KR20080016224A - Cosmetic composition for anti-aging and improvement of skin comprising plant extract - Google Patents
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Abstract
Description
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물의 피부세포 DNA 손상 억제효과를 평가(실험예 4)하기 위해 모무생쥐(hairless mouse)의 세포를 촬영한 사진의 사본이다.1 is a copy of the photograph of the cells of the hairless mouse (hairless mouse) in order to evaluate the skin cell DNA damage inhibitory effect (Experimental Example 4) of the cosmetic composition according to an embodiment of the present invention.
본 발명은 피부 노화 예방 및 피부 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 장수식물 혼합 추출물을 함유함에 따라 피부 세포 DNA 손상억제, 세포활성 효과 및 미세 피부결 증가 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition for preventing skin aging and improving skin, and more particularly, to a cosmetic composition having excellent skin cell DNA damage suppression, cell activity effect, and fine skin texture increase effect by containing a longevity plant mixed extract. .
사람의 피부는 외부 환경으로부터 인체를 보호해 주는 장벽 역할을 하는 중요한 기관으로서, 이를 구성하는 가장 작은 단위인 세포들이 서로 호흡하고, 생성되고, 스스로 치유하면서 가장 건강한 상태로 이끌어간다. 그러나 세포들은 외부 자극에 노출되는데 그 중 가장 위험한 자극 중의 하나가 바로 자외선이다.Human skin is an important organ that acts as a barrier to protect the human body from the external environment, and the smallest units that make up the cells breathe, create, and heal themselves, leading to the healthiest state. However, cells are exposed to external stimuli, one of the most dangerous of which is ultraviolet.
자외선은 그 파장에 따라 A, B, 및 C의 3개 영역으로 나눌 수 있다. 그 중, 가장 에너지가 크고 해로운 자외선 C 영역은 대부분 오존층에서 흡수되어 지표면에 도달하지 못하고, 피부 속 깊은 곳까지 도달할 수 있는 자외선 A는 에너지가 비교적 약해 인체에 큰 해를 주기에는 미약하다. 그러나, 자외선 B는 피부 세포의 지질, 단백질 및 DNA에 심각한 손상을 일으킨다. 특히 자외선 B에 의해 세포 내 DNA가 손상될 경우 세포사멸, 돌연변이 등을 일으키면서 피부는 노화가 가속화되고 피부 기능 저하 및 시각적으로 피부결이 거칠어지면서 아름다움이 크게 감소한다. Ultraviolet rays can be divided into three regions, A, B, and C, depending on their wavelength. Among them, the most energetic and harmful ultraviolet C region is mostly absorbed by the ozone layer and does not reach the earth's surface. Ultraviolet A, which can reach deep within the skin, is relatively weak in energy and weak to cause great harm to the human body. However, ultraviolet B causes serious damage to skin cells' lipids, proteins and DNA. In particular, when the intracellular DNA is damaged by ultraviolet light B, apoptosis, mutations, and the like, the skin accelerates aging, deteriorates the skin function, and the skin becomes rough.
그에 따라, 화장품에서 가장 관심을 갖고 연구하는 분야 중 하나가 어떻게 피부 노화를 지연할 수 있을까 하는 것이다. 이렇듯 자외선의 피부에 대한 나쁜 영향이 강조되어 왔기에 종래에는 자외선 차단제 등을 화장료에 배합하여 사용하여 왔으나, 자외선 차단제는 화장료에 배합시 안전성(safety) 등이 좋지 못하다는 단점을 가지고 있다. Accordingly, one of the areas of interest in cosmetics is how to delay skin aging. Thus, since the bad effect on the skin of ultraviolet rays has been emphasized, in the past, sunscreens and the like have been used in combination with cosmetics, but sunscreens have a disadvantage in that the safety (safety), etc. when blending in the cosmetics is not good.
한편, 노화에 따른 손상된 피부의 상태 정도를 나타내는 지표로써 최근 미세 피부결 측정이 이용되고 있다. 미세 피부결은 피부의 가장 바깥에 위치한 그물망 구조로써 기존의 연구 결과들을 보면, 피부 노화의 신뢰성 있는 지표로서 연령별로 유의한 변화가 있음이 보고되어 있다. 이것으로 미루어 볼 때, 미세 피부결은 피부 속 상태를 반영하는 기준이라 할 수 있다. 따라서 미세 피부결의 상태를 기준 별로 분석함으로써 피부 속 상태까지 객관적인 판단이 가능하다(Photodermatol. Phoimmunol. Photomed. 19. 169-174, 2003).On the other hand, fine skin texture measurement has recently been used as an indicator of the degree of condition of damaged skin due to aging. Fine skin texture is the outermost network structure of the skin, and the results of previous studies have shown that there is a significant change by age as a reliable indicator of skin aging. In view of this, fine skin texture can be said to reflect the condition in the skin. Therefore, it is possible to objectively determine the state of the skin by analyzing the state of fine skin texture by criteria (Photodermatol. Phoimmunol. Photomed. 19. 169-174, 2003).
본 발명은 화장료에 배합 시 안전성이 뛰어난 동시에 피부 노화 예방과 미세 피부결 개선효과가 우수하면서 특이취가 적은 식물 추출물를 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.It is an object of the present invention to provide a cosmetic composition containing a plant extract having excellent safety when formulated in a cosmetic and excellent skin aging prevention and fine skin texture improvement effect and low specific odor.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 차파랄(Chaparral) 추출물, 아데노포라(Adenophora stricta) 추출물, 및 루피너스(Lupinus albus) 추출물로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상의 식물 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부노화 예방 및 개선용 화장료 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention is Chaparral extract, Adenophora stricta extract, and Lupinus albus ) provides a cosmetic composition for preventing and improving skin aging comprising at least one plant extract selected from the group consisting of the extract as an active ingredient.
본 발명자들은 화장료에 배합시 안전성(safety)이 뛰어난 동시에 피부 노화 예방과 피부 개선효과가 우수한 물질을 탐색하는 연구의 일환으로, 장수 식물에서 피부 미용학적으로 효과가 예측되는 식물 추출물에 대하여 여러 가지 유효성 및 안전성을 정밀 조사한 결과, 피부 노화 예방 및 피부 개선 효과가 우수하면서 특이취가 적고 피부에 안전한 식물 추출물을 발견하여 본 발명의 완성에 이르게 되었다.The inventors of the present invention, as part of a study to search for substances that have excellent safety (safety) when combined with cosmetics and excellent skin aging prevention and skin improvement effect, various effects on plant extracts that are predicted to be cosmetically effective in longevity plants As a result of a thorough investigation of the safety, it was found that the plant extract is excellent in preventing skin aging and improving skin, and has a specific odor and is safe for the skin.
또한, 본 발명과 관련하여 연구 대상이 된 3가지 장수 식물인 차파랄, 아데노포라 및 루피너스 추출물에서 피부 세포 DNA 손상억제, 피부 세포 증식을 통한 세포활성 효과와 미세 피부결 증가 효과에 의한 노화예방 효과 및 피부 개선효과에 대한 연구 결과라든가 이와 관련된 보고는 현재까지 없는 바, 본 발명에서는 피부 세포 DNA 손상억제, 피부 세포 증식을 통한 세포활성 효과와 미세 피부결 증가 효과에 대한 입증을 통하여 본 발명을 완성하게 된 것이다.In addition, the three longevity plants studied in connection with the present invention, chaparal, adenophora and lupine extract, inhibits skin cell DNA damage, prevents aging due to cellular activity and fine skin texture increase effect through skin cell proliferation. As a result of research on the effect and skin improvement effect, there are no reports related to the present invention. In the present invention, the present invention is demonstrated through the demonstration of the effect of inhibiting skin cell DNA damage, the effect of cell activity through skin cell proliferation and the effect of increasing the fine skin texture. It is complete.
본 발명에 있어서, '셀리언스'란 차파랄 추출물, 아데노포라 추출물 및 루피너스 추출물로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상의 장수식물 추출물의 혼합물을 의미한다.In the present invention, 'celion' means a mixture of at least one long-life plant extract selected from the group consisting of chaparal extract, adenophora extract, and lupine extract.
이하에서 본 발명을 더욱 자세히 설명하고자 한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.
본 발명에서는 차파랄, 아데노포라 및 루피너스의 혼합 추출물을 함유하는 노화 예방과 피부 개선 조성물을 제공한다. 본 명세서에서 노화 예방 및 피부 개선 조성물이란 피부 세포 DNA 손상억제, 피부 세포 증식을 통한 세포활성 효과 및 미세 피부결 효과를 갖는 조성물이다.The present invention provides an anti-aging and skin improvement composition containing a mixed extract of chaparal, adenophora and lupine. In the present specification, the anti-aging and skin improvement composition is a composition having a skin cell DNA damage suppression, a cell activity effect through skin cell proliferation and a fine skin texture effect.
본 발명에 따른 화장료 조성물이 되는 장수 식물 혼합 추출물인 셀리언스의 원료 식물을 살펴보면, 먼저 차파랄(Chaparral)은 미국 남서부 사막지대에 자생하는 떡갈나무로 수 천년 이상 사는 것으로 알려져 있다. 차파랄 추출물을 함유하는 안정화된 조성물을 개시한 한국 공개특허공보 제10-2005-0023041호가 있으나, 이는 화장료 조성물 내 불안정화되는 성분의 장기 안정성을 향상시키는 목적으로 하는 것으로서, 본 발명의 피부 세포 DNA 손상억제, 피부 세포 증식을 통한 세포활성 효과와 미세 피부결 증가 효과와는 완전히 구별된다.Looking at the raw material of the Celion, which is a longevity plant mixed extract that is a cosmetic composition according to the present invention, first, Chaparral is known to live for several thousand years as an oak tree native to the desert southwestern United States. Korean Patent Laid-Open Publication No. 10-2005-0023041 discloses a stabilized composition containing chaparal extract, but this is for the purpose of improving the long-term stability of the destabilizing component in the cosmetic composition. It is completely distinguished from the effect of inhibiting the cell activity through skin cell proliferation and increasing the effect of fine skin texture.
한편, 아데노포라(Adenophora ; 특히 Adenophora stricta)는 산야에서 흔히 자라는 다년생 식물로 도라지과에 속하며, 산삼과 마찬가지로 간혹 수 백년 묵은 것도 발견되어 풀 중에서 오래 사는 것으로 알려져 있다. 아데노포라의 뿌리는 한방에서 해독 및 제염제로 사용되며(대한식물독감, 해창사, 1993), 민간에서 뱀 독, 농약 독, 중금속 독 등 각종 독을 푸는데 약초는 오직 아데노포라 뿐이라는 말도 있다. 그리고, 아데노포라를 함유하는 피부 미백용 조성물이 한국 등록특허 제10-0544024호에 기재되어 있고, 피부 건조의 예방, 아토피 및 접촉성 피부염 증상의 예방 효과(한국 공개특허공보 제10-2004-0058848호)가 있다고 알려져 있다. 이는 본 발명의 피부 세포 DNA 손상억제, 피부 세포 증식을 통한 세포활성 효과와 미세 피부결 증가 효과와는 완전히 구별된다.On the other hand, Adenophora ( especially Adenophora) stricta ) is a perennial plant commonly found in Sanya and belongs to the bellflower family. Like wild ginseng, hundreds of years old are sometimes found and live long in grass. The root of adenophora is used as a detoxification and decontamination agent in oriental medicine (Korean Plant Flu, Haechangsa, 1993). In addition, a skin composition for skin whitening containing adenophora is described in Korean Patent No. 10-0544024, and it prevents skin dryness and prevents atopic and contact dermatitis symptoms (Korean Patent Publication No. 10-2004-0058848). Ho) is known. This is completely distinguished from the skin cell DNA damage inhibition of the present invention, the cell activity effect through skin cell proliferation and the effect of increasing the fine skin texture.
루피너스(Lupinus albus)는 아관목상 다년생 풀의 씨앗으로서, 극지방에서 자생하는 루피너스의 수명은 15년에서 길게는 수백 년 까지 보존할 수 있으며, 이 씨앗들은 지금 발아하여 꽃을 피울 수 있을 정도의 강한 생명력을 지닌 식물이다. 루피너스와 관련된 성분 동정 연구에 의하면, 루핀 펩타이드(Lupine peptide) 등의 화합물이 연구 보고되고 있으며, 콜라게나아제 및 제라티나아제 억제 활성(한국 공개특허공보 제10-2002-0030263호)이 있다고 알려져 있다. 이는 본 발명의 피부 세포 DNA 손상억제, 피부 세포 증식을 통한 세포활성 효과와 미세 피부결 증가 효과와는 완전히 구별된다.Lupineus ( Lupinus albus ) is a seed of subsidiary perennial grass, and the life span of polar lupine grows from 15 to hundreds of years, and these seeds are now germinating and flowering. It is a plant with strong vitality. According to a component identification study related to lupine, compounds such as lupine peptide have been studied and known to have collagenase and gelatinase inhibitory activity (Korean Patent Publication No. 10-2002-0030263). have. This is completely distinguished from the skin cell DNA damage inhibition of the present invention, the cell activity effect through skin cell proliferation and the effect of increasing the fine skin texture.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 3 가지 장수 식물인 차파랄 추출물, 아데노포라 추출물 및 루피너스 추출물로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상의 식물 추출물(이하, '셀리언스'라 함)을 전체 조성물 중량에 대하여 0.1 내지 20.0 중량%로 포함할 수 있다. The cosmetic composition according to the present invention comprises at least one plant extract selected from the group consisting of three longevity plants, chaparal extract, adenophora extract, and lupine extract (hereinafter referred to as 'celion'), based on the total composition weight. It may include 0.1 to 20.0% by weight.
즉, 실질적으로 피부 세포 DNA 손상억제, 피부 세포 증식을 통한 세포활성 효과와 미세 피부결 증가 효과를 기대하기 위해서는, 장수 식물 혼합 추출물인 셀리언스 함량이 0.1 중량% 이상 포함되는 것이 바람직하고, 장수 식물의 특이취의 마스킹(masking)을 고려하여 20 중량% 이하로 포함하는 것이 바람직하다.That is, in order to substantially expect the effect of inhibiting skin cell DNA damage, increasing cell activity through skin cell proliferation and increasing the effect of fine skin texture, it is preferable that the content of celion, which is a longevity plant mixed extract, is contained in an amount of 0.1 wt% or more. In consideration of the masking (masking) of the specific odor of the plant, it is preferably included in 20% by weight or less.
또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 셀리언스를 만들기 위하여 구성 식물 인 차파랄, 아데노포라 및 루피너스에 대하여 각 식물의 추출물을 얻은 후 이들을 혼합하여 제조하거나, 각 식물을 혼합하여 함께 추출하여 제조할 수 있다. In addition, the cosmetic composition according to the present invention is obtained by extracting each plant for the constituent plants Chaparal, adenophora and lupine in order to make the celery and then mixing them, or by mixing together each plant to be prepared can do.
본 발명에서 사용되는 각 식물의 추출물은 종자, 껍질, 잎, 줄기 및 싹 등을 추출하여 얻어진 것으로서, 천연에서 유래하여 인체에 대한 안전성이 높은 추출물이다. 바람직하게는, 상기 아데노포라 추출물은 아데노포라 뿌리 추출물이고, 상기 루피너스 추출물은 루피너스 열매 추출물이다.The extract of each plant used in the present invention is obtained by extracting seeds, bark, leaves, stems and shoots, etc., is an extract derived from nature and high in safety to the human body. Preferably, the adenophora extract is an adenophora root extract, and the lupine extract is a lupine fruit extract.
상기 식물 추출물은, 통상적으로 식물 추출물을 얻는 추출 방법에 의해 얻어질 수 있으며, 본 발명에서 한정하지는 않는다. 일예로 식물의 뿌리, 열매 등을 통째로 건조시킨 후 분쇄하거나 잘게 절단하여 얻어진 분쇄물에, 예컨대 증류수, 유기용매 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 용매로 추출될 수 있다.The plant extract can be obtained by an extraction method to obtain a plant extract, but is not limited in the present invention. For example, the roots, fruits and the like of the plant may be extracted with a solvent selected from the group consisting of, for example, distilled water, organic solvents and mixtures thereof, which are obtained by drying and grinding or cutting finely.
이때 사용되는 유기용매는 1,3-부틸렌글리콜, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 에틸아세테이트 또는 아세톤일 수 있으며, 상기 유기용매의 극성에 따라 순차적으로 2종 이상 사용할 수 있다.In this case, the organic solvent used may be 1,3-butylene glycol, lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms, ethyl acetate or acetone, and may be used two or more kinds sequentially according to the polarity of the organic solvent.
예컨대, 상기 식물 추출물은 차파랄, 아데노포라 및 루피너스를 0.05 내지 0.5: 0.2 내지 2.0: 0.1 내지 1.0의 중량비로 혼합하여 증류수, 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 탄소수 1 내지 5를 갖는 알코올, 또는 이들의 혼합 용매에 5∼30 중량%, 바람직하게는 10∼25 중량%로 냉침 추출법 또는 초임계 추출법으로 추출하여 제조한다. 이때 얻어진 추출 여액을 여과, 탈수 또는 탈용매화한 후, 감압농축 또는 동결 건조하여 액상 또는 분말 형태로 화장료 조성물에 배합된다. 예를 들면, 추출액을 0.1∼1 ㎛ 필터, 바람직하게는 0.2∼0.5 ㎛ 필터로 여과하여 제조된다.For example, the plant extract is mixed with chaparal, adenophora and lupine in a weight ratio of 0.05 to 0.5: 0.2 to 2.0: 0.1 to 1.0 having distilled water, 1,3-butylene glycol, propylene glycol, 1 to 5 carbon atoms It is prepared by extraction with an alcohol or a mixed solvent of 5 to 30% by weight, preferably 10 to 25% by weight by cold dip extraction or supercritical extraction. The extract filtrate obtained at this time is filtered, dehydrated or desolvated, and then concentrated under reduced pressure or lyophilized and blended into the cosmetic composition in liquid or powder form. For example, the extract is prepared by filtration with a 0.1-1 μm filter, preferably a 0.2-0.5 μm filter.
본 발명의 화장료 조성물은 화장수, 에센스, 로션, 크림 또는 젤을 포함하는 화장료 조성물로 제제화될 수 있다. 더욱 자세하게는, 본 발명의 화장료 조성물은, 기초화장품, 메이크업 화장품, 바디 화장품, 두발용 화장품, 두피용 화장품, 면도용 화장품 또는 구강용 화장품의 용도로 제공될 수 있다. The cosmetic composition of the present invention may be formulated into a cosmetic composition comprising a lotion, essence, lotion, cream or gel. More specifically, the cosmetic composition of the present invention may be provided for the use of basic cosmetics, makeup cosmetics, body cosmetics, hair cosmetics, scalp cosmetics, shaving cosmetics or oral cosmetics.
상기 기초화장품의 예로는 크림, 화장수, 팩, 마사지 크림, 유액 등이 있으며; 상기 메이크업 화장품으로는 파운데이션, 메이크업 베이스, 립스틱, 아이새도, 아이라이너, 마스카라, 아이브로우 펜슬 등이 있고; 바디 화장품으로는 비누, 액체 세정제, 입욕제, 선스크린 크림, 선 오일 등이 있으며; 두발용 화장품으로는 샴푸, 린스, 헤어 트리트먼트, 헤어 무쓰, 헤어 리퀴드, 포마드, 헤어 칼라제, 헤어 블릿치제, 칼라 린스가 있고; 두피용 화장품으로는 헤어 토닉, 스칼프 트리트먼트가 있으며; 면도용 화장품으로는 애프터셰이브 로션, 셰이빙 크림 등이 있고; 구강용 화장품으로는 치약, 마우스 워셔 등이 있다.Examples of the basic cosmetics include creams, lotions, packs, massage creams, emulsions, and the like; The makeup cosmetics include foundation, makeup base, lipstick, eyeshadow, eyeliner, mascara, eyebrow pencil and the like; Body cosmetics include soaps, liquid detergents, bath agents, sunscreen creams, sun oils, and the like; Hair cosmetics include shampoo, rinse, hair treatment, hair mousse, hair liquid, pomade, hair colorant, hair bleach, color rinse; Cosmetics for the scalp include hair tonic and scalp treatments; Cosmetics for shaving include aftershave lotion and shaving cream; Cosmetics for oral use include toothpaste and mouse washers.
이하, 실시예 등을 통하여 본 발명을 구체적으로 설명한다. 단, 이들 실험예, 실시예, 비교예 및 제조예는 본 발명의 예시일 뿐, 본 발명의 보호범위가 이에 한정되는 의도는 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in detail through examples. However, these experimental examples, examples, comparative examples and production examples are only examples of the present invention, and the protection scope of the present invention is not intended to be limited thereto.
<< 실시예Example 1> 식물 혼합 추출물 1> Plant Blend Extract 셀리언스의Celence 제조 Produce
추출계 총 중량에 대하여, 차파랄 2.0 중량%, 아데노포라 9.0 중량%, 및 루피너스 4.0 중량%로 혼합한 장수 식물을 추출용매(증류수:부틸렌글리콜 중량비=7:3) 85 중량%로 냉침 추출한 후, 침전물이 생기지 않도록 0.2 ㎛ 필터로 여과한 다음, 살균을 위해 3 일간 자외선(UV)을 조사하여 최종 장수 식물 혼합 추출물인 셀리언스를 얻었다.Based on the total weight of the extraction system, longevity plants mixed with 2.0% by weight of chaparal, 9.0% by weight of adenophora, and 4.0% by weight of lupine were cooled by 85% by weight of the extraction solvent (distilled water: butylene glycol weight ratio = 7: 3). After extraction, the resultant was filtered with a 0.2 μm filter to prevent sediment, and then irradiated with ultraviolet (UV) light for 3 days for sterilization to obtain Celiac, which is a final mixed plant of longevity.
<< 실시예Example 2> 식물 혼합 추출물 2> Plant Blend Extract 셀리언스의Celence 제조 Produce
한편, 추출계 총 중량에 대하여, 차파랄 2.0 중량%를 추출용매(증류수:부틸렌글리콜 중량비=7:3) 98 중량%로; 아데노포라 9.0 중량%를 추출용매(증류수:부틸렌글리콜 중량비=7:3) 91 중량%로; 루피너스 4.0 중량%를 추출용매(증류수:부틸렌글리콜 중량비=7:3) 96 중량%로 각각 냉침 추출한 후, 침전물이 생기지 않도록 0.2 ㎛ 필터로 여과한 다음, 살균을 위해 3 일간 자외선(UV)을 조사하여 각각의 차파랄 추출물, 아데노포라 추출물, 루피너스 추출물을 각각 얻었다.On the other hand, 2.0% by weight of chaparal to 98% by weight of the extraction solvent (distilled water: butylene glycol weight ratio = 7: 3) relative to the total weight of the extraction system; 9.0 wt% of adenophora to 91 wt% of an extraction solvent (distilled water: butylene glycol weight ratio = 7: 3); Lupineus 4.0% by weight of the extraction solvent (distilled water: butylene glycol weight ratio = 7: 3), respectively, extracted by cold extraction, filtered with a 0.2 ㎛ filter to prevent the formation of precipitates, and then UV (UV) for 3 days for sterilization Each of the chaparal extract, adenophora extract, and lupine extract were obtained.
<< 실험예Experimental Example 1> 세포독성 시험 1> Cytotoxicity Test
화장품에 사용되는 원료로서의 1차 안전성을 검증하고자, 위 실시예 1에서 제조한 셀리언스에 대하여 V79-4 세포(차이니스 햄스터, 폐조직 섬유아세포의 연속 세포주)을 배양하여 MTT 시험을 실시[참고문헌: Mossman T. (1983) Rapid colorimetric assay for cellular growth & survival: application to proliferation & cytotoxicity assays. Journal of Immunological Methods 65, 55~63]하였다. 세포독성 시험 결과를 표 1에 나타낸다. In order to verify the primary safety as a raw material used in cosmetics, MTT test was performed by culturing V79-4 cells (Chinese hamster, continuous cell line of lung tissue fibroblasts) against the celions prepared in Example 1 [ References: Mossman T. (1983) Rapid colorimetric assay for cellular growth & survival: application to proliferation & cytotoxicity assays. Journal of Immunological Methods 65, 55 ~ 63]. The cytotoxicity test results are shown in Table 1.
주) aIC50: 억제농도(Inhibitory Concentration) 50, 50 %의 세포를 사멸시키는 농도Note) a IC 50: inhibitory concentration (Inhibitory Concentration) 50, the concentration that kills 50% of cells
상기 표 1에서 나타낸 바와 같이, 장수 식물 혼합 추출물인 셀리언스의 IC50 값은 10.0으로 소디움라우릴설페이트에 비하여 2000배 이상 세포독성이 낮게 나타났으며, 안전성이 우수한 유용성 원료인 스쿠알란에 비해서도 200배 이상 세포독성이 낮게 나타나, 안전성이 매우 우수한 것임을 알 수 있다.As shown in Table 1, the IC 50 value of the celery, which is a mixed extract of longevity plants, was 10.0, showing a cytotoxicity over 2000 times lower than that of sodium lauryl sulfate, and 200 compared to squalane, which is an excellent safety material. More than twice the cytotoxicity is low, it can be seen that the safety is very good.
<< 실험예Experimental Example 2> 2> 알러지allergy 평가( evaluation( LLNALLNA ))
본 발명에 따른 셀리언스의 알러지 유발 여부를 확인하기 위하여, 운반 매개물로 아세톤:올리브오일(4:1)을 사용하는 실험법을 선정하였다[참고문헌: Kimber Ⅰ(1990): Identification of contact allergens using the murine local lymph node assay, J. Appl . Toxicol . 10(3), 173∼180]. 식물 추출물의 20%, 40% 및 60% 용액을 제조하여 마우스(Balb/c)의 양쪽 귀에 50 ㎕씩 3 일간 발라준 후 쥐로부터 이개 임파절(Auricular lymph node)을 분리하였다. 임파절을 분쇄하여 단일 세포 상태로 만든 후 방사성 동위원소(3H-티미딘)를 첨가하여 24시간 배양하고 세포의 증폭도[cpm]를 측정하였다. 그 결과를 표 2에 나타낸다.In order to confirm the allergy-induced celence according to the present invention, an experimental method using acetone: olive oil (4: 1) as a carrier medium was selected [Kimber I (1990): Identification of contact allergens using the murine local lymph node assay, J. Appl . Toxicol . 10 (3), 173 to 180]. A 20%, 40%, and 60% solution of the plant extract was prepared and applied to both ears of the mouse (Balb / c) for 50 days for 3 days, and then isolated from the rat lymph node (Auricular lymph node). Lymph nodes were pulverized into a single cell state and then cultured for 24 hours with the addition of radioisotope (3H-thymidine), and the amplification degree [cpm] of the cells was measured. The results are shown in Table 2.
상기 표 2에서 보는 바와 같이, 본 발명에 따른 장수 식물 혼합 추출물인 셀리언스는 증폭도(S.I)가 2 이하로서, 알러지 유발 가능성이 거의 없는 것으로 나타났다.As shown in Table 2, the celery of the longevity plant mixed extract according to the present invention has an amplification degree (S.I) of 2 or less, and it has been shown that there is little possibility of allergy.
<< 실험예Experimental Example 3> 피부 세포 DNA 손상억제 평가(in vitro) 3> Evaluation of skin cell DNA damage inhibition (in vitro)
본 발명에 따른 셀리언스, 차파렐 추출물, 아데노포라 추출물 및 루피너스 추출물에 대하여 배양된 사람의 정상 피부 각화 세포에서 자외선에 의해 발생되는 DNA 손상 억제 효과를 comet assay법으로 시험하였다. 배양된 사람의 정상 각화 세포(cultured normal human keratinocyte)에 셀리언스는 여러 가지 농도로, 그리고 차파렐 추출물, 아데노포라 추출물 및 루피너스 추출물은 각각 0.1% 농도로 12시간 처리하여 배양 후 배지를 버리고 PBS로 세척하고 자외선 조사기로 UVB 60mJ을 조사한 후 세포를 harvest 하여 세포수준에서의 DNA 손상을 측정하였다.The effect of inhibiting DNA damage caused by UV light in normal skin keratinocytes of cultured humans against the celions, chaparrel extracts, adenophora extracts and lupine extracts according to the present invention was tested by the comet assay. In cultured normal human keratinocytes, celions were treated at various concentrations, and chaparel extract, adenophora extract, and lupine extract were treated at 0.1% concentration for 12 hours, and then cultured and discarded PBS. The cells were harvested and irradiated with UVB 60mJ with an ultraviolet irradiator, and the cells were harvested to measure DNA damage at the cellular level.
핵양체 내에 DNA가닥 절단(strand breakage)이 있는 경우 전기영동하면 양극(+극) 쪽으로 이동되어 원래 구조로부터 확장된 꼬리(tail)의 형태를 보임으로써 전기영동 시 DNA의 손상을 쉽게 감지할 수 있다. 무작위로 선정된 50개 세포의 tail moment 값의 평균을 계산하여 특정 시료의 DNA손상 정도로 하였다.In the case of DNA strand breakage in nucleophiles, electrophoresis moves toward the anode (+ pole) to show a tail that extends from its original structure, making it easy to detect DNA damage during electrophoresis. . The mean of the tail moment values of 50 randomly selected cells was calculated to be the degree of DNA damage of a specific sample.
저해율 = [(자외선 조사 대조군 - 실험군)/자외선 조사 대조군]×100Inhibition rate = [(UV irradiation control-experimental group) / UV irradiation control] × 100
상기 식으로 저해율(%)을 계산하고 결과를 표 3에 정리하였다. Inhibition rate (%) was calculated by the above formula and the results are summarized in Table 3.
상기 표 3의 결과에서 볼 수 있듯이, 실시예에 따라 얻어진 장수 식물 혼합 추출물인 셀리언스는 0.0001% ~ 0.1% 농도에서 15.4 % 이상 20.1% 수준의 피부 세포 DNA 손상 억제효과를 보였으며, 한편 0.1% 농도에서 차파렐 추출물은 6.2%, 아데노포라 추출물은 3.5%, 루피너스 추출물은 5.0%의 저해율을 나타내어 장수 식물 혼합 추출물인 셀리언스는 0.1% 농도에서 5.4%의 상승효과가 있음을 알 수 있었다.As can be seen from the results of Table 3, the celery, which is a long-life plant mixed extract obtained according to the embodiment, showed a skin cell DNA damage inhibitory effect of 15.4% or more and 20.1% at a concentration of 0.0001% to 0.1%, while 0.1% At the concentrations, Chaparel extract was 6.2%, Adenophora extract 3.5%, Lupine extract 5.0% inhibition rate was found that the longevity plant mixture extract Celion has a synergistic effect of 5.4% at 0.1% concentration.
<< 실험예Experimental Example 4> 피부 세포 DNA 손상억제 평가(in 4> Evaluation of skin cell DNA damage inhibition (in vivovivo ))
피부 세포에 대한 DNA 손상억제 효과가 우수한 셀리언스, 차파랄 추출물, 아데노포라 추출물, 루피너스 추출물에 대하여 살아있는 피부에 대한 효과를 무모생쥐(hairless mouse)를 이용하여 자외선에 의한 피부 DNA 손상 억제 효과를 comet assay법으로 시험하였다. Inhibition of skin DNA damage caused by UV light using hairless mouse for celine, chaparal extract, adenophora extract, and lupine extract with excellent DNA damage suppression effect on skin cells Was tested by the comet assay.
무모생쥐의 등 부위에 셀리언스를 여러 가지 농도로 6 일간 도포한 후, 자외선 조사기로 UVB 1J을 조사한다. 피부를 적출하여 세포를 분리하고 DNA 손상을 측정하였다. 핵양체 내에 DNA가닥 절단(strand breakage)이 있는 경우 전기영동하면, 양극(+극) 쪽으로 이동되어 원래 구조로부터 확장된 꼬리(tail)의 형태를 보임으로써 전기영동 시 DNA의 손상을 쉽게 감지할 수 있다. 무작위로 선정된 50개 세포의 tail moment 값의 평균을 계산하여 특정 시료의 DNA손상 정도로 하였다. 그 결과를 도 1에 정리하였다.After applying celine at various concentrations to the back of the hairless mice for 6 days, UVB 1J is irradiated with an ultraviolet irradiator. Skin was isolated to isolate cells and measure DNA damage. Electrophoresis in the presence of DNA strand breakage in a nucleophile allows for easy detection of DNA damage during electrophoresis by moving towards the anode (+ pole) to show a tail that extends from its original structure. have. The mean of the tail moment values of 50 randomly selected cells was calculated to be the degree of DNA damage of a specific sample. The results are summarized in FIG.
저해율 = [(자외선 조사 대조군 - 실험군)/자외선 조사 대조군]×100Inhibition rate = [(UV irradiation control-experimental group) / UV irradiation control] × 100
상기 식으로 저해율(%)을 계산하고 결과를 표 4 에 정리하였다. Inhibition rate (%) was calculated by the above formula and the results are summarized in Table 4.
도 1 및 상기 표 4에서 볼 수 있듯이, 장수 식물 혼합 추출물인 셀리언스는 살아있는 무모생쥐의 피부에서도 자외선에 의한 피부 세포 내 DNA의 손상도 매우 효과적으로 막아 주는 것을 알 수 있다. 이는 셀리언스가 배양된 세포뿐만 아니라 살아있는 생물의 피부에 도포하여도 강력한 DNA 손상방지 효과를 나타낼 수 있음을 의미한다.As can be seen in Figure 1 and Table 4, the longevity plant mixed extract celions can be seen that even in the skin of live hairless mice very effectively prevent DNA damage in the skin cells by ultraviolet light. This means that the celions can be applied not only to cultured cells but also to the skin of living organisms, which can show strong DNA damage prevention effect.
<< 실험예Experimental Example 5> 세포증식 효과 5> cell proliferation effect
본 발명에 따른 셀리언스의 세포증식 효과를 측정하기 위한 실험을 실시하였다. 먼저 사람의 섬유아세포(human fibroblast cell)를 96웰 플레이트(96 well plate, Corning사)에 접종하여 배양한 다음, 셀리언스를 10%, 1%, 0.01% 및 0.001% 농도로 2일간 적용하고, MTT 시험 방법을 수행하여 세포증식을 평가하였다. 대조군으로는 혈청(serum) 1 %를 부가하여 사용하였으며, 비교군으로는 무혈청 배지를 사용하였다. 그 결과를 표 5에 나타낸다.Experiments were performed to determine the cell proliferation effect of celence according to the present invention. First, human fibroblast cells were inoculated into 96 well plates (Corning, Inc.), and then incubated. , MTT test method was performed to evaluate cell proliferation. Serum 1% was added as a control and serum-free medium was used as a comparative group. The results are shown in Table 5.
상기 표 5의 결과에서 보듯이, 본 발명에 따른 장수 식물 혼합 추출물인 셀리언스는 세포증식 효과가 매우 우수하다는 있다는 것을 알 수 있다.As shown in the results of Table 5, it can be seen that the celery, which is a longevity plant mixed extract according to the present invention, has a very good cell proliferation effect.
<< 실시예Example 3 ~ 5> 및 < 3 to 5> and < 비교예Comparative example 1 ~ 3> 1 to 3
하기 표 6의 조성에 따라 실시예 3 내지 5는 일반적인 방법으로 실시예 1에서 제조한 장수 식물 혼합 추출물 셀리언스를 배합하였다.According to the composition of Table 6, Examples 3 to 5 were combined with the longevity plant mixture extract Celion prepared in Example 1 in a general manner.
비교예 1 내지 3은 각각 차파랄 추출물, 아데노포라 추출물, 루피너스 추출물을 함유한 비교 시료로, 다음 방법에 따라 수중유형 유화물을 제조하였다: 먼저 수상과 유상을 각각 70 내지 75 ℃로 가열 용해한 후 유상을 수상에 첨가하고 호모믹서 6000 rpm 조건하에서 10분간 유화시킨 후 30 ℃까지 냉각하여 수중유형 유화물을 제조하였다.Comparative Examples 1 to 3 are comparative samples containing chaparal extract, adenophora extract, and lupine extract, respectively, to prepare an oil-in-water emulsion according to the following method: The oil phase was added to the aqueous phase, emulsified under homomixer under 6000 rpm for 10 minutes, and cooled to 30 ° C to prepare an oil-in-water emulsion.
하기 표 6에서 사용된 수치의 단위는 중량%이다.Units of numerical values used in Table 6 below are in weight percent.
상기 표 6에서, 카르복시비닐폴리머로는 미국 비.에프.굿리치(B.F.Goodrich)사의 상품인 카보폴 941(Carbopol 941)을 1 중량% 수용액으로 사용하였다. 모노스테아린산소르비탄으로는 영국 아이시아이 (ICI)사의 상품명 아라셀 60(Arlacel 60)으로 시판되는 것을 사용하였고, 이소세틸옥타노에이트는 일본 니혼 코교 알코올(Nihon Kokyu Alcohol)사의 상품인 아이시이에이치(ICEH)를 사용하였다.In Table 6, Carbopol 941 (Carbopol 941), a product of B.F.Goodrich, was used as a 1% by weight aqueous solution. The monostearate sorbitan was used under the trade name Alascel 60 of IIC Co., Ltd., UK, and isocetyloctanoate was manufactured by Nihon Kokyu Alcohol Co., Ltd. Was used.
<< 실험예Experimental Example 6> 미세 6> fine 피부결Skin texture 증가 효과 Increase effect
실시예 3~5 및 비교예 1~3에 따라 제조된 제품들의 미세 피부결 증가 효과를 다음과 같이 평가 하였다. 즉, 30세 에서 45세 여성 20명을 대상으로 매일 2회씩 각 시료를 팔의 하박부 2.5㎝×2.5㎝ 의 4개 부위에 균일하게 2주간 도포하였다. 2주 후 시료 적용 후전, 후희 피부 주형(replica)을 영상분석법으로 미세 피부결의 양을 측정하여 평가 하였다. 영상분석법의 결과는 다음 표 7에 시료적용 전에 대한 시료적용 후의 미세 피부결의 양으로 나타내었다.The effects of increasing the fine skin texture of the products prepared according to Examples 3 to 5 and Comparative Examples 1 to 3 were evaluated as follows. That is, each sample was applied twice a day to 20 women aged 30 to 45 years, evenly applied to four sites of 2.5 cm × 2.5 cm in the lower arm of the arm for 2 weeks. Two weeks later, after application of the sample, the skin skin replica was evaluated by measuring the amount of fine skin texture by image analysis. The results of the image analysis are shown in Table 7 as the amount of fine skin texture after application of the sample to the application of the sample.
상기 표 7의 영상분석에 의한 미세 피부결의 측정 결과에서 볼 수 있듯이, 미세 피부결은 깊이는 대조군의 경우 2.50 %가 증가한 반면, 장수 식물 혼합 추출물인 셀리언스을 첨가한 실시예 3 내지 5는 식물 추출물 농도에 따라 5.4 내지 12.4 %가 증가되어 대조군에 비해 유효한 미세 피부결 증가효과를 보였다.As can be seen from the measurement results of the fine skin texture by the image analysis of Table 7, the depth of the fine skin texture increased by 2.50% in the case of the control group, while the plants of Examples 3 to 5 to which the mixture of longevity plant mixed extract was added 5.4 to 12.4% was increased according to the extract concentration, showing an effective fine skin texture increase effect compared to the control.
한편, 차파랄 추출물은 3.0 % 증가, 및 아데노포라 추출물은 2.8 % 증가로 대조군에 비해 유의차가 거의 없으며, 루피너스 추출물은 4.0 % 증가를 나타내었다.On the other hand, chaparal extract showed a 3.0% increase, and adenophora extract showed a 2.8% increase, showing little difference compared to the control, and the lupine extract showed a 4.0% increase.
이에 따라 장수 식물 추출물인 셀리언스을 함유한 제제에서는 피부 개선 효과가 있음을 확인 하였으며, 그밖에 피부 부작용이나 피부 악화는 관찰되지 않았다.Accordingly, it was confirmed that the preparation containing celion, a long-lived plant extract, has an effect on skin improvement, and no other side effects or skin deterioration were observed.
<< 제조예Production Example 1> 화장수 1> lotion
표 8의 처방으로 통상의 화장수 제조방법에 따라 본 발명의 셀리언스를 함유하는 화장수를 제조하였다.The lotion containing the celence of the present invention was manufactured according to the conventional lotion preparation method by the prescription of Table 8.
<< 제조예Production Example 2> 에센스 2> essence
표 9의 처방으로 통상의 에센스 제조방법에 따라 본 발명의 셀리언스를 함유하는 에센스를 제조하였다.The essence containing the celence of this invention was prepared according to the conventional essence manufacturing method by the prescription of Table 9.
<< 제조예Production Example 3> 로션 3> lotion
표 10의 처방으로 통상의 로션 제조방법에 따라 본 발명의 셀리언스를 함유하는 로션을 제조하였다. The lotion containing celence of this invention was prepared according to the conventional lotion manufacturing method by the prescription of Table 10.
<< 제조예Production Example 4> 크림 4> cream
표 11의 처방으로 통상의 크림 제조방법에 따라 본 발명의 셀리언스를 함유하는 크림을 제조하였다.In the formulation of Table 11, according to the conventional cream preparation method, a cream containing celence of the present invention was prepared.
<< 제조예Production Example 5> 젤 5> gel
표 12의 처방으로 통상의 젤 제조방법에 따라 본 발명의 셀리언스를 함유하는 젤을 제조하였다.In the formulation of Table 12, according to the conventional gel preparation method, a gel containing celence of the present invention was prepared.
이상에서 살펴 본 바와 같이, 상기 장수 식물 혼합 추출물인 셀리언스를 함유하는 본 발명의 화장료 조성물은 피부 세포 DNA 손상억제, 세포활성 효과 및 미세 피부결 증가 효과가 우수하면서, 피부 부작용이나 피부 악화를 유발하지 않는 장점이 있다.As described above, the cosmetic composition of the present invention containing celinus, which is a mixed extract of the longevity plant, is excellent in inhibiting skin cell DNA damage, improving cell activity, and increasing fine skin texture, while improving skin side effects and skin deterioration. There is an advantage that does not cause.
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