KR20080031201A - 병원성 미생물에 대해 피부를 보호하기 위한 방법 및 수단 - Google Patents

병원성 미생물에 대해 피부를 보호하기 위한 방법 및 수단 Download PDF

Info

Publication number
KR20080031201A
KR20080031201A KR1020077029941A KR20077029941A KR20080031201A KR 20080031201 A KR20080031201 A KR 20080031201A KR 1020077029941 A KR1020077029941 A KR 1020077029941A KR 20077029941 A KR20077029941 A KR 20077029941A KR 20080031201 A KR20080031201 A KR 20080031201A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
microorganism
skin
growth
microorganisms
lactobacillus
Prior art date
Application number
KR1020077029941A
Other languages
English (en)
Other versions
KR101398347B1 (ko
Inventor
크리스틴 랑
안드레아스 하일만
마르쿠스 벤
엑카르트 부데
메웨스 뵈트너
안드레아스 라인들
롤프 크뇔
Original Assignee
오르가노발란스 게엠베하
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 오르가노발란스 게엠베하 filed Critical 오르가노발란스 게엠베하
Publication of KR20080031201A publication Critical patent/KR20080031201A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101398347B1 publication Critical patent/KR101398347B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/22—Bacillus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/16—Emollients or protectives, e.g. against radiation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/02—Local antiseptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
    • A61Q17/005—Antimicrobial preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/38—Chemical stimulation of growth or activity by addition of chemical compounds which are not essential growth factors; Stimulation of growth by removal of a chemical compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K2035/11—Medicinal preparations comprising living procariotic cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C12R2001/24—Lactobacillus brevis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Toxicology (AREA)

Abstract

첫번째 양상에서, 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 자극할 수 있고 일과성 병원성 미생물총의 미생물의 성장은 자극하지 않는 미생물이 기술된다. 두번째 양상에서, 일과성 병원성 피부 미생물총의 생물의 성장을 억제할 수 있고 상주성 미생물총의 미생물의 성장은 억제하지 않는 미생물이 기술된다. 이같은 미생물을 포함하는 조성물, 뿐만 아니라 이같은 미생물의 화장용, 예방용 또는 치료용 적용에서의 용도가 또한 기술된다.
피부 보호용 미생물, 락토바실루스 종, 상주성 피부 미생물, 표피 포도상구균, 일과성 병원성 미생물, 황색 포도상구균

Description

병원성 미생물에 대해 피부를 보호하기 위한 방법 및 수단{METHODS AND MEANS FOR PROTECTING THE SKIN AGAINST PATHOGENIC MICROORGANISMS}
본 발명은 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 자극할 수 있고 일과성 병원성(病原性) 미생물총의 미생물의 성장은 자극하지 않는 미생물에 관한 것이다. 또한 본 발명은 이같은 미생물을 포함하는 조성물, 예를 들어, 화장용 또는 제약 조성물, 및 이같은 미생물의 화장용, 예방용 또는 치료용 적용에서의 용도에 관한 것이다.
인간의 피부에는 피부의 표면 상에 비교적 안정성인 조성물 내의 공생물로서 주로 생존하는 다양한 미생물이 거주한다 ([Roth and James, 1988]). 이러한 정상적인 피부 세균총은 "상주성 피부 세균총"으로 명명된다. 인간 피부의 주요 기능은 피부 밑의 조직을 환경에 대해 보호하는 것이다 ([Feingold, 1985]). 이러한 정상 피부 세균총은 잠재적으로 병원성인 미생물의 침입에 대해 피부를 특히 보호한다 ([Bisno, 1984]). 특정 미생물이 상주성 미생물총에서 우위를 차지한다. 표피 포도상구균(Staphylococcus epidermidis) (혈장응고효소 음성), 마이크로코쿠스(Micrococcus) 종, 디프테로이드균(Diphteroid) 및 프로피온산균(propionibacteria)이 상주성 미생물총의 미생물의 90％를 초과한다 ([Leyden et al., 1987]). 따라서, 천연 피부 세균총의 안정화는 피부 보호를 지지하고, 병원 체의 침입을 방지한다. 피부 건강이 증가한다. 천연 피부 세균총의 중요성이 여러 임상 연구에서 기술되었다. 이러한 피부 세균총이 아직 발달되지 않은 영아의 탄생 후 첫째날에 황색 포도상구균(Staphylococcus aureus) 감염 위험이 매우 높은 것으로 나타났다. 세균총의 발달이 증가하면서, 피부는 병원성 미생물에 의한 콜로니형성으로부터 보호된다 ([Hurst, 1959]). 또다른 영아 연구에서, 항생제 아목시실린으로의 치료 후 상주성 세균총이 격렬하게 (약 50％) 억제된 것이 관찰되었다. 이것으로 병원성 효모인 칸디다 알비칸스(Candida albicans)가 14배를 초과하여 증가하였다. 항생제 치료의 중단으로 상주성 세균총이 재생되었고, 칸디다 알비칸스가 억제되었다 ([Brook, 2000]).
상주성 피부 세균총의 미생물은 피부 표면 상의 부착 부위 및 필수 영양소에 대해 경쟁함으로써 병원성 미생물에 의한 콜로니형성을 방지한다 ([Sullivan et al. 2001]). 병원성 미생물은 특정 결합 단백질을 사용하여 표피 구조물에 특이적으로 부착될 수 있다. 이러한 문맥에서, 여러 메커니즘이 공지되어 있다. 예를 들어, 황색 포도상구균으로부터, 특이적 부착소가 공지되어 있다. 이는 병원성 미생물이 피브로넥틴 구조물에 부착되도록 한다. 일반적으로 병원체는 숙주에 부착하는 잠재력이 더 높다. 이는 이러한 미생물의 발병력을 설명한다 ([Gibbons and Houte, 1975]).
병원성 미생물에 의한 콜로니형성의 위험은 피부 표면 상에 작은 병변 또는 기타 손상이 있는 경우에, 특히 정상적인 피부 세균총이 항생제 또는 과도한 세정에 의해 손상되었을 때 격렬하게 증가한다 ([Elek, 1956]). 그러나, 상주성 피부 세균총은 영양소 이용에 관하여 피부에 더 잘 적응된다. 이는 상주성 피부 세균총의 장점에 이른다 ([Larson, 2001]). 이와는 별개로, 상주성 피부 세균총의 생물은 병원성 미생물과 싸우기 위해 항균성 물질을 생산할 수 있다. 이것 또한 영양소 및 에너지 공급원과 관련하여 상주성 미생물의 장점이다 ([Selwyn and Ellis, 1972]; [Milyani and Selwyn, 1978]).
또한, 피부가 분비하는 물질, 예컨대 복합 지질 (트리글리세리드)이 불포화 지방산으로 분해되고, 이는 화농성 연쇄구균(Streptococcus pyrogenes) 또는 그람 음성 세균 및 진균과 같은 병원성 미생물을 억제한다 ([Aly et al., 1972]).
피부 미생물총은 화장과 관련된 피부의 여러 인자에 영향을 미친다. 이는 피부의 pH 값, 장벽 기능 및 지질 함량이다. 표피 포도상구균은 pH 값을 낮춤으로써 (약 4-6) 병원성 미생물과 싸울 수 있다. 병원체는 감소된 pH 값에서 성장할 수 없다 ([Korting et al., 1990]; [Lukas, 1990]; [Korting, 1992]; [Yosipovitch and Maibach, 1996]; [Gfatter et al., 1997]).
피부의 수분 장벽 기능 및 지질 함량은 각질층의 세라마이드 함량에 좌우된다 ([Imokawa et al., 1986]). 세라마이드 함량의 저하는 피부 건조 및 균열을 야기한다. 이러한 피부 외양을 갖는 아토피 피부염 환자의 연구는 피부 미생물총이 극적으로 황색 포도상구균으로 변화되는 것을 나타냈다. 이러한 병원체는 매우 높은 세라마이드분해효소 활성을 특징으로 하는 반면, 상주성 피부 세균총의 정상적인 공생물은 이러한 활성을 갖지 않는다. 피부에 세라마이드가 방출되도록 하는 스핑고마이엘린분해효소 활성은 아토피 피부염 환자의 상주성 및 병원성 세균총에 서 유사하다 ([Ohnishi et al., 1999]).
따라서, 병원성 미생물에 대해 피부, 특히 인간 피부를 보호하도록 하는 수단 및 방법이 요구된다.
본 발명은 이러한 요구를 다루고, 병원성 미생물에 의한 콜로니형성에 대해 피부를 포함하는 미생물 및 방법을 제공한다. 특히, 본 발명은 청구항에서 특징화된 바와 같은 실시양태들을 제공한다.
따라서, 첫번째 양상에서 본 발명은 상주성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장을 자극할 수 있고 일과성 병원성 미생물총의 미생물의 성장은 자극하지 않는 미생물에 관한 것이다.
본 발명자들은 병원성 미생물에 의한 콜로니형성에 대한 효과적인 피부 보호가 상기 기술된 미생물 또는 이의 불활성화 형태를 피부에 투여함으로써 달성될 수 있다는 것을 뜻밖에 발견하였다. 본 발명자들은 최초로 상응하는 미생물을 확인하였고, 이의 확인 방법을 제공하였다. 이러한 미생물은 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 특이적으로 자극함으로써 천연 피부 세균총을 재생 및 안정화시킬 수 있다. 이에 의해, 병원성 미생물의 성장이 억제된다. 또한, 피부 미생물총 내로의 병원성 미생물의 진입이 방지될 수 있다. 본 발명의 미생물은, 예를 들어, 피부의 상부층 내의 미생물이 세정에 의해 제거되었을 때 피부의 더 깊은 각질층 내의 상주성 미생물총을 자극하도록 한다.
다수의 상이한 미생물이 피부 상에 존재한다. 일부는 피부의 정상적인 (상주성) 세균총에 속하고 무해한 공생물이고, 일부는 잠재적인 병원체이다.
기본적으로, 피부 상의 생물은 2가지 카테고리로 분류될 수 있다: 1. 상주성 생물: 상주성 생물은 피부, 각질층의 표면 상에, 그리고 표피의 외부층 및 피부 및 모낭의 더 깊은 틈새 내에 콜로니를 형성하는 피부의 영구적인 서식체이다. 상주성 피부 미생물총의 이러한 미생물들은 피부 조직을 침범하거나 손상시키지 않으면서 피부 상에서 성장 및 번식할 수 있다. 세정은 심부 피부 영역 내의 이러한 생물들을 쉽게 제거하지 않는다. 상주성 미생물은 무해한 공생물이다.
2. 일과성 생물: 일과성 생물은 피부 상에 침착되지만 피부에서 번식하지 않는 미생물 또는 피부 상에서 번식하고 단기간 동안 지속되는 공생물이다. 이는 미세환경이 상주성 미생물총에 의해 크게 결정되는 건강한 피부 상에서 영구적으로 정주할 수 없다. 일과성 생물은 잠재적으로 병원성이다.
따라서, 용어 "상주성 피부 미생물총"은 건강한 피부, 바람직하게는 인간 피부 상에서 정상적으로 발견될 수 있고 피부 상에서 발견되는 미생물의 대부분을 구성하는 미생물에 관한 것이다.
특히, 용어 "상주성 피부 미생물총"은 피부, 각질층의 표면 상의, 그리고 표피의 외부층 및 피부 및 모낭의 더 깊은 틈새 내의 영구적인 서식체인 미생물에 관한 것이다. 이러한 미생물은 피부 조직을 침범하거나 손상시키지 않으면서 피부 상에서 성장 및 번식할 수 있는 것을 특징으로 한다. 이러한 미생물의 특징은 세정이 심부 피부 영역 내의 이들을 쉽게 제거하지 않는다는 것이다. 상주성 피부 미생물총의 미생물은 무해한 공생물이다.
바람직하게는 용어 "상주성 피부 미생물총"은 피부, 바람직하게는 인간 피부 상에서 발견될 수 있는 호기성 및 혐기성 미생물의 세균총에 관한 것이다. 더욱 바람직하게는, 이는 표피 포도상구균 (혈장응고효소 음성), 마이크로코쿠스 종, 디프테로이드균 및 프로피온산균을 포함하는 미생물의 세균총에 관한 것이다. 전형적으로, 호기성 상주성 피부 미생물총의 약 90％는 표피 포도상구균으로 구성된다. 나머지 약 10％는 주로 마이크로코쿠스 종 (80％ 마이크로코쿠스 루테우스(Micrococcus luteus)) 및 디프테로이드균 (13％)으로 구성된다. 용어 "디프테로이드균"은 코리네박테리움(Corynebacterium) 속에 속하는 광범위한 세균을 의미한다. 편의상, 피부의 디프테로이드균은 하기의 4가지 군으로 카테고리화되었다: 친지성 또는 비-친지성 디프테로이드균; 혐기성 디프테로이드균; 포르피린을 생산하는 디프테로이드균. 혐기성 피부 미생물총의 주요 대표물 (90％)은 프로피온산균이다; 특히 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acnes), 프로피오니박테리움 그라눌로숨(P. granulosum) 및 프로피오니박테리움 아비둠(P. avidum)이 피부로부터 단리될 수 있다. 혐기성 세균총은 전체 상주성 피부 세균총의 약 4％를 차지한다.
더욱 바람직하게는, 이러한 미생물총의 미생물의 90％ 초과가 표피 포도상구균, 마이크로코쿠스 종, 디프테로이드균 및 프로피온산균에 속한다. 더욱 더 바람직하게는, 상주성 피부 미생물총은 주요 구성성분이 표피 포도상구균인 것을 특징으로 한다.
피부 미생물총의 구성성분 및 조성이, 예를 들어 스카치 테이프로 피부 상부층을 박리함으로써, 정량적 및 정성적으로 결정될 수 있다. 상주성 피부 미생물총 의 미생물은 스카치 테이프에 의해 예를 들어 박리된 10개의 상부 피부 층 내에서 확인될 수 있다. 예를 들어, 이러한 미생물들을 단리하기 위해, 6개의 2 ㎠ 스카치 테이프를 한정된 영역의 피부, 바람직하게는 팔뚝 상에 각각 눌러 붙인 후, 각각의 테이프 스트립을 피부로부터 그람 양성 세균용 (예를 들어 BHI, Difco Inc.) 또는 그람 음성 세균용 (예를 들어 MacConkey 한천, Difco Inc.) 선택 배양 한천 플레이트 또는 효모 및 진균용 선택 배양 한천 (예를 들어 Plate Count Agar, Difco Inc.)으로 옮긴다. 그 후, 피부로부터 배양 한천 플레이트로 옮겨진 미생물을 30℃ 및 37℃에서, 약 24시간 동안 호기성 및 혐기성 배양시킨다. 콜로니 형성 단위를 정성적 분석을 위해 형태학적 및 생화학적 방법에 의해, 그리고 정량을 위해 카운팅에 의해 결정한다. 상대적인 조성 및 전체 세포 카운트를 결정한다. 당업자는 당업계에 공지된 방법에 의해 상기 기술된 바와 같이 단리된 상주성 피부 미생물총의 미생물의 속 및/또는 종을 결정할 수 있다. 예를 들어, 당업자는 대사 발자국법(footprinting), 지방산 조성 및 세포벽의 조성 등에 의해 상기 미생물을 확인할 수 있다.
용어 "피부"는 당업자에게 공지된 바와 같이 신체의 외부 덮개를 지칭한다. 바람직하게는, 이 용어는 3가지 층에 관한 것이다: 표피, 진피 및 피하 지방 조직. 표피는 피부의 최외층이다. 이는 전형적으로 신체 표면 전반에 걸쳐 방수성의 보호 싸개를 형성하고, 바닥판이 밑에 깔린, 층을 이룬 편평상피로 구성된다. 이는 일반적으로 혈관을 함유하지 않고, 진피로부터의 확산에 의해 영양이 공급된다. 표피를 구성하는 세포의 주요 유형은 각질형성세포이고, 멜라닌세포 및 랑게르한 스(Langerhans) 세포 또한 존재한다. 표피는 여러 층으로 분할되고, 이때 세포는 최내층에서 유사분열을 통해 형성된다. 세포들은 분화됨에 따라 형상 및 조성이 변하면서 위쪽 층으로 상승하고, 각질로 채워지게 된다. 마침내 세포는 각질층으로 칭해지는 최상층에 도달하고, 떨어지거나 또는 벗겨지게 된다. 표피의 최외층은 죽은 세포의 25 내지 30개의 층으로 구성된다. 통상적으로, 표피는 5개의 하층(sublayer) 또는 층으로 분할된다 (표면에서 심부쪽으로): 각질층, 투명층, 과립층, 가시층, 및 배아층 또는 기저층. 전형적으로, 표피와 진피 간의 계면은 불규칙적이고, 유두의 연속물 또는 손가락모양의 돌출물로 구성되는데, 이는 피부가 얇은 곳에서 가장 작고 손바닥 및 발바닥 피부에서 가장 길다. 전형적으로, 손바닥 및 발바닥의 유두는 표피의 상승과 관련되고, 이는 융기를 생성시킨다. 피하 지방 조직은 피부의 최심층이다. 이러한 층의 특징은 연결 조직, 혈관 및 지방 세포로 구성된다는 것이다. 전형적으로, 이러한 층은 피부를 하부 구조물에 결합시키고, 신체를 추위로부터 단열시키고, 지방의 형태로 에너지를 저장한다. 일반적으로, 피부는 심부 조직 상에서의 물리적, 화학적 및 세균 작용제의 작용에 대해 보호 장벽을 형성한다. 이는 구강 또는 질 영역에 예를 들어 속하는 조직 또는 점막이 피부에 속하지 않는다는 것을 의미한다. 바람직한 실시양태에서, 용어 "피부"는 신체 덮개의 최외층, 즉 표피에 관한 것이다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 용어 "피부"는 표피의 각질층에 관한 것이다. 더욱 더 바람직한 실시양태에서, 용어 피부는 표피의 죽은 세포의 가장 바깥쪽의 25 내지 30개의 층에 관한 것이다. 가장 바람직한 실시양태에서, 용어 "피부"는 표피의 죽은 세포의 가장 바깥쪽의 10개의 층에 관한 것이다.
상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장과 관련된 용어 "자극하다"는 본 발명에 따른 미생물과 접촉되었을 때 1가지 이상의 이러한 미생물의 성장이 증가된다는 것을 의미한다. 성장 증가는 바람직하게는 증식, 즉 시간 단위 당 세포 분할에서의 증가를 의미한다. 별법적으로, 용어 "자극하다"는 개별적인 세포 크기에서의 증가를 또한 지칭한다. 세균 세포 크기는 SYBR Green I (Molecular Probes, USA) 염료로 염색한 후 유세포 분석법 (예를 들어 Becton-Dickinson FACSort 유세포 분석기, San Jose, CA)에 의해 평가할 수 있다. 세균 세포 크기는 측방 광 산란 (SSC: Side-Angle Light Scatter) 모드로 평가된다.
따라서 성장 증가는 시간 단위 당 생물량(biomass) 생산에서의 증가를 의미한다.
상주성 피부 미생물총의 미생물(들)의 성장 자극이 바람직하게는 시험관 내에서, 더욱 바람직하게는 본 발명에 따른 미생물이 상주성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물과 접촉되고 이러한 상주성 피부 미생물총의 미생물(들)의 성장이 결정되는 분석법에서 관찰될 수 있다. 여러 시간 간격의 인큐베이션 후 세포/콜로니의 수를 카운팅함으로써 성장을 결정할 수 있고, 본 발명에 따른 미생물을 함유하지 않는 대조군과 비교할 수 있으며, 이에 의해 성장에서의 증가 여부가 결정된다.
성장 자극을 결정하기 위한 시험관내 분석법은 실시예에 기술되고, 소위 "시험관내 홀(hole) 플레이트 분석법"을 포함한다. 간략하게, 이같은 분석법은 하기의 단계들을 포함한다:
- 상주성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물을 배양하고, 각각의 미생물(들)의 성장 및 바람직하게는 검출을 위한 적절한 한천 배지를 함유하는 준비된 한천 플레이트 상에 이를 균일하게 스프레딩(spreading)하는 단계;
- 접종된 한천 플레이트 내에 홀을 제공하는 단계;
- 본 발명에 따른 미생물의 예비배양 세포로 홀을 채우는 단계;
- 상주성 피부 미생물총의 미생물(들)이 성장되도록 하는 조건 하에 적합한 시간 동안 한천 플레이트를 인큐베이션하는 단계; 및
- 본 발명에 따른 미생물을 함유하는 홀을 둘러싸는 상주성 피부 미생물총의 미생물(들)의 성장을 결정하고, 이를 본 발명에 따른 미생물을 함유하지 않는 홀을 둘러싸는 미생물(들)의 성장과 비교하는 단계.
마지막 단계에서의 성장 결정은 세포 및/또는 콜로니의 수를 결정하기 위한 입수가능한 수단 및 방법에 의해, 예를 들어 적합한 염료로 염색하고 세포/콜로니를 현미경 하에 카운팅함으로써 및/또는 광학 수단 예컨대 농도계측기에 의해 실행될 수 있다.
더욱 더 바람직하게는, 상주성 피부 미생물총의 미생물(들)의 성장 자극을 원위치 피부 분석법에서 또한 관찰할 수 있다. 이같은 분석법은 실시예에 기술되고, 간략하게, 하기의 단계들을 포함한다:
- 상주성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물을 배양하고, 이를 테스트 개체의 피부 구역 상에 균일하게 스프레딩하는 단계;
- 상주성 피부 미생물총의 미생물(들)이 스프레딩된 구역 내의 점 구역에 분취량의 본 발명에 따른 미생물을 적용하는 단계;
- 상주성 피부 미생물총의 미생물(들)이 성장되도록 하기에 충분한 시간 동안 피부를 인큐베이션하는 단계;
- 내부에 포함된 미생물을 포함하여 상부 피부 층을 적합한 성장 배지를 함유하는 한천 플레이트로 옮기는 단계;
- 상주성 피부 미생물총의 미생물(들)이 성장되도록 하는 기간의 시간 동안, 그리고 조건 하에 한천 플레이트를 인큐베이션하는 단계;
- 본 발명에 따른 미생물이 적용된 구역을 둘러싸는 상주성 피부 미생물총의 미생물(들)의 성장을 결정하고, 이를 본 발명에 따른 미생물이 적용되지 않은 대조군에서의 미생물(들)의 성장과 비교하는 단계.
이러한 분석법에 사용된 피부 구역은 개체, 바람직하게는 인간 개체의 피부의 임의의 적절한 구역일 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 이는 인간 개체의 팔뚝의 피부 구역이다. 구역의 크기는 결정적이지 않고, 바람직하게는 약 1 내지 40 ㎠, 더욱 바람직하게는 5 내지 20 ㎠, 더욱 더 바람직하게는 5 내지 10 ㎠, 예를 들어 약 5,6, 7, 8, 9 또는 10 ㎠이다.
상주성 피부 미생물총의 미생물(들)은 구역 상에 균일하게, 바람직하게는 약 102 cfu/㎠ - 103 cfu/㎠의 밀도로 분포된다. 피부 상에 스프레딩된 미생물(들)은 공기 건조되고, 분취량의 본 발명에 따른 미생물이 구역 내에 점 방식으로 적용된다. 이는 당업자에게 공지된 수단에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따른 미생물을 원심분리한다 (15 분, 4000 × g). 세포 펠렛을 K/Na-완충제로 2회 세정한다 (각각 1 ㎖). 세포를 200 ㎕ K/Na 완충제에 재현탁시키고, 10 ㎕의 제조된 미생물을 예비-접종된 피부 구역 상에 마이크로피펫으로 점 적용한다.
피부의 인큐베이션은, 예를 들어 2 시간 동안, 바람직하게는 실온에서 일어난다. 내부에 포함된 미생물을 포함하여 상부 피부 층을 옮기는 것은, 예를 들어, 접착성 테이프 스트립을 사용하여 실행할 수 있다. 상부 피부 층이 옮겨진 한천 플레이트를 테스트되는 상주성 피부 미생물총의 미생물(들)이 성장되도록 하는 온도에서 인큐베이션하고, 이는 이러한 미생물(들)의 성장을 지지하는 것으로 공지된 성장 배지를 함유한다. 인큐베이션은 전형적으로 약 24시간 동안 일어난다. 미생물(들)의 성장은 당업자에게 공지된 방법에 의해 검출할 수 있다. 바람직하게는, 농도계측기에 의해 또는 분취량의 본 발명의 미생물이 적용된 점 주변에 형성된 콜로니를 카운팅함으로써 결정된다. 세균 세포 크기를 SYBR Green I (Molecular Probes, USA) 염료로 염색한 후 유세포 분석법 (예를 들어 Becton-Dickinson FACSort 유세포 분석기, San Jose, CA)에 의해 평가할 수 있다. 세균 세포 크기는 측방 광 산란 (SSC) 모드로 평가된다.
미생물은 시험관내 홀 플레이트 분석법에서 미생물이 첨가되지 않은 대조군과 비교하여 상주성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장이 적어도 5％, 바람직하게는 적어도 10％, 20％, 30％, 40％, 50％, 60％, 또는 70％, 더욱 바람직하게는 적어도 75％, 더욱 더 바람직하게는 적어도 80％, 가장 바람직하게는 적어도 85％ 증가되는 경우 상주성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 이같은 미생물의 성장을 자극하는 것으로 간주된다.
더욱 바람직하게는, 미생물은 원위치 피부 분석법에서 상주성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장이 적어도 5％, 바람직하게는 적어도 10％, 20％, 30％, 40％, 50％, 60％, 또는 70％, 더욱 바람직하게는 적어도 75％, 더욱 더 바람직하게는 적어도 80％, 가장 바람직하게는 적어도 85％ 증가되는 경우 상주성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 이같은 미생물의 성장을 자극하는 것으로 간주된다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 미생물은 상주성 피부 세균총의 주요 대표물, 즉 표피 포도상구균의 성장을 자극한다. "성장을 자극한다"라는 어구의 의미는 본원에서 상기 기술된 바와 같고, 바람직하게는 시험관 내에서의 자극, 더욱 바람직하게는 본원에서 상기 기술된 바와 같은 시험관내 홀 플레이트 분석법에서의 자극을 의미한다. 더욱 더 바람직하게는, 이는 본원에서 상기 기술된 바와 같은 원위치 피부 분석법에서의 자극을 의미한다. 가장 바람직하게는, 이는 시험관내뿐만 아니라 원위치 분석법에서의 자극을 의미한다. 시험관내 홀 플레이트 분석법 및 원위치 피부 분석법은 바람직하게는 실시예에 기술된 바와 같이 수행된다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 미생물은 마이크로코쿠스 종, 바람직하게는 마이크로코쿠스 루테우스의 성장을 또한 자극한다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 디프테로이드균, 바람직하게는 코리네박테리움 속에 속하는 세균의 성장이 또한 자극된다.
특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 미생물은 상주성 피부 미생물총의 모든 미생물의 성장을 자극한다.
본 발명에 따른 미생물은 일과성 병원성 미생물총의 미생물의 성장을 자극하지 않는 것을 또한 특징으로 한다. 용어 "일과성 병원성 미생물총"은 피부 상에 침착되지만 피부에서 번식하지 않는 미생물 또는 피부 상에서 번식하고 단기간 동안 지속되는 공생물을 지칭한다. 특히, 미생물이 피부 상에 적용되어, 건강한 피부에 의해 제공되는 환경 조건 하에 피부에서 성장 및 재생될 수 없고, 이러한 기관 (또는 이의 영역)에서 영구적으로 콜로니를 형성할 수 없다면, 이는 일과성 병원성 미생물총에 속하는 것으로 간주된다. 여러 세균, 효모 및 진균이 인간 피부로부터 일시적으로 단리될 수 있지만, 특히 하기의 미생물들이 이들의 빈번한 출현으로 인해 일과성 미생물총으로 분류될 수 있다: 황색 포도상구균, 화농성 연쇄상구균(Streptococcus pyogenes), 그람-음성 바실루스 (예를 들어 아세네토박테르 칼코아세티쿠스(Acinetobacter calcoaceticus)), 칸디다 알비칸스 및 어루러기균(Malassezia furfur). 종종 일과성 미생물총의 미생물은 세균이 장애가 있는 피부 영역에 부착되도록 하는 병원성 인자이다. 이는 예를 들어 콜라겐 구조 또는 각질 구조에의 부착일 수 있다.
일과성 병원성 미생물총의 미생물은, 예를 들어, 대사 발자국법, 지방산 조성 및 세포벽 조성의 평가, 16S 리보솜 RNA의 서열분석, 또는 특정 병원성 인자를 코딩하는 특정 DNA 프로브의 검출에 의해 결정될 수 있다.
용어 "일과성 병원성 미생물총의 미생물의 성장을 자극하지 않는다"는 본 발명의 미생물이 일과성 병원성 세균총의 1가지 이상, 바람직하게는 1가지 초과, 바람직하게는 2가지 초과, 더욱 바람직하게는 5가지 초과, 특히 바람직하게는 임의의 미생물의 성장을 자극하지 않는다는 것을 의미한다.
미생물은 이와 접촉되었을 때 일과성 병원성 미생물총의 미생물의 성장이 증가되지 않으면 일과성 병원성 미생물총의 이같은 미생물의 성장을 자극하지 않는 것으로 간주된다. 성장 자극 또는 이의 부재는 상주성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장을 자극하는 본 발명의 미생물의 성질과 관련되어 상기 기술된 바와 같이 시험관내에서 또는 원위치에서 테스트될 수 있다. 가장 바람직하게는, 자극 또는 이의 부재를 결정하기 위한 테스트는 상기 기술된 바와 같은, 더욱 바람직하게는 실시예에 기술된 바와 같은 시험관내 홀 플레이트 분석법 및/또는 원위치 피부 분석법을 수행함으로써 일어난다. 미생물은 이와 접촉되었을 때 일과성 병원성 미생물총의 미생물의 성장이 증가되지 않거나 단지 약간만 증가되는 경우 일과성 병원성 미생물총의 미생물의 성장을 자극하지 않는 것으로 간주된다. "약간 증가"는 성장이 대조군과 비교하여 5％ 이하, 더욱 바람직하게는 대조군과 비교하여 2％ 이하로 증가되는 것을 의미한다. 용어 "증가되지 않음"은 본 발명의 미생물이 존재하지 않는 대조군과 비교하여 본 발명의 미생물과 접촉된 일과성 병원성 미생물총의 미생물의 성장에 통계학적으로 관련된 차이를 발견할 수 없다는 것을 의미한다. 바람직한 실시양태에서, 용어 "증가되지 않음"은 미생물이 실제로 일과성 병원성 미생물총의 미생물의 성장의 감소에 이른 경우, 즉 이같은 미생물의 성장을 억제한 경우를 또한 포함한다.
또다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 미생물은 일과성 병원성 미생물총의 미생물의 성장에 음성으로 영향을 미치지 않는다. 용어 "음성으로 영향을 미치 지 않는다"는 본 발명의 미생물이 존재하지 않는 대조군과 비교하여 본 발명의 미생물과 접촉된 일과성 병원성 미생물총의 미생물의 성장 억제를 발견할 수 없다는 것을 의미한다.
추가적인 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 미생물은 일과성 병원성 미생물총의 주요 대표물, 즉 황색 포도상구균의 성장을 자극하지 않는다. 미생물이 황색 포도상구균의 성장을 자극하거나 또는 자극하지 않는지 여부를 결정하기 위한 테스트는 바람직하게는 본원에 상기 기술된 바와 같은 시험관내 및/또는 원위치 테스트, 더욱 바람직하게는 실시예에 기술된 바와 같은 테스트이다.
특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 미생물은 락트산 세균의 군에 속하는 미생물이다. 용어 "락트산 세균의 군에 속하는 미생물"은 특히 그람-양성 발효성 진정세균(eubacteria)에 속하는, 더욱 특히 락트산 세균이 포함되는 락토박테리아세아에(lactobacteriaceae) 족에 속하는 세균에 속하는 미생물(들)을 포함한다. 락트산 세균은 분류학적 관점에서 스트렙토코쿠스(Streptococcus), 류코노스톡(Leuconostoc), 페디오코쿠스(Pediococcus) 및 락토바실루스(Lactobacillus)로 세분화된다. 본 발명의 미생물은 바람직하게는 락토바실루스 종이다. 락트산 세균 군의 구성원은 정상적으로는 포르피린 및 사이토크롬이 없고, 전자-전달 인산화를 수행하지 않으며, 따라서 기질-수준의 인산화에 의해서만 에너지를 수득한다. 즉, 락트산 세균에서, ATP는 탄수화물의 발효를 통해서 합성된다. 모든 락트산 세균은 혐기성 성장하지만, 많은 혐기균과는 달리, 대부분의 락트산 세균은 산소에 대해 민감성이지 않고, 따라서 산소의 존재 하에서뿐만 아니라 이의 부재하에서 성 장할 수 있다. 따라서, 본 발명의 세균은 바람직하게는 내기성 혐기성 락트산 세균이고, 바람직하게는 락토바실루스의 속에 속한다.
바람직하게는 본 발명의 락트산 세균은 길고 가느다란 것에서 짧고 구부러진 막대기까지 다양한 막대기-형상이거나 구형이고, 더욱 바람직하게는 부동성이고/이거나 홀씨가 없고, 발효 대사의 주요 또는 단독 산물로서 락트산을 생산한다. 본 발명의 미생물이 속하는 락토바실루스 속은, 바람직한 실시양태에서, 하기의 특성에 의해 3가지 주요 아군으로 분류되고, 이에 의해 본 발명의 락토바실루스 종이 각각의 3가지 주요 아군에 속할 수 있는 것으로 구현된다:
(a) 하기와 같은 동종발효성 락토바실루스
(i) 엠덴-마이어호프(Embden-Meyerhof) 경로를 통해 글루코스로부터 85％ 이상의 양으로 락트산, 바람직하게는 락트산의 L-, D- 또는 DL-이성질체(들)을 생산하고;
(ii) 45℃의 온도에서 성장하지만, 15℃의 온도에서 성장하지 않으며;
(iii) 긴 막대기 형상이고;
(iv) 세포벽 내에 글리세롤 테이코산이 있음;
(b) 하기와 같은 동종발효성 락토바실루스
(i) 엠덴-마이어호프 경로를 통해 락트산, 바람직하게는 락트산의 L- 또는 DL-이성질체(들)을 생산하고;
(ii) 15℃의 온도에서 성장하고, 45℃의 온도에서 가변성 성장을 나타내고;
(iii) 짧은 막대기 형상이거나 곤봉형이고;
(iv) 세포벽 내에 리비톨 및/또는 글리세롤 테이코산이 있음;
(c) 하기와 같은 이종발효성 락토바실루스
(i) 펜토스-포스페이트 경로를 통해 글루코스로부터 50％ 이상의 양으로 락트산, 바람직하게는 락트산의 DL-이성질체를 생산하고;
(ii) 이산화탄소 및 에탄올을 생산하고;
(iii) 15℃ 또는 45℃의 온도에서 가변성 성장을 나타내고;
(iv) 길거나 짧은 막대기 형상이고;
(v) 세포벽 내에 글리세롤 테이코산이 있음.
상기 기술된 특징들을 기초로, 본 발명의 미생물은 락트산 세균 군, 특히 락토바실루스 속에 속하는 것으로 분류될 수 있다. 고전적인 계통학을 사용하여, 예를 들어, ["Bergey's Manual of Systematic Bacteriology" (Williams & Wilkins Co., 1984)]의 관련된 기술을 참조하여, 본 발명의 미생물은 락토바실루스 속에 속하는 것으로 결정될 수 있다. 별법적으로, 본 발명의 미생물은 당업계에 공지된 방법에 의해, 예를 들어, 이의 대사 지문, 즉 당을 대사하는 본 발명의 미생물(들)의 능력의 유사한 개관에 의해, 또는 [Schleifer et al., System. Appl. Microb., 18 (1995), 461-467] 또는 [Ludwig et al., System. Appl. Microb., 15 (1992), 487-501]에 예를 들어 기술된 기타 방법에 의해 락토바실루스 속에 속하는 것으로 분류될 수 있다. 본 발명의 미생물은 락토바실루스 속에 속하는 미생물에 대해 당업계에 공지되고 전형적인 당 공급원을 대사할 수 있다.
당업계에 공지된 또다른 방법을 사용함으로써, 예를 들어, 결정될 종의 전체 단백질의 SDS-PAGE 젤 전기영동을 사용하여 이를 락토바실루스 속의 공지되고 이미 특징화된 군주와 비교함으로써 본 발명의 미생물이 락토바실루스 속에 가입되는 것을 또한 특징화할 수 있다. 상기 기술된 바와 같은 전체 단백질 프로파일을 제조하는 기술, 뿐만 아니라 이같은 프로파일의 수치 비교는 당업자에게 주지되어 있다. 그러나, 각각의 공정 단계가 충분히 표준화된 경우에만 결과를 신뢰할 수 있다. 미생물이 락토바실루스 속에 속하는지를 결정할 때 정확성이 요구되는 것에 직면하여, 표준화된 절차가, 유럽 연합(European Union)에 의해 벨기에의 겐트 대학교(University of Ghent)에서 1994년 9월 12일부터 16일까지 개최된 "워크샵" 동안 제시된 바와 같이, [Pot et al.]과 같은 저자에 의해 정기적으로 공개적으로 입수가능해진다 (세균의 분류 및 확인을 위한 지문술, 전체 세포 단백질의 SDS-PAGE). SDS-PAGE 전기영동 젤을 분석하기 위한 기술에서 사용되는 소프트웨어가 결정적으로 중요한데, 종들 간의 상관관계의 정도가 이러한 소프트웨어에서 사용되는 파라메터 및 알고리즘에 좌우되기 때문이다. 이론적으로 상세하게 진행되지 않고, 농도계측기에 의해 측정되고 컴퓨터에 의해 표준화된 밴드의 정량적인 비교가 피어슨(Pearson) 상관관계 계수로 바람직하게 이루어진다. 가장 유사한 프로파일들을 함께 분류할 수 있게 할 뿐만 아니라, 계통수를 구축할 수 있게 하는 UPGMA (unweighted pair group method using average linkage) 알고리즘을 사용하여, 이렇게 수득된 유사성 매트릭스를 체계화시킬 수 있다 ([Kersters, Numerical methods in the classification and identification of bacteria by electrophoresis, in Computer-assisted Bacterial Systematics, 337-368, M. Goodfellow. A. G. O'Donnell Ed., John Wiley and Sons Ltd, 1985] 참조).
별법적으로, 상기 본 발명의 미생물이 락토바실루스 속에 가입되는 것이 소위 Riboprinter.RTM에서 리보솜 RNA와 관련하여 특징화될 수 있다. 더욱 바람직하게는, 본 발명의 새롭게 확인된 종이 락토바실루스 속에 가입되는 것이 본 발명의 세균의 16S 리보솜 RNA, 또는 16S 리보솜 RNA를 코딩하는 게놈 DNA의 뉴클레오티드 서열을 현재까지 공지된 다른 속 및 종의 락트산 세균의 것과 비교함으로써 증명된다. 본 발명의 새롭게 확인된 종이 락토바실루스 속에 속하는 것을 결정하기 위한 또다른 바람직한 별법은 16S-23S rRNA 스페이서 영역을 표적으로 하는 종-특이적 PCR 프라이머를 사용하는 것이다. 또다른 바람직한 별법은 RAPD-PCR ([Nigatu et al. in Antonie van Leenwenhoek (79), 1-6, 2001])이고, 이에 의해 종 특이적 DNA 패턴이 생성되어, 확인된 본 발명에 따른 미생물이 락토바실루스 속에 가입되는 지를 결정하도록 한다. 본 발명의 미생물이 락토바실루스 속에 가입되는 것을 결정하는데 유용한 추가적인 기술은 제한 단편 길이 다형성 (RFLP: restriction fragment length polymorphism) ([Giraffa et al., Int. J. Food Microbiol. 82 (2003), 163-172]), 반복 요소의 지문술 ([Gevers et al., FEMS Microbiol. Lett. 205 (2001) 31-36]) 또는 세균 세포의 지방산 메틸 에스테르 (FAME: fatty acid methyl ester) 패턴의 분석 ([Heyrman et al., FEMS Microbiol. Lett. 181 (1991), 55-62])이다. 별법적으로, 락토바실루스는 렉틴 타이핑(typing) ([Annuk et al., J. Med. Microbiol. 50 (2001), 1069-1074])에 의해 또는 이의 세포벽 단백질의 분석 ([Gatti et al., Lett. Appl. Microbiol. 25 (1997), 345-348])에 의해 결정 될 수 있다.
본 출원의 바람직한 실시양태에서, 미생물은 프로바이오틱(probiotic) 락토바실루스 종이다. 본 발명의 문맥에서의 용어 "프로바이오틱"은 미생물이 피부에 국소적으로 적용되었을 때 건강에 이로운 효과를 갖는다는 것을 의미한다. 바람직하게는, "프로바이오틱" 미생물은 피부에 국소적으로 적용되었을 때 이러한 조직의 건강에 이로운 살아 있는 미생물이다. 가장 바람직하게는, 이는 미생물이 피부의 미생물총에 대해 양성 효과를 갖는다는 것을 의미한다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 미생물은 락토바실루스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 락토바실루스 브레비스(Lactobacillus brevis) 또는 락토바실루스 페르멘툼(Lactobacillus fermentum)의 종에 속한다. 그러나, 락토바실루스 종은 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 미생물은 접속 번호 DSM 17248 (락토바실루스 파라카제이 아종 파라카제이 LB-OB-H2), DSM 17247 (락토바실루스 브레비스 LB-OB-H1), DSM 17250 (락토바실루스 브레비스 LB-OB-H4) 및 DSM 17249 (락토바실루스 페르멘툼 LB-OB-H3) 하에 DSMZ에 기탁된 락토바실루스 파라카제이, 락토바실루스 브레비스 또는 락토바실루스 페르멘툼으로 구성된 군으로부터 선택된다. 또한 본 발명은 상기 언급된 기탁된 락토바실루스 균주의 돌연변이체 또는 유도체에 관한 것이고, 상기 돌연변이체 또는 유도체는 상주성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장을 자극하는 능력 및 일과성 병원성 미생물총의 미생물의 성장을 자극하지 않는 성질을 유지한다.
용어 "접속 번호 하에 DSMZ에 기탁된 락토바실루스 파라카제이, 락토바실루스 브레비스 또는 락토바실루스 페르멘툼"은 <Deutsche Sammlung fuer Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ)>에 2005년 4월 18일 기탁되고 하기의 기탁 번호를 갖는 락토바실루스 파라카제이, 락토바실루스 브레비스 또는 락토바실루스 페르멘툼 종에 속하는 미생물의 세포에 관한 것이다: DSM 17248 (락토바실루스 파라카제이 아종 파라카제이 LB-OB-H02), DSM 17247 (락토바실루스 브레비스 LB-OB-H1), DSM 17250 (락토바실루스 브레비스 LB-OB-H4) 및 DSM 17249 (락토바실루스 페르멘툼 LB-OB-H3). DSMZ의 주소는 <Mascheroder Weg 1b, D-38124 Braunschweig, Germany>이다. 상기 언급된 기탁들은 특허절차상 미생물 기탁의 국제적 승인에 관한 부다페스트 조약의 조항에 따라 이루어졌다.
특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 미생물은 "단리된" "정제된" 것이다. 용어 "단리된"은 물질이 원래의 환경, 예를 들어 천연 발생하는 경우의 천연 환경, 또는 배양된 경우의 배양 배지로부터 제거되는 것을 의미한다. 예를 들어, 천연 시스템에서의 일부 또는 모든 공존 물질로부터 분리된 천연-발생 미생물, 바람직하게는 락토바실루스 종은 단리된 것이다. 이같은 미생물은 조성물의 일부일 수 있고, 조성물이 이의 천연 환경의 일부가 아니라는 점에서 여전히 단리된 것으로 간주된다.
용어 "정제된"은 절대 순도를 필요로 하지 않는다; 그보다는, 이는 상대적인 정의로 의도된다. 라이브러리로부터 수득된 개별적인 미생물들은 미생물학적인 균질성으로 통상적으로 정제되고, 즉 이들은 당업계에 공지된 방법에 의해 한천 플레 이트 상에 스트리킹(streaking)되었을 때 단일 콜로니로서 성장한다. 바람직하게는, 이러한 목적에 사용되는 한천 플레이트는 락토바실루스 종에 대해 선별적이다. 이같은 선별 한천 플레이트는 당업계에 공지되어 있다.
또다른 양상에서, 본 발명은, 예를 들어, 열에 의해 불활성화되었거나 동결건조되었지만, 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 자극하고 일과성 병원성 미생물총의 미생물의 성장은 자극하지 않는 성질을 유지하는, 본 발명의 미생물의 불활성화 형태에 관한 것이다.
본 발명에 따르면, 용어 "본 발명의 미생물의 불활성화 형태"는 락토바실루스 속에 속하는 미생물에 특이적인 플레이트 상에서 단일 콜로니를 더 이상 형성할 수 없는, 본 발명의 미생물, 바람직하게는 본원에 개시된 락토바실루스 종의 죽은 세포 또는 불활성화 세포를 포함한다. 상기 죽은 세포 또는 불활성화 세포는 무손상 세포막 또는 파쇄된 세포막을 가질 수 있다. 본 발명의 미생물의 세포를 죽이거나 불활성화시키는 방법은 당업계에 공지되어 있다. [El-Nezami et al., J. Food Prot. 61 (1998), 466-468]에는 UV-조사에 의해 락토바실루스 종을 불활성화시키는 방법이 기술되어 있다. 바람직하게는, 본 발명의 미생물의 세포는 열에 의해 불활성화되거나 동결건조된다. 본 발명의 세포의 동결건조는 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 자극하면서 일과성 병원성 미생물총의 미생물의 성장은 자극하지 않는 성질을 유지하면서 세포가 용이하게 보관 및 취급될 수 있다는 장점을 갖는다. 또한, 동결건조된 세포는 당업계에 공지된 조건 하에 적합한 액체 또는 고체 배지에 적용되었을 때 다시 성장할 수 있다. 동결건조는 당업계에 공지된 방 법에 의해 이루어진다. 바람직하게는, 2시간 이상 동안 실온에서, 즉 16℃ 내지 25℃ 사이의 임의의 온도에서 수행된다. 또한, 본 발명의 미생물의 동결건조된 세포는 4℃의 온도에서 적어도 4주 동안 안정적이어서, 상기 기술된 바와 같은 성질을 여전히 유지한다. 열에 의한 불활성화는 본 발명의 미생물의 세포를 적어도 2시간 동안 170℃의 온도에서 인큐베이션함으로써 달성될 수 있다. 그러나, 바람직하게는 열에 의한 불활성화는 2바(bar)의 대기압에서 포화 증기의 존재 하에 상기 세포를 121℃의 온도에서 적어도 20분 동안 가압멸균시킴으로써 달성된다. 별법적으로, 본 발명의 미생물의 세포의 열에 의한 불활성화는 상기 세포를 적어도 4주, 3주, 2주, 1주, 12시간, 6시간, 2시간 또는 1시간 동안 -20℃에서 동결시킴으로써 달성된다. 본 발명의 미생물의 불활성화 형태의 세포의 적어도 70％, 75％ 또는 80％, 더욱 바람직하게는 85％, 90％ 또는 95％ 특히 바람직하게는 적어도 97％, 98％, 99％, 더욱 특히 바람직하게는 99.1％, 99.2％, 99.3％, 99.4％, 99.5％, 99.6％, 99.7％, 99.8％ 또는 99.9％, 가장 바람직하게는 100％가 죽거나 불활성화되지만, 이들이 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 자극하지만 일과성 병원성 미생물총의 미생물의 성장은 자극하지 않는 능력을 여전히 갖는 것이 바람직하다. 본 발명의 미생물의 불활성화 형태가 실제로 죽었거나 또는 불활성화되었는지 여부는 당업계에 공지된 방법에 의해, 예를 들어, 생존력 테스트에 의해 테스트될 수 있다.
용어 "본 발명의 미생물의 불활성화 형태"는 본 발명의 미생물, 바람직하게는 본원에 개시된 락토바실루스 종의 용해물 또는 분획을 또한 포함하고, 이때 바 람직하게는 상기 용해물 또는 분획은 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 자극하고 일과성 병원성 미생물총의 미생물, 특히, 본원에 기술된 바와 같은 황색 포도상구균의 성장은 자극하지 않는다. 이러한 자극은 본원에 기술된 바와 같이, 특히 첨부된 실시예에 기술된 바와 같이 테스트될 수 있다. 본 발명의 미생물의 용해물 또는 분획이 일과성 병원성 미생물총의 미생물의 성장을 자극할 수 있는 경우, 당업자는, 예를 들어, 상기 용해물 또는 분획을 본원에서 하기에 예시된 당업계에 공지된 방법에 의해 추가로 정제하여, 일과성 병원성 미생물총의 미생물의 성장을 자극할 수 있는 물질을 제거할 수 있다. 그 후, 당업자는 상기 용해물 또는 분획을 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 자극하지만 일과성 병원성 미생물총의 미생물의 성장은 자극하지 않는지 다시 테스트할 수 있다.
본 발명에 따르면, 용어 "용해물"은 파쇄된 또는 추출물인 본 발명의 미생물의 세포의 수성 매질 내의 용액 또는 현탁액을 의미한다. 그러나, 이 용어는 어떠한 한정된 방식으로도 해석되지 않아야 한다. 세포 용해물은, 예를 들어, DNA, RNA, 단백질, 펩티드, 탄수화물, 지질 등과 같은 거대 분자 및/또는 아미노산, 당, 지질산 등과 같은 미세분자, 또는 이의 분획을 포함한다. 추가적으로, 상기 용해물은 평활 또는 과립 구조일 수 있는 세포 잔해물을 포함한다. 예를 들어, 프렌치 프레스(French press), 유리 또는 철 비드를 이용한 세포 밀(mill) 또는 효소에 의한 세포 용해 등을 사용하는 것에 의해, 미생물의 세포 용해물을 제조하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 또한, 세포 용해는 세포를 개방/파괴하기 위해 당업계에 공지된 다양한 방법에 관련된다. 세포 용해 방법은 중요하지 않고, 본 발명의 미 생물의 세포의 용해를 달성할 수 있는 임의의 방법을 사용할 수 있다. 적합한 한 방법이 당업자에 의해 선택될 수 있고, 예를 들어, 세포의 개방/파괴는 효소에 의해, 화학적으로 또는 물리적으로 이루어질 수 있다. 효소 및 효소 칵테일의 비-제한적인 예는 단백질분해효소 K와 같은 프로테아제, 지질분해효소 또는 글리코시다제이고; 화학물질의 비-제한적인 예는 이온운반체(ionophore), 소듐 도데실 술페이트와 같은 세제, 산 또는 염기이며; 물리적 수단의 비-제한적인 예는 프렌치-프레싱과 같은 고압, 오스몰농도, 가열 또는 냉각과 같은 온도이다. 추가적으로, 단백질분해성 효소 이외의 효소, 산, 염기 등의 적합한 조합을 이용하는 방법을 또한 사용할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 미생물의 세포를 동결 및 해동, 더욱 바람직하게는 -70℃ 미만의 온도에서의 동결 및 30℃ 초과의 온도에서의 해동에 의해 용해시킬 수 있고, 특히 -75℃ 미만의 온도에서의 동결 및 35℃ 초과의 온도에서의 해동이 바람직하고, -80℃ 미만의 동결 온도 및 37℃ 초과의 해동 온도가 가장 바람직하다. 상기 동결/해동을 1회 이상, 더욱 바람직하게는 2회 이상, 더욱 더 바람직하게는 3회 이상, 특히 바람직하게는 4회 이상, 가장 바람직하게는 5회 이상 반복하는 것이 또한 바람직하다.
따라서, 당업자는 상기의 일반적인 설명을 참조하고, 필요하다면 이러한 방법을 적합하게 변형 또는 변화시킴으로써 원하는 용해물을 제조할 수 있다. 바람직하게는, 상기 기술된 바와 같은 용해물에 사용되는 수성 매질은 물, 생리식염수, 또는 완충액이다. 세균 세포 용해물의 장점은 기술 설비가 덜 필요하기 때문에 용이하게 제조될 수 있고 비용-효율적으로 보관될 수 있다는 것이다.
본 발명에 따르면, 또한 용해물은 상기 언급된 용해물로부터의 분자의 분획의 제제이다. 이러한 분획은 당업자에게 공지된 방법, 예를 들어, 크로마토그래피 (예를 들어, 친화성 크로마토그래피, 이온-교환 크로마토그래피, 크기-배제 크로마토그래피, 역상-크로마토그래피, 및 컬럼 또는 뱃치(batch) 방법 내에 기타 크로마토그래피 재료가 있는 크로마토그래피 포함), 기타 분획화 방법, 예를 들어, 여과 방법, 예를 들어, 초여과, 투석, 원심분리에서의 크기-배제를 이용하는 투석 및 농축, 밀도-구배 또는 단계 매트릭스에서의 원심분리, 침전, 예를 들어, 친화성 침전, 염용(salting-in) 또는 염석(salting-out) (암모늄술페이트-침전), 알콜성 침전, 또는 용해물의 상기 성분들을 분리하기 위한 기타 단백질화학적, 분자 생물학적, 생화학적, 면역학적, 화학적 또는 물리적 방법에 의해 수득될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 다른 것들보다 더욱 면역원성인 분획들이 바람직하다. 당업자는 상기의 일반적인 설명 및 본원에서의 실시예에서의 구체적인 설명을 참조하고, 필요하다면 이러한 방법들을 적합하게 변형 또는 변화시킴으로써, 적절한 방법을 선택하여 이의 면역원성 잠재력을 결정할 수 있다.
따라서, 용어 "본 발명의 미생물의 불활성 형태"는 본 발명의 미생물, 바람직하게는 본원에 개시된 락토바실루스 종의 여과액을 포함하고, 이때 바람직하게는 상기 여과액은 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물, 바람직하게는 황색 포도상구균의 성장을 억제하고, 건강한 정상적인 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 억제하지 않는다. 이러한 억제는 본원에 기술된 바와 같이, 특히 첨부된 실시예에 기술된 바와 같이 테스트할 수 있다. 본 발명의 미생물의 여과액 이 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 억제하지 않거나 자극할 수 있는 경우, 당업자는, 예를 들어, 상기 여과액을 당업계에 공지된 방법에 의해 추가로 정제하여, 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 자극할 수 있는 물질을 제거할 수 있다. 그 후, 당업자는 상기 여과액을 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 억제하지만 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장은 억제하지 않는지 다시 테스트할 수 있다.
용어 "여과액"은 당업자에게 공지된 임의의 적합한 액체, 매질 또는 완충제 내의 본 발명의 미생물의 배양물의 원심분리 절차의 상청액으로 수득된 본 발명의 미생물의 무세포 용액 또는 현탁액을 의미한다. 그러나, 이 용어는 어떠한 방식으로도 한정되지 않아야 한다. 여과액은, 예를 들어, DNA, RNA, 단백질, 펩티드, 탄수화물, 지질 등과 같은 거대 분자 및/또는 아미노산, 당, 지질산 등과 같은 미세분자, 또는 이의 분획을 포함한다. 미생물의 여과액을 제조하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 또한, "여과액"은 당업계에 공지된 다양한 방법에 관련된다. 추출 방법은 중요하지 않고, 본 발명의 미생물의 세포의 여과를 달성할 수 있는 임의의 방법을 사용할 수 있다.
용어 "본 발명의 미생물의 불활성 형태"는 본 발명의 미생물의 세포의 임의의 부분을 포함한다. 바람직하게는, 상기 불활성 형태는 막-제제에 의해 수득된 막 분획이다. 락토바실루스 속에 속하는 미생물의 막 제제는 당업계에 공지된 방법에 의해, 예를 들어, [Rollan et al., Int. J. Food Microbiol. 70 (2001), 303-307], [Matsuquchi et al., Clin. Diagn. Lab. Immunol. 10 (2003), 259-266] 또는 [Stentz et al., Appl. Environ. Microbiol. 66 (2000), 4272-4278] 또는 [Varmanen et al., J. Bacteriology 182 (2000), 146-154]에 기술된 방법을 사용함으로써 수득될 수 있다. 별법적으로, 전체 세포 제제가 또한 구현된다.
또다른 양상에서, 본 발명은 상기 기술된 바와 같은 본 발명에 따른 미생물 또는 이러한 미생물의 돌연변이체, 유도체 또는 불활성 형태를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, 상기 조성물은 상기 기술된 바와 같은 미생물을 고체 형태의 조성물 1 ㎎ 당 102 내지 1012 개의 세포, 바람직하게는 103 내지 108 개의 세포의 양으로 포함한다. 액체 형태의 조성물의 경우, 미생물의 양은 ㎖ 당 102 내지 1013 개의 세포이다. 추가적인 바람직한 실시양태에서, 상기 조성물은 에멀션, 예를 들어 수중유 또는 유중수 에멀션의 형태, 연고의 형태 또는 마이크로캡슐의 형태이다. 에멀션, 연고 또는 마이크로캡슐의 경우, 조성물은 본원에 기술된 바와 같은 미생물을 ㎖ 당 102 내지 1013 개의 세포의 양으로 포함한다. 그러나, 특정 조성물에 대해, 미생물의 양은 본원에 기술된 것과 상이할 수 있다.
추가적인 양상에서, 본 발명은 상기 기술된 바와 같은 본 발명에 따른 미생물 또는 이러한 미생물의 돌연변이체, 유도체 또는 불활성 형태를 화장용으로 또는 제약상 허용가능한 담체 또는 부형제와 배합하는 단계를 포함하는, 병원성 미생물에 대해 피부를 보호하기 위한 조성물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명에 따라 사용되는 용어 "조성물"은 상기 기술된 바와 같은 1가지 이 상의 본 발명의 미생물 또는 상기 미생물의 돌연변이체, 유도체 또는 불활성 형태를 포함하는 조성물(들)에 관한 것이다. 본원에서 하기에 기술된 본 발명의 조성물이 임의로 조합된 상기 언급된 성분들을 포함하는 것으로 구현된다. 임의로, 조성물은 병원성 미생물에 대해 피부를 보호하는데 적절한 1가지 이상의 추가적인 성분을 포함할 수 있다. 따라서, 조성물은 하기에 기술되는 추가적인 성분들의 임의의 조합을 임의로 포함할 수 있다. 용어 "병원성 미생물에 대해 피부를 보호하는데 적절한 성분"은 pH를 저하시키는 화합물 또는 조성물 및/또는 이의 조합물을 포함한다.
조성물은 고체, 액체 또는 기체 형태일 수 있고, 특히 분말(들), 용액(들), 에어로졸(들), 현탁액, 에멀션, 액체, 엘릭서르, 추출물, 팅크제 또는 유체 추출물의 형태, 또는 국소 투여에 특히 적절한 형태일 수 있다. 국소 적용에 적절한 형태에는, 예를 들어, 페이스트, 연고, 로션, 크림, 젤 또는 경피 패치가 포함된다.
바람직하게는, 본 발명의 조성물은 화장용으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 추가로 포함하는 화장용 조성물이다. 더욱 바람직하게는, 상기 화장용 조성물은 페이스트, 연고, 로션, 크림 또는 젤이다.
본 발명의 화장용 조성물은 본 발명의 조성물과 관련하여 상기 기술된 바와 같은 본 발명의 미생물, 이의 돌연변이체, 유도체 또는 불활성 형태, 및 추가적으로 화장용으로 허용가능한 담체를 포함한다. 바람직하게는, 본 발명의 화장용 조성물은 국소 적용에서 사용하기 위한 것이다.
본원에서 사용된 용어 "화장용으로 허용가능한 담체"는 안전하고 효과적인 방식으로 본 조성물을 피부에 적용하는데 사용될 수 있는 적절한 비히클(vehicle)을 의미한다. 이같은 비히클은 에멀션, 예를 들어 수중유 또는 유중수 에멀션, 연고, 또는 마이크로캡슐과 같은 물질을 포함할 수 있다. 캡슐화된 형태, 예를 들어 셀룰로스 캡슐화, 젤라틴, 폴리아미드, 니오솜(niosome), 왁스 매트릭스, 시클로덱스트린 또는 리포솜 캡슐화로 활성 성분을 투여하는 것이 또한 유리하다. 본원에서 사용된 용어 "안전하고 효과적인 양"은 상주성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장을 자극하는데 충분한 양을 의미한다.
또다른 양상에서, 본 발명은 상기 기술된 바와 같은 본 발명의 미생물, 또는 이의 유도체 또는 돌연변이체 또는 불활성 형태를 포함하고, 제약상 허용가능한 담체 또는 부형제를 추가로 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 바람직하게는 제약 조성물은 국소 적용에 적절한 형태이다.
또한, 본 발명은 조성물, 바람직하게는 제약 또는 화장용 조성물의 제조를 위한 상기 기술된 바와 같은 본 발명의 미생물, 또는 이의 유도체 또는 돌연변이체 또는 불활성 형태의 용도에 관한 것이다.
제약 조성물은 치료적 유효량의 상기 기술된 바와 같은 본 발명의 미생물 또는 본 발명의 유도체 또는 돌연변이체 또는 상기 본 발명의 미생물의 불활성 형태를 포함하고, 다양한 형태, 예를 들어 고체, 액체, 분말, 수성, 동결건조 형태로 제형될 수 있다
제약 조성물은, 본원에 기술된 바와 같이, 환자에게 제약상 허용가능한 담체와 함께 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 용어 "제약상 허용가능한"은 동물, 더욱 특히 인간에서의 사용에 대해 규제 위원회 또는 기타 일반적으로 인정되는 약전에 의해 허가된 것을 의미한다.
용어 "담체"는 이와 함께 치료제가 투여되는 희석제, 보조제, 부형제 또는 비히클을 지칭한다. 이같은 담체는 제약상 허용가능하고, 즉 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 비-독성이다. 바람직하게는 담체는 등장성, 저장성 또는 약하게 고장성이고, 예컨대 수크로스 용액에 의해 제공되는 바와 같이 비교적 낮은 이온 강도를 갖는다. 이같은 제약 담체는 무균 액체, 예컨대 물 및 오일일 수 있고, 페트롤륨, 동물성, 식물성 또는 합성 기원의 것들, 예컨대 땅콩유, 대두유, 미네랄 오일, 참기름 등을 포함한다. 염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액 또한 액체 담체로 사용될 수 있다. 적절한 제약 부형제로는 전분, 글루코스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 석회분말, 실리카 젤, 스테아르산나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 나트륨 이온, 건조 탈지유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등이 포함된다. 조성물은, 원한다면, 미량의 습윤화 또는 유화 작용제, 또는 pH 완충제를 또한 함유할 수 있다. 이러한 조성물은, 예를 들어, 용액, 현탁액, 에멀션, 분말, 서방성 방출 제형 등의 형태를 취할 수 있다. 적절한 제약 담체의 예는 ["Remington's Pharmaceutical Sciences", E.W. Martin]에 기술되어 있다. 제약 담체로 작용할 수 있는 물질의 일부 다른 예는 당, 예컨대 글루코스 및 수크로스; 전분 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; 셀룰로스 및 이의 유도체 예컨대 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; 분말화 트라가칸트; 맥아; 젤라틴; 탈크; 스테아르산; 스테아르산마그네슘; 황산칼슘; 탄 산칼슘; 식물성 오일, 예컨대 땅콩유, 면실유, 참기름, 올리브유, 옥수수유 및 테오브로마(theobroma) 오일; 폴리올 예컨대 프로필렌 글리콜, 글리세린, 소르비톨, 만니톨, 및 폴리에틸렌 글리콜; 한천; 알긴산; 발열원이 없는 물; 등장성 염수; 크랜베리 추출물 및 포스페이트 완충액; 탈지유 분말; 뿐만 아니라 제약 제형에서 사용되는 기타 비-독성 상용성 물질, 예컨대 비타민 C, 에스트로겐 및 에치나세아(echinacea)이다. 습윤화제 및 윤활제 예컨대 소듐 라우릴 술페이트, 뿐만 아니라 착색제, 풍미제, 윤활제, 부형제, 정제화제, 안정화제, 항산화제 및 방부제가 또한 존재할 수 있다. 캡슐화된 형태, 예를 들어 셀룰로스 캡슐화, 젤라틴, 폴리아미드, 니오솜, 왁스 매트릭스, 시클로덱스트린 또는 리포솜 캡슐화로 활성 성분을 투여하는 것이 또한 유리하다.
일반적으로, 성분들은 별도로 공급되거나, 또는, 예를 들어, 활성 작용제의 양을 지시하는 앰플(ampoule) 또는 사켓(sachette)과 같은 밀봉된 용기 내의 동결건조 분말 또는 무수 농축물로서 단위 투여 제형 내에 함께 혼합된다.
본 발명의 제약 조성물은 중성 또는 염 형태로 제형될 수 있다. 제약상 허용가능한 염에는 염산, 인산, 아세트산, 옥살산, 타르타르산 등으로부터 유도된 것들과 같은 음이온으로 형성된 것, 및 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 산화철, 이소프로필아민, 트리에틸아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 프로카인 등으로부터 유도된 것들과 같은 양이온으로 형성된 것이 포함된다.
시험관내 또는 원위치 분석법, 예를 들어 실시예에 기술된 것들을 임의로 사용하여, 최적의 투여량 범위를 확인하는 것을 도울 수 있다. 제형에서 사용될 정 확한 용량은 투여 경로, 및 질환 또는 장애의 심각성에 또한 좌우될 수 있고, 진료의의 판단 및 각각의 환자의 상황에 따라 결정되어야 한다. 국소 투여 경로가 바람직하다. 효과적인 용량은 시험관내 또는 (동물) 모델 테스트 시스템으로부터 유도된 용량-응답 곡선으로부터 외삽될 수 있다. 바람직하게는, 제약 조성물은 직접적으로 또는 보조제와 조합되어 투여된다. 보조제는 클로로퀸, 양성자성 극성 화합물, 예컨대 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세롤, EtOH, 1-메틸 L-2-피롤리돈 또는 이의 유도체, 또는 비-양성자성 극성 화합물 예컨대 디메틸술폭시드 (DMSO), 디에틸술폭시드, 디-n-프로필술폭시드, 디메틸술폰, 술폴란, 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드, 테트라메틸우레아, 아세토니트릴 또는 이의 유도체로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다. 이러한 화합물들은 pH 제한과 관련된 조건에서 첨가된다. 본 발명의 조성물은 척추 동물에게 투여될 수 있다. 본원에서 사용된 "척추동물"은 당업자에게 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖도록 의도된다. 특히, "척추동물"은 포유동물, 더욱 특히 인간을 포함한다.
용어 "투여된"은 치료적으로 유효한 용량의 상기 언급된 조성물의 투여를 의미한다. "치료적 유효량"은 투여되는 목적의 효과를 일으키는 용량을 의미하고, 바람직하게는 이러한 효과는 병원성 미생물에 대한 피부의 보호이다. 정확한 용량은 치료 목적에 좌우될 것이고, 공지된 기술을 사용하여 당업자에 의해 확인가능할 것이다. 당업계에 공지되고 상기 기술된 바와 같이, 전신 전달 대 국소 전달, 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 식이, 투여 시간, 약물 상호작용 및 상태의 중증도에 대한 조정이 필요할 수 있고, 당업자에 의해 통상적인 실험으로 확인가능할 것이다.
방법은 인간 치료법 및 수의학 용도 모두에 적용가능하다. 원하는 치료 활성을 갖는 본원에 기술된 화합물은, 본원에 기술된 바와 같이, 생리학적으로 허용가능한 담체 내에서 환자에게 투여될 수 있다. 투여 방식에 따라, 화합물은 하기 논의되는 바와 같이 다양한 방식으로 제형될 수 있다. 제형 내의 치료적으로 활성인 화합물의 농도는 약 0.01-100 중량％일 수 있다. 작용제는 단독으로 또는 다른 치료와 조합되어 투여될 수 있다.
제약 조성물의 투여는 다양한 방식으로 이루어질 수 있다. 바람직한 투여 경로는 국소 경로이다.
주치의 및 임상 요인에 의해 투여 요법이 결정될 것이다. 의학 분야에 주지된 바와 같이, 임의의 한 환자에 대한 투여량은 환자의 크기, 신체 표면적, 연령, 투여되는 특정 화합물, 성별, 투여 시간 및 경로, 일반적인 건강, 및 동반 투여되는 기타 약물을 포함하는 많은 요인에 따라 좌우된다. 전형적인 용량은, 예를 들어, 0.001 내지 1000 ㎍ 범위일 수 있다; 그러나, 이러한 대표적인 범위보다 많거나 적은 용량이, 특히 상기 언급된 요인들을 고려하여, 구현된다.
바람직하게는 1주일에 1번, 더욱 바람직하게는 1주일에 2번, 3번, 4번, 5번 또는 6번, 가장 바람직하게는 매일, 더욱 더 바람직하게는 하루에 2번 이상으로 투여량이 제공된다. 특히, 예를 들어 세정에 의해, 상주성 피부 세균총의 교란이 발생한 후마다 투여량을 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 그러나, 치료의 진행 동안, 투여량이 더 긴 시간 간격으로 제공될 수 있고, 필요하다면 더 짧은 시간 간격 으로, 예를 들어, 하루에 여러번 제공될 수 있다. 바람직한 경우에, 본원에 기술된 방법 및 당업자에게 공지된 추가적인 방법을 사용하여 면역 응답을 모니터링하고, 예를 들어 시간, 양 및/또는 조성에서, 투여량을 최적화한다. 주기적인 평가에 의해 진행을 모니터링할 수 있다. 제약 조성물이 공동-요법 접근법에서, 즉 다른 의약 또는 약물, 예를 들어 병원성 미생물에 대해 피부를 보호하기 위한 다른 약물과의 공동-투여에서 사용되는 것이 또한 구현된다.
본 발명의 화장용 또는 제약 조성물의 국소 투여는 원하는 치료가 국소 투여에 의해 쉽게 접근가능한 구역 또는 기관을 수반할 때 유용하다. 피부에 국소적으로 적용하기 위해, 바람직하게는 제약 조성물은 적절한 페이스트, 연고, 로션, 크림, 젤 또는 경피 패치로 제형된다. 화장용 또는 제약 제제는, 사용 분야에 따라, 또한 스프레이 (펌프 스프레이 또는 에어로졸), 포말체, 젤 스프레이, 무스, 현탁액 또는 분말의 형태일 수 있다.
적절한 페이스트는 담체 내에 현탁된 활성 성분을 포함한다. 이같은 담체는 페트롤륨, 연질 백색 파라핀, 황색 바셀린 및 글리세롤이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다.
화장용 또는 제약 조성물은 담체 내에 현탁 또는 용해된 활성 성분을 포함하는 적절한 연고로 또한 제형될 수 있다. 이같은 담체에는 글리세롤, 미네랄 오일, 액체 오일, 액체 페트롤륨, 백색 페트롤륨, 황색 바셀린, 프로필렌 글리콜, 알콜, 트리글리세리드, 지방산 에스테르 예컨대 세틸 에스테르, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 화합물, 왁스 예컨대 백색 왁스 및 황색 밀랍, 지방산 알콜 예컨대 세틸 알콜, 스테아릴 알콜 및 세틸스테아릴알콜, 지방산 예컨대 스테아르산, 세틸 스테아레이트, 라놀린, 수산화마그네슘, 카올린 및 물 중 1가지 이상이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다.
별법적으로, 화장용 또는 제약 조성물은 담체 내에 현탁 또는 용해된 활성 성분을 포함하는 적절한 로션 또는 크림으로 또한 제형될 수 있다. 이같은 담체에는 미네랄 오일 예컨대 파라핀, 식물성 오일 예컨대 피마자유, 피마자 종자유 및 수소첨가 피마자유, 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리소르베이트, 지방산 에스테르 예컨대 세틸 에스테르, 왁스, 지방산 알콜 예컨대 세틸 알콜, 스테아릴 알콜, 2-옥틸도데칸올, 벤질 알콜, 알콜, 트리글리세리드 및 물 중 1가지 이상이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다.
별법적으로, 화장용 또는 제약 조성물은 담체 내에 현탁 또는 용해된 활성 성분을 포함하는 적절한 젤로 또한 제형될 수 있다. 이같은 담체에는 물, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 파라핀, 폴리에틸렌, 지방유, 셀룰로스 유도체, 벤토나이트 및 콜로이드성 이산화규소 중 1가지 이상이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다.
본 발명에 따른 에어로졸용의 적절한 추진제는 통상적인 추진제, 예를 들어 프로판, 부탄, 펜탄 및 기타 물질이다.
일반적으로 본 발명에 따른 제제는 이같은 제제에서 통상적으로 사용되는 보조제, 예를 들어 화장용 또는 피부학적 제형의 방부제, 향료, 소포제, 염료, 안료, 증점제, 계면활성 물질, 유화제, 연화제, 마감제, 지방, 오일, 왁스 또는 기타 통 상적인 구성성분, 예컨대 알콜, 폴리올, 중합체, 포말 안정화제, 용해도 촉진제, 전해질, 유기 산, 유기 용매, 또는 실리콘 유도체를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 화장용 또는 제약 조성물은 연화제를 포함할 수 있다. 연화제는 건조를 방지하거나 완화시키는데 효과적인 양으로 사용될 수 있다. 유용한 연화제에는 탄화수소 오일 및 왁스; 실리콘 오일; 트리글리세리드 에스테르; 아세토글리세리드 에스테르; 에톡시화 글리세리드; 알킬 에스테르; 알케닐 에스테르; 지방산; 지방 알콜; 지방 알콜 에테르; 에테르에스테르; 라놀린 및 유도체; 다가 알콜 (폴리올) 및 폴리에테르 유도체; 다가 알콜 (폴리올) 에스테르; 왁스 에스테르; 밀랍 유도체; 식물성 왁스; 인지질; 스테롤; 및 아미드가 비제한적으로 포함된다.
따라서, 예를 들어, 전형적인 연화제에는 미네랄 오일, 특히 점도가 50 내지 500 SUS 범위인 미네랄 오일, 라놀린 오일, 밍크 오일, 코코넛 오일, 코코아 버터, 올리브유, 아몬드유, 마카다미아 넛 오일, 알로에 추출물, 호호바 오일, 홍화유, 옥수수유, 액체 라놀린, 면실유, 땅콩유, 푸르셀린 오일, 퍼히드로스쿠알렌 (스쿠알렌), 피마자유, 폴리부텐, 무취 미네랄 스피릿(spirit), 스위트 아몬드유, 아보카도유, 칼로필룸 오일, 리신 오일, 비타민 E 아세테이트, 올리브유, 미네랄 스피릿, 세테아릴 알콜 (세틸 및 스테아릴 알콜로 주로 구성된 지방 알콜의 혼합물), 리놀렌산 알콜, 올레일 알콜, 옥틸 도데칸올, 곡물 배아유 예컨대 밀 배아유, 세테아릴 옥타노에이트 (세테아릴 알콜과 2-에틸헥산산의 에스테르), 세틸 팔미테이트, 디이소프로필 아디페이트, 이소프로필 팔미테이트, 옥틸 팔미테이트, 이소프로필 미리스테이트, 부틸 미리스테이트, 글리세릴 스테아레이트, 헥사데실 스테아레이트, 이소세틸 스테아레이트, 옥틸 스테아레이트, 옥틸히드록시 스테아레이트, 프로필렌 글리콜 스테아레이트, 부틸 스테아레이트, 데실 올레에이트, 글리세릴 올레에이트, 아세틸 글리세리드, (C12-C15) 알콜의 옥타노에이트 및 벤조에이트, 글리콜 및 글리세롤의 것들과 같은 알콜 및 폴리알콜의 옥타노에이트 및 벤조에이트, 및 알콜 및 폴리알콜의 리신-올레에이트 예컨대 이소프로필 아디페이트, 헥실 라우레이트, 옥틸 도데카노에이트, 디메티콘 코폴리올, 디메티토놀, 라놀린, 라놀린 알콜, 라놀린 왁스, 수소첨가 라놀린, 수산화 라놀린, 아세틸화 라놀린, 바셀린,이소프로필 라놀레이트, 세틸 미리스테이트, 글리세릴 미리스테이트, 미리스틸 미리스테이트, 미리스틸 락테이트, 세틸 알콜, 이소스테아릴 알콜 스테아릴 알콜, 및 이소세틸 라놀레이트 등이 포함된다.
또한, 본 발명에 따른 화장용 또는 제약 조성물은 유화제를 또한 포함할 수 있다. 바람직하게는 유화제 (즉 유화 작용제)는 조성물의 성분들의 균일한 블렌딩을 제공하는데 효과적인 양으로 사용된다. 유용한 유화제에는 (i) 음이온성 물질 예컨대 지방산 비누, 예를 들어, 스테아르산칼륨, 스테아르산나트륨, 스테아르산암모늄, 및 트리에탄올아민 스테아레이트; 지방산 비누를 함유하는 폴리올 지방산 모노에스테르, 예를 들어, 칼륨 또는 나트륨 염을 함유하는 글리세롤 모노스테아레이트; 황산 에스테르 (나트륨 염), 예를 들어, 소듐 라우릴 술페이트, 및 소듐 세틸 술페이트; 및 황산 에스테르를 함유하는 폴리올 지방산 모노에스테르, 예를 들어, 소듐 라우릴 술페이트를 함유하는 글리세릴 모노스테아레이트; (ii) 양이온성 클로 라이드 예컨대 N(스테아롤일 콜아미노 포르밀메틸) 피리듐; N-소야-N-에틸 모르폴리늄 에토술페이트; 알킬 디메틸 벤질 암모늄 클로라이드; 디이소부틸페녹시에톡시에틸 디메틸 벤질 암모늄 클로라이드; 및 세틸 피리듐 클로라이드; 및 (iii) 비이온성 물질 예컨대 폴리옥시에틸렌 지방 알콜 에테르, 예를 들어, 모노스테아레이트; 폴리옥시에틸렌 라우릴 알콜; 폴리옥시프로필렌 지방 알콜 에테르, 예를 들어, 프로폭시화 올레일 알콜; 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트; 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노스테아레이트; 소르비탄 지방산 에스테르, 예를 들어, 소르비탄; 폴리옥시에틸렌 글리콜 지방산 에스테르, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 글리콜 모노스테아레이트; 및 폴리올 지방산 에스테르, 예를 들어, 글리세릴 모노스테아레이트 및 프로필렌 글리콜 모노스테아레이트; 및 에톡시화 라놀린 유도체, 예를 들어, 에톡시화 라놀린, 에톡시화 라놀린 알콜 및 에톡시화 콜레스테롤이 포함된다. 유화제의 선택은 [Schrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika, Huethig Buch Verlag, Heidelberg, 2nd edition, 1989, 3rd part]에 대표적으로 기술되어 있다.
본 발명에 따른 화장용 또는 제약 조성물은 계면활성제를 또한 포함할 수 있다. 적절한 계면활성제에는, 예를 들어, 세정제, 유화제, 포말 증진제, 하이드로트로프(hydrotrope), 가용화제, 현탁화제 및 비-계면활성제 (액체 내의 고체의 분산을 촉진함)로 일반적으로 분류되는 계면활성제들이 포함될 수 있다.
계면활성제는 일반적으로 양쪽성, 음이온성, 양이온성 및 비이온성 계면활성 제로 분류된다. 양쪽성 계면활성제에는 아실아미노산 및 유도체 및 N-알킬아미노산이 포함된다. 음이온성 계면활성제에는 아실아미노산 및 염, 예컨대 아실글루타메이트, 아실펩티드, 아실사르코시네이트, 및 아실타우레이트; 카르복실산 및 염, 예컨대 알칸산, 에스테르 카르복실산, 및 에테르 카르복실산; 술폰산 및 염, 예컨대 아실 이세티오네이트, 알킬아릴 술포네이트, 알킬 술포네이트 및 술포숙시네이트; 황산 에스테르, 예컨대 알킬 에테르 술페이트 및 알킬 술페이트가 포함된다. 양이온성 계면활성제에는 알킬아민, 알킬 이미다졸린, 에톡시화 아민, 및 4차 화합물 (예컨대, 알킬벤질디메틸암모늄 염, 알킬 베타인, 헤테로고리형 암모늄 염, 및 테트라 알킬암모늄 염)이 포함된다. 비이온성 계면활성제에는 알콜, 예컨대 8 내지 18개의 탄소 원자를 함유하는 1차 알콜; 알칸올아미드 예컨대 알칸올아민 유래 아미드 및 에톡시화 아미드; 산화아민; 에스테르 예컨대 에톡시화 카르복실산, 에톡시화 글리세리드, 글리콜 에스테르 및 유도체, 모노글리세리드, 폴리글리세릴 에스테르, 다가 알콜 에스테르 및 에테르, 소르비탄/소르비톨 에스테르, 및 인산의 트리에스테르; 및 에테르 예컨대 에톡시화 알콜, 에톡시화 라놀린, 에톡시화 폴리실록산, 및 프로폭시화 폴리옥시에틸렌 에테르가 포함된다.
또한, 본 발명에 따른 화장용 또는 제약 조성물은 필름 형성제를 또한 포함할 수 있다. 본 발명에 따라 사용되는 적절한 필름 형성제는 조성물을 매끄럽고 균일하게 유지시키고, 아크릴아미드/아크릴산나트륨 공중합체; 암모늄 아크릴레이트 공중합체; 발삼 페루(Balsam Peru); 셀룰로스 검; 에틸렌/말레산 무수물 공중합체; 히드록시에틸셀룰로스; 히드록시프로필셀룰로스; 폴리아크릴아미드; 폴리에틸 렌; 폴리비닐 알콜; pvm/MA 공중합체 (폴리비닐 메틸에테르/말레산 무수물); PVP (폴리비닐피롤리돈); 말레산 무수물 공중합체 예컨대 PA-18 (Gulf Science and Technology로부터 입수가능); PVP/헥사데켄 공중합체 예컨대 Ganex V-216 (GAF Corporation으로부터 입수가능); 아크릴계/아크릴레이트 공중합체 등이 이에 비제한적으로 포함된다.
일반적으로, 필름 형성제는 전체 조성물의 중량의 약 0.1％ 내지 약 10％의 양으로 사용될 수 있고, 약 1％ 내지 약 8％가 바람직하고, 약 0.1 DEG/O 내지 약 5％가 가장 바람직하다. 프룩토스; 글루코스; 글루람산; 글리세린; 꿀; 말티톨; 메틸 글루세트-10; 메틸 글루세트-20; 프로필렌 글리콜; 락트산나트륨; 수크로스 등이 포함되는 보습제 또한 유효량으로 사용될 수 있다.
물론, 본 발명의 화장용 또는 제약 조성물은 방부제를 또한 포함할 수 있다. 본 발명의 특정 조성물에 따른 방부제에는 부틸파라벤; 에틸 파라벤; 이미다졸리디닐 우레아; 메틸파라벤; O-페닐페놀; 프로필파라벤; 쿼터늄-14; 쿼터늄-15; 소듐 데히드로아세테이트; 아연 피리티온 등이 비제한적으로 포함된다.
방부제는 미생물 성장을 방지하거나 지연시키는데 효과적인 양으로 사용된다. 일반적으로, 방부제는 전체 조성물 중량의 약 0.1％ 내지 약 1％의 양으로 사용되고, 약 0.1％ 내지 약 0.8％가 바람직하며, 약 0.1％ 내지 약 0.5％가 가장 바람직하다.
본 발명에 따른 화장용 또는 제약 조성물은 향료를 또한 포함할 수 있다. 당업자에게 주지된 향료 (향기 성분) 및 착색제 (착색 작용제)가 본 발명의 조성물 에 원하는 향기 및 색깔을 부여하는데 효과적인 양으로 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 화장용 또는 제약 조성물은 왁스를 또한 포함할 수 있다. 본 발명에 따라 유용한 적절한 왁스에는 동물성 왁스, 예컨대 밀랍, 경랍, 또는 울 왁스 (라놀린); 식물성 왁스, 예컨대 카르나우바 또는 칸데릴라; 광물성 왁스, 예컨대 몬탄 왁스 또는 오조케라이트; 및 페트롤륨 왁스, 예컨대 파라핀 왁스 및 미세결정질 왁스 (고분자량 페트롤륨 왁스)가 포함된다. 동물성, 식물성, 및 일부 광물성 왁스는 주로 고분자량 지방산 알콜과 고분자량 지방산의 에스테르이다. 예를 들어, 트리콘타놀의 헥사데칸산 에스테르는 밀랍의 주요 성분인 것으로 통상적으로 보고된다. 본 발명에 따른 기타 적절한 왁스에는 일산화탄소와 수소로부터 유도된 탄화수소 왁스 및 폴리에틸렌 폴리옥시에틸렌이 포함되는 합성 왁스가 포함된다.
대표적인 왁스에는 세로신; 세틸 에스테르; 수소첨가 호호바 오일; 수소첨가 호호바 왁스; 수소첨가 쌀겨 왁스; 일본 왁스; 호호바 버터; 호호바 오일; 호호바 왁스; 밍크 왁스; 몬탄산 왁스; 오우리쿠리 왁스; 쌀겨 왁스; 쉘락 왁스; 황화 호호바 오일; 합성 밀랍; 합성 호호바 오일; 트리히드록시스테아린; 세틸 알콜; 스테아릴 알콜; 코코아 버터; 라놀린의 지방산; 25℃에서 고체인 모노-, 디- 및 트리글리세리드, 예를 들어, 글리세릴 트리베헤네이트 (베헨산 및 글리세린의 트리에스테르) 및 C1g-C36 산 트리글리세리드 (C1g-C36 카르복실산 및 글리세린의 트리에스테르의 혼합물) (Croda, Inc. (New York, N.Y.)에서 각각 상표명 Syncrowax HRC 및 Syncrowax HGL-C 하에 입수가능); 25℃에서 고체인 지방 에스테르; 실리콘 왁스 예 컨대 메틸옥타데칸옥시폴리실록산 및 폴리(디메틸실록시) 스테아록시실록산; 스테아릴 모노- 및 디에탄올아미드; 로진 및 이의 유도체 예컨대 글리세롤 및 글리콜의 아비에테이트; 25℃에서 고체인 수소첨가유; 및 수크로글리세리드가 또한 포함된다. 수성 시스템에서 유효량으로 사용될 수 있는 증점제 (점도 제어제)에는 알긴; 카르보머 예컨대 카르보머 934, 934P, 940 및 941 ; 셀룰로스 검; 세테아릴 알콜, 코카미드 DEA, 덱스트린; 젤라틴; 히드록시에틸셀룰로스; 히드록시프로필셀룰로스; 히드록시프로필 메틸셀룰로스; 마그네슘 알루미늄 실리케이트; 미리스틸 알콜; 귀리 분말; 올레아미드 DEA; 올레일 알콜; PEG-7M; PEG-14M; PEG-90M; 스테아르아미드 DEA; 스테아르아미드 MEA; 스테아릴 알콜; 트라가칸트 검; 밀 전분; 잔탄 검 등이 포함되고, 상기 증점제 목록에서, DEA는 디에탄올아민이고, MEA는 모노에탄올아민이다. 비-수성 시스템에서 유효량으로 사용될 수 있는 증점제 (점도 제어제)에는 스테아르산알루미늄; 밀랍; 칸데릴라 왁스; 카르나우바; 세레신; 세테아릴 알콜; 세틸 알콜; 콜레스테롤; 수화 실리카; 수소첨가 피마자유; 수소첨가 면실유; 수소첨가 대두유; 수소첨가 수지(獸脂) 글리세리드; 수소첨가 식물성 오일; 히드록시프로필 셀룰로스; 라놀린 알콜; 미리스틸 알콜; 옥틸도데실 스테아로일 술페이트; 올레일 알콜; 오조케라이트; 미세결정질 왁스; 파라핀, 펜타에리트리틸 테트라옥타노에이트; 폴리아크릴아미드; 폴리부텐; 폴리에틸렌; 프로필렌 글리콜 디카프릴레이트; 프로필렌 글리콜 디페라르고네이트; 스테아르알코늄 헥토라이트; 스테아릴 알콜; 스테아릴 스테아레이트; 합성 밀랍; 트리히드록시스테아린; 트리리놀레인; 트리스테아린; 스테아르산아연 등이 포함된다.
제형 내의 통상적인 천연 및 합성 증점제 또는 젤 형성제는 가교 폴리아크릴산 및 이의 유도체, 다당류, 예컨대 잔탄 검 또는 알기네이트, 카르복시메틸셀룰로스 또는 히드록시카르복시메틸셀룰로스, 하이드로콜로이드 예컨대 아라비아 고무 또는 몬트모릴로나이트 광물, 예컨대 벤토나이트 또는 지방 알콜, 폴리비닐 알콜 및 폴리비닐피롤리돈이다.
의도된 목적에 효과적인 양으로 본 발명에 따른 화장용 또는 제약 조성물에 첨가되거나 이러한 조성물에서 사용될 수 있는 기타 성분에는 성능 또는 소비자 매력을 증강시키는 생물학적 첨가물 예컨대 아미노산, 단백질, 바닐라, 알로에 추출물, 바이오플라비노이드(bioflavinoid) 등; 완충제, 킬레이트화제 예컨대 EDTA; 에멀션 안정화제; pH 조정제; 불투명화제; 및 추진제 예컨대 부탄, 이산화탄소, 에탄, 히드로클로로플루오로카본 22 및 142b, 히드로플루오로카본 152a, 이소부탄, 이소펜탄, 질소, 산화질소, 펜탄, 프로판 등이 포함된다.
또한, 본 발명에 따른 제제는 이의 작용을 보충하거나 증강시키기 위해 항산화성, 자유-라디칼 소거제, 피부 보습 또는 수분-유지, 홍반 방지성, 항염증성 또는 항알레르기성 작용이 있는 화합물을 또한 포함할 수 있다. 특히, 이러한 화합물들은 비타민, 식물 추출물, 알파- 및 베타-히드록시산, 세라마이드, 항염증성, 항균성 또는 UV-여과 물질, 및 이의 유도체 및 이의 혼합물의 군으로부터 선택될 수 있다. 유리하게는, 본 발명에 따른 제제는 UV-B 및/또는 UV-A 영역의 UV 조사를 흡수하는 물질을 또한 포함한다. 지질 상은 미네랄 오일, 광물성 왁스, 분지형 및/또는 비-분지형 탄화수소 및 탄화수소 왁스, 포화 및/또는 불포화, 분지형 및/ 또는 비-분지형 C8-C24-알칸카르복실산의 트리글리세리드 물질의 군으로부터 유리하게 선택된다; 이는 합성, 반합성 또는 천연 오일, 예컨대 올리브유, 야자유, 아몬드유 또는 혼합물; 방향족 카르복실산 및 포화 및/또는 불포화, 분지형 및/또는 비-분지형 C3-C30-알콜로부터의, 포화 및/또는 불포화, 분지형 및/또는 비-분지형 C3-C30-알칸 카르복실산 및 포화 및/또는 불포화, 분지형 및/또는 비-분지형 C3-C30-알콜의 에스테르, 오일, 지방 또는 왁스, 예를 들어 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 스테아레이트, 헥실데실 스테아레이트, 올레일 올레에이트; 및 또한 이같은 에스테르의 합성, 반합성 및 천연 혼합물, 예컨대 호호바 오일, 알킬 벤조에이트 또는 실리콘 오일, 예를 들어, 시클로메티콘, 디메틸폴리실록산, 디에틸폴리실록산, 옥타메틸시클로-테트라실록산 및 이의 혼합물 또는 디알킬 에테르로부터 선택될 수 있다.
본 발명에 따른 활성 성분은 피부 청결을 위한 화장용 조성물, 예컨대 막대 비누, 화장실용 비누, 커드(curd) 비누, 투명 비누, 고급 비누, 탈취 비누, 크림 비누, 유아용 비누, 피부 보호 비누, 마모성 비누, 합성세제(syndet), 액체 비누, 페이스트 비누, 연질 비누, 세정용 페이스트, 액체 세정, 샤워 및 목욕 제제, 예를 들어 세정 로션, 샤워 제제, 샤워 젤, 거품 목욕제, 크림 거품 목욕제, 오일 목욕제, 목욕용 추출물, 스크럽 제제, 원위치 제품, 면도 거품제, 면도 로션, 면도 크림에서 예를 들어 사용될 수 있다. 또한, 이는 피부 화장용 제제, 예컨대 W/O 또는 O/W 피부 및 신체용 크림, 주간용 및 야간용 크림, 일광 보호 조성물, 일광노출 후를 위한 제품, 손 관리 제품, 안면용 크림, 다중 에멀션, 젤리, 마이크로에멀션, 리포솜 제제, 니오솜 제제, 항-주름 크림, 안면용 오일, 리포젤, 스포츠젤, 보습 크림, 표백 크림, 비타민 크림, 피부 로션, 관리 로션, 앰플, 애프터쉐이브 로션, 프리쉐이브(preshave) 제품, 습윤 로션, 태닝 로션, 셀룰라이트 크림, 탈색 조성물, 마사지 제제, 신체용 파우더, 안면용 토닉(tonic), 탈취제, 발한억제제, 코용 스트립, 항-여드름 조성물, 방수제 및 기타물질에 적절하다.
바람직한 실시양태에서, 화장용 조성물은 일상 관리용 O/W 제형을 포함하고, 이는 INCI (International Nomenclature of Cosmetic Ingredients)에 따라 ％로 하기의 성분들을 예를 들어 함유할 수 있다:
A 1.7 세테아레트-6, 스테아릴 알콜
0.7 세테아레트-25
2.0 디에틸아미노 히드록시벤조일 헥실 벤조에이트
2.0 PEG-14 디메티콘
3.6 세테아릴 알콜
6.0 에틸헥실 메톡시신나메이트
2.0 디부틸 아디페이트
B 5.0 글리세롤
0.2 디소듐 EDTA
1.0 판테놀
q.s. 방부제
67.8 탈염수
C 4.0 카프릴산/카프르산 트리글리세리드, 소듐 아크릴레이트 공중합체
D 0.2 소듐 아스코르빌 포스페이트
1.0 토코페릴 아세테이트
0.2 비사볼롤
1.0 카프릴산/카프르산 트리글리세리드, 아스코르브산나트륨,
토코페롤, 레티놀
1.0 락토바실루스 종
E q.s. 수산화나트륨
상 A 및 B를 별도로 약 80℃로 가열한다. 이어서 상 B를 상 A 내로 교반하고, 균질화시킨다. 상 C를 상 A 및 B의 조합물 내로 교반하고, 균질화시킨다. 혼합물을 진탕 하에 약 40℃로 냉각시킨 후, 상 D를 첨가하고, 상 E로 pH를 약 6.5로 조정한다. 이어서 용액을 균질화시키고, 실온으로 냉각시킨다.
추가적인 바람직한 실시양태에서, 화장용 조성물은 주간용 보호 크림 O/W 제형을 포함하고, 이는 INCI에 따라 ％로 하기의 성분들을 예를 들어 함유할 수 있다:
A 1.7 세테아레트-6, 스테아릴 알콜
0.7 세테아레트-25
2.0 디에틸아미노 히드록시벤조일 헥실 벤조에이트
2.0 PEG-14 디메티콘
3.6 세테아릴 알콜
6.0 에틸헥실 메톡시신나메이트
2.0 디부틸 아디페이트
B 5.0 글리세롤
0.2 디소듐 EDTA
1.0 판테놀
q.s. 방부제
68.6 탈염수
C 4.0 카프릴산/카프르산 트리글리세리드, 소듐 아크릴레이트 공중합체
D 1.0 소듐 아스코르빌 포스페이트
1.0 토코페릴 아세테이트
0.2 비사볼롤
1.0 락토바실루스 종
E q.s. 수산화나트륨
상 A 및 B를 별도로 약 80℃로 가열한다. 이어서 상 B를 상 A 내로 교반하고, 균질화시킨다. 상 C를 상 A 및 B의 조합물 내로 도입하고, 균질화시킨다. 혼합물을 진탕 하에 약 40℃로 냉각시킨 후, 상 D를 첨가하고, 상 E로 pH를 약 6.5로 조정한다. 이어서 용액을 균질화시키고, 실온으로 냉각시킨다.
추가적인 바람직한 실시양태에서, 화장용 조성물은 피부 세정제 O/W 제형을 포함하고, 이는 INCI에 따라 ％로 하기의 성분들을 예를 들어 함유할 수 있다:
A 10.0 세테아릴 에틸헥사노에이트
10.0 카프릴산/카프르산 트리글리세리드
1.5 시클로펜타실록산, 시클로헥사실록산
2.0 PEG-40 수소첨가 피마자유
B 3.5 카프릴산/카프르산 트리글리세리드, 소듐 아크릴레이트 공중합체
C 1.0 토코페릴 아세테이트
0.2 비사볼롤
q.s. 방부제
q.s. 향료 오일
D 3.0 폴리쿼터늄-44
0.5 코코트리모늄 메토술페이트
0.5 세테아레트-25
2.0 판테놀, 프로필렌 글리콜
4.0 프로필렌 글리콜
0.1 디소듐 EDTA
1.0 락토바실루스 종
60.7 탈염수
먼저, 상 A를 용해시키고, 이어서 상 B를 상 A 내로 교반시킨다. 이어서, 상 C를 상 A 및 B의 조합물 내로 도입한다. 다음 단계에서, 상 D를 용해시키고, 조합된 상 A, B 및 C 내로 교반시킨다. 혼합물을 균질화시키고, 15분 동안 교반한 다.
추가적인 바람직한 실시양태에서, 화장용 조성물은 일상 관리용 신체 스프레이 제형을 포함하고, 이는 INCI에 따라 ％로 하기의 성분들을 예를 들어 함유할 수 있다:
A 3.0 에틸헥실 메톡시신나메이트
2.0 디에틸아미노 히드록시벤조일 헥실 벤조에이트
1.0 폴리쿼터늄-44
3.0 프로필렌 글리콜
2.0 판테놀, 프로필렌 글리콜
1.0 시클로펜타실록산, 시클로헥사실록산
10.0 옥틸도데칸올
0.5 PVP
10.0 카프릴산/카프르산 트리글리세리드
3.0 C12-15 알킬 벤조에이트
3.0 글리세롤
1.0 토코페릴 아세테이트
0.3 비사볼롤
1.0 락토바실루스 종
59.2 알콜
상 A의 성분들을 칭량하고, 투명할 때까지 용해시킨다.
추가적인 바람직한 실시양태에서, 화장용 조성물은 피부 젤을 포함하고, 이는 INCI에 따라 ％로 하기의 성분들을 예를 들어 함유할 수 있다:
A 3.6 PEG-40 수소첨가 피마자유
15.0 알콜
0.1 비사볼롤
0.5 토코페릴 아세테이트
q.s. 향료 오일
B 3.0 판테놀
0.6 카르보머
1.0 락토바실루스 종
75.4 탈염수
C 0.8 트리에탄올아민
먼저, 상 A를 투명할 때까지 용해시킨다. 상 B를 침연시키고, 이어서 상 C로 중화시킨다. 다음 단계에서, 상 A를 균질화된 상 B 내료 교반시키고, 혼합물을 균질화시킨다.
추가적인 바람직한 실시양태에서, 화장용 조성물은 애프터쉐이브 로션을 포함하고, 이는 INCI에 따라 ％로 하기의 성분들을 예를 들어 함유할 수 있다:
A 10.0 세테아릴 에틸헥사노에이트
5.0 토코페릴 아세테이트
1.0 비사볼롤
0.1 향료 오일
0.3 아크릴레이트/c10-30 알킬 아크릴레이트 가교중합체
B 15.0 알콜
1.0 판테놀
3.0 글리세롤
1.0 락토바실루스 종
0.1 트리에탄올아민
63.5 탈염수
상 A의 성분을 혼합한다. 다음 단계에서, 상 B를 용해시키고, 상 A 내로 도입하고, 이어서 균질화시킨다.
또한 본 발명은 피부염, 바람직하게는 아토피 피부염, 건선, 덩굴옻나무 피부염, 포진상 습진, 독창 또는 옴의 예방 또는 치료를 위한 제약 조성물의 제조를 위한 본원에 상기 기술된 바와 같은 본 발명에 따른 미생물 또는 이의 유도체, 돌연변이체 또는 불활성 형태의 용도에 관한 것이다.
또다른 양상에서, 본 발명은 본원에 상기 기술된 바와 같은 본 발명의 미생물 또는 이의 유도체 또는 돌연변이체 또는 불활성 형태를 화장용으로 및/또는 제약상 허용가능한 담체 또는 부형제와 배합하는 단계를 포함하는 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.
또한 본 발명은 피부염, 바람직하게는 아토피 피부염, 건선, 덩굴옻나무 피부염, 포진상 습진, 독창 또는 옴의 예방 또는 치료를 필요로 하는 환자에게 예방 적 또는 치료적 유효량의 본 발명에 따른 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 피부염, 바람직하게는 아토피 피부염, 건선, 덩굴옻나무 피부염, 포진상 습진, 독창 또는 옴의 예방 또는 치료 방법에 관한 것이다.
본 발명이 본원에 기술된 특정 방법론, 프로토콜, 세균, 벡터, 및 시약 등에 한정되지 않는 것으로 이해되는데, 이들이 변할 수 있기 때문이다. 또한 본원에서 사용된 용어는 단지 특정 실시양태를 기술하기 위한 목적이고, 첨부된 청구항에 의해서만 한정되는 본 발명의 범주를 제한하도록 의도되지 않는 것으로 이해된다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 당업자가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다.
바람직하게는, 본원에서 사용된 용어는 ["A multilingual glossary of biotechnological terms: (IUPAC Recommendations)", Leuenberger. H.G.W, Nagel. B. and Koelbl. H. eds. (1995), Helvetica Chimica Acta (CH-4010 Basel, Switzerland)]에 기술된 바와 같이 정의된다. 본 명세서 및 하기의 청구항 전반에 걸쳐, 문맥적으로 달리 요구되지 않는 한, 용어 "포함하다" 및 이의 변형 예컨대 "포함하는"은 언급된 정수 또는 단계, 또는 정수 또는 단계의 군의 포함을 의미하지만, 임의의 다른 정수 또는 단계, 또는 정수 또는 단계의 군의 배제를 의미하지 않는 것으로 이해될 것이다.
여러 문헌이 본 명세서의 본문 전반에 걸쳐 인용된다. 본원에 인용된 각각의 문헌 (모든 특허, 특허 출원, 과학 간행물, 제조업자의 설명서, 사용설명서 등 포함)은, 상기 또는 하기 여부와 상관 없이, 거명에 의해 전체적으로 본원에 포함 된다. 본원에서의 어떠한 것도 본 발명이 종래 발명에 의한 이같은 개시 내용에 선행하는 권리를 갖지 않는 것을 승인하는 것으로 해석되지 않는다.
본원에서 및 첨부된 청구항에서 사용될 때, 단수형은 문맥적으로 명확하게 다르게 지시하지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다는 것을 주지하여야 한다. 따라서, 예를 들어, "시약"에 대한 언급은 1가지 이상의 상이한 시약을 포함하고, "방법"에 대한 언급은 본원에 기술된 방법들에 대해 변형될 수 있거나 이를 대체할 수 있는 당업자에게 공지된 등가의 단계들 및 방법들에 대한 언급을 포함한다.
두번째 양상에서, 본 발명은 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장을 억제할 수 있고 건강한 정상적인 상주성 피부 미생물총의 성장을 억제하지 않는 미생물에 관한 것이다.
본 발명자들은 병원성 미생물에 의한 콜로니형성에 대한 효과적인 피부 보호가 상기 기술된 미생물 또는 이의 불활성화 형태를 피부에 투여함으로써 달성될 수 있다는 것을 뜻밖에 발견하였다. 본 발명자들은 최초로 상응하는 미생물을 확인하였고, 이의 확인 방법을 제공하였다. 이러한 미생물은 피부 상에서의 미생물의 성장을 차별적으로 억제할 수 있고, 즉 병원성 미생물의 성장을 선택적으로 억제하지만, 건강한 공생 미생물총의 서식체의 성장에는 영향을 미치지 않는다. 따라서, 이러한 미생물은 천연 피부 세균총을 재생 및 안정화시킬 수 있다.
다수의 상이한 미생물이 피부 상에 존재한다. 일부는 피부의 정상적인 (상주성) 세균총에 속하고 무해한 공생물이고, 일부는 잠재적인 병원체이다.
기본적으로, 피부 상의 생물은 2가지 카테고리로 분류될 수 있다: 1. 상주성 생물: 상주성 생물은 피부, 각질층의 표면 상에, 그리고 표피의 외부층 및 피부 및 모낭의 더 깊은 틈새 내에 콜로니를 형성하는 피부의 영구적인 서식체이다. 상주성 피부 미생물총의 이러한 미생물들은 피부 조직을 침범하거나 손상시키지 않으면서 피부 상에서 성장 및 번식할 수 있다. 세정은 심부 피부 영역 내의 이러한 생물들을 쉽게 제거하지 않는다. 상주성 미생물은 무해한 공생물이다.
2. 일과성 생물: 일과성 생물은 피부 상에 침착되지만 피부에서 번식하지 않는 미생물 또는 피부 상에서 번식하고 단기간 동안 지속되는 공생물이다. 이는 미세환경이 상주성 피부 미생물총에 의해 크게 결정되는 건강한 피부 상에서 영구적으로 정주할 수 없다. 일과성 생물은 잠재적으로 병원성이다.
따라서, 용어 "일과성 병원성 피부 미생물총"은 피부 상에 침착되지만 피부에서 번식하지 않는 미생물 또는 피부 상에서 번식하고 단기간 동안 지속되는 공생물을 지칭한다. 특히, 미생물이 피부 상에 적용되어, 건강한 피부에 의해 제공되는 환경 조건 하에 피부에서 성장 및 재생될 수 없고, 이러한 기관 (또는 이의 영역)에서 영구적으로 콜로니를 형성할 수 없다면, 이는 일과성 병원성 피부 미생물총에 속하는 것으로 간주된다. 여러 세균, 효모 및 진균이 인간 피부로부터 일시적으로 단리될 수 있지만, 특히 하기의 미생물들이 이들의 빈번한 출현으로 인해 일과성 병원성 피부 미생물총으로 분류될 수 있다: 황색 포도상구균, 화농성 연쇄상구균, 그람-음성 바실루스 (예를 들어 아세네토박테르 칼코아세티쿠스), 칸디다 알비칸스 및 어루러기균. 종종 일과성 미생물총의 미생물은 세균이 장애가 있는 피부 영역에 부착되도록 하는 병원성 인자이다. 이는 예를 들어 콜라겐 구조 또는 각질 구조에의 부착일 수 있다.
피부 미생물총의 구성성분 및 조성이, 예를 들어 스카치 테이프로 피부 상부층을 박리함으로써, 정량적 및 정성적으로 결정될 수 있다. 피부 미생물총의 미생물은 스카치 테이프에 의해 예를 들어 박리된 10개의 상부 피부 층 내에서 확인될 수 있다. 예를 들어, 이러한 미생물들을 단리하기 위해, 6개의 2 ㎠ 스카치 테이프를 한정된 영역의 피부, 바람직하게는 팔뚝 상에 각각 눌러 붙인 후, 각각의 테이프 스트립을 피부로부터 그람 양성 세균용 (예를 들어 BHI, Difco Inc.) 또는 그람 음성 세균용 (예를 들어 MacConkey 한천, Difco Inc.) 선택 배양 한천 플레이트 또는 효모 및 진균용 선택 배양 한천 (예를 들어 Plate Count Agar, Difco Inc.)으로 옮긴다. 그 후, 피부로부터 배양 한천 플레이트로 옮겨진 미생물을 30℃ 및 37℃에서, 약 24시간 동안 호기성 및 혐기성 배양시킨다. 콜로니 형성 단위를 정성적 분석을 위해 형태학적 및 생화학적 방법에 의해, 그리고 정량을 위해 카운팅에 의해 결정한다. 상대적인 조성 및 전체 세포 카운트를 결정한다. 당업자는 당업계에 공지된 방법에 의해 상기 기술된 바와 같이 단리된 피부 미생물총의 미생물의 속 및/또는 종을 결정할 수 있다.
일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물은, 예를 들어, 대사 발자국법, 지방산 조성 및 세포벽 조성의 평가, 16S 리보솜 RNA의 서열분석, 또는 특정 병원성 인자를 코딩하는 특정 DNA 프로브의 검출에 의해 결정될 수 있다.
미생물은 이와 접촉되었을 때 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물의 성장이 감소되면 일과성 병원성 피부 미생물총의 이같은 미생물의 성장을 억제하는 것 으로 간주된다. 용어 "일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물의 성장의 억제한다"는 본 발명의 미생물이 일과성 병원성 세균총의 1가지 이상, 바람직하게는 1가지 초과, 바람직하게는 2가지 초과, 더욱 바람직하게는 5가지 초과, 특히 바람직하게는 임의의 미생물의 성장을 감소시키는 것을 의미한다. 추가적인 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 미생물은 일과성 병원성 피부 미생물총의 주요 대표물, 즉 황색 포도상구균의 성장을 억제한다. 추가적인 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 미생물은 황색 포도상구균의 성장을 특이적으로 억제한다. 바람직하게는, "특이적으로"는 황색 포도상구균의 성장을 억제하지만, 다른 미생물, 특히 상주성 피부 미생물총에 속하는 미생물의 성장은 현저하게 억제하지 않거나 미량의 정도로만 억제하는 것을 의미한다. 더욱 바람직하게는, 용어 "특이적으로"는 포도상구균에 대한 억제 정도가 또다른 미생물, 특히 상주성 피부 미생물총의 미생물에 대한 억제 정도보다 훨씬 더 높다는 것을 의미한다. 특히 바람직하게는, 용어 "특이적으로"는 당업자에게 공지된 적절한 성장 분석법에서 본 발명의 미생물의 존재 하에서의 황색 포도상구균의 증식이 본 발명의 미생물의 존재 하에서의 또다른 미생물, 특히 상주성 피부 미생물총의 또다른 미생물의 증식의 50％ 이하라는 것을 의미한다. 바람직하게는, 황색 포도상구균의 증식은 본 발명의 미생물의 존재 하에 또다른 미생물, 특히 상주성 피부 미생물총의 또다른 미생물의 증식의 40％, 30％, 20％, 10％, 더욱 바람직하게는 5％, 가장 바람직하게는 0％이다. 황색 포도상구균의 특이적 억제는 마이크로코쿠스 루테우스 및 대장균이 시험관내 액체 분석법에서 본 발명에 따른 미생물에 의해 억제되지 않는 것을 실례로서 나타내는 실시예 10 및 11 에 지시되어 있다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 미생물은 황색 포도상구균의 성장을 억제하지만, 마이크로코쿠스 루테우스 및/또는 대장균의 성장을 억제하지 않는다.
특히 바람직한 실시양태에서, 황색 포도상구균의 특이적 억제는 글리세롤을 포함하는 배양 조건이 사용되는 경우에 검출될 수 있다.
성장 감소는 바람직하게는 증식, 즉 단위 당 세포 분할에서의 감소를 의미한다. 별법적으로, 용어 "억제하다"는 개별적인 세포 크기에서의 감소를 또한 지칭한다. 세균 세포 크기는 SYBR Green I (Molecular Probes, USA) 염료로 염색한 후 유세포 분석법 (예를 들어 Becton-Dickinson FACSort 유세포 분석기, San Jose, CA)에 의해 평가할 수 있다. 세균 세포 크기는 측방 광 산란 (SSC) 모드로 평가된다.
따라서 성장 감소는 시간 단위 당 생물량 생산에서의 감소를 의미한다.
일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물(들)의 성장 억제가 바람직하게는 시험관 내에서, 더욱 바람직하게는 본 발명에 따른 미생물이 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물과 접촉되고 이러한 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물(들)의 성장이 결정되는 분석법에서 관찰될 수 있다. 여러 시간 간격의 인큐베이션 후 세포/콜로니의 수를 카운팅함으로써 성장을 결정할 수 있고, 본 발명에 따른 미생물을 함유하지 않는 대조군과 비교할 수 있으며, 이에 의해 성장에서의 증가 또는 감소 여부가 결정된다.
성장 억제를 결정하기 위한 시험관내 분석법은 실시예에 기술되고, 소위 "시 험관내 홀 플레이트 분석법"을 포함한다. 간략하게, 이같은 분석법은 하기의 단계들을 포함한다:
- 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물을 배양하고, 각각의 미생물(들)의 성장 및 바람직하게는 검출을 위한 적절한 한천 배지를 함유하는 준비된 한천 플레이트 상에 이를 균일하게 스프레딩하는 단계;
- 접종된 한천 플레이트 내에 홀을 제공하는 단계;
- 본 발명에 따른 미생물의 예비배양 세포로 홀을 채우는 단계;
- 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물(들)이 성장되도록 하는 조건 하에 적합한 시간 동안 한천 플레이트를 인큐베이션하는 단계; 및
- 본 발명에 따른 미생물을 함유하는 홀을 둘러싸는 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물(들)의 성장을 결정하고, 이를 본 발명에 따른 미생물을 함유하지 않는 홀을 둘러싸는 미생물(들)의 성장과 비교하는 단계.
마지막 단계에서의 성장 결정은 세포 및/또는 콜로니의 수를 결정하기 위한 입수가능한 수단 및 방법에 의해, 예를 들어 적합한 염료로 염색하고 세포/콜로니를 현미경 하에 카운팅함으로써 및/또는 광학 수단 예컨대 농도계측기에 의해 실행될 수 있다.. 바람직한 실시양태에서, 홀 주변의 발생된 소거(clearing) 구역의 직경을 사용하여, 억제 면적을 결정할 수 있다.
더욱 바람직하게는, 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물(들)의 성장 억제를 "시험관내 액체 분석법"에서 결정할 수 있다. 이같은 분석법은 실시예에 기술되고, 간략하게 하기의 단계들을 포함한다:
- 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물을 액체 배지에서 배양하는 단계;
- 본 발명에 따른 미생물의 액체 배양물의 분취량 및 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물의 액체 배양물의 분취량을 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물이 성장되도록 하는 배양 배지에 적용하는 단계;
- 본 발명에 따른 미생물 및 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물을 액체 배양물에서 공동 배양하는 단계;
- 공동 배양 액체 배양물의 분취량을 적합한 성장 배지를 함유하는 한천 플레이트로 옮기는 단계;
- 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물(들)이 성장되도록 하는 기간의 시간 동안, 그리고 조건 하에 한천 플레이트를 인큐베이션하는 단계;
- 콜로니 형성 단위의 정량에 의해 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물(들)의 성장을 결정하고, 이를 본 발명의 미생물이 적용되지 않은 대조군에서의 미생물(들)의 성장과 비교하는 단계.
더욱 더 바람직하게는, 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물(들)의 성장 억제를 "원위치 피부 분석법"에서 또한 관찰할 수 있다. 이같은 분석법은 실시예에 기술되고, 간략하게, 하기의 단계들을 포함한다:
- 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물을 배양하고, 이를 테스트 개체의 피부 구역 상에 균일하게 스프레딩하는 단계;
- 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물(들)이 스프레딩된 구역 내의 점 구역에 분취량의 본 발명에 따른 미생물을 적용하는 단계;
- 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물(들)이 성장되도록 하기에 충분한 시간 동안 피부를 인큐베이션하는 단계;
- 내부에 포함된 미생물을 포함하여 상부 피부 층을 적합한 성장 배지를 함유하는 한천 플레이트로 옮기는 단계;
- 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물(들)이 성장되도록 하는 기간의 시간 동안, 그리고 조건 하에 한천 플레이트를 인큐베이션하는 단계;
- 본 발명에 따른 미생물이 적용된 구역을 둘러싸는 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물(들)의 성장을 결정하고, 이를 본 발명에 따른 미생물이 적용되지 않은 대조군에서의 미생물(들)의 성장과 비교하는 단계.
이러한 분석법에 사용된 피부 구역은 개체, 바람직하게는 인간 개체의 피부의 임의의 적절한 구역일 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 이는 인간 개체의 팔뚝의 피부 구역이다. 구역의 크기는 결정적이지 않고, 바람직하게는 약 1 내지 40 ㎠, 더욱 바람직하게는 5 내지 20 ㎠, 더욱 더 바람직하게는 5 내지 10 ㎠, 예를 들어 약 5,6, 7, 8, 9 또는 10 ㎠이다.
일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물(들)은 구역 상에 균일하게, 바람직하게는 약 102 cfu/㎠ - 103 cfu/㎠의 밀도로 분포된다. 피부 상에 스프레딩된 미생물(들)은 공기 건조되고, 분취량의 본 발명에 따른 미생물이 구역 내에 점 방식으로 적용된다. 이는 당업자에게 공지된 수단에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따른 미생물을 원심분리한다 (15 분, 4000 × g). 세포 펠렛을 K/Na-완충제로 2회 세정한다 (각각 1 ㎖). 세포를 200 ㎕ K/Na 완충제에 재현탁시키고, 10 ㎕의 제조된 미생물을 예비-접종된 피부 구역 상에 마이크로피펫으로 점 적용한다.
피부의 인큐베이션은, 예를 들어 2 시간 동안, 바람직하게는 실온에서 일어난다. 내부에 포함된 미생물을 포함하여 상부 피부 층을 옮기는 것은, 예를 들어, 접착성 테이프 스트립을 사용하여 실행할 수 있다. 상부 피부 층이 옮겨진 한천 플레이트를 테스트되는 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물(들)이 성장되도록 하는 온도에서 인큐베이션하고, 이는 이러한 미생물(들)의 성장을 지지하는 것으로 공지된 성장 배지를 함유한다. 인큐베이션은 전형적으로 약 24시간 동안 일어난다. 미생물(들)의 성장은 당업자에게 공지된 방법에 의해 검출할 수 있다. 바람직하게는, 농도계측기에 의해 또는 분취량의 본 발명의 미생물이 적용된 점 주변에 형성된 콜로니를 카운팅함으로써 결정된다. 세균 세포 크기를 SYBR Green I (Molecular Probes, USA) 염료로 염색한 후 유세포 분석법 (예를 들어 Becton-Dickinson FACSort 유세포 분석기, San Jose, CA)에 의해 평가할 수 있다. 세균 세포 크기는 측방 광 산란 (SSC) 모드로 평가된다.
미생물은 "시험관내 홀 플레이트 분석법"에서 미생물이 첨가되지 않은 대조군과 비교하여 일과성 병원성 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장이 적어도 5％, 바람직하게는 적어도 10％, 20％, 30％, 40％, 50％, 60％, 또는 70％, 80％, 더욱 바람직하게는 적어도 90％, 더욱 더 바람직하게는 적어도 95％, 가장 바람직 하게는 적어도 99％ 감소되는 경우 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 이같은 미생물의 성장을 억제하는 것으로 간주된다.
더욱 바람직하게는, 미생물은 "시험관내 액체 분석법"에서 미생물이 첨가되지 않은 대조군과 비교하여 일과성 병원성 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장이 적어도 5％, 바람직하게는 적어도 10％, 20％, 30％, 40％, 50％, 60％, 또는 70％, 80％, 더욱 바람직하게는 적어도 90％, 더욱 더 바람직하게는 적어도 95％, 가장 바람직하게는 적어도 99％ 감소되는 경우 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 이같은 미생물의 성장을 억제하는 것으로 간주된다.
가장 바람직하게는, 미생물은 원위치 피부 분석법에서 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장이 적어도 5％, 바람직하게는 적어도 10％, 20％, 30％, 40％, 50％, 60％, 또는 70％, 80％, 더욱 바람직하게는 적어도 90％, 더욱 더 바람직하게는 적어도 95％, 가장 바람직하게는 적어도 99％ 감소되는 경우 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 이같은 미생물의 성장을 억제하는 것으로 간주된다.
미생물이 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물, 예를 들어 황색 포도상구균의 성장을 억제하는지 또는 억제하지 않는지 여부를 결정하기 위한 테스트는 바람직하게는 본원에 상기 기술된 바와 같은 시험관내 및/또는 원위치 테스트, 더욱 바람직하게는 실시예에 기술된 바와 같은 테스트이다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 미생물은 병원성 일과성 미생물총 중 1가지 이상의 미생물, 바람직하게는 황색 포도상구균의 성장을 억제하고, 이는 항생제의 사용 후 1가지 이상의 이같은 미생물의 성장 억제에 필적한다. 용어 "필적"은 특정한 양의 본 발명에 따른 미생물의 억제 활성이 항생제의 활성과 동일한 범위 내에 있다는 것을 의미한다. 특히, 이러한 효과는 바람직하게는 1.0 × 108 내지 3.0 × 109 개의 세포, 더욱 바람직하게는 2.0 × 108 내지 1.0 × 109 개의 세포, 더욱 더 바람직하게는 3.0 × 108 내지 5.0 × 108 개의 세포, 가장 바람직하게는 3.4 × 108 개의 세포의 양을 사용함으로써 달성될 수 있고, 이러한 양의 세포에 의해 달성되는 억제 활성은 바람직하게는 5 내지 15 유닛의 항생제에 상응한다. 용어 "항생제"는 미생물의 성장을 억제하거나 이를 죽이는 능력을 갖는 화학 물질을 지칭한다. 이같은 물질은 당업자에게 공지되어 있다. 바람직하게는, 이 용어는 베타-락탐 화합물 예컨대 페니실린, 세팔로스포린 또는 카르바페넴; 마크로라이드; 테트라사이클린; 플루오로퀴놀론; 술폰아미드; 아미노글리코시드; 이미다졸; 펩티드-항생제 및 린코사마이드를 지칭한다. 더욱 바람직하게는, 이 용어는 바시트라신 및 에리트로마이신에 관련된다. 바람직한 실시양태에서, 용어 "필적"은 약 3.4 × 108 개의 본 발명의 미생물의 세포의 억제 활성이 약 150 ㎍의 바시트라신 또는 약 2.5 ㎍의 에리트로마이신에 상응하는 것을 의미한다. 가장 바람직하게는, 용어 "필적"은 약 3.4 × 108 개의 본 발명의 미생물의 세포의 억제 활성이, 실시예 12에 설명된 바와 같이, 지표 균주로서의 황색 포도상구균에 대해 약 150 ㎍의 바 시트라신 또는 약 2.5 ㎍의 에리트로마이신에 상응하는 것을 의미한다.
용어 "병원성 일과성 미생물총의 미생물"은 본원에 상기 기술되어 있다. 바람직하게는, 이 용어는 황색 포도상구균에 관한 것이다. 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물(들)의 성장 억제 정도가 항생제 사용 후 1가지 이상의 이같은 미생물의 성장 억제와 비교하여 바람직하게는 시험관 내에서, 더욱 바람직하게는 본 발명에 따른 미생물이 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물과 접촉되고 일과성 병원성 피부 미생물총의 이러한 미생물(들)의 성장이 결정되는 분석법에서 관찰될 수 있다. 가장 바람직하게는, 성장 억제 비교는 실시예에 기술되고 본원에 상기 언급된 바와 같은 "시험관내 홀 플레이트 분석법"에서 결정될 수 있다. 간략하게, "시험관내 홀 플레이트 분석법"에서의 이같은 비교는 하기의 단계들을 포함한다:
- 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물을 배양하고, 각각의 미생물(들)의 성장 및 바람직하게는 검출을 위한 적절한 한천 배지를 함유하는 준비된 한천 플레이트 상에 이를 균일하게 스프레딩하는 단계;
- 접종된 한천 플레이트 내에 홀을 제공하는 단계;
- 본 발명에 따른 미생물의 예비배양 세포로 홀을 채우고, 여러 농도의 항생제로 일부 홀을 채우는 단계;
- 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물(들)이 성장되도록 하는 조건 하에 적합한 시간 동안 한천 플레이트를 인큐베이션하는 단계;
- 본 발명에 따른 미생물을 함유하는 홀을 둘러싸는 일과성 병원성 피부 미생물총 의 미생물(들)의 성장을 결정하고, 이를 여러 농도의 항생제를 함유하는 홀을 둘러싸는 미생물(들)의 성장과 비교하는 단계;
- 홀의 억제 구역의 직경을 측정하고, 억제 면적을 계산하는 단계; 및
- 본 발명에 따른 미생물 및 항생제에 의해 야기되는 성장 억제를 상호관련시키는 단계.
바람직한 실시양태에서, 용어 "일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 억제한다"는 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물의 성장 감소가 (방어적인) 항균 물질의 방출로 인한 것임을 의미한다. 용어 "항균 물질"은 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물의 성장의 선택적인 억제를 매개할 수 있는 물질을 지칭한다. 바람직하게는, 이러한 물질은 프로테아제 소화에 대해 민감하지 않다. 용어 "민감하지 않은"은 물질이 프로테아제 활성에 영향을 받지 않거나 오직 부분적으로만 영향을 받는다는 것을 의미한다. 용어 "프로테아제"는 당업자에게 공지된, 단백질 내의 내부 펩티드 결합의 분리를 촉매하는 임의의 효소를 지칭한다. 바람직한 실시양태에서, 이 용어는 단백질분해효소 K, 스트렙토마이세스 그리세우스(Streptomyces griseus)로부터의 프로테아제, 트립신 또는 키모트립신을 지칭한다. 용어 "프로테아제 소화"는 당업자에게 공지된 조건 하에서의 프로테아제 반응을 지칭한다. 바람직한 실시양태에서, 이 용어는 37℃에서, 예를 들어 1시간 동안 인큐베이션하는 것을 지칭한다.
추가적인 바람직한 실시양태에서, 용어 "항균 물질"은 높은 pH 값 또는 낮은 pH 값에서 저해되지 않는 이의 성질을 특징으로 하는 물질을 지칭한다. 용어 "저 해되지 않는"은 물질이 안정적이고 생물학적으로 활성임을 의미한다. 용어 "높은 pH 값" 및 "낮은 pH 값"은 당업자에게 공지되어 있다. 바람직하게는, 저해되지 않는 성질이 pH 3 내지 pH 11 사이에 존재한다.
본 발명에 따른 미생물은 건강한 정상적인 상주성 피부 미생물총의 성장을 억제하지 않는 것을 또한 특징으로 한다. 따라서, 용어 "상주성 피부 미생물총" 및 "건강한 정상적인 상주성 피부 미생물총"은 건강한 피부, 바람직하게는 인간 피부 상에서 정상적으로 발견될 수 있고 피부 상에서 발견되는 미생물의 대부분을 구성하는 미생물에 관한 것이다.
특히, 용어 "상주성 피부 미생물총"은 피부, 각질층의 표면 상의, 그리고 표피의 외부층 및 피부 및 모낭의 더 깊은 틈새 내의 영구적인 서식체인 미생물에 관한 것이다. 이러한 미생물은 피부 조직을 침범하거나 손상시키지 않으면서 피부 상에서 성장 및 번식할 수 있는 것을 특징으로 한다. 이러한 미생물의 특징은 세정이 심부 피부 영역 내의 이들을 쉽게 제거하지 않는다는 것이다. 상주성 피부 미생물총의 미생물은 무해한 공생물이다.
바람직하게는 용어 "상주성 피부 미생물총"은 피부, 바람직하게는 인간 피부 상에서 발견될 수 있는 호기성 및 혐기성 미생물의 세균총에 관한 것이다. 더욱 바람직하게는, 이는 표피 포도상구균 (혈장응고효소 음성), 마이크로코쿠스 종, 디프테로이드균 및 프로피온산균을 포함하는 미생물의 세균총에 관한 것이다. 전형적으로, 호기성 상주성 피부 미생물총의 약 90％는 표피 포도상구균으로 구성된다. 나머지 약 10％는 주로 마이크로코쿠스 종 (80％ 마이크로코쿠스 루테우스) 및 디 프테로이드균 (13％)으로 구성된다. 용어 "디프테로이드균"은 코리네박테리움 속에 속하는 광범위한 세균을 의미한다. 편의상, 피부의 디프테로이드균은 하기의 4가지 군으로 카테고리화되었다: 친지성 또는 비-친지성 디프테로이드균; 혐기성 디프테로이드균; 포르피린을 생산하는 디프테로이드균. 혐기성 피부 미생물총의 주요 대표물 (90％)은 프로피온산균이다; 특히 프로피오니박테리움 아크네, 프로피오니박테리움 그라눌로숨 및 프로피오니박테리움 아비둠이 피부로부터 단리될 수 있다. 혐기성 세균총은 전체 상주성 피부 세균총의 약 4％를 차지한다.
더욱 바람직하게는, 이러한 미생물총의 미생물의 90％ 초과가 표피 포도상구균, 마이크로코쿠스 종, 디프테로이드균 및 프로피온산균에 속한다. 더욱 더 바람직하게는, 상주성 피부 미생물총은 주요 구성성분이 표피 포도상구균인 것을 특징으로 한다.
용어 "피부"는 당업자에게 공지된 바와 같이 신체의 외부 덮개를 지칭한다. 바람직하게는, 이 용어는 3가지 층에 관한 것이다: 표피, 진피 및 피하 지방 조직. 표피는 피부의 최외층이다. 이는 전형적으로 신체 표면 전반에 걸쳐 방수성의 보호 싸개를 형성하고, 바닥판이 밑에 깔린, 층을 이룬 편평상피로 구성된다. 이는 일반적으로 혈관을 함유하지 않고, 진피로부터의 확산에 의해 영양이 공급된다. 표피를 구성하는 세포의 주요 유형은 각질형성세포이고, 멜라닌세포 및 랑게르한스 세포 또한 존재한다. 표피는 여러 층으로 분할되고, 이때 세포는 최내층에서 유사분열을 통해 형성된다. 세포들은 분화됨에 따라 형상 및 조성이 변하면서 위쪽 층으로 상승하고, 각질로 채워지게 된다. 마침내 세포는 각질층으로 칭해지는 최상 층에 도달하고, 떨어지거나 또는 벗겨지게 된다. 표피의 최외층은 죽은 세포의 25 내지 30개의 층으로 구성된다. 통상적으로, 표피는 5개의 하층(sublayer) 또는 층으로 분할된다 (표면에서 심부쪽으로): 각질층, 투명층, 과립층, 가시층, 및 배아층 또는 기저층. 전형적으로, 표피와 진피 간의 계면은 불규칙적이고, 유두의 연속물 또는 손가락모양의 돌출물로 구성되는데, 이는 피부가 얇은 곳에서 가장 작고 손바닥 및 발바닥 피부에서 가장 길다. 전형적으로, 손바닥 및 발바닥의 유두는 표피의 상승과 관련되고, 이는 융기를 생성시킨다. 피하 지방 조직은 피부의 최심층이다. 이러한 층의 특징은 연결 조직, 혈관 및 지방 세포로 구성된다는 것이다. 전형적으로, 이러한 층은 피부를 하부 구조물에 결합시키고, 신체를 추위로부터 단열시키고, 지방의 형태로 에너지를 저장한다. 일반적으로, 피부는 심부 조직 상에서의 물리적, 화학적 및 세균 작용제의 작용에 대해 보호 장벽을 형성한다. 이는 구강 또는 질 영역에 예를 들어 속하는 조직 또는 점막이 피부에 속하지 않는다는 것을 의미한다. 바람직한 실시양태에서, 용어 "피부"는 신체 덮개의 최외층, 즉 표피에 관한 것이다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 용어 "피부"는 표피의 각질층에 관한 것이다. 더욱 더 바람직한 실시양태에서, 용어 피부는 표피의 죽은 세포의 가장 바깥쪽의 25 내지 30개의 층에 관한 것이다. 가장 바람직한 실시양태에서, 용어 "피부"는 표피의 죽은 세포의 가장 바깥쪽의 10개의 층에 관한 것이다.
상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장과 관련하여 용어 "억제하지 않는다"는 상주성 피부 미생물총 중 1가지 이상, 바람직하게는 1가지 초과, 바람직하게는 2가지 초과, 더욱 바람직하게는 5가지 초과, 특히 바람직하게는 임의의 미생물의 성장이 본 발명에 따른 미생물과 접촉되었을 때 변하지 않는다는 것을 의미한다. 바람직하게는, 변하지 않은 성장은 변화되지 않은 증식, 즉 단위 시간 당 세포 분할을 의미한다. 미생물은 이와 접촉되었을 때 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장이 감소되지 않으면 상주성 피부 미생물총의 이같은 미생물의 성장을 변하게 하지 않은 것으로 간주된다. 성장 억제 또는 이의 부재는 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장을 억제하는 본 발명의 미생물의 성질과 관련되어 상기 기술된 바와 같이 시험관내에서 또는 원위치에서 테스트될 수 있다. 가장 바람직하게는, 억제 또는 이의 부재를 결정하기 위한 테스트는 하기 설명되는 바와 같이, 더욱 바람직하게는 실시예에 기술된 바와 같이, 상주성 피부 미생물총의 미생물로 "시험관내 홀 플레이트 분석법" 및/또는 "시험관내 액체 분석법" 및/또는 "원위치 피부 분석법"을 수행함으로써 일어날 수 있다.
간략하게, 상주성 피부 미생물총의 미생물로의 "시험관내 홀 플레이트 분석법"은 하기의 단계들을 포함한다:
- 상주성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물을 배양하고, 각각의 미생물(들)의 성장 및 바람직하게는 검출을 위한 적절한 한천 배지를 함유하는 준비된 한천 플레이트 상에 이를 균일하게 스프레딩하는 단계;
- 접종된 한천 플레이트 내에 홀을 제공하는 단계;
- 본 발명에 따른 미생물의 예비배양 세포로 홀을 채우는 단계;
- 상주성 피부 미생물총의 미생물(들)이 성장되도록 하는 조건 하에 적합한 시간 동안 한천 플레이트를 인큐베이션하는 단계; 및
- 본 발명에 따른 미생물을 함유하는 홀을 둘러싸는 상주성 피부 미생물총의 미생물(들)의 성장을 결정하고, 이를 본 발명에 따른 미생물을 함유하지 않는 홀을 둘러싸는 미생물(들)의 성장과 비교하는 단계.
마지막 단계에서의 성장 결정은 세포 및/또는 콜로니의 수를 결정하기 위한 입수가능한 수단 및 방법에 의해, 예를 들어 적합한 염료로 염색하고 세포/콜로니를 현미경 하에 카운팅함으로써 및/또는 광학 수단 예컨대 농도계측기에 의해 실행될 수 있다.. 바람직한 실시양태에서, 홀 주변의 발생된 소거 구역의 직경을 사용하여, 억제 면적을 결정할 수 있다.
상주성 피부 미생물총의 미생물로의 "시험관내 액체 분석법"은 실시예에 기술되고, 간략하게 하기의 단계들을 포함한다:
- 상주성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물을 액체 배지에서 배양하는 단계;
- 본 발명에 따른 미생물의 액체 배양물의 분취량 및 상주성 피부 미생물총의 미생물의 액체 배양물의 분취량을 상주성 피부 미생물총의 미생물이 성장되도록 하는 배양 배지에 적용하는 단계;
- 본 발명에 따른 미생물 및 상주성 피부 미생물총의 미생물을 액체 배양물에서 공동 배양하는 단계;
- 공동 배양 액체 배양물의 분취량을 적합한 성장 배지를 함유하는 한천 플레이트로 옮기는 단계;
- 상주성 피부 미생물총의 미생물(들)이 성장되도록 하는 기간의 시간 동안, 그리고 조건 하에 한천 플레이트를 인큐베이션하는 단계;
- 콜로니 형성 단위의 정량에 의해 상주성 피부 미생물총의 미생물(들)의 성장을 결정하고, 이를 본 발명의 미생물이 적용되지 않은 대조군에서의 미생물(들)의 성장과 비교하는 단계.
간략하게, 상주성 피부 미생물총의 미생물로의 "원위치 피부 분석법"은 하기의 단계들을 포함한다:
- 상주성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물을 배양하고, 이를 테스트 개체의 피부 구역 상에 균일하게 스프레딩하는 단계;
- 상주성 피부 미생물총의 미생물(들)이 스프레딩된 구역 내의 점 구역에 분취량의 본 발명에 따른 미생물을 적용하는 단계;
- 상주성 피부 미생물총의 미생물(들)이 성장되도록 하기에 충분한 시간 동안 피부를 인큐베이션하는 단계;
- 내부에 포함된 미생물을 포함하여 상부 피부 층을 적합한 성장 배지를 함유하는 한천 플레이트로 옮기는 단계;
- 상주성 피부 미생물총의 미생물(들)이 성장되도록 하는 기간의 시간 동안, 그리고 조건 하에 한천 플레이트를 인큐베이션하는 단계;
- 본 발명에 따른 미생물이 적용된 구역을 둘러싸는 상주성 피부 미생물총의 미생물(들)의 성장을 결정하고, 이를 본 발명에 따른 미생물이 적용되지 않은 대조군에서의 미생물(들)의 성장과 비교하는 단계.
미생물은 이와 접촉되었을 때 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장이 감소되지 않거나 단지 약간만 감소되면 상주성 피부 미생물총의 이같은 미생물의 성장 을 변하게 하지 않은 것으로 간주된다. "약간 감소"는 성장이 대조군과 비교하여 5％ 이하, 더욱 바람직하게는 대조군과 비교하여 2％ 이하로 감소되는 것을 의미한다. 용어 "감소되지 않음"은 본 발명의 미생물이 존재하지 않는 대조군과 비교하여 본 발명의 미생물과 접촉된 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장에 통계학적으로 관련된 차이를 발견할 수 없다는 것을 의미한다. 바람직한 실시양태에서, 용어 "감소되지 않음"은 미생물이 실제로 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장의 증가에 이른 경우, 즉 이같은 미생물의 성장을 자극한 경우를 또한 포함한다.
또다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 미생물은 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장에 음성으로 영향을 미치지 않는다. 용어 "음성으로 영향을 미치지 않는다"는 본 발명의 미생물이 존재하지 않는 대조군과 비교하여 본 발명의 미생물과 접촉된 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장 억제를 발견할 수 없다는 것을 의미한다.
특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 미생물은 락트산 세균의 군에 속하는 미생물이다. 용어 "락트산 세균의 군에 속하는 미생물"은 특히 그람-양성 발효성 진정세균에 속하는, 더욱 특히 락트산 세균이 포함되는 락토박테리아세아에 족에 속하는 세균에 속하는 미생물을 포함한다. 락트산 세균은 분류학적 관점에서 스트렙토코쿠스, 류코노스톡, 페디오코쿠스, 락토코쿠스(Lactococcus) 및 락토바실루스로 세분화된다. 본 발명의 미생물은 바람직하게는 락토바실루스 종이다. 락트산 세균 군의 구성원은 정상적으로는 포르피린 및 사이토크롬이 없고, 전자-전달 인산화를 수행하지 않으며, 따라서 기질-수준의 인산화에 의해서만 에너지를 수득 한다. 즉, 락트산 세균에서, ATP는 탄수화물의 발효를 통해서 합성된다. 모든 락트산 세균은 혐기성 성장하지만, 많은 혐기균과는 달리, 대부분의 락트산 세균은 산소에 대해 민감성이지 않고, 따라서 산소의 존재 하에서뿐만 아니라 이의 부재하에서 성장할 수 있다. 따라서, 본 발명의 세균은 바람직하게는 내기성 혐기성 락트산 세균이고, 바람직하게는 락토바실루스의 속에 속한다.
바람직하게는 본 발명의 락트산 세균은 길고 가느다란 것에서 짧고 구부러진 막대기까지 다양한 막대기-형상이거나 구형이고, 더욱 바람직하게는 부동성이고/이거나 홀씨가 없고, 발효 대사의 주요 또는 단독 산물로서 락트산을 생산한다. 본 발명의 미생물이 속하는 락토바실루스 속은, 바람직한 실시양태에서, 하기의 특성에 의해 3가지 주요 아군으로 분류되고, 이에 의해 본 발명의 락토바실루스 종이 각각의 3가지 주요 아군에 속할 수 있는 것으로 구현된다:
(a) 하기와 같은 동종발효성 락토바실루스
(i) 엠덴-마이어호프 경로를 통해 글루코스로부터 85％ 이상의 양으로 락트산, 바람직하게는 락트산의 L-, D- 또는 DL-이성질체(들)을 생산하고;
(ii) 45℃의 온도에서 성장하지만, 15℃의 온도에서 성장하지 않으며;
(iii) 긴 막대기 형상이고;
(iv) 세포벽 내에 글리세롤 테이코산이 있음;
(b) 하기와 같은 동종발효성 락토바실루스
(i) 엠덴-마이어호프 경로를 통해 락트산, 바람직하게는 락트산의 L- 또는 DL-이성질체(들)을 생산하고;
(ii) 15℃의 온도에서 성장하고, 45℃의 온도에서 가변성 성장을 나타내고;
(iii) 짧은 막대기 형상이거나 곤봉형이고;
(iv) 세포벽 내에 리비톨 및/또는 글리세롤 테이코산이 있음;
(c) 하기와 같은 이종발효성 락토바실루스
(i) 펜토스-포스페이트 경로를 통해 글루코스로부터 50％ 이상의 양으로 락트산, 바람직하게는 락트산의 DL-이성질체를 생산하고;
(ii) 이산화탄소 및 에탄올을 생산하고;
(iii) 15℃ 또는 45℃의 온도에서 가변성 성장을 나타내고;
(iv) 길거나 짧은 막대기 형상이고;
(v) 세포벽 내에 글리세롤 테이코산이 있음.
상기 기술된 특징들을 기초로, 본 발명의 미생물은 락트산 세균 군, 특히 락토바실루스 속에 속하는 것으로 분류될 수 있다. 고전적인 계통학을 사용하여, 예를 들어, ["Bergey's Manual of Systematic Bacteriology" (Williams & Wilkins Co., 1984)]의 관련된 기술을 참조하여, 본 발명의 미생물은 락토바실루스 속에 속하는 것으로 결정될 수 있다. 별법적으로, 본 발명의 미생물은 당업계에 공지된 방법에 의해, 예를 들어, 이의 대사 지문, 즉 당을 대사하는 본 발명의 미생물(들)의 능력의 유사한 개관에 의해, 또는 [Schleifer et al., System. Appl. Microb., 18 (1995), 461-467] 또는 [Ludwig et al., System. Appl. Microb., 15 (1992), 487-501]에 예를 들어 기술된 기타 방법에 의해 락토바실루스 속에 속하는 것으로 분류될 수 있다. 본 발명의 미생물은 락토바실루스 속에 속하는 미생물에 대해 당 업계에 공지되고 전형적인 당 공급원을 대사할 수 있다.
당업계에 공지된 또다른 방법을 사용함으로써, 예를 들어, 결정될 종의 전체 단백질의 SDS-PAGE 젤 전기영동을 사용하여 이를 락토바실루스 속의 공지되고 이미 특징화된 군주와 비교함으로써 본 발명의 미생물이 락토바실루스 속에 가입되는 것을 또한 특징화할 수 있다. 상기 기술된 바와 같은 전체 단백질 프로파일을 제조하는 기술, 뿐만 아니라 이같은 프로파일의 수치 비교는 당업자에게 주지되어 있다. 그러나, 각각의 공정 단계가 충분히 표준화된 경우에만 결과를 신뢰할 수 있다. 미생물이 락토바실루스 속에 속하는지를 결정할 때 정확성이 요구되는 것에 직면하여, 표준화된 절차가, 유럽 연합에 의해 벨기에의 겐트 대학교에서 1994년 9월 12일부터 16일까지 개최된 "워크샵" 동안 제시된 바와 같이, [Pot et al.]과 같은 저자에 의해 정기적으로 공개적으로 입수가능해진다 (세균의 분류 및 확인을 위한 지문술, 전체 세포 단백질의 SDS-PAGE). SDS-PAGE 전기영동 젤을 분석하기 위한 기술에서 사용되는 소프트웨어가 결정적으로 중요한데, 종들 간의 상관관계의 정도가 이러한 소프트웨어에서 사용되는 파라메터 및 알고리즘에 좌우되기 때문이다. 이론적으로 상세하게 진행되지 않고, 농도계측기에 의해 측정되고 컴퓨터에 의해 표준화된 밴드의 정량적인 비교가 피어슨 상관관계 계수로 바람직하게 이루어진다. 가장 유사한 프로파일들을 함께 분류할 수 있게 할 뿐만 아니라, 계통수를 구축할 수 있게 하는 UPGMA 알고리즘을 사용하여, 이렇게 수득된 유사성 매트릭스를 체계화시킬 수 있다 ([Kersters, Numerical methods in the classification and identification of bacteria by electrophoresis, in Computer-assisted Bacterial Systematics, 337-368, M. Goodfellow. A. G. O'Donnell Ed., John Wiley and Sons Ltd, 1985] 참조).
별법적으로, 상기 본 발명의 미생물이 락토바실루스 속에 가입되는 것이 소위 Riboprinter.RTM에서 리보솜 RNA와 관련하여 특징화될 수 있다. 더욱 바람직하게는, 본 발명의 새롭게 확인된 종이 락토바실루스 속에 가입되는 것이 본 발명의 세균의 16S 리보솜 RNA, 또는 16S 리보솜 RNA를 코딩하는 게놈 DNA의 뉴클레오티드 서열을 현재까지 공지된 다른 속 및 종의 락트산 세균의 것과 비교함으로써 증명된다. 본 발명의 새롭게 확인된 종이 락토바실루스 속에 속하는 것을 결정하기 위한 또다른 바람직한 별법은 16S-23S rRNA 스페이서 영역을 표적으로 하는 종-특이적 PCR 프라이머를 사용하는 것이다. 또다른 바람직한 별법은 RAPD-PCR ([Nigatu et al. in Antonie van Leenwenhoek (79), 1-6, 2001])이고, 이에 의해 종 특이적 DNA 패턴이 생성되어, 확인된 본 발명에 따른 미생물이 락토바실루스 속에 가입되는 지를 결정하도록 한다. 본 발명의 미생물이 락토바실루스 속에 가입되는 것을 결정하는데 유용한 추가적인 기술은 제한 단편 길이 다형성 (RFLP) ([Giraffa et al., Int. J. Food Microbiol. 82 (2003), 163-172]), 반복 요소의 지문술 ([Gevers et al., FEMS Microbiol. Lett. 205 (2001) 31-36]) 또는 세균 세포의 지방산 메틸 에스테르 (FAME) 패턴의 분석 ([Heyrman et al., FEMS Microbiol. Lett. 181 (1991), 55-62])이다. 별법적으로, 락토바실루스는 렉틴 타이핑 ([Annuk et al., J. Med. Microbiol. 50 (2001), 1069-1074])에 의해 또는 이의 세포벽 단백질의 분석 ([Gatti et al., Lett. Appl. Microbiol. 25 (1997), 345-348])에 의해 결정될 수 있다.
본 출원의 바람직한 실시양태에서, 미생물은 프로바이오틱 락토바실루스 종이다. 본 발명의 문맥에서의 용어 "프로바이오틱"은 미생물이 피부에 국소적으로 적용되었을 때 건강에 이로운 효과를 갖는다는 것을 의미한다. 바람직하게는, "프로바이오틱" 미생물은 피부에 국소적으로 적용되었을 때 이러한 조직의 건강에 이로운 살아 있는 미생물이다. 가장 바람직하게는, 이는 미생물이 피부의 미생물총에 대해 양성 효과를 갖는다는 것을 의미한다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 미생물은 락토바실루스 부크네리(Lactobacillus buchneri), 또는 락토바실루스 델브뤼키이(Lactobacillus delbrueckii)의 종에 속한다. 그러나, 락토바실루스 종은 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 미생물은 접속 번호 DSM 18007 (락토바실루스 부크네리 OB-LB-Sa16) 및 DSM 18006 (락토바실루스 델브뤼키이 아종 델브뤼키이 OB-LB-Sa3) 하에 DSMZ에 기탁된 락토바실루스 부크네리, 또는 락토바실루스 델브뤼키이로 구성된 군으로부터 선택된다. 또한 본 발명은 상기 언급된 기탁된 락토바실루스 균주의 돌연변이체 또는 유도체에 관한 것이고, 상기 돌연변이체 또는 유도체는 상주성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장을 자극하는 능력 및 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 자극하지 않는 성질을 유지한다.
용어 "접속 번호 하에 DSMZ에 기탁된 락토바실루스 부크네리 또는 락토바실루스 델브뤼키이"는 <Deutsche Sammlung fuer Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ)>에 2006년 2월 24일 기탁되고 하기의 기탁 번호를 갖는 락토바실루스 부크네리, 또는 락토바실루스 델브뤼키이 종에 속하는 미생물의 세포에 관한 것이다: DSM 18007 (락토바실루스 부크네리 OB-LB-Sa16) 및 DSM 18006 (락토바실루스 델브뤼키이 아종 델브뤼키이 OB-LB-Sa3). DSMZ의 주소는 <Mascheroder Weg 1b, D-38124 Braunschweig, Germany>이다. 상기 언급된 기탁들은 특허절차상 미생물 기탁의 국제적 승인에 관한 부다페스트 조약의 조항에 따라 이루어졌다.
특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 미생물은 "단리된" "정제된" 것이다. 용어 "단리된"은 물질이 원래의 환경, 예를 들어 천연 발생하는 경우의 천연 환경, 또는 배양된 경우의 배양 배지로부터 제거되는 것을 의미한다. 예를 들어, 천연 시스템에서의 일부 또는 모든 공존 물질로부터 분리된 천연-발생 미생물, 바람직하게는 락토바실루스 종은 단리된 것이다. 이같은 미생물은 조성물의 일부일 수 있고, 조성물이 이의 천연 환경의 일부가 아니라는 점에서 여전히 단리된 것으로 간주된다.
용어 "정제된"은 절대 순도를 필요로 하지 않는다; 그보다는, 이는 상대적인 정의로 의도된다. 라이브러리로부터 수득된 개별적인 미생물들은 미생물학적인 균질성으로 통상적으로 정제되고, 즉 이들은 당업계에 공지된 방법에 의해 한천 플레이트 상에 스트리킹되었을 때 단일 콜로니로서 성장한다. 바람직하게는, 이러한 목적에 사용되는 한천 플레이트는 락토바실루스 종에 대해 선별적이다. 이같은 선별 한천 플레이트는 당업계에 공지되어 있다.
또다른 양상에서, 본 발명은, 예를 들어, 열에 의해 불활성화되었거나 동결 건조되었지만, 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장을 억제하고 건강한 정상적인 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 억제하지 않는 성질을 유지하는, 본 발명의 미생물의 불활성화 형태에 관한 것이다.
본 발명에 따르면, 용어 "본 발명의 미생물의 불활성화 형태"는 락토바실루스 속에 속하는 미생물에 특이적인 플레이트 상에서 단일 콜로니를 더 이상 형성할 수 없는, 본 발명의 미생물, 바람직하게는 본원에 개시된 락토바실루스 종의 죽은 세포 또는 불활성화 세포를 포함한다. 상기 죽은 세포 또는 불활성화 세포는 무손상 세포막 또는 파쇄된 세포막을 가질 수 있다. 본 발명의 미생물의 세포를 죽이거나 불활성화시키는 방법은 당업계에 공지되어 있다. [El-Nezami et al., J. Food Prot. 61 (1998), 466-468]에는 UV-조사에 의해 락토바실루스 종을 불활성화시키는 방법이 기술되어 있다. 바람직하게는, 본 발명의 미생물의 세포는 열에 의해 불활성화되거나 동결건조된다. 본 발명의 세포의 동결건조는 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장을 억제하고 건강한 정상적인 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 억제하지 않는 성질을 유지하면서 세포가 용이하게 보관 및 취급될 수 있다는 장점을 갖는다. 또한, 동결건조된 세포는 당업계에 공지된 조건 하에 적합한 액체 또는 고체 배지에 적용되었을 때 다시 성장할 수 있다. 동결건조는 당업계에 공지된 방법에 의해 이루어진다. 바람직하게는, 2시간 이상 동안 실온에서, 즉 16℃ 내지 25℃ 사이의 임의의 온도에서 수행된다. 또한, 본 발명의 미생물의 동결건조된 세포는 4℃의 온도에서 적어도 4주 동안 안정적이어서, 상기 기술된 바와 같은 성질을 여전히 유지한다. 열에 의한 불활성화는 본 발명의 미생물의 세포를 적어도 2시간 동안 170℃의 온도에서 인큐베이션함으로써 달성될 수 있다. 그러나, 바람직하게는 열에 의한 불활성화는 2바의 대기압에서 포화 증기의 존재 하에 상기 세포를 121℃의 온도에서 적어도 20분 동안 가압멸균시킴으로써 달성된다. 별법적으로, 본 발명의 미생물의 세포의 열에 의한 불활성화는 상기 세포를 적어도 4주, 3주, 2주, 1주, 12시간, 6시간, 2시간 또는 1시간 동안 -20℃에서 동결시킴으로써 달성된다. 본 발명의 미생물의 불활성화 형태의 세포의 적어도 70％, 75％ 또는 80％, 더욱 바람직하게는 85％, 90％ 또는 95％ 특히 바람직하게는 적어도 97％, 98％, 99％, 더욱 특히 바람직하게는 99.1％, 99.2％, 99.3％, 99.4％, 99.5％, 99.6％, 99.7％, 99.8％ 또는 99.9％, 가장 바람직하게는 100％가 죽거나 불활성화되지만, 이들이 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장을 억제하지만 건강한 정상적인 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 억제하지 않는 능력을 여전히 갖는 것이 바람직하다. 본 발명의 미생물의 불활성화 형태가 실제로 죽었거나 또는 불활성화되었는지 여부는 당업계에 공지된 방법에 의해, 예를 들어, 생존력 테스트에 의해 테스트될 수 있다.
용어 "본 발명의 미생물의 불활성화 형태"는 본 발명의 미생물, 바람직하게는 본원에 개시된 락토바실루스 종의 용해물 또는 분획을 또한 포함하고, 이때 바람직하게는 상기 용해물 또는 분획은 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물, 바람직하게는 황색 포도상구균의 성장을 억제하고 건강한 정상적인 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 억제하지 않는다. 이러한 억제는 본원에 기술된 바와 같이, 특히 첨부된 실시예에 기술된 바와 같이 테스트될 수 있다. 본 발명의 미생물의 용해물 또는 분획이 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 억제하지 않거나 자극할 수 있는 경우, 당업자는, 예를 들어, 상기 용해물 또는 분획을 본원에서 하기에 예시된 당업계에 공지된 방법에 의해 추가로 정제하여, 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 자극할 수 있는 물질을 제거할 수 있다. 그 후, 당업자는 상기 용해물 또는 분획을 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 억제하지만 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 억제하지 않는지 다시 테스트할 수 있다.
본 발명에 따르면, 용어 "용해물"은 파쇄된 또는 추출물인 본 발명의 미생물의 세포의 수성 매질 내의 용액 또는 현탁액을 의미한다. 그러나, 이 용어는 어떠한 한정된 방식으로도 해석되지 않아야 한다. 세포 용해물은, 예를 들어, DNA, RNA, 단백질, 펩티드, 탄수화물, 지질 등과 같은 거대 분자 및/또는 아미노산, 당, 지질산 등과 같은 미세분자, 또는 이의 분획을 포함한다. 추가적으로, 상기 용해물은 평활 또는 과립 구조일 수 있는 세포 잔해물을 포함한다. 예를 들어, 프렌치 프레스, 유리 또는 철 비드를 이용한 세포 밀 또는 효소에 의한 세포 용해 등을 사용하는 것에 의해, 미생물의 세포 용해물을 제조하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 또한, 세포 용해는 세포를 개방/파괴하기 위해 당업계에 공지된 다양한 방법에 관련된다. 세포 용해 방법은 중요하지 않고, 본 발명의 미생물의 세포의 용해를 달성할 수 있는 임의의 방법을 사용할 수 있다. 적합한 한 방법이 당업자에 의해 선택될 수 있고, 예를 들어, 세포의 개방/파괴는 효소에 의해, 화학적으로 또는 물리적으로 이루어질 수 있다. 효소 및 효소 칵테일의 비-제한적인 예는 단백질분 해효소 K와 같은 프로테아제, 지질분해효소 또는 글리코시다제이고; 화학물질의 비-제한적인 예는 이온운반체, 소듐 도데실 술페이트와 같은 세제, 산 또는 염기이며; 물리적 수단의 비-제한적인 예는 프렌치-프레싱과 같은 고압, 오스몰농도, 가열 또는 냉각과 같은 온도이다. 추가적으로, 단백질분해성 효소 이외의 효소, 산, 염기 등의 적합한 조합을 이용하는 방법을 또한 사용할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 미생물의 세포를 동결 및 해동, 더욱 바람직하게는 -70℃ 미만의 온도에서의 동결 및 30℃ 초과의 온도에서의 해동에 의해 용해시킬 수 있고, 특히 -75℃ 미만의 온도에서의 동결 및 35℃ 초과의 온도에서의 해동이 바람직하고, -80℃ 미만의 동결 온도 및 37℃ 초과의 해동 온도가 가장 바람직하다. 상기 동결/해동을 1회 이상, 더욱 바람직하게는 2회 이상, 더욱 더 바람직하게는 3회 이상, 특히 바람직하게는 4회 이상, 가장 바람직하게는 5회 이상 반복하는 것이 또한 바람직하다.
따라서, 당업자는 상기의 일반적인 설명을 참조하고, 필요하다면 이러한 방법을 적합하게 변형 또는 변화시킴으로써 원하는 용해물을 제조할 수 있다. 바람직하게는, 상기 기술된 바와 같은 용해물에 사용되는 수성 매질은 물, 생리식염수, 또는 완충액이다. 세균 세포 용해물의 장점은 기술 설비가 덜 필요하기 때문에 용이하게 제조될 수 있고 비용-효율적으로 보관될 수 있다는 것이다.
본 발명에 따르면, 또한 용해물은 상기 언급된 용해물로부터의 분자의 분획의 제제이다. 이러한 분획은 당업자에게 공지된 방법, 예를 들어, 크로마토그래피 (예를 들어, 친화성 크로마토그래피, 이온-교환 크로마토그래피, 크기-배제 크로마토그래피, 역상-크로마토그래피, 및 컬럼 또는 뱃치 방법 내에 기타 크로마토그래 피 재료가 있는 크로마토그래피 포함), 기타 분획화 방법, 예를 들어, 여과 방법, 예를 들어, 초여과, 투석, 원심분리에서의 크기-배제를 이용하는 투석 및 농축, 밀도-구배 또는 단계 매트릭스에서의 원심분리, 침전, 예를 들어, 친화성 침전, 염용 또는 염석 (암모늄술페이트-침전), 알콜성 침전, 또는 용해물의 상기 성분들을 분리하기 위한 기타 단백질화학적, 분자 생물학적, 생화학적, 면역학적, 화학적 또는 물리적 방법에 의해 수득될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 다른 것들보다 더욱 면역원성인 분획들이 바람직하다. 당업자는 상기의 일반적인 설명 및 본원에서의 실시예에서의 구체적인 설명을 참조하고, 필요하다면 이러한 방법들을 적합하게 변형 또는 변화시킴으로써, 적절한 방법을 선택하여 이의 면역원성 잠재력을 결정할 수 있다.
따라서, 용어 "본 발명의 미생물의 불활성 형태"는 본 발명의 미생물, 바람직하게는 본원에 개시된 락토바실루스 종의 여과액을 포함하고, 이때 바람직하게는 상기 여과액은 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물, 바람직하게는 황색 포도상구균의 성장을 억제하고, 건강한 정상적인 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 억제하지 않는다. 이러한 억제는 본원에 기술된 바와 같이, 특히 첨부된 실시예에 기술된 바와 같이 테스트할 수 있다. 본 발명의 미생물의 여과액이 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 억제하지 않거나 자극할 수 있는 경우, 당업자는, 예를 들어, 상기 여과액을 당업계에 공지된 방법에 의해 추가로 정제하여, 일과성 병원성 피부 미생물총의 미생물의 성장을 자극할 수 있는 물질을 제거할 수 있다. 그 후, 당업자는 상기 여과액을 일과성 병원성 피부 미생물 총의 미생물의 성장을 억제하지만 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장은 억제하지 않는지 다시 테스트할 수 있다.
용어 "여과액"은 당업자에게 공지된 임의의 적합한 액체, 매질 또는 완충제 내의 본 발명의 미생물의 배양물의 원심분리 절차의 상청액으로 수득된 본 발명의 미생물의 무세포 용액 또는 현탁액을 의미한다. 그러나, 이 용어는 어떠한 방식으로도 한정되지 않아야 한다. 여과액은, 예를 들어, DNA, RNA, 단백질, 펩티드, 탄수화물, 지질 등과 같은 거대 분자 및/또는 아미노산, 당, 지질산 등과 같은 미세분자, 또는 이의 분획을 포함한다. 미생물의 여과액을 제조하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 또한, "여과액"은 당업계에 공지된 다양한 방법에 관련된다. 추출 방법은 중요하지 않고, 본 발명의 미생물의 세포의 여과를 달성할 수 있는 임의의 방법을 사용할 수 있다.
용어 "본 발명의 미생물의 불활성 형태"는 본 발명의 미생물의 세포의 임의의 부분을 포함한다. 바람직하게는, 상기 불활성 형태는 막-제제에 의해 수득된 막 분획이다. 락토바실루스 속에 속하는 미생물의 막 제제는 당업계에 공지된 방법에 의해, 예를 들어, [Rollan et al., Int. J. Food Microbiol. 70 (2001), 303-307], [Matsuquchi et al., Clin. Diagn. Lab. Immunol. 10 (2003), 259-266] 또는 [Stentz et al., Appl. Environ. Microbiol. 66 (2000), 4272-4278] 또는 [Varmanen et al., J. Bacteriology 182 (2000), 146-154]에 기술된 방법을 사용함으로써 수득될 수 있다. 별법적으로, 전체 세포 제제가 또한 구현된다.
또다른 양상에서, 본 발명은 상기 기술된 바와 같은 본 발명에 따른 미생물 또는 이러한 미생물의 돌연변이체, 유도체 또는 불활성 형태를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, 상기 조성물은 상기 기술된 바와 같은 미생물을 고체 형태의 조성물 1 ㎎ 당 102 내지 1012 개의 세포, 바람직하게는 103 내지 108 개의 세포의 양으로 포함한다. 액체 형태의 조성물의 경우, 미생물의 양은 ㎖ 당 102 내지 1013 개의 세포이다. 추가적인 바람직한 실시양태에서, 상기 조성물은 에멀션, 예를 들어 수중유 또는 유중수 에멀션의 형태, 연고의 형태 또는 마이크로캡슐의 형태이다. 에멀션, 연고 또는 마이크로캡슐의 경우, 조성물은 본원에 기술된 바와 같은 미생물을 ㎖ 당 102 내지 1013 개의 세포의 양으로 포함한다. 그러나, 특정 조성물에 대해, 미생물의 양은 본원에 기술된 것과 상이할 수 있다.
추가적인 양상에서, 본 발명은 상기 기술된 바와 같은 본 발명에 따른 미생물 또는 이러한 미생물의 돌연변이체, 유도체 또는 불활성 형태를 화장용으로 또는 제약상 허용가능한 담체 또는 부형제와 배합하는 단계를 포함하는, 병원성 미생물에 대해 피부를 보호하기 위한 조성물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명에 따라 사용되는 용어 "조성물"은 상기 기술된 바와 같은 1가지 이상의 본 발명의 미생물 또는 상기 미생물의 돌연변이체, 유도체 또는 불활성 형태를 포함하는 조성물(들)에 관한 것이다. 본원에서 하기에 기술된 본 발명의 조성물이 임의로 조합된 상기 언급된 성분들을 포함하는 것으로 구현된다. 임의로, 조성물은 병원성 미생물에 대해 피부를 보호하는데 적절한 1가지 이상의 추가적인 성 분을 포함할 수 있다. 따라서, 조성물은 하기에 기술되는 추가적인 성분들의 임의의 조합을 임의로 포함할 수 있다. 용어 "병원성 미생물에 대해 피부를 보호하는데 적절한 성분"은 pH를 저하시키는 화합물 또는 조성물 및/또는 이의 조합물을 포함한다.
조성물은 고체, 액체 또는 기체 형태일 수 있고, 특히 분말(들), 용액(들), 에어로졸(들), 현탁액, 에멀션, 액체, 엘릭서르, 추출물, 팅크제 또는 유체 추출물의 형태, 또는 국소 투여에 특히 적절한 형태일 수 있다. 국소 적용에 적절한 형태에는, 예를 들어, 페이스트, 연고, 로션, 크림, 젤 또는 경피 패치가 포함된다.
바람직하게는, 본 발명의 조성물은 화장용으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 추가로 포함하는 화장용 조성물이다. 더욱 바람직하게는, 상기 화장용 조성물은 페이스트, 연고, 로션, 크림 또는 젤이다.
본 발명의 화장용 조성물은 본 발명의 조성물과 관련하여 상기 기술된 바와 같은 본 발명의 미생물, 이의 돌연변이체, 유도체 또는 불활성 형태, 및 추가적으로 화장용으로 허용가능한 담체를 포함한다. 바람직하게는, 본 발명의 화장용 조성물은 국소 적용에서 사용하기 위한 것이다.
본원에서 사용된 용어 "화장용으로 허용가능한 담체"는 안전하고 효과적인 방식으로 본 조성물을 피부에 적용하는데 사용될 수 있는 적절한 비히클을 의미한다. 이같은 비히클은 에멀션, 예를 들어 수중유 또는 유중수 에멀션, 연고, 또는 마이크로캡슐과 같은 물질을 포함할 수 있다. 캡슐화된 형태, 예를 들어 셀룰로스 캡슐화, 젤라틴, 폴리아미드, 니오솜, 왁스 매트릭스, 시클로덱스트린 또는 리포솜 캡슐화로 활성 성분을 투여하는 것이 또한 유리하다. 본원에서 사용된 용어 "안전하고 효과적인 양"은 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장을 억제하는데 충분한 양을 의미한다.
또다른 양상에서, 본 발명은 상기 기술된 바와 같은 본 발명의 미생물, 또는 이의 유도체 또는 돌연변이체 또는 불활성 형태를 포함하고, 제약상 허용가능한 담체 또는 부형제를 추가로 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 바람직하게는 제약 조성물은 국소 적용에 적절한 형태이다.
또한, 본 발명은 조성물, 바람직하게는 제약 또는 화장용 조성물의 제조를 위한 상기 기술된 바와 같은 본 발명의 미생물, 또는 이의 유도체 또는 돌연변이체 또는 불활성 형태의 용도에 관한 것이다.
제약 조성물은 치료적 유효량의 상기 기술된 바와 같은 본 발명의 미생물 또는 본 발명의 유도체 또는 돌연변이체 또는 상기 본 발명의 미생물의 불활성 형태를 포함하고, 다양한 형태, 예를 들어 고체, 액체, 분말, 수성, 동결건조 형태로 제형될 수 있다
제약 조성물은, 본원에 기술된 바와 같이, 환자에게 제약상 허용가능한 담체와 함께 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 용어 "제약상 허용가능한"은 동물, 더욱 특히 인간에서의 사용에 대해 규제 위원회 또는 기타 일반적으로 인정되는 약전에 의해 허가된 것을 의미한다.
용어 "담체"는 이와 함께 치료제가 투여되는 희석제, 보조제, 부형제 또는 비히클을 지칭한다. 이같은 담체는 제약상 허용가능하고, 즉 사용된 투여량 및 농 도에서 수용자에게 비-독성이다. 바람직하게는 담체는 등장성, 저장성 또는 약하게 고장성이고, 예컨대 수크로스 용액에 의해 제공되는 바와 같이 비교적 낮은 이온 강도를 갖는다. 이같은 제약 담체는 무균 액체, 예컨대 물 및 오일일 수 있고, 페트롤륨, 동물성, 식물성 또는 합성 기원의 것들, 예컨대 땅콩유, 대두유, 미네랄 오일, 참기름 등을 포함한다. 염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액 또한 액체 담체로 사용될 수 있다. 적절한 제약 부형제로는 전분, 글루코스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 석회분말, 실리카 젤, 스테아르산나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 나트륨 이온, 건조 탈지유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등이 포함된다. 조성물은, 원한다면, 미량의 습윤화 또는 유화 작용제, 또는 pH 완충제를 또한 함유할 수 있다. 이러한 조성물은, 예를 들어, 용액, 현탁액, 에멀션, 분말, 서방성 방출 제형 등의 형태를 취할 수 있다. 적절한 제약 담체의 예는 ["Remington's Pharmaceutical Sciences", E.W. Martin]에 기술되어 있다. 제약 담체로 작용할 수 있는 물질의 일부 다른 예는 당, 예컨대 글루코스 및 수크로스; 전분 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; 셀룰로스 및 이의 유도체 예컨대 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; 분말화 트라가칸트; 맥아; 젤라틴; 탈크; 스테아르산; 스테아르산마그네슘; 황산칼슘; 탄산칼슘; 식물성 오일, 예컨대 땅콩유, 면실유, 참기름, 올리브유, 옥수수유 및 테오브로마 오일; 폴리올 예컨대 프로필렌 글리콜, 글리세린, 소르비톨, 만니톨, 및 폴리에틸렌 글리콜; 한천; 알긴산; 발열원이 없는 물; 등장성 염수; 크랜베리 추출물 및 포스페이트 완충액; 탈지유 분말; 뿐만 아니라 제약 제형에서 사용되는 기타 비-독성 상용성 물질, 예컨대 비타민 C, 에스트로겐 및 에치나세아이다. 습윤화제 및 윤활제 예컨대 소듐 라우릴 술페이트, 뿐만 아니라 착색제, 풍미제, 윤활제, 부형제, 정제화제, 안정화제, 항산화제 및 방부제가 또한 존재할 수 있다. 캡슐화된 형태, 예를 들어 셀룰로스 캡슐화, 젤라틴, 폴리아미드, 니오솜, 왁스 매트릭스, 시클로덱스트린 또는 리포솜 캡슐화로 활성 성분을 투여하는 것이 또한 유리하다.
일반적으로, 성분들은 별도로 공급되거나, 또는, 예를 들어, 활성 작용제의 양을 지시하는 앰플 또는 사켓과 같은 밀봉된 용기 내의 동결건조 분말 또는 무수 농축물로서 단위 투여 제형 내에 함께 혼합된다.
본 발명의 제약 조성물은 중성 또는 염 형태로 제형될 수 있다. 제약상 허용가능한 염에는 염산, 인산, 아세트산, 옥살산, 타르타르산 등으로부터 유도된 것들과 같은 음이온으로 형성된 것, 및 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 산화철, 이소프로필아민, 트리에틸아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 프로카인 등으로부터 유도된 것들과 같은 양이온으로 형성된 것이 포함된다.
시험관내 또는 원위치 분석법, 예를 들어 실시예에 기술된 것들을 임의로 사용하여, 최적의 투여량 범위를 확인하는 것을 도울 수 있다. 제형에서 사용될 정확한 용량은 투여 경로, 및 질환 또는 장애의 심각성에 또한 좌우될 수 있고, 진료의의 판단 및 각각의 환자의 상황에 따라 결정되어야 한다. 국소 투여 경로가 바람직하다. 효과적인 용량은 시험관내 또는 (동물) 모델 테스트 시스템으로부터 유도된 용량-응답 곡선으로부터 외삽될 수 있다. 바람직하게는, 제약 조성물은 직접적으로 또는 보조제와 조합되어 투여된다. 보조제는 클로로퀸, 양성자성 극성 화 합물, 예컨대 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세롤, EtOH, 1-메틸 L-2-피롤리돈 또는 이의 유도체, 또는 비-양성자성 극성 화합물 예컨대 디메틸술폭시드 (DMSO), 디에틸술폭시드, 디-n-프로필술폭시드, 디메틸술폰, 술폴란, 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드, 테트라메틸우레아, 아세토니트릴 또는 이의 유도체로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다. 이러한 화합물들은 pH 제한과 관련된 조건에서 첨가된다. 본 발명의 조성물은 척추 동물에게 투여될 수 있다. 본원에서 사용된 "척추동물"은 당업자에게 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖도록 의도된다. 특히, "척추동물"은 포유동물, 더욱 특히 인간을 포함한다.
용어 "투여된"은 치료적으로 유효한 용량의 상기 언급된 조성물의 투여를 의미한다. "치료적 유효량"은 투여되는 목적의 효과를 일으키는 용량을 의미하고, 바람직하게는 이러한 효과는 병원성 미생물에 대한 피부의 보호이다. 정확한 용량은 치료 목적에 좌우될 것이고, 공지된 기술을 사용하여 당업자에 의해 확인가능할 것이다. 당업계에 공지되고 상기 기술된 바와 같이, 전신 전달 대 국소 전달, 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 식이, 투여 시간, 약물 상호작용 및 상태의 중증도에 대한 조정이 필요할 수 있고, 당업자에 의해 통상적인 실험으로 확인가능할 것이다.
방법은 인간 치료법 및 수의학 용도 모두에 적용가능하다. 원하는 치료 활성을 갖는 본원에 기술된 화합물은, 본원에 기술된 바와 같이, 생리학적으로 허용가능한 담체 내에서 환자에게 투여될 수 있다. 투여 방식에 따라, 화합물은 하기 논의되는 바와 같이 다양한 방식으로 제형될 수 있다. 제형 내의 치료적으로 활성 인 화합물의 농도는 약 0.01-100 중량％일 수 있다. 작용제는 단독으로 또는 다른 치료와 조합되어 투여될 수 있다.
제약 조성물의 투여는 다양한 방식으로 이루어질 수 있다. 바람직한 투여 경로는 국소 경로이다.
주치의 및 임상 요인에 의해 투여 요법이 결정될 것이다. 의학 분야에 주지된 바와 같이, 임의의 한 환자에 대한 투여량은 환자의 크기, 신체 표면적, 연령, 투여되는 특정 화합물, 성별, 투여 시간 및 경로, 일반적인 건강, 및 동반 투여되는 기타 약물을 포함하는 많은 요인에 따라 좌우된다. 전형적인 용량은, 예를 들어, 0.001 내지 1000 ㎍ 범위일 수 있다; 그러나, 이러한 대표적인 범위보다 많거나 적은 용량이, 특히 상기 언급된 요인들을 고려하여, 구현된다.
바람직하게는 1주일에 1번, 더욱 바람직하게는 1주일에 2번, 3번, 4번, 5번 또는 6번, 가장 바람직하게는 매일, 더욱 더 바람직하게는 하루에 2번 이상으로 투여량이 제공된다. 특히, 예를 들어 세정에 의해, 상주성 피부 세균총의 교란이 발생한 후마다 투여량을 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 그러나, 치료의 진행 동안, 투여량이 더 긴 시간 간격으로 제공될 수 있고, 필요하다면 더 짧은 시간 간격으로, 예를 들어, 하루에 여러번 제공될 수 있다. 바람직한 경우에, 본원에 기술된 방법 및 당업자에게 공지된 추가적인 방법을 사용하여 면역 응답을 모니터링하고, 예를 들어 시간, 양 및/또는 조성에서, 투여량을 최적화한다. 주기적인 평가에 의해 진행을 모니터링할 수 있다. 제약 조성물이 공동-요법 접근법에서, 즉 다른 의약 또는 약물, 예를 들어 병원성 미생물에 대해 피부를 보호하기 위한 다른 약물과의 공동-투여에서 사용되는 것이 또한 구현된다.
본 발명의 화장용 또는 제약 조성물의 국소 투여는 원하는 치료가 국소 투여에 의해 쉽게 접근가능한 구역 또는 기관을 수반할 때 유용하다. 피부에 국소적으로 적용하기 위해, 바람직하게는 제약 조성물은 적절한 페이스트, 연고, 로션, 크림, 젤 또는 경피 패치로 제형된다. 화장용 또는 제약 제제는, 사용 분야에 따라, 또한 스프레이 (펌프 스프레이 또는 에어로졸), 포말체, 젤 스프레이, 무스, 현탁액 또는 분말의 형태일 수 있다.
적절한 페이스트는 담체 내에 현탁된 활성 성분을 포함한다. 이같은 담체는 페트롤륨, 연질 백색 파라핀, 황색 바셀린 및 글리세롤이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다.
화장용 또는 제약 조성물은 담체 내에 현탁 또는 용해된 활성 성분을 포함하는 적절한 연고로 또한 제형될 수 있다. 이같은 담체에는 글리세롤, 미네랄 오일, 액체 오일, 액체 페트롤륨, 백색 페트롤륨, 황색 바셀린, 프로필렌 글리콜, 알콜, 트리글리세리드, 지방산 에스테르 예컨대 세틸 에스테르, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 화합물, 왁스 예컨대 백색 왁스 및 황색 밀랍, 지방산 알콜 예컨대 세틸 알콜, 스테아릴 알콜 및 세틸스테아릴알콜, 지방산 예컨대 스테아르산, 세틸 스테아레이트, 라놀린, 수산화마그네슘, 카올린 및 물 중 1가지 이상이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다.
별법적으로, 화장용 또는 제약 조성물은 담체 내에 현탁 또는 용해된 활성 성분을 포함하는 적절한 로션 또는 크림으로 또한 제형될 수 있다. 이같은 담체에 는 미네랄 오일 예컨대 파라핀, 식물성 오일 예컨대 피마자유, 피마자 종자유 및 수소첨가 피마자유, 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리소르베이트, 지방산 에스테르 예컨대 세틸 에스테르, 왁스, 지방산 알콜 예컨대 세틸 알콜, 스테아릴 알콜, 2-옥틸도데칸올, 벤질 알콜, 알콜, 트리글리세리드 및 물 중 1가지 이상이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다.
별법적으로, 화장용 또는 제약 조성물은 담체 내에 현탁 또는 용해된 활성 성분을 포함하는 적절한 젤로 또한 제형될 수 있다. 이같은 담체에는 물, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 파라핀, 폴리에틸렌, 지방유, 셀룰로스 유도체, 벤토나이트 및 콜로이드성 이산화규소 중 1가지 이상이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다.
본 발명에 따른 에어로졸용의 적절한 추진제는 통상적인 추진제, 예를 들어 프로판, 부탄, 펜탄 및 기타 물질이다.
일반적으로 본 발명에 따른 제제는 이같은 제제에서 통상적으로 사용되는 보조제, 예를 들어 화장용 또는 피부학적 제형의 방부제, 향료, 소포제, 염료, 안료, 증점제, 계면활성 물질, 유화제, 연화제, 마감제, 지방, 오일, 왁스 또는 기타 통상적인 구성성분, 예컨대 알콜, 폴리올, 중합체, 포말 안정화제, 용해도 촉진제, 전해질, 유기 산, 유기 용매, 또는 실리콘 유도체를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 화장용 또는 제약 조성물은 연화제를 포함할 수 있다. 연화제는 건조를 방지하거나 완화시키는데 효과적인 양으로 사용될 수 있다. 유용한 연화제에는 탄화수소 오일 및 왁스; 실리콘 오일; 트리글리세리드 에스테르; 아세 토글리세리드 에스테르; 에톡시화 글리세리드; 알킬 에스테르; 알케닐 에스테르; 지방산; 지방 알콜; 지방 알콜 에테르; 에테르에스테르; 라놀린 및 유도체; 다가 알콜 (폴리올) 및 폴리에테르 유도체; 다가 알콜 (폴리올) 에스테르; 왁스 에스테르; 밀랍 유도체; 식물성 왁스; 인지질; 스테롤; 및 아미드가 비제한적으로 포함된다.
따라서, 예를 들어, 전형적인 연화제에는 미네랄 오일, 특히 점도가 50 내지 500 SUS 범위인 미네랄 오일, 라놀린 오일, 밍크 오일, 코코넛 오일, 코코아 버터, 올리브유, 아몬드유, 마카다미아 넛 오일, 알로에 추출물, 호호바 오일, 홍화유, 옥수수유, 액체 라놀린, 면실유, 땅콩유, 푸르셀린 오일, 퍼히드로스쿠알렌 (스쿠알렌), 피마자유, 폴리부텐, 무취 미네랄 스피릿, 스위트 아몬드유, 아보카도유, 칼로필룸 오일, 리신 오일, 비타민 E 아세테이트, 올리브유, 미네랄 스피릿, 세테아릴 알콜 (세틸 및 스테아릴 알콜로 주로 구성된 지방 알콜의 혼합물), 리놀렌산 알콜, 올레일 알콜, 옥틸 도데칸올, 곡물 배아유 예컨대 밀 배아유, 세테아릴 옥타노에이트 (세테아릴 알콜과 2-에틸헥산산의 에스테르), 세틸 팔미테이트, 디이소프로필 아디페이트, 이소프로필 팔미테이트, 옥틸 팔미테이트, 이소프로필 미리스테이트, 부틸 미리스테이트, 글리세릴 스테아레이트, 헥사데실 스테아레이트, 이소세틸 스테아레이트, 옥틸 스테아레이트, 옥틸히드록시 스테아레이트, 프로필렌 글리콜 스테아레이트, 부틸 스테아레이트, 데실 올레에이트, 글리세릴 올레에이트, 아세틸 글리세리드, (C12-C15) 알콜의 옥타노에이트 및 벤조에이트, 글리콜 및 글리세롤의 것들과 같은 알콜 및 폴리알콜의 옥타노에이트 및 벤조에이트, 및 알콜 및 폴리알콜의 리신-올레에이트 예컨대 이소프로필 아디페이트, 헥실 라우레이트, 옥틸 도데카노에이트, 디메티콘 코폴리올, 디메티토놀, 라놀린, 라놀린 알콜, 라놀린 왁스, 수소첨가 라놀린, 수산화 라놀린, 아세틸화 라놀린, 바셀린,이소프로필 라놀레이트, 세틸 미리스테이트, 글리세릴 미리스테이트, 미리스틸 미리스테이트, 미리스틸 락테이트, 세틸 알콜, 이소스테아릴 알콜 스테아릴 알콜, 및 이소세틸 라놀레이트 등이 포함된다.
또한, 본 발명에 따른 화장용 또는 제약 조성물은 유화제를 또한 포함할 수 있다. 바람직하게는 유화제 (즉 유화 작용제)는 조성물의 성분들의 균일한 블렌딩을 제공하는데 효과적인 양으로 사용된다. 유용한 유화제에는 (i) 음이온성 물질 예컨대 지방산 비누, 예를 들어, 스테아르산칼륨, 스테아르산나트륨, 스테아르산암모늄, 및 트리에탄올아민 스테아레이트; 지방산 비누를 함유하는 폴리올 지방산 모노에스테르, 예를 들어, 칼륨 또는 나트륨 염을 함유하는 글리세롤 모노스테아레이트; 황산 에스테르 (나트륨 염), 예를 들어, 소듐 라우릴 술페이트, 및 소듐 세틸 술페이트; 및 황산 에스테르를 함유하는 폴리올 지방산 모노에스테르, 예를 들어, 소듐 라우릴 술페이트를 함유하는 글리세릴 모노스테아레이트; (ii) 양이온성 클로라이드 예컨대 N(스테아롤일 콜아미노 포르밀메틸) 피리듐; N-소야-N-에틸 모르폴리늄 에토술페이트; 알킬 디메틸 벤질 암모늄 클로라이드; 디이소부틸페녹시에톡시에틸 디메틸 벤질 암모늄 클로라이드; 및 세틸 피리듐 클로라이드; 및 (iii) 비이온성 물질 예컨대 폴리옥시에틸렌 지방 알콜 에테르, 예를 들어, 모노스테아레이트; 폴리옥시에틸렌 라우릴 알콜; 폴리옥시프로필렌 지방 알콜 에테르, 예를 들어, 프로폭시화 올레일 알콜; 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트; 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노스테아레이트; 소르비탄 지방산 에스테르, 예를 들어, 소르비탄; 폴리옥시에틸렌 글리콜 지방산 에스테르, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 글리콜 모노스테아레이트; 및 폴리올 지방산 에스테르, 예를 들어, 글리세릴 모노스테아레이트 및 프로필렌 글리콜 모노스테아레이트; 및 에톡시화 라놀린 유도체, 예를 들어, 에톡시화 라놀린, 에톡시화 라놀린 알콜 및 에톡시화 콜레스테롤이 포함된다. 유화제의 선택은 [Schrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika, Huethig Buch Verlag, Heidelberg, 2nd edition, 1989, 3rd part]에 대표적으로 기술되어 있다.
본 발명에 따른 화장용 또는 제약 조성물은 계면활성제를 또한 포함할 수 있다. 적절한 계면활성제에는, 예를 들어, 세정제, 유화제, 포말 증진제, 하이드로트로프, 가용화제, 현탁화제 및 비-계면활성제 (액체 내의 고체의 분산을 촉진함)로 일반적으로 분류되는 계면활성제들이 포함될 수 있다.
계면활성제는 일반적으로 양쪽성, 음이온성, 양이온성 및 비이온성 계면활성제로 분류된다. 양쪽성 계면활성제에는 아실아미노산 및 유도체 및 N-알킬아미노산이 포함된다. 음이온성 계면활성제에는 아실아미노산 및 염, 예컨대 아실글루타메이트, 아실펩티드, 아실사르코시네이트, 및 아실타우레이트; 카르복실산 및 염, 예컨대 알칸산, 에스테르 카르복실산, 및 에테르 카르복실산; 술폰산 및 염, 예컨대 아실 이세티오네이트, 알킬아릴 술포네이트, 알킬 술포네이트 및 술포숙시네이 트; 황산 에스테르, 예컨대 알킬 에테르 술페이트 및 알킬 술페이트가 포함된다. 양이온성 계면활성제에는 알킬아민, 알킬 이미다졸린, 에톡시화 아민, 및 4차 화합물 (예컨대, 알킬벤질디메틸암모늄 염, 알킬 베타인, 헤테로고리형 암모늄 염, 및 테트라 알킬암모늄 염)이 포함된다. 비이온성 계면활성제에는 알콜, 예컨대 8 내지 18개의 탄소 원자를 함유하는 1차 알콜; 알칸올아미드 예컨대 알칸올아민 유래 아미드 및 에톡시화 아미드; 산화아민; 에스테르 예컨대 에톡시화 카르복실산, 에톡시화 글리세리드, 글리콜 에스테르 및 유도체, 모노글리세리드, 폴리글리세릴 에스테르, 다가 알콜 에스테르 및 에테르, 소르비탄/소르비톨 에스테르, 및 인산의 트리에스테르; 및 에테르 예컨대 에톡시화 알콜, 에톡시화 라놀린, 에톡시화 폴리실록산, 및 프로폭시화 폴리옥시에틸렌 에테르가 포함된다.
또한, 본 발명에 따른 화장용 또는 제약 조성물은 필름 형성제를 또한 포함할 수 있다. 본 발명에 따라 사용되는 적절한 필름 형성제는 조성물을 매끄럽고 균일하게 유지시키고, 아크릴아미드/아크릴산나트륨 공중합체; 암모늄 아크릴레이트 공중합체; 발삼 페루; 셀룰로스 검; 에틸렌/말레산 무수물 공중합체; 히드록시에틸셀룰로스; 히드록시프로필셀룰로스; 폴리아크릴아미드; 폴리에틸렌; 폴리비닐 알콜; pvm/MA 공중합체 (폴리비닐 메틸에테르/말레산 무수물); PVP (폴리비닐피롤리돈); 말레산 무수물 공중합체 예컨대 PA-18 (Gulf Science and Technology로부터 입수가능); PVP/헥사데켄 공중합체 예컨대 Ganex V-216 (GAF Corporation으로부터 입수가능); 아크릴계/아크릴레이트 공중합체 등이 이에 비제한적으로 포함된다.
일반적으로, 필름 형성제는 전체 조성물의 중량의 약 0.1％ 내지 약 10％의 양으로 사용될 수 있고, 약 1％ 내지 약 8％가 바람직하고, 약 0.1 DEG/O 내지 약 5％가 가장 바람직하다. 프룩토스; 글루코스; 글루람산; 글리세린; 꿀; 말티톨; 메틸 글루세트-10; 메틸 글루세트-20; 프로필렌 글리콜; 락트산나트륨; 수크로스 등이 포함되는 보습제 또한 유효량으로 사용될 수 있다.
물론, 본 발명의 화장용 또는 제약 조성물은 방부제를 또한 포함할 수 있다. 본 발명의 특정 조성물에 따른 방부제에는 부틸파라벤; 에틸 파라벤; 이미다졸리디닐 우레아; 메틸파라벤; O-페닐페놀; 프로필파라벤; 쿼터늄-14; 쿼터늄-15; 소듐 데히드로아세테이트; 아연 피리티온 등이 비제한적으로 포함된다.
방부제는 미생물 성장을 방지하거나 지연시키는데 효과적인 양으로 사용된다. 일반적으로, 방부제는 전체 조성물 중량의 약 0.1％ 내지 약 1％의 양으로 사용되고, 약 0.1％ 내지 약 0.8％가 바람직하며, 약 0.1％ 내지 약 0.5％가 가장 바람직하다.
본 발명에 따른 화장용 또는 제약 조성물은 향료를 또한 포함할 수 있다. 당업자에게 주지된 향료 (향기 성분) 및 착색제 (착색 작용제)가 본 발명의 조성물에 원하는 향기 및 색깔을 부여하는데 효과적인 양으로 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 화장용 또는 제약 조성물은 왁스를 또한 포함할 수 있다. 본 발명에 따라 유용한 적절한 왁스에는 동물성 왁스, 예컨대 밀랍, 경랍, 또는 울 왁스 (라놀린); 식물성 왁스, 예컨대 카르나우바 또는 칸데릴라; 광물성 왁스, 예컨대 몬탄 왁스 또는 오조케라이트; 및 페트롤륨 왁스, 예컨대 파라핀 왁스 및 미세결정질 왁스 (고분자량 페트롤륨 왁스)가 포함된다. 동물성, 식물성, 및 일부 광물성 왁스는 주로 고분자량 지방산 알콜과 고분자량 지방산의 에스테르이다. 예를 들어, 트리콘타놀의 헥사데칸산 에스테르는 밀랍의 주요 성분인 것으로 통상적으로 보고된다. 본 발명에 따른 기타 적절한 왁스에는 일산화탄소와 수소로부터 유도된 탄화수소 왁스 및 폴리에틸렌 폴리옥시에틸렌이 포함되는 합성 왁스가 포함된다.
대표적인 왁스에는 세로신; 세틸 에스테르; 수소첨가 호호바 오일; 수소첨가 호호바 왁스; 수소첨가 쌀겨 왁스; 일본 왁스; 호호바 버터; 호호바 오일; 호호바 왁스; 밍크 왁스; 몬탄산 왁스; 오우리쿠리 왁스; 쌀겨 왁스; 쉘락 왁스; 황화 호호바 오일; 합성 밀랍; 합성 호호바 오일; 트리히드록시스테아린; 세틸 알콜; 스테아릴 알콜; 코코아 버터; 라놀린의 지방산; 25℃에서 고체인 모노-, 디- 및 트리글리세리드, 예를 들어, 글리세릴 트리베헤네이트 (베헨산 및 글리세린의 트리에스테르) 및 C1g-C36 산 트리글리세리드 (C1g-C36 카르복실산 및 글리세린의 트리에스테르의 혼합물) (Croda, Inc. (New York, N.Y.)에서 각각 상표명 Syncrowax HRC 및 Syncrowax HGL-C 하에 입수가능); 25℃에서 고체인 지방 에스테르; 실리콘 왁스 예컨대 메틸옥타데칸옥시폴리실록산 및 폴리(디메틸실록시) 스테아록시실록산; 스테아릴 모노- 및 디에탄올아미드; 로진 및 이의 유도체 예컨대 글리세롤 및 글리콜의 아비에테이트; 25℃에서 고체인 수소첨가유; 및 수크로글리세리드가 또한 포함된다. 수성 시스템에서 유효량으로 사용될 수 있는 증점제 (점도 제어제)에는 알긴; 카르보머 예컨대 카르보머 934, 934P, 940 및 941 ; 셀룰로스 검; 세테아릴 알콜, 코카미드 DEA, 덱스트린; 젤라틴; 히드록시에틸셀룰로스; 히드록시프로필셀룰로스; 히드록시프로필 메틸셀룰로스; 마그네슘 알루미늄 실리케이트; 미리스틸 알콜; 귀리 분말; 올레아미드 DEA; 올레일 알콜; PEG-7M; PEG-14M; PEG-90M; 스테아르아미드 DEA; 스테아르아미드 MEA; 스테아릴 알콜; 트라가칸트 검; 밀 전분; 잔탄 검 등이 포함되고, 상기 증점제 목록에서, DEA는 디에탄올아민이고, MEA는 모노에탄올아민이다. 비-수성 시스템에서 유효량으로 사용될 수 있는 증점제 (점도 제어제)에는 스테아르산알루미늄; 밀랍; 칸데릴라 왁스; 카르나우바; 세레신; 세테아릴 알콜; 세틸 알콜; 콜레스테롤; 수화 실리카; 수소첨가 피마자유; 수소첨가 면실유; 수소첨가 대두유; 수소첨가 수지 글리세리드; 수소첨가 식물성 오일; 히드록시프로필 셀룰로스; 라놀린 알콜; 미리스틸 알콜; 옥틸도데실 스테아로일 술페이트; 올레일 알콜; 오조케라이트; 미세결정질 왁스; 파라핀, 펜타에리트리틸 테트라옥타노에이트; 폴리아크릴아미드; 폴리부텐; 폴리에틸렌; 프로필렌 글리콜 디카프릴레이트; 프로필렌 글리콜 디페라르고네이트; 스테아르알코늄 헥토라이트; 스테아릴 알콜; 스테아릴 스테아레이트; 합성 밀랍; 트리히드록시스테아린; 트리리놀레인; 트리스테아린; 스테아르산아연 등이 포함된다.
제형 내의 통상적인 천연 및 합성 증점제 또는 젤 형성제는 가교 폴리아크릴산 및 이의 유도체, 다당류, 예컨대 잔탄 검 또는 알기네이트, 카르복시메틸셀룰로스 또는 히드록시카르복시메틸셀룰로스, 하이드로콜로이드 예컨대 아라비아 고무 또는 몬트모릴로나이트 광물, 예컨대 벤토나이트 또는 지방 알콜, 폴리비닐 알콜 및 폴리비닐피롤리돈이다.
의도된 목적에 효과적인 양으로 본 발명에 따른 화장용 또는 제약 조성물에 첨가되거나 이러한 조성물에서 사용될 수 있는 기타 성분에는 성능 또는 소비자 매력을 증강시키는 생물학적 첨가물 예컨대 아미노산, 단백질, 바닐라, 알로에 추출물, 바이오플라비노이드 등; 완충제, 킬레이트화제 예컨대 EDTA; 에멀션 안정화제; pH 조정제; 불투명화제; 및 추진제 예컨대 부탄, 이산화탄소, 에탄, 히드로클로로플루오로카본 22 및 142b, 히드로플루오로카본 152a, 이소부탄, 이소펜탄, 질소, 산화질소, 펜탄, 프로판 등이 포함된다.
또한, 본 발명에 따른 제제는 이의 작용을 보충하거나 증강시키기 위해 항산화성, 자유-라디칼 소거제, 피부 보습 또는 수분-유지, 홍반 방지성, 항염증성 또는 항알레르기성 작용이 있는 화합물을 또한 포함할 수 있다. 특히, 이러한 화합물들은 비타민, 식물 추출물, 알파- 및 베타-히드록시산, 세라마이드, 항염증성, 항균성 또는 UV-여과 물질, 및 이의 유도체 및 이의 혼합물의 군으로부터 선택될 수 있다. 유리하게는, 본 발명에 따른 제제는 UV-B 및/또는 UV-A 영역의 UV 조사를 흡수하는 물질을 또한 포함한다. 지질 상은 미네랄 오일, 광물성 왁스, 분지형 및/또는 비-분지형 탄화수소 및 탄화수소 왁스, 포화 및/또는 불포화, 분지형 및/또는 비-분지형 C8-C24-알칸카르복실산의 트리글리세리드 물질의 군으로부터 유리하게 선택된다; 이는 합성, 반합성 또는 천연 오일, 예컨대 올리브유, 야자유, 아몬드유 또는 혼합물; 방향족 카르복실산 및 포화 및/또는 불포화, 분지형 및/또는 비-분지형 C3-C30-알콜로부터의, 포화 및/또는 불포화, 분지형 및/또는 비-분지형 C3-C30-알칸 카르복실산 및 포화 및/또는 불포화, 분지형 및/또는 비-분지형 C3-C30-알 콜의 에스테르, 오일, 지방 또는 왁스, 예를 들어 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 스테아레이트, 헥실데실 스테아레이트, 올레일 올레에이트; 및 또한 이같은 에스테르의 합성, 반합성 및 천연 혼합물, 예컨대 호호바 오일, 알킬 벤조에이트 또는 실리콘 오일, 예를 들어, 시클로메티콘, 디메틸폴리실록산, 디에틸폴리실록산, 옥타메틸시클로-테트라실록산 및 이의 혼합물 또는 디알킬 에테르로부터 선택될 수 있다.
본 발명에 따른 활성 성분은 피부 청결을 위한 화장용 조성물, 예컨대 막대 비누, 화장실용 비누, 커드 비누, 투명 비누, 고급 비누, 탈취 비누, 크림 비누, 유아용 비누, 피부 보호 비누, 마모성 비누, 합성세제, 액체 비누, 페이스트 비누, 연질 비누, 세정용 페이스트, 액체 세정, 샤워 및 목욕 제제, 예를 들어 세정 로션, 샤워 제제, 샤워 젤, 거품 목욕제, 크림 거품 목욕제, 오일 목욕제, 목욕용 추출물, 스크럽 제제, 원위치 제품, 면도 거품제, 면도 로션, 면도 크림에서 예를 들어 사용될 수 있다. 또한, 이는 피부 화장용 제제, 예컨대 W/O 또는 O/W 피부 및 신체용 크림, 주간용 및 야간용 크림, 일광 보호 조성물, 일광노출후를 위한 제품, 손 관리 제품, 안면용 크림, 다중 에멀션, 젤리, 마이크로에멀션, 리포솜 제제, 니오솜 제제, 항-주름 크림, 안면용 오일, 리포젤, 스포츠젤, 보습 크림, 표백 크림, 비타민 크림, 피부 로션, 관리 로션, 앰플, 애프터쉐이브 로션, 프리쉐이브 제품, 습윤 로션, 태닝 로션, 셀룰라이트 크림, 탈색 조성물, 마사지 제제, 신체용 파우더, 안면용 토닉, 탈취제, 발한억제제, 코용 스트립, 항-여드름 조성물, 방수제 및 기타물질에 적절하다.
바람직한 실시양태에서, 화장용 조성물은 일상 관리용 O/W 제형을 포함하고, 이는 INCI에 따라 ％로 하기의 성분들을 예를 들어 함유할 수 있다:
A 1.7 세테아레트-6, 스테아릴 알콜
0.7 세테아레트-25
2.0 디에틸아미노 히드록시벤조일 헥실 벤조에이트
2.0 PEG-14 디메티콘
3.6 세테아릴 알콜
6.0 에틸헥실 메톡시신나메이트
2.0 디부틸 아디페이트
B 5.0 글리세롤
0.2 디소듐 EDTA
1.0 판테놀
q.s. 방부제
67.8 탈염수
C 4.0 카프릴산/카프르산 트리글리세리드, 소듐 아크릴레이트 공중합체
D 0.2 소듐 아스코르빌 포스페이트
1.0 토코페릴 아세테이트
0.2 비사볼롤
1.0 카프릴산/카프르산 트리글리세리드, 아스코르브산나트륨,
토코페롤, 레티놀
1.0 락토바실루스 종
E q.s. 수산화나트륨
상 A 및 B를 별도로 약 80℃로 가열한다. 이어서 상 B를 상 A 내로 교반하고, 균질화시킨다. 상 C를 상 A 및 B의 조합물 내로 교반하고, 균질화시킨다. 혼합물을 진탕 하에 약 40℃로 냉각시킨 후, 상 D를 첨가하고, 상 E로 pH를 약 6.5로 조정한다. 이어서 용액을 균질화시키고, 실온으로 냉각시킨다.
추가적인 바람직한 실시양태에서, 화장용 조성물은 주간용 보호 크림 O/W 제형을 포함하고, 이는 INCI에 따라 ％로 하기의 성분들을 예를 들어 함유할 수 있다:
A 1.7 세테아레트-6, 스테아릴 알콜
0.7 세테아레트-25
2.0 디에틸아미노 히드록시벤조일 헥실 벤조에이트
2.0 PEG-14 디메티콘
3.6 세테아릴 알콜
6.0 에틸헥실 메톡시신나메이트
2.0 디부틸 아디페이트
B 5.0 글리세롤
0.2 디소듐 EDTA
1.0 판테놀
q.s. 방부제
68.6 탈염수
C 4.0 카프릴산/카프르산 트리글리세리드, 소듐 아크릴레이트 공중합체
D 1.0 소듐 아스코르빌 포스페이트
1.0 토코페릴 아세테이트
0.2 비사볼롤
1.0 락토바실루스 종
E q.s. 수산화나트륨
상 A 및 B를 별도로 약 80℃로 가열한다. 이어서 상 B를 상 A 내로 교반하고, 균질화시킨다. 상 C를 상 A 및 B의 조합물 내로 도입하고, 균질화시킨다. 혼합물을 진탕 하에 약 40℃로 냉각시킨 후, 상 D를 첨가하고, 상 E로 pH를 약 6.5로 조정한다. 이어서 용액을 균질화시키고, 실온으로 냉각시킨다.
추가적인 바람직한 실시양태에서, 화장용 조성물은 피부 세정제 O/W 제형을 포함하고, 이는 INCI에 따라 ％로 하기의 성분들을 예를 들어 함유할 수 있다:
A 10.0 세테아릴 에틸헥사노에이트
10.0 카프릴산/카프르산 트리글리세리드
1.5 시클로펜타실록산, 시클로헥사실록산
2.0 PEG-40 수소첨가 피마자유
B 3.5 카프릴산/카프르산 트리글리세리드, 소듐 아크릴레이트 공중합체
C 1.0 토코페릴 아세테이트
0.2 비사볼롤
q.s. 방부제
q.s. 향료 오일
D 3.0 폴리쿼터늄-44
0.5 코코트리모늄 메토술페이트
0.5 세테아레트-25
2.0 판테놀, 프로필렌 글리콜
4.0 프로필렌 글리콜
0.1 디소듐 EDTA
1.0 락토바실루스 종
60.7 탈염수
먼저, 상 A를 용해시키고, 이어서 상 B를 상 A 내로 교반시킨다. 이어서, 상 C를 상 A 및 B의 조합물 내로 도입한다. 다음 단계에서, 상 D를 용해시키고, 조합된 상 A, B 및 C 내로 교반시킨다. 혼합물을 균질화시키고, 15분 동안 교반한다.
추가적인 바람직한 실시양태에서, 화장용 조성물은 일상 관리용 신체 스프레이 제형을 포함하고, 이는 INCI에 따라 ％로 하기의 성분들을 예를 들어 함유할 수 있다:
A 3.0 에틸헥실 메톡시신나메이트
2.0 디에틸아미노 히드록시벤조일 헥실 벤조에이트
1.0 폴리쿼터늄-44
3.0 프로필렌 글리콜
2.0 판테놀, 프로필렌 글리콜
1.0 시클로펜타실록산, 시클로헥사실록산
10.0 옥틸도데칸올
0.5 PVP
10.0 카프릴산/카프르산 트리글리세리드
3.0 C12-15 알킬 벤조에이트
3.0 글리세롤
1.0 토코페릴 아세테이트
0.3 비사볼롤
1.0 락토바실루스 종
59.2 알콜
상 A의 성분들을 칭량하고, 투명할 때까지 용해시킨다.
추가적인 바람직한 실시양태에서, 화장용 조성물은 피부 젤을 포함하고, 이는 INCI에 따라 ％로 하기의 성분들을 예를 들어 함유할 수 있다:
A 3.6 PEG-40 수소첨가 피마자유
15.0 알콜
0.1 비사볼롤
0.5 토코페릴 아세테이트
q.s. 향료 오일
B 3.0 판테놀
0.6 카르보머
1.0 락토바실루스 종
75.4 탈염수
C 0.8 트리에탄올아민
먼저, 상 A를 투명할 때까지 용해시킨다. 상 B를 침연시키고, 이어서 상 C로 중화시킨다. 다음 단계에서, 상 A를 균질화된 상 B 내료 교반시키고, 혼합물을 균질화시킨다.
추가적인 바람직한 실시양태에서, 화장용 조성물은 애프터쉐이브 로션을 포함하고, 이는 INCI에 따라 ％로 하기의 성분들을 예를 들어 함유할 수 있다:
A 10.0 세테아릴 에틸헥사노에이트
5.0 토코페릴 아세테이트
1.0 비사볼롤
0.1 향료 오일
0.3 아크릴레이트/c10-30 알킬 아크릴레이트 가교중합체
B 15.0 알콜
1.0 판테놀
3.0 글리세롤
1.0 락토바실루스 종
0.1 트리에탄올아민
63.5 탈염수
상 A의 성분을 혼합한다. 다음 단계에서, 상 B를 용해시키고, 상 A 내로 도입하고, 이어서 균질화시킨다.
또한 본 발명은 피부염, 바람직하게는 아토피 피부염, 건선, 덩굴옻나무 피부염, 포진상 습진, 독창 또는 옴의 예방 또는 치료를 위한 제약 조성물의 제조를 위한 본원에 상기 기술된 바와 같은 본 발명에 따른 미생물 또는 이의 유도체, 돌연변이체 또는 불활성 형태의 용도에 관한 것이다.
또다른 양상에서, 본 발명은 본원에 상기 기술된 바와 같은 본 발명의 미생물 또는 이의 유도체 또는 돌연변이체 또는 불활성 형태를 화장용으로 및/또는 제약상 허용가능한 담체 또는 부형제와 배합하는 단계를 포함하는 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.
또한 본 발명은 피부염, 바람직하게는 아토피 피부염, 건선, 덩굴옻나무 피부염, 포진상 습진, 독창 또는 옴의 예방 또는 치료를 필요로 하는 환자에게 예방적 또는 치료적 유효량의 본 발명에 따른 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 피부염, 바람직하게는 아토피 피부염, 건선, 덩굴옻나무 피부염, 포진상 습진, 독창 또는 옴의 예방 또는 치료 방법에 관한 것이다.
본 발명이 본원에 기술된 특정 방법론, 프로토콜, 세균, 벡터, 및 시약 등에 한정되지 않는 것으로 이해되는데, 이들이 변할 수 있기 때문이다. 또한 본원에서 사용된 용어는 단지 특정 실시양태를 기술하기 위한 목적이고, 첨부된 청구항에 의해서만 한정되는 본 발명의 범주를 제한하도록 의도되지 않는 것으로 이해된다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 당업자가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다.
바람직하게는, 본원에서 사용된 용어는 ["A multilingual glossary of biotechnological terms: (IUPAC Recommendations)", Leuenberger. H.G.W, Nagel. B. and Koelbl. H. eds. (1995), Helvetica Chimica Acta (CH-4010 Basel, Switzerland)]에 기술된 바와 같이 정의된다. 본 명세서 및 하기의 청구항 전반에 걸쳐, 문맥적으로 달리 요구되지 않는 한, 용어 "포함하다" 및 이의 변형 예컨대 "포함하는"은 언급된 정수 또는 단계, 또는 정수 또는 단계의 군의 포함을 의미하지만, 임의의 다른 정수 또는 단계, 또는 정수 또는 단계의 군의 배제를 의미하지 않는 것으로 이해될 것이다.
여러 문헌이 본 명세서의 본문 전반에 걸쳐 인용된다. 본원에 인용된 각각의 문헌 (모든 특허, 특허 출원, 과학 간행물, 제조업자의 설명서, 사용설명서 등 포함)은, 상기 또는 하기 여부와 상관 없이, 거명에 의해 전체적으로 본원에 포함된다. 본원에서의 어떠한 것도 본 발명이 종래 발명에 의한 이같은 개시 내용에 선행하는 권리를 갖지 않는 것을 승인하는 것으로 해석되지 않는다.
본원에서 및 첨부된 청구항에서 사용될 때, 단수형은 문맥적으로 명확하게 다르게 지시하지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다는 것을 주지하여야 한다. 따라서, 예를 들어, "시약"에 대한 언급은 1가지 이상의 상이한 시약을 포함하고, "방법"에 대한 언급은 본원에 기술된 방법들에 대해 변형될 수 있거나 이를 대체할 수 있는 당업자에게 공지된 등가의 단계들 및 방법들에 대한 언급을 포함한다.
본 발명의 첫번째 양상이 하기에 기술되는 바와 같은 도 1 내지 4에 의해 설명된다:
도 1은 시험관내 홀/웰 플레이트 분석법에서의 표피 포도상구균의 성장 자극을 나타낸다 (실시예 1). 웰 주변의 흑색 고리의 형성은 지표 균주 표피 포도상구균의 성장 자극을 가리킨다. 현미경에 의해, 증가된 수의 콜로니를 관찰할 수 있다.
도 2는 락토바실루스에 의한 피부 상에서의 표피 포도상구균의 자극을 나타낸다. 피부에 적용되었던 지표 균주 표피 포도상구균 및 락토바실루스가 있는 한천 플레이트가 제시된다. 상부 피부층을 접착성 테이프를 사용하여 한천 플레이트로 옮긴다. 이에 의해, 지표 균주가 한천 플레이트로 옮겨진다. 대조군 플레이트는 락토바실루스 균주를 함유하지 않는다.
도 3은 락토바실루스에 의한 피부 상에서의 황색 포도상구균 자극의 결여를 나타낸다. 피부에 적용되었던 지표 균주 황색 포도상구균 및 락토바실루스가 있는 한천 플레이트가 제시된다. 상부 피부층을 접착성 테이프를 사용하여 한천 플레이트로 옮긴다. 상부 피부층을 접착성 테이프를 사용하여 한천 플레이트로 옮긴다. 이에 의해, 지표 균주가 한천 플레이트로 옮겨진다. 대조군 플레이트는 락토바실루스 균주를 함유하지 않는다.
도 4는 시험관내 홀/웰 플레이트 분석법에서의 황색 포도상구균 자극의 결여를 나타낸다 (실시예 4). 웰 주변에 세포 밀도가 증가된 흑색 고리가 형성되지 않은 것을 관찰할 수 있다. 이는 지표 균주가 락토바실루스에 의해 자극되지 않는 것을 가리킨다.
본 발명의 두번째 양상이 하기에 기술되는 바와 같은 도 5 내지 11에 의해 설명된다:
도 5는 시험관내 홀/웰 플레이트 분석법에서의 황색 포도상구균의 성장 억제를 나타낸다 (실시예 5). 웰 주변의 뚜렷한 고리의 형성은 지표 균주 황색 포도상구균의 성장 억제를 가리킨다.
도 6은 시험관내 액체 분석법에서의 황색 포도상구균의 성장 억제를 나타낸다 (실시예 6). 락트산 세균이 없는 대조군과 비교하여 지표 균주 황색 포도상구균의 콜로니 형성 단위를 카운팅함으로써 정량된 억제 정도가 제시된다.
도 7은 시험관내 액체 분석법에서 표피 포도상구균의 성장 억제의 결여를 나타낸다 (실시예 7). 락트산 세균이 없는 대조군과 비교하여 지표 균주 표피 포도상구균의 콜로니 형성 단위를 카운팅함으로써 정량된 억제 정도가 제시된다.
도 8은 시험관내 액체 분석법에서 마이크로코쿠스 루테우스의 성장 억제의 결여를 나타낸다 (실시예 10). 락트산 세균이 없는 대조군과 비교하여 지표 균주 마이크로코쿠스 루테우스의 콜로니 형성 단위를 카운팅함으로써 정량된 억제 정도가 제시된다.
도 9는 시험관내 액체 분석법에서 대장균의 성장 억제의 결여를 나타낸다 (실시예 11). 락트산 세균이 없는 대조군과 비교하여 지표 균주 대장균의 콜로니 형성 단위를 카운팅함으로써 정량된 억제 정도가 제시된다.
도 10은 바시트라신 및 에리트로마이신과 비교하여 시험관내 홀 플레이트 분 석법에서의 황색 포도상구균의 성장 억제 정도를 나타낸다 (실시예 12). 바시트라신 및 에리트로마이신을 미리 절단된 홀에 여러 농도로 채우고, 황색 포도상구균의 성장을 관찰한다. 상응하는 검정 곡선이 도 10A에 제시된다. 한정된 수의 예비배양된 락토바실루스 세포 (DSM 18006)에 의한 황색 포도상구균의 성장 억제가 도 10B에 제시된다.
도 11은 락토바실루스 억제 물질의 프로테아제 안정성을 나타낸다 (실시예 13). 락토바실루스 DSM 18006의 항균 활성이 단백질분해효소 K, 키모트립신, 트립신 및 스트렙토마이세스 그리세우스로부터의 프로테아제에 의한 소화가능성과 관련하여 특징화된다.
본 발명의 첫번째 양상이 하기 실시예 1 내지 4에 의해 설명된다:
실시예 1
시험관내 홀 플레이트 분석법에서의 표피 포도상구균의 성장 자극
시험관내 홀 플레이트 분석법에서 한천 플레이트 상의 표피 포도상구균의 성장을 자극할 수 있는 특정 락트산 세균을 확인하였다. 이러한 락트산 세균이 하기에 기술된다. 이러한 효과를 테스트하기 위해, 예비배양된 락트산 세균을 예비-절단된 홀 내로 채우고, 지표 균주 표피 포도상구균의 성장 자극을 관찰하였다. 성장 자극의 가시적인 효과를 촉진하기 위해, 텔루라이트(Tellurite)를 사용하였다. 텔루라이트는 포도상구균을 특이적으로 염색시킨다. 자극은 락트산 세균이 피펫팅된 홀 주변에서의 흑색 고리의 형성, 및 콜로니 카운트의 증가로 정의되었다. 데이타가 도 1에 제시된다.
락토바실루스의 배양 및 제조:
락트산 세균을 에펜도르프 튜브 내의 1 ㎖ MRS 브로스(broth) 내의 -80℃ 동결 배양물로부터 배양하였다. 튜브를 닫고, 2일 동안 37℃에서 배양하였다. 10 ㎕의 이러한 예비배양물을 팔콘 튜브 내의 7 ㎖ MRS로 구성된 본(main) 배양물로 옮겼다. 배양물을 2일 동안 인큐베이션하였다. 배양 후, 세포를 원심분리 (15분, 4000 × g)에 의해 수확하였다. 세포 펠렛을 K/Na-완충제로 2회 세정하였다 (각각 1 ㎖). 세포를 200 ㎕ K/Na 완충제에 재현탁시켰다.
지표 균주의 배양 및 제조:
지표 균주는 표피 포도상구균 (DSM20044)이었다. 진탕 유리 플라스크 내의 20 ㎖ BHI 브로스에 15 ㎕의 24시간 예비배양물을 접종하였다. 지표 균주를 24시간 동안 37℃에서 배양하였다. 분취량을 BHI-브로스에서 0.025 - 0.05의 광학 밀도 OD595nm로 희석하고, 800 ㎕를 지표 플레이트 (BHI/텔루라이트) 상에 스프레딩하였다. 코르크 천공기를 사용하여 한천을 스탬핑(stamping)하였다. 예비 배양된 락트산 세균으로 홀을 채웠다.
배지 및 완충제:
BHI-한천 Difco 한천 1.8％; 플레이트 당 20 ㎖
BHI-배지 Difco
BHI/텔루라이트-한천 BHI-한천과 유사; 50℃로 냉각 후, 멸균 여과된
1％ 포타슘-텔루라이트 용액 1 ㎖를 100 ㎖ BHI-
배지로 옮김; 플레이트 당 20 ㎖
MRS-브로스 Difco, 150 ㎕/웰
K/Na-완충제 Kuester Thiel, pH 7.0, 가압멸균
- 0.066 M Na2HPO4 × 2H2O 61.2 ㎖
- 0.066 M KH2PO4 38.8 ㎖
실시예 2
원위치 피부 분석법에서의 표피 포도상구균의 성장 자극
피부 상에서 직접적으로 표피 포도상구균의 성장을 자극할 수 있는 프로바이오틱 락트산 세균을 확인하였다.
표피 포도상구균의 배양물을 희석하고, 피부 상에 직접 적용하여 공기 건조시켰다. 그 후, 분취량의 락트산 세균을 이러한 피부 구역 상에 점으로 적용하였다. 지표 균주 표피 포도상구균이 락트산 세균에 의해 피부 상에서 직접적으로 자극될 수 있었다. 인큐베이션 후, 포도상구균을 접착성 테이프를 사용하여 피부로부터 한천 플레이트로 옮겼다. 한천 플레이트를 37℃에서 인큐베이션하였다. 증가된 콜로니 카운트는 피부 상에서의 지표 균주의 성장 자극을 가리켰다 (도 2). 본 발명의 락토바실루스 균주, 특히 DSMZ에 기탁된 것들은 본원에 기술된 바와 같이 지표 균주의 성장 자극을 나타냈다.
락토바실루스의 배양 및 제조:
락트산 세균을 에펜도르프 튜브 내의 1 ㎖ MRS 브로스 내의 -80℃ 동결 배양 물로부터 배양하였다. 튜브를 닫고, 2일 동안 37℃에서 배양하였다. 10 ㎕의 이러한 예비배양물을 팔콘 튜브 내의 7 ㎖ MRS로 구성된 본 배양물로 옮겼다. 배양물을 2일 동안 인큐베이션하였다. 배양 후, 세포를 원심분리 (15분, 4000 × g)에 의해 수확하였다. 세포 펠렛을 K/Na-완충제로 2회 세정하였다 (각각 1 ㎖). 세포를 200 ㎕ K/Na 완충제에 재현탁시켰다.
지표 균주의 배양 및 제조:
지표 균주는 표피 포도상구균 (DSM20044)이었다. 진탕 유리 플라스크 내의 20 ㎖ BHI 브로스에 15 ㎕의 24시간 예비배양물을 접종하였다. 지표 균주를 24시간 동안 37℃에서 배양하였다. 분취량을 BHI-브로스에서 0.025 - 0.05의 광학 밀도 OD595nm로 희석하였다. 이러한 용액을 다시 희석하였다 (1:100).
배지 및 완충제:
BHI-한천 Difco 한천 1.8％; 플레이트 당 20 ㎖
BHI-배지 Difco
MRS-브로스 Difco, 150 ㎕/웰
K/Na-완충제 Kuester Thiel, pH 7.0, 가압멸균
- 0.066 M Na2HPO4 × 2H2O 61.2 ㎖
- 0.066 M KH2PO4 38.8 ㎖
팔뚝에의 표피 포도상구균의 적용:
제조된 지표 균주 표피 포도상구균의 1:100 희석물 400 ㎕를 한정된 피부 구 역 (10 cm × 3 cm)에 균일하게 스프레딩하고, 공기 건조시켰다.
표피 포도상구균이 접종된 피부 구역 상에의 락토바실루스의 적용:
10 ㎕의 제조된 락토바실루스를 표피 포도상구균이 예비-접종된 피부 구역에 적용하였다. 정상적인 환경에서 2시간 동안 팔을 인큐베이션하였다.
피부로부터의 미생물의 재단리:
2시간 후, 4개의 상부 피부층을 접착성 테이프 스트립을 이용하여 BHI-한천 플레이트로 옮겼다. 이에 의해, 단리된 피부 세균이 한천 플레이트로 옮겨졌다. 한천 플레이트를 24시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다.
실시예 3
원위치 피부 분석법에서의 황색 포도상구균의 성장 비자극
이러한 분석법을 사용하여, 보호용 상주성 피부 미생물총의 세균을 자극할 수 있는 락트산 세균에 의해 일과성 병원성 미생물총의 원치않는 세균이 자극되지 않는지 여부를 체크할 수 있다.
이러한 목적을 위해, 지표 균주 황색 포도상구균이 고도로 희석되어, 표피 포도상구균과 동일한 방식으로 피부에 적용되었다 (실시예 2 참조). 다시, 락트산 세균의 자극 활성을 테스트하였다. 기술된 락트산 세균에 의한 황색 포도상구균의 자극을 관찰할 수 없었다. 본 발명의 락토바실루스 균주, 특히 DSMZ에 기탁된 것들은 황색 포도상구균의 자극을 나타내지 않았다. 데이타가 도 3에 제시된다.
락토바실루스의 배양 및 제조:
락트산 세균을 에펜도르프 튜브 내의 1 ㎖ MRS 브로스 내의 -80℃ 동결 배양 물로부터 배양하였다. 튜브를 닫고, 2일 동안 37℃에서 배양하였다. 10 ㎕의 이러한 예비배양물을 팔콘 튜브 내의 7 ㎖ MRS로 구성된 본 배양물로 옮겼다. 배양물을 2일 동안 인큐베이션하였다. 배양 후, 세포를 원심분리 (15분, 4000 × g)에 의해 수확하였다. 세포 펠렛을 K/Na-완충제로 2회 세정하였다 (각각 1 ㎖). 세포를 200 ㎕ K/Na 완충제에 재현탁시켰다.
지표 균주의 배양 및 제조:
지표 균주는 황색 포도상구균 (DSM346)이었다. 진탕 유리 플라스크 내의 20 ㎖ BHI 브로스에 15 ㎕의 24시간 예비배양물을 접종하였다. 지표 균주를 24시간 동안 37℃에서 배양하였다. 분취량을 BHI-브로스에서 0.025 - 0.05의 광학 밀도 OD595nm로 희석하였다. 이러한 용액을 다시 희석하였다 (1:100).
배지 및 완충제:
BHI-한천 Difco 한천 1.8％; 플레이트 당 20 ㎖
BHI-배지 Difco
MRS-브로스 Difco, 150 ㎕/웰
K/Na-완충제 Kuester Thiel, pH 7.0, 가압멸균
- 0.066 M Na2HPO4 × 2H2O 61.2 ㎖
- 0.066 M KH2PO4 38.8 ㎖
팔뚝에의 황색 포도상구균의 적용:
제조된 지표 균주 황색 포도상구균의 1:100 희석물 400 ㎕를 한정된 피부 구 역 (10 cm × 3 cm)에 균일하게 스프레딩하고, 공기 건조시켰다.
황색 포도상구균이 접종된 피부 구역 상에의 락토바실루스의 적용:
10 ㎕의 제조된 락토바실루스를 황색 포도상구균이 예비-접종된 피부 구역에 점으로 적용하였다. 정상적인 환경에서 2시간 동안 팔을 인큐베이션하였다.
피부로부터의 미생물의 재단리:
2시간 후, 4개의 상부 피부층을 접착성 테이프 스트립을 이용하여 BHI-한천 플레이트로 옮겼다. 이에 의해, 단리된 피부 세균이 한천 플레이트로 옮겨졌다. 한천 플레이트를 24시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 데이타가 도 3에 제시된다.
실시예 4
시험관내 홀 플레이트 분석법에서의 황색 포도상구균의 성장 비자극
시험관내 홀 플레이트 분석법에서 한천 플레이트 상의 표피 포도상구균의 성장을 자극할 수 있지만 일과성 피부 미생물총의 대표물인 황색 포도상구균의 성장은 자극하지 않는 특정 락트산 세균을 확인하였다. 이러한 효과를 테스트하기 위해, 표피 포도상구균을 자극할 수 있는 예비배양된 락트산 세균을 예비-절단된 홀 내로 채우고, 지표 균주 황색 포도상구균의 성장 자극의 부재를 관찰하였다. 성장 자극의 가시적인 효과를 촉진하기 위해, 텔루라이트를 사용하였다. 텔루라이트는 포도상구균을 특이적으로 염색시킨다. 자극은 락트산 세균을 함유하는 홀 주변에서의 흑색 고리의 형성, 및 콜로니 카운트의 증가로 정의되었다. 본 발명의 락토바실루스 균주, 특히 DSMZ에 기탁된 것들은 황색 포도상구균의 자극을 나타내지 않 았다. 데이타가 도 4에 제시된다.
락토바실루스의 배양 및 제조:
락트산 세균을 에펜도르프 튜브 내의 1 ㎖ MRS 브로스 내의 -80℃ 동결 배양물로부터 배양하였다. 튜브를 닫고, 2일 동안 37℃에서 배양하였다. 10 ㎕의 이러한 예비배양물을 팔콘 튜브 내의 7 ㎖ MRS로 구성된 본 배양물로 옮겼다. 배양물을 2일 동안 인큐베이션하였다. 배양 후, 세포를 원심분리 (15분, 4000 × g)에 의해 수확하였다. 세포 펠렛을 K/Na-완충제로 2회 세정하였다 (각각 1 ㎖). 세포를 200 ㎕ K/Na 완충제에 재현탁시켰다.
지표 균주의 배양 및 제조:
지표 균주는 황색 포도상구균 (DSM346)이었다. 진탕 유리 플라스크 내의 20 ㎖ BHI 브로스에 15 ㎕의 24시간 예비배양물을 접종하였다. 지표 균주를 24시간 동안 37℃에서 배양하였다. 분취량을 BHI-브로스에서 0.025 - 0.05의 광학 밀도 OD595nm로 희석하고, 800 ㎕를 지표 플레이트 (BHI/텔루라이트) 상에 스프레딩하였다. 코르크 천공기를 사용하여 한천을 스탬핑하였다. 예비 배양된 락트산 세균으로 홀을 채웠다.
배지 및 완충제:
BHI-한천 Difco 한천 1.8％; 플레이트 당 20 ㎖
BHI-배지 Difco
BHI/텔루라이트-한천 BHI-한천과 유사; 50℃로 냉각 후, 멸균 여과된
1％ 포타슘-텔루라이트 용액 1 ㎖를 100 ㎖ BHI-
배지로 옮김; 플레이트 당 20 ㎖가 분배됨
MRS-브로스 Difco, 150 ㎕/웰
K/Na-완충제 Kuester Thiel, pH 7.0, 가압멸균
- 0.066 M Na2HPO4 × 2H2O 61.2 ㎖
- 0.066 M KH2PO4 38.8 ㎖
본 발명의 두번째 양상이 하기 실시예 5 내지 13에 의해 설명된다:
실시예 5
시험관내 홀 플레이트 분석법에서의 황색 포도상구균의 성장 억제
시험관내 홀 플레이트 분석법에서 한천 플레이트 상의 황색 포도상구균의 성장을 특이적으로 억제할 수 있는 특정 락트산 세균을 확인하였다. 이러한 효과를 테스트하기 위해, 예비배양된 락트산 세균을 예비-절단된 홀 내로 채우고, 지표 균주 황색 포도상구균의 성장 억제를 관찰하였다. 데이타가 도 5에 제시된다.
락토바실루스의 배양 및 제조:
락트산 세균 (OB-LB-Sa3: DSM 18006)을 에펜도르프 튜브 내의 1 ㎖ MRS 브로스 내의 -80℃ 동결 배양물로부터 배양하였다. 튜브를 닫고, 2일 동안 37℃에서 배양하였다. 10 ㎕의 이러한 예비배양물을 팔콘 튜브 내의 7 ㎖ MRS로 구성된 본 배양물로 옮겼다. 배양물을 2일 동안 인큐베이션하였다. 배양 후, 세포를 원심분리 (15분, 4000 × g)에 의해 수확하였다. 세포 펠렛을 K/Na-완충제로 2회 세정하 였다 (각각 1 ㎖). 세포를 200 ㎕ K/Na 완충제에 재현탁시켰다.
지표 균주의 배양 및 제조:
지표 균주는 황색 포도상구균 (DSM346)이었다. 진탕 유리 플라스크 내의 20 ㎖ BHI 브로스에 15 ㎕의 24시간 예비배양물을 접종하였다. 지표 균주를 24시간 동안 37℃에서 배양하였다. 분취량을 BHI-브로스에서 0.025 - 0.05의 광학 밀도 OD595nm로 희석하고, 800 ㎕를 지표 플레이트 (BHI) 상에 스프레딩하였다. 코르크 천공기를 사용하여 한천을 스탬핑하였다. 5 ㎕ 또는 10 ㎕의 예비 배양된 락트산 세균으로 홀을 채웠다.
배지 및 완충제:
BHI-한천 Difco 한천 1.8％; 플레이트 당 20 ㎖
BHI-배지 Difco
MRS-브로스 Difco
K/Na-완충제 Kuester Thiel에 따름, pH 7.0, 가압멸균
- 0.066 M Na2HPO4 × 2H2O 61.2 ㎖
- 0.066 M KH2PO4 38.8 ㎖
실시예 6
시험관내 액체 분석법에서의 황색 포도상구균의 성장 억제
시험관내 액체 분석법에서 액체 배지 내의 황색 포도상구균의 성장을 특이적으로 억제할 수 있는 특정 락트산 세균을 확인하였다. 이러한 효과를 테스트하기 위해, 예비 배양된 락트산 세균을 포도상구균의 성장에 대해 최적화된 액체 배양 배지 내에서 지표 균주 황색 포도상구균과 함께 공동-인큐베이션하였다. 락트산 세균이 없는 대조군과 비교하여 지표 균주의 콜로니 형성 단위를 카운팅함으로써 억제 정도를 정량하였다. 데이타가 도 6에 제시된다.
락토바실루스의 배양 및 제조:
락트산 세균 (OB-LB-Sa3: DSM 18006)을 에펜도르프 튜브 내의 1 ㎖ MRS 브로스 내의 -80℃ 동결 배양물로부터 배양하였다. 튜브를 닫고, 2일 동안 37℃에서 배양하였다. 10 ㎕의 이러한 예비배양물을 팔콘 튜브 내의 7 ㎖ MRS로 구성된 본 배양물로 옮겼다. 배양물을 2일 동안 인큐베이션하였다. 배양 후, 세포를 원심분리 (15분, 4000 × g)에 의해 수확하였다. 세포 펠렛을 K/Na-완충제로 2회 세정하였다 (각각 1 ㎖). 세포를 250 mM 글리세롤이 있는 200 ㎕ K/Na 완충제에 재현탁시키고, 17시간 동안 인큐베이션하였다.
지표 균주의 배양 및 제조:
지표 균주는 황색 포도상구균 (DSM346)이었다. 진탕 유리 플라스크 내의 10 ㎖ BHI 브로스에 24시간 예비배양물에 대한 동결 배양물 15 ㎕를 접종하였다. 배양물을 2.5 × 108 개의 세포/㎖의 세포 농도로 새로운 BHI 브로스로 희석하였다.
액체 억제 분석법:
액체 분석법을 위해, 5 ㎕의 새롭게 제조된 락트산 세균 (200 ㎕에서) 및 10 ㎕의 예비 배양된 지표 균주 황색 포도상구균을 10 ㎖의 BHI 브로스에 공동-배양을 위해 접종하였다. 배양물을 7시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 100 ㎕의 1:10000 희석물을 콜로니 형성 단위의 정량을 위해 BHI 한천 플레이트 상에 스프레딩하였다. 플레이트를 24시간 동안 인큐베이션하고, 콜로니 형성 단위를 카운팅하였다.
배지 및 완충제:
BHI-한천 Difco 한천 1.8％; 플레이트 당 20 ㎖
BHI-배지 Difco
MRS-브로스 Difco
K/Na-완충제 Kuester Thiel에 따름, pH 7.0, 가압멸균
- 0.066 M Na2HPO4 × 2H2O 61.2 ㎖
- 0.066 M KH2PO4 38.8 ㎖
실시예 7
시험관내 액체 분석법에서의 표피 포도상구균의 성장 비억제
이러한 분석법을 사용하여, 병원성 미생물인 황색 포도상구균의 성장을 억제할 수 있는 선택된 락트산 세균이 시험관내 액체 분석법에서 피부의 공생 미생물총의 주요 구성원인 표피 포도상구균을 억제하지 않는지 여부를 체크할 수 있다.
이러한 효과를 테스트하기 위해, 예비 배양된 락트산 세균을 액체 배양물 내에서 지표 균주와 함께 공동-인큐베이션하였다. 락트산 세균이 없는 대조군과 비교하여 양쪽 지표 균주의 콜로니 형성 단위를 카운팅함으로써 억제 정도를 정량하 였다. 데이타가 도 7에 제시된다.
락토바실루스의 배양 및 제조:
락트산 세균 (OB-LB-Sa3: DSM 18006)을 에펜도르프 튜브 내의 1 ㎖ MRS 브로스 내의 -80℃ 동결 배양물로부터 배양하였다. 튜브를 닫고, 2일 동안 37℃에서 배양하였다. 10 ㎕의 이러한 예비배양물을 팔콘 튜브 내의 7 ㎖ MRS로 구성된 본 배양물로 옮겼다. 배양물을 2일 동안 인큐베이션하였다. 배양 후, 세포를 원심분리 (15분, 4000 × g)에 의해 수확하였다. 세포 펠렛을 K/Na-완충제로 2회 세정하였다 (각각 1 ㎖). 세포를 250 mM 글리세롤이 있는 200 ㎕ K/Na 완충제에 재현탁시키고, 17시간 동안 인큐베이션하였다.
지표 균주의 배양 및 제조:
지표 균주는 표피 포도상구균 (DSM20044)이었다. 진탕 유리 플라스크 내의 20 ㎖ BHI 브로스에 24시간 예비배양물에 대한 동결 배양물 15 ㎕를 접종하였다.
액체 억제 분석법
액체 분석법을 위해, 5 ㎕의 새롭게 제조된 락트산 세균 (200 ㎕에서) 및 10 ㎕의 예비 배양된 지표 균주 표피 포도상구균을 10 ㎖의 BHI 브로스에 공동-배양을 위해 접종하였다. 배양물을 7시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 100 ㎕의 1:10000 희석물을 콜로니 형성 단위의 정량을 위해 BHI 한천 플레이트 상에 스프레딩하였다. 플레이트를 24시간 동안 인큐베이션하고, 콜로니 형성 단위를 카운팅하였다.
배지 및 완충제:
BHI-한천 Difco 한천 1.8％; 플레이트 당 20 ㎖
BHI-배지 Difco
MRS-브로스 Difco
K/Na-완충제 Kuester Thiel에 따름, pH 7.0, 가압멸균
- 0.066 M Na2HPO4 × 2H2O 61.2 ㎖
- 0.066 M KH2PO4 38.8 ㎖
실시예 8
원위치 피부 분석법에서의 황색 포도상구균의 성장 억제
피부 상에서 직접적으로 황색 포도상구균의 성장을 억제할 수 있는 락트산 세균을 확인하였다.
이러한 효과를 테스트하기 위해, 황색 포도상구균의 배양물을 희석하고, 피부 상에 직접 적용하여 공기 건조시켰다. 그 후, 분취량의 락트산 세균을 이러한 피부 구역 상에 적용하였다. 따라서, 지표 균주 황색 포도상구균이 락트산 세균에 의해 피부 상에서 직접적으로 억제되었다. 인큐베이션 후, 포도상구균을 접착성 테이프를 사용하여 피부로부터 한천 플레이트로 옮겼다. 한천 플레이트를 37℃에서 인큐베이션하였다. 락트산 세균이 없는 대조군과 비교하여 감소된 콜로니 카운트는 피부 상에서의 지표 균주의 성장 억제를 가리킨다.
락토바실루스의 배양 및 제조:
락트산 세균 (OB-LB-Sa3: DSM 18006)을 에펜도르프 튜브 내의 1 ㎖ MRS 브로 스 내의 -80℃ 동결 배양물로부터 배양하였다. 튜브를 닫고, 2일 동안 37℃에서 배양하였다. 10 ㎕의 이러한 예비배양물을 팔콘 튜브 내의 7 ㎖ MRS로 구성된 본 배양물로 옮겼다. 배양물을 2일 동안 인큐베이션하였다. 배양 후, 세포를 원심분리 (15분, 4000 × g)에 의해 수확하였다. 세포 펠렛을 K/Na-완충제로 2회 세정하였다 (각각 1 ㎖). 세포를 200 ㎕ K/Na 완충제에 재현탁시켰다.
지표 균주의 배양 및 제조:
지표 균주는 황색 포도상구균 (DSM346)이었다. 진탕 유리 플라스크 내의 20 ㎖ BHI 브로스에 15 ㎕의 24시간 예비배양물을 접종하였다. 지표 균주를 24시간 동안 37℃에서 배양하였다.
배지 및 완충제:
BHI-한천 Difco 한천 1.8％; 플레이트 당 20 ㎖
BHI-배지 Difco
MRS-브로스 Difco
K/Na-완충제 Kuester Thiel, pH 7.0, 가압멸균
- 0.066 M Na2HPO4 × 2H2O 61.2 ㎖
- 0.066 M KH2PO4 38.8 ㎖
팔뚝에의 황색 포도상구균의 적용:
제조된 지표 균주 황색 포도상구균의 1:100 희석물 400 ㎕를 한정된 피부 구역 (10 cm × 3 cm)에 균일하게 스프레딩하고, 공기 건조시켰다.
황색 포도상구균이 접종된 피부 구역 상에의 락토바실루스의 적용:
10 ㎕의 제조된 락토바실루스를 황색 포도상구균이 예비-접종된 피부 구역에 적용하였다. 정상적인 환경에서 6시간 동안 팔을 인큐베이션하였다.
피부로부터의 미생물의 재단리:
6시간 후, 4개의 상부 피부층을 접착성 테이프 스트립을 이용하여 BHI-한천 플레이트로 옮겼다. 따라서, 단리된 피부 세균이 한천 플레이트로 옮겨졌다. 한천 플레이트를 24시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다.
실시예 9
원위치 피부 분석법에서의 표피 포도상구균의 성장 비억제
표피 포도상구균의 성장은 피부 상에서 직접적으로 영향을 받지 않으면서, 황색 포도상구균의 성장을 억제하는 락트산 세균을 확인하였다.
이러한 분석법을 사용하여, 건강한 정상적인 피부 세균총의 공생 미생물 표피 포도상구균이 황색 포도상구균을 억제할 수 있는 락트산 세균에 의해 억제되지 않는지를 체크할 수 있다.
따라서, 지표 균주 표피 포도상구균이 고도로 희석되어, 황색 포도상구균과 동일한 방식으로 피부에 적용되었다. 다시, 락트산 세균의 억제 활성을 테스트하였다. 기술된 락트산 세균에 의한 표피 포도상구균의 억제를 관찰할 수 없었다.
락토바실루스의 배양 및 제조:
락트산 세균 (OB-LB-Sa3: DSM 18006)을 에펜도르프 튜브 내의 1 ㎖ MRS 브로스 내의 -80℃ 동결 배양물로부터 배양하였다. 튜브를 닫고, 2일 동안 37℃에서 배양하였다. 10 ㎕의 이러한 예비배양물을 팔콘 튜브 내의 7 ㎖ MRS로 구성된 본 배양물로 옮겼다. 배양물을 2일 동안 인큐베이션하였다. 배양 후, 세포를 원심분리 (15분, 4000 × g)에 의해 수확하였다. 세포 펠렛을 K/Na-완충제로 2회 세정하였다 (각각 1 ㎖). 세포를 200 ㎕ K/Na 완충제에 재현탁시켰다.
지표 균주의 배양 및 제조:
지표 균주는 표피 포도상구균 (DSM20044)이었다. 진탕 유리 플라스크 내의 20 ㎖ BHI 브로스에 15 ㎕의 24시간 예비배양물을 접종하였다. 지표 균주를 24시간 동안 37℃에서 배양하였다.
배지 및 완충제:
BHI-한천 Difco 한천 1.8％; 플레이트 당 20 ㎖
BHI-배지 Difco
MRS-브로스 Difco
K/Na-완충제 Kuester Thiel, pH 7.0, 가압멸균
- 0.066 M Na2HPO4 × 2H2O 61.2 ㎖
- 0.066 M KH2PO4 38.8 ㎖
팔뚝에의 표피 포도상구균의 적용:
제조된 지표 균주 표피 포도상구균의 1:100 희석물 400 ㎕를 한정된 피부 구역 (10 cm × 3 cm)에 균일하게 스프레딩하고, 공기 건조시켰다.
표피 포도상구균이 접종된 피부 구역 상에의 락토바실루스의 적용:
10 ㎕의 제조된 락토바실루스를 표피 포도상구균이 예비-접종된 피부 구역에 적용하였다. 정상적인 환경에서 6시간 동안 팔을 인큐베이션하였다.
피부로부터의 미생물의 재단리:
6시간 후, 4개의 상부 피부층을 접착성 테이프 스트립을 이용하여 BHI-한천 플레이트로 옮겼다. 따라서, 단리된 피부 세균이 한천 플레이트로 옮겨졌다. 한천 플레이트를 24시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다.
실시예 10
시험관내 액체 분석법에서의 마이크로코쿠스 루테우스의 성장 비억제
병원성 미생물인 황색 포도상구균의 성장을 억제할 수 있는 선택된 락트산 세균은 시험관내 액체 분석법에서 피부의 공생 미생물총의 관련된 구성원인 마이크로코쿠스 루테우스를 억제하지 않는다.
이러한 효과를 테스트하기 위해, 예비 배양된 락트산 세균을 액체 배양물 내에서 지표 균주와 함께 공동-인큐베이션하였다. 락트산 세균이 없는 대조군과 비교하여 양쪽 지표 균주의 콜로니 형성 단위를 카운팅함으로써 억제 정도를 정량하였다. 데이타가 도 8에 제시된다.
락토바실루스의 배양 및 제조:
락트산 세균 (OB-LB-Sa3: DSM 18006 및 OB-LB-Sa16: DSM 18007)을 에펜도르프 튜브 내의 1 ㎖ MRS 브로스 내의 -80℃ 동결 배양물로부터 배양하였다. 튜브를 닫고, 2일 동안 37℃에서 배양하였다. 10 ㎕의 이러한 예비배양물을 팔콘 튜브 내의 7 ㎖ MRS로 구성된 본 배양물로 옮겼다. 배양물을 2일 동안 인큐베이션하였다. 배양 후, 세포를 원심분리 (15분, 4000 × g)에 의해 수확하였다. 세포 펠렛을 K/Na-완충제로 2회 세정하였다 (각각 1 ㎖). 세포를 250 mM 글리세롤이 있는 200 ㎕ K/Na 완충제에 재현탁시키고, 17시간 동안 인큐베이션하였다.
지표 균주의 배양 및 제조:
지표 균주는 마이크로코쿠스 루테우스였다. 진탕 유리 플라스크 내의 20 ㎖ BHI 브로스에 24시간 예비배양물에 대한 동결 배양물 15 ㎕를 접종하였다.
액체 억제 분석법:
액체 분석법을 위해, 5 ㎕의 새롭게 제조된 락트산 세균 (200 ㎕에서) 및 10 ㎕의 예비 배양된 지표 균주 마이크로코쿠스 루테우스를 10 ㎖의 BHI 브로스에 공동-배양을 위해 접종하였다. 배양물을 7시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 100 ㎕의 1:10000 희석물을 콜로니 형성 단위의 정량을 위해 BHI 한천 플레이트 상에 스프레딩하였다. 플레이트를 24시간 동안 인큐베이션하고, 콜로니 형성 단위를 카운팅하였다.
배지 및 완충제:
BHI-한천 Difco 한천 1.8％; 플레이트 당 20 ㎖
BHI-배지 Difco
MRS-브로스 Difco
K/Na-완충제 Kuester Thiel에 따름, pH 7.0, 가압멸균
- 0.066 M Na2HPO4 × 2H2O 61.2 ㎖
- 0.066 M KH2PO4 38.8 ㎖
실시예 11
시험관내 액체 분석법에서의 대장균의 성장 비억제
병원성 미생물인 황색 포도상구균의 성장을 억제할 수 있는 선택된 락트산 세균은 시험관내 액체 분석법에서 인간의 기타 관련된 미생물, 예를 들어 대장균을 억제하지 않는다.
이러한 효과를 테스트하기 위해, 예비 배양된 락트산 세균을 액체 배양물 내에서 지표 균주와 함께 공동-인큐베이션하였다. 락트산 세균이 없는 대조군과 비교하여 양쪽 지표 균주의 콜로니 형성 단위를 카운팅함으로써 억제 정도를 정량하였다. 데이타가 도 9에 제시된다.
락토바실루스의 배양 및 제조:
락트산 세균 (OB-LB-Sa3: DSM 18006 및 OB-LB-Sa16: DSM 18007)을 에펜도르프 튜브 내의 1 ㎖ MRS 브로스 내의 -80℃ 동결 배양물로부터 배양하였다. 튜브를 닫고, 2일 동안 37℃에서 배양하였다. 10 ㎕의 이러한 예비배양물을 팔콘 튜브 내의 7 ㎖ MRS로 구성된 본 배양물로 옮겼다. 배양물을 2일 동안 인큐베이션하였다. 배양 후, 세포를 원심분리 (15분, 4000 × g)에 의해 수확하였다. 세포 펠렛을 K/Na-완충제로 2회 세정하였다 (각각 1 ㎖). 세포를 250 mM 글리세롤이 있는 200 ㎕ K/Na 완충제에 재현탁시키고, 17시간 동안 인큐베이션하였다.
지표 균주의 배양 및 제조:
지표 균주는 대장균이었다. 진탕 유리 플라스크 내의 20 ㎖ BHI 브로스에 24시간 예비배양물에 대한 동결 배양물 15 ㎕를 접종하였다.
액체 억제 분석법:
액체 분석법을 위해, 5 ㎕의 새롭게 제조된 락트산 세균 (200 ㎕에서) 및 10 ㎕의 예비 배양된 지표 균주 대장균을 10 ㎖의 BHI 브로스에 공동-배양을 위해 접종하였다. 배양물을 7시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 100 ㎕의 1:10000 희석물을 콜로니 형성 단위의 정량을 위해 BHI 한천 플레이트 상에 스프레딩하였다. 플레이트를 24시간 동안 인큐베이션하고, 콜로니 형성 단위를 카운팅하였다.
배지 및 완충제:
BHI-한천 Difco 한천 1.8％; 플레이트 당 20 ㎖
BHI-배지 Difco
MRS-브로스 Difco
K/Na-완충제 Kuester Thiel에 따름, pH 7.0, 가압멸균
- 0.066 M Na2HPO4 × 2H2O 61.2 ㎖
- 0.066 M KH2PO4 38.8 ㎖
실시예 12
바시트라신 및 에리트로마이신과 비교된 시험관내 홀 플레이트 분석법에서의
황색 포도상구균의 성장 억제 정도
시험관내 홀 플레이트 분석법에서 한천 플레이트 상의 황색 포도상구균의 성 장을 특이적으로 억제할 수 있는 특정 락트산 세균을 확인하였다. 이러한 효과를 시판되는 바시트라신 및 에리트로마이신의 항생 크림 제제와 비교하였다. 이러한 효과를 비교하기 위해, 양쪽 항생제를 예비-절단된 홀 내로 여러 농도로 채우고, 지표 균주 황색 포도상구균의 성장 억제를 관찰하였다 (도 10A의 검정 곡선). 억제 구역의 직경을 측정하고, 이의 억제 면적을 계산하였다. 그 후, 이러한 면적을 균주 OB-LB-Sa3 (DSM 18006)의 한정된 수의 예비배양된 락토바실루스 세포에 의한 황색 포도상구균의 성장 억제와 상관시켰다 (도 10B 참조).
락토바실루스의 배양 및 제조:
락트산 세균 (OB-LB-Sa3: DSM 18006)을 에펜도르프 튜브 내의 1 ㎖ MRS 브로스 내의 -80℃ 동결 배양물로부터 배양하였다. 튜브를 닫고, 2일 동안 37℃에서 배양하였다. 10 ㎕의 이러한 예비배양물을 팔콘 튜브 내의 7 ㎖ MRS로 구성된 본 배양물로 옮겼다. 배양물을 2일 동안 인큐베이션하였다. 배양 후, 세포를 원심분리 (15분, 4000 × g)에 의해 수확하였다. 세포 펠렛을 K/Na-완충제로 2회 세정하였다 (각각 1 ㎖). 세포는 200 ㎕ K/Na 완충제에 재현탁켰다.
지표 균주의 배양 및 제조:
지표 균주는 황색 포도상구균 (DSM346)이었다. 진탕 유리 플라스크 내의 20 ㎖ BHI 브로스에 15 ㎕의 24시간 예비배양물을 접종하였다. 지표 균주를 24시간 동안 37℃에서 배양하였다. 분취량을 BHI-브로스에서 0.025 - 0.05의 광학 밀도 OD595nm로 희석하고, 800 ㎕를 지표 플레이트 (BHI) 상에 스프레딩하였다. 코르크 천공기를 사용하여 한천을 스탬핑하였다. 5 ㎕ 또는 10 ㎕의 예비 배양된 락트산 세균 또는 상응하는 부피의 시판되는 항생 제제로 홀을 채웠다.
배지 및 완충제:
BHI-한천 Difco 한천 1.8％; 플레이트 당 20 ㎖
BHI-배지 Difco
MRS-브로스 Difco
K/Na-완충제 Kuester Thiel에 따름, pH 7.0, 가압멸균
- 0.066 M Na2HPO4 × 2H2O 61.2 ㎖
- 0.066 M KH2PO4 38.8 ㎖
실시예 13
락토바실루스 억제 물질의 프로테아제 안정성
시험관내 홀 플레이트 분석법에서 한천 플레이트 상의 황색 포도상구균의 성장을 특이적으로 억제할 수 있는 특정 락트산 세균을 확인하였다. 선택된 락토바실루스의 항균 활성을 단백질분해효소 K, 스트렙토마이세스 그리세우스로부터의 프로테아제, 키모트립신 및 트립신에 의한 소화와 관련하여 특징화하였다. 락토바실루스 상청액의 무세포 제제를 제조하고, 여러 프로테아제와 함께 1시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 그 후, 이러한 제제들을 지표 균주 황색 포도상구균의 성장을 억제하는 능력에 대해 테스트하였다. 억제 구역의 직경을 측정하고, 이의 억제 면적을 계산하였다 (도 11 참조).
락토바실루스의 배양 및 제조:
락트산 세균 (OB-LB-Sa3: DSM 18006)을 팔콘 튜브 내의 7 ㎖ MRS 브로스 내의 -80℃ 동결 배양물로부터 배양하였다. 튜브를 닫고, 2일 동안 37℃에서 배양하였다. 7 ㎖의 이러한 예비배양물을 플라스크 내의 40 ㎖ MRS로 구성된 본 배양물로 옮겼다. 배양물을 2일 동안 인큐베이션하였다. 배양 후, 세포를 원심분리 (15분, 4000 × g)에 의해 수확하였다. 세포 펠렛을 K/Na-완충제로 2회 세정하였다 (각각 2 ㎖). 세포를 10 ㎖ BHI 배지에 재현탁시키고, 6시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 세포를 원심분리 (15분, 4000 × g)에 의해 수확하고, 상청액을 프로테아제 인큐베이션에 사용하였다. 상세하게는, 150 ㎕의 상청액을 15 ㎕의 10 ㎎/㎖ 프로테아제 용액과 함께 37℃에서 인큐베이션하였다.
지표 균주의 배양 및 제조:
지표 균주는 황색 포도상구균 (DSM346)이었다. 진탕 유리 플라스크 내의 20 ㎖ BHI 브로스에 15 ㎕의 24시간 예비배양물을 접종하였다. 지표 균주를 24시간 동안 37℃에서 배양하였다. 분취량을 BHI-브로스에서 0.025 - 0.05의 광학 밀도 OD595nm로 희석하고, 800 ㎕를 지표 플레이트 (BHI) 상에 스프레딩하였다. 코르크 천공기를 사용하여 한천을 스탬핑하였다. 5 ㎕ 또는 10 ㎕의 예비 배양된 락트산 세균으로 홀을 채우고, 15 ㎕의 10 ㎎/㎖ 프로테아제 용액과 함께 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 5 ㎕ 또는 10 ㎕의 프로테아제 처리된 락토바실루스 상청액을 억제 분석법에 사용하였다.
배지 및 완충제:
BHI-한천 Difco 한천 1.8％; 플레이트 당 20 ㎖
BHI-배지 Difco
MRS-브로스 Difco
K/Na-완충제 Kuester Thiel에 따름, pH 7.0, 가압멸균
- 0.066 M Na2HPO4 × 2H2O 61.2 ㎖
- 0.066 M KH2PO4 38.8 ㎖
인용된 참조문헌
Aly, R., Maibach, HI., Shinefield, HR., Strauss, WG. (1972): Survival of pathogenic microorganisms on human skin. J Invest Dermatol. 58(4): 205-210.
Bisno, AL. (1984): Cutaneous infections: microbiologic and epidemiologic considerations. Am J Med. 76(5A): 172-179.
Brook, I. (2000): The effects of amoxicillin therapy on skin flora in infants. Pediatr Dermatol. 17(5): 360-363.
Elek, SD. (1956): Experimental staphylococcal infections in the skin of man. Ann. NY Acad Sci. 65: 85-90.
Feingold, DS. (1985): Cutaneous microbial flora. Cutis. 36(5A): 1.
Gfatter, R., Hackl, P., Braun, F. (1997): Effects of soap and detergents on skin surface pH, stratum corneum hydration and fat content in infants. Dermatology. 195(3): 258-262.
Gibbons, RJ., Houte, JV. (1975): Bacterial adherence in oral microbial ecology. Annu Rev Microbiol. 1975;29: 19-44.
Hurst, V. (1959): Transmission of hospital staphylococci among newborn infants. Pediatrics 25: 204-214.
Imokawa, G., Akasaki, S., Hattori, M., Yoshizuka, N. (1986): Selective recovery of deranged water-holding properties by stratum corneum lipids. J Invest Dermatol. 87(6): 758-761.
Korting, HC. (1992): Einfluss des pH-Wertes auf das Wachstum von Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus und Propionibacterium acnes in kontinuierlicher Kultur. Zbl. Hyg. 193: 78-90.
Korting, HC., Huebner, K., Greiner, K., Hamm, G., Braun-Falco, O. (1990): Unterschiede des Hautoberflaechen-pH-Wertes und der bakteriellen Mikroflora durch Langzeit-Anwendung synthetische Detergenz-Zubereitungen mit pH 5,5 und pH 7,0 in Acta Derm Venereol. 70: 429-457.
Larson, E. (2001): Hygiene of the skin: when is clean too clean? Emerg Infect Dis. 7(2): 225-230.
Leyden, JJ., McGinley, KJ., Nordstrom, KM., Webster, GF. (1987): Skin microflora. J Invest Dermatol. 88(3): 65-72.
Lukas, A. (1990): Beeinflussbarkeit des Wachstums wichtiger Bakterien der Residentflora in-vitro durch den pH-Wert. In: O. Braun-Falco, HC. Korting (Hrsg.): Hautreinigung mit Syndets, 104-112.
Milyani, RM., Selwyn, S. (1978): Quantitative studies on competitive activities of skin bacteria growing on solid media. J Med Microbiol. 11(4): 379-386.
Ohnishi, Y., Okino, N., Ito, M., Imayama, S. (1999): Ceramidase activity in bacterial skin flora as a possible cause of ceramide deficiency in atopic dermatitis. Clin Diagn Lab Immunol. 6(1): 101-104.
Roth, RR., James, WD. (1988): Microbial ecology of the skin. Annu Rev Microbiol. 42: 441-464.
Selwyn, S., Ellis, H. (1972): Skin bacteria and skin disinfection reconsidered. Br Med J. 1(793): 136-140.
Sullivan, A., Edlund, C., Nord, CE. (2001): Effect of antimicrobial agents on the ecological balance of human micro flora. Lancet Infect Dis. 1(2): 101-114.
Yosipovitch, G., Maibach, HI. (1996): Skin surface pH: A protective acid mantle in Cosmetics Toiletries magazine 111 (12): 101

Claims (37)

  1. 상주성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장을 자극할 수 있고 일과성 병원성(病原性) 미생물총의 미생물의 성장은 자극하지 않는 미생물.
  2. 제1항에 있어서, 표피 포도상구균(Staphylococcus epidermidis)의 성장을 자극할 수 있는 미생물.
  3. 제2항에 있어서, 시험관 내에서 표피 포도상구균의 성장을 자극할 수 있는 미생물.
  4. 제2항 또는 제3항에 있어서, 원위치 피부 분석법에서 표피 포도상구균의 성장을 자극할 수 있는 미생물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 황색 포도상구균(Staphylococcus aureus)의 성장을 자극하지 않는 미생물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 락토바실루스(Lactobacillus) 속에 속하는 미생물인 미생물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 락토바실루스가 락토바실루스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 락토바실루스 브레비스(Lactobacillus brevis) 또는 락토바실루스 페르멘툼(Lactobacillus fermentum)인 미생물.
  8. 제7항에 있어서, 락토바실루스 파라카제이가 락토바실루스 파라카제이 아종 파라카제이 (Lactobacillus paracasei spp . paracasei) 아종의 것인 미생물.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서, DSMZ 접속 번호 DSM 17248, 접속 번호 DSM 17247, 접속 번호 DSM 17250 및 접속 번호 DSM 17249의 락토바실루스 파라카제이, 락토바실루스 브레비스 또는 락토바실루스 페르멘툼, 또는 이의 돌연변이체 또는 유도체로 구성되는 군으로부터 선택되고, 상기 돌연변이체 또는 유도체가 상주성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장을 자극하고 일과성 병원성 미생물총의 미생물의 성장은 자극하지 않는 능력을 유지하는 미생물.
  10. 상주성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장을 자극할 수 있지만 일과성 병원성 미생물총의 미생물의 성장은 자극하지 않는, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 미생물의 불활성 형태.
  11. 제10항에 있어서, 열에 의해 불활성화되거나 또는 동결건조된 불활성 형태.
  12. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 미생물 또는 제10항 또는 제11항에 따른 불활성 형태를 포함하는 조성물.
  13. 제12항에 있어서, 화장용으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 임의로 포함하는 화장용 조성물인 조성물.
  14. 제12항에 있어서, 제약상 허용가능한 담체 또는 부형제를 임의로 포함하는 제약 조성물인 조성물.
  15. 병원성 세균에 대해 피부를 보호하기 위한 화장용 또는 제약 조성물의 제조를 위한 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 미생물 또는 제10항 또는 제11항에 따른 불활성 형태의 용도.
  16. 피부염의 예방 또는 치료를 위한 제약 조성물의 제조를 위한 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 미생물 또는 제10항 또는 제11항에 따른 불활성 형태의 용도.
  17. 제16항에 있어서, 피부염이 아토피 피부염, 건선, 덩굴옻나무 피부염, 포진상 습진, 독창 또는 옴인 용도.
  18. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 미생물 또는 제10항 또는 제11항에 따른 불활성 형태를 화장용으로 또는 제약상 허용가능한 담체 또는 부형제와 배합하는 단계를 포함하는 조성물의 제조 방법.
  19. 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장을 억제할 수 있고, 건강한 정상적인 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장은 억제하지 않는 미생물.
  20. 제19항에 있어서, 황색 포도상구균의 성장을 억제할 수 있는 미생물.
  21. 제20항에 있어서, 시험관 내에서 황색 포도상구균의 성장을 억제할 수 있는 미생물.
  22. 제21항에 있어서, 시험관내 액체 분석법에서 황색 포도상구균의 성장을 억제할 수 있는 미생물.
  23. 제20항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 원위치 피부 분석법에서 황색 포도상구균의 성장을 억제할 수 있는 미생물.
  24. 제19항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 표피 포도상구균의 성장을 억 제하지 않는 미생물.
  25. 제19항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 락토바실루스 속에 속하는 미생물인 미생물.
  26. 제25항에 있어서, 상기 락토바실루스가 락토바실루스 부크네리(Lactobacillus buchneri), 또는 락토바실루스 델브뤼키이(Lactobacillus delbrueckii)인 미생물.
  27. 제26항에 있어서, 락토바실루스 델브뤼키이가 락토바실루스 델브뤼키이 아종 델브뤼키이(Lactobacillus delbrueckii spp . delbrueckii) 아종의 것인 미생물.
  28. 제26항 또는 제27항에 있어서, DSMZ 접속 번호 DSM 18007 및 접속 번호 DSM 18006의 락토바실루스 부크네리 및 락토바실루스 델브뤼키이 아종 델브뤼키이, 또는 이의 돌연변이체 또는 유도체로 구성되는 군으로부터 선택되고, 상기 돌연변이체 또는 유도체가 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장을 억제하고 건강한 정상적인 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장은 억제하지 않는 능력을 유지하는 미생물.
  29. 일과성 병원성 피부 미생물총 중 1가지 이상의 미생물의 성장을 억제할 수 있고, 건강한 정상적인 상주성 피부 미생물총의 미생물의 성장은 억제하지 않는, 제19항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 미생물의 불활성 형태.
  30. 제29항에 있어서, 열에 의해 불활성화되거나 또는 동결건조된 불활성 형태.
  31. 제19항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 미생물 또는 제29항 또는 제30항에 따른 불활성 형태를 포함하는 조성물.
  32. 제31항에 있어서, 화장용으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 임의로 포함하는 화장용 조성물인 조성물.
  33. 제31항에 있어서, 제약상 허용가능한 담체 또는 부형제를 임의로 포함하는 제약 조성물인 조성물.
  34. 병원성 세균에 대해 피부를 보호하기 위한 화장용 또는 제약 조성물의 제조를 위한 제19항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 미생물 또는 제29항 또는 제30항에 따른 불활성 형태의 용도.
  35. 피부염의 예방 또는 치료를 위한 제약 조성물의 제조를 위한 제19항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 미생물 또는 제29항 또는 제30항에 따른 불활성 형태의 용도.
  36. 제35항에 있어서, 피부염이 아토피 피부염, 건선, 덩굴옻나무 피부염, 포진상 습진, 독창 또는 옴인 용도.
  37. 제19항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 미생물 또는 제29항 또는 제30항에 따른 불활성 형태를 화장용으로 또는 제약상 허용가능한 담체 또는 부형제와 배합하는 단계를 포함하는 조성물의 제조 방법.
KR1020077029941A 2005-06-22 2006-06-22 병원성 미생물에 대해 피부를 보호하기 위한 방법 및 수단 KR101398347B1 (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP05013494.9 2005-06-22
EP05013494A EP1736537A1 (en) 2005-06-22 2005-06-22 Methods and means for protecting the skin against pathogenic microorganisms
US74008405P 2005-11-28 2005-11-28
US60/740,084 2005-11-28
PCT/EP2006/006030 WO2006136420A2 (en) 2005-06-22 2006-06-22 Methods and means for protecting the skin against pathogenic microorganisms

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20080031201A true KR20080031201A (ko) 2008-04-08
KR101398347B1 KR101398347B1 (ko) 2014-05-22

Family

ID=35429657

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020077029941A KR101398347B1 (ko) 2005-06-22 2006-06-22 병원성 미생물에 대해 피부를 보호하기 위한 방법 및 수단

Country Status (8)

Country Link
US (4) US20090317370A1 (ko)
EP (3) EP1736537A1 (ko)
JP (3) JP5495559B2 (ko)
KR (1) KR101398347B1 (ko)
CN (1) CN101203600B (ko)
AU (2) AU2006261100A1 (ko)
CA (1) CA2607911C (ko)
WO (1) WO2006136420A2 (ko)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20170003478A (ko) * 2015-06-30 2017-01-09 (주)아모레퍼시픽 피부 개선용 균주 및 이를 포함하는 피부 개선용 키트
KR20180023012A (ko) * 2015-07-20 2018-03-06 쿼럼 이노베이션즈 엘엘씨 면역 반응 및 피부 및/또는 점막 장벽 기능을 개선하기 위한 물질 및 방법
KR102052086B1 (ko) * 2019-07-25 2019-12-04 복세원 젖소 유두 보호제 및 그 제조방법

Families Citing this family (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2670915A1 (en) * 2006-12-01 2008-06-05 Organobalance Gmbh Compositions, kits and uses for protecting the skin against pathogenic microorganisms
WO2009018447A2 (en) * 2007-07-31 2009-02-05 New York University Diagnostic and treatment methods for characterizing bacterial microbiota in skin conditions
FR2920305B1 (fr) * 2007-09-04 2010-07-30 Oreal Utilisation d'un lysat de bifidobacterium species pour le traitement de peaux sensibles.
FR2937536B1 (fr) * 2008-10-28 2016-07-01 Oreal Utilisation cosmetique d'un lysat de bifidobacterium species pour le traitement du cuir chevelu gras
FR2937547B1 (fr) * 2008-10-28 2012-11-09 Oreal Utilisation d'un lysat de microorganisme pour le traitement des peaux grasses
CN103037878B (zh) 2010-06-08 2015-06-24 可尔必思株式会社 脂质代谢改善剂
JPWO2012026346A1 (ja) * 2010-08-27 2013-10-28 株式会社ヤクルト本社 細胞保護剤
JP6149279B2 (ja) * 2011-02-09 2017-06-21 オーガノバランス ゲーエムベーハー 皮膚状態の治療に使用するためのペプチド
CA2833937C (en) * 2011-05-16 2022-04-05 Organobalance Medical Ag Lactobacillus strains, compositions containing them and use of the strains to prevent or treat conditions caused by streptococcus pyogenes
WO2013070893A1 (en) * 2011-11-08 2013-05-16 The Procter & Gamble Company Method of making cosmetic compositions containing a prebiotic
BR112015026773A2 (pt) * 2013-04-23 2017-07-25 Terragen Holdings Ltd cepas bacterianas que têm atividade antimicrobiana e composições de controle biológico que compreendem as mesmas
CN104673700A (zh) * 2013-11-29 2015-06-03 晨晖生物科技股份有限公司 乳酸菌株及引物组
EP3200766B1 (en) 2014-09-30 2019-07-03 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Synergistic prebiotic composition
MX2017002447A (es) 2014-09-30 2017-05-23 Kimberly Clark Co Papel tisu crepado prebiotico.
ITUB20153106A1 (it) * 2015-08-13 2017-02-13 Probiotical Spa Composizione di batteri lattici per uso nel trattamento delle infezioni causate da Propionibacterium acnes e in particolare per l'acne
KR20180056775A (ko) * 2015-10-07 2018-05-29 갈데르마 리써어치 앤드 디벨로프먼트 유산균 함유 조성물 및 아토피 피부염을 치료하기 위한 이의 용도
JP2019510036A (ja) 2016-03-31 2019-04-11 ゴジョ・インダストリーズ・インコーポレイテッド プロバイオティクス／プレバイオティクス有効成分を含む清浄剤組成物
EP3436156A1 (en) 2016-03-31 2019-02-06 Gojo Industries, Inc. Antimicrobial peptide stimulating cleansing composition
AU2017240656A1 (en) * 2016-03-31 2018-11-15 Gojo Industries, Inc. Topical composition for reducing pathogen binding
KR102340006B1 (ko) 2016-04-19 2021-12-20 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 세크러테리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비씨즈 아토피 피부염을 치료하기 위한 그램 음성 종의 용도
US10293005B2 (en) 2016-04-19 2019-05-21 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Use of gram negative species to treat atopic dermatitis
BE1024425B9 (nl) * 2016-06-21 2018-03-26 Yun NV Dermatologische preparaten voor het onderhouden en/of herstellen van een gezonde huidmicrobiota
DE102017103850A1 (de) 2016-08-24 2018-03-01 Georg Fritzmeier Gmbh & Co. Kg Hautpflegezusammensetzung
CA3036937C (en) 2016-09-15 2023-01-17 Kirin Company, Limited Composition which contains lactic acid bacterium as effective component and which is for preventing or ameliorating skin condition deterioration caused by abnormal proliferation of specific bacterium in skin
CN106399192A (zh) * 2016-10-25 2017-02-15 江苏微康生物科技有限公司 一种乳酸菌发酵溶胞产物、制备方法及其应用
BE1024189B1 (nl) 2016-10-28 2017-12-05 Yun NV Spuitbus met bacteriële species
JP2020500860A (ja) 2016-11-23 2020-01-16 ゴジョ・インダストリーズ・インコーポレイテッド プロバイオティック／プレバイオティックな有効成分を含む消毒薬組成物
TWI607758B (zh) * 2017-03-07 2017-12-11 景岳生物科技股份有限公司 改善乾癬症狀的副乾酪乳桿菌菌株ｇｍｎｌ－６５３及其組合物
JP7208894B2 (ja) * 2017-05-23 2023-01-19 森永乳業株式会社 乳酸菌を含有する化粧料、皮膚保護剤
WO2019049150A1 (en) * 2017-09-07 2019-03-14 Technion Research & Development Foundation Limited KITS AND TOPICAL COMPOSITIONS AND THEIR USE
MX2020009313A (es) * 2018-03-08 2020-11-24 Plexus Worldwide Llc Composiciones y metodos para renovacion de la piel.
JP2021523900A (ja) 2018-05-11 2021-09-09 フォルテ サブシディアリー，インク． 皮膚疾病の処置のための組成物
CN110680836B (zh) * 2018-06-19 2021-04-02 景岳生物科技(中国)有限公司 副干酪乳杆菌菌株gmnl-653用于制备改善狐臭组合物的用途
KR101925135B1 (ko) * 2018-08-23 2018-12-04 주식회사 지놈앤컴퍼니 신규의 큐티박테리움 아비덤 균주, 및 이러한 균주 또는 이의 배양물을 포함하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 조성물
AU2019203692A1 (en) * 2018-08-30 2020-03-19 Johnson & Johnson Consumer Inc. Topical composition containing glycerin and yeast extract
EP3666341B1 (en) 2018-12-14 2022-03-23 DWI - Leibniz-Institut für Interaktive Materialien e.V. Topical formulation in form of a patch, a bandage or a plaster comprising probiotic bacteria, and use thereof in a method for treating or preventing skin disorders
KR102596687B1 (ko) 2019-01-31 2023-11-01 킴벌리-클라크 월드와이드, 인크. 미생물의 선택적 대사 기능에 의한 환경의 동적 제어를 위한 방법 및 생성물
FR3101775A1 (fr) * 2019-10-15 2021-04-16 Basf Beauty Care Solutions France Sas Nouvelle utilisation cosmétique de la N-méthylglycine pour augmenter la diversité de la flore microbienne cutanée
KR102073013B1 (ko) * 2019-11-14 2020-03-02 주식회사 제이투케이바이오 피부진정 및 스트레스 완화용 화장료 조성물
AT17326U1 (de) 2021-03-29 2021-12-15 Sanubiom Gmbh Hautpflegezusammensetzung in Pulverform, aus dem ein Gel hergestellt wird
CN114058559B (zh) * 2022-01-17 2022-04-08 山东锦鲤生物工程有限公司 表皮葡萄球菌及其应用

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2756181B1 (fr) * 1996-11-26 1999-03-05 Au Mont Beaute Composition cosmetique, pharmaceutique a base de culture inactivee de bacteries bifidobacterium, d'huile de menthe et d'un acide
RO113114B1 (ro) * 1997-08-05 1998-04-30 Rodica Teodorescu Produs eubiotic natural, pentru intretinerea si tratamentul tegumentelor
WO2000071139A2 (en) 1999-05-25 2000-11-30 Gregor Reid Lactobacillus compositions and methods for preventing wound infections and biofilm formation on implantable surgical devices
ATE490776T1 (de) * 2000-10-06 2010-12-15 Nestec Sa Verwendung von probiotischen milchsäure- produzierende bakterien zur zum schutz der haut gegen uv-induzierter allergischen reaktionen und entzündungskrankheiten oder immunsuppression
ATE409220T1 (de) * 2002-03-21 2008-10-15 Bifodan As Lactobacillus-stämme
KR100993562B1 (ko) * 2002-03-21 2010-11-11 비포단 에이/에스 락토바실러스 균주

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20170003478A (ko) * 2015-06-30 2017-01-09 (주)아모레퍼시픽 피부 개선용 균주 및 이를 포함하는 피부 개선용 키트
KR20180023012A (ko) * 2015-07-20 2018-03-06 쿼럼 이노베이션즈 엘엘씨 면역 반응 및 피부 및/또는 점막 장벽 기능을 개선하기 위한 물질 및 방법
KR102052086B1 (ko) * 2019-07-25 2019-12-04 복세원 젖소 유두 보호제 및 그 제조방법

Also Published As

Publication number Publication date
WO2006136420A3 (en) 2007-04-19
EP1893744A2 (en) 2008-03-05
CN101203600A (zh) 2008-06-18
CN101203600B (zh) 2015-05-13
EP1736537A1 (en) 2006-12-27
US20140072542A1 (en) 2014-03-13
JP2008539747A (ja) 2008-11-20
AU2006261100A1 (en) 2006-12-28
AU2012203217B2 (en) 2015-04-23
CA2607911A1 (en) 2006-12-28
JP2014057600A (ja) 2014-04-03
EP1995307B1 (en) 2014-09-24
US20120328586A1 (en) 2012-12-27
CA2607911C (en) 2016-08-02
JP2012070745A (ja) 2012-04-12
JP5495559B2 (ja) 2014-05-21
EP1893744B1 (en) 2013-10-16
KR101398347B1 (ko) 2014-05-22
US20090317370A1 (en) 2009-12-24
WO2006136420A2 (en) 2006-12-28
AU2012203217A1 (en) 2012-06-21
JP5826241B2 (ja) 2015-12-02
EP1995307A1 (en) 2008-11-26
US20170202889A1 (en) 2017-07-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101398347B1 (ko) 병원성 미생물에 대해 피부를 보호하기 위한 방법 및 수단
US20220079871A1 (en) Microorganisms inhibiting the formation of foot malodor
KR20090085084A (ko) 병원성 미생물에 대해 피부를 보호하기 위한 조성물, 키트 및 용도
US20200030390A1 (en) Microorganisms inhibiting the formation of axillary malodor
US10953051B2 (en) Methods and means for protecting the skin against pathogenic microorganisms

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E90F Notification of reason for final refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20170420

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20190426

Year of fee payment: 6