KR20090040908A - 벤조트리아졸 키나아제 조절제 - Google Patents

Abstract

본 발명은 식 (I)의 신규한 벤조트리아졸 유도체, 및 이들의 생리학적으로 허용가능한 염에 관한 것이다:

[식 중, R, R¹, R², R³, 및 m 은 상세한 설명 및 청구항에 정의된 바와 같음]. 상기 화합물은 JNK 및 CDK 조절제이다.

벤조트리아졸, 키나아제, JNK 및 CDK 조절제

Description

벤조트리아졸 키나아제 조절제 {BENZOTRIAZOLE KINASE MODULATORS}

본 발명은 c-Jun N-말단 키나아제 (JNK) 및 시클린 의존 키나아제 (CDK)를 조절하기 위한 방법, 및 헤테로시클릭 화합물, 더욱 특히는, 벤조트리아졸 유도체로의 JNK 또는 CDK 조절에 의해 경감될 수 있는 질환 또는 상태를 앓고 있는 대상체를 치료하기 위한 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 신규한 헤테로시클릭 화합물 및 상기 화합물을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.

c-Jun N-말단 키나아제 (JNK)는 p38 및 세포외 신호 조절 키나아제 (ERK)와 함께 미토젠 활성화 단백질 키나아제 계통의 구성원이다. 10 개의 스플라이스(splice) 변이체를 인코딩하는 3 가지 상이한 유전자 (jnk1, jnk2 및 jnk3)가 규명되어 있다 (Y.T. Ip 및 R.J. Davis, Curr. Opin. Cell Biol. (1998) 10:205-19). JNK1 및 JNK2 는 다양한 조직에서 발현되는 반면, JNK3 는 주로 뉴런에서, 및 더 적은 범위로 심장 및 정소에서 발현된다 (D.D. Yang 등, Nature (1997) 389:865-70). JNK 계통의 구성원은 전구염증성 시토킨, 예컨대 종양 괴사 인자α (TNF-α) 및 인터루킨-1β (IL-1β), 및 주위의 자극에 의해 활성화된다. JNK 의 활성화는 Thr-183 및 Tyr-185 의 2중 인산화를 통해, 그의 상부 키나아제, MKK4 및 MKK7 에 의해 매개된다 (B. Derijard 등, Cell (1994) 76:1025-37). MKK4 및 MMK7 는 외부 자극 및 세포 환경에 따라, MEKK1 및 MEKK4 를 포함하는, 다양한 상부 키나아제에 의해 활성화될 수 있다고 제시되어 있다 (D. Boyle 등, Arthritis Rheum (2003) 48:2450-24). JNK 신호전달의 특이성은 JNK-상호작용 단백질이라 불리는 골격 단백질을 사용하여, 다단계 키나아제의 복합 성분을 함유하는 JNK-특이적 신호 복합체 형성에 의해 달성된다 (J. Yasuda 등, Mol. Cell. Biol. (1999) 19:7245-54). JNK 는 전사 인자, 예컨대 c-Jun, 활성제 단백질-1 (AP1) 계통의 구성 요소, 및 ATF2, 및 비전사 인자, 예컨대 IRS-1 및 Bcl-2 를 포함하는, 특정 기질의 인산화에 의해, 염증, T 세포 기능, 아포토시스(apotosis) 및 세포의 생존에서 중요한 역할을 수행하는 것으로 제시되어 있다 (A.M. Manning 및 R.J. Davis, Nat. Rev. Drug Discov. (2003) 2:554-65). JNK 의 과잉활성화는 자가면역, 염증성, 대사성, 신경학적 질환 및 암에서 중요한 메카니즘으로 여겨진다.

류마티스 관절염 (RA)은 관절의 만성 염증을 특징으로 하는 전신적 자가면역 질환이다. 염증 과정에 의해 야기된 관절 부종 및 통증에 더하여, 대부분의 RA 환자들에서는 궁극적으로 쇠약성 관절 손상 및 변형이 발병한다. 세포 및 동물 모델에서 주목할 만한 약리학적 및 유전적 증거의 몇몇 계열은 RA 의 병인에서 활성화된 JNK 의 관련성 및 중요성을 강력하게 제안한다. 우선, JNK 의 비정상 활성화는 RA 환자로부터 인간 관절염 관절 (G. Schett 등, Arthritis Rheum (2000) 43:2501-12) 및 관절염의 동물 모델로부터 설치류 관절염 관절 (Z. Han 등, J. Clin. Invest. (2001) 108:73-81) 모두에서 검출되었다. 또한, 선택적인 JNK 억제제에 의한 JNK 활성화의 억제는 인간 활막세포, 대식세포 및 림프구에서 전구염증성 시토킨 및 MMP 생성을 차단했다 (Z. Han 등, (2001) 상기). 중요하게는, 애주번트 관절염을 가진 래트에서 (Z. Han 등, (2001) 상기) 또는 콜라겐 유도성 관절염을 가진 마우스에서 (P. Gaillard 등, J Med Chem. (2005) 14:4596-607) 선택적인 JNK 억제제의 투여는 시토킨 및 콜라게네이즈 발현 억제에 의해, 관절을 파괴로부터 효과적으로 보호하고, 발 부종을 유의하게 감소시켰다. 또한, JNK2 결핍 마우스는 부분적으로 관절 파괴로부터 보호되었으나, 잠복성 콜라겐 유도성 관절염 모델에서는 발 부종 및 염증에 거의 효과를 나타내지 않았다. 이러한 연구는 JNK2 가 기질 분해, 염증 및 발 부종에서, JNK1 와 이들의 역할에 대해 기능적으로 중복된다는 것을 나타낸다. 따라서, RA 의 효과적인 치료를 위해 JNK1 및 JNK2 둘 모두의 통합된 억제가 요구된다 (Z. Han 등, Arrthritis Rheum. (2002) 46:818-23).

천식은 세포의 염증 과정의 존재 및 기도의 구조적 변화와 관련된 기관지 과민화를 특징으로 하는, 기도의 만성 염증성 질환이다 (B. Bradley 등, J. Allergy Clin. Immunol. (1991) 88:661-74). 이러한 장애는 T 림프구, 호산구, 비만 세포, 호중구 및 상피 세포를 포함하는, 기도 내 다수의 세포 유형에 의해 유도된다고 제시되어 있다 (J. Bousquet 등, Am. J. Respir. Crit. Care Med. (2000) 161:1720-45). JNK 는 선택적인 JNK 억제제를 사용한 천식의 세포 및 동물 모델에서, 최근 기술 검증(proof-of-concept) 연구에 기초하여 천식을 위한 가망성 있는 치료 대상으로서 판명되었다 (K. Blease 등, Expert Opin. Emerg. Drugs (2003) 8:71-81). JNK 억제제는 활성화된 인간 기도 평활 세포에서, RANTES 생성을 유의하게 차단하는 것으로 제시되었다 (K. Kujime 등, J. Immunol. (2000) 164:3222-28). 더욱 중요하게는, JNK 억제제는 만성 래트 및 마우스 모델에서 세포 침윤, 염증, 과민화, 평활근 증식, 및 IgE 생성을 감소시키는 이들의 능력에 대한 우수한 효능을 나타냈다 (P. Nath 등, Eur. J. Pharmacol. (2005) 506:273-83; P. Eynott 등, Br. J. Pharmacol. (2003) 140:1373-80). 이러한 관찰은 과민화와 관련된 기도 리모델링 과정인, 알러지성 염증에서 JNK 의 중요한 역할을 제안한다. 따라서, JNK 활성의 차단은 천식의 치료를 위해 유익한 것으로 예상된다.

제 2 형 당뇨병은 만성 저수준 염증 및 산화적 스트레스와 관련된 비정상 지질 대사의 결과로서 인슐린 저항 및 인슐린 분비 장애를 특징으로 하는, 가장 심각하고 널리 퍼진 대사성 질환이다. JNK 활성은 비만 및 당뇨병 조건 하에서, 각종 당뇨병 대상 조직에서 비정상적으로 상승된다고 보고되어 있다 (J. Hirosumi 등, Nature (2002) 420:333-36; H. Kaneto, Expert. Opin. Ther. Targets (2005) 9:581-92). 전구염증성 시토킨 및 산화적 스트레스에 의한 JNK 경로의 활성화는 Ser³⁰⁷ 에서 인슐린 수용체 기질-1 (IRS-1)의 인산화를 통해 인슐린 신호전달을 부정적으로 조절하고, 따라서 인슐린 저항 및 포도당 부하에 기여한다 (J. Hirosumi 등, Nature (2002) supra; Y. Lee 등, J. Biol. Chem. (2003) 278:2896-902; Y. Nakatani 등, J. Biol. Chem. (2004) 279:45803-09). 강력한 유전적 증거가 유전적 (ob/ob) 비만 마우스 또는 식이적 비만 마우스로 교차된 jnk^-/- 마우스를 사용한 명쾌한 동물 모델 연구로부터 제시되었다. JNK2 기능 (jnk^-/- )이 아닌, JNK1(JNK1^-/- )의 손실은 비만 마우스를 체중 증가, 혈당의 증가된 항정상태 수준, 및 감소된 혈장 인슐린 수준으로부터 보호하였다 (J. Hirosumi 등, Nature (2002) supra). 또한, 유전적 당뇨병 모델 (db/db 마우스)에서, 소분자 JNK 억제제, CC105 (B. Bennett 등, Curr. Opin. Pharmacol. (2003) 3:420-25) 또는 JNK-상호작용 단백질-1 (JIP-1)의 JNK 결합 도메인으로부터 유래한 JNK 억제성 펩티드 I (JIP)(H. Kaneto 등, Nat. Med. (2004) 10:1128-32)의 투여에 의해, 유의하게 더 낮은 혈당 및 더 높은 혈장 인슐린 수준을 포함하는 유익한 효과가 관찰되었다. 더욱 흥미롭게는, 또 다른 최근 보고서 (A. Jaeschke 등, Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. (2005) 102:6931-35)에서는 JNK2 가 인슐린 생성 β세포의 자가면역 파괴에 의해 야기되는 제 1 형 당뇨병에서 중요한 역할을 수행한다고 제시하였다. JNK2 발현이 결핍된 비만이 아닌 당뇨병 마우스는 아마도 Th2 표현형에 대한 편향된 분극 때문에, 감소된 파괴적인 인슐린염 및 당뇨병으로의 더 낮은 질환 진행을 나타냈다. 종합해서, 이러한 연구들는 비만/제 2 형 당뇨병의 치료에서 JNK 억제제의 효용을 증명하였다.

신경변성 질환, 예컨대 알츠하이머병 (AD), 파킨슨병 (PD) 및 뇌졸중은 시냅스 손실, 뉴런 위축 및 사망을 특징으로 한다. c-Jun 활성화를 유도하는 JNK 경로는 단리된 1차 배아 뉴런 및 복합 뉴런 세포 계열의 아포토시스에서 각종 자극 의 유도에 따른 인과적인 역할을 수행한다고 제시되어 있다 (D. Bozyczko-Coyne 등, Curr. Drug Targets CNS Neurol. Disord. (2002) 1:31-49). JNK 의 과잉활성화는 AD 환자로부터 인간 뇌에서 (J. Pei 등, J. Alzheimers Dis. (2001) 3:41-48) 또는 신경변성 질환의 동물 모델로부터 유래한 설치류 뇌 절편 (M. Saporito 등, J. Neurochem. (2000) 75:1200-08)에서 관찰되었다. 예를 들어, 증가된 포스포-JNK 가 AD 환자로부터의 사후(post-mortem) 뇌에서 검출되었다. β-아밀로이드 펩티드 투여에 의해 유도된 AD 의 설치류 모델에서 JNK 억제성 펩티드 (JIP-1 펩티드)의 투여는 시냅스 가소성의 장애를 예방하였다. PD 의 동물 모델 (MPTP 모델)에서, 상승된 포스포-MKK4 및 포스포-JNK 는 뉴런 세포 사멸과 함께 동시에 관찰되었다. JNK 억제성 펩티드 (JIP-1 펩티드)의 마우스의 선조체(striatum)로의 아데노바이러스 유전자 전이는 MPTP-매개 JNK, c-Jun 및 카스파제 활성화를 억제하고, 따라서 흑색질에서 뉴런 세포 사멸을 방지함에 의해 행동 장애를 약화시켰다 (X. Xia 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. (2001) 98:10433-38). 또한, 글루타메이트 흥분독성에 의해 유도된 허혈성 뇌졸중의 동물 모델에서, JNK1 또는 JNK2 가 아닌, JNK3 이 결핍된 마우스는 카인산 (글루타메이트 수용체 아고니스트)-매개 발작 또는 뉴런 사멸에 저항력이 있었다 (D. D.Yang 등, Nature (1997) 389:865-70). 이러한 자료는 JNK3 가 허혈성 상태에서의 중요한 구성 요소인 글루타메이트 흥분독성의 주요한 원인이라고 제안한다. 통합하여, 상기 자료는 JNK 가 뉴런 세포 사멸과 관련된 복합 CNS 질환을 위한 흥미있는 대상이라고 제안한다.

비조절된 혈관형성과 함께 비제어된 세포 성장, 증식 및 이동은 악성 종양의 형성을 야기한다. JNK 신호 전달 경로는 아포토시스에서 배타적으로 작용할 수 없고, AP1 활성화를 유도하는 지속된 JNK 활성화는 최근 특정 암 유형, 예컨대 교종양 및 BCL-ABL 형질전환 B 림프모구의 세포의 생존에 기여하는 것으로 여겨지고 있다 (M. Antonyak 등, Oncogene (2002) 21:5038-46; P. Hess 등, Nat. Genet. (2002) 32:201-05). 교종양의 경우, 증강된 JNK/AP1 활성이 대부분의 1차 뇌 종양 시료에서 관찰되었다. 형질전환 B 림프모구에 있어서, BCL-ABL 은 JNK 경로를 활성화시켜, 항아포토시스 bcl-2 유전자의 발현을 상향조절하는 것으로 나타났다. 흥미롭게는, 난치성 AML 환자에서 나타나는 다중약물 저항 및 과증식은 상기 AML 시료에 존재하는 지속된 JNK 활성과 인과적으로 연결되어 있었다 (L. Cripe 등, Leukemia (2002) 16:799-812). 백혈병 세포에서의 JNK 의 활성화는 다중약물 저항의 원인이 되는 유출 펌프, 예컨대 mdr1 및 MRP1 의 유도 발현을 야기하였다. 또한, 글루타티온-S-전이효소 π 및 γ-글루타밀 시스테인 신타아제를 포함하는, 산화적 스트레스에 반응하여 생존 이익을 갖는 유전자는 또한 활성화된 JNK 경로에 의해 상향조절되었다.

따라서, JNK 조절제는 각종 질환 및/또는 상태를 치료하는데 유용하다.

세포 증식의 조절에서 시클린 의존 키나아제 ("cdks")의 역할은 잘 성립되어있다. 항증식성 치료제로서, Cdk4, Cdk2 및 Cdk1 경로에서 대상을 억제하는 화합물의 사용을 입증하는 광범위한 문헌이 있다. 참조, 예컨대 J. Lukas 등, Nature (1995) 79:573-82; J.R. Nevins, Science (1992) 258:424-29; I.K. Lim 등, Mol Carcinogen (1998) 23:25-35; S.W. Tam 등, Oncogene (1994) 9:2663-74; B. Driscoll 등, Am. J. Physiol. (1997) 273 (Lung Cell. Mol. Physiol.) L941-L949; 및 J. Sang 등, Chin. Sci. Bull. (1999) 44:541-44. 세포 증식의 억제제는 가역 세포증식억제제(cytostatic agent)로서 작용하고, 이는 비정상 세포 성장을 특징으로 하는 질환 과정, 예컨대 암 및 예를 들어, 염증 (예컨대, 양성 전립선 비대증, 가족성 선종증, 폴립증, 신경섬유종증, 죽상동맥경화증, 폐 섬유증, 관절염, 건선, 염증성 장질환, 이식 거부 감염), 바이러스 감염 (비제한적으로, 포진성바이러스, 폭스바이러스, 엡스타인-바(Epstein-Barr)바이러스 포함), 자가면역 질환 (예컨대, 루푸스, 류마티스 관절염, 건선, 염증성 장질환), 신경변성 장애 (비제한적으로, 알츠하이머병 포함), 및 신경변성 질환 (예컨대, 파킨슨병, 루게릭병, 망막 색소변성증, 척수성 근위축증, 및 대뇌 변성)을 포함하는, 기타 세포 증식성 장애의 치료에서 유용하다.

본 발명의 한 측면은 식 I 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하는 것이다:

[식 중,

R 은 저급 알킬, 히드록시 저급 알킬, 또는 하기로부터 선택되는 라디칼이고:

이때, 각각의 R^a 는 독립적으로 H, 저급 알킬, OH, 또는 히드록시-저급 알킬이고;

각각의 R^b 는 독립적으로 H, 저급 알킬, 할로, 니트로, 또는 할로-저급 알킬이고;

p 는 2, 3, 또는 4 이고;

X 는 O, CR⁴R⁵, C(=O), 또는 S(O)_x 이고;

R¹ 은 수소, 할로, 알킬, 또는 NH₂ 이고;

각각의 R³ 은 독립적으로 할로, -NO₂, 저급 알킬, -CN, -OR⁷, -NR⁸R⁹, -C(O)-R⁷, -O-C(O)-R⁷, -CF₃, -CHF₂, -SO₂-R¹⁰, 또는 두 개의 R³ 은 알킬렌 디옥시를 형성하고;

R⁴ 은 수소, 저급 알킬, 시아노, -(CH₂)_nOR⁷, -(CH₂)_nNR⁸R⁹, -(CH₂)_n-C(O)-NR⁸R⁹, -(CH₂)_n-OC(O)-NR⁸R⁹, -(CH₂)_n-C(O)-OR⁷; -NR⁷-SO₂-R¹⁰, -(CH₂)_n-NR⁸-C(O)-R¹¹, 또는 -(CH₂)_n-NR⁸-C(O)-OR⁶ 이고;

R⁵ 는 수소 또는 알킬이고;

또는 R⁴ 및 R⁵ 는 함께 알킬렌 디옥시를 형성하고;

R⁶ 은 수소, 저급 알킬, 헤테로알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴알킬, 또는 -NR⁸R⁹ 이고;

R¹⁰ 은 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴알킬, 또는 -NR⁸R⁹ 이고;

R¹¹ 은 알킬, 시클로알킬, 헤테로알킬, 또는 (헤테로시클릴)알킬이고;

R² 및 R⁷ 은 각각 독립적으로 수소 또는 저급 알킬이고;

R⁸ 은 수소, 저급 알킬, 또는 아실이고;

R⁹ 는 수소, 저급 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클릴, 시클로알킬이고;

또는 R⁸ 및 R⁹ 는 이들이 연결된 질소 원자와 함께, 하나 이상의 질소 환 원자를 포함하고, 임의로 OH, 옥소, 저급 알킬, 저급 알콕시, 또는 아실로 치환된 헤테로시클릴을 형성하고;

각각의 m 및 x 는 독립적으로 0 내지 2 의 정수이고 ;

Y 는 수소, -(CH₂)_n-OR⁷, -(CH₂)_n-C(O)-R⁷ 또는 -(CH₂)_n-C(O)-OR⁷ 이고;

각각의 y 및 z 는 독립적으로 0 또는 1 이고;

n 은 0 내지 4 의 정수임].

본 발명은 또한 약학적 조성물, 상기 언급한 화합물의 사용 방법, 및 제조 방법을 제공한다.

본 발명의 화합물 및 조성물은 c-Jun N-말단 키나아제 매개 장애, 예컨대 자가면역 장애, 염증성 장애, 대사성 장애, 신경학적 질환, 및 암의 치료 및/또는 예방에 유용하다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물 및 조성물은 류마티스 관절염, 천식, 제 II 형 당뇨병, 알츠하이머병, 파킨슨병 및/또는 뇌졸중의 치료 및/또는 예방에 유용하다.

본 발명의 화합물 및 조성물은 일반적으로 비정상 세포 성장을 특징으로 하는 질환 과정인 CDK 매개 장애, 예컨대 암 및 예를 들어, 염증 (예컨대, 양성 전립선 비대증, 가족성 선종증, 폴립증, 신경섬유종증, 죽상동맥경화증, 폐 섬유증, 관절염, 건선, 염증성 장질환, 이식 거부 감염), 바이러스 감염 (비제한적으로, 포진성바이러스, 폭스바이러스, 엡스타인-바 바이러스 포함), 자가면역 질환 (예컨대, 루푸스, 류마티스 관절염, 건선, 염증성 장질환), 신경변성 장애 (비제한적으로, 알츠하이머병 포함), 및 신경변성 질환 (예컨대, 파킨슨병, 루게릭병, 망막 색소변성증, 척수성 근위축증, 및 대뇌 변성)을 포함하는, 기타 세포 증식성 장애의 치료 및/또는 예방에 유용하다.

다른 언급이 없는 한, 명세서 및 청구항을 포함하는, 본 출원에서 사용된 하기 용어는 하기 제시된 정의를 갖는다. 명세서 및 첨부된 청구항에 사용된 바, 단수 형태는 문맥에서 명백하게 다른 언급이 없는 한, 복수 형태를 포함하는 것으로 기술된 것이다.

"알킬" 은 오직 탄소 및 수소 원자로 이루어지고, 탄소수 1 내지 12 인 1가 선형 또는 분지형 포화 탄화수소 잔기를 의미한다. "저급 알킬" 은 탄소수 1 내지 6 의 알킬기, 즉 C₁-C₆ 알킬을 지칭한다. 알킬기의 예로는, 비제한적으로, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸, n-헥실, 옥틸, 도데실이 포함된다. "분지형 알킬" 은 하나 이상의 분지를 갖는 알킬 잔기를 지칭하고, 예를 들어, 이소프로필, 이소부틸, tert-부틸, 등이다. 유사하게는, "저급 알콕시" 는 -OR 형태의 잔기를 지칭하고, "아실" 은 -C(O)R 형태의 잔기를 지칭하며, 이때 R 은 저급 알킬이다.

"알킬렌" 은 탄소수 1 내지 6 의 선형 포화 2가 탄화수소 잔기 또는 탄소수 3 내지 6 의 분지형 포화 2가 탄화수소 라디칼, 예컨대 메틸렌, 에틸렌, 2,2-디메틸에틸렌, 프로필렌, 2-메틸프로필렌, 부틸렌, 펜틸렌을 의미한다.

"알킬렌 디옥시" 는 식 -O-R-O- 의 2가 잔기를 의미하고, 이때 R 은 본원에 정의된 바와 같은 알킬렌이다.

"아릴" 은 모노-, 비- 또는 트리시클릭 방향족 환으로 이루어진, 1가 시클릭 방향족 탄화수소 잔기를 의미한다. 페닐 또는 나프틸이 바람직하다. 상기 아릴기는 본원에 정의된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다. 아릴 잔기의 예로는, 비제한적으로, 이들의 부분적으로 수소화된 유도체를 포함하는, 임의로 치환된 페닐, 나프틸, 페난트릴, 플루오레닐, 인데닐, 펜탈레닐, 아줄레닐, 옥시디페닐, 비페닐, 메틸렌디페닐, 아미노디페닐, 디페닐술피딜, 디페닐술포닐, 디페닐이소프로필리데닐, 벤조디옥사닐, 벤조푸라닐, 벤조디옥실릴, 벤조피라닐, 벤족사지닐, 벤족사지노닐, 벤조피페라디닐, 벤조피페라지닐, 벤조피롤리디닐, 벤조모르폴리닐, 메틸렌디옥시페닐, 에틸렌디옥시페닐이 포함된다.

"시클로알킬" 은 모노- 또는 비시클릭 환으로 이루어진 1가 포화 카르보시클릭 잔기를 의미한다. 시클로알킬은 하나 이상의 치환기로 임의로 치환될 수 있고, 이때 각각의 치환기는 특별히 다른 언급이 없는 한, 독립적으로 히드록시, 알킬, 알콕시, 할로, 할로알킬, 아미노, 모노알킬-아미노, 또는 디알킬아미노이다. 바람직한 시클로알킬은 C_3-7 모노-시클릭 시클로알킬이다. 시클로알킬 잔기의 예로는, 비제한적으로, 이들의 부분적으로 불포화된 유도체를 포함하는, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸이 포함된다.

"시클로알킬알킬" 은 식 -R^a-R^b 의 잔기를 의미하고, 이때 R^a 는 알킬렌이고, R^b 는 본원에 정의된 바와 같은 시클로알킬이다.

"헤테로알킬" 은 분지형 C₄-C₇ 알킬을 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 알킬 잔기를 의미하고, 이때 1, 2 또는 3 개의 수소 원자는 -OR^a, -NR^bR^c, 및 -S(O)_nR^d (이때, n 은 0 내지 2 의 정수임)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 치환기로 대체되며, 헤테로알킬 라디칼의 부착 지점은 탄소 원자 전체에 걸쳐있는 것으로 이해되고, 이때 R^a 는 수소, 아실, 알킬, 시클로알킬, 또는 시클로알킬알킬이고; R^b 및 R^c 는 서로 독립적으로 수소, 아실, 알킬, 시클로알킬, 또는 시클로알킬알킬이고; n 이 0 인 경우, R^d 는 수소, 알킬, 시클로알킬, 또는 시클로알킬알킬이고; n 이 1 인 경우, R^d 는 알킬, 시클로알킬, 또는 시클로알킬알킬이고; n 이 2 인 경우, R^d 는 알킬, 시클로알킬, 시클로알킬알킬, 아미노, 아실아미노, 모노알킬아미노, 또는 디알킬아미노이다. 대표적인 예로는, 비제한적으로, 2-히드록시에틸, 3-히드록시프로필, 2-히드록시-1-히드록시메틸에틸, 2,3-디히드록시프로필, 1-히드록시메틸에틸, 3-히드록시부틸, 2,3-디히드록시부틸, 2-히드록시-1-메틸프로필, 2-아미노에틸, 3-아미노프로필, 2-메틸술포닐에틸, 아미노술포닐-메틸, 아미노술포닐에틸, 아미노술포닐프로필, 메틸아미노술포닐메틸, 메틸아미노술포닐에틸, 메틸아미노술포닐프로필이 포함된다.

"헤테로아릴" 은 N, O, 또는 S 로부터 선택되는 1, 2 또는 3 개의 환 헤테로원자를 함유하고, 나머지 환 원자는 C 인, 하나 이상의 방향족 환을 갖는, 5 내지 12 개의 환 원자의 모노시클릭 또는 비시클릭 잔기를 의미하고, 이때 헤테로아릴 라디칼의 부착 지점은 방향족 환 상에 있을 것으로 이해된다. 상기 헤테로아릴 환은 본원에 정의된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다. 헤테로아릴 잔기의 예로는, 비제한적으로, 이들의 부분적으로 수소화된 유도체를 포함하는, 임의로 치환된 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 피라지닐, 티에닐, 티오페닐, 푸라닐, 피라닐, 피리디닐, 피롤릴, 피라졸릴, 피리미딜, 피리다지닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 벤조푸릴, 벤조푸라닐, 벤조티오페닐, 벤조티오피라닐, 벤즈이미다졸릴, 벤즈옥사졸릴, 벤조옥사디아졸릴, 벤조티아졸릴, 벤조티아디아졸릴, 벤조피라닐, 인돌릴, 이소인돌릴, 인다졸릴, 트리아졸릴, 트리아지닐, 퀴녹살리닐, 푸리닐, 퀴나졸리닐, 퀴놀리지닐, 나프티리디닐, 프테리디닐, 카르바졸릴, 아제피닐, 디아제피닐, 아크리디닐이 포함된다.

용어 "할로", "할로겐", 및 "할라이드" 는 본원에서 교환가능하게 사용되고, 플루오로, 클로로, 브로모, 또는 요오도 치환기를 지칭한다.

"할로알킬" 은 하나 이상의 수소가 동일 또는 상이한 할로겐으로 대체된 본원에 정의된 바와 같은 알킬을 의미한다. 할로알킬의 예로는 -CH₂Cl, -CH₂CF₃, -CH₂CCl₃, 퍼플루오로알킬 (예컨대, -CF₃)이 포함된다.

"헤테로시클릴" 은 1, 2 또는 3 또는 4 개의 헤테로원자 (질소, 산소 또는 황으로부터 선택됨)가 혼입된, 1 내지 3 개의 환으로 이루어진, 1가 포화 잔기를 의미한다. 3 내지 8 개의 환 원자를 가진, 모노시클릭 헤테로시클릴이 바람직하다. 상기 헤테로시클릴 환은 본원에 정의된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다. 헤테로시클릴 잔기의 예로는, 비제한적으로, 임의로 치환된 피페리디닐, 피페라지닐, 호모피페라지닐, 아제피닐, 피롤리디닐, 피라졸리디닐, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 피리디닐, 피리다지닐, 피리미디닐, 옥사졸리디닐, 이속사졸리디닐, 모르폴리닐, 티아졸리디닐, 이소티아졸리디닐, 퀴누클리디닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 벤즈이미다졸릴, 티아디아졸리디닐, 벤조티아졸리디닐, 벤조아졸리디닐, 디히드로푸릴, 테트라히드로푸릴, 디히드로피라닐, 테트라히드로피라닐, 티아모르폴리닐, 티아모르폴리닐술폭시드, 티아모르폴리닐술폰, 디히드로퀴놀리닐, 디히드로이소퀴놀리닐, 테트라히드로퀴놀리닐, 테트라히드로이소퀴놀리닐이 포함된다.

"아릴", "페닐", "헤테로아릴" 또는 "헤테로시클릴" 과 관련되어 사용된 경우, "임의로 치환된" 은 C_1-6 알킬, C_1-6 헤테로알킬, 옥소 (즉, =O), 할로알킬, -(CH₂)_mCOR⁷, -(CH₂)_mSO₂R⁷, C_1-6 알콕시, 할로겐, C_1-6 알킬티오, C_1-6 알킬술포닐, -SO₂NR⁸R⁹, 시아노, 니트로, 및 -NR⁸R⁹ 로부터 선택되는, 하나 이상의 치환기, 바람직하게는 1 내지 4 개, 및 더욱 바람직하게는, 1 내지 3 개의 치환기로 독립적으로 임의로 치환된, 아릴, 페닐, 헤테로아릴 또는 헤테로시클릴을 의미하고, 이때 m, R⁷, R⁸, 및 R⁹ 는 본원에 정의된 바와 같다.

상기 제시된 정의를 갖는 화학적 기를 위한 바람직한 라디칼은 특히 실시예에 예시되어 있다.

"이탈기" 는 통상적으로 합성 유기 화학에서 이와 관련된 의미를 갖는 기, 즉, 치환 반응 조건 하에서 대체가능한 원자 또는 기를 의미한다. 이탈기의 예로는, 비제한적으로, 할로겐, 알칸- 또는 아릴렌술포닐옥시, 예컨대 메탄술포닐옥시, 에탄술포닐옥시, 티오메틸, 벤젠술포닐옥시, 토실옥시, 및 티에닐옥시, 디할로포스피노일옥시, 임의로 치환된 벤질옥시, 이소프로필옥시, 아실옥시가 포함된다.

"임의적" 또는 "임의로" 는 뒤이어 기술되는 사건 또는 상황이 발생할 필요가 없을 수 있는 것을 의미하고, 상기 기술은 사건 또는 상황이 발생하는 경우 및 발생하지 않는 경우를 포함한다.

"질환" 및 "질환 상태" 는 임의의 질환, 상태, 증상, 장애 또는 징후를 의미한다.

"불활성 유기 용매" 또는 "불활성 용매" 는 그와 관련하여 기술된 반응 조건 하에서 불활성인 용매를 의미하고, 예를 들어, 벤젠, 톨루엔, 아세토니트릴, 테트라히드로푸란, N,N-디메틸포름아미드, 클로로포름, 메틸렌 클로라이드 또는 디클로로메탄, 디클로로에탄, 디에틸 에테르, 에틸 아세테이트, 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, tert-부탄올, 디옥산, 피리딘이 포함된다. 반대의 언급이 없는 한, 본 발명의 반응에서 사용된 용매는 불활성 용매이다.

"약학적으로 허용가능한" 은 일반적으로 안전하고, 무독성이며, 생물학적으로 및 다른 방식으로도 비바람직하지 않은, 약학적 조성물을 제조하는데 유용한 것을 의미하며, 수의학적 및 인간의 약학적 사용을 위해 허용가능한 것을 포함한다.

화합물의 "약학적으로 허용가능한 염" 은 본원에 정의된 바와 같이, 약학적으로 허용가능하고, 모(parent) 화합물의 목적하는 약리학적 활성을 가지는 염을 의미한다. 상기와 같은 염에는 하기가 포함된다:

무기산, 예컨대 염산, 브롬산, 황산, 질산, 인산; 또는 유기산, 예컨대 아세트산, 벤젠술폰산, 벤조산, 캠퍼술폰산, 시트르산, 에탄술폰산, 푸마르산, 글루코헵톤산, 글루콘산, 글루탐산, 글리콜산, 히드록시나프토산, 2-히드록시에탄술폰산, 락트산, 말레산, 말산, 말론산, 만델산, 메탄술폰산, 뮤콘산, 2-나프탈렌술폰산, 프로피온산, 살리실산, 숙신산, 타르타르산, p-톨루엔술폰산, 트리메틸아세트산과 함께 형성되는 산 부가염; 또는 모 화합물에 존재하는 산성 양성자가 금속 이온, 예컨대, 알칼리 금속 이온, 알칼리 토금속 이온, 또는 알루미늄 이온으로 대체되거나; 또는 유기 또는 무기 염기와 배위결합되는 경우 형성되는 염. 허용가능한 유기 염기에는 디에탄올아민, 에탄올아민, N-메틸글루카민, 트리에탄올아민, 트로메타민이 포함된다. 허용가능한 무기 염기에는 수산화알루미늄, 수산화칼슘, 수산화칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨이 포함된다. 바람직한 약학적으로 허용가능한 염은 아세트산, 염산, 황산, 메탄술폰산, 말레산, 인산, 타르타르산, 시트르산, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 아연, 및 마그네슘으로부터 형성되는 염이다.

"보호기" 또는 "보호하는 기" 는 통상적으로 합성 화학에서 이와 관련된 의미에서, 화학 반응이 또 다른 비보호된 반응 부위에서 선택적으로 수행될 수 있는, 다관능 화합물에서의 한 반응 부위를 선택적으로 차단하는 기를 의미한다. 본 발명의 특정 과정들은 반응물에 존재하는 반응성 질소 및/또는 산소 원자를 차단하는 보호기에 의존한다. 예를 들어, 용어 "아미노 보호기" 및 "질소 보호기" 는 본원에서 교환가능하게 사용되고, 합성 절차 중 바람직하지 않은 반응에 대하여 질소 원자를 보호하도록 의도된 유기기를 지칭한다. 질소 보호기의 예로는, 비제한적으로, 트리플루오로아세틸, 아세트아미도, 벤질 (Bn), 벤질옥시카르보닐 (카르보벤질옥시, CBZ), p-메톡시벤질옥시카르보닐, p-니트로벤질옥시카르보닐, tert-부톡시카르보닐 (BOC)이 포함된다. 숙련된 자는 용이한 제거 및 뒤이은 반응을 견딜 수 있는 능력을 위해 기를 선택하는 방법을 숙지하고 있을 것이다.

"대상체" 는 포유동물 및 비포유동물을 의미한다. 포유동물은 포유동물 강(class)의 임의의 구성원을 의미하고, 비제한적으로, 인간; 비인간 영장류, 예컨대 침팬지 및 기타 유인원 및 원숭이 종; 사육 동물, 예컨대 소, 말, 양, 염소, 및 돼지; 가축, 예컨대 토끼, 개, 및 고양이; 설치류를 포함하는 실험용 동물, 예컨대 래트, 마우스, 및 기니어 피그가 포함된다. 비포유동물의 예로는, 비제한적으로, 조류가 포함된다. 용어 "대상체" 는 특정 연령 또는 성별을 의미하지 않는다.

"치료적 유효량" 은 질환 상태를 치료하기 위해 대상체에 투여할 때, 상기 질환 상태를 위한 상기와 같은 치료가 효과를 나타내기에 충분한 화합물의 양을 의미한다. "치료적 유효량" 은 화합물, 치료될 질환 상태, 치료되는 질환의 중증도, 대상체의 연령 및 상대적인 건강, 투여의 경로 및 형태, 의학 또는 수의학 주치의의 판단, 및 기타 인자에 따라 달라질 것이다.

가변적인 것에 관련된 경우, 용어 "상기 정의된 바" 및 "본원에 정의된 바" 는, 존재한다면, 바람직한, 더욱 바람직한 및 가장 바람직한 정의와 더불어 가변적인 것의 폭넓은 정의를 참조로 포함한다.

질환 상태의 "치료하는 것" 또는 "치료" 에는 하기가 포함된다:

(i) 질환 상태를 예방하는 것, 즉 질환 상태에 노출 또는 걸리기 쉬울 수 있으나, 아직 상기 질환 상태의 증상을 나타내거나 경험하지 않은 대상체에 있어서, 질환 상태의 임상적 증상이 발전되지 않도록 유도하는 것.

(ii) 질환 상태를 억제하는 것, 즉, 질환 상태 또는 이의 임상적 증상의 발전을 저지하는 것, 또는

(iii) 질환 상태를 경감시키는 것, 즉, 질환 상태 또는 이의 임상적 증상의 일시적 또는 영구적 퇴보를 유도하는 것.

화학적 반응에 관련되는 경우, 용어 "처리하는 것", "접촉시키는 것" 및 "반응하는 것" 은 2 가지 이상의 시약을 적합한 조건 하에서 첨가 또는 혼합하여, 지시된 및/또는 목적하는 생성물을 생성하는 것을 의미한다. 지시된 및/또는 목적하는 생성물을 생성하는 반응이 반드시 초기에 첨가되었던 2 가지 시약의 조합으로부터 직접적으로 수득되지 않을 수 있으며, 즉, 지시된 및/또는 목적하는 생성물의 형성을 궁극적으로 유도하는, 혼합물 중에서 생성되는 하나 이상의 중간체가 존재할 수 있다는 것을 이해하여야 한다.

일반적으로, 본 출원에서 사용된 명명은 IUPAC 체계명의 생성을 위한 Beilstein Institute 컴퓨터화 시스템인 AUTONOM^TM v.4.0 에 기초한 것이다. 본원에서 나타낸 화학 구조는 ISIS^®2.2 버전을 사용하여 작성되었다. 본원의 구조에서 탄소, 산소 또는 질소 원자 상에 나타난 임의의 열린(open) 원자가는 수소 원자의 존재를 의미한다.

화학 구조에 카이랄 탄소가 존재하는 경우, 카이랄 탄소와 관련된 모든 입체이성질체가 상기 구조에 의해 포함되는 것으로 의도된다.

본원에서 명시된 모든 특허 및 출판물은 그들의 전체가 본원에 참조 병합된다.

본 발명의 한 측면은 식 I 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하는 것이다:

[식 중,

R 은 저급 알킬, 히드록시 저급 알킬, 또는 하기로부터 선택되는 라디칼이고:

이때, 각각의 R^a 는 독립적으로 H, 저급 알킬, OH, 또는 히드록시-저급 알킬이고;

각각의 R^b 는 독립적으로 H, 저급 알킬, 할로, 니트로, 또는 할로-저급 알킬이고;

p 는 2, 3, 또는 4 이고;

X 는 O, CR⁴R⁵, C(=O), 또는 S(O)_x 이고;

R¹ 은 수소, 할로, 알킬, 또는 NH₂ 이고;

각각의 R³ 은 독립적으로 할로, -NO₂, 저급 알킬, -CN, -OR⁷, -NR⁸R⁹, -C(O)-R⁷, -O-C(O)-R⁷, -CF₃, -CHF₂, -SO₂-R¹⁰, 또는 두 개의 R³ 은 알킬렌 디옥시를 형성하고;

R⁴ 은 수소, 저급 알킬, 시아노, -(CH₂)_nOR⁷, -(CH₂)_nNR⁸R⁹, -(CH₂)_n-C(O)-NR⁸R⁹, -(CH₂)_n-OC(O)-NR⁸R⁹, -(CH₂)_n-C(O)-OR⁷; -NR⁷-SO₂-R¹⁰, -(CH₂)_n-NR⁸-C(O)-R¹¹, 또는 -(CH₂)_n-NR⁸-C(O)-OR⁶ 이고;

R⁵ 는 수소 또는 알킬이고;

또는 R⁴ 및 R⁵ 는 함께 알킬렌 디옥시를 형성하고;

R⁶ 은 수소, 저급 알킬, 헤테로알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴알킬, 또는 -NR⁸R⁹ 이고;

R¹⁰ 은 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴알킬, 또는 -NR⁸R⁹ 이고;

R¹¹ 은 알킬, 시클로알킬, 헤테로알킬, 또는 (헤테로시클릴)알킬이고;

R² 및 R⁷ 은 각각 독립적으로 수소 또는 저급 알킬이고;

R⁸ 은 수소, 저급 알킬, 또는 아실이고;

R⁹ 는 수소, 저급 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클릴, 시클로알킬이고;

또는 R⁸ 및 R⁹ 는 이들이 연결된 질소 원자와 함께, 하나 이상의 질소 환 원자를 포함하고, 임의로 OH, 옥소, 저급 알킬, 저급 알콕시, 또는 아실로 치환된 헤테로시클릴을 형성하고;

각각의 m 및 x 는 독립적으로 0 내지 2 의 정수이고 ;

Y 는 수소, -(CH₂)_n-OR⁷, -(CH₂)_n-C(O)-R⁷ 또는 -(CH₂)_n-C(O)-OR⁷ 이고

각각의 y 및 z 는 독립적으로 0 또는 1 이고;

n 은 0 내지 4 의 정수임].

일부 구현예에서, R² 는 수소 또는 메틸이다.

다른 구현예에서, R 은

이고, 이때 z 은 1 이고, X 는 O 또는 CR⁴R⁵ 이다.

일부 구현예에서, R⁴ 는 OH, -C(O)NR⁸R⁹, -NR⁸R⁹, -NR⁷SO₂R¹⁰, 또는 -OR⁷ 이다.

또 다른 구현예에서, m 은 0 이다.

또 다른 구현예에서, R¹ 은 수소, 메틸, 클로로, 또는 플루오로이다.

한 구현예에서, X 는 CR⁴R⁵ 이고, 이때 R⁴ 및 R⁵ 는 본원에서 정의된 바와 같다.

다른 구현예에서, R⁵ 는 수소 또는 메틸이다.

또 다른 일부 구현예에서, z 는 1 이다.

또 다른 구현예에서, R⁴ 는 -NR⁷-SO₂-R¹⁰ 이고, 이때 R⁷, 및 R¹⁰ 은 본원에서 정의된 바와 같다.

다른 구현예에서, x 는 2 이고, R⁷ 은 수소 또는 메틸이고, R¹⁰ 은 메틸, 에틸, 또는 -N(CH₃)₂ 이다.

또 다른 구현예에서, z 는 1 이고, R⁴ 는 수소, 저급 알킬, 시아노, -(CH₂)_nOR⁷, 또는 -(CH₂)_nNR⁸R⁹ 이고, 또는 R⁴ 및 R⁵ 는 함께 알킬렌 디옥시를 형성하고, 이때 n, R⁷, R⁸, 및 R⁹ 는 본원에서 정의된 바와 같다.

또 다른 구현예에서, R⁴ 는 -(CH₂)_nOR⁷ 이고, n 은 0 또는 1 이고, R⁷ 은 수소 또는 메틸이다.

또 다른 구현예에서, R⁴ 는 -(CH₂)_nNR⁸R⁹ 이고, 이때 n, R⁸, 및 R⁹ 는 본원에서 정의된 바와 같다. 상기 구현예 중에서, 어떤 경우에, n 은 0 이고, R⁸ 은 수소이고, R⁹ 는 수소, 피리미딘-2-일, 또는 피리딘-2-일이다. 상기 구현예 중에서 또 다른 경우에, n 은 0 이고, R⁸ 및 R⁹ 는 이들이 연결된 질소 원자와 함께 2,5-디옥소-피롤리딘-1-일을 형성한다.

또 다른 구현예에서, R⁴ 는 수소, 메틸, 에틸, 또는 시아노이다.

다른 구현예에서, R⁴ 및 R⁵ 는 함께 에틸렌 디옥시를 형성한다.

또 다른 구현예에서, 식 I 의 화합물은 z 은 1 이고, R⁴ 는 -(CH₂)_n-NR⁸-C(O)-R¹¹ 인 것을 포함하고, 이때 n, R⁸, 및 R¹¹ 은 본원에서 정의된 바와 같다. 상기 구현예 중에서, 일부 경우에, n 은 0 이고, R⁸ 은 수소 또는 메틸이고, R¹¹ 은 메틸, 에틸, 메톡시메틸, 히드록시메틸, (모르폴린-4-일)메틸, 또는 (4-메틸-피페라진-1-일)메틸이다.

또 다른 구현예에서, z 는 1 이고, R⁴ 는 -(CH₂)_n-C(O)-NR⁸R⁹ 이고, 이때 n, R⁸, 및 R⁹ 는 본원에서 정의된 바와 같다. 상기 구현예 중에서, 일부 경우에, n 은 0 이고, R⁸ 및 R⁹ 는 이들이 연결된 질소 원자와 함께 모르폴린-4-일, 피롤리딘-1-일, 또는 4-메틸-피페라진-1-일을 형성한다. 또 다른 경우에, n 은 0 이고, R⁸ 은 수소 또는 메틸이고, R⁹ 는 (2-아미노-2-메틸)프로필, (2-히드록시)에틸, 테트라히드로피란-4-일, 시클로프로필, 또는 에틸이다.

다른 구현예에서, z 는 1 이고, R⁴ 는 -(CH₂)_n-C(O)-OR⁷ 이고, 이때 n 및 R⁷ 은 본원에서 정의된 바와 같다. 상기 구현예 중에서, 일부 경우에, n 은 0 이고, R⁷ 은 수소 또는 메틸이다.

또 다른 구현예에서, R⁴ 및 R⁵ 는 수소이고, z 는 0 이고, y 는 1 이고, Y 는 시클로펜틸 환 잔기의 3-위치 상의 히드록시이다.

또 다른 구현예에서, R⁴ 및 R⁵ 는 수소이고, z 는 1 이고, y 는 1 이고, Y 는 시클로헥실 환 잔기의 2-위치 상의 히드록시, 히드록시메틸, 또는 -CO₂CH₂CH₃ 기이다.

식 I 의 화합물의 일부 구현예에서, z 는 1 이고, X 는 O, C(=O), 또는 S(O)₂ 이다.

식 I 의 화합물의 다른 구현예에서, X 는 NR⁶ 이고, 이때 R⁶ 은 청구항 제 1 항에 정의된 바와 같다. 상기 구현예 중에서, 일부 경우에, R⁶ 은 수소, -S(O)₂CH₃, 또는 -CH₂C(O)NH₂ 이다.

본원에서 기술된 상이한 기들의 조합은 다른 구현예들을 형성할 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 이와 같이, 각종 상이한 화합물들이 본 발명에서 구현된다. 예를 들어, 한 구현예에서, X 는 CR⁴R⁵ 이고, 이때 R⁴ 및 R⁵ 는 본원에서 정의된 바와 같다. 상기 구현예 중에서, 일부 경우에, R⁵ 는 수소 또는 메틸이다. 상기 구현예 중에서 또 다른 경우에, z 는 1 이고, R⁴ 는 -NR⁷-SO₂-R¹⁰ 이고, 이때 R⁷ 및 R¹⁰ 은 본원에서 정의된 바와 같다. 상기 경우 중에서, 일부 경우에, R⁷ 은 수소 또는 메틸이고, R¹⁰ 은 메틸, 에틸, 또는 -N(CH₃)₂ 이다. 상기 구현예 중에서 또 다른 경우에, z 는 1 이고, R⁴ 는 수소, 저급 알킬, 시아노, -(CH₂)_nOR⁷, 또는 -(CH₂)_nNR⁸R⁹ 이고, 또는 R⁴ 및 R⁵ 는 함께 알킬렌 디옥시를 형성하고, 이때 n, R⁷, R⁸, 및 R⁹ 는 본원에서 정의된 바와 같다. 상기 경우 중에서, 일부 경우에, R⁴ 는 -(CH₂)_nOR⁷ 이고, n 은 0 또는 1 이고, R⁷ 은 수소 또는 메틸이다. 상기 경우 중에서 다른 경우에, R⁴ 는 -(CH₂)_nNR⁸R⁹ 이고, 이때 n, R⁸, 및 R⁹ 는 본원에서 정의된 바와 같다. 상기 경우 중에서, 일부의 특정 화합물은 n 은 0 이고, R⁸ 은 수소이고, R⁹ 는 수소, 피리미딘-2-일, 또는 피리딘-2-일인 것을 포함한다. 상기 경우 중에서, 다른 특정 화합물은 n 은 0 이고, R⁸ 및 R⁹ 는 이들이 연결된 질소 원자와 함께 2,5-디옥소-피롤리딘-1-일을 형성하는 것을 포함한다. 또 다른 경우에, R⁴ 는 수소, 메틸, 에틸, 또는 시아노이다. 상기 구현예 중에서 일부 경우에, R⁴ 및 R⁵ 는 함께 에틸렌 디옥시를 형성한다.

또 다른 구현예에서, 식 I 의 화합물은 z 는 1 이고, R⁴ 는 -(CH₂)_n-NR⁸-C(O)-R¹¹ 인 것을 포함하고, 이때 n, R⁸, 및 R¹¹ 은 본원에서 정의된 바와 같다. 상기 구현예 중에서, 일부 경우에 n 은 0 이고, R⁸ 은 수소 또는 메틸이고, R¹¹ 은 메틸, 에틸, 메톡시메틸, 히드록시메틸, (모르폴린-4-일)메틸, 또는 (4-메틸-피페라진-1-일)메틸이다.

또 다른 구현예에서, z 는 1 이고, R⁴ 는 -(CH₂)_n-C(O)-NR⁸R⁹ 이고, 이때 n, R⁸, 및 R⁹ 는 본원에서 정의된 바와 같다. 상기 구현예 중에서, 일부 경우에, n 은 0 이고, R⁸ 및 R⁹ 는 이들이 연결된 질소 원자와 함께 모르폴린-4-일, 피롤리딘-1-일, 또는 4-메틸-피페라진-1-일을 형성한다. 또 다른 경우에, n 은 0 이고, R⁸ 은 수소 또는 메틸이고, R⁹ 는 (2-아미노-2-메틸)프로필, (2-히드록시)에틸, 테트라히드로피란-4-일, 시클로프로필, 또는 에틸이다.

다른 구현예에서, z 는 1 이고, R⁴ 는 -(CH₂)_n-C(O)-OR⁷ 이고, 이때 n 및 R⁷ 은 본원에서 정의된 바와 같다. 상기 구현예 중에서, 일부 경우에, n 은 0 이고, R⁷ 은 수소 또는 메틸이다.

또 다른 구현예에서, R⁴ 및 R⁵ 는 수소이고, z 는 0 이고, y 는 1 이고, Y 는 시클로펜틸 환 잔기의 3-위치 상의 히드록시이다.

또 다른 구현예에서, R⁴ 및 R⁵ 는 수소이고, z 는 1 이고, y 는 1 이고, Y 는 시클로헥실 환 잔기의 2-위치 상의 히드록시, 히드록시메틸, 또는 -CO₂CH₂CH₃ 기이다.

식 I 의 화합물의 일부 구현예에서, z 는 1 이고, X 는 O, C(=O), 또는 S(O)₂ 이다.

식 I 의 화합물의 다른 구현예에서, X 는 NR⁶ 이고, 이때 R⁶ 은 청구항 제 1 항에 정의된 바와 같다. 상기 구현예 중에서, 일부 경우에, R⁶ 은 수소, -S(O)₂CH_3, 또는 -CH₂C(O)NH₂ 이다.

또 다른 구현예에서, 식 I 의 화합물은 식 IA 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이다:

[식 중, X, R¹, R², R³ , X, Y, m, y, 및 z 는 본원에서 정의된 바와 같음].

본 발명의 대표적인 화합물은 하기 표 1 에 제시하였다.

합성

본 발명의 화합물은 하기 실시예 단락에 제시된 실례에서 서술된 각종 방법에 의해 제조될 수 있다. 상기 화합물의 제조에 사용되는 출발 물질 및 시약은 일반적으로 판매업체, 예컨대 Aldrich Chemical Co. 로부터 입수가능하거나, 또는 참고문헌, 예컨대 [Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis; Wiley & Sons: New York, 1991, Volumes 1-15; Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, Elsevier Science Publishers, 1989, Volumes 1-5 및 부록; 및 Organic Reactions, Wiley & Sons: New York, 1991, Volumes 1-40]에 제시된 절차에 따라 당업계의 숙련된 자에게 공지된 방법에 의해 제조된다. 하기 합성 반응식들은 단지 본 발명의 화합물이 합성될 수 있는 일부 방법들의 예시이고, 이러한 합성 반응식에 대해서는 각종 변형이 성립될 수 있으며, 이는 본 출원에 포함된 개시내용을 참조하는 당업계의 숙련된 자에게 제안될 것이다.

합성 반응식의 출발 물질 및 중간체는 요구되는 경우, 비제한적으로, 여과, 증류, 결정화, 크로마토그래피, 등을 포함하는, 통상적인 기술을 사용하여 단리 및 정제될 수 있다. 상기와 같은 물질들은 물리 상수 및 스펙트럼 데이타를 포함하는, 통상적인 방법을 사용하여 특성이 파악될 수 있다.

다르게 언급되지 않는 한, 본원에서 기술된 반응은 바람직하게는 불활성 대기 하에서, 대기압에서, 약 -78℃ 내지 약 230℃ 의 반응 온도 범위에서, 및 가장 바람직하게 및 용이하게는 실온 (또는 주위 온도), 예컨대, 약 20℃ 에서 수행된다.

반응식 I 에서, R₁, R 및 R₃ 및 z 는 상기 정의된 바와 같고, Y 는 Cl 또는 SMe 이고, z 는 MeSO₂ 또는 Cl 이다. 단계 A 에서, 치환된 4-클로로피리미딘을 염기, 예컨대 수소화나트륨 존재 하에서 및 극성 비양성자성 용매, 예컨대 N,N-디메틸포름아미드 중에서, 0℃ 내지 약 RT 온도 범위에서, 다양하게 치환된 1H-벤조트리아졸과 S_NAr 반응을 시킨다.

단계 B 에서, 티오메틸기 Y 를 비양성자성 용매, 예컨대 클로로포름 중에서, 3-클로로퍼옥시벤조산으로 산화에 의해 또는 N-클로로숙신이미드로 염소화에 의해 이탈기로 전환시킨다.

단계 C 에서, 이탈기 Y 또는 Z (Cl 또는 MeSO₂)를 약 100℃ 내지 약 130℃ 온도 범위에서, 극성 비양성자성 용매, 예컨대 1-메틸-2-피롤리디논 중에서, 혼합물의 가열에 의해, 열적으로 또는 RT 내지 60℃ 온도 범위에서, 극성 비양성자성 용매, 예컨대 테트라히드로푸란 중에서, 염기, 예컨대 트리에틸아민으로 처리에 의해 1차 아민 a 로 대체한다. 아민 a 는, 예를 들어: 시클로알킬아민, 예컨대 다양하게 치환된 시클로헥실아민 및 시클로펜틸아민; 알킬 아민, 예컨대 이소부틸아민; 히드록시알킬아민, 예컨대 4-아미노-1-부탄올; 헤테로시클릭 아민, 예컨대 4-아미노테트라히드로피란, 4-아미노-1-BOC-피페리딘을 포함할 수 있다. 수많은 다양하게 치환된 알킬, 시클로알킬 및 헤테로시클릭 아민 a 는 시판되거나 당업계의 숙련된 자에게 널리 공지된 기술에 의해 손쉽게 제조된다.

그 후, 상기 생성물을 예를 들어, 추출, 결정화, 제조용 HPLC, 플래시 크로마토그래피, 박층 크로마토그래피, 등에 의해 정제할 수 있다.

일반식 (iv)의 화합물을 반응식 II 에 나타낸 바와 같이 변환시켜 본 발명의 목적 화합물을 수득할 수 있다.

반응식 II 에서, R₃, R₁₁, R₈ 및 R₉ 는 상기 정의된 바와 같다. R_a 는 COR₁₁, CH₂CONR₈R₉, SO₂R₁₁, 또는 SO₂NR₈R₉ 이다. R_b 는 알킬, 헤테로알킬, (헤테로시클릭)알킬이다. R_c 및 R_d 는 독립적으로 H, 알킬, 시클로알킬, 알콕시알킬, 히드록시알킬, 또는 헤테로시클릭이다. R_e 및 R_f 는 독립적으로 H, 알킬, 시클로알킬 또는 헤테로시클릭이다. Z 는 헤테로시클릭이다. R_g 는 COR¹¹, SO₂R¹¹ 또는 SO₂NR⁵R⁸ 이다. R_h 는 알킬 또는 아릴이다.

단계 F: b 또는 c , NMP, 가열 또는 d , NMP, MW 또는 NaBH₄, e , MeOH.

단계 G: NaH, f , NMP.

단계 H: NaOH, THF.

단계 I: g , BOP, DIPEA, THF.

단계 J: LAH, THF.

단계 N: 1. IBX, DMSO; 2. h , NaBH(OAc)₃, AcOH, DCE.

단계 K: PPh₃, DIAD, i , PhMe.

단계 L: j , N₂H₄, EtOH, 가열.

단계 M: 1. HCl, THF; 2. k , THF.

R^X 가 NH₂ 인 경우, 일반식 (iv)의 화합물을 약 RT 내지 70℃ 온도 범위에서, 극성 비양성자성 용매, 예컨대 1-메틸-2-피롤리디논 중에서, 예를 들어, 아실화제 b , 예컨대 아세트산 무수물을 사용하여, 단계 F 에서 기술된 바와 같은, 아실화 또는 술포닐화 반응을 시킬 수 있고; 동일한 조건 하에서, (iv)는 술포닐화제 c 로서, 예를 들어, 메탄술폰산 무수물을 사용하여 술포닐화할 수 있다. 대안적으로는, (iv)를 고온에서, 극성 비양성자성 용매, 예컨대 1-메틸-2-피롤리디논 중에서, 마이크로파 조건 하에서, 헤테로아릴할라이드 d , 예를 들어, 2-플루오로-피리딘을 사용하여, 아릴화 반응을 시킬 수 있다.

상기 아실화 및 술포닐화제 b 및 c 는 예를 들어 알킬 무수물, 시클릭 무수물, 아실 및 벤조일 클로라이드, 알킬술포닐 무수물 및 알킬술포닐 및 벤조일 술포닐 클로라이드를 포함할 수 있다.

일반식 (v)의 생성물을 수득하기 위한 대안적인 방법은 극성 양성자성 용매, 예컨대 메탄올 중에서, 예를 들어 나트륨 보로히드라이드 및 알데히드 e , 예컨대 포름알데히드를 사용하여, 환원 아미노화 반응시키고, 그 다음 상기 생성물을 상기 기술된 바와 같은 동일한 조건을 사용하여 아실화 또는 술포닐화할 수 있다. 수많은 알킬, 시클로알킬 및 아릴 알데히드 e 는 시판되거나 당업계의 숙련된 자에게 널리 공지된 기술에 의해 손쉽게 제조된다.

단계 G 에서, 일반식 (v)의 아민, 아미드 또는 술폰아미드를 극성 비양성자성 용매, 예컨대 1-메틸-2-피롤리디논 중에서, 염기, 예컨대 수소화나트륨 및 알킬화제 f , 예컨대 메틸 요오다이드를 사용하여 알킬화한다. 상기 알킬화제 f 는 알킬 할라이드, 헤테로알킬 및 (헤테로시클릭)알킬 할라이드를 포함할 수 있다.

R_X 가 COOMe 또는 COOEt 인 경우, 식 (iv)의 에스테르를 단계 H 에 기술된 바와 같이, 극성 비양성자성 용매, 예컨대 테트라히드로푸란 중에서, 무기 염기, 예컨대 수산화나트륨의 수용액을 사용하여 해당 카르복실산으로 가수분해할 수 있다. 그 다음, 카르복실산 (vi)를 단계 I 에 기술된 바와 같이, 극성 비양성자성 용매, 예컨대 테트라히드로푸란 중에서, 커플링화제, 예컨대 BOP 및 염기, 예컨대 디이소프로필에틸아민 존재 하에서, 1차 또는 2차 아민 g 로 커플링시켜, 일반식 (vii)의 아미드를 수득할 수 있다. 아민 g 는 예를 들어 알킬아민, 알콕시알킬아민, 히드록시알킬아민, 시클로알킬아민 및 헤테로시클릭 아민을 포함할 수 있다.

R_X 가 COOEt 또는 COOMe 인 경우, 식 (iv)의 에스테르를 단계 J 에 기술된 바와 같이, 약 -78℃ 내지 약 RT 온도 범위에서, 극성 비양성자성 용매, 예컨대 THF 중에서, 리튬 알루미늄 히드라이드로 처리하여 해당 알콜로 환원시킬 수 있다. 일반식 (ix)의 알콜을 극성 비양성자성 용매, 예컨대 DMSO 중에서, 산화제, 예컨대 o-요오독시벤조산으로 처리하여 해당 알데히드로 산화시킬 수 있다. 그 다음, 상기 방법으로 수득한 알데히드를 비극성 용매, 예컨대 1,2-디클로로에탄 중에서, 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드 및 빙초산의 존재 하에서, 1차 또는 2차 아민 h , 예컨대 모르폴린으로 환원 아미노화 반응시킬 수 있다 (단계 N). 아민 h 는 예를 들어 알킬아민, 시클로알킬아민 및 헤테로시클릭 아민을 포함할 수 있다. 대안적으로는, 알콜 (ix)를 단계 K 에 기술된 바와 같이, 비극성 비양성자성 용매, 예컨대 톨루엔 중에서, 트리페닐포스핀 및 DIAD 존재 하에서, 이미드 i , 예컨대 프탈리미드와 Mitsunobu 반응을 시킬 수 있다. 이민 i 는 시클릭 및 헤테로시클릭 이민을 포함할 수 있다. Z 가 프탈리미드인 경우, 일반식 (viii)의 화합물을 고온에서, 극성 양성자성 용매, 예컨대 에탄올 중에서, 히드라진으로 처리하여, 해당 1차 아민을 수득하고, 이를 단계 L 에 기술된 바와 같이, 염기, 예컨대 트리에틸아민 존재 하에서, 아실화 또는 술포닐화제, 예컨대 아세틸 클로라이드로 처리하여 아실화 또는 술포닐화할 수 있다. 아실화 및 술포닐화제에는 아실 및 아릴 클로라이드, 술포닐 및 벤젠술포닐 클로라이드가 포함될 수 있고, 이는 시판되거나 또는 당업계의 통상의 기술자에게 공지된 기술을 통해 손쉽게 제조된다.

R_X 가 O(CH₂)₂O 인 경우, 케탈 (iv)을 고온에서, 극성 비양성자성 용매, 예컨대 테트라히드로푸란 중에서, HCl 의 수용액으로 처리하여 해당 케톤으로 전환시킬 수 있고; 이와 같이 수득한 케톤을 단계 M 에 기술된 바와 같이, 저온에서, 극성 비양성자성 용매, 예컨대 테트라히드로푸란 중에서, Grignard 반응물 k 와 함께 첨가 반응시켜, 해당 3차 알콜을 수득할 수 있다. 수많은 알킬-, 시클로알킬- 및 아릴- Grignard 반응물 k 는 시판되거나 당업계의 통상의 기술자에세 공지된 기술에 의해 손쉽게 제조된다.

그 후, 상기 생성물을, 예컨대, 추출, 결정화, 제조용 HPLC, 플래시 크로마토그래피, 박층 크로마토그래피 등에 의해 정제할 수 있다.

이용

본 발명의 화합물은 CDK 및 JNK 조절제이고, 이와 같은 것들은 광범위한 CDK 및 JNK 매개 장애의 치료에 유효한 것으로 예상된다. JNK 매개 장애의 예로는, 비제한적으로, 자가면역 장애, 염증성 장애, 대사성 장애, 신경학적 질환, 및 암이 포함된다. 따라서, 본 발명의 화합물은 하나 이상의 이와 같은 장애를 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 JNK 매개 장애, 예컨대 류마티스 관절염, 천식, 제 II 형 당뇨병, 알츠하이머병, 파킨슨병 또는 뇌졸중을 치료하는데 사용될 수 있다. CDK 매개 장애의 예로는, 비제한적으로, 염증 (예컨대, 양성 전립선 비대증, 가족성 선종증, 폴립증, 신경섬유종증, 죽상동맥경화증, 폐 섬유증, 관절염, 건선, 염증성 장질환, 이식 거부 감염), 바이러스 감염 (비제한적으로, 포진성바이러스, 폭스바이러스, 엡스타인-바 바이러스 포함), 자가면역 질환 (예컨대, 루푸스, 류마티스 관절염, 건선, 염증성 장질환), 신경변성 장애 (비제한적으로, 알츠하이머병 포함), 및 신경변성 질환 (예컨대, 파킨슨병, 루게릭병, 망막 색소변성증, 척수성 근위축증, 및 대뇌 변성)이 포함된다.

투여 및 약학적 조성물

본 발명에는 본 발명의 하나 이상의 화합물, 또는 그의 각 이성질체, 이성질체의 라세미형 또는 비라세미형 혼합물 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물과 함께, 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 및 임의로 기타 치료 및/또는 예방 성분들을 포함하는 약학적 조성물이 포함된다.

일반적으로, 본 발명의 화합물은 유사한 효용을 제공하는 제제에 대한 임의의 허용된 투여 방식에 의해 치료적 유효량으로 투여될 수 있다. 적당한 투여량 범위는 수많은 인자, 예컨대 치료될 질환의 중증도, 대상체의 연령 및 상대적인 건강, 사용되는 화합물의 효능, 투여의 경로 및 형태, 투여의 표적이 되는 징후, 및 담당 의사의 선택 및 경험에 따라, 통상적으로 1 일 1-500 mg, 바람직하게는 1 일 1-100 mg, 및 가장 바람직하게는 1 일 1-30 mg 이다. 이와 같은 질환을 치료하는 당업계의 통상의 기술자는, 과도한 실험 없이 및 개인적 지식 및 본 출원의 개시내용에 따라, 제시된 질환에 대한 본 발명의 화합물의 치료적 유효량을 결정할 수 있을 것이다.

본 발명의 화합물은 경구 (구강 및 설하 포함), 직장, 비강, 국소, 폐, 질, 또는 비경구 (근육 내, 동맥 내, 경막 내, 피하 및 정맥 내 포함) 투여에 적당한 것을 포함하는 약학적 제형물로서 또는 흡입 또는 통기에 의한 투여에 적당한 형태로 투여될 수 있다. 투여의 바람직한 방식은 일반적으로 경구로서, 고통의 정도에 따라 조정될 수 있는 용이한 1 일 투여량 계획을 사용하는 것이다.

본 발명의 화합물 또는 화합물들은, 하나 이상의 통상적인 보조제, 담체, 또는 희석제와 함께, 약학적 조성물 및 단위 투여량 형태를 취할 수 있다. 약학적 조성물 및 단위 투여량 형태는 부가적인 활성 화합물 또는 성분을 사용하거나 사용하지 않고, 통상적인 비율로의 통상적인 성분들로 이루어질 수 있고, 상기 단위 투여량 형태는 사용하고자 하는 1 일 투여량 범위에 상응하는 임의의 적당한 유효량의 활성 성분을 함유할 수 있다. 약학적 조성물은 경구용 고체, 예컨대 정제 또는 충전 캡슐, 반고체, 분말, 서방형 제형물, 또는 액체, 예컨대 용액, 현탁액, 에멀젼, 엘릭시르, 또는 충전 캡슐로서; 또는 직장 또는 질 투여용 좌제의 형태로; 또는 비경구용 무균 주사 용액의 형태로서 사용될 수 있다. 따라서, 정제 당 약 1 mg 또는, 더욱 폭넓게는, 약 0.01 내지 약 100 mg 의 활성 성분을 함유하는 제형물이 적당한 대표적인 단위 투여량 형태이다.

본 발명의 화합물은 다양한 각종 경구 투여량 형태로 제형화 될 수 있다. 약학적 조성물 및 투여량 형태는 활성 성분으로서 본 발명의 화합물 또는 화합물들 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 포함할 수 있다. 약학적으로 허용가능한 담체는 고체 또는 액체일 수 있다. 고체형 제제에는 분말, 정제, 환약, 캡슐, 카세제, 좌제, 및 분산성 과립이 포함된다. 고체 담체는 또한 희석제, 향미제, 가용화제, 윤활제, 현탁제, 결합제, 방부제, 정제 붕해제, 또는 캡슐화 물질로서 작용할 수 있는 하나 이상의 물질일 수 있다. 분말에 있어서, 담체는 일반적으로 미분된 활성 성분과의 혼합물인 미분된 고체이다. 정제에 있어서, 활성 성분은 일반적으로 필요한 결합능을 갖는 담체와 적당한 비율로 혼합되고, 목적하는 모양 및 크기로 압축된다. 분말 및 정제는 바람직하게는 약 1 내지 약 70 % 의 활성 화합물을 함유한다. 적당한 담체에는, 비제한적으로, 마그네슘 카르보네이트, 마그네슘 스테아레이트, 탈크, 당, 락토오스, 펙틴, 덱스트린, 전분, 젤라틴, 트래거캔스, 메틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 저용융 왁스, 코코아 버터, 등이 포함된다. 용어 "제제" 는 담체를 갖거나 갖지 않는, 활성 성분이 그와 연관된 담체에 둘러싸여 있는 캡슐을 제공하는, 담체로서의 캡슐화 물질을 갖는 활성 화합물의 제형물이 포함되는 것으로 의도된다. 유사하게는, 카세제 및 로렌지가 포함된다. 정제, 분말, 캡슐, 환약, 카세제, 및 로렌지는 경구 투여에 적당한 고체 형태일 수 있다.

경구 투여에 적당한 다른 형태에는 에멀젼, 시럽, 엘릭시르, 수용액, 수성 현탁액을 포함하는 액체형 제제, 또는 사용되기 전에 단시간 내에 액체형 제제로 전환되도록 의도된 고체형 제제가 포함된다. 에멀젼은 용액, 예를 들어, 프로필렌 글리콜 수용액 중에서 제조될 수 있거나, 유화제, 예를 들어, 예컨대 레시틴, 소르비탄 모노올레에이트, 또는 아카시아를 함유할 수 있다. 수용액은 활성 성분을 물 중에 용해시키고, 적당한 착색제, 향미제, 안정화제, 및 증점제를 첨가함으로써 제조될 수 있다. 수성 현탁액은 미분된 활성 성분을 점성 물질, 예컨대 천연 또는 합성 검, 수지, 메틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 및 기타 널리 공지된 현탁제와 함께 물 중에 분산시킴으로써 제조될 수 있다. 고체형 제제에는 용액, 현탁액, 및 에멀젼이 포함되며, 이는 활성 성분에 더하여, 착색제, 향미제, 안정화제, 완충제, 인공 및 천연 감미제, 분산제, 증점제, 가용화제, 등을 함유할 수 있다.

본 발명의 화합물은 비경구 투여 (예컨대, 주사, 예를 들어 볼루스 주사 또는 연속 주사) 용으로 제형화될 수 있고, 앰플, 예비 충전 시린지, 소부피 주사의 단위 용량 형태 또는 방부제가 첨가된 다용량 용기로 제시될 수 있다. 조성물은 유성 또는 수성 비히클 중의 현탁액, 용액, 또는 에멀젼, 예를 들어 수성 폴리에틸렌 글리콜 중의 용액과 같은 형태를 취할 수 있다. 유성 또는 비수성 담체, 희석제, 용매 또는 비히클의 예로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일 (예컨대, 올리브 오일), 및 주사용 유기 에스테르 (예컨대, 에틸 올레에이트)가 포함되고, 이는 제형제, 예컨대 방부제, 습윤제, 유화제 또는 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제를 함유할 수 있다. 대안적으로는, 활성 성분은 적당한 비히클, 예컨대, 무균, 무발열원 수로 사용 전에 구성 용액으로부터의 동결건조에 의해, 또는 무균 고체의 무균 단리에 의해 수득된, 분말 형태일 수 있다.

본 발명의 화합물은 연고, 크림 또는 로션으로서, 또는 경피성 패치로서 표피에 국소 투여용으로 제형화 될 수 있다. 연고 및 크림은, 예를 들어, 적당한 증점제 및/또는 겔화제의 첨가와 함께 수성 또는 유성 베이스를 이용하여 제형화 될 수 있다. 로션은 수성 또는 유성 베이스를 이용하여 제형화될 수 있으며, 또한 일반적으로 하나 이상의 유화제, 안정화제, 분산제, 현탁제, 증점제, 또는 착색제를 함유할 수 있다. 구강 내 국소 투여에 적당한 제형물에는 유향 베이스, 통상적으로 수크로오스 및 아카시아 또는 트래거캔스 중에 활성 제제를 포함하는 로렌지; 불활성 베이스, 예컨대 젤라틴 및 글리세린 또는 수크로오스 및 아카시아 중에 활성 성분을 포함하는 향정; 및 적당한 액체 담체 중에 활성 성분을 포함하는 구강세정액이 포함된다.

본 발명의 화합물은 좌제로서의 투여용으로 제형화될 수 있다. 저용융 왁스, 예컨대 지방산 글리세리드 또는 코코아 버터의 혼합물을 우선 용융시키고, 활성 성분을 균질하게, 예를 들어, 교반에 의해 분산시킨다. 그 후, 용융된 균질 혼합물을 용이한 크기의 몰드에 붓고, 냉각시켜, 고체화시킨다.

본 발명의 화합물은 질 투여용으로 제형화될 수 있다. 활성 성분에 더하여 상기와 같은 담체를 함유하는 페서리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 발포체 또는 분사체가 적합한 것으로서 당업계에 공지되어 있다.

본 발명의 화합물은 비강 투여용으로 제형화될 수 있다. 용액 또는 현탁액은 통상적인 방법에 의해, 예를 들어, 점적기, 피펫 또는 분사를 이용하여 비강에 직접적으로 적용된다. 제형물은 단일 또는 다용량 형태로 제공될 수 있다. 후자에 있어 점적기 또는 피펫의 경우에는, 환자가 적합한, 소정의 부피의 용액 또는 현탁액을 투여하게함으로써 달성될 수 있다. 분사의 경우에는, 예를 들어 계량형 원자화 분사 펌프에 의해 달성될 수 있다.

본 발명의 화합물은 에어로졸 투여용으로, 특히 비강 내 투여를 포함하여 기도로의 투여용으로 제형화될 수 있다. 화합물은 일반적으로 작은 입자 크기, 예를 들어 약 5 마이크론 이하를 가질 수 있다. 이와 같은 입자 크기는 당업계에 공지된 방법, 예를 들어 마이크론화에 의해 수득될 수 있다. 활성 성분은 적당한 추진제, 예컨대 클로로플루오로탄소 (CFC), 예를 들어, 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 또는 디클로로테트라플루오로에탄, 또는 이산화탄소 또는 기타 적당한 기체를 이용하여 가압 팩으로 제공된다. 에어로졸은 또한 용이하게는 계면활성제, 예컨대 레시틴을 함유할 수 있다. 약물의 용량은 계량 밸브에 의해 조절될 수 있다. 대안적으로는, 활성 성분은 건조 분말, 예를 들어 적당한 분말 베이스, 예컨대 락토오스, 전분, 전분 유도체, 예컨대 히드록시프로필메틸 셀룰로오스 및 폴리비닐피롤리딘 (PVP) 중의 화합물의 분말 혼합물의 형태로 제공될 수 있다. 분말 담체는 비강 내에서 겔을 형성할 것이다. 분말 조성물은 단위 용량 형태, 예를 들어 분말이 흡입기에 의해 투여될 수 있는, 예컨대 젤라틴 또는 블리스터 팩의 카트리지 또는 캡슐로 제시될 수 있다.

원하는 경우, 제형물은 활성 성분의 서방형 또는 제어 방출형 투여에 적합한 장 코팅물로 제조될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 경피 또는 피하 약물 전달 장치로 제형화될 수 있다. 이러한 전달계은 화합물의 서방형 방출이 필요한 경우 및 치료 계획에 대한 환자의 순응이 중요한 경우에 유리하다. 경피 전달계 내의 화합물은 흔히 피부 접착용 고체 지지체에 부착된다. 관심 대상의 화합물은 또한 침투 증강제, 예컨대, 아존 (1-도데실아자시클로헵탄-2-온)과 조합될 수 있다. 서방형 전달계는 수술 또는 주사에 의해 피하를 통해 피하층 내로 삽입된다. 피하 임플란트는 지질 용해성 막, 예컨대, 실리콘 고무, 또는 생분해성 중합체, 예컨대, 폴리락트산 중에 화합물을 캡슐화한다.

약학적 제제는 바람직하게는 단위 투여량 형태이다. 이와 같은 형태에 있어서, 제제는 적합한 양의 활성 성분을 함유하는 단위 용량으로 세분된다. 단위 투여량 형태는 패키지 제제일 수 있고, 이때 패키지는 바이알 또는 앰플 내에 분리된 양의 제제, 예컨대 패킷 정제, 캡슐, 및 분말을 함유한다. 또한, 단위 투여량 형태는 캡슐, 정제, 카세제, 또는 로렌지 그 자체일 수 있고, 또는 패키지 형태 중의 적합한 수의 이들 중 임의의 것일 수 있다.

기타 적당한 약학적 담체 및 이들의 제형물은 [Remington: The Science and Practice Pharmacy 1995, E. W. Martin 편저, Mack Publishing Company, 19th edition, Easton, Pennsylvania]에 기술되어 있다. 본 발명의 화합물을 함유하는 대표적인 약학적 제형물은 하기에 기술되어 있다.

본 발명의 화합물은 공지된 항암 치료, 예컨대 방사선 치료 또는 세포증식억제제 또는 세포독성제, 예컨대, 예를 들어, 비제한적으로, DNA 작용제, 예컨대 시스플라틴 또는 독소루비신; 국소이성화효소 II 억제제, 예컨대 에토포시드: 국소이성화효소 I 억제제, 예컨대 CPT-11 또는 토포테칸; 투블린 작용제, 예컨대 파클리탁셀, 도세탁셀 또는 에포틸론; 호르몬제, 예컨대 타목시펜: 티미딜산 합성효소 억제제, 예컨대 5-플루오로우라실; 및 항대사물질, 예컨대 메토트렉세이트와의 조합으로 (조합으로 또는 순차적으로 투여)사용될 수 있다. 식 I 의 화합물은 또한 p53 전이활성의 조절제와의 조합이 유용할 수 있다.

고정된 용량으로서 제형화된 경우, 상기 기술된 조합 생성물에는 상기 기술된 투여량 범위 내의 본 발명의 화합물 및 승인된 용량 범위 내로의 기타 약학적 활성제 또는 치료제가 포함된다. 예를 들어, 초기 cdk1 억제제 올로뮤신은 아포토시스를 유도하는에 있어서, 널리 공지된 세포독성제와 함께 서로 상승하여 작용하는 것으로 밝혀졌다 (J. Cell Sci. (1995) 108:2897-904). 동시 투여 또는 조합이 부적합한 경우, 식 I 의 화합물은 또한 공지된 항암 또는 세포독성제와 순차적으로 투여될 수 있다. 본 발명은 투여의 순서에 제한되지 않으며: 식 I 의 화합물은 공지된 항암 또는 세포독성제의 투여 전 또는 후에 투여될 수 있다. 예를 들어, cdk 억제제 플라보피리돌의 세포독성 활성은 항암제를 이용한 투여의 순서에 영향을 받는다 (Canxer Res (1997) 57:3375).

본 발명의 화합물의 약리학적 특성은 수많은 약리학적 검정에 의해 확인될 수 있다. 하기에 따른 예시적인 약리학적 검정은 본 발명에 따른 화합물 및 이들의 염을 이용하여 수행되었다. 본 발명의 화합물은 1.0 μM 미만의 IC₅₀ 값 및 Ki 값을 갖는 cdk4/시클린 D 활성을 나타냈다. 또한, 인간 결장 종양 세포주 HCT116 에서 시험된 본 발명의 일부 화합물의 항증식성 효능은 MTT 검정으로부터 30 μM 미만, 바람직하게는 5 μM 미만의 IC₉₀ 값으로 보고되었다.

본 발명의 부가적인 목적, 이점, 및 신규한 특징은 하기 실시예의 시험에 따라 당업계의 숙련된 자에게 명백하게 될 것이며, 이는 제한하기 위한 의도가 아니다.

실시예

약어 목록

BOP 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄

헥사플루오로포스페이트

DCE 1,2-디클로로에탄

DCM 디클로로메탄/메틸렌 클로라이드

DIPEA 디이소프로필에틸아민

DMF N,N-디메틸포름아미드

DIAD 디이소프로필 아조디카르복실레이트

DMSO 디메틸 술폭시드

EtOAc 에틸 아세테이트

LAH 리튬 알루미늄 히드라이드

IBX o-요오독시벤조산

m-CPBA 3-클로로퍼옥시벤조산

MeOH 메탄올

MsCl 메탄술포닐 클로라이드

MW 마이크로파

NCS N-클로로숙신이미드

NMP 1-메틸-2-피롤리디논

RT 실온

STABH 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드

TEA 트리에틸아민

THF 테트라히드로푸란

TLC 박층 크로마토그래피

실시예 1: 2,4,5-트리클로로-피리미딘의 합성

2,4,5-트리클로로-피리미딘의 합성을 반응식 A 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

5-클로로우라실 (4.5 g, 30.82 mmol)을 포스포러스 옥시클로라이드 (100 mL) 중에 용해시키고, 포스포러스 펜타클로라이드 (19.2 g, 92.46 mmol)를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 환류에서, 밤새 가열하고; 그 후, RT 까지 냉각시키고, 용매를 감압 하에서 증발시켰다. 잔류물을 0 ℃ 까지 냉각시키고, 얼음 조각을 주의하여 첨가하였다. 수득한 혼합물을 10 분 동안 교반하고; 그 후, 물과 DCM 사이에 분할시켰다. 유기상을 분리하고, 물로 3 번 세정하였다. 수성층을 통합하고, DCM 으로 2 번 추출하였다. 통합한 유기 추출물을 Na₂SO₄ 상에서 건 조시키고, 여과 및 감압 하에서 증발시켜, 추가 정제 없이, 6 g (95% 수율)의 2,4,5-트리클로로-피리미딘을 황색 오일로서 수득하였다.

실시예 2: 1-(2,5-디클로로-피리미딘-4-일)-1H-벤조트리아졸의 합성

1-(2,5-디클로로-피리미딘-4-일)-1H-벤조트리아졸의 합성을 반응식 B 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

DMF (10 mL) 중의 벤조트리아졸 (2.14 g, 18.03 mmol) 용액을 0℃ 에서, 질소 대기 하에서, DMF (20 mL) 중의 NaH (광유 중의 60%, 0.850 g, 21.3 mmol) 용액에 천천히 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 0℃ 에서, 15 분 동안 교반하고; 그 후, DMF (20 mL) 중의 2,4,5-트리클로로피리미딘 (3 g, 16.39 mmol) 용액을 0℃ 에서, 천천히 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 밤새 교반하면서 RT 에 도달하도록 하였다. 용매를 감압 하에서 증발시키고; 잔류물을 EtOAc 에 용해시키고, 물로 3 번 세정하였다. 수성층을 통합하고, EtOAc 로 3 번 추출하였다. 통합한 유기 추출물을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과 및 감압 하에서 증발시켜, 미정제 오일을 수득하였다. 상기 물질을 플래시 크로마토그래피 (헵탄/ EtOAc, 8/2)를 통해 정제하여, 1.5 g (34% 수율)의 1-(2,5-디클로로-피리미딘-4-일)-1H-벤 조트리아졸을 수득하였다.

하기 화합물들을 적합한 클로로피리미딘을 사용하여, 유사하게 제조하였다:

1-(2-클로로-피리미딘-4-일)-1H-벤조트리아졸;

1-(2-클로로-5-플루오로-피리미딘-4-일)-1H-벤조트리아졸; 및

1-(2-클로로-5-메틸-피리미딘-4-일)-1H-벤조트리아졸.

실시예 3: 1-(2-메탄술포닐-피리미딘-4-일)-1H-벤조트리아졸의 합성

1-(2-메탄술포닐-피리미딘-4-일)-1H-벤조트리아졸의 합성을 반응식 C 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

단계 1: 1-(2-메틸술파닐-피리미딘-4-일)-1H-벤조트리아졸의 합성

1 L 둥근 바닥 플라스크에 수소화나트륨 분산액 (10.0 g, 250 mmol, 광유 중의 60%) 및 200 mL 의 DMF 를 주입하고, 수득한 슬러리를 얼음 배쓰를 이용하여 냉각시켰다. 벤조트리아졸 (18.02 g, 151 mmol)을 10-12 분 기간에 걸쳐 분할로 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 10 분 동안 교반하여 기체 방출을 진정시키고; 그 후, 얼음 배쓰를 제거하고, 4-클로로-2-메틸티오피리미딘 (24.07 g, 150 mmol)을 첨가하였다. 수득한 혼합물을 RT 에서, 15 분 동안 교반한 후, 1.5 시간 동안 90 ℃ 오일 배쓰 내에 위치시켰다. 가열 배쓰를 끄고, 상기 반응 혼합물을 밤새 교반하면서 천천히 냉각시켰다. 그 후, 상기 반응 혼합물을 500 mL 의 물에 붓고, 20 분 동안 교반한 후 여과하였다. 수집한 고체를 3 분할의 물 및 3 분할의 헥산/EtOAc (10:1 내지 5:1) 혼합물로 세정한 후, 건조시켜, 1-(2-메틸술파닐-피리미딘-4-일)-1H-벤조트리아졸을 회백색 고체로서 수득하였다 (27.05 g, 74% 수율), mp = 180.5-181.7 ℃; MS = 244 (M+H)⁺.

단계 2: 1-(2-메탄술포닐-피리미딘-4-일)-1H-벤조트리아졸의 합성

1-(2-메틸술파닐-피리미딘-4-일)-1H-벤조트리아졸 (27.05 g, 111 mmol)을 2 L 둥근 바닥 플라스크 내에서, 600 mL 의 CHCl₃ 중에 용해/현탁시켰다. 상기 혼합물을 얼음 배쓰를 이용하여 냉각시키고, m-CPBA (58.03 g, 259 mmol, 약 77%)를 반응 온도를 15 ℃ 미만으로 유지하면서, 천천히 분할로 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 RT 까지 천천히 가온시키고, 16 시간 동안 교반한 후, 1 시간 동안 환류시켰다. 이를 냉각시키고, 수성 나트륨 티오술페이트로 처리하고; 유기층을 분리하고, 3 분할의 수성 탄산수소나트륨으로 세정하였다. 그 후, 이를 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과 및 감압 하에서 현탁액이 형성될 때까지 농축시키고, 이를 여과 및 건조시켜, 1-(2-메탄술포닐-피리미딘-4-일)-1H-벤조트리아졸을 백색 고체로서 수득하였다 (20.78 g, 68% 수율), mp = 201.8-202.5 ℃; MS = 276 (M+H)⁺.

실시예 4: N-피리미딘-2-일-시클로헥산-트랜스-1,4-디아민의 합성

N-피리미딘-2-일-시클로헥산-트랜스-1,4-디아민의 합성을 반응식 D 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

디옥산/MeOH (40 mL/40 mL) 중의 90℃ 트랜스-1,4-디아미노시클로헥산 (10.10 g, 88 mmol) 용액에, 디옥산/MeOH (40 mL/40 mL) 중의 2-클로로피리미딘 (3.14 g, 45 mmol) 용액을 천천히 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 밤새 환류시킨 후, 냉각시키고, 형성된 현탁액을 여과하였다. 상기 여과액을 감압 하에서 농축시켜 또 다른 현탁액을 형성시키고, 이를 다시 여과하였다. 수집한 액체를 EtOAc와 수성 NaHCO₃ 사이에 분할시켰다. 수성층에 남아있는 생성물을 3 분할의 CH₂Cl₂ 로 추출하고, Na₂SO₄ 상에서 건조 및 여과하고; 용매를 감압 하에서 증발시켰다. 미정제 잔류물을 헥산/CH₂Cl₂ (1/1)로부터 재결정하고, 건조시켜, N-피리미딘-2-일-시클로헥산-트랜스-1,4-디아민을 회백색 고체로서 수득하였다 (1.20 g, 14% 수율), mp = 126.9-128.4 ℃; MS = 193 (M+H)⁺.

실시예 5: 아민의 합성

각종 아민의 합성을 반응식 E 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

단계 1: 메탄술폰산 (S)-2-tert-부톡시카르보닐아미노-프로필 에스테르의 합성

2-(S)-Boc-아미노-프로판올 (10 g, 57.1 mmol, 1.00 당량)을 질소 대기 하에서, DCM (200 mL) 중에 용해시키고; 트리에틸아민 (7.49g, 10.32 mL, 74.2 mmol, 1.30 당량)을 RT 에서 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 0 ℃ 까지 냉각시키고, 메실 클로라이드 (7.39g, 4.99 mL, 64.5 mmol, 1.13 당량)를 질소 대기 하에서 첨가하였다. 수득한 혼합물을 0 ℃ 에서, 3 시간 동안 교반한 후, H₂O (100 mL)로 3 번 세정하고, 수성상을 통합하고, DCM (50 mL)으로 3 번 추출하였다. 유기 추출물을 통합하고, Na₂SO₄ 상에서 건조, 여과 및 증발시켜, 메탄술폰산 (S)-2-tert-부톡시카르보닐아미노-프로필 에스테르를 백색 고체 (14.17 g, 98% 수율)로서 수득하였다.

동일한 방식으로, 2-(R)-boc-2-아미노-프로판올을 출발 물질로서 사용하여 메탄술폰산 (R)-2-tert-부톡시-카르보닐-아미노-프로필 에스테르 (백색 고체)를 제조하였다 (수율 = 14.09 g, 97% 수율).

단계 2: 아민 A 의 합성

메탄술폰산 (S)-2-tert-부톡시카르보닐아미노-프로필 에스테르 (1.00g, 3.94 mmol, 1 당량)를 질소 대기 하에서, DMF (16 mL) 중에 용해시킨 후, K₂CO₃ (1.09g, 7.89 mmol, 2 당량) 및 식 RR'NH 의 적합한 아민 (3.95 mmol, 1 당량)을 RT 에서 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 90 ℃ 에서, 1 시간 동안 교반하였다. 수득한 혼합물을 농축시켜, 미정제 고체를 수득하고, 이를 1:1 iPrOH/CHCl₃ 혼합물에 용해시키고, H₂O (10 mL)로 2 번 세정하였다. 수성상을 통합하고, 1:1 iPrOH/CHCl₃ 혼합물 (20 mL)로 3 번 추출하였다. 유기 추출물을 통합하고, Na₂SO₄ 상에서 건조, 여과 및 증발시켜, 미정제 목적 아민을 수득하였다.

(S)- 및 (R)- boc 아미노 메실테이트 유도체 및 하기 아민을 사용하여, 유사한 반응을 수행하여 해당 생성물을 수득하였다: 숙신이미드; 2-피롤리디논; 5,5-디메틸옥사졸리딘-2,4-디온; 5-메틸-1H-테트라졸; 1,2,3-트리아졸; 1,2,4-트리아졸; 메틸-4-이미다졸 카르복실레이트; 및 메틸-1,2,3-트리아졸-3-카르복실레이트.

상기 미정제 혼합물들의 ¹H NMR 을 수행하였다. 상기 boc 아미노 유도체는 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.

단계 3: 아민 B 의 합성

(S)-boc-아미노 유도체 A (3.5 mmol, 1 당량)를 1,4-디옥산 (5 mL) 중의 4N HCl 용액에 용해시켰다. 상기 반응 혼합물을 RT 에서, 18 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켜, 미정제 고체를 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.

상기 절차를 사용하여, 하기 아민들을 제조하였다:

3-((R)-2-아미노-프로필)-5,5-디메틸-옥사졸리딘-2,4-디온;

1-((R)-2-아미노-프로필)-피롤리딘-2,5-디온;

(R)-1-메틸-2-[1,2,3]트리아졸-2-일-에틸아민;

(R)-1-메틸-2-[1,2,4]트리아졸-1-일-에틸아민;

1-((S)-2-아미노-프로필)-피롤리딘-2,5-디온;

(S)-1-메틸-2-[1,2,3]트리아졸-2-일-에틸아민;

(S)-1-메틸-2-[1,2,4]트리아졸-1-일-에틸아민; 및

(R)-1-메틸-2-(5-메틸-테트라졸-1-일)-에틸아민.

실시예 6: (4-벤조트리아졸-1-일-5-클로로-피리미딘-2-일)-시클로헥실-아민의 합성

(4-벤조트리아졸-1-일-5-클로로-피리미딘-2-일)-시클로헥실-아민의 합성을 반응식 F 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

시클로헥실아민 (0.21 mL, 1.88 mmol)을 RT 에서, 질소 대기 하에서, THF (30 mL) 중의 1-(2,5-디클로로-피리미딘-4-일)-1H-벤조트리아졸 (250 mg, 0.94 mmol) 용액에 분할로 첨가하였다. 수득한 무색 용액을 RT 에서, 4 시간 동안 교반하였다. 그 후, TEA (2.82 mmol)를 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 RT 에 서, 밤새 교반하였다. 상기 혼합물을 물 (50 mL)과 EtOAc (50 mL) 사이에 분할시켰다. 유기층을 분리하고, 물 (50 mL)로 2 번 및 염수 (50 mL)로 한 번 세정한 후, Na₂SO₄ 상에서 건조, 여과 및 감압 하에서 증발시켜, 회백색 고체를 수득하였다. 상기 미정제 물질을 플래시 크로마토그래피 (톨루엔/EtOAc, 98/2)를 통해 정제하여, 162 mg (53% 수율)의 (4-벤조트리아졸-1-일-5-클로로-피리미딘-2-일)-시클로헥실-아민을 회백색 고체로서 수득하였다. MS: 329.14 (M+1)⁺, 301.14 ((M+1)⁺-28).

유사한 절차 및 적합한 아민 및 피리미딘 유도체를 사용하여, 하기 화합물들을 제조하였다:

트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르보니트릴; MS: 320.15 (M+1)⁺, 292.18((M+1)⁺-28);

(4-벤조트리아졸-1-일-5-메틸-피리미딘-2-일)-시클로헥실-아민; MS: 309.23 (M+1)⁺, 281.24 ((M+1)⁺-28);

(4-벤조트리아졸-1-일-5-플루오로-피리미딘-2-일)-시클로헥실-아민; MS: 313.17 (M+1)⁺, 285.21 ((M+1)⁺-28);

3-[(R)-2-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-프로필]-5,5-디메틸-옥사졸리딘-2,4-디온; MS: 381.94 (M+1), 353.98 ((M+1)-28);

1-[(R)-2-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-프로필]-피롤리딘- 2,5-디온; MS: 351.96 (M+1), 324.01 ((M+1)-28);

(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-((R)-1-메틸-2-[1,2,3]트리아졸-2-일-에틸)-아민; MS: 321.99 (M+1), 293.98 ((M+1)-28);

(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-((R)-1-메틸-2-[1,2,4]트리아졸-1-일-에틸)-아민; MS: 321.99 (M+1), 293.98 ((M+1)-28);

1-[(S)-2-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-프로필]-피롤리딘-2,5-디온; MS: 351.96 (M+1), 324.1 ((M+1)-28);

(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-((S)-1-메틸-2-[1,2,3]트리아졸-2-일-에틸)-아민; MS: 321.99 (M+1), 293.98 ((M+1)-28);

(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-[(R)-1-메틸-2-(5-메틸-테트라졸-1-일)-에틸]-아민; MS: 337.16 (M+1)⁺, 309.13 ((M+1)⁺-28); 및

(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-((S)-1-메틸-2-[1,2,4]트리아졸-1-일-에틸)-아민; MS: 322.17 (M+1), 294.15 ((M+1)-28).

실시예 7: 트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산올의 합성

트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산올의 합성을 반응식 G 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

15 mL 의 NMP 중의 1-(2-메탄술포닐-피리미딘-4-일)-1H-벤조트리아졸 (1.59 g, 6 mmol) 용액에, 트랜스-4-아미노시클로헥산 (3.11 g, 27 mmol)을 첨가하고, 수득한 혼합물을 120 ℃ 에서, 2 시간 동안 교반하였다. 그 후, 이를 냉각시키고, 100 mL 의 물에 붓고, 교반 및 밤새 정치시켰다. 수득한 현탁액을 여과하고, 수집한 고체를 물로 세정하고, CH₂Cl₂ 에 용해시키고; 용매를 감압 하에서 제거하였다. 형성된 고체 잔류물을 EtOAc 에 용해시키고, 여과 및 건조시켜, 트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산올을 백색 고체로서 수득하였다 (910 mg, 51% 수율), mp = 224.8-228.1 ℃; MS = 311 (M+H)⁺.

하기 화합물들을 유사한 절차 및 적합한 아민을 사용하여 제조하였다:

시스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산올 (백색 고체); mp = 220.0-221.0 ℃; MS = 311 (M+H)⁺;

트랜스-2-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산올 (백색 결정성 고체); mp = 166.9-169.3 ℃; MS = 311 (M+H)⁺;

(1R, 3R)-3-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로펜탄올 (백색 고체); mp = 194.5-196.5 ℃; MS = 297 (M+H)⁺;

(1S, 3S)-3-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로펜탄올 (백색 고체); mp = 194.1-195.9 ℃; MS = 297 (M+H)⁺;

(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-(4-에틸-시클로헥실)-아민 (백색 고체); mp = 191.2-191.7 ℃; MS = 323 (M+H)⁺;

(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-피페리딘-4-일-아민 (백색 고체, 4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (tert-부틸 4-아미노-1-피페리딘카르복실레이트를 사용하여 수득함)의 통상적인 tert-부틸 카르바메이트 탈보호로부터 수득함); mp = 230.1-233.9 ℃; MS = 296 (M+H)⁺;

(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-(4-메틸-시클로헥실)-아민 (백색 고체); mp = 192.5-196.0 ℃; MS = 309 (M+H)⁺;

(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-(트랜스-4-메톡시-시클로헥실)-아민 (백색 고체) (4-메톡시-시클로헥실아민은 [J. Org. Chem. (1985) 50:1160]에 기술된 바와 같이 4-메톡시-시클로헥사논 옥심으로부터 수득하였고, 상기 4-메톡시-시클로헥사논 옥심은 [J. Med. Chem. (1977) 20:289]에 기술된 바와 같이 4-메톡시-시클로헥사논으로부터 수득하였고, 상기 4-메톡시-시클로헥사논은 [J. Med. Chem. (1989) 32:355)]에 기술된 바와 같이 4-메톡시-시클로헥산올로부터 수득함) mp = 184.0-186.9 ℃; MS = 325 (M+H)⁺;

N-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-N'-피리미딘-2-일-시클로헥산-트랜스-1,4-디아민 (백색 고체) (N-피리미딘-2-일-시클로헥산-트랜스-1,4-디아민은 제조 4 에 기술된 바와 같이 제조함); mp = 286.0-286.4 ℃; MS = 388 (M+H)⁺;

N-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-N'-피리미딘-2-일-시클로헥산-트랜스-1,4-디아민 비스-메탄 술포네이트 염은 과량의 메탄술폰산을 100 mL 의 CH₂Cl₂ 및 대략 20 mL 의 MeOH 중의 N-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-N'-피리미딘-2-일-시클로헥산-트랜스-1,4-디아민 비스-메탄 (150 mg) 용액에 첨가하여 제조하였다. 수득한 혼합물을 농축하고, CH₂Cl₂/EtOAc 으로부터 재결정하였다. 상기 고체를 여과하고, 건조시켜, 메탄술폰산 염을 백색 고체로서 수득하였다 (214 mg, 95% 수율); mp = 282.6-288.9 ℃; MS = 388 (M+H)⁺.

유사하게, 하기 화합물들의 메탄술폰산 염을 제조하였다:

(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-(1,4-디옥사-스피로[4.5]데크-8-일)-아민 (백색 고체); mp = 207.9-209.0 ℃; MS = 353 (M+H)⁺;

(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-(테트라히드로-피란-4-일)-아민 (백색 미세 바늘형 결정); mp = 202.0-202.4 ℃; MS = 297 (M+H)⁺; 및

(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-(1,1-디옥소-헥사히드로-1λ⁶-티오피란-4-일)-아민 (백색 분말); mp = 268.5-270.2 ℃; MS = 345 (M+H)⁺.

실시예 8: (4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-시클로헥실-아민의 합성

(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-시클로헥실-아민의 합성을 반응식 H 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

4 mL 의 NMP 중의 1-(2-메틸술파닐-피리미딘-4-일)-1H-벤조트리아졸 (376 mg, 1.5 mmol) 용액에, N-클로로숙신아미드 (250 mg, 1.9 mmol) 및 0.5 mL 의 물을 첨가하였다. 상기 혼합물을 130 ℃ 에서, 5-10 분 동안 오일 배쓰 내에 위치시킨 후, 시클로헥실아민 (450 mg, 5 mmol)을 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 130 ℃ 에서, 30 분 동안 오일 배쓰 내에서 교반하였다. 냉각시킨 반응 혼합물을 물 (40 mL)과 EtOAc (40 mL) 사이에 분할시켰다. 유기층을 분리하고, 물 (40 mL) 로 2 번 세정한 후, Na₂SO₄ 상에서 건조, 여과 및 용매를 감압 하에서 제거하였다. 미정제 잔류물을 플래시 크로마토그래피로 정제하고, CH₂Cl₂/EtOAc 로부터 재결정하여, (4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-시클로헥실-아민을 백색 짧은 바늘형 결정성 고체로서 수득하였다 (255 mg, 56% 수율). mp = 202.0-204.0 ℃; MS = 295 (M+H)⁺.

실시예 9: (1S, 2R)-[2-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]- 메탄올의 합성

(1S, 2R)-[2-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-메탄올의 합성을 반응식 I 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

단계 1: 시스-(1S, 2R)-2-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산-카르복실산 에틸 에스테르의 합성

(1S, 2R)-시스-2-아미노-1-시클로헥산카르복실산 에틸 에스테르 히드로브로마이드 (0.41 g, 1.62 mmol) 및 트리에틸아민 (0.30 mL, 2.16 mmol)을 2 mL 의 NMP 중의 1-(2-메탄-술포닐-피리미딘-4-일)-1H-벤조트리아졸 (0.30 g, 1.09 mmol) 용액에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 120 ℃ 에서, 45 분 동안 교반한 후, 50 mL 의 에틸 아세테이트 상에 부었다. 유기층을 분리하고, 물로 세정, Na₂SO₄ 상에서 건조 및 여과하고; 용매를 감압 하에서 증발시켰다. 미정제 잔류물을 메탄올 및 디클로로메탄의 용액으로 분쇄하고; 그 후, 이를 여과 및 건조시켜, 시스-(1S, 2R)-2-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산 에틸 에스테르를 회백색 고체로서 수득하였다 (0.22 g, 55% 수율); mp = 106.3-107.9 ℃; MS = 367 (M+H)⁺.

단계 2: (1S, 2R)-[2-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-메탄올의 합성

리튬 알루미늄 히드라이드 (THF 중의 1.0 M, 0.52 mL, 0.52 mmol)를 5 mL 의 THF 중의 -78 ℃ 시스-(1S, 2R)-2-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산 에틸 에스테르 (0.19 g, 0.52 mmol) 용액에 적가하였다. 상기 반응 혼합물을 2 시간 동안 교반한 후, 10 분의 기간에 걸쳐 RT 까지 가온시켰다. 표준 Fieser 후처리 (1:1:3 H₂O, 15% NaOH, H₂O) 후, 상기 반응 혼합물을 RT 에서, 약 18 시간 동안 교반하였다. 에틸 아세테이트를 첨가하고, 상기 혼합물을 여과하였다. 상기 여과액을 감압 하에서 농축시키고, 미정제 잔류물을 클로로포름에 용해시키고, 셀리트 패드를 통해 여과, 감압 하에서 농축, 및 건조시켜, (1S, 2R)-[2-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-메탄올을 백색 고체로서 수득하였다 (0.04 g, 24% 수율); mp = 206.1-207.8 ℃; MS = 325 (M+H)⁺.

트랜스-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-메탄올을 유사한 방식으로, 적합한 아미노에스테르를 사용하여 제조하였다; MS: 325.19 (M+1)⁺, 297.17 ((M+1)⁺-28).

실시예 10: N-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-시클로헥산-트랜스-1,4-디아민 의 합성

N-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-시클로헥산-트랜스-1,4-디아민의 합성을 반응식 J 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

80 mL 의 NMP 중의 가온된 1-(2-메탄술포닐-피리미딘-4-일)-1H-벤조트리아졸 (10.07 g, 37 mmol) 용액을 첨가 깔대기를 통해, 10 분 기간에 걸쳐, 100 mL 의 NMP 중의 115 ℃ 트랜스-1,4-디아미노시클로헥산 (25.58 g, 224 mmol) 용액에 적가하였다. 상기 반응 혼합물을 115-120 ℃ 에서, 1.5 시간 동안 오일 배쓰 내에서 교반하고; 그 후, 이를 천천히 RT 까지 밤새 냉각시켰다. 상기 반응 혼합물을 300 mL 의 물에 붓고, 4 시간 동안 교반하고; 그 후, 이를 EtOAc (400 mL)로 2 번 추출하였다. 통합한 유기 추출물을 물로 한 번 세정하고 (상기 생성물은 수용성임), Na₂SO₄ 상에서 건조 및 여과하였다. 생성물이 결정화되기 시작할 때까지 용매를 감압 하에서 증발시켰다. 고체를 여과하고, EtOAc/헥산으로 세정 및 건조시켜, 상기 표제 화합물의 첫 번째 수확을 수득하였다. 부가적인 수확을 모액(mother liquor)으로부터 유사한 방식으로 수득하여, 총 6.47 g (57% 수율)의 N-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-시클로헥산-트랜스-1,4-디아민을 회백색 고체로서 수득하였다; mp = 223.5-227.8 ℃; MS = 310 (M+H) ⁺.

실시예 11: N-[트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-아세트아미드의 합성

N-[트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-아세트아미드의 합성을 반응식 K 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

1.5 mL 의 NMP 중의 N-(4-벤조트리아졸-일-피리미딘-2-일)-시클로헥산-트랜스-1,4-디아민 (0.22 g, 0.71 mmol) 현탁액에, 아세트산 무수물 (0.13 mL, 1.38 mmol)을 첨가하였다. 상기 반응물을 1 시간 동안 교반하였다. 에틸 아세테이트를 상기 현탁액에 첨가하고, 수득한 혼합물을 10 분 동안 교반하였다. 침전물을 여과하고, 디클로로메탄으로 분쇄, 및 건조시켜, N-[트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-아세트아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (0.18 g, 74% 수율); mp = 286.6-287.6 ℃; MS = 352 (M+H)⁺.

하기 화합물들을 적합한 아실화제를 사용하여, 유사하게 제조하였다:

N-[트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-아세트아미드 메실레이트 (백색 고체); mp = 202.2-206.6 ℃; MS = 352 (M+H)⁺;

N-[트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-메탄 술폰아미드 (백색 고체); mp = 279.2-280.0 ℃; MS = 388 (M+H)⁺;

메탄술포네이트(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-(4-메탄술포닐아미노-시클로헥실)-암모늄 (백색 고체, 161 mg, 90% 수율); mp = 252.3-256.6 ℃; MS = 388 (M+H)⁺;

N-[트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-프로피온아미드 (백색 고체); mp = 293.0-294.3 ℃; MS = 366 (M+H)⁺;

에탄술폰산 [트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-아미드 (백색 고체); mp = 282.1-287.3 ℃; MS = 402 (M+H)⁺;

디메틸술팜산 [트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일-아미노)-시클로헥실] 아미드 (백색 고체); mp = 242.0-244.0 ℃; MS = 417 (M+H)⁺; 및

2-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-피페리딘-1-일]-아세트아미드 (회백색 고체); mp = 247.9-249.3 ℃; MS = 353 (M+H)⁺.

실시예 12: N-[트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-N-메틸-아세트아미드의 합성

N-[트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-N-메틸-아세트아미드의 합성을 반응식 L 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

단계 1: (4-벤조트리아졸-일-피리미딘-2-일)-N'-메틸-시클로헥산-트랜스-1,4-디아민의 합성

N-(4-벤조트리아졸-일-피리미딘-2-일)-시클로헥산-트랜스-1,4-디아민 (0.30 g, 0.97 mmol), 포름알데히드 (0.5 mL, 물 중의 37%, 0.87 mmol) 및 메탄올 (5 mL)의 현탁액을 RT 에서, 질소 대기 하에서, 4 시간 동안 교반하였다. 나트륨 보로히드라이드 (0.06 g, 1.59 mmol)를 분할로 첨가하고, 상기 현탁액을 1 시간 동안 교반하였다. 수산화나트륨 (1 M, 10 mL) 용액을 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 25 ℃ 물 배쓰 내에서 냉각시키고, 30 분 동안 교반하였다. 에틸 아세테이트 (50 mL)를 첨가하고, 상기 수득한 혼합물을 5 분 동안 교반한 후, 여과하였다. 여과액의 유기층을 제거하였다. 수성층을 EtOAc 로 추출하고; 유기층을 분리하고; Na₂SO₄ 상에서 건조 및 여과하고; 용매를 감압 하에서 증발시켰다. 상기 미정제 고체를 15% MeOH/CH₂Cl₂ 를 사용하여 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, (4-벤조트리아졸-일-피리미딘-2-일)-N'-메틸-시클로헥산-트랜스-1,4-디아민을 고체로서 수득하였다 (0.05g, 16% 수율). MS = 324 (M+H)⁺.

단계 2: N-[트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-N- 메틸-아세트아미드의 합성

상기 표제 화합물을 실시예 11 에 기술된 바와 같은 유사한 방식으로, (4-벤조트리아졸-일-피리미딘-2-일)-N'-메틸-시클로헥산-트랜스-1,4-디아민으로부터 회백색 분말로서 수득하였다. MS = 366 (M+H)⁺.

N-[트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-N-메틸-메탄술폰아미드 (회백색 고체)를 유사한 방식으로, 메탄술포닐 클로라이드를 사용하여 제조하였다 ; mp = 249.9-251.7 ℃; MS = 402 (M+H)⁺.

실시예 13: N-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-N'-피리딘-2-일-시클로헥산-트랜스-1,4-디아민 히드로클로라이드의 합성

N-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-N'-피리딘-2-일-시클로헥산-트랜스-1,4-디아민 히드로클로라이드의 합성을 반응식 M 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

1.5 mL 의 NMP 중의 N-(4-벤조트리아졸-일-피리미딘-2-일)-시클로헥산-트랜스-1,4-디아민 (0.20 g, 0.65 mmol) 및 2-플루오로피리딘 (0.11 mL, 1.28 mmol) 용액을 230 ℃ 에서, 20 분 동안, 마이크로파 반응기 내에서 가열하였다. NMP 를 증류에 의해 제거하였다. 상기 고체를 포화 탄산수소나트륨으로 세정하고, 에테르로 분쇄, 및 제조용 TLC 로 정제하였다. 이와 같이 수득한 유리 염기를 에테르 중의 HCl 의 첨가에 의해 해당 히드로클로라이드 염으로 전환시켜, 상기 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다 (0.04 g, 16% 수율); mp = 207.0-210.0 ℃. MS = 387 (M+H)⁺.

실시예 14: N-{트랜스-4-[(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-메틸-아미노]-시클로헥실}-N-메틸-메탄술폰아미드의 합성

N-{트랜스-4-[(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-메틸-아미노]-시클로헥실}-N-메틸-메탄술폰아미드의 합성을 반응식 N 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

4 mL 의 NMP 중의 N-[트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-메탄-술폰아미드 (0.13 g, 0.3 mmol) 용액에 과량의 NaH (광유 중의 분산액)를 첨가하였다. 즉시 상기 혼합물의 색이 황색으로 변했고, 상기 반응물이 약하게 발열을 나타냈다; 그 후, 이를 RT 에서, 10-15 분 동안 교반한 후, 몇 방울의 요오도메탄을 첨가하였다. 황색이 사라지면, 상기 반응 혼합물을 15 분 동안 교반하였다. 그 후, 이를 100 mL 의 물에 붓고, 100 mL의 EtOAc 로 추출 하였다. 유기층을 분리하고, 100 mL 의 물로 2 번 세정하고; 그 후, 이를 Na₂SO₄ 상에서 건조하고, 여과하였다. 용매를 감압 하에서 증발시키고, 미정제 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (EtOAc/헥산, 1:1)로 정제하였다. EtOAc/헥산으로부터 재결정화하여, 상기 표제 생성물을 백색 고체로서 수득하였다 (51 mg, 37% 수율); mp = 203.5-204.0 ℃; MS = 416 (M+H)⁺.

실시예 15: 1-[트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-피롤리딘-2,5-디온의 합성

1-[트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-피롤리딘-2,5-디온의 합성을 반응식 O 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

2 mL 의 NMP 중의 N-(4-벤조트리아졸-일-피리미딘-2-일)-시클로헥산-트랜스-1,4-디아민 (0.26 g, 0.8 mmol) 및 숙신산 무수물 (0.09 g, 0.9 mmol) 용액을 반응 튜브 내에 위치시키고, 봉합한 후, 60-65 ℃ 에서, 17 시간 동안 가열하였다. 냉각시킨 반응 혼합물을 농축시키고, 8 mL 의 아세트산 무수물 및 나트륨 아세테이트 (0.09 g, 1.10 mmol)로 처리하였다. 상기 혼합물을 가열하여 환류시키고, 21 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 얼음 냉각수 상에 붓고, 1 M 수 산화나트륨으로 중화시켰다. 침전물을 여과하고, 제조용 TLC 로 정제하여, 상기 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (0.07 g, 21% 수율); mp = 205.0-210.0 ℃; MS = 392 (M+H) ⁺.

실시예 16: 4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥사논의 합성

4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥사논의 합성을 반응식 P 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

80 mL 의 THF 중의 (4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-(1,4-디옥사-스피로[4.5]데크-8-일)-아민 (실시예 2 에 기술된 바와 같은 유사한 방식으로 제조함) (1.53 g, 4 mmol) 현탁액에, 25 mL 의 3 M HCl 수용액을 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 RT 에서, 20 분 동안 교반하였다. 상기 반응물을 30 분 동안 가열하여 환류시켰다. 그 후, 이를 냉각시키고, NaHCO₃ 수용액 상에 부었다. 수득한 혼합물을 EtOAc 로 추출하고, Na₂SO₄ 상에서 건조 및 여과하였다. 생성물이 용액으로부터 결정화되기 시작할 때까지 용매를 감압 하에서 증발시키고; 그 후, 이를 여과하고, 건조시켜, 상기 표제 생성물을 백색 분말로서 수득하였다 (942 mg, 70% 수율); mp = 204.9-206.5 ℃; MS = 309 (M+H)⁺.

실시예 17: 4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-1-메틸-시클로헥산올의 합성

4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-1-메틸-시클로헥산올의 합성을 반응식 Q 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

-78 ℃ 에서 냉각시킨, 80 mL 의 THF 중의 4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥사논 (764 mg, 2.5 mmol) 용액에, 메틸마그네슘 클로라이드 (3.5 mL, THF 중의 3.0 M, 10.5 mmol)를 적가하였다. 상기 반응 혼합물의 색이 즉시 밝은 황색으로 변했다; 그 후, 이를 RT 까지 가온시켰다. 상기 반응이 종결에 이르지 않아서, 이를 -78 ℃ 까지 재냉각시키고, 부가적인 분취량의 MeMgCl (3 mL, 9 mmol)을 첨가하였다. 수득한 혼합물을 RT 까지 가온한 후, NH₄Cl 의 수용액 상에 붓고; 이를 EtOAc 로 추출하였다. 유기층을 분리하고, Na₂SO₄ 상에서 건조 및 여과하고; 용매를 감압 하에서 증발시켰다. 미정제 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (1-5/99-95 MeOH/CH₂Cl₂)로 정제하여: 더 낮은 극성의 트랜스-이성질체 (130 mg, 16% 수율, mp = 193.0-195.4 ℃; MS = 325 (M+H)⁺), 및 더 높은 극성 의 시스-이성질체 (360 mg, 45% 수율, mp = 202.1-205.6 ℃; MS = 325 (M+H)⁺)를 백색 결정성 고체로서 수득하였다.

실시예 18: 트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-5-클로로-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산의 합성

트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-5-클로로-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산-카르복실산의 합성을 반응식 R 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

단계 1: 4-(4-벤조트리아졸-1-일-5-클로로-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산-카르복실산 메틸 에스테르의 합성

트랜스-4-아미노-시클로헥산카르복실산 메틸 에스테르 (727 mg, 3.76 mmol)를 RT 에서, 질소 대기 하에서, THF (50 mL) 중의 1-(2,5-디클로로-피리미딘-4-일)-1H-벤조트리아졸 (500 mg, 1.88 mmol) 용액에 분할로 첨가하고, 이어서 TEA (0.79 mL, 5.64 mmol)를 첨가하였다. 수득한 백색 현탁액을 RT 에서, 밤새 그 후, 60 ℃ 에서 2.5 일 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 물 (100 mL)과 EtOAc (100 mL) 사이에 분할시켰다. 유기층을 분리하고, 물 (100 mL)로 2 번 및 염수 (100 mL)로 한 번 세정한 후, Na₂SO₄ 상에서 건조, 여과 및 용매를 감압 하에서 증발시켜, 회백색 고체를 수득하였다. 상기 미정제 물질을 플래시 크로마토그래피 (톨루엔/EtOAc, 90/10)를 통해 정제하여, 538 mg (74% 수율)의 4-(4-벤조트리아졸-1-일-5-클로로-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산 메틸 에스테르를 회백색 고체로서 수득하였다. MS: 387.10 (M+1)⁺, 359.13 ((M+1)⁺-28).

하기 화합물들을 적합한 피리미딘을 사용하여, 유사하게 제조하였다:

트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-5-플루오로-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산 메틸 에스테르; MS: 371.12 (M+1)⁺, 343.14 ((M+1) ⁺-28);

트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-5-메틸-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산 메틸 에스테르; MS: 367.20 (M+1) ⁺, 339.23 ((M+1) ⁺-28); 및

트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산 메틸 에스테르; MS: 353.21 (M+1) ⁺, 325.19 ((M+1) ⁺-28).

단계 2: 트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-5-클로로-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산의 합성

NaOH (2 M, 10 mL) 수용액을 RT 에서, THF (10 mL) 중의 4-(4-벤조트리아졸-1-일-5-클로로-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산 메틸 에스테르 (482 mg, 1.25 mmol)의 무색 용액에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 RT 에서, 밤새 교반하고; 그 후, 이를 물 (15 mL)로 희석하고, HCl (2 M)의 첨가에 의해 pH 3 까지 산성화시켰다. 형성된 백색 침전물을 여과에 의해 수집하고, 물로 세정 및 공기로 건조시켜, 435 mg (85% 수율)의 트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-5-클로로-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산을 백색 고체로서 수득하였다. MS: 373.12 (M+1)⁺, 345.15 ((M+1)⁺-28).

하기 화합물들을 적합한 피리미딘을 사용하여, 유사하게 제조하였다:

트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산; MS: 339.21 (M+1) ⁺, 311.21 ((M+1) ⁺-28); 및

트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-5-플루오로-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산; MS: 357.12 (M+1) ⁺, 329.15 ((M+1) ⁺-28).

실시예 19: 트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-5-클로로-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산 에틸아미드의 합성

트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-5-클로로-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산-카르복실산 에틸아미드의 합성을 반응식 S 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

THF (60 mL) 중의 트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-5-클로로-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산-카르복실산 (70 mg, 0.17 mmol), 에틸 아민 (21 μL, 0.26 mmol), BOP (114 mg, 0.26 mmol) 및 DIPEA (59 μL, 0.34 mmol)의 혼합물을 RT 에서, 2 일 동안 교반하였다. 형성된 백색 고체를 여과에 의해 제거하고, 상기 여과액을 물 (25 mL)로 희석 및 이소프로판올/클로로포름 (1/1, 20 mL) 혼합물로 3 번 추출하였다. 통합한 유기 추출물을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과 및 감압 하에서 증발시켜, 회백색 잔류물을 수득하고, 이를 플래시 크로마토그래피 (DCM/MeOH, 98/2)를 통해 정제하여, 68 mg (정량적 수율)의 트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-5-클로로-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산 에틸아미드를 백색 고체로서 수득하였다.

하기 화합물들을 적합한 아민 및 피리미딘 유도체를 사용하여, 유사하게 제조하였다.

트랜스-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2일아미노)-시클로헥실]-(4-메틸-피페라진-1-일)-메타논;

트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산 시클로프로필아미드; MS: 378.22 (M+1)⁺, 350.22 ((M+1) ⁺-28);

트랜스-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-피롤리딘-1-일-메타논; MS: 391.21 (M+1)⁺;

트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산 (2-히드록시-에틸)-아미드; MS: 382.18 (M+1)⁺;

시스-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-(4-메틸-피페라진-1-일)-메타논; MS: 421.23 (M+1)⁺;

트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산 (테트라히드로-피란-4-일)-아미드; MS: 422.24 (M+1)⁺;

트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산 (2-히드록시-에틸)-메틸-아미드; MS: 396.12 (M+1)⁺;

트랜스-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-모르폴린-4-일-메타논; MS: 408.26 (M+1)⁺;

트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산 (2-아미노-2-메틸-프로필)-아미드; MS: 409.27 (M+1)⁺;

트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산 에틸아미드; MS: 366.19 (M+1)⁺, 338.23 ((M+1)⁺-28);

트랜스-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-5-플루오로-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-모르폴린-4-일-메타논; MS: 426.15 (M+1)⁺, 398.14 ((M+1)⁺-28);

트랜스-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-5-메틸-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-모르폴린-4-일-메타논; MS: 422.18 (M+1)⁺, 394.15 ((M+1)⁺-28);

트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-5-플루오로-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산 에틸아미드; MS: 384.15 (M+1)⁺, 356.17 ((M+1) ⁺-28); 및

트랜스-4-(4-벤조트리아졸-1-일-5-메틸-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르복실산 에틸아미드; MS: 380.18 (M+1)⁺, 352.21 ((M+1) ⁺-28).

실시예 20: 트랜스-(4-아미노메틸-시클로헥실)-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-아민의 합성

트랜스-(4-아미노메틸-시클로헥실)-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-아민의 합성을 반응식 T 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

단계 1: 트랜스-2-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실메틸]-이소인돌-1,3-디온의 합성

트리페닐포스핀 (972 mg, 1.2 당량)을 톨루엔 (100 mL) 중의　트랜스-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-메탄올 (1g, 1 당량; 실시예 4 에 기술된 바와 같은 유사한 방식으로 제조함) 용액에 첨가한 후, 이어서 DIAD (0.73 mL, 1.2 당량)를 적가하였다. 상기 반응 혼합물을 RT 에서, 10 분 동안 교반한 후, 프탈리미드 (545 mg, 1.2 당량)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 RT 에서, 밤새 교반한 후, 물을 첨가하고, 수득한 혼합물을 EtOAc 로 3 번 추출하였다. 통합한 유기 추출물을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과 및 용매를 감압 하에서 증발시켰다. 미정제 잔류물을 MeOH 로 분쇄하여, 976 mg (70% 수율)의 트랜스-2-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실메틸]-이소인돌-1,3-디온을 수득하였다; MS = 454.40 (M+1)⁺.

트랜스-4-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실메틸]- 모르폴린-3,5-디온을 적합한 이미드를 사용하여, 유사한 방식으로 제조하였다; MS: 422.35 (M+1)⁺.

단계 2: 트랜스-(4-아미노메틸-시클로헥실)-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-아민의 합성

히드라진 1수화물 (0.28 mL, 2.7 당량)을 EtOH (60 mL) 중의 트랜스-2-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실메틸]-이소인돌-1,3-디온 (976 mg, 1 당량) 용액에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 70 ℃ 에서, 밤새 교반한 후, 두 번째 분취량의 히드라진 1수화물 (0.22 mL, 2.0 당량)을 첨가하고, 상기 혼합물을 환류에서, 7 시간 동안 교반하였다. 그 후, 용매를 감압 하에서 증발시키고, 잔류물을 이소프로판올 및 클로로포름의 혼합물에 용해시키고, 이를 HCl (1 M)의 첨가에 의해 pH 3 까지 산성화시켰다. 유기상을 물로 3 번 세정하였다. 수성상을 NaOH (1 M)의 첨가에 의해 pH 8-9 까지 염기성화시키고, 이를 이소프로판올 및 클로로포름의 혼합물로 5 번 추출하였다. 통합한 유기 추출물을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과 및 용매를 감압 하에서 증발시켰다. 이러한 산/염기 추출 절차를 3 번 반복하여, 프탈라지논을 제거하였다. 트랜스-(4-아미노메틸-시클로헥실)-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-아민을 71% 순도로 수득하였다 (450 mg, 65% 수율).

실시예 21: 트랜스-N-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실메틸]-아세트아미드의 합성

트랜스-N-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실메틸]-아세트아미드의 합성을 반응식 U 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

TEA (52 μL, 0.37 mmol)를 질소 대기 하에서, DCM (3 mL) 중의 트랜스-(4-아미노메틸-시클로헥실)-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-아민 (60 mg, 0.185 mmol) 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 -78 ℃ 까지 냉각시키고, 아세틸 클로라이드 (13.2 μL, 0.185 mmol)를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 RT 에서, 밤새 교반하고; 그 후, 이를 물에 붓고, 이소프로판올 및 클로로포름의 혼합물로 3 번 추출하였다. 통합한 유기 추출물을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과 및 용매를 감압 하에서 증발시켰다. 미정제 잔류물을 제조용 TLC 를 통해 정제하여, 10 mg 의 트랜스-N-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실메틸]-아세트아미드를 수득하였다.

트랜스-N-N'-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실메틸]-디메틸-술파노일 우레아를 아실화제로서 디메틸술파모일 클로라이드를 사용하여, 유사한 방식으로 제조하였다.

실시예 22: (4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-(4-모르폴린-4-일메틸-시클로헥실)-아민의 합성

(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-(4-모르폴린-4-일메틸-시클로헥실)-아민의 합성을 반응식 V 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

단계 1: 4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산-카르발데히드의 합성

요오독시벤조산 (830 mg, 2.96 mmol)을 DMSO (10 mL) 중의 트랜스-[4-(4-벤조-트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-메탄올 (640 mg, 1.97 mmol) 용액에 첨가하고, 수득한 혼합물을 RT 에서, 23 시간 동안 교반하였다. 그 후, 부가적인 분취량의 o-요오독시벤조산 (830 mg, 2.96 mmol)을 첨가하였다. 몇 시간 후, 상기 반응을 정지시켰다. 물을 첨가하고, 수득한 혼합물을 20 분 동안 교반하고, 형성된 고체를 여과 및 상기 여과액을 EtOAc 로 3 번 추출하였다. 통합한 유기 추출물을 물로 한 번 세정하고, Na₂SO₄ 상에서 건조 및 여과하고; 용매를 감압 하에서 증발시켰다. 형성된 백색 고체를 EtOAc 로 수차례 세정하고, 상기 수득한 고체와 통합하여, 789 mg 의 미정제 잔류물을 수득하였다. 상기 미정제 물질을 플래시 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc, 20% 에서 50% 의 EtOAc 구배로)를 통해 정제하여, 452 mg (70% 수율)의 4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산카르발데히드를 수득하였다.

단계 2: (4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-(4-모르폴린-4-일메틸-시클로헥실)-아민의 합성

DCE (2 mL) 중의 4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산-카르발데히드 (39 mg), 모르폴린 (14 μL) 및 아세트산 (2 방울)의 혼합물을 RT 에서, 2 시간 동안 교반하고; 그 후, 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드를 첨가하였 다. 수득한 혼합물을 RT 에서, 3 시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고; 유기층을 분리하고, 물로 3 번 세정하였다. 수성층을 DCM 으로 재추출하였다. 통합한 유기 추출물을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고; 용매를 감압 하에서 증발시키고, 잔류물을 제조용 TLC 를 통해 정제하여, 13.2 mg 의 (4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-(4-모르폴린-4-일메틸-시클로헥실)-아민을 수득하였다.

하기 화합물들을 적합한 아민을 사용하여, 유사하게 제조하였다.

트랜스-4-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실메틸-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르

및, 트랜스-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일)-{4-[(2-메톡시-에틸아미노)-메틸]-시클로헥실}-아민.

실시예 23: 트랜스-N-(4-아미노-시클로헥실)-2-(4-메틸-피페라진-1-일)-아세트아미드의 합성

트랜스-N-(4-아미노-시클로헥실)-2-(4-메틸-피페라진-1-일)-아세트아미드의 합성을 반응식 W 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

단계 1: 트랜스-[4-(2-클로로-아세틸아미노)-시클로헥실]-카르밤산 tert-부틸 에스테르의 합성

얼음 냉각시킨, DCM(15 mL) 중의 트랜스-4-메틸-시클로헥실아민 (520 mg, 1.5 mmol) 용액에, 피리딘 (0.36 mL, 4.5 mmol)을 첨가하고, 이어서 클로로아세틸 클로라이드 (1 당량)를 적가하였다. 상기 혼합물을 RT 까지 가온시키고, 3 일에 걸쳐 교반하였다. 부가적인 분취량의 피리딘 (1 당량) 및 클로로아세틸 클로라이드 (1 당량)를 첨가하고, 수득한 혼합물을 밤새 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 EtOAc 로 희석하고, NaHCO₃ 포화 수용액으로 세정하고, EtOAc 로 추출하고, 다시 물로 세정하였다. 통합한 유기층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과 및 감압 하에서 농축시켜, 추가 정제 없이, 478 mg 의 트랜스-[4-(2-클로로-아세틸아미노)-시클로헥실]-카르밤산 tert-부틸 에스테르를 수득하였다.

단계 2: 트랜스-{4-[2-(4-메틸-피페라진-1-일)-아세틸아미노]-시클로헥실}-카르밤산 tert-부틸 에스테르의 합성

DCM (12 mL) 중의 트랜스-[4-(2-클로로-아세틸아미노)-시클로헥실]-카르밤산 tert-부틸 에스테르 (330 mg, 1.14 mmol) 용액을 RT 에서, DCM (1 mL) 중의 메틸피페라진 (0.1 mL, 0.95 mmol) 용액에 첨가하였다. 수득한 혼합물을 밤새 교반한 후, DCM 으로 희석하고, NaHCO₃ 포화 수용액으로 세정하였다. 수성상을 DCM 및 그 후 EtOAc 로 추출하였다. 통합한 유기상을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과 및 감압 하에서 농축시켜, 추가 정제 없이, 199 mg 의 트랜스-{4-[2-(4-메틸-피페라진-1-일)-아세틸아미노]-시클로헥실}-카르밤산 tert-부틸 에스테르를 수득하였다.

단계 3: 트랜스-N-(4-아미노-시클로헥실)-2-(4-메틸-피페라진-1-일)-아세트아미드의 합성

HCl (2 M, 15 mL) 수용액을 RT 에서, MeOH (15 mL) 중의 트랜스-{4-[2-(4-메틸-피페라진-1-일)-아세틸아미노]-시클로헥실}-카르밤산 tert-부틸 에스테르 (199 mg, 0.56 mmol) 용액에 첨가하고, 수득한 혼합물을 밤새 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켜, 고체 잔류물을 수득하였다. Et₂O 를 상기 물질에 첨가하고, 수득한 현탁액을 초음파처리 하였다. 에테르상을 분리하고, 분말성 갈색 고체를 남기고, 이를 제조용 TLC 로 정제하였다. 수득한 오 일을 최소량의 MeOH 중에 용해시키고, Et₂O 를 첨가하였다. 고체가 침전되었는데; 액체상을 제거하여 건조시킨 후, 75 mg 의 트랜스-N-(4-아미노-시클로헥실)-2-(4-메틸-피페라진-1-일)-아세트아미드를 미세 분말로서 수득하였다.

유사한 방식으로, 적합한 출발 물질을 사용하여, 하기 화합물들을 또한 제조하였다:

-트랜스-N-(4-아미노-시클로헥실)-2-모르폴린-4-일-아세트아미드;

-트랜스-N-(4-아미노-시클로헥실)-2-메톡시-아세트아미드; 및

-트랜스- N-(4-아미노-시클로헥실)-2-히드록시-아세트아미드.

실시예 24: 트랜스-N-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-2-메톡시-아세트아미드의 합성

트랜스-N-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-2-메톡시-아세트아미드의 합성을 반응식 X 에 나타낸 과정에 따라 수행하였다.

1-(2-메탄술포닐-피리미딘-4-일)-1H-벤조트리아졸 (99.1 mg, 0.36 mmol)을 주입한, 10 mL 봉합가능한 튜브에, NMP (1 mL) 및 디이소프로필에틸아민 (0.19 mL, 1.09 mmol)을 첨가하였다. N-(4-아미노-시클로헥실)-2-메톡시-아세트아미드 (100 mg, 0.36 mmol)를 주입한, 두 번째 5 mL 봉합가능한 튜브에, NMP (1 mL)를 첨가하였다. 두 개의 튜브를 모두 120℃ 에서 가열하고, 고체가 완전히 용해되었을 때, 1-(2-메탄술포닐-피리미딘-4-일)-1H-벤조트리아졸 용액을 캐뉼라를 통해 N-(4-아미노-시클로헥실)-2-메톡시-아세트아미드 용액을 함유한 튜브로 옮겼다. 수득한 혼합물을 120℃ 에서, 1.5 시간 동안 교반한 후, RT 까지 냉각시키고, 물 (15 mL)에 부었다. 수득한 혼합물을 밤새 교반한 후, DCM 으로 희석하고, 물로 세정하였다. 수성층을 분리하고, DCM 으로 추출하였다. 통합한 유기층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과 및 감압 하에서 농축시켜, 오일을 수득하고, 이를 소량의 EtOAc 에 용해시키고, 헥산을 첨가하여, 고체를 침전시켰다. 수득한 혼합물을 1 시간 동안 정치시킨 후, 상청액을 주의하여 제거하였다. 남아있는 고체를 감압 하에서 건조시켜, 86 mg (63% 수율)의 트랜스-N-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-2-메톡시-아세트아미드를 수득하였다. MS = 381 [M+H]⁺; MP = 233.5-235.4 ℃.

유사한 방식으로, 적합한 출발 물질을 사용하여, 하기 화합물들을 또한 제조하였다:

-트랜스-N-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-2-히드록시-아세트아미드, MS = 368 [M+H]⁺;

-트랜스-N-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-2-모 르폴린-4-일-아세트아미드, MS = 437 [M+H]⁺; 및

-트랜스-N-[4-(4-벤조트리아졸-1-일-피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실]-2-(4-메틸-피페라진-1-일)-아세트아미드, MS = 450 [M+H]⁺.

제형물

하기 표에 나타낸 바와 같이 각종 경로에 의한 전달을 위한 약학적 제제를 제형화하였다. 표에서 사용된 바와 같은 "활성 성분" 또는 "활성 화합물"은 하나 이상의 식 I 의 화합물을 의미한다.

상기 성분들을 혼합하여, 각각 약 100 mg 을 함유하는 캡슐 내로 분배하였으며; 1 개의 캡슐은 1 일 총 투여량과 유사할 것이다.

상기 성분들을 조합하고, 메탄올과 같은 용매를 사용하여 과립화하였다. 그 후, 상기 제형물을 건조시키고, 적합한 타정기를 이용하여 정제 (활성 화합물 약 20 mg 함유)로 형성시켰다.

상기 성분들을 혼합하여 경구 투여용 현탁액을 형성시켰다.

활성 성분을 주사용수의 일부에 용해시켰다. 그 후, 충분한 양의 염화나트륨을 교반하면서 첨가하여, 용액을 등장성이 되게 하였다. 나머지 주사용수로 용액의 중량을 보충한 후, 0.2 마이크론 막 여과기를 통해 여과하고, 무균 조건 하에서 패키징하였다.

상기 성분들을 함께 용융시키고, 증기 배쓰 상에서 혼합하고, 총 중량 2.5 g 을 함유하는 몰드에 부었다.

물을 제외한 상기 성분들을 모두 조합하고, 교반하면서, 약 60℃ 까지 가열하였다. 그 후, 충분한 양의 약 60℃ 의 물을 격렬한 교반과 함께 첨가하여 상기 성분들을 유화시킨 후, 물을 충분히 (약 100 g) 첨가하였다.

비강 분사 제형물

약 0.025-0.5 % 의 활성 화합물을 함유하는 여러 수성 현탁액을 비강 분사 제형물로서 제조하였다. 상기 제형물은 임의로 비활성 성분, 예컨대, 예를 들어, 미세결정성 셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 덱스트로오스, 등을 함유한다. pH 를 조정하기 위해 염산을 첨가할 수 있다. 상기 비강 분사 제형물은 통상적으로 작업 당 약 50-100 μL 의 제형물을 전달하는, 비강 분사 계량 펌프를 통해 전달될 수 있다. 통상의 투여 계획은 2-4 분사/4-12 시간이다.

실시예 28

키나아제 검정

A: IC ₅₀ 측정

Cdk4, Cdk2 및 Cdk1 활성의 억제를 측정하기 위해, FlashPlate™ 검정 (NEN™-Life Science Products)을 사용하여 키나아제 검정을 수행하였다. FlashPlate 검정은 재조합된 인간 시클린 B-CDK1, 인간 시클린 E-CDK2 또는 인간 시클린 D1-CDK4 복합체를 사용하여 수행하였다. 바큘로바이러스 벡터 내 GST-시클린E (GST-cycE), CDK2, GST-시클린B (GST-cycB), CDK1, GST-CDK4 및 시클린 D1 (cycD1) cDNA 클론은 Dr. W. Harper (Baylor College of Medicine, Houston, TX)에 의해 제공되었다. 단백질들은 High Five™ 곤충 세포에서 동시 발현시켰고, 복합체는 이전에 기술된 (J.W. Harper 등, Cell (1993) 75:805-16) 바와 같이, 글루타티온 Sepharose® 수지 (Pharmacia, Piscataway, NJ) 상에서 정제하였다. 6X-히스티딘 태깅된 절단된 형태의 레티노블라스토마 (Rb) 단백질 (아미노산 386- 928)을 cycD1-CDK4, cycB-CDK1 및 cycE-CDK2 검정 (발현 플라스미드는 Dr. Veronica Sullivan (Department of Molecular Virology, Roche Research Centre, Welwyn Garden City, United Kingdom)에 의해 제공됨)을 위한 기질로서 사용하였다. Rb 단백질은 CDK4, CDK2 및 CDK1 에 의한 인산화를 위한 천연 기질이다 ([Herwig 및 Strauss Eur. J. Biochem. (1997) 246:581-601] 및 본원에서 인용된 참고문헌 참조).

62 Kd 단백질의 발현은 M15 E. coli 균주 내 IPTG 유도성 프로모터의 조절 하에 있었다. 세포를 초음파처리에 의해 용해시키고, 용해물을 pH 8.0 에서 1 mM 이미다졸로 전처리된 Ni-킬레이트 아가로오스 컬럼에 결합시켜 정제하였다. 그 후, 상기 수지를 pH 6.0 으로 점차 감소하는 pH 완충액으로 수차례 세정하고, 500 mM 이미다졸로 용리하였다. 용리한 단백질을 20 mM 헤페스(HEPES) pH 7.5, 30% 글리세롤, 200 mM NaCl, 및 1 mM DTT 에 반하여 투석하였다. 정제한 Rb 융합 단백질 저장액을 단백질 농도로 정량하여, 분취하고, -70℃ 에서 저장하였다.

본원에서 기술한 모든 3 가지 키나아제 검정에 있어서, 96-웰 FlashPlate 를 웰 당 100 μl 를 사용하여, 10 μg/ml 의 Rb 단백질로 코팅하였다. 플레이트를 4℃ 에서, 밤새 또는 RT 에서, 3 시간 동안, 진탕기 상에서 인큐베이션하였다. 비특이 인산화를 조절하기 위해, 웰의 한 열을 100 μl/웰 코팅 완충액 (20 mM 헤페스, 0.2 M NaCl)으로 코팅하였다. 그 후, 플레이트를 세정 완충액 (포스페이트-완충 식염수 중의 0.01% Tween® 20)으로 2 번 세정하였다. 시험하고자 하는 화합물 ("시험 화합물")을 최종 농도의 5 배로 웰에 첨가하였다. 40 μl 반응 혼합물 (25 mM 헤페스, 20 mM MgCl₂, 0.002% Tween® 20, 2 mM DTT, 1 μM ATP, 4 nM ³³P-ATP) 및 충분한 양의 효소의 첨가로 반응을 즉시 개시하여, 상기 바탕의 10 배 이상의 수를 수득하였다. 플레이트를 RT 에서, 30 분 동안, 진탕기 상에서 인큐베이션하였다. 플레이트를 세정 완충액으로 4 번 세정하고, 봉합한 후, TopCount 신틸레이션 계수기 (Packard Instrument Co., Downers Grove, IL) 상에서 계수하였다. CDK 활성 억제의 측정치인, Rb 인산화의 % 억제는, 하기 식에 따라 결정하였다:

이때, "시험 화합물" 은 중복 시험의 분 당 평균 수를 지칭하고, "비특이" 는 시클린D/Cdk4, 등을 첨가하지 않았을 경우, 분 당 평균 수를 지칭하고, "총" 은 어떤 화합물도 첨가하지 않았을 경우, 분 당 평균 수를 지칭한다. IC₅₀ 값은 기술된 시험 조건 하에서, 단백질-키나아제 유도성 방사성 동위원소의 혼입을 50% 감소시키는, 시험 화합물의 농도이다

B. K _I 측정

대안적으로, 억제 활성은 Ki 를 사용하여 측정할 수 있다. 상기 실시예 28(A)에 기술된 단백질 구조물을 사용하여, CDK1, CDK2, 및 CDK4 HTRF 검정을 수행하였다. 이는 96-웰 형식에서 수행하고, 384-웰 플레이트 형식에서 판독하였 다. 상기 검정은 ATP 에 대한 각각 3 배의 Km 에서 실시하였다.

CDK4 검정에 있어서, 시험 화합물을 25 mM 헤페스, pH 7.0, 6.25 mM MgCl₂, 1.5 mM DTT, 135 μM ATP 중에 그들의 최종 농도의 3 배로 희석하였다. DMSO 농도는 4.76% 이하였다. 20 μl 를 96-웰 플레이트의 웰에 첨가하였다. 키나아제 반응을 25 mM 헤페스, pH 7.0, 6.25 mM MgCl₂, 0.003% Tween-20, 0.3 mg/ml BSA, 1.5 mM DTT 중에 0.185 μM Rb 및 2.25 μg/ml CDK4 를 함유한 용액 40 μl/웰의 첨가에 의해 개시하였다. CDK4 를 사용하지 않은 블랭크(blank) 웰을 포함시켰다. 플레이트를 37℃ 에서, 30 분 동안, 진탕하면서 인큐베이션하였다. 키나아제 반응을 25 mM 헤페스, pH 7.0, 24 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA 중의 1.6 μM 항-포스포-Rb (Ser 780) 항체 (Cell Signaling Inc.) 15 μl/웰의 첨가에 의해 개시하였다. 37℃ 에서 30 분 후, 25 mM 헤페스, pH 7.0, 0.5 mg/ml BSA 중의 3 nM Lance-Eu-W1024 라벨링된 항-토끼 IgG 및 60 nM 알로피코시아닌 결합된 항-His6 (PerkinElmer Life Sciences) 15 μl/웰을 첨가하였다. 37℃ 에서, 1 시간 인큐베이션 후, 2중으로, 각 웰의 35 μl 를 384-웰 블랙 플레이트로 옮겼다. 플레이트를 340 nm 의 여기 파장 및 615 nm 및 665 nm 의 이중 방출 파장을 사용하는, ViewLux 또는 Victor V 판독기 (PerkinElmer Life Sciences)를 사용하여 판독하였다. IC50 값 (검정 대조군 형광 기록값보다 50% 감소시키는 시험 화합물의 농도)은 우선 665 nm 에서 순 기록값으로부터 계산하고, 615 nm 에서 유로퓸 기록값으로 표준화하였다. ATP 경쟁적 억제제에 대하여, Ki 값은 하기 방정식에 따라 계산하였다:

Ki = IC50/(1 + S/Km)

이때, S 는 기질 농도를 지칭하고, Km 은 Michaelis-Menten 상수를 지칭한다.

CDK1 및 CDK2 검정은 시약 및 단백질 농도의 작은 변화를 제외하고는 유사하게 수행하였다.

두 가지 검정을 위한 화합물 및 효소 완충액은 10 mM MgCl₂ 을 함유하였다. CDK1 및 CDK2 에 있어서, 각각의 시약의 ATP 농도는 162 μM 및 90 μM 이었다. 시약 농도 0.15 ng/μl 의 CDK1 및 시약 농도 0.06 ng/μl 의 CDK2 를 사용하였다. 검출 시약의 시약 농도를 3-12 nM Eu-Ab 및 60-90 nM APC-항His 6 으로 조정하여, 10 대 1 이상의 신호 대 배경비를 수득하였다.

실시예 29

세포 기반 검정 (테트라졸륨 염료 증식 검정)("MTT 검정")

Denizot 및 Lang (F. Denizot 및 R. Lang, J Immunol Meth (1986) 89:271-77)의 절차에 따른 테트라졸륨 염료 검정에 의해 증식을 평가하였다. 사용한 세포주는 American Type Cell Culture Collection (ATCC; Rockville, MD)으로부터 수득한 결장 직장암 세포주인, HCT116 였다. 상기 세포를 10% FCS 및 L-글루타민으로 보충한 McCoy 5A 배지에서 성장시켰다 .

세포를 적합한 씨딩(seeding) 밀도로 플레이팅하여, 96-웰 조직 배양 플레이트에서 검정 과정에 따라 대수적 성장을 수득하였다. 플레이트를 37℃ 에서, 밤새, 5% CO₂ 를 사용하여 습윤한 인큐베이터 내에서 인큐베이션하였다. 다음날, 시험 화합물을 1.2% DMSO 를 함유한 적합한 배지 중에 최종 농도의 4 배로 순차적으로 희석하였다. 각 희석액의 최종 부피의 1/4 을 세포를 함유한 플레이트에 2중으로 첨가하였다. 배지 중 동일한 부피의 1.2% DMSO 를 "대조군 웰"의 한 열에 첨가함으로써, 각각의 웰 중 DMSO 의 최종 농도가 0.3% 이 되도록 하였다. 세포를 첨가하지 않은 웰은 "블랭크" 로서 하였다. 억제제를 첨가하지 않은 웰은 "억제제 부재 대조군" 으로 하였다. 플레이트를 다시 인큐베이터에 넣고, 설정 시간 지점 (이들의 성장 곡선에 의해 결정됨)에서, 플레이트를 하기 기술된 바와 같이 분석하였다.

3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐-2H-테트라졸륨 브로마이드 (티아졸릴 블루; MTT; Sigma)를 각각의 웰에 첨가하여, 1 mg/ml 의 최종 농도를 수득하였다. 플레이트를 37℃ 에서, 2.5-3 시간 동안 다시 인큐베이터에 넣었다. MTT-함유 배지를 제거하고, 수득한 포르마잔 대사산물을 RT 에서, 15 분 동안 진탕하면서, 100% 에탄올 중에 용해시켰다. 흡광도 판독은 마이크로티터 플레이트 판독기 (Dynatech and Molecular Device 플레이트 판독기를 교환가능하게 사용함) 내에서, 570 nm 의 파장에서 650 nm 기준과 더불어 수행하였다. % 억제 (% INH)는 모든 웰로부터 블랭크 웰의 흡광도를 감한 후, 1.00 에서 대조군의 평균 (C_AVE)에 대한 각각의 중복 시험의 평균 흡광도 (S_AVE)의 비율을 감하여 계산하였다. 그 후, 최종 수에 100 을 곱하였다 (% INH = (1.00 - S_AVE/C_AVE) x 100). 세포 증식 의 90% 억제를 수득한 지점에서의 농도 (IC₉₀)를, 농도 대 % 억제의 대수 그래프의 선형 회귀로부터 결정하였다.

American Tissue Culture Collection (ATCC)로부터 구입한 SW1353 세포를 6-웰 플레이트 내에서, 10% 소태아 혈청 (Invitrogen)으로 보충된, 2 ml 의 둘베코 변형 이글 배지 (Invitrogen)를 함유한 웰 당 3 x 10⁵ 세포의 밀도로, 37℃ 에서, 융합될 때까지 성장시켰다. 그 후, 세포를 무혈청 배지를 사용하여, 37℃ 에서, 2 시간 동안 위치시켰다. 화합물 저장액 (10 mM)을 디메틸술폭시드 (DMSO)로 희석하고, 3 μl 부피 중에 1000 배 농축된 용액으로서 각각의 웰에 첨가고, 혼합 및 세포와 함께 30 분 동안 예비인큐베이션하였다. 화합물 비히클 DMSO 는 모든 시료 내에서 0.3% 의 최종 농도로 유지시켰다. TNF (Roche Biochem)를 성장 배지에서 제조한 10 배 농축된 용액으로서 첨가하였으며, 총 부피 300 μl 의 무혈정 배지 중의 1 ng/ml 의 최종 농도로, 웰 당 30 μl 부피로 첨가하였다. 그 후, 세포 플레이트를 37℃ 에서, 20 분 동안 인큐베이션하였다. 세포 배지의 제거 후, 세포 용해물을 120 μl 의 용해 완충액 (Biosource) 중에서 수집하였다. 용해물 시료에 대한 단백질 농도는 제조업자 (Bio-Rad) 지시에 따라 Lowry 검정에 의해 결정하였다.

세포 용해물 시료 (시료 당 15 μg 의 총 단백질)를 10% NuPAGE Bis-Tris 겔 (Invitrogen) 상에 로딩하고, 니트로셀룰로오스 막 (Invitrogen)으로 옮겼다. 상기 막을 1xTBS 중의 5% 분유에서, RT 에서, 1 시간 동안 차단시켰다. 시료 내 인산화된 cJun 및 총 cJun 의 수준을 모두 결정하기 위해, 상기 막을 동시에 0.1% Tween® 20 (Roche Biochem)을 함유한 오딧세이 차단 완충액 (Li-cor) 중의 토끼 항-p-cjun 및 마우스 항- 총 cJun 항체 (Cell Signaling)를 사용하여, 4℃ 에서, 밤새 탐침시켰다.

상기 막을 0.1% Tween® 20 을 함유한 1xPBS 중에서 3 번 세정하였다. 2차 항체로서, IRDye 700 염소 항-마우스 IgG (Rockland) 및 IRDye 800 염소 항-토끼 IgG (Rockland)를 오딧세이 차단 완충액 중의 1:6500 의 희석액으로 사용하였다. 상기 막 Blot 을 스캔하고, 오딧세이 적외선 카메라 (Li-cor Cat. No.9201)를 사용하여 정량화하였다.

p-c-Jun 대 총 c-Jun 의 표준화 강도를 Microsoft Excel 의 Xlfit3 프로그램을 사용하여, IC₅₀ 계산을 위해 사용하였다. IC₅₀ 값은 억제제 농도 대 % 억제의 그래프로부터 내삽하였다.

실시예 30

시험관 내 JNK 검정

JNK 활성을 [γ-³³P] ATP 를 사용하여 GST-ATF2 (19-96)의 인산화에 의해 측정하였다. 효소 반응을 25 mM 헤페스, pH 7.5, 2 mM 디티오트레이톨, 150 mM NaCl, 20 mM MgCl₂, 0.001% Tween® 20, 0.1% BSA 및 10% DMSO 를 함유한 완충액 중의 40 μl 의 최종 부피에서, 기질 및 ATP 의 Km 농도에서 수행하였다. 인간 JNK2α2 검정은 1 μCi [γ-³³P] ATP 와 함께 1nM 효소, 1 μM ATF2, 8 μM ATP 를 함유하였다. 인간 JNK1α1 검정은 1 μCi [γ-³³P] ATP 와 함께 2 nM 효소, 1 μM ATF2, 6 μM ATP 를 함유하였다. 인간 JNK3 (Upstate Biotech #14-501M) 검정은 1 μCi [γ-³³P] ATP 와 함께 2 nM 효소, 1 μM ATF2, 4 μM ATP 를 함유하였다. 효소 검정을 10 개의 화합물 농도의 존재 또는 부재에서 수행하였다. JNK 및 화합물을 10 분 동안 예비인큐베이션하였다. 그 후, 효소 반응을 ATP 및 기질의 첨가에 의해 개시하였다. 상기 반응 혼합물을 30℃ 에서, 30 분 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션의 종결에서, 상기 반응을 25 μl 의 상기 반응 혼합물을 135 mM EDTA 를 함유한 150 μl 의 10% 글루타티온 세파로오스 슬러리 (Amersham # 27-4574-01)에 옮겨 종결시켰다. 상기 반응 생성물을 친화 수지 상에서 포획하고, 여과 플레이트 (Millipore, MABVNOB50) 상에서 포스페이트 완충 식염수로 6 번 세정하여, 유리된 방사성 뉴클레오티드를 제거하였다. 그 후, ³³P 의 ATF2 로의 혼입을 미세플레이트 신틸레이션 계수기 (Packard Topcount) 상에서 정량화하였다. JNK 에 대한 화합물 억제 효능을 3-변수 모델로 피팅한 10 개 농도 억제 곡선으로부터 제공된 IC₅₀ 값으로 측정하였다: % 억제 = 최대/(1+ (IC₅₀/[억제제])^기울기). 데이타를 변수 추정을 위해 Microsoft Excel 로 분석하였다.

실시예 31

래트 생체 내의 TNFα-유도 IL-6 생성 검정

찰스리버사(Charles River Laboratories)로부터 입수한 암컷 위스타-한(Wistar-Han) 래트를 사용 전 1 주일 동안 순응시키고, 대략 95-130g 의 체중에 이르게 하였다. 래트에 0.5 μg 의 재조합된 래트 TNF-α (Biosource)의 복강 내 접종 30 분 전에, 경구 위관섭식(gavage), 피하 주사 또는 정맥 내 주사 (꼬리 정맥)를 통해 시험 화합물을 투여하였다. 채혈을 TNF-α접종 90 분 후, 심장천 자를 통해 수집하였다. 혈장을 리튬 헤파린 분리 튜브 (BD microtainer)를 사용하여 제조하고, 및 분석할 때까지 -80℃ 에서 동결시켰다. IL-6 수준을 래트 특이 IL-6 ELISA 키트 (Biosource)를 사용하여 결정하였다. % 억제 및 ED₅₀ 값 (TNF-α 생성이 대조군 값의 50% 인 지점에서의 화합물의 용량으로서 계산함)을 결정하였다.

실시예 32

설치류 콜라겐 유도성 관절염

할란사(Harlan Laboratories)로부터 입수한 생후 7-8 주의 암컷 루이스(Lewis) 래트를 사용 전 1 주일 동안 순응시키고, 대략 120-140 g 의 체중에 이르게 하였다. 실험 당일에, 래트에 프로인트 불완전 애주번트(Incomplete Freund's adjuvant) 중의 100 μg 소 II 형 콜라겐 (Chondrex)의 에멀젼을 사용하여 등의 몇몇 부위에 피내 초회자극하였다 (IFA; 2-3 부위에 총 0.1 ml). 관절염 유도는 일반적으로 초회자극으로부터 12-14 일 후에 관찰되지만; 100 μg 콜라겐/IFA 의 촉진 주사를 꼬리의 바닥에 또는 등의 다른 부위에 7-10 일 근처에 투여하여 (총 0.1 ml 이하로 피내로), 동시에 질환을 유도하였다. 화합물 투여는 예방적 (촉진시 또는 1-2 일 전에 시작) 또는 치료적 (촉진 후 시작 및 초기 질환 점수 1-2 와 일치 - 하기 임상소견 점수화 참조)일 수 있다. 동물들을 그 후 21 일에 걸쳐 질환의 발전 및 진행에 대해 평가하였다.

래트를 점수화 시스템 (하기에 기술) 사용, 체적변화유량계를 사용하여 각각 의 발에 대한 발 부피 측정, 또는 캘리퍼스로 발 또는 관절 두께를 측정함으로써 평가하였다. 기준선 측정은 실험 당일 및 첫 번째 징후 또는 부종의 시작에서부터 다시 시작하여 실험의 종결 때까지 주 당 3 번 이하로 수행하였다. 점수화는 각각의 발에 대하여 하기에 따라 평가하였다.

1 = 발 또는 발가락 하나의 부종 및/또는 발적.

2 = 둘 이상의 관절에서의 부종.

3 = 둘 이상의 관절이 포함된 발의 심한 부종.

4 = 발 및 발가락 전체의 심각한 관절염.

각각의 래트에 대한 관절염 지수는 각각의 발의 4 개의 점수를 더하고, 최대 점수 16 점을 부여하여 평가하였다. 질환 발병 및 진행을 연속적으로 측정하기 위해, 뒷발의 발 부피 또한 체적변화유량계를 사용하여 측정하였다.

연구의 끝으로, 뒷발 (및 기타 조직)의 중량 측정, 조직학, 세포적 및/또는 분자적 분석을 수행하였다. 또한, 채혈을 심장천자를 통해 수행하고, 혈장을 리튬 헤파린 분리 튜브 (BD microtainer)를 사용하여 준비 및 분석 때까지 -80℃ 에서 동결시켰다. 혈장 또는 균질 관절 조직으로부터의 염증성 시토킨 수준 (예컨대, TNF-α, IL-1 및 IL-6)을 래트-특이 ELISA 키트 (R&D)를 사용하여 결정하였다. 질환 보호 또는 억제의 수준을 대조군 동물과 비교하여, 임상소견 점수, 발 부피 및 조직병리학에서의 변화의 복합으로서 결정하였다.

실시예 33

TNFα-유도성 인간 연골육종 SW1353 세포에서의 IL-8 생성 검정

SW1353 세포를 American Tissue Culture Collection 으로부터 구입하고, 5% CO₂ 중의 37℃ 배양 조건 하에서, 10% 소태아 혈정 (Invitrogen), 아스코르브산 (Sigma) 및 페니실린 (Invitrogen)을 함유한 DMEM 배지 (Invitrogen)로 이루어진 성장 배지 중에 유지시켰다. 세포를 화합물 처리 48 시간 전, 100 μl 의 배지 중에서 웰 당 1.0 x 10⁴ 세포의 밀도로 플레이팅하였다. 화합물 처리 직전에, 배지를 160 μl 의 새로운 배지로 대체하였다. 화합물 저장액 (10 mM)을 성장 배지 중에서 희석하고, 20 μl 부피 중의 10 배 농축 용액으로서 각각의 웰에 첨가하고, 혼합하고, 세포와 함께 30 분 동안 예비인큐베이션하였다. 화합물 비히클 (DMSO)은 모든 시료 중에서 1% 의 최종 농도로 유지하였다. 30 분 후, 세포를 10 ng/ml 의 TNF-α (Roche Biochem)를 사용하여 활성화시켰다. TNF-α 를 성장 배지 중에서 제조된 10 배 농축 용액으로서 첨가하였으며, 웰 당 20 μl 부피로 첨가하였다. 세포 플레이트를 5 시간 동안 배양하였다. 세포 배지를 수득하고, -20℃ 에서 보관하였다. 배지 분취량을 IL-8 존재 여부에 대해, 제조업자의 지시에 따라 (BD Bioscience) 샌드위치(sandwich) ELISA 로 분석하였다. IC₅₀ 값을 Microsoft Excel 프로그램 중 Xlfit3 을 사용하여, IL-8 생성이 대조군 값의 50% 로 감소된 지점에서의 화합물의 농도로서 계산하였다. 특정 화합물은 상기 검정에서 0.1-20 μM 의 범위의 IC₅₀ 값을 가졌다.

Claims (36)

1. 하기 식의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:

   

   [식 중,

   R 은 저급 알킬, 히드록시 저급 알킬, 또는 하기로부터 선택되는 라디칼이고:

   

   이때, 각각의 R^a 는 독립적으로 H, 저급 알킬, OH, 또는 히드록시-저급 알킬이고;

   각각의 R^b 는 독립적으로 H, 저급 알킬, 할로, 니트로, 또는 할로-저급 알킬이고;

   p 는 1, 2, 3, 또는 4 이고;

   X 는 O, CR⁴R⁵, C(=O), 또는 S(O)_x 이고;

   R¹ 는 수소, 할로, 알킬, 또는 NH₂ 이고;

   각각의 R³ 은 독립적으로 할로, -NO₂, 저급 알킬, -CN, -OR⁷, -NR⁸R⁹, -C(O)-R⁷, -O-C(O)-R⁷, -CF₃, -CHF₂, -SO₂-R¹⁰, 또는 두 개의 R³ 은 알킬렌 디옥시를 형성하고;

   R⁴ 은 수소, 저급 알킬, 시아노, -(CH₂)_nOR⁷, -(CH₂)_nNR⁸R⁹, -(CH₂)_n-C(O)-NR⁸R⁹, -(CH₂)_n-OC(O)-NR⁸R⁹, -(CH₂)_n-C(O)-OR⁷; -NR⁷-SO₂-R¹⁰, -(CH₂)_n-NR⁸-C(O)-R¹¹, 또는 -(CH₂)_n-NR⁸-C(O)-OR⁶ 이고;

   R⁵ 는 수소 또는 알킬이고;

   또는 R⁴ 및 R⁵ 는 함께 알킬렌 디옥시를 형성하고;

   R⁶ 은 수소, 저급 알킬, 헤테로알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴알킬, 또는 -NR⁸R⁹ 이고;

   R¹⁰ 은 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴알킬, 또는 -NR⁸R⁹ 이고;

   R¹¹ 은 알킬, 시클로알킬, 헤테로알킬, 또는 (헤테로시클릴)알킬이고;

   R² 및 R⁷ 은 각각 독립적으로 수소 또는 저급 알킬이고;

   R⁸ 은 수소, 저급 알킬, 또는 아실이고;

   R⁹ 는 수소, 저급 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클릴, 시클로알킬이고;

   또는 R⁸ 및 R⁹ 는 이들이 연결된 질소 원자와 함께, 하나 이상의 질소 환 원자를 포함하고, 임의로 OH, 옥소, 저급 알킬, 저급 알콕시, 또는 아실로 치환된 헤테로시클릴을 형성하고;

   각각의 m 및 x 는 독립적으로 0 내지 2 의 정수이고 ;

   Y 는 수소, -(CH₂)_n-OR⁷, -(CH₂)_n-C(O)-R⁷ 또는 -(CH₂)_n-C(O)-OR⁷ 이고;

   각각의 y 및 z 는 독립적으로 0 또는 1 이고;

   n 은 0 내지 4 의 정수임].
2. 제 1 항에 있어서, 식 중 R² 는 수소 또는 메틸인 화합물.
3. 제 1 항에 있어서, 식 중 m 은 0 인 화합물.
4. 제 1 항에 있어서, 식 중 R¹ 은 수소, 메틸, 클로로, 또는 플루오로인 화합물.
5. 제 1 항에 있어서, 식 중 X 는 CR⁴R⁵ 인 화합물.
6. 제 5 항에 있어서, 식 중 R⁵ 는 수소 또는 메틸인 화합물.
7. 제 5 항에 있어서, 식 중 z 는 1 이고, R⁴ 는 -NR⁷-SO₂-R¹⁰ 인 화합물.
8. 제 7 항에 있어서, 식 중 R⁷ 은 수소 또는 메틸이고, R¹⁰ 은 메틸, 에틸, 또는 -N(CH₃)₂ 인 화합물.
9. 제 5 항에 있어서, 식 중 z 는 1 이고, R⁴ 는 수소, 저급 알킬, 시아노, -(CH₂)_nOR⁷, 또는 -(CH₂)_nNR⁸R⁹ 이고, 또는 R⁴ 및 R⁵ 는 함께 알킬렌 디옥시를 형성하는 화합물.
10. 제 9 항에 있어서, 식 중 R⁴ 는 -(CH₂)_nOR⁷ 이고, n 은 0 또는 1 이고, R⁷ 은 수소 또는 메틸인 화합물.
11. 제 9 항에 있어서, 식 중 R⁴ 는 -(CH₂)_nNR⁸R⁹ 인 화합물.
12. 제 11 항에 있어서, 식 중 n 은 0 이고, R⁸ 은 수소이고, R⁹ 는 수소, 피리미딘-2-일, 또는 피리딘-2-일인 화합물.
13. 제 11 항에 있어서, 식 중 n 은 0 이고, R⁸ 및 R⁹ 는 이들이 연결된 질소 원자와 함께 2,5-디옥소-피롤리딘-1-일을 형성하는 화합물.
14. 제 9 항에 있어서, 식 중 R⁴ 는 수소, 메틸, 에틸, 또는 시아노인 화합물.
15. 제 9 항에 있어서, 식 중 R⁴ 및 R⁵ 는 함께 에틸렌 디옥시를 형성하는 화합물.
16. 제 5 항에 있어서, 식 중 z 는 1 이고, R⁴ 는 -(CH₂)_n-NR⁸-C(O)-R¹¹ (이때, n, R⁸, 및 R¹¹ 은 제 1 항에 정의된 바와 같은 것임)인 화합물.
17. 제 16 항에 있어서, 식 중 n 는 0 이고, R⁸ 은 수소 또는 메틸이고, R¹¹ 은 메틸, 에틸, 메톡시메틸, 히드록시메틸, (모르폴린-4-일)메틸, 또는 (4-메틸-피페라진-1-일)메틸인 화합물.
18. 제 5 항에 있어서, 식 중 z 는 1 이고, R⁴ 는 -(CH₂)_n-C(O)-NR⁸R⁹ 인 화합물.
19. 제 18 항에 있어서, 식 중 n 은 0 이고, R⁸ 및 R⁹ 는 이들이 연결된 질소 원자와 함께 모르폴린-4-일, 피롤리딘-1-일, 또는 4-메틸-피페라진-1-일을 형성하는 화합물.
20. 제 18 항에 있어서, 식 중 n 은 0 이고, R⁸ 은 수소 또는 메틸이고, R⁹ 는 (2-아미노-2-메틸)프로필, (2-히드록시)에틸, 테트라히드로피란-4-일, 시클로프로필, 또는 에틸인 화합물.
21. 제 5 항에 있어서, 식 중 z 는 1 이고, R⁴ 는 -(CH₂)_n-C(O)-OR⁷ 인 화합물.
22. 제 21 항에 있어서, 식 중 n 은 0 이고, R⁷ 은 수소 또는 메틸인 화합물.
23. 제 5 항에 있어서, 식 중 R⁴ 및 R⁵ 는 수소이고, z 는 0 이고, y 는 1 이고, Y 는 시클로펜틸 환 잔기의 3-위치 상의 히드록시인 화합물.
24. 제 5 항에 있어서, 식 중 R⁴ 및 R⁵ 는 수소이고, z 는 1 이고, y 는 1 이고, Y 는 시클로헥실 환 잔기의 2-위치 상의 히드록시, 히드록시메틸, 또는 -CO₂CH₂CH₃ 기인 화합물.
25. 제 1 항에 있어서, 식 중 z 는 1 이고, X 는 O, C(=O), 또는 SO₂ 인 화합물.
26. 제 2 항에 있어서, 식 중 R 은

    

    이고, z 는 1 이고, X 는 O 또는 CR⁴R⁵ 인 화합물.
27. 제 26 항에 있어서, 식 중 X 는 O 인 화합물.
28. 제 26 항에 있어서, 식 중 X 는 CR⁴R⁵ 인 화합물.
29. 제 28 항에 있어서, 식 중 R⁴ 는 -OH, -OR⁷, -C(O)NR⁸R⁹, -NR⁸R⁹, 또는 -NR⁷SO₂R¹⁰ 인 화합물.
30. 하기 단계를 포함하는 식 (Ia)의 화합물의 제조 방법:

    

    식 (II)의 화합물,

    

    또는 식 (III)의 화합물을,

    

    RNH₂ 와 반응시키는 단계를 포함하는 방법,

    [이때, R, R1 및 R3 은 제 1 항에 정의된 바와 같고, Y 는 Cl 또는 SMe 이고, Z 는 MeSO₂ 또는 Cl 임].
31. 제 1 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항의 화합물 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물.
32. 제 1 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 있어서, 치료 물질로서 사용되는 화합물.
33. 제 1 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항의 화합물의, c-Jun N-말단 키나아제 매개 장애의 치료적 및 예방적 처치를 위한 약제의 제조를 위한 용도.
34. 제 33 항에 있어서, c-Jun N-말단 키나아제 매개 장애는 자가면역 장애, 염 증성 장애, 대사성 장애, 신경학적 질환, 또는 암인 용도.
35. 제 34 항에 있어서, c-Jun N-말단 키나아제 매개 장애는 류마티스 관절염, 천식, 제 II 형 당뇨병, 알츠하이머병, 파킨슨병 또는 뇌졸중인 용도.
36. 특히 신규 화합물, 중간체, 약제, 용도 및 방법에 관한, 앞서 정의된 바와 같은 본 발명.