KR20070053443A - 조직공학용 지지체 및 그 제조방법, 및 조직공학용지지체를 제조하기 위한 전기방사장치 - Google Patents

Abstract

본 발명은 섬유 방사원액을 전기 방사하는 공정을 수행하여 3차원 구조의 스펀지 형태의 나노 섬유로 이루어진 지지체를 제조하는 방법에 관한 것으로서, 본 발명에 따르면, 전기방사공정, 분산공정, 및 동결건조 공정을 통해 나노 섬유를 3차원 구조의 스펀지 형태로 제조함으로써 천연의 세포외 기질(extracellular matrix)과 유사한 조직공학용 지지체를 형성할 수 있으며, 특히, 지지체의 공극율을 극대화할 수 있어 조직배양에 매우 유리하다.

조직공학, 지지체, 전기방사

Description

조직공학용 지지체 및 그 제조방법, 및 조직공학용 지지체를 제조하기 위한 전기방사장치{Scaffold and method of manufacturing scaffold, and electrospinning device of manufacturing scaffold}

도 1은 본 발명에 따른 지지체 제조방법을 나타낸 흐름도이다.

도 2는 본 발명에 따른 지지체 제조용 전기방사장치를 개략적으로 도시한 것이다.

도 3a는 본 발명의 실시예에 따라 제조된 스펀지 형태의 나노 섬유로 이루어진 지지체의 사진이고, 도 3b는 비교예에 따라 제조된 부직포 형태의 나노 섬유로 이루어진 지지체의 사진이다.

도 4a는 본 발명의 실시예에 따라 제조된 지지체 표면에 대한 주사현미경 사진이고, 도 4b 및 도 4c는 각각 비교예에 따라 제조된 지지체 표면 및 단면에 대한 주사현미경 사진이다.

도 5는 실시예 및 비교예에 따라 제조된 지지체를 구성하는 섬유의 공극도를 보여주는 그래프이다.

도 6a는 실험군에 대한 섬유아세포의 주사현미경 사진이고, 도 6b는 비교군에 대한 섬유아세포의 주사현미경 사진이다.

도 7a는 실험군에 따른 섬유아세포의 공초점레이저주사현미경 사진이고, 도 7b는 비교군에 따른 섬유아세포의 공초점레이저주사현미경 사진이다.

<도면의 주요부의 부호에 대한 설명>

100: 전기방사장치 110: 방사부

130: 직류전원 공급부 150: 분산부

본 발명은 조직공학용 지지체(scaffold)에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 천연의 세포외 기질과 유사한 다공성 구조의 조직공학용 지지체(scaffold)를 제조하는 방법에 관한 것이다.

조직공학 기술이란 세포를 지지체에 배양하여 세포-지지체 복합체를 제조하고 이를 이용하여 생체조직 및 장기를 재생하는 기술이다.

조직공학 기술의 기본적인 원리는 환자의 몸에서 필요한 조직을 채취하고 그 조직으로부터 세포를 분리한 다음 분리된 세포를 지지체에 배양하여 세포-지지체 복합체를 제조한 후 제조된 세포-지지체 복합체를 다시 인체 내에 이식하는 것이다.

조직공학 기술은 인공피부, 인공뼈, 인공연골, 인공각막, 인공혈관, 인공근육 등 인체의 거의 모든 장기의 재생에 적용되고 있다.

이와 같은 조직공학 기술에서 생체조직 및 장기의 재생을 최적화하기 위해서는 기본적으로 생체조직과 유사한 지지체를 제조하는 것이 우선이다.

상기 지지체의 기본적인 요건으로는 조직세포가 지지체에 유착하여 3차원적 구조를 가진 조직을 형성할 수 있는 틀의 역할을 충분히 해야 하며, 생체에 이식된 후 혈액응고나 염증반응이 일어나지 않는 무독성의 생체적합성 등이 있어야 한다.

특히, 최근에는 세포 배양시 우수한 세포 부착능을 구현하기 위해서 상기 지지체를 다공성 구조로 제조하는 시도가 있어 왔으며, 그 예로 입자 침출법(particulate leaching), 유화동결 건조법(emulsion freeze-drying), 고압기체 팽창법(high pressure gas expansion), 및 상분리법(phase separation) 등이 있다.

상기 입자 침출법은 생체적합한 고분자를 유기용매에 용해시킨 용액에 녹지 않는 소금 등의 입자를 혼합하여 주물을 제조한 후 용매를 제거하고 물을 이용하여 소금 입자를 용출하여 제거함으로써 공극을 형성하는 방법이다. 그러나 상기 입자 침출법은 잔존하는 소금염이나 거친 형상으로 인해 세포가 손상되는 문제가 있다.

상기 유화 동결건조법은 생체적합한 고분자를 유기용매에 용해시킨 용액 및 물의 유화액을 동결건조하여 유기용매와 물을 제거함으로써 공극을 형성하는 방법이다.

상기 고압기체 팽창법은 유기용매를 사용하지 않고 생체적합한 고분자를 주형에 넣고 압력을 가해 펠렛을 만들고 적당한 온도에서 고압의 가스를 상기 펠렛에 주입한 후 서서히 압력을 낮추어 가스가 방출되도록 하여 공극을 형성하는 방법이다.

그러나 상기 유화 동결건조법 및 고압기체 팽창법은 열린 구조를 갖는 공극(open cellular pores)을 만드는데 한계가 있다.

상기 상분리법은 생체적합한 고분자를 유기용매에 용해시킨 용액에 승화성 물질 또는 용해도가 다른 용매를 추가하고 승화 또는 온도변화에 따른 용액의 상분리에 의해 공극을 형성하는 방법이다. 그러나 상기 상분리법은 공극의 크기가 너무 작아 세포 배양이 어려운 문제가 있다.

이상과 같이, 지지체를 다공성 구조로 제조하기 위해서 여러 가지 시도가 있어왔지만 아직까지 그 효과 면에 미흡한 실정이다.

본 발명은 상기 종래의 실정을 감안하여 고안된 것으로서,

본 발명의 제1목적은 천연의 세포외 기질과 유사한 다공성 구조의 지지체를 제조하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 제2목적은 천연의 세포외 기질과 유사한 다공성 구조의 지지체를 제조할 수 있는 제조 장치를 제공하는 것이다.

본 발명의 제3목적은 천연의 세포외 기질과 유사한 다공성 구조의 지지체를 제공하는 것이다.

상기 제1목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 섬유 방사원액을 전기방사하는 공정을 수행하여 3차원 구조의 스펀지 형태의 나노 섬유로 이루어진 지지체를 제조하는 방법을 제공한다.

여기서, 상기 전기방사공정은 섬유 방사 원액을 준비하는 공정, 전압을 인가하면서 상기 준비된 섬유 방사 원액을 방사하는 공정, 상기 방사된 섬유를 분산시 키는 공정, 및 상기 분산된 섬유를 소정의 용기에 담아 동결건조하는 공정으로 이루어진 것이 바람직하다.

본 발명의 첫 번째 특징은 나노 섬유를 이용하여 지지체를 제조한 데에 있다.

천연의 세포외 기질(extracellular matrix)은 나노 수준의 크기를 지니는 단백질 섬유가 얽혀 있는 3차원 구조로 이루어져 있다. 본 발명은 천연의 세포외 기질과 유사한 구조를 구현하기 위해서 나노 섬유를 지지체 제조에 이용한 것이다.

나노 섬유는 비표면적이 커서 세포의 부착 면적이 크기 때문에 나노 섬유로 이루어진 지지체에 세포를 배양할 경우 세포 부착능이 우수하게 된다.

본 발명의 두 번째 특징은 나노 섬유를 제조하기 위해서 전기방사공정을 이용한 데에 있다.

전기방사공정은 고분자 용액이나 용융된 고분자를 소정 전압으로 하전 시킬 때 발생하는 전기적 인력 및 척력을 이용하여 섬유를 형성시키는 기술이다.

전기방사공정은 수 nm ~ 수천 nm 크기의 다양한 직경을 갖는 섬유를 제조할 수 있으며, 장비 구조가 간단하고, 광범위한 재료에 적용이 가능하고, 기존의 섬유에 비하여 공극률이 증가되어 부피 대비 표면적이 큰 섬유 제조가 가능하다.

본 발명의 세 번째 특징은 전기방사공정을 수행함에 있어서 방사된 섬유를 분산시킨 후 동결 건조하는 공정을 추가함으로써 3차원 구조의 스펀지 형태의 나노 섬유를 제조한 데 있다.

일반적인 전기방사공정만을 수행할 경우 얻어지는 나노 섬유는 부직포 형태 를 이루게 된다. 본 발명은 이에 더 나아가 전기 방사된 섬유를 분산시키고 동결건조하는 공정을 추가함으로써 부직포 형태가 아닌 3차원 구조의 스펀지 형태의 나노섬유를 제조함으로써, 공극률을 극대화시켜 천연의 세포외 기질과 거의 유사한 지지체를 형성한 것이다.

상기 제2목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 섬유 방사 원액을 수용하고 방사하는 방사부; 방사시 전압을 인가할 수 있도록 상기 방사부에 연결된 직류전원 공급부; 및 방사된 섬유가 분산되어 응고되는 응고부를 포함하여 이루어진 지지체 제조용 전기방사장치를 제공한다.

상기 제3목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 3차원 구조의 스펀지 형태의 나노 섬유로 이루어진 지지체를 제공한다.

이하, 도면을 참조로 본 발명의 바람직한 실시예에 대해 보다 구체적으로 설명하기로 한다.

1. 지지체 제조방법

도 1은 본 발명에 따른 지지체 제조방법을 나타낸 흐름도이다.

도 1에서 알 수 있듯이, 본 발명에 따른 지지체 제조방법은 섬유 방사 원액을 준비하는 공정(10s), 전압을 인가하면서 상기 준비된 섬유 방사 원액을 방사하는 공정(20s), 상기 방사된 섬유를 분산시키는 공정(30s), 및 상기 분산된 섬유를 소정의 용기에 담아 동결 건조하는 공정(40s)으로 이루어진다.

(1) 섬유 방사 원액 준비 공정(10s)

섬유 방사원액을 준비하는 공정(10s)은 지지체의 용도에 따라 적용되는 섬유 방사원액을 변경할 수 있는데, 생체 친화성이 우수한 실크 단백질을 이용하는 것이 바람직하다. 특히, 인체의 피부에 발생한 창상과 같은 결손부위를 효과적으로 치유하기 위한 창상피복재로 지지체가 이용될 경우 실크 단백질을 이용하는 것이 바람직하다.

실크 섬유는 뽕을 먹고 자라는 누에고치로부터 뽑아낸 실로 만든 섬유를 말하는 것으로, 고인장강도, 고유의 광택, 탁월한 염색성 등으로 오랫동안 고급 섬유소재로 이용되어왔다. 이와 같은 실크 섬유는 두 가닥의 피브로인이 세리신 외막에 싸여 있는 구조를 갖고 있는데, 상기 피브로인은 생체친화성이 우수하여 주변의 어떤 조직에도 영향을 미치지 않기 때문에 분말, 겔, 수용액 등 여려 형태로 제조되어 식품, 의약품 등에 다양하게 사용될 수 있다.

이와 같은 실크 섬유를 이용하여 방사 원액을 준비할 경우에는 실크 섬유에서 세리신을 제거하는 것이 생체적합성을 최대화하기 위해 바람직하다.

상기 실크 섬유에서 세리신을 제거한 후에는, 수세, 건조, 및 투석하여 실크피브로인 수용액을 제조하고, 실크피브로인 수용액을 동결건조하여 실크피브로인 스펀지를 제조하고, 그리고 실크피브로인 스펀지를 소정의 용매에 용해한 후 여과하여 실크 섬유 방사 원액을 준비할 수 있다.

상기 섬유 방사원액을 준비하는 공정은 12 내지 18%의 농도로 섬유 방사원액을 준비하는 것이 후술하는 방사공정을 원활히 수행하고 균일한 형태의 섬유를 얻기 위해 바람직하다.

12 내지 18%의 농도 범위 내에서 농도가 증가할 경우 섬유의 굵기는 증가되 기 때문에, 섬유 굵기를 감안하여 적당한 농도를 설정한다.

(2) 방사 공정(20s)

방사 공정(20s)은 소정의 전압을 인가하면서 소정의 방사 장치를 이용하여 수행할 수 있다. 방사 장치와 관련해서는 후술하기로 한다.

방사 공정시 인가되는 전압은 10 내지 20kV의 범위 내로 설정하는 것이 안정적인 방사공정을 수행할 수 있어 바람직하다. 10 내지 20kV의 전압 범위 내에서 전압이 커질 경우 방사속도가 증가된다.

(3) 방사된 섬유 분산 공정(30s)

상기 방사된 섬유를 분산시키는 공정은 소정의 응고액으로 채워진 응고욕에 상기 방사된 섬유를 분산시키는 공정으로 이루어질 수 있다.

상기 응고액으로는 메탄올이 사용될 수 있는데, 반드시 이에 한정되는 것은 아니다.

(4) 동결 건조 공정(40s)

응고욕에 분산된 섬유는 나노 크기로 젤과 유사한 상태를 나타내게 되는데 동결 건조 공정을 수행하기 전에 상기 분산된 섬유에 존재하는 응고액을 제거하는 것이 바람직하다.

동결 건조 공정은 상기 응고된 섬유를 소정의 용기에 담은 상태에서 수행함으로써, 용기의 형태에 따라 최종 얻어지는 스펀지 형태의 나노 섬유의 모양이 결정된다.

2. 지지체 제조용 전기방사장치

도 2는 본 발명에 따른 지지체 제조용 전기방사장치를 개략적으로 도시한 것이다.

도 2에서 알 수 있듯이, 본 발명에 따른 전기방사장치(100)는 방사부(110), 직류전원 공급부(130), 및 분산부(150)를 포함하여 이루어진다.

상기 방사부(110)는 섬유 방사 원액을 수용하고 수용된 섬유 방사 원액을 방사하는 역할을 하는 것이다.

상기 방사부(110)에서 섬유 방사 원액을 방사할 경우 방사속도는 일정하게 유지하는 것이 바람직하며, 따라서, 방사속도를 일정하기 유지하는 데 적합한 주사기 펌프를 이용하는 것이 바람직하다.

상기 직류전원 공급부(130)는 방사시 전압을 인가하는 역할을 하는 것으로서, 상기 직류전원 공급부(130)는 상기 방사부(110)에 연결되어 있다.

상기 분산부(150)는 방사된 섬유가 분산되어 응고되도록 하는 역할을 하며, 상기 분산부(150)는 응고액이 채워진 응고욕으로 이루어진다.

상기 응고욕은 금속용기로 이루어지며, 소정의 전선에 의해 접지되어 형성된다. 상기 응고액은 메탄올이 사용될 수 있다.

3. 지지체

본 발명은 전술한 방법에 의해 제조된 3차원 구조의 스펀지 형태의 나노 섬유로 이루어진 지지체를 제공한다.

상기 지지체를 구성하는 나노 섬유의 공극 크기는 50 내지 250 ㎛인 것이 바람직하다.

상기 지지체는 다양한 용도로 사용될 수 있으며, 특히 창상피복제로 이용이 가능하다.

상기 지지체를 창상피복제로 이용할 경우 상기 나노 섬유는 실크 섬유로 이루어진 것이 바람직하다.

이하 실시예 및 비교예를 통해 본 발명에 따라 제조된 지지체의 효능에 대해 설명하기로 한다. 그러나 하기 실시예에 의하여 본 발명의 기술적 사상이 한정되는 것은 아니다.

1. 지지체 제조

하기와 같은 방법으로 본 발명에 따른 실시예 및 실시예 비교하기 위한 비교예를 제조하였다.

(1) 실시예

1) 방사원액 제조

가잠 고치를 0.3%의 비누 및 0.2%의 탄산수소나트륨 용액에 1:25의 비율로 침지하여 100℃에서 1시간동안 처리하여 세리신을 제거하였다.

세리신이 제거된 고치를 증류수로 반복수세하고 건조하여 CaCl₂:H₂O:EtOH(몰비 1:8:2) 혼합용액에 1:25의 비율로 85℃에서 3분간 용해 후 증류수로 3일간 투석하여 실크피브로인 수용액을 제조하였다.

실크피브로인 수용액을 동결건조하여 실크피브로인 스펀지를 제조하였고, 이를 98%의 개미산에 12%로 용해하고 불용분을 여과하여 방사원액을 제조하였다.

2) 전기방사공정, 분산공정, 및 동결건조 공정 수행

상기 준비된 방사원액을 전술한 도 2에 따른 전기방사장치를 이용하여 전기방사공정, 분산공정, 및 동결건조 공정을 수행하였다.

상기 전기방사장치와 관련해서 보다 구체적으로 설명하면,

상기 방사부로는 22G 주사바늘을 포함하는 주사기 펌프를 이용하였고, 상기 응고부의 응고액으로는 메탄올을 이용하였고, 상기 방사부와 응고욕과의 거리는 약 20cm정도로 설정하였다.

전기방사공정을 수행한 후 응고욕에 분산된 섬유를 투석막에 담아 증류수로 1일간 투석하여 응고액인 메탄올을 제거하였고, 메탄올이 제거된 실크피브로인 나노섬유 분산체를 소정의 용기에 담아 동결 건조하였다.

최종 얻어진 지지체는 도 3a와 같이 나노 섬유가 스펀지 형태로 형성되었다.

(2) 비교예

전술한 실시예와 동일한 방법으로 방사원액을 제조하고, 제조된 방사원액을 전기방사하였다. 다만, 분산공정 및 동결건조 공정은 수행하지 않았다.

최종 얻어진 지지체는 도 3b와 같이 나노 섬유가 부직포 형태로 형성되었다.

2. 지지체 특성 분석

도 4a는 본 발명의 실시예에 따라 제조된 지지체 표면에 대한 주사현미경 사진이고, 도 4b 및 도 4c는 각각 비교예에 따라 제조된 지지체 표면 및 단면에 대한 주사현미경 사진이다.

도 4a에서 알 수 있듯이, 본 발명의 실시예에 따라 제조된 지지체는 미세한 섬유의 망상 구조로 이루어지며, 섬유의 공극의 크기는 약 200㎛로 나타났다.

도 4b 및 도 4c에서 알 수 있듯이, 비교예에 따라 제조된 지지체는 부직포 형태로 섬유들이 적층되어 있으며, 섬유의 공극의 크기는 1㎛ 이하로 나타났다.

이와 같이, 비교예의 경우는 부직포 형태로 이루어져 섬유가 이루는 공극의 크기가 매우 작아 세포가 공극 사이로 들어가지 못하고 나노섬유 부직포의 표면에서만 세포가 부착하고 증식되는 반면에, 본 발명에 따른 실시예의 경우는 스펀지 형태로 이루어져 섬유가 이루는 공극의 크기가 커서 세포가 지지체 내부까지 부착할 수 있게 된다.

도 5는 실시예 및 비교예에 따라 제조된 지지체를 구성하는 섬유의 공극도를 보여주는 그래프이다.

도 5에서 알 수 있듯이, 본 발명의 실시예에 따른 스펀지 형태 지지체의 공극도가 비교예에 따른 부직포 형태의 지지체의 공극도에 비해 상대적으로 큰 값을 나타냄을 알 수 있으며, 그 이유는 본 발명의 경우 분산된 나노섬유를 동결되는 과정에서 나노섬유가 넓은 간격을 유지한 채로 형태가 고정되기 때문이다.

3. 세포 배양 효과

(1) 세포 배양

본 발명에 따른 지지체의 세포 배양 성능을 평가하기 위해 쥐 섬유아세포(3T3 mouse fibroblast)를 이용하여 배양 실험을 행하였는데, 전술한 실시예에 따라 제조된 지지체를 이용한 실험군과, 전술한 비교예에 따라 제조된 지지체를 이용한 비교군으로 나누어 실험하였다.

배지는 RPMI 1640, FBS, penicillin strepto-mycin, HEPES를 혼합한 용액을 사용하였고 배양 조건은 5%의 CO₂ 대기 하에서 37℃를 유지하며 세포를 배양하였다.

각 실험군과 비교군은 지지체를 2cm×2cm(가로ㅧ세로)의 크기로 잘라 세포배양용 페트리디쉬(petri-dish)에 넣고 자외선을 이용하여 멸균하였다. 멸균 후 50㎍/ml 농도로 0.1M PBS에 용해된 콜라겐(type I)용액에 24시간 동안 침지하여 콜라겐으로 코팅하고 제조된 배지를 이용하여 3회 세척하고 다시 배지를 채운 다음 분산된 섬유아세포를 분주하여 파종하였다.

배지는 2일에 한 번씩 교환하였으며 7일간 배양하여 세포의 부착 및 증식 상태를 주사전자현미경, 공초점 레이져 주사현미경을 통하여 관찰하였다.

(2) 세포 배양 모습

도 6a는 실험군에 대한 섬유아세포의 주사현미경 사진이고, 도 6b는 비교군에 대한 섬유아세포의 주사현미경 사진이다.

도 6b에서 알 수 있듯이, 비교군의 경우 세포의 밑에 위치하고 있는 나노섬유 부직포는 공극의 크기가 매우 작아 세포가 그 내부로 침투하지는 못하고 표면에서만 증식한다.

그에 반해, 도 6a에서 알 수 있듯이, 실험군의 경우 전체적인 세포의 밀도는 낮지만 세포가 섬유를 따라 지지체의 외부에 뿐만 아니라 내부에까지 부착하여 있는 것을 알 수 있다. 이는 실험군의 경우가 공극의 크기가 크기 때문에 내부로 침투하는데 훨씬 수월하기 때문이다.

결국, 본 발명과 같은 스펀지 형태의 지지체는 섬유들이 분산되어 있기 때문에 부직포 형태의 지지체에 비해 세포 하나가 부착할 수 있는 면적은 작지만 입체구조를 지니고 있고 큰 공극으로 인해 조직배양에 유리함을 알 수 있다.

(3) FDA 분석 결과

배양된 세포가 정상적으로 생육하고 있는지를 확인하기 위해 FDA를 이용하여 분석하였다. FDA는 본래 형광을 발하지 않지만 살아있는 세포내부에 들어가서 세포 내에 존재하는 에스테르가수분해효소(esterase)에 의해 분해되면 녹색 형광을 발하고 음전하를 띄게 되어 세포 내부에만 존재한다. 이를 이용해 세포의 정상적인 생육상태를 확인할 수 있다.

도 7a는 실험군에 따른 섬유아세포의 공초점 레이저주사현미경 사진이고, 도 7b는 비교군에 따른 섬유아세포의 공초점 레이저주사현미경 사진이다.

도 7b에서 알 수 있듯이, 비교군의 경우 주사전자현미경 사진에서처럼 전체적으로 세포가 빽빽이 분포되어 있기 때문에 전체적으로 강한 녹색 형광을 관찰할 수 있었다.

도 7a에서 알 수 있듯이, 실험군의 경우 전체적인 형광은 나타나지 않았다. 스펀지 형태는 입체 구조이기 때문에 표면의 높이 차에 의해서 부분적인 형광만을 관찰할 수 있었다. 그러나 초점의 깊이를 달리하여 관찰했을 때에는 형광이 나타나지 않던 부분에서도 형광이 관찰되어 세포가 전체적으로 분포하고 있음을 확인할 수 있었으며 이를 통해 세포가 정상적으로 생육하고 있음을 확인할 수 있었다.

이상의 결과로부터 실크피브로인 나노섬유 집합체가 조직공학용 담체로서 응 용될 수 있음을 알 수 있다.

이상과 본 발명에 따르면, 전기방사공정, 분산공정, 및 동결건조 공정을 통해 나노 섬유를 3차원 구조의 스펀지 형태로 제조함으로써 천연의 세포외 기질(extracellular matrix)과 유사한 조직공학용 지지체를 형성할 수 있으며, 특히 지지체의 공극율을 극대화할 수 있어 조직배양에 매우 유리하다.

Claims (13)

1. 섬유 방사원액을 전기 방사하는 공정을 수행하여 3차원 구조의 스펀지 형태의 나노 섬유로 이루어진 지지체를 제조하는 방법.
2. 제1항에 있어서,

   상기 섬유 방사원액을 전기방사하는 공정은

   섬유 방사 원액을 준비하는 공정;

   전압을 인가하면서 상기 준비된 섬유 방사 원액을 방사하는 공정;

   상기 방사된 섬유를 분산시키는 공정; 및

   상기 분산된 섬유를 소정의 용기에 담아 동결 건조하는 공정으로 이루어진 것을 특징으로 하는 지지체를 제조하는 방법.
3. 제2항에 있어서,

   상기 섬유 방사원액을 준비하는 공정은

   실크 섬유에서 세리신을 제거하는 공정;

   세리신이 제거된 실크 섬유를 수세, 건조, 및 투석하여 실크피브로인 수용액을 제조하는 공정;

   상기 실크피브로인 수용액을 동결 건조하여 실크피브로인 스펀지를 제조하는 공정; 및

   상기 실크피브로인 스펀지를 소정의 용매에 용해한 후 여과하는 공정을 이루어진 것을 특징으로 하는 지지체를 제조하는 방법.
4. 제2항에 있어서,

   상기 섬유 방사원액을 준비하는 공정은 12 내지 18%의 농도로 섬유 방사원액을 준비하는 것을 특징으로 하는 지지체를 제조하는 방법.
5. 제2항에 있어서,

   상기 전압을 인가하면서 상기 준비된 섬유 방사 원액을 방사하는 공정은 10 내지 20kV의 전압범위로 인가하면서 수행하는 것을 특징으로 하는 지지체를 제조하는 방법.
6. 제2항에 있어서,

   상기 방사된 섬유를 분산시키는 공정은 소정의 응고액으로 채워진 응고욕에 상기 방사된 섬유를 분산시키는 공정으로 이루어진 것을 특징으로 하는 지지체를 제조하는 방법.
7. 섬유 방사 원액을 수용하고 방사하는 방사부;

   방사시 전압을 인가할 수 있도록 상기 방사부에 연결된 직류전원 공급부; 및

   방사된 섬유가 분산되어 응고되는 분산부를 포함하여 이루어진 지지체 제조 용 전기방사장치.
8. 제7항에 있어서,

   상기 방사부는 주사기 펌프로 이루어진 것을 특징으로 하는 전기방사장치.
9. 제7항에 있어서,

   상기 분산부는 응고액이 채워진 응고욕이 접지되어 형성된 것을 특징으로 하는 전기방사장치.
10. 3차원 구조의 스펀지 형태의 나노 섬유로 이루어진 지지체.
11. 제10항에 있어서,

    상기 지지체를 구성하는 나노 섬유의 공극 크기는 50 내지 250 ㎛인 것을 특징으로 하는 지지체.
12. 제10항에 있어서,

    상기 나노 섬유는 실크 섬유로 이루어진 것을 특징으로 하는 지지체.
13. 제10항에 있어서,

    상기 지지체는 창상피복제인 것을 특징으로 하는 지지체.

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