EA009568B1 - Способ деаэрации - Google Patents
Способ деаэрации Download PDFInfo
- Publication number
- EA009568B1 EA009568B1 EA200601261A EA200601261A EA009568B1 EA 009568 B1 EA009568 B1 EA 009568B1 EA 200601261 A EA200601261 A EA 200601261A EA 200601261 A EA200601261 A EA 200601261A EA 009568 B1 EA009568 B1 EA 009568B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- oil
- deaeration
- riga
- cells
- aqueous medium
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 80
- 230000008569 process Effects 0.000 title abstract description 28
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 47
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 47
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 44
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims abstract description 44
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 44
- 239000007789 gas Substances 0.000 claims abstract description 41
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 36
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 26
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims abstract description 21
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 18
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 18
- 238000007872 degassing Methods 0.000 claims abstract description 13
- 235000020777 polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 7
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000001307 helium Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract 4
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 66
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 47
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 claims description 39
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 17
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 15
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 13
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 4
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 claims description 3
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 claims description 3
- 229910052756 noble gas Inorganic materials 0.000 claims description 3
- BHAAPTBBJKJZER-UHFFFAOYSA-N p-anisidine Chemical compound COC1=CC=C(N)C=C1 BHAAPTBBJKJZER-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 claims description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 claims description 2
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 claims description 2
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 claims 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 abstract description 3
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 abstract description 2
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 abstract description 2
- 229940123973 Oxygen scavenger Drugs 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 64
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 49
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 27
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 20
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 9
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 8
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 8
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 6
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 6
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- -1 alkylene halide Chemical class 0.000 description 5
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 5
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 5
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 5
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol group Chemical group OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 5
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 239000004484 Briquette Substances 0.000 description 3
- 241000199914 Dinophyceae Species 0.000 description 3
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 3
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 3
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 3
- 235000008452 baby food Nutrition 0.000 description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000010779 crude oil Substances 0.000 description 3
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 3
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000010408 film Substances 0.000 description 3
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 3
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 2
- 101000606535 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase epsilon Proteins 0.000 description 2
- 102100039665 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase epsilon Human genes 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N all-cis-5,8,11,14,17-icosapentaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N 0.000 description 2
- MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N all-cis-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCC(O)=O MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N 0.000 description 2
- DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N alpha-linolenic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N 0.000 description 2
- 235000020661 alpha-linolenic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 235000020673 eicosapentaenoic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960005135 eicosapentaenoic acid Drugs 0.000 description 2
- JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N eicosapentaenoic acid Natural products CCC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 2
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 2
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 2
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 2
- 229960004488 linolenic acid Drugs 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 2
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 description 2
- ADHNUPOJJCKWRT-JLXBFWJWSA-N (2e,4e)-octadeca-2,4-dienoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCC\C=C\C=C\C(O)=O ADHNUPOJJCKWRT-JLXBFWJWSA-N 0.000 description 1
- JBYXPOFIGCOSSB-GOJKSUSPSA-N 9-cis,11-trans-octadecadienoic acid Chemical compound CCCCCC\C=C\C=C/CCCCCCCC(O)=O JBYXPOFIGCOSSB-GOJKSUSPSA-N 0.000 description 1
- 241000881711 Acipenser sturio Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 1
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 1
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N Sulfurous acid Chemical compound OS(O)=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910001615 alkaline earth metal halide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000006727 cell loss Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 238000005056 compaction Methods 0.000 description 1
- 229940108924 conjugated linoleic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 239000013530 defoamer Substances 0.000 description 1
- 238000004332 deodorization Methods 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 235000020669 docosahexaenoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940090949 docosahexaenoic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 150000002066 eicosanoids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 description 1
- VZCCETWTMQHEPK-UHFFFAOYSA-N gamma-Linolensaeure Natural products CCCCCC=CCC=CCC=CCCCCC(O)=O VZCCETWTMQHEPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZCCETWTMQHEPK-QNEBEIHSSA-N gamma-linolenic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC(O)=O VZCCETWTMQHEPK-QNEBEIHSSA-N 0.000 description 1
- 235000020664 gamma-linolenic acid Nutrition 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002733 gamolenic acid Drugs 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M hexadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 1
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 1
- KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N linolenic acid Natural products CC=CCCC=CCC=CCCCCCCCC(O)=O KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 235000020978 long-chain polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000007472 neurodevelopment Effects 0.000 description 1
- 239000012454 non-polar solvent Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000015205 orange juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 description 1
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 230000029219 regulation of pH Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 description 1
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 description 1
- 230000007958 sleep Effects 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 150000003595 thromboxanes Chemical class 0.000 description 1
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 1
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 1
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N tributyl phosphate Chemical compound CCCCOP(=O)(OCCCC)OCCCC STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002966 varnish Substances 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
- C12P7/6445—Glycerides
- C12P7/6472—Glycerides containing polyunsaturated fatty acid [PUFA] residues, i.e. having two or more double bonds in their backbone
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
- C11B1/00—Production of fats or fatty oils from raw materials
- C11B1/10—Production of fats or fatty oils from raw materials by extracting
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
- C12P7/6432—Eicosapentaenoic acids [EPA]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
- C12P7/6445—Glycerides
- C12P7/6463—Glycerides obtained from glyceride producing microorganisms, e.g. single cell oil
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Fats And Perfumes (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Glass Compositions (AREA)
- Heating, Cooling, Or Curing Plastics Or The Like In General (AREA)
- Extrusion Moulding Of Plastics Or The Like (AREA)
- Reverberation, Karaoke And Other Acoustics (AREA)
- Photoreceptors In Electrophotography (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Two-Way Televisions, Distribution Of Moving Picture Or The Like (AREA)
- Percussion Or Vibration Massage (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Liquid Crystal Substances (AREA)
- Edible Oils And Fats (AREA)
- Developing Agents For Electrophotography (AREA)
- Lubricants (AREA)
- Diaphragms For Electromechanical Transducers (AREA)
Abstract
Рассмотрен способ получения масла или жирной полиненасыщенной кислоты (PUFA), в котором водную среду, содержащую клетки, подвергают деаэрации и из клеток получают масло или PUFA. Деаэрацию можно проводить различными техническими приемами, включающими приложение вакуума (или пониженного давления), механическую деаэрацию или дегазацию при пониженном перемешивании или воздействии на среду центробежных сил, понижение вязкости (в результате разбавления или нагревания), уменьшение подачи кислорода или воздуха в ходе ферментации или уменьшение скорости перемешивания, понижение рН (с целью уменьшения растворимости СО), фильтрацию с использованием PTFE капилляров, замену газовой фазы (в результате барботажа азота или гелия) или химическую деаэрацию (с использованием акцепторов кислорода).
Description
Изобретение относится к способу получения масла или полиненасыщенной жирной кислоты (РИГА). Способ предусматривает деаэрацию водной среды, содержащей клетки, из которых получают масло или РИГА. После деаэрации клетки могут быть подвергнуты пастеризации. Далее, масло или РИГА могут быть экстрагированы, очищены или выделены из клеток.
Полиненасыщенные жирные кислоты, или РИГА, имеют природное происхождение, и разнообразные кислоты РИГА продуцируются различными одноклеточными микроорганизмами (водоросли, грибы и т.п.). Одной из особенно важных РИГА является арахидоновая кислота (АКА), являющаяся примером длинноцепочечных полиненасыщенных жирных кислот (кислоты ЬС-РИГА). В соответствии с химической номенклатурой арахидоновая кислота представляет собой цис-5,8,11,14 эйкозатетраеновую кислоту (20:4) и принадлежит к (п-6) семейству ЬС-РИГАк.
Арахидоновая кислота является главным предшественником различных биологически активных соединений, известных как эйкозаноиды, включающих простагландины, тромбоксаны и лейкотриены. Кроме этого, предполагается, что арахидоновая кислота, как один из компонентов липидной фракции материнского молока, необходима для обеспечения оптимального неврологического развития детей. Арахидоновая кислота находит разнообразное и широкое применение, включающее использование в детском питании, пищевых продуктах и корме животных.
\УО-А-97/37032 относится к получению микробного РИГА-содержащего масла из пастеризованной биомассы. Однако в этом документе не содержится информации, касающейся деаэрации перед пастеризацией.
В заявке \УО-А-04/001021. опубликованной 31 декабря 2003 г., приводится более детальное описание условий пастеризации.
Известны способы, предусматривающие нагревание биомассы или микробных клеток. В \УО-А-97/37032 указывается, что микробные клетки могут быть подвергнуты пастеризации перед экстракцией из них РИГА в виде масла. Однако авторы настоящего изобретения обнаружили, что использование процесса деаэрации может улучшить качество масла, экстрагируемого из клеток. В частности, полученное масло в меньшей степени подвержено окислению, может иметь более низкое пероксидное число (РОУ) и/или более низкое анизидиновое число (АпУ).
Раскрытие сущности изобретения
Настоящее изобретение предусматривает усовершенствованный способ получения масла или полиненасыщенной жирной кислоты (РИГА). Такое усовершенствование заключается в проведении деаэрации, предпочтительно перед пастеризацией.
В связи с этим первый аспект изобретения относится к способу получения масла или полиненасыщенной жирной кислоты (РИГА), включающему:
a) деаэрацию водной среды, содержащей клетки;
b) получение из клеток масла или РИГА.
Предпочтительная водная среда представляет собой бульон или культуральную среду, такую как ферментационный бульон или жидкая ферментационная среда. Такая среда может представлять собой жидкость, удаляемую в ходе ферментации, хотя предпочтительно она представляет собой бульон, образовавшийся в конце ферментации. Предпочтительные клетки представляют собой микробные клетки. Микробные клетки могут находиться в живом состоянии до, в ходе и/или после деаэрации.
Предпочтительная деаэрация водной среды приводит к удалению воздуха, например увлеченного, захваченного, нерастворенного и/или растворенного воздуха. Поэтому такой процесс может представлять собой или включать эффективную дегазацию. С помощью такого процесса может удаляться газ (например, воздушные пузырьки). Предпочтительно, чтобы с помощью такого процесса удалялся кислород, например, растворенный кислород (в захваченной форме или в виде пузырьков). В этом контексте термин «растворенный» относится к такому газу, как воздух или кислород, присутствующему или растворенному в водной среде (а не к любому газу внутри клеток).
Кроме этого, процесс деаэрации может обеспечивать удаление из жидкой среды других газов, например диоксида углерода.
Поскольку в результате деаэрации удаляется по меньшей мере часть растворенного и/или некоторая часть нерастворенного кислорода, такой процесс может приводить к понижению степени окисления. Это означает, что может быть получено менее окисленная РИГА и/или масло, что повышает качество продукта.
Из этого не следует, что удаление кислорода полезно, поскольку для жизнеобеспечения и роста микробных клеток требуется кислород. Во многих ферментационных процессах, включая предпочтительные способы согласно изобретению, воздух подается к микробным клеткам, например, доставляется в водную среду или культуральную жидкость (например, в результате барботажа). Процесс деления и роста клеток сопровождается биосинтезом одной или более РИГА. Идея о том, что в результате прекращения подачи кислорода или воздуха в ходе процесса ферментации произойдет деаэрация, возможно, предполагает полезную стратегию, поскольку такая операция может приводить к гибели клеток или потере способности продуцирования РИГАк и других ценных соединений.
- 1 009568
Деаэрация является известным процессом, который применяется для обработки пищевых продуктов, таких как молоко, апельсиновый сок, и в производстве бумаги. Однако следует отдавать отчет в том, что такие процессы отличаются от ферментации микробных организмов, в особенности в том, что касается продуцирования соединения, подлежащего экстракции, а также систем, в которых не используются живые клетки. В некоторых известных способах деаэрацию проводят для уменьшения бактериального роста, тогда как согласно изобретению рост и выживание микробных клеток (включая клетки бактерий) с целью продуцирования РИРЛ является важным элементом процесса ферментации, нуждающимся в кислороде.
Существует ряд способов проведения деаэрации, включающих следующие методы, предусматривающие:
a) приложение вакуума (или пониженного давления);
b) механическую деаэрацию/дегазирование (перемешивание, вибрация, использование силы ускорения, например, при применении центрифуги или циклона);
c) изменение вязкости (в результате разбавления водой или другими жидкостями либо изменения температуры);
6) изменение условий ферментации, например уменьшение скорости подачи воздуха, скорости барботажа или введение кислорода или воздуха в ферментационную систему либо уменьшение скорости перемешивания;
е) изменение рН, например уменьшение рН или подкисление (например, с использованием диоксида углерода, который при растворении в жидкости образует угольную кислоту);
Г) фильтрацию, например, с использованием фильтра, капилляров полимерной (предпочтительной инертной) мембраны, например, из РТРЕ;
д) замену газовой фазы на такой инертный газ, как азот, или на такой благородный газ, как гелий;
11) химическую деаэрацию, например, с использованием акцептора кислорода, такого как сульфит натрия или гидразин;
ί) регулирование длительности процесса, например обеспечение стационарного состояния жидкой фазы, или обеспечение диффузии такого газа, как кислород или воздух из жидкой фазы; и/или
_)) комбинацию из одного или более указанных выше процессов.
Далее каждый из указанных выше способов деаэрации обсуждается более подробно.
1. Использование вакуума (или пониженного давления).
Поверхность водной среды может подвергаться воздействию вакуума. Однако действительный вакуум не всегда необходим, так как предпочтительный способ предусматривает понижение давления над поверхностью водной среды, например, находящейся в сосуде, например в ферментере. Предпочтительно, чтобы давление над поверхностью водной среды было меньше атмосферного или комнатного давления или, по меньшей мере, было ниже давления внутри ферментера (или давления в ходе ферментации). Таким образом, следует использовать пониженное давление в начале деаэрации, например, сразу после завершения ферментации.
Вакуум или пониженное давление могут применяться в отдельном сосуде, отличном от того, в котором проводят ферментацию (например, ферментера). Жидкость может перемещаться в вакуумную станцию или отдельный контейнер, в котором создан вакуум. В этом контексте при обсуждении термина «вакуум», как одного из методов деаэрации, следует иметь в виду, что такая операция предусматривает приложение вакуума к водной среде. В этом смысле совершенно не обязательно создавать полный вакуум.
Предпочтительное давление (в ходе вакуумной деаэрации) не превышает 800, предпочтительно 600, оптимально 400 мбар (в расчете на давление в абсолютных миллибарах). В некоторых случаях при использовании надлежащего оборудования предпочтительное давление не превышает 200 или 100 мбар. Предпочтительное пониженное давление составляет 50-600 мбар, например 100-500 мбар, оптимально 200-450 мбар.
Согласно предпочтительному варианту осуществления изобретения водная среда, например, после ферментации перемещается в сосуд с пониженным давлением, другими словами, давлением ниже, чем в ферментере (или другом сосуде, из которого перемещается жидкая среда). Перемещение водной среды из двух указанных сосудов (например, из ферментера в сосуд с пониженным давлением) может обеспечиваться перепадом давления. Таким образом, давление, обеспечивающее перемещение, может представлять собой давление, которому подвергается жидкость в ходе перемещения из одного сосуда в другой. Такое давление не превышает 0,7, например 0,6, предпочтительно 0,5 бар. Давление, при котором происходит перемещение, может составлять 0,7-0,3 бар, например 0,6-0,4 бар.
Сосуд, работающий при пониженном давлении, может быть обеспечен средствами повышения площади поверхности водной среды, способствующими деаэрации. В результате их применения водная среда может принимать форму пленки, например тонкой пленки. Форсированное превращение водной среды в пленку (например, тонкую пленку) может осуществляться с помощью механического устройства, например форсунки в виде зонтообразного сопла или парасольного деаэратора. В результате водная среда может принудительно подаваться на криволинейную поверхность в условиях пониженного давления. Увеличения площади поверхности водной среды, например, при образовании пленки или аэрозоля
- 2 009568 способствует деаэрации и может обеспечивать более эффективную дегазацию. Уровень водной среды внутри сосуда, работающего при пониженном давлении (снабженного форсункой или имеющего искривленную поверхность, на которую подается водная среда), может составлять 0,1-0,2 от полного заполнения. После этого деаэрированная водная среда может подаваться на стадию пастеризации или в нагревательный сосуд.
2. Механическая деаэрация.
В ходе процесса ферментации в водную среду (культуральную или ферментационную среду) вводят кислород или (как правило) воздух. Эта операция способствует росту и делению микробных клеток и биосинтезу РИРЛ.
В ходе ферментации водная среда может перемешиваться. В целях деаэрации степень перемешивания (или скорость перемешивания) может уменьшаться, замедляться или перемешивание может прекращаться. При перемешивании с низкой скоростью понижается вероятность кавитации вблизи или непосредственно на перемешивающей лопасти или движущихся поверхностях, а также вероятность образования воздушных пузырьков (в водной среде).
Прекращение перемешивания или уменьшение скорости перемешивания может приводить к сливанию пузырьков и их поднятию на поверхность водной среды. В ходе пониженного перемешивания скорость перемешивания может уменьшаться не более чем на половину, треть или даже четверть от значения скорости в ходе ферментации. Так, например, если скорость перемешивания составляет 80 об/мин, то режим пониженного перемешивания, обеспечивающий деаэрацию, может предусматривать перемешивание со скоростью не более 40 об/мин.
Механическая деаэрация может предусматривать уменьшение подачи воздуха или кислорода в водную среду (например, в ферментационный бульон с помощью аэрации). Введение воздуха или кислорода может замедляться или совсем прекращаться. В режиме деаэрации скорость подачи воздуха (или кислорода) может быть уменьшена не более чем на половину, треть или даже четверть (относительно скорости в режиме ферментации). Аэрация жидкости может быть остановлена или прекращена до завершения ферментации (например, за 5, 2 или 1 ч).
В ходе ферментации в водную среду, находящуюся в ферментационном сосуде (или ферментере), часто подают воздух (или кислород). Газ барботируют через водную среду часто с помощью барботера. Режим деаэрации может предусматривать уменьшение скорости подачи воздуха или кислорода с помощью барботера.
Кроме этого, деаэрация может достигаться в результате вибрации в том случае, когда водную среду пропускают через (статический) вибрационный сосуд, например через трубку.
Водную среду можно деаэрировать с использованием вакуумного насоса. Водная среда может быть подвергнута действию силы ускорения, например, в циклоне. В этом случае жидкость подвергается действию центробежной силы, которая может способствовать деаэрации. В циклоне может осуществляться быстрое вращение водной среды и воздействие на нее центробежной силы, в результате чего газы, выходящие из жидкости, поднимаются вверх и отводятся сверху циклона, тогда как деаэрированная жидкость перемещается в противоположном направлении (например, вниз).
Для деаэрации водной среды может использоваться механический вакуумный деаэратор. Он может представлять собой насос, работающий при вакууме (или пониженном давлении). Модифицированные (например, центробежные) насосы, способные создавать пониженное давление или вакуум, производятся промышленностью. Предпочтительный вакуумный насос имеет вращающуюся камеру, в которой пузырьки газа могут удаляться из водной среды, например, под воздействием центробежной силы.
Альтернативные типы такого оборудования включают дегазационные насосы. С помощью подобных устройств может осуществляться дегазация жидкостей, в которых растворен газ.
Такой насос может быть сблокирован с вакуумным насосом. Устройство способно производить дегазацию без каких-либо химических добавок. Такие системы могут осуществлять дегазацию до остаточного содержания газа порядка 0,5 м.д. С помощью устройств такого типа может обеспечиваться объемная скорость порядка 25 л/мин или менее. Походящие дегазационные насосы могут быть приобретены у Уоко1а МапиГасШгшд Сотрапу, 1арап.
3. Регулирование вязкости.
Уменьшение вязкости может быть достигнуто нагреванием водной среды. Такое нагревание также может приводить к деаэрации.
Понижение вязкости способствует более эффективному движению газов к поверхности водной среды. Таким образом, уменьшение вязкости способствуют процессу деаэрации. Такая операция может проводиться добавлением другой жидкости (уже деаэрированной или имеющей более низкое содержание воздуха/кислорода, чем водная среда), например воды, и в результате подобный процесс предусматривает разбавление. Водная среда часто бывает достаточно вязкой из-за присутствия клеток и источников азота и/или углерода, ассимилируемых клетками.
Другой способ понижения вязкости предусматривает нагревание водной среды. В результате повышения температуры понижается растворимость кислорода в жидкости.
- 3 009568
4. Регулирование рН.
Водная среда может быть подкислена. В результате этого может быть уменьшена растворимость воздуха/кислорода в жидкости.
На практике водная среда содержит живые клетки, которые синтезируют ценные соединения. Клетки «дышат» в том смысле, что они потребляют кислород и выделяют диоксид углерода. Углекислый газ может растворяться в водной среде, что приводит к образованию угольной кислоты. Понижение рН приводит к образованию подкисленной водной среды и уменьшению растворимости диоксида углерода (или кислорода).
5. Фильтрация.
Водная жидкость может пропускаться через фильтр или мембрану, способные удалять мелкие пузырьки, например, воздуха. Этот процесс может осуществляться в относительно мелком масштабе. Предпочтительный фильтр или мембрана содержат инертный материал, такой как полимер. Такой полимерный материал может представлять собой галоидный алкилен, например РТРЕ.
Водная жидкость может пропускаться через (мелкую или относительно тонкую) трубку или капилляр. Эти устройства могут содержать (например, на стенках) или быть покрыты таким полимером, как РТРЕ. Трубка может иметь отверстия или щели, через которые проходят растворенные газы или пузырьки. Водная среда может пропускаться через подобные трубки или капилляры под давлением.
6. Замена газа.
Эта операция предусматривает вытеснение или замену кислорода или воздуха (как в растворенном, так и в ином состоянии), содержащегося в водной среде. Воздух или кислород могут быть заменены большим числом различных газов при условии, что растворенный кислород вытесняется из раствора и может покидать водную среду. Для этой цели предпочтительно использовать инертный газ, такой как азот, или благородный газ, например гелий. Газ может подаваться на поверхность водной среды (например, в свободное пространство ферментера). Так, например, газ может вводиться в свободное пространство над жидкостью, находящейся в таком сосуде, как ферментер. С другой стороны газ может вводиться в водную среду путем барботажа или с использованием разбрызгивателя. Предпочтительно использовать азот, хотя также может применяться газ, содержащий азот (но с уменьшенным содержанием кислорода, составляющим, например, менее 20, менее 10 или 15%, т.е. меньшим, чем в атмосферном воздухе).
Предпочтительная технология заключается в уменьшении или прекращении подачи воздуха (или кислорода) в водную среду до завершения ферментации. Так, подача воздуха, например, через разбрызгиватель может быть прекращена по меньшей мере за 1 или 2 ч до завершения ферментации. Вместо воздуха может подаваться газ, отличный от воздуха или кислорода, например газ с пониженным содержанием кислорода, такой как азот. Таким образом, предпочтительно, чтобы за 1 или 2 ч до завершения ферментации в водную среду подавался азот. В результате такой операции над поверхностью водной среды создается инертная атмосфера или атмосфера с пониженным содержанием кислорода (например, обогащенная азотом), т.е. атмосфера с более высоким содержанием азота, чем в атмосферном воздухе. Парциальное давление азота над водной средой может составлять 0,4-0,8 бар, например 0,6 бар.
7. Химическая деаэрация.
Цель может быть достигнута использованием вещества или химической добавки, способной эффективно реагировать с воздухом или, что более важно, с кислородом воздуха. Таким веществом может служить акцептор кислорода. Вещество такого типа может приводиться в контакт с водной средой. Химические агенты могут добавляться в водную среду, находящуюся в таком сосуде, как ферментер. Вещества, реагирующие с кислородом, включающие его акцепторы, хорошо известны в данной области и они включают сульфит щелочного металла (например, натрия) и соединения, содержащие гидразин. В том случае, когда РИГА или масло используются в пищевых продуктах, могут применяться другие (не химические) способы деаэрации.
8. Продолжительность.
В стационарном состоянии водная среда медленно выделяет такие растворенные газы, как кислород и воздух. Растворенные газы могут диффундировать из водной среды. В результате газы постепенно выделяются из раствора.
Измерение содержания воздуха/кислорода.
Такая операция может осуществляться хорошо известными методами. Для этого может использоваться ЕСТ (анализатор увлеченного газа). Количество воздуха в водной среде (особенно в микробной суспензии) может быть измерено неавтономными методами.
Количество увлеченного газа (газовых пузырьков) может быть измерено сжатием образца в измерительной ячейке. Объемную долю увлеченного газа рассчитывают по закону Бойля (ру=еои81).
Количество способного к выделению растворенного газа может быть измерено по увеличению объема образца. Этот процесс стимулирует резкое падение давления. В результате снижения давления в измерительной ячейке растворимость газов уменьшается, и они выделяются из среды. Это приводит к увеличению объема суспензии. Такая операция может быть полностью автоматизирована и/или может предусматривать использование ои-1ше газового анализатора, расположенного в соответствующем месте, предпочтительно после блока деаэрации.
- 4 009568
В результате деаэрации содержание О2 (в водной среде) составляет менее 20 или 15 м.д., например 2-5 или 15-20 м.д. Предпочтительная концентрация растворенного кислорода предпочтительно составляет менее 10, например менее 5, оптимально менее 2 м.д.
Деаэрацию проводят таким образом, чтобы концентрация (растворенного) кислорода составляла менее 0,03 см3/л (44 ч./млрд.), предпочтительно менее 0,005 см3/л (7 ч./млрд.).
Деаэрированная водная среда (полученная деаэрацией водной среды, содержащей клетки согласно изобретению) может подвергаться воздействию повышенного давления и/или повышенной температуры. Повышенное давление и/или повышенная температура могут использоваться при нагревании и/или пастеризации клеток.
Согласно предпочтительному варианту осуществления, способ согласно изобретению предусматривает воздействие на деаэрированную водную среду давления по меньшей мере 1 бар, предпочтительно по меньшей мере 1,5 бар, более предпочтительно по меньшей мере 2 бар и наиболее предпочтительно по меньшей мере 5 бар. Давление не ограничивается конкретным значением. Так, например, деаэрированная жидкость может подвергаться воздействию давления менее 40 бар, например менее 20 бар.
Предпочтительный способ осуществления изобретения включает воздействие на деаэрированную водную среду температуры по меньшей мере 60°С, предпочтительно по меньшей мере 80°С, более предпочтительно по меньшей мере 90°С, еще более предпочтительно по меньшей мере 100°С и наиболее предпочтительно по меньшей мере 110°С. Используемая температура не ограничивается конкретным значением. Так, например, деаэрированная водная среда может подвергаться воздействию температуры ниже 150°С.
Предпочтительно, чтобы деаэрированная водная среда после воздействия повышенной температуры и/или повышенного давления имела предпочтительное содержание О2 и/или содержала предпочтительное количество растворенного кислорода.
Процесс пастеризации.
Обычно пастеризацию проводят после деаэрации и/или после завершения ферментации. Согласно предпочтительному варианту осуществления, пастеризацию проводят после завершения ферментации, поскольку тепло, выделяющееся в ходе пастеризации, приводит к гибели клеток. Обычно осуществляют пастеризацию ферментационного бульона (или клеток в водной среде), хотя может проводиться пастеризация микробной биомассы, полученной в бульоне. В первом случае может проводиться пастеризация микробных клеток, все еще присутствующих в ферментере. Предпочтительно проводить пастеризацию до следующей обработки микробных клеток, например их грануляции (например, в результате экструзии), разрушения или перемешивания.
Сразу после завершения ферментации ферментационный бульон может быть отфильтрован или обработан каким-либо иным способом с целью удаления воды или водной среды. После удаления воды может быть получены «брикет» из биомассы. Если пастеризация не проводилась, то обезвоженные клетки (или брикет из биомассы) могут быть подвергнуты пастеризации.
Пастеризацию проводят непосредственным или косвенным нагреванием клеток. При непосредственном нагревании в ферментер может подаваться пар. Косвенный способ включает использование среды, пропускаемой через теплообменник или через стенку ферментера, или использование нагревательных змеевиков, а также внешних теплообменных средств, таких как пластинчатый теплообменник.
Пастеризацию обычно проводят в ферментере, в котором проводилась ферментация. Однако в случае некоторых микроорганизмов (таких, как бактерии) часто предпочитают вначале удалять клетки из сосуда и затем проводить пастеризацию. Пастеризация может осуществляться перед другими методами обработки микроорганизмов, например, таких как сушка или грануляция.
Обычно пастеризация приводит к гибели большинства, если не всех микроорганизмов. После пастеризации может быть уничтожено по меньшей мере 95, 96 или даже 98% микроорганизмов.
Нагревание или пастеризация клеток может осуществляться при любой подходящей температуре, предпочтительно при температуре по меньшей мере 60°С, более предпочтительно по меньшей мере 80°С, предпочтительно по меньшей мере 90°С, предпочтительно по меньшей мере 100°С, предпочтительно по меньшей мере 110°С. Верхний температурный предел не имеет конкретных ограничений. Так, например, пастеризацию можно проводить при температуре ниже 150°С. Предпочтительные способы пастеризации описаны в №О 97/37032 и №0 А-04/001021.
Экстракция РИГА.
Изобретение может предусматривать экстракцию и/или выделение РИГА из пастеризованных клеток. Эту операцию предпочтительно проводить после деаэрации и (возможно) после пастеризации.
Экстракцию начинают с добавления галогенида щелочно-земельного металла, такого как хлористый кальций. После этого клетки могут быть подвергнуты фильтрации, промывке и/или сжатию с целью образования влажного брикета.
Микробные клетки могут быть подвергнуты экструзии и в случае необходимости полученные в результате гранулы или экструдат подвергают сушке. Высушенные гранулы или высушенную биомассу можно использовать для экстракции одной из РИГА, предпочтительно масла, содержащего одну или более РИГА. Предпочтительные способы экстракции, предназначенные для получения РИГА-содержащей
- 5 009568 масла из микробных клеток, описаны в РСТ/ЕР99/01446 (\УО 97/36996), РСТ/ЕР97/01448 (\УО 97/37032) и РСТ/ЕР01/08903 (№О 02/10423).
Полиненасыщенные жирные кислоты (РИГАз) и микробиальные масла.
РИГА может представлять собой отдельную РИГА либо две или более различных РИГА. Каждая из РИГА может относиться к п-3 или п-6 семейству. Предпочтительными веществами являются С18, С20 или С22 РИГА. РИГА может содержать по меньшей мере 18 углеродных атомов и/или по меньшей мере 3 или 4 двойные связи. РИГА может находиться в виде свободной жирной кислоты, ее соли, эфира жирной кислоты (например, метилового или этилового эфира), фосфолипида и/или моно-, ди- или триглицерида.
Подходящие (п-3 и п-6) РИГА включают в себя докозагексаеновую кислоту (ЭНА, 22:6 Ω3), полученную из водорослей или грибов, таких как (динофлаггелят) СгурШесобшшш или (гриб) Т11гаи51ос11у1пит:
γ-линоленовую кислоту (СЬА, 18:3 Ω6): α-линоленовую кислоту (АЬА, 18:3 Ω3): коньюгированную линолевую кислоту (октадекадиеновая кислота, СЬА): дигомо-'-линоленовую кислоту (ЬСБА. 20:3 Ω6): арахидоновую кислоту (АКА, 20:4 Ω6): эйкозапентаеновую кислоту (ЕРА, 20:5 Ω3).
Предпочтительные РИГА включают арахидоновую (АКА), докозогексаеновую (ОНА), эйкозапентаеновую (ЕРА) и γ-линоленовую (СЬА) кислоты. Среди указанных кислот наиболее предпочтительной является АКА.
РИГА могут быть получены в результате пастеризации клеток, таких как микробные клетки, с использованием способа согласно изобретению. Для этой цели могут использоваться бактерии, водоросли, грибы или дрожжевые клетки. Предпочтительные грибы относятся к отряду Мисога1ез, например МойегеИа, Рйусотусез, В1акез1еа, АзрегдШиз, Тйгаиз1осйу1пит, РуПиит или Еп1отор111ога. Предпочтительные источники РИГА включают МогйегеИа а1рша, В1акез1еа йгзрога, АзрегдШиз 1еггеи8 или РуПиит Ш816ю8ит. Водоросли могут относиться к динофлаггелятам и могут включать Рогрйупбшт, Ыйз/сЫа, СгурШесоЛшит (СгурШесобшшт соНпи). Дрожи включают микроорганизмы, относящиеся к виду РюЫа или ЗассЬаготусез, например РюЫа сйеш. Бактерии могут относиться к роду РгорюЫЬаЫепит. Микробное масло может представлять собой жидкость (при комнатной температуре).
Предпочтительно, чтобы большая часть РИГА находилась в виде триглицеридов. Предпочтительно, чтобы по меньшей мере 50%, например по меньшей мере 60% или по меньшей мере 70% РИГА находились в виде триглицеридов. Однако содержание триглицеридов может быть более высоким и составлять по меньшей мере 85%, предпочтительно по меньшей мере 90%, оптимально по меньшей мере 93% или 95% от количества масла. Предпочтительно, чтобы среди таких триглицеридов по меньшей мере 40%, например 50%, оптимально по меньшей мере 60% РИГА находились в α-положении глицерина (входящего в состав триглицерида), также известного, как положение 1 или 3. Предпочтительно, чтобы по меньшей мере 20%, например по меньшей мере 30%, оптимально по меньшей мере 40% РИГА находилось в положении Ь (2).
Микробное масло может содержать по меньшей мере 10, 35, 40 или 45% или более желаемой РИГА, такой как арахидоновая кислота. Содержание триглицеридов может составлять по меньшей мере 90%, например 92-94%. Типичное микробное масло содержит эйкозапентаеновую кислоту (ЕРА) в количестве менее 5%, предпочтительно менее 1% и более предпочтительно менее 0,5%. Рассматриваемое масло содержит С20, С20:з, С22:0 и/или С24:0 жирные кислоты в количестве менее 5%, менее 2% и менее 1% соответственно. Содержание свободных жирных кислот (ГГА) составляет не более 1,0: 0,4: 0,2 или 0,1. Масло может не содержать или содержать незначительное количество ОЬА и/или ЭОЬА.
Микробное масло может представлять собой неочищенное масло. Оно может экстрагироваться из клеток с помощью органического растворителя, такого как гексан или изопропанол.
Процесс экстракции РИГА.
РИГА (или микробное масло, содержащее РИГА) может экстрагироваться из (пастеризованных) микробных клеток. Масло предпочтительно экстрагировать из (например, высушенных) гранул (например, экструдатов), содержащих клетки. Экстракцию можно проводить с использованием растворителя. Предпочтительно использовать неполярные растворители, такие как С1-8, предпочтительно С2-6алканы, например гексан.
Предпочтительно, чтобы растворитель просачивался через высушенные гранулы. Подходящие для этой цели методы грануляции и экструзии микроорганизмов, а также последующей экстракции микробного РИГА-содержащего масла описаны в \УО-А-97/37032.
С помощью растворителя получают неочищенное РИГА-содержащее масло. Полученное масло может использоваться без дополнительной очистки или оно может быть подвергнуто одной или более очистке. Однако сырое масло обычно содержит растворитель, используемый для экстракции масла (например, гексан или спирт, такой как изопропиловый спирт), и оно представляет вещество, которое не было
- 6 009568 подвергнуто одной (предпочтительно всем) из следующих стадий очистки. Подходящие для этой цели методы очистки описаны в РСТ/ЕР01/08902 (на содержание этого и всех других цитированных документов ссылаются в настоящем описании). Масло может быть подвергнуто одной или более операциям очистки, которые могут включать обработку кислотой или рафинирование, обработку щелочью или удаление свободных жирных кислот, отбеливание или удаление пигмента, фильтрацию, демаргаринизацию (или охлаждение с целью удаления насыщенных триглицеридов), дезодорацию (или удаление свободных жирных кислот) и/или доочистку (или удаление маслонерастворимых веществ). Все перечисленные стадии очистки подробно описаны в РСТ/ЕР01/08902 и при внесении необходимых изменений могут применяться в настоящем изобретении.
Полученное масло особенно подходит для пищевых применений и может добавляться в продукты питания (людей) и корм животных. Примерами таких пищевых продуктов могут служить молоко, детское питание, оздоровительные напитки, хлеб и животные корма.
Клетки.
Клетки могут представлять собой объекты, из которых могут быть получено масло или РИГА. Предпочтительными клетками являются микробные клетки. Микробные клетки (или микроорганизмы), используемые в изобретении, могут представлять собой любые объекты, описанные выше, в частности, в разделе, касающемся РИГА и микробных масел. Такие микроорганизмы могут включать либо продуцировать РИГА или микробное масло, причем РИГА может экстрагироваться или выделяться из клеток. Рассматриваемые клетки могут иметь нитеобразную форму, как в грибах или бактериях, или представлять собой отдельные клетки, как в дрожжах, водорослях и бактериях. Такие клетки могут представлять собой микроорганизмы, такие как дрожжи, грибы, бактерии или водоросли. Предпочтительные грибы относятся к отряду Мисога1ск, например к роду Мог(1сгс11а, Рйусотусск, В1акск1са или АкрегдШик. Предпочтительные грибы относятся к виду Могйсгсйа а1рша, В1акск1са 1г15рога, АкрегдШик 1сггси8.
Предпочтительные дрожжи относятся к роду Р1сЫа (например, Р1сЫа с1ГГсгП) или 8ассйаготусск.
Бактерии могут относиться к роду РгорюшЬас!спит.
Предпочтительные клетки водорослей представляют собой динофлагеллят и/или принадлежат к роду СгурШссобшшт или ЭашсПа. Предпочтительные водоросли относятся к виду СгурШесоЛшит сойпй или ИашсИа кайпа.
Пероксидное число (РОУ).
Предпочтительное значение РОУ для (микробного) масла составляет 3-8 или 12. Однако способ изобретения позволяет использовать более низкие значения РОУ, и такие значения составляют 10,0 или менее 8,0. Значение РОУ может быть измерено с использованием известной методики, например, согласно АОС8 Сй-8-53. Обычно РОУ имеет размерность мэкв./кг.
Анизидоновое число (АпУ).
Это число отражает содержание альдегидов. Предпочтительное анизидиновое число микробного масла составляет 5, 6, 7 или 10-15, 20 или 25. Походящее значение АпУ не превышает 20, например не превышает 15. В некоторых случаях оно не превышает 10 или даже 5 или 2. Предпочтительный интервал значений АпУ составляет 5-15, оптимально 7-12. Более предпочтительное АпУ имеет значение в интервале от 2 или 5 до 12 или 15. АпУ может быть измерено с использованием известных методов, например, согласно АОС8 Сй-8-53.
Применение масел и РИГАк.
Дополнительный аспект изобретения относится к композиции, содержащей масло и в некоторых случаях другие соединения. Рассматриваемая композиция может представлять собой корм и/или пищевую добавку для животных и людей. Масла могут приводиться в форму, подходящую для потребления человеком, обычно в результате рафинирования или очистки масла, полученного из микробов.
Рассматриваемая композиция может представлять собой детское питание или пищевой продукт. Согласно изобретению состав такой формулы может регулироваться таким образом, чтобы обеспечивалось содержание липидов или РИГАк, соответствующее их содержанию в обычном материнском молоке. Такая операция предусматривает смешивание микробного масла согласно изобретению с другими маслами с получением композиции требуемого состава.
Рассматриваемая композиция может представлять собой корм или пищевую добавку в корм животных или рыб. Полученный корм и пищевые добавки могут использоваться для кормления любых сельскохозяйственных животных, в частности овец, крупного рогатого скота и домашней птицы. Кроме этого, подобный корм или пищевые добавки могут применяться для кормления сельскохозяйственных водоплавающих животных, таких как рыбы и моллюски. Состав корма для таких животных может включать один или более пищевых веществ или ингредиентов.
Согласно изобретению масло может представлять собой сырой или очищенный продукт. Рассматриваемый продукт может непосредственно поставляться на рынок непосредственно или в виде товаров в соответствующей упаковке, обычно в одноразовых алюминиевых бутылях, внутренняя поверхность которых покрыта эпоксифенольным лаком и заполнена азотом. Такое масло может содержать один или более антиоксидантов (например, токоферол, витамин Е, пальмитат), концентрация которых может составлять 50-800 м.д., например 100-700 м.д.
- 7 009568
Походящие составы могут представлять собой фармацевтические или ветеринарные композиции, предназначенные для перорального приема, или косметические композиции. Масло может потребляться как таковое или в капсулированной форме, например в виде капсул с оболочкой. Такие капсулы могут содержать желатин и/или глицерин. Композиция может содержать другие компоненты, например отдушки (со вкусом лимона или лайма), а также фармацевтически или ветеринарно применимые носители или наполнители.
Пеногасители.
В ходе деаэрации водной среды могут образовываться пузырьки газа. Такое явление может наблюдаться при дегазации, поскольку выходящие (в виде пузырьков) из раствора газы поднимаются к поверхности водной среды. В результате на поверхности водной среды может образовываться пена. Поскольку пенообразование нежелательно, для уменьшения или предотвращения такого процесса, в водную среду могут добавляться один или более пеногасителей. В способе изобретения могут использоваться такие известные пеногасители, как трибутилфосфат. Предпочтительный пеногаситель имеет гидрофобную природу и может не растворяться в воде. Рассматриваемое вещество может содержать неполярную углеводородную цепочку, например, модифицированную полярной группой. Предпочтительные пеногасители включают силиконовое масло, парафин, алкоксилат жирного спирта и/или полигликоль.
Предпочтительные химические деаэраторы включают алифатические спирты, сложные эфиры жирных кислот, этоксилаты жирных кислот, полиэфиры жирных кислот и/или жирные спирты.
Деаэрация может иметь другие преимущества, особенно в случае нагревания микробных клеток при их уничтожении или пастеризации. В ходе нагревания или пастеризации клетки или водная среда (или любая композиция, содержащая клетки) могут подвергаться воздействию высоких температур и/или высоких давлений. В результате происходит бурное выделение газов из водной среды, сопровождающееся кавитацией в насосах в ходе перемещения микробных клеток. Такое явление нежелательно, поскольку может приводить к повреждению клеточных стенок и разрушению клеток. Таким образом, предварительная деаэрация может уменьшать возможные проблемы, связанные с воздействием высоких температур и давлений в ходе нагревания или пастеризации.
Оборудование (например, промышленная технологическая установка).
Второй аспект изобретения относится к устройству для реализации первого аспекта изобретения. Второй аспект изобретения может предусматривать (а) средства для культивирования (или ферментации) микробных клеток (например, ферментер), возможно, соединенные со (Ь) средствами деаэрации водной среды, содержащей микробные клетки, и (с) необязательными средствами для получения масла из микробных клеток.
В соответствии с одним из вариантов воплощения изобретения деаэрация по (Ь) может проводиться, когда клетки все еще присутствуют внутри ферментера. Согласно альтернативному решению деаэрационные средства могут быть отделены от средств деаэрации по (Ь) (хотя, возможно, они могут быть соединены с ними). Так, клетки и культурная среда (например, бульон) могут пропускаться или переноситься (например, непосредственно) через средства деаэрации по (Ь). Кроме этого, такие устройства также могут служить средствами пастеризации. После деаэрации по (Ь) деаэрированная жидкость может переноситься или пропускаться через устройства пастеризации либо подаваться в сосуд, в котором жидкость (и клетки) подвергают пастеризации. Каждое из указанных средств может размещаться в порядке, соответствующем порядку технологических стадий согласно первому аспекту.
В предпочтительной системе водная среда может перемещаться от ферментера к нагревательной системе (предпочтительно трубчатого типа). Водную среду можно подвергать предварительному нагреванию, в ходе которого также может происходить деаэрация. Жидкость может нагреваться до 40-80°С, например до 50-70°С, например до 55-65°С. Таким образом, нагревание (или предварительное нагревание) может быть частью системы деаэрации. Деаэрация может дополнительно стимулироваться добавлением воды (способ разбавления) и/или пара (способ замены газа). Оба таких способа или любой из них могут осуществляться до (предварительного) нагрева.
После предварительного нагрева водная среда может подвергаться дополнительной деаэрации, например, с использованием вакуума или пониженного давления. После этого может проводиться пастеризация жидкости.
Предпочтительные отличия и характерные признаки одного аспекта изобретения с внесением необходимых изменений применимы в другом его аспекте.
Далее изобретение описывается со ссылкой на следующие примеры, которые приведены в целях иллюстрации и не ограничивают область изобретения.
Сравнительный пример 1 и примеры 2-4 (деаэрация внутри ферментера).
При проведении некоторых экспериментов, включающих пастеризацию грибковой биомассы (Могйеге11а а1рша), наблюдалось окисление. Предполагается, что наличие воздуха в ферментационном бульоне приводит к химическому окислению, особенно при высоких температурах. Хотя для жизнедеятельности микробных клеток и биосинтеза РИРЛ требуется воздух, было решено проводить деаэрацию ферментационного бульона внутри ферментера до пастеризации (метод теплового шока).
- 8 009568
Ферментацию грибковой биомассы, М. а1рше, проводили известным способом. Использовали метод ферментации, аналогичный описанному в XVО 97/36996 (см. примеры). Длительность ферментации составляла примерно 150-200 ч. Бульон из ферментера перемещали через небольшой сосуд (емкость 350 л) в оборудование для пастеризации.
Испытанию подвергали ферментационные бульоны, полученные в серии ферментации длительностью 150-200 ч.
В первой группе экспериментов испытания проводили непосредственно на бульоне, находящемся внутри ферментера, с использованием различных методов деаэрации, включающих прекращение барботажа воздуха в бульон через разбрызгиватель за 2 ч до завершения ферментации (пример 2) и использование азота для замены воздуха в свободном пространстве над ферментационным бульоном (примеры 3 и 4). В сравнительном примере 1 деаэрация не применялась.
Сухую биомассу, полученную в испытаниях по методу теплового шока, анализировали с использованием ТРС (чашечный метод подсчета). Результаты ТРС незначительно отличаются от результатов измерений, полученных на бульоне, пастеризованном в стандартных условиях. Бульон после деаэрации и пастеризации использовали для выделения микробного/одноклеточного масла, содержащего арахидоновую кислоту (АКА). Сырое масло, содержащее арахидоновую кислоту, выделяли и анализировали. Процесс выделения после деаэрации и пастеризации бульона включал добавление хлористого кальция, фильтрацию/промывку и уплотнение с образованием влажного осадка. Далее, влажный осадок подвергали экструзии с получением экструдата, который сушили, и полученную высушенную биомассу подвергали экстракции.
Было установлено, что 1 л бульона содержит 45-55 г сухой биомассы, содержащей 30-35% масла.
Использовали следующий лабораторный процесс выделения. Хлористый кальций в виде хлопьев и воду добавляли в стеклянные лабораторные сосуды. 25% мас./мас. раствор хлористого кальция готовили с использованием СаС12-2Н2О. Полученный раствор в количестве 24 г добавляли в 1 л пастеризованного бульона и смесь тщательно перемешивали.
Процесс фильтрации использовался для моделирования действия мембранного фильтровального пресса. Применяли 1-литровый фильтр 8еЦх с 8е!ат БуИщ АМ 25116 тканью. 1 л бульона фильтровали под давлением азота 0,5-1,0 бар. Давление сбрасывали и добавляли свежую воду в количестве, составляющем 0,6 объема бульона, не повреждая при этом осадок на фильтре. После этого осадок промывали под давлением 0,5-1,0 бар и сушили продувкой в течение 1 мин.
Вакуумную фильтрацию проводили с использованием Раппеущ лабораторного ленточного фильтра, выполненного из марлевого материала РаппеуЦ. Бульон в количестве 400-500 мл фильтровали под давлением 0,45 бар (вакуум - 0,55 бар). Добавляли свежую воду в количестве, составляющем 0,6 объема бульона, и осадок на фильтре промывали под давлением 0,45 бар. Полученный осадок на фильтре сушили с помощью водяного насоса досуха.
После этого биомассу выжимали между пластинами до прекращения выделения воды. Операцию проводили с использованием марли.
Экструзию проводили с использованием экструдера (Ую1опа) типа мясорубки. Полученные гранулы в течение 30 мин сушили в устройстве с псевдоожиженным слоем при температуре на входе 50°С и объемной скорости, установленной на значении 5. Содержание сухого вещества составило 91-96%.
В ходе процесса экстракции 100 г сухой биомассы в течение 60 мин экстрагировали 500 мл гексана при комнатной температуре. Гексан декантировали и осадок на фильтре в течение 30 мин промывали 250 мл свежего гексана при комнатной температуре. Гексан сливали и добавляли в гексан с предыдущей стадии экстракции. Экстракт осветляли вакуумной фильтрацией с использованием стекловолокна.
Процесс выпаривания включал быстрое испарение большей части гексана в роторном испарителе при температуре водяной бани 60-70°С и давлении 200 мбар в течение 5-20 мин. Оставшуюся часть гексана также выпаривали при указанной температуре в течение 10-20 мин при давлении ниже 100 мбар. Во избежание окисления сброс давления осуществляли с использованием азота.
В полученном АКА-содержащем масле определяли РОУ и АпУ, значения которых представлены в табл. 1.
- 9 009568
Таблица 1
| № Примера | Ферм. □агрузи а | Условия процесса | Условия Процесса пастеризации | ρον (мэкв/кг) | АпУ [-1 |
| I (сек*) | |||||
| 1(соавнит.} | В-03036 | Стандаотные* | 100 10 | 16,6 | 24.3 |
| 2 | В-03050 | Отсутствие воздуха в барботере Воздух в пустом пространстве 60 об/м<м | 100 | 10 | 10, 8 | 10,6 |
| 3 | В-03050 | 1 час в присутствии азота Ы2 в пустом пространстве при 0,6 бар | 100 | 10 | э, е | 13, 2 |
| 4 | В-03067 | Отсутствие воздуха в барботере в течение 2 часов в барботере в течение 2ч в пустом пространстве. При 0,6 бар40 об/мин | 100 | 10 | 8 | 5,5 |
*Бульон перемещали под давлением на входе в ферментер 1,8-2,0 бар.
Как следует из табл. 1, уменьшение количества воздуха в бульоне улучшает значения РОУ и/или АпУ. Полученные результаты позволяют заключить, что деаэрация позволяет уменьшить степень окисления и улучшить значения РОУ и АпУ. Дальнейшие испытания проводились в большем масштабе с использованием отдельного деаэратора.
Примеры 5-14 (отдельный деаэратор).
Устанавливали систему деаэрации непрерывного действия, снабженную «Зонтиковой насадкой», предназначенную для работы при давлении ниже 500 мбар. Ферментационную среду перемещали из ферментера в деаэратор с помощью насоса с низкой деформацией сдвига (топко насос).
С целью имитации деаэратора типа «парасоль», комплекс деаэрации, после ферментации, но до пастеризации устанавливали с использованием АРУ деаэрационной системы. Ферментер присоединяли к деаэратору и среду перемещали под давлением 0,5 бар. Деаэратор присоединяли к вакуумному насосу. После прохождения деаэратора биомассу направляли (через топко насос) в сборник и затем на стадии пастеризации, которую проводили с использованием оборудования для обработки методом теплового шока (также АУР). Объемная скорость подачи с помощью топко насоса составляла 10 м3/ч при давлении внутри деаэратора 400 мбар.
В табл. 2 представлены результаты испытания с использованием деаэрационной установки. Методика выделения микробного масла и его анализа приведены ранее.
-10009568
Таблица 2
| Ν' примера | Ферм. загрузка | Условия процесса | Условия процесса пастеризации | Давление деаэрации | ρον [мэкв/кг] | Αην [-] | |
| 5 | В-031096 | Отсутствие воздуха в барботере в течение 1 часа Р в свободном пространстве= 0,2 бар РТГ=0,5 бар | (°С) | (сек.) | (миллибар) | ||
| 100 | 15 | 400 | 4,9 | 13,1 | |||
| 6 | В-03102 | Отсутствие воздуха в барботере в течение 1 часа Р в свободном пространстве= 0,2 бар РТГ=0,5 бар | 120 | 15 | 400 | 17,2 | 36,3 |
| 7 | В-03102 | Отсутствие воздуха в барботере в течение 1 часа Р в свободном пространстве= 0,2 бар РТГ=0,5 бар | 100 | 15 | 400 | 11,7 | 19,0 |
- 11 009568
| 8 | В-03104 | Отсутствие воздуха в барботере в течение 1 часа Р в свободном пространстве= 0,2 бар РТГ=0,5 бар | 100 | 15 | 400 | 4, 9 | 7, 4 |
| 9 | Ά-03079 | Отсутствие воздуха в барботере в течение 1 часа Р в свободном пространстве= 0,2 бар РТГ=0,3 бар (12м3) РТЕ=0,7 бар (28м3) | 100 | 15 | 400 | 5, 6 | 9,0 |
| 10 | А-03081 | Отсутствие воздуха в барботере в течение 1 часа Р в свободном пространстве= 0,1 бар РТГ=0,3 бар (10м3) РТГ=0,7 бар (остаток бульона) | 100 | 15 | 400 | 2,9 | 6,2 |
| 11 | В-03141 | Отсутствие воздуха в барботере в течение 1 часа Р в свободном пространстве= 0,1 бар РТГ=0,6 бар | 100 | 15 | 400 | 7,6 | 18,4 |
- 12 009568
| 12 | А-03092 | Отсутствие воздуха в барботере в течение 2 часов Р в свободном пространстве= 0,1 бар РТР=0,6 бар | 100 | 15 | 400 | 7,8 | 17,1 |
| 13 | А-03093 | Отсутствие воздуха в барботере в течение 2 часов Р в свободном пространстве= 0,1 бар РТГ=0,7 бара | 100 | 15 | 400 | 9,3 | 23,1 |
| 14 | А-03095 | Отсутствие воздуха в барботере в течение 2 часов Р в свободном пространстве^ 0,1 бара РТГ=0,7 бара | 100 | 15 | 400 | 5,2 | 7, 9 |
Claims (25)
1. Способ получения масла или полиненасыщенной жирной кислоты (РИГА), предусматривающий нагрев или пастеризацию водной среды, содержащей клетки, и экстракцию масла или РИГА, характеризующийся тем, что перед нагревом или пастеризацией водной среды осуществляют ее деаэрацию.
2. Способ по п.1, в котором указанные клетки являются микробными клетками.
3. Способ по любому предшествующему пункту, в котором водная среда представляет собой ферментационный бульон.
4. Способ по любому предшествующему пункту, который после экстракции дополнительно предусматривает очистку или выделение масла либо одной или более РИГА.
5. Способ по любому предшествующему пункту, в котором стадия деаэрации включает:
a) приложение вакуума (или пониженного давления);
b) механическую деаэрацию/дегазацию (перемешиванием, вибрацией, приложением силы ускорения или силы тяжести, например, с использованием центрифуги или циклона);
c) изменение вязкости (в результате разбавления водой или другой жидкостью или в результате повышения температуры);
б) изменение условий ферментации, например, уменьшением эрлифта, барботажем воздуха или подачей кислорода или воздуха в ходе ферментации либо уменьшение скорости перемешивания;
е) изменение рН, например понижение рН или подкисление;
ί) фильтрацию, например, с использованием фильтра или мембраны, предпочтительно из (инертного) полимера, например, такого как РТГЕ;
д) замену газа таким инертным газом, как азот, или таким благородным газом, как гелий, или паром;
й) химическую деаэрацию, например, с использованием акцептора кислорода, например, такого как сульфит натрия или гидразин;
1) период пребывания водной среды в условиях диффузии кислорода воздуха из жидкости; или комбинацию одного или более метода (а)-(1).
- 13 009568
6. Способ по любому предшествующему пункту, в котором деаэрацию проводят при замедленном перемешивании и/или замене газовой фазы.
7. Способ по п.6, в котором замену газа осуществляют с использованием газа, не содержащего кислород, или с концентрацией кислорода ниже его содержания в атмосферном воздухе.
8. Способ по п.6 или 7, в котором газ представляет собой или содержит азот.
9. Способ по п.6, в котором деаэрация предусматривает приложение вакуума или пониженного давления.
10. Способ по п.9, в котором пониженное давление составляет не более 800 мбар, предпочтительно не более 600 мбар.
11. Способ по п.9 или 10, в котором деаэрацию водной среды проводят с использованием вакуумного или дегазирующего насоса, деаэратора типа парасоль или зонтичного сопла.
12. Способ по любому предшествующему пункту, в котором деаэрация обеспечивает содержание О2 в водной среде менее 20 м.д., предпочтительно менее 10 м.д.
13. Способ по любому предшествующему пункту, в котором деаэрация обеспечивает концентрацию растворенного кислорода менее 10 м.д., предпочтительно менее 5 м.д., более предпочтительно менее 2 м. д.
14. Способ по любому предшествующему пункту, в котором деаэрацию водной среды проводят при (ί) давлении выше 1 бар, предпочтительно выше 1,5 бар, более предпочтительно выше 2 бар и/или (ίί) температуре выше 60°С, предпочтительно выше 80°С, более предпочтительно выше 100°С.
15. Способ по любому предшествующему пункту, в котором клетки нагревают или пастеризуют при температуре выше 80°С, предпочтительно выше 90°С, более предпочтительно выше 100°С.
16. Способ по любому предшествующему пункту, в котором РИГА или масло, содержащее РИГА, в котором РИГА является С18, С20 или С22 0-3 или 0-6 РИГА (возможно, ЛКЛ, ЕРА, ΌΗΆ и/или ОЬЛ).
17. Способ по любому предшествующему пункту, в котором клетки являются дрожжевыми, бактериальными, грибными или водорослевыми.
18. Способ по любому предшествующему пункту, в котором масло является микробным маслом или маслом одноклеточных микроорганизмов.
19. Способ по любому предшествующему пункту, в котором стадия экстракции включает получение из клеток масла, имеющего значение перекисного числа (РОУ) менее 12 и/или значение анизидинового числа (АпУ) менее 20.
20. РиЕА-содержащее масло или РИГА, полученные способом по любому предшествующему пункту.
21. Масло по п.20, которое представляет собой микробное масло или масло одноклеточных микроорганизмов.
22. Устройство для получения масла или РИГА из микробных клеток, включающее:
a) средства культивирования или ферментации микробных клеток;
b) средства деаэрации водной среды, содержащей микробные клетки;
c) средства получения из микробных клеток масла или РИГА.
23. Устройство по п.22, которое включает (а) ферментер, (Ь) деаэратор, в котором может использоваться пониженное давление, и (с) гомогенизатор и/или центрифугу.
24. Устройство по п.22 или 23, в котором средства (Ь) включают вакуумный или дегазирующий насос, парасольный деаэратор или зонтичную форсунку.
25. Устройство по любому предшествующему пункту, в котором (Ь) включает деаэратор, способный прикладывать давление ниже 800 мбар, предпочтительно ниже 600 мбар.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP03258249 | 2003-12-30 | ||
| PCT/EP2004/014884 WO2005063999A1 (en) | 2003-12-30 | 2004-12-28 | Deaeration process |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA200601261A1 EA200601261A1 (ru) | 2006-12-29 |
| EA009568B1 true EA009568B1 (ru) | 2008-02-28 |
Family
ID=34717265
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200601261A EA009568B1 (ru) | 2003-12-30 | 2004-12-28 | Способ деаэрации |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US20070148315A1 (ru) |
| EP (3) | EP1706500B1 (ru) |
| JP (3) | JP4839454B2 (ru) |
| KR (1) | KR101167331B1 (ru) |
| CN (2) | CN103357199B (ru) |
| AT (1) | ATE480634T1 (ru) |
| BR (1) | BRPI0418239B1 (ru) |
| CA (1) | CA2551659C (ru) |
| DE (1) | DE602004029090D1 (ru) |
| DK (2) | DK1706500T3 (ru) |
| EA (1) | EA009568B1 (ru) |
| ES (3) | ES2563649T3 (ru) |
| HK (1) | HK1150862A1 (ru) |
| IL (1) | IL176417A (ru) |
| MX (1) | MX2011004418A (ru) |
| PL (1) | PL2251429T3 (ru) |
| TW (1) | TWI349040B (ru) |
| WO (1) | WO2005063999A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA200605347B (ru) |
Families Citing this family (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005529621A (ja) | 2002-06-19 | 2005-10-06 | デーエスエム イーペー アセッツ ベスローテン フェンノートシャップ | 微生物細胞及び微生物油の低温殺菌方法 |
| BRPI0418239B1 (pt) | 2003-12-30 | 2013-10-01 | processo de desaeraÇço | |
| CN1965701B (zh) * | 2006-11-27 | 2010-12-29 | 华南理工大学 | 低值鱼酶解制备调味基料及鱼油的方法 |
| GB0807619D0 (en) | 2008-04-28 | 2008-06-04 | Whitton Peter A | Production of bio fuels from plant tissue culture sources |
| US8207363B2 (en) * | 2009-03-19 | 2012-06-26 | Martek Biosciences Corporation | Thraustochytrids, fatty acid compositions, and methods of making and uses thereof |
| US20100310743A1 (en) * | 2009-06-04 | 2010-12-09 | Dean Intellectual Property Services, Inc. | Removing gas additives from raw milk |
| CN104974030A (zh) | 2009-12-30 | 2015-10-14 | 巴斯夫制药（卡兰尼什）公司 | 用于纯化多不饱和脂肪酸的模拟移动床色谱分离方法 |
| CA2787344C (en) | 2010-01-19 | 2018-03-20 | Dsm Ip Assets B.V. | Eicosapentaenoic acid-producing microorganisms, fatty acid compositions, and methods of making and uses thereof |
| EP3617318A1 (en) | 2010-06-01 | 2020-03-04 | DSM IP Assets B.V. | Extraction of lipid from cells and products therefrom |
| KR20130103489A (ko) * | 2010-08-06 | 2013-09-23 | 호스피라 오스트레일리아 피티와이 리미티드 | 바이알 제조 방법 및 시스템 |
| WO2012037535A2 (en) * | 2010-09-19 | 2012-03-22 | Kornacki Daniel C | Method and apparatus for treating fermented liquids |
| GB201111594D0 (en) | 2011-07-06 | 2011-08-24 | Equateq Ltd | New improved process |
| GB201111601D0 (en) | 2011-07-06 | 2011-08-24 | Equateq Ltd | New process |
| GB201111589D0 (en) | 2011-07-06 | 2011-08-24 | Equateq Ltd | New modified process |
| GB201111591D0 (en) | 2011-07-06 | 2011-08-24 | Equateq Ltd | Further new process |
| GB201111595D0 (en) | 2011-07-06 | 2011-08-24 | Equateq Ltd | Improved process |
| CN108771240A (zh) | 2011-07-21 | 2018-11-09 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 脂肪酸组合物 |
| DK3050972T3 (da) * | 2011-07-21 | 2021-02-08 | Dsm Ip Assets Bv | Fremgangsmåder til fremstilling af eicosapentaensyre i thraustochytrider |
| GB201300354D0 (en) | 2013-01-09 | 2013-02-20 | Basf Pharma Callanish Ltd | Multi-step separation process |
| US9428711B2 (en) | 2013-05-07 | 2016-08-30 | Groupe Novasep | Chromatographic process for the production of highly purified polyunsaturated fatty acids |
| US8802880B1 (en) | 2013-05-07 | 2014-08-12 | Group Novasep | Chromatographic process for the production of highly purified polyunsaturated fatty acids |
| EP3118186B1 (fr) | 2013-12-11 | 2022-02-09 | Novasep Process | Installation chromatographique de production d acides gras polyinsatures |
| JP2017504318A (ja) | 2013-12-20 | 2017-02-09 | ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． | 微生物細胞から微生物油を入手するための方法 |
| US11124736B2 (en) | 2013-12-20 | 2021-09-21 | Dsm Ip Assets B.V. | Processes for obtaining microbial oil from microbial cells |
| CN105960235B (zh) | 2013-12-20 | 2021-01-08 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 用于从微生物细胞获得微生物油的方法 |
| CA2934491C (en) | 2013-12-20 | 2023-09-26 | Dsm Ip Assets B.V. | Processes for obtaining microbial oil from microbial cells |
| BR112016015718B1 (pt) | 2014-01-07 | 2021-12-07 | Novasep Process Solutions | Processo de purificação de aminoácidos aromáticos |
| CN104857743B (zh) * | 2014-02-21 | 2017-01-18 | 中国石油化工股份有限公司 | 一种聚合物溶液的密封除氧装置及方法 |
| JP6967334B2 (ja) * | 2015-12-21 | 2021-11-17 | 備前化成株式会社 | 高度不飽和脂肪酸のエステルを含む組成物 |
| CN107661643A (zh) * | 2016-07-28 | 2018-02-06 | 北京化工大学 | 一种液体脱氧的系统装置与应用 |
| BR112019003361A2 (pt) | 2016-08-19 | 2019-05-28 | Noblegen Inc | métodos e usos de frações de material orgânico dissolvido para ligação a íons metálicos |
| EP3606663A4 (en) | 2017-04-07 | 2021-01-27 | Noblegen Inc. | PROCESSES AND USES OF ENCAPSULATED EXUDATES AND EUGLENA BIOMASS |
| CN114423504A (zh) * | 2019-07-12 | 2022-04-29 | 巴克曼实验室国际公司 | 优化发酵过程的系统和方法 |
| CN110478949A (zh) * | 2019-09-06 | 2019-11-22 | 安徽赛福电子有限公司 | 一种消除电容器填充环氧树脂气泡的装置 |
| CN111203955B (zh) * | 2020-01-16 | 2021-12-28 | 河北工业大学 | 多级泵送除气系统及应用其的建筑3d打印系统 |
| WO2023175141A1 (en) | 2022-03-18 | 2023-09-21 | Purac Biochem B.V. | Method for reducing fermentation broth viscosity |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4970167A (en) * | 1988-04-14 | 1990-11-13 | Phillips Petroleum Company | Fermentation broth degassification apparatus |
| WO1997037032A2 (en) * | 1996-03-28 | 1997-10-09 | Gist-Brocades B.V. | Preparation of microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass |
Family Cites Families (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3082228A (en) | 1959-12-18 | 1963-03-19 | Escambia Chem Corp | Method for producing monoesters of polyunsaturated fatty acids |
| EP0089128B1 (en) * | 1982-03-12 | 1986-05-07 | Imperial Chemical Industries Plc | Process for displacing dissolved gas from water |
| JPS59230849A (ja) | 1983-06-14 | 1984-12-25 | Toyoda Gosei Co Ltd | ステアリングホイ−ルの衝撃エネルギ−吸収構造体 |
| GB8324236D0 (en) | 1983-09-09 | 1983-10-12 | Shell Int Research | Biopolymer formulations |
| US4574117A (en) * | 1984-06-06 | 1986-03-04 | Genex Corporation | Stabilization of phenylalanine ammonia-lyase in a bioreactor using reducing agents |
| US4789554A (en) * | 1985-12-05 | 1988-12-06 | The Procter & Gamble Company | High temperature vacuum steam distillation process to purify and increase the frylife of edible oils |
| GB2218984B (en) | 1988-05-27 | 1992-09-23 | Renafield Limited | Process for preparing high-concentration mixtures of polyunsaturated fatty acids & their esters and their prophylactic or therapeutic uses |
| JPH0334802U (ru) * | 1989-08-07 | 1991-04-05 | ||
| US5658767A (en) * | 1991-01-24 | 1997-08-19 | Martek Corporation | Arachidonic acid and methods for the production and use thereof |
| US5695545A (en) * | 1996-05-10 | 1997-12-09 | Hoechst Celanese Corporation | Degassing liquids: apparatus and method |
| CA2273570A1 (en) | 1999-05-31 | 2000-11-30 | Jfs Envirohealth Ltd. | Concentration and purification of polyunsaturated fatty acid esters by distillation-enzymatic transesterification coupling |
| CA2311974A1 (en) | 1999-06-28 | 2000-12-28 | Nisshin Flour Milling Co., Ltd. | Processes of selectively separating and purifying eicosapentaenoic and docosahexaenoic acids or their esters |
| WO2001051598A1 (en) | 2000-01-11 | 2001-07-19 | Monsanto Technology Llc | Process for making an enriched mixture of polyunsaturated fatty acid esters |
| DE60130737T3 (de) * | 2000-01-28 | 2016-01-14 | Dsm Ip Assets B.V. | Verstärkte Produktion von Lipiden enthaltend mehrfachungesättigte Fettsäuren durch hochdichte Kulturen von eukariotischen Mikroben in Gärvorrichtungen |
| CA2484334C (en) * | 2002-05-03 | 2013-01-22 | Martek Biosciences Corporation | High-quality lipids and methods for producing by enzymatic liberation from biomass |
| BRPI0418239B1 (pt) * | 2003-12-30 | 2013-10-01 | processo de desaeraÇço | |
| DE102005003624A1 (de) | 2005-01-26 | 2006-07-27 | Nutrinova Nutrition Specialties & Food Ingredients Gmbh | Herstellung und Anwendung eines antioxidativ wirksamen Extraktes aus Crypthecodinium sp. |
-
2004
- 2004-12-28 BR BRPI0418239-1B1A patent/BRPI0418239B1/pt active IP Right Grant
- 2004-12-28 AT AT04804466T patent/ATE480634T1/de not_active IP Right Cessation
- 2004-12-28 KR KR1020067013087A patent/KR101167331B1/ko active IP Right Grant
- 2004-12-28 US US10/583,890 patent/US20070148315A1/en not_active Abandoned
- 2004-12-28 DK DK04804466.3T patent/DK1706500T3/da active
- 2004-12-28 CN CN201310239611.7A patent/CN103357199B/zh active Active
- 2004-12-28 ES ES10174828.3T patent/ES2563649T3/es active Active
- 2004-12-28 EP EP04804466A patent/EP1706500B1/en active Active
- 2004-12-28 WO PCT/EP2004/014884 patent/WO2005063999A1/en active Application Filing
- 2004-12-28 ES ES04804466T patent/ES2351697T3/es active Active
- 2004-12-28 EP EP10174828.3A patent/EP2251430B1/en active Active
- 2004-12-28 EA EA200601261A patent/EA009568B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2004-12-28 EP EP10174824.2A patent/EP2251429B1/en active Active
- 2004-12-28 CN CNA2004800394578A patent/CN1902320A/zh active Pending
- 2004-12-28 JP JP2006546128A patent/JP4839454B2/ja active Active
- 2004-12-28 PL PL10174824T patent/PL2251429T3/pl unknown
- 2004-12-28 DE DE602004029090T patent/DE602004029090D1/de active Active
- 2004-12-28 CA CA2551659A patent/CA2551659C/en active Active
- 2004-12-28 ES ES10174824.2T patent/ES2624952T3/es active Active
- 2004-12-28 DK DK10174828.3T patent/DK2251430T3/en active
- 2004-12-30 TW TW093141411A patent/TWI349040B/zh not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-06-19 IL IL176417A patent/IL176417A/en active IP Right Grant
- 2006-06-28 ZA ZA200605347A patent/ZA200605347B/xx unknown
- 2006-06-28 MX MX2011004418A patent/MX2011004418A/es not_active Application Discontinuation
-
2010
- 2010-09-02 US US12/874,648 patent/US20100331561A1/en not_active Abandoned
-
2011
- 2011-01-06 JP JP2011001192A patent/JP5496920B2/ja active Active
- 2011-05-17 HK HK11104816.1A patent/HK1150862A1/zh unknown
- 2011-12-21 US US13/333,252 patent/US10041097B2/en active Active
-
2013
- 2013-12-25 JP JP2013266934A patent/JP2014087357A/ja not_active Ceased
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4970167A (en) * | 1988-04-14 | 1990-11-13 | Phillips Petroleum Company | Fermentation broth degassification apparatus |
| WO1997037032A2 (en) * | 1996-03-28 | 1997-10-09 | Gist-Brocades B.V. | Preparation of microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA009568B1 (ru) | Способ деаэрации | |
| KR101208304B1 (ko) | 다가불포화 지방산을 함유하는 미생물 오일의 제조방법 | |
| CN101837137B (zh) | 用于微生物细胞和微生物油的巴氏消毒方法 | |
| EP0904339B2 (en) | Sterol extraction with a polar solvent to give low sterol microbial oil | |
| MXPA06007448A (en) | Deaeration process | |
| KR20140146156A (ko) | 다가불포화 지방산을 함유하는 미생물 오일의 제조방법 | |
| EA039406B1 (ru) | Способ пастеризации микробных клеток и масла из микробных клеток |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM |
|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): RU |