KR20070113618A - 양송이 균사체를 배양하는 방법 및 양송이 균사체 배양용배지 - Google Patents

양송이 균사체를 배양하는 방법 및 양송이 균사체 배양용배지 Download PDF

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Abstract

본 발명은 사탕수수 원당을 포함하는 액체 배지 중에서 양송이 (Agaricus bisporus) 균사체 또는 포자를 배양하는 단계를 포함하는, 양송이 균사체를 배양하는 방법 및 그를 위한 배지를 제공한다.
양송이, 사탕수수 원당

Description

양송이 균사체를 배양하는 방법 및 양송이 균사체 배양용 배지{A method for culturing Agaricus bisporus mycellium and a medium for culturing the same}
도 1은 본 발명의 방법에 사용된 양송이 균사체의 전자 현미경 사진을 나타내는 도면이다.
도 2는 배양 온도에 따른 양송이 균사체의 생육 정도를 나타내는 도면이다.
도 3은 배지의 초기 pH에 따른 양송이 균사체 생육 정도를 나타내는 도면이다.
도 4는 배양기간에 따른 균사체 생육 정도를 나타내는 도면이다.
도 5는 배지 중의 탄소원의 종류에 따른 양송이 균체의 생육 정도를 나타내는 도면이다.
도 6은 탄소원으로서 사탕수수 원당을 사용하는 경우, 그 농도에 따른 양송이 균사체의 생육 정도를 나타내는 도면이다.
도 7은 배지 중의 질소원의 종류에 따른 양송이 균사체의 생육 정도를 나타내는 도면이다.
도 8은 질소원으로서 질산나트륨을 사용하는 경우, 그 농도에 따른 양송이 균사체의 생육 정도를 나타내는 도면이다.
도 9는 생물반응기에서 양송이 균사체를 배양하는 경우, 생물반응기의 교반 속도에 따른 양송이 균사체 생육의 정도를 나타내는 도면이다.
본 발명은 양송이 균사체를 액체 배양하는 방법에 관한 것이다.
양송이 버섯 (Agaricus bisporus)은 주름버섯목 주름버섯과에 속하는 버섯이다. 종래 양송이 균사체를 배양하는 방법으로는 고체 배양법과 액체 배양법이 알려져 있었다. 고체 배양법은 재배시간이 길고, 오염이 발생할 확률이 높고, 배양이 완료된 후 균사체만을 회수하는 작업을 자동화하기가 어렵다는 단점이 있다.
양송이 균사체의 액체 배양법은 고체 배양법에 비하여 오염가능성이 적고, 비교적 조밀한 공간에서 짧은 시간 동안에 대량 배양할 수 있다는 장점이 있다. Hunfeid 등의 논문(Mycology 44: 605-611, 1952)에는 양송이 균사체를 진탕 및 산소 공급 조건하에서 액체 배양하는 방법이 개시되어 있다. 또한, Fraser 등의 논문(Mushroom Sci. 3:190-200, 1956)에는 효모 추출물 및 카제인이 양송이 균사체의 생육을 촉진한다는 내용이 개시되어 있다. 또한, 한국특허공개 제1997-0027295호에는 탄소원으로서, 설탕, 맥아당, 과당, 포도당, 자당, 맥아추출물, 및 물엿으로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 또는 둘 이상을 사용하여 담자균류를 액체 종균 배양하는 방법이 개시되어 있다. 그러나, 배양기간이 비교적 길고, 단당류 및 이당류를 사용하기 때문에 비용이 많이 소요되어 대량 배양에는 적합하지 않다는 단점이 있다.
이상과 같은 종래 기술에 의하더라도, 비용이 저렴하여 대량 배양에 유리하고, 배양 시간이 짧아 오염가능성이 적고, 균체 생산성이 높은 배지 성분을 이용하여 양송이 균체를 배양하는 방법이 여전히 요구되고 있다.
본 발명의 목적은 효율적으로 양송이 균사체를 배양할 수 있는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 양송이 균사체 배양용 배지를 제공하는 것이다.
본 발명은 사탕수수 원당을 포함하는 액체 배지에서 양송이 (Agaricus bisporus) 균사체 또는 포자를 배양하는 단계를 포함하는, 양송이 균사체를 배양하는 방법을 제공한다.
본 발명의 방법에 있어서, 상기 사탕수수 원당은 10g/ℓ 내지 30g/ℓ의 농도로 포함되는 것일 수 있다. 상기 사탕수수 원당이 10g/ℓ 미만이면, 양송이 균사체의 성장이 이루어지지 않고, 30g/ℓ를 초과하는 경우 삼투압이 높고 비경제적이기 때문에 상기 농도 범위에서 사용하는 것이 바람직하다. 상기 사탕수수 원당은 주로 탄소원 및 성장인자원으로써 사용된다. 본 발명에 있어서, "사탕수수 원당"이란 사탕수수의 즙을 짜서 농축하고 결정화한 것을 말하며, 직접적으로 제조하거나 상업적으로 구입하여 사용할 수 있다.
본 발명의 방법에 있어서, 상기 배지에는 상기 사탕수수 원당 외에 질소원, 인산 및 미량원소 등의 영양소를 더 포함할 수 있다. 질소원으로는, 유기 질소 및 무기질소원이 포함될 수 있으며, 바람직하게는 소이톤 및 질산나트륨이며, 더욱 바람직하게는 질산나트륨이다. 상기 질산나트륨은 1g/ℓ 내지 10g/ℓ의 농도로 포함되는 것일 수 있다. 질산나트륨은 양송이 균사체의 의한 흡수율이 우수하고, 비용이 저렴하며, 다른 암모니아에 기초한 질소원을 사용하는 경우 배지의 pH가 변화하는 단점이 있는 반면, 질산나트륨은 pH를 일정하게 유지시키는 역할을 한다. 질산나트륨이 1g/ℓ 미만이면, 균사체의 생육에 필요한 질소원이 부족하게 되고, 10g/ℓ을 초과하는 경우, 균사체에 성장에 큰 차이는 없으므로 1g/ℓ 내지 10g/ℓ의 농도로 사용하는 것이 바람직하다.
본 발명의 방법에 있어서, 상기 배지는 효모 추출물을 1g/ℓ 내지 10g/ℓ의 농도로 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 방법에 있어서, 상기 배양은 상기 배지의 초기 pH는 6.0 내지 6.5이고, 배양 온도는 25℃ 내지 28℃이고, 교반 속도 150rpm 내지 250rpm의 범위에서 배양 용기를 교반하면서 수행하는 것일 수 있다.
본 발명의 방법에 사용되는 양송이 균사체는 접종되기 전에, 블렌더를 사용하여 분산시킨 것일 수 있다. 접종원을 배양하는 중에 균사체의 성장에 의하여 큰 덩어리화를 이루게 되어 산소 공급이 어려워지는 것을 방지하기 위하여 작은 입자의 형태로 분산시킬 필요가 있다.
상기 배양 단계는 원하는 양의 균사체를 얻을 수 있는 기간 동안 수행될 수 있다. 예를 들면, 배양기간은 보통 3일 내지 10일 동안 수행되는 것일 수 있으며, 바람직하게는, 3일 내지 6일 동안 수행되는 것이다. 본 발명에 의하는 경우, 3일 내지 6일의 배양기간에서 최대 수율로 양송이 균사체를 얻을 수 있으므로, 14일 내지 15일 동안 배양하여 원하는 최대 수율로 양송이 균사체를 얻을 수 있었던 종래 기술에 비하여, 배양기간이 단축될 수 있다.
본 발명은 또한, 감자포도당액 15g/ℓ 내지 25g/ℓ, 효모 추출물 1g/ℓ 내지 10g/ℓ, 맥아 추출물 2g/ℓ 내지 5g/ℓ, 및 소이톤 2g/ℓ 내지 5g/ℓ을 포함하는 액체 배지 중에서 상기 양송이 균사체 또는 포자를 전배양하는 단계를 더 포함할 수 있다.
전배양이란 양송이 균사체를 본 배양하기 전에, 원균으로부터 본 배양에 사용할 종균을 얻기 위하여 미리 배양하는 것을 말한다. 원균이란, 종균을 제조하는데 있어서 그 종의 기원이 되는 균주을 말한다. 종균은 필요로 하는 목적 종만을 순수하게 배양한 증식체를 말하며, 접종원이란 배지에 옮겨 놓을 균주로서 증식용 종균을 말한다.
상기 전배양은, 상기 배지의 초기 pH는 6.0 내지 6.5이고, 배양 온도는 25℃ 내지 28℃이고, 교반 속도 150rpm 내지 250rpm의 범위에서 배양 용기를 교반하면서 배양하는 것일 수 있다. 얻어진 균사체는 블렌더를 사용하여 분산될 수 있다. 배양 중에 균사체의 성장에 의하여 큰 덩어리를 형성하게 되어 산소 공급이 어려워지는 것을 방지하기 위하여 작은 입자의 형태로 분산시킬 필요가 있다. 상기 전배양은 원하는 양의 증식용 종균을 얻을 때까지 배양할 수 있으나, 보통 3일 내지 4일 동안 배양하는 것이 바람직하다.
본 발명은 또한, 양송이 균사체 배양용 배지를 제공한다. 상기 배지는 상기 사탕수수 원당을 포함하며, 바람직하게는, 사탕수수 원당을 10g/ℓ 내지 30g/ℓ의 농도로 포함하는 것이다. 본 발명의 배지에는 질소원으로서 질산나트륨을 더 포함할 수있다. 바람직하게는, 상기 배지는 상기 질산나트륨은 1g/ℓ 내지 10g/ℓ의 농도로 포함하는 것일 수 있다. 또한 본 발명의 배지는 1g/ℓ 내지 10g/ℓ의 농도의 효모 추출물을 더 포함할 수 있다. 본 발명의 배지의 pH는 바람직하게는, 초기 pH는 6.0 내지 6.5이다.
본 발명의 배지의 일 구체예는, 사탕수수 원당을 15g/ℓ 내지 25g/ℓ 및 질산나트륨은 5g/ℓ 내지 10g/ℓ를 포함하는 것이며, 더욱 바람직하게는 상기 배지는 효모 추출물을 5g/ℓ 내지 10g/ℓ를 더 포함하는 것이다.
본 발명은 또한, 감자포도당액 15g/ℓ 내지 25g/ℓ, 효모 추출물 1g/ℓ 내지 10g/ℓ, 맥아 추출물 2g/ℓ 내지 5g/ℓ, 및 소이톤 2g/ℓ 내지 5g/ℓ을 포함하는 양송이 균사체 또는 포자 전배양용 배지를 제공한다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예
실시예 1: 균주의 분리 및 접종원의 준비
본 발명의 균주는 양송이 버섯 (Agaricus bisporus)의 조직배양을 통하여 획득하였으며, 감자 포도당 한천 배지 (Potato Dextrose Agar 배지: 이하 "PDA" 배지 라고도 한다)에서 25℃에서 3주 동안 배양한 다음, 얻어진 양송이 균사체를 4℃에서 보존하였다.
도 1은 본 발명의 방법에 사용된 양송이 균사체의 전자 현미경 사진을 나타내는 도면이다.
접종원의 준비는, 고체 배양을 통하여 상기 원균으로부터 접종원을 준비하는 경우, 냉장 보관된 PDA 평판 배지의 중앙부로부터 균사체의 일부를 분리하여 고체 배지 상에 접종한 후, 25℃의 항온기에서 배양하여 얻었다. 액체 배양을 통하여 상기 원균으로부터 접종원을 준비하는 경우, 500ml 삼각플라스크에 감자포도당액 (Potato Dextrose Broth: PDB) 20g/ℓ, 효모추출물 10g/ℓ, 맥아추출물 5g/ℓ, 및 소이톤 5g/ℓ으로 구성된 PDBYMS 배지 100ml를 121℃에서 15분 동안 고압 멸균한 다음, 여기에 균사체를 접종하고 25℃에서 200rpm으로 교반하면서 배양하였다. 이하의 실시예에서 특별히 언급된 성분 이외의 나머지 배지 성분은 증류수이다.
실시예 2: 종균 전배양
종균 전배양을 위한 최적 조건을 조사하기 위하여, 표 1에 나타낸 바와 같은 조성을 갖는 배지를 제조하였다. 제조된 배지를 500ml 삼각플라스크에 각각 100㎖씩을 넣고, 121℃에서 15분 동안 고압 멸균한 다음, 무균상태로 균질화된 접종원을 1%(v/v) 접종하고, 25℃의 항온기에서 200rpm으로 4일 동안 진탕배양하였다. 균사체 성장 정도를 측정하기 위하여, 배양액을 거즈로 여과한 한 후, 초원심분리기로 1,500rpm에서 10분 동안 여과 분리한 후 60℃ 건조 오븐에서 24시간 동안 건조시켜 중량을 측정하였다.
표 1.
실험군 PDB(g/ℓ) 효모 추출물 (g/ℓ) 맥아 추출물 (g/ℓ) 소이톤 (g/ℓ) 중량 (g/100ml) 건조중량 (g/100ml)
P1 0 10 5 5 6.49 0.46
P2 5 10 5 5 7.50 0.65
P3 10 10 5 5 8.35 0.93
P4 15 10 5 5 7.65 1.01
P5 20 10 5 5 7.95 1.06
P6 24 10 5 5 8.43 1.53
Y1 24 0 5 5 7.53 0.85
Y2 24 3 5 5 7.07 0.95
Y3 24 5 5 5 6.87 0.71
Y4 24 10 5 5 8.45 1.14
M1 24 10 0 5 5.88 0.79
M2 24 10 0.5 5 5.91 0.76
M3 24 10 1 5 6.37 0.7
M4 24 10 2 5 6.66 0.94
M5 24 10 5 5 6.57 0.67
S1 24 10 5 0 6.50 0.63
S2 24 10 5 0.5 6.72 0.74
S3 24 10 5 1 6.38 0.74
S4 24 10 5 2 6.58 0.78
S5 24 10 5 5 6.94 0.71
표 1에 나타낸 바와 같이, PDB 24 g/ℓ, 효모 추출물 10 g/ℓ, 맥아 추출물 2g/ℓ 내지 5g/ℓ 및 소이톤 2g/ℓ 내지 5g/ℓ를 포함하는 배지를 사용한 경우, 균사체의 성장이 가장 양호하였다.
따라서, 종균 배양을 위한 전배양용 배지는 PDB 24 g/ℓ, 효모 추출물 10 g/ℓ, 맥아 추출물 5g/ℓ 및 소이톤 5g/ℓ을 포함하는 배지를 사용하였다. 또한, 본 배양의 최적 조건을 설정하기 위한 배양의 기본 배지로서, PDB 24 g/ℓ, 효모 추출물 10 g/ℓ, 맥아 추출물 5g/ℓ 및 소이톤 5g/ℓ으로 구성된 PDBYMS 배지를 사용하였다.
상기와 같이 얻어진 종균은 블렌더를 사용하여, 양송이 균사체가 성장함에 따라 형성되는 덩어리를 분산시켰다. 본 실시예에 있어서, 상기 블렌더는 한국특허 공개 제1998-0072112호에 공개된 바와 같은 소형 믹서기의 형태를 갖는 것을 의미한다.
실시예 3: 최적 본 배양 조건의 설정
1. 최적 온도
양송이 균사체 생육을 위한 최적 배양 온도를 조사하기 위해 500㎖ 삼각플라스크에 상기 기본 배지를 100㎖ 넣고 121℃에서 15분간 고압 멸균한 후, 무균상태로 균질화된 접종원 1%(v/v)를 접종하여 25℃, 28℃, 30℃의 온도로 설정된 항온기에서 200rpm의 조건으로 4일간 진탕배양하면서 균사생장을 조사하였다.
도 2는 배양 온도에 따른 양송이 균사체의 생육정도를 나타내는 도면이다. 도 2에 나타낸 바와 같이, 28℃ 및 30℃에서 균사체 생장이 양호하였고, 특히 28℃에서 균사체 생장이 최대치를 나타냈다.
2. 최적 pH
양송이 균사체 생육을 위한 최적 초기 pH를 조사하기 위해 500㎖ 삼각플라스크에 상기 기본 배지를 100㎖ 넣고 인산과 50% 수산화나트륨(NaOH)으로 초기 pH를 4.0에서 9.0까지 0.5단위로 조절하여, 상기 배지를 121℃에서 15분간 고압 멸균한 후, 무균상태로 균질화된 접종원 1%(v/v)를 접종하여 25℃에서 200rpm의 조건으로 4일간 진탕배양하면서 균사생장을 조사하였다.
도 3은 배지의 초기 pH에 따른 양송이 균사체 생육 정도를 나타내는 도면이다. 도 3에 나타낸 바와 같이, pH 6.0에서 균사체 생장이 가장 양호한 것으로 나타났다.
3. 배양 기간
양송이 균사체 생육에 미치는 배양 기간의 영향을 조사하기 위하여 500㎖ 삼각플라스크에 상기 기본배지를 100㎖씩 분주하여 초기 pH를 6.0~6.5로 조절한 후, 121℃에서 15분간 고압 멸균한 후, 무균상태로 균질화된 접종원 1%(v/v)를 접종하여 25℃에서 200rpm의 조건으로 10일간 진탕배양하면서 균사생장을 조사하였다.
도 4는 배양기간에 따른 균사체 생육 정도를 나타내는 도면이다. 도 4에 나타낸 바와 같이, 균사체 생장은 배양 2일째까지는 완만한 증가를 보이다가 배양 3일 이후부터 빠르게 생육하는 대수기의 전형적인 형태를 나타냈다. 최대 균사체 량은 배양 9일째에 2.43g/100㎖인 것으로 나타났고, 그 이후에는 균사생장이 감소하는 경향을 나타냈다. 상기 결과로부터 배양 9일째와 균사량 차가 근소한 6일을 최적 배양기간으로 정하였다.
4. 탄소원 선발 및 최적 농도
본 배양을 위한 최적 배지 선정을 위해 상기 기본 배지를 변형하여 균사체의 생육을 조사하였다.
즉, 탄소원으로 PDB, 포도당, 및 사탕수수 원당 (sugar cane extract, CJ) 각20g/ℓ을 효모 추출물 10g/ℓ, 맥아 추출물 5g/ℓ 및 소이톤 5g/ℓ과 혼합하고, 배지의 pH를 6.0~6.5로 조절한 다음 500㎖ 삼각플라스크에 상기 배지를 100㎖씩 분주하여 121℃에서 15분간 고압 멸균하여 실험 배지를 준비하였다. 여기에 무균상태로 균질화된 접종원 1%(v/v)를 접종하고 25℃에서 200rpm의 조건으로 4일 동안 진탕배양하여 균사체 생장을 조사하였다.
도 5는 배지 중의 탄소원의 종류에 따른 양송이 균사체의 생육 정도를 나타내는 도면이다. 도 5에 나타낸 바와 같이, 탄소원으로서 사탕수수 원당을 이용할 때 가장 균사체 생장이 효율적인 것으로 나타났다.
다음으로, 최적 탄소원의 농도를 선정하기 위해 사탕수수 원당을 1g/ℓ, 5g/ℓ, 10g/ℓ, 15g/ℓ 및 20g/ℓ로 하고, 각 실험군에 효모추출물 10g/ℓ, 맥아추출물 5g/ℓ 및 소이톤 5g/ℓ을 혼합하고, 배지의 pH를 6.0~6.5로 조절한 다음 500㎖ 삼각플라스크에 상기 배지를 100㎖씩 분주하여 121℃에서 15분간 고압 멸균하여 배지를 준비하여 탄소원 선발 실험과 동일하게 균사체 Z생장을 조사하였다.
도 6은 탄소원으로서 사탕수수 원당을 사용하는 경우, 그 농도에 따른 양송이 균사체 생육의 정도를 나타내는 도면이다. 도 6에 나타낸 바와 같이, 사탕수수 원당의 농도가 10~20g/ℓ일 때 균사체 생장이 양호한 것으로 나타났다.
5. 질소원 선발 및 최적 농도
양송이 균사체 생육을 위한 최적 질소원 및 농도를 조사하기 위하여 PDBYMS 배지에 최적 탄소원인 사탕수수 원당을 20g/ℓ 농도로 첨가한 후, 질소원으로 질산나트륨 (sodium nitrate), 질산암모늄 (ammonium nitrate), 염화암모늄 (ammonium chloride), 황산암모늄(ammonium sulfate) 및 소이톤(소이톤)을 각 10g/ℓ씩 첨가하고 pH를 6.0~6.5로 조절한 다음 500㎖ 삼각플라스크에 상기 배지를 100㎖씩 분주하여 121℃에서 15분간 고압 멸균하여 배지를 준비하여 탄소원 선발 실험과 동일하게 균사체 생장을 조사하였다.
도 7은 배지 중의 질소원의 종류에 따른 양송이 균사체의 생육 정도를 나타 내는 도면이다. 도 7에 나타낸 바와 같이, 질소원으로서 소이톤을 사용할 때 가장 균사체 생장이 우수한 것으로 나타났고, 질산나트륨이 그 다음으로 나타났다. 경제적인 면까지 고려할 경우, 질산나트륨이 질소원으로서 가장 바람직한 것으로 여겨진다.
다음으로, 최적 질소원의 농도를 선정하기 위해 질산나트륨의 농도를 1g/ℓ, 3g/ℓ, 5g/ℓ, 7g/ℓ 및 10g/ℓ로 달리하여 상기 질소원 선발 실험과 동일하게 균사체 생장을 조사하였다.
도 8은 질소원으로서 질산나트륨을 사용하는 경우, 그 농도에 따른 양송이 균사체의 생육 정도를 나타내는 도면이다. 도 8에 나타낸 바와 같이, 질산나트륨의 농도가 10g/ℓ일 때 균사생장이 가장 양호한 것으로 나타났다. 추가적인 실험 결과, 질소원으로서 질산나트륨을 10g/ℓ의 농도로 포함하고, 여기에 효모추출물을 5g/ℓ의 농도로 포함시키는 경우, 균사체 생장이 최대로 나타났다.
실시예 4: 생물반응기에서의 양송이 균사체의 액체 배양 - 최적 임펠러 회전수
본 실시예에서는, 양송이 균사체를 대량으로 배양하기 위하여 생물반응기 중에서 교반하면서 양송이 균사체를 배양하였다.
생물반응기는 BIOFLO IIc Batch/Continuous Fermentor(New Brunsdwick Scientific.)를 이용하였다. 증류수 중에 사탕수수 원당 20g/ℓ, 질산나트륨 10g/ℓ 및 효모추출물 5g/ℓ를 포함하는 배지를 배양 배지로 하고, 상기 배지 2ℓ에 무균상태로 균질화된 접종원 1%(v/v)를 접종하여 공기 주입량 0.25v/v/m의 조건에서 생물반응기의 임펠러 회전수를 각각 150rpm, 200rpm, 250rpm 및 300rpm으로 설정하여 4일간 배양한 후 생체중량을 측정하였다.
도 9는 생물반응기에서 양송이 균사체를 배양하는 경우, 임펠러 회전수에 따른 양송이 균사체 생육의 정도를 나타내는 도면이다. 도 9에 나타낸 바와 같이, 임펠러회전수가 200rpm인 경우 최대 균사체를 얻을 수 있었다.
본 발명에 따른 양송이 균사체를 배양하는 방법에 의하면, 많은 양의 양송이 균사체를 빠른 시일 내에 효율적으로 배양할 수 있다.

Claims (13)

  1. 사탕수수 원당을 포함하는 액체 배지 중에서 양송이 (Agaricus bisporus) 균사체 또는 포자를 배양하는 단계를 포함하는, 양송이 균사체를 배양하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 사탕수수 원당은 10g/ℓ 내지 30g/ℓ의 농도로 포함되는 것인 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 배지는 질소원으로서 질산나트륨을 더 포함하는 것인 방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 질산나트륨은 1g/ℓ 내지 10g/ℓ의 농도로 포함되는 것인 방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 배지는 효모 추출물을 1g/ℓ 내지 10g/ℓ의 농도로 포함되는 것인 방법.
  6. 제1항에 있어서, 상기 배지의 초기 pH는 6.0 내지 6.5이고, 배양 온도는 25℃ 내지 28℃이고, 배양 용기의 교반 속도 150rpm 내지 250rpm의 범위에서 배양 용기를 교반하면서 배양하는 것인 방법.
  7. 제1항에 있어서, 상기 양송이 균사체는 블렌더를 사용하여 분산된 것인 방법.
  8. 제1항에 있어서, 감자포도당액 15g/ℓ 내지 25g/ℓ, 효모 추출물 1g/ℓ 내지 10g/ℓ, 맥아 추출물 2g/ℓ 내지 5g/ℓ, 및 소이톤 2g/ℓ 내지 5g/ℓ을 포함하는 액체 배지 중에서 상기 양송이 균사체 또는 포자를 전배양하여 종균을 준비하는 단계를 더 포함하는 방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 배지의 초기 pH는 6.0 내지 6.5이고, 배양 온도는 25℃ 내지 28℃이고, 배양 용기의 교반 속도 150rpm 내지 250rpm의 범위에서 배양 용기를 교반하면서 배양하는 것인 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 전배양된 종균을 블렌더를 사용하여 분산시키는 단계를 더 포함하는 방법.
  11. 사탕수수 원당 10g/ℓ 내지 30g/ℓ 및 질산나트륨 1g/ℓ 내지 10g/ℓ를 포함하는 양송이 균사체 배양용 배지.
  12. 제11항에 있어서, 상기 배지는 효모 추출물을 1g/ℓ 내지 10g/ℓ를 더 포함 하는 배지.
  13. 감자포도당액 15g/ℓ 내지 25g/ℓ, 효모 추출물 1g/ℓ 내지 10g/ℓ, 맥아 추출물 2g/ℓ 내지 5g/ℓ, 및 소이톤 2g/ℓ 내지 5g/ℓ을 포함하는 양송이 균사체 또는 포자 전배양용 배지.
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