내에 두고, 그룹 당 비히클 에어로졸 또는 0.9％ 염수 중의 0.1 내지 30 ㎍/ml의 농도의 LPS 에어로졸에 노출시켰다. 에어로졸은 컬럼당 2개의 제트 네뷸라이저를 사용하여 12 L/m의 유속으로 발생시켰다. 각 네뷸라이저에는 접종제를 10 ml 넣었다. 이와 별도로, 동물에 0.1 내지 10 ㎍/kg를 기관내 투여하였다. 실험 프로토콜에 따라 이것을 최대 8회 반복하였다.

실험 프로토콜에 따라 접종 전후의 다양한 시점에 적절한 경로 및 빈도로 기니아 피그에 비히클, 표준 화합물 또는 시험 화합물을 투여하였다. 시험 화합물 그룹은 상이한 투여량의 동일한 화합물일 수 있거나, 또는 단일 투여량의 상이한 화합물 또는 2가지의 조합물일 수 있다. 시험 화합물은 복강내, 정맥내, 또는 피하 주사에 의해, 또는 흡입 투여 또는 기관내 투여에 의해 주입하였다. 접종 4 시간 내지 24 시간 이후에 마취제를 과량투여하여 (0.5 ml 유테탈(Euthetal)을 복강내 주사) 접종된 기니아 피크를 사망시켰다. 이어서, 폐를 세척하였다. 기관을 노출시키고 루어 피팅 캐뉼라 (luer fitting cannula, 오렌지색, 크기 8FG)를 이용 하여 캐뉼라를 삽입한 후, 행크스 버퍼드 염 용액 (Hanks Buffered Salt Solution (HBSS, EDTA 없음))의 3×5 ml 분취량으로 세척하였다. 세척은 흉곽을 부드럽게 맛사지하듯 하여, 액체가 폐에서 적절하게 섞이도록 하였다. 세척액을 15 ml의 원뿔형 폴리프로필렌 원심분리용 튜브에 담고, BAL 액의 분취량을 덜어내어 시스멕스 (영국 밀턴 케인즈 소재의 시스멕스 유케이사 제) 상에서 계수하였다. 700 rpm에서 5 분 동안 작동시킨 샨돈 시토스핀3 (Shandon Cytospin3) 내의 시토스핀 깔대기에 BAL 액의 100 ㎕ 분취량을 첨가하여 시토스핀 슬라이드를 제조하였다. 슬라이드를 헤마-테크-2000(Hema-Tek-2000) 자동 슬라이드 염색기 상에서 라이트-김사(Wright-Giemsa) 염색을 이용하여 염색하였고, 전형적으로 200 개의 세포가 현미경 하에서 계수되었다. 세포를 호산구, 호중구, 및 단핵 세포 (단핵 세포에는 단핵구, 대식세포, 및 림프구가 포함됨)로 분류하고, 총 갯수의 백분율로 나타내었다.

실시예 3

마우스의 리포폴리사카라이드 (LPS) 에어로졸 접종 이후 폐포내 호중구 이동에 대한 화합물 활성의 평가

수컷 C57BL/6/J 또는 BALB/C 마우스 (20 내지 35 g)를 최대 20 그룹으로 퍼스펙스(Perspex) 노출 박스에 넣고, 0.3 mg/ml LPS 또는 0.9％ w/v 염수의 에어로졸에 노출시켰다. LPS (시그마(Sigma), 이.콜라이, 참조번호 L-3755, 혈청형 026:B6, 로트 번호 111k4078)는 0.9％ w/v 염수로 이루어졌다. 에어로졸은 15 분 동안 12 L/m (각 네뷸라이저에서 6 L/분)의 유속으로 작동하는 2개의 제트 네뷸라 이저를 사용하여 발생시켰다. 이와 별도로, 동물에 0.1 내지 10 ㎍/kg를 기관내 투여하였다. 이것은 최대 8회까지 반복할 수 있다.

실험 프로토콜에 따라 접종 전후의 다양한 시점에 적절한 경로 및 빈도로 마우스에 비히클, 표준 화합물 또는 시험 화합물을 투여하였다. 시험 화합물 그룹은 상이한 투여량의 동일한 화합물일 수 있거나, 또는 단일 투여량의 상이한 화합물 또는 2가지의 조합물일 수 있다. 시험 화합물은 복강내, 정맥내, 또는 피하 주사에 의해, 또는 흡입 투여 또는 기관내 투여에 의해 주입하였다.

마우스를 LPS 접종 30 분, 1 시간 내지 24 시간 이후에 유테탈을 복강내 주사로 과량투여하여 사망시켰다. 순환이 멈추었을때, 기관에 캐뉼라를 삽입하고 (포르텍스(Portex) 정맥내 캐뉼라) 기도를 이소톤 II (베크만 쿨터 참조 번호 8448011 로트 번호 25775) 3×0.3 ml로 세척하였다. 시토스핀을 위해 BAL 액 100 ㎕를 시토스핀 깔대기에 첨가하고, 썰모샨돈(ThermoShandon) 시토스핀 모델 3 또는 4를 이용하여 700 rpm에서 5 분 동안 회전시켰다. 슬라이드 상의 세포를 헤마-테크-2000 자동 슬라이드 염색기 상에서 라이트-김사 염색을 이용하여 염색하였고, 세포 구별 계수하여 호산구, 호중구, 및 림프단핵 세포 (단핵구, 대식세포, 및 림프구가 포함됨)로 구별하였다. 전형적으로 슬라이드당 200 개의 세포가 계수되었고, 각 세포 유형을 총 갯수의 백분율로 나타내었다. BAL 액의 총 백혈구 수는 시스멕스 (영국 밀턴 케인즈 소재의 시스멕스 유케이사 제)를 이용하여 측정하였다.

실시예 4

마취시킨 기니아 피그의 폐 기능 평가

수컷 던킨-할틀리 기니아 피그 (300 내지 600 g)의 체중을 재고, 회복가능한 기체 마취 (산소 중 할로탄 5％) 하에 기관내 경로를 통해 비히클 (0.05 M 포스페이트, 0.1％ 트윈 80, 0.6％ 염수, pH 6) 또는 화합물을 투여하였다. 동물에게 히스타민 또는 메타콜린을 투여하기 2 시간 전에 화합물 또는 비히클을 투여하였다.

기관지수축제를 1차 투여하기 대략 30 분 전에 펜토바르비톤으로 기니아 피그를 마취시켰다 (1 mL/kg, 60 mg/mL 용액, 복강내 주사). 기관에 캐뉼라를 삽입하고, 정적 호흡 펌프 (하버드 로덴트 벤틸레이터(Harvard Rodent Ventilator) 모델 683)를 이용하여 60 호흡/분의 속도 및 5 ml/kg의 호흡 용적으로 동물에게 산소를 공급하였다. 히스타민, 메타콜린, 또는 지속적인 마취제의 투여 (펜토바르비톤 용액 0.1 mL, 60 mg/mL, 필요에 따름)를 위해 목정맥에 캐뉼라를 삽입하였다.

기도 저항의 측정을 위해 동물을 플렉시벤트 시스템 (Flexivent System; 캐나다 몬트리얼 소재의 SCIREQ)으로 옮겼다. 동물에게 60 호흡/분 및 5 mL/kg의 호흡 용적으로 산소를 공급하였다 (준-사인형(quasi-sinusoidal) 산소 공급 패턴). 2 내지 3 cmH₂O의 양성 호기말 압력(positive end expiratory pressure)을 적용하였다. 플렉시벤트 "스냅샷" 기기 (지속시간 1 초, 주파수 1 Hz)를 이용하여 호흡 저항을 측정하였다. 안정한 기준선 저항값이 얻어지면, 동물에게 히스타민 또는 메타콜린을 상승 용량 (0.5, 1, 2, 3 및 5 ㎍/kg, 정맥내 주사)으로 대략 4 분 간격으로 목 카테터를 통해 주입하였다. 기관지수축제의 각 투여 후 피크 저항값을 기록하였다. 폐 기능 측정을 완료한 후 펜토바르비톤 나트륨 (유테탈)을 대략 1.0 mL 정맥 주사하여 기니아 피그를 안락사시켰다. 화합물에 의해 얻어진 기관지보호 백분율을 기관지수축제의 각 투여량마다 아래와 같이 계산하였다.

상기 식에서 ％ 변화 R_비히클이란 비히클 처리군에서 기도 저항의 최대 백분율 변화의 평균을 말한다. 보고하는 결과는 히스타민 또는 메타콜린을 5 ㎍/kg 투여한 후에 측정하였고, 이를 백분율 기관지보호로 나타내었다 (평균±표준 오차 평균).

화합물 A 및 로플루밀라스트 조합물:

기니아 피그에 비히클, 화합물 A 1 및 27 ㎍/kg, 로플루밀라스트 1 mg/kg 또는 화합물 A 1 ㎍/kg 및 로플루밀라스트 1 mg/kg의 조합물을 기관내 경로를 통해 투여하였다. 히스타민의 정맥내 상승 투여량으로의 투여 (0.5, 1, 2, 3 및 5 ㎍/kg)는 비히클 처리 동물에서 비히클 투여 2 시간 후에, 0.5 ㎍/kg에서 140±36％ 내지 5 ㎍/kg에서 1100±161％의 범위로 투여량 관련 기관지수축을 일으켰다 (n=9). 로플루밀라스트 1 mg/kg의 기관내 투여는 히스타민-유도 기관지수축을 35％ 억제하였다 (기관지수축이 695±177％ 증가; n=8). 화합물 A (1 및 27 ㎍/kg)의 기관내 투여는 히스타민-유도 기관지수축을 49 및 87％ 억제하였다 (각각 기관지수축이 544±60 및 140±36％ 증가; 각각 n=8 및 6). 로플루밀라스트 (1 mg/kg) 및 화합물 A (1 ㎍/kg)의 조합물은 히스타민-유도 기관지수축을 55％ 억제하였다 (기관지수축이 480±128％ 증가; n=8) (도 4).

화합물 A 및 티오트로퓸 브로마이드 조합물:

기니아 피그에 비히클, 화합물 A 1 및 27 ㎍/kg, 티오트로퓸 브로마이드 0.03 ㎍/kg, 또는 화합물 A 1 ㎍/kg 및 티오트로퓸 브로마이드 0.03 ㎍/kg의 조합물을 기관내 경로를 통해 투여하였다. 메타콜린의 정맥내 상승 투여량으로의 투여 (0.5, 1, 2, 3 및 5 ㎍/kg)는 비히클 처리 동물에서 비히클 투여 2 시간 후에, 0.5 ㎍/kg에서 7.8±4.1％ 내지 5 ㎍/kg에서 1898±211％의 범위로 투여량 관련 기관지수축을 일으켰다 (n=9). 티오트로퓸 브로마이드 0.03 ㎍/kg의 기관내 투여는 메타콜린-유도 기관지수축을 13％ 억제하였다 (저항이 1656±269％ 증가, n = 8). 화합물 A (1 및 27 ㎍/kg)의 기관내 투여는 메타콜린-유도 기관지수축을 15 및 82％ 억제하였다 (각각 저항이 1619±235 및 347±71％ 증가; 각각 n=8 및 6). 티오트로퓸 브로마이드 (0.03 ㎍/kg) 및 화합물 A (1 ㎍/kg)의 조합물은 메타콜린-유도 기관지수축을 43％ 억제하였다 (저항이 1087±123％ 증가; n=8) (도 5).

실시예 5

난알부민 감작시킨(ovalbumin sensitised) 갈색 노르웨이 래트에서 항원 유도 호산구증가증에 대한 화합물의 평가

연구 0일째에, 갈색 노르웨이 래트에게 두 개의 서로 다른 위치에서 염수 0.4 mL (각 위치 당 대략 0.2 mL) 중의 수산화 알루미늄 100 mg에 흡착된 난알부민 500 ㎍을 피하 주사하였다. 감작 후 14일 및 15일 째에 래트를 에어로졸화된 난알부민으로 15 분 동안 접종시켰다. 래트를 10 마리 그룹으로 아크릴 박스에 넣었다 (내부 면적은 너비 320 mm × 깊이 320 mm × 높이 195 mm, 부피는 20 L). 0.9％ 염수 중의 10 mg/mL 난알부민 8 mL, 또는 0.9％ 염수 단독을 2개의 제트 네뷸라이저 (사이드스트림(Sidestream, 등록상표), 프로파일 레스피레토리 시스템스 엘티디.(Profile Respiratory Systems Ltd.)) 각각에 넣어두었다. 압축된 공기를 6 L/분으로 각각의 네뷸라이저를 통해 통과시키고, 네뷸라이저의 산출물을 래트가 담긴 박스에 통과시켰다.

실험 프로토콜에 따라 접종 전후의 다양한 시점에 적절한 경로를 통해 래트에 비히클, 표준 화합물 또는 시험 화합물을 투여하였다. 접종 후 다양한 시점에 복강내로 펜토바르비톤 나트륨 (유테탈)을 0.5 mL 투여하여 래트를 안락사시켰다. 기관을 절개하여 기관에 캐뉼라를 삽입하였다. 이어서, 실온에서 멸균 PBS 3 mL를 사용하여 기도를 세척하였다. 기도에서 PBS를 제거하기 전에 10 초간 그대로 두었다. 세포를 함유하는 PBS를 얼음상의 15 mL 원심분리용 튜브에 넣었다. 이 과정을 3회 반복하였다. 회수된 최종 부피를 기록하였다. BAL 액의 분취량을 덜어내어 시스멕스 (영국 밀턴 케인즈 소재의 시스멕스 유케이사 제)를 이용하여 계수하였다.

700 rpm에서 5 분 동안 작동시킨 샨돈 시토스핀3 내의 시토스핀 깔대기에 BAL 액의 100 ㎕ 분취량을 첨가하여 시토스핀 슬라이드를 제조하였다. 슬라이드를 헤마-테크-2000 자동 슬라이드 염색기 상에서 라이트-김사 염색을 이용하여 염색하였고, 전형적으로 200 개의 세포가 현미경 하에서 계수되었다. 세포를 호산구, 호중구, 및 단핵 세포로 분류하였다. 단핵 세포에는 단핵구, 대식세포, 및 림프구가 포함된다.

실시예 6

난알부민 감작시킨 마우스에서 항원 유도 호산구증가증에 대한 화합물의 평가

20 내지 25 g의 수컷 BALB/c 마우스에 0.3 ml 염수 중의 수산화 알루미늄 겔 혼합물 (피셔 사이언티픽 유케이(Fisher Scientific UK)) 1 mg에 흡착된 등급 V의 난알부민 (시그마(Sigma)) 100 ㎍을 복강내 투여하여 알부민에 대해 감작시켰다. 필요에 따라, 감작하고 최소 2주 후에 마우스 그룹에 화합물을 예비투여하였다. 이어서, 구체화된 연구 프로토콜에 따라 이들에게 시험 화합물 또는 비히클 0.25 mL를 1 내지 8일 동안 매일 투여하였다.

1 내지 8일의 날마다, 투여 1 시간 후에 마우스를 펄스펙스(perspex) 챔버 (20×11×11 cm, 최대 10 마리/챔버)에 넣고, 36 분 동안 난알부민 20 mg ml^-1을 에어로졸 접종시켰다 (18 분 동안 8 mL, 이후 18 분 동안 8 mL 더). 에어로졸은 데빌비스(DeVilbiss) 제트 네뷸라이저를 이용하여 61 분^-1의 유속으로 전달하였다. 마지막 투여 24 시간 후에 유테탈 0.2 ml를 복강내 주사하여 마우스를 사망시키고, 세포 구별 계수 분석을 위해 혈액 샘플을 채취하고 (EDTA 튜브 내), 1 cm를 절개하여 분홍색 루어 실장 포르텍스 캐뉼라를 이용하여 기관에 캐뉼라를 삽입하고, 이소톤 II 1 ml 3회 세척액을 이용하여 폐를 세척하였다. 시토스핀을 위해 BAL 액 100 ㎕를 시토스핀 깔대기에 첨가하고, 썰모샨돈 시토스핀 모델 3 또는 4를 이용하여 700 rpm에서 5 분 동안 회전시켰다. 슬라이드 상의 세포를 헤마-테크-2000 자동 슬라이드 염색기 상에서 라이트-김사 염색을 이용하여 염색하였고, 세포 구별 계수하여 호산구, 호중구, 및 림프단핵 세포 (단핵구, 대식세포, 및 림프구가 포함됨)로 구별하였다. 전형적으로 슬라이드당 200 개의 세포가 계수되었고, 각 세포 유형을 총 갯수의 백분율로 나타내었다. BAL 액의 총 백혈구 수는 시스멕스 (영국 밀턴 케인즈 소재의 시스멕스 유케이사 제)를 이용하여 측정하였다.

실시예 7

마우스를 급성으로 담배연기에 노출시킨 후에, 폐 기능 및 BAL-호중구증가증에 대한 화합물 효과의 평가

BALB/c 또는 C57BL6/J 마우스의 전신을 주류 연기에 노출시키고 (50 분/담배 12 개피), 1 내지 9일 동안 하루에 1회 또는 2회 신선한 공기에 노출시켰다. 실험 프로토콜에 따라 접종 전후의 다양한 시점에 적절한 경로를 통해 마우스에 비히클, 표준 화합물 또는 시험 화합물을 투여하였다. 실험 마지막 날에 복강내로 유테탈을 0.2 mL 투여하여 마우스를 사망시키고, 기관지-폐포 세척액을 수득하여 플렉시벤트 시스템 (캐나다 몬트리얼 소재의 SCIREQ)을 이용하여 (상기한 바와 같이) 백혈구 침윤 또는 폐 기능을 평가하였다. 별법으로, 강제 기동 시스템 (EMMS)을 이용하여 폐 역학을 측정하였다.

마우스를 펜토바르비톤으로 마취시켰다 (투여 부피 1 mL/kg을 1/10 희석, 복강내 투여). 기관에 캐뉼라를 삽입하고, 기도 저항의 측정을 위해 동물을 플렉시벤트 시스템으로 옮겨 동물에게 150 호흡/분 및 10 mL/kg의 호흡 용적으로 산소를 공급하였다 (준-사인형 산소 공급 패턴). 플렉시벤트 "스냅샷" 기기 (지속시간 1 초, 주파수 1 Hz)를 이용하여 호흡 저항을 측정하였다. 폐 기능 측정을 완료한 후 펜토바르비톤 나트륨 (유테탈)을 대략 0.5 mL 정맥 주사하여 마우스를 안락사시켰다.

실시예 8

기니아 피그에서 단리한 기관환 표본에서 기관지확장제 활성의 평가: 개시 측정

기니아 피그 (300 내지 500 g)를 경추 탈골시켜 사망시키고, 기관을 단리해내었다. 기관을 너비 당 2 내지 3개의 연골환의 분절로 자르고, 37℃에서 5％ CO₂, 95％ O₂의 기체로 처리한 개질 크렙스(Krebs) 용액 (mM; NaCl, 90; NaHCO₃, 45; KCl, 5; MgSO₄.7H₂O, 0.5; Na₂HPO₄.2H₂O, 1; CaCl₂, 2.25; 글루코스, 10; pH 7.4) 중의 10 ml 장기 조에 현탁시켰다. 등장성 장력의 측정을 위해 기관환을 등장력 변환기에 부착시켰다. 조직을 세척하고 각 조직에 1 g의 힘을 가하였다. 상기 환을 메타콜린 (1 μM)으로 수축시켰다. 수축이 정체 상태에 이르면 비히클 (증류 H₂O 중의 DMSO 0.01％), 화합물 A (3 nM), 로플루밀라스트 (1 μM), 또는 화합물 A (3 nM) 및 로플루밀라스트 (1 μM)의 조합물을 첨가하고, 반응이 정체 상태에 이를 때까지 조직을 그대로 두었다. 챠트 4 소프트웨어 (AD인스트루먼츠(ADInstruments, 영국 챨그로브(Charlgrove) 소재))를 이용하여 데이터를 수집하였다. 기관지확장제의 최대 효과의 90％에 이르는 시간 (개시 시간)을 측정하고, 이것을 분으로 나타내었다 (평균±표준 오차 평균).

화합물 A의 3 nM에서 개시 시간은 16±3.0 분이었다. 로플루밀라스트 (1 μM)의 존재하에, 화합물 A (3 nM)의 개시 시간은 5.7±1.0 분이었고, 로플루밀라스트의 개시 시간은 26±1.4 분이었다 (n = 4; 도 6).

실시예 9

인간 말초 혈액 단핵 세포에서 리포폴리사카라이드 (LPS)-유도된 TNFα 생산의 억제

인간에서 단리한 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 로플루밀라스트 (30 nM)와 단독으로, 그리고 화합물 A (3 pM 내지 300 nM)의 존재하에서 37℃에서 20 시간 동안 예비 인큐베이션하여 LPS 자극된 TNFα 생산의 화합물 유도 억제를 측정하였다. 이어서, 세포를 LPS (1 ㎍/mL)와 37℃에서 4 시간 동안 인큐베이션하여 TNFα 생산을 유도하였다. 인큐베이션 기간의 말미에 플레이트를 원심분리하고 (300 g, 10 분), 배양 상청액 100 ㎕를 분석하여 형광-결합 면역흡수 검정법 (FLISA) 검정 키트 (알 앤드 디 시스템스(R&D Systems))로 TNFα 방출을 정량하였다. 형광 수치는 FMAT 플레이트 판독기 상에서 판독하였다. 4 가지 파라미터의 로지스틱 방정식을 이용하여 비-선형의 곡선 피팅 루틴에 억제 곡선을 피팅시키고, 활성을 pIC₅₀으로 나타내었다 (평균±표준 오차 평균).

로플루밀라스트 (30 nM)는 LPS-유도된 TNFα 생산을 70±4.1％ 억제시켰다. 3, 30 및 300 nM의 화합물 A의 존재하에서, TNFα 생산은 각각 최대 82±2.3％, 92±0.40％ 및 92±2.1％ 억제되었다 (n=3) (도 7).

Claims

제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 또는 그의 염, 및 제2 활성 성분으로서 하기로부터 선택된 것을 조합물로 포함하는 제약 생성물:

비스테로이드성 글루코코르티코이드 수용체 (GR 수용체) 효능제;

항산화제;

CCR1 길항제;

케모카인 길항제 (CCR1이 아님);

코르티코스테로이드;

CRTh2 길항제;

DP1 길항제;

히스톤 디아세틸라제 유도제;

IKK2 억제제;

COX 억제제;

리폭시게나제 억제제;

류코트리엔 수용체 길항제;

MPO 억제제;

아클리디늄 브로마이드, 글리코피롤레이트, 옥시트로퓸 브로마이드, 피렌제 핀, 텔렌제핀, 티오트로퓸 브로마이드, 3(R)-(2-히드록시-2,2-디티엔-2-일아세톡시)-1-(3-페녹시프로필)-1-아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드, 3(R)-1-페네틸-3-(9H-크산텐-9-카르보닐옥시)-1-아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 또는 (3R)-3-[(2S)-2-시클로펜틸-2-히드록시-2-티엔-2-일아세톡시]-1-(2-페녹시에틸)-1-아조니아비시클로[2.2.2]악탄 브로마이드인 무스카린 길항제;

p38 억제제;

PDE 억제제;

PPARγ 효능제;

프로테아제 억제제;

스타틴;

트롬복산 길항제;

혈관확장제; 또는

ENAC 차단제 (상피 나트륨 채널 차단제).
제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 또는 그의 염의 제제,

제2 활성 성분으로서 비스테로이드성 글루코코르티코이드 수용체 (GR 수용체) 효능제; 항산화제; CCR1 길항제; 케모카인 길항제 (CCR1이 아님); 코르티코스테로이드; CRTh2 길항제; DP1 길항제; 히스톤 디아세틸라제 유도제; IKK2 억제제; COX 억제제; 리폭시게나제 억제제; 류코트리엔 수용체 길항제; MPO 억제제; 아클리디늄 브로마이드, 글리코피롤레이트, 옥시트로퓸 브로마이드, 피렌제핀, 텔렌제핀, 티오트로퓸 브로마이드, 3(R)-(2-히드록시-2,2-디티엔-2-일아세톡시)-1-(3-페녹시프로필)-1-아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드, 3(R)-1-페네틸-3-(9H-크산텐-9-카르보닐옥시)-1-아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 또는 (3R)-3-[(2S)-2-시클로펜틸-2-히드록시-2-티엔-2-일아세톡시]-1-(2-페녹시에틸)-1-아조니아비시클로[2.2.2]악탄 브로마이드인 무스카린 길항제; p38 억제제; PDE 억제제; PPARγ 효능제; 프로테아제 억제제; 스타틴; 트롬복산 길항제; 혈관확장제; 또는 ENAC 차단제 (상피 나트륨 채널 차단제)로부터 선택된 것의 제제, 및

임의로, 상기 제제의 투여가 필요한 환자에게 상기 제제를 동시에, 순차적으로, 또는 별개로 투여하기 위한 지침서

를 포함하는 키트.
제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 또는 그의 염;

제2 활성 성분으로서 비스테로이드성 글루코코르티코이드 수용체 (GR 수용체) 효능제; 항산화제; CCR1 길항제; 케모카인 길항제 (CCR1이 아님); 코르티코스테로이드; CRTh2 길항제; DP1 길항제; 히스톤 디아세틸라제 유도제; IKK2 억제제; COX 억제제; 리폭시게나제 억제제; 류코트리엔 수용체 길항제; MPO 억제제; 아클리 디늄 브로마이드, 글리코피롤레이트, 옥시트로퓸 브로마이드, 피렌제핀, 텔렌제핀, 티오트로퓸 브로마이드, 3(R)-(2-히드록시-2,2-디티엔-2-일아세톡시)-1-(3-페녹시프로필)-1-아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드, 3(R)-1-페네틸-3-(9H-크산텐-9-카르보닐옥시)-1-아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 또는 (3R)-3-[(2S)-2-시클로펜틸-2-히드록시-2-티엔-2-일아세톡시]-1-(2-페녹시에틸)-1-아조니아비시클로[2.2.2]악탄 브로마이드인 무스카린 길항제; p38 억제제; PDE 억제제; PPARγ 효능제; 프로테아제 억제제; 스타틴; 트롬복산 길항제; 혈관확장제; 또는 ENAC 차단제 (상피 나트륨 채널 차단제)로부터 선택된 것; 및

제약상 허용되는 보조제, 희석제 또는 담체

를 혼합물로 포함하는 제약 조성물.
(a) 제1 활성 성분으로서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 또는 그의 염의 치료상 유효량; 및

(b) 제2 활성 성분으로서 비스테로이드성 글루코코르티코이드 수용체 (GR 수용체) 효능제; 항산화제; CCR1 길항제; 케모카인 길항제 (CCR1이 아님); 코르티코스테로이드; CRTh2 길항제; DP1 길항제; 히스톤 디아세틸라제 유도제; IKK2 억제제; COX 억제제; 리폭시게나제 억제제; 류코트리엔 수용체 길항제; MPO 억제제; 아클리디늄 브로마이드, 글리코피롤레이트, 옥시트로퓸 브로마이드, 피렌제핀, 텔렌제핀, 티오트로퓸 브로마이드, 3(R)-(2-히드록시-2,2-디티엔-2-일아세톡시)-1-(3- 페녹시프로필)-1-아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드, 3(R)-1-페네틸-3-(9H-크산텐-9-카르보닐옥시)-1-아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 또는 (3R)-3-[(2S)-2-시클로펜틸-2-히드록시-2-티엔-2-일아세톡시]-1-(2-페녹시에틸)-1-아조니아비시클로[2.2.2]악탄 브로마이드인 무스카린 길항제; p38 억제제; PDE 억제제; PPARγ 효능제; 프로테아제 억제제; 스타틴; 트롬복산 길항제; 혈관확장제; 또는 ENAC 차단제 (상피 나트륨 채널 차단제)로부터 선택된 것의 치료상 유효량

을 호흡기 질환의 치료가 필요한 환자에게 동시에, 순차적으로, 또는 별개로 투여하는 것을 포함하는, 호흡기 질환의 치료 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 활성 성분이

비스테로이드성 글루코코르티코이드 수용체 (GR 수용체) 효능제;

CCR1 길항제;

케모카인 길항제 (CCR1이 아님);

코르티코스테로이드;

IKK2 억제제;

아클리디늄 브로마이드, 글리코피롤레이트, 옥시트로퓸 브로마이드, 피렌제핀, 텔렌제핀, 티오트로퓸 브로마이드, 3(R)-(2-히드록시-2,2-디티엔-2-일아세톡시)-1-(3-페녹시프로필)-1-아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드, 3(R)-1-페네틸-3-(9H-크산텐-9-카르보닐옥시)-1-아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 또는 (3R)-3-[(2S)-2-시클로펜틸-2-히드록시-2-티엔-2-일아세톡시]-1-(2-페녹시에틸)-1- 아조니아비시클로[2.2.2]악탄 브로마이드인 무스카린 길항제;

p38 억제제; 또는

PDE 억제제

로부터 선택된 것인 제약 생성물, 키트, 조성물, 또는 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 활성 성분이 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 트리플루오로아세테이트, 술페이트, 포스페이트, 아세테이트, 푸마레이트, 말레에이트, 타르트레이트, 락테이트, 시트레이트, 피루베이트, 숙시네이트, 옥살레이트, 메탄술포네이트, p-톨루엔술포네이트, 바이술페이트, 벤젠술포네이트, 에탄술포네이트, 말로네이트, 지나포에이트, 아스코르베이트, 올레에이트, 니코티네이트, 사카리네이트, 아디페이트, 포르메이트, 글리콜레이트, L-락테이트, D-락테이트, 아스파르테이트, 말레이트, L-타르트레이트, D-타르트레이트, 스테아레이트, 2-푸로에이트, 3-푸로에이트, 나파디실레이트 (나프탈렌-1,5-디술포네이트 또는 나프탈렌-1-(술폰산)-5-술포네이트), 에디실레이트 (에탄-1,2-디술포네이트 또는 에탄-1-(술폰산)-2-술포네이트), 이세티오네이트 (2-히드록시에틸술포네이트), 2-메시틸렌술포네이트 또는 2-나프탈렌술포네이트인 염 형태인 제약 생성물, 키트, 조성물, 또는 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 활성 성분이 디히드로브로마이드인 염 형태인 제약 생성물, 키트, 조성물, 또는 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 활성 성분이 아클리디늄 브로마이드, 글리코피롤레이트, 옥시트로퓸 브로마이드, 피렌제핀, 텔렌제핀, 티오트로퓸 브로마이드, 3(R)-(2-히드록시-2,2-디티엔-2-일아세톡시)-1-(3-페녹시프로필)-1-아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드, 3(R)-1-페네틸-3-(9H-크산텐-9-카르보닐옥시)-1-아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 또는 (3R)-3-[(2S)-2-시클로펜틸-2-히드록시-2-티엔-2-일아세톡시]-1-(2-페녹시에틸)-1-아조니아비시클로[2.2.2]악탄 브로마이드인 무스카린 길항제인 제약 생성물, 키트, 조성물, 또는 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 활성 성분이 티오트로퓸 브로마이드인 제약 생성물, 키트, 조성물, 또는 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 활성 성분이 CCR1 길항제인 제약 생성물, 키트, 조성물, 또는 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 활성 성분이 코르티코스테로이드인 제약 생성물, 키트, 조성물, 또는 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 활성 성분이 PDE4 억제제인 제약 생성물, 키트, 조성물, 또는 방법.
치료를 위한, 제1항 내지 제3항 및 제5항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 제약 생성물, 키트 또는 조성물의 용도.
호흡기 질환 치료용 약제를 제조하기 위한, 제1항 내지 제3항 및 제5항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 제약 생성물, 키트 또는 조성물의 용도.
호흡기 질환을 치료하기 위한, 제1항 내지 제3항 및 제5항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 제약 생성물, 키트 또는 조성물의 용도.
제14항 또는 제15항에 있어서, 호흡기 질환이 만성 폐색성 폐 질환, 천식, 비염, 기종 또는 기관지염인 용도.