KR20070033998A - Ｉｌ-13 결합제 - Google Patents

Ｉｌ-13 결합제 Download PDF

Info

Publication number
KR20070033998A
KR20070033998A KR1020067026549A KR20067026549A KR20070033998A KR 20070033998 A KR20070033998 A KR 20070033998A KR 1020067026549 A KR1020067026549 A KR 1020067026549A KR 20067026549 A KR20067026549 A KR 20067026549A KR 20070033998 A KR20070033998 A KR 20070033998A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
variable domain
antibody
antibody molecule
heavy chain
Prior art date
Application number
KR1020067026549A
Other languages
English (en)
Inventor
류드밀라 치스티아코바
마리온 티 카사이안
데브라 디 도날드슨
샹-양 탄
다빈더 길
브루스 제이콥슨
메이시 엑스 진
사뮤엘 제이 골드만
죤 노프
앤젤라 엠 위덤
Original Assignee
와이어쓰
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 와이어쓰 filed Critical 와이어쓰
Publication of KR20070033998A publication Critical patent/KR20070033998A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

본원에서는, IL-13에 특이적으로 결합하고 IL-13의 IL-13 수용체 및 시그널전달 매개체와의 상호작용 능력을 조절하는 제제(예를 들면, 항체 및 이의 단편)가 기술된다.
IL-13, IL-13 수용체, 중쇄 면역 글로불린, 경쇄 면역 글로불린, MJ2-7, 항체, 항원, 천식, 아토피성 장애

Description

ＩＬ-13 결합제{IL-13 binding agents}
관련 출원에 대한 상호참조
본 출원은 미국 특허법 제119조(35 U.S.C. § 119)하에 2004년 6월 17일자로 제출된 미국 특허 출원 번호 제60/581,078호에 대한 우선권을 주장하며, 변호사 안건 번호 제16163-029001호를 갖는, 표제 "항-IL-13 항체 및 복합체"의, 2005년 6월 9일자로 제출된 미국 특허 출원 번호 제11/_______호의 우선권을 주장한다. 상기한 출원의 내용은 본원에 참조 인용되어 있다.
서열 목록
본 출원은 제출한(후일 등록할) 서열 목록을 포함한다.
인터루킨-13(IL-13)은 T 림프구 및 비만 세포에 의해 분비되는 사이토킨이다[참조: McKenzie et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:3735-39; Bost et al. (1996) Immunology 87:663-41]. IL-13은 IL-4와 수개의 생물학적 활성을 공유한다. 예를 들어, IL-4 또는 IL-13은 B 세포에서 IgE 이소타입 전환(isotype switching)을 일으킬 수 있다[참조: Tomkinson et al. (2001) J. Immunol. 166:5792-5800]. 또한, 세포 표면 CD23 및 혈청 CD23(sCD23)의 증가된 수준이 천식 환자에서 보고되어 왔다[참조: Sanchez-Guererro et al. (1994) Allergy 49:587-92; DiLorenzo et al. (1999) Allergy Asthma Proc. 20:119-25]. 또한, IL-4 또는 IL-13은 B 세포 및 단핵구 상의 MHC 제II형 및 저친화성 IgE 수용체(CD23)의 발현을 상향 조절하여, 항원 제시를 향상시키고 대식구 기능을 조절한다(Tomkinson et al., 상기 참조). 중요하게는, IL-4 또는 IL-13은 내피 세포상의 VCAM-1의 발현을 증가시켜 호산구(및 T 세포)의 기도 조직으로의 우선적인 보충을 촉진한다(Tomkinson et al., 상기 참조). 또한, IL-4 또는 IL-13은 기도 점액 분비를 증가시켜 기도 반응성을 격화시킬 수 있다(Tomkinson et al., 상기 참조). 이들 관측은, 비록 IL-13이 Th2 바달을 유도하는데 필수적이지는 않지만, 또는 비록 유도할 수 있다고 하더라도, IL-13이 기도 호산구증가증 및 AHR의 발달에 주요 역할자일 수 있다는 것을 제시한다(상기 문헌[참조: Tomkinson et al.], ; 문헌[참조: Wills-Karp et al.(1998) Science 282:2258-61]).
발명의 요지
본 발명자는 특히 IL-13 결합제, 특히, 항 IL-13 항체 분자가 높은 친화성 및 특이성으로 사람 IL-13 및/또는 사이노몰구스(cynomolgus) 원숭이 IL-13에 결합할 수 있음을 밝혀냈다. 한 양태에서, 항체 분자는 하나 이상의 IL-13 관련 활성을 감소, 예를 들면, 염증 상태를 조절한다. 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자는 IL-13에 결합할 수 있으며, IL-13과 IL-13 수용체, 예를 들면, IL-13 수용체 α1("IL-13Rα1"), IL-13 수용체 α2("IL-13Rα2"), 및/또는 인터루킨-4 수용체 알파 쇄("IL-4Rα")의 상호작용을 조절(예를 들면, 억제)하여, 시그널전달을 감소시키거나 방해할 수 있다.
IL-13 결합제(예를 들면, 항-IL-13 항체 분자)는 생체 내에서 하나 이상의 IL-13-관련 활성을 조절(예를 들면, 억제)하는 데 사용될 수 있다. IL-13 결합제는 IL-13 관련 장애를 치료 또는 예방하거나, 이의 하나 이상의 증상을 개선하는 데 사용될 수 있다. 예시적 IL-13 관련 장애에는 염증 장애(예를 들면, 폐 염증), 호흡기 장애(예를 들면, 알러지성 및 비알러지성 천식을 포함하는 천식 , 만성폐쇄폐질환(COPD)), 및 기도 염증, 호산구증가증, 섬유증 장애, 피부 경화증, 과잉 점액 생산을 수반하는 질환(예를 들면, 낭포성 섬유증, 간 섬유증 및 폐 섬유증); 아토피성 장애(예를 들면, 아토피성 피부염, 두드러기, 습진, 알러지성 비염 및 알러지성 위장염), IL-13 관련 암(예를 들면, 백혈병, 아교모세포종 또는 림프종, 예를 들면, 호지킨(Hodgkin's) 림프종), 위장관 장애(예를 들면, 염증성 장 질병), 간 장애(예를 들면, 경화증), 및 바이러스 감염이 포함된다.
IL-13 결합제는 IL-13, 특히, 포유동물 IL-13, 예를 들면, 사람 또는 비사람 영장류 IL-13과 상호작용하는(예를 들면, 이에 결합하고/하거나 이를 억제하는) 단백질, 예를 들면, 항체 분자, 펩타이드 또는 스캐폴드(scaffold) 도메인일 수 있다. 항체 분자는 분리된 항체 분자일 수 있다. 한 양태에서, 결합제는 길항제, 예를 들면, CD23 발현 유도; 사람 B 세포에 의한 IgE 생산; 전사 인자, 예를 들면, STAT 단백질(예를 들면, STAT6 단백질)의 인산화; 생체내 항원-유도성 호산구증가증; 생체내 항원-유도성 기관지수축; 또는 생체내 약물-유도성 기도 과반응성 등을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는 하나 이상의 IL-13-관련 활성을 중화, 감소 및/또는 억제하는 결합제이다. 예를 들면, 결합제는 본원에 기술된 하나 이상의 검정에서 통계적으로 유의한 효과를 갖는다. 항-IL-13 항체 분자 외에, 사용할 수 있는 기타 IL-13 결합제에는 IL-13 수용체-Fc 융합체, IL-13 수용체의 기타 가용성 형태, IL-4Rα의 가용성 형태, IL-13R에 결합하는 항체 및 IL-13과 이의 수용체 중 하나와의 상호작용을 억제하는 기타 분자가 포함된다.
한 측면에서, 본 발명은 예를 들면, 5 x 10-7M 미만, 1 x 10-7 M 미만, 5 x 10-8M 미만, 1 x 10-8M 미만, 5 x 10-9M 미만, 1 x 10-9M 미만, 보다 통상적으로는 5 x 10-10M 미만, 1 x 10-10M 미만, 5 x 10-11M 미만, 1 x 10-11M 미만의 KD에 상응하는, 또는 이보다 우수한 친화성으로 IL-13에 결합하는 IL-13 결합제를 특징으로 한다. IL-13 결합제는 예를 들면, 적어도 IL-13에 결합하는 항원-결합 부위를 형성하기에 충분한 부분의 면역글로불린 가변 도메인을 포함하는 제1 및 제2 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하는 항체 분자일 수 있다. 통상적으로, 제1 및 제2 면역글로불린 가변 도메인 서열은 중쇄 및 경쇄, 예를 들면, 짝을 이룬 또는 기타 호환성 중쇄 및 경쇄의 면역글로불린 가변 도메인 서열에 상응한다.
한 양태에서, IL-13 결합제는 예를 들면, 분리된 펩타이드로서 다음의 펩타이드 중 적어도 1개 또는 당해 펩타이드가 성숙한 IL-13 단백질의 구조로 폴딩(folding)된 경우, 이러한 펩타이드 내의 아미노산과 결합한다.
FVKDLLVHLKKLFREGQ 130 FN (서열번호 1),
FVKDLLVHLKKLFREGR 130 FN (서열번호 2),
FVKDLLLHLKKLFREGQ 13O FN (서열번호 3),
FVKDLLLHLKKLFREGR 130 FN (서열번호 4),
FVKDLLVHLKKLFREG (서열번호 5) 및
FVKDLLLHLKKLFREG (서열번호 6).
예를 들면, IL-13 결합제는 펩타이드 또는 IL-13에 R 또는 Q가 130번 위치에 존재하는지의 여부에 관계 없이, 비교가능한 친화성(예를 들면, 8, 5, 4 또는 2 인자 미만으로 상이한 친화성)으로 결합할 수 있다. 특히, IL-13 결합제는 R 또는 Q가 130번 위치에 존재하는지의 여부에 관계 없이 펩타이드 또는 IL-13에 동일한 친화성으로 결합할 수 있다.
IL-13 결합제는 분리된 펩타이드로서 다음의 펩타이드 중 하나 또는 당해 펩타이드가 성숙 IL-13 단백질의 구조로 폴딩된 경우, 이러한 펩타이드 내의 아미노산에 결합할 수 있다.
KDLLVHLKKLFREGQFN (서열번호 7),
KDLLVHLKKLFREGRFN (서열번호 8),
KDLLLHLKKLFREGQFN (서열번호 9),
KDLLLHLKKLFREGRFN (서열번호 10),
KDLLVHLKKLFRE (서열번호 11),
KDLLLHLKKLFRE (서열번호 12), 및
HLKKLFRE (서열번호 13).
IL-13 결합제는 본원에 재인용된(예를 들면, 도 1b에) 펩타이드 서열, 또는 1개 이상, 그러나 1개, 2개 또는 3개 미만의 아미노산 잔기가 상이한 상응하는 펩타이드, 예를 들면, 사람 IL-13으로부터의 상응하는 펩타이드로부터의 1개 이상(예를 들면, 1개, 2개, 3개 또는 4개)의 아미노산 잔기를 포함하는 IL-13 상의 에피토프에 결합할 수 있다.
한 양태에서, IL-13 결합제는 전장 IL-13(서열번호 24 또는 서열번호 178)의 나선 D의 아미노산 잔기(아미노산 잔기 114 내지 130), 예를 들면, 다음의 아미노산 잔기(서열번호 24 또는 서열번호 178의 잔기 116, 117, 118, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 또는 128) 중 적어도 1개에 접촉한다(예를 들면, 이와 반데르발스(van der Waals) 접촉한다). 한 양태에서, IL-13 결합제는 나선 D 상의 에피토프, 또는 나선 D 상의 하나 이상의 아미노산 잔기(예를 들면, 1개, 2개, 3개 또는 4개 이상)를 포함하는 에피토프에 결합하고/하거나, IL-13과 IL-13Rα1 및/또는 IL-13Rα2 중 하나 또는 이 둘 다와의 상호작용을 억제할 수 있다. 나선 D는 성숙한 프로세싱된 IL-13(서열번호 14 또는 서열번호 124)의 아미노산 잔기 95 내지 111에 상응한다.
한 양태에서, IL-13 결합제는 특히 에피토프, 예를 들면, IL-13, 예를 들면, 포유동물 IL-13(예를 들면, 사람 IL-13)의 선형 또는 입체배좌 에피토프에 결합한다. 예를 들면, IL-13 결합제는 IL-13, 예를 들면, 사람 IL-13에 결합하기 위해 MJ 2-7 및/또는 C65와 경쟁한다. IL-13 결합제는 MJ 2-7 및/또는 C65의 IL-13에 대한 결합을 경쟁적으로 억제할 수 있다. IL-13 결합제는 사람 IL-13에 대한 MJ 2-7의 결합으로 정의된 에피토프 또는 사람 IL-13에 대한 C65의 결합으로 정의된 에피토프의 하나 이상의 아미노산과 결합할 수 있다. 한 양태에서, IL-13 결합제는 예를 들면, 통상적으로 1개, 2개, 3개 또는 4개 이상의 아미노산을 포함하는 MJ 2-7 또는 C65의 에피토프 및 중첩 에피토프, 또는 결합한 경우, MJ2-7 또는 C65와의 상호작용을 입체적으로 방해하는 에피토프에 결합할 수 있다.
다른 양태에서, IL-13 결합제는 특히 사람 IL-13에 대한 IL-13Rα1의 결합으로 정의된 에피토프 또는 사람 IL-13에 대한 IL-13Rα2의 결합으로 정의된 에피토프, 또는 이러한 에피토프와 중첩되는 에피토프의 하나 이상의 아미노산과 결합한다. IL-13 결합제는 IL-13, 예를 들면, 사람 IL-13에 대한 결합을 놓고 IL-13Rα1 및/또는 IL-13Rα2와 경쟁할 수 있다. IL-13 결합제는 IL-13에 대한 IL-13Rα1 및/또는 IL-13Rα2의 결합을 경쟁적으로 억제할 수 있다. IL-13 결합제는 결합한 경우 IL-13Rα1 및/또는 IL-13Rα2와의 상호작용을 입체적으로 막는 IL-13 상의 에피토프와 상호작용할 수 있다.
한 양태에서, IL-13 결합제는 IL-13Rα2와 비교가능한 기능적 활성을 갖는데, 예를 들면, IL-13 결합제는 IL-13과 IL-13Rα1의 상호작용을 감소 또는 억제한다. IL-13 결합제는 IL-13과 IL-13Rα1 사이의 복합체 형성을 막거나 IL-13과 IL-13Rα1 사이의 복합체를 파괴 또는 불안정화시킬 수 있다. 한 양태에서, IL-13 결합제는 4차 복합체 형성, 예를 들면, IL-13, IL-13Rα1 및 IL4-R 사이의 복합체 형 성을 억제한다.
한 양태에서, IL-13 결합제는 하나 이상의 IL-13 관련 활성을 약 50nM 내지 5pM, 통상적으로는 약 100 내지 250pM 이하의 IC50, 예를 들면, 보다 우수한 억제로 억제할 수 있다. IL-13의 하나 이상의 활성을 억제하는 제제가 IL-13 길항제로 간주된다. 한 양태에서, IL-13 결합제는 IL-13과 103 내지 108M-1S-1, 통상적으로는 104 내지 107 M-1S-1 범위의 반응속도로 결합할 수 있다. 다른 양태에서, IL-13 결합제는 10-2 내지 10-6S-1, 통상적으로는 10-2 내지 10-5S-1 범위의 해리 반응속도를 갖는다. 한 양태에서, IL-13 결합제는 IL-13, 예를 들면, 사람 IL-13과 모노클로날 항체 MJ 2-7 또는 C65, 또는 이의 변형된 형태, 예를 들면, 이의 키메릭 형태 또는 사람화된 형태(예를 들면, 본원에 기술된 사람화된 형태)와 유사한(예를 들면, 인자 20, 10 또는 5 이내의) 친화성 및/또는 반응속도로 결합한다. IL-13 결합제의 친화성 및 결합 반응속도를 예를 들면, 바이오센서 기법(BIACORETM)을 사용하여 검사할 수 있다.
IL-13 결합제는 항체 분자, 예를 들면, 항체의 항원 결합 단편(예를 들면, Fab, F(ab')2, Fv 또는 단일 쇄 Fv 단편) 또는 Fc 도메인을 포함하는 항체일 수 있다. 통상적으로, 항-IL-13 항체 분자는 모노클로날 또는 단일 특이적일 수 있다.
IL-13 결합제, 특히 항-IL-13 항체 분자는 효과적으로 사람, 사람, 사람화된, CDR-이식된, 키메릭, 돌연변이된, 친화성 성숙한, 탈면역화된, 합성 또는 기타 시험관 내에서 생산된 단백질일 수 있다. 한 양태에서, IL-13 결합제는 사람화된 항체이다. 한 양태에서, IL-13 결합제는 사람에서는 항원성이 아니거나 HAMA 반응을 유발하지 않는다.
한 양태에서, IL-13 항체 분자는 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 항-IL-13 항체 분자의 중쇄 및 경쇄는 실질적으로 전장이거나(예를 들면, 항체 분자는 하나 이상, 바람직하게는 2개 이상의 중쇄, 및 하나 이상, 바람직하게는 2개 이상의 경쇄를 포함한다) 항원-결합 단편(예를 들면, Fab, F(ab')2, Fv 또는 단쇄 Fv 단편)을 포함할 수 있다. 다른 양태에서, 항체 분자는 예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IGM, IgA1, IgA2, IgD 및 IgE의 중쇄 불변 영역으로부터 선택된; 특히, 예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4의 중쇄 불변 영역, 보다 특히, IgG1(예를 들면, 사람 IgG1)의 중쇄 불변 영역으로부터 선택된 중쇄 불변 영역을 갖는다. 통상적으로 중쇄 불변 영역은 사람 불변 영역(예를 들면, 실시예 5에 기술된 바와 같은)의 사람 또는 변형된 형태이다. 다른 양태에서, 항체 분자는 예를 들면, 카파 또는 람다, 바람직하게는 카파(예를 들면, 사람 카파)으로부터 선택된 경쇄 불변 영역을 갖는다. 한 양태에서, 불변 영역은 항체 분자의 특성을 변형시키기 위해(예를 들면, 하나 이상의 Fc 수용체 결합, 항체 글리코실화, 시스테인 잔기 수, 효과기 세포 기능, 또는 보체 기능을 증가 또는 감소시키기 위해) 변경, 예를 들면, 돌연변이시킨다. 예를 들면, 실시예 5에 기술된 바와 같이, 사람 IgG1 불변 영역을 하나 이상의 잔기, 예를 들면, 잔기 234 내지 237 중 하나 이상의 잔기에서 돌연변이시킬 수 있다.
한 양태에서, IL-13 결합제(예를 들면, 항-IL-13 결합 분자)는 본원에 개시된 항체, 예를 들면, MJ 2-7의 경쇄 또는 중쇄 가변 도메인으로부터의 하나 이상, 2개, 바람직하게는 3개의 CDR을 포함한다. 예를 들면, 당해 단백질은 CDR 영역 내의 다음의 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 다음의 서열과 비교하여 10개의 아미노산마다(예를 들면, 차이의 수는 CDR 길이에 비례한다) 4, 3, 2.5, 2, 1 또는 0.5개 이하의 변경(예를 들면, 치환, 삽입 또는 결실)에 의해 상이한(예를 들면, CDR 당 1개 이상, 그러나 2개, 3개 또는 4개 이하의 변경) 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함한다:
GFNIKDTYIH (서열번호 15),
RIDPANDNIKYDPKFQG (서열번호 16),
SEENWYDFFDY (서열번호 17),
RSSQSIVHSNGNTYLE (서열번호 18),
KVSNRFS (서열번호 19), 및
FQGSHIPYT (서열번호 20).
예를 들면, IL-13 결합제는 경쇄 불변 도메인 서열에 CDR 영역 내의 다음의 서열 중 적어도 1개, 2개 또는 3개의 서열, 또는 다음의 서열과 비교하여 10개의 아미노산마다 4, 3, 2.5, 2, 1.5, 1 또는 0.5개 이하의 치환, 삽입 또는 결실에 의해 상이한 아미노산 서열을 포함할 수 있다:
RSSQSIVHSNGNTYLE (서열번호 18),
KVSNRFS (서열번호 19) 및
FQGSHIPYT (서열번호 20).
IL-13 결합제는 중쇄 가변 도메인 서열에 CDR 영역 내의 다음의 서열 중 적어도 1개, 2개 또는 3개의 서열, 또는 다음의 서열과 비교하여 10개의 아미노산마다 4, 3, 2.5, 2, 1.5, 1 또는 0.5개 이하의 치환, 삽입 또는 결실로 상이한 아미노산 서열을 포함할 수 있다:
GFNIKDTYIH (서열번호 15),
RIDPANDNIKYDPKFQG (서열번호 16), 및
SEENWYDFFDY (서열번호 17).
중쇄 CDR3 영역은 13개 미만 또는 12개 미만의 아미노산 길이, 예를 들면, 11개 아미노산 길이(초티아(Chothia) 또는 카뱃(Kabat) 정의를 사용하여)일 수 있다.
다른 예에서, IL-13 결합제는 경쇄 가변 도메인 서열에, CDR 영역(괄호 안의 아미노산은 특정 위치에 대한 대안을 나타낸다) 내의 다음의 서열 중 적어도 1개, 2개 또는 3개의 서열을 포함할 수 있다.
(i) (RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS) (서열번호 25) 또는 (RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-E (서열번호 26) 또는 (RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-N-G-N-T-Y-L-(EDNQYAS) (서열번호 21),
(ii) K-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-S (서열번호 27) 또는 K-(LV)-S-(NY)-R-F-S (서열번호 22), 및
(iii) Q-(GSA)-(ST)-(HEQ)-I-P (서열번호 28), F-Q-(GSA)-(SIT)-(HEQ)-(IL)-P (서열번호 23), 또는 Q-(GSA)-(ST)-(HEQ)-I-P-Y-T (서열번호 193), 또는 F-Q- (GSA)-(SIT)-(HEQ)-(IL)-P-Y-T (서열번호 29).
하나의 바람직한 양태에서, IL-13 결합제는 MJ 2-7로부터의 모든 6개 CDR 또는 밀접하게 관련된 CDR, 예를 들면, 동일하거나 하나 이상의, 그러나 2개, 3개 또는 4개 이하의 아미노산 변경(예를 들면, 치환, 결실 또는 삽입)을 갖는 CDR을 포함한다. IL-13 결합제는 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 7개의, MJ 2-7의 IL-13과 접촉하는 아미노산 잔기를 포함할 수 있다.
다른 예에서, IL-13 결합제는 동일한 정준(canonical) 구조를 갖는 적어도 1개, 2개 또는 3개의 CDR 영역 및 MJ 2-7의 상응하는 CDR 영역, 예를 들면, 적어도 MJ 2-7의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인의 CDR1 및 CDR2를 포함한다.
IL-13 결합제는 다음의 서열 중 하나, 또는 8개 미만, 7개, 6개, 5개, 4개, 3개 또는 2개의 변형(예를 들면, 치환, 삽입 또는 결실, 예를 들면, MJ 2-7 내의 상응하는 위치에서의 아미노산의 보존적 치환 또는 치환)을 갖는 서열을 포함할 수 있다:
DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQS
PQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC
FQGSHIPYT (서열번호 30)
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWFQQRPGQS
PRRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC
FQGSHIPYT (서열번호 31)
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQS
PQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC
FQGSHIPYT (서열번호 32)
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQP
PQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC
FQGSHIPYT (서열번호 33)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQS
PQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC
FQGSHIPYT (서열번호 34)
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWLQQRPGQP
PRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC
FQGSHIPYT (서열번호 35)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGKA
PKLLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC
FQGSHIPYT (서열번호 36)
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVYSDGNTYLNWFQQRPGQS
PRRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC
FQGSHIPYT (서열번호 37)
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQS
PKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYC
FQGSHIPYT (서열번호 38).
예시적 치환은 다음의 카뱃 위치: 2, 4, 6, 35, 36, 38, 44, 47, 49, 62, 64-69, 85, 87, 98, 99, 101 및 102 중 하나에서이다. 치환은 예를 들면, MJ 2-7로부터의 상응하는 위치의 아미노산을 사람 주쇄(framework) 영역으로 치환할 수 있다.
IL-13 결합제는 또한 다음의 서열 중 하나 또는 주쇄 영역에 8개, 7개, 6개, 5개, 4개, 3개 또는 2개 미만의 변경(예를 들면, 치환, 삽입 또는 결실, 예를 들면, MJ 2-7의 상응하는 위치에서의 아미노산의 보존적 치환 또는 치환)을 갖는 서열을 포함할 수 있다:
■DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISC-(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-
H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYLQKPGQSPQLLIYK-
(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC F-Q-(GSA)-
(SIT)-(HEQ)-(IL)-P (서열번호 39)
■DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISC-(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-
H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WFQQRPGQSPRRLIYK-
(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF-Q-(GSA)-
(SIT)-(HEQ)-(IL)-P (서열번호 40)
■DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC-(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-
H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYLQKPGQSPQLLIYK-
(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF-Q-(GSA)-
(SIT)-(HEQ)-(IL)-P (서열번호 41)
■DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-
H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYLQKPGQPPQLLIYK-
(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF-Q-(GSA)-
(SIT)-(HEQ)-(IL)-P (서열번호 42)
■DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISC(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-
H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYLQKPGQSPQLLIYK-
(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF-Q-(GSA)-
(SIT)-(HEQ)-(IL)-P (서열번호 43)
■DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISC(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-
H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WLQQRPGQPPRLLIYK-
(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-
SGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF-Q-(GSA)-
(SIT)-(HEQ)-(IL)-P (서열번호 44)
■DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-
S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYQQKPGKAPKLLIYK-
(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-
SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCF-Q-(GSA)-
(SIT)-(HEQ)-(IL)-P (서열번호 45)
■DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISC(RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-
S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS)WYLQKPGQSPKLLIYK-
(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-
SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCF-Q-(GSA)-
(SIT)-(HEQ)-(IL)-P (서열번호 46).
예시적 치환은 다음의 카뱃 위치: 2, 4, 6, 35, 36, 38, 44, 47, 49, 62, 64-69, 85, 87, 98, 99, 101 및 102 중 하나 이상에 있다. 치환은 예를 들면, MJ 2-7로부터의 상응하는 위치의 아미노산을 사람 주쇄 영역으로 치환한다. 당해 서열 다음에 디펩타이드 Tyr-Thr가 뒤따를 수도 있다. FR4 영역은 예를 들면, 서열 FGGGTKVEIKR(서열번호 47)을 포함할 수 있다.
다른 예에서, IL-13 결합제는 중쇄 가변 도메인 서열에, CDR 영역 내의 다음의 서열 중 적어도 1개, 2개 또는 3개의 서열(괄호 안의 아미노산은 특정 위치에서의 대안을 나타낸다)을 포함할 수 있다:
(i) G-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H (서열번호 48),
(ii) (WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-G (서열번호 49), 및
(iii) SEENWYDFFDY (서열번호 17).
IL-13 결합제는 다음의 서열 중 1개, 또는 8개, 7개, 6개, 5개, 4개, 3개 또는 2개 미만의 변경(예를 들면, 치환, 삽입 또는 결실, 예를 들면, MJ 2-7의 상응 하는 위치에서의 아미노산의 보존적 치환 또는 치환)을 갖는 서열을 포함할 수 있다:
■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQAPGQGLEWM
GRIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 50)
■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQAPGQRLEWM
GRIDPANDNIKYDPKFQGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 51)
■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQATGQGLEWM
GRIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 52)
■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQAPGQGLEWM
GRIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 53)
■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWM
GRIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYC
ATSEENWYDFFDY (서열번호 54)
■QMQLVQSGAEVKKTGSSVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQAPGQALEWM
GRIDPANDNIKYDPKFQGRVTITRDRSMSTAYMELSSLRSEDTAMYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 55)
■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQAPGQGLEWM
GRIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 56)
■QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQARGQRLEWI
GRIDPANDNIKYDPKFQGRVTITRDMSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYC
AASEENWYDFFDY (서열번호 57)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWV
ARIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 58)
■EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWV
SRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYC
AKDSEENWYDFFDY (서열번호 59)
■QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWIRQAPGKGLEWV
SRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 60)
■EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWV
GRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYC
TTSEENWYDFFDY (서열번호 61)
■EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWV
SRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYHC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 62)
■EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWV
SRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 63)
■EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWV
SRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC
AKSEENWYDFFDY (서열번호 64)
■QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWV
ARIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC
AKSEENWYDFFDY (서열번호 65)
■QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWV
ARIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 66)
■EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWV
SRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLRTEDTALYYC
AKDSEENWYDFFDY (서열번호 67)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWV
SRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 68)
■EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGFNIKDTYIHWFRQAPGKGLEWV
GRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDGSKSIAYLQMNSLKTEDTAVYYC
TRSEENWYDFFDY (서열번호 69)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEYV
SRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNSKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 70)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWI
GRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 71)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWV
ARIDPANDNIKYDPKFQGKATISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 72)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWV
ARIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 73)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWV
GRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 74)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWV
ARIDPANDNIKYDPKFQGKATISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 75)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWI
GRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 76)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWV
GRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 77)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWV
ARIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 78)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWV
GRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 79)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWI
GRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 80)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTGSGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWI
GRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 81)
■EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTGSGFNIKDTYIHWVKQRPEQGLEWI
GRIDPANDNIKYDPKFQGKATITADTSSNTAYLQLNSLTSEDTAVYYC
ARSEENWYDFFDY (서열번호 82).
예시적 치환은 다음의 카뱃 위치: 2, 4, 6, 25, 36, 37, 39, 47, 48, 93, 94, 103, 104, 106 및 107 중 하나 이상에 있다. 예시적 치환은 또한 다음의 위치(순차적 번호매김에 따라) 중 하나 이상에 있을 수 있다: 48, 49, 67, 68, 72 및 79. 당해 치환은 예를 들면, MJ 2-7로부터의 상응하는 위치의 아미노산을 사람 주쇄 영역으로 치환할 수 있다. 한 양태에서, 서열은 다음 중 하나 이상을 포함한다(순차적 번호매김에 따라): 48에서 ILe, 49에서 Gly, 67에서 Lys, 68에서 Ala, 72에서 Ala 및 79에서 Ala; 바람직하게는, 예를 들면, 48에서 Ile, 49에서 Gly, 72에서 Ala 및 79에서 Ala.
추가로, 당해 중쇄 가변 도메인 서열의 주쇄는 (i) 49에 상응하는 위치에 Gly; (ii) 72에 상응하는 위치에 Ala; (iii) 48에 상응하는 위치에 Ile, 및 49에 상응하는 위치에 Gly; (iv) 48에 상응하는 위치에 Ile, 49에 상응하는 위치에 Gly, 및 72에 상응하는 위치에 Ala; (v) 67에 상응하는 위치에 Lys, 68에 상응하는 위치에 Ala, 및 72에 상응하는 위치에 Ala; 및/또는 (vi) 48에 상응하는 위치에 Ile, 49에 상응하는 위치에 Gly, 72에 상응하는 위치에 Ala, 79에 상응하는 위치에 Ala를 포함한다.
IL-13 결합제는 또한 다음의 서열 중 하나 또는 주쇄 영역에 8개, 7개, 6개, 5개, 4개, 3개 또는 2개 미만의 변경(예를 들면, 치환, 삽입 또는 결실, 예를 들면, MJ 2-7의 상응하는 위치에서의 아미노산의 보존적 치환 또는 치환)을 갖는 서열을 포함할 수 있다:
■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGQGLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 83)
■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGQRLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 84)
■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQATGQGLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 85)
■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGQGLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 86)
■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCAT SEENWYDFFDY
(서열번호 87)
■QMQLVQSGAEVKKTGSSVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGQALEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRVTITRDRSMSTAYMELSSLRSEDTAMYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 88)
■QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGQGLEWMG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 89)
■QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQARGQRLEWIG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRVTITRDMSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAA SEENWYDFFDY
(서열번호 90)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWVA(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 91)
■EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAK DSEENWYDFFDY
(서열번호 92)
■QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WIRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 93)
■EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWVG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTT SEENWYDFFDY
(서열번호 94)
■EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYHCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 95)
■EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 96)
■EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK SEENWYDFFDY
(서열번호 97)
■QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWVA(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK SEENWYDFFDY
(서열번호 98)
■QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWVA(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 99)
■EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISRDNSKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK DSEENWYDFFDY
(서열번호 100)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 101)
■EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WFRQAPGKGLEWVG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISRDGSKSIAYLQMNSLKTEDTAVYYCTR SEENWYDFFDY
(서열번호 102)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEYVS(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISRDNSKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 103)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWIG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 104)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWVA(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GKATISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 105)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWVA(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 106)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWVG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 107)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWVA(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GKATISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 108)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWIG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 109)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWVG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 110)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWVA(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISRDNAKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 111)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWVG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISADNAKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 112)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWIG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISADNAKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 113)
■EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTGSG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVRQAPGKGLEWIG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GRFTISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 114)
■EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTGSG-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-
(MI)-H,WVKQRPEQGLEWIG(WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-
Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-
GKATITADTSSNTAYLQLNSLTSEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY
(서열번호 115).
예시적 치환은 다음의 카뱃 위치(2, 4, 6, 25, 36, 37, 39, 47, 48, 93, 94, 103, 104, 106 및 107) 중 하나 이상에 있다. 당해 치환은 예를 들면, MJ 2-7로부터의 상응하는 위치의 아미노산을 사람 주쇄 영역으로 치환할 수 있다. FR4 영역은 예를 들면, 서열 WGQGTTLTVSS(서열번호 116) 또는 WGQGTLVTVSS(서열번호 117)을 포함할 수 있다.
한 양태에서, 중쇄 가변 도메인 서열은 V2.1, V2.2, V2.3, V2.4, V2.5, V2.6, V2.7, V2.11의 중쇄 가변 도메인 또는 본원에 기술된 기타 중쇄 가변 도메인과 동일하거나, 90, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% 이상 동일하다. 한 양태에서, 중쇄 가변 도메인 서열은 높은 엄중성 조건 하에 V2.1, V2.2, V2.3, V2.4, V2.5, V2.6, V2.7, V2.11의 중쇄 가변 도메인, 또는 본원에 기술된 기타 중쇄 가변 도메인을 암호화하는 핵산의 상보체에 하이브리드화하는 핵산에 의해 암호화된 서열을 포함하는 가변 도메인 서열을 포함한다. 한 양태에서, 경쇄 가변 도메인 서열은 V2.11의 경쇄 가변 도메인 또는 본원에 기술된 기타 경쇄 가변 도메인과 동일하거나, 90, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% 이상 동일하다. 한 양태에서, 경쇄 가변 도메인 서열은 높은 엄중성 조건 하에 V2.11의 경쇄 가변 도메인 또는 본원에 기술된 기타 경쇄 가변 도메인을 암호화하는 핵산의 상보체와 하이브리드화하는 핵산에 의해 암호화된 서열을 포함한다.
한 양태에서, 중쇄 주쇄(예를 들면, 개별적으로 FR1, FR2, FR3, 또는 FR1, FR2 및 FR3는 포함하지만, CDR은 배제하는 서열)은 다음의 배선(germline) V 절편 서열: DP-25, DP-1, DP-12, DP-9, DP-7, DP-31, DP-32, DP-33, DP-58, 또는 DP-54 중 하나, 또는 정준 구조 계열 1-3과 양립하는 기타 V 유전자의 중쇄 주쇄와 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다(예를 들면, 문헌[초티아 et al. (1992) J. Mol. Biol. 227:799-817; Tomlinson et al. (1992) J. Mol. Biol. 227:776-798] 참조). 정준 구조 계열 1-3과 양립하는 기타 주쇄에는 카뱃 번호매김에 따르는 다음의 잔기 중 하나 이상을 갖는 주쇄가 포함된다: 위치 26에서 Ala, Gly, Thr 또는 Val; 위치 26에서 Gly; 위치 27에서 Tyr, Phe 또는 Gly; 위치 29에서 Phe, Val, Ile 또는 Leu; 위치 34에서 Met, Ile, Leu, Val, Thr, Trp 또는 Ile; 위치 94에서 Arg, Thr, Ala, Lys; 위치 54에서 Gly, Ser, Asn 또는 Asp; 및 위치 71에서 Arg.
한 양태에서, 경쇄 주쇄(예를 들면, 개별적으로 FR1, FR2, FR3, 또는 FR1, FR2 및 FR3는 포함하지만, CDR은 배제하는 서열)은 VκII 하위그룹 배선 서열 또는 다음의 배선 V 절편 서열: A17, A1, A18, A2, A19/A3, 또는 A23 중 하나, 또는 정준 구조 계열 4-1과 양립하는 기타 V 유전자의 경쇄 주쇄와 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다(예를 들면, 문헌[Tomlinson et al. (1995) EMBO J. 14:4628] 참조). 정준 구조 계열 4-1와 양립하는 기타 주 쇄에는 카뱃 번호매김에 따르는 다음의 잔기 중 하나 이상을 갖는 주쇄를 포함한다: 위치 2에서 Val 또는 Leu 또는 Ile; 위치 25에서 Ser 또는 Pro; 위치 29에서 Ile 또는 Leu; 위치 31에서 Gly; 위치 33에서 Phe 또는 Leu; 및 위치 71에서 Phe.
다른 양태에서, 경쇄 주쇄(예를 들면, 개별적으로 FR1, FR2, FR3, 또는 FR1, FR2 및 FR3는 포함하지만, CDR은 배제하는 서열)은 VκI 하위그룹 배선 서열, 예를 들면, DPK9 서열의 경쇄 주쇄와 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
다른 양태에서, 중쇄 주쇄(예를 들면, 개별적으로 FR1, FR2, FR3, 또는 FR1, FR2 및 FR3는 포함하지만, CDR은 배제하는 서열)은 VH I 하위그룹 배선 서열, 예를 들면, DP-25 서열 또는 VH III 하위그룹 배선 서열, 예를 들면, DP-54 서열의 경쇄 주쇄와 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
한 양태에서, IL-13 결합제는 본원에 개시된 항체, 예를 들면, C65의 경쇄 또는 중쇄 가변 도메인으로부터의 적어도 1개, 2개, 바람직하게는 3개의 CDR을 포함한다. 예를 들면, IL-13 결합제는 CDR 영역 내의 다음의 서열 중 적어도 1개, 또는 상기한 서열에 비교하여 10개의 아미노산마다(차이의 수는 CDR 길이에 비례한다) 4, 3, 2.5, 2, 1.5, 1 또는 0.5개의 치환, 삽입 또는 결실에 의해 상이한 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함한다:
QASQGTSINLN (서열번호 118),
GASNLED (서열번호 119), 및
LQHSYLPWT (서열번호 120)
GFSLTGYGVN (서열번호 121),
IIWGDGSTDYNSAL (서열번호 122), 및
DKTFYYDGFYRGRMDY (서열번호 123).
예를 들면, 당해 단백질은 경쇄 가변 도메인 서열에 CDR 영역 내의 다음의 서열 중 적어도 1개, 2개 또는 3개의 서열, 또는 상기한 서열에 비교하여 10개의 아미노산마다 4, 3, 2.5, 2. 1.5, 1 또는 0.5개 이하의 치환에 의해 상이한 아미노산 서열을 포함할 수 있다:
QASQGTSINLN (서열번호 118),
GASNLED (서열번호 119), 및
LQHSYLPWT (서열번호 120).
IL-13 결합제는 중쇄 가변 도메인 서열에, CDR 영역 내의 다음의 서열 중 적어도 1개, 2개 또는 3개의 서열, 또는 상기한 서열에 비교하여 10개의 아미노산마다 4, 3, 2.5, 2. 1.5, 1 또는 0.5개 이하의 치환에 의해 상이한 아미노산 서열을 포함할 수 있다:
GFSLTGYGVN (서열번호 121),
IIWGDGSTDYNSAL (서열번호 122), 및
DKTFYYDGFYRGRMDY (서열번호 123).
하나의 바람직한 양태에서, IL-13 결합제는 C65로부터의 6개 CDR 모두 또는 밀접하게 관련된 CDR, 예를 들면, 동일하거나 1개 이상, 그러나 2, 3 또는 4개 미 만의 변경(예를 들면, 치환, 결실 또는 삽입)의 아미노산 변경을 갖는 CDR을 포함한다.
다른 양태에서, IL-13 결합제는 동일한 정준 구조를 갖는 1, 2 또는 3개 이상의 CDR 영역 및 C65의 상응하는 CDR 영역, 예를 들면, 적어도 C65의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인의 CDR1 및 CDR2를 포함한다.
한 양태에서, 중쇄 주쇄(예를 들면, 개별적으로 FR1, FR2, FR3, 또는 FR1, FR2 및 FR3는 포함하지만, CDR은 배제하는 서열)은 다음의 배선 V 절편 서열: DP-71 또는 DP-67 중 하나 또는 C65의 정준 구조 계열과 양립하는 기타 V 유전자의 중쇄 주쇄와 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다(예를 들면, 문헌[초티아 et al. (1992) J. Mol. Biol. 227:799-817; Tomlinson et al. (1992) J. Mol. Biol. 227:776-798] 참조).
한 양태에서, 경쇄 주쇄(예를 들면, 개별적으로 FR1, FR2, FR3, 또는 FR1, FR2 및 FR3는 포함하지만, CDR은 배제하는 서열)은 DPK-1 또는 DPK-9 배선 서열 또는 C65의 정준 구조 계열과 양립하는 기타 V 유전자의 경쇄 주쇄와 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다(예를 들면, 문헌[Tomlinson et al. (1995) EMBO J. 14:4628] 참조).
다른 양태에서, 경쇄 주쇄(예를 들면, 개별적으로 FR1, FR2, FR3, 또는 FR1, FR2 및 FR3는 포함하지만, CDR은 배제하는 서열)은 VκI 하위그룹 배선 서열, 예를 들면, DPK-9 또는 DPK-1 서열의 경쇄 주쇄와 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
기타 양태에서, 중쇄 주쇄(예를 들면, 개별적으로 FR1, FR2, FR3, 또는 FR1, FR2 및 FR3는 포함하지만, CDR은 배제하는 서열)은 VH IV 하위그룹 배선 서열, 예를 들면, DP-71 또는 DP-67 서열의 경쇄 주쇄와 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
한 양태에서, 경쇄 또는 중쇄 가변 주쇄(예를 들면, 적어도 FR1, FR2, FR3 및 임의로 FR4를 포함하는 영역)은 (a) 사람 경쇄 또는 중쇄 가변 주쇄로부터의 아미노산 잔기, 예를 들면, 사람 성숙 항체, 사람 배선 서열, 사람 컨센서스 서열 또는 본원에 기술된 사람 항체로부터의 경쇄 또는 중쇄 가변 주쇄 잔기의 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%를 포함하는 경쇄 또는 중쇄 가변 주쇄; (b) 사람 경쇄 또는 중쇄 가변 주쇄로부터의 아미노산 잔기, 예를 들면, 사람 성숙 항체, 사람 배선 서열, 사람 컨센서스 서열로부터의 경쇄 또는 중쇄 가변 주쇄 잔기의 20% 내지 80%, 40% 내지 60%, 60% 내지 90%, 또는 70% 내지 95%를 포함하는 경쇄 또는 중쇄 가변 주쇄; (c) 비-사람 주쇄(예를 들면, 설치류 주쇄); 또는 (d) 예를 들면, 항원성 또는 세포독성 결정자를 제거하도록 변형된(예를 들면, 탈면역화된 또는 부분적으로 사람화된) 비-사람 주쇄 중에서 선택할 수 있다. 한 양태에서, 중쇄 가변 도메인 서열은 다음의 위치 중 하나 이상(바람직하게는 5개, 10개, 12개 이상, 또는 모두)에 사람 잔기 또는 사람 컨센서스 서열 잔기를 포함한다: (경쇄의 가변 도메인의 FR에) 4L, 35L, 36L, 38L, 43L, 44L, 58L, 46L, 62L, 63L, 64L, 65L, 66L, 67L, 68L, 69L, 70L, 71L, 73L, 85L, 87L, 98L, 및/또는 (중쇄의 가변 도메인의 FR에) 2H, 4H, 24H, 36H, 37H, 39H, 43H, 45H, 49H, 58H, 60H, 67H, 68H, 69H, 70H, 73H, 74H, 75H, 78H, 91H, 92H, 93H 및/또는 103H(카뱃 번호매김에 따라).
한 양태에서, IL-13 결합제는 하나 이상의 비-사람 CDR, 예를 들면, 쥐 CDR, 예를 들면, MJ 2-7 또는 C65로부터의 CDR, 또는 이의 돌연변이체, 및 MJ 2-7 또는 C65와 하나 이상의 아미노산, 예를 들면, 5, 8, 10, 12, 15 또는 18개 이상의 아미노산이 상이한 하나 이상의 주쇄를 포함한다. 예를 들면, 당해 단백질은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 이러한 비-사람 CDR을 포함하고, HC FR1, HC FR2, HC FR3. LC FR1, LC FR2 및 LC FR3 중 3개 이상에 1개 이상의 아미노산 차이를 포함한다.
한 양태에서, 항-IL-13 항체 분자의 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인 서열은 본원에 기술된 항체, 예를 들면, MJ 2-7 또는 C65의 가변 도메인 서열과 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일하거나; 본원에 기술된 항체, 예를 들면, MJ 2-7 또는 C65의 가변 도메인 서열과 1개 또는 5개 이상, 그러나 40, 30, 20 또는 10개 미만의 잔기가 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 한 양태에서, 당해 단백질의 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인 서열은 본원에 기술된 핵산 서열 또는 예를 들면, 낮은 엄중성, 중간 엄중성, 높은 엄중성 또는 매우 높은 엄중성 조건 하에, 본원에 기술된 핵산 서열 또는 이의 상보체에 하이브리드화하는 핵산에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함한다.
한 양태에서, 가변 도메인 서열 중 하나 또는 둘다는 비-사람 항체(예를 들면, mAb13.2와 같은 설치류 항체) 및 사람 항체 둘 다 또는 배선 서열로부터 다양하게 유래한 주쇄 영역에 아미노산 위치를 포함한다. 예를 들면, 가변 도메인 서열은 아미노산 잔기가 비-사람 항체 및 사람 항체(또는 사람 배선 서열) 둘 다와 동일한 다수의 위치를 포함할 수 있는데, 이는 둘 다 당해 위치에서 동일하기 때문이다. 비-사람 및 사람 항체가 상이한 잔여 주쇄 위치 중, 바람직하게는 가변 도메인의 위치의 50, 60, 70, 80 또는 90% 이상은 비-사람보다 사람 항체(또는 사람 배선 서열)과 동일하다. 예를 들면, 이러한 잔여 주쇄 위치 중 어느 것도 사람보다 비-사람 항체와 동일하지 않거나, 이들 중 1, 2, 3 또는 4개 이상은 사람 항체보다 비-사람 항체와 동일할 수 있다. 예를 들면, HC FR1에서, 1개 또는 2개의 이러한 위치가 비-사람일 수 있으며; HC FR2에서는 이러한 위치 중 1개 또는 2개가 비-사람일 수 있고; FR3에서는, 이러한 위치 중 1, 2, 3 또는 4개가 비-사람일 수 있으며; LC FR1에서는, 이러한 위치 중 1, 2, 3 또는 4개가 비-사람일 수 있으며; LC FR2에서는, 이러한 위치 중 1개 또는 2개가 비-사람일 수 있고; LC FR3에서는 이러한 위치 중 1개 또는 2개가 비-사람일 수 있다. 당해 주쇄는 추가의 비-사람 위치를 포함할 수 있다.
IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자는 기타 기능성 분자, 예를 들면, 기타 펩타이드 또는 단백질(예를 들면, Fab 단편)로부터 유래하거나 이에 연결될 수 있다. 예를 들면, 결합제는 기타 항체 분자(예를 들면, 이중특이적 또는 다중특이적 항체 분자를 형성하기 위한), 독소, 방사성 동위 원소, 세포독성제 또는 세포증식 억제제 등과 같은 하나 이상의 기타 분자 실체에 기능적으로 연결(예를 들면, 화학적 커플링, 유전자 융합, 비공유 결합 등에 의해)될 수 있다.
다른 양태에서, IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자는 IL-13과 수용체 IL-13Rα1의 상호작용을 방해한다. 한 양태에서, IL-13 결합제는 잔기 Leu319, Cys257, Arg256 및 Cys320(서열번호 125; 도 13b)의 측쇄에 의해 형성된 IL-13Rα1의 소수성 포켓과 IL-13의 Phe107(서열번호 124; 도 13a)의 상호작용을, 예를 들면, 이들 잔기에 직접 결합하거나 입체 간섭함으로써 방해할 수 있다. 다른 양태에서, IL-13 결합제는 IL-13Rα1(서열번호 125)의 아미노산 잔기 Il2254, Ser255, Arg256, Lys318, Cys320 및 Tyr321과 IL-13(서열번호 124)의 아미노산 잔기 Arg11, Glu12, Leu13, Ile14, Glu15, Lys104, Lys105, Leu106, Phe107 및 Arg108 간의 반데르발스 상호작용을, 예를 들면, 이들 잔기에 직접 결합하거나 입체 간섭함으로써 방해할 수 있다.
한 양태에서, IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자는 문헌[DC CPMP Guideline III/5271/94 Draft 5]의 부록 II의 "교차 반응성의 면역조직화학적 조사에 사용된 사람 조직의 제시 목록", "모노클로날 항체의 제조 및 질 제어"의 조직의 1/2, 2/3, 3/4, 90% 또는 모든 조직에 대하여, 또는 1997 미국 FDA/CBER "사람 용도의 단일 클론 항체 생성물의 제조 및 검사에 관한 고찰 사항"의 표 2에 권장된 조직의 1/2, 2/3, 3/4, 90% 또는 모든 조직에 대하여 선별한 경우 유의적인 교차 반응성을 갖지 않는다.
한 양태에서, IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체는 특히 IL-13, 예를 들면, 포유동물 IL-13, 예를 들면, 사람 또는 비-사람 영장류 IL-13에 결합한다. 예를 들면, 당해 결합제는 IL-13 이외의 비-특이적 항원(예를 들면, BSA, 카세인)에 대한 이의 결합 친화성보다 2배, 10배, 50배, 100배 이상(보다 작은 Kd)의 친화성, 또는 IL-13 이외의 기타 사람 인터루킨에 대한 이의 결합 친화성보다 2배, 10 배, 50배, 100배 이상의 친화성(보다 작은 Kd)으로 IL-13과 결합한다. 일부 양태에서, IL-13 결합제는 실시예 1("4차 선별")에 기술한 사람 IL-13의 조악한 샘플에 대하여 블롯팅(blotting)하는 경우 오직 1개의 두드러진 밴드만을 검출한다. 일부 양태에서, IL-13 결합제가 고정된 비드(bead)를 사용하여 조악한 샘플로부터 단백질을 침잠시켜 제조한 침전물은 IL-13이 적어도 5%, 10%, 50% 또는 80% 순수한 조성물이다.
다른 측면에서는, IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자, 또는 이의 약제학적 조성물을 투여하여 IL-13 관련 장애를 치료 또는 예방한다. 치료는 피검체의 질환을 개선 또는 유지시킴(또는 이의 시도)을 지칭한다. 통상적인 경우, 치료는 피검체의 질환을 의사가 식별할 수 있을 정도로 개선하거나 질환의 악화를 예방한다. IL-13-관련 장애의 예에는 호흡기 장애, 예를 들면, 천식{예를 들면, 알러지성 및 비알러지성 천식(예를 들면, 감염, 예를 들면, 영유아에서 예를 들면, 호흡기 합포체 바이러스(RSV) 감염으로 인한 천식)}, 만성 폐쇄성폐질환(COPD), 및 기도 염증, 호산구증가증, 섬유증 장애 및 과잉 점액 생산을 수반하는 질환(예를 들면, 낭포성 섬유증 및 폐 섬유증); 아토피성 장애{예를 들면, IL-13에 대한 증가된 감수성으로 인한(예를 들면, 아토피성 피부염, 두드러기, 습진, 알러지성 비염 및 알러지성 위장염)}; 피부의 염증 및/또는 자가면역 질환(예를 들면, 아토피성 피부염), 위장관 장애(예를 들면, 궤양결장염 및/또는 크론병(Crohn's disease)과 같은 염증성 장 질병(IBD)), 간(예를 들면, 간경변, 간세포성 암종), 및 피부경화증; 백혈병, 아교모세포종 및 림프종(예를 들면, 호지킨 림프종)과 같은 종양 또는 암(예를 들면, 연조직 또는 고형 종양); 바이러스 감염(예를 들면, HTLV-1); 기타 기관의 섬유증, 예를 들면, 간 섬유증(예를 들면, 간염 B 및/또는 C 바이러스로 인해 유발된 섬유증); 및 예를 들면, 본원에 기술된 바와 같은 보호적 1형 면역반응(예를 들면, 백신 접종 동안의 발현의 억제) 중에서 선택된 장애가 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다.
IL-13 결합제(예를 들면, 본원에 기술된 바와 같은 항-IL-13 항체 분자)를 유효량으로 투여하여 장애를 치료 또는 예방할 수 있다. 예방적 용도(예를 들면, 발병 예방 또는 발명의 지연을 위한)의 경우, 피검체는 당해 장애의 하나 이상의 증상을 갖거나 갖지 않을 수 있다. 사용량은 또한 당해 장애의 하나 이상의 증상을 개선하는 데 유효하도록 선택할 수 있다. 바람직하게는, 피검체는 본원에 기술된 바와 같은 IL-13-관련 장애를 앓는 포유동물, 예를 들면, 사람이다. 호흡기 장애, 예를 들면, 천식의 경우, IL-13 결합제를 흡입으로 전달할 수 있다.
한 양태에서는, 당해 방법은 IL-13에 결합하는 항체 분자의 용량을 투여하는 단계를 포함한다. 예를 들면, 항체 분자는 IL-13을 억제 또는 중화시킨다. 한 양태에서, 각각의 용량을 주당 1회 이하, 예를 들면, 격주로 또는 매달 1회 또는 2회의 빈도로 예를 들면, 약 0.5 내지 10mg/kg(예를 들면, 0.7 내지 3.3mg/kg)의 양으로 피하 투여한다. 한 양태에서, 당해 항체는 본원에 기술된 항체이다. 예를 들면, 항체는 IL-13Rα1의 결합을 억제하는 항체이다. 당해 항체는 예를 들면, 주사 한지 적어도 6주 후 양 모델에서 회충(Ascaris) 항원에의 노출에 대한 주사 후 보호 효과를 부여할 수 있다.
한 양태에서, IL-13 결합제를 기타 치료제와 함께 배합하여 투여한다. 배합 치료는 본원에 상세히 기술한 바와 같이, 하나 이상의 부가적 치료제, 예를 들면, 하나 이상의 사이토킨 및 성장 인자 억제제, 면역억제제, 소염제(예를 들면, 전신성 소염제), 대사 억제제, 효소 억제제 및/또는 세포독성제 또는 세포증식억제제와 공동제형화하고/하거나 공동투여되는 IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자를 포함할 수 있다. IL-13 결합제 및 기타 치료제는 개별적으로 투여할 수도 있다.
IL-13 결합제와 공동투여 및/또는 공동제형화할 수 있는 바람직한 부가 치료제의 예에는 흡입 스테로이드; 베타-효능제, 예를 들면, 단기-작용 또는 장기-작용 베타-효능제; 류코트리엔 또는 류코트리엔 수용체의 길항제; ADVAIRR과 같은 배합 약물; IgE 억제제, 예를 들면, 항-IgE 항체(예를 들면, XOLAIRR); 포스포디에스테라제 억제제(예를 들면, PDE4 억제제); 크산틴; 항콜린성 약물; 비만세포 안정제(예를 들면, 크로몰린); IL-4 억제제; IL-5 억제제; 에오탁신/CCR3 억제제; 및 항히스타민이 포함된다. 이러한 배합물은 천식 및 기타 호흡기 장애에 사용될 수 있다. IL-13 결합제와 공동투여 및/공동제형화될 수 있는 치료제의 추가의 예에는 TNF 길항제{예를 들면, TNF 수용체의 가용성 단편, 예를 들면, p55 또는 p75 사람 TNF 수용체 또는 이의 유도체, 예를 들면, 75kd TNFR-IgG(75kD TNF 수용체-IgG 융합 단백질, ENBRELTM)}; TNF 효소 길항제, 예를 들면, TNFα 전환 효소(TACE) 억제제; 무스카린성 수용체 길항제; TGF-β 길항제; 인터페론 감마; 페르페니돈; 화학치료제, 예를 들면, 메토트렉세이트, 레플루노미드, 또는 시롤리무스(라파마이신) 또는 이의 유사체, 예를 들면, CCI-779; COX2 및 cPLA2 억제제; NSAID; 면역조절제; p38 억제제, TPL-2 Mk-2 및 NFκB 억제제 등 중 하나 이상이 포함된다.
다른 측면에서, 본 출원은 약제학적으로 허용되는 담체 및 하나 이상의 IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자를 포함하는 조성물, 예를 들면, 약제학적 조성물을 제공한다. 한 양태에서, 조성물, 예를 들면, 약제학적 조성물은 2개 이상의 IL-13 결합제, 예를 들면, 2개 이상의 항-IL-13 항체 분자의 배합물을 포함한다. 본원에 기술된 바와 같은 IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자와 약물, 예를 들면, 치료제{예를 들면, 하나 이상의 사이토킨 및 성장 인자 억제제, 면역억제제, 소염제(예를 들면, 전신성 소염제), 대사 억제제, 효소 억제제 및/또는 세포독성제 또는 세포증식억제제의 배합물 또한 사용할 수 있다.
본 출원은 또한 본원에 기술된 IL-13 결합제 또는 이의 성분, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자, 예를 들면, 본원에 기술된 항체 분자의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산을 특징으로 한다. 예를 들면, 본 출원은 예를 들면, 본원에 기술된 바와 같은, 예를 들면, MJ 2-7 또는 C65 중 하나 이상에서 선택된 항-IL-13 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 각각 암호화하는 제1 및 제2 핵산을 특징으로 한다. 다른 측면에서, 본 출원은 본원에 기술된 핵산을 포함하는 숙주 세포 및 벡터를 특징으로 한다.
본 발명은 또한 예를 들면, MJ 2-7 또는 C65 중 하나 이상에 의해 인식되는 IL-13, 예를 들면, 사람 IL-13의 에피토프를 특징으로 한다. 예를 들면, 에피토프 를 포함하는 단백질 및 펩타이드를 사용하여 에피토프와 상호작용하는 기타 결합 화합물, 예를 들면, 항체 또는 소분자와 같은 단백질을 생산 또는 선별할 수 있다. 예를 들면, 에피토프를 포함하는 펩타이드를 면역원 또는 발현 라이브러리 선별용 표적으로 사용할 수 있다. 또한 지도화 또는 구조 결정에 의해 화합물의 펩타이드와의 상호작용 능력을 평가하거나, 성숙 IL-13과 관련하여, 화합물의 에피토프와의 상호작용 능력을 평가할 수 있다.
다른 측면에서, 본 출원은 IL-13과 동족 IL-13 결합 단백질, 예를 들면, IL-13 수용체 복합체, 예를 들면, IL-13Rα1 및 IL-4Rα를 포함하는 복합체, 또는 이의 아단위의 상호작용을 조절하는, 예를 들면, 방해하는(예를 들면, 억제, 차단 또는 그밖에 감소) 방법을 특징으로 한다. 조절은 생체내 또는 시험관 내에서 효과적일 수 있다. 기타 양태에서, IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자는 IL-13에 결합하며, IL-13과 IL-13 수용체 복합체의 아단위, 예를 들면, IL-13Rα1 또는 IL-4Rα의 개별적 상호작용, 예를 들면, 결합을 방해한다(예를 들면, 억제, 차단 또는 그밖에 감소시킴). 기타 양태에서, IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자는 IL-13에 결합하며, IL-13과 IL-13Rα1의 상호작용, 예를 들면 결합을 방해(예를 들면, 억제, 차단 또는 그밖에 감소)한다. 다른 양태에서, IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자는 IL-13에 결합하며, IL-13과 IL-13Rα1의 상호작용, 예를 들면, 결합을 방해(예를 들면, 억제, 차단 또는 그밖에 감소)한다. 통상적으로, 항-IL-13 항체 분자는 IL-13과 IL-13Rα1의 상호작용, 예를 들면, 결합을 방해(예를 들면, 억제, 차단 또는 그밖에 감소)한다.
다른 측면에서, 본 출원은 IL-13과 IL-13 수용체 단백질, 예를 들면, IL-13Rα1 또는 IL-13Rα2의 상호작용을 조절하는 방법을 특징으로 한다. 예를 들면, IL-13 결합제, 예를 들면, 본원에 기술한 제제를 IL-13과 IL-13Rα1 또는 IL-13Rα2 간의 결합을 감소 또는 억제하거나, IL-13Rα1 및 IL-4Rα을 포함하는 복합체(예를 들면, 본원에 기술된 바와 같은 복합체)의 형성을 감소시키는 데 사용할 수 있다. 당해 방법은 IL-13 결합제, 예를 들면, 본원에 기술된 단백질을 사용하여 IL-13과 IL-13을 포함하는 복합체를 접촉시키는 단계를 포함한다.
본 방법은 시험관 내 (예: 세포-유리 시스템)에서, 배양물 중에서, 예를 들어 시험관 내 또는 생체 외에서 세포에 사용될 수 있다. 예를 들면, IL-13 수용체-발현 세포를 배양 배지에서 시험관 내에서 배양할 수 있으며, 배양 배지에 IL-13 결합제를 첨가함으로써 접촉 단계를 개시할 수 있다. 대안적으로, 당해 방법을 피검체 내에 존재하는 세포 상에서, 예를 들면, 생체내 (예를 들면, 치료학적 또는 예방학적) 프로토콜의 일부로서 수행할 수 있다. 예를 들면, IL-13 결합제를 국소적으로 또는 전신적으로 전달할 수 있다.
당해 방법은 IL-13를 IL-13 수용체 복합체, 또는 이의 아단위 사이의 상호작용을 가능케 하는 조건하에 IL-13을 IL-13 수용체 복합체, 또는 이의 아단위와 접촉시켜 IL-13/IL-13 수용체 혼합체를 형성하는 단계를 포함할 수 있다. 일반적으로, IL-13 결합제는 예를 들면, 접촉한 IL-13/IL-13 수용체 혼합물을 조절, 예를 들면, IL-13과 수용체 단백질의 상호작용 또는 IL-13의 하나 이상의 기능, 예를 들면, IL-13 매개 시그널전달을 방해(예를 들면, 억제, 차단 또는 그밖에 감소)하기 에 유효한 양으로 제공한다.
다른 측면에서, 본 출원은 시험관 내의 샘플(예를 들면, 혈청, 혈장, 조직, 생검과 같은 생물학적 샘플)에서 IL-13의 존재를 검출하는 방법을 제공한다. 당해 방법은 장애, 예를 들면, 면역 세포-관련 장애를 진단하는 데 사용할 수 있다. 당해 방법은 (i) 샘플 또는 대조군 샘플을 IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자(예를 들면, 본원에 기술된 바와 같은)와 접촉시키는 단계; 및 (ii) IL-13 결합제와 샘플 또는 대조군 샘플 사이의 복합체 형성을 검출하는 단계(여기서, 샘플 내에서의 복합체 형성의 대조군 샘플에 비교하여 통계적으로 유의한 변화는 샘플 중 IL-13의 존재를 나타낸다)를 포함한다.
다른 측면에서, 본 출원은 생체 내에서의 IL-13 존재의 검출 방법(예를 들면, 피검체의 생체 내 영상화)을 제공한다. 당해 방법을 장애, 예를 들면, IL-13 관련 장애의 진단에 사용할 수 있다. 당해 방법은 (i) IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자(예를 들면, 본원에 기술된 바와 같은)를 결합제와 IL-의 결합을 가능케 하는 조건 하에 피검체 또는 대조군 피검체에 투여하는 단계; 및 (ii) 결합제와 IL-13 사이의 복합체 형성을 검출하는 단계(여기서, 샘플 내에서의 복합체 형성의 대조군 샘플에 비교하여 통계적으로 유의한 변화는 샘플 중 IL-13의 존재를 나타낸다)를 포함한다.
예를 들면, 항체 분자를 검출가능한 물질로 직접 또는 간접적으로 표지하여 결합된 또는 비결합된 항체의 검출을 촉진한다. 적합한 검출가능 물질에는 각종 효소, 보결분자단, 형광발광 물질, 발광 물질 및 방사성 물질이 포함된다.
제제, 예를 들면, 치료제 또는 세포독성제를 생체 내에서 IL-13-발현 세포에 전달 또는 표적화하는 방법 또한 개시한다.
한 측면에서, 본 발명은 당해 서열 또는 이의 기능적 단편을 포함하는 폴리펩타이드를 특징으로 한다:
SPVPPSTALKELIEELVNITQNQKAPLCNGSMVWSINLTAGVYCAALESLINVSGCSAIEKTQRMLNGFCPHKVSAGQFSSLRVRDTKIEVAQFVKDLLVHLKKLFREGQFN(서열번호 14).
당해 폴리펩타이드는 추가로 MALLLTMVIALTCLGGFASP(서열번호 127), 예를 들면, N-말단 시그널 서열을 포함할 수 있다. 예를 들면, 당해 폴리펩타이드는 사이노몰구스 원숭이로부터의 IL-13 단백질(본원에서, "NHP-IL-13")이다. NHP-IL-13은 성숙한 IL-13 단백질 또는 비-프로세싱된 전장 IL-13 단백질일 수 있다. 상기한 서열의 펩타이드, 예를 들면, 사람 IL-13의 상응하는 펩타이드와 상이한 펩타이드를 예를 들면, 면역원 또는 표적 화합물로 사용할 수 있다.
또한 상기한 하나 이상의 볼드체로 나타낸 위치에서는 사람 IL-13과 상이하지만, 상기한 비-볼드체 위치에서는 사람 IL-13과 동일한 관련 폴리펩타이드를 특징으로 한다. 예를 들면, 볼드체로 나타낸 위치 중 하나 이상은 알라닌이거나, 사이노몰구스 서열(상기한)의 상응하는 잔기 또는 사람 서열의 상응하는 잔기의 보존적 치환일 수 있다. 본 발명은 또한 예를 들면, 상기한 서열로부터의 5개 또는 6개 이상의 아미노산의 펩타이드를 특징으로 한다. 당해 펩타이드는 이종성 단백질(예를 들면, IL-13 이외의 단백질), 키메릭 단백질(예를 들면, 사람 IL-13)에 포함되거나 분리된 펩타이드, 예를 들면, 다른 서열을 포함하지 않은 펩타이드에 포 함될 수 있다. 당해 펩타이드는 또한 기타 화합물, 예를 들면, 담체와 융합 또는 접합될 수 있다. 한 양태에서, 당해 펩타이드는 사람 IL-13과 상이한 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함한다. 예시 펩타이드가 아래에 기술되어 있다.
또한 사이노몰구스 IL-13 서열 및 이의 변이체를 암호화하는 핵산의 특징이 기술되어 있다. 당해 폴리펩타이드를 사용하여 사이노몰구스 원숭이 IL-13, 임의로는, 또한 기타 종으로부터의 IL-13 단백질, 예를 들면, 사람 IL-13에 결합하는 IL-13 결합제를 제공할 수 있다.
한 측면에서, 본 발명은 사람 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 표적 결합 분자를 제공하는 방법을 특징으로 한다. 예를 들면, 표적 결합 분자는 항체 분자이다. 당해 방법은 적어도 비-사람 단백질 부위, 사람 표적 단백질의 상응 부위와 상동이지만(70, 75, 80, 85, 87, 90, 92, 94, 95, 96, 97 또는 98% 이상 동일한), 하나 이상의 아미노산(예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 9개 이상의 아미노산)이 상이한 부위를 포함하는 표적 단백질을 제공하는 단계; 당해 항원에 특이적으로 결합하는 결합제를 수득하는 단계; 및 결합제가 사람 표적 단백질에 특이적으로 결합하는지의 여부를 평가하거나 결합제의 사람 표적 단백질의 조절 활성에서의 효능을 평가하는 단계를 포함한다. 당해 방법은 추가로 당해 결합제(예를 들면, 항체 분자) 또는 유도체(예를 들면, 사람화된 항체 분자)를 사람 피검체에 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 한 양태에서, 사람 표적 단백질은 사이토킨, 예를 들면, 인터루킨, 예를 들면, IL-13 또는 IL-14이다. 비-사람 단백질은 비-사람 영장류, 예를 들면, 레수스 원숭이, 사이노몰구스 원숭이 또는 돼지꼬리 머카 크(macaque)로부터 유래한 것일 수 있다.
한 양태에서, 수득 단계는 단백질 발현 라이브러리, 예를 들면, 파아지 또는 리보좀 디스플레이 라이브러리를 사용하는 단계를 포함한다. 예를 들면, 당해 라이브러리는 Fab 또는 scFv와 같은 항체 분자를 디스플레이한다. 한 양태에서, 수득 단계는 면역원으로서 항체를 사용하여 동물을 면역화시키는 단계를 포함한다. 예를 들면, 동물은 설치류, 예를 들면, 마우스 또는 랫트일 수 있다. 당해 동물은 하나 이상의 사람 면역글로불린 유전자를 갖는 형질전환 동물일 수 있다.
본원에 언급된 모든 문헌, 특허 출원, 특허 및 기타 참조문헌은 이의 전문이 참조 인용되어 있다.
정의
본원에 사용된 바와 같은 용어 "IL-13 결합제"는 IL-13 단백질, 예를 들면, 포유동물 IL-13, 특히, 사람 또는 비-사람 영장류 IL-13과 결합하는 경계면을 포함하는 단백질(예를 들면, 다중쇄 폴리펩타이드, 폴리펩타이드) 또는 펩타이드와 같은 임의의 화합물을 지칭한다. 결합제는 일반적으로 5 x10-7M 미만의 Kd로 결합한다. 예시 IL-13 결합제는 항원 결합 부위를 포함하는 단백질, 예를 들면, 항체 분자이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "항체 분자"는 하나 이상의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하는 단백질을 지칭한다. 용어 항체 분자는 예를 들면, 전장, 성숙 항체 및 항체의 항원 결합 단편을 포함한다. 예를 들면, 항체 분자는 중(H)쇄 가변 도메인 서열(본원에서는 VH로 약칭함), 및 경(L)쇄 가변 도메인 서열(본원에서는 VL로 약칭함)을 포함할 수 있다. 다른 예에서, 항체 분자는 2개의 중(H)쇄 가변 도메인 서열 및 2개의 경(L)쇄 가변 도메인 서열을 포함하며, 이에 따라 2개의 항원 결합 부위를 형성한다. 항원 결합 단편의 예에는 (i) Fab 단편, VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 일가 단편; (ii) F(ab')2 단편, 힌지 영역에서 이황화결합으로 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 이가 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (iv) 항체 단일 암(arm)의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편; (v) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편; (vi) 카멜리드(camelid) 또는 카멜화된(camelized) 가변 도메인; 및 (vii) 단일 쇄 Fv(scFv)가 포함된다.
VH 및 VL 영역은 추가로 보다 보존되고, "주쇄 영역"(FR)으로 지칭되는 영역들이 산재된 "상보성 결정 영역"(CDR)로 지칭되는, 초가변성 영역으로 세분할 수 있다. 주쇄 영역 및 CDR의 범위는 다수의 방법(예를 들면, 문헌[참조: 카뱃, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; 초티아, C. et al. (1987) J. MoI. Biol. 196:901-917]); 및 옥스포드 분자 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 사용된 AbM 정의에 의해 정확하게 정의되었다. 일반적으로, 예를 들면, 문헌[Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains. In: Antibody Engineering Lab Manual (Ed.: Duebel, S. and Kontermann, R., Springer-Verlag, Heidelberg)]을 참조한다. 일반적으로, 구체적으로 제시되지 않는 한, 다음의 정의를 사용한다: 중쇄 가변 도메인 도메인 의 CDR1의 AbM 정의 및 기타 CDR에 대한 카뱃 정의. 추가로, 카뱃 또는 AbM CDR에 대하여 기술된 본 발명의 양태는 또한 초티아 초가변 루프를 사용하여 수행할 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 통상적으로 다음의 순서로 아미노- 말단에서 카복시-말단까지 정렬된 3개의 CDR 및 4개의 FR을 포함한다: FR1, CDR1. FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
본원에 사용된 바와 같은 "면역글로불린 가변 도메인 서열"은 면역글로불린 가변 도메인의 구조를 형성할 수 있는 아미노산 서열을 지칭한다. 예를 들면, 당해 서열은 천연 발생 가변 도메인의 아미노산 서열 모두 또는 이의 일부를 포함할 수 있다. 예를 들면, 당해 서열은 1 또는 2개 이상의 N- 또는 C- 말단 아미노산을 포함하거나 포함하지 않을 수 있거나, 단백질 구조의 형성과 양립하는 기타 변형을 포함할 수 있다.
용어 "항원 결합 부위"는 IL-13, 예를 들면, 포유동물 IL-13, 예를 들면, 사람 또는 비-사람 영장류 IL-13, 또는 이의 에피토프에 결합하는 경계면을 형성하는 결정인자를 포함하는 IL-13 결합제의 일부를 지칭한다. 단백질(또는 단백질 모방체)에 대하여, 항원 결정 부위는 통상적으로 IL-13에 결합하는 경계면을 형성하는 1개 이상의 루프(4개 이상의 아미노산 또는 아미노산 모방체의)를 포함한다. 통상적으로, 항체 분자의 항원 결합 부위는 1개 또는 2개 이상의 CDR, 또는 보다 통상적으로는 3개, 4개, 5개 또는 6개 이상의 CDR을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "모노클로날 항체" 또는 "모노클로날 항체 조성물"은 단일 분자 조성물의 항체 분자의 제제를 지칭한다. 모노클로날 항체 조성 물은 특정 에피토프에 대한 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타낸다. 모노클로날 항체는 하이브리도마 기법 또는 하이브리도마 기법을 사용하지 않는 방법(예를 들면, 재조합 방법)으로 제조할 수 있다.
"효과적 사람" 단백질은 중화 항체 반응, 예를 들면, 사람 항-쥐 항체(HAMA) 반응을 유발하지 않는 단백질이다. HAMA는 예를 들면, 만성 또는 재발 질병 질환의 치료에서, 예를 들면, 항체 분자를 반복적으로 투여하는 경우 다수의 상황에서 문제가 될 수 있다. HAMA 반응은 혈청으로부터의 증가된 항체 제거(예를 들면, 문헌[Saleh et al., Cancer Immunol. Immunother., 32:180-190 (1990)] 참조) 및 또한 잠재적 알러지 반응(예를 들면, 문헌[LoBuglio et al., Hybridoma, 5:5117-5123 (1986)]) 때문에 반복적 항체 투여를 잠재적으로 비효과적으로 만들 수 있다.
용어 "분리된"은 실질적으로 이의 자연 환경으로부터 유리된 분자를 지칭한다. 예를 들면, 분리된 단백질은 실질적으로 그것이 유래한 세포 또는 조직원으로부터의 세포성 물질 또는 기타 단백질을 가지지 않는다. 당해 용어는 분리된 단백질이 치료학적 조성물로 투여할 수 있을 정도로 충분히 순수하거나, 70% 내지 80%(w/w) 이상, 보다 바람직하게는, 80% 내지 90%(w/w) 이상, 보다 바람직하게는, 90 내지 95% 이상; 및 가장 바람직하게는, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%(w/w) 이상 순수한 제제를 지칭한다. "단리된" 화합물은 당해 화합물을 수득한 샘플의 하나 이상의 성분의 90% 이상이 제거된 화합물을 지칭한다. 본원에 기술된 임의의 화합물을 분리된 또는 단리된 화합물로 제공할 수 있다.
"에피토프"는 결합제, 예를 들면, 항체 분자에 의해 결합된 표적 화합물 상 의 부위를 지칭한다. 에피토프는 선형 또는 입체배좌 에피토프, 또는 이의 배합일 수 있다. 표적 화합물이 단백질인 경우, 예를 들면, 에피토프는 결합제에 의해 결합된 아미노산을 지칭할 수 있다. 중첩 에피토프는 하나 이상의 공통의 아미노산 잔기를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "낮은 엄중성, 중간 엄중성, 높은 엄중성 또는 매우 높은 엄중성 조건 하에 하이브리드화하다"는 하이브리드화 및 세척 조건을 기술한다. 하이브리드화 반응의 수행 지침은 문헌[참조: Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6]에서 찾을 수 있다. 수성 및 비수성 방법이 참조로 기술되어 있으며 어느 것이든 사용할 수 있다. 본원에 지칭된 특이적 하이브리드화 조건은 다음과 같다: 1) 약 45℃에서 6X 염화나트륨/시트르산나트륨(SSC), 이후 50℃ 이상에서(세척 온도는 낮은 엄중성 조건에서 55℃까지 증가시킬 수 있다) 0.2X SSC, 0.1% SDS에서 2회 세척의 낮은 엄중성 하이브리드화 조건; 2) 약 45℃에서 6X SSC, 이후 60℃에서 0.2X SSC, 0.1% SDS에서 1회 이상 세척의 중간 엄중성 하이브리드화 조건; 3) 약 45℃에서 6X SSC, 이후 65℃에서 0.2X SSC, 0.1% SDS 중 1회 이상 세척의 높은 엄중성 하이브리드화 조건; 및 바람직하게는 4) 65℃에서 0.5M 인산나트륨, 7% SDS, 이후 65℃에서 0.2X SSC, 0.1% SDS에서 1회 이상 세척의 매우 높은 엄중성 하이브리드화 조건. 매우 높은 엄중성 조건(4)이 바람직한 조건이며 달리 언급되지 않는 한 이것을 사용한다.
"IL-13 관련 장애"는 IL-13이 당해 장애의 병리학 또는 증상에 기여하는 것 이다. 따라서, IL-13 결합제, 예를 들면, 하나 이상의 IL-13 관련 활성의 길항제인 IL-13 결합제를 당해 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용할 수 있다.
용어 "IL-13"은 당해 분야에 IL-13(종 기원에 관계없이, 그리고 포유동물, 예를 들면, 사람 및 비-사람 영장류 IL-13을 포함하는)으로 공지된 사이토킨의 전장 비-프로세싱 형태 및 이의 성숙한 프로세싱된 형태, 및 임의의 단편(5개 이상의 아미노산) 또는 이러한 사이토킨의 변이체를 포함한다. IL-13 서열 내의 위치를 전장, 비-프로세싱된 사람 IL-13 서열에 대한 번호매김에 따라 명시할 수 있다. 예시 전장 원숭이 IL-13에 대해서는 서열번호 24를 참조하고; 성숙한 프로세싱된 원숭이 IL-13에 대해서는 서열번호 14를 참조하고; 전장 사람 IL-13에 대해서는 서열번호 178을 참조하고; 성숙한 프로세싱된 사람 IL-13에 대해서는 서열번호 124를 참조한다. 예시 서열이 다음과 같이 언급된다:
MALLLTTVIALTCLGGFASPGPVPPSTALRELIEELWITQNQKAPLCNGSMVW
SINLTAGMYCAALESLNVSGCSAIEKTQRMLSGFCPHKVSAGQFSSLHVRDTK
EVAQFVKDLLLHLKKLFREGRFN (서열번호 178)
예를 들면, 위치 130은 통상적인 다형성(polymorphism)의 부위이다.
IL-13 수용체 단백질(예를 들면, IL-13Rα1 및 IL-13Rα2)의 예시 서열이 예를 들면, 문헌[참조: Donaldson et al. (1998) J Immunol. 161:2317-24; 미국 특허 제6,214,559호; 미국 특허 제6,248,714호; 및 미국 특허 제6,268,480호]에 기술되어 있다.
도 1a는 전장 사람 및 사이노몰구스 원숭이 IL-13의 배열, 각각 서열번호 178 및 서열번호 14이다.
도 1b는 사이노몰구스 원숭이 IL-13으로부터의 예시 펩타이드의 목록이다(각각 서열번호 179 내지 188).
도 2는 CD23+ 단핵구의 비율(y-축)로 측정한 바에 따른, 각종 IL-13 결합제에 의한 NHP IL-13 활성의 중화를 나타내는 그래프이다. MJ 2-7(Δ), C65(◆) 및 sIL-13Rα2-Fc(●)의 농도는 x-축 상에 나타내어져 있다.
도 3은 MJ2-7(쥐; ●) 또는 사람화된 MJ2-7 v2.11(○)에 의한 NHP IL-13 활성의 중화를 나타내는 그래프이다. NHP IL-13 활성을 항체 농도의 함수(x-축)로서 STAT6의 인산화(y-축)로 측정하였다.
도 4는 MJ2-7 v2.11(○) 또는 sIL-13Rα2-Fc(▲)에 의한 NHP IL-13 활성의 중화를 나타내는 그래프이다. NHP IL-13 활성은 길항제 농도의 함수(x-축)로서 STAT6의 인산화(y-축)로 측정하였다.
도 5는 MJ 2-7(Δ), C65(◆) 또는 sIL-13Rα2-Fc(●)에 의한 NHP IL-13 활성의 중화를 나타내는 그래프이다. NHP IL-13 활성은 길항제 농도의 함수(x-축)로서 STAT6의 인산화(y-축)로 측정하였다.
도 6a는 천연 사람 IL-13(x-축)에 의한 테나신 생산(y-축)의 유도를 나타내는 그래프이다.
도 6b는 항체 농도의 함수(x-축)로서 테나신 생산(y-축) 유도의 억제로 측정한, MJ2-7에 의한 NHP IL-13 활성의 중화를 나타내는 그래프이다.
도 7은 SPR 칩에 커플링된 sIL-13Rα2-Fc에 결합된 NHP-IL-13에 대한 MJ2-7 또는 대조군 항체의 결합을 나타내는 그래프이다.
도 8은 포획된 hMJ2-7 V2-11 항체에 대한 가변 농도(0.09-600nM)의 NHP IL-13의 결합을 나타내는 그래프이다.
도 9는 마우스 MJ2-7(●) 또는 사람화 형태 1(○), 형태 2(◆) 또는 형태 3(Δ) 항체에 의한 NHP IL-13 활성의 중화를 나타내는 그래프이다. NHP IL-13 활성은 항체 농도의 함수(x-축)로서 STAT6의 인산화(y-축)로 측정하였다.
도 10은 마우스 MJ2-7 VH 및 VL(●), 마우스 VH 및 사람화 형태 2 VL(Δ), 또는 2형 VH 및 VL(◆)을 포함하는 항체에 의한 NHP IL-13 활성의 중화를 나타내는 그래프이다. NHP IL-13 활성은 항체 농도의 함수(x-축)로서 STAT6(y-축)의 인산화로 측정하였다.
도 11a 및 11b는 ELISA로 측정한 바에 따른, MJ 2-7 항체에 의한 고정화된 IL-13 수용체에 대한 IL-13의 결합의 억제를 나타내는 그래프이다. 결합은 450nm의 흡광도로 나타내어져 있다(y-축). MJ2-7 항체의 농도는 x-축 상에 나타내어져 있다. 도 11a는 IL-13Rα1에 대한 결합을 나타낸다. 도 11b는 IL-13Rα2에 대한 결합을 나타낸다.
도 12는 DPK18 배선 아미노산 서열(서열번호 193) 및 사람화된 MJ2-7 3형 VL(서열번호 190)의 배열이다.
도 13a는 성숙한 프로세싱된 사람 IL-13의 아미노산 서열(서열번호 124)이다.
도 13b는 사람 IL-13Rα1의 아미노산 서열(서열번호 125)이다.
IL-13에 특이적으로 결합하고 IL-13의 IL-13 수용체 및 시그널전달 매개체와의 상호작용 능력을 조절하는 결합제(예를 들면, 항-IL-13 항체 분자)를 개시한다. 당해 제제는 하나 이상의 IL-13-관련 활성을 조절(예를 들면, 억제)하는 데 사용할 수 있다. IL-13 결합제(예를 들면, 본원에 기술한 바와 같은)를 사용하여 하나 이상의 IL-13-관련 활성을 예를 들면, 생체 내에서 조절하여 예를 들면, IL-13-매개장애(예를 들면, 천식, 기도 염증, 아토피성 장애, 알러지 반응, 호산구증가증, 섬유증 및 IL-13 관련 암)를 치료 또는 예방할 수 있다.
항-IL-13 항체 분자
항체 분자를 수득하기 위해 다수의 방법을 사용할 수 있다. 한 예시적 방법에는 단백질 발현 라이브러리, 예를 들면, 파아지 또는 리보좀 디스플레이 라이브러리의 선별이 포함된다. 파아지 디스플레이는 예를 들면, 문헌[참조: Ladner et al., 미국 특허 제5,223,409호; Smith(1985) Science 228:1315-1317; 국제공개공보 제92/18619호; 국제공개공보 제91/17271호 ; 국제공개공보 제92/20791호; 국제공개공보 제92/15679호; 국제공개공보 제93/01288호; 국제공개공보 제92/01047호; 국제공개공보 제92/09690호; 및 국제공개공보 제90/02809호에 기술되어 있다. 디스플레이 라이브러리의 사용 이외에, 다른 방법을 사용하여 항-IL-13 항체 분자를 수득할 수 있다. 예를 들면, IL-13 단백질 또는 이의 펩타이드를 비-사람 동물, 예를 들면, 설치류, 예를 들면, 마우스, 햄스터 또는 랫트에서 항원으로 사용할 수 있다.
한 양태에서, 비-사람 동물은 적어도 사람 면역글로불린 유전자의 일부를 포함한다. 예를 들면, 사람 Ig 유전자좌의 거대 단편을 갖는 마우스 항체 생산 능력이 결핍된 마우스 종을 조작할 수 있다. 하이브리도마 기법을 사용하여, 목적하는 특이성을 갖는 유전자로부터 유래한 항원-특이적 모노클로날 항체를 제조 및 선별할 수 있다. 예를 들면, 문헌[XENOMOUSETM, Green et al. (1994) Nature Genetics 7:13-21, 미국 특허 제2003-0070185호, 1996년 10월 31일자로 발표된 국제공개공보 제96/34096호, 및 1996년 4월 29일자로 제출된 PCT 출원 제PCT/US96/05928호]을 참조한다.
다른 양태에서, 모노클로날 항체를 비-사람 동물로부터 수득한 후, 변형, 예를 들면, 사람화 또는 탈면역화시킨다. Winter는 본원에 기술된 사람화된 항체를 제조하기 위해 사용할 수 있는 예시적 CDR-이식 방법을 기술한다(미국 특허 제5,225,539호). 특정한 사람 항체의 모든 CDR을 적어도 비-사람 CDR의 일부로 대체될 수 있거나, 당해 CDR의 오직 일부만이 비-사람 CDR로 대체될 수 있다. 오직 사람화된 항체의 소정의 항원에 대한 결합에 필요한 수의 CDR을 대체하는 것만이 필요하다.
사람화된 항체는 항원 결합에 직접적으로 관여하지 않는 Fv 가변 도메인의 서열을 사람 Fv 가변 도메인으로부터의 동등한 서열로 대체함으로써 제조할 수 있다. 사람화된 항체 분자를 제조하는 예시적 방법은 문헌[참조: Morrison(1985) Science 229: 1202-1207]; Oi et al.(1986) BioTechniques 4:214; 및 미국 특허 제5,585,089호; 미국 특허 제5,693,761호; 미국 특허 제5,693,762호; 미국 특허 제5,859,205호; 및 미국 특허 제6,407,213호]에 제공되어 있다. 이들 방법은 하나 이상의 중쇄 또는 경쇄로부터의 면역글로불린 Fv 가변 도메인 전부 또는 이의 일부를 암호화하는 핵산 서열을 분리, 조작 및 발현시키는 단계를 포함한다. 이러한 핵산은 상기한 바와 같은 소정의 표적에 대한 항체를 생산하는 하이브리도마, 및 기타 공급원으로부터 수득할 수 있다. 이어서 사람화된 항체 분자를 암호화하는 재조합 DNA를 적합한 발현 벡터 내로 클로닝시킬 수 있다.
IL-13 결합 항체 분자는 또한 사람 T 세포 에피토프의 특이적 결실로 변형시키거나 국제공개공보 제98/52976호 및 국제공개공보 제00/34317호에 개시된 방법으로 "탈면역화"시킬 수 있다. 요약하면, 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 제II형 MHC에 결합하는 펩타이드에 대하여 분석할 수 있으며, 이들 펩타이드는 잠재적 T-세포 에피토프(국제공개공보 제98/52976호 및 국제공개공보 제00/34317호에 정의된 바와 같은)를 나타낸다. 잠재적 T-세포 에피토프의 검출을 위하여, "펩타이드 스레딩(threading)"으로 지칭되는 컴퓨터 모델링 방법을 적용할 수 있으며, 사람 제II형 MHC 결합 펩타이드의 데이타베이스 이외에 국제공개공보 제98/52976호 및 국제공개공보 제00/34317호에 기술된 바와 같은, VH 및 VL 서열에 존재하는 모티브를 찾을 수 있다. 이들 모티브는 18개의 제II형 주 MHC DR 동종이형 중 어느 하나에 결합하며, 이에 따라 잠재적 T 세포 에피토프를 구성한다. 검출된 잠재적 T-세포 에피토프는 가변 도메인의 소수의 아미노산 잔기를 치환하거나, 바람직하게는, 단일 아미노산을 치환하여 제거할 수 있다. 통상적으로, 보존적 치환을 가한다. 흔히, 사람 배선 항체 서열의 위치에 흔한 아미노산을 사용할 수 있지만, 전적으로 그러하지는 않다. 사람 배선 서열이 예를 들면, 문헌[참조: Tomlinson, et al. (1992) J. MoI. Biol. 227:776-798; Cook, G. P. et al. (1995) Immunol. Today Vol. 16(5): 237-242; 초티아, D. et al. (1992) J. MoI. Biol. 227:799-817; 및 Tomlinson et al. (1995) EMBO J. 14:4628-4638])에 개시되어 있다. V BASE 자료실은 사람 면역글로불린 가변 도메인 서열의 포괄적 자료실{단백질 공학 MRC 센터(영국 캠브릿지 소재)의 Tomlinson, I.A. 등에 의해 편찬된}을 제공한다. 이들 서열은 예를 들면, 주쇄 영역 및 CDR에 대한 사람 서열의 공급원으로 사용될 수 있다. 컨센서스 사람 주쇄 영역 또한 예를 들면, 미국 특허 제6,300,064호에 기술된 바와 같이 사용할 수 있다.
추가로, 키메릭, 사람화된 및 단일쇄 항체 분자(예를 들면, 사람 및 비사람 부위 둘 다를 포함하는 단백질)을 표준 재조합 DNA 기법을 사용하여 제조할 수 있다. 사람화된 항체는 또한 예를 들면, 사람 중쇄 및 경쇄 유전자는 발현하지만, 내인성 마우스 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 유전자는 발현할 수 없는 형질전환 마우스를 사용하여 제조할 수 있다.
추가로, 본원에 기술된 항체 분자는 또한 기능적 IL-13 시그널전달 복합체의 형성을 방해하고, 중쇄의 불변 영역에 돌연변이를 갖는, IL-13에 결합하는 것들이 포함된다. 때로는 당해 불변 영역의 특정 단편을 돌연변이 및 불활성화시키는 것이 바람직하다. 예를 들면, 중쇄 불변 영역을 돌연변이시켜 Fc 수용체(FcR) 및/또는 보체에 대한 감소된 결합력을 갖는 항체를 제조할 수 있으며; 이러한 돌연변이는 당해 분야에 널리 공지되어 있다. IgG의 중쇄 불변 영역의 아미노산에 대한 이러한 돌연변이의 예가 서열번호 128에 제공되어 있다. CL 및 CH 아단위(예를 들면, CH1)의 특정 활성 단편을 서로에 대해 공유 결합시킨다. 추가의 측면은 기능적 IL-13 시그널전달 복합체 형성에 참여하는 IL-13의 표면에 특이적인 항원-결합 부위를 수득하는 방법을 제공한다.
예시적 항체 분자는 서열번호 30 내지 46으로 나타낸 VL 쇄의 서열, 및/또는 서열번호 50 내지 115로 나타낸 VH 쇄의 서열을 포함할 수 있을 뿐 아니라, IL-13 결합 능력을 유지하는 이들 서열의 변이체도 포함할 수 있다. 이러한 변이체는 당해 분야에 널리 공지된 기법을 사용하여 제공된 서열로부터 유도할 수 있다. 아미노산 치환, 결실 또는 첨가를 FR 또는 CDR에 가할 수 있다. 주쇄 영역에의 변화는 일반적으로 항체 분자의 안정성을 개선하고 면역원성을 감소시키도록 설계하는 반면, CDR 내에서의 변화는 일반적으로 이의 표적에 대한 항체 분자의 친화성을 증가시키도록 설계한다. 이러한 친화성-증가 변화는 통상적으로 CDR 영역을 변경시키고 항체 분자를 검사함으로써 경험적으로 결정한다. 이러한 변형은 문헌[참조: Antibody Engineering, 2nd. ed.(1995), ed. Borrebaeck, Oxford University Press]에 기술된 방법에 따라 가할 수 있다.
본원에 기술된 중쇄 가변 도메인 서열의 변이체인 중쇄 가변 도메인 서열을 수득하는 예시적 방법은 본원에 기술된 중쇄 가변 도메인 서열의 하나 이상의 아미노산을 첨가, 결실, 치환 또는 삽입하는 단계, 임의로는 당해 중쇄 가변 도메인 서열과 하나 이상의 경쇄 가변 도메인 서열을 결합시키는 단계, 및 IL-13에 대한 특이적 결합을 위한 변경된 중쇄 가변 도메인 서열을 포함하는 단백질을 검사하는 단계, 및(바람직하게는) 이러한 항원-결합 영역의 하나 이상의 IL-13 관련 활성 조절 능력을 검사하는 단계를 포함한다. 유사한 방법은 본원에 기술된 경쇄 가변 도메인 서열의 하나 이상의 서열 변이체의 사용 단계를 사용할 수 있다.
항체 분자의 변이체는 하나 이상의 변형 CDR을 사용하여 라이브러리를 제작하고, IL-13에, 예를 들면, 개선된 친화성으로 결합하는 구성원을 찾기 위해 라이브러리를 선별함으로써 제조할 수 있다. 예를 들면, Marks 등(문헌[참조: Bio/Technology (1992) 10:779-83])은 CDR3가 결핍된 VH 가변 도메인의 레퍼토리를 제공하기 위해 당해 가변 도메인 범위의 5' 말단을 향한 또는 그에 인접한 컨센서스 프라이머를 사람 VH 유전자의 제3 주쇄 영역의 컨센서스 프라이머와 접합시키는 데 사용하는, 항체 불변 도메인 레퍼토리의 제조 방법을 기술한다. 당해 레퍼토리를 특정 항체의 CDR3와 결합시킬 수 있다. 추가로, CDR3-유래 서열을 CDR3가 결핍된 VH 또는 VL 영역의 레퍼토리로 셔플링(shuffling)할 수 있고, 셔플링된 완전 VH 또는 VH 영역을 동족 VL 또는 VH 영역과 결합하여 특이적 항원-결합 단편을 제공할 수 있다. 이어서 당해 레퍼토리를 국제공개공보 제92/01047호의 파아지 디스플레이 시스템과 같은 적합한 숙주 시스템에서 디스플레이하여, 적합한 항원-결합 단편을 선별할 수 있다. 유사 교체 또는 결합 기법 또한 Stemmer(문헌[참조: Nature (1994) 370:389-91])에 의해 개시되어 있다. 추가의 대안 방법은 하나 이상의 선별된 VH 및/또는 VL 유전자를 사용하여 변형된 VH 또는 VL 영역을 제조하여 전체 가변 도메인 내에 돌연변이를 발생시키는 것이다. 예를 들면, 문헌[Gram et al. Proc. Nat. Acad. Sci. USA (1992) 89:3576-80]을 참조한다.
사용할 수 있는 다른 방법은 VH 또는 VL 유전자의 CDR 영역으로 돌연변이유발을 지시하는 것이다. 이러한 기법은 예를 들면, Barbas 등(문헌[참조: Proc. Nat. Acad. ScL USA (1994) 91:3809-13]) 및 Schier 등(문헌[참조: J. MoI. Biol. (1996) 263:551- 67])에 의해 개시되어 있다. 유사하게는, 하나 이상, 또는 3개 모든 CDR을 VH 또는 VL 영역, 또는 심지어 임의의 기타 스캐폴드(피브로넥틴 영역과 같은)의 레퍼토리로 이식할 수 있다. 수득된 단백질은 IL-13에 대한 결합 능력을 평가한다.
한 양태에서는, 표적에 결합하는 결합제를 예를 들면, 돌연변이를 유발하여 변형시켜 변형된 결합제의 풀(pool)을 제공한다. 이어서 변경된 결합제를 변경된 기능적 특성(예를 들면, 개선된 결합력, 개선된 안정성, 생체 내에서의 연장된 안정성)을 갖는 하나 이상의 변경된 결합제를 확인한다. 한 실시양태에서, 디스플레이 라이브러리 기법을 사용하여 변경된 결합제 풀을 선택 또는 선별한다. 이어서 고친화성 결합제를 예를 들면, 높은 엄중성 또는 보다 경쟁적인 결합 및 세척 조건을 사용하여 제2 라이브러리로부터 확인해 낸다. 기타 선별 기법 또한 사용할 수 있다.
일부 양태에서, 돌연변이유발은 공지된 영역 또는 결합 경계면에 존재할 법한 영역으로 표적화된다. 예를 들면, 확인된 결합제가 항체 분자인 경우, 본원에 기술된 바와 같은 중쇄 또는 경쇄의 CDR 영역에 돌연변이유발을 지시할 수 있다. 추가로, 돌연변이유발은 CDR 근처 또는 이에 인접한 주쇄 영역, 예를 들면, 특히 CDR 접합부의 10, 5 또는 3개 아미노산 내의 주쇄 영역으로 지시할 수 있다. 항체의 경우, 돌연변이유발은 또한 예를 들면, 단계별 개선을 위해 1개 미만의 CDR로 제한시킬 수 있다.
한 양태에서, 돌연변이유발을 사용하여 하나 이상의 배선 서열과 보다 유사한 항체를 제조할 수 있다. 예시적 배선화(germling) 방법은 분리된 항체의 서열과 유사한(예를 들면, 특정 데이타베이스에 가장 유사한) 하나 이상의 배선 서열을 확인하는 단계를 포함할 수 있다. 이어서 분리된 항체에 돌연변이(아미노산 수준에서)를 증가적으로, 또는 조합적으로 또는 그 둘 다로 가할 수 있다. 예를 들면, 일부 또는 모든 가능한 배선 돌연변이를 암호화하는 서열을 포함하는 핵산 라이브러리를 제조한다. 이어서 돌연변이된 항체를 예를 들면, 분리된 항체에 비교하여 하나 이상의 부가적 배선 잔기를 가지며 여전히 유용한(예를 들면, 기능적 활성을 갖는) 항체를 확인하기 위하여 평가한다. 한 양태에서, 가능한 많은 배선 잔기를 분리된 항체 내로 도입한다.
한 양태에서, 돌연변이유발을 사용하여 CDR 영역 내로 하나 이상의 배선 잔기를 치환 또는 삽입할 수 있다. 예를 들면, 배선 CDR 잔기는 변형시킬 가변 도메인과 유사한(예를 들면, 가장 유사한) 배선 서열로부터의 것일 수 있다. 돌연변이유발 후, 당해 항체의 활성(예를 들면, 결합 또는 기타 기능적 활성)을 평가하여 당해 배선 잔기 또는 잔기들이 허용되었는지의 여부를 결정할 수 있다. 유사한 돌연변이유발을 당해 주쇄 영역에서 수행할 수 있다.
배선 잔기 선택은 상이한 방법들로 수행할 수 있다. 예를 들면, 배선 서열은 선택성 또는 유사성에 대한 소정의 기준, 예를 들면, 적어도 특정 비율의 동일성, 예를 들면, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 99.5%의 동일성을 충족하는지의 여부에 따라 선택할 수 있다. 이러한 선택은 2, 3, 5 또는 10개 이상의 배선 서열을 사용하여 수행할 수 있다. CDR1 및 CDR2의 경우, 유사 배선 서열의 확인은 이러한 서열 하나를 선택하는 단계를 포함할 수 있다. CDR3의 경우, 유사 배선 서열의 확인은 이러한 서열 하나를 선택하는 단계를 포함할 수 있지만, 아미노-말단 부위 및 카복시-말단 부위에 개별적으로 기여하는 2개의 배선 서열을 사용하는 단계도 포함할 수 있다. 기타 이행에서는, 하나 또는 2개 이상의 배선 서열을 사용하여 예를 들면, 컨센서스 서열을 형성한다.
다른 양태에서, 항체를 변형시켜 변경된 글리코실화 패턴(즉, 원형 또는 천연 글리코실화 패턴으로부터 변형된)을 갖게 할 수 있다. 이러한 범주에서 사용된 바와 같은 "변형된"은 결실된 하나 이상의 탄수화물 잔기를 가짐, 및/또는 원형 항체에 첨가된 하나 이상의 글리코실화 위치를 가짐을 의미한다. 글리코실화 위치의 현재 개시된 항체로의 첨가는 아미노산 서열을 글리코실화 위치 컨센서스 서열을 포함하도록 변형시킴으로써 수행할 수 있으며; 이러한 기법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 당해 항체 상의 다수의 탄수화물 잔기를 증가시키는 기타 방법은 글리코시드의 항체의 아미노산 잔기로의 화학적 또는 효소적 커플링에 의한 것이다. 이들 방법은 예를 들면, 국제공개공보 제87/05330호, 및 문헌[참조: Aplin and Wriston (1981) CRC Crit. Rev. Biochem. 22:259-306]에 기술되어 있다. 당해 항체 상에 존재하는 탄수화물 잔기의 제거는 당해 분야에 기술된 바와 같이 화학적 또는 효소적으로 수행할 수 있다(문헌[참조: Hakimuddin등 (1987) Arch. Biochem. Biophys. 259:52; Edge et al. (1981) Anal. Biochem. 118:131; and Thotakura et al. (1987) Meth. Enzymol. 138:350]). 예를 들면, 구제(salvage) 수용체 결합 에피토프를 제공함으로써 생체 내 반감기를 증가시키는 변형에 대한 문헌, 예를 들면, 미국 특허 제5,867,046호를 참조한다.
한 양태에서, 항체 분자는 MJ 2-7 또는 C65의 것과 단지 불충분하게 상이한 CDR 서열을 갖는다. 불충분한 차이는 CDR(예를 들면, 초티아 또는 카뱃 CDR)의 서열의 통상적으로 5개 내지 7개의 아미노산 중 1개 또는 2개의 치환과 같은 소수의 아미노산 변화를 포함한다. 통상적으로, 아미노산은 유사한 전하, 소수성 또는 입체화학적 특성을 갖는 관련 아미노산으로 치환한다. 이러한 치환은 당해 분야의 숙련 기술에 포함된다. CDR에서와 달리, 구조 주쇄 영역(FR) 내에서의 보다 현저한 변화를 항체의 결합 특성에 부적인 영향을 주지 않으면서 가할 수 있다. FR에 대한 변화는 비사람-유래 주쇄의 사람화 또는 항원 접촉에 중요하거나 결합 부위 안정화에 중요한 특정 주쇄 잔기를 조작하는{예를 들면, 불변 도메인의 부류 또는 하위부류를 변경하건, Fc 수용체 결합과 같은 효과기 작용을 변형시킬 수 있는 특이적 아미노산 잔기를 변경하거나(문헌[참조: Lund et al. (1991) J. Immunol. 147:2657-62; Morgan et al.(1995) Immunology 86:319-24]), 당해 불변이 유래한 종을 변경함} 단계를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 항체는 효과기 작용, 예를 들면, Fc 수용체 결합 및 보체 활성화를 감소 또는 변형시키는 중쇄 CH2 영역 내의 돌연변이를 가질 수 있다. 예를 들면, 항체는 미국 특허 제5,624,821호 및 제5,648,260호에 기술된 바와 같은 돌연변이를 가질 수 있다. 예를 들면, IgG1 또는 IgG2 중쇄에, 이러한 돌연변이를 가하여 서열번호 17로 나타낸 아미노산 서열과 유사하게 할 수 있다. 항체는 또한 면역글로불린의 두 중쇄 사이의 이황화결합을 안정화시키는 돌연변이(예를 들면, 당해 분야에 개시된 바와 같은, IgG4의 경첩 영역 내의 돌연변이)를 가질 수 있다(문헌[참조: Angal et al. (1993) MoI. Immunol. 30:105-08]).
IL-13 결합제는 온전한 항체, 항체의 항원-결합 단편, 예를 들면, Fab, F(ab')2, Fd, aAb 및 scFv 단편, 및 이들의 불변 및/또는 가변 도메인이 돌연변이된(예를 들면, 키메릭, 부분적으로 사람화된, 또는 전체적으로 사람화된 항체를 제조하기 위한 돌연변이, 및 목적하는 특성, 예를 들면, 향상된 IL-13 결합 및/또는 감소된 FcR 결합을 갖는 항체를 제조하기 위한 돌연변이) 온전한 항체 및 단편의 형태일 수 있다.
항체 생산. 일부 항체 분자, 예를 들면, Fab는 세균 세포, 예를 들면, 이. 콜라이(E. coli) 세포 내에서 제조할 수 있다. 예를 들면, Fab가 디스플레이 실체와 박테리오파아지 단백질(또는 이의 단편) 사이에 억제성 정지 코돈을 포함하는 파아지 디스플레이 벡터의 서열에 의해 암호화된 경우, 당해 벡터 핵산을 정지 코돈을 억제할 수 없는 세균 세포로 전달할 수 있다. 이러한 경우, Fab는 유전자 III 단백질에 융합되지 못하며 원형질막 및/또는 배지로 분비된다.
항체 분자는 또한 진핵세포에서 생산할 수도 있다. 한 양태에서, 항체(예를 들면, scFv)는 피키아(Pichia)(예를 들면, 문헌[Powers et al. (2001) J Immunol Methods. 251:123-35]을 참조한다), 한설라(Hanseula) 또는 사카로마이세스(Saccharomyces)와 같은 효모 세포에서 발현된다,
한 바람직한 양태에서는, 항체 분자를 포유동물 세포에서 제조한다. 클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 발현시키기 위한 바람직한 포유동물 숙주 세포에는 중국햄스터난소(CHO 세포)(예를 들면, 문헌[참조: Kaufman and Sharp (1982) MoI. Biol. 159:601-621]에 기술된 DHFR 선별 마커와 함께 사용되는, 문헌[참조: Urlaub and Chasin(1980 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220])에 기술된 dhfr - CHO 세포를 포함하여), 림프구 세포주, 예를 들면, NS0 골수종 세포 및 SP2 세포, COS 세포, 및 형질전환 동물, 예를 들면, 형질전환 포유동물로부터의 세포가 포함된다. 예를 들면, 당해 세포는 포유동물 상피 세포이다.
항체 분자를 암호화하는 핵산 서열 이외에, 재조합 발현 벡터는 숙주 세포에서 벡터의 복제를 조절하는 서열(예를 들면, 복제 기원) 및 선별 마커 유전자와 같은 추가의 서열을 수반할 수 있다. 당해 선별 마커 유전자는 벡터를 도입한 숙주 세포의 선별을 촉진한다(예를 들면, 미국 특허 제4,399,216호, 제4,634,665호 및 제5,179,017호를 참조한다). 예를 들면, 통상적으로 당해 선별 마커 유전자는 벡터를 도입한 숙주 세포에 약물(예를 들면, G418, 하이그로마아신 또는 메토트렉세이트)에 대한 내성을 부여한다.
항체 분자의 재조합 발현을 위한 예시적 시스템에서는, 항체 중쇄 및 항체 경쇄 둘 다를 암호화하는 재조합 발현 벡터를 인산칼슘-매개 형질감염에 의해 dhfr- CHO 세포로 도입한다. 재조합 발현 벡터 내에서, 항체 중쇄 및 경쇄 유전자를 각각 인핸서/프로모터 조절 요소(예를 들면, SV40, CMV, 아데노바이러스 등으로부터 유래한, 예를 들면, CMV 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 요소 또는 SV40 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 요소)에 작동적으로 연결하여 당해 유전자의 높은 수준의 전사를 유발한다. 당해 재조합 발현 벡터는 또한 메토트렉세이트 선별/증폭을 사용하여 벡터를 형질감염시킨 CHO 세포의 선별을 가능케 하는, DHFR 유전자를 수반한다. 선별된 형질전환체 숙주 세포를 배양하여 항체 중쇄 및 경쇄의 발현을 가능케 하고, 온전한 항체를 배양 배지로부터 회수한다. 표준 분자 생물학 기법을 사용하여 재조합 발현 벡터를 제조하고, 숙주 세포를 형질감염시키고, 형질전환체를 선별하고, 숙주 세포를 배양하고 항체 분자를 배양 배지로부터 회수할 수 있다. 예를 들면, 기질에 커플링된 단백질 A 또는 단백질 G를 사용한 친화성 크로마토그래피로 일부 항체 분자를 분리할 수 있다.
Fc 도메인을 포함하는 항체 분자에 대한 항체 제조 시스템은 바람직하게는 Fc 도메인이 글리코실화된 항체를 합성한다. 예를 들면, IgG 분자의 Fc 도메인을 CH2 영역 내의 아스파라긴 297에서 글리코실화시킨다. 당해 아스파라긴은 양촉각형 올리고당을 사용한 변형을 위한 부위이다. 이러한 글리코실화가 Fcγ 수용체 및 보체 C1q에 의해 매개된 효과기 기능에 필요함이 입증되어 왔다(문헌[참조: Burton and Woof (1992) Adv. Immunol. 51:1-84; Jefferis등 (1998) Immunol. Rev. 163:59-76]). 한 양태에서는, Fc 도메인을 아스파라긴 297에 상응하는 잔기를 적합하게 글리코실화시키는 포유동물 발현 시스템 내에서 제조한다. Fc 도메인은 또한 기타 진핵 해독후 변형을 포함할 수 있다.
항체 분자는 또한 형질전환 동물에 의해 제조될 수도 있다. 예를 들면, 미국 특허 제5,849,992호는 형질전환 동물의 유선에서 항체를 발현시키는 방법을 기술한다. 유즙-특이적 프로모터 및 항체 분자 및 분비를 위한 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 형질전환유전자를 제작한다. 이러한 형질전환 포유동물 암컷에 의해 생산된 유즙은 이러한 유즙내에서 분비된, 관심의 항체를 포함한다. 당해 항체 분자를 모유로부터 정제하거나, 일부 적용에서는 직접 사용할 수 있다.
특성화
결합제의 결합 특성은 임의의 방법, 예를 들면, 다음의 방법 중 하나로 측정할 수 있다: BIACORETM 분석, 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA), x-선 결정학, 서열 분석 및 스캐닝 돌연변이유발. 단백질의 하나 이상의 IL-13-관련 활성 중화 및/또는 억제 능력은 다음의 방법으로 측정할 수 있다: IL-13 의존성 세포주, 예를 들면, TFI의 증폭 측정용 검정; IL-13 매개폴리펩타이드의 발현 측정용 검정, 예를 들면, CD23 발현의 유동 혈구계수 분석; 하류 시그널전달 분자, 예를 들면, STAT6의 활성 평가 검정; 테나신 생산 평가 검정; 본원에 기술된 항체의 관련 동물 모델, 예를 들면, 사이노몰구스 원숭이에서의 천식 예방 효능 검사 검정, 및 기타 검정. IL-13 결합제, 특히, IL-13 항체 분자는 이들 검정 중 하나 이상에서 통계적으로 유의한 효과를 가질 수 있다. 결합 특성에 대한 예시적 검정은 다음을 포함한다.
IL-13 결합제와 표적(예를 들면, IL-13)의 결합 상호작용을 표면 플라스몬 공명(SPR)을 사용하여 분석할 수 있다. SPR 또는 생분자 상호작용 분석(BIA)는 임의의 상호작용자를 표지하지 않고, 실시간으로 생물특이적 상호작용을 검출한다. BIA 칩의 결합 표면(결합 사건을 나타내는)에서의 질량 변화는 당해 표면 근처의 광굴절지수의 변화를 초래한다. 굴절율의 변화는 검출가능한 신호를 생산하고, 이는 생물학적 분자 사이의 실시간 반응의 지표로서 측정된다. SPR 사용 방법은 예를 들면, 미국 특허 제5,641,640호; 문헌[참조: Raether (1988) Surface Plasmons Springer Verlag; Sjolander and Urbaniczky (1991) Anal. Chem. 63:2338-2345; Szabo et al. (1995) Curr. Opin. Struct. Biol. 5:699-705] 및 BIAcore International AB(스웨덴 웁살라 소재)에서 제공된 온라인 제공자료에 기술되어 있다.
SPR로부터의 정보를 사용하여 분자의 표적에의 결합에 대한 평형해리상수(Kd) 및 반응속도 변수(Kon 및 Koff를 포함하는)의 정확하고 정량적인 측정을 제공할 수 있다. 이러한 데이타를 사용하여 상이한 분자를 비교할 수 잇다. SPR로부터의 정보를 사용하여 구조-활성 관계(SAR)를 개발할 수 있다. 예를 들면, 상이한 항체 분자의 반응속도 및 평형 결합 변수를 측정할 수 있다. 특정 결합 변수, 예를 들어 높은 친화성 및 느린 Koff와 관련되는 지정된 위치에서의 변이체 아미노산이 확인될 수 있다. 이러한 정보는 (예를 들어, 상동성 모델링, 에너지 최소화 또는 x-선 결정학 또는 NMR에 의한 구조 결정을 이용하는) 구조 모델링과 조합될 수 있다. 그 결과, 단백질과 이의 표적물 사이의 물리적 상호작용의 이해가 공식화되고 다른 디자인 과정을 안내하는데 이용될 수 있다.
호흡기 장애
IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자를 천식{예를 들면, 알러지성 및 비알러지성 천식(예를 들어, 영유아에서 예를 들어 호흡기 합포체 바이러스 (RSV)의 감염에 의한 천식)}; 기관지염(예를 들면, 만성 기관지염); 만성폐쇄성폐질환(COPD){예를 들면, 폐공기증(예를 들면, 담배-유도성 폐공기증)}; 기도 염증, 호산구증가증, 섬유증 및 과잉 점액 생산증을 포함하는 질환, 예를 들면, 낭성섬유증, 폐섬유증 및 알러지성 비염을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는 호흡기 장애의 치료 또는 예방에 사용할 수 있다. 예를 들면, IL-13 결합제(예를 들면, 항-IL-13 항체 분자)를 유효량으로 투여하여 당해 장애를 치료 또는 예방하거나 당해 장애의 하나 이상의 증상을 개선할 수 있다.
천식은 무수한 조건, 예를 들면, 알러지항원 흡입, 상기도 또는 귀감염의 존재 등에 의해 유발될 수 있다(문헌[참조: Opperwall (2003) Nurs. Clin. North Am. 38:697-711]). 알러지성 천식은 각종 특이적 및 비특이적 자극에 대한 기도 과반응(AHR), 증가된 혈청 면역글로불린 E(IgE), 과잉 기도 점액 생산, 부종 및 기관지상피상해(상기한 문헌[참조: Wills-Karp])로 특징지을 수 있다. 알러지성 천식은 알러지항원이 최전 기도 반응을 유발하고, 흔히 몇 시간 후 지연 후기 기도 반응(LAR)이 뒤따르는 경우 시작된다(문헌[참조: Henderson et al. (2000) J. Immunol. 164:1086-95]). LAR 중, 기도 벽 및 기관지액을 통해 호산구, 림프구 및 대식세포가 유입된다(상기한 문헌[참조: Henderson et al.]). 폐 호산구증가증은 알러지성 천식의 특징이며 호흡기 상피의 손상에 많은 책임을 가진다(문헌[참조: Li et al. (1999) J. Immunol. 162:2477-87]).
CD4+ T 헬퍼(Th) 세포는 천식과 관련된 만성 염증에 중요하다(상기 문헌[참조: Henderson et al.]). 여러 연구가 CD4+ 세포의 제2형 T 헬퍼(Th2) 세포에의 연루 및 이에 이은 제2형 사이토킨(예를 들면, IL-4, IL-5, IL-10 및 IL-13)의 생산이 AHR을 초래하는 알러지성 염증 반응에 중요함을 나타낸다(문헌[참조: Tomkinson et al. (2001) J. Immunol. 166:5792-5800], 및 본원에 인용된 참고 문헌). 첫째, CD4+ T 세포가 설치류 모델에서 알러지-유도성 천식에 필수적인 것으로 나타났다. 둘째, 제2형 사이토킨을 생산하는 CD4+ T 세포는 이들 동물 모델 뿐 아니라, 알러지성 천식으로 투병중인 환자에서도 확장을 수행한다. 셋째, 제2형 사이토킨 수준은 동물 모델 및 천식 환자의 기도 조직에서 증가되어 있다. 넷째, Th2 사이토킨은 알러지성 천식의 설치류 모델에서 호산구 동원에서 중심 역할을 이행하며, 입양 전달된 Th2 세포는 폐 및 폐 호산구증가증에서 에오탁신(효능적 호산구 화학유인물질)의 증가된 수준과 관련되어 있다(상기 문헌[참조: Wills-Karp et al.; 및 Li et al.]).
본원에 기술된 천식 치료 또는 예방 방법에는 외인성 천식(또한 알러지성 천식 또는 아토피성 천식으로 공지된), 내인성 천식(또한 비알러지성 천식 또는 비아토피성 천식으로 공지된) 또는 혼합 천식으로 지칭되는 이 둘의 조합에 대한 방법을 포함한다. 외인성 또는 알러지성 천식은 예를 들면, 화분, 포자, 목초 또는 잡초, 애완동물의 비듬, 먼지, 진드기 등과 같은 알러지 항원에 의해 유발되거나, 이와 연관된 사건을 포함한다. 모든 알레르기 항원 및 기타 자극제 자체가 연간 다양한 지점에 존재하기 때문에, 이러한 유형의 사고는 또한 계절성 천식으로 지칭된다. 또한 외인성 천식 그룹에 포함되는 것은 기관지 천식 및 알러지성 기관지폐 아스페르길루스증이다.
본원에 기술된 제제에 의해 치료 또는 완화될 수 있는 장애에는 바이러스(예를 들면, 감기 및 독감 바이러스, 호흡기 합포체 바이러스(RSV), 파라믹소바이러스, 리노바이러스 및 인플루엔자 바이러스)와 같은 감염성 제제에 의해 유발된 이들 호흡기 장애 및 천식이 포함된다. RSV, 리노바이러스 및 인플루엔자 바이러스감염은 어린이에게서 흔하며, 유아 및 어린 아이들의 호흡기 질병의 주 원인이다. 바이러스성 세기관지염을 앓는 어린이는 만성 쌕쌕거림 및 천식을 발전시킬 수 있으며, 이는 본원에 기술된 방법을 사용하여 치료할 수 있다. 또한 운동 및/또는 찬 공기에 의한 일부 천식에서 초래될 수 있는 천식 질환이 포함된다. 당해 방법은 매연 노출(예를 들면, 담배-유도성 및 산업 매연), 및 산업 및 직업적 노출(예를 들면, 매연, 오존, 유해 가스, 이산화황, 산화질소, 페인트, 플라스틱, 폴리우레탄, 바니시 등으로부터의 이소시아네이트를 포함하는 연무, 목재, 식물 또는 기타 유기 먼지 등)과 관련된 천식에 유용하다. 당해 방법은 또한 식품 첨가물, 보존제 또는 약리학적 제제와 관련된 천식 사건에 유용하다. 또한 무증상 천식 또는 기침 변형 천식으로 지칭되는 천식 유형의 치료, 억제 또는 완화 방법이 포함된다.
본원에 개시된 방법은 또한 기관지 수축을 자극할 수 있는 위식도역류(GERD)과 관련된 천식의 치료 및 완화에 유용하다. 잔류 신체 분비에 따라, GERD는 기침을 억제하고, 침대에서의 알러지 항원 및 자극제에 대한 노출은 천식성 질환에 기여할 수 있으며 종합적으로 밤시간 천식 또는 야간 천식으로 지칭되어 왔다. GERD와 관련된 천식의 치료, 억제 또는 완화 방법에서, 약제학적 유효량의 IL-13 결합제를 약제학적 유효량의 GERD 치료제와 배합하여 본원에 기술된 바와 같이 사용할 수 있다. 이들 제제에는 서방형 판토프라졸 나트륨 정제의 PROTONIXR 상표, 오메프라졸 서방형 캡슐 PRILOSECR 상표, ACIPHEXR 상표 레베프라졸 나트륨 서방형 정제 또는 PREVACIDR 상표 서방형 란소프라졸 캡슐과 같은 양성자 펌프 억제제가 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다.
아토피성 장애 및 이의 증상
아토피 환자로부터의 세포가 IL-13에 대한 향상된 감수성을 갖는 것으로 관찰되었다. 따라서, IL-13 결합제(예를 들면, 본원에 기술된 항체 분자와 같은 IL-13 결합제)를 유효량으로 투여하여 아토피성 장애를 치료 또는 예방할 수 있다. "아토피"는 흔히 알러지성 반응을 발달시키는 유전적 경향인 질병 그룹을 지칭한다.
아토피성 장애의 예에는 알러지, 알러지성 비염, 아토피성 피부염, 천식 및 건초열이 포함된다. 천식은 간헐적 호흡기 증상(예를 들면, 기관지 과반응 및 역기류폐쇄)와 연관된 표현형적 이질 장애이다. 천식의 면역조직병리학적 특징에는 기도 상피 박피, 기저막하 콜라겐 침착; 부종; 비만 세포 활성화; 및 염증 세포 침윤(예를 들면, 호중구, 호산구 및 림프구에 의한)이 포함된다. 기도 염증은 추가로 기도 과잉감응성, 기류 제한, 급성 기관지수축, 점액 마개 형성, 기도벽 재형성, 및 기타 호흡기 증상에 기여할 수 있다. IL-13 결합제(예를 들면, 본원에 기술된 항체 분자와 같은 IL-13 결합제)를 유효량으로 투여하여 이들 증상 중 하나 이상을 완화시킬 수 있다.
알러지성 비염(건초열)의 증상에는 가려움증, 콧물 분비, 재채기 또는 코막힘, 및 안구 가려움증이 포함된다. IL-13 결합제를 투여하여 이들 중상 중 하나 이상을 완화시킬 수 있다. 아토피성 피부염은 피부에 영향을 주는 만성(장기 지속적) 질병이다. 아토피성 피부염에 대한 정보를 예를 들면, NIH 문헌 제03-4272호로부터 입수할 수 있다. 아토피성 피부염에서는, 피부가 극심하게 가려워지고, 홍조, 종창, 균열을 유발하고, 맑은 체액을 삼출하며, 최종적으로, 딱지가 생기고 낙설되게 한다. 많은 경우, 당해 질병이 심해지는 기간(악화 또는 발적으로 지칭됨) 후에 피부가 개선되거나 전체적으로 깨끗해지는(완화로 지칭됨) 기간이 이어진다. 아토피성 피부염은 흔히 여러 종류의 피부 염증에 대한 일반적인 용어인 "습진"으로 지칭된다. 아토피성 피부염은 많은 종류의 습진 중 가장 흔하다. 아토피성 피부염의 예는 알러지성 접촉 습진 (피부염: 면역계가 왼인성 물질로서 인식하는 물질, 예를 들어 옻나무 또는 크림 및 로션 중의 특정 보존제와 접촉하게 되는 경우의 붉고 가렵고 액이 나오는 반응); 접촉 습진 (피부가 알레르겐 (알러지-유발 물질) 또는 산, 세정제 또는 기타 화합물과 같은 자극물과 접촉하게 되는 경우 붉게되고 가렵고 화끈하게 되는 국소화된 반응); 발한장애성 습진(가렵고 화끈거리는, 맑고 깊은 물집으로 특징지어지는 손바닥 및 발바닥의 피부의 자극); 신경피부염 (긁었을 때 심하게 자극되는 국소화 가려움 (예: 곤충에 물림)에 의해 야기되는 머리, 아래쪽 다리, 손목 또는 전박 피부의 벗겨지는 패치); 동전 습진 (딱딱하게 되고 딱지가 앉고 매우 가려울 수 있는 팔, 등, 둔부, 아래쪽 다리에서 가장 일반적인 자극된 피부의 동전 형태의 패치); 지루성 습진 (머리가죽, 얼굴 및 때때로 신체의 다른 부분의 피부에 대한 노랗고 기름지며 비늘로 덮인 패치)을 포함한다. 추가의 특별한 증후군은 울혈성 피부염, 아토피성 주름(pleat)(Dennie-Morgan fold), 구순염, 잔금이 많은 손바닥(hyperlinear palm), 과색소침착된 눈꺼풀 (염증 또는 건초열로부터 어둡게 된 눈꺼풀), 비늘증, 위축털, 태선화, 구진 및 두드러기를 포함한다. IL-13 결합제를 투여하여 이들 증상 중 하나 이상을 완화시킬 수 있다.
알러지성 비염 또는 기타 알러지성 장애를 치료하는 예시적 방법은 알러지 항원에 노출시키기 전, 예를 들면, 알러지 항원에 대한 계절성 노출 전, 예를 들면, 알러지 항원 성숙 전에 IL-13 결합제를 사용하여 치료법을 개시하는 것을 포함할 수 있다. 이러한 치료법은 1회 이상의 투여, 예를 들면, 규칙적 간격으로의 투여를 포함할 수 있다.
암
IL-13 및 이의 수용체는 적어도 일부 종류의 암, 예를 들면, 조혈 세포로부터 유래한 암 또는 뇌 또는 신경세포로부터 유래한 암(아교모세포종)의 발달에 관여할 수 있다. 예를 들면, IL-13 시그널전달 경로의 차단(예를 들면, 수용성 IL-13 수용체 또는 STAT6 -/- 결핍 마우스의 사용에 의한)은 각각 지연성 종양 발병 및/또는 호지킨 림프종 세포주 또는 전이성 유방암종의 성장을 초래한다(문헌[참조: Trieu et al. (2004) Cancer Res. 64: 3271-75; Ostrand-Rosenberg et al. (2000) J. Imunol. 165:6015-6019]). IL-13R을 발현하는 암(문헌[참조: Husian and Puri(2003) J. Neurooncol. 65:37-48; Mintz et al. (2003) J. Neurooncol. 64:117-23])은 본원에 기술된 항-IL-13 항체에 의해 특이적으로 표적화될 수 있다. IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자는 암세포 증식 또는 기타 암세포 활성을 억제하는 데 유용할 수 있다. 암은 정상적 성장 대조군에 대한 반응성을 상실하고 통상 상응하는 정상 세포에 비해 조절이 감소되게 증식하는 하나 이상의 세포를 언급한다.
IL-13 결합제(예를 들면, 본원에 기술된 항체 또는 항원 결합 단편과 같은 IL-13 결합제)를 치료용으로 사용할 수 있는 암의 예에는 백혈병(예를 들면, B-세포 만성 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병 및 제1형 사람 T세포 백혈병 바이러스(HTLV-1) 형질전환 T세포); 림프종(예를 들면, T 세포 림프종, 호지킨 림프종); 아교모세포종; 췌장암; 신장 세포 암종; 난소 암종; 및 AIDS-카포시(Kaposi) 육종이 포함된다. 예를 들면, IL-13 결합제(예를 들면, 항-IL-13 항체 분자)를 유효량으로 투여하여 당해 장애를 치료 또는 예방, 예를 들면, 세포 증식을 감소시키거나, 당해 장애의 하나 이상의 증상을 완화시킬 수 있다.
섬유증
IL-13 결합제는 또한 염증 및 섬유증, 예를 들면, 간 섬유증의 치료에 유용할 수 있다. IL-13 생산은 경화증, 및 가능하게는, 간세포성 암종으로 가는 간 염증의 진행과 관련되어 있다(문헌[참조: de Lalla et al.(2004) J. Immunol. 173:1417-1425]). 섬유증은 예를 들면, 정상 조직이 흉터 조직으로 대체되고, 흔히 염증이 뒤따르는 경우 발생한다. B형 간염 및 C형 간염 둘 다 간에서 섬유증 반응을 유발하며, 이는 경화증으로 진행할 수 있다. 다시, 경화증은 간부전 또는 간세포성 암종과 같은 중증 합병증으로 발달할 수 있다. IL-13 결합제, 예를 들면, 본원에 기술된 항-IL-13 항체를 사용하여 IL-13 활성을 차단하는 것은 염증 및 섬유증, 예를 들면, 간 질병, 특히 B형 간염 및 C형 간염과 관련된 염증, 섬유증 및 경화증을 감소시킬 수 있다. 예를 들면, IL-13 결합제(예를 들면, 항-IL-13 항체 분자)를 유효량으로 투여하여 당해 장애를 치료 또는 예방하거나, 염증 및/또는 섬유증 장애의 하나 이상의 증상을 완화시킬 수 있다.
염증성 장 질병
염증성 장 질병(IBD)은 장의 염증을 유발하는 질병의 일반적인 명칭이다. 염증성 장 질병의 2가지 예는 크론병 및 궤양결장염이다. IL-13/STAT6 시그널전달이 염증성 장 질병이 모델인, 마우스 평활근의 염증-유도성 과잉수축성에 관여함이 밝혀졌다(문헌[참조: Akiho et al. (2002) Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 282:G226-232]). 예를 들면, IL-13 결합제(예를 들면, 항-IL-13 항체 분자)를 유효량으로 투여하여 당해 장애를 치료 또는 예방하거나, 염증성 장 장애의 하나 이상의 증상을 완화시킬 수 있다.
부가적 IL-13 결합제
또한 IL-13에 결합하는 항체 및 이의 단편인 결합제 이외의 결합제, 특히, MJ2-7 또는 C65 및 IL-13에 결합하는, 본원에 기술된 기타 항체와 경쟁하는 결합제를 제공한다. 예를 들면, 당해 결합제는 IL-13 상의 MJ2-7 또는 C65와 동일한 에피토프 또는 중복되는 에피토프와 결합할 수 있다. 당해 결합제는 바람직하게는 IL-13 활성을 억제 또는 중화시킨다. 예를 들면, 당해 결합제는 IL-13과 IL-13Rα1의 결합은 억제하고, 예를 들면, IL-13과 IL-4Rα의 결합은 막지 않는다. 이러한 결합제를 본원에 기술된 방법, 예를 들면, 장애 치료 및 예방 방법에 사용할 수 있다. 본원에 기술된 모든 양태는 IL-13 결합제의 사용에 적합하게 개작할 수 있다.
결합제는 본원에 기술된 가변 도메인을 변형시키거나 본원에 기술된 가변 도메인의 하나 이상의 CDR을 다른 스캐폴드 도메인에 이식하는 방법을 포함하는 다수의 방법으로 확인할 수 있다. 결합제는 또한 다양한 라이브러리로부터, 예를 들면, 선별하여 확인할 수 있다. 단백질 라이브러리 선별 방법 중 하나는 파아지 디스플레이를 사용한다. 단백질의 특정 영역을 변화시키며 IL-13과 상호작용하는 단백질을 예를 들면, 고형 지지체에 보유시키거나 기타 물리적 결합에 의해 확인할 수 있다. IL-13 상의 MJ2-7 또는 C65와 동일한 에피토프 또는 중복되는 에피토프에 결합하는 특정 결합제를 확인하기 위해, MJ2-7 또는 C65(또는 관련 항체)를 첨가하여 결합제를 용출시키거나, 결합제를 MJ2-7 또는 C65(또는 관련 항체)를 사용한 경쟁 실험에서 평가할 수 있다. 또한 IL-13 및 MJ2-7 또는 C65(또는 관련 항체)를 포함하는 복합체에 기타 에피토프에 결합하는 제제의 라이브러리를 접촉시킴으로써 당해 라이브러리를 소모시킬 수 있다. 이어서 소모된 라이브러리를 IL-13에 접촉시켜 IL-13에 결합하지만, MJ 2-7 또는 C65에 의해 결합된 경우에는 IL-13에 결합하지 않는 결합제를 수득할 수 있다. 또한 표적으로서 MJ2-7 또는 C65 에피토프를 포함하는 IL-13으로부터의 펩타이드를 사용할 수 있다.
파아지 디스플레이는 예를 들면, 문헌[참조: 미국 특허 제5,223,409호; Smith (1985) Science 228:1315-1317; 국제공개공보 제92/18619호; 국제공개공보 제91/17271호; 국제공개공보 제92/20791호; 국제공개공보 제92/15679호; 국제공개공보 제93/01288호; 국제공개공보 제92/01047호; 국제공개공보 제92/09690호; 국제공개공보 제90/02809호; 국제공개공보 제94/05781호; Fuchs et al. (1991) Bio/Technology 9:1370-1372; Hay et al. (1992) Hum Antibod Hybridomas 3:81-85; Huse et al. (1989) Science 246:1275-1281; Griffiths et al. (1993) EMBO J 12:725-734; Hawkins et al. (1992) JMo/ Biol 226:889-896; Clackson et al. (1991) Nature 352:624-628; Gram et al. (1992) PNAS 89:3576-3580; Garrard et al. (1991) Bio/Technology 9:1373-1377; Rebar et al. (1996) Methods Enzymol. 267:129-49; 및 Barbas et al. (1991) PNAS 제88:7978-7982호]에 기술되어 있다. 효모 표면 디스플레이는 예를 들면, 문헌[참조: Boder 및 Wittrup (1997) Nat. Biotechnol. 15:553-557]에 기술되어 있다. 기타 디스플레이 형태는 리보좀 디스플레이다. 예를 들면, 문헌[Mattheakis et al.(1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91 :9022 및 Hanes et al.(2000) Nat Biotechnol. 18:1287-92; Hanes 등(2000) Methods Enzymol. 328:404-30. 및 Schaffitzel et al.(1999) J Immunol Methods. 231(1-2): 119-35]를 참조한다.
IL-13에 결합하는 결합제는 하나의 스캐폴드 단백질의 구조적 특징, 예를 들면, 폴딩된 도메인을 가질 수 있다. 항체에 기초한 예시적 스캐폴드 도메인은 모노클로날 항체의 중쇄 가변 도메인으로부터 3개의 베타쇄를 결실시켜 설계한 "미니바디(minibody)"이다(문헌[참조: Tramontano et al., 1994, J. MoI. Recognit. 7:9; and Martin et al., 1994, EMBOJ. 13:5303-5309]). 당해 도메인은 61개의 잔기를 포함하며, 이를 사용하여 2개의 초가변 루프, 예를 들면, 본원에 기술된 가변 도메인 또는 본원에 기술된 변이체의 하나 이상의 초가변 루프를 나타낼 수 있다. 기타 방법에서는, 당해 결합제는 V형 도메인인 스캐폴드 도메인을 포함한다(문헌[참조: Coia et al. 국제공개공보 제99/45110호]). V형 도메인은 항체의 가변 중쇄(VH) 또는 가변 경쇄(VL) 영역과 유사한 구조적 특징을 갖는 영역을 지칭한다. 기타 스캐폴드 도메인은 텐다미스태틴, 74개 잔기, 2개의 이황화결합에 의해 서로 연결된 6쇄 베타 시트(beta sheet) 샌드위치로부터 유래한다(문헌[참조: McConnell and Hoess, 1995, J. MoI. Biol. 250:460]). 이러한 모 단백질은 3개의 루프를 포함한다. 당해 루프는 변형시키거나(예를 들면, 본원에 기술된 CDR 또는 초가변 루프를 사용하여), 예를 들면, IL-13에 결합하는 도메인을 선택하기 위해 변화를 줄 수 있다. 국제공개공보 제00/60070호는 스캐폴드 도메인으로 사용될 수 있는 CTLA-4의 천연 발생 세포외 도메인으로부터 유래한 β-샌드위치 구조를 기술한다.
IL-13 결합제를 위한 또 다른 스캐폴드 도메인은 피브로넥틴 타입 III 도메인 또는 관련된 피브로넥틴-유사 단백질에 기초하는 도메인이다. 피브로넥틴 타입 III (Fn3) 도메인의 총 폴드는 가장 작은 작용성 항체 단편, 항체 중쇄의 가변 영역의 도메인과 밀접히 관련된다. Fn3은, 9개 대신 7개의 β-쇄를 갖는다는 것을 제외하고는, 항체 VH 도메인의 것과 유사한 β-샌드위치이다. Fn3의 말단에 3개의 루프가 있으며; BC, DE 및 FG 루프의 위치가 항체의 VH 도메인의 CDR1, 2 및 3의 것에 상응한다. Fn3은 디설파이드 결합을 갖지 않기 때문에 유리하다. 따라서, Fn3은 항체 및 이들의 단편과 달리 환원 조건 하에서 안정하다 (WO 98/56915; WO 01/64942; WO 00/34784). Fn3 도메인은, 예를 들어 IL-13에 결합하는 도메인을 선별하기 위해, (예를 들어, 본원에서 기술되는 CDR 또는 초가변 루프를 사용하여) 변형되거나 변화될 수 있다.
또 다른 예시적 스캐폴드 도메인은 T-세포 수용체; MHC 단백질; 세포외 도메인 (예: 피브로넥틴 타입 III 반복부, EGF 반복부); 프로테아제 억제제(예: 쿠니츠 (Kunitz) 도메인, 에코틴, BPTI 등); TPR 반복부; 트리포일 구조물; 아연 핑거 도메인; DNA-결합 단백질; 특히 단량체성 DNA 결합 단백질; RNA 결합 단백질; 효소, 예를 들어 프로테아제(특히 불활성화된 프로테아제), RNase; 샤페론, 예를 들어 티오레독신 및 열쇽 단백질; 및 세포내 시그널전달 도메인 (예: SH2 및 SH3 도메인)을 포함한다. 문헌(U.S. 20040009530)은 일부 다른 스캐폴드에 대한 예를 기술한다.
작은 스캐폴드 도메인의 예는 다음을 포함한다: 쿠니츠 (Kunitz) 도메인 (58개 아미노산, 3개 디설파이드 결합), 쿠쿠르비다(Cucurbida) 최대 트립신 억제제 도메인 (31개 아미노산, 3개 디설파이드 결합), 구아닐린에 관련된 도메인 (14개 아미노산, 2개 디설파이드 결합), 그람 네가티브 세균으로부터의 열안정성 내독소 IA에 관련된 도메인 (18개 아미노산, 3개 디설파이드 결합), EGF 도메인 (50개 아미노산, 3개 디설파이드 결합), 크링글 도메인 (60개 아미노산, 3개 디설파이드 결합), 진균 탄수화물-결합 도메인 (35개 아미노산, 2개 디설파이드 결합), 엔도텔린 도메인 (18개 아미노산, 2개 디설파이드 결합) 및 스트렙토코커스 G IgG-결합 도메인 (35개 아미노산, 디설파이드 결합 없음). 작은 스캐폴드 도메인의 예는 SH2, SH3 및 EVH 도메인을 포함한다. 일반적으로, 세포내 또는 세포외의 어떠한 모듈 도메인도 사용될 수 있다.
스캐폴드 도메인을 평가하기 위한 예시적 기준은 (1) 아미노산 서열, (2) 수개의 상동성 도메인의 서열, (3) 3차원적 구조, 및/또는 (4) pH, 온도, 염도, 유기용매, 산화제 농도의 범위에 걸친 안정성 자료를 포함할 수 있다. 하나의 양태에서, 스캐폴드 도메인은 작고 안정한 단백질 도메인, 예를 들어 100, 70, 50, 40 또는 30개 미만의 아미노산으로 이루어진 단백질이다. 도메인은 하나 이상의 디설파이드 결합을 포함하거나 금속, 예를 들어 아연을 킬레이트화할 수 있다.
또 다른 결합제는 펩티드, 예를 들어 30, 25, 24, 20, 18, 15 또는 12개 미만의 아미노산을 갖는 단백질에 기초한다. 펩티드는 보다 큰 단백질, 그러나 통상적으로 IL-13, 예를 들어 본원에 기술된 에피토프에 독립적으로 결합할 수 있는 영역에 삽입될 수 있다. 펩티드는 파아지 디스플레이에 의해 확인될 수 있다[참조: US 20040071705].
IL-13 결합제는 비펩티드 연결물 및 기타 화학적 변형을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 또는 모든 결합제를 펩티드모방제(peptidomimetic), 예를 들어 펩토이드로서 합성할 수 있다 (Simon et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:9367-71 및 Horwell (1995) Trends Biotechnol. 13:132-4). 결합제는 하나 이상의 (예를 들어, 전부) 비-가수분해성 결합을 포함할 수 있다. 많은 비-가수분해성 펩티드 결합이 이러한 결합을 포함하는 펩티드의 합성에 대한 절차와 함께 당 기술 분야에 공지되어 있다. 비-가수분해성 결합의 예는 -[CH2NH]- 환원된 아미드 펩티드 결합, -[COCH2]- 케토메틸렌 펩티드 결합, -[CH(CN)NH]- (시아노메틸렌)아미노 펩티드 결합, -[CH2CH(OH)]- 히드록시에틸렌 펩티드 결합, -[CH2O]- 펩티드 결합 및 -[CH2S]- 티오메틸렌 펩티드를 포함한다(예를 들면, 미국 특허 제6,172,043호를 참조한다).
약제학적 조성물
IL-13 결합제, 예를 들면, IL-13에 결합하는 항체 분자(본원에 기술된 바와 같은)를 시험관 내, 셍체 외, 또는 생체 내에서 사용할 수 있다. 이들을 예를 들면, IL-13과 약제학적으로 허용가능한 담체를 혼합함으로써 약제학적 조성물에 혼입시킬 수 있다. 이러한 조성물은 IL-13 결합제 및 담체 이외에, 각종 희석제, 충전제, 염, 완충액, 안정화제, 가용화제 및 당해 분야에 널리 공지된 기타 물질을 함유할 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 물질은 일반적으로 IL-13 결합제의 생물학적 활성의 효과를 방해하지 않는 무독성 물질이다. 담체의 특성은 투여 경로에 따를 수 있다.
본원에 기술된 약제학적 조성물은 또한 기타 인자(예를 들면, 아래에 보다 상세히 기술되어 있는 바와 같은 기타 항-사이토킨 항체 분자 또는 기타 소염제이지만, 이에 제한되지는 않음)를 포함할 수 있다. 이러한 추가의 인자 및/또는 제제를 약제학적 조성물에 포함시켜 IL-13 결합제, 예를 들면, 본원에 기술된 바와 같은 항-IL-13 항체 분자와 함께 상승 효과를 달성할 수 있다. 예를 들면, 알러지성 천식의 치료에서, 본원에 기술된 약제학적 조성물은 항-IL-4 항체 분자 또는 알러지 반응을 감소시키는 것으로 공지된 약물을 포함할 수 있다.
본원에 기술된 약제학적 조성물은 IL-13 결합제, 예를 들면, 본원에 기술된 바와 같은 항-IL-13 항체 분자를 기타 약제학적으로 허용가능한 담체 외에,
수용액 중에서 응집 형태, 예를 들어 미셀, 불용성 단층, 액정 또는 라멜라 층으로 존재하는 액체와 같은 양쪽성 제제와 함께 배합되는 리포좀의 형태일 수 있다. 리포좀 제형을 위한 적합한 지질은, 이로 제한됨이 없이, 모노글리세라이드, 디글리세라이드, 설파티드, 리솔레시틴, 인지질, 사포닌, 담즙산 등을 포함한다. 이러한 리포좀 제형의 제조는 당해 기술 분야의 수준에 속한다 (미국 특허 제4,235,871호; 제4,501,728호; 제4,837,028호; 및 제4,737,323호, 모두 본원에 참조로 삽입됨).
본원에 사용된 용어 "치료학적 유효량"은 의미있는 환자 이점, 예를 들어 질병 증상의 경감, 치유 또는 치유 속도의 증가를 나타내기에 충분한 약제학적 조성물 또는 방법에 대한 각각의 활성 성분의 총량을 의미한다. 개별적 활성 성분이 단독으로 투여되는 경우, 상기 용어는 성분 단독의 양을 의미한다. 배합 적용되는 경우, 상기 용어는 배합하여 연속적으로나 동시에 투여되는 경우 치료 효과를 갖는 활성 성분의 배합량을 언급한다.
치료 또는 사용 방법의 실행에서, IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자, 예를 들면, IL-13에 결합하고 기능적 IL-13 시그널전달 복합체의 형성을 방해(및, 예를 들면, 하나 이상의 IL-13 관련 활성을 중화 또는 억제)하는 항-IL-13 항체 분자의 치료학적 유효량을 피검체, 예를 들면, 포유동물(예를 들면, 사람)에 투여한다. IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자를 본원에 기술된 방법에 따라, 단독 및 기타 치료요법, 예를 들면, 사이토킨, 림포카인 또는 기타 조혈 인자, 암 치료제 또는 소염제를 사용하는 치료와 함께 투여할 수 있다. 하나 이상의 제제와 공동투여하는 경우, IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자를 제2의 제제와 동시에 또는 순차적으로 투여할 수 있다. 순차적으로 투여하는 경우, 의사는 IL-13 결합제를 기타 제제와 함께 투여하기에 적합한 순서를 선택할 수 있다.
약제학적 조성물에 사용되는 IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자의 투여는 각종 통상적인 방법, 예를 들면, 섭취, 흡입 또는 피부, 피하 또는 정맥내 주사로 수행할 수 있다. 치료학적 유효량의 IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자를 정맥내, 피부 또는 피하 주사로 투여하는 경우, 당해 결합제를 피로겐 비함유의 비경구적으로 허용가능한 수용액으로 제조할 수 있다. 이러한 비경구적으로 허용가능한 단백질 용액의 조성물은 당해 조성물을 생리학적 조건, 결합제 안정성 등을 최적화시키기 위해, pH, 등장성, 안정성 등과 같은 요인을 고려하여 조정할 수 있다. 정맥내, 피부 또는 피하 주사용 약제학적 조성물은 예를 들면, 염화나트륨 주사, 링거(Ringer) 주사, 덱스트로스 주사, 덱스트로스 및 염화나트륨 주사, 락테이트화된 링거 주사 또는 당해 분야에 공지된 기타 비히클과 같은 등장성 담체를 함유할 수 있다. 당해 약제학적 조성물은 또한 안정화제, 보존제, 완충액, 항산화제 또는 기타 첨가제를 함유할 수 있다.
약제학적 조성물 중 IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자의 양은 치료할 질환의 성질 및 중증도, 및 환자가 받은 이전 치료의 성질에 따를 수 있다. 약제학적 조성물을 일반적인 환자 또는 증상을 나타내지 않는 환자에, 예를 들면, 예방 방식으로 투여할 수 있다. 담당 주치의는 각각의 개별 환자를 치료하기 위한 IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자의 양을 결정할 수 있다. 예를 들면, 담당 주치의는 저용량의 길항제를 투여하고 환자의 반응을 관찰할 수 있다. 환자에 대한 최적의 치료 효과가 수득될 때까지 보다 많은 길항제를 투여할 수 있으며, 이때, 용량은 일반적으로 추가로 증가시키지 않는다. 예를 들면, 약제학적 조성물은 체중 kg 당 항체 약 0.1mg 내지 50mg, 예를 들면, 체중 kg 당 항체 약 0.1mg 내지 5mg 또는 약 8mg 및 50mg을 함유할 수 있다. 항체를 월당 2회 이하, 예를 들면, 격주로 또는 매달의 빈도로 피하로 전달하는 양태에서, 당해 조성물은 약 0.7 내지 3.3, 예를 들면, 1.0 내지 3.0mg/kg, 예를 들면, 약 0.8 내지 1.2, 1.2 내지 2.8 또는 2.8 내지 3.3mg/kg의 양을 포함한다.
약제학적 조성물을 사용하는 치료 기간은 치료할 질병의 중증도 및 각각의 개별 환자의 상태 및 잠재적 특이 반응에 따라 다양할 수 있다. 한 양태에서, IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자는 또한 피하 경로를 통해, 예를 들면, 주당 1회의 범위, 24시간, 48시간, 96시간 당 1회, 또는 이러한 간격 이하의 빈도로 투여할 수 있다. 예시적 용량은 0.1 내지 20mg/kg의 범위, 보다 바람직하게는 1 내지 10mg/kg의 범위일 수 있다. 당해 제제는 예를 들면, 정맥내 주입에 의해, 20, 10, 5 또는 1mg/분 미만의 속도로 약 1 내지 50mg/m2 또는 약 5 내지 20mg/m2의 용량에 이를 때까지 투여할 수 있다.
한 양태에서, 환자에게 IL-13 결합제를 투여하는 것은 예를 들면, 부작용을 감소 또는 최소화하기 위해 단백질의 용량을 변화시키는 단계를 포함한다. 예를 들면, 피검체에 1차 용량, 예를 들면, 치료학적 유효량 미만의 용량을 투여할 수 있다. 이후의 기간 내에, 예를 들면, 최소 6, 12, 24 또는 48시간 후에, 당해 환자에게 2차 용량, 예를 들면, 1차 용량보다 25, 50, 75 또는 100% 이상 많은 용량을 투여할 수 있다. 예를 들면, 2차 및/또는 필적하는 3차, 4차 및 5차 용량은 치료학적 유효량의 약 70, 80, 90 또는 100% 이상일 수 있다.
흡입
IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자를 포함하는 조성물을 흡입용 또는 폐 전달의 기타 방식으로 제형화할 수 있다. 따라서, IL-13 결합제는 흡입에 의해 폐 조직으로 투여할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "폐 조직"은 달리 제시되는 경우를 제외하고는, 기도의 모든 조직을 지칭하며, 상부 및 하부 기도 둘 다를 포함한다. IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자를 폐 질병 치료를 위한 하나 이상의 기존의 요법과 함께 투여할 수 있다.
한 예에서는, IL-13 결합제를 분무기용으로 제형화한다. 한 양태에서, IL-13 결합제를 동결건조 형태(예를 들면, 실온에서)로 저장할 수 있으며 흡입 전 용액에 용해시킬 수 있다. 또한 IL-13 결합제를 의학 장치, 예를 들면, 흡입기를 사용하는 흡입용으로 제형화할 수 있다. 예를 들면, 미국 특허 제6,102,035호(분말 흡입기) 및 제6,012,454호(무수분말 흡입기)를 참조한다. 흡입기는 저장에 적합한 pH에서 IL-13 결합제를 위한 개별 구획과 중성화 완충액을 위한 다른 구획, 및 분무 직전 중성화 완충액과 IL-13 결합제를 배합하기 위한 메커니즘을 포함할 수 있다. 한 양태에서, 흡입기는 계량 용량 흡입기이다.
폐 기도로 국소적으로 약물을 전달하는데 사용되는 3가지의 일반적인 시스템은 건조 분말 흡입기 (DPI), 계량식 흡입기 (MDI) 및 분무기를 포함한다. 흡입 투여에 가장 일반적인 방법으로 사용되는 MDI는 의약을 가용화된 형태로 또는 분산액으로 전달하는데 사용될 수 있다. 통상적으로, MDI는 장치의 작동시 기도로 에오로졸화된 의약을 밀어내는 프레온 또는 기타 상대적으로 높은 증기압 추진제를 포함한다. MDI와는 달리, DPI는 일반적으로 폐로 건조 분말 형태의 의약을 도입하기 위한 환자의 흡입 노력에 전적으로 의존한다. 분무기는 액체 용액에 에너지를 가하여 흡입되도록 의약 에어로졸을 형성한다. 또한, 불소화합물 매질을 사용하는 폐 세척 또는 액체 통기 동안 약물의 직접적 폐 전달이 수행된다. 이들 및 기타 방법을 사용하여 IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자를 전달할 수 있다. 한 양태에서는, IL-13 결합제를 중합체, 예를 들면, 당해 화합물을 안정화시키거나 반감기를 증가시키는 중합체와 결합시킨다.
예를 들면, 흡입에 의한 투여의 경우, IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자를 적합한 추진제 또는 분무기를 포함하는 가압 용기 또는 지급기로부터 에어로졸 분사의 형태로 전달한다. IL-13 결합제는 무수 미립자 또는 액상 형태일 수 있다. IL-13 결합제를 포함하는 입자는 IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자의 수용액을 전하 중성화제와 함께 분사 건조, 건조시킨 후, 무수 분말로부터 미립자를 생성시키거나, 유기 변경자 중 수용액을 건조시킨 후, 무수 분말로부터 미립자를 생성시킴으로써 제조할 수 있다.
IL-13 결합제는 통상적으로 적합한 추진제, 예를 들어 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 기타 적합한 가스를 사용하여 가압된 팩 또는 분무기로부터 에어로졸 분무물의 형태로 전달될 수 있다. 가압 에어로졸의 경우, 투여 단위는 계량된 양을 전달하도록 밸브가 제공될 수 있다. 흡입기 또는 취입기에 사용하기 위한 캡슐 및 카트리지는, 입자가 제형화된 입자인 경우, IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자와 적합한 분말 기재, 예를 들어 락토즈 또는 전분의 분말 혼합물을 포함하도록 제형화될 수 있다. 제형화되거나 제형화되지 않은 화합물 이외에, 이의 전달 및 분산을 촉진하기 위해 다른 물질, 예를 들어 100% DPPC 또는 다른 계면활성제를 IL-13 결합제와 혼합할 수 있다. 건조 입자를 제조하는 방법이, 예를 들어 문헌 (WO 02/32406)에 기술되어 있다.
IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자는 에어로졸 전달용, 예를 들면, 무수 에어로졸 입자로 제형화하여, 이를 투여할 경우, 신속하게 흡수되고 신속한 국소적 또는 전신성 치료학적 결과를 도출하게 할 수 있다. 투여 2분, 5분, 1시간 또는 3시간 내에 검출가능한 활성을 제공하도록 투여를 조절할 수 있다. 일부 양태에서, 최고 활성은 보다 신속하게, 예를 들면, 30분 이내 또는 심지어 10분 이내에 도달할 수 있다. IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자는 예를 들면, IL-13 결합제가 폐로부터 순화에 돌입하여 기타 기관 또는 특정한 표적 기관으로 분포하게 하는 다른 투여 방식을 위한 대안으로 사용하기 위해 보다 긴 생물학적 반감기를 갖도록 (예를 들면, PEG와 같은 중합체와 결합시켜) 제형화할 수 있다.
한 양태에서는, IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자를 폴리펩타이드 질량의 5% 이상이 기도 하부 또는 심폐로 전달되는 양으로 전달한다. 심폐는 극도로 밀집된 모세혈관망을 갖는다. 폐포 공극으로부터 모세혈관 내강을 분리하는 호흡기 막은 매우 얇으며(≤㎛) 투과성이 매우 크다. 추가로, 폐포 표면을 덮는 액상 층은 폐 계면활성제가 풍부하다. 다른 양태에서는, IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자의 조성물의 2%, 3%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80% 이상이 기도 하부 또는 심폐로 전달된다. 이들 조직 중 하나 또는 둘다로의 전달은 IL-13 결합제의 효율적인 흡수 및 높은 생체이용율을 야기한다. 한 양태에서는, IL-13 결합제를 예를 들면, 흡입기 또는 분무기를 사용하여 계량된 용량으로 제공한다. 예를 들면, IL-13 결합제를 약 0.02, 0.1, 0.5, 1, 1.5, 2, 5, 10, 20, 40 또는 50mg/1회 호기 이상의 용량 단위 형태로 전달한다. 생체이용율(%)은 다음과 같이 계산할 수 있다: 퍼센트 생체이용율 = (AUC비침습성/AUC정맥내 또는 피나) x (용량정맥내 또는 피하/용량비침습성) x 100.
필수적인 것은 아니지만, 계면활성제와 같은 전달 증진제가 폐 전달을 더욱 증진시키는데 사용될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "계면활성제"는 2개의 비혼화성 상 사이의 경계면과 상호작용함으로써 약물의 흡수를 촉진하는 친수성 및 친유성 잔기를 갖는 화합물을 언급한다. 계면활성제는 수개의 이유, 예를 들어 입자 응집의 감소, 대식구 식작용의 감소 등의 이유로 건조 입자에 유용한다. 폐 계면활성제와 커플링되는 경우, 계면활성제, 예를 들어 DPPC는 화합물의 확산을 상당히 용이하게 할 것이므로, 화합물의 보다 효과적인 흡수가 달성될 수 있다. 계면활성제는 당해 기술 분야에 널리 공지되어 있으며, 이로 제한됨이 없이, 포스포글리세라이드, 예를 들어 포스파티딜콜린, L-알파-포스파티딜콜린 디팔미토일 (DPPC) 및 디포스파티딜 글리세롤 (DPPG); 헥산데칸올; 지방산; 폴리에틸렌 글리콜 (PEG); 폴리옥시에틸렌-9- ; 아우릴 에테르; 팔미트산; 올레산; 소르비탄 트리올레에이트 (SPAN 85); 글리코콜레이트; 서팍틴; 폴록소머; 소르비탄 지방산 에스테르; 소르비탄 트리올레에이트; 틸록사폴; 및 인지질을 포함한다.
안정화
한 양태에서는, IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자는 순환, 예를 들어 혈액, 혈청, 림프, 폐기관지액, 기관지폐포액 또는 기타 조직 중에서, 예를 들어 1.5, 2, 5, 10 또는 50배로 이의 안정화 및/또는 보유를 개선하기 위한 잔기와 물리적으로 결합된다.
예를 들면, IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자는 중합체, 예를 들면, 실질적으로 비-항원성인 중합체(예를 들면, 산화폴리알킬렌 또는 산화폴리에틸렌)와 결합할 수 있다. 적합한 중합체는 중량에 따라 상당히 다양할 것이다. 수평균 분자량이 약 200 내지 약 35,000 (또는 약 1,000 내지 약 15.000 또는 약 2,000 내지 약 12,500)인 중합체가 사용될 수 있다.
예를 들면, IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자를 수용성 중합체, 예를 들면, 친수성 폴리비닐 중합체, 예를 들면, 폴리비닐알콜 및 폴리비닐피롤리돈과 접합시킬 수 있다. 이러한 중합체의 비제한적 목록에는 폴리알킬렌 옥사이드 단독중합체, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 또는 프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌화된 폴리올, 이의 공중합체 및 이의 블록 공중합체(단, 블록 공중합체의 수용성이 유지되는 경우)를 포함한다. 추가의 유용한 중합체에는 폴리옥시알킬렌{예를 들면, 폴리옥시에틸렌, 폴리옥시프로필렌 및 폴리옥시에틸렌과 폴리옥시프로필렌의 블록 공중합체(Pluronics)}; 폴리메타크릴레이트; 카보머; 동종다당류 및 이종다당류{예를 들면, 락토스, 아밀로펙틴, 전분, 하이드록시에틸 전분, 아밀로스, 황산덱스트란, 덱스트란, 덱스트린, 글리코겐 또는 산 뮤코다당류의 다당류 아단위(예를 들면, 하이알루론산)}를 포함하는, 사카라이드 단량체 D-만노스, D- 및 L-갈락토스, 푸코스, 프럭토스, D-자일로스, L-아라비노스, D-글루쿠론산, 시알산, D-갈락투론산, D-만누론산(예를 들면, 폴리만누론산 또는 알긴산), D-글루코사민, D-갈락토사민, D-글루코스 및 뉴라민산을 포함하는 분지된 또는 비분지된 다당류; 폴리소르비톨 및 폴리만니톨과 같은 당 알코올의 중합체; 헤파린 또는 헤파란이 포함된다.
IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자의 접합체 및 공중합체를 반응하지 않은 출발 물질로부터, 예를 들면, 겔 여과 또는 이온 교환 크로마토그래피, 예를 들면, HPLC에 의해 분리할 수 있다. 당해 접합체의 이종성 종을 동일한 방식으로 다른 종으로부터 정제한다. 상이한 종(예를 들면, 1개 또는 2개의 PEG 잔기를 포함하는)의 분해는 또한 반응하지 않은 아미노산의 이온 특성의 차이로 인해 가능하다. 예를 들면, 국제공개공보 제96/34015호를 참조한다.
생체 내에서의 하나 이상의 IL-13 관련 활성의 조절을 위한 IL-13 결합제의 사용
다른 측면에서, 본 발명은 하나 이상의 생체 내 IL-13 관련 활성을, IL-13 결합제, 예를 들면, 본원에 기술된 바와 같은 항-IL-13 항체 분자를 이의 활성을 억제하는 데 충분한 양으로 투여함으로써 조절하는(예를 들면, 감소, 중화 및/또는 억제하는) 방법을 특징으로 한다. 또한 IL-13 결합제를 IL-13 매개염증 반응의 억제를 필요로 하는 피검체에 투여할 수 있다. 이들 질환은 예를 들면, 기도 염증, 천식, 섬유증, 호산구증가증 및 증가된 점액 생산을 포함한다.
IL-13 결합제, 예를 들면, 본원에 기술된 바와 같은 항-IL-13 항체의 효능을 예를 들면, 길항제의 돼지회충(Ascaris suum) 알러지 항원에 노출된 사이노몰구스 원숭이에서 기도 염증을 조절하는 능력을 평가함으로써 평가할 수 있다. IL-13 결합제, 특히, 하나 이상의 IL-13 활성을 억제하는 IL-13 결합제를 사용하여 하나 이상의 IL-13 관련 활성을 중화시키거나 억제(예를 들면, 생체 내 IL-13 매개염증을 감소)하여 천식 및/또는 이의 관련 증상을 포함하는 IL-13 관련 병리를 치료 또는 예방할 수 있다.
한 양태에서는, IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자, 예를 들면, 이의 약제학적 조성물을 치료제(즉, 기타 제제와 배합한, 예를 들면, 알러지성 및 염증 장애와 같은 병리 상태 또는 장애의 치료에 유용한 치료학적 제제)와 배합하여 투여한다. 당해 문맥에서 용어 "배합하여"는 당해 제제를 실질적으로 같은 시기에, 동시에 또는 순차적으로 제공함을 의미한다. 순차적으로 제공하는 경우, 제2의 화합물의 투여 개시 시, 2가지 화합물 중 첫 번째는 바람직하게는 치료 부위에서 여전히 유효 농도로 검출가능하다.
예를 들면, 배합 치료제는 예를 들면, IL-13에 결합하고, 기능적 IL-13 시그널전달 복합체의 형성을 방해하고, 하나 이상의 부가적 치료학적 제제, 예를 들면, 아래에 보다 상세히 기술된 바와 같은 하나 이상의 사이토킨 및 성장 인자 억제제, 면역억제제, 소염제, 대사 억제제, 효소 억제제 및/또는 세포독성 또는 세포증식억제제와 공동제형화되고/되거나 공동투여되는 하나 이상의 IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 및 이의 단편을 포함할 수 있다. 추가로, 하나 이상의 IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자를 본원에 기술된 2개 이상의 치료학적 제제와 함께 사용할 수 있다. 이러한 배합 치료제는 유리하게는 투여되는 치료학적 제제를 저용량으로 사용할 수 있게 하며, 이에 따라 각종 단일치료요법과 관련된 가능한 독성 또는 합병증을 피할 수 있다. 추가로, 본원에 기술된 치료학적 제제는 IL-13/IL-13 수용체 경로와 상이한 경로에 작용하며, 따라서 IL-13 결합제의 효과를 향상시키고/시키거나 상승작용하는 것으로 기대된다.
천식 또는 기도 염증의 상이한 유발을 방해하는 치료학적 제제, 예를 들면, 알러지, 상부 호흡기 염증 또는 귀 염증에 사용되는 치료학적 제제를 IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자와 함께 사용할 수 있다. 한 양태에서, 하나 이상의 IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 및 이의 단편을 기타 사이토킨 또는 성장 인자 길항제(예를 들면, 수용성 수용체, 펩타이드 억제제, 소분자, 부착소)와 같은 하나 이상의 첨가 제제, 기타 제제와 결합하는 항체 분자(예를 들면, 기타 사이토킨 또는 성장 인자와 결합하는 항체, 이들의 수용체 또는 기타 세포 표면 분자), 및 소염성 사이토킨 또는 이의 효능제와 함께 공동제형화하고/하거나 공동투여할 수 있다. IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 및 이의 단편과 함께 사용할 수 있는 제제의 비제한적 예에는 흡입 스테로이드; 베타-효능제; 예를 들면, 단기 작용 또는 장기 작용 베타-효능제; 류코트리엔 또는 류코트리엔 수용체의 길항제; ADVAIRR과 같은 배합 약물; IgE 억제제, 예를 들면, 항-IgE 항체(예를 들면, XOLAIRR); 포스포디에스테라제 억제제(예를 들면, PDE4 억제제); 크산틴; 항콜린성 약물; 비만 세포 안정화제(예를 들면, 크로몰린); IL-4 억제제; IL-5 억제제; 에오탁신/CCR3 억제제; 및 항히스타민제가 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다.
기타 양태에서는, 하나 이상의 IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자를 하나 이상의 소염 약물, 면역억제제, 또는 대사 또는 효소 억제제와 함께 공동제형화하고/하거나 공동투여할 수 있다. IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 및 이의 단편화 함께 사용할 수 있는 약물 또는 억제제의 예에는 다음 중 하나 이상이 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다: 하나 이상의 항-IL-13 항체 또는 이의 단편과 함께 공동투여하고/하거나 공동제형화할 수 있는 치료학적 제제의 부가적 예는 TNF 길항제(예: TNF 수용체의 가용성 단편, 예를 들어 p55 또는 p75 사람 TNF 수용체 또는 이의 유도체, 예를 들어 75 kd TNFR-IgG (75 kD TNF 수용체-IgG 융합 단백질, ENBRELTM)); TNF 효소 길항제, 예를 들어 TNFα 전환 효소 (TACE) 억제제; 무스카린 수용체 길항제; TGF-β 길항제; 인터페론 감마; 페르페니돈; 화학요법제, 예를 들어 메토트렉세이트, 레플루노마이드 또는 시롤리무스 (라파마이신) 또는 이의 동족체, 예를 들어 CCI-779; COX2 및 cPLA2 억제제; NSAID; 면역조절제; p38 억제제, TPL-2, Mk-2 및 NFκB 억제제 중 하나 이상을 포함한다.
백신 제형
다른 측면에서, 본 발명은 면역화와 관련된 면역반응을 조절하는 방법을 특징으로 한다. IL-13 결합제(예를 들면, 항-IL-13 항체 분자)를 사용하여 IL-13 활성을 억제함으로써 면역화의 효능을 증가시킬 수 있다. IL-13 결합제를 면역원의 전달, 예를 들면, 백신 투여 전, 전달 동안 또는 전달 후에 투여할 수 있다. 한 양태에서, 백신접종에 의해 유발되는 면역성은 세포 면역성, 예를 들면, 암세포 또는 바이러스에 감염된, 예를 들면, 레트로바이러스에 감염된, 예를 들면, HIV에 감염된 세포에 대한 면역성이다. 한 양태에서, 백신 제형은 하나 이상의 IL-13 결합제 및 항원, 예를 들면, 면역원을 함유한다. 다른 양태에서는, IL-13 결합제 및 면역원을 각각 1시간, 3시간, 1일 또는 2일 내에 개별적으로 투여한다. IL-13 결합제는 하나 이상의 IL-13 활성을 중화시키거나 억제할 수 있는 제제일 수 있다.
IL-13의 억제는 예를 들면, 세포성 백신, 예를 들면, 암 및 바이러스 감염, 예를 들면, 레트로바이러스 감염(예를 들면, HIV 감염)과 같은 질병에 대한 백신의 효능을 개선할 수 있다. 백신에 의한 CD8+ 세포독성 T 림프구(CTL)의 유도는 사이토킨 IL-13으로 인한 것과 유사하게, CD4+ T 세포에 의해 하향 조절된다. IL-13의 억제가 CTL 반응의 백신 유도를 향상시키는 것으로 보인다(문헌[참조: Ahlers et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99:13020-10325]). IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자는 본원에 기술된 항체를 백신과 함께 사용하여 백신 효능을 증가시킬 수 있다. 암 및 바이러스 감염{예를 들면, 레트로바이러스(예를 들면, HIV) 감염과 같은}은 세포 백신 반응이 효과적일 수 있는 예시적 장애이다. 백신 효능은 백신 접종시 IL-13 시그널전달을 차단함으로써 향상된다(문헌[참조: Ahlers et al. (2002) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 99:13020-25]). 백신 제형을 약제학적 또는 치료학적 조성물의 형태로 피검체에 투여할 수 있다.
장애 진단, 예후 및 모니터링 방법
IL-13 결합제를 진단제로 시험관 내 및 생체 내에서 사용할 수 있다. 한 예시적 방법은 (i) IL-13 결합제(예를 들면, IL-13 항체 분자)를 피검체에 투여하는 단계; 및 (ii) 피검체에서 IL-13 결합제를 검출하는 단계를 포함한다. 검출 단계는 피검체 내에서 IL-13 결합제의 위치를 측정하는 단계를 포함할 수 있다. 기타 예시적 방법은 IL-13 결합제와 샘플, 예를 들면, 피검체로부터의 샘플을 접촉시키는 단계를 포함한다. 샘플 내의 IL-13의 유무 또는 IL-13의 수준(정성적 또는 정량적)을 측정할 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 IL-13의 존재를 시험관 내(예를 들면, 조직, 생검과 같은 생물학적 샘플) 또는 생체 내(예를 들면, 피검체에서의 생체 내 영상화)에서 검출하는 진단 방법을 제공한다.
당해 방법은 (i) 샘플과 IL-13 결합제를 접촉시키는 단계; (ii) IL-13 결합제와 당해 샘플 사이의 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함한다. 당해 방법은 또한 참조 샘플(예를 들면, 대조군 샘플)과 당해 결합제를 접촉시키는 단계, 및 결합제와 참조 샘플 사이의 복합체 형성 정도와 비교하여 결합제와 샘플 사이의 복합체 형성 정도를 측정하는 단계를 포함할 수 있다. 대조군 샘플 또는 피검체에 비교한 샘플 또는 피검체에서의 복합체 형성의 변화, 예를 들면, 통계적으로 유의한 변화는 샘플 중의 IL-13의 존재를 나타낼 수 있다.
다른 방법은 (i) 피검체에 IL-13 결합제를 투여하는 단계; 및 (ii) IL-13 결합제와 피검체 사이의 복합체 형성을 검출하는 단계를 포함한다. 검출 단계는 복합체 형성 위치 또는 시간을 측정하는 단계를 포함할 수 있다.
IL-13 결합제를 검출가능한 물질로 직접 또는 간접적으로 표지하여 결합된 또는 결합되지 않은 단백질의 검출을 촉진할 수 있다. 적합한 검출가능 물질에는 각종 효소, 보결분자단, 형광발광 물질, 발광 물질 및 방사성 물질이 포함된다.
IL-13 결합제 및 IL-13 사이의 복합체 형성은 IL-13에 부착된 결합제 또는 비부착 결합제를 측정하거나 가시화하여 검출할 수 있다. 통상적인 검출 검정은 예를 들면, 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA), 방사성면역검정(RIA) 또는 조직 면역조직화학을 사용할 수 있다. IL-13 결합제를 표지하는 것에서 더 나아가, 검출가능 물질 및 비표지 IL-13 결합제로 표지한 표준물을 사용하는 경쟁적 면역검정으로 IL-13의 존재를 샘플 중에서 검정할 수 있다. 이러한 검정의 한 예에서, 표지된 표준물 및 IL-13 결합제를 배합하고, 비표지 결합제에 결합된 표지 기준의 양을 측정한다. 샘플 중 IL-13의 양은 IL-13 결합제에 결합된 표지 기준의 양에 반비례한다.
천식 진단, 예후 및/또는 모니터링 방법
본원에 기술된 결합제를 생물학적 샘플 중 IL-13의 수준을 측정함으로써 천식의 진행을 진단, 예후 및 모니터링하는 방법에 사용할 수 있다. 추가로, 이러한 발견은 IL-13 시그널전달의 신규한 억제제의 확인을 가능케 하며, 이는 또한 천식 치료에 유용할 것이다.
이러한 알러지성 및 비알러지성 천식의 진단 방법은 생물학적 샘플(예를 들면, 혈청, 혈장, 기관지폐포 세척액, 가래 등) 중 IL-13의 변화(예를 들면, 감소 또는 증가)의 검출 단계를 포함할 수 있다. "진단" 또는 "진단하는"는 병리 상태의 유무를 확인함을 의미한다. 진단 방법은 피검체(사람 또는 비사람 포유동물)로부터 생물학적 샘플, 예를 들면, 기관지폐포 세척액 중 IL-13 폴리펩타이드의 시험량을 측정하고, IL-13 폴리펩타이드에 대한 시험량과 정상량 또는 범위(즉, 천식을 앓지 않는 것으로 공지된 개체(들)로부터의 양 또는 범위)를 비교함으로써 IL-13의 존재를 검출하는 단계를 포함한다. 특정 진단 방법이 천식의 확실한 진단을 제공하지 않을 수 있지만, 당해 방법이 진단에 도움을 주는 양성 지표를 제공하는 경우 충분하다.
천식 및/또는 아토피성 장애를 예후하는 방법은 mRNA 또는 단백질 수준에서 IL-13의 상향조절을 검출하는 단계를 포함할 수 있다. "예후" 또는 "예후하는"는 병리 상태의 가능한 발생 및/또는 중증도를 예측함을 의미한다. 예후 방법은 피피검체로부터의 생물학적 샘플 중 IL-13의 시험량을 측정하는 단계, 및 IL-13에 대한 시험량과 예후 양 또는 범위(즉, 천식의 다양한 중증도를 갖는 개체들로부터의 양 또는 범위)를 비교하는 단계를 포함한다. 시험 샘플 중 IL-13의 각종 다양한 양은 천식에 대한 특정 예후와 일치한다. 특정 예후 수준에서 IL-13의 양의 검출은 피검체에 대한 예후를 제공한다.
본 출원은 또한 IL-13의 상향조절을 검출함으로써 천식 경과를 관찰하는 방법을 제공한다. 모니터링 방법은 1차 및 2차 시기에 피검체로부터 취한 생물학적 샘플 중 IL-13의 시험량을 측정하는 단계, 및 당해 양을 비교하는 단계를 포함한다. 1차 및 2차 시기 사이의 IL-13 양의 변화는 천식 및/또는 아토피성 장애의 경과에의 변화를 나타낼 수 있는데, 양의 감소는 천식의 경감을 나타내며, 양의 증가는 천식 및/또는 아토피성 장애의 진행을 나타낸다. 이러한 모니터링 검정은 또한 IL-13 관련 장애를 치료받는 환자에게서 특정 치료학적 중재(예를 들면, 질병 감쇠 및/또는 전도)의 효능을 평가하는 데 유용하다.
형광단- 및 발색단-표지된 결합제를 제조할 수 있다. 형광 잔기는 310nm 이상, 바람직하게는 400nm 이상의 파장에서 최대 흡수를 갖는 것으로 선택할 수 있다. 각종 적합한 형광체 및 발색단이 문헌[참조: Stryer (1968) Science, 162:526 및 Brand, L. et al(1972) Annual Review of Biochemistry, 41 :843-868])에 기술되어 있다. 당해 결합제를 미국 특허 제3,940,475호, 제4,289,747호 및 제4,376,110호에 개시된 바와 같은 통상적인 과정에 의해 형광 발색단 그룹으로 표지할 수 있다. 상기한 다수의 목적하는 특성을 갖는 형광체의 한 그룹은 플루오레세인 및 로다민을 포함하는 크산텐 염료이다. 형광 화합물의 다른 그룹은 나프틸라민이다. 형광단 또는 발색단으로 표지한 후, 당해 결합제를 사용하여 예를 들면, 형광체 현미경(공초점 또는 탈회선 현미경)을 사용하여 샘플 중 IL-13의 존재 또는 국소화를 검출할 수 있다.
조직학적 검사. 본원에 기술된 결합제를 사용하여 면역조직화학을 수행할 수 있다. 예를 들면, 항체의 경우, 당해 항체를 표지(정제 또는 에피토프 태그와 같은)와 함께 합성할 수 있거나, 예를 들면, 표지 또는 표지-결합 그룹을 접합시켜 검출가능하게 표지할 수 있다. 예를 들면, 킬레이트제를 항체에 부착할 수 있다. 이어서, 당해 항체를 조직학적 제제, 예를 들면, 현미경 슬라이드 상의 고정된 조직 절편과 접촉시킨다. 결합을 위한 항온처리 후, 당해 제제를 세척하여 비결합 항체는 제거한다. 이어서 당해 제제를 예를 들면, 현미경을 사용하여 분석하여 항체가 제제에 결합했는지의 여부를 확인한다. 당해 항체(또는 기타 폴리펩타이드 또는 펩타이드)는 결합 시 표지되어 있지 않을 수 있다. 결합 및 세척 후, 당해 항체를 표지하여 이를 검출가능하게 한다.
단백질 어레이(array). IL-13 결합제(예를 들면, IL-13 결합제인 단백질)을 또한 단백질 어레이상에 고정할 수 있다. 당해 단백질 어레이를 진단 도구로 사용하여, 예를 들면, 의학적 샘플(예를 들면, 분리된 세포, 혈액, 혈청, 생검 등)을 선별할 수 있다. 당해 단백질 어레이는 또한 기타 결합제, 예를 들면, IL-13 또는 기타 표적 분자에 결합하는 결합제를 포함할 수 있다.
단백질 어레이 제조 방법은 문헌[참조: De Wildt et al.(2000) Nat. Biotechnol. 18:989-994; Lueking et al.(1999) Anal. Biochem. 270:103- 111; Ge (2000) Nucleic Acids Res. 28, e3, I-VII; MacBeath and Schreiber(2000) Science 289:1760-1763; 국제공개공보 제01/40803호 및 국제공개공보 제99/51773A1호]에 기술되어 있다. 당해 어레이에 대한 폴리펩타이드를 예를 들면, 시판되는 로봇 장치(예를 들면, 제조사[Genetic MicroSystems] 또는 [BioRobotics]의)를 사용하여 고속으로 점적할 수 있다. 당해 어레이 기판은 예를 들면, 니트로셀룰로스, 플라스틱, 유리, 예를 들면, 표변-변형 유리일 수 있다. 당해 어레이는 또한 다공성 기판, 예를 들면, 아크릴아미드, 아가로스 또는 기타 중합체를 포함할 수 있다. 예를 들면, 당해 어레이는 예를 들면, 상기 문헌[참조: De Wildt]에 기술된 바와 같은 항체의 배열일 수 있다. 단백질을 제조하는 세포를 어레이 포맷으로 여과기 상에서 배양할 수 있다. 단백질 제조를 유도하고, 발현 단백질은 당해 세포의 위치에서 여과기에 고정한다.
단백질 어레이를 샘플과 접촉시켜 샘플 중 IL-13의 양을 측정할 수 있다. 샘플이 표지되어 있지 않은 경우, 예를 들면, 표지된 프로브를 사용하는 샌드위치 방법을 사용하여 IL-13의 결합을 검출할 수 있다. 당해 어레이의 각 어드레스에서의 결합 양에 대한 정보를 예를 들면, 컴퓨터 데이타베이스에 프로필로 저장할 수 있다. 단백질 어레이를 이중 제조하여 예를 들면, 상이한 샘플의 결합 프로필과 비교하는 데 사용할 수 있다.
유세포측정. IL-13 결합제를 세포, 예를 들면, 샘플(예를 들면, 환자 샘플) 중의 세포를 표지하는데 사용할 수 있다. 당해 결합제를 형광 화합물에 부착(또는 부착가능하게)할 수 있다. 이어서 당해 세포를 유세포측정기로 분석하고/하거나 분류된(예를 들면, 제조사[Becton Dickinson Immunocytometry Systems, 캘리포니아주 새너제이 소재]로부터 입수 가능한 분류기를 사용하여; 또한 미국 특허 제5,627,037호; 제5,030,002호; 및 제5,137,809호를 참조) 형광 활성화 세포를 사용하여 분류할 수 있다. 세포가 분류기를 통과함에 따라, 레이저 광선이 형광 화합물을 여기시키고, 그 동안 검출기는 통과한 세포를 계수하고 형광을 검출함으로써 형광 화합물이 세포에 부착되었는지의 여부를 결정한다. 각각의 세포에 결합한 표지량을 정량화하고 분석하여 샘플의 특성을 밝힐 수 있다. 또한 분류기는 세포를 편향하고 결합제가 결합하지 않은 이들 세포로부터 결합제에 결합한 세포를 분리할 수 있다. 분리된 세포를 배양하고/하거나 특성을 밝힐 수 있다.
생체 내 영상화. 다른 양태에서, 본 발명은 생체 내에서 피검체 내의 IL-13의 존재를 검출하는 방법을 제공한다. 당해 방법은 (i) 피검체(예를 들면, IL-13 관련 장애를 가진 환자)에 검출가능한 마커와 접합시킨 항-IL-13 항체를 투여하는 단계; (ii) 피검체를 검출가능한 마커의 검출 장치에 노출시키는 단계를 포함한다. 예를 들면, NMR 또는 기타 단층 x-선 촬영 장치를 사용하여 피검체를 영상화한다.
진단 영상화에 유용한 표지의 예에는 방사성표지(예를 들면, 131I, 111In, 123I, 99 mTc, 32P, 33P, 125I, 3H, 14C 및 188Rh), 형광 표지(예를 들면, 플루오레세인 및 로다민), 핵자기공명 활성 표지, 양전자 방출 단층 x-선 촬영 장치("PET") 주사기에 의해 검출가능한 양전자 방출 동위원소, 화학발광체(예를 들면, 루시페린) 및 효소 마커, 예를 들면, 퍼옥시다제 또는 포스파타제가 포함된다. 단범위 방사선 방사체, 예를 들면, 단범위 검출기 프로브에 의해 검출가능한 동위원소를 또한 사용할 수 있다. 당해 결합제를 공지된 기법을 사용하여 이러한 시약으로 표지할 수 있다. 예를 들면, 문헌[Wensel and Meares (1983) Radioimmunoimaging and Radioimmunotherapy, Elsevier, New York for techniques relating to the radiolabeling of antibodies and Colcher et al. (1986) Meth. Enzymol. 121 : 802-816]을 참조한다. 방사성표지된 결합제는 또한 시험관 내 진단 검사에 사용할 수 있다. 동위원소-표지 결합제의 특이적 활성은 반감기, 방사성 표지의 동위원소적 순도, 및 표지가 어떻게 항체 내로 혼입되었는지에 따른다. 방사성 동위원소(예를 들면, 14C, 3H, 35S, 125I, 99mTc, 32P, 33P 및 131I)로 폴리펩타이드를 표지하는 과정이 일반적으로 공지되어 있다. 예를 들면, 문헌[미국 특허 제4,302,438호; Goding, J.W. (Monoclonal antibodies : principles and practice: production and application of monoclonal antibodies in cell biology, biochemistry, and immunology 2nd ed. London; Orlando: Academic Press, 1986. pp 124-126), 및 이의 참조문헌; 및 A.R. Bradwell et al., "Developments in Antibody Imaging", Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy, R.W. Baldwin et al., (eds.), pp 65-85 (Academic Press 1985)]을 참조한다.
본원에 기술된 IL-13 결합제를 자기 공명 영상(MRI) 조영제와 접합시킬 수 있다. 일부 MRI 기법이 유럽 특허원 제EP-A-0 502 814호에 요약되어 있다. 일반적으로, 상이한 환경에서의 수 양성자의 이완 시간 상수 T1 및 T2의 차이를 사용하여 상을 생성한다. 그러나, 이들 차이는 뚜렷한 고분해능 영상을 제공하기에는 불충분할 수 있다. 이들 이완 시간 상수의 차이는 조영제로 향상시킬 수 있다. 이러한 조영제의 예에는 다수의 자성 제제, 상자성 제제(주로 T1을 변경하는) 및 강자성 또는 초상자성 제제(주로 T2 반응을 변경하는)를 포함한다. 킬렐이트(예를 들면, EDTA, DTPA 및 NTA 킬레이트)를 일부 상자성 물질(예를 들면, Fe3+, Mn2+, Gd3+)의 부착에 사용할 수 있다. 기타 제제는 강자성, 항강자성 또는 초상자성 특성을 갖는 미립자(예를 들면, 직경 10㎛ 미만 내지 10nm)의 형태일 수 있다. 또한 IL-13 결합제를 문헌[참조: Pykett (1982) Scientific American, 246:78-88]에 기술된 바와 같은, NMR 활성 19F 원자를 함유하는 제시 그룹으로 표지하여 IL-13 분포 위치를 찾아내고 영상화할 수 있다.
본원에 기술된 범위 내에는 또한 IL-13 결합제 및 진단적 사용, 예를 들면, 시험관 내에서, 예를 들면, 샘플 중, 예를 들면, IL-13 관련 장애를 갖는 환자로부터의 생검 또는 세포, 또는 생체 내에서, 피검체를 영상화하여 IL-13을 검출하기 위한 IL-13 결합제의 사용에 대한 지침서를 포함하는 킷트가 포함된다. 당해 킷트는 추가로 하나 이상의 추가 시약(예를 들면, 표지 또는 추가 진단 제제)을 함유할 수 있다. 생체 내 사용을 위해, 결합제를 약제학적 조성물로 제형화할 수 있다.
킷트
IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자를 킷트, 예를 들면, 킷트의 성분으로 제공할 수 있다. 예를 들면, 당해 킷트는 (a) IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자, 및 임의로는 (b) 정보 물질을 포함한다. 정보 물질은 방법, 예를 들면, 본원에 기술된 방법에 관련된 기술적, 지시적, 시판 또는 기타 물질일 수 있다. 당해 킷트의 정보 물질은 이의 형태를 제한받지 않는다. 한 양태에서, 정보 물질은 화합물의 제조, 화합물의 분자량, 농도, 만기일, 일괄처리 또는 제조 위치 등에 관한 정보를 포함할 수 있다. 한 양태에서, 정보 물질은 본원에 기술된 장애를 치료, 예방, 진단, 예후 또는 관찰하기 위한 IL-13 결합제의 사용에 관한 것이다.
한 양태에서, 정보 물질은 IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자를 본원에 기술된 방법을 수행하기에 적합한 방식, 예를 들면, 적합한 용량, 투여 형태 또는 투여 방식(예를 들면, 본원에 기술된 용량, 투여 형태 또는 투여 방식)으로 투여하기 위한 지침서를 포함할 수 있다. 다른 양태에서, 정보 물질은 IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자를 적합한 피검체, 예를 들면, 사람, 예를 들면, 알러지성 천식, 비-알러지성 천식, 또는 IL-13 관련 장애(예를 들면, 알러지성 및/또는 염증성 장애), 또는 HTLV-1 감염을 갖거나 이에 대한 위험이 있는 환자에 적합하게 투여하기 위한 지침서를 포함할 수 있다. IL-13 생산은 HTLV-1 감염과 상관 관계가 있다(문헌[참조: Chung et al., (2003) Blood 102: 4130-36]).
예를 들면, 당해 물질은 IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자를 환자, 알러지성 천식, 비-알러지성 천식 또는 IL-13 매개 장애, 예를 들면, 알러지성 및/또는 염증성 장애, 또는 HTLV-1 감염으로 투병중이거나, 이의 위험이 있는 환자에게 투여하기 위한 지침서를 포함할 수 있다.
당해 킷트는 IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자를 함유하는 조성물을 위한 하나 이상의 용기를 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 당해 킷트는 분리된 용기, 칸막이 또는 당해 조성물 및 정보 물질용 구획을 포함한다. 예를 들면, 당해 조성물을 병, 유리병 또는 주사기에 담을 수 있으며, 당해 정보 물질은 플라스틱 슬리브(sleeve) 또는 패킷(packet)에 담을 수 있다. 다른 양태에서는, 당해 킷트의 개별 요소를 단일, 비분할된 용기에 담는다. 예를 들면, 당해 조성물을 라벨 형태의 정보 물질이 부착된 병, 유리병 또는 주사기에 담는다. 일부 양태에서, 당해 킷트는 각각 IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자의 하나 이상의 단위 투여 형태(예를 들면, 본원에 기술된 투여 형태)를 함유하는 다량의(예를 들면, 묶음) 개별 용기를 포함한다. 예를 들면, 당해 킷트는 각각 단일 단위 용량의 IL-13 결합제, 예를 들면, 항-IL-13 항체 분자, 또는 다수의 단위 용량을 함유하는 다수의 주사기, 앰플, 포일(foil) 패킷, 분무기 또는 흡입 장치를 포함한다.
키트는 임의로 조성물의 투여에 적합한 장치, 예를 들어 주사기, 흡입기, 피펫, 겸자, 계량 스푼, 점적기(예: 점안기), 솜 (예: 면솜 또는 모솜) 또는 임의의 이러한 전달 장치를 포함한다. 바람직한 양태에서, 장치는 계량된 용량의 결합제를 분배하는 이식가능한 장치이다.
하기 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위해 제시된 것으로써, 어떠한 방식으로도 본 발명의 범위를 제한하고자 하는 것이 아니며 그러한 것으로 간주되어서는 안된다.
실시예 1
(a) NHP-IL-13의 클로닝 및 사람 IL-13에 대한 상동성
사이노몰구스 원숭이 IL-13(NHP IL-13)을 하이브리드화 프로브를 사용하여 클로닝하였다. 사이노몰구스 원숭이 IL-13 아미노산 서열과 사람 IL-13 아미노산 서열의 비교가 도 1a에 나타내어져 있다. 두 서열 사이에는 8개의 아미노산 차이 때문에, 94% 아미노산 상동성이 있다. 이들 차이 중 하나, R130Q는 천식 환자에게서 차별적으로 나타나는 통상적인 사람 다형성을 나타낸다(문헌[참조: Heinzmann et al. (2000) Hum. MoI. Genet. 9:549-559]).
(b) NHP-IL-13과 사람 IL13Rα2의 결합
사람 IL-13은 IL-13 수용체의 알파2 형태(IL13Rα2)와 고친화성으로 결합한다. 당해 수용체의 가용성 형태를 사람 IgG1 Fc 꼬리(sIL13Rα2-Fc)를 사용하여 발현시켰다. IL-13에 결합시키고 세포 표면 IL-13Rα1-IL4R 시그널전달 복합체로부터의 사이토킨을 격리시킴으로써, sIL13Rα2-Fc는 사람 IL-13 생물활성의 잠재적 억제제로서 작용할 수 있다. sIL13Rα2-Fc는 CHO 세포 또는 이. 콜랄이에 의해 생 산된 NHP-IL-13에 결합하는 것으로 나타났다.
(c) 사람 단핵구 상에서의 NHP-IL-13의 생물활성
(i) 사람 단핵구 상에서의 CD23 발현. 사이노몰구스 원숭이 IL-13을 암호화하는 cDNA를 이. 콜라이 내에서 발현시키고 생물활성을 유지하도록 재폴딩시켰다. 사이노몰구스 IL-13에 대한 사람 세포의 반응성은 건강한 공여체로부터의 정상 말초 혈액 단핵 세포를 37℃에서 밤새 IL-13으로 처리하는 생물검정을 사용하여 입증하였다. 이는 단핵구 표면 상에서의 CD23 발현의 상향 조절을 유도하였다. 결과는 사이노몰구스 IL-13이 주로 사람 단핵구 상에서 생물활성을 가짐을 나타내었다.
(ii) HT-29 세포 상에서의 STAT6 인산화. 사람 HT-29 상피 세포주는 IL-13 수용체를 통한 시그널전달 결과인 STAT6 인산화를 수행함에 따라 IL-13에 반응한다. 재조합 NHP-IL-13의 STAT6 인산화 유도 능력을 검정하기 위해, HT-29 세포를 NHP-IL-13으로 37℃에서 30분 동안 시험감염한 후, 고정, 투과시키고, 인-STAT6에 대한 형광 항체로 염색하였다. 결과는 사이노몰구스 IL-13이사람 세포주에서 STAT6 인산화를 효율적으로 유도함을 나타내었다.
(d) NHP-IL-13에 결합하는 항체의 제조
마우스 또는 기타 적합한 동물을 예를 들면, 다음의 방법 중 하나 이상을 사용하여 사이노몰구스 IL-13으로 면역화시키고 부스팅(boostin)하였다. 한 면역화 방법을 부스팅과 유사한 방법 또는 상이한 방법과 조합할 수 있다.
(i) 봉입체로부터 정제된, 이. 콜라이에서 발현되고, 생물학적 활성을 보존하도록 재폴딩시킨 사이노몰구스 IL-13 단백질을 사용한 면역화. 면역화를 위해, 단백질을 완전 프로인트(Freund's) 보조제(CFA)로 유화시키고, 마우스를 표준 프로토콜에 따라 면역화시킨다. 부스팅을 위해, 동일한 단백질을 불완전 프로인트 보조제(IFA)로 유화시킨다.
(ii) 성숙 사이노몰구스 IL-13의 전체 서열을 주사한 펩타이드를 사용한 면역화. 각각의 펩타이드는 사이노몰구스 IL-13에 유일하지만 사람 단백질에는 존재하지 않는 하나 이상의 아미노산을 포함한다. 도 1b를 참조한다. 당해 펩타이드가 시스테인 이외의 C-말단 잔기를 갖는 경우, 시스테인을 접합을 위해 담체 단백질에 첨가한다. 당해 펩타이드를 KLH와 같은 면역원성 담체 단백질과 접합시키고, 표준 프로토콜에 따라 마우스를 면역화시키기 위해 사용한다. 면역화를 위해, 당해 단백질을 완전 프로인트 보조제(CFA)로 유화시키고, 마우스를 표준 프로토콜에 따라 면역화시킨다. 부스팅(boosting)을 위해, 동일한 단백질을 불완전 프로인트 보조제(IFA)로 유화시킨다.
(iii) 발현된 NHP-IL-13 암호화 cDNA를 사용한 면역화. 리더 서열을 포함하는, NHP-IL-13을 암호화하는 cDNA를 적합한 벡터 내로 클로닝시킨다. 당해 DNA를 유전자 총에 의해 피내 주사되는 금 비드 상에 피복시킨다.
(iv) 당해 단백질 또는 펩타이드를 단백질 라이브러리, 예를 들면, 파아지 또는 리보좀 디스플레이 라이브러리를 선별하기 위한 표적으로 사용할 수 있다. 예를 들면, 당해 라이브러리는 각종 다양한 면역글로불린 분자, 예를 들면, Fab, scFv 또는 Fd를 디스플레이할 수 있다.
(e) NHP 및 임의로는 사람 IL-13, 예를 들면, 천연 사람 IL-13과 교차 반응 하는 항체 클론의 선택.
1차 선별
1차 항체 선별은 ELISA로 재조합 NHP-IL-13에 대한 결합을 선별하는 것이다. 이러한 ELISA에서, 웰을 재조합 NHP IL-13으로 피복한다. 면역 혈청을 일련의 희석액에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 항온처리하였다. 웰을 0.05% TWEENR-20을 함유하는 PBS(PBS-Tween)로 세척하였다. 결합된 항체를 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRP)-표지 항-마우스 IgG 및 테트라메틸벤지덴(TMB) 기질을 사용하여 검출하였다. 흡광도는 450nm에서 판독하였다. 통상적으로, 모든 면역화된 마우스는 NHP-IL-13에 대한 고역가의 항체를 생산하였다.
2차 선별
2차 선별은 재조합 NHP-IL-13의 sIL-13Rα1-Fc에 대한 결합의 억제를 ELISA에 의해 선택하였다. 웰을 FLAG-태그된 NHP-IL-13이 결합할 수 있는 가용성 IL-13Rα1-Fc로 피복하였다. 이러한 결합은 HRP에 접합된 항-FLAG 항체를 사용하여 검출하였다. TMB 기질의 가수분해는 450nm의 흡광도에서 판독하였다. 당해 검정에서, FLAG-표지 NHP-IL-13을 면역 혈청의 농도를 증가시키면서 함께 첨가하였다. 면역 혈청이 NHP-IL-13에 결합된 항체를 함유하고 웰을 피복한 sIL13Rα-1Fc에 대한 이의 결합을 막는 경우, ELISA 신호는 감소하였다. 모든 면역화된 마우스는 NHP-IL-13에 대한 결합을 두고 sIL13Rα-1Fc와 경쟁하는 항체를 생산하였지만, 역가는 마우스마다 다양하였다. 비장은 혈청을 나타낸 동물로부터의 융합물이 최고 희석에서 NHP-IL-13에 대한 sIL13Rα-1Fc 결합을 억제하는 것을 선택하였다.
3차 선별
NHP-IL-13 생물활성의 억제에 대해 시험한 3차 선별. TF-1 증식 검정, 단핵구 CD23 발현 검정, 및 HT-29 세포 STAT6 인산화 검정을 포함하는 여러 생물검정을 사용할 수 있었다. 면역 혈청을 NHP-IL-13-매개 STAT6 인산화의 억제에 대하여 시험하였다. HT-29 사람 상피세포주를 제시된 농도의 마우스 면역 혈청의 유무하에 재조합 NHP-IL-13으로 37℃에서 30분 동안 시험감염시켰다. 이어서 세포를 인-STAT6에 대한 ALEXATM 플루오로 488-접합 mAb(제조사[Parmingen])를 사용하여 고정, 투과 및 염색하였다. STAT6 인산화 수행에 의해 IL-13에 반응하는 세포의 퍼센트를 유세포측정기로 측정하였다. 고혈청 희석에서 NHP-IL-13 생물활성의 최강 억제로 결정된 가장 효능 높은 중화 활성을 가진 마우스의 비장을 하이브리도마 제조를 위해 선택하였다.
4차 선별
사람 IL-13을 함유하는 조악한 제제를 사람 탯줄 혈액 단핵 세포(제조사[BioWhittaker/Cambrex])로부터 제조하였다. 당해 세포를 10% 열-불활성화 FCS, 50U/㎖ 페니실린, 50mg/㎖ 스트렙토마이신 및 2mM L-글루타민을 함유하는 RPMI 배지 중, 5% CO2에서, 37℃에서 배양하였다. 세포를 유사분열물질 PHA-P(제조사[Sigma])로 3일 동안 자극하고, 재조합 사람 IL-4(제조사[R&D Systems]) 및 항-사람 IL-12를 사용하여 Th2 쪽으로 편중되게(skewed) 하였다. Th2 세포를 IL-2를 사용하여 1주 동안 증폭시킨 후, 포볼 12-미리스테이트 13-아세테이트(PMA) 및 아 이오노마이신을 3일 동안 처리하여 사이토킨을 생산하도록 활성화시켰다. 상층액을 수집하고 투석하여 PMA 및 아이오노마이신을 제거하였다. IL-13에 대한 생물검정을 방해할 수 있는 GM-CSF 및 IL-4를 고갈시키기 위해, 상층액을 GM-CSF 및 IL-4(제조사[R&D Systems])에 대한 비오틴화된 항체로 처리한 후, 스트렙타비딘-피복 자성 비드(제조사[Dynal])과 함께 항온처리하였다. IL-13의 최종 농도를 ELISA(제조사[Biosource])로 측정하였고, 총 단백질의 최종 농도는 Bradford 검정(제조사[Bio-Rad])으로 측정하였다. 총 제제는 0.0005중량% 미만의 IL-13을 함유한다.
하이브리도마 클론의 선택
확정된 방법을 사용하여, 하이브리도마를 P3X63_AG8.653 골수종 세포주(ATCC)에 융합시킨, 상기한 바와 같이 선택된 마우스의 비장으로부터 생성시켰다. 세포를 제한 희석으로 평판 배양하였고, 클론은 상기한 선별 기준에 따라 선택하였다. ELISA에 의한 NHP-IL-13의 sIL13Rα1-Fc에 대한 결합 경쟁 능력을 토대로 한 클론의 선별 데이타를 수집하였다. 추가로 클론을 NHP-IL-13의 생물활성을 중화시키는 능력에 대하여 검사하였다. 하이브리도마의 상층액을 HT-29 사람 상피세포주 중 NHP-IL-13에 의해 유도된 STAT-6 인산화의 경쟁에 대하여 검사하였다.
실시예 2: MJ 2-7 항체
총 RNA를 QIAGEN RNEASYTM Mini Kit(제조사[Qiagen])을 사용하여 MJ2-7 하이브리도마 세포로부터 제조하였다. SMARTTM PCR 합성 킷트(제조사[BD Biosciences Clontech])를 사용하여 RNA를 cDNA로 역전사시켰다. MJ 2-7 중쇄의 가변 도메인을 전방 프라이머로 SMARTTM 올리고뉴클레오타이드, 및 역 프라이머로 마우스 IgG1 불변 영역의 CH1 영역의 N-말단부를 암호화하는 DNA에 어닐링하는 mIgG1 프라이머를 사용하여 PCR에 의해 추정하였다. MJ 2-7 경쇄 가변 영역을 암호화하는 DNA 단편은 SMARTTM 및 마우스 카파 특이적 프라이머를 사용하여 제조하였다. PCR 반응은 DEEP VENTTM DNA 중합효소(제조사[New England Biolabs]) 및 dNTP 25nM을 사용하여 24회(94℃에서 1분, 60℃에서 1분, 72℃에서 1분) 수행하였다. PCR 생성물을 pED6 벡터로 계대클로닝하였고, 삽입물의 서열을 DNA 서열화로 확인하였다. 정제된 마우스 MJ 2-7 항체의 N-말단 단백질 서열화를 사용하여 관찰된 단백질 서열에 상응하는 해독 서열을 확인하였다.
NHP IL-13과 상호작용하고 사람 IL-13와 상호작용할 수 있음을 제시하는 특성을 갖는 마우스 모노클로날 항체 MJ 2-7의 예시적 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열은 다음과 같다.
중쇄 가변 도메인을 암호화하는 예시적 뉴클레오타이드 서열은 다음을 포함한다:
GAG GTTCAGCTGC AGCAGTCTGG GGCAGAGCTT GTGAAGCCAG
GGGCCTCAGT CAAGTTGTCC TGCACAGGTT CTGGCTTCAA CATTAAAGAC
ACCTATATAC ACTGGGTGAA GCAGAGGCCT GAACAGGGCC TGGAGTGGAT
TGGAAGGATT GATCCTGCGA ATGATAATAT TAAATATGAC CCGAAGTTCC
AGGGCAAGGC CACTATAACA GCAGACACAT CCTCCAACAC AGCCTACCTA
CAGCTCAACA GCCTGACATC TGAGGACACT GCCGTCTATT ACTGTGCTAG
ATCTGAGGAA AATTGGTACG ACTTTTTTGA CTACTGGGGC CAAGGCACCA
CTCTCACAGT CTCCTCA(서열번호 129)
중쇄 가변 도메인에 대한 예시적 아미노산 서열은 다음을 포함한다:
EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTGS GFNIKDTYIH WVKQRPEQGLEWIG RIDP
ANDNIKYDPKFQG KATITADTSSNTAYLQLNSLTSEDTAVYYCAR SEENWYD
FFDY WGQGTTLTVSS(서열번호 130)
CDR은 밑줄이 그어져 있다. 당해 가변 도메인 앞에는 임의로 리더 서열, 예를 들면, MKCSWVIFFLMAVVTGVNS(서열번호 131)이 선행한다. 경쇄 가변 도메인을 암호화하는 예시적 뉴클레오타이드 서열은 다음을 포함한다:
GAT GTTTTGATGA CCCAAACTCC ACTCTCCCTG CCTGTCAGTC
TTGGAGATCA AGCCTCCATC TCTTGCAGGT CTAGTCAGAG CATTGTACAT
AGTAATGGAA ACACCTATTT AGAATGGTAC CTGCAGAAAC CAGGCCAGTC
TCCAAAGCTC CTGATCTACA AAGTTTCCAA CCGATTTTCT GGGGTCCCAG
ACAGGTTCAG TGGCAGTGGA TCAGGGACAG ATTTCACACT CAAGATTAGC
AGAGTGGAGG CTGAGGATCT GGGAGTTTAT TACTGCTTTC AAGGTTCACA
TATTCCGTAC ACGTTCGGAG GGGGGACCAA GCTGGAAATA AAA(서열번호 132)
경쇄 가변 도메인에 대한 예시적 아미노산 서열은 다음을 포함한다:
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISC RSSQSIVHSNGNTYLE WYLQKPGQ
SPKLLIY KVSNRFS GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYC FQGSHIPY
T FGGGTKLEIK(서열번호 133)
CDR은 밑줄이 그어져 있다. 당해 아미노산 서열 앞에는 임의로 리더 서열, 예를 들면, MKLPVRLLVLMFWIPASSS(서열번호 134)이 선행한다. 본원에서 용어 "MJ 2-7"은 용어 "mAb7.1.1"과 상호교환적으로 사용한다.
실시예 3: C65 항체
NHP-13과 상호작용하고, 사람 IL-13과 상호작용할 수 있음을 제시하는 특성을 가진 마우스 모노클로날 항체 C65의 예시적 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열은 다음과 같다.
중쇄 가변 도메인에 대한 예시적 아미노산 서열은 다음을 포함한다:
1 ATGGCTGTCC TGGCATTACT CTTCTGCCTG GTAACATTCC CAAGCTGTAT
51 CCTTTCCCAG GTGCAGCTGA AGGAGTCAGG ACCTGGCCTG GTGGCGCCCT
101 CACAGAGCCT GTCCATCACA TGCACCGTCT CAGGGTTCTC ATTAACCGGC
151 TATGGTGTAA ACTGGGTTCG CCAGCCTCCA GGAAAGGGTC TGGAGTGGCT
201 GGGAATAATT TGGGGTGATG GAAGCACAGA CTATAATTCA GCTCTCAAAT
251 CCAGACTGAT CATCAACAAG GACAACTCCA AGAGCCAAGT TTTCTTAAAA
301 ATGAACAGTC TGCAAACTGA TGACACAGCC AGGTACTTCT GTGCCAGAGA
351 TAAGACTTTT TACTACGATG GTTTCTACAG GGGCAGGATG GACTACTGGG
401 GTCAAGGAAC CTCAGTCACC GTCTCCTCA (서열번호 135)
중쇄 가변 도메인에 대한 예시적 아미노산 서열은 다음을 포함한다:
QVQLKESGPGL VAPSQSLSIT CTVS GFSLTG YGVN WVRQPP GKGLEWLG II
WGDGSTDYNS AL KSRLIINK DNSKSQVFLK MNSLQTDDTA RYFCAR DKTF
YYDGFYRGRM DY WGQGTSVT VSS (서열번호 136)
CDR은 밑줄이 그어져 있다. 당해 아미노산 서열 앞에는 임의로 리더 서열, 예를 들면, MAVLALLFCL VTFPSCILS (서열번호 137)이 선행한다.
당해 경쇄 가변 도메인을 암호화하는 예시적 뉴클레오타이드 서열은 다음을 포함한다:
1 ATGAACACGA GGGCCCCTGC TGAGTTCCTT GGGTTCCTGT TGCTCTGGTT
51 TTTAGGTGCC AGATGTGATG TCCAGATGAT TCAGTCTCCA TCCTCCCTGT
101 CTGCATCTTT GGGAGACATT GTCACCATGA CTTGCCAGGC AAGTCAGGGC
151 ACTAGCATTA ATTTAAACTG GTTTCAGCAA AAACCAGGGA AAGCTCCTAA
201 GCTCCTGATC TTTGGTGCAA GCAACTTGGA AGATGGGGTC CCATCAAGGT
251 TCAGTGGCAG TAGATATGGG ACAAATTTCA CTCTCACCAT CAGCAGCCTG
301 GAGGATGAAG ATATGGCAAC TTATTTCTGT CTACAGCATA GTTATCTCCC
351 GTGGACGTTC GGTGGCGGCA CCAAACTGGA AATCAAA (서열번호 138)
경쇄 가변 도메인에 대한 예시적 아미노산 서열에는 다음이 포함된다:
DVQMIQSP SSLSASLGDI VTMTC QASQG TSINLN WFQQ KPGKAPKLLI
F GASNLED GV PSRFSGSRYG TNFTLTISSL EDEDMATYFC LQHSYLPWT F
GGGTKLEIK(서열번호 139)
CDR은 밑줄이 그어져 있다. 당해 아미노산 서열 앞에는 임의로 리더 서열, 예를 들면, MNTRAPAEFLGFLLLWFLGARC (서열번호 140)이 선행한다.
실시예 4: 사이노몰구스 원숭이 모델
생체 내에서 하나 이상의 IL-13-관련 활성을 중화시키는 항체의 효능을 돼지회충에 대해 선천적으로 알러지성인 사이노몰구스 원숭이에서 항원-유도성 기도 염증 모델을 사용하여 검사하였다. 당해 모델에서, 돼지회충 항원을 사용한 알러지성 원숭이 시험감염은 염증 세포, 특히, 호산구의 기도 내로의 유입을 초래한다. 항체의 이러한 세포 유입을 막는 능력을 검사하기 위해, 당해 항체를 돼지회충 항원을 사용한 시험감염 24시간 전에 투여할 수 있다. 시험감염 당일, 기저 기관지폐포 세척(BAL) 샘플을 왼쪽 폐로부터 취할 수 있다. 이어서 당해 항원을 오른쪽 폐로 기관내적으로 주입할 수 있다. 24시간 후, 오른쪽 폐를 세척하고, CHO 세포로부터 발현된 재조합 항체 10mg/kg으로 정맥내로 처리한 동물로부터의 BAL 액을 비처리 동물로부터의 BAL 액과 비교한다. 항체가 기도 염증을 감소시킨 경우, BAL 호산구의 퍼센트 증가가 비처리 그룹에서는 관찰되지만, 항체-처리 그룹에서는 관찰되지 않을 수 있다. 이들 검정을 사용하여 당해 항체가 알러지 항원으로 시험감염시킨 알러지성 동물에서 기도 호산구증가증을 효과적으로 예방하였는지를 확인할 수 있다.
실시예 5: Fc 서열
서열번호 128의 1번 위치의 Ser는 Ser 앞에 중쇄 가변 도메인의 118번 잔기가 위치하는 제1 예시적 전장 항체 번호매김 도식에서 119번 아미노산 잔기를 나타낸다. 제1 예시적 전장 항체 번호매김 도식에서, 돌연변이된 아미노산은 234번 및 237번에 위치하며, 서열번호 128의 116번 및 119번 위치에 상응한다. 따라서, 다 음의 서열은 제1 예시적 전장 항체 번호설정 도식에 따라, 2개의 돌연변이(L234A 및 G237A)를 갖는 Fc 도메인을 나타낸다.
STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEALGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 128)
다음은 다른 예시적 사람 Fc 도메인 서열이다.
STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 141)
효과기 기능을 감소시키는 데 사용할 수 있는 기타 예시적 변형에는 (L234A;L235A), (L235A; G237A), 및 N297A가 포함된다.
실시예 6: 마우스 내의 IL-13 및 IgE
IL-13은 아토피성 질병의 중요한 매개체인 IgE의 생산에 관여한다. IL-13이 결핍된 마우스는 혈청 IgE 및 비만 세포 IgE 반응의 부분적 감소를 갖는 반면, 천연 IL-13 결합제, IL-13Rα2-/-가 결핍된 마우스는 IgE 및 IgE 효과기 기능의 향상된 수준을 갖는다.
BALB/c 암컷 마우스를 Jackson 연구소(메인주 바하버 소재)로부터 입수하였다. IL-13Rα2-/- 마우스는 예를 들면, 문헌[참조: in Wood et al. (2003) J. Exp. Med. 197:703-9])에 기술되어 있다. IL-13이 결핍된 마우스는 예를 들면, 문헌[참조: McKenzie et al. (1998) Immunity 9:423-32]에 기술되어 있다. 모든 돌연변이체 균주는 BALB/c 배경하에 있다.
혈청 IgE 수준을 ELISA로 측정하였다. ELISA 플레이트(제조사[MaxiSrop]; 뉴욕주 로체스터 눈크 소재)에 랫트 항-마우스 IgE(제조사[BD Biosciences], 캘리포니아주 샌디에고 소재)를 4℃에서 밤새 피복하였다. 플레이트를 PBS 중 0.5% 젤라틴을 사용하여 실온에서 1시간 동안 차단하고, 0.05% TWEENR-20(PBS-Tween)을 함유하는 PBS에서 세척하고, 표준물로서 정제된 마우스 IgE(제조사[BD Biosciences]) 또는 혈청 희석액과 함께 실온에서 6시간 동안 항온처리하였다. 결합은 차단제로서 마우스 IgG(제조사[Sigma-Aldrich], 미주리주 세인트루이스 소재)를 사용하는 비오틴화 항-마우스 IgE(제조사[BD Biosciences])로 검출하였다. 결합은 퍼옥시다제-결합 스트렙타비딘(제조사[Southern Biothechnology Associates, Inc.], 알라바마주 버밍함 소재) 및 SURE BLUETM 기질(제조사[KPL Inc.], 매릴랜드주 게이더스버그 소재)을 사용하여 검출하였다.
비투여(naive) 마우스에서의 안정적인 IgE 수준을 유지하기 위한 IL-13의 요건을 조사하기 위해, 야생형 마우스 및 유전적으로 IL-13 및 IL-13Rα2가 결핍된 마우스로부터의 특이적 면역화의 부재 하에 혈청을 조사하였다. IL-13이 결핍된 마우스는 사실상 검출 불가능한 수준의 혈청 IgE를 가졌다. 대조적으로, 억제 수용체 IL-13Rα2가 결팝된 마우스는 혈청 IgE의 상승된 수준을 나타내었다. 이들 결과는 IL-13 차단이 아토피성 장애의 치료 또는 예방에 유용할 수 있음을 입증한다.
실시예 7: IL-13 및 아토피성 장애
천연 사람 IL-13(1ng/㎖의) 생물활성을 억제하는 MJ2-7의 능력을 STAT6 인산화에 대한 검정으로 평가하였다. MJ2-7은 당해 검정에서 약 0.293nM의 IC50으로 천연 사람 IL-13의 활성을 억제하였다. MJ2-7의 쥐 중쇄 및 사람화된 경쇄를 갖는 항체는 당해 검정에서 약 0.554nM의 IC50으로 천연 사람 IL-13의 활성을 억제하였다.
MJ2-7의 비-사람 영장류 IL-13(1ng/㎖의) 억제 능력은 CD23 발현에 대한 검정으로 평가하였다. MJ2-7은 당해 검정에서 약 0.242nM의 IC50으로 비-사람 영장류 IL-13의 활성을 억제하였다. MJ2-7의 설치류 중쇄 및 사람화된 경쇄를 갖는 항체는 당해 검정에서 약 0.308nM의 IC50으로 비-사람 영장류 IL-13의 활성을 억제하였다.
실시예 8: 마우스 MJ2-7 항체의 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열
중쇄 가변 영역(임의의 리더를 갖는)을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 다음과 같다.
1 ATGAAATGCA GCTGGGTTAT CTTCTTCCTG ATGGCAGTGG TTACAGGGGT
51 CAATTCAGAG GTTCAGCTGC AGCAGTCTGG GGCAGAGCTT GTGAAGCCAG
101 GGGCCTCAGT CAAGTTGTCC TGCACAGGTT CTGGCTTCAA CATTAAAGAC
151 ACCTATATAC ACTGGGTGAA GCAGAGGCCT GAACAGGGCC TGGAGTGGAT
201 TGGAAGGATT GATCCTGCGA ATGATAATAT TAAATATGAC CCGAAGTTCC
251 AGGGCAAGGC CACTATAACA GCAGACACAT CCTCCAACAC AGCCTACCTA
301 CAGCTCAACA GCCTGACATC TGAGGACACT GCCGTCTATT ACTGTGCTAG
351 ATCTGAGGAA AATTGGTACG ACTTTTTTGA CTACTGGGGC CAAGGCACCA
401 CTCTCACAGT CTCCTCA (서열번호 142)
임의의 리더(밀줄이 그어져 있는)를 갖는 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 다음과 같다.
1 MKCSWVIFFL MAVVTGVNSE VQLQQSGAEL VKPGASVKLS CTGSGFNIKD
51 TYIHWVKQRP EQGLEWIGRI DPANDNIKYD PKFQGKATIT ADTSSNTAYL
101 QLNSLTSEDT AVYYCARSEE NWYDFFDYWG QGTTLTVSS
(서열번호 143)
당해 경쇄 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 다음과 같다.
1 ATGAAGTTGC CTGTTAGGCT GTTGGTGCTG ATGTTCTGGA TTCCTGCTTC
51 CAGCAGTGAT GTTTTGATGA CCCAAACTCC ACTCTCCCTG CCTGTCAGTC
101 TTGGAGATCA AGCCTCCATC TCTTGCAGGT CTAGTCAGAG CATTGTACAT
151 AGTAATGGAA ACACCTATTT AGAATGGTAC CTGCAGAAAC CAGGCCAGTC
201 TCCAAAGCTC CTGATCTACA AAGTTTCCAA CCGATTTTCT GGGGTCCCAG
251 ACAGGTTCAG TGGCAGTGGA TCAGGGACAG ATTTCACACT CAAGATTAGC
301 AGAGTGGAGG CTGAGGATCT GGGAGTTTAT TACTGCTTTC AAGGTTCACA
351 TATTCCGTAC ACGTTCGGAG GGGGGACCAA GCTGGAAATA AAA (서열번호 144)
임의의 리더(밑줄이 그어져 있는)를 갖는 당해 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 다음과 같다.
1 MKLPVRLLVL MFWIPASSSD VLMTQTPLSL PVSLGDQASI SCRSSQSIVH
51 SNGNTYLEWY LQKPGQSPKL LIYKVSNRFS GVPDRFSGSG SGTDFTLKIS
101 RVEAEDLGVY YCFQGSHIPY TFGGGTKLEI K (서열번호 145)
실시예 9: MJ2-7 항체의 예시적 제1 사람화된 변이체의 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열
사람화된 항체 형태 1(V1)은 최근접 사람 배선 클론을 기초로 한다. hMJ 2-7 V1 중쇄 가변 영역(hMJ 2-7 VH V1)(임의의 리더 서열을 암호화하는 서열을 갖는)의 뉴클레오타이드 서열은 다음과 같다.
1 ATGGATTGGA CCTGGCGCAT CCTGTTCCTG GTGGCCGCTG CCACCGGCGC
51 TCACTCTCAG GTGCAGCTGG TGCAGTCTGG CGCCGAGGTG AAGAAGCCTG
101 GCGCTTCCGT GAAGGTGTCC TGTAAGGCCT CCGGCTTCAA CATCAAGGAC
151 ACCTACATCC ACTGGGTGCG GCAGGCTCCC GGCCAGCGGC TGGAGTGGAT
201 GGGCCGGATC GATCCTGCCA ACGACAACAT CAAGTACGAC CCCAAGTTTC
251 AGGGCCGCGT GACCATCACC CGCGATACCT CCGCTTCTAC CGCCTACATG
301 GAGCTGTCTA GCCTGCGGAG CGAGGATACC GCCGTGTACT ACTGCGCCCG
351 CTCCGAGGAG AACTGGTACG ACTTCTTCGA CTACTGGGGC CAGGGCACCC
401 TGGTGACCGT GTCCTCT (서열번호 146)
당해 중쇄 가변 영역(hMJ 2-7 V1)의 아미노산 서열은 DP-25, VH-I, 1-03에 이식된 CDR을 기초로 한다. 임의의 리더 서열(처음 밑줄 그어진 영역; 이후의 밑줄 그어진 영역으로 나타낸 AbM 정의를 기초로 한 CDR)을 갖는 아미노산 서열은 다음과 같다.
1 MDWTWRILFL VAAATGAHS - Q VQLVQSGAEV KKPGASVKVS CKAS GFNIKD
51 TYIH WVRQAP GQRLEWMG RI DPANDNIKYD PKFQG RVTIT RDTSASTAYM
101 ELSSLRSEDT AVYYCAR SEE NWYDFFDY WG QGTLVTVSSG ESCR (서열번호 147)
hMJ 2-7 V1 경쇄 가변 도메인(hMJ 2-7 VL V1)(임의의 리더 서열을 암호화하는 서열을 갖는)의 뉴클레오타이드 서열은 다음과 같다.
1 ATGCGGCTGC CCGCTCAGCT GCTGGGCCTG CTGATGCTGT GGGTGCCCGG
51 CTCTTCCGGC GACGTGGTGA TGACCCAGTC CCCTCTGTCT CTGCCCGTGA
101 CCCTGGGCCA GCCCGCTTCT ATCTCTTGCC GGTCCTCCCA GTCCATCGTG
151 CACTCCAACG GCAACACCTA CCTGGAGTGG TTTCAGCAGA GACCCGGCCA
201 GTCTCCTCGG CGGCTGATCT ACAAGGTGTC CAACCGCTTT TCCGGCGTGC
251 CCGATCGGTT CTCCGGCAGC GGCTCCGGCA CCGATTTCAC CCTGAAGATC
301 AGCCGCGTGG AGGCCGAGGA TGTGGGCGTG TACTACTGCT TCCAGGGCTC
351 CCACATCCCT TACACCTTTG GCGGCGGAAC CAAGGTGGAG ATCAAG
(서열번호 148)
이러한 형태는 DPK18, V 카파II로 이식된 CDR을 기초로 한다. hMJ V1 경쇄 가변 도메인(hMJ 2-7 VL V1)(처음 밑줄 그어진 영역으로서의 임의의 리더 서열을 갖는; 이후의 밑줄 그어진 영역의 AbM 정의를 기초로 한 CDR)의 아미노산 서열은 다음과 같다.
1 MRLPAQLLGL LMLWVPGSSG -DVVMTQSPLS LPVTLGQPAS ISC RSSQSIV
51 HSNGNTYLE W FQQRPGQSPR RLIY KVSNRF S GVPDRFSGS GSGTDFTLKI
101 SRVEAEDVGV YYC FQGSHIP YT FGGGTKVE IK (서열번호 149)
실시예 10: MJ 2-7 항체의 예시적 제2 사람화 변이체의 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열
다음의 중쇄 가변 영역은 DP-54, VH-3, 3-07에 대한 CDR 이식체를 기초로 한다. hMJ 2-7 형태 2(V2) 중쇄 가변 영역(hMJ 2-7 VH V2)(임의의 리더 서열을 암호화하는 서열)의 뉴클레오타이드 서열은 다음과 같다.
1 ATGGAGCTGG GCCTGTCTTG GGTGTTCCTG GTGGCTATCC TGGAGGGCGT
51 GCAGTGCGAG GTGCAGCTGG TGGAGTCTGG CGGCGGACTG GTGCAGCCTG
101 GCGGCTCTCT GCGGCTGTCT TGCGCCGCTT CCGGCTTCAA CATCAAGGAC
151 ACCTACATCC ACTGGGTGCG GCAGGCTCCC GGCAAGGGCC TGGAGTGGGT
201 GGCCCGGATC GATCCTGCCA ACGACAACAT CAAGTACGAC CCCAAGTTCC
251 AGGGCCGGTT CACCATCTCT CGCGACAACG CCAAGAACTC CCTGTACCTC
301 CAGATGAACT CTCTGCGCGC CGAGGATACC GCCGTGTACT ACTGCGCCCG
351 GAGCGAGGAG AACTGGTACG ACTTCTTCGA CTACTGGGGC CAGGGCACCC
401 TGGTGACCGT GTCCTCT (서열번호 150)
임의의 리더 서열(처음 밑줄 그어진 영역; 이후 밑줄 그어진 영역에 나타낸 AbM 정의를 기초로 한 CDR)을 갖는 hMJ 2-7 V2 중쇄 가변 영역(hMJ 2-7 VH V2)의 뉴클레오타이드 서열은 다음과 같다.
1 MELGLSWVFL VAILEGVQC- E VQLVESGGGL VQPGGSLRLS CAAS GFNIKD
51 TYIH WVRQAP GKGLEWVA RI DPANDNIKYD PKFQG RFTIS RDNAKNSLYL
101 QMNSLRAEDT AVYYCAR SEE NWYDFFDY WG QGTLVTVSS (서열번호 151)
hMJ 2-7 V2 경쇄 가변 영역은 DPK9, V 카파I, 02에 대한 CDR 이식체를 기초로 한다. hMJ 2-7 V2 경쇄 가변 영역(hMJ 2-7 VH V2)(임의의 리더 서열을 암호화하는 서열을 갖는)의 뉴클레오타이드 서열은 다음과 같다.
1 ATGGATATGC GCGTGCCCGC TCAGCTGCTG GGCCTGCTGC TGCTGTGGCT
51 GCGCGGAGCC CGCTGCGATA TCCAGATGAC CCAGTCCCCT TCTTCTCTGT
101 CCGCCTCTGT GGGCGATCGC GTGACCATCA CCTGTCGGTC CTCCCAGTCC
151 ATCGTGCACT CCAACGGCAA CACCTACCTG GAGTGGTATC AGCAGAAGCC
201 CGGCAAGGCC CCTAAGCTGC TGATCTACAA GGTGTCCAAC CGCTTTTCCG
251 GCGTGCCTTC TCGGTTCTCC GGCTCCGGCT CCGGCACCGA TTTCACCCTG
301 ACCATCTCCT CCCTCCAGCC CGAGGATTTC GCCACCTACT ACTGCTTCCA
351 GGGCTCCCAC ATCCCTTACA CCTTTGGCGG CGGAACCAAG GTGGAGATCA
401 AGCGT (서열번호 152)
hMJ 2-7 V2 경쇄 가변 영역(hMJ 2-7 VL V2)(밑줄 그어진 임의의 지도 펩타이드 및 이후 밑줄 그어진 영역에 나타낸 AbM 정의를 토대로 한 CDR을 갖는)은 다음 과 같다.
1 MDMRVPAQLL GLLLLWLRGA RC -DIQMTQSP SSLSASVGDR VTITC RSSQS
51 IVHSNGNTYL E WYQQKPGKA PKLLIY KVSN RFS GVPSRFS GSGSGTDFTL
101 TISSLQPEDF ATYYC FQGSH IPYT FGGGTK VEIKR (서열번호 153)
MJ 2-7 V2 중쇄 가변 영역의 추가의 사람화 형태를 제조하였다. 이들 형태는 선택된 주쇄 위치에 쥐 아미노산을 갖는 복귀 돌연변이를 포함하였다.
복귀 돌연변이 V48I, A29G를 갖는 중쇄 가변 영역 "형태 2.1" 또는 V2.1을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 다음과 같다.
1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC
51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA
101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATCGGCCGG
151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG
201 GTTCACCATC TCTCGCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA
251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG
301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC
351 CGTGTCCTCT (서열번호 154)
V2.1의 중쇄 가변 영역(이후의 밑줄 그어진 영역으로 나타낸 AbM 정의를 기초로 한 CDR)의 아미노산 서열은 다음과 같다.
1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFNIK DTYIH WVRQA PGKGLEWIG R
51 IDPANDNIKY DPKFQG RFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR SE
101 ENWYDFFDY W GQGTLVTVSS (서열번호 155)
복귀 돌연변이(R67K;F68A)를 갖는 중쇄 가변 영역 V2.2를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 다음과 같다.
1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC
51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA
101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGCCCGG
151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCAA
201 GGCCACCATC TCTCGCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA
251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG
301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC
351 CGTGTCCTCT (서열번호 156)
V2.2의 중쇄 가변 영역(이후의 밑줄 그어진 영역으로 나타낸 AbM 정의를 기초로 한 CDR)의 아미노산 서열은 다음과 같다.
1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFNIK DTYIH WVRQA PGKGLEWVA R
51 IDPANDNIKY DPKFQG KATI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR SE
102 ENWYDFFDY W GQGTLVTVSS (서열번호 157)
복귀 돌연변이(R72A)를 갖는 중쇄 가변 영역 V2.3을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 다음과 같다.
1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC
51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA
101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGCCCGG
151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG
201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA
251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG
301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC
351 CGTGTCCTCT (서열번호 158)
V2.3의 중쇄 가변 영역(이후의 밑줄 그어진 영역으로 나타낸 AbM 정의를 기초로 한 CDR)의 아미노산 서열은 다음과 같다.
1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFNIK DTYIH WVRQA PGKGLEWVA R
51 IDPANDNIKY DPKFQG RFTI SADNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR SE
103 ENWYDFFDY W GQGTLVTVSS (서열번호 159)
복귀 돌연변이(A49G)를 갖는 중쇄 가변 영역 V2.4를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 다음과 같다.
1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC
51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA
101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGGCCGG
151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG
201 GTTCACCATC TCTCGCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA
251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG
301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC
351 CGTGTCCTCT (서열번호 160)
V2.4의 중쇄 가변 영역(이후의 밑줄 그어진 영역으로 나타낸 AbM 정의를 기초로 한 CDR)의 아미노산 서열은 다음과 같다.
1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFNIK DTYIH WVRQA PGKGLEWVG R
51 IDPANDNIKY DPKFQG RFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR SE
104 ENWYDFFDY W GQGTLVTVSS (서열번호 161)
복귀 돌연변이(R67K;F68A;R72A)를 갖는 중쇄 가변 영역 V2.5를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 다음과 같다.
1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC
51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA
101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGCCCGG
151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCAA
201 GGCCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA
251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG
301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC
352 CGTGTCCTCT (서열번호 162)
V2.5의 중쇄 가변 영역(이후의 밑줄 그어진 영역으로 나타낸 AbM 정의를 기초로 한 CDR)의 아미노산 서열은 다음과 같다.
1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFNIK DTYIH WVRQA PGKGLEWVA R
51 IDPANDNIKY DPKFQG KATI SADNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR SE
105 ENWYDFFDY W GQGTLVTVSS (서열번호 163)
복귀 돌연변이(V48I;A49G;R72A)를 갖는 중쇄 가변 영역 V2.6을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 다음과 같다.
1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC
51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA
101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATCGGCCGG
151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG
201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA
251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG
301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC
351 CGTGTCCTCT (서열번호 164)
V2.6의 중쇄 가변 영역(이후의 밑줄 그어진 영역으로 나타낸 AbM 정의를 기초로 한 CDR)의 아미노산 서열은 다음과 같다.
1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFNIK DTYIH WVRQA PGKGLEWIG R
51 IDPANDNIKY DPKFQG RFTI SADNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR SE
106 ENWYDFFDY W GQGTLVTVSS (서열번호 165)
복귀 돌연변이(A49G;R72A)를 갖는 중쇄 가변 영역 V2.7을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 다음과 같다.
1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC
51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA
101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGGCCGG
151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG
201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA
251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG
301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC
351 CGTGTCCTCT (서열번호 166)
V2.7의 중쇄 가변 영역(이후의 밑줄 그어진 영역으로 나타낸 AbM 정의를 기초로 한 CDR)의 아미노산 서열은 다음과 같다.
1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFNIK DTYIH WVRQA PGKGLEWVG R
51 IDPANDNIKY DPKFQG RFTI SADNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR SE
107 ENWYDFFDY W GQGTLVTVSS (서열번호 167)
복귀 돌연변이(L79A)를 갖는 중쇄 가변 영역 V2.8을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 다음과 같다.
1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC
51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA
101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGCCCGG
151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG
201 GTTCACCATC TCTCGCGACA ACGCCAAGAA CTCCGCCTAC CTCCAGATGA
251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG
301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC
351 CGTGTCCTCT (서열번호 168)
V2.8의 중쇄 가변 영역(이후의 밑줄 그어진 영역으로 나타낸 AbM 정의를 기초로 한 CDR)의 아미노산 서열은 다음과 같다.
1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFNIK DTYIH WVRQA PGKGLEWVA R
51 IDPANDNIKY DPKFQG RFTI SRDNAKNSAY LQMNSLRAED TAVYYCAR SE
108 ENWYDFFDY W GQGTLVTVSS (서열번호 169)
복귀 돌연변이(A49G;R72A;L79A)를 갖는 중쇄 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 다음과 같다.
1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC
51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA
101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGGCCGG
151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG
201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCGCCTAC CTCCAGATGA
251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG
301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC
351 CGTGTCCTCT (서열번호 170)
V2.10의 중쇄 가변 영역(이후의 밑줄 그어진 영역으로 나타낸 AbM 정의를 기초로 한 CDR)의 아미노산 서열은 다음과 같다.
1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFNIK DTYIH WVRQA PGKGLEWVG R
51 IDPANDNIKY DPKFQG RFTI SADNAKNSAY LQMNSLRAED TAVYYCAR SE
109 ENWYDFFDY W GQGTLVTVSS (서열번호 171)
복귀 돌연변이(V48I;A49G;R72A;L79A)를 갖는 중쇄 가변 영역 V2.11을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 다음과 같다.
1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC
51 TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA
101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATCGGCCGG
151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG
201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCGCCTAC CTCCAGATGA
251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG
301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC
351 CGTGTCCTCT (서열번호 172)
V2.11의 중쇄 가변 영역(이후의 밑줄 그어진 영역으로 나타낸 AbM 정의를 기초로 한 CDR)의 아미노산 서열은 다음과 같다.
1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFNIK DTYIH WVRQA PGKGLEWIG R
51 IDPANDNIKY DPKFQG RFTI SADNAKNSAY LQMNSLRAED TAVYYCAR SE
110 ENWYDFFDY W GQGTLVTVSS (서열번호 173)
복귀 돌연변이(V48I;A49G;R72A)를 갖는 중쇄 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 다음과 같다.
1 GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC
51 TCTGCGGCTG TCTTGCACCG GCTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA
101 TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATCGGCCGG
151 ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG
201 GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA
251 ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG
301 GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC
351 CGTGTCCTCT (서열번호 174)
V2.16의 중쇄 가변 영역(이후의 밑줄 그어진 영역으로 나타낸 AbM 정의를 기초로 한 CDR)의 아미노산 서열은 다음과 같다.
1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCTGS GFNIK DTYIH WVRQA PGKGLEWIG R
51 IDPANDNIKY DPKFQG RFTI SADNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR SE
111 ENWYDFFDY W GQGTLVTVSS (서열번호 175)
다음은 돌연변이된 CH2 영역을 갖는 사람화 MH 2-7 V2.11 IgG1의 아미노산 서열이다.
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWIGRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEALGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 176)
가변 도메인은 아미노산 1 내지 120에 있으며, CH1은 아미노산 121 내지 218; 힌지는 아미노산 219 내지 233; CH2는 아미노산 234 내지 343; 그리고 CH3는 아미노산 344 내지 450에 있다. 경쇄는 1 내지 133에 가변 도메인을 갖는 다음의 서열을 포함한다.
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGKAPKLLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCFQGSHIPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호 177)
실시예 11: MJ2-7의 예시적 변형체의 기능 검정
본 발명자는 IL-13 활성에 대한 검정에서 MJ2-7 항체 및 사람화 변형체의 사람 IL-13을 억제하는 능력을 평가하였다.
STAT6 인산화 검정
HT-29 사람 결장 상피 세포(ATCC)를 10% FBS, 펜-스트렙(Pen-Strep), 글루타민 및 중탄산나트륨을 함유하는 맥코이(McCoy's) 5A 배지에서 부착성 단층으로 배양하였다. 검정을 위해, 트립신을 사용하여 세포를 플라스크로부터 제거하고, 신선한 배지로 세척하고, 12 x 75mm 폴리스티렌 튜브로 분산시켰다. 재조합 사람 IL-13(제조사[R&D Systems, Inc.])을 100 내지 0.01ng/㎖ 범위의 농도로 첨가하였다. 항체의 IL-13 반응 억제 능력을 검사하는 검정을 위해, 재조합 사람 IL-13 1ng/㎖을 500 내지 0.4ng/㎖ 범위의 항체 희석액과 함께 첨가하였다. 세포를 30분 내지 60분 동안 37℃ 수욕에서 항온처리한 후, 1% BSA를 함유하는 빙냉 PBS로 세척 하였다. 세포를 PBS 중 1% 파라포름알데하이드 중에서 15분 동안 37℃에서 항온처리하여 고정한 후, 1% BSA를 함유하는 PBS로 세척하였다. 핵을 투과성이 되도록 하기 위해, 세포를 무수 에탄올 중에서 -20℃에서 밤새 항온처리하였다. 이들을 1% BSA를 함유하는 PBS로 세척한 후, STAT6(제조사[BD Biosciences])에 대한 ALEXATM 플루오르 488-표지 항체로 염색하였다. 형광을 FACSCANTM 및 CELLQUESTTM 소프트웨어(제조사[BD Biosciences])로 분석하였다.
사람 단핵구 상에서의 CD23 유도
HISTOPAQUER(제조사[Sigma]) 상에 적층하여 사람 말초 혈액핵 세포로부터 단핵 세포를 분리하였다. 세포를 10% 열-불활성화 FCS, 50U/㎖ 페니실린, 50mg/㎖ 스트렙토마이신, 2mM L-글루타민을 함유하는 RPMI로 세척하고, 48-웰 조직 배양 플레이트(제조사[Costar/Corning])에 플레이팅하였다. 재조합 사람 IL-13(제조사[R&D Systems, Inc.])를 100 내지 0.01ng/㎖ 범위의 희석액으로 첨가하였다. 항체의 IL-13 반응 억제 능력을 검사하는 검정을 위해, 재조합 사람 IL-13 1ng/㎖을 500 내지 0.4ng/㎖ 범위의 항체 희석액과 함께 첨가하였다. 세포를 5% CO2 항온배양기에서 37℃에서 밤새 항온처리하였다. 다음날, 비-효소적 세포 분리 용액(제조사[Sigma])을 사용하여 세포를 웰로부터 수거한 후, 1% BSA를 함유하는 빙냉 PBS로 세척하였다. 세포를 사람 CD23에 대한 피코에리트린(PE)-표지 항체(제조사[BD Biosciences], 캘리포니아주 샌디에고 소재]), 및 사람 CD11b에 대한 사이-크롬-표지 항체(제조사[BD Biosciences])와 함께 항온처리하였다. 단핵구를 고 전향 및 측방 광 산란, 및 CD11b의 발현을 토대로 하여 통제하였다. 단핵구 상의 CD23 발현은 FACSCANTM (제조사[BD Biosciences])를 사용하는 유세포측정기로 측정하였고, CD23+ 세포의 백분율은 CELLQUESTTM 소프트웨어(제조사[BD Biosciences])로 분석하였다.
TF-1 세포 증식
TF-1 세포는 그들의 장기 성장에 인터루킨 3(IL-3) 또는 과립구/대식세포 콜로니-자극 인자(GM-CSF)를 필요로 하는 인자-의존성 사람 조혈 세포주이다. TF-1 세포는 또한 인터루킨 13(IL-13)을 포함하는 각종 기타 사이토킨에 반응한다. TF-1 세포(ATCC)를 10% 열-불활성화 FCS, 50U/㎖ 페니실린, 50mg/㎖ 스트렙토마이신, 2mM L-글루타민, 및 5ng/㎖ 재조합 사람 GM-CSF(제조사[R&D Systems])를 함유하는 RPMI 배지 중에 유지시켰다. 검정 전, 세포에서 GM-CSF를 밤새 고갈시켰다. 검정을 위해, TF-1 세포를 94-웰 평저 미세역가 플레이트(제조사[Costar/Corning])에 5000 세포/웰로 2회 플레이팅하였으며, 100 내지 0.01ng/㎖ 범위의 사람 IL-13(제조사[R&D Systems])으로 시험감염시켰다. 5% CO2를 사용한 37℃ 항온배양기에서 72시간 방치한 후, 당해 세포에 1μCi/웰 3H-티미딘(제조사[Perkin Elmer/New England Nuclear])으로 펄스를 발생시켰다. 이들을 추가로 4.5시간 동안 항온처리한 후, 당해 세포를 TOMTEKTM 수거기를 사용하여 여과기 매트 상에서 수거하였다. 3H-티미딘 혼입을 액체 섬광계수법으로 산정하였다.
테나신 생산 검정
BEAS-2B 사람 기관지 상피 세포(ATCC)를 보충제를 첨가한 BEGM 배지(제조사[Clonetics])에서 유지시켰다. 세포를 96-웰 환자 배양 플레이트에서 웰당 20,000개로 밤새 플레이팅하였다. 제시된 항체의 유무하에 IL-13을 함유하는 신선한 배지를 첨가하였다. 밤새 항온처리한 후, 상층액을 수거하고, ELISA로 세포외 기질 성분, 테나신 C의 존재를 검정하였다. ELISA 플레이트에 PBS 중 사람 테나신에 대한 쥐 모노클로날 항체(IgG1, k; 제조사[Chemicon International]) 1ug/㎖를 밤새 피복하였다. 플레이트를 0.05% TWEENR-20(PBS-Tween)을 함유하는 PBS로 세척하고, 1% BSA를 함유하는 PBS로 차단하였다. 신선한 차단 용액을 이들 총 변화에 대하여 6분 마다 첨가하였다. 플레이트를 PBS-Tween으로 3회 세척하였다. 테나신은 테나신에 대한 쥐 모노클로날 항체(IgG2a, k; 제조사[Biohit])를 사용하여 검출하였다. 결합은 마우스 IgG2a에 대한 HRP-표지 항체, 및 이에 이어 TBM 기질로 검출하였다. 당해 반응을 0.01N 황산으로 중지시켰다. 흡광도는 450nm에서 판독하였다.
HT 29 사람 상피세포주를 사용하여 STAT6 인산화를 검정할 수 있다. HT 29 세포를 증가하는 농도의 시험 항체의 존재 하에 천연 사람 IL-13 조악한 제제 1ng/㎖과 함께 30분 동안 항온처리하였다. 인산화된 STAT6에 대한 항체를 사용한 세포 용해물의 웨스턴 블롯 분석을 사용하여 STAT6의 용량-의존성 IL 13-매개 인산화를 검출할 수 있다. 유사하게, 유세포측정 분석은 포화 농도의 IL-13으로 37℃에서 30분 동안 처리하고, 인-STAT6에 대한 ALEXATM 플루오르 488-표지 mAb로 고정, 투과, 및 염색한 HT 29 세포에서 인산화된 STAT6를 검출할 수 있다. 예시적 결과 세트가 표 1에 나타내어져 있다. V2.11의 억제 활성을 sIL-13Rα2-Fc의 억제 활성과 비교하였다.
Figure 112006093173148-PCT00001
실시예 12: IL-13과 IL-13Rα1 사이의 결합 상호작용 부위
IL-13, IL-13Rα1의 세포외 도메인(서열번호 125의 잔기 27 내지 342), 및 사람 IL-13에 결합하는 항체의 복합체를 x-선 결정학으로 연구하였다. 예를 들면, 출원 제16163-029001호를 참조한다. 실질적인 상호작용의 두 지점이 IL-13과 IL-13Rα1 사이에서 발견되었다. IL-13Rα1의 Ig 도메인 1과 IL-13 사이의 상호작용은 두 분자를 걸치는 확장된 베타 시트의 형성을 초래한다. IL-13(서열번호 124, 성숙 서열[전장 서열(서열번호 178])의 잔기 Thr88[Thr107], Lys89[Lys108], Ile90[Ile109] 및 Glu91[Glu110]는 수용체(서열번호 125)의 잔기 Lys76, Lys77, Ile78 및 Ala79와 상호작용하는 베타쇄를 형성한다. 추가로, IL-13(서열번호 124[서열번호 178])의 Met33[Met52])의 측쇄는 이들 인접 쇄의 측쇄에 의해 형성된 소수성 포켓으로 확장한다.
Ig 도메인 3과의 상호작용의 주요 특징은 IL-13(서열번호 124[서열번호 178])의 소수성 잔기(Phe107[Phe126])의 수용체 IL-13Rα1의 Ig 영역 3의 소수성 포켓으로의 삽입이다. IL-13Rα1의 소수성 포켓은 잔기 Leu319, Cys257, Arg256 및 Cys320(서열번호 125)의 측쇄에 의해 형성된다. IL-13(서열번호 124[서열번호 178])의 Phe107[Phe126])과의 상호작용은 IL-13Rα1(서열번호 125)의 아미노산 잔기 Ile254, Ser255, Arg256, Lys318, Cys320 및 Tyr321과 IL-13(서열번호 124[서열번호 178])의 아미노산 잔기 Arg11[Arg30], Glu12[Glu31], Leu13[Leu32], Ile14[Ile33], Glu15[Ile34], Lys104[Lys123], Lys105[Lys124], Leu106[Leu125], Phe107[Phe126], 및 Arg108[Arg127] 사이의 반데르발스 상호작용의 광범위한 세트를 초래한다. 이들 결과는 IL-13Rα1과의 상호작용에 관여하는 IL-13의 영역과 결합하는 IL-13 결합제를 IL-13 시그널전달을 억제하는 데 사용할 수 있음을 입증한다.
실시예 13: COS 세포에서의 사람화 MJ 2-7 항체의 발현
포유동물 재조합 시스템에서 키메릭 항-NHP IL-13 항체의 제조를 평가하기 위해, 마우스 MJ 2-7 항체의 가변 영역을 사람 카파 및 IgG1 mut 불변 도메인을 포함하는 pED6 발현 벡터 내로 계대클로닝하였다. 원숭이 신장 COS-1 세포를 10% 열-불활성화 태소 혈청, 1mM 글루타민 및 0.1mg/㎖ 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 DME 배지(제조사[Gibco])에서 배양하였다. 시약 공급자가 제시한 프로토콜에 따라 TRANSITITTM-LT1 형질감염 시약(제조사[Mirus])를 사용하여 COS 세포의 형질감염을 수행하였다. 형질감염된 COS 세포를 10% CO2의 존재 하에 37℃에서 24시간 동안 항온처리하고, 멸균 PBS로 세척한 후, 무혈청 배지 R1CD1(제조사[Gibco])에서 48시간 동안 배양하여 항체가 조작된 배지로 분비 및 축적되게 하였다. chMJ 2-7 항체의 발현을 기준으로 정제된 사람 IgG1/카파 항체를 사용하는 총 사람 IgG ELISA로 정량화하였다.
COS 세포에서의 키메릭 MJ 2-7 항체의 생산은 대조군 키메릭 항체보다 현저히 낮아졌다(표 2). 따라서, Ab 발현의 최적화를 MJ 2-7 사람화 과정에 포함시켰다. 당해 사람화된 MJ 2-7 V1은 마우스 2-7 중쇄 CDR을 통상적으로 사람 항체 반응에서 잘 발현되고 제시되는, 가장 상동인 사람 배선 클론, CP25 상으로 CDR 이식하여 제작하였다. 경쇄의 CDR을 사람 배선 클론 CPK 18 상으로 계대 배양하여 huMJ 2-7 V1 VL을 제조하였다. 사람화된 MJ 2-7 V2는 CDR MJ 2-7 중쇄 가변 도메인을 DP54 사람 배선 유전자 주쇄 상으로, 그리고 MJ 2-7 경쇄 가변 도메인의 CDR을 DPK9 사람 배선 유전자 주쇄 상으로 CDR 이식하여 제조하였다. DP54 클론은 사람 VH III 배선 하위그룹에 속하며, DPK9는 사람 배선 유전자의 V 카파 I 하위그룹으로부터 유래한다. VH III 및 V 카파 I 주쇄를 포함하는 항체 분자는 이. 콜라이 시스템에서 높은 발현 수준을 가지며, 높은 안정성 및 수용액에서의 가용성을 갖추고 있다(예를 들면, 문헌[Stefan Ewert et al., J. MoI. Biol. (2003), 325; 531-553, Adrian Auf et al., Methods (2004) 34:215-224]을 참조한다). 본 발명자는 여러 재조합 항체의 제조에 DP54/DPK9 사람 주쇄의 조합을 사용하였으며, 일시적 COS 형질감염 실험에서 항체의 높은 발현(> 20㎍/㎖)을 성취하였다.
mAb 발현, Tg/ml
3D6 10.166
Ch MJ 2-7 pED6 (1) 2.44
Ch MJ 2-7pED6 (2) 2.035
h12A11 V2 1.639
CDR 이식된 MJ 2-7 V1 및 V2 VH 및 VL 유전자를 2가지의 포유동물 발현 벡터 시스템(pED6카파/pED6 IgG1mut 및 pSMEN2카파/pSMED2IgG1mut) 내로 계대클로닝하였고, 사람화된 MJ 2-7 항체의 생산을 상기한 바와 같은 일시적 COS 형질감염 실험으로 평가하였다. 제1 세트의 실험에서, 항체 발현에 대한 huMJ 2-7 VL 및 VH의 각종 조합의 효과를 평가하였다(표 3). MJ 2-7 VL 주쇄 영역의 DKP9로의 변화는 항체 생산을 8배 내지 10배 증가시킨 반면, VL V1(DPK 18 상으로 이식된 CDR)은 항체 생산에서 단지 중간 정도 증가만을 나타내었다. 이러한 효과는 사람화된 VL을 키메릭 MJ 2-7 및 사람화된 MJ 2-7 V1 및 V2와 결합시키는 경우 관찰되었다. CDR 이식된 MJ2-7 V2는 동일한 검정 조건에서 CDR 이식된 MJ 2-7 V1보다 3배 높은 발현 수준을 가졌다.
mAb 발현, Tg/ml
ChMJ 2-7 1.83
hVH V1/ mVL 3.04
hVH V1/ hVL V1 6.34
hVH V1/ hVL V2 15.4
hVH-V2 / mVL 0.2
mVH / hVL-V2 18.41
hVH-V2 / hVL-V1 5.13
hVH-V2 / hVL-V2 10.79
유사한 실험을 중쇄 가변 도메인에 복귀 돌연변이를 포함하는 huMJ 2-7 V2를 사용하여 수행하였다(표 4). 마우스 MJ 2-7 항체의 항원 결합 및 중화 특성을 유지하는 huMJ 2-7 V2.11에 대하여 최고 발현 수준이 검출되었다. 48번 및 49번 위치에의 복귀 돌연변이(48I 및 A49G)의 유도는 COS 세포에서 huMJ 2-7 V2 항체의 생산을 증가시킨 반면, 23, 24, 67 및 68번 위치에서의 아미노산 복귀 돌연변이(A23T; A24G; R67K 및 F68A)는 항체 발현에 부정적 영향을 가졌다.
mAb 발현, Tg/ml
V2 8.27
V2.1 12.1
V2.2 5.29
V2.3 9.60
V2.4 8.20
V2.5 6.05
V2.6 11.3
V2.10 9.84
V2.11 14.85
V2.16 1.765
실시예 14: NHP IL-13 FLAG ELISA에 의한 사람화된 MJ 2-7 항체의 항원 결합 특성 평가
사람화된 MJ 2-7 mAb(V1, V2 v2)의 NHP IL-13-FLAG에 대한 결합에 대한 비오틴화된 마우스 MJ 2-7 Ab와의 경쟁 능력을 ELISA로 평가하였다. 미세 역가 플레이트(제조사[lCostar])에 항-FLAG 모노클로날 항체 M2(제조사[Sigma]) 1㎍/㎖을 피복시켰다. 10ng/㎖ 농도의 FLAG NHP IL-13 단백질을 비오틴 표지 항체 MJ 2-7 10ng/㎖ 및 다양한 농도의 비표지 마우스 및 사람화된 MJ 2-7 항체와 혼합하였다. 당해 혼합물을 2시간 동안 실온에서 항온처리한 후 항-FLAG 항체-피복 플레이트에 첨가하였다. FLAG NHP-IL-13/바이오MJ 2-7 Ab 복합체의 결합을 스트렙타비딘-HRP 및 3, 3',5,5'-테트라메틸벤지딘(TMB)로 검출하였다. 사람화된 MJ 2-7 V2는 활성을 현저히 손실한 반면, huMJ 2-7 V2.11은 항원 결합 활성을 완전히 회복하였고, FLAG-NHP IL-13과의 결합에 대하여 비오틴화 MJ 2-7 mAb와 경쟁할 수 있었다. BIACORETM 분석은 또한 NHP IL-13이 고정된 h1uMJ 2-7 v2.11에 대한 신속한 결합 및 느린 해리를 가졌음을 확증하였다.
실시예 15: 사람화된 MJ 2-7 V2VH의 분자 모델링
사람화된 MJ 2-7 중쇄 형태 2(MJ2-7 V2VH)의 모델링을 위한 구조 주형을 단백질 데이타 뱅크(PDB)에 대한 VLAST 상동성 탐색을 기초로 하여 선택하였다. BLAST 탐색 결과로부터 선택한 2개의 구조 외에, 추가의 주형을 단백질 구조의 사내 데이타베이스로부터 선택하였다. MJ 2-7 V2VH의 모델은 주형으로 3가지의 주형 구조 1JPS(사람화된 Fab D3h44와의 복합체 중 사람 조직 인자의 공동 결정 구조), 1N8Z(허셉틴 Fab와의 복합체 중 사람 Her2의 공동 결정 구조) 및 F13.2(마우스 항체 Fab 단편을 갖는 복합체 중 IL-13)과 InsightII의 상동성 모듈(제조사[Accelrys], 샌디에고 소재)을 사용하여 제조하였다. 1JPS, 1N8Z 및 F13.2(출원 제16163-029001호로부터 입수 가능한)의 구조적 보존 영역(SCR)을 각각의 모듈에 대한 Cα 거리 행렬을 기초로 하여 결정하였고, 주형 구조는 SCR의 상응하는 원자의 최소 RMS 편차를 기초로 하여 중첩시켰다. 표적 단백질 MJ 2-7 V2VH의 서열을 중첩된 주형 단백질의 서열과 정렬시키고, SCR의 좌표를 표적 단백질의 상응하는 잔기에 할당하였다. SCR의 각각에서 표적과 주형 사이의 서열 유사성 정도를 기초로 하여, 상이한 주형으로부터의 좌표를 상이한 SCR에 대하여 사용하였다. SCR에 포함되지 않은 루프 및 가변 영역에 대한 좌표는 상동성 모듈로 제공된 탐색 루프(Search Loop) 또는 생성 루프(Generate Loop)로 생성시켰다. 요약하면, 탐색 루프 방법은 동일한 수의 측면 잔기 및 소정의 길이의 중재 펩타이드 단편을 갖는 단백질 구조로부터 유래한 미리 계산한 행렬을 갖는 측면 SCR 잔기의 Ca 거리 행렬과 비교함으로써 2개의 SCR 사이에 적합하게 핏팅되는 단백질 구조를 스캐닝한다. 새로이 원자 좌표를 생성하는 생성 루프 방법은 탐색 루프가 목적하는 결과를 도출하지 못한 경우 사용하였다. 아미노산 잔기가 당해 주형 및 표적과 동일한 경우, 아미노산 측쇄의 형태를 주형의 아미노산 측쇄 형태와 동일하게 유지하였다. 그러나, 로타머(rotamer)의 형태 탐식을 수행하였고, 에너지적으로 가장 바람직한 형태를 주형 및 표적과 동일하지 않은 이들 잔기용으로 유지시켰다. 이어서 두 SCR 사이 또는 SCR과 가변 도메인 사이의 접합에 적합한 결합 길이 및 결합 각을 유도하기 위해 분자 기계적 자극을 공급하는 스플라이스 복구(Splice Repair)를 수행하였다. 최종적으로, 당해 모델을 5kcal/(mol Å)의 최대 편차 또는 500회까지 최대경사 하강 알고리즘, 또는 5kcal/(mol Å)의 최대 편차 또는 2000회까지 접합 구배 알고리즘을 사용하여 에너지 최소화에 적용하였다. 당해 모델의 질은 ProStat/Struct_Check 명령을 사용하여 평가하였다.
마우스 MJ2-7 VH의 분자 모델은 사용한 주형이 1QBL 및 1QBM, 말 항-사이토크롬 c 항체 FabE8에 대한 결정 구조인 것을 제외하고, 사람화된 MJ2-7 V2VH에 대하여 기술된 과정에 따라 제조하였다.
CDR-주쇄 H-결합의 전위차는 다음의 모델을 사용하여 예측하였다.
hMJ2-7 V2VH:G26 - hMJ2-7 V2VH:A24
hMJ2-7 V2VH:Y109 - hMJ2-7 V2VH:S25
mMJ2-7 VH:D61 - mMJ2-7 VH:I48
mMJ2-7 VH:K63 - mMJ2-7 VH:E46
mMJ2-7 VH: Yl 09 - mMJ2-7 VH:R98
이들 차이는 다음의 임의의 복귀 돌연변이: A23T, A24G 및 V48I를 제시하였다.
개별 아미노산의 유의한 RMS 편차 및 이들에 인접한 아미노산 차이를 토대로 하여 제시한 다른 임의의 복귀 돌연변이는 G9A, L115T 및 R87T이다.
실시예 16: MJ2-7 및 C65의 IL-13 중화 활성
MJ2-7 및 C65의 IL-13 중화 능력을 일련의 생물검정으로 검사하였다. 첫째, 이들 항체의 NHP IL-13의 생물활성을 중화시키는 능력을 단핵구 CD23 발현 검정으로 검사하였다. 새로이 분리한 사람 PBMC를 MJ2-7, C65 또는 sIL-13Rα-2Fc의 농도를 증가시키며 NHP IL-13 3ng/㎖와 함께 밤새 항온처리하였다. 세포를 수거하고, 단핵구-특이적 마커, CD11b에 대한 CYCHROMETM-표지된 항체, 및 CD23에 대한 PE-표지된 항체로 염색하였다. IL-13 처리에 대한 반응에서, CD23 발현은 CD11b의 발현에 근거하여 통제된, 단핵구 세포에서 상향조절된다. MJ2-7, C65 및 sIL13Rα2-Fc 모두 당해 검정에서 NHP IL-13의 활성을 중화시켰다. MJ2-7 및 sIL-13Rα2-Fc의 효능은 동등하였다. C65는 대략 20배 덜 활성적이었다(도 2).
제2 생물검정에서, 천연 사람 IL-13에 대한 MJ2-7 및 C65의 중화 능력을 STAT6 인산화 검정으로 검사하였다. HT-29 상피 세포주를 증가하는 농도의 MJ2-7, C65 또는 sIL-13Rα2-Fc의 존재 하에, 천연 사람 IL-13 0.3ng/㎖과 함께 37℃에서 30분 동안 항온처리하였다. 세포를 인산화된 STAT6에 대한 ALEXATM 플루오르 488-표지된 항체를 사용하여 고정시키고 투과성이 되게 하고, 염색하였다. MJ2-7, C65 및 sIL13Rα2-Fc 모두 당해 검정에서 천연 사람 IL-13의 활성을 중화시킬 수 있었다(도 3). 쥐 MJ 2-7 항체 및 사람화된 형태(V2.11)에 대한 IC50은 각각 0.48nM 및 0.52nM였다. MJ2-7 및 sIL-13Rα2-Fc의 효능은 대략 동등하였다. sIL-13Rα2-Fc에 대한 IC50은 0.33nM였다(도 4). C65는 대략 20배 덜 활성적이었다(도 5).
제3 생물검정에서, MJ2-7의 천연 사람 IL-13을 중화시키는 능력을 테나신 생산 검정에서 검사하였다. 사람 BEAS-2B 폐 상피세포주를 MJ2-7의 농도를 증가시키면서 천연 사람 IL-13 3ng/㎖과 함께 밤새 항온처리하였다. 상층액을 수거하고 ELISA로 세포외 기질 단백질, 테나신 C의 생산을 검사하였다(도 6a). MJ2-7은 대략 0.1nM의 IC50으로 이러한 반응을 억제하였다(도 6b).
이들 결과는 MJ2-7이 NHP IL-13 및 천연 사람 IL-13 둘 다의 유효한 중화자임을 입증한다. MJ2-7의 IL-13 중화 능력은 sIL-13Rα2-Fc의 능력과 동등하다. MJ1-65는 또한 IL-13 중화 활성을 갖지만, MJ2-7보다 대략 20배 덜 효능적이다.
실시예 17: SPR에 의한 MJ2-7 항체의 에피토프 지도화
sIL-13Rα2-Fc를 표준 아민 커플링에 의해 CM5 칩상에 직접 피복하였다. 100nM 농도의 NHP-IL-13을 주사하였고, 고정된 IL-13Rα2-Fc에 대한 이의 결합을 BIACORETM으로 검출하였다. 항 IL-13 항체 100nM를 추가로 주사하여, 결합 변화를 관찰하였다. MJ2-7 항체는 hu IL-13Rα2와 복합체를 형성한 경우에는 NHP-IL-13에 결합하지 않았지만, 양성 대조군 항-IL-13 항체는 NHP-IL-13에 결합하였다(도 7). 이들 결과는 hu IL-13Rα2 및 MJ2-7이 NHP IL-13의 동일한 에피토프 또는 중복된 에피토프에 결합함을 나타낸다.
실시예 18: NHP-IL-13 및 사람화된 MJ2-7 V2-11 항체 사이의 상호작용을 위한 반응속도 상수의 측정
생감지기 표면을 제조하기 위해, 염소 항-사람 IgG Fc 특이적 항체를 아민 커플링을 사용하여 연구용 카복시 메틸 덱스트란 칩(CM5) 상에 고정시켰다. 당해 표면을 0.1M 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카보디이미드(EDC) 및 0.05M N-하이드록시석신이미드(NHS)의 혼합물로 활성화시켰다. 포착된 항체를 아세트산나트륨 완충액(pH 5.5)에 10㎍/㎖의 농도로 주입하였다. 잔여 활성화 그룹은 1.0M 에탄올라민(pH 8.0)으로 차단시켰다. 대조군으로서, 제1 유동 세포를 벌크(bulk) 굴절 지수, 기질 효과 및 비-특이적 결합을 교정하기 위해 참조 표면으로 사용하였고, 제2, 제3 및 제4의 유동 세포를 포획 분자로 피복하였다.
반응속도 분석을 위해, 모노클로날 항체 hMJ2-7 V2-11을 1㎍/㎖ 용액 40㎕을 주사하여 항 IgG 항체 표면상에 포획하였다. 기준점 및 주사 완료 후 대략 30초 지점 사이의 전체 차이를 취하여 표적 결합량을 나타내었다. 600, 200, 66.6, 22.2, 7.4, 2.5, 0.8, 0.27, 0.09 및 0nM 농도의 NHP-IL-13의 용액을 2분 동안 100㎕의 유속으로 3회 주입하였고, 결합된 물질의 양을 시간 함수로서 기록하였다(도 8). 충분히 활성적인 포획 표면을 재생성하기 위해, 해리 상을 동일한 유속으로 5분 동안 HBS/EP 완충액(10mM HEPES, pH 7.4, 150mM NaCl, 3mM EDTA 및 0.005%(v/v) 계면활성제 P20 함유) 중에서 관찰하였다. 모든 반응속도 실험은 HBS/EP 완충액 중에서 22.5℃에서 수행하였다. 블랭크 및 완충액 효과는 이중 참조를 사용하는 각각의 센서그램(sensorgram)에서 제하였다.
반응속도 데이타는 1:1 모델에 적용한 BIAEVALUATIONTM 소프트웨어 3.0.2를 사용하여 분석하였다. 뚜렷한 해리(kd) 및 결합(ka) 속도 상수를 범용 분석을 사용하는 센서그램의 적합한 영역으로부터 계산하였다. 항체와 NHP IL-13 사이의 상호작용의 친화성 상수는 다음의 공식으로 반응속도 상수로부터 계산하였다: Kd = kd/ka. 이들 결과는 huMJ2-7 V2-11이 각각 2.05x107M-1s-1 및 8.89x10-4l/s의 개시 속도 및 종결 속도를 가지며, 이는 NHP-IL-13에 대한 43pM 친화성을 갖는 항체를 초래함을 나타낸다.
실시예 19: 생물검정에서 MJ2-7 사람화 중간체의 억제 활성
사람화 과정에서 각종 중간체의 억제 활성을 STAT6 인산화 및 테나신 생산 생물검정으로 검사하였다. NHP IL-13 또는 천연 사람 IL-13 조악한 제제의 최대이하 수준을 사용하여 생물학적 반응을 제거하였고, 당해 반응의 최대 억제의 절반에 필요한 MJ2-7의 사람화 형태의 농도를 결정하였다. 사람 IgG1 및 카파 불변 영역으로 발현시킨 hMJ2-7 V1, hMJ2-7 V2 및 hMJ2-7 V3의 분석은 형태 2가 천연 사람 IL-13에 대한 중화 활성을 유지하였음을 나타내었다. 천연 사람 IL-13 생물활성의 최대 억제의 절반에 필요한 형태 2 사람화 항체의 농도는 대략 쥐 MJ2-7의 농도의 대략 110배 이상이었다(도 9). V1 또는 V2 VL을 쥐 MJ2-7 VH와 결합시킨, 반(semi)-사람화 형태의 분석은 천연 사람 IL-13 중화 활성의 감소가 사람화된 VL 보다는, VH 서열에 기인하였음을 입증하였다(도 10). VL V1을 갖는 반-사람화된 MJ2-7 항체가 중화 활성을 단지 부분적으로만 유지한 반면, 사람화된 VL V2를 갖는 유형은 모 마우스 항체만큼 활성적이었다. 따라서, 일련의 복귀 돌연변이를 V1 VH 서열에 도입하여 쥐 MJ2-7의 천연 사람 IL-13 중화 활성을 개선하였다.
실시예 20: MJ2-7은 IL-13과 IL-13Rα1 및 IL-13Rα2의 상호작용을 차단한다.
MJ2-7은 미성숙 단백질(서열번호 24)의 아미노산 잔기 114 내지 132, 및 성숙 단백질(서열번호 14)의 잔기 95 내지 113에 상응하는 NHP IL-13의 C-말단 19-mer에 특이적이다. 사람 IL-13에 대하여, 당해 단백질의 D 알파-헬릭스의 일부를 형성하는 이러한 영역은 IL-13Rα1 및 IL-13Rα2 둘 다와의 결합에 중요한 잔기를 포함하는 것으로 보고되었다. 사람 IL-13 돌연변이체의 분석은 IL-13Rα1/IL-4Rα 시그널전달 복합체에 대한 중요한 접촉 부위를 포함하는 것으로써 A, C 및 D-헬리스를 동정하였다(문헌[참조: Thompson and Debinski (1999) J. Biol. Chem. 21 A: 29944-50]). D-헬릭스의 알라닌 스캐닝 돌연변이는 IL-13Rα2와의 상호작용을 담당하는 잔기 K123, K124 및 R127(서열번호 24), 및 IL-13Rα1에 대한 접촉에 중요한 잔기 E110, E128 및 L122를 확인하였다(문헌[참조: Madhankmuar et al. (2002) J. Biol. Chem. 277: 43194-205]). NMR로 측정한 사람 IL-13의 고분해능 용액 구조는 공지된 구조의 관련 리간드-수용체 쌍에 대한 유사성을 근거로 한 IL-13 결합 상호작용을 예측했다. 이들 NMR 연구는 IL-13Rα1과의 중요한 접촉에 있어서 IL-13 A 및 D-헬리스의 핵심 역할을 지지한다(문헌[참조: Eisenmesser et al. (2001) J. MoI. Biol. 310:231-241; Moy et al. (2001) J. MoI. Biol. 310:219-230]). MJ2-7과 IL-13의 C-말단, D-헬릭스에 위치한 당해 에피토프의 결합은 IL-13과 IL-13Rα1 및 IL-13Rα2의 상호작용을 붕괴시키는 것으로 예측되었다.
IL-13Rα1 및 IL-13Rα2에 대한 NHP IL-13의 결합을 억제하는 MJ2-7의 능력을 ELISA로 검사하였다. 사람 IL-13Rα1-Fc 및 IL-13Rα2-Fc의 재조합 가용성 형태를 ELISA 플레이트에 피복하였다. FLAG-표지 NHP IL-13를 MJ2-7의 농도를 증가시키며 첨가하였다. 결과는 MJ2-7이 NHP IL-13에 대한 가용성 수용체 형태 둘 다와 경쟁함을 나타냈다(도 11a 및 11b). 이는 MJ2-7에 의한 IL-13 생물활성의 중화에 대한 근거를 제공한다.
실시예 21: MJ2-7 경쇄 CDR은 항원 결합에 기여한다
3개의 경쇄 CDR 영역 모두가 MJ 2-7과 NHP IL-13의 결합에 필요한지의 여부를 평가하기 위해, MJ 2-7 VL의 2가지의 추가의 사람화된 형태를 CDR 이식으로 제작하였다. 마우스 M2-7 항체로부터의 사람 배선 클론 및 CDR3의 CDR1 및 CDR2를 포함하는 VL 형태 3을 사람 배선 클론 DPK18을 근거로 하여 설계하였다(도 12). 제2 작제물(hMJ 2-7 V4)에서, MJ2-7 항체의 CDR1 및 CDR2만을 CPK18 주쇄 상으로 이식하였고, CDR3는 무관한 마우스 모노클로날 항체로부터 유래하였다.
hMJ 2-7 VH V1과 hMJ 2-7 VL V3 및 V4를 결합하여 COS 세포에서 사람화된 MJ 2-7 V3 및 V4를 제조하였다. 당해 항체의 항원 결합 특성은 직접적 NHP IL-13 결합 ELISA로 조사하였다. MJ 2-7 경쇄 CDR3이 부재하는 hMJ 2-7 V4는 NHP IL-13 결합 능력을 유지하는 반면, 경쇄에 사람 배선 CDR1 및 CDR2를 포함하는 V3는 고정된 NHP IL-13과 결합하지 않았다. 이들 결과는 MJ 항체 경쇄의 CDR1 및 CDR2가 필시 당해 항체의 항원 결합 특성을 담당함을 입증한다.
hMJ 2-7 VL V3의 뉴클레오타이드 서열
1 ATGCGGCTGC CCGCTCAGCT GCTGGGCCTG CTGATGCTGT GGGTGCCCGG
51 CTCTTCCGGC GACGTGGTGA TGACCCAGTC CCCTCTGTCT CTGCCCGTGA
101 CCCTGGGCCA GCCCGCTTCT ATCTCTTGCC GGTCCTCCCA GTCCCTGGTG
151 TACTCCGACG GCAACACCTA CCTGAACTGG TTCCAGCAGA GACCCGGCCA
201 GTCTCCTCGG CGGCTGATCT ACAAGGTGTC CAACCGCTTT TCCGGCGTGC
251 CCGATCGGTT CTCCGGCTCC GGCAGCGGCA CCGATTTCAC CCTGAAGATC
301 AGCCGCGTGG AGGCCGAGGA TGTGGGCGTG TACTACTGCT TCCAGGGCTC
351 CCACATCCCT TACACCTTTG GCGGCGGAAC CAAGGTGGAG ATCAAG
(서열번호 189)
hMJ 2-7 VL V3의 아미노산 서열
MRLPAQLLGLLMLWVPGSSG- DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISC RSSQSLVYSDGNTYLN W
FQQRPGQSPRRLIY KVSNRFS GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC FQGSHIP
YTFGGGTKVEIK (서열번호 190)
hMJ 2-7 VL V4의 뉴클레오타이드 서열
GATGTTGTGATGACCCAATCTCCACTCTCCCTGCCTGTCACTCCTGGAGAGCCAGCCTCC
ATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCATTGTGCATAGTAATGGAAACACCTACCTGGAATGG
TACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTT
TCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATC
AGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAAGTTCACATGTTCCT
CTCACCTTCGGTCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA (서열번호 191)
hMJ 2-7 VL V4의 아미노산 서열
DVVMTQSPLS LPVTPGEPAS ISC RSSQSIV HSNGNTYLE W YLQKPGQSPQ LLIY KVSNRF
S GVPDRFSGS GSGTDFTLKISRVEAEDVGV YYC FQSSHVP LT FGQGTKLE IK (서열번호 192)
당해 분야의 숙련가들은 본원에 기술된 특이적 양태와 동등한 다수의, 다만 통상적일 뿐인 실험을 사용하였음을 인식하거나 확인할 수 있다. 기타의 양태가 다음의 청구항 내에 포함된다.
<110> WYETH <120> IL-13 binding agent <130> 16158-020001 <140> US 60/581,078 <141> 2004-06-17 <150> US 11/149,025 <151> 2005-06-09 <160> 192 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 1 Phe Val Lys Asp Leu Leu Val His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly 1 5 10 15 Gln Phe Asn <210> 2 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 2 Phe Val Lys Asp Leu Leu Val His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly 1 5 10 15 Arg Phe Asn <210> 3 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 3 Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly 1 5 10 15 Gln Phe Asn <210> 4 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 4 Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly 1 5 10 15 Arg Phe Asn <210> 5 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 5 Phe Val Lys Asp Leu Leu Val His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly 1 5 10 15 <210> 6 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 6 Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly 1 5 10 15 <210> 7 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 7 Lys Asp Leu Leu Val His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Gln Phe 1 5 10 15 Asn <210> 8 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 8 Lys Asp Leu Leu Val His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe 1 5 10 15 Asn <210> 9 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 9 Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Gln Phe 1 5 10 15 Asn <210> 10 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 10 Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe 1 5 10 15 Asn <210> 11 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 11 Lys Asp Leu Leu Val His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu 1 5 10 <210> 12 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 12 Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu 1 5 10 <210> 13 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 13 His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu 1 5 <210> 14 <211> 112 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 14 Ser Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Lys Glu Leu Ile Glu Glu Leu 1 5 10 15 Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser Met 20 25 30 Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Val Tyr Cys Ala Ala Leu Glu 35 40 45 Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln Arg 50 55 60 Met Leu Asn Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe Ser 65 70 75 80 Ser Leu Arg Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val Lys 85 90 95 Asp Leu Leu Val His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Gln Phe Asn 100 105 110 <210> 15 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 15 Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His 1 5 10 <210> 16 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 16 Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 17 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 17 Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 18 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 18 Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu 1 5 10 15 <210> 19 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 19 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 20 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 20 Phe Gln Gly Ser His Ile Pro Tyr Thr 1 5 <210> 21 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = Arg or Lys <220> <221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa = Leu or Ile <220> <221> VARIANT <222> 7 <223> Xaa = Lys or Val <220> <221> VARIANT <222> 16 <223> Xaa = Glu, Asp, Asn, Gln, Tyr, Ala or ser <400> 21 Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Xaa 1 5 10 15 <210> 22 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = Leu or Val <220> <221> VARIANT <222> 4 <223> Xaa = Asn or Tyr <400> 22 Lys Xaa Ser Xaa Arg Phe Ser 1 5 <210> 23 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = Gly, Ser or Ala <220> <221> VARIANT <222> 4 <223> Xaa = Ser, Ile or Thr <220> <221> VARIANT <222> 5 <223> Xaa = His, Glu or Gln <220> <221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa = Ile or Leu <400> 23 Phe Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Pro 1 5 <210> 24 <211> 132 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 24 Met Ala Leu Leu Leu Thr Met Val Ile Ala Leu Thr Cys Leu Gly Gly 1 5 10 15 Phe Ala Ser Pro Ser Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Lys Glu Leu 20 25 30 Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys 35 40 45 Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Val Tyr Cys 50 55 60 Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu 65 70 75 80 Lys Thr Gln Arg Met Leu Asn Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala 85 90 95 Gly Gln Phe Ser Ser Leu Arg Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala 100 105 110 Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu Val His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu 115 120 125 Gly Gln Phe Asn 130 <210> 25 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = Arg or Lys <220> <221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa = Leu or Ile <220> <221> VARIANT <222> 7 <223> Xaa = Lys or Val <220> <221> VARIANT <222> 10 <223> Xaa = Asn or Asp <220> <221> VARIANT <222> 13 <223> Thr or Asn <220> <221> VARIANT <222> 16 <223> Xaa = Glu, Asp, Asn, gln, Tyr, Ala or Ser <400> 25 Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa 1 5 10 15 <210> 26 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = Arg or Lys <220> <221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa = Leu or Ile <220> <221> VARIANT <222> 7 <223> Xaa = Lys or Val <220> <221> VARIANT <222> 10 <223> Xaa = Asn or Asp <220> <221> VARIANT <222> 13 <223> Xaa = Thr or Asn <400> 26 Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Glu 1 5 10 15 <210> 27 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = Leu, Val or Ile <220> <221> VARIANT <222> 4 <223> Xaa = Asn or Tyr <220> <221> VARIANT <222> 5 <223> Xaa = Arg or Trp <220> <221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa = Phe or Asp <400> 27 Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser 1 5 <210> 28 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = Gly, Ser or Ala <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = Ser or Thr <220> <221> VARIANT <222> 4 <223> Xaa = His, Glu or Gln <400> 28 Gln Xaa Xaa Xaa Ile Pro 1 5 <210> 29 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = Gly, Ser or Ala <220> <221> VARIANT <222> 4 <223> xaa = Ser, Ile or Thr <220> <221> VARIANT <222> 5 <223> Xaa = His, Glu or Gln <220> <221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa = Ile or Leu <400> 29 Phe Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Tyr Thr 1 5 <210> 30 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 30 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Ile Pro Tyr Thr 100 <210> 31 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 31 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Ile Pro Tyr Thr 100 <210> 32 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 32 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Ile Pro Tyr Thr 100 <210> 33 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 33 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Ile Pro Tyr Thr 100 <210> 34 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 34 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Ile Pro Tyr Thr 100 <210> 35 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 35 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Ile Pro Tyr Thr 100 <210> 36 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 36 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Ile Pro Tyr Thr 100 <210> 37 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 37 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser 20 25 30 Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Ile Pro Tyr Thr 100 <210> 38 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 38 Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Ile Pro Tyr Thr 100 <210> 39 <211> 100 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 24 <223> Xaa = Arg or Lys <220> <221> VARIANT <222> 29 <223> Xaa = Leu or Ile <220> <221> VARIANT <222> 30 <223> Xaa = Lys or Val <220> <221> VARIANT <222> 33 <223> Xaa = Asn or Asp <220> <221> VARIANT <222> 36 <223> Xaa = Thr or Asn <220> <221> VARIANT <222> 39 <223> Xaa = Glu, Asp, Asn, Gln, Tyr, Ala or Ser <220> <221> VARIANT <222> 56 <223> Xaa = Leu, Val or Ile <220> <221> VARIANT <222> 58 <223> Xaa = Asn or Tyr <220> <221> VARIANT <222> 59 <223> Xaa = Arg or Trp <220> <221> VARIANT <222> 60 <223> Xaa = Phe or Asp <220> <221> VARIANT <222> 96 <223> Xaa = Gly, Ser or Ala <220> <221> VARIANT <222> 97 <223> Xaa = Ser, Ile or Thr <220> <221> VARIANT <222> 98 <223> Xaa = His, Glu or Gln <220> <221> VARIANT <222> 99 <223> Xaa = Ile or Leu <400> 39 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser 20 25 30 Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa 85 90 95 Xaa Xaa Xaa Pro 100 <210> 40 <211> 100 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 24 <223> Xaa = Arg or Lys <220> <221> VARIANT <222> 29 <223> Xaa = Leu or Ile <220> <221> VARIANT <222> 30 <223> Xaa = Lys or Val <220> <221> VARIANT <222> 33 <223> Xaa = Asn or Asp <220> <221> VARIANT <222> 36 <223> Xaa = Thr or Asn <220> <221> VARIANT <222> 39 <223> Xaa = Glu, Asp, Asn, Gln, Tyr, Ala or Ser <220> <221> VARIANT <222> 56 <223> Xaa = Leu, Val or Ile <220> <221> VARIANT <222> 58 <223> Xaa = Asn or Tyr <220> <221> VARIANT <222> 59 <223> Xaa = Arg or Trp <220> <221> VARIANT <222> 60 <223> Xaa = Phe or Asp <220> <221> VARIANT <222> (96)...(0) <223> Xaa = Gly, Ser or Ala <220> <221> VARIANT <222> 97 <223> Xaa = Ser, Ile or Thr <220> <221> VARIANT <222> 98) <223> Xaa = His, Glu or Gln <220> <221> VARIANT <222> 99 <223> Xaa = Ile or Leu <400> 40 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser 20 25 30 Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa 85 90 95 Xaa Xaa Xaa Pro 100 <210> 41 <211> 100 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 24 <223> Xaa = Arg or Lys <220> <221> VARIANT <222> 29 <223> Xaa = Leu or Ile <220> <221> VARIANT <222> 30 <223> Xaa = Lys or Val <220> <221> VARIANT <222> 33 <223> Xaa = Asn or Asp <220> <221> VARIANT <222> 36 <223> Xaa = Thr or Asn <220> <221> VARIANT <222> 39 <223> Xaa = Glu, Asp, Asn, Gln, Tyr, Ala or Ser <220> <221> VARIANT <222> 56 <223> Xaa = Leu, Val or Ile <220> <221> VARIANT <222> 58 <223> Xaa = Asn or Tyr <220> <221> VARIANT <222> 59 <223> Xaa = Arg or Trp <220> <221> VARIANT <222> 60 <223> Xaa = Phe or Asp <220> <221> VARIANT <222> 96 <223> Xaa = Gly, Ser or Ala <220> <221> VARIANT <222> 97 <223> Xaa = Ser, Ile or Thr <220> <221> VARIANT <222> 98 <223> Xaa = His, Glu or Gln <220> <221> VARIANT <222> 99 <223> Xaa = Ile or Leu <400> 41 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser 20 25 30 Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa 85 90 95 Xaa Xaa Xaa Pro 100 <210> 42 <211> 100 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 24 <223> Xaa = Arg or Lys <220> <221> VARIANT <222> 29 <223> Xaa = Leu or Ile <220> <221> VARIANT <222> 30 <223> Xaa = Lys or Val <220> <221> VARIANT <222> 33 <223> Xaa = Asn or Asp <220> <221> VARIANT <222> 36 <223> Xaa = Thr or Asn <220> <221> VARIANT <222> 39 <223> Xaa = Glu, Asp, Asn, Gln, Tyr, Ala or Ser <220> <221> VARIANT <222> 56 <223> Xaa = Leu, Val or Ile <220> <221> VARIANT <222> 58 <223> Xaa = Asn or Tyr <220> <221> VARIANT <222> 59 <223> Xaa = Arg or Trp <220> <221> VARIANT <222> 60 <223> Xaa = Phe or Asp <220> <221> VARIANT <222> 96 <223> Xaa = Gly, Ser or Ala <220> <221> VARIANT <222> 97 <223> Xaa = Ser, Ile or Thr <220> <221> VARIANT <222> 98 <223> Xaa = His, Glu or Gln <220> <221> VARIANT <222> 99 <223> Xaa = Ile or Leu <400> 42 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser 20 25 30 Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa 85 90 95 Xaa Xaa Xaa Pro 100 <210> 43 <211> 100 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 24 <223> Xaa = Arg or Lys <220> <221> VARIANT <222> 29 <223> Xaa = Leu or Ile <220> <221> VARIANT <222> 30 <223> Xaa = Lys or Val <220> <221> VARIANT <222> 33 <223> Xaa = Asn or Asp <220> <221> VARIANT <222> 36 <223> Xaa = Thr or Asn <220> <221> VARIANT <222> 39 <223> Xaa = Glu, Asp, Asn, Gln, Tyr, Ala or Ser <220> <221> VARIANT <222> 56 <223> Xaa = Leu, Val or Ile <220> <221> VARIANT <222> 58 <223> Xaa = Asn or Tyr <220> <221> VARIANT <222> 59 <223> Xaa = Arg or Trp <220> <221> VARIANT <222> 60 <223> Xaa = Phe or Asp <220> <221> VARIANT <222> 96 <223> Xaa = Gly, Ser or Ala <220> <221> VARIANT <222> 97 <223> Xaa = Ser, Ile or Thr <220> <221> VARIANT <222> 98 <223> Xaa = His, Glu or Gln <220> <221> VARIANT <222> 99 <223> Xaa = Ile or Leu <400> 43 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser 20 25 30 Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa 85 90 95 Xaa Xaa Xaa Pro 100 <210> 44 <211> 100 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 24 <223> Xaa = Arg or Lys <220> <221> VARIANT <222> 29 <223> Xaa = Leu or Ile <220> <221> VARIANT <222> 30 <223> Xaa = Lys or Val <220> <221> VARIANT <222> 33 <223> Xaa = Asn or Asp <220> <221> VARIANT <222> 36 <223> Xaa = Thr or Asn <220> <221> VARIANT <222> 39 <223> Xaa = Glu, Asp, Asn, Gln, Tyr, Ala or Ser <220> <221> VARIANT <222> 56 <223> Xaa = Leu, Val or Ile <220> <221> VARIANT <222> 58 <223> Xaa = Asn or Tyr <220> <221> VARIANT <222> 59 <223> Xaa = Arg or Trp <220> <221> VARIANT <222> 60 <223> Xaa = Phe or Asp <220> <221> VARIANT <222> 96 <223> Xaa = Gly, Ser or Ala <220> <221> VARIANT <222> 97 <223> Xaa = Ser, Ile or Thr <220> <221> VARIANT <222> 98 <223> Xaa = His, Glu or Gln <220> <221> VARIANT <222> 99 <223> Xaa = Ile or Leu <400> 44 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser 20 25 30 Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa 85 90 95 Xaa Xaa Xaa Pro 100 <210> 45 <211> 100 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 24 <223> Xaa = Arg or Lys <220> <221> VARIANT <222> 29 <223> Xaa = Leu or Ile <220> <221> VARIANT <222> 30 <223> Xaa = Lys or Val <220> <221> VARIANT <222> 33 <223> Xaa = Asn or Asp <220> <221> VARIANT <222> 36 <223> Xaa = Thr or Asn <220> <221> VARIANT <222> 39 <223> Xaa = Glu, Asp, Asn, Gln, Tyr, Ala or Ser <220> <221> VARIANT <222> 56 <223> Xaa = Leu, Val or Ile <220> <221> VARIANT <222> 58 <223> Xaa = Asn or Tyr <220> <221> VARIANT <222> 59 <223> Xaa = Arg or Trp <220> <221> VARIANT <222> 60 <223> Xaa = Phe or Asp <220> <221> VARIANT <222> 96 <223> Xaa = Gly, Ser or Ala <220> <221> VARIANT <222> 97 <223> Xaa = Ser, Ile or Thr <220> <221> VARIANT <222> 98 <223> Xaa = His, Glu or Gln <220> <221> VARIANT <222> 99 <223> Xaa = Ile or Leu <400> 45 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser 20 25 30 Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa 85 90 95 Xaa Xaa Xaa Pro 100 <210> 46 <211> 100 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 24 <223> Xaa = Arg or Lys <220> <221> VARIANT <222> 29 <223> Xaa = Leu or Ile <220> <221> VARIANT <222> 30 <223> Xaa = Lys or Val <220> <221> VARIANT <222> 33 <223> Xaa = Asn or Asp <220> <221> VARIANT <222> 36 <223> Xaa = Thr or Asn <220> <221> VARIANT <222> 39 <223> Xaa = Glu, Asp, Asn, Gln, Tyr, Ala or Ser <220> <221> VARIANT <222> 56 <223> Xaa = Leu, Val or Ile <220> <221> VARIANT <222> 58 <223> Xaa = Asn or Tyr <220> <221> VARIANT <222> 59 <223> Xaa = Arg or Trp <220> <221> VARIANT <222> 60 <223> Xaa = Phe or Asp <220> <221> VARIANT <222> 96 <223> Xaa = Gly, Ser or Ala <220> <221> VARIANT <222> 97 <223> Xaa = Ser, Ile or Thr <220> <221> VARIANT <222> 98 <223> Xaa = His, Glu or Gln <220> <221> VARIANT <222> 99 <223> Xaa = Ile or Leu <400> 46 Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa His Ser 20 25 30 Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Xaa 85 90 95 Xaa Xaa Xaa Pro 100 <210> 47 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 47 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 1 5 10 <210> 48 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 9 <223> Xaa = Met or Ile <400> 48 Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr Tyr Xaa His 1 5 10 <210> 49 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 5 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 13 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 49 Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 50 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 50 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 51 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 51 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 52 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 52 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 53 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 53 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 54 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 54 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 55 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 55 Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Thr Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ala Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Arg Ser Met Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 56 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 56 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 57 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 57 Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Arg Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly Arg 35 40 45 Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln Gly 50 55 60 Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 65 70 75 80 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala 85 90 95 Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 58 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 58 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 59 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 59 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 110 <210> 60 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 60 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 61 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 61 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Thr Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 62 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 62 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr His Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 63 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 63 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 64 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 64 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 65 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 65 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 66 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 66 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 67 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 67 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Val Val Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 110 <210> 68 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 68 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 69 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 69 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ser Lys Ser Ile Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 70 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 70 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val 35 40 45 Ser Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 71 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 71 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 72 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 72 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 73 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 73 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 74 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 74 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 75 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 75 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 76 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 76 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 77 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 77 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 78 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 78 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 79 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 79 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 80 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 80 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 81 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 81 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 82 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 82 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 83 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 83 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 84 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 84 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 85 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 85 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 86 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 86 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 87 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 87 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 88 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 88 Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Thr Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ala Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Arg Ser Met Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 89 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 89 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 90 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 90 Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Arg Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly Xaa 35 40 45 Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe Gln Gly 50 55 60 Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 65 70 75 80 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala 85 90 95 Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 91 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 91 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 92 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 92 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 110 <210> 93 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 93 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 94 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 94 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Thr Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 95 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 95 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr His Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 96 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 96 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 97 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 97 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 98 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 98 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 99 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 99 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 100 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 100 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Val Val Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 110 <210> 101 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 101 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 102 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 102 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ser Lys Ser Ile Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 103 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 103 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val 35 40 45 Ser Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 104 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 104 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 105 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 105 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 106 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 106 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 107 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 107 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 108 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 108 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 109 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 109 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 110 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 110 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 111 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 111 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 112 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 112 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 113 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 113 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 114 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 114 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 115 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 28 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 34 <223> Xaa = Met or Ile <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa = Trp or Arg <220> <221> VARIANT <222> 54 <223> Xaa = Gly or Ala <220> <221> VARIANT <222> 61 <223> Xaa = Ser or Asp <220> <221> VARIANT <222> 62 <223> Xaa = Pro or Gln <400> 115 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Xaa Xaa Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Xaa His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Xaa Ile Asp Pro Xaa Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 100 105 <210> 116 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 116 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 117 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 117 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 118 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 118 Gln Ala Ser Gln Gly Thr Ser Ile Asn Leu Asn 1 5 10 <210> 119 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 119 Gly Ala Ser Asn Leu Glu Asp 1 5 <210> 120 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 120 Leu Gln His Ser Tyr Leu Pro Trp Thr 1 5 <210> 121 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 121 Gly Phe Ser Leu Thr Gly Tyr Gly Val Asn 1 5 10 <210> 122 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 122 Ile Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu 1 5 10 <210> 123 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 123 Asp Lys Thr Phe Tyr Tyr Asp Gly Phe Tyr Arg Gly Arg Met Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 124 <211> 113 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 124 Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Glu Leu Ile Glu Glu 1 5 10 15 Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser 20 25 30 Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala Leu 35 40 45 Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln 50 55 60 Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe 65 70 75 80 Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val 85 90 95 Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe 100 105 110 Asn <210> 125 <211> 427 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 125 Met Glu Trp Pro Ala Arg Leu Cys Gly Leu Trp Ala Leu Leu Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Pro Thr Glu Thr Gln 20 25 30 Pro Pro Val Thr Asn Leu Ser Val Ser Val Glu Asn Leu Cys Thr Val 35 40 45 Ile Trp Thr Trp Asn Pro Pro Glu Gly Ala Ser Ser Asn Cys Ser Leu 50 55 60 Trp Tyr Phe Ser His Phe Gly Asp Lys Gln Asp Lys Lys Ile Ala Pro 65 70 75 80 Glu Thr Arg Arg Ser Ile Glu Val Pro Leu Asn Glu Arg Ile Cys Leu 85 90 95 Gln Val Gly Ser Gln Cys Ser Thr Asn Glu Ser Glu Lys Pro Ser Ile 100 105 110 Leu Val Glu Lys Cys Ile Ser Pro Pro Glu Gly Asp Pro Glu Ser Ala 115 120 125 Val Ile Glu Leu Gln Cys Ile Trp His Asn Leu Ser Tyr Met Lys Cys 130 135 140 Ser Trp Leu Pro Gly Arg Asn Thr Ser Pro Asp Thr Asn Tyr Thr Leu 145 150 155 160 Tyr Tyr Trp His Arg Ser Leu Glu Lys Ile His Gln Cys Glu Asn Ile 165 170 175 Phe Arg Glu Gly Gln Tyr Phe Gly Cys Ser Phe Asp Leu Thr Lys Val 180 185 190 Lys Asp Ser Ser Phe Glu Gln His Ser Val Gln Ile Met Val Lys Asp 195 200 205 Asn Ala Gly Lys Ile Lys Pro Ser Phe Asn Ile Val Pro Leu Thr Ser 210 215 220 Arg Val Lys Pro Asp Pro Pro His Ile Lys Asn Leu Ser Phe His Asn 225 230 235 240 Asp Asp Leu Tyr Val Gln Trp Glu Asn Pro Gln Asn Phe Ile Ser Arg 245 250 255 Cys Leu Phe Tyr Glu Val Glu Val Asn Asn Ser Gln Thr Glu Thr His 260 265 270 Asn Val Phe Tyr Val Gln Glu Ala Lys Cys Glu Asn Pro Glu Phe Glu 275 280 285 Arg Asn Val Glu Asn Thr Ser Cys Phe Met Val Pro Gly Val Leu Pro 290 295 300 Asp Thr Leu Asn Thr Val Arg Ile Arg Val Lys Thr Asn Lys Leu Cys 305 310 315 320 Tyr Glu Asp Asp Lys Leu Trp Ser Asn Trp Ser Gln Glu Met Ser Ile 325 330 335 Gly Lys Lys Arg Asn Ser Thr Leu Tyr Ile Thr Met Leu Leu Ile Val 340 345 350 Pro Val Ile Val Ala Asp Ala Ile Ile Val Leu Leu Leu Tyr Leu Lys 355 360 365 Arg Leu Lys Ile Ile Ile Phe Pro Pro Ile Pro Asp Pro Gly Lys Ile 370 375 380 Phe Lys Glu Met Phe Gly Asp Gln Asn Asp Asp Thr Leu His Trp Lys 385 390 395 400 Lys Tyr Asp Ile Tyr Glu Lys Gln Thr Lys Glu Glu Thr Asp Ser Val 405 410 415 Val Leu Ile Glu Asn Leu Lys Lys Ala Ser Gln 420 425 <210> 126 <211> 101 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 126 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser 20 25 30 Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly 85 90 95 Thr His Trp Pro Pro 100 <210> 127 <211> 20 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 127 Met Ala Leu Leu Leu Thr Met Val Ile Ala Leu Thr Cys Leu Gly Gly 1 5 10 15 Phe Ala Ser Pro 20 <210> 128 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 128 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser 1 5 10 15 Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 20 25 30 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 35 40 45 Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 50 55 60 Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr 65 70 75 80 Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys 85 90 95 Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 100 105 110 Ala Pro Glu Ala Leu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 115 120 125 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 130 135 140 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 145 150 155 160 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 165 170 175 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 180 185 190 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 195 200 205 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 210 215 220 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 225 230 235 240 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 245 250 255 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 260 265 270 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 275 280 285 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 290 295 300 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 305 310 315 320 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 129 <211> 360 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 129 gaggttcagc tgcagcagtc tggggcagag cttgtgaagc caggggcctc agtcaagttg 60 tcctgcacag gttctggctt caacattaaa gacacctata tacactgggt gaagcagagg 120 cctgaacagg gcctggagtg gattggaagg attgatcctg cgaatgataa tattaaatat 180 gacccgaagt tccagggcaa ggccactata acagcagaca catcctccaa cacagcctac 240 ctacagctca acagcctgac atctgaggac actgccgtct attactgtgc tagatctgag 300 gaaaattggt acgacttttt tgactactgg ggccaaggca ccactctcac agtctcctca 360 <210> 130 <211> 120 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 130 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 131 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 131 Met Lys Cys Ser Trp Val Ile Phe Phe Leu Met Ala Val Val Thr Gly 1 5 10 15 Val Asn Ser <210> 132 <211> 336 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 132 gatgttttga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60 atctcttgca ggtctagtca gagcattgta catagtaatg gaaacaccta tttagaatgg 120 tacctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180 tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatt 240 agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattactgct ttcaaggttc acatattccg 300 tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaa 336 <210> 133 <211> 112 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 133 Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 134 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 134 Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala 1 5 10 15 Ser Ser Ser <210> 135 <211> 429 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 135 atggctgtcc tggcattact cttctgcctg gtaacattcc caagctgtat cctttcccag 60 gtgcagctga aggagtcagg acctggcctg gtggcgccct cacagagcct gtccatcaca 120 tgcaccgtct cagggttctc attaaccggc tatggtgtaa actgggttcg ccagcctcca 180 ggaaagggtc tggagtggct gggaataatt tggggtgatg gaagcacaga ctataattca 240 gctctcaaat ccagactgat catcaacaag gacaactcca agagccaagt tttcttaaaa 300 atgaacagtc tgcaaactga tgacacagcc aggtacttct gtgccagaga taagactttt 360 tactacgatg gtttctacag gggcaggatg gactactggg gtcaaggaac ctcagtcacc 420 gtctcctca 429 <210> 136 <211> 124 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 136 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Gly Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Ile Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ile Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Lys Thr Phe Tyr Tyr Asp Gly Phe Tyr Arg Gly Arg Met Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 137 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 137 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Gly Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Ile Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ile Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Lys Thr Phe Tyr Tyr Asp Gly Phe Tyr Arg Gly Arg Met Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 138 <211> 387 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 138 atgaacacga gggcccctgc tgagttcctt gggttcctgt tgctctggtt tttaggtgcc 60 agatgtgatg tccagatgat tcagtctcca tcctccctgt ctgcatcttt gggagacatt 120 gtcaccatga cttgccaggc aagtcagggc actagcatta atttaaactg gtttcagcaa 180 aaaccaggga aagctcctaa gctcctgatc tttggtgcaa gcaacttgga agatggggtc 240 ccatcaaggt tcagtggcag tagatatggg acaaatttca ctctcaccat cagcagcctg 300 gaggatgaag atatggcaac ttatttctgt ctacagcata gttatctccc gtggacgttc 360 ggtggcggca ccaaactgga aatcaaa 387 <210> 139 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 139 Asp Val Gln Met Ile Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Ile Val Thr Met Thr Cys Gln Ala Ser Gln Gly Thr Ser Ile Asn 20 25 30 Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Phe Gly Ala Ser Asn Leu Glu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Tyr Gly Thr Asn Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Asp 65 70 75 80 Glu Asp Met Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gln His Ser Tyr Leu Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 140 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 140 Met Asn Thr Arg Ala Pro Ala Glu Phe Leu Gly Phe Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Phe Leu Gly Ala Arg Cys 20 <210> 141 <211> 329 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 141 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser 1 5 10 15 Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 20 25 30 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 35 40 45 Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 50 55 60 Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr 65 70 75 80 Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys 85 90 95 Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 100 105 110 Ala Pro Glu Ala Leu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 115 120 125 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 130 135 140 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 145 150 155 160 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 165 170 175 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 180 185 190 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 195 200 205 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 210 215 220 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 225 230 235 240 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 245 250 255 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 260 265 270 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 275 280 285 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 290 295 300 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 305 310 315 320 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 142 <211> 417 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 142 atgaaatgca gctgggttat cttcttcctg atggcagtgg ttacaggggt caattcagag 60 gttcagctgc agcagtctgg ggcagagctt gtgaagccag gggcctcagt caagttgtcc 120 tgcacaggtt ctggcttcaa cattaaagac acctatatac actgggtgaa gcagaggcct 180 gaacagggcc tggagtggat tggaaggatt gatcctgcga atgataatat taaatatgac 240 ccgaagttcc agggcaaggc cactataaca gcagacacat cctccaacac agcctaccta 300 cagctcaaca gcctgacatc tgaggacact gccgtctatt actgtgctag atctgaggaa 360 aattggtacg acttttttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcctca 417 <210> 143 <211> 139 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 143 Met Lys Cys Ser Trp Val Ile Phe Phe Leu Met Ala Val Val Thr Gly 1 5 10 15 Val Asn Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Phe Asn Ile 35 40 45 Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp 65 70 75 80 Pro Lys Phe Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn 85 90 95 Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 130 135 <210> 144 <211> 393 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 144 atgaagttgc ctgttaggct gttggtgctg atgttctgga ttcctgcttc cagcagtgat 60 gttttgatga cccaaactcc actctccctg cctgtcagtc ttggagatca agcctccatc 120 tcttgcaggt ctagtcagag cattgtacat agtaatggaa acacctattt agaatggtac 180 ctgcagaaac caggccagtc tccaaagctc ctgatctaca aagtttccaa ccgattttct 240 ggggtcccag acaggttcag tggcagtgga tcagggacag atttcacact caagattagc 300 agagtggagg ctgaggatct gggagtttat tactgctttc aaggttcaca tattccgtac 360 acgttcggag gggggaccaa gctggaaata aaa 393 <210> 145 <211> 131 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 145 Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala 1 5 10 15 Ser Ser Ser Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val 20 25 30 Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile 35 40 45 Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro 50 55 60 Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 65 70 75 80 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 85 90 95 Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys 100 105 110 Phe Gln Gly Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 115 120 125 Glu Ile Lys 130 <210> 146 <211> 417 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated oligonucleotide <400> 146 atggattgga cctggcgcat cctgttcctg gtggccgctg ccaccggcgc tcactctcag 60 gtgcagctgg tgcagtctgg cgccgaggtg aagaagcctg gcgcttccgt gaaggtgtcc 120 tgtaaggcct ccggcttcaa catcaaggac acctacatcc actgggtgcg gcaggctccc 180 ggccagcggc tggagtggat gggccggatc gatcctgcca acgacaacat caagtacgac 240 cccaagtttc agggccgcgt gaccatcacc cgcgatacct ccgcttctac cgcctacatg 300 gagctgtcta gcctgcggag cgaggatacc gccgtgtact actgcgcccg ctccgaggag 360 aactggtacg acttcttcga ctactggggc cagggcaccc tggtgaccgt gtcctct 417 <210> 147 <211> 144 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 147 Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile 35 40 45 Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu 50 55 60 Glu Trp Met Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp 65 70 75 80 Pro Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Glu Ser Cys Arg 130 135 140 <210> 148 <211> 396 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated oligonucleotide <400> 148 atgcggctgc ccgctcagct gctgggcctg ctgatgctgt gggtgcccgg ctcttccggc 60 gacgtggtga tgacccagtc ccctctgtct ctgcccgtga ccctgggcca gcccgcttct 120 atctcttgcc ggtcctccca gtccatcgtg cactccaacg gcaacaccta cctggagtgg 180 tttcagcaga gacccggcca gtctcctcgg cggctgatct acaaggtgtc caaccgcttt 240 tccggcgtgc ccgatcggtt ctccggcagc ggctccggca ccgatttcac cctgaagatc 300 agccgcgtgg aggccgagga tgtgggcgtg tactactgct tccagggctc ccacatccct 360 tacacctttg gcggcggaac caaggtggag atcaag 396 <210> 149 <211> 132 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 149 Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Ser Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro 20 25 30 Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser 35 40 45 Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg 50 55 60 Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 65 70 75 80 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 100 105 110 Cys Phe Gln Gly Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys 115 120 125 Val Glu Ile Lys 130 <210> 150 <211> 417 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated oligonucleotide <400> 150 atggagctgg gcctgtcttg ggtgttcctg gtggctatcc tggagggcgt gcagtgcgag 60 gtgcagctgg tggagtctgg cggcggactg gtgcagcctg gcggctctct gcggctgtct 120 tgcgccgctt ccggcttcaa catcaaggac acctacatcc actgggtgcg gcaggctccc 180 ggcaagggcc tggagtgggt ggcccggatc gatcctgcca acgacaacat caagtacgac 240 cccaagttcc agggccggtt caccatctct cgcgacaacg ccaagaactc cctgtacctc 300 cagatgaact ctctgcgcgc cgaggatacc gccgtgtact actgcgcccg gagcgaggag 360 aactggtacg acttcttcga ctactggggc cagggcaccc tggtgaccgt gtcctct 417 <210> 151 <211> 139 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 151 Met Glu Leu Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Glu Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile 35 40 45 Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp 65 70 75 80 Pro Lys Phe Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95 Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 130 135 <210> 152 <211> 405 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated oligonucleotide <400> 152 atggatatgc gcgtgcccgc tcagctgctg ggcctgctgc tgctgtggct gcgcggagcc 60 cgctgcgata tccagatgac ccagtcccct tcttctctgt ccgcctctgt gggcgatcgc 120 gtgaccatca cctgtcggtc ctcccagtcc atcgtgcact ccaacggcaa cacctacctg 180 gagtggtatc agcagaagcc cggcaaggcc cctaagctgc tgatctacaa ggtgtccaac 240 cgcttttccg gcgtgccttc tcggttctcc ggctccggct ccggcaccga tttcaccctg 300 accatctcct ccctccagcc cgaggatttc gccacctact actgcttcca gggctcccac 360 atcccttaca cctttggcgg cggaaccaag gtggagatca agcgt 405 <210> 153 <211> 135 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 153 Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 20 25 30 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser 35 40 45 Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gln 50 55 60 Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 85 90 95 Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr 100 105 110 Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly 115 120 125 Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 130 135 <210> 154 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated oligonucleotide <400> 154 gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg 60 tcttgcgccg cttccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct 120 cccggcaagg gcctggagtg gatcggccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac 180 gaccccaagt tccagggccg gttcaccatc tctcgcgaca acgccaagaa ctccctgtac 240 ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag 300 gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct 360 <210> 155 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 155 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 156 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated oligonucleotide <400> 156 gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg 60 tcttgcgccg cttccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct 120 cccggcaagg gcctggagtg ggtggcccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac 180 gaccccaagt tccagggcaa ggccaccatc tctcgcgaca acgccaagaa ctccctgtac 240 ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag 300 gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct 360 <210> 157 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 157 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 158 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated oligonucleotide <400> 158 gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg 60 tcttgcgccg cttccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct 120 cccggcaagg gcctggagtg ggtggcccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac 180 gaccccaagt tccagggccg gttcaccatc tctgccgaca acgccaagaa ctccctgtac 240 ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag 300 gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct 360 <210> 159 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 159 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 160 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated oligonucleotide <400> 160 gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg 60 tcttgcgccg cttccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct 120 cccggcaagg gcctggagtg ggtgggccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac 180 gaccccaagt tccagggccg gttcaccatc tctcgcgaca acgccaagaa ctccctgtac 240 ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag 300 gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct 360 <210> 161 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 161 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 162 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated oligonucleotide <400> 162 gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg 60 tcttgcgccg cttccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct 120 cccggcaagg gcctggagtg ggtggcccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac 180 gaccccaagt tccagggcaa ggccaccatc tctgccgaca acgccaagaa ctccctgtac 240 ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag 300 gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct 360 <210> 163 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 163 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 164 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated oligonucleotide <400> 164 gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg 60 tcttgcgccg cttccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct 120 cccggcaagg gcctggagtg gatcggccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac 180 gaccccaagt tccagggccg gttcaccatc tctgccgaca acgccaagaa ctccctgtac 240 ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag 300 gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct 360 <210> 165 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 165 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 166 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated oligonucleotide <400> 166 gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg 60 tcttgcgccg cttccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct 120 cccggcaagg gcctggagtg ggtgggccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac 180 gaccccaagt tccagggccg gttcaccatc tctgccgaca acgccaagaa ctccctgtac 240 ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag 300 gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct 360 <210> 167 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 167 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 168 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated oligonucleotide <400> 168 gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg 60 tcttgcgccg cttccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct 120 cccggcaagg gcctggagtg ggtggcccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac 180 gaccccaagt tccagggccg gttcaccatc tctcgcgaca acgccaagaa ctccgcctac 240 ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag 300 gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct 360 <210> 169 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 169 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 170 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated oligonucleotide <400> 170 gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg 60 tcttgcgccg cttccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct 120 cccggcaagg gcctggagtg ggtgggccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac 180 gaccccaagt tccagggccg gttcaccatc tctgccgaca acgccaagaa ctccgcctac 240 ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag 300 gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct 360 <210> 171 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 171 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 172 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated oligonucleotide <400> 172 gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg 60 tcttgcgccg cttccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct 120 cccggcaagg gcctggagtg gatcggccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac 180 gaccccaagt tccagggccg gttcaccatc tctgccgaca acgccaagaa ctccgcctac 240 ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag 300 gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct 360 <210> 173 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 173 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 174 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated oligonucleotide <400> 174 gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc tctgcggctg 60 tcttgcaccg gctccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggct 120 cccggcaagg gcctggagtg gatcggccgg atcgatcctg ccaacgacaa catcaagtac 180 gaccccaagt tccagggccg gttcaccatc tctgccgaca acgccaagaa ctccctgtac 240 ctccagatga actctctgcg cgccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggagcgag 300 gagaactggt acgacttctt cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctct 360 <210> 175 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 175 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 176 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 176 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Ile Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Glu Glu Asn Trp Tyr Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Leu Gly Ala 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 177 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 177 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 178 <211> 132 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 178 Met Ala Leu Leu Leu Thr Thr Val Ile Ala Leu Thr Cys Leu Gly Gly 1 5 10 15 Phe Ala Ser Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Glu Leu 20 25 30 Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys 35 40 45 Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys 50 55 60 Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu 65 70 75 80 Lys Thr Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala 85 90 95 Gly Gln Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala 100 105 110 Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu 115 120 125 Gly Arg Phe Asn 130 <210> 179 <211> 13 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 179 Met Ala Leu Leu Leu Thr Met Val Ile Ala Leu Thr Cys 1 5 10 <210> 180 <211> 12 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 180 Leu Gly Gly Phe Ala Ser Pro Ser Pro Val Pro Pro 1 5 10 <210> 181 <211> 17 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 181 Ser Pro Ser Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Lys Glu Leu Ile Glu 1 5 10 15 Glu <210> 182 <211> 19 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 182 Thr Ala Leu Lys Glu Leu Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn 1 5 10 15 Gln Lys Ala <210> 183 <211> 22 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 183 Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn 1 5 10 15 Leu Thr Ala Gly Val Tyr 20 <210> 184 <211> 21 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 184 Ile Asn Leu Thr Ala Gly Val Tyr Cys Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile 1 5 10 15 Asn Val Ser Gly Cys 20 <210> 185 <211> 21 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 185 Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln Arg 1 5 10 15 Met Ile Asn Gly Phe 20 <210> 186 <211> 18 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 186 Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe Ser Ser Leu Arg 1 5 10 15 Val Arg <210> 187 <211> 20 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 187 Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu 1 5 10 15 Val His Leu Lys 20 <210> 188 <211> 19 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 188 Phe Val Lys Asp Leu Leu Val His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly 1 5 10 15 Gln Phe Asn <210> 189 <211> 396 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated oligonucleotide <400> 189 atgcggctgc ccgctcagct gctgggcctg ctgatgctgt gggtgcccgg ctcttccggc 60 gacgtggtga tgacccagtc ccctctgtct ctgcccgtga ccctgggcca gcccgcttct 120 atctcttgcc ggtcctccca gtccctggtg tactccgacg gcaacaccta cctgaactgg 180 ttccagcaga gacccggcca gtctcctcgg cggctgatct acaaggtgtc caaccgcttt 240 tccggcgtgc ccgatcggtt ctccggctcc ggcagcggca ccgatttcac cctgaagatc 300 agccgcgtgg aggccgagga tgtgggcgtg tactactgct tccagggctc ccacatccct 360 tacacctttg gcggcggaac caaggtggag atcaag 396 <210> 190 <211> 132 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 190 Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Ser Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro 20 25 30 Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser 35 40 45 Leu Val Tyr Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg 50 55 60 Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 65 70 75 80 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 100 105 110 Cys Phe Gln Gly Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys 115 120 125 Val Glu Ile Lys 130 <210> 191 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated oligonucleotide <400> 191 gatgttgtga tgacccaatc tccactctcc ctgcctgtca ctcctggaga gccagcctcc 60 atctcttgca gatctagtca gagcattgtg catagtaatg gaaacaccta cctggaatgg 120 tacctgcaga aaccaggcca gtctccacag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180 tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgtgggagtt tattactgct ttcaaagttc acatgttcct 300 ctcaccttcg gtcaggggac caagctggag atcaaa 336 <210> 192 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 192 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ser 85 90 95 Ser His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

Claims (35)

  1. IL-13과 10-7M 미만의 KD로 결합하는 항원 결합 부위를 형성하는 중쇄 면역글로불린 가변 도메인 서열 및 경쇄 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하고, 항체 또는 항원 결합 단편이 하기 (a) 내지 (k)의 특성 중 하나 이상을 갖는 항체 분자:
    (a) 중쇄 면역글로불린 가변 도메인 서열은 mAb MJ2-7의 중쇄 CDR3와 3개 미만의 아미노산 치환에 의해 상이한 중쇄 CDR3를 포함하며;
    (b) 경쇄 면역글로불린 가변 도메인 서열은 mAb MJ2-7의 상응하는 경쇄 CDR과 3개 미만의 아미노산 치환에 의해 상이한 경쇄 CDR을 포함하며;
    (c) 중쇄 면역글로불린 가변 도메인 서열은 높은 엄중성 조건 하에 V2.1, V2.3, V2.4, V2.5, V2.6, V2.7 또는 V2.11의 중쇄 가변 도메인을 암호화하는 핵산의 상보체와 하이브리드화하는 핵산에 의해 암호화되는 서열을 포함하며;
    (d) 경쇄 면역글로불린 가변 도메인 서열은 높은 엄중성 조건 하에 V2.11의 경쇄 가변 도메인을 암호화하는 핵산의 상보체와 하이브리드화하는 핵산에 의해 암호화되는 서열을 포함하며;
    (e) 중쇄 면역글로불린 가변 도메인 서열은 V2.1, V2.3, V2.4, V2.5, V2.6, V2.7 또는 V2.11의 중쇄 가변 도메인과 90% 이상 동일하며;
    (f) 경쇄 면역글로불린 가변 도메인 서열은 V2.11의 경쇄 가변 도메인과 90% 이상 동일하며;
    (g) 항체 분자는 사람 IL-13와 결합하기 위해 mAb MJ2-7과 경쟁하며;
    (h) 항체 분자는 서열번호 24 또는 서열번호 178의 잔기 116, 117, 118, 122, 123, 124, 125, 126, 127 및 128로 이루어진 그룹 중에서 선택된 IL-13으로부터의 하나 이상의 아미노산 잔기와 접촉하며;
    (i) 중쇄 가변 도메인 서열은 초가변 루프 1, 2 및/또는 3에 mAb MJ2-7과 동일한 정준(canonical) 구조를 갖으며;
    (j) 경쇄 가변 도메인 서열은 초가변 루프 1, 2 및/또는 3에 mAb MJ2-7과 동일한 정준 구조를 갖으며;
    (k) 중쇄 가변 도메인 서열 및/또는 경쇄 가변 도메인 서열은 배선(germline) 유전자 DP-54 및 DPK-9 각각에 의해 암호화된 VH 절편으로부터의 FR1, FR2 및 FR3 주쇄(framework) 영역 또는 배선 유전자 DP-54 및 DPK-9에 의해 암호화된 VH 절편과 95% 이상 동일한 서열을 갖는다.
  2. 제1항에 있어서, 정제된 항체 분자.
  3. 제1항에 있어서, Fc 도메인을 포함하는 재조합 IgG인 항체 분자.
  4. 제1항에 있어서, Fab 또는 scFv인 항체 분자.
  5. 제1항에 있어서, 사람 배선 주쇄 영역과 90% 이상 동일한 주쇄 영역을 포함하는 항체 분자.
  6. 제1항에 있어서, 사람 주쇄 영역, 사람 Fc 영역 또는 이들 둘다를 포함하는 항체 분자.
  7. 제1항에 있어서, 중쇄 가변 도메인 서열의 초가변 루프가 mAb MJ2-7의 초가변 루프와 동일한 정준 구조를 가지며, 중쇄 가변 도메인이 mAb MJ2-7의 IL-13 접촉 아미노산 잔기 4개 이상을 포함하는 항체 분자.
  8. 제1항에 있어서, 중쇄 가변 도메인 서열의 주쇄가 (i) 49에 상응하는 위치에 Gly; (ii) 72에 상응하는 위치에 Ala; (iii) 48에 상응하는 위치에 Ile 및 49에 상응하는 위치에 Gly; (iv) 48에 상응하는 위치에 Ile, 49에 상응하는 위치에 Gly 및 72에 상응하는 위치에 Ala; (v) 67에 상응하는 위치에 Lys, 68에 상응하는 위치에 Ala 및 72에 상응하는 위치에 Ala; 및/또는 (vi) 48에 상응하는 위치에 Ile, 49에 상응하는 위치에 Gly, 72에 상응하는 위치에 Ala 및 79에 상응하는 위치에 Ala를 포함하는 항체 분자.
  9. 제1항에 있어서, IL-13Rα1에 결합하는 IL-13의 능력을 감소시키는 항체 분자.
  10. 제1항에 있어서, 서열번호 24의 130번 위치에 다형성(polymorphism)이 존재하는지와 관계없이 IL-13에 결합하는 항체 분자.
  11. 제1항에 있어서, 서열번호 1로 이루어진 펩타이드 및 서열번호 2로 이루어진 펩타이드 중 하나 또는 이들 둘다에 결합하는 항체 분자.
  12. 제1항에 있어서, 중쇄 가변 도메인 서열이
    (i) CDR1에 G-(YF)-(NT)-I-K-D-T-Y-(MI)-H (서열번호 48),
    (ii) CDR2에 (WR)-I-D-P-(GA)-N-D-N-I-K-Y-(SD)-(PQ)-K-F-Q-G (서열번호 49) 및
    (iii) CDR3에 SEENWYDFFDY (서열번호 17)을 포함하는 항체 분자.
  13. 제12항에 있어서, 중쇄 가변 도메인 서열이
    CDR1에 GFNIKDTYIH (서열번호 15),
    CDR2에 RIDPANDNIKYDPKFQG (서열번호 16) 및
    CDR3에 SEENWYDFFDY (서열번호 17)을 포함하는 항체 분자.
  14. 제1항에 있어서, 경쇄 가변 도메인 서열이
    (i) CDR1에 (RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-H-S-(ND)-G-N-(TN)-Y-L-(EDNQYAS) (서열 번호 25),
    (ii) CDR2에 K-(LVI)-S-(NY)-(RW)-(FD)-S (서열번호 27) 및
    (iii) CDR3에 Q-(GSA)-(ST)-(HEQ)-I-P (서열번호 28)을 포함하는 항체 분자.
  15. 제14항에 있어서, 경쇄 가변 도메인 서열이
    CDR1에 RSSQSIVHSNGNTYLE (서열번호 18),
    CDR2에 KVSNRFS (서열번호 19) 및
    CDR3에 FQGSHIPYT (서열번호 20)을 포함하는 항체 분자.
  16. V2.11의 경쇄 가변 도메인을 포함하는 경쇄 및 V2.1, V2.3, V2.4, V2.5, V2.6, V2.7 또는 V2.11의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 중쇄의 2개의 폴리펩타이드 쇄를 포함하는 분리된 재조합 IgG 항체.
  17. 제16항에 있어서, 중쇄가 추가로 Fc 도메인을 포함하는 분리된 재조합 IgG 항체.
  18. 제1항에 따르는 항체 분자 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  19. 제18항에 있어서, 피하, 흡입 또는 국소 투여에 적합한 약제학적 조성물.
  20. (i) (a) mAb MJ2-7의 상응하는 CDR3와 3개 미만의 아미노산 치환에 의해 상이한 중쇄 CDR3을 포함하거나; (b) V2.1, V2.3, V2.4, V2.5, V2.6, V2.7 또는 V2.11의 중쇄 가변 도메인과 90% 이상 동일한
    중쇄 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 암호화하는 서열, 또는
    (ii) 높은 엄중성 조건 하에 V2.1, V2.3, V2.4, V2.5, V2.6, V2.7 또는 V2.11의 중쇄 가변 도메인을 암호화하는 핵산의 상보체와 하이브리드화하는 서열
    을 포함하는 핵산.
  21. (i) (a) mAb MJ2-7의 상응하는 CDR과 3개 미만의 아미노산 치환에 의해 상이한 경쇄 CDR을 포함하거나; (b) V2.11의 경쇄 가변 도메인과 90% 이상 동일한
    경쇄 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 암호화하는 서열, 또는
    (ii) 높은 엄중성 조건 하에 V2.11의 경쇄 가변 도메인을 암호화하는 핵산의 상보체와 하이브리드화하는 서열
    을 포함하는 핵산.
  22. 제1항에 따르는 항체 분자를 암호화하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함하는 숙주 세포.
  23. 숙주 세포에 제1항에 따르는 항체 분자를 암호화하는 핵산 서열을 제공하는 단계 및 항체 분자가 발현되는 조건 하에 세포를 유지시키는 단계를 포함하여, 재조합 항체를 제공하는 방법.
  24. 제23항에 있어서, 숙주 세포 또는 숙주 세포가 유지되는 배지로부터 단백질을 분리하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  25. 제24항에 있어서, 분리된 단백질을 약제학적 조성물로서 제형화하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  26. IL-13-관련 장애를 앓거나 걸릴 위험이 있는 피검체에게 제1항에 따르는 항체 분자의 유효량을 투여하는 단계를 포함하여, IL-13-관련 장애를 치료하는 방법.
  27. 제26항에 있어서, IL-13 관련 장애가 천식 장애, 아토피성 장애, 만성 폐쇄성 폐질환(COPD), 및 기도 염증, 호산구증가증, 섬유증 및 과잉 점액 생산을 수반하는 질환, 염증 질환, 자가면역 질환, 종양 또는 암, 바이러스 감염 및 보호적 제1형 면역반응의 발현 억제로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 방법.
  28. 제26항에 있어서, 장애가 천식 장애 또는 알러지성 비염인 방법.
  29. 제26항에 있어서, 장애가 염증성 장 질병인 방법.
  30. 제26항에 있어서, 장애가 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)인 방법.
  31. 제26항에 있어서, 장애가 아토피성 장애인 방법.
  32. 제26항에 있어서, 단백질이 피하, 흡입에 의해 또는 국소적으로 투여되는 방법.
  33. (i) 제1항에 따르는 항-IL-13 항체 분자와 샘플을 접촉시키는 단계; 및
    (ii) 항-IL-13 항체 분자를 사용하여 상기 샘플 중의 IL-13을 검출하는 단계를 포함하여 샘플 중 IL-13의 존재를 검출하는 방법.
  34. 제33항에 있어서, 샘플이 피검체로부터 유래한 것인 방법.
  35. IL-13에 결합하고 기능적 IL-13 시그널전달 복합체(signaling complex)의 형성을 방해하는 제1항에 따르는 항체를 쌕쌕거림, 숨가쁨, 기관지수축, 기도 과반응성, 감소한 폐활량, 섬유증, 기도 염증, 및 점액 생산으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 천식의 증상을 나타내는 피검체에게 투여하는 단계를 포함하여, 상기 천식 증상을 나타내는 피검체를 치료하는 방법.
KR1020067026549A 2004-06-17 2005-06-17 Ｉｌ-13 결합제 KR20070033998A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US58107804P 2004-06-17 2004-06-17
US60/581,078 2004-06-17
US11/149,025 2005-06-09
US11/149,025 US20070048785A1 (en) 2004-06-09 2005-06-09 Anti-IL-13 antibodies and complexes
PCT/US2005/021454 WO2006085938A2 (en) 2004-06-17 2005-06-17 Il-13 binding agents

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20070033998A true KR20070033998A (ko) 2007-03-27

Family

ID=36793491

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020067026549A KR20070033998A (ko) 2004-06-17 2005-06-17 Ｉｌ-13 결합제

Country Status (14)

Country Link
US (1) US20070048785A1 (ko)
EP (1) EP1755675A4 (ko)
JP (2) JP2008512985A (ko)
KR (1) KR20070033998A (ko)
AU (1) AU2005327240B2 (ko)
BR (1) BRPI0511008A (ko)
CA (1) CA2570373A1 (ko)
CR (1) CR8789A (ko)
IL (1) IL179661A0 (ko)
MX (1) MXPA06014564A (ko)
NZ (2) NZ586421A (ko)
RU (1) RU2434881C2 (ko)
SG (1) SG166090A1 (ko)
WO (1) WO2006085938A2 (ko)

Families Citing this family (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AR049390A1 (es) * 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
US7501121B2 (en) * 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
US20090098142A1 (en) * 2004-06-09 2009-04-16 Kasaian Marion T Methods and compositions for treating and monitoring treatment of IL-13-associated disorders
US20070048785A1 (en) * 2004-06-09 2007-03-01 Lin Laura L Anti-IL-13 antibodies and complexes
EP2532677A1 (en) 2005-10-21 2012-12-12 Novartis AG Human antibodies against il13 and therapeutic uses
JP2010512402A (ja) * 2006-12-11 2010-04-22 ワイス エルエルシー Ｉｌ−１３関連障害を治療するための方法および組成物ならびにその治療をモニター観察するための方法
AR064826A1 (es) * 2007-01-09 2009-04-29 Wyeth Corp Formulaciones de anticuerpos anti-il-13 y usos de los mismos. dispositivos, parche y jeringa
CN101977935A (zh) * 2007-04-23 2011-02-16 惠氏公司 用于治疗和监测il-13相关病症的方法和组合物
NZ591098A (en) * 2008-08-20 2012-08-31 Centocor Ortho Biotech Inc Engineered anti-il-13 antibodies, compositions, methods and uses
GB0904214D0 (en) 2009-03-11 2009-04-22 Ucb Pharma Sa Biological products
EP2431463A4 (en) * 2009-05-13 2012-12-26 Shionogi & Co TESTS FOR VISCERAL ADIPOSITAS AND ITS USE
BR112012013330A2 (pt) * 2009-12-02 2017-03-28 Acceleron Pharma Inc composições e métodos para aumentar meia vida do soro de proteínas de fusão fc
BR112012027001A2 (pt) 2010-04-23 2016-07-19 Genentech Inc produção de proteínas heteromultiméricas
CN105175542B (zh) 2010-12-16 2018-12-18 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 与th2抑制相关的诊断和治疗
US10689447B2 (en) 2011-02-04 2020-06-23 Genentech, Inc. Fc variants and methods for their production
RU2018108836A (ru) 2011-02-04 2019-03-14 Дженентек, Инк. ВАРИАНТЫ Fc И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ
US8883982B2 (en) 2011-06-08 2014-11-11 Acceleron Pharma, Inc. Compositions and methods for increasing serum half-life
EP4011913A1 (en) * 2011-06-30 2022-06-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Heterodimerized polypeptide
MY178142A (en) 2011-12-20 2020-10-05 Janssen Biotech Inc Anti-phf-tau antibodies and their uses
JP6628966B2 (ja) 2012-06-14 2020-01-15 中外製薬株式会社 改変されたＦｃ領域を含む抗原結合分子
BR112015001955A2 (pt) 2012-08-24 2017-11-07 Chugai Pharmaceutical Co Ltd variante de região fc específica de fcgamariib
ES2876009T3 (es) 2012-12-27 2021-11-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Polipéptido heterodimerizado
WO2014163101A1 (ja) 2013-04-02 2014-10-09 中外製薬株式会社 Ｆｃ領域改変体
KR102362609B1 (ko) 2013-08-01 2022-02-11 위니베르시트카솔리끄드루뱅 항garp 단백질 항체와 그 용도
EP4163633A1 (en) 2013-09-13 2023-04-12 F. Hoffmann-La Roche AG Compositions and methods for detecting and quantifying host cell protein in cell lines and recombinant polypeptide products
NZ756749A (en) 2013-09-13 2022-05-27 Genentech Inc Methods and compositions comprising purified recombinant polypeptides
CN105849280B (zh) 2013-10-23 2020-11-06 豪夫迈·罗氏有限公司 诊断和治疗嗜酸性粒细胞紊乱的方法
BR112016016020B1 (pt) * 2014-01-10 2024-02-27 Anaptysbio, Inc Agente de ligação (il-33) de interleucina-33, célula procariótica isolada, composição e uso do referido agente
BR112016018980A2 (pt) 2014-02-21 2017-10-10 Genentech Inc método de tratamento de um distúrbio, anticorpo multiespecífico, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, métodos de produzir um anticorpo, de produção de uma metade de anticorpo ou de um anticorpo multiespecífico e de produção de um anticorpo multiespecífico, imunoconjugado e formulação farmacêutica
RU2694980C2 (ru) 2014-04-11 2019-07-18 Новартис Аг Способы избирательного лечения астмы с использованием антагонистов il-13
WO2016149276A1 (en) 2015-03-16 2016-09-22 Genentech, Inc. Methods of detecting and quantifying il-13 and uses in diagnosing and treating th2-associated diseases
EP3528838B1 (en) 2016-09-23 2023-07-19 F. Hoffmann-La Roche AG Uses of il-13 antagonists for treating atopic dermatitis
JOP20180021A1 (ar) 2017-03-16 2019-01-30 Janssen Biotech Inc الأجسام المضادة لتكتلات خيوط بروتين تاو (tau) الحلزونية المزدوجة واستخداماتها
GB201707561D0 (en) 2017-05-11 2017-06-28 Argenx Bvba GARP-TGF-beta antibodies
CA3226165A1 (en) 2018-02-09 2019-08-15 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for mast cell-mediated inflammatory diseases
WO2020092015A1 (en) 2018-11-02 2020-05-07 University Of Rochester Therapeutic mitigation of epithelial infection
CN111925438B (zh) * 2020-08-28 2021-03-09 和元生物技术（上海）股份有限公司 能够与aav1-13结合的抗体
WO2023044313A1 (en) 2021-09-15 2023-03-23 Dermira, Inc. Il-13 inhibitors for the treatment of prurigo nodularis

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5596072A (en) * 1992-08-21 1997-01-21 Schering Corporation Method of refolding human IL-13
AU8867501A (en) * 2000-09-01 2002-03-13 Biogen Inc Co-crystal structure of monoclonal antibody 5c8 and cd154, and use thereof in drug design
WO2002072636A2 (en) * 2000-12-28 2002-09-19 Altus Biologics Inc. Crystals of whole antibodies and fragments thereof and methods for making and using them
US20040023337A1 (en) * 2001-10-26 2004-02-05 Heavner George A. IL-13 mutein proteins, antibodies, compositions, methods and uses
US20030235555A1 (en) * 2002-04-05 2003-12-25 David Shealey Asthma-related anti-IL-13 immunoglobulin derived proteins, compositions, methods and uses
JP2006501249A (ja) * 2002-08-30 2006-01-12 グラクソ　グループ　リミテッド ワクチン
GB0407315D0 (en) * 2003-07-15 2004-05-05 Cambridge Antibody Tech Human antibody molecules
US20070048785A1 (en) * 2004-06-09 2007-03-01 Lin Laura L Anti-IL-13 antibodies and complexes

Also Published As

Publication number Publication date
IL179661A0 (en) 2007-05-15
EP1755675A4 (en) 2010-08-11
NZ551982A (en) 2010-10-29
BRPI0511008A (pt) 2007-11-27
EP1755675A2 (en) 2007-02-28
CA2570373A1 (en) 2006-08-17
NZ586421A (en) 2011-11-25
MXPA06014564A (es) 2007-03-23
RU2006142554A (ru) 2008-07-27
WO2006085938A2 (en) 2006-08-17
RU2434881C2 (ru) 2011-11-27
JP2011225574A (ja) 2011-11-10
JP2008512985A (ja) 2008-05-01
AU2005327240A1 (en) 2006-08-17
CR8789A (es) 2008-10-03
SG166090A1 (en) 2010-11-29
US20070048785A1 (en) 2007-03-01
WO2006085938A3 (en) 2009-04-30
AU2005327240B2 (en) 2011-09-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7943342B2 (en) Nucleic acids encoding IL-13 binding agents
AU2005327240B2 (en) IL-13 binding agents
KR101299073B1 (ko) 사람 인터루킨-13에 대한 항체 및 이의 용도
US20090098142A1 (en) Methods and compositions for treating and monitoring treatment of IL-13-associated disorders
US20090068195A1 (en) Methods and compositions for treating and monitoring treatment of il-13-associated disorders
KR101676269B1 (ko) 인터루킨-13 결합 단백질
JP2010512402A (ja) Ｉｌ−１３関連障害を治療するための方法および組成物ならびにその治療をモニター観察するための方法
CN101600456A (zh) 治疗il-13相关疾病和监测il-13相关疾病治疗的方法和组合物
CN101432018A (zh) Il-13结合剂

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application