KR20080017093A

KR20080017093A - 종양치료제

Info

Publication number: KR20080017093A
Application number: KR1020087000638A
Authority: KR
Inventors: 에이스케 메카다; 신고 미야모토
Original assignee: 사이단호진한다이비세이부쯔뵤우겐큐우카이
Priority date: 2005-06-21
Filing date: 2006-06-20
Publication date: 2008-02-25
Also published as: US20090105135A1; JP5052338B2; WO2006137398A1; EP1894575A1; JPWO2006137398A1; HK1110224A1; US7700546B2; CA2610281C; AU2006260240B2; CN101208106B; CA2610281A1; AU2006260240A1; EP1894575B1; EP1894575A4; CN101208106A; KR101052090B1

Abstract

본 발명은 유효성분으로 HB-EGF에 결합함으로써 HB-EGF와 EGF 수용체의 결합을 억제하는 물질, 특히 CRM197을 포함하는 종양치료제를 제공하고, 상기 종양은 방광암, 결장암 또는 위암 및 췌장암의 복막전이성 암으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.

종양치료제, CRM197, 복막전이성 암

Description

종양치료제{THERAPEUTIC AGENT FOR CANCER}

본 발명은 방광암, 결장암 치료용 및 위암 및 췌장암의 복막전이 치료용 종양치료제에 관련된다.

디프테리아 독소 또는 CRM197과 같은 이의 돌연변이체는 수용성 및 불용성(막-고정된) HB-EGF에서 EGF-유사 도메인에 결합함으로써 HB-EGF와 EGF 수용체의 결합을 억제하는 활성을 가진다. 디프테리아 독소에서 수용체 결합 도메인은 상기 결합에 포함되어 있다.

CRM197의 항-종양 효과에 대한 다양한 연구가 수행되어 있다. 예를 들면, CRM197이 유방암, 난소암, 전립선암 및 갑상선 암에 효과적인 것이 특허 문서 1에서 기술된다. 비특허 문헌 1에서는 CRM197을 전이성 암환자에게 투약하였을 때, 유방암 및 신경아세포종에서 종결 반응이 관찰되었으나, 비소세포폐암, 결장암 및 방광암의 경우에서는 종양이 진행하였음이 발표되었다.

예후가 나쁜 위암 및 췌장암의 복막전이에 유효한 효과적인 항종양제는 없다. 디프테리아 독소의 효력 또는 CRM197과 같은 이의 돌연변이체가 상기 암에 효 과가 있는지는 알려진 바 없다.

특허 문서 1: JP 2004-155776-A

비특허 문헌 1: S. Buzzi, et al. Cancer Immunol. Immunother. (2004) 53: 1041-1048

해결할 문제

본 발명의 목적은 방광암, 결장암의 치료 및 위암 및 췌장암의 복막전이의 치료에 효과적인 항종양 치료제를 제공하는 것이다.

문제 해결 수단

CRM197의 항-종양 효과에 대한 광범위한 연구 결과에 따라, 본 발명자들은 CRM197이 방광암, 결장암의 치료 및 위암 및 췌장암의 복막전이의 치료에 효과적인 것을 발견하였다.

본 발명은 하기 종양치료제에 관련한다.

[1] HB-EGF에 결합함으로써 HB-EGF와 EGF 수용체의 결합을 억제하는 물질을 유효성분으로 포함하는 종양치료제로, 상기 유효성분이 HB-EGF와 EGF 수용체의 결합을 억제하는 활성을 갖고 실질적으로 디프테리아 독소의 독성을 갖지 않는 폴리펩티드인 디프테리아 독소의 돌연변이체이고, 상기 종양은 결장암, 방광암 및 복막전이성 암으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 종양치료제.

[2] [1]에 있어서, 방광암 치료제인 것을 특징으로 하는 종양치료제.

[3] [1]에 있어서, 결장암 치료제인 것을 특징으로 하는 종양치료제.

[4] [1]에 있어서, 복막전이성 암 치료제인 것을 특징으로 하는 종양치료제.

[5] [4]에 있어서, 복막전이성 암은 위암 또는 췌장암에서 전이하였고 복막에 전이한 것을 특징으로 하는 종양치료제.

[6] [1] 내지 [5]에 있어서, 유효성분은 CRM197인 것을 특징으로 하는 종양치료제.

발명의 해결 수단

본 발명은 HB-EGF에 결합함으로써 HB-EGF와 EGF 수용체의 결합을 억제하는 물질, 특히 HB-EGF와 EGF 수용체에 결합을 억제하는 활성을 갖고 실질적으로 디프테리아 독소의 독성을 갖지 않는 폴리펩티드를 유효성분으로 포함하는 결장암, 방광암 및 위암 및 췌장암의 복막전이성 암으로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 종양을 치료하기 위한 치료제에 관련된다.

디프테리아 독소의 수용체 결합 도메인을 포함하는 폴리펩티드는 상기 물질의 예로써 바람직하다. 특히 바람직한 상기 물질에는 CRM197 또는 DT52E148K이 있다. CRM197의 아미노산 숫자에 대해, 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열의 신호 서열(1 내지 25)을 제거함으로써 26번째 위치의 아미노산(Gly)이 제 1번으로 번호가 매겨졌다.

디프테리아 독소의 수용체 결합 도메인은 HB-EGF에 결합함으로써 HB-EGF와 EGF 수용체의 결합을 억제할 수 있다. 촉매 활성의 일부 또는 모두 손상시키기 위해 디프테리아 독소의 촉매 활성 도메인에 한 개 또는 그 이상의(예를 들면, 몇 개 내지 몇십 개의) 아미노산 삭제, 치환, 삽입 또는 추가를 갖는 폴리펩티드는 이의 낮은 독성 때문에 상기 폴리펩티드의 예로써 바람직하다. 25 아미노산 잔기의 신호 서열은 포함되거나 포함되지 않을 것이다.

본 발명의 하나의 바람직한 구체화에서, 상기 물질은 HB-EGF와 EGF 수용체의 결합을 억제하는 활성을 갖는 하기 폴리펩티드 (a), (b) 또는 (c)을 포함한다:

(a) 디프테리아 독소의 일부로 구성되고, 적어도 디프테리아 독소의 수용체 결합 도메인을 포함하는 폴리펩티드;

(b) 폴리펩티드 (a)의 수용체 결합 도메인에 한 개 또는 그 이상의(예를 들면, 몇 개 내지 몇 십 개의) 아미노산 삭제, 치환 또는 추가를 갖는 아미노산 서열로 구성되는 폴리펩티드; 또는

(c) 단백질 (a) 또는 (b)를 포함하는 합성 폴리펩티드.

수용체 결합 도메인은 일반적으로 378번째 아미노산부터 C 말단까지의 부위를 지시하지만, C 말단 쪽에서 약 53 아미노산 잔기의 부위가 수용체 결합 능력을 갖는 것으로 보고되어 있다(J. Biol. Chem., 265:7331-7337, 1990).

CRM197 및 DT52E148K과 같은 디프테리아 독소 돌연변이체는 낮은 독성을 갖기 때문에 본 발명의 종양치료제의 유효성분으로써 바람직하다.

부작용을 제거하고 안정성을 강화시킨다는 관점에서, 본 발명의 물질에서의 독성 수준이 CRM197의 그것과 동등하거나 낮은 것이 바람직하다. 그러나, 본 발명에서 상기 독성이 제암제(carcinostatic agnet)의 효력에 도움을 주는 것을 시사하였고, 그러므로 제암 효과를 강화시키는 관점에서, CRM197의 그것에 동등한 매우 낮은 독성을 갖는 것이 바람직하다. 그 결과, 제조방법에 따라 디프테리아 독소의 독성 수준을 적당하게 선택하는 것이 가능하다.

디프테리아 독소의 독성 수준은 ADP 라이보실레이션에 필수적인 효소 활성 도메인의 돌연변이 또는 효소 활성 도메인의 일부 또는 모든 제거에 의해 조절할수 있다. 상기에 추가로, 효소 활성 도메인과 수용체 결합 도메인 사이에 위치하는 막통과 도메인에 돌연변이가 있는 것들은 활성 도메인이 세포질에 흡수될 수 없기 때문에 비독성 또는 저독성이 된다. 그러므로 상기 부위에 돌연변이를 갖는 디프테리아 독소를 제암제로 사용하는 것도 가능할 것이다.

디프테리아 독소의 아미노산 서열에서 수용체 결합 도메인에 상응하는 378 내지 535번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드는 본 발명의 유효성분에서 HB-EGF와 EGF 수용체의 결합을 억제하는 활성을 갖는다.

본 발명의 유효성분으로 바람직한 물질은 (i) 디프테리아 독소의 수용체 결합 도메인이 유지되고, 효소 활성 도메인이 돌연변이(일부 또는 전체의 치환, 삭제, 삽입 또는 추가)된 디프테리아 독소를 포함한다. 상기 돌연변이체의 특정의 예로는 CRM197, DT52E148K 및 GST-DT를 포함한다. 상기 돌연변이체는 실질적으로 디프테리아 독소의 독성을 갖지 않고, HB-EGF와 EGF 수용체의 결합을 억제한다. CRM197은 25 아미노산 잔기의 신호 서열을 제외하고 세었을 때 52번째 위치의 Gly가 Glu로 돌연변이 된 돌연변이체다; DT52E148K는 신호 서열을 제외하고 세었을 때 상기 돌연변이에 추가로 148번째 위치의 Glu가 Lys로 돌연변이 된 돌연변이체다; 및 GST-DT는 신호 서열을 제외하고 세었을 때 378번째 위치부터 535번째 위치까지의 아미노산 잔기를 포함하는 GST(글루타치온-S-전이효소, glutathione S-transferase)에 결합되는 단백질이다. CRM197의 아미노산 서열(첫 번째 25 아미노산 잔기는 신호서열을 구성한다)은 서열번호 1로 기재되고, 이를 암호화하는 염기 서열은 서열번호 2로 기재된다.

CRM197이 디프테리아 독소의 독성을 갖지 않는 것, 즉 ADP 라이보실레이션 활성을 갖지 않는 것은 이미 보고되어있다(T. Uchida and A. M. Pappenheimer Jr. (1972) Science 175, 901-903). 148E에 돌연변이를 갖는 148K 돌연변이체가 극히 약한 활성을 갖는 것도 알려져 있다(J. T. Barbieri and R.J. Collier (1987) Infect. Immun. 55, 1647-1651). 52E 돌연변이체인 CRM197에 148K 돌연변이를 추가로 포함하는 이중 돌연변이체인 DT52E148K는 더 안전한 돌연변이체로 바람직하다.

수용체 결합 도메인을 포함하는 단편은 CRM197을 암호화하는 유전자(Pβ197)가 도입된 플라스미드를 주형으로 하여 PCR에 의해 수용체 결합 도메인 부분의 DNA 서열을 합성하고, GST 융합 단백질 또는 히스티딘 태그 합성용 발현 벡터(pGEX-3X, pQE-30)의 다중 클로닝 자리(multicloning site)에 상기를 삽입하고, Escherichia coli에 결과 플라스미드를 도입하고, Escherichia coli에서 플라스미드에 의해 암호화된 유전자를 합성함으로써 제조할 수 있다.

효소 활성 도메인에 돌연변이를 갖는 돌연변이체는 하기에 따라 수득할 수 있다. CRM197 부위는 플라스미드에 도입된 CRM197을 암호화하는 유전자(Pβ197)를 주형으로 하여 돌연변이 될 부분을 프라이머로 이용하여 PCR에 의해 합성할 수 있다. 상기 프라이머는 점 돌연변이 도입에 의해 돌연변이 되도록 합성되고 사용된다. 돌연변이체는 대장균용 유전자 발현벡터(pET-22b)에 합성된 DNA를 도입하고, 대장균에서 돌연변이체를 발현하기 위하여 대장균을 상기 벡터로 형질전환함으로써 수득할 수 있다.

본 발명의 치료제는 방광암 및 결장암의 원발성 병소 및 위암 및 췌장암의 전이성 병소(복막전이)의 치료에 효과적이다.

본 발명의 치료제는 HB-EGF의 발현이 EGF 패밀리의 성장인자 중에서 특히 강화된 종양의 치료에 효과적이다.

본 발명의 치료제는 상기 유효성분으로부터 직접적으로 제형할 수 있고, 또는 제약을 위해 약제학적으로 허용가능한 담체와 함께 성분을 결합함으로써 제형할 수 있다.

상기 치료제는 경구 또는 비경구(예를 들면, 정맥내, 근육내, 복강내, 피하 또는 피내 주사 또는 직장내 투약, 점막내 투약, 호흡기를 통한 투약)로 투약할 수 있다. 위암 및 췌장암의 복막전이와 같은 복막 전이 악성 종양에 사용하였을 때, 종양 세포에 직접적으로 전달되도록 하는 관점에서, 복강내 주사에 의해 투약하는 것이 바람직하다.

경구 투약할 약제학적 조성물의 제형은 예를 들면, 정제, 과립제, 캡슐, 분말, 액형, 현탁액 및 시럽 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않고, 비경구 투약할 약제학적 조성물의 제형은 주사제, 주입제, 좌제 및 경피 흡수제 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

치료제 생산을 위해 이용하는 조제약의 첨가물의 유형은 특별히 이에 한정되는 것은 아니나, 당업자에 의해 적절히 선택할 수 있다. 예를 들면, 부형제(excipient), 붕해제(disintegrant) 또는 붕해 보조제, 결합제, 윤활제, 코팅제, 염, 분해제 또는 분해 보조제, 분산제, 현탁용제, 유화제, 완충용액, 항산화제, 방부제, 장성제, pH 조절제, 분해제 및 안정제를 사용할 수 있고, 상기 목적을 위해 사용된 개개의 특이 성분은 당업자에게 잘 알려져 있다.

경구 투여용 조제약의 제조를 위해 이용하는 조제약의 첨가물로써, 포도당, 유당, D-만니톨, 전분 또는 크리스탈린 셀룰로오스와 같은 부형제; 카복시메틸셀룰로오스, 전분 또는 칼슘 카복시메틸셀룰로오스와 같은 붕해제 또는 붕해 보조제; 하이드록시프로필셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오수, 폴리비닐 피롤리돈 또는 젤라틴과 같은 결합제; 스테아린산 마그네슘(Magnesium stearate) 및 탈크(Talc)와 같은 윤활제; 하이드록시프로필메틸셀룰로오스, 자당, 폴리에틸린 글리콜 또는 티타늄 옥사이드와 같은 코팅제; 및 바셀린(petrolatum), 리퀴드 파라핀, 폴리에틸렌 글리콜, 젤라틴, 카올린, 글리세린, 정제수 및 경화지방과 같은 염을 사용할 수 있다.

주사 또는 주입용 조제약의 제조를 위해 이용할 수 있는 조제약의 첨가물로써, 주사용 증류수, 수용성 주사제 또는 일반적으로 쓰이는 용해된 주사제를 구성할 수 있는 살린 및 프로필렌 글리콜과 같은 붕해제 또는 붕해 보조제; 포도당, 염화나트륨, D-만니톨 및 글리세린과 같은 장성제; 및 무기산, 유기산, 무기염 또는 유기염과 같은 pH 조절제를 사용할 수 있다.

본 발명의 치료제에 포함된 유효성분의 양이 조제 형태 또는 치료제의 투약 경로에 따라 달라질 수 있고 엄격하게 한정할 수 없더라도, 일반적으로 최종 조제약의 약 0.0001% 내지 70%의 범위로부터 적당히 선택함으로써 결정할 수 있다.

본 발명의 치료제를 인간을 포함하는 포유 동물에게 투약할 수 있고, 특히 인간에게 투약할 수 있다.

본 발명의 치료제의 투여량은 환자의 나이, 성별, 체중 및 증상 등의 조건 및 투여 경로에 따라 적당히 증가 또는 감소할 것이고, 바람직하게는 성인의 1일 유효성분의 양으로써 체중 1 ㎏당 약 1 ㎍ 내지 50 ㎎의 범위인 것이 바람직하다. 투여할 상기 양의 조제약은 하루에 한번 투약 되거나 또는 여러 번에 나누어 투약할 수 있다. 조제약을 6 내지 8주 동안 일주일에 한번 투약할 것이고, 또는 2 내지 3주 동안 매일 투약할 것이고, 또는 10 내지 14일 동안 매일 투약할 것이다.

본 처리의 종양치료제와 함께 사용할 수 있는 제암제로써는 택솔, 택소티어(Taxotere), 5-FU, 시스플라틴, 칼보플라틴(carboplatin), 아드리아마이신(adriamycin) 및 캠토테신(camptothecin) 및 이의 유사체들을 예로 들 수 있다.

도 1은 복막 전이 모델을 나타내는 도이다. 1 × 10⁷의 인간 위암 세포주, MKN28, MKN45 및 MKN74 세포를 누드 마우스에 복강 주사하였고, CRM197을 5회(50 ㎎/㎏/1주) 복강 주사하였다. 접종 후 6주째에 전체 복막 전이 병소가 제거되었고, 그의 총 질량이 측정되었다.

도 2는 CRM197의 효과를 나타낸 도이다. 인간 방광암 세포주, KK47세포(5 × 10⁶ 세포)를 누드 마우스의 등에 피하 주사하였다. 한 그룹의 누드 마우스에, 50 ㎎/㎏/1주의 양의 CRM197 세포를 접종 후 7일에 복강 주사하였다(화살표). CRM197이 투약되지 않은 누드 마우스를 대조군으로 이용하였다.

도 3. 인간 결장암 세포주, HT29 세포 또는 HCT116 세포(5 × 10⁶ 세포)를 누드 마우스의 등에 피하 주사하였다. 한 그룹의 누드 마우스에, 50 ㎎/㎏/1주의 양의 CRM197 세포를 접종 후 7일에 복강 주사하였다(화살표). CRM197이 투약되지 않은 누드 마우스를 대조군으로 이용하였다.

도 4는 복막 전이 모델을 나타내는 도이다. 1 × 10⁷의 인간 췌장암 세포주, PANC1을누드 마우스에 복강 주사하였고, CRM197을 5회(50 ㎎/㎏/1주) 복강 주사하였다. 접종 후 6주째에 전체 복막 전이 병소가 제거되었고, 그의 총 질량이 측정되었다.

발명의 효과

본 발명에 따라, 방광암, 결장암의 치료 및 위암 및 췌장암의 복막전이의 치료성 암의 효과적인 치료가 가능하다.

본 발명은 실시예에서 상세하게 설명할 것이나, 본 발명의 하기 실시예에 제한되는 것은 아니다.

( 실시예 1)

복막 전이 모델. 1 × 10⁷의 인간 위암 세포주, MKN28, MKN45 및 MKN74 세포를 누드 마우스에 복강 주사하였고, CRM197을 5회(50 ㎎/㎏/1주) 복강 주사하였다. 접종 후 6주째에 전체 복막 전이 병소가 제거되었고, 그의 총 질량이 측정되었다(도 1).

( 실시예 2)

누드 마우스를 이용하여 종양유발성(tumorigenicity) 실험을 수행하였다. RPMI + 10% FBS 배지에서 배양된 인간 방광암 세포주, KK47세포를 EDTA/PBS(-)으로 세척하였고, 0.25% 트립신을 이용하여 수집하였다. 세포를 RPMI + 10% FBS로 두 번, RPMI(무혈청)로 두 번 세척한 후, 5 × 10⁶ 세포에 250 ㎕ RPMI(혈청 포함)를 첨가하였다. 상기를 누드 마우스의 등에 피하 주사하였다. 한 그룹의 누드 마우스에, 상기 세포 접종 후 7일째에 50 ㎎/㎏/1주의 양의 CRM197을 복강 주사하였다. CRM197은 3주 동안 일주일에 한 번씩 투약하였다. CRM197이 투약 되지 않은 누드 마우스를 대조군으로 사용하였다. 투약 시간 및 종양 용적의 관계는 도 2에 나타내었다. 종양 용적은 매주 생성된 종양의 장축 및 단축을 측정하고 (장축) × (단축) × (단축) × 1/2로 연산하였다.

( 실시예 3)

누드 마우스를 이용하여 종양유발성 실험을 수행하였다. RPMI + 10% FBS 배지에서 배양된 인간 결장암 세포주, HT29 세포 또는 HCT116 세포(입수처: American Type Culture Collection [ATCC])를 EDTA/PBS(-)으로 세척하였고, 0.25% 트립신을 이용하여 수집하였다. 세포를 RPMI + 10% FBS로 두 번, RPMI(무혈청)로 두 번 세척한 후, 5 × 10⁶ 세포에 250 ㎕ RPMI(혈청 포함)를 첨가하였다. 상기를 누드 마우스의 등에 피하 주사하였다. 한 그룹의 누드 마우스에, 상기 세포 접종 후 7일째에 50 ㎎/㎏/1주의 양의 CRM197을 복강 주사하였다. CRM197은 3주 동안 일주일에 한 번씩 투약하였다. CRM197이 투약 되지 않은 누드 마우스를 대조군으로 사용하였다. 투약 시간 및 종양 용적의 관계는 도 3에 나타내었다. 종양 용적은 매주 생성된 종양의 장축 및 단축을 측정하고 (장축) × (단축) × (단축) × 1/2로 연산하였다.

( 실시예 4)

복막 전이 모델. 1 × 10⁷의 인간 췌장암 세포주, PANC1을 누드 마우스에 복강 주사하였고, CRM197을 5회(50 ㎎/㎏/1주) 복강 주사하였다. 접종 후 6주째에 전체 복막 전이 병소가 제거되었고, 그의 총 질량이 측정되었다(도 4).

상기 실시예의 결과로부터, CRM197의 투약은 모든 경우에서 종양의 증대를 억제하는 것을 발견하였다.

<110> OSAKA UNIVERSITY KYUSHU UNIVERSITY, NATIONAL UNIVERSITY CORPORATION Kansai Technology Licensing Organization Co., Ltd. <120> THERAPEUTIC AGENT FOR CANCER <130> 7FPI-11-14 <160> 2 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 560 <212> PRT <213> CRM197 <400> 1 Met Ser Arg Lys Leu Phe Ala Ser Ile Leu Ile Gly Ala Leu Leu Gly 1 5 10 15 Ile Gly Ala Pro Pro Ser Ala His Ala Gly Ala Asp Asp Val Val Asp 20 25 30 Ser Ser Lys Ser Phe Val Met Glu Asn Phe Ser Ser Tyr His Gly Thr 35 40 45 Lys Pro Gly Tyr Val Asp Ser Ile Gln Lys Gly Ile Gln Lys Pro Lys 50 55 60 Ser Gly Thr Gln Gly Asn Tyr Asp Asp Asp Trp Lys Glu Phe Tyr Ser 65 70 75 80 Thr Asp Asn Lys Tyr Asp Ala Ala Gly Tyr Ser Val Asp Asn Glu Asn 85 90 95 Pro Leu Ser Gly Lys Ala Gly Gly Val Val Lys Val Thr Tyr Pro Gly 100 105 110 Leu Thr Lys Val Leu Ala Leu Lys Val Asp Asn Ala Glu Thr Ile Lys 115 120 125 Lys Glu Leu Gly Leu Ser Leu Thr Glu Pro Leu Met Glu Gln Val Gly 130 135 140 Thr Glu Glu Phe Ile Lys Arg Phe Gly Asp Gly Ala Ser Arg Val Val 145 150 155 160 Leu Ser Leu Pro Phe Ala Glu Gly Ser Ser Ser Val Glu Tyr Ile Asn 165 170 175 Asn Trp Glu Gln Ala Lys Ala Leu Ser Val Glu Leu Glu Ile Asn Phe 180 185 190 Glu Thr Arg Gly Lys Arg Gly Gln Asp Ala Met Tyr Glu Tyr Met Ala 195 200 205 Gln Ala Cys Ala Gly Asn Arg Val Arg Arg Ser Val Gly Ser Ser Leu 210 215 220 Ser Cys Ile Asn Leu Asp Trp Asp Val Ile Arg Asp Lys Thr Lys Thr 225 230 235 240 Lys Ile Glu Ser Leu Lys Glu His Gly Pro Ile Lys Asn Lys Met Ser 245 250 255 Glu Ser Pro Asn Lys Thr Val Ser Glu Glu Lys Ala Lys Gln Tyr Leu 260 265 270 Glu Glu Phe His Gln Thr Ala Leu Glu His Pro Glu Leu Ser Glu Leu 275 280 285 Lys Thr Val Thr Gly Thr Asn Pro Val Phe Ala Gly Ala Asn Tyr Ala 290 295 300 Ala Trp Ala Val Asn Val Ala Gln Val Ile Asp Ser Glu Thr Ala Asp 305 310 315 320 Asn Leu Glu Lys Thr Thr Ala Ala Leu Ser Ile Leu Pro Gly Ile Gly 325 330 335 Ser Val Met Gly Ile Ala Asp Gly Ala Val His His Asn Thr Glu Glu 340 345 350 Ile Val Ala Gln Ser Ile Ala Leu Ser Ser Leu Met Val Ala Gln Ala 355 360 365 Ile Pro Leu Val Gly Glu Leu Val Asp Ile Gly Phe Ala Ala Tyr Asn 370 375 380 Phe Val Glu Ser Ile Ile Asn Leu Phe Gln Val Val His Asn Ser Tyr 385 390 395 400 Asn Arg Pro Ala Tyr Ser Pro Gly His Lys Thr Gln Pro Phe Leu His 405 410 415 Asp Gly Tyr Ala Val Ser Trp Asn Thr Val Glu Asp Ser Ile Ile Arg 420 425 430 Thr Gly Phe Gln Gly Glu Ser Gly His Asp Ile Lys Ile Thr Ala Glu 435 440 445 Asn Thr Pro Leu Pro Ile Ala Gly Val Leu Leu Pro Thr Ile Pro Gly 450 455 460 Lys Leu Asp Val Asn Lys Ser Lys Thr His Ile Ser Val Asn Gly Arg 465 470 475 480 Lys Ile Arg Met Arg Cys Arg Ala Ile Asp Gly Asp Val Thr Phe Cys 485 490 495 Arg Pro Lys Ser Pro Val Tyr Val Gly Asn Gly Val His Ala Asn Leu 500 505 510 His Val Ala Phe His Arg Ser Ser Ser Glu Lys Ile His Ser Asn Glu 515 520 525 Ile Ser Ser Asp Ser Ile Gly Val Leu Gly Tyr Gln Lys Thr Val Asp 530 535 540 His Thr Lys Val Asn Ser Lys Leu Ser Leu Phe Phe Glu Ile Lys Ser 545 550 555 560 <210> 2 <211> 1683 <212> DNA <213> CRM197 <400> 2 gtgagcagaa aactgtttgc gtcaatctta ataggggcgc tactggggat aggggcccca 60 ccttcagccc atgcaggcgc tgatgatgtt gttgattctt ctaaatcttt tgtgatggaa 120 aacttttctt cgtaccacgg gactaaacct ggttatgtag attccattca aaaaggtata 180 caaaagccaa aatctggtac acaaggaaat tatgacgatg attggaaaga gttttatagt 240 accgacaata aatacgacgc tgcgggatac tctgtagata atgaaaaccc gctctctgga 300 aaagctggag gcgtggtcaa agtgacgtat ccaggactga cgaaggttct cgcactaaaa 360 gtggataatg ccgaaactat taagaaagag ttaggtttaa gtctcactga accgttgatg 420 gagcaagtcg gaacggaaga gtttatcaaa aggttcggtg atggtgcttc gcgtgtagtg 480 ctcagccttc ccttcgctga ggggagttct agcgttgaat atattaataa ctgggaacag 540 gcgaaagcgt taagcgtaga acttgagatt aattttgaaa cccgtggaaa acgtggccaa 600 gatgcgatgt atgagtatat ggctcaagcc tgtgcaggaa atcgtgtcag gcgatcagta 660 ggtagctcat tgtcatgcat aaatcttgat tgggatgtca taagggataa aactaagaca 720 aagatagagt ctttgaaaga gcatggccct atcaaaaata aaatgagcga aagtcccaat 780 aaaacagtat ctgaggaaaa agctaaacaa tacctagaag aatttcatca aacggcatta 840 gagcatcctg aattgtcaga acttaaaacc gttactggga ccaatcctgt attcgctggg 900 gctaactatg cggcgtgggc agtaaacgtt gcgcaagtta tcgatagcga aacagctgat 960 aatttggaaa agacaactgc tgctctttcg atacttcctg gtatcggtag cgtaatgggc 1020 attgcagacg gtgccgttca ccacaataca gaagagatag tggcacaatc aatagcttta 1080 tcgtctttaa tggttgctca agctattcca ttggtaggag agctagttga tattggtttc 1140 gctgcatata attttgtaga gagtattatc aatttatttc aagtagttca taattcgtat 1200 aatcgtcccg cgtattctcc ggggcataaa acgcaaccat ttcttcatga cgggtatgct 1260 gtcagttgga acactgttga agattcgata atccgaactg gttttcaagg ggagagtggg 1320 cacgacataa aaattactgc tgaaaatacc ccgcttccaa tcgcgggtgt cctactaccg 1380 actattcctg gaaagctgga cgttaataag tccaagactc atatttccgt aaatggtcgg 1440 aaaataagga tgcgttgcag agctatagac ggtgatgtaa ctttttgtcg ccctaaatct 1500 cctgtttatg ttggtaatgg tgtgcatgcg aatcttcacg tggcatttca cagaagcagc 1560 tcggagaaaa ttcattctaa tgaaatttcg tcggattcca taggcgttct tgggtaccag 1620 aaaacagtag atcacaccaa ggttaattct aagctatcgc tattttttga aatcaaaagc 1680 tga 1683

Claims

HB-EGF에 결합함으로써 HB-EGF와 EGF 수용체의 결합을 억제하는 물질을 유효성분으로 포함하는 종양치료제로, 상기 유효성분이 HB-EGF와 EGF 수용체의 결합을 억제하는 활성을 갖고 실질적으로 디프테리아 독소의 독성을 갖지 않는 폴리펩티드인 디프테리아 독소의 돌연변이체이고, 상기 종양은 결장암, 방광암 및 복막전이성 암으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 종양치료제.
제 1항에 있어서, 방광암 치료제인 것을 특징으로 하는 종양치료제.
제 1항에 있어서, 결장암 치료제인 것을 특징으로 하는 종양치료제.
제 1항에 있어서, 복막전이성 암 치료제인 것을 특징으로 하는 종양치료제.
제 4항에 있어서, 복막전이성 암은 위암 또는 췌장암에서 전이하였고 복막에 전이한 것을 특징으로 하는 종양치료제.
제 1항에 있어서, 유효성분은 CRM197인 것을 특징으로 하는 종양치료제.