CN101010100A - 癌症的治疗方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及含有有效抗癌药和抗－Hsp90抗体的新药物和制剂，它们共同提供治疗癌症和白血病的增强的药效。

Description

癌症的治疗方法
本发明涉及含有有效药剂及抗-Hsp90抗体的新的药物和制剂，它们共同提供治疗癌症的增强的药效，所述癌症包括结肠直肠癌。本发明的其他方面涉及白血病的治疗。
癌症治疗和白血病治疗
本发明的第一个方面涉及含有有效抗癌药物及抗-Hsp90抗体的新的药物和制剂，它们共同提供治疗癌症的增强的药效。
近几年发现热激蛋白(Hsp)家族成员在癌发生和细胞死亡中起着重要作用。确实，很多年来热激蛋白被鉴定为是癌症治疗的有潜力的靶物(Whitesell L等，PNAS USA，1994 Aug 30，91(18)：8324-8；PMID：8078881)，而且有人提出安沙霉素(ansamycin)家族成员(以前称为酪氨酸激酶抑制剂)在有效治疗癌症中是有效的(Neckers L等，Invest New Drugs，1999，17(4)：361-73；PMID：10759403；Schulte TW等，Cancer Chemother Pharmacol.，1998，42(4)：273-9；PMID：9744771)。
一种热激蛋白，Hsp90，已经被推断涉及乳腺癌、前列腺癌、黑素瘤、白血病和淋巴瘤、结肠癌和肺癌(Banerji U等，Curr Cancer DrugTargets，2003 Oct；3(5)：385-90；PMID：14529390)以及甲状腺癌。Hsp90的作用是保证多种细胞过程例如信号传导中涉及的″客户蛋白(clientprotein)″的正确折叠。Hsp90客户蛋白包括转录因子，例如突变体p53和低氧诱导因子1α，和可溶性激酶，包括v-Src、Akt、Raf-1和Bcr-Abl。Hsp90以比在正常细胞中高2至10倍的水平在肿瘤细胞中组成型表达，提示其对于肿瘤细胞的生长/存活来说它可能是重要的(Schwartz，J.，等，2003，Semin.Hematol.40：p87-96)。因为客户蛋白与Hsp90的结合能调节它们在细胞中的构象、稳定性和命运，所以Hsp90对调节细胞出路包括细胞生长、分裂、分化、运动和死亡的途径起主要作用(Workman，P.，Cancer Lett.2004 Apr 8；206(2)：149-57；PMID：15013520)。Hsp90在细胞进程中达到的广泛作用意味着目前该蛋白质被视为开发治疗性药物的可能的靶物。通过与单一分子靶物特异性相互作用，Hsp90抑制剂引起Hsp90客户蛋白的去稳定作用甚至降解。
本发明的第二个方面涉及含有有效抗癌药物及抗-Hsp90抗体的新的药物和制剂，它们共同提供治疗白血病的增强的药效。
白血病是影响骨髓的一种癌症。患有白血病的人骨髓产生大量异常白细胞。异常白细胞挤入骨髓，使得骨髓不能产生足够的正常红细胞、白细胞和血小板。
根据其发展速度(急性或慢性)以及根据受影响的白细胞类型(髓细胞性或类淋巴细胞性)可以将不同类型白血病分类。髓样白细胞是抵御感染的免疫系统第一道防线，并且主要在血液中被发现，在那里它们吞噬并杀死外来生物体。类淋巴白细胞在淋巴结和血液中被发现。
白血病最常见的四种类型包括慢性类淋巴(淋巴细胞性)白血病(CLL)、急性髓样(髓细胞性)白血病(AML)、急性类淋巴(淋巴细胞性)白血病(ALL)和慢性髓细胞性白血病(CML)。
CLL也是一种淋巴细胞癌症，但是比ALL发展缓慢。这种疾病是影响成年人最常见的一种白血病类型，而在儿童中非常少见。
AML是主要影响已知是粒细胞的骨髓细胞的一种癌症。它产生太多的能阻塞血管的成髓细胞，而产生不足量的成熟骨髓细胞。这种疾病主要发生在成人但也影响儿童。
CML，(也称作慢性粒细胞性白血病)是一种典型的嗜中性粒细胞缓慢进程癌症，在儿童中少见而与妇女相比，更常见影响成年男性。CML通常容易被诊断，因为多于95％的患者的白血病细胞有着截然不同的细胞遗传学异常，费城染色体(Ph1)(Kurzrock，R.等2003，Ann.Intern.Med.138(10)：p819-30，PMID：12755554；Goldman，J.M.和MeIo，J.V.，2003，N.Engl.J.Med.349(15)：p1451-64，PMID：14534339)。Ph1是9号和22号染色体长臂之间相互易位的结果，并且在所有的造血前体中证实(Deininger，M.W.等2000，Blood 96(10)：p3343-56，PMID：11071626)。这种易位导致9号染色体上Abelson(abl)致癌基因转移到22号染色体的被称为断点簇区域(breakpoint clusterregion，BCR)的区域(Deininger，M.W.等，2000，Blood 96(10)：p3343-56，PMID：11071626)。这接着导致编码8.5kb嵌合mRNA的融合BCR/ABL基因。BCR/ABL基因是足以在小鼠中产生CML-样疾病的致癌基因。BCR/ABL致癌基因的转录物被翻译得到210kDa或190kDa蛋白质。Bcr-Abl蛋白质是一种异常的酪氨酸激酶蛋白，其引起CML中发现的失调的髓细胞生成。CML经称作慢性期、加速期和原始细胞危象的不同临床阶段发展。BCR/ABL致癌基因在所有阶段表达，但是原始细胞危象特征在于多个额外的基因和分子变化(Gorre，M.E.，等2002，Blood，100(8)：p3041-3044)。
Ph1-阴性CML是一种罕见疾病，特征在于CML的临床特征没有导致Bcr-Abl融合mRNA的t(9；22)(q34；q11)易位的细胞遗传学或分子(RT-PCR)证据。Ph1-阴性CML是定义不充分的实体，其几乎没有和其他骨髓增殖性综合症清晰地区分。曾经一度认为所有临床CML的5-10％可以常规对Bcr-Abl转录物进行RT-PCR分析，但是现在这个数据远低于5％。令人感兴趣的是，一些带有这种实体的患者可能是由于与AbI的另一种融合而导致的。在两例Ph-CML病例中，作为t(9；12)的结果的TEL(ETV6)-ABL融合已经被证实。Ph1-阴性CML患者相对于Ph1-阳性CML患者来说对于治疗一般有更不好的响应和更短的存活期(Onida，F.等2002：Cancer 95(8)：p1673-84，PMID：12365015)。
ALL是已知是成淋巴细胞的未成熟淋巴细胞的癌症。这种疾病是在通常在1岁至7岁之间的少年儿童中最常见的白血病类型，而在成人则极少见。ALL引起生成很多异常淋巴细胞，其排挤出正常红细胞和血小板。在ALL的发展中直接涉及一种185kDa Bcr-Abl蛋白质。
临床试验中作为Hsp90抑制剂的两种药物格尔德霉素(GA)和17-烯丙基氨基，17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)已经示出具有有希望的生物学和临床活性。确实，210kDa Bcr-Abl融合蛋白(p210Bcr-Abl)其稳定性依赖于与Hsp90的缔合，用GA或17-AAG对细胞治疗导致p210Bcr-Abl被快速破环。
与常规细胞毒性剂或者其他新药物联合的Hsp90抑制剂如17AAG在治疗多步骤癌发生中也是有治疗价值的(Workman P.，Cancer Lett.2004 Apr 8；206(2)：149-57；PMID：15013520)。在特征在于遗传不稳定性的癌细胞中，17AAG有可能通过阻断Hsp90活性而释放多种突变，它们共同证实对于肿瘤是″合成致死的(synthetically lethal)″。相对来说，没有肿瘤细胞遗传不稳定性的正常细胞不受影响(Garber，K.，2002，Journal of the National Cancer Institute，Vol.94，No.22，p1666-1668)。17AAG的显著问题是对于长时间治疗而言药物毒性太大，因此需要非毒性替代品(Banerji等，上文)。
Imatinib mesylate(Gleevec(RTM))是一种小分子酪氨酸激酶抑制剂，其作为单一药物对肿瘤疾病有着主要影响。Imatinib最初被设计成特征在于携带病原性9；22易位的恶性肿瘤的Bcr-Abl酪氨酸激酶的抑制剂，经证实是中等特异性的，并且对慢性骨髓性白血病(CML)和费城染色体阳性(Ph1+)ALL的治疗有着主要作用(Krystal，GW，2004，Leukemia Research 28S1：pS53-S59)。与CML的imatinib治疗相关的一个问题是作为Bcr-Abl酪氨酸激酶突变结果的抗药性。重要的是，变为imatinib抗性的CML细胞在体内保持着其Hsp90依赖性，因此保持着对17AAG的敏感性。
最近的出版物教导肿瘤Hsp90完全以多分子伴侣复合体存在，这有利于恶性发展并且它们对于癌症治疗是有吸引力的靶物。特别地，从肿瘤细胞衍生的多分子伴侣复合体中的Hsp90被教导是与来自正常细胞的Hsp90(即其潜伏性未复合态中的Hsp90)相比，对于17AAG有高100倍的结合亲和性，表明在多分子伴侣复合体中其呈现了潜伏性未复合Hsp90未呈现的表位(特别是四级表位)。Mycograb(RTM)抗体能结合其潜伏性未复合态的Hsp90，以及多分子伴侣复合体中的Hsp90，对结合动力学没有任何副作用。
WO 01/76627公开了治疗真菌感染的组合物，所述组合物含有下面(i)和(ii)的组合：(i)多烯或β葡聚糖合成酶抑制剂抗真菌剂；和(ii)特异性抗真菌Hsp90抗体，所述组合物对于抗引起感染的真菌是有效的，尽管所述真菌对抗真菌剂本身有抗药性。
根据本发明的第一个方面，提供下面物质在用于治疗癌症的药物的制备方法中的用途：
(i)特异于Hsp90的至少一个表位的抗体或者其抗原结合片段；和
(ii)至少一种选自下面一组中的抗癌药：阿霉素、柔红霉素(Daunorubicin)、表阿霉素(Epirubicin)、Herceptin、多西他赛(Docetaxel)和顺铂(Cisplatin)。
阿霉素是蒽环类抗生素药物，以前被认为是抗肿瘤药物。
表阿霉素是较少毒性的合成蒽环类抗生素，以前也被认为是抗肿瘤药物。
柔红霉素是多种治疗场合使用的抗肿瘤药物，包括作为抗癌药物。
Herceptin(Trastuzumab)是用于治疗HER2蛋白质过表达转移乳腺癌的单克隆抗体。
多西他赛是一种公认的抗癌药物，并且是一种有丝分裂抑制剂。
顺铂是一种公认的抗癌药物，并且含有铂络合物。
根据下文实验结果中的详细描述(″实验A″)，阿霉素和柔红霉素是特别优选的，并且特别表现出与抗-Hsp90抗体的良好的协同作用。Herceptin也表现出与抗-Hsp90抗体的良好的协同作用。多西他赛和顺铂与抗-Hsp90抗体联合时和发现了协同作用。使用雌激素受体阳性细胞时柔红霉素和抗体之间的协同作用特别明显，所以使用抗体和柔红霉素的药物和治疗可以特别用于(或者施用于)有雌激素受体的细胞。
实验(″实验A″)还示出其他抗癌药物当与抗-Hsp90抗体一起使用时表现出中性结果(紫杉醇(paclitaxel))或拮抗作用(Imatinib)。这证实当与抗-Hsp90抗体联合时上述抗癌药物实现的惊奇的/出人意料的协同作用性质。
还提供了在治疗癌症中同时、分开或依次使用的联合制剂，含有：
(i)特异于Hsp90的至少一个表位的抗体或者其抗原结合片段；和
(ii)至少一种选自下面一组中的抗癌药：阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、Herceptin、多西他赛和顺铂。
还提供了对有需要的患者治疗癌症的方法，包括施用治疗有效量的：
(i)特异于Hsp90的至少一个表位的抗体或者其抗原结合片段；和
(ii)至少一种选自下面一组中的抗癌药：阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、Herceptin、多西他赛和顺铂。
如本文使用，术语″治疗″意在具有广义含义，除非另有清楚说明。因此″治疗″或″疗法″意思是任何治疗，其被设计来治愈、减轻、去除或减小症状，或者预防或降低人或动物体病症(contracting disorders)或机能障碍的可能性。因此术语″治疗″意思是疾病病症的治疗及其预防。
抗体或者其抗原结合片段对于包含SEQ ID NO：1的序列的肽所呈现的表位是特异性的。
如上所讨论，虽然有人提出多分子伴侣复合体中的Hsp90呈现的四级表位是治疗的合适靶物，但是实验(下文)示出事实上线性表位是治疗的有用而有效的靶物。
抗体，它们的制备和用途是公知的并且公开于例如Harlow，E.和Lane，D.，Antibodies：A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，New York，1999。
应用本领域公知的标准方法可以制备抗体。抗体的例子包括(但不局限于)多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段、Fab表达库产生的片段和抗体的抗原结合片段。
可以在很多种宿主例如山羊、兔、大鼠、小鼠、人和其他宿主中生产抗体。可以通过注射用真菌应激蛋白或者具有免疫原性的其片段或寡肽对它们免疫。根据宿主种类，可以使用不同的佐剂来加强免疫应答。这样的佐剂包括但不限于弗氏佐剂、矿质凝胶例如氢氧化铝和表面活性物质，例如溶血卵磷脂、多聚醇、聚阴离子、肽、油乳化剂、匙孔血蓝蛋白和二硝基酚。对人使用的佐剂中，BCG(卡介苗)和小棒杆菌(Corynebacterium parvum)是特别有用的。
应用通过在培养基中的连续细胞系提供抗体分子制备的任何技术可以制备抗真菌蛋白的单克隆抗体或者其任何片段或寡肽。这些包括但不限于杂交瘤技术、人B-细胞杂交瘤技术和EBV-杂交瘤技术(Koehler等，1975，Nature，256：495-497；Kosbor等，1983，Immunol.Today 4：72；Cote等，1983，PNAS USA，80：2026-2030；Cole等，1985，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Alan R.Liss Inc.，New York，pp.77-96)。
另外，可以利用产生″嵌合抗体″的技术，将小鼠抗体基因与人抗体基因剪接获得具有合适抗原特异性和生物学活性的分子(Morrison等，1984，PNAS USA，81：6851-6855；Neuberger等，1984，Nature，312：604-608；Takeda等，1985，Nature，314：452-454)。或者，利用本领域公知方法，可以采用制备单链抗体的技术制备真菌应激蛋白-特异性单链抗体。通过从随机组合免疫球蛋白文库中进行链改组，可以制备具有相关特异性但是有不同独特型成分的抗体(Burton，D.R.，1991，PNAS USA，88：11120-11123)。
还可以通过在淋巴细胞群中诱导体内生产或者通过筛选重组免疫球蛋白文库或高特异性结合剂组来制备抗体(Orlandi等，1989，PNAS USA，86：3833-3837；Winter，G.等，1991，Nature，349：293-299)。
还可以制备抗原结合片段，例如通过抗体分子的胃蛋白酶消化能产生F(ab′)2片段，通过还原F(ab′)2片段的二硫键能产生Fab片段。或者，可以构建Fab表达文库来快速便捷地鉴定具有期望的特异性的单克隆Fab片段(Huse等，1989，Science，256：1275-1281)。
可以利用用于筛选的多种免疫测定来鉴定具有期望的特异性的抗体。利用已确定特异性的多克隆抗体或单克隆抗体进行竞争结合或免疫放射分析的多种方法是本领域公知的。这样的免疫测定典型地包括真菌应激蛋白或者其片段或寡肽和其特异性抗体之间形成的复合体的测定。可以使用应用特异于两个互不干扰的真菌应激蛋白表位的单克隆抗体的两位点、以单克隆为基础的免疫测定，也可以使用竞争性结合测定(Maddox等，1983，J.Exp.Med.，158：1211-1216)。
例如，组合物或联合制剂中使用的抗体可以包含SEQ ID NO：2的序列。
本发明人发现可以有效治疗的癌症包括纤维肉瘤和选自下面的癌症：乳腺癌、前列腺癌、黑素瘤、白血病、淋巴瘤、结肠癌、睾丸生殖细胞癌、胰腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、甲状腺癌和肺癌。
根据本发明的第二个方面，提供(i)特异于Hsp90的至少一个表位的抗体或者其抗原结合片段在用于治疗白血病的药物的制备方法中的用途。
还提供了：(i)特异于Hsp90的至少一个表位的抗体或者其抗原结合片段；和(ii)至少一种选自下面一组中的抗癌药：Imatinib、紫杉醇、多西他赛、阿霉素、柔红霉素、和羟基脲在用于治疗白血病的药物的制备方法中的用途。
Imatinib，2-苯基氨基嘧啶衍生物，是一种具有抗蛋白质酪氨酸激酶活性的小分子拮抗剂，并且对Bcr-Abl表现出有效的特异性抑制作用。Imatinib指示用于对原始细胞危象、加速期或IFN-治疗失败后的慢性期的CML患者的治疗。
紫杉醇是治疗某些类型癌症的化疗药物。其最常见用于治疗卵巢癌、乳腺癌和非小细胞肺癌。
多西他赛是一种公认的抗癌药物，并且是有丝分裂抑制剂。
柔红霉素是多种治疗场合中使用的抗肿瘤药物，包括作为抗癌药物。
阿霉素是一种蒽环类抗生素药物，以前公认为是抗肿瘤药物。
羟基脲是抗肿瘤药物，是核糖核苷酸还原酶抑制剂。
根据下文实验结果中的详细描述(″实验B″)，多西他赛和紫杉醇是特别优选的，并且表现出与抗-Hsp90抗体特别好的协同作用。当与抗-Hsp90抗体联合时，Imatinib、阿霉素、柔红霉素和羟基脲也发现了协同作用。抗癌药物顺铂当与抗-Hsp90抗体一起使用时表现出中性结果。这证实当与抗-Hsp90抗体联合时上述抗癌药物实现的惊奇的/出人意料的协同作用性质。
还提供了在治疗白血病中同时、分开或依次使用的联合制剂，其包含：
(i)特异于Hsp90的至少一个表位的抗体或者其抗原结合片段；和
(ii)至少一种选自下面一组中的抗癌药：Imatinib、紫杉醇、多西他赛、柔红霉素阿霉素和羟基脲。
联合制剂的例子包括在独立的容器中(即不是在单一制剂中混合在一起)含有(i)的抗体和至少一种(ii)的抗癌药物的药物包装。
还提供了治疗白血病的方法，包括对有需要的患者施用治疗有效量的：
(i)特异于Hsp90的至少一个表位的抗体或者其抗原结合片段；和
(ii)至少一种选自下面一组中的抗癌药：Imatinib、紫杉醇、多西他赛、柔红霉素、阿霉素和羟基脲。
白血病可以是慢性髓细胞性白血病或急性类淋巴白血病，并且至少一种抗癌药物可以是Imatinib。
抗体或者其抗原结合片段可以对包含SEQ ID NO：1的序列的肽所呈现的表位是特异性的。
例如，组合物或联合制剂中使用的抗体可以包含SEQ ID NO：2的序列。
抗癌药物可以是Imatinib。
本发明人发现可以有效治疗的白血病包括选自下面一组中的白血病：急性粒细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病和慢性淋巴细胞性白血病。
白血病可以是慢性髓细胞性白血病或急性类淋巴白血病。
慢性髓细胞性白血病可以是Ph1-阳性或Ph1-阴性，即特征在于含有费城染色体(Ph1-阳性)或者没有费城染色体(Ph1-阴性)的白血病细胞。
本发明人发现可以用Imatinib有效治疗的慢性髓细胞性白血病可以是Ph1-阳性或Ph1-阴性。
白血病可以是Ph1-阳性的慢性髓细胞性白血病，抗癌药物可以是Imatinib。特别地，本发明人发现通过Imatinib和包含SEQ ID NO：2的序列的抗体的联合能有效实施Ph1-阳性CML的治疗。不期望受到任何理论上的制约，Hsp90可能被包含SEQ ID NO：2的序列的抗体隔离，接着意味着异常Bcr-Abl酪氨酸激酶(其引起CML中发现的失调的髓细胞生成)被例如不正确地折叠、靶向蛋白质降解和/或防止其对髓细胞生成途径产生影响。
这种治疗对于Imatinib抗性CML Ph1-阳性细胞也是有效的。不期望受到任何理论上的制约，对Imatinib的抗性可能是由于异常Bcr-Abl酪氨酸激酶中集中的诱变，它能例如阻止药物结合蛋白质和/或干扰药物的作用方式。在Imatinib抗性细胞中，包含SEQ ID NO：2的序列的抗体对Hsp90的隔离有可能引起突变的异常酪氨酸激酶例如不正确折叠、靶向蛋白质降解和/或阻止其对髓细胞生成途径施加作用。正常情况下Hsp90通过与异常蛋白质结合或者阻断其表达来″缓冲″与癌细胞相关的遗传突变，Hsp90的隔离也可以引起释放多种突变，其一起证明对于肿瘤细胞是合成致死的。没有肿瘤细胞遗传不稳定性的正常细胞相对来说不受影响。
另外，特别令人惊奇地，本发明人发现Imatinib和包含SEQ ID NO：2的序列的抗体的联合能有效进行Ph1-阴性CML的治疗。
白血病可以是Ph1-阴性慢性髓细胞性白血病，抗癌药物可以是Imatinib。
这一发现是出人意料的，因为Ph1-阴性CML细胞没有与Ph1-阳性细胞相关的异常酪氨酸激酶蛋白质。然而，不希望受到任何理论上的制约，有可能在Ph1-阴性细胞中有低水平或基础水平的这种激酶(异常的或者其他的)，并且如上所述，Hsp90被包含SEQ ID NO：2的序列的抗体的隔离意味着酪氨酸激酶蛋白被例如不正确折叠或靶向蛋白质降解或以某种方式阻止其对髓细胞生成途径施加作用。也可能是这种情况，即通过隔离Hsp90，一起证明是合成致死的多种突变被肿瘤细胞释放。
Ph1-阴性细胞中这种Imatinib和抗-Hsp90抗体的令人惊奇的作用可能是由于TEL(ETV6)-ABL融合蛋白的存在，这已经在Ph1-阴性CML(Krystal，GW，2004，Leukemia Research 28S1：pS53-S59)和对Imatinib敏感这两种情况下证实。
白血病可以是特征在于细胞是Imatinib抗性的。
本发明的组合物或制剂可以另外包含已知的Hsp90抑制剂，例如GA或17-AAG。
本发明的第三个方面(实验C)涉及在结肠直肠癌或腺癌治疗中一起提供增强药效的、包含有效抗癌药物和抗-Hsp90抗体的新的药物和制剂。
结肠直肠癌是结肠或直肠恶性肿瘤。结肠直肠癌是癌症发病和死亡的主要原因。在英国，对于男性来说这是第三位最常见的癌，对于妇女，这是第二位最常见的癌。95％的结肠直肠癌是腺癌，是位于结肠和直肠内部的腺细胞癌症。
结肠直肠癌的标准治疗通常是5-氟尿嘧啶和甲酰四氢叶酸(亚叶酸)的联合疗法。
5-氟尿嘧啶(5-FU)用来治疗多种实体瘤，包括胃肠癌和乳腺癌。在晚期结肠直肠癌中其通常与亚叶酸使用。5-FU在细胞中转化为FdUMP，其与抑制DNA、蛋白质和RNA合成的胸苷酸合成酶(TS)形成复合体。
亚叶酸(甲酰四氢叶酸)是一种与5-FU联合给予的维生素。亚叶酸提高对5-氟尿嘧啶的响应速度，对消除疾病和总的存活率有显著提高。亚叶酸增加细胞内叶酸并稳定FdUMP/TS复合体。
发现有作用的其他药物包括伊立替康(irinotecan)和草酸铂(oxalipatin)，其得到许可可以对晚期结肠直肠癌患者一线使用，与5-氟尿嘧啶和亚叶酸联合治疗。伊立替康或雷替曲塞(raltitrexed)得到许可，当以氟尿嘧啶为基础的治疗无效或者不合适时，可以用作第二线单一治疗。
草酸铂公认是抗癌药物并且含有新的二氨基环己烷铂化合物，其在DNA中形成交联并且因此抑制DNA复制。
′FOLFOX′是常用的5-氟尿嘧啶、亚叶酸和草酸铂的联合疗法。
伊立替康(CPT-11，Campto)抑制拓扑异构酶I，一种细胞分裂所必需的DNA-解链酶，伊立替康导致复制抑制，单链DNA中有断裂。在UK，伊立替康获得许可可与5FU/FA联合用于晚期结肠直肠癌首次化疗患者，并且作为对用已经确立的以5FU-为基础的治疗方案无效的患者的第二线化疗的单一药物。
雷替曲塞(ZD 1694，Tomudex)抑制在DNA合成中涉及的胸苷酸合成酶。这是被5FU靶向的相同的酶。雷替曲塞在UK获得许可可在以5FU/FA-为基础的治疗方案不能忍受或不适当情况下用于晚期结肠直肠癌的治标疗法。
Tebbutt等，2002，European Journal of Cancer，38：1000-1015；Cutsem等，2002，Best Practice and Research Clinical Gastroenterology，16：319-330；Beretta等，2004，Surgical Oncology，13：63-73；NICEguidelines for Irinotecan，Oxaliplatin and raltitrexed for advancedcolorectal cancer，2002.
根据本发明的第三个方面，提供了下面物质在用于治疗癌症的药物的制备方法中的用途：
(i)特异于Hsp90的至少一个表位的抗体或者其抗原结合片段；和
(ii)至少一种选自下面一组中的抗癌药：5-氟尿嘧啶、草酸铂、伊立替康和雷替曲塞。
或者，提供了在治疗癌症中同时、分开或依次使用的联合制剂，含有：
(i)特异于Hsp90的至少一个表位的抗体或者其抗原结合片段；和
(ii)至少一种选自下面一组中的抗癌药：5-氟尿嘧啶、草酸铂、伊立替康和雷替曲塞。
根据本发明的另一方面，提供了治疗癌症的方法，包括对有需要的患者施用治疗有效量的：
(i)特异于Hsp90的至少一个表位的抗体或者其抗原结合片段；和
(ii)至少一种选自下面一组中的抗癌药：5-氟尿嘧啶、草酸铂、伊立替康和雷替曲塞。
优选地，癌症是结肠直肠癌或腺癌。
最优选地，抗癌药物5-氟尿嘧啶进一步包含亚叶酸(甲酰四氢叶酸)或者与其一起施用。
另外或者可选择地，5-氟尿嘧啶、亚叶酸和草酸铂同时给药。
根据本发明任何方面的组合物或制剂可以另外包含药学可接受载体、稀释剂或赋形剂。类似地，本发明的任何制备方法或用途同样还可以包括使用药学可接受载体、稀释剂或赋形剂。药学可接受载体、稀释剂或赋形剂的例子是本领域公知的，例如参见：Remington′sPharmaceutical  Sciences and US Pharmacopoeia，(1984，MackPublishing Company，Easton，PA，USA)。
所述药物或联合制剂可以例如口服给药，但是这并不意味着排除其他给药途径。
本发明的抗体或者其抗原结合片段可以应用常规程序用可检测标记物加以标记或者缀合效应分子，例如一种药物，例如抗癌药物如阿霉素、柔红霉素、多西他赛或顺铂，或5-氟尿嘧啶、草酸铂、伊立替康和雷替曲塞或者用于治疗白血病的药物，例如Imatinib、紫杉醇、多西他赛、柔红霉素、阿霉素和羟基脲或者毒素如蓖麻蛋白或者酶，本发明延伸至如此标记的抗体或抗体缀合物。
如果期望，可以使用抗体混合物用于诊断或治疗，例如识别本发明的应激蛋白的不同表位的两种或多种抗体的混合物，和/或不同类抗体的混合物，例如，识别本发明相同或不同表位的IgG和IgM抗体的混合物。
如上所讨论的，虽然有人提出多分子伴侣复合体中Hsp90呈现的四级表位是治疗的合适靶物，但是实验(下文)表明事实上线性表位是用于治疗的有用而有效的靶物。
这里讨论的各参考资料的内容，包括本文所引用的参考文献，在此全文引作参考。
给出出版物″PMID：″参考号情况下，US National Library ofMedicine分配给它们的PubMed鉴定号，在 www.ncbi.nlm.nih.gov可获得出版物的全文目录信息和摘要。还提供了全文电子版本的直接入口，特别是在例如PNAS、JBC和MBC公开物的情况下。
下面的描述使得本发明更清楚，下面的描述只是说明性的，只是例举组合物和实验的具体实施方案。
实验
下面描述的第一组实验(″实验A″)详细研究了具有SEQ ID NO：2的序列并且特异于具有SEQ ID NO：1的序列的肽所呈现的表位的抗-Hsp90抗体的抗癌作用，包括使用其本身或者与抗癌药物阿霉素、柔红霉素、多西他赛、Herceptin、Imatinib、顺铂和紫杉醇联合。
下面描述的第二组实验(″实验B″)详细研究了具有SEQ ID NO：2的序列并且特异于具有SEQ ID NO：1的序列的肽所呈现的表位的抗-Hsp90抗体对白种人慢性骨髓性白血病细胞系K562和人骨髓性白血病细胞系KU-812的作用，包括使用其本身或者与抗癌药物Imatinib、紫杉醇、多西他赛、柔红霉素、阿霉素、紫杉醇、顺铂和羟基脲联合。
下面描述的第三组实验(″实验C″)详细研究了具有SEQ ID NO：2的序列并且特异于具有SEQ ID NO：1的序列的肽所呈现的表位的抗-Hsp90抗体对人结肠腺癌细胞系HT29的作用，包括使用其本身或者与抗癌药物5-氟尿嘧啶(5-FU)和亚叶酸(甲酰四氢叶酸，LV)和/或草酸铂联合。
一般材料和方法
除非另有说明，所有程序都应用标准方法并且适当时根据生产商说明进行。多种技术的标准方法包括PCR、分子克隆、操作和测序、制备抗体、表位图谱和模拟表位(mimotope)设计、细胞培养和噬菌体展示，这些方法描述于教科书中，例如McPherson，MJ等(1991，PCR：A practical approach，Oxford University Press，Oxford)，Sambrook，J.和Russell，D.，″Molecular Cloning：A Laboratory Manual″，第三版，Cold Spring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor Press，New York，2001，Huynh和Davies(1985，″DNA Cloning VoI I-A PracticalApproach″，IRL Press，Oxford，Ed.DM Glover)，Sanger，F.等(1977，PNAS USA 74(12)：5463-5467)，Harlow，E.和Lane，D.(″UsingAntibodies：A Laboratory Manual″，Cold Spring Harbor Laboratory Press，New York，1998)，Jung，G.和Beck-Sickinger，AG(1992，Angew.Chem.Int.Ed.Eng.，31：367-486)，Harris，M.A.和Rae，I.F.(″General Techniquesof Cell Culture″，1997，Cambridge University Press，ISBN 0521 573645)，″Phage Display of Peptides and Proteins：A Laboratory Manual″(编者Kay，BK，Winter，J.，和McCafferty，J.，Academic Press Inc.，1996，ISBN0-12-402380-0)。
从Amersham( www.amersham.co.uk)、BoehringerMannheim( www.boehringer-ingeltheim.com)、Clontech( www.clontech.com)、Genosys( www.genosys.com)、Millipore( www.millipore.com)、Novagen( www.novagen.com)、PerkinElmer(www.perkinelmer.com)、Pharmacia( www.pharmacia.com)、Promega( www.promega.com)、Qiagen( www.qiagen.com)、Sigma(www.sigma-aldrich.com)和Stratagene(www.stratagene.com)等可获得本文详细描述的方法以及其他中使用的试剂和设备。
抗体
下面实验A和B中使用的抗体是WO 01/76627中公开的，这里称作Mycograb(RTM)，具有SEQ ID NO：2的序列并且特异于具有SEQ ID NO：1的序列的肽所呈现的表位。基础抗体溶液是4毫克/毫升原种水溶液。在RPMI完全培养基中进行进一步稀释。
简要地说，通过在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达的密码子优化来对GB 2240979和EP 0406029中公开的对白色假丝酵母(Candidaalbicans)Hsp90表位特异性的前者抗体的DNA序列进行遗传修饰(Operon Technologies Inc.，Alameda，CA，USA)并且插入到大肠杆菌表达载体中。抗-Hsp90抗体的氨基酸序列包含SEQ ID NO：2的序列(包括重链、轻链和间隔结构域)。该抗体识别包含SEQ ID NO：1的序列的表位。
在大肠杆菌宿主中表达抗-Hsp90抗体，然后通过亲和层析和咪唑交换柱纯化至95％纯度。应用标准分子生物学方法(见例如Harlow&Lane，上文；Sambrook，J.等1989，Molecular Cloning：A LaboratoryManual，第二版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold SpringHarbor，New York；Sambrook，J.&Russell，D.，2001，MolecularCloning：A Laboratory Manual，第三版，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，Cold Spring Harbor)。
药物
从Bristol-Myers Squibb，Mayne获得顺铂，以1毫克/毫升供应。
从Sigma获得多西他赛。用二甲亚砜(DMSO)最初将5毫克稀释至16毫克/毫升。
从Pharmacia获得阿霉素；以2毫克/毫升盐酸阿霉素供给5毫升。
从Novartis获得Imatinib(Glivec(RTM))，以100毫克胶囊供给。Imatinib最初用水稀释得到10毫克/毫升原液。
从Sigma获得紫杉醇，在250微升甲醇中重新兑制，用水补充至2.5毫升，得到2毫克/毫升。
从Sigma获得柔红霉素，在2.5毫升水中将5毫克稀释得到2毫克/毫升。
从Roche获得Herceptin(RTM)(Trastuzumab)，并在7.2毫升水中重新构兑得到21毫克/毫升。
从Sigma获得羟基脲，在4毫升水中稀释1克，得到25毫克/毫升。
从Sigma获得5-氟尿嘧啶(5-FU)，在1毫升DMSO中重新配制96毫克，以1/10在RPMI完全培养基中稀释得到9.6毫克/毫升。
从Sigma获得亚叶酸(LV)；在25毫升水中将100毫克重新配制，得到4毫克/毫升原液。
从Sigma获得草酸铂；在2.5毫升水中将12.5毫克重新配制，得到5毫克/毫升。
上述各种药物进一步在RPMI完全培养基中稀释。
细胞浓度和生存力测定
用等体积0.4％台盼蓝溶液(Sigma)染色之后利用标准血细胞计数器计数细胞并测定存活百分率。
细胞存活率测定
在各项实验之后用细胞滴定蓝分析(Cell Titer Blue Assay，Promega)测定细胞存活率。从细胞去除培养基并加入100微升新鲜完全培养基，然后加入20微升细胞滴定蓝分析试剂。在37℃，5％CO2下温育4小时，并且使用600nm为参考读取570nm吸光度。该项测定使用指示剂染料刃天青(蓝)测定细胞的代谢能力。存活细胞将刃天青还原为试卤灵(粉色)。
数据解释
如上所述评价细胞生长。对于每种药物的48小时温育期单独测定IC50(对50％的细胞引起细胞毒性所需要的药物剂量)浓度。
通过Chou和Talalay的方法，使用Calcusyn产物(BioSoft，Cambridge，UK- www.biosoft.com)测定中位数有效分析(Medianeffect analysis)、协同作用测定、加合作用或者以Hill等式为基础的拮抗作用。对于不同水平的药效计算反映小于1小时时的协同作用、等于1时时的加合作用和大于1时的拮抗作用的CI(联合指数(combination index))。当N是接近各个药物的IC50的值时，通过将药物组合与细胞温育48小时然后测定细胞毒性程度来研究0.0156N-8N范围的高于和低于IC50(产生50％细胞毒性作用所需要的药物浓度)的10个固定药物比例。在其中50％的细胞受到影响的点限定Fa50。对于Fa50给出CI值。
实验A
结果示出所述抗体给出与Imatinib有拮抗作用而与紫杉醇中立的证明。与顺铂和与多西他赛有某种协同作用，但是后者可能是在临床上不能实现的浓度。使用两个细胞系证明阿霉素在临床上可实现的药物水平下有协同作用而不管是否有雌激素受体。用阿霉素实现的结果达到高度明显的协同作用。柔红霉素的结果用有雌激素受体的细胞系是同样高的，但是对于雌激素受体阴性细胞系则较低，协同作用限制在6和12.5毫克/升。对Herceptin的结果表明没有抗雌激素受体阳性细胞系的协同作用，但是用雌激素受体阴性细胞系则观察到协同作用。
材料和方法
细胞系和培养信息
从ECACC获得白种人乳腺癌细胞系MCF7，其表达野生型和变体雌激素受体以及孕酮受体(ECACC号-86012803)。
使用的其他细胞系如下：
HS578T-ECACC号86082104，人乳腺癌，上皮。免疫抑制小鼠中致肿瘤并且在半固体培养基中形成集落。雌激素受体阴性。
SK-BR-3-(ATCC)人乳腺癌。雌激素受体阳性。过表达HER2/C-erb-2基因。
UACC-812-(ATCC)导管癌，手术之前，患者接受广泛化疗。雌激素受体阴性、孕酮受体阴性、P-糖蛋白阴性。HER-2/neu致癌基因序列扩增。
HCT116-ATCC结肠直肠癌。对于TGFβ1和β2表达呈阳性。
使用0.25％胰蛋白酶/EDTA(Sigma)将细胞分离，并且在没有酚红的含有10％胎牛血清、1％非必需氨基酸、2mM谷氨酰胺、100U/毫升青霉素、0.1毫克/毫升链霉素(Sigma)的RPMI培养基中在37℃，5％CO2下保持。
实验A
Mycograb对MCF7细胞的作用
将细胞系分离并计数细胞。将细胞加到12-或96-孔平底组织培养板中。在12-孔板情况下，加入1毫升的4×104细胞/毫升加1毫升培养基。在96-孔板情况下，加入100微升的4×104细胞/毫升，然后再向板中加入100微升完全培养基。培养板在37℃，5％CO2下温育过夜。第二天，在相差显微镜下观察细胞，确保它们与培养板附着并且通过吸移去除上清液培养基。然后向孔中加入含有两倍渐增浓度的Mycograb(1.5-200微克/毫升)的新鲜培养基或者制剂缓冲液或者单独的培养基。将培养板再放回培养箱培养48小时，接着进行细胞滴定蓝分析或者使用血细胞计数器进行存活计数。
抗癌药物阿毒素、柔红霉素、Herceptin、多西他赛、Imatinib、紫杉醇和顺铂对MCF7细胞的作用
将细胞系分离并计数细胞。将100微升4×104细胞/毫升加到96-孔平底组织培养板中，再向板中加入100微升完全培养基。然后培养板在37℃，5％CO2下培养过夜。第二天，在相差显微镜下观察细胞，确保它们与培养板附着并且通过吸移去除上清液培养基。向孔中加入含有递增浓度的研究药物(阿霉素0.55-600微克/毫升、柔红霉素0.45-1000微克/毫升、Herceptin 0.2-200微克/毫升、多西他赛0.75-800微克/毫升、Imatinib 4.5-5000微克/毫升、顺铂0.04-50微克/毫升、紫杉醇1.8-1000微克/毫升)的新鲜培养基或者单独加入培养基。将培养板再放回培养箱培养48小时，接着进行细胞滴定蓝分析。
Mycograb与抗癌药物阿霉素、柔红霉素、Herceptin、多西他赛、Imatinib、紫杉醇和顺铂联合对MCF7细胞的作用
将细胞系分离并计数细胞。将100微升4×104细胞/毫升加到96-孔平底组织培养板中，再向板中加入100微升完全培养基。然后培养板在37℃，5％CO2下培养过夜。第二天，在相差显微镜下观察细胞，确保它们与培养板附着并且通过吸移去除上清液培养基。向培养板中加入100微升新鲜培养基。如下文表1所示给出Mycograb对其他药物的分布(使用阿霉素作为例子)得到每孔200微升的总体积。
将培养板再放回培养箱培养48小时，接着进行细胞滴定蓝分析。
利用上述方法使用HS578T细胞也进行了实验，下面给出结果。
实验A的结果
MCF7细胞系
顺铂
IC50是6毫克/升，并且对加入Mycograb没有作用，在较高浓度下的协同作用除外-见表2。
Imatinib
IC50是37.5毫克/升，并且有剂量低于37.5毫克/升的Imatinib时Mycograb的拮抗作用的证据，CI在3.3-10范围内。高于这个剂量，Imatinib杀死细胞系。
多西他赛
IC50是225毫克/升并且有高剂量多西他赛与Mycograb的某些协同作用的证据-参见表3。
紫杉醇
IC50是225毫克/升并且与低浓度药物是中立的，在高水平例如500毫克/升的紫杉醇下有低协同作用。这些水平在临床适当水平之外。
阿霉素
IC50是1.75毫克/升。在药物浓度范围内与Mycograb有明确的协同作用-参见表4。
柔红霉素
IC50是1毫克/升。在药物浓度范围内，与Mycograb有协同作用的证据-参见表5。
Herceptin
由于Herceptin，没有可检测的活性并且没有协同作用的证据。
HS578T细胞系
这个细胞系对递增浓度至400毫克/升的Mycograb不敏感。这不令人感到惊奇，因为这些肿瘤不是类固醇敏感的，因此本质上不可能响应Hsp90抑制剂如Mycograb。然而与蒽环类阿霉素以及柔红霉素和Herceptin联合，有意外的协同作用。
阿霉素
IC50是1毫克/升。在药物浓度范围内与Mycograb有协同作用的证据-参见表6。
柔红霉素
IC50是1毫克/升。与Mycograb有一些协同作用的证据，但是大多数是中立的-参见表7。
Hercerptin
与HS578T，mono-herceptin在高达200毫克/升的浓度下不能杀死50％的细胞，但是在存在Mycograb时没有发现协同作用-参见表8。
多西他赛
对于细胞系HS578T，IC50是50毫克/升，并且没有与Mycograb的协同作用的证据。
顺铂
对于细胞系HS578T，顺铂的IC50是12.5毫克/升，并且没有与Mycograb的协同作用的证据。
结论
有与Imatinib有拮抗作用和与紫杉醇中立的证据。与顺铂和与多西他赛有一些协同作用，但是后者是在临床上不能实施的浓度下。使用两种细胞证明了阿霉素在临床上可实施的药物水平下的协同作用，而不管是否有雌激素受体。使用阿霉素得到的结果达到高度显著的协同作用。使用有雌激素受体的细胞系得到的柔红霉素的结果同样高，但是对于雌激素受体阴性细胞系则较低，协同作用局限在6和12.5毫克/升。
在所述抗体和一些抗癌药物之间发现这种出人意料的协同作用，但是与其他抗癌药物如Imatinib则没有。
实验B
第二组实验(下述)详细研究了具有SEQ ID NO：2的序列并且特异于具有SEQ ID NO：1的序列的肽所呈现的表位的抗-Hsp90抗体对白种人慢性骨髓性白血病细胞系K562和人骨髓性白血病细胞系KU-812的作用，包括使用其本身或者与抗癌药物Imatinib、紫杉醇、多西他赛、柔红霉素、阿霉素、紫杉醇、顺铂和羟基脲联合给药。
结果表明所述抗体给出与Imatinib、紫杉醇、多西他赛、柔红霉素有协同作用的证据。所述抗体给出与阿霉素和羟基脲的某些协同作用的证据。结果表明所述抗体给出与顺铂中立的证据。
用多西他赛和紫杉醇实现的结果达到高度显著的协同作用。
材料和方法
细胞系和培养信息
从ECACC获得人骨髓性白血病细胞系KU-812(ECAAC号90071807)。在这种细胞系中已经检测到费城染色体(Ph1)。所述细胞形态学特征是嗜碱性粒细胞。
从ECACC获得白种人慢性骨髓性白血病细胞系K562(ECACC号89121407)。K562是从患有晚期原始细胞危象的慢性骨髓性白血病的53岁女性的胸腔积液中获得的。有人将对多种K-562亚系的细胞核学研究分为三组(A，B，C)(Dimery，I.W.等，1983，Exp.Hematol.；11(7)：p601-10)。在这些实验中使用的细胞系是K562B。实验证明这些细胞系就下面的来说一般是类似的：形态学、在液体悬浮培养中的生长动力学、软琼脂培养中的克隆效率、抗-K562单克隆抗体的结合和细胞表面蛋白。就生长动力学、细胞表明蛋白标记物、表面抗原、细胞遗传学和血红蛋白产生方面，将K562B与K562A和K562C相比较。在细胞系之间发现差异，最重要的差异是90％以上的K562A或C细胞显示Ph1-阳性，少于15％的K562B细胞含有Ph1(Dimery，IW，等，1983，Exp.Hematol.；11(7)：p601-10)。虽然细胞遗传学试验没有揭示真实Ph1染色体的存在，K562显示含有部分Ph1染色体，其至少是四倍扩增的。这部分Ph1染色体编码嵌合bcr/c-abl转录体，翻译时其产生bcr/c-abl融和蛋白(Grosveld，G.，等，1986，Mol.Cell.Biol.6，No.2：p607-616)。bcr/c-abl融和蛋白具有激活的酪氨酸激酶活性，其对CML发病起作用。
在没有酚红的、含有10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、100U/毫升青霉素、0.1毫克/毫升链霉素(Sigma)的RPMI培养基1640中，37℃、5％CO2下以2×106和9×106细胞/毫升之间保持细胞。
实验
Mycograb对K562细胞的作用
计数细胞系。使用含有4×105细胞/毫升的100微升等份将细胞加入96孔平底组织培养板中。然后向孔中加入含有两倍递增浓度Mycograb(RTM)(1.5-200微克/毫升)的新鲜培养基或者单独的培养基。将培养板再放回培养箱培养48小时，接着进行细胞滴定蓝分析或者使用血细胞计数器测定存活数。
抗癌药物阿霉素、柔红霉素、多西他赛、紫杉醇、Imatinib、顺铂和羟基脲对K562细胞的作用
计数细胞系。将100微升2×105细胞/毫升或4×105细胞/毫升加入96孔平底组织培养板中。培养板在37℃、5％CO2下培养过夜。然后向孔中加入含有递增浓度的研究药物(阿霉素0.55-600微克/毫升、柔红霉素0.07-100微克/毫升、多西他赛0.75-800微克/毫升、紫杉醇0.5-500微克/毫升、Imatinib 4.5-5000微克/毫升、顺铂0.04-50微克/毫升)的新鲜培养基或者单独的培养基。将培养板再放回培养箱培养48小时，接着进行细胞滴定蓝分析。
Mycograb与抗癌药物阿霉素、柔红霉素、多西他赛、紫杉醇、Imatinib、顺铂和羟基脲联合对K562细胞的作用
计数细胞系。将100微升2×105细胞/毫升或4×105细胞/毫升加入96孔平底组织培养板中。然后培养板在37℃，5％CO2下培养过夜。向培养板加入100微升新鲜培养基，并且根据下面表9列出的设置Mycograb对其他药物的分布(使用阿霉素作为例子)，得到每孔200微升的总体积。
利用上述方法使用KU-812细胞也进行了实验，下面给出结果。
结果
Mycograb(RTM)对K562细胞的作用
使用细胞系K562，12.5微克/毫升Mycograb本身证明细胞存活率减少40％。
Mycograb(RTM)和抗癌药物对K562细胞的作用
Imatinib
IC50是16微克/毫升。在药物浓度范围内Imatinib和Mycograb(RTM)之间有一定协同作用的证据(参见表10)。
阿霉素
IC50是1微克/毫升。在一定药物浓度下阿霉素和Mycograb(RTM)之间有一定协同作用的证据，但是大多与Mycograb(RTM)是中立的。
柔红霉素
IC50是0.75微克/毫升。在低药物浓度下，柔红霉素和Mycograb(RTM)之间有一些协同作用的证据(参见表11)。
多西他赛
IC50是70微克/毫升。在药物浓度范围内多西他赛和Mycograb(RTM)之间有明确协同作用的证据(参见表12)。
紫杉醇
IC50是32微克/毫升。在药物浓度范围内紫杉醇和Mycograb(RTM)之间有协同作用的清楚证据(参见表13)。
顺铂
IC50是12.5微克/毫升。顺铂和Mycograb(RTM)之间没有协同作用证据。
羟基脲
羟基脲单独用药从来没有达到IC50。但是，在低药物浓度下羟基脲和Mycograb(RTM)之间有一些协同作用的证据(参见表14)。
KU-812细胞系
Mycograb(RTM)对KU-812细胞的作用
使用细胞系KU-812，50微克/毫升Mycograb本身证明细胞存活率减少40％。
Mycograb(RTM)和抗癌药物对KU-812细胞的作用
Imatinib
IC50是0.12微克/毫升。在低药物浓度下Imatinib和Mycograb(RTM)之间有一些协同作用的证据(参见表15)。
总结
使用K562细胞系，有与Imatinib、紫杉醇和多西他赛协同作用的证据。与柔红霉素、阿霉素和羟基脲有一些协同作用的证据。与顺铂是中立的。
使用KU-812细胞系，有与Imatinib有一定协同作用的证据。
结论
这里给出的证据清楚地证明Mycograb(RTM)抗体本身能降低Ph1-阳性和Ph1-阴性CML细胞系的存活率。此外，对于Ph1-阳性CML细胞系，抗癌药物包括Imatinib和抗-Hsp90抗体之间有令人惊奇的协同作用。数据还证明对于Ph1-阳性白血病细胞系，紫杉醇、多西他赛、柔红霉素、阿霉素、羟基脲和抗-Hsp90抗体之间有协同作用。这些结果承认包含抗癌药物如Imatinib和抗-Hsp90抗体(Mycograb，RTM)的组合物用于治疗CML的用途。抗癌药物和Mycograb(RTM)抗体联合所显示的协同作用潜在地允许较低的治疗剂量，鉴于很多抗癌药物特别是Imatinib的有问题的毒性，这是非常显著的，或者在相同剂量下更有效或者治疗时间更长，从而减小不期望的副作用。
本发明的临床意义包括：(i)在CML的治疗中，抗癌药物例如Imatinib和抗-Hsp90抗体产生的协同联合应该成为治疗选择。这可能引起CML死亡率降低；(ii)Imatinib是毒性的，本发明提供的协同作用意味着可以使用较低剂量的Imatinib而保持效力以及伴随毒性降低；和(iii)抗-Hsp90抗体的毒性节制作用允许研究较高剂量Imatinib的临床药效并进一步开发改良的临床结果。
实验C
下面描述的第三组实验(下述)详细研究了具有SEQ ID NO：2的序列并且特异于具有SEQ ID NO：1的序列的肽所呈现的表位的抗-Hsp90抗体对人结肠腺癌细胞系HT29的作用，包括使用其本身或者与抗癌药物5-FU和亚叶酸和/或草酸铂联合给药。
结果表明所述抗体给出与5-FU和亚叶酸和草酸铂协同作用的证据。还有Mycograb/抗-Hsp90抗体与5-FU、亚叶酸和草酸铂四种药物组合协同作用的证据。发现高于75微克/毫升5-FU和10.5微克/毫升草酸铂的浓度是特别有用的。
材料和方法
细胞系和培养信息
从ECACC获得白种人结肠腺癌I1级细胞系HT29(ECACC号91072201)。
使用0.25％胰蛋白酶/EDTA(Sigma)将细胞分离，并且在含有10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、100U青霉素、0.1毫克链霉素(Sigma)的McCoy′s 5a培养基中在37℃，5％CO2下保持。
其他细胞系包括HCT116
实验
Mycograb(RTM)对HT29细胞的作用
分离细胞系并计数细胞。将细胞加至12或96孔平底组织培养板中。在12孔板情况下，向各孔加入1毫升的4×104细胞/毫升或者4×105细胞/毫升加1毫升完全McCoy′s 5a培养基。在96孔板情况下，向各孔加入100微升的4×104细胞/毫升或者4×105细胞/毫升，然后再加入100微升完全McCoy′s 5a培养基。培养板在37℃，5％CO2下培养过夜。第二天，在相差显微镜下观察细胞，确保它们与培养板附着并且通过吸移去除上清液培养基。然后向孔中加入含有两倍渐增浓度的Mycograb(RTM)(1.5-200微克/毫升)的新鲜完全RPMI培养基或者单独的培养基。将培养板再放回培养箱培养48小时，接着进行细胞滴定蓝分析或者完成活细胞计数。
抗癌药物5-FU和亚叶酸和草酸铂对HT29细胞的作用
分离细胞系并计数细胞。将100微升的4×104细胞/毫升或者4×105细胞/毫升加到96孔平底组织培养板中，再向板中加100微升完全McCoy′s 5a培养基。然后培养板在37℃，5％CO2下培养过夜。第二天，在相差显微镜下观察细胞，确保它们与培养板附着并且通过吸移去除上清液培养基。然后向孔中加入100微升含有两倍渐增浓度的研究药物(5-FU 4.5-2400微克/毫升加1毫克/毫升亚叶酸或草酸铂1-500微克/毫升)的新鲜完全RPMI培养基或者单独的培养基(培养基+2.5％DMSO用于5-FU对照物)。将培养板再放回培养箱培养48小时，接着进行细胞滴定蓝分析。
Mycograb(RTM)与抗癌药物5-FU和亚叶酸或草酸铂联合对HT29细胞的作用
分离细胞系并计数细胞。将100微升的4×104细胞/毫升或者4×105细胞/毫升加到96孔平底组织培养板中，再向板中加100微升完全McCoy′s 5a培养基。然后培养板在37℃，5％CO2下培养过夜。第二天，在相差显微镜下观察细胞，确保它们与培养板附着并且通过吸移去除上清液培养基。向孔中加入100微升新鲜完全RPMI培养基，并且根据表16确定Mycograb(RTM)对研究药物((5-FU 4.5-2400微克/毫升加1毫克/毫升亚叶酸或草酸铂1-500微克/毫升)或者单独的培养基(培养基+2.5％DMSO用于5-FU对照))的分布，达到每孔200微升的总体积。
Mycograb(RTM)与抗癌药物5-FU和亚叶酸和草酸铂的联合对HT29细胞的作用
分离细胞系并计数细胞。将100微升的4×104细胞/毫升或者4×105细胞/毫升加到96孔平底组织培养板中，再向板中加100微升完全McCoy′s 5a培养基。然后培养板在37℃，5％CO2下培养过夜。第二天，在相差显微镜下观察细胞，确保它们与培养板附着并且通过吸移去除上清液培养基。向板中加入100微升新鲜完全RPMI培养基，并且根据表16对于5-FU分布确定Mycograb(RTM)对研究药物((5-FU∶亚叶酸∶草酸铂，比例是3∶1∶0.42)或者单独的培养基(培养基+2.5％DMSO用于5-FU对照))的分布，达到每孔200微升的总体积。
结果
Mycograb(RTM)对HT29细胞的作用
使用细胞系HT29，125微克/毫升Mycograb(RTM)本身证明细胞存活率减少40％。
单独的抗癌药物5-FU或草酸铂和Mycograb(RTM)与抗癌药物5-FU或草酸铂联合对HT29细胞的作用
5-FU：
5-氟尿嘧啶的IC50是150微克/毫升。在药物浓度范围内5-FU和Mycograb(RTM)之间有明确的协同作用证据，参见表17-20。
草酸铂：
草酸铂的IC50是16微克/毫升。在药物浓度范围内草酸铂和Mycograb(RTM)之间有一些协同作用的证据，参见表18。
Mycograb(RTM)与抗癌药物5-FU和草酸铂的联合对HT29细胞的作用
LV/5FU/Ox的IC50是25/75/10.5微克/毫升。在药物浓度范围内5-FU和草酸铂和Mycograb(RTM)之间有一些协同作用的证据，参见表22-24。
总结
结果表明当5-FU浓度大于75微克/毫升和草酸铂浓度大于10.5微克/毫升时，所述抗体给出与5-FU和亚叶酸或草酸铂协同作用的证据和与5-FU和亚叶酸和草酸铂的四种药物联合的一些协同作用的证据。有与5-FU和草酸铂协同作用的证据，表25总结了ED50、ED75和ED90的CI值。
结论
这里给出的数据证明Mycograb(RTM)抗体本身能降低结肠腺癌细胞系的存活率。抗癌药物包括5-氟尿嘧啶和草酸铂和抗-HSP90抗体之间对结肠腺癌细胞系有协同作用。数据还证明5-氟尿嘧啶和草酸铂与抗-HSP90抗体之间对结肠腺癌细胞系有协同作用。
表1：Mycograb(MG)(μg/ml)对阿霉素(DR)(μg/ml)的分布
    1     2     3     4     5     6     7     8     9     10     11     12
    A   DR 150MG 50   DR 75MG 50   DR 37MG 50   DR 18.5MG 50     DR 9MG 50     DR 4.5MG 50     DR 2.3MG 50     DR 1.12MG 50     DR 0.55MG 50     DR 0.27MG 50     MG 50 培养基，没有细胞
    B   DR 150MG 25   DR 75MG 25   DR 37MG 25   DR 18.5MG 25     DR 9MG 25     DR 4.5MG 25     DR 2.3MG 25     DR 1.12MG 25     DR 0.55MG 25     DR 0.27MG 25     MG 25 培养基，没有细胞
    C   DR 150MG 12.5   DR 75MG 12.5   DR 37MG 12.5   DR 18.5MG 12.5     DR 9MG 12.5     DR 4.5MG 12.5     DR 2.3MG 12.5     DR 1.12MG 12.5     DR 0.55MG 12.5     DR 0.27MG 12.5     MG 12.5 培养基，没有细胞
    D   DR 150MG 6.25   DR 75MG 6.25   DR 37MG 6.25   DR 18.5MG 6.25     DR 9MG 6.25     DR 4.5MG 6.25     DR 2.3MG 6.25     DR 1.12MG 6.25     DR 0.55MG 6.25     DR 0.27MG 6.25     MG 6.25 培养基，没有细胞
    E   DR 150MG 3   DR 75MG 3   DR 37MG 3   DR 18.5MG 3     DR 9MG 3     DR 4.5MG 3     DR 2.3MG 3     DR 1.12MG 3     DR 0.55MG 3     DR 0.27MG 3     MG 3 培养基，没有细胞
    F   DR 150MG 1.5   DR 75MG 1.5   DR 37MG 1.5   DR 18.5MG 1.5     DR 9MG 1.5     DR 4.5MG 1.5     DR 2.3MG 1.5     DR 1.12MG 1.5     DR 0.55MG 1.5     DR 0.27MG 1.5     MG 1.5 培养基，没有细胞
    G   DR 150MG 0.75   DR 75MG 0.75   DR 37MG 0.75   DR 18.5MG 0.75     DR 9MG 0.75     DR 4.5MG 0.75     DR 2.3MG 0.75     DR 1.12MG 0.75     DR 0.55MG 0.75     DR 0.27MG 0.75     MG 0.75 培养基，没有细胞
    H   DR 150   DR 75   DR 37   DR 18.5     DR 9     DR 4.5     DR 2.3     DR 1.12     DR 0.55     DR 0.27     培养基+细胞 培养基，没有细胞
表2
    顺铂     Mycograb     CI
    12.5     25     0.012
    25     50     0.024
表3
    Mycograb     多西他赛     CI
    12.5     100     0.400
    25     200     0.098
    50     400     0.002
表4
    Mycograb     阿霉素     CI
    0.75     2.25     0.249
    1.5     4.5     0.261
    3     9     0.248
    6     18     0.476
    12.5     37.5     0.186
    25     75     0.155
    50     150     0.159
表5
    Mycograb     柔红霉素     CI
    0.75     0.75     0.189
    1.5     1.5     0.257
    3     3     0.512
    6     6     0.676
    12.5     12.5     0.469
    25     25     0.082
    50     50     0.176
表6
    阿霉素     Mycograb     CI
    0.55     0.75     0.573
    1.12     1.5     0.541
    2.25     3     0.824
    4.5     6     0.254
    9     12     0.507
    18.5     25     0.538
    37     50     1.033
表7
    Mycograb     柔红霉素     CI
    0.75     0.75     1.153
    1.5     1.5     1.300
    3     3     1.557
    6     6     0.763
    12.5     12.5     0.367
    25     25     1.014
表8
    Mycograb     Herceptin     CI
    0.75     0.75     0.007
    1.5     1.5     0.008
    3     3     0.005
    6     6     0.034
    12.5     12.5     0.025
    25     25     0.170
表9：Mycograb(MG)(μg/ml)对阿霉素(DR)(μg/ml)的分布
    1     2     3     4     5     6     7     8     9     10     11     12
    A   培养基，有细胞   DR 0.27   DR 0.55   DR 1.12   DR 2.3   DR 4.5   DR 9   DR 18.5   DR 37   DR 75   DR 150   培养基，没有细胞
    B   MG 0.75   DR 0.27MG 0.75   DR 0.55MG 0.75   DR 1.12MG 0.75   DR 2.3MG 0.75   DR 4.5MG 0.75   DR 9MG 0.75   DR 18.5MG 0.75   DR 37MG 0.75   DR 75MG 0.75   DR 150MG 0.75   培养基，没有细胞
    C   MG 1.5   DR 0.27MG 1.5   DR 0.55MG 1.5   DR 1.12MG 1.5   DR 2.3MG 1.5   DR 4.5MG 1.5   DR 9MG 1.5   DR 18.5MG 1.5   DR 37MG 1.5   DR 75MG 1.5   DR 150MG 1.5   培养基，没有细胞
    D   MG 3   DR 0.27MG 3   DR 0.55MG 3   DR 1.12MG 3   DR 2.3MG 3   DR4.5MG 3   DR 9MG 3   DR 18.5MG 3   DR 37MG 3   DR 75MG 3   DR 150MG 3   培养基，没有细胞
    E   MG 6.25  DR 0.27MG 6.25   DR 0.55MG 6.25   DR 1.12MG 6.25   DR 2.3MG 6.25   DR 4.5MG 6.25   DR 9MG 6.25   DR 18.5MG 6.25   DR 37MG 6.25   DR 75MG 6.25   DR 150MG 6.25   培养基，没有细胞
    F   MG 12.5  DR 0.27MG 12.5   DR 0.55MG 12.5   DR 1.12MG 12.5   DR 2.3MG 12.5   DR 4.5MG 12.5   DR 9MG 12.5   DR 18.5MG 12.5   DR 37MG 12.5   DR 75MG 12.5   DR 150MG 12.5   培养基，没有细胞
    G   MG 25   DR 0.27MG 25   DR 0.55MG 25   DR 1.12MG 25   DR 2.3MG 25   DR 4.5MG 25   DR 9MG 25   DR 18.5MG 25   DR 37MG 25   DR 75MG 25   DR 150MG 25   培养基，没有细胞
    H   MG 50   DR 0.27MG 50   DR 0.55MG 50   DR 1.12MG 50   DR 2.3MG 50   DR 4.5MG 50   DR 9MG 50   DR 18.5MG 50   DR 37MG 50   DR 75MG 50   DR 150MG 50   培养基，没有细胞
表10
 Imatinib(微克/毫升) Mycograb(微克/毫升)     CI
    1     0.75     0.033
    2     1.5     0.069
    4     3     0.114
    8     6     0.218
    16     12.5     0.366
    32     25     0.558
    64     50     0.799
表11
柔红霉素(微克/毫升) Mycograb(微克/毫升)     CI
    0.75     1.5     0.696
    1.5     3     0.872
表12
多西他赛(微克/毫升) Mycograb(微克/毫升)     CI
    1.5     1.5     0.001
    3     3     0.008
    6     6     0.707
    12.5     12.5     0.051
    25     25     0.013
    50     50     0.003
    100     100     0.004
表13
紫杉醇(微克/毫升) Mycograb(微克/毫升)     CI
    1     1.5     0.064
    2     3     0.145
    4     6     0.011
    8     12.5     0.05
    16     25     0.04
    32     50     0.06
    64     100     0.077
表14
羟基脲(微克/毫升) Mycograb(微克/毫升)     CI
    0.3     0.75     0.798
    0.6     0.75     0.694
表15
 Imatinib(微克/毫升) Mycograb(微克/毫升)     CI
    1     0.375     0.131
    2     1.5     0.093
    4     3     0.016
    8     6     0.001
    16     12.5     0.002
    32     25     0.327
表16：Mycograb(RTM)(MG，μg/ml)对5-氟尿嘧啶(5FU，μg/ml)的分布
  1     2     3     4     5     6     7     8     9     10    11     12
  A 培养基2.5％DMSO  5FU 4.5  5FU 9  5FU 18.5  5FU 37  5FU 75  5FU 150  5FU 300  5FU 600  5FU1200  5FU2400 只是培养基，没有细胞
  B 2.5％DMSOMG 3  5FU 4.5MG 3  5FU 9MG 3  5FU 18.5MG 3  5FU 37MG 3  5FU 75MG 3  5FU 150MG 3  5FU 300MG 3  5FU 600MG 3  5FU1200MG 3  5FU2400MG 3 只是培养基，没有细胞
  C 2.5％DMSOMG 6  5FU 4.5MG 6  5FU 9MG 6  5FU 18.5MG 6  5FU 37MG 6  5FU 75MG 6  5FU 150MG 6  5FU 300MG 6  5FU 600MG 6  5FU1200MG 6  5FU2400MG 6 只是培养基，没有细胞
  D 2.5％DMSOMG12.5  5FU 4.5MG 12.5  5FU 9MG 12.5  5FU 18.5MG 12.5  5FU 37MG 12.5  5FU 75MG 12.5  5FU 150MG 12.5  5FU 300MG 12.5  5FU 600MG 12.5  5FU1200MG 12.5  5FU2400MG 12.5 只是培养基，没有细胞
  E 2.5％DMSOMG 25  5FU 4.5MG 25  5FU 9MG 25  5FU 18.5MG 25  5FU 37MG 25  5FU 75MG 25  5FU 150MG 25  5FU 300MG 25  5FU 600MG 25  5FU1200MG 25  5FU2400MG 25 只是培养基，没有细胞
  F 2.5％DMSOMG 50  5FU 4.5MG 50  5FU 9MG 50  5FU 18.5MG 50  5FU 37MG 50  5FU 75MG 50  5FU 150MG 50  5FU 300MG 50  5FU 600MG 50  5FU1200MG 50  5FU2400MG 50 只是培养基，没有细胞
  G 2.5％DMSOMG100  5FU 4.5MG 100  5FU 9MG 100  5FU 18.5MG 100  5FU 37MG 100  5FU 75MG 100  5FU 150MG 100  5FU 300MG 100  5FU 600MG 100  5FU1200MG 100  5FU2400MG 100 只是培养基，没有细胞
  H 2.5％DMSOMG 200  5FU 4.5MG 200  5FU 9MG 200  5FU 18.5MG 200  5FU 37MG 200  5FU 75MG 200  5FU 150MG 200  5FU 300MG 200  5FU 600MG 200  5FU1200MG 200  5FU2400MG 200 只是培养基，没有细胞
表17
0.37∶1比例的5-氟尿嘧啶和Mycograb
    5-FU(微克/毫升) Mycograb(微克/毫升)     CI
    4.5     12.5     0.001
    9     25     0.004
    18.5     50     0.008
    37     100     0.049
表18
0.75∶1比例的5-氟尿嘧啶和Mycograb
    5-FU(微克/毫升) Mycograb(微克/毫升)     CI
    4.5     6     0.184
    9     12.5     0.295
表19
12∶1比例的5-氟尿嘧啶和Mycograb
5-FU(微克/毫升) Mycograb(微克/毫升) CI
    37     3     0.557
    75     6     0.228
    150     12.5     0.198
    300     25     0.540
    600     50     0.250
    1200     100     0.478
    2400     100     0.212
表20
50∶1比例的5-氟尿嘧啶和Mycograb
    5-FU(微克/毫升) Mycograb(微克/毫升)     CI
    75     1.5     0.004
    150     3     0.342
    300     6     0.482
表21
1.25∶1比例的草酸铂和Mycograb
    草酸铂(微克/毫升) Mycograb(微克/毫升)     CI
    7.5     6     0.378
    15.5     12.5     0.182
    31     25     0.153
    62.5     50     0.046
    125     100     0.616
    250     200     0.185
表22
3∶1∶0.42比例的5-氟尿嘧啶、草酸铂和Mycograb
    5-FU   Mycograb   草酸铂     CI
  (微克/毫升)   (微克/毫升)   (微克/毫升)
  9   3   1.3     0.053
  18.5   6   2.6     0.109
  37   12.5   5.25     0.239
  75   25   10.5     3.120
表23
3∶2∶0.42比例的5-氟尿嘧啶、草酸铂和Mycograb
  5-FU   Mycograb   草酸铂     CI
  (微克/毫升)   (微克/毫升)   (微克/毫升)
  9   6   1.3     0.074
  18.5   12.5   2.6     0.152
  37   25   5.25     0.405
  75   50   10.5     1.519
表24
3∶0.5∶0.42比例的5-氟尿嘧啶、草酸铂和Mycograb
  5-FU   Mycograb   草酸铂     CI
  (微克/毫升)   (微克/毫升)   (微克/毫升)
  9   1.5   1.3     0.043
  18.5   3   2.6     0.089
  37   6   5.25     0.184
  75   12.5   10.5     2.202
表25
药物(比例)  联合指数值
 ED50  ED75  ED90     Dm     r
5-FU  N/A  N/A  N/A  297.1493  0.95571
Mycograb  N/A  N/A  N/A  96.46543  0.87307
草酸铂  N/A  N/A  N/A  27.77133  0.94124
5-FU/Mycograb/草酸铂  0.77008  0.11419  0.02256  64.92005  0.87996
 (3∶1∶0.42)
5-FU/Mycograb/草酸铂  0.85085  0.16415  0.03924  55.54798  0.97163
(1.5∶1∶0.21)
5-FU/Mycograb/草酸铂  0.62267  0.09916  0.02224  61.08042  0.9142
(6∶1∶0.85)
序列表
<110>纽泰克医药有限公司
<120>癌症的治疗方法
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<151>2004-09-20
<160>2
<170>PatentIn version 3.2
<210>1
<211>9
<212>PRT
<213>Candida sp.
<400>1
Leu Lys Val Ile Arg Lys Asn Ile Val
1               5
<210> 2
<211>248
<212>PRT
<213>Artificial Sequence
<220>
<223>Synthetic
<400>2
His Met Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
1               5                   10                  15
Pro Gly Glu Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Cys Ile Ile
            20                  25                  30
Ser Ser Tyr Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu
        35                  40                  45
Glu Trp Met Gly Lys Ile Asp Pro Gly Asp Ser Tyr Ile Asn Tyr Ser
    50                  55                  60
Pro Ser Phe Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Asn
65                  70                  75                  80
Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Asn Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met
                85                  90                  95
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Arg Asp Phe Gly Asp Ser Phe Asp Tyr
            100                 105                 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser
        115                 120                 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln
    130                 135                 140
Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Phe Val Gly Asp Arg Ile Thr Ile Thr
145                 150                 155                 160
Cys Arg Ala Ser Ser Gly Ile Ser Arg Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln
                165                 170                 175
Ala Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu
            180                 185                 190
Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu
        195                 200                 205
Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
    210                 215                 220
Tyr Cys Gln His Leu Asn Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr
225                 230                 235                 240
Lys Val Asp Ile Lys Arg Ala Ala
                245

Claims (33)

1.下列物质在用于治疗癌症的药物的制备方法中的用途：
(i)特异于Hsp90的至少一个表位的抗体或者其抗原结合片段；和
(ii)至少一种选自下面一组中的抗癌药：阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、Herceptin、多西他赛和顺铂。
2.在治疗癌症中同时、分开或依次使用的联合制剂，含有：
(i)特异于Hsp90的至少一个表位的抗体或者其抗原结合片段；和
(ii)至少一种选自下面一组中的抗癌药：阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、Herceptin、多西他赛和顺铂。
3.根据权利要求1或2的用途或联合制剂，其中所述抗体或者其抗原结合片段对具有SEQ ID NO：1的序列的肽所呈现的表位是特异性的。
4.根据权利要求1-3任一项的用途或联合制剂，其中所述抗体包含SEQ ID NO：2的序列。
5.根据权利要求1-4任一项的用途或联合制剂，其中所述癌症选自：纤维肉瘤、乳腺癌、前列腺癌、黑素瘤、白血病、淋巴瘤、结肠癌、睾丸生殖细胞癌、胰腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、甲状腺癌和肺癌。
6.一种治疗癌症的方法，包括对有需要的患者施用治疗有效量的：
(i)特异于Hsp90的至少一个表位的抗体或者其抗原结合片段；和
(ii)至少一种选自下面一组中的抗癌药：阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、Herceptin、多西他赛和顺铂。
7.下面物质在用于治疗白血病的药物的制备方法中的用途：
(i)特异于Hsp90的至少一个表位的抗体或者其抗原结合片段。
8.下面物质在用于治疗白血病的药物的制备方法中的用途：
(i)特异于Hsp90的至少一个表位的抗体或者其抗原结合片段；和
(ii)至少一种选自下面一组中的抗癌药：Imatinib、紫杉醇、多西他赛、柔红霉素、阿霉素和羟基脲。
9.在白血病治疗中同时、分开或依次使用的联合制剂，含有：
(i)特异于Hsp90的至少一个表位的抗体或者其抗原结合片段；和
(ii)至少一种选自下面一组中的抗癌药：Imatinib、紫杉醇、多西他赛、柔红霉素、阿霉素和羟基脲。
10.根据权利要求7-9任一项的用途或联合制剂，其中所述抗体或者其抗原结合片段对具有SEQ ID NO：1的序列的肽所呈现的表位是特异性的。
11.根据权利要求7-10任一项的用途或联合制剂，其中所述抗体包含SEQ ID NO：2的序列。
12.根据权利要求7-11任一项的用途或联合制剂，其中所述白血病选自：急性粒细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病和慢性淋巴细胞性白血病。
13.根据权利要求7-12任一项的用途或联合制剂，其中所述至少一种抗癌药是Imatinib。
14.根据权利要求7-13任一项的用途或联合制剂，其中所述白血病是慢性髓细胞性白血病或急性类淋巴白血病。
15.根据权利要求14的用途或联合制剂，其中所述白血病特征在于费城染色体阳性的细胞，或者费城染色体阴性的细胞。
16.根据权利要求14的用途或联合制剂，其中所述抗癌药是Imatinib，所述白血病特征在于费城染色体阳性的细胞。
17.根据权利要求14的用途或联合制剂，其中所述抗癌药是Imatinib，所述白血病特征在于费城染色体阴性的细胞。
18.根据权利要求7-17任一项的用途或联合制剂，其中所述白血病特征在于Imatinib抗性细胞。
19.一种治疗白血病的方法，包括对有需要的患者施用治疗有效量的：
(i)特异于Hsp90的至少一个表位的抗体或者其抗原结合片段；和
(ii)至少一种选自下面一组中的抗癌药：Imatinib、紫杉醇、多西他赛、柔红霉素、阿霉素和羟基脲。
20.根据权利要求19的方法，其中所述白血病是慢性髓细胞性白血病，并且所述至少一种抗癌药是Imatinib。
21.下面物质在用于治疗癌症的药物的制备方法中的用途：
(i)特异于Hsp90的至少一个表位的抗体或者其抗原结合片段；和
(ii)至少一种选自下面一组中的抗癌药：5-氟尿嘧啶、草酸铂、伊立替康和雷替曲塞。
22.在治疗癌症中同时、分开或依次使用的联合制剂，含有：
(i)特异于Hsp90的至少一个表位的抗体或者其抗原结合片段；和
(ii)至少一种选自下面一组中的抗癌药：5-氟尿嘧啶、草酸铂、伊立替康和雷替曲塞。
23.根据权利要求21或22的用途或联合制剂，其中所述抗体或者其抗原结合片段对具有SEQ ID NO：1的序列的肽所呈现的表位是特异性的。
24.根据权利要求21-23任一项的用途或联合制剂，其中所述抗体包含SEQ ID NO：2的序列。
25.根据权利要求21-24任一项的用途或联合制剂，其中所述癌症选自：纤维肉瘤、腺癌、乳腺癌、前列腺癌、黑素瘤、白血病、淋巴瘤、结肠癌、结肠直肠癌、睾丸生殖细胞癌、胰腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、甲状腺癌和肺癌。
26.根据权利要求25的用途或联合制剂，其中所述癌症是结肠直肠癌或腺癌。
27.一种治疗癌症的方法，包括对有需要的患者施用治疗有效量的：
(i)特异于Hsp90的至少一个表位的抗体或者其抗原结合片段；和
(ii)至少一种选自下面一组中的抗癌药：5-氟尿嘧啶、草酸铂、伊立替康和雷替曲塞。
28.根据权利要求21-27任一项的用途、联合制剂或方法，其中所述抗癌药是5-氟尿嘧啶并且进一步包含亚叶酸(甲酰四氢叶酸)。
29.根据权利要求28的用途、联合制剂或方法，其中所述抗癌药包括5-氟尿嘧啶、亚叶酸(甲酰四氢叶酸)和草酸铂。
30.根据权利要求6、19、20、27、28或29任一项的用途、联合制剂或方法，其中所述组合物或联合制剂口服给药的。
31.根据权利要求1-30任一项的用途、联合制剂或方法，其中所述抗体或者其抗原结合片段用可检测标记物进行标记。
32.根据权利要求1-31任一项的用途、联合制剂或方法，其中所述抗体或者其抗原结合片段与效应分子偶联。
33.参照实施例实质性描述的本发明。
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