KR20070050918A - 암의 치료 - Google Patents

암의 치료 Download PDF

Info

Publication number
KR20070050918A
KR20070050918A KR1020077002582A KR20077002582A KR20070050918A KR 20070050918 A KR20070050918 A KR 20070050918A KR 1020077002582 A KR1020077002582 A KR 1020077002582A KR 20077002582 A KR20077002582 A KR 20077002582A KR 20070050918 A KR20070050918 A KR 20070050918A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cancer
leukemia
antibody
hsp90
antigen
Prior art date
Application number
KR1020077002582A
Other languages
English (en)
Inventor
제임스 피터 버니
루쓰 크리스틴 매튜스
트레이시 카터
Original Assignee
뉴텍 파마 피엘씨
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB0414885A external-priority patent/GB0414885D0/en
Priority claimed from GB0420845A external-priority patent/GB0420845D0/en
Priority claimed from GB0503566A external-priority patent/GB0503566D0/en
Application filed by 뉴텍 파마 피엘씨 filed Critical 뉴텍 파마 피엘씨
Publication of KR20070050918A publication Critical patent/KR20070050918A/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues

Abstract

본 발명은 함께 암 및 백혈병의 치료에 증진된 효능을 제공하는, 항-Hsp90 항체와 함께 효과적인 항암제를 포함하는 신규의 의약 및 제제에 관한 것이다.
항-Hsp90 항체, 암, 백혈병, 결장직장암, 이마티니브, 필라델피아 염색체.

Description

암의 치료{TREATMENT OF CANCER}
본 발명은 함께 결장직장암을 포함하는 암의 치료에 증진된 효능을 제공하는, 항-Hsp90 항체와 함께 효과적인 약제학적 성분을 포함하는 신규의 의약 및 제제에 관한 것이다. 본 발명의 그 밖의 다른 관점은 백혈병의 치료에 관한 것이다.
암 치료법 및 백혈병의 치료
본 발명의 첫번째 관점은 함께 암의 치료에 증진된 효능을 제공하는, 항-Hsp 90 항체와 함께 효과적인 항암제를 포함하는 신규의 의약 및 제제에 관한 것이다.
단백질의 열쇼크 단백질 (heat shock protein; Hsp) 집단의 구성원은 종양발생 및 세포사에서 중요한 역할을 갖는 것으로 최근에 알려졌다. 실제로, 열쇼크 단백질은 수년 동안 암 치료를 위한 잠재적 표적인 것으로 확인되었으며 (Whitesell L et al., PNAS USA, 1994 Aug 30, 91(18): 8324-8; PMID: 8078881), 안사마이신 집단의 구성원 (이전에는 타이로신 키나제 억제제로 불렸다)은 암 치료법을 수행하는데 유용한 것으로 제안되었다 (Neckers L et al., Invest New Drugs, 1999, 17(4): 361-73; PMID: 10759403; Schulte TW et al., Cancer Chemother Pharmacol., 1998, 42(4): 273-9; PMID: 9744771).
한가지 열쇼크 단백질인 Hsp90은 유방, 전립선, 흑색종, 백혈병 및 림프종, 결장 및 폐의 암 (Banerji U et al., Curr Cancer Drug Targets, 2003 Oct; 3(5): 385-90; PMID: 14529390), 및 갑상선 암에 수반되는 것으로 관련되었다. Hsp90의 역할은 광범한 종류의 세포성 과정, 예를 들어, 신호전달에 수반되는 "클라이언트 (client) 단백질"의 정확한 접힘 (correct folding)을 보장한다. Hsp90 클라이언트 단백질에는 돌연변이체 p53 및 저산소증-유도성 인자 1α와 같은 전사인자, 및 v-Src, Akt, Raf-1 및 Bcr-Abl을 포함하는 가용성 키나제가 포함된다. Hsp90은 정상세포에서보다 종양세포에서 2- 내지 10-배 더 높은 레벨로 구성적으로 발현되며, 이것은 이것이 종양세포의 성장/생존에 중요할 수 있음을 시사하는 것이다 (Schwartz, J., et al., 2003, Semin. Hematol. 40:p87-96). Hsp90에 대한 클라이언트 단백질의 결합은 그들의 배좌 (conformation), 안정성 및 세포 내에서의 운명을 조절할 수 있기 때문에, Hsp90은 세포 성장, 분열, 분화, 이동 및 사망을 포함하는 세포성 결과를 조정하는 경로에 대하여 중요한 영향을 가질 수 있다 (Workman, P., Cancer Lett. 2004 Apr 8; 206(2):149-57; PMID: 15013520). 세포성 과정에서 Hsp90에 대한 광범한 도달 역할은 단백질이 현재 치료학적 약물의 개발을 위한 가능한 표적으로서 검토되고 있음을 의미하는 것이다. 특히 단일 분자표적과 상호작용함에 의한 Hsp90 억제제는 Hsp90 클라이언트 단백질의 불안정화 및 궁극적인 분해를 야기한다.
본 발명의 두번째 관점은 함께 백혈병의 치료 시에 증진된 효능을 제공하는, 항-Hsp 90 항체와 함께 효과적인 항암제를 포함하는 신규의 의약 및 제제에 관한 것이다.
백혈병은 골수에 걸리는 암이다. 백혈병이 있는 사람에게서, 골수는 다수의 비정상적인 백혈구를 생산한다. 비정상적인 백혈구는 골수 내에 들어가서 골수는 정상적인 적혈구, 백혈구 및 혈소판을 충분히 만들 수 없게 된다.
다양한 타입의 백혈병은 그들의 발현 속도 (급속 또는 만성), 및 병에 걸린 백혈구의 타입 (골수양 또는 림프양 세포)에 의해서 분류될 수 있다. 골수양 백혈구는 감염에 대한 면역계의 방어의 제 1선이며, 주로 혈액에 존재하고, 여기에서 이들은 외래 유기체를 삼켜서 사멸시킨다. 림프양 백혈구는 림프절 및 혈액에 존재한다.
백혈병의 4가지 가장 통상적인 타입에는 만성 림프성 (림프구성) 백혈병 (CLL), 급성 골수성 (골수아구성) 백혈병 (AML), 급성 림프성 (림프아구성) 백혈병 (ALL), 및 만성 골수성 백혈병 (CML)이 포함된다.
CLL은 또한, 림프구 세포의 암이지만, ALL보다 더 서서히 발병한다. 이 질병은 성인이 걸리는 백혈병의 가장 통상적인 타입이며, 소아에게서는 매우 드물다.
AML은 과립구로 알려진 골수양 세포에 주로 침범하는 암이다. 이것은 혈관을 차단할 수 있는 너무 많은 골수아구를 생성시키지만, 성숙한 골수양 세포는 충분하지 않다. 이 질병은 주로 성인에게서 나타나지만, 소아에게 침범할 수도 있다.
CML (또한, 만성 과립구성 백혈병으로도 불림)은 일반적으로 호중구 세포의 서서히 진행하는 암이며, 이것은 소아에게서는 드물고, 통상적으로는 여성보다는 성인 남성에게 침범한다. CML은 환자의 95% 이상의 백혈병 세포가 독특한 세포유 전학적 이상인 필라델피아 염색체 (Ph1)를 가지기 때문에, 통상적으로 쉽게 진단된다 (Kurzrock, R. et al. 2003, Ann. Intern. Med. 138 (10): p819-30, PMID: 12755554; Goldman, J.M. and Melo, J.V., 2003, N. Engl. J. Med. 349 (15): p1451-64, PMID: 14534339). Ph1은 염색체 9와 22의 긴 팔 사이에서 상반전좌로부터 유래하며, 모든 조혈성 전구체에서 증명할 수 있다 (Deininger, M.W. et al. 2000, Blood 96 (10): p3343-56, PMID: 11071626). 이러한 전좌는 염색체 9 상의 아벨슨 (Abelson; abl) 종양유전자의 BCR (breakpoint cluster region)이라 불리는 염색체 22의 영역으로의 전이를 야기한다 (Deininger, M.W. et al. 2000, Blood 96 (10): p3343-56, PMID: 11071626). 이것은 다시 8.5 kb 키메릭 mRNA를 코드화하는 융합된 BCR/ABL 유전자를 제공한다. BCR/ABL 유전자는 마우스에서 CML-양 질병을 발생시키는데 충분한 종양유전자이다. BCR/ABL 종양유전자의 전사물은 해독되어 210 kDa 또는 190 kDa 단백질을 수득한다. Bcr-Abl 단백질은 CML에서 발견되는 장애를 일으킨 골수발생을 야기하는 비정상적인 타이로신 키나제 단백질이다. CML은 만성적 상, 촉진된 상, 및 아세포발증 (balst crisis)로 불리는 독특한 임상적 단계를 통해서 진행한다. BCR/ABL 종양유전자는 모든 단계에서 발현하지만, 아세포발증은 다수의 추가적 유전자 및 분자 변화를 특징으로 한다 (Gorre, M.E., et al. 2002, Blood, 100(8): p3041-3044).
Ph1-음성 (negative) CML은 Bcr-Abl 융합 mRNA를 야기하는 t(9;22)(q34;q11) 전좌의 세포유전학적 또는 분자 (RT-PCR) 증거가 없이 CML의 임상적 특징을 특징으로 하는 희귀한 질병이다. Ph1-음성 CML은 다른 골수증식성 증후군으로부터 덜 뚜 렷하게 구별되는 불충분하게 정의된 실체이다. 임상적 CML의 5-10%를 차지하는 것을 생각하면, Bcr-Abl 전사물에 대한 RT-PCR 분석의 일상적인 접근성에 의해서 이 수는 현재 5%보다 상당히 낮다. 흥미롭게도, 이러한 실체를 갖는 일부의 환자는 Abl에 대한 대체 융합으로부터 일어날 수 있다. t(9;12)의 결과로서 TEL(ETV6)-ABL 융합은 Ph- CML의 두가지 경우에서 입증되었다. Ph1-음성 CML이 있는 환자는 일반적으로 Ph1-양성 (positive) 환자보다 치료에 대하여 더 열등한 반응 및 더 짧은 생존기간을 갖는다 (Onida, F. et al. 2002: Cancer 95 (8): p1673-84, PMID: 12365015).
ALL은 림프아구로 알려진 미성숙 림프구 세포의 암이다. 이 질병은 통상적으로 1 내지 7 세 사이인 어린 소아에게서 가장 통상적인 타입의 백혈병이며, 성인에게서는 매우 드물다. ALL은 정상적인 적혈구 및 혈소판을 밀어내는 다수의 비정상적인 림프구가 만들어지도록 야기한다. 185 kDa Bcr-Abl 단백질은 ALL의 발현에 직접적으로 관련된다.
Hsp90 억제제로 작용하는 두가지 약물인 젤다나마이신 (GA) 및 17-알릴아미노, 17-데스메톡시젤다나마이신 (17-AAG)은 임상실험에서 기대되는 생물학적 및 임상적 활성을 나타내었다. 실제로, 210 kDa Bcr-Abl 융합단백질 (p210Bcr-Abl)은 그의 안정성에 대해서 Hsp90과의 그의 회합에 의존적이며, GA 또는 17-AAG에 의한 세포의 치료는 p210Bcr-Abl의 빠른 파괴를 유도한다.
통상적인 세포독성제 또는 그 밖의 다른 신규한 약제와 함께 17AAG와 같은 Hsp90 억제제는 또한, 다단계 종양발생을 공격하는데 치료학적으로 유용할 수 있다 (Workman P., Cancer Lett. 2004 Apr 8; 206(2):149-57; PMID: 15013520). 유전적 불안정성을 특징으로 하는 암세포에서, 17AAG는 Hsp90 활성을 차단함으로써 종양에 대하여 함께 "종합적으로 치명적"인 것을 나타내는 다양한 돌연변이를 일으킬 수 있다. 종양세포의 유전적 불안정성이 결여된 정상세포는 비교적 병에 걸리지 않는다 (Garber, K., 2002, Journal of the National Cancer Institute, Vol. 94, No. 22, p1666-1668). 17AAG에 의한 중요한 문제점은 약물이 지속적인 치료를 하기에는 너무 독성이라는 점이며, 따라서 비독성 대체물에 대한 필요성이 있다 (Banerji et al., supra).
이마티니브 메실레이트 (글리벡 (Gleevec); RTM)는 단일 약제로서 종양성 질병에 대한 주요 영향을 갖는 소분자 타이로신 키나제 억제제이다. 원래, 병원성 9;22 전좌를 수반하는 악성종양의 Bcr-Abl 타이로신 키나제 특징의 억제제로서 디자인된 이마티니브는 적절하게 특이적인 것으로 입증되었으며, 만성 골수성 백혈병 (CML) 및 필라델피아 염색체 양성 (Ph1+) ALL의 치료에 대한 주요 영향을 갖는다 (Krystal, GW, 2004, Leukemia Research 28S1:pS53-S59). CML의 이마티니브 치료와 연관된 문제점 중의 하나는 Bcr-Abl 타이로신 키나제에서의 돌연변이의 결과로 인한 약물에 대한 저항성이다. 중요하게도, 이마티니브에 대해서 저항성이 있게 된 CML 세포는 생체내에서 그들의 Hsp90 의존성을 보유하며, 따라서 17AAG에 대해서 민감성을 유지한다.
최근의 문헌들은 종양 Hsp90이 악성 진행을 촉진하는 멀티-샤프롱 (multi- chaperone) 컴플렉스로 온전히 존재하며, 이들이 암 치료에 대한 매력적인 표적임을 시사하였다. 특히, 종양세포로부터 유도된 멀티-샤프롱 컴플렉스에서 Hsp90은 정상세포로부터의 Hsp90 (즉, 그의 잠복성 비컴플렉스 상태인 Hsp90)의 경우보다 17AAG에 대하여 100-배 더 큰 결합친화성을 갖는 것으로 생각되며, 이것은 멀티-샤프롱 컴플렉스에서 이것이 잠복성 비컴플렉스 Hsp90에 의해서 나타나지 않는 에피토프를 나타낼 수 있음을 시사한다. 마이코그라브 (mycograb) (RTM) 항체는 결합 동력학에 대한 어떤 부작용도 없이 그의 잠복성 비컴플렉스 상태, 및 또한 멀티-샤프론 컴플렉스인 Hsp90에 결합할 수 있다.
WO 01/76627은 (i) 폴리엔 또는 베타 글루칸 신타제 억제제 항진균제; 및 (ii) 진균성 Hsp90에 대해서 특이적인 항체의 배합물을 포함하여 진균성 감염을 치료하는 조성물을 시사하고 있으며, 이 조성물은 진균이 항진균제 그 자체에 대해서 저항성이 있음에도 불구하고 감염을 야기하는 진균에 대해서 효과적이다.
본 발명의 첫번째 관점에 따르면, 암의 치료를 위한 의약의 제조방법에 있어서의 (i) Hsp90의 적어도 하나의 에피토프에 대해서 특이적인 항체 또는 그의 항원 결합성 단편; 및 (ii) 독소루비신, 다우노루비신, 에피루비신, 헤르셉틴, 도세탁셀 및 시스플라틴으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 항암제의 용도를 제공한다.
독소루비신은 항종양제인 것으로 이전에 인식된 안트라사이클린 항생제이다.
에피루비신은 역시 항종양제로서 이전에 인식된 덜 독성인 합성 안트라사이클릭 항생제이다.
다우노루비신은 항암제의 분야를 포함하는 다수의 치료학적 분야에서 사용되는 항종양성 약물이다.
헤르셉틴 (트라스투주마브)은 HER2 단백질 과발현성 전이성 유방암의 치료를 위해서 사용되는 모노클로날 항체이다.
도세탁셀은 인지된 항암제이며, 유사분열 억제제이다.
시스플라틴은 인지된 항암제이며, 백금 컴플렉스로 이루어진다.
이하의 실험 결과 ("실험 A")에 상세히 기술된 바와 같이, 독소루비신 및 다우노루비신이 특히 바람직하며, 항-Hsp90 항체와 특히 우수한 상승적 효과를 나타낸다. 헤르셉틴은 또한, 항-Hsp90 항체와 우수한 상승적 효과를 나타낸다. 상승작용은 또한, 항-Hsp90 항체와 배합된 경우의 도세탁셀 및 시스플라틴에 의해서 관찰된다. 다우노루비신과 항체 사이의 상승작용은 특히 에스트로젠 수용체 양성세포에 의해서 명백하며, 따라서 항체와 다우노루비신을 사용한 의약 및 치료법은 에스트로젠 수용체를 갖는 세포에 대한 것 (또는 그에 대해서 또는 위해서 투여되는 것)일 수 있다.
실험들 ("실험 A")은 항-Hsp90 항체와 함께 사용되는 경우에 다른 항암제들이 평범한 결과 (파클리탁셀) 또는 길항작용 (이마티니브)을 나타냄을 보여준다. 이것은 항-Hsp90 항체와 함께 배합하는 경우에 상기 항암제에 의해서 도달되는 상승작용의 놀라운/예기치 않은 성질을 입증하는 것이다.
또한, 암의 치료시에 동시에, 별도로 또는 순차적으로 사용하기 위한 (i) Hsp90의 적어도 하나의 에피토프에 대해서 특이적인 항체 또는 그의 항원 결합성 단편; 및 (ii) 독소루비신, 다우노루비신, 에피루비신, 헤르셉틴, 도세탁셀 및 시스플라틴으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 항암제를 포함하는 배합제제가 제공된다.
또한, 암의 치료가 필요한 환자에게 치료학적 유효량의 (i) Hsp90의 적어도 하나의 에피토프에 대해서 특이적인 항체 또는 그의 항원 결합성 단편; 및 (ii) 독소루비신, 다우노루비신, 에피루비신, 헤르셉틴, 도세탁셀 및 시스플라틴으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 항암제를 투여하는 것을 포함하여 암을 치료하는 방법이 제공된다.
본 명세서에서 사용된 것으로서, 용어 "치료"는 다른 식으로 명백하게 언급되지 않는 한은 광범한 의미를 갖는 것으로 해석된다. 따라서, "치료" 또는 "치료법"은 인간 또는 동물체의 증상을 치료하거나, 경감시키거나, 제거하거나, 감소시키거나, 또는 그들의 수축성 장애 또는 기능부전의 가능성을 예방 또는 감소시키도록 디자인된 모든 치료를 의미한다. 즉, 용어 "치료"는 질병상태의 치료뿐만 아니라 그들의 예방 둘 다를 의미한다.
항체 또는 그의 항원 결합성 단편은 서열 1의 서열을 포함하는 펩타이드에 의해서 나타나는 에피토프에 대해서 특이적일 수 있다.
상기 거론한 바와 같이, 비록 멀티-샤프롱 컴플렉스에서 Hsp90에 의해서 나타나는 4급 에피트포가 치료법에 대한 적절한 표적으로 제안되었지만, 실험 (이하)은 실제로 선형 에피토프가 치료법을 위한 유용하고 효과적인 표적임을 나타낸다.
항체, 그들의 제조 및 용도는 잘 알려져 있으며, 예를 들어, 문헌 (Harlow, E. and Lane, D., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1999)에 기술되어 있다.
항체는 본 기술분야에서 공지된 표준방법을 사용하여 생성될 수 있다. 항체의 예로는 폴리클로날, 모노클로날, 키메릭, 단일 쇄, Fab 단편, Fab 발현 라이브러리에 의해서 생산된 단편, 및 항체의 항원 결합성 단편이 포함된다 (단, 이들로 제한되지는 않는다).
항체는 광범한 숙주, 예를 들어, 염소, 토끼, 랫트, 마우스, 인간 등에서 생산될 수 있다. 이들은 진균성 스트레스 단백질, 또는 면역원성 특성을 갖는 그의 단편 또는 올리고펩타이드를 주사함으로써 면역시킬 수 있다. 숙주의 종에 따라서 다양한 보조제를 사용하여 면역학적 반응을 증가시킬 수 있다. 이러한 보조제에는 프로인트 보조제 (Freund's), 수산화알루미늄과 같은 무기 겔, 및 라이소레시틴, 플루로닉 폴리올, 폴리음이온 (polyanion), 펩타이드, 오일 에멀젼, 키홀 림펫 헤모시아닌 (keyhole limpet hemocyanin) 및 디니트로페놀과 같은 표면활성성분이 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다. 인체에서 사용되는 보조제 중에서는 BCG (Bacille Calmette-Guerin) 및 코리네박테리움 파르붐 (Corynebacterium parvum)이 특히 유용하다.
진균 단백질에 대한 모노클로날 항체, 또는 그의 단편 또는 올리고펩타이드는 배양물에서 연속적 세포 라인 (cell line)에 의한 항체 분자의 생산을 제공하는 어떤 기술을 사용하여서도 제조될 수 있다. 이들에는 하이브리도마 기술, 인간 B-세포 하이브리도마 기술, 및 EBV-하이브리도마 기술이 포함되나, 이들로 제한되지 는 않는다 (Koehler et al., 1975, Nature, 256: 495-497; Kosbor et al., 1983, Immunol. Today 4: 72; Cote et al., 1983, PNAS USA, 80: 2026-2030; Cole et al., 1985, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss Inc., New York, pp. 77-96).
또한, "키메릭 항체"의 생산을 위해서 개발된 기술로서 인간 항체 유전자에 마우스 항체 유전자를 스플리싱 (splicing)하여 적절한 항원 특이성 및 생물학적 활성을 갖는 분자를 수득하는 기술이 사용될 수 있다 (Morrison et al., 1984, PNAS USA, 81: 6851-6855; Neuberger et al., 1984, Nature, 312: 604-608; Takeda et al., 1985, Nature, 314: 452-454). 대신으로, 단일 쇄 항체의 생산을 위해서 설명된 기술은 본 기술분야에서 공지된 방법을 사용하여 진균성 스트레스 단백질-특이적 단일 쇄 항체를 생산하도록 조절될 수 있다. 관련된 특이성을 갖지만, 별개의 이디오타입 (idiotypic) 조성의 항체는 랜덤 컴비나토리알 면역글로빈 라이브러리 (random combinatorial immunoglobin libraries)로부터 연쇄 셔플링 (chain shuffling)에 의해서 생성될 수 있다 (Burton, D.R., 1991, PNAS USA, 88: 11120-11123).
항체는 또한, 림프구 집단에서 생체내 생산을 유도함으로써, 또는 재조합체 면역글로불린 라이브러리 또는 고도로 특이적인 결합성 시약의 패널을 스크리닝함으로써 생산될 수도 있다 (Orlandi et al., 1989, PNAS USA, 86: 3833-3837; Winter, G. et al., 1991, Nature, 349: 293-299).
항원 결합성 단편이 또한 생성될 수도 있으며, 예를 들어, 항체 분자의 펩신 분해에 의해서 생산될 수 있는 F(ab')2 단편 및 F(ab')2 단편의 디설파이드 브릿지를 환원시킴으로써 생성될 수 있는 Fab 단편이 있다. 대신으로, 목적하는 특이성을 갖는 모노클로날 Fab 단편의 빠르고 용이한 확인이 가능하도록 Fab 발현 라이브러리가 제작될 수 있다(Huse et al., 1989, Science, 256: 1275-1281).
다양한 면역측정법이 목적하는 특이성을 갖는 항체를 확인하기 위한 스크리닝에 사용될 수 있다. 설정된 특이성을 갖는 폴리클로날 또는 모노클로날 항체를 사용한 경쟁적 결합성 또는 면역방사계측성 시험을 위한 다수의 프로토콜은 본 기술분야에서 잘 알려져 있다. 이러한 면역측정법은 일반적으로 진균성 스트레스 단백질, 또는 그의 단편 또는 올리고펩타이드와 그의 특이성 항체 사이의 컴플렉스 형성을 측정하는 것을 수반한다. 두개의 비-간섭성 진균성 스트레스 단백질 에피토프에 대해서 특이적인 모노클로날 항체를 이용한 2-부위 모노클로날-기본 면역측정법이 사용될 수 있지만, 경쟁적 결합성 시험도 또한 사용될 수 있다 (Maddox et al., 1983, J. Exp. Med., 158: 1211-1216).
예를 들어, 조성물 또는 배합제제에서 사용되는 항체는 서열 2의 서열을 포함할 수 있다.
본 발명자는, 유용하게 치료될 수 있는 암에 유방암, 전립선암, 흑색종, 백혈병, 림프종, 백혈병, 결장암, 고환 배세포암, 췌장암, 난소암, 자궁내막암, 갑상선암, 및 폐암로 구성된 군으로부터 선택된 섬유육종 및 암종이 포함되는 것을 알아내었다.
본 발명의 두번째 관점에 따르면, 백혈병의 치료를 위한 의약을 제조하는 방 법에서의 (i) Hsp90의 적어도 하나의 에피토프에 대해서 특이적인 항체 또는 그의 항원 결합성 단편의 용도가 제공된다.
또한, 백혈병의 치료를 위한 의약을 제조하는 방법에서의 (i) Hsp90의 적어도 하나의 에피토프에 대해서 특이적인 항체 또는 그의 항원 결합성 단편; 및 (ii) 이마티니브, 파클리탁셀, 도세탁셀, 다우노루비신, 독소루비신, 및 하이드록시우레아로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 항암제의 용도가 제공된다.
2-페닐아미노피리미딘의 유도체인 이마티니브는 단백질 타이로신 키나제에 대한 활성을 갖는 소분자 길항제이며, Bcr-Abl의 강력하고 특이적인 억제를 나타낸다. 이마티니브는 아세포발증, 촉진된 상, 또는 IFN-치료법이 실패한 후의 만성적 상의 CML을 갖는 환자의 치료를 위해서 지시된다.
파클리탁셀은 몇가지 타입의 암에 대한 치료제로 제공되는 화학요법제이다. 이것은 난소암, 유방암 및 비-소세포 폐암을 치료하기 위해서 가장 통상적으로 사용된다.
도세탁셀은 인지된 항암제이며, 유사분열 억제제이다.
다우노루비신은 항암제의 분야를 포함하는 다수의 치료학적 분야에서 사용되는 항종양성 약물이다.
독소루비신은 항종양제인 것으로 이전에 인식된 안트라사이클린 항생제이다.
하이드록시우레아는 항종양성 리보뉴클레오타이드 리덕타제 억제제이다.
이하의 실험 결과 ("실험 B")에 상세히 기술된 바와 같이, 도세탁셀 및 파클리탁셀이 특히 바람직하며, 항-Hsp90 항체와 특히 우수한 상승적 효과를 나타낸다. 상승작용은 또한, 항-Hsp90 항체와 배합된 경우의 이마티니브, 독소루비신, 다우노루비신 및 하이드록시우레아에 의해서 관찰된다. 항-Hsp90 항체와 함께 사용되는 경우에 항암제인 시스플라틴은 평범한 결과를 나타내었다. 이것은 항-Hsp90 항체와 배합된 경우에 상기 항암제에 의해서 달성되는 상승작용의 놀랍고/예기치 않은 성질을 입증하는 것이다.
또한, 백혈병의 치료시에 동시에, 별도로 또는 순차적으로 사용하기 위한, (i) Hsp90의 적어도 하나의 에피토프에 대해서 특이적인 항체 또는 그의 항원 결합성 단편; 및 (ii) 이마티니브, 파클리탁셀, 도세탁셀, 다우노루비신, 독소루비신, 및 하이드록시우레아로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 항암제를 포함하는 배합제제가 제공된다.
배합제제의 예로는 별도의 용적으로 (즉, 단일 제제로 함께 혼합되지 않은) (i)의 항체 및 (ii)의 적어도 하나의 항암제를 함유하는 약제학적 팩이 포함된다.
또한, 백혈병의 치료가 필요한 환자에게 치료학적 유효량의 (i) Hsp90의 적어도 하나의 에피토프에 대해서 특이적인 항체 또는 그의 항원 결합성 단편; 및 (ii) 이마티니브, 파클리탁셀, 도세탁셀, 다우노루비신, 독소루비신, 및 하이드록시우레아로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 항암제를 투여하는 것을 포함하여 백혈병을 치료하는 방법이 제공된다.
백혈병은 만성 골수성 백혈병 또는 급성 림프구성 백혈병일 수 있으며, 적어도 하나의 항암제는 이마티니브일 수 있다.
항체 또는 그의 항원 결합성 단편은 서열 1의 서열을 포함하는 펩타이드에 의해서 나타나는 에피토프에 대해서 특이적일 수 있다.
예를 들어, 조성물 또는 배합제제에서 사용된 항체는 서열 2의 서열을 포함할 수 있다.
항암제는 이마티니브일 수 있다.
본 발명자는, 유용하게 치료될 수 있는 백혈병에는 급성 골수아구성 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병 및 만성 림프구성 백혈병으로 구성된 군으로부터 선택된 백혈병이 포함되는 것을 알아내었다.
백혈병은 만성 골수성 백혈병 또는 급성 림프성 백혈병일 수 있다.
만성 골수성 백혈병은 Ph1-양성 또는 Ph1-음성일 수 있으며, 즉 필라델피아 염색체를 함유하거나 (Ph1-양성), 필라델피아 염색체가 결여된 (Ph1-음성) 백혈병 세포를 특징으로 한다.
본 발명자는, 이마티니브에 의해서 유용하게 치료될 수 있는 만성 골수성 백혈병은 Ph1-양성이거나 Ph1-음성일 수 있음을 알아내었다.
백혈병은 Ph1-양성인 만성 골수성 백혈병일 수 있으며, 항암제는 이마티니브일 수 있다. 특히, 본 발명자는 Ph1-양성인 CML의 치료가 이마티니브와 서열 2의 서열을 포함하는 항체의 배합물에 의해서 수행될 수 있음을 알아내었다. 어떤 이론에도 얽매이는 것을 원치 않지만, Hsp90은 서열 2의 서열을 포함하는 항체에 의해서 격리될 수 있으며, 이것은 다시 비정상적인 Bcr-Abl 타이로신 키나제 (CML에서 발견되는 장애를 일으킨 골수생성을 야기함)가 예를 들어, 부정확하게 접히거나, 단백질 분해에 대해서 표적화되고/되거나, 골수생성 경로에 대한 그의 영향을 나타내는 것으로부터 방지되는 것을 의미한다.
이 치료는 또한, 이마티니브 저항성 CML Ph1-양성 세포에 대해서 효과적이다. 어떤 이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, 이마티니브에 대한 저항성은 예를 들어, 약물이 단백질에 대해 결합하는 것을 방지하고/하거나 약물의 작용 모드를 저해할 수 있는 비정상적인 Bcr-Abl 타이로신 키나제 내에 모여진 돌연변이에 기인하는 것으로 보인다. 이마티니브 저항성 세포에서, 서열 2의 서열을 포함하는 항체에 의한 Hsp90의 격리는 돌연변이된 비정상적인 타이로신 키나제가 부정확하게 접히고, 단백질 분해에 대해서 표적화되고/되거나, 골수생성 경로에 대해 그의 효과가 나타나는 것을 방지하도록 야기할 수 있다. 통상적으로, 비정상적인 단백질에 결합하고, 그들의 발현을 차단함으로써 암성 세포와 연관된 유전적 돌연변이를 완충시키는 작용을 하는 Hsp90의 격리는 또한, 함께 종양세포에 대해서 종합적으로 치사성인 것으로 입증되는 다양한 돌연변이가 발생하도록 야기할 수도 있다. 종양세포의 유전적 불안정성이 결여된 정상세포는 비교적 병에 걸리지 않는다.
추가로, 그리고 특히 놀랍게도, 본 발명자는 Ph1-음성인 CML의 치료는 이마티니브와 서열 2의 서열을 포함하는 항체의 배합물에 의해서 이루어질 수 있다.
백혈병은 Ph1-음성인 만성 골수성 백혈병일 수 있으며, 항암제는 이마티니브일 수 있다.
이러한 발견은 놀라운 것인데, 이는 Ph1-음성 CML 세포는 Ph1-양성 세포와 연관된 비정상적인 타이로신 키나제 단백질이 결여되어 있기 때문이다. 그러나, 어떤 이론에도 얽매이는 것을 원치는 않지만, Ph1-음성 세포에 이 키나제 (비정상 적이든지 그렇지 않던지)가 낮거나 기본적인 레벨로 존재할 수 있으며, 상술한 바와 같이 Hsp90의 격리는 서열 2의 서열을 포함하는 항체에 의한 것이며, 타이로신 키나제 단백질이 예를 들어, 부정확하게 접히거나, 단백질 분해에 대해서 표적화되거나, 또는 일부의 경우에는 골수생성 경로에 대해 그의 효과가 나타나는 것이 방지되는 것을 의미한다. 이것은 또한, Hsp90을 격리시킴으로써 함께 종합적으로 치사성인 것으로 나타난 다양한 돌연변이가 종양세포에 의해서 발생되는 경우일 수도 있다.
Ph1-음성 세포에서 이마티니브와 항-Hsp90 항체의 놀라운 효과는 Ph1-음성 CML의 두가지 경우에서 입증되며, 이마티니브에 대해서 민감한 TEL(ETV6)-ABL 융합의 존재에 기인하는 것일 수 있다 (Krystal, GW, 2004, Leukemia Research 28S1:pS53-S59).
백혈병은 이마티니브 저항성인 세포를 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 조성물 또는 제제는 추가로, 공지된 Hsp90 억제제, 예를 들어, GA 또는 17-AAG를 포함할 수 있다.
본 발명의 세번째 관점 (실험 C)은 함께 결장직장암 또는 선암의 치료시에 증진된 효능을 제공하는 효과적인 항암제를 포함하는 신규한 의약 및 제제에 관한 것이다.
결장직장암은 결장 또는 직장의 악성 종양이다. 결장직장암은 암 이환성 및 치사성의 선도적 원인이다. 이것은 영국에서 남성에게서 세번째로 가장 통상적인 암이고, 여성에게서는 두번째로 가장 통상적인 암이다. 결장직장암의 95%는 결장 및 직장 내부에 늘어선 선세포의 암인 선암이다.
결장직장암의 표준 치료방법은 통상적으로 5-플루오로우라실과 로이코보린 (폴린산)의 배합물이다.
5-플루오로우라실 (5-FU)는 위장암 및 유방암을 포함하는 다수의 고형 종양을 치료하기 위해서 사용된다. 이것은 통상적으로 진행된 결장직장암에서 폴린산과 함께 사용된다. 5-FU는 세포에서 FdUMP로 전환되며, 이것은 티미딜레이트 신타제 (TS) 억제성 DNA, 단백질 및 RNA 합성에 의해서 컴플렉스를 형성한다.
폴린산 (로이코보린)은 5-FU와의 배합물로 제공되는 비타민이다. 폴린산은 질병 부재 및 전반적인 생존율에서 유의적인 개선과 함께 5-플루오로우라실에 대한 반응속도를 증가시킨다. 폴린산은 세포내 폴레이트를 증가시키며, FdUMP/TS 컴플렉스를 안정화시킨다.
효과를 갖는 것으로 밝혀진 그 밖의 다른 약제에는 5-플루오로우라실 및 폴린산과 함께 진행된 결정직장암에서 일차적인 용도로 승인된 이리노테칸 및 옥살리파틴이 포함된다. 이리노테칸 또는 랄티트렉시드는 플루오로우라실-기본 치료법이 실패하였거나 부적절한 경우에 이차적 단일요법으로 사용하도록 승인되었다.
옥살리플라틴은 인지된 항암제이며, DNA에서 교차결합을 형성하며, 따라서 DNA 복제를 억제하는 신규한 디아미노사이클로헥산 백금 화합물을 함유한다.
'폴폭스 (FOLFOX)'는 5-플루오로우라실, 폴린산 및 옥살리플라틴의 통상적으로 사용되는 배합 화학요법이다.
이리노테칸 (CPT-11, Campto)은 세포분열에 대해서 필수적인 DNA-언와인딩 (unwinding) 효소인 토포이소머라제를 억제하며, 이것은 단일-스트랜드 DNA에서의 파괴에 의해 복제 정지를 야기한다. 영국에서, 이리노테칸은 5FU/FA와의 배합물로 진행된 결장직장암이 있는 화학요법-비처리 환자에게서 사용하도록, 또는 확립된 5FU-기본 레지멘이 실패한 환자에게서 이차적인 화학요법을 위한 단일 약제로서 승인되었다.
랄티트렉시드 (ZD 1694, Tomudex)는 DNA 합성에 수반되는 효소 티미딜레이트 신테타제를 억제한다. 이것은 5FU에 의해서 표적화된 것과 동일한 효소이다. 랄티트렉시드는 영국에서 5FU/FA-기본 레지멘이 허용되지 않거나 부적절한 경우의 진행된 결장직장암에 대한 고식적 치료를 위해서 승인되었다.
[참조: Tebbutt et al., 2002, European Journal of Cancer, 38: 1000-1015; Custem et al., 2002, Best Practice and Research Clinical Gastroenterology, 16: 319-330; Beretta et al., 2004, Surgical Oncology, 13: 63-73; NICE guidelines for Irinotecan, Oxaliplatin and raltitrexed for advanced colorectal cancer, 2002.]
본 발명의 이러한 세번째 관점에 따라, 암의 치료를 위한 의약을 제조하는 방법에서의 (i) Hsp90의 적어도 하나의 에피토프에 대해서 특이적인 항체 또는 그의 항원 결합성 단편; 및 (ii) 5-플루오로우라실, 옥살리플라틴, 이리노테칸 및 랄티트렉시드로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 항암제의 용도를 제공한다.
대신으로, 암의 치료시에 동시에, 별도로 또는 순차적으로 사용하기 위한 (i) Hsp90의 적어도 하나의 에피토프에 대해서 특이적인 항체 또는 그의 항원 결합 성 단편; 및 (ii) 5-플루오로우라실, 옥살리플라틴, 이리노테칸 및 랄티트렉시드로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 항암제를 포함하는 배합제제가 제공된다.
본 발명의 추가의 관점에 따르면, 암의 치료가 필요한 환자에게 치료학적 유효량의 (i) Hsp90의 적어도 하나의 에피토프에 대해서 특이적인 항체 또는 그의 항원 결합성 단편; 및 (ii) 5-플루오로우라실, 옥살리플라틴, 이리노테칸 및 랄티트렉시드로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 항암제를 투여하는 것을 포함하여 암을 치료하는 방법이 제공된다.
바람직하게는, 암은 결장직장암 또는 선암이다.
가장 바람직하게는, 항암제 5-플루오로우라실은 폴론산 (로이코보린)을 더 포함하거나, 폴론산과 함께 투여된다.
추가로, 또는 대신으로 5-플루오로우라실, 폴린산 및 옥살리플라틴은 함께 투여된다.
본 발명의 관점에 따르는 조성물 또는 제제는 추가로, 약제학적으로 허용되는 캐리어, 희석제 또는 부형제를 포함할 수 있다. 유사하게, 본 발명의 제조방법 또는 이들에서의 용도는 또한, 약제학적으로 허용되는 캐리어, 희석제 또는 부형제의 용도를 포함할 수도 있다. 약제학적으로 허용되는 캐리어, 희석제 및 부형제의 예는 본 기술분야에서 잘 알려져 있다 [참조예: Remington's Pharmaceutical Sciences and US Pharmacopoeia (1984, Mack Publishing Company, Easton, PA, USA)].
의약 또는 배합제제는 예를 들어, 경구적으로 투여될 수 있지만, 이것은 다 른 투여경로가 제외되는 것을 의미하지는 않는다.
본 발명에 따르는 항체 또는 그의 항원 결합성 단편은 검출가능한 라벨로 표지될 수 있거나, 통상적인 절차를 사용하여 이펙터 (effector) 분자, 예를 들어, 약물, 예를 들어, 독소루비신, 다우노루비신, 도세탁셀 또는 시스플라틴, 또는 5-플루오로우라실, 옥살리플라틴, 이리노테칸 및 랄티트렉시드와 같은 항암제, 또는 백혈병을 치료하는데 유용한 약제학적 성분, 예를 들어, 이마티니브, 파클리탁셀, 도세탁셀, 다우노루비신, 독소루비신, 및 하이드록시우레아, 또는 리신과 같은 독소, 또는 효소와 컨쥬게이트될 수 있으며, 본 발명은 이러한 표지된 항체 또는 항체 컨쥬게이트에 까지 연장된다.
필요한 경우에, 진단 또는 치료를 위해서는 항체의 혼합물, 예를 들어, 본 발명에 따르는 스트레스 단백질의 상이한 에피토프를 인식하는 두가지 또는 그 이상의 항체의 혼합물 및/또는 상이한 부류의 항체의 혼합물, 예를 들어, 본 발명의 동일하거나 상이한 에피토프(들)를 인식하는 IgG 및 IgM 항체의 혼합물이 사용될 수 있다.
상술한 바와 같이, 비록 멀티-샤프롱 컴플렉스에서 Hsp90에 의해서 나타나는 4급 에피토프가 치료를 위한 적절한 표적으로 제시되었지만, 실험 (이하)은 실제로 선형 에피토프가 치료를 위한 유용하고 효과적인 표적임을 나타낸다.
본 명세서에 인용된 문헌들을 포함한 본 명세서에서 거론된 문헌 각각의 내용은 본 명세서에 온전히 참고로 포함된다.
"PMID:" 참조번호가 문헌에 대해서 제시된 경우에, 이들은 각각의 문헌에 대 한 전체적인 서지적 정보 및 초록을 이들로부터 www.ncbl.nlm.nih.gov에서 이용할 수 있는 미국 국립의학도서관 (US National Library of Medicine)에 의해서 그들에게 할당된 PubMed 인식번호이다. 이것은 또한, 특히 예를 들어, PNAS, JBC 및 MBC 문헌의 경우에는 전문의 전자 복사본에 대한 직접적인 입수를 제공할 수 있다.
본 발명은 단지 예로서 조성물의 특정한 구체예 및 그에 의한 실험을 나타내는 이하의 설명으로부터 더 명백해 질 것이다.
실험
이하에 상세히 기술하는 실험의 첫번째 셋트 ("실험 A")는 단독으로 또는 항암제 독소루비신, 다우노루비신, 도세탁셀, 헤르셉틴, 이마티니브, 시스플라틴 및 파클리탁셀과 함께 사용되는, 서열 2의 서열을 가지며 서열 1의 서열을 갖는 펩타이드에 의해서 나타나는 에피토프에 대해서 특이적인 항-Hsp90 항체의 항암효과를 조사한 것을 설명하는 것이다.
이하에 상세히 기술하는 실험의 두번째 셋트 ("실험 B")는 단독으로 또는 항암제 이마티니브, 파클리탁셀, 도세탁셀, 다우노루비신, 독소루비신, 파클리탁셀, 시스플라틴 및 하이드록시우레아 함께 사용되는, 서열 2의 서열을 가지며 서열 1의 서열을 갖는 펩타이드에 의해서 나타나는 에피토프에 대해서 특이적인 항-Hsp90 항체의 인간 코카시안 (Caucasian) 만성 골수성 백혈병 세포 라인 K562 및 인간 골수성 백혈병 세포 라인 KU-812에 대한 효과를 조사한 것을 설명하는 것이다.
이하에 상세히 기술하는 실험의 세번째 셋트 ("실험 C")는 단독으로 또는 항 암제 5-플루오로우라실 (5-FU) 및 폴린산 (로이코보린, LV) 및/또는 옥살리플라틴과 함께 사용되는, 서열 2의 서열을 가지며 서열 1의 서열을 갖는 펩타이드에 의해서 나타나는 에피토프에 대해서 특이적인 항-Hsp90 항체의 인간 결장선암 세포 라인 HT29에 대한 효과를 조사한 것을 설명하는 것이다.
일반적 재료 및 방법
다른 식으로 언급되지 않는 한, 모든 방법은 표준 프로토콜을 사용하고, 적용가능한 경우에 제조자의 지침에 따라서 수행되었다. PCR, 분자 클로닝, 조작 및 서열결정, 항체의 제조, 에피토프 지도작성 및 미모토프 (mimotope) 디자인, 세포 배양 및 파아지 디스플레이 (phage display)를 포함하는 다양한 기술을 위한 표준 프로토콜은 문헌 [McPherson, MJ et al. (1991, PCR: A practical approach, Oxford University Press, Oxford), Sambrook, J. and Russell, D., "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", Third Edition, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Press, New York, 2001, Huynh and Davies (1985, "DNA Cloning Vol I - A Practical Approach", IRL Press, Oxford, Ed. DM Glover), Sanger, F. et al. (1977, PNAS USA 74(12): 5463-5467), Harlow, E. and Lane, D. ("Using Antibodies: A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 1998), Jung, G. and Beck-Sickinger, AG (1992, Angew. Chem. Int. Ed. Eng., 31: 367-486), Harris, M.A. and Rae, I.F. ("General Techniques of Cell Culture", 1997, Cambridge University Press, ISBN 0521 573645), "Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual" (Eds. Kay, BK, Winter, J., and McCafferty, J., Academic Press Inc., 1996, ISBN 0-12-402380-0)]과 같은 텍스트에 기술되어 있다.
다른 것들 중에서 특히 여기에 상세히 기술된 방법에서 유용한 시약 및 장치는 아머샴 (Amersham; www.amersham.co.uk), 베링거 만하임 (Boehringer Mannheim; www.boehringer-ingelheim.com), 클론테크 (Clontech; www.clontech.com), 제노시스 (Genosys; www.genosys.com), 밀리포어 (Millipore; www.millipore.com), 노바젠 (Novagen; www.novagen.com), 퍼킨 엘머 (Perkin Elmer; www.perkinelmer.com), 파마시아 (Pharmacia; www.pharmacia.com), 프로메가 (Promega; www.promega.com), 퀴아젠 (Qiagen; www.qiagen.com), 시그마 (Sigma; www.sigma-aldrich.com), 및 스트라타젠 (Stratagene; www.stratagene.com) 등으로부터 이용할 수 있다.
항체
이하의 실험 A 및 B에서 사용된 항체는 WO 01/76627에 기술된 것이며, 여기에서 서열 2의 서열을 갖고, 서열 1의 서열을 갖는 펩타이드에 의해서 나타나는 에피토프에 대해서 특이적인 마이코그라브 (Mycograb) (RTM)라 칭한다. 기본적 항체용액은 물 중의 4 ㎎/㎖ 원액이었다. 추가의 희석은 RPMI 완전배지 내에서 수행되었다.
간략하면, GB 2240979 및 EP 0406029에 기술된 칸디다 알비칸스 (Candida albicans) Hsp90 에피토프에 대해서 특이적인 이전의 항체의 DNA 서열을 에스케리 키아 콜라이 (Escherichia coli)(Operon Technologies Inc., Alameda, CA, USA) 내에서 발현시키기 위한 코돈 최적화에 의해서 유전적으로 변형시키고, 이. 콜라이 (E. coli) 발현 벡터 내에 삽입하였다. 항-Hsp90 항체의 아미노산 서열은 서열 2의 서열을 포함한다 (중 (heavy), 경 (light) 및 스페이서 (spacer) 영역을 포함). 이 항체는 서열 1의 서열을 포함하는 에피토프를 인식한다.
항-Hsp90 항체는 에스케리키아 콜라이 숙주 내에서 발현된 다음에, 친화성 크로마토그라피 및 이미다졸 교환 칼럼에 의해서 95% 순도까지 정제하였다. 표준 분자생물학 프로토콜이 사용되었다 (참조예: Harlow & Lane, supra; Sambrook, J. et al., 1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York; Sambrook, J. & Russell, D., 2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd Edition, Cold spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor).
약물
시스플라틴은 브리스톨-마이어스 스퀴브 (Bristol-Myers Squibb, Mayne)로부터 수득되었으며, 1 ㎎/㎖로 공급되었다.
도세탁셀은 시그마로부터 수득되었다. 5 ㎎을 우선적으로 디메틸 설폭사이드 (DMSO)에 의해서 16 ㎎/㎖로 희석하였다.
독소루비신은 파마시아로부터 수득되었으며; 5 ㎖가 독소루비신 하이드로클로라이드 2 ㎎/㎖로 공급되었다.
노바티스 (Norvatis)로부터 수득된 이마티니브 (글리벡 (RTM))는 100 ㎎ 캅셀제로 공급되었다. 이마티니브는 우선적으로 물로 희석하여 10 ㎎/㎖ 원액을 생산하였다.
파클리탁셀은 시그마로부터 수득되었으며, 물로 2.5 ㎖까지 만든 250 ㎕ 메탄올 중에서 재조제하여 2 ㎎/㎖를 제공하였다.
다우노루비신은 시그마로부터 수득되었으며, 5 ㎎은 2.5 ㎖ 물로 희석하여 2 ㎎/㎖를 제공하였다.
헤르셉틴 (RTM)(트라스투주마브)은 로슈 (Roche)로부터 수득되었으며, 7.2 ㎖의 물 중에서 재조제하여 21 ㎎/㎖를 제공하였다.
하이드록시우레아는 시그마로부터 수득되었으며, 1 g을 4 ㎖의 물로 희석하여 25 ㎎/㎖를 제공하였다.
5-플루오로우라실 (5-FU)은 시그마로부터 수득되었으며, 96 ㎎을 완전 RPMI 배지 내에서 1/10로 희석된 1 ㎖ DMSO 내에서 재조제하여 9.6 ㎎/㎖를 제공하였다.
폴린산 (LV)은 시그마로부터 수득되었으며; 100 ㎎을 25 ㎖의 물로 재조제하여 4 ㎎/㎖ 원액을 제공하였다.
옥살리플라틴은 시그마로부터 수득되었으며; 12.5 ㎎을 2.5 ㎖의 물로 재조제하여 5 ㎎/㎖를 제공하였다.
상기 약물은 각각 RPMI 완전배지 내에서 더 희석하였다.
세포 농도 및 생존도 측정
세포를 계수하였으며, 생존도 백분율은 등량의 0.4% 트립판 블루 용액 (Sigma)으로 염색한 후에 표준 혈구계를 사용하여 측정하였다.
세포 생존도 시험
세포 생존도는 각각의 실험 후에 세포 역가 청색시험 (Cell Titer Blue Assay; Promega)을 사용하여 평가되었다. 세포로부터 배지를 제거하고, 100 ㎕의 신선한 완전배지를 첨가하고, 이어서 20 ㎕의 세포 역가 청색시약을 첨가하였다. 이것을 37℃, 5% CO2 하에서 4시간 동안 배양하고, 흡광도는 기준으로 600 nm를 사용하여 570 nm에서 판독하였다. 이 시험은 지시제 (indicator) 염료 레사주린 (청색)을 사용하여 세포의 대사능을 측정한다. 생존 세포는 레사주린을 레소루핀 (분홍색)으로 환원시킨다.
데이타 해석
세포 성장은 상술한 바와 같이 평가되었다. IC50 (세포의 50%에서 세포독성을 야기하는데 필요한 약물의 용량) 농도는 48시간의 배양기간에 걸쳐서 각각의 약물에 대해 단독으로 측정되었다.
힐 공식 (Hill equation)을 기초로 한 상승작용, 상가적 효과 또는 길항작용의 척도인 중앙효과분석 (median effect analysis)은 칼쿠신 제품 (Calcusyn product; BioSoft, Cambridge, UK - www.biosoft.com)을 사용하여 초우 (Chou)와 탈라레이 (Talalay)의 방법에 의해서 결정되었다. 1 미만인 경우에는 상승작용을 반영하고, 1인 경우에는 상가적 효과를 반영하며, 1보다 큰 경우에는 길항작용을 반영하는 CI (combination index)는 약물 효과의 가변적 레벨에 대해서 계산되었다. N이 개개 약물의 IC50에 근접한 값인 경우에 0.0156N-8N 범위를 갖는 IC50 (50% 세포독성효과를 나타내는데 필요한 약물의 농도) 이상 및 이하의 10개의 고정된 약물 비는 약물 배합물을 48시간 동안 세포와 함께 배양한 다음에, 세포독성의 정도를 결정함으로써 조사되었다. Fa50은 세포의 50%가 병에 걸린 포인트 (point)로 정의된다. CL 값은 Fa50에 대해서 나타낸다.
실험 A
결과는 항체가 이마티니브와의 길항작용 및 파클리탁셀과의 무작용 (indifference)의 증거를 나타내었음을 보여준다. 시스플라틴 및 도세탁셀과는 약간의 상승작용이 있었지만, 도세탁셀은 임상적으로 달성될 수 없는 농도에서 가능하다. 독소루비신은 임상적으로 달성될 수 있는 약물 레벨에서 세포 라인 둘 다와, 에스트로젠 수용체가 있는지 여부와는 무관하게 상승작용을 나타내었다. 독소루비신에 의해서 달성된 결과는 매우 유의적인 상승작용으로 평가된다. 다우노루비신의 결과는 에스트로젠 수용체를 갖는 세포 라인에 의해서는 동등하게 인상적이었지만, 6 및 12.5 ㎎/ℓ로 제한된 상승작용을 갖는 에스트로젠 수용체 음성 세포 라인에 의해서는 덜 인상적이었다. 헤르셉틴에 대한 결과는 에스트로젠 수용체 양성 세포 라인에 대해서는 상승작용을 나타내지 않았지만, 상승작용은 에스트로젠 수용체 음성 세포 라인에 의해서 관찰되었다.
재료 및 방법
세포 라인 및 배양 정보
야생형 및 변이체 에스트로젠 수용체 둘 다뿐만 아니라 프로제스테론 수용체를 발현하는 인간 코카시안 유방선암 (breast adenocarcinoma) 세포 라인 MCF7은 ECACC로부터 수득되었다 (ECACC 번호 - 86012803).
사용된 그 밖의 다른 세포 라인은 다음과 같다:
HS578T - ECACC 번호 86082104, 인간 유방암, 상피성. 면역억제된 마우스에서 종양형성성이며, 반고형 매질에서 콜로니를 형성한다. 에스트로젠 수용체 음성.
SK-BR-3 - (ATCC) 인간 유방선암. 에스트로젠 수용체 양성. HER2/C-erb-2 유전자를 과발현한다.
UACC-812 - (ATCC) 도관암, 수술 전에 환자는 집중적인 화학요법을 받았다. 에스트로젠 수용체 음성, 프로제스테론 수용체 음성, P-글리코프로테인 음성. HER-2/neu 종양유전자 서열의 증폭.
HCT116 - ATCC 결장직장암. TGF 베타 1 및 베타 2 발현에 대해서 양성.
세포는 0.25% 트립신/EDTA (Sigma)를 사용하여 분할하고, 37℃, 5% CO2 하에서 페놀 레드를 함유하지 않고 10% 태자소혈청, 1% 필수아미노산, 2 mM 글루타민, 100 U/㎖ 페니실린, 0.1 ㎎/㎖ 스트렙토마이신 (Sigma)을 함유하는 RPMI 배지 내에서 유지시켰다.
실험 A
MCF7 세포에 대한 마이코그라브의 효과
세포 라인을 분할하고, 세포를 계수하였다. 세포를 12- 또는 96-웰 편평-바닥 조직배양 플레이트에 첨가하였다. 12-웰 플레이트의 경우에는 1 ㎖의 4×104 세포/㎖를 1 ㎖의 배지와 함께 첨가하였다. 96-웰 플레이트의 경우에는 100 ㎕의 4×104 세포/㎖를 첨가하고, 이어서 추가로 100 ㎕의 완전배지를 플레이트에 첨가하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO2 하에서 밤새 배양하였다. 다음 날, 세포를 위상차 현미경검사 하에서 관찰하여 이들이 플레이트에 부착하였음을 확인하고, 상등액 배지를 흡인하여 여과하였다. 그 후, 2배 증가 농도의 마이코그라브 (1.5-200 ㎍/㎖)를 함유하는 신선한 배지, 또는 제제 완충액 또는 배지를 단독으로 웰에 첨가하였다. 플레이트를 48시간 동안 다시 배양기에 넣고, 그 후에 세포 역가 청색시험을 수행하거나, 생존수를 혈구계를 사용하여 계수하였다.
MCF7 세포에 대한 항암제 독소루비신, 다우노루비신, 헤르셉틴, 도세탁셀, 이마티니브, 파클리탁셀 및 시스플라틴의 효과
세포 라인을 분할하고, 세포를 계수하였다. 100 ㎕의 4×104 세포/㎖를 96-웰 편평-바닥 조직배양 플레이트에 첨가하고, 추가로 100 ㎕의 완전배지를 플레이트에 첨가하였다. 그 후, 플레이트를 37℃, 5% CO2 하에서 밤새 배양하였다. 다음 날, 세포를 위상차 현미경검사 하에서 관찰하여 이들이 플레이트에 부착하였음을 확인하고, 상등액 배지를 흡인하여 여과하였다. 그 후, 증가 농도의 시험 약물 (독소루비신 0.55-600 ㎍/㎖, 다우노루비신 0.45-1000 ㎍/㎖, 헤르셉틴 0.2-200 ㎍/㎖, 도세탁셀 0.75-800 ㎍/㎖, 이마티니브 4.5-5000 ㎍/㎖, 시스플라틴 0.04-50 ㎍/㎖, 파클리탁셀 1.8-1000 ㎍/㎖)를 함유하는 신선한 배지, 또는 배지를 단독으로 웰에 첨가하였다. 플레이트를 48시간 동안 다시 배양기에 넣고, 그 후에 세포 역가 청색시험을 수행하였다.
MCF7 세포에 대한 항암제 독소루비신, 다우노루비신, 헤르셉틴, 도세탁셀, 이마티니브, 파클리탁셀 및 시스플라틴과 배합한 마이코그라브의 효과
세포 라인을 분할하고, 세포를 계수하였다. 100 ㎕의 4×104 세포/㎖를 96-웰 편평-바닥 조직배양 플레이트에 첨가하고, 추가로 100 ㎕의 완전배지를 플레이트에 첨가하였다. 그 후, 플레이트를 37℃, 5% CO2 하에서 밤새 배양하였다. 다음 날, 세포를 위상차 현미경검사 하에서 관찰하여 이들이 플레이트에 부착하였음을 확인하고, 상등액 배지를 흡인하여 여과하였다. 100 ㎕의 신선한 배지를 플레이트 에 첨가하고, 마이코그라브 대비 다른 약물의 체커보드 (checkerboard)는 이하의 표 1 (예로서 독소루비신을 사용함)에 요약된 바와 같이 설정하여 웰당 200 ㎕의 총용적을 제공하였다.
플레이트를 48시간 동안 다시 배양기에 넣고, 그 후에 세포 역가 청색시험을 수행하였다.
실험은 또한, 상기 방법을 사용하여 HS578T 세포에 의해서도 수행되었으며, 결과는 이하에 제시하였다.
실험 A의 결과
MCF7 세포 라인
시스플라틴
IC50은 6 ㎎/ℓ였으며, 고농도에서의 상승작용을 제외하고는 마이코그라브 첨가에 대한 영향은 없었다 - 참조 표 2.
이마티니브
IC50은 37.5 ㎎/ℓ였으며, 37.5 ㎎/㎖ 이하의 이마티니브 용량에서는 마이코그라브와 3.3-10 범위의 CIs를 갖는 길항작용의 증거를 나타내었다. 이 용량 이상에서 이마티니브는 세포 라인을 치사시켰다.
도세탁셀
IC50은 225 ㎎/ℓ였으며, 도세탁셀의 고용량에서는 마이코그라브와 약간의 상승작용의 증거가 있었다 - 참조 표 3.
파클리탁셀
IC50은 225 ㎎/ℓ였으며, 약물의 저농도에 의한 무작용 및 500 ㎎/ℓ의 파클리탁셀과 같은 높은 레벨에서의 온화한 상승작용이 있었다. 이들 레벨은 임상적으로 적절한 용량을 벗어나는 것이다.
독소루비신
IC50은 1.75 ㎎/ℓ였다. 일정한 약물 농도의 범위에 걸쳐서 마이코그라브와 명백한 상승작용이 있었다 - 참조 표 4.
다우노루비신
IC50은 1 ㎎/ℓ였다. 일정한 약물 농도의 범위에 걸쳐서 마이코그라브와의 상승작용의 증거가 있었다 - 참조 표 5.
헤르셉틴
헤르셉틴에 의해서는 검출가능한 활성이 없었으며, 상승작용의 증거도 없었다.
HS578T 세포 라인
이 세포 라인은 마이코그라브에 대해 400 ㎎/ℓ까지의 증가 농도에서 무감각하였다. 이것은 이들 종양이 스테로이드 민감성이 아니고, 따라서 마이코그라브와 같은 Hsp90 억제제에 대해서 내재적으로 응답할 것 같지 않기 때문에 놀라운 것이 아니었다. 그러나, 안트라사이클린 독소루비신뿐만 아니라 다우노루비신 및 헤르 셉틴과 함께는 예기치 않은 상승작용이 있었다.
독소루비신
IC50은 1 ㎎/ℓ였다. 일정한 약물 농도의 범위에 걸쳐서 마이코그라브와의 상승작용의 증거가 있었다 - 참조 표 6.
다우노루비신
IC50은 1 ㎎/ℓ였다. 상승작용의 약간의 증거가 있었으나, 마이코그라브와는 대부분 무작용성이었다 - 참조 표 7.
헤르셉틴
HS578T의 경우에 모노-헤르셉틴은 200 ㎎/ℓ까지의 농도에서 세포의 50%를 치사시키는데 실패하였지만, 마이코그라브의 존재하에서는 상승작용이 관찰되었다 - 참조 표 8.
도세탁셀
이것은 세포 라인 HS578T에 대해서 50 ㎎/ℓ의 IC50을 제공하였으며, 마이코그라브와의 상승작용의 증거는 나타내지 않았다.
시스플라틴
시스플라틴은 세포 라인 HS578T에 대해서 12.5 ㎎/ℓ의 IC50을 가졌으며, 마이코그라브와의 상승작용의 증거는 나타내지 않았다.
결론
이마티니브에 의한 길항작용 및 파클리탁셀에 의한 무작용의 증거가 있었다. 시스플라틴 및 도세탁셀과의 약간의 상승작용이 있었으나, 도세탁셀은 임상적으로 도달할 수 없는 농도에서 예상된다. 독소루비신은 독소루비신은 임상적으로 달성될 수 있는 약물 레벨에서 세포 라인 둘 다와, 에스트로젠 수용체가 있는지 여부와는 무관하게 상승작용을 나타내었다. 독소루비신에 의해서 달성된 결과는 매우 유의적인 상승작용으로 평가된다. 다우노루비신의 결과는 에스트로젠 수용체를 갖는 세포 라인에 의해서는 동등하게 인상적이었지만, 6 및 12.5 ㎎/ℓ로 제한된 상승작용을 갖는 에스트로젠 수용체 음성 세포 라인에 의해서는 덜 인상적이었다. 상기의 이러한 놀라운 상승적 효과는 항체와 특정의 항암제 사이에서는 관찰되지만, 이마티니브와 같은 다른 항암제에 의해서는 관찰되지 않는다.
실험 B
실험의 두번째 셋트 (이하에 기술됨)는 단독으로 또는 항암제 이마티니브, 파클리탁셀, 도세탁셀, 다우노루비신, 독소루비신, 파클리탁셀, 시스플라틴 및 하이드록시우레아 함께 사용되는, 서열 2의 서열을 가지며 서열 1의 서열을 갖는 펩타이드에 의해서 나타나는 에피토프에 대해서 특이적인 항-Hsp90 항체의 인간 코카시안 만성 골수성 백혈병 세포 라인 K562 및 인간 골수성 백혈병 세포 라인 KU-812에 대한 효과를 조사한 것을 설명하는 것이다.
결과는 항체가 이마티니브, 파클리탁셀, 도세탁셀, 다우노루비신과의 상승작용의 증거를 나타내었음을 보여준다. 항체는 독소루비신 및 하이드록시우레아와는 약간의 상승작용을 증거를 나타내었다. 결과는 항체가 시스플라틴과의 무작용의 증거를 나타내었음을 보여준다.
도세탁셀 및 파클리탁셀에 의해서 달성된 결과는 매우 유의적인 상승작용으로 평가된다.
재료 및 방법
세포 라인 및 배양 정보
인간 골수성 백혈병 세포 라인 KU-812는 ECACC로부터 수득되었다 (ECACC 번호 90071807). 필라델피아 염색체 (Ph1)는 이 세포 라인에서 검출되었다. 세포는 형태학적으로 호염기구의 특징을 갖는다.
인간 코카시안 만성 골수성 백혈병 세포 라인 K562는 ECACC로부터 수득되었다 (ECACC 번호 89121407). K562는 말기 아세포발증 상태의 만성 골수성 백혈병을 갖는 53세의 여성의 흉막 삼출액으로부터 확립되었다. 다양한 K-562 서브라인 (sublines)에 대한 세포핵학적 연구는 3가지 서브그룹 (A, B, C)으로 분류되었다 (Dimery, I.W. et al., 1983, Exp. Hematol.;11(7):p601-10). 이들 실험에서 사용된 라인은 K562B였다. 실험은 이들 라인이 일반적으로 형태학, 액체 현탁배지 내에서의 성장 동력학, 연질 한천 배양물에서의 클로닝 효율, 항-K562 모노클로날 항체의 결합, 및 세포표면 단백질의 관점에서 유사함을 나타내었다. K562B는 성장 동력학, 세포표면 단백질 마커, 표면 항원, 세포유전학 및 헤모글로빈 생산에 관하여 K562A 및 K562C와 비교하였다. 세포 라인들 사이에서의 차이점이 관찰되었으 며, 가장 중요한 차이점은 K562A 또는 C 세포의 90% 이상이 Ph1-양성인 것으로 나타난 반면에, K562B 세포의 15% 미만이 Ph1을 함유하였다는 것이다 (Dimery, IW, et al., 1983, Exp. Hematol.;11(7):p601-10). 세포유전학적 시험은 진정한 Ph1 염색체의 존재를 밝히지 못하였지만, K562는 적어도 4배 증폭되는 Ph1 염색체의 부분을 함유하는 것으로 보인다. Ph1 염색체의 이 부분은 키메릭 bcr/c-abl 전사물을 코드화하며, 이것은 해독되면 bcr/c-abl 융합단백질을 수득한다 (Grosveld, G., et al., 1986, Mol. Cell. Biol. 6, No. 2: p607-616). bcr/c-abl 융합단백질은 CML의 병원론에 대한 원인이 되는 활성화된 타이로신 키나제 활성을 갖는다.
세포는 37℃, 5% CO2 하에서 페놀 레드를 함유하지 않고 10% 태자소혈청, 2 mM 글루타민, 100 U/㎖ 페니실린, 0.1 ㎎/㎖ 스트렙토마이신 (Sigma)을 함유하는 RPMI 배지 내에서 2×106 내지 9×106 세포/㎖ 사이를 유지시켰다.
실험
K562 세포에 대한 마이코그라브의 효과
세포 라인을 계수하였다. 세포를 4×104 세포/㎖를 함유하는 100 ㎕의 분취액을 사용하여 96-웰 편평-바닥 조직배양 플레이트에 첨가하였다. 그 후, 2배 증가 농도의 마이코그라브 (RTM) (1.5-200 ㎍/㎖)를 함유하는 신선한 배지, 또는 배지를 단독으로 웰에 첨가하였다. 플레이트를 48시간 동안 다시 배양기에 넣고, 그 후에 세포 역가 청색시험을 수행하거나, 생존수를 혈구계를 사용하여 계수하였다.
K562 세포에 대한 항암제 독소루비신, 다우노루비신, 도세탁셀, 파클리탁셀, 이마티니브, 시스플라틴 및 하이드록시우레아의 효과
세포 라인을 계수하였다. 100 ㎕의 2×105 또는 4×105 세포/㎖를 96-웰 편평-바닥 조직배양 플레이트에 첨가하였다. 그 후, 플레이트를 37℃, 5% CO2 하에서 밤새 배양하였다. 증가 농도의 시험 약물 (독소루비신 0.55-600 ㎍/㎖, 다우노루비신 0.07-100 ㎍/㎖, 도세탁셀 0.75-800 ㎍/㎖, 파클리탁셀 0.5-500 ㎍/㎖, 이마티니브 4.5-5000 ㎍/㎖, 시스플라틴 0.04-50 ㎍/㎖)를 함유하는 신선한 배지, 또는 배지를 단독으로 웰에 첨가하였다. 플레이트를 48시간 동안 다시 배양기에 넣고, 그 후에 세포 역가 청색시험을 수행하였다.
K562 세포에 대한 항암제 독소루비신, 다우노루비신, 도세탁셀, 파클리탁셀, 이마티니브, 시스플라틴 및 하이드록시우레아와 배합한 마이코그라브의 효과
세포 라인을 계수하였다. 100 ㎕의 2×105 또는 4×105 세포/㎖를 96-웰 편평-바닥 조직배양 플레이트에 첨가하였다. 그 후, 플레이트를 37℃, 5% CO2 하에서 밤새 배양하였다. 100 ㎕의 신선한 배지를 플레이트에 첨가하고, 마이코그라브 대비 다른 약물의 체커보드는 이하의 표 9 (예로서 독소루비신을 사용함)에 요약된 바와 같이 설정하여 웰당 200 ㎕의 총용적을 제공하였다.
실험은 또한, 상기 방법을 사용하여 KU-812 세포에 의해서도 수행되었으며, 결과는 이하에 제시하였다.
결과
K562 세포에 대한 마이코그라브 (RTM)의 효과
세포 라인 K562에 대해서 마이코그라브 단독은 12.5 ㎍/㎖에서 세포 생존도에서 40% 감소를 나타내었다.
K562 세포에 대한 마이코그라브 (RTM)과 항암제의 효과
이마티니브
IC50은 16 ㎍/㎖였다. 일정한 약물 농도의 범위에 걸쳐서 이마티니브와 마이코그라브 (RTM) 사이에서 상승작용의 증거가 있었다 (참조 표 10).
독소루비신
IC50은 1 ㎍/㎖였다. 일정한 약물 농도에서 독소루비신과 마이코그라브 (RTM) 사이에서는 상승작용의 약간의 증거가 있지만, 대부분은 마이코그라브 (RTM)와 무작용성이었다.
다우노루비신
IC50은 0.75 ㎍/㎖였다. 낮은 약물 농도에서는 다우노루비신과 마이코그라브 (RTM) 사이에서 상승작용의 약간의 증거가 있었다 (참조 표 11).
도세탁셀
IC50은 70 ㎍/㎖였다. 일정한 약물 농도의 범위에서 도세탁셀과 마이코그라브 (RTM) 사이에는 명백한 상승작용의 증거가 있었다 (참조 표 12).
파클리탁셀
IC50은 32 ㎍/㎖였다. 일정한 약물 농도의 범위에서 파클리탁셀과 마이코그라브 (RTM) 사이에는 명백한 상승작용의 증거가 있었다 (참조 표 13).
시스플라틴
IC50은 12.5 ㎍/㎖였다. 시스플라틴과 마이코그라브 (RTM) 사이에는 상승작용의 증거가 없었다.
하이드록시우레아
IC50은 유일한 약제로서 하이드록시우레아에 의해서는 결코 달성되지 않았다. 그러나, 낮은 약물 농도에서 하이드록시우레아와 마이코그라브 (RTM) 사이에서는 상승작용의 약간의 증거가 있었다 (참조 표 14).
KU-812 세포 라인
KU-812 세포에 대한 마이코그라브 (RTM)의 효과
세포 라인 KU-812에 대해서 마이코그라브 단독은 50 ㎍/㎖에서 세포 생존도에서 40% 감소를 나타내었다.
KU-812 세포에 대한 마이코그라브 (RTM)와 항암제의 효과
이마티니브
IC50은 0.12 ㎍/㎖였다. 낮은 약물 농도에서 이마티니브와 마이코그라브 (RTM) 사이에는 상승작용의 약간의 증거가 있었다 (참조 표 15).
요약
K562 세포 라인을 사용하여, 이마티니브, 파클리탁셀, 및 도세탁셀과의 상승작용의 증거가 있었다. 다우노루비신, 독소루비신 및 하이드록시우레아와는 약간의 상승작용의 증거가 있었다. 시스플라틴과는 무작용이 나타났다.
KU-812 세포 라인을 사용하여서는, 이마티니브와의 약간의 상승작용의 증거가 있었다.
결론
여기에 제시된 데이타는 마이코그라브 (RTM) 항체는 단독으로 Ph1-양성 및 Ph1-음성 CML 세포 라인 둘 다의 생존도를 감소시킬 수 있음을 명백히 나타낸다. 더구나, Ph1-양성 CML 세포 라인에서는 이마티니브와 항-Hsp90 항체를 포함하는 항암제 사이에서 놀라운 상승작용이 있다. 데이타는 또한, Ph1-양성 백혈병 세포 라인에서 파클리탁셀, 도세탁셀, 다우노루비신, 독소루비신, 하이드록시우레아 및 항-Hsp90 항체 사이에 상승작용이 있음을 나타낸다. 이들 결과는 CML의 치료를 위한, 항-Hsp90 항체 (마이코그라브, RTM)과 함께 이마티니브와 같은 항암제를 포함하는 조성물의 사용을 허용한다. 항암제와 마이코그라브 (RTM) 항체의 배합물에 의해서 나타나는 상승작용은 잠재적으로 다수의 항암제, 특히 이마티니브의 문제가 되는 독성을 가정하면 대단히 중요할 수 있는 더 낮은 치료 투약량을 가능하게 하거나, 동일한 투약량에서 더 효과적이고 더 장기간 치료를 가능하게 하며, 이렇게 함으로써 원치 않는 부작용을 감소시킬 수 있다.
본 발명의 임상적 의미에는 다음이 포함된다: (i) 항암제, 예를 들어, 이마티니브와 항-Hsp90 항체의 상승적 배합물의 생산은 CML의 치료시에 선택되는 치료방법이 된다. 이것은 CML에 대한 치사율의 감소를 유도할 수 있다; (ii) 이마티니브는 독성이며, 본 발명에 의해서 제공되는 상승작용은 저용량의 이마티니브가 효능을 유지하고, 동시에 독성을 감소시키면서 사용될 수 있음을 의미한다; (iii) 항-Hsp90 항체의 독성 절감효과는 이마티니브의 고용량의 임상적 효능을 조사할 수 있도록 하며, 또한 개선된 임상적 결과에 기여할 것이다.
실험 C
실험의 세번째 셋트 (이하에 기술됨)는 단독으로 또는 항암제 5-FU 및 폴린산 및/또는 옥살리플라틴과 함께 사용되는, 서열 2의 서열을 가지며 서열 1의 서열을 갖는 펩타이드에 의해서 나타나는 에피토프에 대해서 특이적인 항-Hsp90 항체의 인간 결장선암 세포 라인 HT29에 대한 효과를 조사한 것을 설명하는 것이다.
결과는 항체가 5-FU 및 폴린산과, 및 옥살리플라틴과 상승작용의 증거를 나타내었음을 보여준다. 또한, 마이코그라브/항-Hsp90 항체와 5-FU, 폴린산 및 옥살리플라틴의 4가지 약물 배합물에 의한 상승작용의 증거도 있다. 75 ㎍/㎖의 5-FU 및 10.5 ㎍/㎖의 옥살리플라틴 보다 큰 농도가 특히 유용한 것으로 나타났다.
재료 및 방법
세포 라인 및 배양 정보
인간 코카시안 결장선암 등급 II 세포 라인 HT29는 ECACC로부터 수득되었다 (ECACC 번호 91072201).
세포는 0.25% 트립신/EDTA (Sigma)를 사용하여 분할하였으며, 37℃, 5% CO2 하에서 10% 태자소혈청, 2 mM 글루타민, 100 U 페니실린, 0.1 ㎎ 스트렙토마이신 (Sigma)을 함유하는 맥코이 (McCoy's) 5a 배지 내에서 유지시켰다.
그 밖의 다른 세포 라인에는 HCT116이 포함된다.
실험
HT29 세포에 대한 마이코그라브 (RTM)의 효과
세포 라인을 분할하고, 세포를 계수하였다. 세포를 12- 또는 96-웰 편평-바닥 조직배양 플레이트에 첨가하였다. 12-웰 플레이트의 경우에는 1 ㎖의 4×104 세포/㎖ 또는 4×105 세포/㎖를 1 ㎖의 완전 맥코이 5a 배지와 함께 각각의 웰에 첨가하였다. 96-웰 플레이트의 경우에는 100 ㎕의 4×104 세포/㎖ 또는 4×105 세포/㎖를 첨가하고, 이어서 추가로 100 ㎕의 완전 맥코이 5a 배지를 각각의 웰에 첨가하였다. 그 후, 플레이트를 37℃, 5% CO2 하에서 밤새 배양하였다. 다음 날, 세포를 위상차 현미경검사 하에서 관찰하여 이들이 플레이트에 부착하였음을 확인하고, 상등액 배지를 흡인하여 여과하였다. 그 후, 2배 증가 농도의 마이코그라브 (1.5-200 ㎍/㎖)를 함유하는 신선한 배지, 또는 배지를 단독으로 웰에 첨가하였다. 플레이트를 48시간 동안 다시 배양기에 넣고, 그 후에 세포 역가 청색시험을 수행하거나, 생존수를 계수하였다.
HT29 세포에 대한 항암제 5FU와 폴린산 및 옥살리플라틴의 효과
세포 라인을 분할하고, 세포를 계수하였다. 100 ㎕의 4×104 세포/㎖ 또는 4×105 세포/㎖를 96-웰 편평-바닥 조직배양 플레이트에 첨가하고, 추가로 100 ㎕의 완전 맥코이 5a 배지를 플레이트에 첨가하였다. 그 후, 플레이트를 37℃, 5% CO2 하에서 밤새 배양하였다. 다음 날, 세포를 위상차 현미경검사 하에서 관찰하여 이들이 플레이트에 부착하였음을 확인하고, 상등액 배지를 흡인하여 여과하였다. 그 후, 증량식 2 배 농도의 시험 약물 (5-FU 4.5-2400 ㎍/㎖ + 1 ㎎/㎖ 폴린산 또는 옥살리플라틴 1-500 ㎍/㎖)를 함유하는 100 ㎕의 신선한 완전 RPMI 배지, 또는 배지를 단독 (배지 + 5-FU 대조를 위한 2.5% DMSO)으로 웰에 첨가하였다. 플레이트를 48시간 동안 다시 배양기에 넣고, 그 후에 세포 역가 청색시험을 수행하였다.
HT29 세포에 대한 항암제 5FU 및 폴린산 또는 옥살리플라틴과 배합한 마이코그라브 (RTM)의 효과
세포 라인을 분할하고, 세포를 계수하였다. 100 ㎕의 4×104 세포/㎖ 또는 4×105 세포/㎖를 96-웰 편평-바닥 조직배양 플레이트에 첨가하고, 추가로 100 ㎕의 완전 맥코이 5a 배지를 플레이트에 첨가하였다. 그 후, 플레이트를 37℃, 5% CO2 하에서 밤새 배양하였다. 다음 날, 세포를 위상차 현미경검사 하에서 관찰하여 이들이 플레이트에 부착하였음을 확인하고, 상등액 배지를 흡인하여 여과하였다. 100 ㎕의 신선한 완전 RPMI 배지를 플레이트에 첨가하고, 마이코그라브 (RTM) 대비 시험 약물 ((5-FU 4.5-2400 ㎍/㎖ + 1 ㎎/㎖ 폴린산 또는 옥살리플라틴 1-500 ㎍/㎖) 또는 배지 단독 (배지 + 5-FU 대조를 위한 2.5% DMSO))의 체커보드는 이하의 표 16에 요약된 바와 같이 설정하여 웰당 200 ㎕의 총용적을 제공하였다.
HT29 세포에 대한 항암제 5FU 및 폴린산 및 옥살리플라틴과 배합한 마이코그라브 (RTM)의 효과
세포 라인을 분할하고, 세포를 계수하였다. 100 ㎕의 4×104 세포/㎖ 또는 4×105 세포/㎖를 96-웰 편평-바닥 조직배양 플레이트에 첨가하고, 추가로 100 ㎕의 완전 맥코이 5a 배지를 플레이트에 첨가하였다. 그 후, 플레이트를 37℃, 5% CO2 하에서 밤새 배양하였다. 다음 날, 세포를 위상차 현미경검사 하에서 관찰하여 이들이 플레이트에 부착하였음을 확인하고, 상등액 배지를 흡인하여 여과하였다. 100 ㎕의 신선한 완전 RPMI 배지를 플레이트에 첨가하고, 마이코그라브 (RTM) 대비 시험 약물 ((3:1:0.42의 비로 5-FU:폴린산:옥살리플라틴) 또는 배지 단독 (배지 + 5-FU 대조를 위한 2.5% DMSO))의 체커보드는 이하의 표 16에 요약된 5-FU 체커보드에 대해서와 같이 설정하여 웰당 200 ㎕의 총용적을 제공하였다.
결과
HT29 세포에 대한 마이코그라브 (RTM)의 효과
세포 라인 HT29에 대해서 마이코그라브 (RTM) 단독은 125 ㎍/㎖에서 세포 생존도에서 50% 감소를 나타내었다.
HT29 세포에 대한 항암제 5FU 또는 옥살리플라틴 단독, 및 항암제 5U 또는 옥살리플라틴과 배합된 마이코그라브 (RTM)의 효과
5-FU
5-플루오로우라실에 대한 IC50은 150 ㎍/㎖였다. 일정한 약물 농도의 범위에서 5-FU와 마이코그라브 (RTM) 사이에 상승작용의 명백한 증거가 있었다 - 참조 표 17-20.
옥살리플라틴
옥살리플라틴에 대한 IC50은 16 ㎍/㎖였다. 일정한 약물 농도의 범위에서 옥살리플라틴과 마이코그라브 (RTM) 사이에 상승작용의 약간의 증거가 있었다 - 표 18.
HT29 세포에 대한 항암제 5FU 및 옥살리플라틴과 배합된 마이코그라브 (RTM) 의 효과
LV/5FU/Ox의 IC50은 25/75/10.5 ㎍/㎖였다. 일정한 약물 농도의 범위에서 5-FU 및 옥살리플라틴과 마이코그라브 (RTM) 사이에 상승작용의 약간의 증거가 있었다 - 참조 표 22-24.
요약
결과는 항체가 5-FU 및 폴린산 또는 옥살리플라틴과의 상승작용의 증거, 및 75 ㎍/㎖ 이상의 5-FU 및 10.5 ㎍/㎖ 이상의 옥살리플라틴 농도를 갖는 5-FU 및 폴린산 및 옥살리플라틴과의 4가지 약물 배합물에 의한 상승작용의 약간의 증거를 제공함을 나타낸다. 5-FU 및 옥살리플라틴과의 상승작용의 증거가 있었으며, 표 25는 ED50, ED75 및 ED90에서의 CI 값을 요약하였다.
결론
여기에 제시된 데이타는 마이코그라브 (RTM) 항체가 단독으로 결장선암 세포 라인의 생존도를 감소시킬 수 있음을 나타낸다. 결장선암 세로 라인에서 5-플루오로우라실 및 옥살리플라틴을 포함하는 항암제와 항-HSP 90 항체 사이에는 상승작용이 있었다. 데이타는 또한 결장선암 세포 라인에서 항-HSP 90 항체와 5-플루오로우라실 및 옥살리플라틴 사이의 상승작용을 나타낸다.
Figure 112007009803933-PCT00001
Figure 112007009803933-PCT00002
Figure 112007009803933-PCT00003
Figure 112007009803933-PCT00004
Figure 112007009803933-PCT00005
Figure 112007009803933-PCT00006
Figure 112007009803933-PCT00007
Figure 112007009803933-PCT00008
Figure 112007009803933-PCT00009
Figure 112007009803933-PCT00010
Figure 112007009803933-PCT00011
Figure 112007009803933-PCT00012
Figure 112007009803933-PCT00013
Figure 112007009803933-PCT00014
Figure 112007009803933-PCT00015
Figure 112007009803933-PCT00016
Figure 112007009803933-PCT00017
Figure 112007009803933-PCT00018
Figure 112007009803933-PCT00019
Figure 112007009803933-PCT00020
Figure 112007009803933-PCT00021
Figure 112007009803933-PCT00022
Figure 112007009803933-PCT00023
Figure 112007009803933-PCT00024
Figure 112007009803933-PCT00025
SEQUENCE LISTING <110> NeuTec Pharma plc Burnie, James P Matthews, Ruth C Carter, Tracey <120> Treatment of Cancer <130> WA/M101423WO <150> US 60/654,458 <151> 2005-02-22 <150> US 60/614,423 <151> 2004-09-30 <150> GB 0503566.2 <151> 2005-02-21 <150> GB 0414885.4 <151> 2004-07-02 <150> GB 0420845.0 <151> 2004-09-20 <160> 2 <170> PatentIn version 3.2 <210> 1 <211> 9 <212> PRT <213> Candida sp. <400> 1 Leu Lys Val Ile Arg Lys Asn Ile Val 1 5 <210> 2 <211> 248 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 2 His Met Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 1 5 10 15 Pro Gly Glu Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Cys Ile Ile 20 25 30 Ser Ser Tyr Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Met Gly Lys Ile Asp Pro Gly Asp Ser Tyr Ile Asn Tyr Ser 50 55 60 Pro Ser Phe Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Asn 65 70 75 80 Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Asn Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met 85 90 95 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Arg Asp Phe Gly Asp Ser Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln 130 135 140 Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Phe Val Gly Asp Arg Ile Thr Ile Thr 145 150 155 160 Cys Arg Ala Ser Ser Gly Ile Ser Arg Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln 165 170 175 Ala Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu 180 185 190 Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu 195 200 205 Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 210 215 220 Tyr Cys Gln His Leu Asn Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr 225 230 235 240 Lys Val Asp Ile Lys Arg Ala Ala 245

Claims (33)

  1. 암의 치료를 위한 의약의 제조방법에서, (i) Hsp90의 적어도 하나의 에피토프에 대해서 특이적인 항체 또는 그의 항원 결합성 단편; 및 (ii) 독소루비신, 다우노루비신, 에피루비신, 헤르셉틴, 도세탁셀 및 시스플라틴으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 항암제의 용도.
  2. 암의 치료시에 동시에, 별도로 또는 순차적으로 사용하기 위한, (i) Hsp90의 적어도 하나의 에피토프에 대해서 특이적인 항체 또는 그의 항원 결합성 단편; 및 (ii) 독소루비신, 다우노루비신, 에피루비신, 헤르셉틴, 도세탁셀 및 시스플라틴으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 항암제를 포함하는 배합제제.
  3. 제 1 항 또는 2 항에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합성 단편이 서열 1의 서열을 갖는 펩타이드에 의해서 나타나는 에피토프에 대해서 특이적인 용도 또는 배합제제.
  4. 제 1 항 내지 3 항 중의 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열 2의 서열을 포함하는 용도 또는 배합제제.
  5. 제 1 항 내지 4 항 중의 어느 한 항에 있어서, 암이 섬유육종, 유방암, 전립 선암, 흑색종, 백혈병, 림프종, 결장암, 고환 배세포암, 췌장암, 난소암, 자궁내막암, 갑상선암, 및 폐암으로 구성된 군으로부터 선택되는 용도 또는 배합제제.
  6. 암의 치료가 필요한 환자에게 치료학적 유효량의 (i) Hsp90의 적어도 하나의 에피토프에 대해서 특이적인 항체 또는 그의 항원 결합성 단편; 및 (ii) 독소루비신, 다우노루비신, 에피루비신, 헤르셉틴, 도세탁셀 및 시스플라틴으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 항암제를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법.
  7. 백혈병의 치료를 위한 의약의 제조방법에서, (i) Hsp90의 적어도 하나의 에피토프에 대해서 특이적인 항체 또는 그의 항원 결합성 단편의 용도.
  8. 백혈병의 치료를 위한 의약의 제조방법에서, (i) Hsp90의 적어도 하나의 에피토프에 대해서 특이적인 항체 또는 그의 항원 결합성 단편; 및 (ii) 이마티니브, 파클리탁셀, 도세탁셀, 다우노루비신, 독소루비신 및 하이드록시우레아로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 항암제의 용도.
  9. 백혈병의 치료시에 동시에, 별도로 또는 순차적으로 사용하기 위한, (i) Hsp90의 적어도 하나의 에피토프에 대해서 특이적인 항체 또는 그의 항원 결합성 단편; 및 (ii) 이마티니브, 파클리탁셀, 도세탁셀, 다우노루비신, 독소루비신 및 하이드록시우레아로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 항암제를 포함하는 배합제제.
  10. 제 7 항 내지 9 항 중의 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합성 단편이 서열 1의 서열을 갖는 펩타이드에 의해서 나타나는 에피토프에 대해서 특이적인 용도 또는 배합제제.
  11. 제 7 항 내지 10 항 중의 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열 2의 서열을 포함하는 용도 또는 배합제제.
  12. 제 7 항 내지 11 항 중의 어느 한 항에 있어서, 백혈병이 급성 골수아구성 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병 및 만성 림프구성 백혈병으로 구성된 군으로부터 선택되는 용도 또는 배합제제.
  13. 제 7 항 내지 12 항 중의 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 항암제가 이마티니브인 용도 또는 배합제제.
  14. 제 7 항 내지 13 항 중의 어느 한 항에 있어서, 백혈병이 만성 골수성 백혈병 또는 급성 림프성 백혈병인 용도 또는 배합제제.
  15. 제 14 항에 있어서, 백혈병이 필라델피아 염색체 양성인 세포, 또는 필라델피아 염색체 음성인 세포의 특징을 나타내는 용도 또는 배합제제.
  16. 제 14 항에 있어서, 항암제가 이마티니브이고, 백혈병이 필라델피아 염색체 양성인 세포의 특징을 나타내는 용도 또는 배합제제.
  17. 제 14 항에 있어서, 항암제가 이마티니브이고, 백혈병이 필라델피아 염색체 음성인 세포의 특징을 나타내는 용도 또는 배합제제.
  18. 제 7 항 내지 17 항 중의 어느 한 항에 있어서, 백혈병이 이마티니브 저항성인 세포의 특징을 나타내는 용도 또는 배합제제.
  19. 백혈병의 치료가 필요한 환자에게 치료학적 유효량의 (i) Hsp90의 적어도 하나의 에피토프에 대해서 특이적인 항체 또는 그의 항원 결합성 단편; 및 (ii) 이마티니브, 파클리탁셀, 도세탁셀, 다우노루비신, 독소루비신 및 하이드록시우레아로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 항암제를 투여하는 것을 포함하는, 백혈병을 치료하는 방법.
  20. 제 19 항에 있어서, 백혈병이 만성 골수성 백혈병이고, 적어도 하나의 항암제가 이마티니브인 방법.
  21. 암의 치료를 위한 의약의 제조방법에서, (i) Hsp90의 적어도 하나의 에피토프에 대해서 특이적인 항체 또는 그의 항원 결합성 단편; 및 (ii) 5-플루오로우라실, 옥살리플라틴, 이리노테칸 및 랄티트렉시드로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 항암제의 용도.
  22. 암의 치료시에 동시에, 별도로 또는 순차적으로 사용하기 위한, (i) Hsp90의 적어도 하나의 에피토프에 대해서 특이적인 항체 또는 그의 항원 결합성 단편; 및 (ii) 5-플루오로우라실, 옥살리플라틴, 이리노테칸 및 랄티트렉시드로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 항암제를 포함하는 배합제제.
  23. 제 21 항 또는 22 항에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합성 단편이 서열 1의 서열을 갖는 펩타이드에 의해서 나타나는 에피토프에 대해서 특이적인 용도 또는 배합제제.
  24. 제 21 항 내지 23 항 중의 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열 2의 서열을 포함하는 용도 또는 배합제제.
  25. 제 21 항 내지 24 항 중의 어느 한 항에 있어서, 암이 섬유육종, 선암, 유방암, 전립선암, 흑색종, 백혈병, 림프종, 결장암, 결장직장암, 고환 배세포암, 췌장 암, 난소암, 자궁내막암, 갑상선암, 및 폐암으로 구성된 군으로부터 선택되는 용도 또는 배합제제.
  26. 제 25 항에 있어서, 암이 결장직장암 또는 선암인 용도 또는 배합제제.
  27. 암의 치료가 필요한 환자에게 치료학적 유효량의 (i) Hsp90의 적어도 하나의 에피토프에 대해서 특이적인 항체 또는 그의 항원 결합성 단편; 및 (ii) 5-플루오로우라실, 옥살리플라틴, 이리노테칸 및 랄티트렉시드로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 항암제를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법.
  28. 제 21 항 내지 27 항 중의 어느 한 항에 있어서, 항암제가 5-플루오로우라실이고, 폴린산 (로이코보린)을 더 포함하는 용도, 배합제제 또는 방법.
  29. 제 28 항에 있어서, 항암제가 5-플루오로우라실, 폴린산 (로이코보린) 및 옥살리플라틴을 포함하는 용도, 배합제제 또는 방법.
  30. 제 6, 19, 20, 27, 28 또는 29 항 중의 어느 한 항에 있어서, 조성물 또는 배합제제가 경구적으로 투여되는 방법.
  31. 제 1 항 내지 30 항 중의 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합성 단편이 검출가능한 라벨로 표지되는 용도, 배합제제 또는 방법.
  32. 제 1 항 내지 31 항 중의 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합성 단편이 이펙터 (effector) 분자와 컨쥬게이트되는 용도, 배합제제 또는 방법.
  33. 실시예를 참고로 하여 실질적으로 전술한 바와 같은 발명.
KR1020077002582A 2004-07-02 2005-06-30 암의 치료 KR20070050918A (ko)

Applications Claiming Priority (10)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB0414885.4 2004-07-02
GB0414885A GB0414885D0 (en) 2004-07-02 2004-07-02 Cancer therapy
GB0420845A GB0420845D0 (en) 2004-09-20 2004-09-20 Treatment of cancer
GB0420845.0 2004-09-20
US61442304P 2004-09-30 2004-09-30
US60/614,423 2004-09-30
GB0503566.2 2005-02-21
GB0503566A GB0503566D0 (en) 2005-02-21 2005-02-21 Treatment for cancer
US65445805P 2005-02-22 2005-02-22
US60/654,458 2005-02-22

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20070050918A true KR20070050918A (ko) 2007-05-16

Family

ID=39092324

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020077002582A KR20070050918A (ko) 2004-07-02 2005-06-30 암의 치료

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20080038267A1 (ko)
EP (1) EP1763366A1 (ko)
KR (1) KR20070050918A (ko)
CN (1) CN101010100A (ko)
AU (1) AU2005259002B2 (ko)
CA (1) CA2572318A1 (ko)
NO (1) NO20070580L (ko)
RU (1) RU2389507C2 (ko)
WO (1) WO2006003384A1 (ko)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019160383A1 (ko) * 2018-02-19 2019-08-22 고려대학교 산학협력단 열충격단백질의 에피토프를 포함하는 백신 및 이의 용도
US11446368B2 (en) 2018-02-19 2022-09-20 Aston Sci. Co., Ltd. Vaccine comprising epitope of heat shock protein, and use thereof

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7959915B2 (en) 2003-03-12 2011-06-14 Tufts University Inhibitors of extracellular Hsp90
ES2400375T3 (es) * 2006-04-07 2013-04-09 Novartis Ag Combinación que comprende A) un compuesto de pirimidilaminobenzamida y B)un inhibidor de cinasa THR315LLE
US20100111943A1 (en) * 2007-03-22 2010-05-06 Medical College Of Georgia Research Institute, Inc Compositions and methods for inhibiting cancer metastasis
US20100113355A1 (en) * 2007-04-27 2010-05-06 Naresh Chennamsetty Novel antibody molecules and nucleic acids binding to fungal stress protein hsp90
EP2324359B1 (en) * 2008-08-18 2018-10-31 Mesoblast, Inc. Use of heat shock protein 90-beta as marker for the identification and/or enrichment of adult multipotential mesenchymal precursor cells
AU2013202693B2 (en) * 2012-04-16 2015-01-22 Baxalta GmbH Combination Therapy of Anti-MIF Antibodies and Chemotherapeutics
WO2015183978A1 (en) * 2014-05-28 2015-12-03 Agensys, Inc. Derivatives of dolaproine-dolaisoleuine peptides
US20150342961A1 (en) * 2014-06-03 2015-12-03 Hai-Hui Xue Use of prostaglandin e1 (pge1) and misoprostol for treating chronic myelogenous/myeloid leukemia (cml)
US10457726B2 (en) * 2016-06-30 2019-10-29 University Of Connecticut Antibody and antigen-binding fragment compositions targeting cell surface antigens in tumors and methods of use thereof
CN111116743B (zh) * 2018-10-30 2022-01-28 迈威(上海)生物科技股份有限公司 Hsp90抗体及其在抗真菌感染中的应用
WO2021183318A2 (en) * 2020-03-09 2021-09-16 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions relating to improved combination therapies

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000061578A1 (en) * 1999-04-09 2000-10-19 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Methods and compositions for degradation and/or inhibition of her-family tyrosine kinases
GB0008305D0 (en) 2000-04-06 2000-05-24 Neutec Pharma Plc Treatment of fungal infections

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019160383A1 (ko) * 2018-02-19 2019-08-22 고려대학교 산학협력단 열충격단백질의 에피토프를 포함하는 백신 및 이의 용도
US11446368B2 (en) 2018-02-19 2022-09-20 Aston Sci. Co., Ltd. Vaccine comprising epitope of heat shock protein, and use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
EP1763366A1 (en) 2007-03-21
RU2007104053A (ru) 2008-08-10
CN101010100A (zh) 2007-08-01
RU2389507C2 (ru) 2010-05-20
NO20070580L (no) 2007-03-19
AU2005259002B2 (en) 2011-01-27
AU2005259002A1 (en) 2006-01-12
WO2006003384A1 (en) 2006-01-12
US20080038267A1 (en) 2008-02-14
CA2572318A1 (en) 2006-01-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2005259002B2 (en) Treatment of cancer
USRE45105E1 (en) Method of treating cancer by co-administration of anticancer agents
CN102858335B (zh) Erbb3抑制剂在三阴性乳腺癌和基底样乳腺癌治疗中的用途
JP2023060196A5 (ko)
JP2024051080A (ja) 抗癌療法としての正常細胞および腫瘍細胞の小分子ｔｒａｉｌ遺伝子誘導
US20170202973A1 (en) Methods of treating metastatic breast cancer with trastuzumab-mcc-dm1
JP2019081799A (ja) オーロラキナーゼ阻害剤と抗ｃｄ３０抗体の併用
TW201032796A (en) Treatment of lung cancer with a PARP inhibitor in combination with a growth factor inhibitor
Koval et al. A novel pro-apoptotic effector lactaptin inhibits tumor growth in mice models
CN115135322A (zh) 包含哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号传导抑制剂作为有效成分的用于预防或治疗癌症的药物组合物
WO2019099750A1 (en) Compositions, methods, systems and/or kits for preventing and/or treating neoplasms
US20220354961A1 (en) Methods of treating her2-positive metastatic breast cancer
WO2012106379A1 (en) Sensitization of cancer cells to treatment
CN114340679A (zh) 用于治疗对pd-1/pd-l1信号传导抑制剂无应答的癌症的方法和药物
KR20180121571A (ko) Liv1-adc와 화학요법제를 사용한 병용 요법
RU2576027C2 (ru) Антиангиогенная терапия для лечения ранее подвергавшегося лечению рака молочной железы
US9415078B2 (en) Method of treating desmocollin-3 expressing cancer with Mycobacterium w
NZ552508A (en) Treatment of cancer with pharmaceutical agents together with anti-Hsp 90 antibodies
TW201929900A (zh) Ｐｄ－１抗體和阿帕替尼聯合治療三陰性乳腺癌的用途
US9801840B1 (en) Pharmaceutical composition and use thereof
CN109303919B (zh) Akt抑制剂在制备增强石蒜碱的抗肝癌活性药物中的应用
KR20220001246A (ko) 췌장암 예방 또는 치료용 조성물
WO2023170065A1 (en) Methods of treating small cell lung cancer
Olevsky et al. Treatment of Malignant Pleural Mesothelioma by Drug Therapy
CN117379551A (zh) 一种肿瘤联合治疗疗法

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application