KR20090055166A - 황태 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물에서 분리한활성 분획물을 유효성분으로 함유하는 조성물 - Google Patents
황태 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물에서 분리한활성 분획물을 유효성분으로 함유하는 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 황태(Theragra chalcogramma) 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물에서 분리한 활성 분획물을 유효성분으로 함유하는 숙취해소용 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 본 발명의 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출되는 황태 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물에서 분리한 활성 분획물은 아세트알데히드 분해 활성 및 알코올 분해 활성을 나타냄으로써 숙취해소에 유용하게 이용될 수 있다.
황태(Theragra chalcogramma), 숙취해소, 아세트알데히드 분해활성, 알코올 분해활성
Description
본 발명은 황태(Theragra chalcogramma) 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물에서 분리한 활성 분획물을 유효성분으로 함유하는 숙취해소용 조성물에 관한 것이다.
현재 기능성 식품은 영양학적 요구와 건강학적 요구를 만족하는 생산품을 얻고자하는 두 개의 명확한 명제를 가지고 있다. 건강학적 요구는 여러 가지 임상적 질병에 의한 위험을 줄이고 신체의 기능을 향상시키도록 하는 것을 반영하여야 한다. 영양적으로 중요하며 다른 생리활성을 가진 물질로부터 얻는 기능성 식품은 생선 및 '황태'와 같이 어류를 가공한 산물을 통해서 얻을 수 있다. 이들은 생리학적으로 중요한 비타민 D 또는 칼슘(bone health promotein)을 충당하여 주며 이들로부터 얻을 수 있는 지방산은 혈관계질환에 걸릴 확률을 줄여준다. 이러한 지 방산은 염증, 체중조절, 대사적 질환, 및 대장암 등과 같은 질병에 대하여 예방 또는 치료적인 측면에 사용되어질 수 있으나 보다 과학적인 근거를 강화할 필요성이 있다. 이들로부터 얻을 수 있는 단백질들은 그들 자체가 매우 높은 소화능력(digestibility)을 가지고 있기 때문에 대장에 대하여 매우 높은 효과를 가질 수 있으며 다른 효소들에 의한 발효(fermentation)를 줄일 수 있다. 또한 생물학적으로 활성을 가지는 펩티드들은 더욱 높은 효과를 가지는 것으로 보여진다. 또한, 이들은 타우린(taurine), 키토산(chitosan), 글루코사민(glucosamin) 및 인지질(pholipid)과 같은 많은 생물학적 활성을 가진 물질을 함유하고 있으므로 기능성 식품을 제조하기 위한 생리활성재료로서 잠재성을 가진다고 할 수 있다.
황태는 내장을 빼낸 명태를 영하 10℃ 이하의 고랭지에서 낮에는 녹이고 밤에는 얼리는 과정을 3개월 내지 5개월간 반복하여 명태로부터 서서히 수분을 제거함으로써 건조시킨다. 이렇게 수개월간의 건조 과정을 거쳐 제조된 황태는 동의보감에도 각종 해독작용이 뛰어난 것으로 기재되어 있는 우리 몸에 좋은 식품으로써, 특히 숙취 해독 효과나 연탄가스 중독의 해독, 두통 등에 대한 진통 효과가 우수한 것으로 알려져 있다. 또한 황태는 콜레스테롤이 거의 없고 영양가가 높아 신체 각 기관이 신진대사를 활성화하여 머리를 맑게 하고 특히 단백질이 56%나 되는 고단백 영양식품으로 남녀노소 누구나 즐겨 먹을 수 있는 식품이다. 또한, 여성들의 다이어트와 미용에도 효과가 있으며 지방 함량이 2%로 다른 생선에 비해 극히 적으며, 메티오닌 등 아미노산이 풍부해 해장용으로 쓰이며 그 국물은 일산화탄소 중독까지 중화시키는 기능이 있는 것으로 알려져 있다. 이와 같이 황태는 맛과 영양이 뛰어날 뿐만 아니라, 각종 해독효과를 갖추고 있다.
황태와 관련된 종래 기술로는 황태를 그대로 또는 양념 처리한 후 훈제기에서 훈제시키는 인스턴트 훈제 황태의 제조 방법(대한민국 공개특허 제 2000-37086호), 선별된 황태를 추출용매로 추출한 추출액을 침지시켜 여과한 후 진공 농축시킨 황태 농축액 등을 이용한 기능성 액상제품 및 그의 제조방법(대한민국 공개특허 제 2000-24779호), 명태를 건조하는 과정에서 갈화 추출액에 명태를 침지하여 제조하는 방법(대한민국 공개특허 제 2002-36805호) 등이 개시되어 있다.
이에, 본 발명자들은 황태의 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물에서 분리한 활성 분획물의 그 활성 및 기능성을 규명한 결과, 아세트알데히드 분해 활성 및 알코올 분해 활성을 나타냄으로써 숙취해소용으로 유용하게 사용될 수 있음을 발견함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 황태(Theragra chalcogramma) 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물에서 분리한 활성 분획물을 유효성분으로 함유하는 숙취해소용 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 황태 추출물을 유효성분으로 함유하는 숙취해소제를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 황태 추출물을 헥산, 에틸아세테이트 및 부탄올 순으로 추출하여 얻은 에틸아세테이트 또는 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 숙취해소제를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 에틸아세테이트 분획물을 추가적으로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 흡착시키고 이동상으로 톨루엔(toluene): 아세톤(Aceton)을 농도구배(100 : 0 → 0 : 100)를 1차 적용한 후, 아세톤 : 메탄올을 농도구배(100 : 0 → 0 : 100)를 2차 적용하여, 아세톤 : 메탄올의 농도(6 : 4)에서 얻을 수 있는 활성 분획물(E 9)을 유효성분으로 함유하는 숙취해소제를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 부탄올 분획물을 추가적으로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 흡착시키고 이동상으로 톨루엔(toluene): 아세톤(Aceton)을 농도구배(100 : 0 → 0 : 100)를 1차 적용한 후, 아세톤 : 메탄올을 농도구배(100 : 0 → 0 : 100)를 2차 적용하여, 톨루엔 : 아세톤의 농도(10 : 0)에서 얻을 수 있는 활성 분획물(B 1)을 유효성분으로 함유하는 숙취해소제를 제공한다.
아울러, 본 발명은 상기 황태 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물에서 분리한 활성 분획물을 유효성분으로 함유하는 숙취해소용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 황태 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물에서 분리한 활성 분획물은 아세트알데히드 분해 활성 및 알코올 분해 활성을 나타냄으로써 숙취해소에 유용하게 이용될 수 있다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명의 유효성분인 황태 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물에서 분리한 활성 분획물은 하기의 단계들을 포함하는 분리정제 방법에 의해 제조된다.
1) 황태(Theragra chalcogramma)를 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출하는 단계;
2) 단계 1)의 추출물을 추가로 유기용매를 가하여 유기용매 분획물을 제조하는 단계; 및
3) 단계 2)의 분획물을 컬럼 크로마토그래피로 흡착시키고 톨루엔(toluene): 아세톤(Aceton) : 메탄올로 구성되는 농도구배를 적용하여 얻을 수 있는 활성 분획물을 수득하는 단계,
상기 제조방법에 있어서, 단계 1)의 황태는 생산한 것 또는 시판되는 것을 제한 없이 사용할 수 있다.
본 발명에서는 황태가 생태에 비해 조성물로서 유용하게 사용될 수 있음을 알기 위해 단백질 및 아미노산을 분석하였다. 단백질 분석은 단백질 효율(protein efficiency, PER), 즉 전체 아미노산 함량 중 생체 내에서 중요하게 작용할 수 있는 필수 아미노산의 상대적 함량을 구하여 실질적인 단백질 대사율을 측정하였다. 그 결과 황태의 PER 값은 생태에서보다 약 1.6배 높은 수준으로 나타났으며 필수아미노산의 함량이 생태보다 높게 나타나 단백질 대사에 있어서 생태의 활용보다는 황태의 활용적성이 더 높게 나타났다. 아미노산 분석은 황태에서 전체 아미노산 구성 중 유리 아미노산 구성 비율이 생태의 경우에 비해 24배 증가하여 전체 아미노산 함량 중 약 79%의 비율을 나타냈으며, 이는 황태의 제조과정 중에 동결과 해동, 건조의 과정 중 유리 아미노산 함량 증대 더 용이하게 흡수될 수 있음을 나타내고 이렇게 흡수된 아미노산들은 생체 내 대사에 직접적인 영향을 미칠 것으로 사료되어진다.
상기 제조방법에 있어서, 단계 1)의 알코올은 C1 내지 C4 저급 알코올을 이용하는 것이 바람직하며, 저급 알코올로는 메탄올 또는 에탄올을 이용하는 것이 바람직하다. 추출시 용매를 황태 분량의 5 내지 15배 첨가하여 추출하는 것이 바람 직하며, 10배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하다. 상기 용매를 가한 후 환류 냉각하여 추출하는 것이 바람직하다. 추출시 물중탕의 물의 온도 0 ~ 40℃인 것이 바람직하며, 40℃인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 5 ~ 15 일이 바람직하며, 10 일이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 아울러, 추출 회수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 3회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 방법에 의하여 황태를 추출, 여과한 뒤 여과액을 감압 농축하여 황태 추출물을 수득하였다.
상기 제조방법에 있어서, 단계 2)의 유기용매는 n-헥산, 에틸아세테이트 또는 부탄올로 추출하는 것이 바람직하며 에틸아세테이트 또는 부탄올을 사용하는 것이 더욱 바람직하다. 본 발명에서는 황태의 메탄올 추출물을 물에 현탁한 후 n-헥산, 에틸아세테이트 또는 부탄올로 차례로 분배하여 에틸아세테이트 또는 부탄올 분획물을 감압 농축하였다.
상기 제조방법에 있어서, 단계 3)의 컬럼 크로마토그래피는 실리카겔, 세파덱스, LH-20, ODS 겔, RP-18, 폴리아미드, 도요펄(Toyopearl) 및 XAD 수지로 이루어진 군으로부터 선택된 충진제를 이용하는 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 활성화합물을 분리 및 정제할 수 있다. 컬럼 크로마토그래피는 필요에 따라 적절한 충진제를 선택하여 수차례 실시할 수 있다. 본 발명에서는 상기 황태의 에틸아세테이트 분획물을 실리카겔(silicagel) 컬럼 크로마토그래피에 흡착시키고 이동상으로 톨루엔(toluene): 아세톤(Aceton)을 농도구배(100 : 0 → 0 : 100)를 1차 적용한 후, 아세톤 : 메탄올을 농도구배(100 : 0 → 0 : 100)를 2차 적용하여, 9개의 분획 물 E1 ~ E9을 순차적으로 용출하였고, 이 중 아세톤 : 메탄올의 농도(6 : 4)에서 활성분획물(E9)을 얻었다(표 1 참조). 또한, 상기 황태의 부탄올 분획물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 흡착시키고 이동상으로 톨루엔(toluene): 아세톤(Aceton)을 농도구배(100 : 0 → 0 : 100)를 1차 적용한 후, 아세톤 : 메탄올을 농도구배(100 : 0 → 0 : 100)를 2차 적용하여, 12개의 분획물 B1 ~ B12를 순차적으로 용출하였고, 이 중 톨루엔 : 아세톤의 농도(10 : 0)에서 활성분획물(B1)을 얻었다(표 2 참조).
본 발명은 상기 제조방법에 의하여 제조된 황태 추출물, 이의 유기용매 분획물 또는 상기 유기용매 분획물에서 분리한 활성 분획물을 유효성분으로 함유하는 숙취해소제를 제공한다.
본 발명에서는 황태 추출물, 이의 유기용매 분획물 및 상기 유기용매 분획물에서 분리한 활성 분획물이 아세트알데히드 분해 활성에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 아세트알데히드에 황태 추출물, 이의 유기용매 분획물 및 상기 유기용매 분획물에서 분리한 활성 분획물(E9 및 B1)을 각각 첨가한 후, 아세트알데히드 디하이드로제나제(Acetaldehyde dehydrogenase, ALDH)를 첨가하여 반응시킨 후 흡광도의 변화를 측정하였다. 그 결과, 상기 황태 추출물, 이의 유기용매 분획물 및 상기 유기용매 분획물에서 분리한 활성 분획물(E9 및 B1)은 대조군인 ALDH만 첨가한 것에 비해, ALDH의 활성을 높히는 것을 알 수 있었다. 체내에 과량의 알코올이 섭취된 경우, 알코올의 분해산물로 생성된 아세트알데히드는 뇌로 전해져 많은 유해 화합물로 바뀌어 맥박의 증가나 발한, 홍조, 오심, 구토 등의 증상을 초래하고 숙취를 느끼게 된다. ALDH 활성은 간손상을 주지 않으면서 아세트알데히드 분해를 촉진시키는 것이다. 따라서, 본 발명의 황태 추출물, 이의 유기용매 분획물 및 상기 유기용매 분획물에서 분리한 활성 분획물은 ALDH의 활성을 증가시켜 아세트알데히드 분해를 촉진시킴으로써 숙취해소제로 이용될 수 있음을 알 수 있다.
본 발명에서는 황태 추출물, 이의 유기용매 분획물 및 상기 유기용매 분획물에서 분리한 활성 분획물이 알코올 분해 활성에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 알코올에 황태 추출물, 이의 유기용매 분획물 및 상기 유기용매 분획물에서 분리한 활성 분획물(E9 및 B1)을 각각 첨가한 후, 알코올 디하이드로제나제(Alcohol dehydrogenase, ADH)를 첨가하여 반응시킨 후 흡광도의 변화를 측정하였다. 그 결과, 상기 황태 추출물, 이의 유기용매 분획물 및 상기 유기용매 분획물에서 분리한 활성 분획물(E9 및 B1)은 대조군인 ADH만 첨가한 것에 비해, ADH의 활성을 높히는 것을 알 수 있었다. 따라서, 본 발명의 황태 추출물, 이의 유기용매 분획물 및 상기 유기용매 분획물에서 분리한 활성 분획물은 ADH의 활성을 증가시켜 알코올 분해를 촉진시킴으로써 숙취해소제로 이용될 수 있음을 알 수 있었다.
본 발명의 숙취해소제는 황태 추출물, 이의 유기용매 분획물 및 상기 유기용매 분획물에서 분리한 활성 분획물에 약학적으로 허용가능한 염을 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용가능한 염은 유리산(free acid)에 의해 형성된 부가염이 유용하다. 적합한 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 브롬산, 황산 및 인산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 구연산(citric acid), 초산, 젖산, 주석산(tartariac acid), 말레인산, 푸마르산(fumaric acid), 포름산, 프로피온산(propionic acid), 옥살산, 트리플루오로아세트산, 벤조산, 글루콘산, 메탄술폰산, 글리콜산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 갈룩투론산, 엠본산, 글루탐산 또는 아스파르트산 등을 사용할 수 있다. 나아가, 약학적으로 허용가능한 염뿐만 아니라, 통상의 방법에 의해 조제될 수 있는 모든 염, 수화물 및 용매화물을 모두 포함할 수 있다.
본 발명의 숙취해소제는 황태 추출물, 이의 유기용매 분획물 및 상기 유기용매 분획물에서 분리한 활성 분획물 중에서 하나 이상을 선택적으로 함유할 수 있으며, 상기 성분에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
본 발명의 숙취해소제는 임상 투여 시에 경구 또는 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다. 즉, 본 발명의 숙취해소제는 실제 임상 투여 시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제 및 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제 및 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 본 발명의 약학적 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스, 락토오스 및 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘, 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 및 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제와 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤 및 젤라틴 등이 사용될 수 있다. 본 발명의 숙취해소제는 비경구 투여시 피하주사, 정맥주사 또는 근육내 주사를 통할 수 있다.
투약 단위는, 예를 들면 개별 투약량의 1, 2, 3 또는 4배를 함유하거나 또는 1/2, 1/3 또는 1/4배를 함유할 수 있다. 개별 투약량은 바람직하기로는 유효 약물이 1회에 투여되는 양을 함유하며, 이는 통상 1일 투여량의 전부, 1/2, 1/3 또는 1/4배에 해당한다. 본 발명의 숙취해소제의 유효용량은 0.0001 ~ 10 g/㎏이고, 바람직하기로는 0.0001 g ~ 5 g/kg이며, 하루 1 ~ 6회 투여될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 제조방법에 의하여 제조된 황태 추출물, 이의 유기용매 분획물 또는 상기 유기용매 분획물에서 분리한 활성 분획물을 유효성분으로 함유하는 숙취해소용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 황태 추출물, 이의 유기용매 분획물 또는 상기 유기용매 분획물에서 분리한 활성 분획물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사 용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 황태 추출물, 이의 유기용매 분획물 또는 상기 유기용매 분획물에서 분리한 활성 분획물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 약학적 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.
상기 외에 본 발명의 황태 추출물, 이의 유기용매 분획물 또는 상기 유기용매 분획물에서 분리한 활성 분획물은 여러가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 황태 추출물, 이의 유기용매 분획물 또는 상기 유기용매 분획물에서 분리한 활성 분획물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 본 발명을 하기 실시예, 실험예 및 제제예에 의하여 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예, 실험예 및 제제예는 본 발명을 구체적으로 예시하는 것이며, 본 발명의 내용이 하기의 실시예, 실험예 및 제제예에 의해 한정되는 것은 아니다.
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실시예
1> 황태 추출물의 제조
인제 용대리 황태덕장으로부터 용대리 황태를 지원받아 잘게 파쇄하여 시료로 사용하였다. 대상 실험군은 국내에 생산하는 인제 용대리 황태를 대상으로 실험을 진행하였다.
<1-1> 메탄올 추출물
황태 500g을 잘게 파쇄하여 메탄올에 10일간 추출한 후 추출물을 여과지(filter paper)(185㎜Ø, Whatman NO.2, Cat NO. 1002 185)로 여과시킨 후, 회전식 감압농축기(rotary evaporator)(EYELA NE-2001 5L, Japan)를 이용하여 40℃이하의 중탕에서 감압 농축하였다. 상기 결과, 56.1g(11.22%) 수득하였다.
<1-2> 물 추출물
황태 500g을 잘게 파쇄하여 95℃ 물에 10일간 추출한 후 추출물을 상기와 같은 방법으로 48.8g(9.76%) 수득하였다.
<1-3> 에탄올 추출물
황태 500g을 잘게 파쇄하여 에탄올에 10일간 추출한 후 추출물을 상기와 같은 방법으로 52.4g(10.48%) 수득하였다.
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실시예
2> 황태
분획물의
제조
황태의 메탄올 추출물(54g)을 증류수 1L에 현탁시켜 분별깔때기(separate funne)에 넣은 후, 헥산(Hexane), 에틸 아세테이트(EtOAc), 부탄올(BuOH), 물(H2O) 순으로 순차적 용매 분획하였다. 동일한 방법으로 3회 반복하였으며, 헥산 분획 10.77g(19.94%), 에틸 아세테이트 분획 4.61g(8.53%), 부탄올 분획 6.9g(12.78%), 수용성 분획 31.4g(58.15%)을 각각 수득하였다.
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실시예
3> 활성
분획물의
제조
황태 추출물로부터 얻은 용매 분획 중 알콜분해능(ADH)을 지표로 하여 활성물질을 분리정제 하였다.
<3-1> 에틸 아세테이트
분획물의
활성
분획물
황태 분획물 중 알코올분해능(ADH) 활성이 가장 높은 에틸 아세테이트 분획층(9.2g)을 이용하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 실시하였다. 각 시료를 메탄올로 용해시킨 다음 실리카겔로 충진시키고 유리 컬럼(glass column)(4×70 ㎝, 7734, Merck社)에 충진시킨 시료를 하기 표 1과 같은 톨루엔 : 아세톤 : 메탄올의 농도구배 용매 시스템을 이용하여 9개(E1 ~ E9)의 소분획 각각을 순차적으로 용출하였으며, 아세톤 : 메탄올의 농도(6 : 4)에서 높은 활성을 가지는 분획물(E9)을 수득하였다(표 1 참조).
| 분획 | 이동상 | ||
| 톨루엔 | 아세톤 | 메탄올 | |
| 1 | 100% | ||
| 2 | 90% | 10% | |
| 3 | 80% | 20% | |
| 4 | 50% | 50% | |
| 5 | 20% | 80% | |
| 6 | 100% | ||
| 7 | 90% | 10% | |
| 8 | 80% | 20% | |
| 9 | 60% | 40% | |
시료무게 : 4g, 컬럼 크기 : 4cm, Merck(社) 실리카겔(7734)
<3-2>
부탄올
분획물의
활성
분획물
알코올분해능(ADH) 및 숙취해소능(ALDH)을 고려하여 부탄올 분획층(4g)을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 실시하였다. 각 시료를 메탄올로 용해시킨 다음 실리카겔로 충진시키고 유리 컬럼(glass column)(4×70 ㎝, 7734, Merck社)에 충진시킨 시료를 하기 표 2와 같은 톨루엔 : 아세톤 : 메탄올의 농도구배 용매 시스템을 이용하여 12개(B1 ~ B12)의 소분획 각각을 순차적으로 용출하였으며, 톨루엔 : 아세톤의 농도(10 : 0)에서 높은 활성을 가지는 분획물(B1)을 수득하였다(표 2 참조).
| 분획 | 이동상 | ||
| 톨루엔 | 아세톤 | 메탄올 | |
| 1 | 100% | ||
| 2 | 90% | 10% | |
| 3 | 80% | 20% | |
| 4 | 50% | 50% | |
| 5 | 20% | 80% | |
| 6 | 100% | ||
| 7 | 90% | 10% | |
| 8 | 80% | 20% | |
| 9 | 60% | 40% | |
| 10 | 40% | 60% | |
| 11 | 20% | 80% | |
| 12 | 100% | ||
시료무게 : 4g, 컬럼 크기 : 4cm, Merck(社) 실리카겔(7734)
<
실험예
1> 아세트알데히드
디하이드로제나제
활성 측정
아세트 알데히드에 황태 추출물, 이의 분획물 및 상기 분획물에서 분리한 활성 분획물을 각각 0.1 ml 첨가하고 ALDH를 첨가하여 37℃ 물중탕(water bath)에서 10분간 반응시킨 후 340nm에서 흡광도를 측정하여 1%의 농도에서 ALDH 활성에 미치는 영향을 알아보았다. 음성 대조군은 ALDH에 완충용액을 첨가하였고 양성 대조군은 ALDH 활성을 증가시키는 것으로 알려진 아스파르트산을 첨가하였다.
하기와 같은 식으로 ALDH 활성을 산출하였다.
ALDH 활성(%) = (B/A) × 100
A : 대조구의 최대 흡광도
B : 실험구의 최대 흡광도
그 결과, 하기 표 3에서 보는 바와 같이, 본 발명의 황태 추출물, 이의 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물, 상기 분획물에서 분리한 활성 분획물 E9 및 B1은 대조군에 비해 ALDH의 활성을 증가시키는 것을 알 수 있다.
| 실험군 | 최대 흡광도의 증가율(%) |
| ALDH 0.1 mL + 완충용액 0.1 mL | 100.0 |
| ALDH 0.1 mL + ALDH 0.1 mL | 458.9 |
| ALDH 0.1 mL + 메탄올 추출물 0.1 mL | 151 |
| ALDH 0.1 mL + 에탄올 추출물 0.1 mL | 148 |
| ALDH 0.1 mL + 물 추출물 0.1 mL | 120 |
| ALDH 0.1 mL + 헥산 분획물 0.1 mL | 91 |
| ALDH 0.1 mL + 에틸아세테이트 분획물 0.1 mL | 148 |
| ALDH 0.1 mL + 부탄올 분획물 0.1 mL | 142 |
| ALDH 0.1 mL + 물 분획물 0.1 mL | 109 |
| ALDH 0.1 mL + E9 분획물 0.1 mL | 175 |
| ALDH 0.1 mL + B1 분획물 0.1 mL | 170 |
| ALDH 0.1 mL + 아스파르트산 0.1 mL | 170 |
<
실험예
2> 알코올
디하이드로나제
활성 측정
ADH(Alcohol dehydrogenase) 활성도는 Choi 등과 Racker의 방법을 변용하여 UV/VIS 스펙트로미터(spectrophotometer)(V-530, Jasco社)를 이용하여 340nm에서 형성되는 NADH의 흡광도를 측정함으로써 나타내었다. 시험관에 알코올 0.1 ml, NAD수용액(2 mg/ml) 0.5 ml, 황태 추출물, 이의 분획물 및 상기 분획물에서 분리한 활성 분획물을 각각 0.1 ml를 첨가하고 0.01M glycine-NaOH 완충용액(pH 8.8)를 총부피가 1.8 ml가 되게 첨가한 후 25℃ 항온 수조에 10분간 반응시키고 ADH(18 units/ml) 0.25 ml를 가하여 340nm에서 흡광도의 변화를 측정하였다. 이때 대조군은 ADH 대신 0.01M glycine-NaOH 완충용액 0.25 ml를 넣은 것으로 하였다. ADH의 활성은 반응 종료시의 최대 흡광도를 대조군의 최대 흡광도에 대한 비율로 나타내었으며 다음과 같은 식으로 계산하였다.
ADH 활성 = (B/A) × 100
A: 대조구의 최대 흡광도
B: 실험구의 최대 흡광도
그 결과, 하기 표 4에서 보는 바와 같이, 본 발명의 황태 추출물, 이의 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물, 상기 분획물에서 분리한 활성 분획물 E9 및 B1은 최대 흡광도에서 유의적인 차이를 나타냈으며, 대조군에 비해 ADH의 활성을 증가시키는 것을 알 수 있다.
| 실험군 | 최대 흡광도의 증가율(%) |
| ADH + 완충용액 | 100.0 |
| ADH + ADH | 452.4 |
| ADH + 메탄올 추출물 | 194 |
| ADH + 에탄올 추출물 | 190 |
| ADH + 물 추출물 | 188 |
| ADH + 헥산 분획물 | 176 |
| ADH + 에틸아세테이트 분획물 | 332 |
| ADH + 부탄올 분획물 | 274 |
| ADH + 물 | 136 |
| ADH + E9 분획물 | 341 |
| ADH + B1 분획물 | 268 |
| ADH + 아스파르트산 | 120 |
<
실험예
3> 황태의 단백질 분석
쿠마시 브릴리언트 블루(Coomassie Brilliant Blue) G-250 염료(dye)가 단백질과 결합하여 붉은색에서 푸른색으로 변하고, 595nm에서의 흡광도는 시료 중 단백질 함량과 비례한다. 황태시료를 액체질소 및 막자사발을 이용하여 곱게 분쇄한 후 단백질 추출용액[200mM Tris-Cl, pH8.0, 100mM NaCl, 400mM 슈크로즈(sucrose), 10mM EDTA, 14mM 2-메르캅토에탄올(mercaptoethanol), 1mM 페닐메틸 설포닐 플루오라이드(sulfonyl fluoride), 0.05% Tween-20]을 첨가하였다. 실온에서 20분간 방치한 후, 13,000xg로 원심분리하였고 상층액을 단백질 정량으로써 사용되었다. 그 상층액에 염료 시약(dye reagent)을 첨가하였고, 30분 후 595nm에서의 흡광도를 측정하였다. 소 혈청 알부민(Bovine serum albumin, BSA)를 이용하여 단백질 표준정량곡선을 작성하였고 시료 중의 단백질 함량을 표준곡선을 이용하여 계산되었다.
단백질 효율(protein efficiency, PER)을 통해 실질적인 단백질 대사율을 측정하였다. 전체 아미노산 함량 중 생체 내에서 중요하게 작용할 수 있는 필수 아미노산의 상대적 함량을 구하여 실질적인 단백질 대사율을 측정하였다. 황태의 PER 값은 가공 이전의 생태에서보다 약 1.6배 높은 수준으로 나타났으며 필수아미노산의 함량이 생태보다 높게 나타나 단백질 대사에 있어서 생태의 활용보다는 황태의 활용적성이 더 높게 나타났다(표 5 참조).
| PER(rat protein efficienvy) | |
| 황태 | 2.64 |
| 생태 | 1.65 |
<
실시예
4> 아미노산분석
황태시료를 액체질소 및 막자사발을 이용하여 곱게 분쇄한 후, 6N-HCl 용액을 첨가하여 펩타이드 결합을 가수분해하였다. 질소가스를 충진한 후, 진공감압하여 산소를 제거하고 110℃의 건조기에 24시간 반응시켰다. 가수분해시킨 후, 감압농축시키고, 물로 희석하여 산 용액을 제거하였다. 완전히 농축시킨 시료는 구연산나트륨 완충용액(Sodium citrate buffer)(pH2.2)으로 용해하였다. HPLC에 의한 아미노산 분석은 포스트컬럼(Postcolumn) 유도체화 방법을 사용하였다. 유도체화 시약으로는 닌히드린(ninhydrin)을 사용하여 UV 탐지기(detector)로 정량하였다. 각 시료는 구조 아미노산과 유리 아미노산(free amino acid) 조성을 비교 분석하고 대조군으로 생태로부터 아미노산 분석을 수행하였다. 분석된 아미노산을 조성을 바탕으로 하여 이소류신, 류신, 페닐알라닌 ,메티오닌, 리신, 트레오닌, 트립토판, 발린과 같은 필수아미노산과 알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 세린, 시스테인, 글루타민, 히스티딘, 프롤린, 티로신 등과 같은 비필수 아미노산을 분류하고 상대적인 양적 비율을 계산하여 단백질의 질을 결정할 수 있는 PER 값을 구하였다.
황태에서 전체 아미노산 구성 중 유리 아미노산 구성 비율이 생태의 경우에 비해 24배 증가하여 전체 아미노산 함량 중 약 79%의 비율을 나타냈으며 이는 황태의 제조과정 중에 동결과 해동, 건조의 과정 중 유리 아미노산 함량 증대 더 용이하게 흡수될 수 있음을 나타내고 이렇게 흡수된 아미노산들은 생체 내 대사에 직접적인 영향을 미칠 것으로 사료되어진다.
하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.
<
제제예
1> : 약학적 제제의 제조
1. 산제의 제조
실시예 <1-1>의 추출물 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
2. 정제의 제조
실시예 <1-1>의 추출물 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유 당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
3. 캡슐제의 제조
실시예 <1-1>의 추출물 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유 당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
4. 환의 제조
실시예 <1-1>의 추출물 1 g
유당 1.5 g
글리세린 1 g
자일리톨 0.5 g
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1환 당 4 g이 되도록 제조하였다.
5. 과립의 제조
실시예 <1-1>의 추출물 150 ㎎
대두추출물 50 ㎎
포도당 200 ㎎
전분 600 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 30 % 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 섭씨 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.
<
제제예
2> : 식품의 제조
본 발명의 황태 추출물, 이의 분획물 및 상기 분획물에서 분리한 활성 분획물을 포함하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.
1. 조리용 양념의 제조
본 발명의 실시예<1-2>의 추출물 20~95 중량부로 건강 증진용 조리용 양념을 제조하였다.
2. 밀가루 식품의 제조
본 발명의 실시예<1-2>의 추출물 0.5~5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.
3. 스프 및 육즙(gravies)의 제조
본 발명의 실시예<1-2>의 추출물 0.1~5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.
4. 그라운드 비프(ground beef)의 제조
본 발명의 실시예<1-2>의 추출물 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.
5. 유제품(dairy products)의 제조
본 발명의 실시예<1-2>의 추출물 5~10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
6. 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
본 발명의 실시예<1-2>의 추출물을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.
상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 황태 추출물의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.
곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),
종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),
실시예<1-2> 추출물의 건조분말(3 중량부),
영지(0.5 중량부),
지황(0.5 중량부)
<
제제예
3> : 음료의 제조
1. 건강음료의 제조
실시예<1-2>의 추출물 1000 ㎎
구연산 1000 ㎎
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수를 가하여 전체 900 ㎖
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
2. 야채쥬스의 제조
본 발명의 실시예<1-2>의 추출물 5 g을 토마토 또는 당근 쥬스 1,000 ㎖에 가하여 건강 증진용 야채쥬스를 제조하였다.
3. 과일쥬스의 제조
본 발명의 실시예<1-2>의 추출물 1 g을 사과 또는 포도 쥬스 1,000㎖ 에 가하여 건강 증진용 과일쥬스를 제조하였다.
도 1은 황태 추출물, 이의 유기용매 분획물 또는 상기 에틸 아세테이트 분획물에서 분리한 활성 분획물을 분리하는 과정을 나타내는 모식도이고,
도 2는 황태의 부탄올 분획물에서 활성 분획물을 분리하는 과정을 나타내는 모식도이고,
도 3은 황태의 부탄올 분획물에서 실리카겔 칼럼크로마토그라피를 통하여 얻은 분획물 B1 ~ B12를 나타내는 그림이다.
Claims (16)
- 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 황태(Theragra chalcogramma) 추출물을 유효성분으로 함유하는 숙취해소제.
- 제 1항에 있어서, 알코올은 C1 내지 C4 저급 알코올인 것을 특징으로 하는 숙취해소제.
- 제 2항에 있어서, 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것을 특징으로 하는 숙취해소제.
- 제 1항의 황태 추출물을 추가적으로 유기용매로 추출하여 제조된 유기용매 분획물을 유효성분으로 함유하는 숙취해소제.
- 제 4항에 있어서, 상기 유기용매는 에틸아세테이트 또는 부탄올인 것을 특징 으로 하는 숙취해소제.
- 제 5항의 에틸아세테이트 분획물을 추가적으로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 흡착시키고 이동상으로 톨루엔(toluene): 아세톤(Aceton)을 농도구배(100 : 0 → 0 : 100)를 1차 적용한 후, 아세톤 : 메탄올을 농도구배(100 : 0 → 0 : 100)를 2차 적용하여, 아세톤 : 메탄올의 농도(6 : 4)에서 얻을 수 있는 활성 분획물(E 9)을 유효성분으로 함유하는 숙취해소제.
- 제 5항의 부탄올 분획물을 추가적으로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 흡착시키고 이동상으로 톨루엔(toluene): 아세톤(Aceton)을 농도구배(100 : 0 → 0 : 100)를 1차 적용한 후, 아세톤 : 메탄올을 농도구배(100 : 0 → 0 : 100)를 2차 적용하여, 톨루엔 : 아세톤의 농도(10 : 0)에서 얻을 수 있는 활성 분획물(B 1)을 유효성분으로 함유하는 숙취해소제.
- 제 1항, 제 4항, 제 6항 또는 제 7항에 있어서, 황태 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물에서 분리한 활성 분획물은 아세트알데히드 분해(acetaldehyde dehydrogenase) 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 숙취해소제.
- 제 1항, 제 4항, 제 6항 또는 제 7항에 있어서, 황태 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물에서 분리한 활성 분획물은 알코올 분해(alcohol dehydrogenase) 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 숙취해소제.
- 물, 에탄올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 황태 추출물을 유효성분으로 함유하는 숙취해소용 건강기능식품.
- 제 10항의 황태 추출물을 추가적으로 유기용매로 추출하여 제조된 유기용매 분획물을 유효성분으로 함유하는 숙취해소용 건강기능식품.
- 제 11항에 있어서, 상기 유기용매는 에틸아세테이트 또는 부탄올인 것을 특징으로 하는 숙취해소용 건강기능식품.
- 제 12항의 에틸아세테이트 분획물을 추가적으로 실리카겔 컬럼 크로마토그래 피에 흡착시키고 이동상으로 톨루엔(toluene): 아세톤(Aceton)을 농도구배(100 : 0 → 0 : 100)를 1차 적용한 후, 아세톤 : 메탄올을 농도구배(100 : 0 → 0 : 100)를 2차 적용하여, 아세톤 : 메탄올의 농도(6 : 4)에서 얻을 수 있는 활성 분획물(E 9)을 유효성분으로 함유하는 숙취해소용 건강기능식품.
- 제 12항의 부탄올 분획물을 추가적으로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 흡착시키고 이동상으로 톨루엔(toluene): 아세톤(Aceton)을 농도구배(100 : 0 → 0 : 100)를 1차 적용한 후, 아세톤 : 메탄올을 농도구배(100 : 0 → 0 : 100)를 2차 적용하여, 톨루엔 : 아세톤의 농도(10 : 0)에서 얻을 수 있는 활성 분획물(B 1)을 유효성분으로 함유하는 숙취해소용 건강기능식품.
- 제 10항, 제 11항, 제 13항 또는 제 14항에 있어서, 황태 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물에서 분리한 활성 분획물은 아세트알데히드 분해(acetaldehyde dehydrogenase) 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 숙취해소용 건강기능식품.
- 제 10항, 제 11항, 제 13항 또는 제 14항에 있어서, 황태 추출물, 이의 분획물 또는 상기 분획물에서 분리한 활성 분획물은 알코올 분해(alcohol dehydrogenase) 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 숙취해소용 건강기능식품.
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