RO113114B1

RO113114B1 - Produs eubiotic natural, pentru intretinerea si tratamentul tegumentelor

Info

Publication number: RO113114B1
Application number: RO97-01480A
Authority: RO
Inventors: Rodica Teodorescu
Original assignee: Rodica Teodorescu
Priority date: 1997-08-05
Filing date: 1997-08-05
Publication date: 1998-04-30
Also published as: WO1999007332A3; AU8753998A; WO1999007332A2

Description

Invenția se referă la un produs eubiotic natural, pentru întreținerea și tratamentul tegumentelor.

Se știe că pielea nu este un simplu înveliș al corpului, ea este un organ viu, cu importanță vitală pentru organism.

Cu vârsta, secreția de sebum scade și pielea începe să se usuce, nemaiputând să-și îndeplinească funcțiile. Sebumul, împreună cu alte secreții ale pielii, formează așa numita “manta acidă” a pielii, a cărei aciditate variază de la individ la individ.

Aciditatea pielii este un factor de apărare a organismului împotriva influențelor mediului înconjurător, în special, a microorganismelor care nu se dezvoltă favorabil într-un mediu acid.

Dacă pielea este lipsită de această manta acidă protectoare, pot să apară frecvent absece, furuncule, micoze, etc.

pH-ul tegumentelor și, în special, al tenului, se modifică foarte ușor în urma nerespectării regulilor de igienă, variații bruște de temperatură, alimentație necorespunzătoare, constipație, stress. De asemenea, pH-ul tenului se modifică în urma abuzului de săpun, loțiuni de față alcaline, glicerină concentrată, loțiuni alcoolice concentrate.

Este cunoscută folosirea acidului lactic în cosmetică, în preparate destinate întreținerii pielii, în special, pentru modificarea pH-ului tegumentelor. Acidul lactic folosit este, de obicei, un produs de sinteză și acidificarea pielii, în limite fiziologice, este greu de realizat, deoarece este mai puțin compatibil biologic cu funcțiile tegumentelor.

Pentru obținerea acidului lactic natural, este cunoscută, în industria alimentară, folosirea tulpinilor de Lactobacillus acidophylus. Pentru folosirea acidului lactic natural, acesta trebuie izolat din mediu de cultură, într-o stare cât mai pură, ceea ce implică tehnologii complexe.

Tulpinile comune Lb. acidophylus sunt și ele nepotrivite pentru utilizare directă în cosmetică, deoarece sunt prea puțin rezistente în compozițiile cosmetice, iar din cauza aspectului lor filant și consistent conduc la schimbarea produsului cosmetic, ceea ce este important pentru utilizatorul produsului.

Se cunoaște, de asemenea, utilizarea unui medicament care este constituit dintr-un amestec de două tulpini de bacterii Lactobacillus acidophylus si Lactobacillus casei înregistrate în colecția IISB București sub nr. 3 și 7.

Produsul eubiotic, conform invenției, este constituit dintr-un amestec de trei tulpini de Lactobacillus acidophylus LR, LV și LD, înregistrate în colecția Centrului Biosan București sub nr. 13,17 și 11, asocierea fiind în părți egale din fiecare tulpină înaintea liofilizării amestecului.

Tulpina Lactobacillus acidophylus LD-11 fermentează rafinoza. Tulpina Lactobacillus acidophyllus LR-13 fermentează trehaloza. Tulpina Lactobacillus acidophylus LV-17 fermentează dextrina. Cele trei tulpini de bacili lactici asociate sunt folosite ca ingrediente active în diferite forme cosmetice pentru întreținerea și tratamentul tegumentelor, produsul fiind înglobat în cantitate de 1 -10 g sub forma liofilizată la 100 g produs cosmetic.

Avantajele eubioticului, conform invenției, sunt următoarele:

- se obține ușor din ingrediente naturale, ușor accesibile, distruge microflora patogenă și păstrează pH-ul la valori fiziologice, neconducând la alergii și iritații;

- tonifică și redă suplețea tegumentelor prin “ergoni” care rezultă în urma activității, dezvoltă o imunitate nespecifică și inhibă dezvoltarea diferiților agenți microbieni, prin pH-ul pe care îl dezvoltă bariera de netrecut pentru alte microorganisme;

- este componenta activă a produselor cosmetice și este singurul care se apropie de chimismul fiziologic al tegumentelor.

Se dă, în continuare, un exemplu de realizare, a invenției.

Pentru obținerea produsului eubiotic, în conformitate cu prezenta invenție, cele trei tulpini de bacterii se asociază, înaintea liofilizării, în părți egale.

RO 113114 Bl

Caracteristicile tulpinilor comune de Lb acidophylus sunt următoarele:

a) Caractere morfologice:

In urma colorației Gram, Lb acidophylus apare sub forma unor bastoane cu capetele rotunjite, gram pozitive, organizate în formațiuni filamentoase de dimensiuni variabile, care dau aspect filamentar și mucilaginos mediului de creștere.

b) Caractere culturale

Pe medii solide (mediu MRS solid) se pot dezvolta la suprafață, unde formează colonii vâscoase, lungi, încurcate, cu proiecții piriforme, pufoase, sau în profunzime, unde coloniile sunt mici, neregulate, cu prelungiri fine.

Pe MRS lichid formează, după 48 h un sediment fin, floculat.

c) Caractere biochimice

- rezistența la substanțe inhibitoare 3,5%-NaCI;

- taurocolat de sodiu 3%;

- fenol 0,4%;

- puterea acidifiantă 140°T;

- aciditate limită 1,2% acid lactic;

- nu fluidifică gelatina;

- nu hidrolizează amidonul;

- nu reduc nitrații;

- reduc tinctura de turnesol și albastrul de metilen;

- nu produc îndoi, acid sulfhidric, amoniac din arginină;

- sunt ureazo și catalazo negativi;

- cultura este nehemolitică pe mediile cu sânge;

- coagulează laptele și sunt homofermentative;

- produc acetilmetilcarbinol;

- nu utilizează citratul de sodiu;

- fermentează glucoza, lactoza, zaharoza, fructoza, galactoza, manoza, maltoza;

- nu fermentează dextrina, trehaloza și rafinoza;

- produce acid lactic optic inactiv și acizi volatili în urma fermentării zaharurilor;

- nu se observă dezvoltare vizibilă pe medii lipsite de hidrați de carbon.

d) Relații de temperatură

-Temperatura optimă de dezvoltare este de 37°C. Nu se dezvoltă sub 20°C. Temperatura maximă la care se mai dezvoltă normal este de 43... 45°C. Poate rezista 30 min. la 6D°C.

încercările de a folosi aceste tulpini în produsele cosmetice nu au dus la rezultate optime și din acest motiv, prin cercetări s-a încercat și realizat selecția și izolarea unor tulpini de Lb.acidophylus care să fie compatibile preparării produselor cosmetice de întreținere a tegumentelor.

Problema pe care o rezolvă invenția constă în găsirea unei asocieri optime a unor tulpini de Lactobacillus acidophylus analergiceîn vederea realizării unui produs eubiotic natural, capabil să corecteze pH-ul tegumentelor, apropiindu-l de cel fiziologic de 5,5 și să fie rezistent în compozițiile cosmetice.

Produsul, conform invenției, este constituit dintr-un amestec de trei tulpini de Lb.acidophylus, în părți egale din fiecare, cele trei tulpini fiind înreigstrate în colecția Centrului Biosan cu denumirea de LR, LV și LD, la numerele 13, 17 și

11. ’

Modul de obținere a tulpinilor

Tulpinile pure de Lactobacilli au fost obținute prin dispersii și izolări repetate pe medii de agar, în sine cunoscute, care conțin substanțe de creștere și substanțe inhibitoare pentru alte tulpini de microorganisme.

De pe mediile de cultură se identifică și se izolează acele tulpini de Lb. acidophylus care corespund următoarelor caracteristici:

1. Tulpina LD nr.11.

a) Caractere morfologice - Sunt bacili lungi, colorați intermitent, imobili dar care formează lanțuri scurte. La colorația cu albastru de metilen apar ca bacili lungi, colorați intermitent, imobili, formând lanțuri scurte.

b) Caractere culturale - Pe lapte turnesolat coagulează laptele, iar pe mediu MRS lichid tulbură mediul. Pe mediu MRS solid coloniile sunt mici, albicioase și vâscoase, cu marginile neregulate.

RO 113114 Bl

c] Caractere biochimice

- temperatura maximă de dezvoltare este la 47°C;

- rezistă 30 min. la 60°C;

- rezistență la substanțe inhibitoare

a] NaCI - 6%; '

b] Taurocolat de sodiu - 3%;

c] Fenol - 0,6%.

- puterea acidifiantă

- aciditatea finală a culturii 170°T

- aciditatea limită în acid tactic 1,4%

- nu fluidifică gelatina;

- nu hidrolizează amidonul;

- nu reduce nitrații;

- reduce tinctura de turnesol și albastrul de metilen;

- nu produce indol, acid sulfhidric și ariginină;

- sunt ureazo și catalazo - negativi;

- cultura este nehemolitică pe mediile cu sânge;

- coagulează laptele și sunt homofermentative;

- produc acetilmetil carbinol;

- nu utilizează citratul de sodiu;

- fermentează glucoza, lactoza, zaharoza, fructoza, galactoza, manoza, Fermentarea rafinozei este o caracteristică a acestei tulpini.

2. Tulpina LR nr. 13

a) Caractere morfologice - Bacili subțiri lungi, care însă formează lanțuri scurte, intens colorate. Sunt imobili și au capetele rotunjite.

La colorația cu albastru de metilen apar ca bacili subțiri, lungi, cu capetele rotunjite, imobili. Formează lanțuri scurte intens colorate.

b) Caractere culturale

- pe lapte turnesolat coagulează și acidulează laptele;

- pe mediu MRS lichid tulbură mediul și formează sediment la 48 h;

- pe mediu MRS solid coloniile de suprafață apar delicate, lungi, proiecții pufoase și centrul mic și întunecat. Coloniile de adâncime apar mici, neregulate, albicioase cu fine prelungiri ramificate sau radiale.

c) Caractere biochimice

-temperatura maximă de dezvoltare este la 48°C;

- rezistență la 60°;

- puterea acidifiantă este de 158°T, iar aciditatea limită este de 1,3% în acid lactic;

- rezistența la următoarele substanțe inhibitoare;

a] NaCI - la peste 8ⁿ nu se mai dezvoltă;

b] Taurocolat de sodiu - la peste 4% nu se mai dezvoltă;

c] Fenol - peste 0,8% dezvoltarea este foarte slabă.

- nu fluidifică gelatina;

- nu hidrolizează amidonul;

- nu reduce nitrații;

- reduce tinctura de turnesol și albastrul de metilen;

- nu produce indol, acid sulfhidric, amoniac și arginină;

- sunt ureazo și catalazo - negativi;

- cultura este nehemolitică pe mediile cu sânge;

- coagulează laptele și sunt homofermentative;

- produc acetilmetil carbinol;

- nu utilizează citratul de sodiu;

- fermentează glucoza, lactoza, zaharoza, fructoza, galactoza, manoza, maltoza.

Fermentarea trehalozei este o caracteristică a acestei tulpini.

3. Tulpina LV nr. 17

a) Caractere morfologice - Bacili scurți, mai slab colorați, imobili, formează lanțuri scurte.

La colorarea cu albastru de metilen apar bacili scurți, slab colorați, lanțuri scurte, imobili - cu capetele rotunjite.

b) Caractere culturale - pe lapte turnesolat coagulează și acidifiază laptele în 18 ore de la însămânțare; pe mediu MRS lichid tulbură mediul cu formare de sediment; pe mediu MRS solid coloniile sunt albe, cu marginile netede, prezentând ramificații.

c) Caractere biochimice

- temperatura maximă de dezvoltare este la 48°C;

- rezistă 90 min la 60°C;

- puterea acidifiantă este de 173°T, iar aciditatea limită este de 1,4% în acid lactic;

RO 113114 Bl

- rezistența la inhibitori;

a) NaCI - la peste 8% nu se mai dezvoltă;

b) Taurocolat de sodiu - la peste 4% nu se mai dezvoltă;

c) Fenol - peste 0,8% nu se mai dezvoltă.

- nu fluidifică gelatina;

- nu hidrolizează amidonul;

- nu reduce nitrații;

- reduce tinctura de turnesol și albastrul de metilen;

- nu roduce îndoi, acid sulfhidric, amoniac și arginina;

- sunt ureazo și catalazo - negativi;

- cultura este nehemolitică pe mediile cu sânge;

- coagulează laptele și sunt homofermentative;

- produc acetilmetil carbinol;

- nu utilizează citratul de sodiu;

Fermentarea dextrinei este o caracteristică a acestei tulpini.

Tulpinile identificate și izolate, conform invenției, pot fi caracteirzate ca fiind diferite de tulpinile comune de Lb.acidophylus prin următoarele:

- formează lanțuri scurte, ceea ce este foarte convenabil pentru omogenizarea și rezistența produselor cosmetice în care eubioticul se înglobează;

- coagulează și acidifică mult mai rapid laptele, ceea ce conduce la o mai rapidă scădere a pH-ului din mediul în care tulpinile se înglobează, fie acesta și un produs cosmetic;

- tulbură evident mediile lichide de cultură și sedimentează abundent, ceea ce demonstrează o mare viabilitate a tulpinii și o producție performantă;

- față de tulpnile comune fermentează și alte zaharuri (trehaloza, rafinoza și dextrina) pe care tulpinile comune nu le fermentează, ceea ce dovedește un pachet enzimatic superior în procesul identificării;

- rezistența crescută la inhibitorii clasici demonstrează viabilitatea mai mare a tulpinilor obținute, conform invenției, față de tulpinile comune.

Tulpinile identificate și izolate vor fi întreținute pe medii sintetice, cum ar fi MRS, care au următoarea compoziție: triptona 1O g. extract de carne 10 g. extract de drojdie 5 g, glucoza 20 g. fosfat disodic 2 g. acetat de sodiu 5 g, citrat de sodiu 2 g, sulfat de magneziu 0,05 g, apă distilată 1000 ml.

Periodic, tulpinile sunt supuse la cele mai importante teste cunoscute de identificare, pentru a se vedea rezistența în timp a tulpinilor respective, viteza lor de îmbătrânire.

Pentru revitalizare, tulpinile se trec periodic pe medii solide, prin metode în sine cunoscute.

Pentru a pregăti tulpinile pentru faza de producție a lor, acestea se trec pe lapte degresat steril, în raportul de asociere de 1/3 din fiecare tulpină la 10 I lapte.

Laptele degresat steril este și mediul protector utilizat, conform invenției, pentru ultima fază a procedeului și anume, liofilizarea celor trei tulpini multiplicate. Se obține o cultură pură a celor trei tulpini.

Intre tulpinile de lactobacili nu s-au observat fenomene de antagonism, de eliminare a unei tulpini de către alta, numărul de germeni viabili din cultura pură fiind maxim.

Cultura de lactobacili, obținută, conform ivenției, se congelează la -45°C 50°C, după care începe liofilizarea propriuzisă. Liofilizarea se face în vid de 3 torr timp de 30 h, având ca mediu de protecție lapte degresat steril corespunzător STAS din punct de vedere fizico-chimic și microbiologic (lipsa metalelor grele etc.J.

Produsul liofilizat se condiționează în recipiente speciale, în condiții de asepsie (se lucrează sub hotă], iar închiderea acestora se face sub vid.

Produsul liofilizat, obținut, conform invenției, are următoarele caracteristici, care îl identifică:

- aspect: pulbere liofilizată lipsită de impurități mecanice, higroscopică;

- culoare: alb gălbuie;

- miros: specific;

- gust: acru caracteristic;

RO 113114 Bl

- solubilitate: insolubil în apă, dar se dispersează ușor făcând o dispersie omogenă;

-pH-ul suspensiei 1%în apă: 3.8...

5,5

- fiecare tulpină de bacili Lb. acidophylus se identifică prin caracteristicile morfologice, culturale și biochimice prezentate, conform invenției;

- conținut în CT % în greutate = max. 1.2;

- conținut în Ca²⁺ % în greutate = min. 1,2;

- conținut în azot % în greutate = min. 4,5;

- reziduuri prin calcinare = max. 12% în greutate;

- metale grele absente;

- puritate microbiologică - conform Farmacopeei române;

- număr de germeni viabili = min 5 x 1ϋ⁷ germeni/0,50 g.

- termen de valabilitate 2 ani;

- produsul liofilizat se poate folosi în fabricarea cremelor pentru toate tipurile de ten, a laptelui demachiant și a măștilor cosmetice.

In tratamentul tenului acneic, concomitent cu folosirea măștilor cosmetice, se administrează per os, dimineața pe stomacul gol, cu 30min înainte de masă (0,50 g sau 2 tablete a □.25 g.J.

Exemple de produse cosmetice ce conțin produsul eubiotic.

Cremă pentru ten uscat cu bacili lactici

g. produs eubiotic liofilizat, 10

g. lanolină, 2 g. cetaceum, 5 g vaselină, 0,1 g. colesterol, 21 g. oleum helianti, 0,5

g. ceară, 3 g apă boraxată, 50 gr. apă distilată.

Cremă pentru ten gras cu bacili tactici g produs eubiotic liofilizat, 20 g lanolină anhidră, 10 g cetaceum, 10 g stearină, 10 g uleiuri helianti, 30 g apă boraxată, 30 g. apă distilată.

Compozițiile cosmetice de mai sus nu limitează utilizarea produsului în conformitate cu prezenta invenție, în vederea obținerii și a altor tipuri de produse cosmetice cum ar fi lapte demachiant, cremă hidratantă, etc.

Mască cosmetică cu lactobacili

Conținutul a 1 - 2 flacoane, conținând produsul eubiotic, liofilizat, se dizolvă într-o cantitate mică de apă fiartă și răcită, în care se îmbibă o bucată de tifon curat și se așază pe față, după ce tenul a fost, în prealabil spălat cu apă călduță (37... 40°C).

Masca se ține pe față 3O'-1 h, iar persoana este în repaus total.

Pentru tenul acneic - se ia dimineața pe stomacul gol înainte de masă un flacon per os, iar seara se folosește masca.

Tratamentul durează 10... 15 zile, în funcție de cât este de afectat tenul.

Claims

Revendicări

1. Produs eubiotic natural pentru întreținerea și tratamentul tegumentelor ce conține Lactobacillus, caracterizat prin aceea că este constituit dintr-un amestec de trei tulpini de Lactobacillus acidophylus LR, LV și LD, înregistrate în colecția Centrului Biosan - București sub numerele 13,17 și respectiv 11, asocierea făcânduseîn părți egale din fiecare tulpină, înaintea liofilizării amestecului.
2. Produs eubiotic, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că tulpina de Lactobacillus acidophylus LD-11, utilizată este tulpina care fermentează rafinoza.
3. Produs eubiotic, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că tulpina de Lactobacillus acidophylus LR-13, utilizată este tulpina care fermentează trehaloza.
4. Produs eubiotic, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că tulpina de Lactobacillus acidophylus LV-17

RO 113114 Bl utilizată, este tulpina care fermentează dextrina.
5. Produs eubiotic, conform revendicărilor 1-4, caracterizat prin aceea că cele trei tulpini de bacili lactici asociate sunt folosite ca ingrediente active în diferite forme cosmetice pentru întreținerea și tratamentul tegumentelor, produsul fiind înglobat în cantitate de 1... 1 □ g sub forma liofilizată la 1OO g produs cosmetic.