CN106906148A - 一种球孢白僵菌的培养基、球孢白僵菌的培养方法 - Google Patents

一种球孢白僵菌的培养基、球孢白僵菌的培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种球孢白僵菌的培养基、球孢白僵菌的培养方法，所述培养基包括液体培养基和固体培养基，所述液体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖5‑15份、酵母粉2‑8份、马铃薯汁3‑10份、蛋白胨5‑20份、蚕粉5‑10份、硫酸二氢钾1‑5份、头孢霉素1‑5份、无菌水20‑80份；所述固体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖5‑15份、玉米粉5‑15份、蚕粉5‑10份、乳糖10‑20份、麦麸10‑20份、头孢霉素1‑5份。通过本申请所述的培养基得到的球孢白僵菌分生孢子具有较高的侵染寄主昆虫的毒力，杂菌污染少，成功率高，繁殖周期缩短，球孢白僵菌分生孢子的质量稳定。

Description

一种球孢白僵菌的培养基、球孢白僵菌的培养方法
技术领域
本发明涉及微生物培养技术领域，具体涉及一种球孢白僵菌的培养基、球孢白僵菌的培养方法。
背景技术
白僵菌是一种子囊菌类的虫生真菌，主要种类包括球孢白僵菌和布氏白僵菌等，常通过无性繁殖生成分生孢子，菌丝有横隔有分枝。白僵菌可以侵入6个目15科200多种昆虫、螨类的虫体内大量繁殖，同时产生白僵素(非核糖体多肽类毒素)、卵孢霉素(苯醌类毒素)和草酸钙结晶，这些物质可引起昆虫中毒，打乱新陈代谢以致死亡。其中，球孢白僵菌为子囊菌类的真菌，可工业化培养生产，人们利用其产生的分子孢子可加工成微生物杀虫剂；中药白僵蚕也是基于白僵菌的以上特性产生的，昆虫家蚕的幼虫在未吐丝前，因感染白僵菌而发病致死，虫体僵化即为白僵蚕。
通过培养球孢白僵菌，可以实现工业化生产微生物杀虫剂，也可以通过球孢白僵菌侵染家蚕得到工业化的白僵蚕产品，因此，球孢白僵菌的培养基成分配比，培养方法对球孢白僵菌产量和质量非常重要。现有的球孢白僵菌培养基的成分比较单一，对促进球孢白僵菌的生长效果不佳，针对球孢白僵菌的生长过程进行的设计较少，在培养过程中易受杂菌污染，因此，得到的球孢白僵菌分生孢子的质量不稳定，毒力较弱，繁殖周期较长。
发明内容
有鉴于此，本申请提供一种球孢白僵菌的培养基、球孢白僵菌的培养方法，通过本申请所述的培养基得到的球孢白僵菌分生孢子具有较高的侵染寄主昆虫的毒力，杂菌污染少，成功率高，繁殖周期缩短，球孢白僵菌分生孢子的质量稳定。
为解决以上技术问题，本发明提供的技术方案是一种球孢白僵菌的培养基，所述培养基包括液体培养基和固体培养基，所述液体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖5-15份、酵母粉2-8份、马铃薯汁3-10份、蛋白胨5-20份、蚕粉5-10份、硫酸二氢钾1-5份、头孢霉素1-5份、无菌水20-80份；所述固体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖5-15份、玉米粉5-15份、蚕粉5-10份、乳糖10-20份、麦麸10-20份、头孢霉素1-5份。
优选的，所述液体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖8-12份、酵母粉4-6份、马铃薯汁6-9份、蛋白胨10-15份、蚕粉6-9份、硫酸二氢钾2-4份、头孢霉素1-4份、无菌水30-70份。
更为优选的，所述液体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖10份、酵母粉5份、马铃薯汁7份、蛋白胨12份、蚕粉8份、硫酸二氢钾3份、头孢霉素3份、无菌水60份。
优选的，所述液体培养基的组分按重量份数计还包括氯化钡1-5份、氯化钙1-5份。
更为优选的，所述液体培养基的组分按重量份数计还包括氯化钡2份、氯化钙3份。
优选的，所述固体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖8-12份、玉米粉8-12份、蚕粉6-9份、乳糖12-18份、麦麸12-18份、头孢霉素2-4份。
更为优选的，所述固体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖10份、玉米粉10份、蚕粉8份、乳糖15份、麦麸15份、头孢霉素3份。
优选的，所述固体培养基的组分按重量份数计还包括硫酸锌1-5份、氯化钡2-6份、硼酸2-8份。
更为优选的，所述固体培养基的组分按重量份数计还包括硫酸锌3份、氯化钡5份、硼酸5份。
本申请技术方案还提供一种球孢白僵菌的培养方法，具体为：将球孢白僵菌菌种接种于所述液体培养基中，在24-25℃、振荡条件下培养2-4天，得到球孢白僵菌菌丝体；将球孢白僵菌菌丝体接种于固体培养基中，在25-26℃条件下培养4-5天，得到球孢白僵菌分生孢子。
本申请技术方案所述的蚕粉是家蚕干燥粉碎后形成的粉体。
本申请技术方案提供了一种球孢白僵菌的培养基，针对于球孢白僵菌本身的特性，包括了液体培养基和固体培养基，其中液体培养基包括有葡萄糖、酵母粉、马铃薯汁、蛋白胨，为球孢白僵菌菌丝体生长提供了丰富的碳源和氮源，通过添加蚕粉，能够使培养基中培养的球孢白僵菌保持侵染寄主昆虫毒力，通过添加硫酸二氢钾、头孢霉素，能够避免杂菌生成污染，且不会影响球孢白僵菌菌丝体的生长，此外还添加了氯化钡和氯化钙，为菌丝生长和产孢提供钡元素和钙元素，促进菌丝生长和产孢；其中固体培养基中包括有葡萄糖、玉米粉、乳糖，为球孢白僵菌菌丝体生长和产孢提供丰富的碳源和氮源，此外，玉米粉和麦麸具有疏松质地，具有较好的保湿性和透气性，提供湿润和透气的环境，有利于球孢白僵菌菌丝体的快速繁殖和产孢，添加的蚕粉保证了球孢白僵菌侵染寄主昆虫的毒力，添加的头孢霉素能够避免杂菌生成污染。通过将球孢白僵菌菌种接种于上述的液体培养基中，在24-25℃、振荡条件下培养2-4天，得到球孢白僵菌菌丝体；将球孢白僵菌菌丝体接种于固体培养基中，在25-26℃条件下培养4-5天，得到球孢白僵菌分生孢子。通过本申请所述的培养基得到的球孢白僵菌分生孢子具有较高的侵染寄主昆虫的毒力，杂菌污染少，成功率高，繁殖周期缩短，球孢白僵菌分生孢子的质量稳定。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1
本实施例所述的一种球孢白僵菌的培养基，包括液体培养基和固体培养基，其中液体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖10份、酵母粉5份、马铃薯汁7份、蛋白胨12份、蚕粉8份、硫酸二氢钾3份、头孢霉素3份、无菌水60份；固体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖10份、玉米粉10份、蚕粉8份、乳糖15份、麦麸15份、头孢霉素3份。
球孢白僵菌培养：将球孢白僵菌菌种接种于所述液体培养基中，在24℃、振荡条件下培养3天，得到球孢白僵菌菌丝体；将球孢白僵菌菌丝体接种于固体培养基中，在26℃条件下培养5天，得到球孢白僵菌分生孢子。
本实施例中，采用本申请所述的培养基，得到的白僵菌产孢量为7.1×109个/g固体培养基，孢子萌发率达96％。
实施例2
本实施例所述的一种球孢白僵菌的培养基，包括液体培养基和固体培养基，其中液体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖5份、酵母粉2份、马铃薯汁3份、蛋白胨5份、蚕粉5份、硫酸二氢钾1份、头孢霉素1份、无菌水20份；固体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖5份、玉米粉5份、蚕粉5份、乳糖10份、麦麸10份、头孢霉素1份。
球孢白僵菌培养：将球孢白僵菌菌种接种于所述液体培养基中，在25℃、振荡条件下培养2天，得到球孢白僵菌菌丝体；将球孢白僵菌菌丝体接种于固体培养基中，在25℃条件下培养4天，得到球孢白僵菌分生孢子。
本实施例中，采用本申请所述的培养基，得到的白僵菌产孢量为6.9×109个/g固体培养基，孢子萌发率达96％。
实施例3
本实施例所述的一种球孢白僵菌的培养基，包括液体培养基和固体培养基，其中液体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖15份、酵母粉8份、马铃薯汁10份、蛋白胨20份、蚕粉10份、硫酸二氢钾5份、头孢霉素5份、无菌水80份；固体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖15份、玉米粉15份、蚕粉10份、乳糖20份、麦麸20份、头孢霉素5份。
球孢白僵菌培养：将球孢白僵菌菌种接种于所述液体培养基中，在24℃、振荡条件下培养4天，得到球孢白僵菌菌丝体；将球孢白僵菌菌丝体接种于固体培养基中，在26℃条件下培养5天，得到球孢白僵菌分生孢子。
本实施例中，采用本申请所述的培养基，得到的白僵菌产孢量为7.12×109个/g固体培养基，孢子萌发率达96％。
实施例4
本实施例所述的一种球孢白僵菌的培养基，包括液体培养基和固体培养基，其中液体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖8份、酵母粉4份、马铃薯汁6份、蛋白胨10份、蚕粉6份、硫酸二氢钾2份、头孢霉素1份、无菌水30份；固体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖8份、玉米粉8份、蚕粉6份、乳糖12份、麦麸12份、头孢霉素2份。
球孢白僵菌培养：将球孢白僵菌菌种接种于所述液体培养基中，在25℃、振荡条件下培养4天，得到球孢白僵菌菌丝体；将球孢白僵菌菌丝体接种于固体培养基中，在25℃条件下培养4天，得到球孢白僵菌分生孢子。
本实施例中，采用本申请所述的培养基，得到的白僵菌产孢量为7.0×109个/g固体培养基，孢子萌发率达96％。
实施例5
本实施例所述的一种球孢白僵菌的培养基，包括液体培养基和固体培养基，其中液体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖12份、酵母粉6份、马铃薯汁9份、蛋白胨15份、蚕粉9份、硫酸二氢钾4份、头孢霉素4份、无菌水70份；固体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖12份、玉米粉12份、蚕粉9份、乳糖18份、麦麸18份、头孢霉素4份。
球孢白僵菌培养：将球孢白僵菌菌种接种于所述液体培养基中，在25℃、振荡条件下培养2天，得到球孢白僵菌菌丝体；将球孢白僵菌菌丝体接种于固体培养基中，在26℃条件下培养5天，得到球孢白僵菌分生孢子。
本实施例中，采用本申请所述的培养基，得到的白僵菌产孢量为7.1×109个/g固体培养基，孢子萌发率达95％。
实施例6
本实施例所述的一种球孢白僵菌的培养基，包括液体培养基和固体培养基，其中液体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖10份、酵母粉5份、马铃薯汁7份、蛋白胨12份、蚕粉8份、硫酸二氢钾3份、头孢霉素3份、无菌水60份、氯化钡2份、氯化钙3份；固体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖10份、玉米粉10份、蚕粉8份、乳糖15份、麦麸15份、头孢霉素3份、硫酸锌3份、氯化钡5份、硼酸5份。
球孢白僵菌培养：将球孢白僵菌菌种接种于所述液体培养基中，在25℃、振荡条件下培养3天，得到球孢白僵菌菌丝体；将球孢白僵菌菌丝体接种于固体培养基中，在26℃条件下培养4天，得到球孢白僵菌分生孢子。
本实施例中，采用本申请所述的培养基，得到的白僵菌产孢量为7.06×109个/g固体培养基，孢子萌发率达95％。
实施例7
本实施例所述的一种球孢白僵菌的培养基，包括液体培养基和固体培养基，其中液体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖10份、酵母粉5份、马铃薯汁7份、蛋白胨12份、蚕粉8份、硫酸二氢钾3份、头孢霉素3份、无菌水60份、氯化钡1份、氯化钙1份；固体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖10份、玉米粉10份、蚕粉8份、乳糖15份、麦麸15份、头孢霉素3份、硫酸锌1份、氯化钡2份、硼酸2份。
球孢白僵菌培养：将球孢白僵菌菌种接种于所述液体培养基中，在24℃、振荡条件下培养3天，得到球孢白僵菌菌丝体；将球孢白僵菌菌丝体接种于固体培养基中，在26℃条件下培养5天，得到球孢白僵菌分生孢子。
本实施例中，采用本申请所述的培养基，得到的白僵菌产孢量为7.13×109个/g固体培养基，孢子萌发率达95％。
实施例8
本实施例所述的一种球孢白僵菌的培养基，包括液体培养基和固体培养基，其中液体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖10份、酵母粉5份、马铃薯汁7份、蛋白胨12份、蚕粉8份、硫酸二氢钾3份、头孢霉素3份、无菌水60份、氯化钡5份、氯化钙5份；固体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖10份、玉米粉10份、蚕粉8份、乳糖15份、麦麸15份、头孢霉素3份、硫酸锌5份、氯化钡6份、硼酸8份。
球孢白僵菌培养：将球孢白僵菌菌种接种于所述液体培养基中，在25℃、振荡条件下培养3天，得到球孢白僵菌菌丝体；将球孢白僵菌菌丝体接种于固体培养基中，在26℃条件下培养5天，得到球孢白僵菌分生孢子。
本实施例中，采用本申请所述的培养基，得到的白僵菌产孢量为7.03×109个/g固体培养基，孢子萌发率达96％。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种球孢白僵菌的培养基，其特征在于：所述培养基包括液体培养基和固体培养基，所述液体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖5-15份、酵母粉2-8份、马铃薯汁3-10份、蛋白胨5-20份、蚕粉5-10份、硫酸二氢钾1-5份、头孢霉素1-5份、无菌水20-80份；所述固体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖5-15份、玉米粉5-15份、蚕粉5-10份、乳糖10-20份、麦麸10-20份、头孢霉素1-5份。
2.根据权利要求1所述的一种球孢白僵菌的培养基，其特征在于：所述液体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖8-12份、酵母粉4-6份、马铃薯汁6-9份、蛋白胨10-15份、蚕粉6-9份、硫酸二氢钾2-4份、头孢霉素1-4份、无菌水30-70份。
3.根据权利要求2所述的一种球孢白僵菌的培养基，其特征在于：所述液体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖10份、酵母粉5份、马铃薯汁7份、蛋白胨12份、蚕粉8份、硫酸二氢钾3份、头孢霉素3份、无菌水60份。
4.根据权利要求1所述的一种球孢白僵菌的培养基，其特征在于：所述液体培养基的组分按重量份数计还包括氯化钡1-5份、氯化钙1-5份。
5.根据权利要求4所述的一种球孢白僵菌的培养基，其特征在于：所述液体培养基的组分按重量份数计还包括氯化钡2份、氯化钙3份。
6.根据权利要求1所述的一种球孢白僵菌的培养基，其特征在于：所述固体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖8-12份、玉米粉8-12份、蚕粉6-9份、乳糖12-18份、麦麸12-18份、头孢霉素2-4份。
7.根据权利要求6所述的一种球孢白僵菌的培养基，其特征在于：所述固体培养基的组分按重量份数计包括葡萄糖10份、玉米粉10份、蚕粉8份、乳糖15份、麦麸15份、头孢霉素3份。
8.根据权利要求1所述的一种球孢白僵菌的培养基，其特征在于：所述固体培养基的组分按重量份数计还包括硫酸锌1-5份、氯化钡2-6份、硼酸2-8份。
9.根据权利要求8所述的一种球孢白僵菌的培养基，其特征在于：所述固体培养基的组分按重量份数计还包括硫酸锌3份、氯化钡5份、硼酸5份。
10.权利要求1-9任一项所述球孢白僵菌的培养方法，其特征在于：将球孢白僵菌菌种接种于所述液体培养基中，在24-25℃、振荡条件下培养2-4天，得到球孢白僵菌菌丝体；将球孢白僵菌菌丝体接种于固体培养基中，在25-26℃条件下培养4-5天，得到球孢白僵菌分生孢子。
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