CN111116743B - Hsp90抗体及其在抗真菌感染中的应用 - Google Patents

Hsp90抗体及其在抗真菌感染中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种特异性结合真菌Hsp90的抗体或其片段，以及所述抗体或其片段用于预防、治疗或诊断真菌感染的用途。本发明的抗体或其片段可以使患者体内感染真菌更快清除、更快的由静脉输液治疗转为口服治疗，具有更短的治疗疗程、更好的临床疗效和耐受性，从而使患者受益。

Description

Hsp90抗体及其在抗真菌感染中的应用
技术领域
本发明涉及抗体药物领域，具体而言，本发明涉及针对真菌Hsp90蛋白的抗体及其用于制备抗真菌药物或抗真菌药物增效剂的用途。
背景技术
热休克蛋白(heat shock protein，HSP)是1962年由遗传学家Ritossa发现的、在生物进化过程中高度保守并广泛存在的蛋白质。热休克蛋白是一个多基因家族，在不利细胞生长环境因素(如高温、低氧及氧化应激等)刺激下，能够被迅速地诱导表达增加。
Hsp90是一类分子量为90kD的热休克蛋白，作为分子伴侣参与重要的细胞生理活动如蛋白质的正确折叠、细胞生长调控等，细胞受到各种应激反应时会大量表达，对真核生物的细胞活性起重要作用。Hsp90蛋白在细胞内通过同源二聚体形式发挥作用，其单体由N端、Linker region(CL)、中间区域(M domain)以及C端部分组成。Hsp90蛋白N端的蛋白结构呈口袋状，由氨基酸α螺旋和β折叠形成三明治结构，具有ATP/ADP结合位点、核苷酸结合位点和靶蛋白结合位点。Hsp90蛋白发挥作用依赖于N端蛋白结合ATP并水解释放能量，而C端结构对于其形成二聚体有至关重要的作用；M区域的α螺旋是其与客户蛋白结合、并发挥调控作用的结构基础；CL区域则主要是连接N端与中间区域的部分，其在不同pH值下可改变蛋白自身的结构灵活性，进而影响生物学功能。
真菌细胞侵入机体后面对生存条件的改变、宿主免疫细胞的攻击、抗真菌药物的作用等，这些都会诱导一系列的细胞应激反应，从而获得致病侵袭力、生长繁殖能力、免疫逃逸能力以及形成耐药性。研究表明，Hsp90蛋白在不同种属的真菌细胞(如白念珠菌、新型隐球菌和烟曲霉菌)之间高度保守，氨基酸序列相似性很高，是最重要的一类应激反应蛋白，在真菌生长繁殖、致病侵袭力和耐药性形成等方面均发挥了重要作用。菌丝相生长状态是白念珠菌形成侵袭性感染的关键因素，而Hsp90蛋白在白念珠菌从酵母相转化为菌丝相的生长过程中起到了关键的作用。同时，HSP90基因缺失真菌在小鼠体内毒力显著降低，也说明Hsp90蛋白是真菌细胞重要的毒力调控因子之一。动物实验研究表明抑制Hsp90蛋白功能(减少白念珠菌Hsp90基因的表达、或者使用化合物阻断Hsp90功能)可阻断白念珠菌对唑类抗真菌药物形成快速适应性耐药性，并且提高唑类抗真菌药物的药效；体外实验研究表明抑制Hsp90蛋白功能可以逆转白念珠菌传代进化形成的对唑类药物的稳定耐药性。同样，在对念珠菌和曲霉的研究中证实真菌对棘白菌素类药物耐药也与Hsp90蛋白相关，在体外实验中Hsp90抑制剂可以逆转烟曲霉菌对棘白菌素类药物的耐药性，动物体内实验研究表明降低真菌细胞内Hsp90的表达或者采用小分子化合物阻断Hsp90蛋白功能也可以显著提高棘白菌素药物的抗真菌感染药效。所以，Hsp90蛋白作为真菌耐药、应激反应、形态转换以及毒力相关的细胞功能枢纽，在真菌侵袭宿主形成感染过程中发挥重要作用。
研究表明哺乳动物细胞Hsp90蛋白定位于细胞浆，而真菌Hsp90蛋白定位于细胞壁表面，并且在细胞应激反应(针对免疫细胞攻击、药物作用等)时表达明显增高。同时，Hsp90蛋白也是真菌细胞主要的免疫优势抗原，在动物模型及临床感染患者体内均可检测到高滴度的Hsp90蛋白抗体。临床研究表明，恢复期真菌感染患者以体内高滴度的Hsp90蛋白抗体为主要特征，抗体滴度与患者预后呈正相关，并且对真菌感染具有保护性的抗体主要靶向Hsp90蛋白C端结构。
综上所述，真菌Hsp90蛋白在致病真菌细胞之间高度保守，生物学功能重要(与真菌毒力、应激反应、耐药性形成等密切相关)；细胞内定位与哺乳动物细胞不同(哺乳动物细胞的Hsp90位于细胞浆内；真菌细胞的Hsp90位于细胞壁表面)，因此基于真菌细胞壁表面Hsp90蛋白设计抗体药物不会对人体细胞Hsp90蛋白造成影响，也不会被小分子化合物药物取代(小分子化合物可透过细胞膜影响人体细胞Hsp90蛋白功能)；真菌Hsp90蛋白C端蛋白结构可以在感染患者体内诱导保护性抗体产生。所以，Hsp90蛋白C端结构是抗真菌感染抗体药物理想的作用靶点。
自上世纪80年代以来，由于艾滋病患者的不断增多，新的治疗技术如抗排异反应和强化化疗等广泛应用于临床，侵入性诊疗设备和广谱抗生素的长期应用以及重症监护病人、老龄病人增多等诸多原因，已导致免疫功能低下人群逐年增多，使得侵袭性真菌感染的发生率明显上升。其中，常见致病真菌包括念珠菌属、新型隐球菌和曲霉菌属感染的年发病率已经达到万分之一以上，念珠菌感染的发生率已经升至医院内感染的第四位。其中，侵袭性真菌感染由于缺乏可靠有效的早期诊疗方法，病死率居高不下，念珠菌血症的病死率高达40％，侵袭性曲霉菌感染未能及时诊疗的病死率高达90％以上，已经成为严重威胁人类健康的感染性疾病。
目前临床上可供选择的抗真菌药物非常有限，应用较多的仍然是唑类抗真菌药物如氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑等，随着在临床上的长期应用，真菌耐药现象日趋严重；有些真菌如克柔念珠菌、烟曲霉菌等先天耐药；真菌有高适应性特点，在体内形成生物被膜、转变成菌丝后也会高度耐药，甚至出现了“超级耐药”真菌的流行，耐药性也成为侵袭性真菌感染治疗失败的主要原因之一。所以研究高效的新型抗真菌药物是临床上亟待解决的问题。
与日趋严重的侵袭性真菌感染相比，抗真菌药物的发展显得十分缓慢，可用于临床的品种不多，自本世纪初棘白菌素类药物卡泊芬净上市后至今，国内外尚未有新作用靶点的药物上市。目前有效的抗真菌药物种类有限，小分子抗真菌药物研究遭遇瓶颈。真菌细胞与人类宿主细胞同为真核细胞，大大限制了新药研发过程中药物靶点的选择，21世纪以来近20年尚未出现基于新靶点的抗真菌小分子化合物药物。但是，值得注意的是，侵袭性真菌感染大多发生于免疫功能低下患者，抗体药物从免疫调节的角度治疗真菌感染具有独特优势；同时，哺乳动物细胞没有细胞壁，抗真菌感染抗体药物主要靶向细胞壁表面抗原，该抗原在哺乳动物细胞膜表面没有同源蛋白，脱靶可能性极低，潜在的毒副作用小，也具有优势。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，提供一种抗Hsp90抗体，所述抗体对真菌Hsp90蛋白具有特异性结合亲和力，因此具有与致病真菌Hsp90蛋白结合并抑制真菌侵袭宿主细胞的能力，可以单独或者与现有抗真菌化学药物联合用于治疗真菌感染。
针对上述技术问题，本发明的目的是提供一种特异性结合真菌Hsp90的抗体或其功能片段，并基于该抗体或其功能片段，提供其用途。
本发明的技术方案如下。
一方面，本发明提供一种特异性结合真菌Hsp90的抗体或其片段，所述抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)分别包含选自以下的CDR组合(VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3；VL-CDR1、VL-CDR2、VL-CDR3)：
(1)如SEQ ID NO：3所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：7所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO：11所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：15所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：17所示的VL-CDR2、如SEQID NO：19所示的VL-CDR3；
(2)如SEQ ID NO：4所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：8所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO：11所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：15所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：17所示的VL-CDR2、如SEQID NO：19所示的VL-CDR3；
(3)如SEQ ID NO：5所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：9所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO：11所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：15所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：17所示的VL-CDR2、如SEQID NO：19所示的VL-CDR3；
(4)如SEQ ID NO：6所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：10所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：12所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：16所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：18所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：20所示的VL-CDR3；
(5)如SEQ ID NO：4所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：110所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：111所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：112所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：113所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：19所示的VL-CDR3；
(6)如SEQ ID NO：63所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：67所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：71所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：75所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：57所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：78所示的VL-CDR3；
(7)如SEQ ID NO：64所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：68所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：71所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：75所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：57所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：78所示的VL-CDR3；
(8)如SEQ ID NO：65所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：69所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：71所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：75所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：57所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：78所示的VL-CDR3；
(9)如SEQ ID NO：66所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：70所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：72所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：76所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：77所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：79所示的VL-CDR3；
(10)如SEQ ID NO：64所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：122所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：123所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：124所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：125所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：78所示的VL-CDR3；
(11)如SEQ ID NO：23所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：27所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：31所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：35所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：37所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：39所示的VL-CDR3；
(12)如SEQ ID NO：24所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：28所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：31所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：35所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：37所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：39所示的VL-CDR3；
(13)如SEQ ID NO：25所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：29所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：31所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：35所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：37所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：39所示的VL-CDR3；
(14)如SEQ ID NO：26所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：30所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：32所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：36所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：38所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：40所示的VL-CDR3；
(15)如SEQ ID NO：24所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：114所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：115所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：116所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：117所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：39所示的VL-CDR3；
(16)如SEQ ID NO：43所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：47所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：51所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：55所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：57所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：59所示的VL-CDR3；
(17)如SEQ ID NO：44所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：48所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：51所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：55所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：57所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：59所示的VL-CDR3；
(18)如SEQ ID NO：45所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：49所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：51所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：55所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：57所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：59所示的VL-CDR3；
(19)如SEQ ID NO：46所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：50所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：52所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：56所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：58所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：60所示的VL-CDR3；
(20)如SEQ ID NO：44所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：118所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：119所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：120所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：121所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：59所示的VL-CDR3；
(21)如SEQ ID NO：82所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：86所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：90所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：94所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：96所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：98所示的VL-CDR3；
(22)如SEQ ID NO：83所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：87所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：90所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：94所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：96所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：98所示的VL-CDR3；
(23)如SEQ ID NO：84所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：88所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：90所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：94所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：96所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：98所示的VL-CDR3；
(24)如SEQ ID NO：85所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：89所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：91所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：95所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：97所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：99所示的VL-CDR3；
(25)如SEQ ID NO：83所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：126所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：127所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：128所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：129所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：98所示的VL-CDR3；
(26)如SEQ ID NO：63所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：102所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：71所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：108所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：57所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：78所示的VL-CDR3；
(27)如SEQ ID NO：64所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：103所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：71所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：108所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：57所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：78所示的VL-CDR3；
(28)如SEQ ID NO：65所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：104所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：71所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：108所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：57所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：78所示的VL-CDR3；
(29)如SEQ ID NO：66所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：105所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：72所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：109所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：77所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：79所示的VL-CDR3；和
(30)如SEQ ID NO：64所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO：130所示的VH-CDR2、如SEQ IDNO：123所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO：131所示的VL-CDR1、如SEQ ID NO：125所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO：78所示的VL-CDR3。
优选地，所述抗体或其片段的重链可变区包含选自以下的序列：
如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：80或SEQ ID NO：100所示的氨基酸序列或者包含与如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：80或SEQ ID NO：100所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；优选地，所述至少75％同一性为例如至少80％、优选至少85％、更优选至少90％、进一步优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或甚至99％同一性等≥75％的任何百分比的同一性；和/或
所述抗体或其片段的轻链可变区包含选自以下的序列：
如SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：92或SEQ ID NO：106所示的氨基酸序列或者包含与如SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：92或SEQ ID NO：106所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；优选地，所述至少75％同一性为至少80％、优选至少85％、更优选至少90％、进一步优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或甚至99％同一性等≥75％的任何百分比的同一性。
根据本发明的具体实施方案，所述抗体或其片段包含选自以下的重链可变区和轻链可变区组合：
(1)如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列的重链可变区；和，如SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；
(2)如SEQ ID NO：61所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO：61所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列的重链可变区；和，如SEQ ID NO：73所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO：73所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；
(3)如SEQ ID NO：21所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO：21所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列的重链可变区；和，如SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；
(4)如SEQ ID NO：41所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO：41所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列的重链可变区；和，如SEQ ID NO：53所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO：53所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；
(5)如SEQ ID NO：80所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO：80所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列的重链可变区；和，如SEQ ID NO：92所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO：92所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；
(6)如SEQ ID NO：100所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO：100所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列的重链可变区；和，如SEQ ID NO：106所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO：106所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；
其中，上述至少75％同一性为至少80％、优选至少85％、更优选至少90％、进一步优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或甚至99％同一性等≥75％的任何百分比的同一性。
本发明提供的抗体可以为单克隆抗体、单链抗体、单域抗体、完全或部分人源化的抗体或者嵌合抗体等任意形式；优选地，所述抗体为IgA、IgD、IgE、IgG或IgM，更优选为IgG1。关于本发明提供的抗体的片段，优选地，所述片段为所述抗体能够特异性结合真菌Hsp90或其任何部分的片段；更优选地，所述片段选自所述抗体的scFv、Fab、F(ab′)2或Fv片段。
特别优选地，本发明提供的抗体的重链恒定区为IgG1亚型，轻链恒定区为κ型。优选地，本发明提供的抗体或其片段包含如SEQ ID NO：132所示的重链恒定区和/或如SEQ IDNO：133所示的轻链恒定区。
根据本发明的具体实施方案，本发明提供的抗体或其片段包含选自以下的重链和轻链组合：
(1)如SEQ ID NO：134所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO：134所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列的重链；和，如SEQ ID NO：135所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO：135所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列的轻链；
(2)如SEQ ID NO：136所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO：136所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列的重链；和，如SEQ ID NO：137所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO：137所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列的轻链；
(3)如SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列的重链；和，如SEQ ID NO：139所示的氨基酸序列或与如SEQ ID NO：139所示的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列的轻链；
其中，上述至少75％同一性为至少80％、优选至少85％、更优选至少90％、进一步优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或甚至99％同一性等≥75％的任何百分比的同一性。
基于本发明的抗体或其片段，本发明还提供包含本发明的抗体或其片段的缀合物。该缀合物可包含通过化学或物理方法结合于本发明所述抗体或其片段的其他部分，例如细胞表面受体、小分子化合物如氨基酸和糖类、小分子聚合物或对本发明所述抗体进行修饰的任何其它部分，或者甚至是活性蛋白或多肽。
另一方面，本发明还提供一种核酸分子，其编码本发明任意抗体或其片段中的重链CDR、轻链CDR、重链可变区、轻链可变区、重链或轻链；
优选地，所述核酸分子包含如SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：22、SEQ IDNO：34、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：81、SEQ IDNO：93、SEQ ID NO：101或SEQ ID NO：107所示的核苷酸序列。
还一方面，本发明提供一种载体，其包含本发明的核酸分子。所述载体可以为真核表达载体、原核表达载体、人工染色体及噬菌体载体等。
本发明的载体或核酸分子可以用于转化或转染宿主细胞或以任何方式进入宿主细胞内，用于保存或表达抗体等目的。
因此，另一方面，本发明提供一种宿主细胞，所述宿主细胞包含本发明的核酸分子和/或载体，或者所述宿主细胞被本发明的核酸分子和/或载体转化或转染。宿主细胞可以是任何原核或真核细胞，例如细菌或昆虫、真菌、植物或动物细胞。
基于本发明的公开内容，本发明提供的抗体或其片段以及相应的缀合物、核酸分子、载体和/或宿主细胞可以通过使用本领域已知的任何常规技术方法获得。所述抗体或其片段、缀合物、核酸分子、载体和/或宿主细胞可以被包含在药物组合物中，更特别地被包含在药物制剂中，从而根据实际需要用于各种目的。
因此，在又一方面，本发明还提供一种药物组合物，所述药物组合物包含本发明所述的抗体或其片段、缀合物、核酸分子、载体和/或宿主细胞，以及任选的药学上可接受的辅料。
作为特异性结合真菌Hsp90或其任何部分且封闭真菌Hsp90功能的抗体，本发明还提供上述主题的相关应用。
具体而言，再一方面，本发明提供本发明所述的抗体或其片段、缀合物、核酸分子、载体、宿主细胞和/或药物组合物在制备用于预防或治疗真菌感染的药物中的用途。
并且，本发明提供所述抗体或其片段、缀合物、核酸分子、载体、宿主细胞和/或药物组合物和抗真菌药物的组合在制备用于预防或治疗真菌感染的药物中的用途。
另外，本发明提供一种预防或治疗真菌感染的方法，所述方法包括给有此需要的受试者施用所述抗体或其片段、缀合物、核酸分子、载体、宿主细胞和/或药物组合物，以及任选的抗真菌药物。该任选的抗真菌药物是指可以与本发明抗体或其片段、缀合物、核酸分子、载体、宿主细胞和/或药物组合物联合施用的其他抗真菌药物。二者的联合施用可以采取任意形式进行，例如同时、连续或间隔一定时间进行。
本发明还提供一种诊断真菌感染的方法，所述方法包括使所述抗体或其片段、缀合物、核酸分子、载体、宿主细胞和/或药物组合物与来自受试者的样品相接触。
在上述用途或方法中，所述真菌感染为皮肤与软组织感染、深部真菌感染或侵袭性真菌感染；
所述真菌为能够引起哺乳动物如人类感染的病原真菌，优选为念珠菌属、隐球菌属和霉菌属真菌，如白念珠菌；
所述受试者为哺乳类动物；优选地，所述受试者为人；
本文中所述的抗真菌药物可以为唑类抗真菌药物(例如氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、艾沙康唑等)、棘白菌素类抗真菌药物(例如卡泊芬净、阿尼芬净、米卡芬净等)、多烯类抗真菌药(例如两性霉素等)、丙烯胺类抗真菌药物(例如特比萘芬等)或嘧啶类抗真菌药物(例如5-氟胞嘧啶等)。
再一方面，本发明提供一种试剂盒，所述试剂盒包括本发明的所述抗体或其片段、缀合物、核酸分子、载体、宿主细胞和/或药物组合物。
相对于现有技术，本发明通过大肠杆菌原核表达获得了白念珠菌Hsp90全长蛋白以及C端蛋白；利用Hsp90 C端蛋白成功免疫小鼠后取脾细胞，利用杂交瘤技术建立抗体库；筛选获得与Hsp90 C端蛋白以及全长蛋白均具有高亲和力并且具有生物学活性的Hsp90-B单克隆抗体，进一步将其人源化后获得相应抗体分子，示例性抗体为Hsp90-B H2L3人源化单克隆抗体。
体外研究结果表明，本发明的Hsp90抗体可以通过与真菌细胞壁表面抗原结合(流式细胞术检测和激光共聚焦显微镜观察)封闭Hsp90蛋白功能，降低真菌毒力，减轻其对宿主细胞的侵袭损伤。并且，本发明的Hsp90抗体分子可以为IgG1亚型，还可以通过ADCC或者补体激活途径发挥抗真菌作用。
预期本发明的抗体或其片段可以使患者体内感染真菌更快清除、更快的由静脉输液治疗转为口服治疗，具有更短的治疗疗程、更好的临床疗效和耐受性，从而使患者受益。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1示出重组表达质粒图谱，该质粒克隆了白念珠菌Hsp90蛋白C端氨基酸序列的碱基序列，用于表达白念珠菌Hsp90 C端蛋白。
图2示出重组表达质粒图谱，该质粒克隆了白念珠菌Hsp90蛋白全长氨基酸序列的碱基序列，用于表达白念珠菌Hsp90全长蛋白。
图3示出10μg重组表达的白念珠菌Hsp90全长蛋白和C端蛋白的10％SDS-PAGE电泳结果，其中图3A为全长蛋白，图3B为C端蛋白。
图4示出本发明的抗体与抗原Hsp90蛋白结合的ELISA检测结果，其中图4A至图4E分别示出筛选到的HSP90-A、HSP90-B、HSP90-C、HSP90-D和HSP90-J对抗原的结合结果。
图5示出本发明的抗体与白念珠菌结合的激光共聚焦检测结果。
图6示出本发明的抗体与白念珠菌结合的流式细胞术检测结果，其中图6A为计数结果和SSC结果，图6B为荧光强度。
图7示出本发明的抗体与人主要器官组织交叉实验结果，所示切片结果中左列为100μg/ml浓度的抗体HSP90-B hzIgG-H2L3结果，右列为1000μg/ml浓度的抗体HSP90-BhzIgG-H2L3结果。
图8示出本发明的抗体在白念珠菌感染动物模型中的药效学研究结果，其中图8A和8B分别为小分子药物为氟康唑时相应的肾脏组织载菌量结果和生存时间，图8C和8D分别为小分子药物为两性霉素B和阿尼芬净时相应的肾脏组织载菌量结果。
图9示出本发明的抗体在白念珠菌感染动物模型中的药效学研究结果，为小分子药物为氟康唑时相应的肾脏组织载菌量结果。
具体实施方式
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。
实施例1 重组表达融合His标签的白念珠菌Hsp90蛋白C端序列和全长序列的菌株构建
白念珠菌Hsp90蛋白C端氨基酸如SEQ ID NO：140所示，以该序列为目的序列，人工合成相应的碱基序列，如SEQ ID NO：141所示，利用酶切位点NdeI和XhoI将其克隆至含His标签的Pet-21a质粒中，得到重组质粒，命名为Y0000339-1，见图1。
将该重组质粒转化至感受态细胞BL21(DE3)pLysS中，于次日挑取单菌落接种至含100μg/ml氨苄西林的LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜。过夜培养的菌液按1：100体积比接种至含100μg/ml氨苄西林的LB液体培养基中，200rpm于37℃振荡培养至OD600约为0.6～0.8，向菌液中加入IPTG至终浓度为0.5mM，于37℃诱导4.5h。取诱导后菌液，8000rpm离心3min收集菌体，-80℃保存。
白念珠菌Hsp90蛋白全长氨基酸如SEQ ID NO：142所示，同样，以该序列为目的序列，人工合成相应的碱基序列，如SEQ ID NO：143所示，利用酶切位点NdeI和XhoI将其克隆至含His标签的Pet-21a质粒中，得到重组质粒，命名为Y0000289-3，见图2。
如上，进行该重组质粒的转化、培养以及诱导，取诱导后菌液，8000rpm离心3min收集菌体，-80℃保存。
实施例2 重组表达的白念珠菌Hsp90及其C端蛋白的纯化
将实施例1得到的诱导表达重组白念珠菌Hsp90全长序列及其C端序列的大肠杆菌用超声破碎仪破碎，180W工作3s间歇3s，时间7-9min。然后13000rpm离心30min，收集上清液，用0.22μm滤器过滤除菌。
室温下将Ni柱与经过滤的上清液于旋转混合仪上混合1h，然后将Ni柱装载到填料柱中。用5倍柱床体积的BD液(含咪唑浓度30mM)洗脱与Ni柱非特异性结合的蛋白，洗至蛋白显色液不变色，然后用5倍柱床体积的BB液(含咪唑浓度300mM)洗脱目的蛋白。
使用10KD的浓缩管将含目的蛋白的洗脱液浓缩置换，溶剂为PBS。得到的蛋白的电泳结果见图3。
实施例3 重组表达的白念珠菌Hsp90 C端蛋白对Balb/c小鼠的免疫
参考Antibodies a Laboratory Manual，Second Edition(Edward A.Greenfield2012)，以14天为间隔共计42天的过程免疫8周龄Balb/c小鼠。
将实施例2获得的免疫原白念珠菌Hsp90 C末端蛋白在完全或不完全弗氏佐剂中乳化，将其以单侧的方式注射于小鼠颈背部、尾根部、腹股沟3处皮下组织和腹膜腔内。在免疫第35天尾静脉采血，用ELISA方法检测抗体滴度后，取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合。
实施例4 杂交瘤细胞株的筛选、鉴定及抗体的序列测定
如实施例3所述，取白念珠菌Hsp90 C端蛋白免疫的Balb/c小鼠的脾细胞，与骨髓瘤细胞P3X63Ag8.653使用PEG或者电融合方法进行融合。然后将融合后的杂交瘤细胞接种于96孔板中，融合24小时后换成HAT培养基(Sigma-Aldrich，H0262)，融合第9天换成HT培养基(Sigma-Aldrich，H0137)。在96孔板中培养10-14天后，取细胞上清进行ELISA实验，筛选能够分泌抗Hsp90抗体的杂交瘤母克隆。
ELISA实验过程如下。将实施例2得到的重组白念珠菌Hsp90蛋白用pH7.2的PBS(下文同)稀释至1μg/ml，每孔100μl包被于96孔板(Microwell 96F 167008，Thermo)，4℃孵育过夜。次日取出96孔板，用PBST(含0.5％吐温的PBS)洗板，洗板5次，每次浸润1min后彻底甩干残余水分。于每孔中加入200μl的含5％BSA的PBST，置于37℃封闭1h，然后用PBST洗板，并甩干孔中水分。
分别向96孔板中加入待测样品(此处为含有抗体的细胞上清)100μl，并置于37℃孵育1h。然后用PBST洗板5次，在每孔加入1∶10000稀释的二抗(北京鼎国昌盛生物技术有限公司，货号1H-0031)100μl，并置于37℃孵育1h。用PBST洗板5次后，每孔加入100μl显色液(Invitrogen，Substrate Solution)，于37℃孵育10min。最后每孔加入2N硫酸50μl终止反应，于酶标仪(Multiskcin FC，Thermo)在450nm波长处检测吸光度。
将筛选到的分泌抗Hsp90抗体的杂交瘤母克隆采用有限稀释法加入铺有饲养细胞的96孔板中，第2-3天后显微镜下观察并标记单克隆细胞，第7天后通过ELISA实验再次筛选确认杂交瘤细胞能够分泌抗Hsp90单克隆抗体。经两轮有限稀释后获得的杂交瘤克隆可认为是得到了分泌抗HSP90抗体的单克隆杂交瘤。部分单克隆杂交瘤抗体分别命名为Hsp90-A、Hsp90-B、Hsp90-C、Hsp90-D和Hsp90-J，实验结果见图4。
实施例5 抗体与真菌Hsp90蛋白结合的检测
将分泌抗Hsp90单克隆抗体的单克隆杂交瘤细胞扩大培养后，按照RNAfast200试剂盒(上海飞捷生物技术有限公司)说明书步骤提取细胞总RNA，取2μg总RNA然后利用5×PrimeScript RT Master Mix(Takara)将杂交瘤细胞总RNA反转录成cDNA。再使用简并引物(Anke Krebber.1997)和Extaq PCR试剂(Takara)，取50ng cDNA作为模板，扩增抗体轻链可变区Ig VL(κ)和重链可变区Ig VH序列。PCR反应条件如下：95℃5min；94℃30s，54℃30s，72℃30s，30个循环；72℃10min。
利用PCR clean-up Gel extraction试剂盒(Macherey-Nagel公司)纯化PCR扩增产物；按照pClone007 Simple Vector Kit试剂盒(擎科生物科技有限公司)说明书将扩增PCR产物连接至T载体并转化大肠杆菌感受态细胞，菌株扩增、抽提质粒后进行DNA测序获得单克隆抗体可变区序列。
实施例6 鼠源抗体的可变区序列的表征
获取抗体可变区序列并分析如下：
＞单克隆抗体Hsp90-A
重链可变区：
Figure BSA0000172921880000151
轻链可变区：
Figure BSA0000172921880000152
按照不同方法，对抗体Hsp90-A的重链和轻链CDR进行定义，见表1。
表1.抗体Hsp90-A的CDR序列
Figure BSA0000172921880000153
Figure BSA0000172921880000161
＞单克隆抗体Hsp90-B
重链可变区：
Figure BSA0000172921880000162
轻链可变区：
Figure BSA0000172921880000163
按照不同方法，对抗体HSP90-B的重链和轻链CDR进行定义，见表2。
表2.抗体HSP90-B的CDR序列
Figure BSA0000172921880000171
＞单克隆抗体Hsp90-C
重链可变区：
Figure BSA0000172921880000172
轻链可变区：
Figure BSA0000172921880000173
Figure BSA0000172921880000181
按照不同方法，对抗体Hsp90-C的重链和轻链CDR进行定义，见表3。
表3.抗体Hsp90-C的CDR序列
Figure BSA0000172921880000182
＞单克隆抗体Hsp90-D
重链可变区：
Figure BSA0000172921880000183
Figure BSA0000172921880000191
轻链可变区：
Figure BSA0000172921880000192
按照不同方法，对抗体Hsp90-D的重链和轻链CDR进行定义，见表4。
表4.抗体Hsp90-D的CDR序列
Figure BSA0000172921880000193
＞单克隆抗体Hsp90-J
重链可变区：
Figure BSA0000172921880000201
轻链可变区：
Figure BSA0000172921880000202
按照不同方法，对抗体HSP90-J的重链和轻链CDR进行定义，见表5。
表5.抗体HSP90-J的CDR序列
Figure BSA0000172921880000203
Figure BSA0000172921880000211
实施例7 嵌合抗体和人源化抗体的获得
为统一后续抗体评价条件，将鼠源抗体的轻、重链可变区和人轻、重链恒定区组合，得到嵌合抗体序列。
关于人源化，通过分析搜索到的已知人源抗体序列，选择与鼠源抗体最为相似接近的人源抗体重链可变区序列，如IGHV1-69*08，选择其抗体框架区序列作为模板。将鼠源抗体重链CDR与人源抗体框架区结合，最终生成人源化抗体的重链可变区序列。同样过程，生成人源化抗体的轻链可变区序列。
将设计合成的嵌合抗体的基因DNA、人源化抗体的基因DNA分别转染293细胞，重组表达嵌合抗体以及人源化抗体。
本发明的嵌合抗体和人源化抗体的重链恒定区可为IgG1亚型，轻链恒定区可为κ型。具体而言，本发明提供的各种抗体可以具有如SEQ ID NO：132所示的重链恒定区和SEQID NO：133所示的轻链恒定区。
更具体地，本发明制备得到嵌合抗体，命名为HSP90-B xiIgG，其重链序列如SEQID NO：134所示，轻链序列如SEQ ID NO：135所示。本发明制备得到人源化抗体，命名为Hsp90-B hzIgG-H2L3，其重链序列如SEQ ID NO：136所示，轻链序列如SEQ ID NO：137所示。
发现纯化后的人源化抗体Hsp90-B hzIgG-H2L3与嵌合抗体Hsp90-B xiIgG表现出一致的特异性结合真菌HSP90蛋白活性，由此可知与其母本鼠源抗体Hsp90-B muIgG(重链序列如SEQ ID NO：138所示，轻链序列如SEQ ID NO：139所示)特异性结合活性一致。
＞单克隆抗体Hsp90-B hzIgG-H2L3
重链可变区：
Figure BSA0000172921880000212
轻链可变区：
Figure BSA0000172921880000213
按照不同方法，对人源化抗体Hsp90-B hzIgG-H2L3的重链和轻链CDR进行定义，见表6。
表6.人源化抗体Hsp90-B hzIgG-H2L3的CDR序列
Figure BSA0000172921880000221
实施例8 抗体与抗原Hsp90蛋白的结合动力学(Kon，Koff)和亲和力常数KD的检测
采用GE公司BIAcore仪器S200测定抗体抗原相互作用力。
参考GE公司Human antibody capture kit(货号BR-1008-39，Lot10261753)操作说明，首先在传感芯片CM5分析通道和对照样品通道都饱和偶联最大量的抗鼠Fc抗体，将试剂盒自带缓冲液配制7.5μg/ml Hsp90-B muIgG抗体溶液，然后在分析通道流过使其均匀分布，最后在分析通道和对照样品通道一起流过梯度稀释的抗原样品(起始浓度20nM，1：3稀释8个浓度点，并且设定0.741nm浓度点重复)，测定抗体抗原结合后发生的光反应值。
重复上述实验，但饱和偶联最大量的抗人Fc抗体，分别测定嵌合抗体Hsp90-BxiIgG、人源化抗体Hsp90-B hzIgG-H2L3与抗原Hsp90蛋白的结合动力学及亲和常数。
经仪器软件拟合分析，最终得到抗体的结合常数Kon和解离常数Koff，以及亲和力常数KD。结果如下：
鼠源抗体Hsp90-B muIgG：ka(Kon)＝4.2438E+5，kd(Koff)＝1.011e-4，KD(M)＝2.383E-10；
嵌合抗体Hsp90-B xiIgG：ka(Kon)＝2.438E+5，kd(Koff)＝4.638e-5，KD(M)＝1.902E-10；
人源化抗体Hsp90-B hzIgG-H2L3：ka(Kon)＝5.614E+5，kd(Koff)＝7.222E-5，KD(M)＝1.29E-10。
实施例9 抗体与白念珠菌的结合检测
取培养12小时处于对数生长期的白念珠菌SC5314，PBS洗涤3次后，以约1×106CFU/ml的浓度重悬于PBS中，加入10-50μg/ml的单克隆抗体，4℃孵育过夜。次日5000rpm离心2min收集菌体，吸弃上清，PBS洗涤3次，加入0.5ml稀释2000倍的FITC荧光标记的抗小鼠或人IgG抗体，于30℃摇床内160rpm避光孵育1h。再次用PBS洗涤三次，并调整菌液浓度至2×106个细胞/ml。取100μl该菌液滴于干净载玻片上，静置20min后弃去载玻片上的液体，晾干，80％甘油封片。按照激光共聚焦显微镜(TCS SP5，Leica公司)操作说明观察荧光并拍照(激发波长为570nm，吸收波长为650nm)。结果见图5。
同上，白念珠菌细胞于30℃摇床内160rpm避光孵育1h后，用FACS洗涤细胞，然后加入含1％多聚甲醛的FACS固定过夜。按照流式细胞仪(FACS VerseTM，BD Biosciences公司)操作说明操作检测单克隆抗体与白念珠菌的结合。结果见图6。
体外研究结果表明，HSP90-B hzIgG-H2L3抗体可以通过与真菌细胞壁表面抗原结合封闭HSP90蛋白功能，降低真菌毒力，减轻其对宿主细胞的侵袭损伤。
实施例10 抗体与人Hsp90蛋白的交叉特异性的检测
按照实施例4中描述的实验方法，检测HSP90-B hzIgG-H2L3抗体分子与人重组HSP90蛋白的亲和力。实验结果表明，HSP90-B hzIgG-H2L3抗体分子与人重组HSP90蛋白无亲和力，与阴性对照抗体无明显差异。
利用细胞裂解液裂解处于对数生长期的人脐静脉内皮细胞和肺上皮细胞(A549)细胞，提取细胞总蛋白，常规进行SDS-PAGE蛋白电泳，采用常规Western blot方法(包括半干转膜、封闭、抗体孵育、化学发光成像等步骤)将HSP90-B hzIgG-H2L3抗体分子分别与人脐静脉内皮细胞和肺上皮细胞(A549)总蛋白杂交，未见明显特异性条带。
此外，进行与人主要器官组织的交叉实验，其中，以小鼠腿部肌肉注射Hsp90蛋白为阳性对照，以小鼠腿部肌肉注射生理盐水为阴性对照。主要实验步骤如下：常规石蜡组织切片后，按照免疫组织化学染色常规流程，依次用生物素标记的HSP90-B hzIgG-H2L3抗体、HRP标记的人源二抗孵育，显色后结果如图7所示。结果表明，HSP90-B hzIgG-H2L3抗体分子与人脏器组织(脾、胃和睾丸)无组织交叉反应。
上述实验结果表明，HSP90-B hzIgG-H2L3抗体分子特异性较好，无潜在的脱靶效应与交叉反应。
实施例11 抗体的急性毒性研究
在小鼠和食蟹猴体内开展了HSP90-B hzIgG-H2L3抗体分子急性毒性试验研究(小鼠实验N＝10，食蟹猴实验N＝3)。
C57BL/6小鼠(18-20g)，雌雄各半，每只小鼠经尾静脉24小时内注射75mg/kg的HSP90-B hzIgG-H2L3抗体分子。结果表明，最高24小时内给予75mg/kg剂量时，未出现小鼠死亡，连续观察14天未见动物出现任何不适现象，处死动物取主要脏器(心、肝、脾、肺、肾、脑)大体观察未见异常。
每只雄性食蟹猴动物，经四肢静脉滴注给予HSP90-B hzIgG-H2L3抗体分子10mg/kg，单次给药。结果表明，HSP90-B hzIgG-H2L3抗体分子10mg/kg剂量时，未出现动物死亡，连续观察28天未见动物出现任何不适现象。
急性毒性试验研究表明HSP90-B hzIgG-H2L3抗体分子安全性好。
实施例12 抗体的药代动力学研究
HSP90-B hzIgG-H2L3抗体分子按照10mg/kg剂量在食蟹猴体内开展了单次给药的药代动力学研究(N＝3)。
食蟹猴，雄性，每只动物经四肢静脉滴注给予HSP90-B hzIgG-H2L3抗体分子10mg/kg，单次给药。于给药前0h(pre-dose，0h)，给药开始后0.25h(15min)、0.5h(拔针点)、4h、24h(D2)、48h(D3)、96h(D5)、168h(D8)、336h(D15)、504h(D22)、672h(D29)进行采血。采血部位为动物四肢外周静脉(非给药肢)或腹股沟静脉取血。采血量为约1mL全血/只/时间点。采用ELISA法测定食蟹猴血清中抗体浓度；采用非房室模型分析的方法，通过WinNonlinPhoenix(v6.4，Pharsight公司)软件计算Cmax，Tmax、AUClast、CL、t1/2、AUCINF等药代动力学参数。
结果表明，基本的药代动力学参数符合成药性标准，体内消除半衰期(T1/2)为119±19.4h，血浆清除率(CL)为0.39±0.03ml/h/kg。结果见表7。
表7.抗体HSP90-B hzIgG-H2L3的药代动力学结果
Figure BSA0000172921880000251
实施例13 抗体HSP90-B的药效学研究
将C57BL/6小鼠根据体重随机分为模型组(对照；PBS)，抗真菌小分子药物治疗组(氟康唑0.25mg/kg或者两性霉素0.1mg/kg或者阿尼芬净0.25mg/kg)，单克隆抗体药物治疗组(HSP90-B 2mg/kg)，抗真菌小分子药物(氟康唑0.25mg/kg或者两性霉素0.1mg/kg或者阿尼芬净0.25mg/kg)+单克隆抗体药物(HSP90-B 2mg/kg)治疗组。
取培养12小时处于对数生长期的SC5314白念珠菌，PBS洗涤3次后，重悬于PBS中，并调整菌液浓度。采用尾静脉注射的方式，注射菌量为1×106CFU/只，注射体积100μl，使上述各组动物感染白念珠菌。2小时后，各组动物通过尾静脉给予相应药物(均溶解于pH7.2的PBS中)，模型组给予同等体积的PBS。实验动物或者每天观察记录生存时间，或者感染48h后处死小鼠取肾脏，称重、匀浆、涂布于SDA固体培养基上检测组织载菌量。
抗真菌小分子药物为氟康唑(FLC)时，实验结果如图8A、8B所示，Hsp90-B抗体与氟康唑联用组与氟康唑单用组相比，肾脏组织载菌量显著下降，动物生存时间显著延长。
抗真菌小分子药物为两性霉素B(AMB)和阿尼芬净(AN)时，实验结果分别如图8C和8D所示。Hsp90-B抗体与两性霉素B或者阿尼芬净联用组与相应单用组相比，肾脏组织载菌量显著下降。
实施例14 HSP90-B hzIgG-H2L3的药效学研究
将C57BL/6J小鼠根据体重随机分为模型组(对照；PBS)，抗真菌小分子药物治疗组(感染菌后2h，尾静脉注射0.1mg/kg氟康唑+鼠源无关IgG抗体2mg/kg)，单克隆抗体药物治疗组(感染菌后2h，尾静脉注射0.1mg/kg氟康唑+HSP90B hzIgG-H2L3 2mg/kg；感染菌后24h，再次尾静脉注射HSP90B hzIgG-H2L3 2mg/kg)，鼠源HSP90B组(感染菌后2h，尾静脉注射0.1mg/kg氟康唑+HSP90B 2mg/kg)。
取培养12小时处于对数生长期的SC5314白念珠菌，PBS洗涤3次后，重悬于PBS中，并调整菌液浓度。采用尾静脉注射1×106CFU/只，注射体积100μl的方式使上述各组动物感染白念珠菌。2小时后，各组动物给予相应药物治疗，模型组给予同等体积的PBS。实验动物或者每天观察记录生存时间，或者感染48h后处死小鼠取肾脏，称重、匀浆、涂布于SDA固体培养基上检测组织载菌量。
结果如图9所示。
以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。
序列表
<110> 迈威（上海）生物科技股份有限公司
上海普铭生物科技有限公司
<120> Hsp90抗体及其在抗真菌感染中的应用
<130> LC18110072
<160> 143
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 1
Glu Val Gln Leu Gln Gln Leu Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Phe
20 25 30
Asn Met Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro Asn His Ala Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Lys Phe
50 55 60
Arg Gly Lys Val Ser Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Lys Val Gly Arg Phe Leu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 2
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 2
gaggtccagc tgcaacagct tggagctgag ctggtgaagc ccggggcttc agtgaagata 60
tcctgcaagg cttctggcta cacattcact gacttcaaca tggactgggt gaagcagagc 120
catggaaaga gccttgagtg gattggagac attaatccta atcatgctag tactagctac 180
aacccgaagt tcaggggaaa ggtctcattg actgtagaca agtcctccaa cacagcctac 240
ctggaactcc gcagcctgac atctgaggac actgcagtct attactgtgc aagaggcggg 300
aaagtgggac gtttccttgc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgca 357
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR1
<400> 3
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Phe
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR1
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Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Phe Asn Met Asp
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR1
<400> 5
Asp Phe Asn Met Asp
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<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR1
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Thr Asp Phe Asn Met Asp
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<212> PRT
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<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 8
Asp Ile Asn Pro Asn His Ala Ser Thr Ser
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Asp Ile Asn Pro Asn His Ala Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Lys Phe Arg
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Gly
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<223> 重链可变区CDR2
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Trp Ile Gly Asp Ile Asn Pro Asn His Ala Ser Thr Ser
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<212> PRT
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<223> 重链可变区CDR3
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Gly Gly Lys Val Gly Arg Phe Leu Ala Tyr
1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR3
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Ala Arg Gly Gly Lys Val Gly Arg Phe Leu Ala
1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 13
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Phe Ser Cys Gln Ala Ser Glu Ser Val Ser Phe Ala
20 25 30
Gly Thr Arg Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Thr Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Glu Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Asp Asp Ala Ala Met Tyr Tyr Cys Met Gln Ser Met
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Asn Leu Ala Ile Lys
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<212> PRT
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<220>
<223> 轻链可变区
<400> 14
Gly Ala Cys Ala Thr Thr Gly Thr Gly Cys Thr Gly Ala Cys Cys Cys
1 5 10 15
Ala Ala Thr Cys Thr Cys Cys Ala Gly Cys Thr Thr Cys Thr Thr Thr
20 25 30
Gly Gly Cys Thr Gly Thr Gly Thr Cys Thr Cys Thr Cys Gly Gly Ala
35 40 45
Cys Ala Gly Ala Gly Gly Gly Cys Cys Ala Cys Cys Thr Thr Thr Thr
50 55 60
Cys Cys Thr Gly Cys Cys Ala Ala Gly Cys Cys Ala Gly Cys Gly Ala
65 70 75 80
Ala Ala Gly Thr Gly Thr Cys Ala Gly Thr Thr Thr Thr Gly Cys Thr
85 90 95
Gly Gly Thr Ala Cys Ala Ala Gly Gly Thr Thr Ala Ala Thr Gly Cys
100 105 110
Ala Cys Thr Gly Gly Thr Ala Cys Cys Ala Ala Cys Ala Gly Ala Gly
115 120 125
Ala Cys Cys Ala Gly Gly Ala Cys Ala Gly Ala Cys Ala Cys Cys Cys
130 135 140
Ala Ala Ala Cys Thr Cys Cys Thr Cys Ala Thr Cys Thr Ala Thr Cys
145 150 155 160
Gly Thr Gly Cys Ala Thr Cys Cys Ala Ala Cys Cys Thr Ala Gly Ala
165 170 175
Ala Thr Cys Thr Gly Gly Ala Gly Thr Cys Cys Cys Thr Gly Cys Cys
180 185 190
Ala Gly Gly Thr Thr Cys Ala Gly Thr Gly Gly Cys Ala Gly Thr Gly
195 200 205
Gly Gly Thr Cys Thr Gly Ala Gly Thr Cys Ala Gly Ala Gly Thr Thr
210 215 220
Cys Ala Cys Thr Cys Thr Cys Ala Cys Cys Ala Thr Cys Gly Ala Thr
225 230 235 240
Cys Cys Thr Gly Thr Gly Gly Ala Gly Ala Ala Gly Gly Ala Thr Gly
245 250 255
Ala Thr Gly Cys Thr Gly Cys Ala Ala Thr Gly Thr Ala Thr Thr Ala
260 265 270
Cys Thr Gly Thr Ala Thr Gly Cys Ala Ala Ala Gly Thr Ala Thr Gly
275 280 285
Gly Ala Ala Gly Ala Thr Cys Cys Gly Thr Ala Cys Ala Cys Gly Thr
290 295 300
Thr Cys Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Cys Cys Ala Ala
305 310 315 320
Cys Cys Thr Gly Gly Cys Ala Ala Thr Ala Ala Ala Ala
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<210> 15
<211> 15
<212> PRT
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<220>
<223> 轻链可变区CDR1
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Gln Ala Ser Glu Ser Val Ser Phe Ala Gly Thr Arg Leu Met His
1 5 10 15
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR1
<400> 16
Ser Phe Ala Gly Thr Arg Leu Met His Trp Tyr
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
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Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu
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Met Gln Ser Met Glu Asp Pro Tyr Thr
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Met Gln Ser Met Glu Asp Pro Tyr
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<212> PRT
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<220>
<223> 重链可变区
<400> 21
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asn Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Leu Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Thr Arg Phe Trp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser
100 105 110
Ser
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tcctgcacag cttctggctt caacattaaa aacacctata tgcactgggt gaagctgagg 120
cctgaacagg gcctggagtg gattggaagg attgatcctg cgaatggtaa tactaaatat 180
gacccgaagt tccagggcaa ggccactata acagcagaca catcctccaa cacagcctac 240
ctgcagctca gcagcctgac atctgaggac actgccgtct attactgtac tagattctgg 300
gactactggg gccaaggcac cactctcaca gtctcctcg 339
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<223> 重链可变区CDR1
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<220>
<223> 重链可变区CDR1
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Gly Phe Asn Ile Lys Asn Thr Tyr Met His
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<212> PRT
<213> 人工序列
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Asn Thr Tyr Met His
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<212> PRT
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<400> 29
Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln
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Gly
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Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys
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<213> 人工序列
<220>
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Phe Trp Asp Tyr
1
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR3
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Thr Arg Phe Trp Asp
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 33
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Thr Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Leu Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 34
<211> 318
<212> DNA
<213> 轻链可变区
<400> 34
gacatcaaga tgacccagtc tccatcttcc atgtatgcat ctctagggga gagagtcact 60
atcacttgca aggcgagtca ggacattaat acctatttaa gctggttcca gcagaaacca 120
gggaaatctc ctaagaccct gatctatcgt gcaaacagat tggtagatgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggcaagat tattctctca ccatcagcag cctggagtat 240
gaagatgtgg gaatttatta ttgtctacag tatgatgagt tgtggacgtt cggtggaggc 300
accaagctgg aaatcaaa 318
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR1
<400> 35
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Thr Tyr Leu Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Phe
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<212> PRT
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<223> 轻链可变区CDR2
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Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR2
<400> 38
Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val
1 5 10
<210> 39
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR3
<400> 39
Leu Gln Tyr Asp Glu Leu Trp Thr
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR3
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Leu Gln Tyr Asp Glu Leu Trp
1 5
<210> 41
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 41
Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr Ser
1 5 10 15
Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr Leu
20 25 30
Ile Asp Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Asn Pro Gly Ser Gly Phe Thr Thr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
50 55 60
Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr Met
65 70 75 80
Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala
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Arg Ser Leu Leu Trp Asp Asn Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 42
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 42
gtccagctgc agcagtctgg agctgaacta gtaaggcctg ggacttcagt gaaggtgtcc 60
tgcacggctt ctggatacgc cttcactaat tatttgatag actgggtaaa gcagaggcct 120
ggacagggcc ttgagtggat tggagtgatt aatcctggaa gtggttttac tacctacaat 180
gagaagttca agggcaaggc aaccctgact gcagacaagt cctccaccac tgcctacatg 240
cagctcagca gcctgacatc tgatgactct gcggtttatt tctgtgctag atccctactt 300
tgggataact atgcctggtt tgcttactgg ggccaaggga ctctggtcac tgtctctgcg 360
<210> 43
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR1
<400> 43
Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr
1 5
<210> 44
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR1
<400> 44
Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr Leu Ile Asp
1 5 10
<210> 45
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR1
<400> 45
Asn Tyr Leu Ile Asp
1 5
<210> 46
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR1
<400> 46
Thr Asn Tyr Leu Ile Asp
1 5
<210> 47
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 47
Asn Pro Gly Ser Gly Phe
1 5
<210> 48
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 48
Val Ile Asn Pro Gly Ser Gly Phe Thr Thr
1 5 10
<210> 49
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 49
Val Ile Asn Pro Gly Ser Gly Phe Thr Thr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 50
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 50
Trp Ile Gly Val Ile Asn Pro Gly Ser Gly Phe Thr Thr
1 5 10
<210> 51
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR3
<400> 51
Ser Leu Leu Trp Asp Asn Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 52
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR3
<400> 52
Ala Arg Ser Leu Leu Trp Asp Asn Tyr Ala Trp Phe Ala
1 5 10
<210> 53
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 53
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Thr Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Met Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser Arg Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 54
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 54
gatgttttga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gaccattgtc catagtaatg gaaacactta tttagaatgg 120
tatatgcaga aaccaggcca gtctccaaag cccctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattattgtt ttcaaggttc acgtgttccg 300
tacacgttcg gaggggggac caagctggaa atcaaa 336
<210> 55
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR1
<400> 55
Arg Ser Ser Gln Thr Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 56
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR1
<400> 56
Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr
1 5 10
<210> 57
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR2
<400> 57
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 58
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR2
<400> 58
Pro Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe
1 5 10
<210> 59
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR3
<400> 59
Phe Gln Gly Ser Arg Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 60
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR3
<400> 60
Phe Gln Gly Ser Arg Val Pro Tyr
1 5
<210> 61
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 61
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Val Ile Ser Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Asn Asp Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Thr Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Gly Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 62
<211> 342
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 62
caggttcagc tgcagcaatc tggccccgag cttgtgaaac ctggcgcctc tgtgaagatg 60
agctgcaagg ccagcggcta caccttcagc gactacgtga tcagctgggt caagcagaga 120
acaggccagg gcctcgagtg gatcggcgag atctacccca gaaacgacag cacctactac 180
aacgagaagt tcaagggcaa agccacactg accgccgaca agagcagcaa cacagcctac 240
ctgcagctca caagcctggc ctctgaagat agcgccgtgt acttctgtgc cagactcggc 300
ggcgattatt ggggccaggg aacaaccctg acagtgtcca gc 342
<210> 63
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR1
<400> 63
Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
1 5
<210> 64
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR1
<400> 64
Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr Val Ile Ser
1 5 10
<210> 65
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR1
<400> 65
Asp Tyr Val Ile Ser
1 5
<210> 66
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR1
<400> 66
Ser Asp Tyr Val Ile Ser
1 5
<210> 67
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 67
Tyr Pro Arg Asn Asp Ser
1 5
<210> 68
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 68
Glu Ile Tyr Pro Arg Asn Asp Ser Thr Tyr
1 5 10
<210> 69
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 69
Glu Ile Tyr Pro Arg Asn Asp Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 70
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 70
Trp Ile Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Asn Asp Ser Thr Tyr
1 5 10
<210> 71
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR3
<400> 71
Leu Gly Gly Asp Tyr
1 5
<210> 72
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR3
<400> 72
Ala Arg Leu Gly Gly Asp
1 5
<210> 73
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 73
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Ala Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Ser Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 74
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 74
gacgtggtca tgacacaaac ccctctgagc ctgcctgtgt ctctgggagc ccaggccagc 60
atcagctgta gaagctctca gagcctggtg cacagcaacg gcaacaccta cctgcactgg 120
tatctgcaga agcccggaca gagccccaag ctgctgatct acaaggtgtc caaccggttc 180
agcggcgtgc ccgatagatt ttctggcagc ggctctggca ccgacttcac cctgaagatc 240
tccagagtgg aagccgagga cctgggcgtg tacttctgta gccagagcac acacgtgccc 300
agcacatttg gcgccggaac aaagctggaa ctgaag 336
<210> 75
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR1
<400> 75
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 76
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR1
<400> 76
Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr
1 5 10
<210> 77
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR2
<400> 77
Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe
1 5 10
<210> 78
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR3
<400> 78
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Ser Thr
1 5
<210> 79
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR3
<400> 79
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Ser
1 5
<210> 80
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 80
Glu Val Arg Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Asp Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Glu Ile Arg Leu Lys Ser His Asn Tyr Ala Ala His Tyr Ala Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser
65 70 75 80
Val Phe Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Val Glu Asp Thr Gly Phe Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ser Thr Gly Thr Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 81
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 81
gaagtgaggc ttgaggagtc tggaggaggc ttggtgcaac ctggaggatc catgaaactc 60
tcctgtgttg cctctggatt tattttcagt aactattgga tgaactgggt ccgccagtct 120
ccagacaagg ggcttgagtg ggttgctgaa attagattga aatctcataa ttatgcagcc 180
cattatgcgg agtctgtgaa agggaggttc accatctcaa gagatgactc caaaagtagt 240
gtcttcctgc aaatgaacaa cttaagagtt gaagacactg gcttttatta ctgttcgact 300
gggacggttt ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc a 351
<210> 82
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR1
<400> 82
Gly Phe Ile Phe Ser Asn Tyr
1 5
<210> 83
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR1
<400> 83
Gly Phe Ile Phe Ser Asn Tyr Trp Met Asn
1 5 10
<210> 84
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR1
<400> 84
Asn Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 85
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR1
<400> 85
Ser Asn Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 86
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 86
Arg Leu Lys Ser His Asn Tyr Ala
1 5
<210> 87
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 87
Glu Ile Arg Leu Lys Ser His Asn Tyr Ala Ala His
1 5 10
<210> 88
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 88
Glu Ile Arg Leu Lys Ser His Asn Tyr Ala Ala His Tyr Ala Glu Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 89
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 89
Trp Val Ala Glu Ile Arg Leu Lys Ser His Asn Tyr Ala Ala His
1 5 10 15
<210> 90
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR3
<400> 90
Gly Thr Val Phe Asp Tyr
1 5
<210> 91
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR3
<400> 91
Ser Thr Gly Thr Val Phe Asp
1 5
<210> 92
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 92
Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Phe Ser Asn Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 93
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 93
gatattgtga tgacgcaggc tgcattctcc aatccagtca ctcttggaac atcagcttcc 60
atctcctgca ggtctagtaa gagtctccta catagtaatg gcatcactta tttgtattgg 120
tatctgcaga agccaggcca gtctcctcag ctcctgattt atcagatgtc caaccttgcc 180
tcaggagtcc cagacaggtt cagtggcagt gggtcaggaa ctgatttcac actgagaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgtgggtgtt tattactgtg ctcagaatct agaacttcct 300
ccgacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaa 336
<210> 94
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR1
<400> 94
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr
1 5 10 15
<210> 95
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR1
<400> 95
Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr
1 5 10
<210> 96
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR2
<400> 96
Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 97
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR2
<400> 97
Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 98
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR3
<400> 98
Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Pro Thr
1 5
<210> 99
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR3
<400> 99
Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Pro
1 5
<210> 100
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 100
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Asp Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Gly Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 101
<211> 342
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 101
caggtccaac tcgtccaaag cggcgcagaa gtcaaaaagc ccggcagctc agtcaaagtt 60
agctgcaagg ccagcggcta caccttcagc gactacgtca tcagctgggt gagacaagcc 120
cccggccaag gcctcgaatg gatgggagag atctacccca gaagcgacag cacctattac 180
aacgaaaagt tcaagggccg cgtgaccata accgctgaca aaagcaccaa caccgcttac 240
atggaactga gcagcctgag atcagaggac accgccgtgt actactgcgc aagactgggc 300
ggagactact ggggacaagg gacaaccgtg acagtgagca gc 342
<210> 102
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 102
Tyr Pro Arg Ser Asp Ser
1 5
<210> 103
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 103
Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Asp Ser Thr Tyr
1 5 10
<210> 104
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 104
Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Asp Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 105
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 105
Trp Met Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Asp Ser Thr Tyr
1 5 10
<210> 106
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 106
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Ala Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Ser Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 107
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 107
gacgtggtga tgacccaaac acccctgagc ctgcctgtga gcctgggcgc tcaggccagc 60
atctcctgca gaagcagcca gagcctggtg cacagcaacg gcaacaccta cctgcactgg 120
tacctgcaga aaccaggaca aagcccaaaa ctcctgatat acaaagtgag caatcggttc 180
agcggggtgc ccgacagatt cagcggcagc ggaagcggaa cagacttcac cctcaagatc 240
agcagagtgg aagcagagga cctgggcgtg tacttctgca gccagtccac ccacgtcccc 300
agtaccttcg gcgcaggcac aaagctggag ctgaaa 336
<210> 108
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR1
<400> 108
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Ala Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 109
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR1
<400> 109
Val His Ser Asn Ala Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr
1 5 10
<210> 110
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 110
Trp Ile Gly Asp Ile Asn Pro Asn His Ala Ser Thr Ser Tyr Asn Pro
1 5 10 15
Lys Phe Arg Gly
20
<210> 111
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR3
<400> 111
Ala Arg Gly Gly Lys Val Gly Arg Phe Leu Ala Tyr
1 5 10
<210> 112
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR1
<400> 112
Gln Ala Ser Glu Ser Val Ser Phe Ala Gly Thr Arg Leu Met His Trp
1 5 10 15
Tyr
<210> 113
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR2
<400> 113
Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5 10
<210> 114
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 114
Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro
1 5 10 15
Lys Phe Gln Gly
20
<210> 115
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR3
<400> 115
Thr Arg Phe Trp Asp Tyr
1 5
<210> 116
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR1
<400> 116
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Phe
1 5 10
<210> 117
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR2
<400> 117
Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
1 5 10
<210> 118
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 118
Trp Ile Gly Val Ile Asn Pro Gly Ser Gly Phe Thr Thr Tyr Asn Glu
1 5 10 15
Lys Phe Lys Gly
20
<210> 119
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR3
<400> 119
Ala Arg Ser Leu Leu Trp Asp Asn Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 120
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR1
<400> 120
Arg Ser Ser Gln Thr Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
Trp Tyr
<210> 121
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR2
<400> 121
Pro Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5 10
<210> 122
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 122
Trp Ile Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Asn Asp Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu
1 5 10 15
Lys Phe Lys Gly
20
<210> 123
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR3
<400> 123
Ala Arg Leu Gly Gly Asp Tyr
1 5
<210> 124
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR1
<400> 124
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
Trp Tyr
<210> 125
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR2
<400> 125
Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5 10
<210> 126
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 126
Trp Val Ala Glu Ile Arg Leu Lys Ser His Asn Tyr Ala Ala His Tyr
1 5 10 15
Ala Glu Ser Val Lys Gly
20
<210> 127
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR3
<400> 127
Ser Thr Gly Thr Val Phe Asp Tyr
1 5
<210> 128
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR1
<400> 128
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr
1 5 10 15
Trp Tyr
<210> 129
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR2
<400> 129
Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser
1 5 10
<210> 130
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区CDR2
<400> 130
Trp Met Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Asp Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu
1 5 10 15
Lys Phe Lys Gly
20
<210> 131
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区CDR1
<400> 131
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Ala Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
Trp Tyr
<210> 132
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链恒定区
<400> 132
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 133
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链恒定区
<400> 133
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 134
<211> 444
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链
<400> 134
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Val Ile Ser Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Asn Asp Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Thr Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Gly Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val
100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
115 120 125
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
180 185 190
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
195 200 205
Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
340 345 350
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 135
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链
<400> 135
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Ala Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Ser Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 136
<211> 444
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链
<400> 136
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Asp Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Gly Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
115 120 125
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
180 185 190
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
195 200 205
Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
340 345 350
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 137
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链
<400> 137
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Ala Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Ser Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 138
<211> 438
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链
<400> 138
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Val Ile Ser Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Asn Asp Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Thr Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Gly Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val
100 105 110
Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly
115 120 125
Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu
145 150 155 160
Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr
165 170 175
Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu
180 185 190
Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp
195 200 205
Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr
210 215 220
Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
225 230 235 240
Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp
245 250 255
Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp
260 265 270
Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
275 280 285
Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp
290 295 300
Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro
305 310 315 320
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala
325 330 335
Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp
340 345 350
Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile
355 360 365
Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn
370 375 380
Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys
385 390 395 400
Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys
405 410 415
Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu
420 425 430
Ser His Ser Pro Gly Lys
435
<210> 139
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链
<400> 139
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Ala Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
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35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
145 150 155 160
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
180 185 190
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
195 200 205
Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210 215
<210> 140
<211> 443
<212> PRT
<213> Candida albicans
<400> 140
Glu Glu Leu Asn Lys Thr Lys Pro Leu Trp Thr Arg Asn Pro Ser Asp
1 5 10 15
Ile Thr Gln Asp Glu Tyr Asn Ala Phe Tyr Lys Ser Ile Ser Asn Asp
20 25 30
Trp Glu Asp Pro Leu Ala Val Lys His Phe Ser Val Glu Gly Gln Leu
35 40 45
Glu Phe Arg Ala Ile Leu Phe Val Pro Lys Arg Ala Pro Phe Asp Ala
50 55 60
Phe Glu Ser Lys Lys Lys Lys Asn Asn Ile Lys Leu Tyr Val Arg Arg
65 70 75 80
Val Phe Ile Thr Asp Asp Ala Glu Glu Leu Ile Pro Glu Trp Leu Ser
85 90 95
Phe Ile Lys Gly Val Val Asp Ser Glu Asp Leu Pro Leu Asn Leu Ser
100 105 110
Arg Glu Met Leu Gln Gln Asn Lys Ile Leu Lys Val Ile Arg Lys Asn
115 120 125
Ile Val Lys Lys Met Ile Glu Thr Phe Asn Glu Ile Ser Glu Asp Gln
130 135 140
Glu Gln Phe Asn Gln Phe Tyr Thr Ala Phe Ser Lys Asn Ile Lys Leu
145 150 155 160
Gly Ile His Glu Asp Ala Gln Asn Arg Gln Ser Leu Ala Lys Leu Leu
165 170 175
Arg Phe Tyr Ser Thr Lys Ser Ser Glu Glu Met Thr Ser Leu Ser Asp
180 185 190
Tyr Val Thr Arg Met Pro Glu His Gln Lys Asn Ile Tyr Tyr Ile Thr
195 200 205
Gly Glu Ser Ile Lys Ala Val Glu Lys Ser Pro Phe Leu Asp Ala Leu
210 215 220
Lys Ala Lys Asn Phe Glu Val Leu Phe Met Val Asp Pro Ile Asp Glu
225 230 235 240
Tyr Ala Met Thr Gln Leu Lys Glu Phe Glu Asp Lys Lys Leu Val Asp
245 250 255
Ile Thr Lys Asp Phe Glu Leu Glu Glu Ser Asp Glu Glu Lys Ala Ala
260 265 270
Arg Glu Lys Glu Ile Lys Glu Tyr Glu Pro Leu Thr Lys Ala Leu Lys
275 280 285
Asp Ile Leu Gly Asp Gln Val Glu Lys Val Val Val Ser Tyr Lys Leu
290 295 300
Val Asp Ala Pro Ala Ala Ile Arg Thr Gly Gln Phe Gly Trp Ser Ala
305 310 315 320
Asn Met Glu Arg Ile Met Lys Ala Gln Ala Leu Arg Asp Thr Thr Met
325 330 335
Ser Ser Tyr Met Ser Ser Lys Lys Thr Phe Glu Ile Ser Pro Ser Ser
340 345 350
Pro Ile Ile Lys Glu Leu Lys Lys Lys Val Glu Thr Asp Gly Ala Glu
355 360 365
Asp Lys Thr Val Lys Asp Leu Thr Thr Leu Leu Phe Asp Thr Ala Leu
370 375 380
Leu Thr Ser Gly Phe Thr Leu Asp Glu Pro Ser Asn Phe Ala His Arg
385 390 395 400
Ile Asn Arg Leu Ile Ala Leu Gly Leu Asn Ile Asp Asp Asp Ser Glu
405 410 415
Glu Thr Ala Val Glu Pro Glu Ala Thr Thr Thr Ala Ser Thr Asp Glu
420 425 430
Pro Ala Gly Glu Ser Ala Met Glu Glu Val Asp
435 440
<210> 141
<211> 1341
<212> DNA
<213> Candida albicans
<400> 141
catatggaag agttgaacaa gaccaaacca ttatggacca gaaacccatc tgatatcact 60
caagatgaat acaatgcatt ctacaagtct atttccaacg actgggaaga cccattggct 120
gtcaaacact tttctgttga aggtcaatta gaattcagag ctatcttgtt tgttccaaag 180
agagctccat ttgatgcctt tgaatccaag aagaagaaga acaacatcaa attatacgtc 240
cgtagagtgt ttatcactga tgatgctgaa gagttgattc cagaatggtt aagtttcatc 300
aagggggttg tcgattccga agacttgcca ttgaacttgt ccagagaaat gttgcaacaa 360
aacaagattt tgaaagttat cagaaagaac attgtcaaaa agatgattga aactttcaat 420
gaaatctctg aagaccaaga gcaattcaac caattctaca ctgctttctc caagaacatc 480
aaattgggta ttcatgaaga tgctcaaaac agacaatctt tggctaaatt gttgagattc 540
tactctacca aatcttctga agaaatgact tccttgtctg actacgttac tagaatgcca 600
gaacaccaaa agaatatcta ctacatcact ggtgaatcca tcaaagccgt tgaaaaatca 660
ccattcttgg atgccttgaa agctaagaac tttgaagtct tgttcatggt ggatccaatc 720
gatgaatatg ccatgactca attgaaggaa tttgaagaca agaaattggt tgatattacc 780
aaagactttg aattggaaga aagtgacgaa gaaaaagctg ctagagaaaa ggaaatcaaa 840
gaatacgaac cattgaccaa agctttgaaa gatattcttg gtgatcaagt tgaaaaagtt 900
gttgtttcct acaaacttgt tgatgctcca gctgccatta gaactggtca atttggttgg 960
tctgccaata tggaaagaat catgaaggct caagctttga gagacaccac catgtcttct 1020
tacatgtcct ctaagaagac ctttgaaatt tctccatctt ccccaattat caaggaattg 1080
aagaagaaag ttgaaaccga tggagctgaa gacaagaccg ttaaggactt gaccactttg 1140
ttgtttgata ctgcattgtt gacttctggt ttcaccttgg acgaaccatc caactttgcc 1200
cacagaatta acagattgat tgccttggga ttgaatattg acgatgattc agaagaaact 1260
gctgttgaac ctgaagctac tactactgcc tcaactgacg aaccagctgg agaatctgct 1320
atggaagaag ttgatctcga g 1341
<210> 142
<211> 707
<212> PRT
<213> Candida albicans
<400> 142
Met Ala Asp Ala Lys Val Glu Thr His Glu Phe Thr Ala Glu Ile Ser
1 5 10 15
Gln Leu Met Ser Leu Ile Ile Asn Thr Val Tyr Ser Asn Lys Glu Ile
20 25 30
Phe Leu Arg Glu Leu Ile Ser Asn Ala Ser Asp Ala Leu Asp Lys Ile
35 40 45
Arg Tyr Gln Ala Leu Ser Asp Pro Ser Gln Leu Glu Ser Glu Pro Glu
50 55 60
Leu Phe Ile Arg Ile Ile Pro Gln Lys Asp Gln Lys Val Leu Glu Ile
65 70 75 80
Arg Asp Ser Gly Ile Gly Met Thr Lys Ala Asp Leu Val Asn Asn Leu
85 90 95
Gly Thr Ile Ala Lys Ser Gly Thr Lys Ser Phe Met Glu Ala Leu Ser
100 105 110
Ala Gly Ala Asp Val Ser Met Ile Gly Gln Phe Gly Val Gly Phe Tyr
115 120 125
Ser Leu Phe Leu Val Ala Asp His Val Gln Val Ile Ser Lys His Asn
130 135 140
Asp Asp Glu Gln Tyr Val Trp Glu Ser Asn Ala Gly Gly Lys Phe Thr
145 150 155 160
Val Thr Leu Asp Glu Thr Asn Glu Arg Leu Gly Arg Gly Thr Met Leu
165 170 175
Arg Leu Phe Leu Lys Glu Asp Gln Leu Glu Tyr Leu Glu Glu Lys Arg
180 185 190
Ile Lys Glu Val Val Lys Lys His Ser Glu Phe Val Ala Tyr Pro Ile
195 200 205
Gln Leu Val Val Thr Lys Glu Val Glu Lys Glu Val Pro Glu Thr Glu
210 215 220
Glu Glu Asp Lys Ala Ala Glu Glu Asp Asp Lys Lys Pro Lys Leu Glu
225 230 235 240
Glu Val Lys Asp Glu Glu Asp Glu Lys Lys Glu Lys Lys Thr Lys Thr
245 250 255
Val Lys Glu Glu Val Thr Glu Thr Glu Glu Leu Asn Lys Thr Lys Pro
260 265 270
Leu Trp Thr Arg Asn Pro Ser Asp Ile Thr Gln Asp Glu Tyr Asn Ala
275 280 285
Phe Tyr Lys Ser Ile Ser Asn Asp Trp Glu Asp Pro Leu Ala Val Lys
290 295 300
His Phe Ser Val Glu Gly Gln Leu Glu Phe Arg Ala Ile Leu Phe Val
305 310 315 320
Pro Lys Arg Ala Pro Phe Asp Ala Phe Glu Ser Lys Lys Lys Lys Asn
325 330 335
Asn Ile Lys Leu Tyr Val Arg Arg Val Phe Ile Thr Asp Asp Ala Glu
340 345 350
Glu Leu Ile Pro Glu Trp Leu Ser Phe Ile Lys Gly Val Val Asp Ser
355 360 365
Glu Asp Leu Pro Leu Asn Leu Ser Arg Glu Met Leu Gln Gln Asn Lys
370 375 380
Ile Leu Lys Val Ile Arg Lys Asn Ile Val Lys Lys Met Ile Glu Thr
385 390 395 400
Phe Asn Glu Ile Ser Glu Asp Gln Glu Gln Phe Asn Gln Phe Tyr Thr
405 410 415
Ala Phe Ser Lys Asn Ile Lys Leu Gly Ile His Glu Asp Ala Gln Asn
420 425 430
Arg Gln Ser Leu Ala Lys Leu Leu Arg Phe Tyr Ser Thr Lys Ser Ser
435 440 445
Glu Glu Met Thr Ser Leu Ser Asp Tyr Val Thr Arg Met Pro Glu His
450 455 460
Gln Lys Asn Ile Tyr Tyr Ile Thr Gly Glu Ser Ile Lys Ala Val Glu
465 470 475 480
Lys Ser Pro Phe Leu Asp Ala Leu Lys Ala Lys Asn Phe Glu Val Leu
485 490 495
Phe Met Val Asp Pro Ile Asp Glu Tyr Ala Met Thr Gln Leu Lys Glu
500 505 510
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515 520 525
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Lys Val Val Val Ser Tyr Lys Leu Val Asp Ala Pro Ala Ala Ile Arg
565 570 575
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580 585 590
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595 600 605
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660 665 670
Leu Asn Ile Asp Asp Asp Ser Glu Glu Thr Ala Val Glu Pro Glu Ala
675 680 685
Thr Thr Thr Ala Ser Thr Asp Glu Pro Ala Gly Glu Ser Ala Met Glu
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Glu Val Asp
705
<210> 143
<211> 2130
<212> DNA
<213> Candida albicans
<400> 143
catatggctg acgcaaaagt tgaaactcac gaattcactg ctgagatctc tcagttgatg 60
tctttgatca ttaacacagt ctattcaaac aaggaaattt tcttaagaga attgatctcc 120
aatgcttctg atgctttgga caaaatcaga taccaagcct tgtctgatcc atcccaattg 180
gaatccgaac cagaattgtt cattagaatc atccctcaaa aggaccaaaa agttttggaa 240
attagagatt ctggtattgg tatgaccaaa gctgacttgg tcaacaattt gggtactatt 300
gctaaatctg gtaccaaatc ctttatggaa gctttaagtg ctggtgctga cgtttctatg 360
attggtcaat ttggtgttgg tttctactcc ttgttcttgg ttgctgatca cgtccaagtt 420
atctccaaac acaatgacga cgaacaatac gtttgggaat ctaacgctgg tggtaagttc 480
actgttactt tggatgaaac taacgaaaga ttgggtcgtg gtaccatgtt gagattgttc 540
ttgaaggaag atcaattgga atacttggaa gaaaaaagaa tcaaagaagt tgtcaagaaa 600
cactctgaat tcgttgctta tccaatccaa ttagttgtca ccaaagaagt tgaaaaagaa 660
gttccagaaa ccgaagaaga agacaaagct gctgaagaag acgacaagaa accaaaattg 720
gaagaagtca aggatgaaga agacgaaaag aaagaaaaga agaccaagac tgtcaaagaa 780
gaggttactg aaactgaaga gttgaacaag accaaaccat tatggaccag aaacccatct 840
gatatcactc aagatgaata caatgcattc tacaagtcta tttccaacga ctgggaagac 900
ccattggctg tcaaacactt ttctgttgaa ggtcaattag aattcagagc tatcttgttt 960
gttccaaaga gagctccatt tgatgccttt gaatccaaga agaagaagaa caacatcaaa 1020
ttatacgtcc gtagagtgtt tatcactgat gatgctgaag agttgattcc agaatggtta 1080
agtttcatca agggggttgt cgattccgaa gacttgccat tgaacttgtc cagagaaatg 1140
ttgcaacaaa acaagatttt gaaagttatc agaaagaaca ttgtcaaaaa gatgattgaa 1200
actttcaatg aaatctctga agaccaagag caattcaacc aattctacac tgctttctcc 1260
aagaacatca aattgggtat tcatgaagat gctcaaaaca gacaatcttt ggctaaattg 1320
ttgagattct actctaccaa atcttctgaa gaaatgactt ccttgtctga ctacgttact 1380
agaatgccag aacaccaaaa gaatatctac tacatcactg gtgaatccat caaagccgtt 1440
gaaaaatcac cattcttgga tgccttgaaa gctaagaact ttgaagtctt gttcatggtg 1500
gatccaatcg atgaatatgc catgactcaa ttgaaggaat ttgaagacaa gaaattggtt 1560
gatattacca aagactttga attggaagaa agtgacgaag aaaaagctgc tagagaaaag 1620
gaaatcaaag aatacgaacc attgaccaaa gctttgaaag atattcttgg tgatcaagtt 1680
gaaaaagttg ttgtttccta caaacttgtt gatgctccag ctgccattag aactggtcaa 1740
tttggttggt ctgccaatat ggaaagaatc atgaaggctc aagctttgag agacaccacc 1800
atgtcttctt acatgtcctc taagaagacc tttgaaattt ctccatcttc cccaattatc 1860
aaggaattga agaagaaagt tgaaaccgat ggagctgaag acaagaccgt taaggacttg 1920
accactttgt tgtttgatac tgcattgttg acttctggtt tcaccttgga cgaaccatcc 1980
aactttgccc acagaattaa cagattgatt gccttgggat tgaatattga cgatgattca 2040
gaagaaactg ctgttgaacc tgaagctact actactgcct caactgacga accagctgga 2100
gaatctgcta tggaagaagt tgatctcgag 2130

Claims (27)

1.一种特异性结合白念珠菌Hsp90的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）分别包含以下的CDR组合：
(1) 根据Chothia编码系统定义，如SEQ ID NO: 63所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO: 67所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO: 71所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO: 75所示的VL-CDR1、如SEQID NO: 57所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO: 78所示的VL-CDR3；
(2) 根据AbM编码系统定义，如SEQ ID NO: 64所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO: 68所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO: 71所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO: 75所示的VL-CDR1、如SEQ IDNO: 57所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO: 78所示的VL-CDR3；
(3) 根据Kabat编码系统定义，如SEQ ID NO: 65所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO: 69所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO: 71所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO: 75所示的VL-CDR1、如SEQID NO: 57所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO: 78所示的VL-CDR3；或
(4) 根据Contact编码系统定义，如SEQ ID NO: 66所示的VH-CDR1、如SEQ ID NO: 70所示的VH-CDR2、如SEQ ID NO: 72所示的VH-CDR3；如SEQ ID NO: 76所示的VL-CDR1、如SEQID NO: 77所示的VL-CDR2、如SEQ ID NO: 79所示的VL-CDR3。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包含以下的重链可变区和轻链可变区组合：
如SEQ ID NO: 61所示的氨基酸序列的重链可变区；和，如SEQ ID NO: 73所示的氨基酸序列的轻链可变区。
3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体为单克隆抗体、单链抗体、人源化的抗体或者嵌合抗体。
4.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的类型为IgA、IgD、IgE、IgG或IgM。
5.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的类型为IgG1。
6.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗原结合片段为所述抗体能够特异性结合白念珠菌Hsp90或其任何部分的抗原结合片段。
7.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗原结合片段选自所述抗体的scFv、Fab、F(ab')2或Fv片段。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链恒定区为IgG1亚型，轻链恒定区为κ型。
9.根据权利要求8所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO: 132所示的重链恒定区和如SEQ ID NO: 133所示的轻链恒定区。
10.根据权利要求9所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段为以下的重链和轻链组合：
如SEQ ID NO: 138所示的氨基酸序列的重链；和，如SEQ ID NO: 139所示的氨基酸序列的轻链。
11.一种缀合物，所述缀合物包含权利要求1至10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
12.一种核酸分子，其编码权利要求1至10中任一项限定的所述抗体或其抗原结合片段中的重链可变区和轻链可变区。
13.根据权利要求12所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含如SEQ ID NO:62和SEQ ID NO: 74所示的核苷酸序列。
14.一种载体，其包含权利要求12或13所述的核酸分子。
15.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求12或13所述的核酸分子或权利要求14所述的载体。
16.一种宿主细胞，所述宿主细胞被权利要求12或13所述的核酸分子或权利要求14所述的载体转化或转染。
17.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1至10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求11所述的缀合物、权利要求12或13所述的核酸分子、权利要求14所述的载体或权利要求15或16所述的宿主细胞。
18.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1至10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求11所述的缀合物、权利要求12或13所述的核酸分子、权利要求14所述的载体或权利要求15或16所述的宿主细胞以及药学上可接受的辅料。
19.权利要求1至10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求11所述的缀合物、权利要求12或13所述的核酸分子、权利要求14所述的载体、权利要求15或16所述的宿主细胞或权利要求17或18所述的药物组合物在制备用于治疗白念珠菌感染的药物中的用途。
20.权利要求1至10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求11所述的缀合物、权利要求12或13所述的核酸分子、权利要求14所述的载体、权利要求15或16所述的宿主细胞或权利要求17或18所述的药物组合物和抗真菌药物的组合在制备用于治疗白念珠菌感染的药物中的用途。
21.根据权利要求20所述的用途，其特征在于，所述抗真菌药物为唑类抗真菌药物、棘白菌素类抗真菌药物、多烯类抗真菌药、丙烯胺类抗真菌药物或嘧啶类抗真菌药物。
22.根据权利要求21所述的用途，其特征在于，所述唑类抗真菌药物为氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑或艾沙康唑。
23.根据权利要求21所述的用途，其特征在于，所述棘白菌素类抗真菌药物为卡泊芬净、阿尼芬净或米卡芬净。
24.根据权利要求21所述的用途，其特征在于，所述多烯类抗真菌药为两性霉素。
25.根据权利要求21所述的用途，其特征在于，所述丙烯胺类抗真菌药物为特比萘芬。
26.根据权利要求21所述的用途，其特征在于，所述嘧啶类抗真菌药物为5-氟胞嘧啶。
27.一种试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1至10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求11所述的缀合物、权利要求12或13所述的核酸分子、权利要求14所述的载体、权利要求15或16所述的宿主细胞或权利要求17或18所述的药物组合物。
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