KR20090043115A

KR20090043115A - 감태에서 추출한 플로로탄닌을 함유하는 아토피 질환의치료 또는 예방용 조성물

Info

Publication number: KR20090043115A
Application number: KR1020070108793A
Authority: KR
Inventors: 최송암; 최재승; 안은미
Original assignee: (주)유라팜
Priority date: 2007-10-29
Filing date: 2007-10-29
Publication date: 2009-05-06

Abstract

본 발명은 아토피 피부염의 치료 또는 예방에 유용한 조성물에 관한 것으로서, 감태(Ecklonia cava)로부터 추출된 플로로탄닌(phlorotannin) 또는 감태의 플로로탄닌 풍부 분획을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하며, 보다 바람직하게는 상기 플로로탄닌이 엑콜(eckol), 디엑콜(dieckol), 바이엑콜(bieckol) 또는 이들의 혼합물인 것을 특징으로 한다.

감태, 플로로탄닌, 아토피 피부염, 엑콜

Description

감태에서 추출한 플로로탄닌을 함유하는 아토피 질환의 치료 또는 예방용 조성물{Ecklonia cava-derived phlorotannin-containing composition for treating or preventing atopic disease}

본 발명은 아토피 피부염을 치료 또는 예방하는데 유용한 조성물에 관한 것이다.

최근 아토피 질환의 발생률이 상당히 증가하는 추세에 있다. 아토피 피부염은 심한 소양감, 홍반, 부종, 삼출 및 부스럼 딱지를 특징으로 하는 만성 습진성 피부질환이다.

아토피 피부염의 병리에 면역학적 기전이 관여한다는 것은 잘 알려져 있지만 정확한 병인에 대해서는 아직까지 완전한 이해가 부족한 실정이다. 지금까지 병인으로 알려진 것으로는 면역학적으로 T 림프구의 비정상적 활성화, 랑게르한스 세포의 자극증가, 사이토카인 체계의 이상, 세포매개성 면역의 감소, IgE의 증가 등이 있으며 그 밖에 혈관작용성 매개체의 분비와 약리학적 반응의 변형도 아토피 피부염의 병태생리에 중요한 역할을 한다고 알려져 있다.

보다 구체적으로, NFAT(Nuclear Factors of Activated T Cells)는 세포질에 존재하는 전사조절인자이며, 이것은 효소인 칼시뉴린(calcineurin)이 Ca² ⁺에 의해 활성화되면 탈인산화되어 핵으로 들어가서 면역세포들에서 면역반응의 유도와 조절에 필수적인 여러 사이토카인들(IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, GM-CSF, TNF-alpha, IFN-gamma 등) 및 세포표면인자(CD40L, FasL, IL-2Rα 등)의 발현에 중요한 역할을 한다(Winter et al., Immunology Today 1993; 14:243-246, 및 Crabtree GR, Cell 1999; 96:611-614). 그러나 지나친 NFAT의 활성화는 자가면역, 장기이식거부반응, 염증 및 아토피와 같은 면역질환을 야기하므로 이러한 질환의 치료를 위하여 NFAT 전사인자에 대한 조절이 필요하다. 즉, 과도하게 활성화된 NFAT 전사인자를 억제 또는 저해하는 작용을 지니는 물질은 각종 면역질환이나 염증질환의 치료제로 유용하게 사용될 수 있는 것이다.

또 인체의 면역기능이 지나칠 경우 패혈증이나 아토피 피부염 등을 유발하며, 전사인자 조절물질인 AP(Activator protein)-1의 신호전달 체계가 매우 밀접하게 관련되어 있음은 최근 들어서 밝혀진 내용들이다. 아토피 피부염은 주로 Th2-type 면역반응에 의하여 매개되는 것으로 알려져 있는데, 이것은 환자들의 혈청 중에서 immunoglobulin(Ig)-E가 특징적으로 증가되기 때문이다. 이러한 Ig-E의 조절은 주로 인터루킨(IL)-4의 영향을 받게 되며, 동시에 IL-4에 의하여 전사인자 AP-1이 과도 발현되게 되어 아토피 피부염이 진행되는 것으로 알려져 있다(Yamazaki F et al., 2002; Pastore S et al., 2000). 따라서 과도하게 발현되는 AP-1의 활성을 적절하게 억제하게 되면 아토피 피부질환의 개선이 가능하게 되는 것이다.

Kawai M 등(Allergol Int 2007 56(2):113-123)에 따르면 플라보노이드 성분들이 NFAT(Nuclear factors of activated T cells)과 AP-1의 활성을 억제하여 아토피 피부염에 대한 개선 효과를 보였음을 보고한 바가 있다.

한편 아토피는 다른 질환들과는 달리 Th2 및 Th1 모두가 관여하는 질병이다. 병의 초기에는 Th2 질병에서 시작하여 만성화되면서 감염을 동반하고 Th1 사이토카인인 IL-12의 수치가 증가하므로 Th1으로 이동하는 경향을 나타낸다고 알려져 있다. 자가면역질환이나 알러지 등은 Th1/Th2의 균형이 깨어져 있다. 균형이 파괴되어서 쉽게 질환이 왔는지 질환이 와서 균형이 파괴되었는지는 명확하지 않지만, 체내에서 Th1/Th2 균형 유지는 아토피 피부염과 같은 면역질환의 예방에 큰 역할을 한다고 알려져 있다(Parris Kidd, Alt Med Rev 2003; 8(3): 223).

면역반응에 관여하는 T 세포는 항원의 자극에 따라 Th1 및 Th2 세포로 분화된 후 효현제(effector) 기능을 발휘함과 동시에 면역계의 균형 유지에 도움을 주고 있다. 만일 Th1/Th2 균형이 파괴된다면 Th 세포 특성에 따라서 알러지, 아토피, 관절염, 당뇨병 등과 같은 자가면역질환이 유도될 가능성이 커지게 된다. 특히 아토피 피부염 상태에서는 Th1 세포에서 유래하는 IFN-gamma나 IL-12가 감소하고 반대로 Th2 세포에서 유래하는 IL-4, IL-5, IL-10 등이 증가하게 되어 Th1/Th2 (= IFN-r/IL-4)의 비율이 감소하게 되는데, 이 비율을 증가하게 되면 아토피 피부염의 증상 개선이 기대되는 것으로 알려져 있다(A B Kay et al. New Eng J Med 2001; 344(1): 30).

아토피성 피부염의 원인에 대해서는 최근까지 수많은 연구결과와 정보가 제 시되었으나, 정확한 병인과 유효한 치료법에 대해서 아직까지 명확한 이론이 확립되지 않은 상태이다. 이러한 문제점으로 인해 현재까지 개발되어 있는 아토피성 피부염 치료제는 스테로이드 제제, 경구용 항히스타민제, 하이드록시퀴놀린(hydroxyquinoline), 타르 제제, 저자극성 보습제 등으로서, 근본적인 치료보다는 증상을 적절한 수준으로 조절하는데 도움을 주는 제품들이 주종을 이루고 있으며 현재까지 개발되어 있는 어떤 의약품도 환자들의 요구를 완전히 충족시켜주지 못하고 있는 실정이다. 최근까지는 국소용 스테로이드 제제가 아토피성 피부염 치료제의 주종을 차지하고 있었으나, 장기간 사용시의 내성발현 및 안전성의 문제로 인해 부작용이 없고 보다 안전한 비스테로이드성 아토피성 피부염 치료제의 개발이 절실히 요구되고 있다.

따라서 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 보다 안전하고 치료 또는 예방효과가 탁월한 아토피 피부염 치료 또는 예방용 조성물을 제공하는 것이다.

상기 기술적 과제를 달성하기 위하여, 본 발명은 감태(Ecklonia cava)에서 유래한 플로로탄닌 또는 감태 추출물의 플로로탄닌 분획을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 치료 또는 예방용 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 엑콜(eckol), 디엑콜(dieckol), 바이엑콜(bieckol) 또는 이들의 혼합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 치료 또는 예방용 조성물을 제공한다.

이하 본 발명의 아토피 피부염 치료 또는 예방용 조성물에 대해 보다 구체적으로 설명한다.

감태는 미역과(Alariaceae)에 속하는 다년생 해조류이다. 감태는 한국의 동해 남부와 제주도를 포함한 남해안 일대 연안의 수심 10m 내외에서 서식하며 소라, 전복 등의 먹이나 알긴산을 만드는 원료로 주로 이용되고 있다.

플로로탄닌(phlorotannin)은 플로로글루시놀(phloroglucinol)을 기본 구성 단위로 하는 폴리페놀 화합물이며, 자연계에서는 해양식물 특히 갈조류에서 많이 발견되는데, 이러한 플로로탄닌은 항균 효과, 항산화 효과, 간보호 활성, 엘라스타제 저해 활성, 히야루로니다제(hyaluronidase) 저해 활성, 심혈관계 보호효과, 항 바이러스활성 등 여러 가지 유용한 효과들이 보고되었다.

본 발명은 감태에서 추출된 플로로탄닌이 아토피 피부염을 치료 또는 예방하는데 매우 유용하다는 놀라운 발견에 기초한다. 따라서 본 발명은 감태(Ecklonia cava)로부터 추출된 플로로탄닌을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 치료 또는 예방용 조성물을 제공하며, 본 발명은 또한 감태(Ecklonia cava)의 플로로탄닌 분획을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 치료 또는 예방용 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 감태에 포함된 여러 플로로탄닌 중 엑콜(eckol), 디엑콜(dieckol) 및 바이엑콜(bieckol)이 아토피 피부염의 치료 또는 예방에 특히 유용하다는 놀라운 발견에 기초한다. 이러한 엑콜 화합물들은 본 발명이 속한 분야에서 잘 알려진 통상적인 화학적 합성법을 이용하여 합성될 수도 있으나, 전술한 감태로부터 분리되는 것이 바람직하다.

본 발명의 아토피 피부염 치료 또는 예방용 조성물은 의약품, 기능성 식품 및 화장품의 형태로 제조될 수 있다. 이러한 의약품, 기능성 식품 및 화장품은 약제학적으로 허용되는 부형제 또는 첨가제를 포함할 수 있다. 본 발명의 아토피 피부염 치료 또는 예방용 개선용 조성물은 단독으로 혹은 어떤 편리한 운반체, 부형제 등과 함께 혼합하여 투여될 수 있고, 그러한 투여 제형은 단회투여 또는 반복투여 제형일 수 있다.

본 발명의 아토피 피부염 치료 또는 예방용 조성물은 고형 제제, 반고형제제 또는 액상 제제일 수 있다. 고형 제제는 산제, 과립제, 정제, 캅셀제, 좌제 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 고형 제제에는 부형제, 착향제, 결합제, 방부제, 붕해제, 활택제, 충진제 등이 포함될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 반고형 제제로는 크림제, 로션제, 유화제, 리니멘트제 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 적당한 착색제, 착향제, 안정화제, 점성화제, 계면활성제 등을 첨가하여 제조할 수 있다. 액상 제제로는 물, 알코올, 프로필렌 글리콜 용액 같은 용액제, 현탁액제, 유제 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 적당한 착색제, 착향제, 안정화제, 점성화제 등을 첨가하여 제조할 수 있다.

예를 들어, 산제는 본 발명의 플로로탄닌과 유당, 전분, 미결정셀룰로오스 등 약제학적으로 허용되는 적당한 부형제를 단순 혼합함으로써 제조될 수 있다. 과립제는 본 발명의 플로로탄닌; 약제학적으로 허용되는 적당한 부형제; 및 폴리비닐피롤리돈, 히드록시프로필셀룰로오스 등의 약제학적으로 허용되는 적당한 결합제를 혼합한 후, 물, 에탄올, 이소프로판올 등의 용매를 이용한 습식과립법 또는 압축력을 이용한 건식과립법을 이용하여 제조될 수 있다. 또한 정제는 상기 과립제를 마그네슘스테아레이트 등의 약제학적으로 허용되는 적당한 활택제화 혼합한 후, 타정기를 이용하여 타정함으로써 제조될 수 있다. 또한 예를 들어, 피부외용제는 바세린, 스테아릴알콜 등의 약제학적으로 허용되는 적당한 기재; 폴리소르베이트, 솔르비탄 세스퀴올레이트 등의 약제학적으로 허용되는 적당한 계면활성제; 글리세린 등의 약제학적으로 허용되는 적당한 보습제; 약제학적으로 허용되는 적당한 용제; 및 착향제, 착색제, 안정화제, 점성화제 등을 균질하게 혼합하는 통상의 피부외용제 제조방법에 의해서 제조될 수 있다.

아토피 피부염의 치료 또는 예방이라는 본 발명의 목적을 달성하기 위하여 본 발명의 감태 유래 플로로탄닌은 매일 약 0.01 mg/kg 내지 약 10 g/kg이 투여될 수 있으며, 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 g/kg의 1일 투여 용량이 바람직하다. 그러나 상기 투여량은 투여 경로 및 제형, 환자의 상태(연령, 성별, 체중 등), 치료하고 있는 상태의 심각성, 추출방법에 따른 플로로탄닌 분획의 순도와 함량 등에 따라 다양할 수 있다. 필요에 따라 편리성을 위하여 1일 총 투여량이 나누어지고 하루 동안 여러 번 나누어 투여될 수 있다.

본 발명은 또한 (S1) 감태를 저급 알코올로 추출하는 단계; (S2) 여액을 감압농축하는 단계; (S3) 농축물을 에틸아세테이트, 클로로포름, 헥산, 부탄올 및 디클로로메탄으로 이루어진 군으로부터 선택된 유기용매로 분획하는 단계; 및 (S4) 상기 분획에서 디에칠에테르 분획을 분리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 감태로부터 아토피 피부염의 치료 또는 예방에 유용한 추출물을 제조하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 상기 제조방법에 있어 (S5) 얻어진 디에칠에테르 분획을 컬럼 크로마토그래피로 정제하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 감태로부터 아토피 피부염의 치료 또는 예방에 유용한 추출물을 제조하는 방법을 제공한다.

보다 구체적으로, 상기 저급 알코올로는 메탄올, 에탄올, 이소프로판올 등이 사용될 수 있으며, 컬럼 크로마토그래피에서는 용출용매로서 클로로포름 및 메탄올 혼합물을 이용하여 추출하거나 이산화탄소 초임계 추출방법을 통해서도 아토피 피 부염의 치료 또는 예방에 유용한 플로로탄닌 분획을 순수하게 얻을 수 있다. 그러나 본 발명에 따른 플로로탄닌을 얻는 방법은 이러한 추출방법에 한정된 것은 아니다.

본 발명은 보다 안전하고 치료 또는 예방효과가 탁월한 아토피 피부염 치료 또는 예방용 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위하여 하기 실시예 등을 들어 설명한다. 그러나 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며 본 발명의 범위가 아래에서 상술하는 실시예들에 한정되는 것으로 해석돼서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 본 발명의 구체적 이해를 돕기 위해 예시적으로 제공되는 것이다.

<감태로부터 플로로탄닌(phlorotannin)의 분리>

실험에 사용된 감태는 제주도 연안에서 채집하였고, 실내에서 통풍건조한 후 분쇄기를 이용하여 분말상태로 만든 후 냉장보관하면서 사용하였다. 감태 건조분말 4kg을 먼저 헥산, 헥산:에틸아세테이트 (4:1)혼합액, 및 (1:1)혼합액으로 추출하여 지질 성분과 색소를 제거한 다음, 잔류물을 80% 메탄올 16L에 침적하여 실온에서 24시간 동안 교반하면서 침출한 후(3회 반복), 여액을 모아서 감압농축하여 추출물 1Kg을 얻었다. 얻어진 추출물을 증류수(1L)에 현탁한 후 에틸아세테이트로 처리하 여 유기물 층을 얻었다. 얻어진 에틸아세테이트 분획을 셀라이트(celite) 컬럼에 실은 후 용매별로 용출하여 디에칠에테르 분획을 얻었다. 이 분획을 후술하는 평가 실험 등에 사용하였다.

SEAP(Secretory alkaline phosphatase)를 갖는 NFAT consensus sequence 유전자를 형질 도입한 Jurkat 세포주를 사용하여 시료에 의한 NFAT 유전자의 활성이 얼마나 감소하는지를 측정하였다. NFAT-Jukat 세포주를 96-well plate에 각 1X10⁵이 되게 분주하고, 분리한 플로로탄닌 추출물(디에칠에테르 분획)을 다양한 농도로 첨가한 뒤 PMA(Phorbol Myristate Acetate) 10ng/ml 및 이노마이신 0.5uM을 첨가하여 세포를 활성화시켰다. 이후 37℃, CO₂ 배양기에서 6시간 동안 배양한 뒤 배양액을 25ul 취하여 형광측정용 96-well black plate에 분주하고, 75ul의 증류수와 100ul의 4-MUP용액(4-methyl umbelliferyl phosphate, 40ug/ml)을 첨가하여 암소에서 60분간 반응시킨 후 형광측정기(excitation: 365nm, emission: 460nm)를 사용하여 형광 값을 측정하였다. 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

처리농도 (ug/ml)	상대적인 NFAT 활성 (%)
0	100 ± 5.6
5	75.4 ± 8.2
10	50.5 ± 5.3
50	13.8 ± 4.7

상기 표 1에 나타나는 바와 같이, PMA 10ng/ml와 이노마이신 0.5uM로 활성화시킨 대조군에 비하여 플로로탄닌를 처리한 군에서는 농도의존적인 NFAT 활성을 저해하는 것을 확인하였다. 그러므로 감태에서 분리한 플로로탄닌(디에칠에테르 분획)은 아토피 피부염과 같은 면역질환의 개선에 유용하게 사용될 수 있을 것으로 생각된다.

<AP-1 저해 효과>

상기와 같이 분리한 디에칠에테르 분획(플로로탄닌 분획)의 Activator protein-1 억제 효과를 측정하기 위하여 다음과 같은 실험을 수행하였다(Z Dong et al., 1994, PNAS 91:609-613).

JB6 세포주(마우스 표피 세포주)를 96-well plate에 5% PBS을 함유한 MEM (Minimum Essential Medium)를 이용하여 37℃에서 24시간 배양하였다. JB6 세포주를 8X10³ 세포/ml의 농도로 96-well plate에 분주하고 24시간 경과 후 세포가 플레이트 바닥에 잘 부착되었는지 확인한 후 1ug/ml의 LPS로 세포를 자극하고 상기 플로로탄닌 분획을 5, 10 및 50ug/ml의 농도로 첨가한 다음 16시간 동안 배양하였다. 배양한 세포를 라이시스완충액(0.1M 인산염완충액 pH 7.8/ 1% Triton X-100/ 1mM DTT/ 2mM EDTA)를 이용하여 배양액을 처리한 후 배양액 내의 루시퍼라제 활성을 루미노미터(luminometer, Monolight 2010)을 이용하여 측정하였다. 그 결과를 하기 표 2에 상대적인 AP-1 활성으로 나타내었다.

시료	상대적 AP-1 활성 (%)
음성 대조군	100
LPS 대조군	570
Phlorotannin 분획 5ug/ml	340
Phlorotannin 분획 10ug/ml	210
Phlorotannin 분획 50ug/ml	170

상기 표 1에 나타나는 바와 같이, 본 발명의 감태에서 추출한 플로로탄닌은 LPS 자극에 의한 AP-1을 억제하는 효과를 농도의존적으로 나타내었다.

<DNCB로 유도한 아토피 동물모델에서의 아토피 피부질환 개선 효과>

DNCB(2,4-dinitrochlorobenzene)은 아토피 피부염을 유발시키는 물질로서 잘 알려져 있으며 많은 연구에서 아토피 피부염 치료효과를 검증하기 위하여 이용되고 있다(Jan Gutermuth et al., Drug discovery today : Disease models , 2005, 2(2): 135-140).

감태에서 분리한 플로로탄닌 분획의 피부질환 개선 효과를 확인하기 위하여 DNCB를 처리하여 아토피 유발 동물모델에서의 임상적인 피부병변, Immunoglobulin-E의 억제효과 및 Th1/Th2 비율 조절 효과를 관찰하였다.

먼저 10주령의 수컷 BALB/c 마우스를 구입하여 1마리씩 wire-drop bottom cage에 넣고 1주간 순화시킨 다음 실험에 사용하였다. 실험 첫째 날에 등쪽의 털을 제모한 다음 안와 채혈을 하고 아세톤과 올리브오일을 4:1로 혼합한 용액을 용매로 하여 1%-DNCB를 녹인 액을 2회 도포하여 감작시키고 7일째에 다시 0.2%-DNCB 용액을 2회 도포하여 재감작시켰다. 14일째 되는 날에 긁기 반응 검사와 안와 채혈을 하였으며 이후 35일까지 각각의 시료를 위의 용매에 녹인 용액을 1일 1회 3주간 도포한 다음 35일째에 긁기 반응 검사와 안와 채혈을 하고 부검을 행하였다.

실험결과 아토피로 인한 가려움증으로 인한 긁기 반응의 횟수는 도 1에 나타내었다. 도 1에 나타나는 바와 같이, 용매만을 도포한 Sham 대조군에서는 24.0±5.8회, DNCB만 도포한 아토피 질병모델 군에서는 99.5±12.03회, 플로로탄닌 분획 1% 용액을 도포한 PT 1 군, 플로로탄닌 3% 용액을 도포한 PT 3 군 및 플로로탄닌 5% 용액을 도포한 PT 5 군에서는 각각 55.0±7.9회, 40.0±10.0회, 그리고 20.0±2.65회로 농도의존적으로 유의적으로 낮게(아토피 군 대비 p<0.001) 나타나서 감태에서 추출한 플로로탄닌이 아토피 피부염의 대표적인 증상인 가려움증을 효과적으로 억제하는 것을 확인할 수 있었다.

한편, 상기의 DNCB로 유발한 아토피 동물모델에서 농도별 플로로탄닌의 처리에 따른 혈장 중 Immunoglobulin(Ig)-E의 함량을 측정해 본 결과, 약물의 처리가 끝난 35일 후의 Ig-E의 함량은 Sham 대조군에서는 501.53±32.64, DNCB만 도포한 아토피(Atopy) 군에서는 1793.89±267.09, 플로로탄닌 분획 1%, 3%, 및 5% 용액을 도포한 PT 1, PT 3 및 PT 5%군에서는 각각 1193.58±104.94, 873.14±89.52, 및 472.01±89.95ng/ml로 농도의존적으로 유의적으로 낮게(아토피 군 대비 p<0.05) 나타나서 감태에서 추출한 플로로탄닌이 아토피 피부염의 대표적인 증상인 가려움증을 효과적으로 억제하는 것을 확인할 수 있었다.

또한, 앞서 언급하였듯이 아토피 피부염의 경우 타입 2 T 세포에 의한 Interleukin(IL)-4의 급격한 증가와 더불어 타입 1 T 세포에 의한 Interferon(IFN)-gamma의 감소 경향을 보이므로 결과적으로 혈장 내에서의 비율(IL-4/IFN-gamma ratio)이 매우 증가하는 경향을 보인다고 알려져 있는데, 대조군(4.1±0.4)에 비하여 DNCB로 유발한 아토피 군에서는 이 비율이 2배 이상 증가(8.7±1.3)하는 경향을 보였으며, 상기 감태에서 분리된 플로로탄닌의 처리에 의한 IL-1/IFN-γ 비율은 각 군에서 모두 유의적인 수준(아토피 군 대비 p<0.05)으로 감소함이 확인(PT 1, 3, 및 5% 모두 1.67~1.77±0.22~0.48)되어 플로로탄닌을 적용함으로써 효과적으로 아토피 피부염을 개선할 수 있음을 확인할 수 있었다.

<플로로탄닌의 추가 분리>

전술한 제조방법에서 분리한 디에칠에테르 분획(13.9g)을 세파덱스 컬럼 크로마토그래피(컬럼 용출용매로 클로로포름 및 메탄올 혼합물을 2:1, 1:1, 0:1 비율로 순차적으로 조절) 분리하여 플로로글루시놀, 엑콜(eckol), 엑크스토로놀(eckstolonol), 트리플로레쏠 A(triphlorethol A) 등의 플로로탄닌을 순순하게 분리하였다. 이러한 분리를 통하여 엑콜(eckol, 138mg), 디엑콜(dieckol, 158mg) 및 바이엑콜(bieckol, 75mg)을 순수하게 얻었다.

플로로탄닌 혼합물로부터 추가로 분리한 엑콜, 디엑콜 및 바이엑콜을 이용하여 전술한 방법과 동일하게 NFAT 저해 활성을 평가하였다. 엑콜, 디엑콜 및 바이엑콜 각각을 10ug/ml의 농도로 처리한 후에 NFAT 저해 활성을 측정한 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

시료	상대적인 NFAT 활성 (%)
대조군	99.8±4.9
Eckol	57.2±6.2
Dieckol	42.1±5.8
Bieckol	38.3±7.1

상기 표 3에서와 같이, PMA 10ng/ml와 이노마이신 0.5uM로 활성화시킨 대조군에 비하여 엑콜 화합물들을 10ug/ml의 농도로 처리한 경우에는 강력하게 NFAT 활성을 저해하는 것을 확인하였다. 그러므로 감태에서 분리한 엑콜 화합물들은 아토피 피부염과 같은 면역질환의 개선에 유용하게 사용될 수 있을 것으로 생각된다.

<AP-1 저해 활성 평가>

플로로탄닌 혼합물로부터 추가로 분리한 엑콜, 디엑콜 및 바이엑콜을 이용하여 전술한 방법과 동일하게 AP-1 저해 활성을 평가하였다. 엑콜, 디엑콜 및 바이엑콜 각각을 10ug/ml의 농도로 처리한 후에 AP-1 저해 활성을 측정한 결과를 하기 표 4에 나타내었다.

시료	상대적인 AP-1 활성 (%)
대조군	99
LPS 대조군	610
Eckol	337
Dieckol	285
Bieckol	253

상기 표 4에서와 같이, 엑콜 화합물들을 10ug/ml의 농도로 처리한 경우에 LPS 자극에 의하여 유도된 AP-1 활성을 강력하게 저해하는 것을 확인하였다. 그러므로 해조류에서 분리한 Eckol 유도체들은 아토피 피부염과 같은 면역질환의 개선에 유용하게 사용될 수 있을 것으로 생각된다.

도 1은 DNCB로 유발한 아토피 동물모델에서 플로로탄닌의 농도별 처리에 따른 긁기 회수의 억제 효과를 나타내는 그래프이다.

Claims

감태(Ecklonia cava)로부터 추출된 플로로탄닌(phlorotannin)을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 치료 또는 예방용 조성물.
감태(Ecklonia cava)의 플로로탄닌 분획을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 치료 또는 예방용 조성물.
엑콜(eckol), 디엑콜(dieckol) 및 바이엑콜(bieckol)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 치료 또는 예방용 조성물.
제3항에 있어서, 상기 엑콜, 디엑콜 및 바이엑콜은 감태로부터 추출된 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 치료 또는 예방용 조성물.