KR20060126524A - 탈기 방법 - Google Patents

탈기 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20060126524A
KR20060126524A KR1020067013087A KR20067013087A KR20060126524A KR 20060126524 A KR20060126524 A KR 20060126524A KR 1020067013087 A KR1020067013087 A KR 1020067013087A KR 20067013087 A KR20067013087 A KR 20067013087A KR 20060126524 A KR20060126524 A KR 20060126524A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
degassing
oil
aqueous liquid
pufa
cells
Prior art date
Application number
KR1020067013087A
Other languages
English (en)
Other versions
KR101167331B1 (ko
Inventor
알버트 샵
다니엘 버코에이젠
Original Assignee
디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. filed Critical 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이.
Publication of KR20060126524A publication Critical patent/KR20060126524A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101167331B1 publication Critical patent/KR101167331B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6436—Fatty acid esters
    • C12P7/6445—Glycerides
    • C12P7/6472—Glycerides containing polyunsaturated fatty acid [PUFA] residues, i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B1/00—Production of fats or fatty oils from raw materials
    • C11B1/10—Production of fats or fatty oils from raw materials by extracting
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C12P7/6432—Eicosapentaenoic acids [EPA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6436—Fatty acid esters
    • C12P7/6445—Glycerides
    • C12P7/6463—Glycerides obtained from glyceride producing microorganisms, e.g. single cell oil

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Fats And Perfumes (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Glass Compositions (AREA)
  • Heating, Cooling, Or Curing Plastics Or The Like In General (AREA)
  • Extrusion Moulding Of Plastics Or The Like (AREA)
  • Reverberation, Karaoke And Other Acoustics (AREA)
  • Photoreceptors In Electrophotography (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Two-Way Televisions, Distribution Of Moving Picture Or The Like (AREA)
  • Percussion Or Vibration Massage (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Liquid Crystal Substances (AREA)
  • Edible Oils And Fats (AREA)
  • Developing Agents For Electrophotography (AREA)
  • Lubricants (AREA)
  • Diaphragms For Electromechanical Transducers (AREA)

Abstract

세포를 포함하는 수성 액체를 탈기시키고, 세포로부터 오일 또는 고도불포화 지방산(PUFA)를 수득하는 것을 포함하는, 오일 또는 고도불포화 지방산(PUFA)을 제조하는 방법이 기술된다. 탈기는, 진공(또는 감압)의 적용, 감소된 교반 또는 배양액의 원심분리력으로의 처리에 의한 기계적 탈기 또는 탈기체화, 점도 감소(희석 또는 가열에 의함), 발효 동안의 산소 또는 공기의 공급 감소 또는 교반 속도의 감소, pH의 저하(CO2의 용해도를 저하시키기 위함), PTFE 모세관을 사용하는 여과, 기체 치환(질소 또는 헬륨에서의 기포화) 또는 화학적 탈기(산소 소거제를 사용)를 비롯한 다양한 기법에 의해 실시될 수 있다.

Description

탈기 방법{DEAERATION PROCESS}
본 발명은 오일, 또는 고도불포화 지방산(PUFA)을 제조하는 방법에 관한 것이다. 본 방법은 (후에) 이것으로부터 오일 또는 PUFA을 수득하는 세포를 포함하는 수성 액체를 탈기(deaeration: 공기 제거)하는 것에 관련된다. 탈기 후, 상기 세포는 파스퇴르화된다. 이어서, 오일 또는 PUFA가 세포로부터 추출, 정제 또는 유리될 수 있다.
고도불포화 지방산 또는 PUFA는 자연에서 발견되며, 다른 단세포 유기체(예, 조류, 공팡이류 등)에 의해 매우 다양한 다른 PUFA가 제조된다. 특히 중요한 하나의 PUFA는 아라키돈산(ARA)으로서, 이것은 다수의 장쇄 고도불포화 지방산(LC-PUFA) 중 하나이다. 화학적으로, 아라키돈산은 시스-5,8,11,14-에이코사테트라에노산(20:4)이며, LC-PUFA의 (n-6)계에 속한다.
아라키돈산은 매우 다양한 생물학적 활성화합물의 주요 전구물질로서, 프로스타글란딘, 트롬복세인 및 류코트리엔을 포함하는 그룹인 에이코사노이드로서 통합적으로 알려져 있다. 아라키돈산은 또한 사람의 젖의 지질분 성분 중 하나이고, 유아의 최적 신경 발달을 위해 필수적인 것으로 생각된다. 아라키돈산은 유아의 유동식, 식료품 및 동물 사료로의 사용을 포함한 매우 다양한 다른 용도를 갖는다.
국제 특허 공개 제 WO-A-97/37032 호는 파스퇴르화된 바이오매스로부터 미생물 PUFA-함유 오일을 제조하는 것에 관한 것이다. 그러나, 파스퇴르화 이전의 탈기에 대해서는 어떠한 언급도 없다.
2003년 12월 31일에 공개된 국제 특허 공개 제 WO-A-04/001021 호는 파스퇴르화 조건에 대해 더욱 상세하게 기재하고 있다.
바이오매스 또는 미생물 세포의 가열과 관련된 방법들이 알려져 있다. 국제특허 공개 제 WO-A-97/37032 호는, 미생물 세포가 이로부터 PUFA로 추출되기 전에 오일 형태로 파스퇴르화될 수 있다고 기술하고 있다. 그러나, 본 출원인은 탈기 방법을 포함시킴으로써 상기세포로부터 추출될 수 있는 오일의 품질을 개선시킬 수 있다는 것을 발견하였다. 특히, 결과의 오일은 덜 산화시킬 수 있거나 덜 산화될 수 있으며, 더욱 낮은 과산화물가(POV) 및/또는 아니시딘가(AnV)을 가질 수 있다.
그러므로, 본 발명은 오일 또는 고도불포화 지방산(PUFA)를 제조하는 개선된 방법의 제공에 관한 것이다. 바람직하게는, 파스퇴르화 되기 전에 탈기를 사용한다는데 그 개선이 있다.
따라서, 본 발명의 제 1 양태는 오일 또는 고도불포화 지방산(PUFA)을 제조하는 방법에 관한 것으로, 본 방법은 a) 세포를 포함하는 수성 액체를 탈기시키는 단계; 및 b) 세포로부터 상기 오일 또는 PUFA를 수득하는 단계를 포함한다.
수성 액체는 바람직하게는 배양액(broth) 또는 배지, 예컨대 발효 배양액 또는 발효로부터 산출된 배양액이다. 이것은 발효 동안 취해지거나 또는 제거된 액체일 수 있지만, 발효가 끝난 배양액이 바람직하다. 세포는 미생물 세포인 것이 바람직하다. 미생물 세포는 탈기 전, 탈기 동안 및/또는 탈기 후에 살아 있을 수 있다.
바람직하게는 수성 액체의 탈기로 인해 공기, 예컨대 비말동반된, 포착된, 비용해된 및/또는 용해된 공기가 제거된다. 그러므로, 상기 방법은 사실상 탈기체화(degassing; 기체 제거)일 수 있거나, 이를 포함할 수 있다. 이로 인해, 기체(예, 공기기포)를 제거할 수 있다. 바람직하게는, 상기 방법은 용해된 산소(예컨대, 비말동반된 형태로 또는 기포로서)와 같은 산소를 제거할 수 있다. 이와 관련하여, "용해된"은 수성 액체에 존재하는 또는 용해된 공기 또는 산소와 같은 기체(세포 내의 임의 기체보다는)와 관련된다.
탈기 방법으로 인해 또한 수성 액체로부터 다른 기체(예, 이산화 탄소)를 제거할 수 있다.
탈기로 인해 용해된 및/또는 일부 비용해된 산소의 적어도 일부를 제거하는 것이 바람직하기 때문에, 탈기는 감소된 산화를 초래할 수 있다. 이것은 PUFA 및/또는 오일이 덜 산화될 수 있고, 따라서 질이 더욱 우수할 수 있다는 것을 의미한다.
산소의 제거가 이로울 것인지는 분명하지 않은데, 이는 물론 미생물 세포가 생존하고 성장하기 위해 산소를 필요로 하기 때문이다. 사실, 본 발명의 바람직한 방법을 비롯한 많은 발효 공정에서, 공기는 미생물 세포에 공급된다. 예를 들면, 공기는 수성 액체, 또는 배지에 공급된다(예들들면 기포 되어). 세포는 분화되고 성장할 것이고, 바람직하게는 이렇게 하는 동안 또한 하나 이상의 PUFA를 생합성할 것이다. 탈기를 실시하기 위해, 발효 공정 동안 산소 또는 공기 공급을 중단하려는 의도는 반드시 유리한 전략이라고 여겨지지는 않는데, 이는 이렇게 함으로써 세포가 죽을 수 있거나, 또는 적어도 PUFA 및 다른 가치있는 화합물을 산출할 수 있는 세포의 능력이 손상될 수 있기 때문이다.
탈기는 우유, 및 오렌지 쥬스와 같은 식료품 및 또한 종이의 제조와 같은 몇몇 산업 공정에서 알려져 있다. 그러나, 이러한 공정들은 특히 추출될 화합물을 제조하는 미생물 유기체의 발효와는 다른 분야이며, 이러한 (종래 기술) 시스템들에서는 (살아있는) 세포가 없다 것을 이해할 것이다. 몇몇 종래 기술공정에서는 세균 성장을 감소시키기 위해 탈기를 실시하는 반면, 본 발명에서 PUFA를 생산하기 위한 미생물 세포의 성장 및 생존(세균 세포 포함)이 산소를 필요로 하는 발효 공정에서는 중요한 요소이다.
탈기의 실시에는 하기를 비롯한 다수의 방식이 있다:
a) 진공(또는 감압)의 적용;
b) 기계적인 탈기/탈기체화(예를 들면, 원심분리기 또는 사이클론에서의 교반, 진동, 가속력(예, g-력)의 사용);
c) 점도 변화(물 또는 다른 액체를 사용하는 희석에 의해, 또는 온도 변화에 의해);
d) 발효 동안의 공기상승력, 공기 스파징(sparging) 또는 산소 또는 공기의 공급의 감소 또는 교반 속도의 감소와 같은 발효 조건의 변화;
e) 예를 들면 pH를 낮추거나 산성화에 의한 pH의 변화(예, 액체에서 용해될 때 탄산을 형성하는 이산화 탄소를 사용함으로써);
f) 예를 들면 필터, 모세관 또는 막(예, (바람직하게는 불활성) 중합체, 예를 들면 PTFE)을 사용하는 여과;
g) 질소 또는 희기체(예, 헬륨)와 같은 불활성 기체로의 기체 치환;
h) 예를 들면 산소 소거제(예, 소디움 설파이트 또는 하이드라진)를 사용하는 화학적 탈기;
i) 산소 또는 공기와 같은 기체를 액체로부터 확산시키는 조건 하에서 수성 액체를 방치시키는 것과 같은 시간 경과; 및/또는
j) 상기 방법 중 하나 이상의 조합.
상기 9개의 탈기 방법 각각이 더욱 상세하게 기술될 것이다.
1. 진공(또는 감압)
수성 액체의 표면 위에 진공을 적용시킬 수 있다. 그러나, 진정한 진공이 항상 필요한 것은 아니며, 대신 바람직한 방법은 예를 들면 압력이 용기(예, 발효 용기) 내에 있는 동안 수성 액체의 표면 위의 압력을 감소시키는 것을 포함한다. 바람직하게는, 수성 액체 위의 압력은 대기압 또는 실압 보다 작거나, 적어도 발효조 용기 내부에서의 압력(또는 발효 동안의 압력)에 비해 감소된 압력을 나타낸다. 따라서, 탈기가 시작될 때, 예를 들면 발효가 끝나자마자 압력의 감소가 있을 수 있다.
진공 또는 감압은 발효가 일어난 용기(예, 발효조)와 다른 별도의 용기에 적용될 수 있다. 그러므로, 진공 작업대 또는 진공이 적용되거나 존재할 수 있는 별도의 용기로 액체가 이동될 수 있다. 이와 관련하여, 탈기 방법의 하나로서 "진공"의 적용을 논의할 때, 이것은 수성 액체에 감압이 적용되는 것으로 이해하여야 한다. 이는, 완전한 진공이 적용되는 것이 절대적으로 필수적인 것은 아니기 때문이다.
바람직하게는, 적용된 압력(진공 탈기 단계 동안)이 800 mbara(millibar pressure absolute) 이하, 바람직하게는 600 mbara 이하, 최적으로는 400 mbara 이하이다. 특정 상황에서는, 정확한 장치를 사용하여, 압력이 200 mbara 이하 또는 100 mbara 이하인 것이 바람직하다. 바람직하게는, 감압은 50 내지 600 mbara, 예를 들면 100 내지 500 mbara, 및 최적으로는 200 내지 450 mbara이다.
바람직한 실시양태에서, 수성 액체(예, 발효 후 수성 액체)는 감압, 바꾸어 말하자면 발효조보다 낮은 압력을 갖는 용기(또는 수성 액체가 이동되는 다른 용기)로 이동된다. 수성 액체의 상기 두 개의 용기(예, 발효조로부터 감압 용기로)로부터의 이동은 압력의 차이에 의해 도움을 받거나 초래될 수 있다. 그러므로, 수성 액체가 한 용기로부터 다른 용기로 이동하는 동안 수반되는 압력을 나타내는 이동 압력이 있을 수 있다. 이러한 이동 압력은 0.7 bar 이하(예, 0.6 bar 이하) 및 바람직하게는 0.5 bar 이하이다. 이동 압력은 0.7 내지 0.3 bar, 예컨대 0.6 내지 0.4 bar일 수 있다.
감압 용기는 탈기를 돕도록 수성 액체의 표면적을 증가시키는 수단을 가질 수 있다. 따라서, 수성 액체는 박막과 같은 필름 형태를 취할 수 있다. 수성 액체는 기계적인 장치, 예를 들면 노즐(예컨대, 엄블렐라 노즐 또는 파라솔 탈기 장기)에 의해 필름(예, 박막)을 형성할 수 있다. 그러므로, 수성 액체는 감압이 적용되는 동안 곡선 표면 상에 있게 된다. 수성 액체의 표면적을 증가시킴으로써, 예컨대 필름 또는 스프레이를 형성함으로써, 탈기 방법을 도울 수 있으며, 더욱 효과적인 탈기체화를 초래할 수 있다. (노즐 또는 곡선 표면 상에 존재하는 수성 액체를 함유하는) 감압 용기 내부의 수성 액체의 수준은 1/10 내지 2/10 일 수 있다. 이어서, 탈기된 수성 액체는 파스퇴르화 또는 가열 용기 또는 작업대로 이동될 수 있다.
2. 기계적 탈기
종종, 발효 동안, 산소 또는 (더욱 통상적으로) 공기가 수성 액체(배지 또는 발효 배양액)로 공급된다. 이로 인해, 미생물 세균이 성장 및 분화되고 PUFA를 생합성시킨다.
발효 동안 수성 액체는 교반될 수 있다. 탈기를 위해, 교반 정도(또는 교반 속도)를 감소 또는 저하시키거나 또는 함께 중단시킬 수 있다. 교반을 감소시키면 예를 들면 교반 날 또는 움직이는 표면 상에서 또는 그 근처에서 공동현상이 적게 발생하고, 기포(수성 액체 중에서)가 적게 발생할 것 같다.
교반의 중단 또는 교반 정도의 감소는 수성 액체에서 기포를 응집시키고, 따라서 수성 액체의 표면을 향해 상승할 수 있다. 이러한 교반의 감소 동안, 교반 속도는 발효 동안의 속도의 1/2 이하, 1/3 이하, 심지어 1/4이하로 감소될 수 있다. 예를 들어 교반 속도가 80 rpm이면, 탈기를 허용하는 감소된 교반은 40 rpm 이하의 속도에서의 교반을 포함할 수 있다.
기계적 탈기는 또한 수성 액체(발효 배양액, 통기에 의해)에 공급된 공기 또는 산소의 함량의 감소를 포함할 수 있다. 공기 또는 산소의 첨가 속도가 함께 저하되거나 중단될 수 있다. 탈기 동안, 공기(또는 산소) 공급 속도는 (예컨대 발효 동안의 속도의) 1/2이하, 1/3이하, 또는 심지어 1/4로 감소될 수 있다. 따라서, 액체의 통기는 발효가 끝나기 전에 중단될 수 있다(예, 5, 2, 또는 1시간 이하 동안).
종종, 공기(또는 산소)는 발효 동안 수성 액체에 공급되고, 그동안 이것은 발효 용기(발효조) 중에 있다. 기체는 수성 액체 속으로 기포 되며, 이것은 스파저(sparger)에 의할 수 있다. 탈기는 스파저에 의한 공기 또는 산소 공급 속도의 감소를 포함한다.
탈기는 또한 진공에 의해 달성될 수 있는데, 이때 수성 액체는 튜브와 같은 (정압) 진동 용기를 통해 또는 그 속을 통과한다.
수성 액체는 탈기체화 펌프를 사용하여 탈기될 수 있다. 수성 액체는 예를될면 싸이크론에서와 같은 가속력으로 처리될 수 있다. 그러므로, 상기 액체는 탈기에 도움을 줄 수 있는 원심분리력으로 처리될 수 있다. 싸이클론은 용기 중의 수성 액체를 빠르게 회전시키고 이것을 원심분리력에 수반시켜 액체로부터 방출되는 기체는 위로 올라가서 싸이클론의 상부로부터 제거되고, 그 동안에 탈기된 액체는 반대 방향(예, 아래)으로 흐를 수 있다.
기계적 진공 탈기 장치는 수성 액체를 탈기하는데 사용될 수 있다. 이것은 진공(또는 감압)이 적용될 수 있는 펌프일 수 있다. 감압을 수용하거나 또는 진공을 발생할 수 있는 변경된(예, 원심분리) 펌프가 상업적으로 이용될 수 있다. 바람직하게는, 진공 펌프는 예를 들면 원심분리력의 작용하에 수성 액체로부터 기체 기포를 제거할 수 있는 회전 챔버를 가질 것이다.
또 다른 유형의 장치는 탈기체화 펌프를 포함한다. 이것으로 기체 용해된 액체의 탈기체화를 실시할 수 있다. 펌프는 (예를 들면 연동식) 진공 펌프를 가질 수 있다. 이로 인해, 임의 화학적 첨가제 없이 탈기체화를 실시할 수 있다. 이러한 시스템은 0.5ppm 이하의 수준으로 탈기체화될 수 있다. 이러한 시스템은 25리터/분 이하의 유속을 가질 수 있다. 적합한 탈기체화 펌프는 일본의 요코타 매뉴팩추어링 컴파니(Yokota Manufacturing Company)로부터 이용할 수 있다.
3. 점도 조절
수성 액체를 가열하여 점도 증가를 달성할 수 있다. 상기 가열은 또한 탈기를 초래할 수 있다.
점도 감소로 인해 수성 액체 중의 기체를 표면으로 더욱 효과적으로 이동시킬 수 있다. 따라서, 점도를 감소시키는 방법은 탈기 방법에 도움을 줄 수 있다. 이것은 또다른 액체(그자체가 탈기화되거나, 수성 액체 보다 더욱 낮은 공기/산소 함량을 가짐), 예컨대 물을 첨가함으로써 달성될 수 있고, 따라서 상기 방법은 희석을 포함할 수 있다. 수성 액체는 세포 및 세포의 동화를 위한 질소 및/또는 탄소 원의 존재 때문에 종종 아주 점성질이다.
점도를 감소시키는 또 다른 방법은 수성 액체를 가열시키는 것이다. 온도의 증가는 액체 중의 산소의 용해도를 감소시킨다.
4. pH 조절
수성 액체는 더욱 산성으로 만들 수 있다. 이로 인해, 수성 액체중의 공기/산소의 용해도를 저하시킬 수 있다.
수성 액체는 가치있는 화합물을 합성할 수 있는 살아있는 세포를 포함한다는 것을 이해할 것이다. 세포가 산소를 소비하고 이산화 탄소를 배출한다는 점에서 세포는 "호흡한다". 이산화 탄소는 수성 액체에 용해될 수 있고, 그럼으로써 탄산을 생산한다. pH를 낮춤으로써 수성 액체는 더욱 산성이 될 수 있으며, 따라서 액체 중에서의 이산화 탄소(또는 산소)의 용해도를 감소시킬 수 있다.
5. 여과
수성 액체는, 예를 들면 공기의 작은 기포를 제거할 수 있는 필터 또는 막을 통과할 수 있다. 이것은 비교적 작은 규모로 실시될 수 있다. 필터 또는 막은 바람직하게는 불활성 물질, 예컨대 중합체를 포함할 수 있다. 상기 물질(예, 중합체)는 PTFE와 같은 할로겐 알킬렌을 포함할 수 있다.
그러므로, 수성 액체는 (예를 들면 작은 또는 비교적 가는) 튜브 또는 모세관을 통과할 수 있다. 이것은 PTFE와 같은 중합체를 (예, 벽에) 포함할 수 있거나, 또는 (코팅으로서) 가질 수 있다. 상기 튜브는 용해된 기체 또는 기포가 통과하는 구멍 또는 천동을 가질 수 있다. 수성 액체는 압력하에 상기 튜브 또는 모세관을 통과할 수 있다.
6. 기체 치환
이것은 수성 액체에서 산소 또는 공기(용해되거나 또는 그렇지 않거나)를 치환하거나 대체하는 것을 포함한다. 바람직하게는 용해된 산소가 용액으로부터 방출되는 한, 공기 또는 산소는 많은 다양한 범위의 기체로 치환될 수 있으며, 그후 수성 액체로부터 이탈할 수 있다. 질소 또는 희기체(예, 헬륨)와 같은 불활성 기체가 바람직하다. 상기 기체는 수성 액체의 상부(예, 발효조의 상부 공간)에 제공될 수 있다. 예를 들면, 이것은 예를 들면 용기(예, 발효조) 중의 액체 위의 상부 공간에 첨가되거나 공급될 수 있다. 다르게는, 상기 기체는 예를 들면 스파저에서의 기포화 또는 스파저의 사용에 의해 수성 액체에 공급될 수 있다. 바람직한 기체는 질소이지만, 질소를 포함하는 기체(20% 이하, 또는 10% 또는 15% 이하의 감소된 양의 산소와 함께, 따라서 이것이 대기 수준이하임)가 사용될 수 있다.
바람직한 기법은, 발효가 끝나기 전에 수성 액체에 공급된 공기(또는 산소)의 함량을 감소시키거나 또는 중지시키는 것이다. 먼저, 예를 들면 발효가 끝나기 전 적어도 한 시간 또는 두 시간 동안 예를 들어 스파저를 통해 어떠한 공기도 공급되지 않을 수 있다. 스파저를 통한 공기의 공급 대신에, 공기 또는 산소 이외의 기체, 예를 들면 감소된 산소 함량을 갖는 기체(예, 질소)를 공급할 수 있다. 따라서, 바람직하게는 발효가 끝나기 전 한 시간 또는 두 시간 이하의 시간동안 수성 액체에 질소를 공급할 수 있다. 이로 인해, 수성 액체 위에서 불활성 또는 감소된 산소 함량(질소 풍부)을 갖는 대기, 예를 들면 대기 공기 보다 높은 질소 함량을 갖는 대기를 형성할 수 있다. 수성 액체 상에서의 질소 압력은 0.4 내지 0.8 bar, 예컨대 약 0.6 bar일 수 있다.
7. 화학적 탈기
이것은 공기 또는 더욱 중요하게는 공기 중의 산소와 유리하게 반응할 수 있는 물질 또는 화학물질을 사용하여 달성할 수 있다. 상기 물질은 산소 소거제일 수 있다. 상기 물질은 수성 액체와 접촉할 수 있다. 화학물질은 예를 들면 수성 액체가 용기(예, 발효조 용기)에 있는 동안 수성 액체에 첨가될 수 있다. 산소 소거제를 포함하는 적합한 산소 반응 물질은 본 기술분야에 잘 알려져 있으며, 알칼리 금속(예, 나트륨) 설파이트 및 히드라진을 포함하는 화합물을 포함한다. PUFA 또는 오일이 식료품에 사용되는 경우, 다른(비화학적) 탈기 방법이 사용될 수 있다.
8. 시간 경과
수성 액체를 방치시킨다면, 수성 액체는 이것의 용해된 기체, 예를 들면 산소 및 공기를 천천히 상승시킬 것이다. 용해된 기체는 수성 액체로부터 확산될 수 있다. 따라서, 기체는 점차적으로 시간이 지남에 따라 용액으로부터 방출될 수 있다.
공기/산소 함량 측정
이것은 본 기술분야의 표준 기법을 사용하여 달성될 수 있다. 예를 들면, EGT(비말동반된 기체 테스터)를 사용할 수 있다. 공기 함량은 온라인 기법을 사용하여 수성 액체(효과적으로는 세포의 미생물 현탁액)에서 측정될 수 있다.
비말동반된 기체(기체 기포)는 측정하는 세포 중의 샘플을 압축함으로써 측정될 수 있다. 비말동반된 기체의 부피 함량은 보일의 법칙(pV = 일정)에 의해 계산된다. 한편, 방출될 수 있는 용해된 기체는 샘플을 팽창시킴으로써 측정될 수 있다. 이것은 상기 압력에서의 완전한 방울을 시뮬레이션한 것이다. 측정하는 세포에서의 압력이 감소되는 경우, 기체의 용해도는 감소하고 기체는 방출된다. 따라서, 현택액의 부피는 증가한다. 이런 작동은 완전히 자동일 수 있고/있거나, 적합하게는 탈기 후 시스템의 적절한 장소에 온라인 기체 분석기를 포함할 수 있다.
탈기는 20 ppm 또는 15 ppm 미만, 예를 들면 2 또는 5 내지 15 또는 20 ppm의 O2 함량(수성 액체 중에서)을 초래할 것이다. (예컨대 용해된) 산소의 농도는 바람직하게는 10 ppm 미만, 예를 들면 5 ppm 미만, 최적으로는 2 ppm 미만 일 수 있다. 바람직하게는, 탈기는 (용해된)산소의 농도가 0.03 cc/ℓ(44 ppb) 미만, 바람직하게는 0.005cc/ℓ(7 ppb) 미만이 되도록 일어난다.
탈기된 수성 액체(본 발명에 따라 세포를 포함하는 수성 액체를 탈기함으로써 수득됨)는 증가된 압력 및/또는 증가된 온도로 처리되는 것이 유리할 수 있다. 증가된 압력 및/또는 증가된 온도는 예를 들면 세포의 가열 및/또는 파스퇴르화 동안 존재할 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 방법은, 탈기된 수성 액체를 1 bara 이상, 바람직하게는 1.5 bara 이상, 더욱 바람직하게는 2 bara 이상, 가장 바람직하게는 5 bara 이상의 압력으로 처리하는 것을 포함한다. 압력의 상부 한계치에 는 특별한 한정이 없다. 탈기된 수성 액체는 예를 들면 40 bara 이하, 예컨대 20 bara 이하의 압력으로 처리될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 방법은 탈기된 수성 액체를 60℃ 이상, 바람직하게는 80℃ 이상, 더욱 바람직하게는 90℃ 이상, 더욱 더 바람직하게는 100℃ 이상, 가장 바람직하게는 110℃ 이상의 온도로 처리하는 것을 포함한다. 온도의 상부 한계치에는 특별한 한정이 없다. 탈기된 수성 액체는 예를 들면 150℃ 이하의 온도로 처리될 수 있다.
바람직하게는, 증가된 온도 및/또는 증가된 압력으로 처리될 수 있는 탈기된 수성 액체는 본원에 기술된 바와 같은 바람직한 O2 함량 및 바람직한 (용해된)산소의 농도를 갖는다.
파스퇴르화 공정
탈기 및/또는 발효가 종결된 후 파스퇴르화가 일반적으로 일어날 것이다. 바람직한 실시양태에서, 파스퇴르화 동안의 열이 세포를 사멸시키기 때문에 파스퇴르화는 발효를 종결시킬 것이다. 그러므로, 파스퇴르화는 발효 배양액(또는 액체(수성)매질에서의 세포)에서 실시될 수 있지만, 이것은 상기 배양액으로부터 수득된 미생물 바이오매스 상에서도 실시될 수 있다. 전자, 즉, 발효 배양액에서의 경우, 미생물 세포가 여전히 발효조 내에 있는 동안 파스퇴르화가 일어날 수 있다. 미생물 세포의 임의 추가의 처리 전, 예를 들면 그래뉼화(예, 압출에 의한) 크럼블링(crumbling) 또는 니딩(kneading) 전에 파스퇴르화가 일어나는 것이 바람직하다.
일단 발효가 종결되면, 발효 배양액은 여과될 수 있거나, 그렇지 않으면 물 또는 수성 액체를 제거하기 위해 처리될 수 있다. 물의 제거 후, 바이오매스 "케이크"를 얻을 수 있다. 파스퇴르화가 일어나지 않는다면, 탈수된 세포(또는 바이오매스 케이크)를 파스퇴르화시킬 수 있다. 파스퇴르화는 직접적인 또는 간접적인 가열(세포)에 의해 실시될 수 있다. 가열(직접적인인 경우)은 증기가 발효조 내를 통과함으로써 실시될 수 있다. 간접적인 방법에서는 발효조의 벽을 통해 또는 가열 코일을 사용하는 열교환기를 통한 매체 또는 평판열교환기와 같은 외부 열교환기를 통한 매체를 사용할 수 있다.
일반적으로, 발효가 일어난 발효조 용기에서 파스퇴르화가 발생할 것이다. 그러나, 일부 유기체(예, 세균)에 있어서, 먼저 용기로부터 세포를 제거한 후 파스퇴르화를 실시하는 것이 바람직하다. 파스퇴르화는 유기체의 또 다른 처리, 예를 들면 건조 또는 그래뉼화 전에 일어날 수 있다.
파스퇴르화는 일반적으로 미생물을 전부는 아니지만 대부분을 사멸시킬 것이다. 파스퇴르화 후에, 미생물의 95% 이상, 96% 이상, 심지어 98% 이상이 사멸된다. 즉, 미생물은 생존하지 않는다.
세포의 가열 또는 파스퇴르화는 임의 적합한 온도, 바람직하게는 60℃ 이상, 더욱 바람직하게는 80℃ 이상, 더욱 더 바람직하게는 90℃ 이상, 여전히 더 바람직하게는 100℃ 이상, 가장 바람직하게는 110℃ 이상의 온도에서 실시될 수 있다. 온도에 대한 특별한 상부 한계치는 없다. 파스퇴르화는 예를 들면 150℃ 이하의 온도에서 실시될 수 있다. 바람직한 파스퇴르화 공정은 국제 특허 공개 제 WO 97/37032 호 및 제 WO-A-04/001021 호에 기술되어 있다.
PUFA의 추출
본 발명은 (예컨대, 파스퇴르화) 세포로부터 PUFA를 추출 및/또는 유리하는 것을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 이것은 탈기 후에 및 (선택적으로) 또한 파스퇴르화 이후에 실시된다.
추출은 염화 칼슘과 같은 알칼리 토금속 할라이드의 첨가로 먼저 시작될 수 있다. 세포는 (그 후) 여과, 세정 및/또는 젖은 케이크의 형성을 위해 압착처리(squeezing)될 수 있다.
미생물 세포는 그 후 압출되며, 필요에 따라 결과의 압출된 그래뉼 또는 압출물은 건조될 수 있다. 결과의 건조된 그래뉼 또는 건조된 바이오매스는 하나의 PUFA, 바람직하게는 하나 이상의 PUFA를 함유한 오일을 추출하는데 사용될 수 있다. 미생물 세포로부터 PUFA를 함유한 오일을 제조하는 바람직한 추출 공정은 국제 특허 출원 제 PCT/EP99/01446(WO 97/36996) 호, 제 PCT/EP97/01448(WO 97/37032) 호 및 제 PCT/EP01/08903(WO 02/10423) 호에 기술되어 있다.
고도불포화 지방산(PUFA) 및 미생물 오일
PUFA는 단일의 PUFA 또는 두 개 이상의 다른 PUFA일 수 있다. 단일의 PUFA 또는 각각의 PUFA는 n-3 또는 n-6계일 수 있다. 바람직하게는, C18, C20, 또는 C22 PUFA이다. 18이상의 탄소원자 및/또는 3 또는 4 이상의 이중 결합을 갖는 PUFA일 수 있다. PUFA는 유리 지방산 형태로, 지방산 에스터(예, 메틸 또는 에틸 에스터)와 같은 염으로서, 인지질로서 및/또는 모노-, 다이-, 또는 트라이글리세라이드 형태로서 제공될 수 있다.
적합한 (n-3 및 n-6) PUFA는 다음을 들 수 있다:
적합하게는 조류 또는 곰팡이(예, (다이노플라겔레이트)(dinoflagellate) 크립테코디늄(Crypthecodinium) 또는 (곰팡이)(fungus) 트라우스포키트리움 Thraustochytrium)로부터 도코사헥사에노산(DHA, 22:6 Ω3);
γ-리놀렌산(GLA, 18:3 Ω6);
α-리놀렌산(ALA, 18:3 Ω3);
공액 리놀렌산(옥타데카디엔산, CLA);
다이호모-γ-리놀렌산(DGLA, 20:3 Ω6);
아라키돈산(ARA, 20:4 Ω6) 및
에코사펜타에노산(EPA, 20:5 Ω3).
바람직한 PUFA는 아라키돈산(ARA), 도코사헥사에노산(DHA), 에코사펜타에노산(EPA) 및/또는 γ-리놀렌산(GLA)을 포함한다. 특히, ARA가 바람직하다.
PUFA는 본 발명의 방법에서 파스퇴르화된 세포, 예를 들면 미생물 세포에 의해 제조될 수 있다. 이것은 세균, 조류, 곰팡이, 또는 효모 세포일 수 있다. 곰팡이가 바람직하며, 모르티렐라(Mortierella), 피코마이세스(Phycomyces), 블레이크스레아(Blakeslea), 아스퍼길러스(Aspergillus), 트라우스토키트리움(Thraustochytrium), 피티움(Pythium) 또는 엔토모프토라(Entomophthora)와 같은 무코랄레스(Mucorales) 목이 바람직하다. ARA의 바람직한 공급원은 모르티렐라 알피나(Mortierella alpina), 블레이크스레아 트리스포라(Blakeslea trispora), 아스퍼길러스 테레우스(Aspergillus terreus), 또는 피티움 인시디오섬(Pythium insidiosum) 로부터 유래된다. 조류는 다이노플라겔레이트일 수 있으며/있거나 포르피리듐(Porphyridium), 니트스키아(Nitszchia) 또는 크립테코디늄(Crypthecodinium)(예, 크립테코디늄 코니(Crypthecodinium cohnii))을 포함한다. 효모는 피키아(Pichia) 또는 사카로마이세스(Saccharomyces) 속, 예를 들면, 피키아 시페리(Pichia ciferii)을 포함한다. 세균은 프로피오니박테리움(Propionibacterium) 속일 수 있다. 미생물 오일은 액체(실온에서) 일 수 있다.
대부분의 PUFA가 트라이글리세라이드 형태인 것이 바람직하다. 따라서, PUFA의 50% 이상, 예를 들면 60% 이상, 최적으로는 70% 이상이 트라이클리세리드 형태인 것이 바람직하다. 그러나, 트라이글리세라이드의 함량은 더 크며, 예를 들면 오일의 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 최적으로는 93% 또는 95% 이상일 수 있다. 이러한 트라이글리세라이드에서, PUFA의 바람직하게는 40% 이상, 예컨대 50% 이상, 최적으로는 60% 이상이 글리세롤(트라이글리세라이드 주쇄 중에 존재하는)의 a-위치(또한, 1 또는 3위치로 알려짐)에 존재한다. PUFA의 20% 이상, 예를 들면 30% 이상, 최적으로는 40% 이상이 b(2) 위치에 있는 것이 바람직하다.
미생물 오일은 10, 35, 40 또는 45% 이상의 바람직한 PUFA(예, 아라키돈산)을 포함할 수 있다. 상기 오일은 90% 이상, 예를 들면 92 내지 94%의 트라이글리세라이드 함량을 가질 수 있다. 전형적으로, 미생물 오일은 5% 이하, 바람직하게는 1% 이하, 더욱 바람직하게는 0.5% 이하의 에이코사펜타노에산(EPA) 함량을 가질 것이다. 상기 오일은 C20, C20:3, C22:0 및/또는 C24:0 지방산 각각을 5% 미만, 2% 미만, 1% 미만으로 가질 수 있다. 유리 지방산(FFA) 함량은 1.0 이하, 0.4 이하, 0.2 이하, 또는 0.1 이하일 수 있다. 오일은 GLA 및/또는 DGLA가 거의 없거나 전혀 없을 수 있다.
미생물 오일은 조질 오일일 수 있다. 상기 오일은 유기 액체(예, 헥산 또는 아이소프로판올)과 같은 용매를 사용하여 세포로부터 추출될 수 있다.
PUFA 추출 공정
다음, PUFA(또는 일반적으로 PUFA를 포함하는 미생물 오일)는 (파스퇴르화) 미생물 세포로부터 추출될 수 있다. 바람직하게는, 이것은 세포를 함유한 (예, 건조된) 그래뉼(예, 압출물)로부터 추출된다. 추출은 용매를 사용하여 실시될 수 있다. 바람직하게는, 비이온성 용매, 예를 들면 C1-8(바람직하게는 C2-6)알칸(예, 헥산)을 사용한다.
바람직하게는, 용매는 건조된 그래뉼 상에서 여과된다. 미생물 PUFA 함유의 오일의 적합한 미생물 그래뉼 및 압출 기술 및 후속의 추출 기술은 국제 특허 공개 제 WO-A-97/37032 호에 기술되어 있다.
용매의 사용으로 인해 조질의 PUFA 함유의 오일을 수득할 수 있다. 이런 오일은 추가의 처리없이 그 상태로 사용될 수 있거나, 하나 이상의 정제 단계에 처리될 수 있다. 그러나, 조질 오일은 일반적으로 오일을 추출하는데 사용된 용매와 같은 용매(예, 헥산 또는 아이소프로필 알콜과 같은 알콜)를 함유하거나 또는 후속의 정제 단계 중의 하나(또는 바람직하게는 모두)에 처리되지 않은 오일이다. 적합한 정제 프로코콜은 국제 특허 출원 제 PCT/EP01/08902 호에 기술된 바와 같다(본원에 기술된 상기 문헌 및 모든 기타 문헌의 내용이 참고로 인용되었다). 예를 들면, 오일은 산처리 또는 검제거처리, 알칼리 처리 또는 유리 지방산 제거, 표백 또는 안료 제거, 여과, 방한처리(winterisation)(또는 예를 들면 포화 트라이글리세라이드를 제거하기 위한 냉각), 냄새제거(예, 유리 지방산의 제거) 및/또는 폴리싱(또는 오일 불용성 물질의 제거)를 포함하는 하나 이상의 정제 단계에서 처리될 수 있다. 이러한 모든 정제 단계는 국제 특허 출원 제 PCT/EP01/08902 호에 더욱 상세하게 기술되어 있으며, 본원에 기술된 단계에 필요한 변경을 가해서 사용할 수 있다.
결과의 오일은 특히 영양적 목적에 적합하며, (사람) 식료품 또는 (동물) 사료에 첨가될 수 있다. 보기로서 우유, 유아의 유동식, 건강 음료, 빵 및 동물 사료를 포함한다.
세포
세포는 이로부터 오일 또는 PUFA를 수득할 수 있는 임의 세포일 수 있다. 바람직하게는, 세포는 미생물 세포다. 본 발명에 사용되는 미생물 세포(미생물)는 특히 PUFA 및 미생물 오일과 관련된 섹션에서 이미 기술된 임의의 세포이다. 이것들은 PUFA 또는 미생물 오일을 포함하거나 또는 이것을 제조할 수 있으며, 적합하게는 PUFA 또는 오일은 세포로부터 추출되거나 또는 유리될 수 있다. 이것들은 곰팡이 또는 세균과 같은 사상균 형태 또는 효모, 조류 및 세균과 같은 단세포일 수 있다. 세포는 효모, 곰팡이, 세균 또는 조류인 미생물을 포함할 수 있다. 바람직한 곰팡이는 예를 들면 무코랄레스(Mucorales)목이며, 곰팡이는 모르티렐라(Mortierella), 피코마이세스(Phycomyces), 블레이크스레아(Blakeslea), 또는 아스퍼길러스(Aspergillus) 속일 수 있다. 바람직한 곰팡이의 종은 모르티렐라 알피나(Mortierella alpina), 블레이크스레아 트리스포라(Blakeslea trispora), 또는 아스퍼길러스 테레우스(Aspergillus terreus) 종이다. 효모가 관련되는 한, 이러한 효모는 피키아(Pichia) 속(예, 피키아 시페리(Pichia ciferii)) 또는 사카로마이세스(Saccharomyces)속인 것이 바람직하다. 세균은 프로티오니박테리움(Propionibacterium) 속일 수 있다. 세포가 조류로부터 유래되는 경우, 이것은 다이노플라겔레이트가 바람직하며, 크립테코디늄(Crypthecodinium) 또는 다니엘라(Daniella) 속에 속한다. 바람직한 조류는 크립테코디늄 코니(Crypthecodinium cohnii) 또는 다니엘라 살리나(Daniella salina) 종이다.
과산화물가(POV)
(미생물) 오일의 POV는 3 내지 8 또는 12이다. 그러나, 본 발명의 방법을 사용하여 더욱 낮은 POV를 얻을 수 있으며, 이러한 값들은 10.0 미만, 또는 8.0 미만일 수 있다. POV는 본 기술분야에 공지된 기법, 예컨대 AOCS Cd-8-53에 따라 측정될 수 있다. 단위(POV)는 일반적으로 meq/kg이다.
아니시딘가(AnV)
이 값은 알데하이드 함량의 측정치이다. 바람직하게는, (미생물) 오일의 아니시딘가는 5, 6, 7 또는 10 내지 15, 20 또는 25이다. 적합하게는, AnV는 20이하, 예를 들면 15 이하이다. 이 값은 10 이하, 심지어 5 또는 2 이하일 수 있다. AnV 값(바람직한 실험에서)는 5 내지 15, 최적으로는 7 내지 12 범위이다. 바람직하게는 AnV는 2 또는 5 내지 12 또는 15이다. AnV는 본 기술분야에 공지된 기법, 예를 들면 AOCS Cd-18-90에 따라 측정될 수 있다.
오일 및 PUFA의 용도
본 발명의 또 다른 양태는 오일 및 적합하다면 부가 물질을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 이러한 조성물은 동물 또는 사람을 위한 식료품 및/또는 식품 보충물 일 수 있다. 오일은 필요에 따라 전형적으로 미생물로부터 수득된 오일의 정련 또는 정제에 의해 사람이 소비하기에 적합하게 될 수 있다.
조성물은 유야의 유동식 또는 (사람) 식료품일 수 있다. 유동식의 조성은 보통의 젖과 유사한 함량의 지질 또는 PUFA를 갖도록 조절될 수 있다. 이것은 적절한 조성을 달성하도록 본 발명의 미생물 오일을 다른 오일과 혼합하는 것을 포함할 수 있다.
조성물은 동물 또는 해양 생물의 사료 조성물 또는 보충물일 수 있다. 이러한 사료 및 보조물은 임의 농장 동물, 특히 양, 소 및 가금류에 제공될 수 있다. 또한, 사료 또는 보충물은 물고기 및 갑각류와 같은 양식되는 해양 유기체에게 제공될 수 있다. 따라서, 조성물은 상기 동물을 위한 하나 이상의 사료 물질 또는 성분를 포함할 수 있다.
본 발명의 오일은 조질 오일 또는 정제된 오일일 수 있다. 이것은 오일로서 직접적으로 시판되거나 적절한 팩키지, 예를 들면 에톡시 페놀성 래커로 내부가 피복되고 질소로 세정된 알루미늄 병에 함유될 수 있다. 오일은 각각 예를 들면 50 내지 800 ppm(예컨대 100 내지 700 ppm)의 농도로 하나 이상의 항산화제(예, 토코페놀, 바이타민 E, 팔미테이트)를 함유할 수 있다.
적합한 조성물은 약학적 또는 수의학적 조성물(예를 들면 경구적으로 투여됨) 또는 화장품 조성물을 함유할 수 있다. 오일은 상기와 같이 투여되거나, 예를 들면 쉘 내에 캡슐화될 수 있고 따라서 캡슐 형태로 있을 수 있다. 쉘 또는 캡슐은 젤라틴 및/또는 글리세롤을 포함할 수 있다. 조성물은 다른 성분, 예를 들면 향미제(예, 레몬 또는 라임 향물질) 또는 약학적 또는 수의학적 허용 담체 또는 부형제를 함유할 수 있다.
소포제
탈기 동안, 수성 액체에서 기체 기포가 형성될 수 있다. 이것은, 기체가 용액으로부터 방출되어서 수성 액체의 표면을 향하여 (기포로서) 상승하기 때문에 탈기체화 공정 동안 일어날 수 있다. 기대한 바와 같이, 이로인해 거품이 수성 액체의 상부 상에서 형성될 수 있다. 거품이 바람직하지 않다면, 수성 액체에 하나 이상의 소포제를 첨가하여 거품의 형성을 감소시키거나 방지할 수 있다. 이러한 소포제는 본 기술분야에 공지되어 있으며, 트라이뷰틸 포스페이트와 같은 적절한 소포제가 사용될 수 있다. 바람직하게는, 소포제는 소수성이며, 물에서 불용성일 수 있다. 소포제는 예를 들면 극성 기에 의해 개질된 비극성 탄화수소 사슬을 포함할 수 있다. 바람직한 소포제는 실리콘 오일, 파라핀, 지방산 알콜 알콕실레이트 및/또는 폴리글라이콜을 포함한다.
바람직한 화학 소포제는 지방족 알콜, 지방산 에스터, 지방산 에톡실레이트, 지방산 폴리에터 및/또는 지방산 알콜을 포함한다.
특히, 미생물 세포가 가열되어야 한다면, 예를 들면 사멸되거나 파스퇴르화될 필요가 있다면, 탈기는 추가의 잇점을 가질 수 있다. 세포, 또는 수성 액체(또는 적절한 단계에서 세포를 포함하는 조성물 모두)는 가열 또는 파스퇴르화 동안 고온 및/또는 고압에 처리될 수 있다. 이로 인해, 기체는 수성 액체를 갑자기 또는 격렬하게 이탈하여서, 예를 들면, 미생물 세포 이동 동안 펌프에 동공현상을 초래할 수 있다. 이로인해 세포벽이 파열되기 때문에, 다르게 말하자면 세포가 개열되기 때문에 바람직하지 못하다. 그러므로, 앞서의 탈기 단계는 고온 또는 고압 동안 예를 들면 가열 또는 파스퇴르화 동안 발생할 수 있는 가능한 문제를 감소시킬 수 있다.
장치(예, 산업 공정 플랜트)
본 발명의 제 2 양태는 제 1 양태의 방법을 실시하기에 적합한 장치에 관한 것이다. 따라서, 제 2 양태는 (a) 미생물 세포를 배양(또는 발효)시키기 위한 수단(예, 발효조) 및 선택적으로 이것과 결합된 (b) 미생물 세포를 포함하는 수성 액체를 탈기시키기 위한 수단; 및 (c) 선택적으로 미생물 세포로부터 (결과의) 오일을 수득하기 위한 수단을 포함할 수 있다.
하나의 실시양태에서, (b)에서의 탈기는 세포가 (여전히) 발효조 내에 있는 동안 일어날 수 있다. 또 다른 양태에서, 탈기 수단은 (b)에서의 탈기 수단과 다를 수 있다(비록 선택적으로 연결되지만). 따라서, 세포 및 배지(예, 배양액)는 (b)의 탈기 수단을 통과하거나 이 수단으로 이동될 수 있다(직접적으로). 또한, 파스퇴르화를 위한 수단이 있을 수 있다. (b)에서의 탈기 후, 탈기된 액체는 액체(및 세포)가 파스퇴르화되는 파스퇴르화 수단 또는 용기로 이동하거나 통과할 수 있다. 상기 수단 각각은 명시된 순서로, 즉, 제 1 양태의 방법의 단계의 순서로 배치될 수 있다.
바람직한 시스템에서, 수성 액체는 발효조로부터 (적합하게는 튜브형) 가열 시스템으로 이동할 수 있다. 그 자체로 탈기될 수 있는 수성 액체는 (예비)가열될 수 있다. 액체는 40 내지 80℃, 예를 들면 50 내지 70℃(예, 55 내지 65℃)로 가열될 수 있다. 그러므로, 가열(또는 예비가열 단계)은 탈기 시스템의 일부일 수 있다. 탈기는 물(희석 기술) 및/또는 증기(기체 치환 기술)의 부가에 의해 추가로 촉진될 수 있다. 상기 중 하나 또는 둘 다는 (예비) 가열 전에 발생할 수 있다.
예를 들면, 예비가열 후, 수성 액체는 진공 또는 압력 감소와 같은 추가의 탈기 단계에서 처리될 수 있다. 이어서, 액체는 파스퇴르처리될 수 있다.
본 발명의 하나의 양태의 바람직한 특징 및 특성은 또 다른 양태에 필요에 따라 변경되어 사용될 수 있다.
본 발명은 예시적인 방식으로 하기 실시예들을 참조로 하여 기술될 것이며, 이러한 실시예들은 예시적으로 제공되는 것으로 그 범위로 한정되는 것은 아니다.
비교실시예 1 및 실시예 2 내지 4(발효조 내에서의 탈기)
곰팡이 바이오매스(모르티렐라 알피나; Mortierella alpina)의 파스퇴르화를 포함하는 몇몇 실험 동안 일부 산화가 나타났다. 발효 배양액에 공기가 존재하여, 특히 고온에서 화학적 산화가 일어난 것으로 의심된다. 비록, 미생물 세포는 생존 및 PUFA의 생합성을 위해 공기를 필요로 할지라도, 파스퇴르화(열 쇼크 처리) 전에 발효조 내부에서 발효 배양액의 탈기를 실시하기로 결정하였다.
곰팡이 바이오매스(모르티렐라 알피나)의 발효를 본 기술분야에서 이미 기재된 바에 따라 실시하였다. 발효는 국제 특허 공개 제 WO 97/36996 호(실시예 참조)에 기술된 것과 유사한 방식으로 실시하였다. 약 150 내지 200 시간 동안 발효가 지속되었다. 배양액을 발효조로부터 작은 용기(350리터 용량)를 거쳐 파스퇴르화 장치로 이동시켰다.
다수의 비슷한 발효로부터 유래된 발효 배양액 상에서 150 내지 200 시간의 발효 시간으로 시험을 실시하였다.
제 1 군의 실험에서, 여전히 발효조 내부에서 있는 배양액 상에서, 발효가 끝나기 전에 2 시간 동안 스파저를 통해 배양액에 공기를 기포화하는 것을 중단하는 것(실시예 2)과, 발효 배양액 상의 상부공간에서 공기 대신 치환된 질소를 사용하는 것(실시예 3 및 4)을 포함하는 여러 탈기 방법을 사용하여 직접적으로 시험을 실시하였다. 비교실시예 1에서는 어떠한 탈기 방법도 실시되지 않았다.
가열 쇼크 시험으로부터 수득된 건조된 바이오매스를 TPC(총 플레이트의 계수)에 대해 분석하였다. TPC의 결과는 표준 조건하에서 파스퇴르화된 배양액 상에서 측정된 결과와는 벗어나지 않았다. 일단 탈기되고 파스퇴르화된 배양액을 사용 하여 아라키돈산(ARA)을 함유한 미생물/단세포 오일을 유리하였다. 아라키돈산 조질 오일을 회수하여 분석하였다. 배양액의 탈기 및 파스퇴르화 후의 회수 시스템은 염화 칼슘 첨가, 여과/세정 및 젖은 케이크를 형성하기 위한 압착을 포함하였다. 그 후, 젖은 케이크를 압출시켜 압출물을 형성하고, 건조시키고 결과의 건조된 바이오매스를 추출하였다.
배양액 약 1리터가 30 내지 35%의 오일을 갖는 약 45 내지 55g의 건조된 바이오매스를 함유하는 것으로 확인되었다.
하기의 실험실 규모의 회수 공정을 사용하였다. 유리 실험실 용기를 사용하고 염화 칼슘 플레이크 및 물을 사용하여 염화 칼슘의 부가를 실시하였다. CaCl2.2H2O의 25중량%의 염화 칼슘 용액을 사용하였다. 24g의 용액을 1리터의 파스퇴르화된 배양액에 첨가하고 잘 혼합하였다.
막 필터 프레스를 시뮬레이션하는 여과를 사용하였다. 세파 필티스(Sefar Fyltis) AM 25116 천을 갖는 1리터의 "세이쯔(Seitz)" 필터를 사용하였다. 1리터의 배양액을 0.5 내지 1bar의 질소에서 여과하였다. 다음, 감압하고 배양액 부피의 0.6배의 세정수를 첨가하였으며, 물의 첨가 동안 케이크가 흩뜨러지지 않았다. 그 후, 케이크를 0.5 내지 1bar에서 세정하고, 케이크를 약 1분동안 건풍시켰다.
다음, 판네비스(Pannevis) 천 재료를 사용하는 판네비스 실험실 규모의 여과 벨트 필터를 사용하여 진공 여과를 실시하였다. 약 400 내지 500ml의 배양액을 사용하고 0.45 bara(-0.55 bar 진공)의 압력으로 여과하였다. 다음, 배양액 부피의 0.6배의 세정수를 첨가하고, 케이크를 0.45 bara 압력에서 세정하였다. 다음, 케이크를 건조시까지 흡수시켰다.
다음, 더 이상의 물이 제거되지 않을 때까지 바이오매스를 플레이트 사이에서 압착시켰다. 이것은 올이 성긴 천(cheesecloth)을 사용하여 실시되었다.
다음, 미트그라인더(meatgrinder, Victoria) 압출기를 사용하여 압출을 실시하였다. 입구 온도가 50℃이고 유속이 "5"로 설정된 유동상 건조기를 사용하여 30분 동안 산출된 그래뉼을 건조시켰다. 건조체는 91 내지 96% 이었다.
다음, 추출을 실시하는데, 60분 동안 주변 온도에서 500ml의 헥산을 사용하여 100g의 건조된 바이오매스를 추출하였다. 헥산을 경사분리시키고, 케이크를 주변온도에서 30분동안 새로운 250ml의 헥산으로 세정하였다. 헥산을 경사분리시키고, 이미 추출된 헥산에 첨가하였다. 유리 필터를 사용하는 진공 여과에 의해 추출물을 세정하였다.
200 mbara에서 60 내지 70℃의 수욕 온도에서 5 내지 10분 동안 로터베이퍼(rotorvapor)에 대부분의 헥산을 통과시켜 증발을 실시하였다. 남아있는 헥산을 또한 100mbara 미만에서 10 내지 20분 동안 상기와 동일한 온도에서 증발시켰다. 산화를 최소로 하기 위해, 질소를 사용하여 시스템을 감압시켰다. 결과의 ARA-함유의 오일을 하기 표 1에서 기재한 바와 같이 POV 및 AnV에 대해 분석하였다.
Figure 112006046739975-PCT00001
표 1의 데이터로부터 볼 수 있는 바와 같이, 배양액에서 공기의 양이 감소함에 따라 POV 및/또는 AnV는 향상되었다. 이러한 결과를 토대로 하여, 탈기는 산화를 감소시키고, POV 및 AnV 값을 개선시킬 수 있는 것으로 생각된다. 별도의 탈기 장치를 사용하여 더 큰 부피로 추가의 시험을 실시하였다.
실시예 5 내지 14(별도의 탈기 장치)
500 mbara 이하의 작동 압력에서 "엄브렐라 노즐"을 사용하여 영구 탈기 시스템을 설치하였다. 낮은 전단 펌프(몬호 펌프)에 의해 발효 배양액을 발효조로부터 탈기 장치로 이동시켰다.
파라솔 탈기 장치를 모방한 APV의 탈기 시스템을 사용하여, 발효 후이지만 파스퇴르화 전의 탈기 시스템을 설치하였다. 0.5 bar의 이동 압력에서 이동된 배양액 및 탈기 장치를 발효조와 결합시켰다. 탈기 장치를 진공 펌프와 연결시켰다. 탈기 장치를 통과한 후, 파스퇴르화를 위해 이동시키기 전에 가열 쇼크 처리 장치(또는 APV)를 사용하여 바이오매스를 (몬호 펌프를 통해) 저장 탱크로 이송하였다. 몬호 펌프는 10m3/시간의 유속을 가졌으며, 탈기 장치의 내부 압력은 400 mbara이었다.
하기 표 2는 이러한 탈기 장치를 사용하여 실시된 시험의 결과를 보여준다. 미생물 오일의 유리 및 분석은 이미 기술된 바와 같다.
Figure 112006046739975-PCT00002

Claims (26)

  1. (a) 세포를 포함하는 수성 액체를 탈기시키는 단계; 및
    (b) 상기 세포로부터 오일 또는 고도불포화 지방산(PUFA)을 수득하는 단계를 포함하는,
    오일 또는 고도불포화 지방산(PUFA)의 제조 방법.
  2. 제 1 항에 있어서,
    세포가 미생물 세포인 방법.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    세포가 단계 (a)에서의 탈기 후이지만 단계 (b) 이전에 가열 또는 파스퇴르화되는 방법.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    수성 액체가 발효 배양액인 방법.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (c) 오일 또는 하나 이상의 PUFA를 추출, 정제 또는 유리하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
    탈기가,
    (a) 진공(또는 감압)의 적용;
    (b) 기계적인 탈기/탈기체화(원심분리기 또는 싸이클론에서와 같이, 교반, 진동, 가속력 또는 g-력 사용);
    (c) 점도 변화(물 또는 다른 액체를 사용하는 희석에 의해, 또는 온도 증가에 의해);
    (d) 발효 조건의 변화, 예를 들면 발효 동안의 공기상승력, 공기 스파징(sparging) 또는 산소 또는 공기의 공급 감소, 또는 교반 속도의 감소;
    (e) 예를 들면 pH를 낮추거나 산성화에 의한 pH의 변화;
    (f) 예를 들면 (불활성) 중합체(예, PTFE )를 바람직하게 포함하는 필터 또는 막의 사용에 의한 여과;
    (g) 질소 또는 희기체(예, 헬륨)와 같은 불활성 기체 또는 증기로의 기체 치환;
    (h) 예를 들면 산소 소거제(예, 소디움 설파이트 또는 하이드라진)를 사용하는 화학적 탈기;
    (i) 산소 또는 공기를 액체로부터 확산시키는 조건 하에 수성 액체를 방치시키는 시간 경과; 또는
    상기 (a) 내지 (i) 중 하나 이상의 조합을 포함하는 방법.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    탈기가 감소된 교반 및/또는 기체 치환에 의해 실시되는 방법.
  8. 제 7 항에 있어서,
    기체 치환이 대기 공기보다 낮은 농도로 산소를 포함하지 않거나 산소를 포함하는 기체를 사용하여 실시되는 방법.
  9. 제 7 항 또는 제 8 항에 있어서,
    기체가 질소이거나 또는 질소를 포함하는 방법.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
    탈기가, 수성 액체를 감압으로 처리하는 것을 포함하는 방법.
  11. 제 10 항에 있어서,
    감압이 800 mbara 이하, 바람직하게는 600 mbara 이하의 압력인 방법.
  12. 제 10 항 또는 제 11 항에 있어서,
    진공 또는 탈기체화 펌프, 파라솔 탈기 장치 또는 엄브렐라 노즐을 사용하여 수성 액체가 탈기되는 방법.
  13. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
    탈기는 20 ppm 미만, 바람직하게는 10 ppm 미만의 수성 액체 중의 O2 함량을 초래하는 방법.
  14. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
    탈기는 10 ppm 미만, 바람직하게는 5 ppm 미만, 더욱 바람직하게는 2ppm 미만의 용해된 산소의 농도를 초래하는 방법.
  15. 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서,
    탈기된 수성 액체를 (i) 1 bara 초과, 바람직하게는 1.5 bara 초과, 더욱 바람직하게는 2 bara 초과의 압력 및/또는 (ii) 60℃ 초과, 바람직하게는 80℃ 초과, 더욱 바람직하게는 100℃ 초과의 온도로 처리하는 것을 포함하는 방법.
  16. 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,
    세포가 80℃ 초과, 바람직하게는 90℃ 초과, 더욱 바람직하게는 100℃ 초과의 온도에서 가열 또는 파스퇴르화되는 방법.
  17. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서,
    PUFA 또는 오일이 C18, C20 또는 C22 Ω-3 또는 Ω-6 PUFA(선택적으로 ARA, EPA, DHA 및/또는 GLA)인 PUFA를 포함하는 방법.
  18. 제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,
    세포가 효모, 세균, 곰팡이 또는 조류 세포인 방법.
  19. 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,
    오일이 미생물 또는 단세포 오일인 방법.
  20. 제 1 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서,
    단계 (b)가 PUFA를 포함하는 오일을 세포로부터 수득하는 것을 포함하고, 상기 오일은 12 미만의 POV 및/또는 20 미만의 AnV를 갖는 방법.
  21. 제 1 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 따른 방법에 의해 수득된, PUFA를 포함하는 오일 또는 PUFA.
  22. 제 21 항에 있어서,
    오일이 미생물 또는 단세포 오일인 오일.
  23. (a) 미생물 세포를 배양 또는 발효시키기 위한 수단;
    (b) 미생물 세포를 포함하는 수성 액체를 탈기시키기 위한 수단; 및
    (c) 선택적으로, 미생물 세포로부터 오일 또는 PUFA를 수득하기 위한 수단을 포함하는,
    미생물 세포로부터 오일 또는 PUFA를 제조하기 위한 장치.
  24. 제 23 항에 있어서,
    수단 (a)는 발효조 용기를 포함하며, 수단 (b)는 탈기 장치(선택적으로, 감압을 적용할 수 있는)를 포함하고/포함하거나, 수단 (c)가 균질화기 또는 원심분리기를 포함하는 장치.
  25. 제 23 항 또는 제 24 항에 있어서,
    수단 (b)가 진공 또는 탈기체화 펌프, 파라솔 탈기 장치 또는 엄브렐라 노즐을 포함하는 장치.
  26. 제 1 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서,
    수단 (b)가 800 mbara 미만, 바람직하게는 600 mbara 미만의 압력을 적용할 수 있는 탈기 장치를 포함하는 장치.
KR1020067013087A 2003-12-30 2004-12-28 탈기 방법 KR101167331B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP03258249 2003-12-30
EP03258249.6 2003-12-30
PCT/EP2004/014884 WO2005063999A1 (en) 2003-12-30 2004-12-28 Deaeration process

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20060126524A true KR20060126524A (ko) 2006-12-07
KR101167331B1 KR101167331B1 (ko) 2012-07-19

Family

ID=34717265

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020067013087A KR101167331B1 (ko) 2003-12-30 2004-12-28 탈기 방법

Country Status (19)

Country Link
US (3) US20070148315A1 (ko)
EP (3) EP1706500B1 (ko)
JP (3) JP4839454B2 (ko)
KR (1) KR101167331B1 (ko)
CN (2) CN103357199B (ko)
AT (1) ATE480634T1 (ko)
BR (1) BRPI0418239B1 (ko)
CA (1) CA2551659C (ko)
DE (1) DE602004029090D1 (ko)
DK (2) DK1706500T3 (ko)
EA (1) EA009568B1 (ko)
ES (3) ES2563649T3 (ko)
HK (1) HK1150862A1 (ko)
IL (1) IL176417A (ko)
MX (1) MX2011004418A (ko)
PL (1) PL2251429T3 (ko)
TW (1) TWI349040B (ko)
WO (1) WO2005063999A1 (ko)
ZA (1) ZA200605347B (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012037535A2 (en) * 2010-09-19 2012-03-22 Kornacki Daniel C Method and apparatus for treating fermented liquids

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005529621A (ja) 2002-06-19 2005-10-06 デーエスエム イーペー アセッツ ベスローテン フェンノートシャップ 微生物細胞及び微生物油の低温殺菌方法
BRPI0418239B1 (pt) 2003-12-30 2013-10-01 processo de desaeraÇço
CN1965701B (zh) * 2006-11-27 2010-12-29 华南理工大学 低值鱼酶解制备调味基料及鱼油的方法
GB0807619D0 (en) 2008-04-28 2008-06-04 Whitton Peter A Production of bio fuels from plant tissue culture sources
US8207363B2 (en) * 2009-03-19 2012-06-26 Martek Biosciences Corporation Thraustochytrids, fatty acid compositions, and methods of making and uses thereof
US20100310743A1 (en) * 2009-06-04 2010-12-09 Dean Intellectual Property Services, Inc. Removing gas additives from raw milk
CN104974030A (zh) 2009-12-30 2015-10-14 巴斯夫制药（卡兰尼什）公司 用于纯化多不饱和脂肪酸的模拟移动床色谱分离方法
CA2787344C (en) 2010-01-19 2018-03-20 Dsm Ip Assets B.V. Eicosapentaenoic acid-producing microorganisms, fatty acid compositions, and methods of making and uses thereof
EP3617318A1 (en) 2010-06-01 2020-03-04 DSM IP Assets B.V. Extraction of lipid from cells and products therefrom
KR20130103489A (ko) * 2010-08-06 2013-09-23 호스피라 오스트레일리아 피티와이 리미티드 바이알 제조 방법 및 시스템
GB201111594D0 (en) 2011-07-06 2011-08-24 Equateq Ltd New improved process
GB201111601D0 (en) 2011-07-06 2011-08-24 Equateq Ltd New process
GB201111589D0 (en) 2011-07-06 2011-08-24 Equateq Ltd New modified process
GB201111591D0 (en) 2011-07-06 2011-08-24 Equateq Ltd Further new process
GB201111595D0 (en) 2011-07-06 2011-08-24 Equateq Ltd Improved process
CN108771240A (zh) 2011-07-21 2018-11-09 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 脂肪酸组合物
DK3050972T3 (da) * 2011-07-21 2021-02-08 Dsm Ip Assets Bv Fremgangsmåder til fremstilling af eicosapentaensyre i thraustochytrider
GB201300354D0 (en) 2013-01-09 2013-02-20 Basf Pharma Callanish Ltd Multi-step separation process
US9428711B2 (en) 2013-05-07 2016-08-30 Groupe Novasep Chromatographic process for the production of highly purified polyunsaturated fatty acids
US8802880B1 (en) 2013-05-07 2014-08-12 Group Novasep Chromatographic process for the production of highly purified polyunsaturated fatty acids
EP3118186B1 (fr) 2013-12-11 2022-02-09 Novasep Process Installation chromatographique de production d acides gras polyinsatures
JP2017504318A (ja) 2013-12-20 2017-02-09 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． 微生物細胞から微生物油を入手するための方法
US11124736B2 (en) 2013-12-20 2021-09-21 Dsm Ip Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
CN105960235B (zh) 2013-12-20 2021-01-08 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 用于从微生物细胞获得微生物油的方法
CA2934491C (en) 2013-12-20 2023-09-26 Dsm Ip Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
BR112016015718B1 (pt) 2014-01-07 2021-12-07 Novasep Process Solutions Processo de purificação de aminoácidos aromáticos
CN104857743B (zh) * 2014-02-21 2017-01-18 中国石油化工股份有限公司 一种聚合物溶液的密封除氧装置及方法
JP6967334B2 (ja) * 2015-12-21 2021-11-17 備前化成株式会社 高度不飽和脂肪酸のエステルを含む組成物
CN107661643A (zh) * 2016-07-28 2018-02-06 北京化工大学 一种液体脱氧的系统装置与应用
BR112019003361A2 (pt) 2016-08-19 2019-05-28 Noblegen Inc métodos e usos de frações de material orgânico dissolvido para ligação a íons metálicos
EP3606663A4 (en) 2017-04-07 2021-01-27 Noblegen Inc. PROCESSES AND USES OF ENCAPSULATED EXUDATES AND EUGLENA BIOMASS
CN114423504A (zh) * 2019-07-12 2022-04-29 巴克曼实验室国际公司 优化发酵过程的系统和方法
CN110478949A (zh) * 2019-09-06 2019-11-22 安徽赛福电子有限公司 一种消除电容器填充环氧树脂气泡的装置
CN111203955B (zh) * 2020-01-16 2021-12-28 河北工业大学 多级泵送除气系统及应用其的建筑3d打印系统
WO2023175141A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Purac Biochem B.V. Method for reducing fermentation broth viscosity

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3082228A (en) 1959-12-18 1963-03-19 Escambia Chem Corp Method for producing monoesters of polyunsaturated fatty acids
EP0089128B1 (en) * 1982-03-12 1986-05-07 Imperial Chemical Industries Plc Process for displacing dissolved gas from water
JPS59230849A (ja) 1983-06-14 1984-12-25 Toyoda Gosei Co Ltd ステアリングホイ−ルの衝撃エネルギ−吸収構造体
GB8324236D0 (en) 1983-09-09 1983-10-12 Shell Int Research Biopolymer formulations
US4574117A (en) * 1984-06-06 1986-03-04 Genex Corporation Stabilization of phenylalanine ammonia-lyase in a bioreactor using reducing agents
US4789554A (en) * 1985-12-05 1988-12-06 The Procter & Gamble Company High temperature vacuum steam distillation process to purify and increase the frylife of edible oils
US4970167A (en) * 1988-04-14 1990-11-13 Phillips Petroleum Company Fermentation broth degassification apparatus
GB2218984B (en) 1988-05-27 1992-09-23 Renafield Limited Process for preparing high-concentration mixtures of polyunsaturated fatty acids & their esters and their prophylactic or therapeutic uses
JPH0334802U (ko) * 1989-08-07 1991-04-05
US5658767A (en) * 1991-01-24 1997-08-19 Martek Corporation Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
CA2627832C (en) * 1996-03-28 2012-12-11 Dsm Ip Assets B.V. Preparation of microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass
US5695545A (en) * 1996-05-10 1997-12-09 Hoechst Celanese Corporation Degassing liquids: apparatus and method
CA2273570A1 (en) 1999-05-31 2000-11-30 Jfs Envirohealth Ltd. Concentration and purification of polyunsaturated fatty acid esters by distillation-enzymatic transesterification coupling
CA2311974A1 (en) 1999-06-28 2000-12-28 Nisshin Flour Milling Co., Ltd. Processes of selectively separating and purifying eicosapentaenoic and docosahexaenoic acids or their esters
WO2001051598A1 (en) 2000-01-11 2001-07-19 Monsanto Technology Llc Process for making an enriched mixture of polyunsaturated fatty acid esters
DE60130737T3 (de) * 2000-01-28 2016-01-14 Dsm Ip Assets B.V. Verstärkte Produktion von Lipiden enthaltend mehrfachungesättigte Fettsäuren durch hochdichte Kulturen von eukariotischen Mikroben in Gärvorrichtungen
CA2484334C (en) * 2002-05-03 2013-01-22 Martek Biosciences Corporation High-quality lipids and methods for producing by enzymatic liberation from biomass
BRPI0418239B1 (pt) * 2003-12-30 2013-10-01 processo de desaeraÇço
DE102005003624A1 (de) 2005-01-26 2006-07-27 Nutrinova Nutrition Specialties & Food Ingredients Gmbh Herstellung und Anwendung eines antioxidativ wirksamen Extraktes aus Crypthecodinium sp.

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012037535A2 (en) * 2010-09-19 2012-03-22 Kornacki Daniel C Method and apparatus for treating fermented liquids
WO2012037535A3 (en) * 2010-09-19 2012-07-12 Kornacki Daniel C Method and apparatus for treating fermented liquids

Also Published As

Publication number Publication date
EP2251430B1 (en) 2015-11-25
IL176417A (en) 2010-12-30
DK1706500T3 (da) 2010-12-13
EA009568B1 (ru) 2008-02-28
ATE480634T1 (de) 2010-09-15
JP4839454B2 (ja) 2011-12-21
MX2011004418A (es) 2012-01-27
JP2007520213A (ja) 2007-07-26
TWI349040B (en) 2011-09-21
BRPI0418239A (pt) 2007-04-17
JP5496920B2 (ja) 2014-05-21
BRPI0418239B1 (pt) 2013-10-01
US20070148315A1 (en) 2007-06-28
EP2251430A1 (en) 2010-11-17
CN103357199B (zh) 2019-02-01
WO2005063999A1 (en) 2005-07-14
US20120095246A1 (en) 2012-04-19
CA2551659C (en) 2015-02-17
ZA200605347B (en) 2007-04-25
TW200535243A (en) 2005-11-01
ES2624952T3 (es) 2017-07-18
DE602004029090D1 (de) 2010-10-21
JP2011097952A (ja) 2011-05-19
CN103357199A (zh) 2013-10-23
CA2551659A1 (en) 2005-07-14
US10041097B2 (en) 2018-08-07
EP1706500A1 (en) 2006-10-04
ES2563649T3 (es) 2016-03-15
EP1706500B1 (en) 2010-09-08
PL2251429T3 (pl) 2017-08-31
US20100331561A1 (en) 2010-12-30
KR101167331B1 (ko) 2012-07-19
IL176417A0 (en) 2006-10-05
CN1902320A (zh) 2007-01-24
ES2351697T3 (es) 2011-02-09
EP2251429A1 (en) 2010-11-17
DK2251430T3 (en) 2016-02-22
EP2251429B1 (en) 2017-03-01
JP2014087357A (ja) 2014-05-15
HK1150862A1 (zh) 2012-01-13
EA200601261A1 (ru) 2006-12-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101167331B1 (ko) 탈기 방법
CN101837135B (zh) 用于微生物细胞和微生物油的巴氏消毒方法
KR101208304B1 (ko) 다가불포화 지방산을 함유하는 미생물 오일의 제조방법
MXPA06007448A (en) Deaeration process
KR20140146156A (ko) 다가불포화 지방산을 함유하는 미생물 오일의 제조방법

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20150618

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20160616

Year of fee payment: 5

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20170616

Year of fee payment: 6

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20190617

Year of fee payment: 8