KR20060115366A - 간소화시킨 조직 가공 - Google Patents
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Abstract
조직 가공에 있어서의 개선된 시스템 및 방법은 여기에 기재되었다. 화학적 가공 및 장치의 축조는 두 개의 반응 모듈에서 오직 두 가지 상이한 용액만을 사용함으로써 간소화된다. 그들은 유전적 분석, 조직학, 인 시투 항체 결합, 혼성화, 형태에 대한 문서적 보존, 핵산, 및 그들의 결합에 있어서 조직 검체의 가공과 호환성이 있다.
반응실, 저장실, 레토르트, 수송기관, 극초단파 복사선, 진공 펌프, 비수성 혼합물, 왁스, 고형화, 조직 단편
Description
관련출원에의 상호 참조
상기 출원은 2003년 10월 24일에 출원된 잠정적인 미국 출원 No. 60/513,560의 이익(the benefit)을 청구한다.
발명의 기술분야
본 발명은 조직 가공에 있어서, 두 개의 분리된 반응 모듈에서 두 가지 상이한 용액만을 사용하여 간소화시킨 화학적 가공 방법 및 그 장치에 관한 것이다.
WO 99/09390, WO 01/44783, 및 WO 01/44784을 보면, 조직 가공에 있어서 두 가지 이상의 상이한 용액의 사용, 그로부터의 유용한 생산물, 및 시스템들이 요구되는 조직 가공의 과정들이 기술되어 있다. 상기 국제공개들은 신속한 조직 가공의 필요성을 검토하였다. 그것들은 두 개의 분리된 반응 모듈에서 (ⅰ) 비수성 혼합물 및 (ⅱ) 왁스 용액이 신속하고 완전하게 조직을 가공하기에 충분하다는 것을 나타낸다.
이러한 사실에 의해서 공개된 발명과는 대조적으로 Boon et al. (Eur. J. Morphol. 33:349-358, 1995)에서는 조직 구조에 있어 조직 검체를 가공하기 위한, 각각 진공(vacuum) 및 극초단파 가열(microwave heating)이 따르는, 두 개의 분리 된 반응실에서 이소프로판올 용액 및 파라핀 왁스 용액을 사용한다. 그 시스템은 조직 검체가 가공 전에 고정될 것을 요구하며, 극초단파 에너지를 분산시키기 위하여 회전대를 사용할 것을 필요로 한다. 게다가, 상기 조직 검체를 받치는 유리 용기는 그 속에서 상기 용액에 열을 전달하며, 또한 극초단파를 흡수한다.
Milestone (WO 98/05938)은 조직 가공에 있어 적어도 3단계로 된 또 다른 대안을 제공한다: 조직 검체의 고정, 동시에 탈수 시약과 필수적으로 지방친화성 시약을 사용하는 탈수 및 제거, 및 조직 검체를 함침시키는 것. 극초단파 가열은 상기 첫 두 단계에서 사용되며, 탈수 및 제거 공정 동안에 증압(elevated pressure)이 사용된다. 상기 조직 검체는 열과 감압(reduced pressure)에 의해 건조되고, 그 후 진공하에서 또는 택일적으로 일련의 적절한 압력 및 적절한 진공을 가함으로써 함침시킨다.
조직 가공에 있어서 자동화 기기의 비용과 그 조작 비용은 효율적인 보건 의료 서비스의 제공을 위해 감소시킬 필요성이 있다. 또한, 보다 나은 진단은 그들이 받는 치료가 믿을만한 정보를 기초로 하며, 외과의사는 시기적절한 방법으로 환자들을 다룸으로써 환자들의 신뢰감을 증대시킨다. 장비 비용의 감소는 추가적인 장비를 구입할 수 있게 하며, 그 결과 추가적인 장비들은 주요 치료 시설을 갖춘 서비스 지역을 벗어나서 분포될 수 있게 된다. 조직들은 그러한 분산된 치료 시설 네트워크에서 지역적으로 가공될 수 있고, 그 다음에는 분석을 위한 전문화된 병리시설로 운송된다. 외과병원 또는 소규모 진료소에서는 공간이 중요하므로 자동화 장비의 크기를 감소시키는 것은 비좁은 공간에서의 설치를 가능하게 할 것이다.
예를 들면, 조직 가공 시스템에서 모듈의 수를 2개(열처리 모듈 및 진공 모듈)로 줄이는 것은 중복된 기계적, 전기적 부품들을 제거할 수 있을 것이며, 그 시스템의 규모에 대한 부담도 없앨 수 있을 것이다. 실험실에서의 배치도 더 여유가 있고 더 용이할 것이다. 화학적 조성물은 거의 재고로 쌓일 필요가 없을 것이며, 그 시스템을 사용하는 초보자도 사용이 용이할 것이다.
앞서 설명한 발명들을 비교하여 볼 때, 전자에서는 화학적 조성물을 거의 사용하지 않은 조직 가공 방법 및 시스템이 기재되어 있어 있고, 후자에서는 기계적, 전기적 부품을 거의 사용하지 않은 조직 가공 방법 및 시스템이 기재되어 있다. 이것은 U.S. Patent No. 6,207,408 및 U.S. Patent 6,793,890에 기재된 가공 방법 및 시스템을 뛰어넘는 개선이다.
상기 발명의 또 다른 이점은 하기에서 논의될 것이나, 그것은 하기 논의로부터 당업자에게 명백할 것이다.
발명의 요약
본 발명은 가공에서 두 가지 상이한 화학적 조성물만을 사용하고, 시스템에서 반응 모듈의 수를 최소화한 조직 가공 방법 및 시스템을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 시스템은 (a) 적어도 반응물이 가열되는 하나의 제 1모듈, (b) 적어도 반응물이 진공하에 존재하고, 가열되는 하나의 제 2모듈, 및 (c) 적어도 하나 또는 그 이상의 조직 검체를 일정 시기에 제 1모듈로부터 제 2모듈로 임의로 이동시키는 수송 기관으로 구성된다. 임의의 적재 및/또는 하역 장소도 상기 시스템을 구성할 수 있다.
제 1 반응 모듈은 (ⅰ) 가열되는 반응실 및 (ⅱ) 비수성 혼합물로 구성된다. 상기 비수성 혼합물은 적어도 세 가지 상이한 기능을 가진 상이한 화학물질들로 구성된다: 고정, 탈수, 및 제거. 상기 제 1모듈의 반응실은 극초단파 소스로부터 발산된 극초단파 에너지를 조절하기 위한 탐침/제어 회로가 있는 극초단파 소스로 구성될 수 있다. 그러한 에너지는 반응실의 내용물을 미리 맞춰진 온도로 가열시키기 위해 사용된다. 상기 모듈은 반응실로 이동하기 전에 비수성 혼합물을 예열하기 위해서, 그리고 반응실로부터 이동된 후 비수성 혼합물의 온도를 유지하기 위해서 가열된 저장실(a heated reservoir)로 더 구성될 수 있다. 상기 조직 검체는 화학적 조성물, 극초단파 복사선, 또는 그 둘에 의해 충분히 고형화될 수 있다. 그리고, 처음에 미네랄 오일과 같은 액체 탄화수소(hydrocarbon)에 의해 함침될 수 있으며, 그 후 왁스에 의해 충분히 함침될 수 있다.
제 2반응 모듈은 (ⅰ) 가열되고, 또한 진공 펌프에 연결된 반응실 및 (ⅱ) 왁스 용액으로 구성된다. 상기 제 2모듈의 반응실은 내부 온도 및 압력을 조절하기 위한 제어 회로 및 적절한 탐침자로 구성될 수 있다. 상기 모듈은 저장실로 더 구성될 수 있다. 제 2모듈의 임의의 저장실 내에서 고체 왁스는 용융될 수 있으며, 그 후 반응실로 이동될 때까지 용액상태로 유지될 수 있다.
택일적으로, 시스템은 상기 반응물들이 적어도 성공적으로 가열되며, 그 후 진공하에서 가열되는 단일 모듈로 구성된다. 하나 또는 그 이상의 조직 검체는 가공하는 동안 동일한 반응실에 머문다. 비수성 용액과 왁스 용액은 두 개의 분리된 저장실로부터 상기 반응실로 성공적으로 이동하게 된다. 임의의 수송기관은 조직 검체를 임의의 적재 장소로부터 이동하고/하거나 하역 장소로 이동시키기 위해 사용될 수 있다.
나아가 본 발명의 양상과 이점은 하기의 상세한 설명 및 청구항, 게다가 구체화로부터 당업자에게 명백할 것이다.
발명의 상세한 설명
고체 조직의 가공 및 분석과 관련하여, 대략 2 ~ 3mm의 통상적인 슬라이스(slice)와 더불어 분할에 의해 얻을 수 있는 신선한 조직의 가장 얇은 슬라이스가 약 1mm인 사실로 미루어보면, 조직 슬라이스는 현미경하에서 관찰되도록 대략 3 ~ 6 마이크론(micron)이 되어야 한다. 현미경으로 관찰될 수 있도록 충분히 얇은 슬라이스를 생산하기 위해서는, 초박절편용 분할기(이상, 마이크로톰(microtome))으로 분할하여 더 얇은 슬라이스가 획득될 수 있도록 조직을 고형화할 필요성이 있다.
본 발명에서는, 선행 기술과 비교하여 볼 때 조직 가공을 위해 필요한 (a) 상이한 화학적 조성물과 (b) 시스템의 기계적, 전기적 부품의 수를 감소시켰다. 상기 시스템은 (ⅰ) 적어도 반응물이 가열되는 하나의 제 1반응 모듈(예 : a heating unit); (ⅱ) 적어도 반응물이 진공하에서 존재하는 하나의 제 2반응 모듈(예 : a vacuum unit); 및 (ⅲ) 적어도 하나 또는 그 이상의 조직 검체를 일정 시기에 제 1모듈에서 제 2모듈로 운반하는 수송기관으로 구성된다. 각 모듈은 반응실과 반응실내에 임의로 포함되어 있는 화학적 조성물로 구성된다.
화학적 조성물은 일반적으로 화학적 조성물의 시간, 속도, 흐르는 방향을 결정하는 제어 회로가 달린 튜브 또는 파이프, 밸브, 및 펌프 등과 함께 유체 교류(fluid communication)가 일어나는 모듈의 반응실과 그 임의의 저장실 사이에서 이동된다. 하나 또는 그 이상의 조직 검체는 충분히 고형화될 수 있고, 제 1모듈에서 최초로 함침될 수 있으며, 그 후 상기의 충분히 고형화된 조직 검체는 왁스로 함침되고, 분할될 수 있는 블록(block)에 삽입된다. 통기, 일련의 진공 및 증압, 진동(shaking) 등의 교반은 조직 검체와 화학적 조성물 사이에 교류를 가속화시키기 위하여 사용될 수 있다. 조직 가공의 성공적인 완성은 마이크로톰(microtome)에 의한 분할 및 단편의 조직 구조 검사의 용이성과 질에 의해 나타나게 된다.
조직 검체는 화학물질 중 비수성 혼합물(non-aqueous admixture)로 고형화된다. 적절한 혼합물은 고정(fixing), 탈수(dehydrating), 및 제거(clearing) 기능으로 된, 적어도 둘 또는 세 가지 상이한 화학물질로 이루어진 비수성 혼합물이다. 고정 및 탈수 기능이 있는 시약의 예는 케톤, 알코올, 또는 그 결합을 들 수 있다. 고정제(fixative) 및 탈수제(dehydrant)의 비수성 혼합물에 있어서, 상기 두 시약의 부피비는 약 1:10 ~ 10:1(그러나, 이러한 극단적 부피비는 가공 시간을 변화시킬 수 있으며, 결과가 신뢰할만 하지 못할 수 있다); 약 1:6, 약 1:3, 또는 약 1:2 초과; 약 2:1, 약 3:1, 또는 약 6:1 미만; 약 1:1 또는 그 매개범위(예 : 약 1:1 ~ 6:1 범위내)일 수 있다. 제거 기능은 지방산 탄화수소, 벤젠, 리모넨, 미네랄 오일, 톨루엔, 및 크실렌에 의해 제공될 수 있다.; 미네랄 오일은 비가연성 및 비휘발성이므로 바람직한 제거제(clearant)이다. 상기 조직 검체는 적어도 약 2분, 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 30분, 약 45분, 또는 약 60분 동안 배양될 수 있다. 배양 온도는 약 30℃ ~ 80℃; 약 40℃, 약 50℃, 약 55℃, 또는 약 60℃ 초과; 약 70℃, 또는 약 75℃ 미만; 또는 그 매개범위(예 : 약 55℃ ~ 75℃ 범위내)일 수 있다.
고형화된 조직 검체는 그 후 왁스 용액으로 함침(impregnation)될 수 있다. 상기 조직 검체의 탈수와 같이, 왁스 용액은 수분 함량을 가능한 한 낮추는 것이 바람직하다. 따라서, 상기 왁스 용액은 용융되어 있는 수분을 증발시키기 위해 왁스에 열을 가하고, 감압하에서 탈가스화시킴으로써 함침시키기 이전에 미리 준비될 수 있다. 조직 검체의 함침은 조직 검체로부터 일정 용매를 제거하고, 상기 왁스 용액을 조직 검체에 주입시키기 위해서 증온 및 대기압 미만의 압력하에서 일어날 수 있다. 진공 상태는 확산을 촉진시키고, 검체내 존재하는 일정 용매의 증발 온도를 낮춤으로써 함침 시간을 감소시킨다. 상기 왁스 용액은 탈가스화되고 탈수화된 파라핀 및/또는 다른 왁스들로 구성될 수 있다. 상기 조직 검체는 적어도 약 3분에서 약 10분, 약 15분, 약 30분, 약 45분, 또는 약 60분 동안 배양될 수 있다. 왁스 용액은 약 25℃ 또는 30℃ 미만인 실온에서 고체상태일 수 있으며, 약 55℃ 또는 약 60℃ 초과에서는 녹을 수 있다. 배양 시간은 약 50 ~ 90℃ 이내; 약 55℃ 또는 약 60℃ 초과; 약 75℃, 약 80℃, 또는 약 85℃ 미만; 또는 그 매개범위(예 : 약 55 ~ 85℃범위내)일 수 있다. 상기 배양은 약 100torr 또는 약 760torr 미만의 감압하에서 수행되는 것이 바람직하다. 분할(sectioning)에 앞서, 상기 함침된 조직 검체는 조직 블록(tissue block)을 형성하기 위해 함침 시료를 주입시킬 수 있다.
반응실은 하기의 일정한 결합으로 이루어질 수 있다: 반응실에 적합하고, 조작자의 환경으로부터 반응실을 격리하기 위해 개작된 상기 반응실에 부착되거나 제거되는 덮개로서의 폐구(a closure); 반응실 내의 열을 유지시키기 위한 보온 단열재(thermal insulation); 반응실 내의 조건을 통제하기 위한 적어도 하나의 온도 및/또는 압력 탐침자; 반응실 내의 전자 부품을 화학물질로부터 격리하기 위한 봉인(seal); 및 적어도 하나의 탐침자(probe) 및/또는 타이머(timer)로부터 입력 데이터를 수용하는 제어 회로(control circuitry). 마찬가지로, 가열된 저장실(a heated reservoir)는 보온 단열재, 적어도 하나의 온도 및/또는 압력 탐침자, 봉인, 및 적어도 하나의 탐침자(probe) 및/또는 타이머(timer)로부터 입력 데이터를 수용하는 제어 회로의 일정한 결합으로 이루어진다. 고무 개스킷(rubber gasket)은 비수성 혼합물의 연료를 조작자로부터 격리시키기 위하여 임의의 가열된 저장실 뿐만 아니라 제 1모듈의 반응실에 있어서도 바람직하다. 제 2모듈에서는 진공 봉인이 반응실에 있어서 바람직하다.
바람직한 함침(impregnation)에 있어서, 상기 비수성 혼합물은 사용 전에 미리 혼합되고 용기에 저장된다. 상기 용기는 개봉되고, 적어도 그 내용물의 일부는 예열된 제 1저장실 안으로 주입된다. 고체 왁스는 제 2저장실에서 녹은 후 제 2모듈의 반응실 안으로 주입된다. 상기 비수성 혼합물은 조직 가공이 이루어지는 동안 제 1모듈의 저장실와 반응실 사이에서 이동된다; 대조적으로, 상기 왁스 용액은 조직 가공이 이루어지는 동안 제 2모듈의 반응실에서 머물게 된다.
그 시기의 말경에, 비수성 혼합물은 용기안으로 환수되고, 왁스 용액은 제 2저장실내로 환수되며, 상기 용액들은 재사용을 위해 안전하게 처리되고 저장된다.
또 다른 대안으로, 단일 반응실(a single reaction chamber)은 단일 유닛에 가열 및 진공 기능을 모두 결합한 모듈내에서 사용될 수 있다. 연속하여, 비수성 혼합물과 왁스 용액은 분리된 제 1저장실 및 제 2저장실에서 각각 반응실로 이동되고, 다시 환수된다.
상기 시스템은 수동식으로 작동되거나 기계적 수송기관으로 연결된 모듈 사이에 조직 검체가 이동하는 자동화된 방식으로 작동될 수 있다. 자동화된 시스템은 적재 장소로 구성되고/되거나 하역 장소를 더 포함하여 구성될 수 있다. 조직 검체는 시스템 내로 적재될 수 있으며, 무더기 또는 별개의 검체로 가공될 수 있다. 조직 검체는 적재 장소에서 시스템으로 유입될 수 있으며, 상기 검체가 임의로 수집되는 하역 장소로부터 시스템을 빠져나올 수 있다. 하드웨어 및 소프트웨어와 같은 제어 회로는 시스템내에서 조직 검체의 이동을 프로그램하기 위해, 조작하는 동안 반응 모듈로 접근하는 것을 막기 위해, 시간, 온도, 압력 또는 가공에 있어서의 화학물질의 총량 등의 매개변수를 수정하기 위해, 또는 상기 모두를 위해 사용된다.
여기서 "조직 검체"는 본 발명에서 기재된 방법으로 가공된 조직 단편이다. 그것은 또한 복수(ascites), 피, 늑막 삼출물(pleural exudate) 등의 생물 체액 또는 고체 기관의 흡인 또는 체강의 세척으로부터 획득된 세포 현탁액으로부터 나온 단일 세포를 말한다. 단일 세포들은 가공 전 부양성 원심분리 또는 침강에 의해서 작은 덩어리(pellet)로 될 수 있다. 고체 단편들(조직 슬라이스)은 흔히 조직학 및 병리학을 위해 가공된다.
고정 기능은 아세톤, 메틸 에틸 케톤 등의 케톤류; 아세틸알데히드, 포름알데히드, 글루타알데히드, 글리옥살 등의 알데히드류; 메탄올, 이소프로판올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 이소부탄올, 에틸 부탄올, 아밀 알코올 등의 저분자량 알코올류; 또는 그와 같은 류에 의해 제공된다. 비수성 혼합물에서 고정제는 약 15%(v/v), 약 20%(v/v), 약 25%(v/v), 약 30%(v/v), 약 35%(v/v), 또는 약 40%(v/v) 초과; 약 35%(v/v), 약 40%(v/v), 약 45%(v/v), 약 50%(v/v), 약 55%(v/v), 약 60%(v/v), 또는 약 65%(v/v) 미만; 또는 그 매개범위(예 : 약 20 ~ 60% 범위내)가 될 수 있다. 탈수 기능은 메탄올, 이소프로판올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 이소부탄올, 에틸 부탄올, 아밀 알코올 등의 저분자량 알코올류; 아세톤, 메틸 에틸 케톤 등의 케톤류; 또는 그와 같은 류에 의해 제공될 수 있다. 비수성 혼합물에서 탈수제는 약 15%(v/v), 약 20%(v/v), 약 25%(v/v), 약 30%(v/v), 약 35%(v/v), 또는 40%(v/v) 초과; 약 35%(v/v), 약 40%(v/v), 약 45%(v/v), 약 50%(v/v), 약 55%(v/v), 약 60%(v/v), 또는 약 65%(v/v) 미만; 또는 그 매개범위(예 : 약 20 ~ 60% 범위내)가 될 수 있다. 포르말린 등의 알데히드류와 같은 통상적인 고정과는 대조적으로, 케톤류 및 알코올류의 사용은 이들과의 화학적 결합없는 물리적으로 안정한 단백질(예 : 침전물)에 의해 고정제로서 역할을 한다고 추정된다. 지방산 탄화수소, 벤젠, 리모넨, 미네랄 오일, 톨루엔, 및 크실렌은 제거 기능에 사용될 수 있는데, 미네랄 오일이 바람직하다. 제거제는 비수성 혼합물의 약 10% 또는 약 15%(v/v) 초과; 약 25% 또는 약 30%(v/v) 미만일 수 있다. 가공은 디메틸 술폭시드(DMSO), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르(예 : TWEEN 80), 소디움 디메틸 술포숙시네이트, 순한 가정용 세제, 또는 그와 같은 류의 계면활성제(surfactant)를 첨가함으로써 촉진될 수 있다. 비수성 혼합물은 또한 산과 염기의 적절한 사용으로 완충될 수 있다.
극초단파 복사선은 또한 화학적 방법 보다는 오히려 물리적인 방법으로 조직의 고형화를 도울 수 있다. 물리적 화학적 가공 공정의 결합은 가공 시간을 감소시키고/감소시키거나 검체의 질을 증가시킬 수 있다. 특별한 물리적 또는 화학적 처리의 효과는 상기 처리의 생략이 조직 가공에 미치는 영향을 인지함으로써 결정될 수 있다.
마지막으로, 상기 조직 검체는 파라핀 등의 왁스, 미네랄 오일, 또는 불수용성 왁스들과 같은 시료로 함침된다. 바람직한 함침 시약은 상업적인 왁스 포뮬래(wax formulae), 녹는점이 다른 왁스 혼합물 - 왁스는 실온에서 고체이며, 사슬 길이에 따른 녹는점을 가지나, 미네랄 오일은 실온에서 액체이다. - 등이 있다.
상기 조직 검체는 고정되지 않을 수 있고, 2 ~ 3시간 동안 10%의 포르말린으로 부분적으로 고정될 수도 있으며, 10%의 포르말린 또는 다른 고정제에서 밤새 고정될 수도 있다. 상기 공정은 조직 검체의 가공이 고정에서부터 함침에 이르기까지 약 2시간 미만, 약 90분 미만, 약 60분 미만, 약 30분 미만, 약 15분 미만으로도 가능하도록 한다. 각 단계에서 용액이 적절한 온도에 도달하기 위해 요구되는 시간은 각 단계에서의 배양 시간과 비교하면 무의미하며, 가공에 있어서의 총 시간을 계산하는 것도 무시될 수 있다. 특히, 지방이 거의 없거나 전혀 없는 작은 생검(biopsies) 및 조직 뿐만 아니라, 두께가 약 1.5mm 미만인 작은 생검 및 조직은 신속히 가공될 수 있었다. 조직은 WO 2004/033622에서 기재된 바와 같이 비수성 혼합물 내에서 조작실(operating room)로부터 병리학 실험실로 운송될 수 있다: 여기서 사용된 UM-FIX는 약 10%의 저분자량의 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 및 약 90%의 메탄올이다. 이들 방부제는 또한 Vincek et al.(Lab. invest. 83:1-9, 2003)에서 구체화되어 있다. UM-FIX에서 보존된 조직에 존재하는 PEG를 제외하고는 본 발명의 공정내에서 수행되는데, PEG는 사용되지 않으며, 조직 가공에 있어서 필요하지 않은 것 같다. 이는 본 발명의 화학처리를 간소화하며, 기존 가공과 비교하여 볼 때, 필요한 배양의 수를 감소시킨다.
다음으로 함침에 있어서, 상기 조직 검체는 블록을 형성하기 위하여 함입될 수 있다. 조직 검체를 함입하기 위해 사용되는 시약은 바람직하게는 함침에서 사용된 물질과 동일하다, 그러나 다른 함침 시약도 사용될 수 있다. 불록화된 조직 검체는 약 1 ~ 50 마이크론 또는 약 2 ~ 10 마이크론의 조직 검체를 생산하기 위해 마이크로톰 상에 올려질 수 있다. 조직 단편(tissue sections)은 조직화학적 염색, 항체 결합, 인시투(in situ) 핵산 혼성화 또는 증폭, 또는 상기 모두에 있어서 더 가공될 수 있다. 그 후, 조직 검체는 일반적으로 현미경에 의해 조사되지만, 세포 특성들을 규명하기 위한 다른 기법들도 가공된 조직 검체를 조사하는데 사용될 수 있다. 그 예로는 자동화된 혈구계산(cytometry), 방사선 사진 촬영, 핵산의 전기영동을 들 수 있다. 조직 블록들은 문서 목적 또는 회고적인 연구를 위해 보관될 수 있다.
세포 특이적인 항체 및 화학적 염색에 따른 반응에 의한 세포 표현형은 탈파라핀화 등의 함입된 물질을 제거하거나 단백질 가수분해 소화 및 기계적 분해 등에 의해 조직을 해부함으로써 분석될 수 있다. 단일 세포들은 스프레이에 의해 분산되고, 유세포 분류기(flow cytometer)내에서 분석될 수 있다. 탈파라핀화된 조직은 현미경 재물대 상에 올려진 후, 레이저 및/또는 마이크로 매니퓰레이터(micromanipulator)에 의해 충분히 균일한 세포 개체군 및 물리적, 화학적 또는 유전적 기법에 의해 분석된 상이한 세포 타입들로 분할될 수 있다.
본 발명은 가공된 조직에서의 핵산(DNA 또는 RNA) 표본과도 호환성이 있다. 따라서, 유전학 연구는 임상 병리 실험실에서 일상적으로 수집된 검체에 대해서도 할 수 있다. 이들 기법의 결합된 힘은 상당할 것이다. 조직 구조의 관찰은 하나의 단편(section)을 염색 또는 면역세포화학에 의해 분석하거나 유전학적 분석을 위해 인근 단편으로부터 핵산을 추출함으로써 유전학과의 상관관계를 가질 수 있다. 예를 들면, 동일한 단편에서 병든 부위와 정상적인 부위는 돌연변이, 전사 수준 등의 유전적 차이를 규명함으로써 비교될 수 있다. 질병의 진행은 여러 시점에서 취해진 샘플의 유전적 차이점을 비교함으로써 구체화될 수 있으며, 종양의 진화는 주요한 암으로부터 대사 작용까지 유전적 차이점들의 축적에 의해 검토될 수 있다. 충분히 균일하거나 단지 영양분만이 강화된 세포들은 유세포 분류기(flow cytometer) 또는 미세해부로 분류함으로써 얻을 수 있다.
생식선에서의 돌연변이는 병의 유전적 소인을 추적하기 위해 사용될 수 있으며, 또한 체세포에서의 돌연변이는 병인에서의 유전적 변화를 결정하기 위해 사용될 수 있다. 병은 대사 작용 또는 신경학상의 무질서, 유해, 발생상의 하자, 또는 전염성을 일으키는 약품에 의해 야기될 수 있다. 본 발명은 간단한 절차 및 실온 저장에 의해 유전적 분석을 위한 물질을 보존한다. 그것은 인 시투 혼성화(in situ hybridization)에 의해 분석될 수 있으며, 또한 핵산이 조직으로부터 추출될 수 있다.
헤마톡실린-에오신 염색(Hematoxylin-eosin staining)은 흔히 조직 구조 연구를 위해 사용되며, 병리학자들에 의해 비교를 위한 표준으로 고려된다. 게다가, 본 발명은 Thompson (Selected Histochemical and Histopathological Methods, C.C. Thomas, Springfield, Illinois, 1966), Sheehan and Hrapchak (Theory and Practice of Histotechnology, C.V. Mosby, St. Louis, Missouri, 1973), 및Bancroft and Stevens (Theory and Practice of Histological Techniques, Churchill Livingstone, New York, New York, 1982)와 같은 일반적인 참고문헌에서 기재된 바와 같이, 트리크롬(trichrome), 레티큘린(reticulin), 무시카르민(mucicarmine), 및 엘라스틱 염료들을 포함하는 다른 염료들과 호환성이 있다. 그러한 염색 과정은, 비록 종결시키는데 단지 5분만이 요구되는 Fisher Scientific의 신속한 염색 절차를 이용할 수 있지만, 그 과정을 종결시키는데 30분 내지 몇 시간 정도 걸린다.
조직은 검시(autopsy), 내시경에 의한 생검 등의 생검(biopsy), 또는 외과의사로부터 얻을 수 있다. 투관침(trochar)으로 통용되는 펀치 생검 또는 바늘 생검과 같은 작은 검체는 본 발명에 있어 꽤 적합하다. 암 진료에 있어서, 염색된 조직 단편으로부터 병리학적 진단을 제공하는 능력은 외과의사에게 수술실에 있는 환자에게 사용될 수 있는 정보를 제공할 것이다. 예를 들면, 암은 절개된 조직에만 한정된다는 병리학자의 지시는 외과의사들이 치료에 있어 조심스럽게 행하도록 할 수 있고, 이웃한 건강한 조직을 보호하도록 할 수 있다. 그 대신에, 암은 절개된 조직에만 한정되지 않는다는 병리학자에 의한 결과는 환자가 여전히 수술실에 있는 동안 좀 더 적극적인 외과적 치료가 이루어지도록 할 것이다. 얼린 조직으로 하는 통상적인 조직학적 가공과는 달리, 본 발명에 따른 신선한 조직의 가공은 더 나은 형태를 가진 조직 검체를 제공할 수 있으며, 고정된 조직을 검토하는 병리학자에 의한 추후 확인의 필요성도 감소될 수 있다.
상기 발명에 따라서 처리될 수 있는 좋은 예가 되는 조직은 맹장, 방광, 뼈, 내장, 뇌, 유방, 악성종양, 경부(cervix; squamous epithelium), 담낭, 심장, 신장, 간, 폐, 난소, 이하선, 태반, 전립선, 피부, 배장, 고한, 갑상선, 편도선, 및 자궁(자궁근 및 자궁내막)을 포함한다. 림프세막 내피성 조직 및 지방 조직은 상기 발명에 따라서 가공될 수 있다. 광물질화된 조직은 본 가공에 의해 처리되기 전에 석회질 제거(decalcification)가 필요할 것이다. 다음의 분석은 DNA 돌연변이 및 RNA 발현의 탐지, 유전학, 조직학, 면역화학, 및 단백질 유전 정보학을 포함할 것이다.
본 가공에 의해 처리된 조직 단편은 또한 면역세포화학에서 이용될 수 있다. 본 가공은 항원이 원상태로 복구되고 보존되는 조직 검체를 제공하며, 고정제의 선택은 특정한 항원의 원상 복구 및 보존을 최적화할 수 있다. 비특이적인 결합 부위는 차단되고, 항원은 특이 항체, 즉 1차 항체(the primary antibody)에 의해 결합되며, 비결합 항체는 제거된다. 만약 1차 항체가 탐침자(probe) 또는 신호 발생 부분(signal generating moiety)으로 표지된다면 1차 항체는 직접적으로 탐지될 수 있지만, 탐침자에 특이적으로 1차 항체에 결합하는 2차 항체(a secondary antibody) 단백질을 부착하는 것이 바람직하다. 2차 항체는 1차 항체의 중쇄(heavy chain) 또는 경쇄(light chain)의 일정한 부위에 대하여 일어날 수 있다. 이것은 각각의 1차 항체가 수많은 2차 항체들과 결합하기 때문에 항원항체 결합(antigen-antibody conjugate)에 의해 발생된 신호를 증폭시킨다. 택일적으로, 증폭은 비오틴-스트렙타비딘(viotin-streptavidin)과 같은 다른 특이 상호작용을 통하여 발생할 수 있다. 항체 결합은 값비싼 시약의 사용을 감소하고, 높은 결합 비율을 유지하기 위하여 소규모로 수행된다; 이러한 소규모에서의 건조는 습윤실에서 배양함으로써 줄일 수 있다. 신호 발생 부위는 바람직하게 조직 내에 존재하는 효소이다. 예를 들면, 알카라인 포스페타아제(alkaline phosphatase) 및 홀스래디쉬 페록시다아제(horseradish peroxidase)는 2차 항체에 부착되거나 스트렙타비딘에 결합될 수 있다. 시각적으로 탐지될 수 있는 발색성(chromogenic), 형광성(fluorescent) 또는 발광성(luminescent) 물질을 생산하는 이들 효소는 기질로서 유용하다.
항원에 대한 염색 패턴은 탈색에 의해 밝혀진 세포의 구조적 환경에서 항원의 발현 위치를 밝혀내기 위해 사용될 수 있다. 항원 발현은 세포 또는 조직 타입, 발생 단계, 종양 진단 마커, 퇴행성 대사 과정, 또는 병원체에 의한 전염을 식별할 수 있다.
항원항체 결합은 또한 형광현미경, 자기방사법, 또는 전자현미경에 의해 형광성, 방사성, 또는 콜로이드 금속 탐침자로 볼 수 있다. 유사한 탐침자는 유전적 돌연변이 또는 전사를 확인하는 인 시투 혼성화(in situ hybridization)에 의해 조직 단편에서 핵산을 탐지하는데 사용될 수 있다; 택일적으로, 핵산(DNA 또는 RNA)은 조직 단편으로부터 추출될 수 있고, 블로팅(blotting)에 의해 직접적으로 분석될 수 있으며, 또는 추가적인 유전적 분석 이전에 증폭될 수 있다.
조직 가공은 다른 자동화된 시스템과 통합될 수 있다: 예를 들어, 파라핀으로 함입된 조직의 블록을 생산하는 함입 또는 분할 시스템; 조직 단편을 포함하는 박절(microtomy), 염색 및 커버슬립 시스템; 조직 단편 상에서 조직화학적 및/또는 면역화학적 신호를 시각화하는 현상 시스템; 단일 세포를 그들의 표현형에 따라 충분히 균일하거나 단지 영양분이 풍부한 개체군으로 분석하고/하거나 분류하는 유세포 분류기(a flow cytometer); 조직을 충분히 균일한 개체군으로 분리하는 미세해부 시스템; 슬라이드 상에서 조직 단편을 정밀 검사하고, 현미경을 통해 시각화된 신호를 계수화하며, 그 후 상기 이미지들을 조작하고, 저장하고, 전송하는 이미징 시스템(imaging system); 및 상기 시스템들의 결합.
세포 또는 조직, 특히 충분히 균일한 개체군으로 분류되고/되거나 분리된 세포 또는 조직은 DNA 또는 RNA 서열, 유전적 돌연변이, 유전자 발현 수준 또는 패턴에서의 변화, 단백질 발현 수준 또는 패턴에서의 변화, 및 상기의 결합에 의해 더욱 분석될 수 있다. 시스템 통합 및 데이터 관리는 영숫자 문자, 바코드, 고주파 인식(RFID, radiofrequency identification), 또는 다른 표지화에 의해 조직 검체 또는 그 홀더(holder)를 식별함으로써 용이하게 한다. 동일 또는 다른 표지는 특정한 조직 검체가 일련의 자동화된 시스템을 통하여 처리될 때, 그것을 식별하기 위하여 사용될 수 있다. 조직 검체에 대한 표지 및 다른 정보(예를 들면, 환자의 성명, 일자, 설비 위치, 병 또는 다른 병리학적 상황, 조직 타입, 진단, 표현형, 유전자형, 게놈 또는 단백질의 특징부여)는 그 데이터를 저장하고, 조작하며, 회수하기 위해 데이터베이스 관리 시스템에 등록될 수 있다. 상기 데이터베이스의 정보를 구하는 것은 통계적 기준에 따른 상관관계를 입증하거나 반증할 수도 있으며, 더 나은 조사를 제시할 수 있다.
외과 수술실, 병리학 실험실, 또는 그밖의 장소에서 수행될 수 있는 가공에 있어서의 초기 단계는 고형화(hardening) 그리고 궁극적으로는 검사(examination)를 위한 적절한 조직 검체를 준비하는 것이다. 일반적으로, 관심을 불러 일으키는 조직 슬라이스가 준비된다. 품질이 좋은 슬라이스 또는 투관침 샘플은 약 0.5 ~ 1mm, 약 1 ~ 3mm, 약 1 ~ 2.5mm, 또는 약 1.5 ~ 2mm의 두께로 가공하기 위해 준비된다. 상기 조직 슬라이스는 고형화된 검체가 분할될 준비가 될 때까지 뒤따르는 가공이 이루어지는 동안 조직이 포함되어 있는 조직 카세트(cassettes) 또는 다른 홀더(holder)에 놓인다. 택일적으로, 조직 검체는 생검(biopsy) 용도 등의 투관침으로 조직을 떼어내거나, 베어냄으로써 준비된다. 많은 카세트를 용이하게 다루기 위해서, 상기 카세트는 캐리어(carrier) 또는 배스킷(basket) 안에 넣을 수 있다. 그 후 상기 카세트 또는 홀더는 본 발명에 따른 비수성 혼합물 속에 넣을 수 있다.
조직 카세트 또는 홀더는 조직을 고형화하는 비수성 혼합물에 노출되며, 동시에 교반되고, 극초단파 복사선에 영향을 받는다. 단일 극초단파 유닛은 단지 하나의 고형화 용액이 필요하기 때문에 요구된다. 상기 고형화 용액은 몇몇 주기의 조직 가공을 통해 반응실에 머무르거나 이따금 반응실 및 저장실 사이에서 이동될 수도 있다.(예를 들면, 매 주기의 고형화가 종결된 후에 저장실로 옮겨지는 경우, 모든 조직 검체들이 가공된 경우, 또는 그 날 실험의 종결 시점). 고체 조직 검체를 포함하는 조직 검체의 캐리어 또는 카세트는 반응실 사이에서 수동식으로 이동될 수 있고, 또한 전동자 또는 트랙 수송기관에 의해서 이동될 수 있다.
조직 가공을 촉진시키는 교반을 제공하기 위해서 통기(aeration)가 공급된다. 튜브는 조직 검체 아래의 비수성 혼합물 내로 직접적으로 삽입될 수 있으나, 더욱 균일하고 완전한 교반을 위해서, 반응실 직경의 상당 부분에 접촉하는 상기 반응실 바닥의 확산 판(diffusion plate)이 용액 전체의 균일한 교반을 위해서 사용될 수 있다. 교반은 또한 압력 및 진공 사이클(P/V)에 의하여(예를 들면, 10 ~ 30초 동안 압력하에 있고, 부분적인 진공상태로 감소되며, 그리고 다시 압력하에 머물게 됨), 또는 저장실의 안팎으로 용액을 펌프질함으로써(예를 들면, 저장실를 통하여 용액을 순환시킴), 또는 P/V 사이클을 사용함으로써 제공될 수 있다.
상기 조직 카세트 또는 홀더는 진공 유닛에 포함된 왁스 용액에 넣는다. 일반적으로, 왁스는 조직 가공 절차의 일부로써 탈가스화된다. 탈가스화는 왁스로부터 유기 용매 및 잉여 수분을 제거한다. 상기 시스템에서 이 과정을 향상시키고, 왁스를 재사용하기 위해서 진공하에 지속적인 탈가스화가 수행될 수 있다.
다음으로, 상기 조직 검체는 함입된다(바람직하게는 자동화된 함입기를 이용). 상기 함입된 조직 검체는 이후마이크로톰(microtome)으로 분할되고, 현미경의 슬라이드 글라스 상에 놓음으로써 물 위에서 부유하게 된다.(바람직하게는 자동화된 분할기를 이용). 단편이 슬라이드 상에서 놓여진 후, 상기 슬라이드는 파라핀을 녹이기 위하여 가열되며, 그 단편은 슬라이드 글라스에 달라붙는다. 그때, 슬라이드는 염색되고(바람직하게는 자동화된 염색기를 이용), 덮개로 씌워진다(바람직하게는 자동화된 커버슬립을 이용).
바람직한 함침에 있어서, 본 발명에 따른 조직 검체를 고형화 및 함침시키기 위한 상기 시스템은 두 개의 분리된 모듈로 제한될 수 있다: 극초단파 유닛 및 진공 유닛. 조직 검체는 극초단파 유닛에서 고정되거나 고정되지 않은 조직을 고형화시키는 비수성 혼합물과 접촉하게 된다. 고형화된 조직 검체의 함침은 진공 유닛에서 종결된다. 하나의 진공 유닛은 오직 함침을 위해 요구된다. 교반은 내부에 통기를 일으키거나, 용액을 진동(shaking 또는 vibration)시키거나, 또는 용액 안으로 초음파 에너지를 전달하는 기계적 장치와 함께 제공될 수 있다. 택일적으로, 펌프는 P/V 사이클을 사용하거나 용액을 순환시켜 교반하기 위해 사용된다.
본 발명의 극초단파 유닛은 (ⅰ) 자전관(magnetron), 속도변조관(klystron), 진행파관(traveling wave tube)등의 극초단파 에너지 소스, (ⅱ) 상기 소스로부터 반응실로 극초단파 에너지를 전달하며, 부피 및 형태가 그 목적에 적합하도록 된 도파관(waveguide), 및 (ⅲ) 전달된 극초단파 에너지를 수용하고, 조직 검체를 적어도 화학적 고정(fixation), 탈수(dehydration), 및 탈지(defatting)에 의해 가공하는데 적합한 반응실로 구성된다. 상기 반응실은 다수의 상이한 조직 검체를 함유할 수 있다. 바람직하게는, 반응실의 내부 기하구조는 그 내용물의 가열 및 극초단파 에너지의 균일한 분산을 이루기 위하여 구성된다. 균일성은 주로 두가지 요소를 고려함으로써 이루어진다.
첫째로 반응실의 둘레는 그 반응실 내에서 극초단파 복사선의 반파장의 정수배가 되도록 구성된다. 반응실 안으로 도파관 입구의 적절한 배치와 더불어, 하나의 모드(a mode)는 여자(exciting)될 것이고, 외벽 주위로 전파될 것이다. 이러한 타입의 모드는 주로 외벽 근처에 존재하는 극초단파 필드에 의해 구체화된다. 유사한 현상은 음파가 매우 효율적으로 고체 벽에 나란히 이동하는 음향학에서 일어난다. 이들 타입의 모드는 회랑 모드(whispering gallery modes)로 간주된다.
두번째 고려사항은 반응실 내 용액의 경계와 그 벽 사이의 방사 거리(radial distance)이다. 최적의 공간은 경험적으로 그 공간을 변경함으로써 결정된다. 만약 공간이 너무 비좁다면, 극초단파 복사선은 주로 도파관 입구 근처에서 반응실로 흡수된다. 만약 공간이 너무 넓다면, 반응실은 공진 공동화(resonant cavity)되고, 그 속에 비수성 혼합물과 조직 검체, 카세트, 및 바스켓 등의 고체 총량에 민감하게 된다. 적절한 공간과 더불어, 상기 용액 및 고체의 효율적인 가열은 반응실 외부의 레벨 센서(level sensor)에 의해 측정되어지는 내용물의 광범위한 범위의 높이, 다시 말해서 그 속에서의 부피 이상으로 이루어진다. 총 부피의 10% 정도까지에 있어서도 여전히 내용물의 효율적인 가열을 제공한다.
마찬가지로, 상기 소스 및 도파관은 극초단파 복사선의 전달이 일어나는 동안 최소 에너지 손실을 이루기 위해 구성된다. 상기 극초단파 유닛은 소스로부터 반응실까지 약 2% 미만의 에너지 손실을 갖는 도파관으로 구성된다. 더 높은 에너지 손실은 값비싼 보호물의 사용 및 극초단파 에너지 소스용의 다른 보호 장치를 필요로 할 것이다.
가열은 극초단파 소스 음극의 가열 특성이 최소 시간을 요구하기 때문에 약 10 ~ 25초 주기의 파워 온오프(power on-off)를 순환시킴으로써 제어될 수 있다. 그러나, 이것은 조직을 연소시킬 수 있으므로, 가열은 극초단파 소스에 의해 반응실로 운송되는 전력에서의 지속적인 변이를 가능하게 하는 다양한 전류원을 통해 제어될 수 있다. 그러한 연소 또는 과도한 연소(over cooking)는 세포의 특성을 구별함이 없는 조직 구조의 균일한 염색으로써 유형화된다. 최대 출력(peak power output)을 감소시키는 것은 후자가 바람직하다.
극초단파 유닛은 반응실에 적합하고, 적어도 하나의 조직 검체를 수용하는 배스킷 등의 컨테이너(container); 반응실 내의 조건을 통제하기 위한 적어도 하나의 온도 및/또는 압력 탐침자; 소스에 의해 발송되고, 도파관을 통해 전달되며, 및/또는 반응실에 의해 수용되는 극초단파 에너지를 통제하기 위한 하나 또는 그 이상의 에너지 탐침자; 반응실에 적합하고 조작자의 환경으로부터 반응실을 격리하기 위한 폐구; 반응실 내의 열을 유지시키기 위한 보온 단열재; 반응실 내의 전자 부품을 화학물질로부터 격리하기 위한 보호물; 및 적어도 하나의 탐침자 또는 타이머로부터 입력 정보를 수용하고, 그것에 의해서 소스로부터 발송되고, 도파관을 통하여 전달되며, 및/또는 반응실에서 수용되는 적어도 하나의 극초단파 에너지를 조절하는 제어 회로의 일정한 결합을 더 포함하여 구성될 수 있다. 컨테이너는 바람직하게 극초단파 복사선에 투과성이 있으며, 그러므로 에너지는 컨테이너의 가열로 소비되지 않는다.
진공 봉인에 사용되는 물질의 특성은 환경으로부터 반응실 또는 저장실를 밀폐하여 격리하는 능력, 임의적으로 극초단파 복사선에 대한 충분한 투과성, 폐구에 합치되는 적합성을 확실하게 하는 가단성, 및 가공 용액에 대한 내약품성이다. 반응실 또는 저장실를 (ⅰ) 증발을 감소시키기 위한 폐구 및 개스킷/봉인과 (ⅱ) 보온 단열재를 갖추도록 변경하는 것은 가열기 또는 진공 유닛을 작동시키기 위해 요구되는 전력을 2 ~ 3배까지 감소시킬 수 있다.
상기 모듈은 동일한 공간을 점유할 수 있으며/있거나 상기 조직 검체는 고정된 상태로 놓일 수 있다. 극초단파 또는 열 에너지는 통제될 수 있으며, 동일한 장소로 전달되거나 또는 가공의 다른 시점에 상기 고정된 조직 검체쪽으로 전달될 수 있다. 화학적 용액 및/또는 증발 기체는 동일한 장소 안팎으로 이동될 수 있고, 또는 고정된 조직 검체와의 접촉에 있어서 안팎으로 이동될 수 있다. 바람직한 것은 두 개의 반응실을 사용함으로써 상기 시스템에 대한 공간의 필요성을 최소화하고, 상기 상이한 화학적 조성물을 분리된 저장실 및/또는 폐기물실로부터 배관(tubing 및 piping)에 의해 반응실로 운반하는 것이다. 컨트롤러(controller)는 반응실로부터 입력 신호를 수용할 수 있고/있거나 가공 사이클의 일정 시기에 시간을 측정함으로부터 기록된 입력 신호를 수용할 수도 있으며, 그것에 의해서 상기 상이한 화학적 조성물의 운반을 통제할 수 있다.
상이한 용액을 반응실 안팎으로 이동시키거나 상이한 용액을 함유하는 반응실들 사이의 배스킷을 이동시키는 것은 반응 단계들에서의 변화를 초래한다. 반응실 내부 위에서 약 5 ~ 10초 동안 배스킷을 지지하고 있는 것은 배스킷이 이동되기 전에 그 바닥 및/또는 양쪽 면에 있는 하나 또는 그 이상의 구멍을 통하여 잉여 용액을 도로 배출하도록 한다. 따라서, 배스킷이 반응실들 사이에서 이동되는 경로, 조직 가공 화학물질의 특정한 조성을 함유하는 각각의 반응실, 및 배스킷이 반응실 내에서 배양되는 시간은 본 발명에 따른 가공을 완성하기 위해 필요한 일련의 화학적 반응에 영향을 끼칠 것이다.
덮개(lid)는 제거될 수 있다; 개스킷은 덮개에 부착될 수 있으며, 덮개와 함께 제거될 수 있다. 상기 덮개와 개스킷을 제거하는 공정은 초기에 조직 검체를 함유하는 반응실과 이후에 조직 검체를 이동시킬 다음 반응실 모두에 있어서 수행된다. 그 후 배스킷은 제거되고, 5 ~ 10초 동안 반응실 내로 도로 넣어질 배스킷과 일정한 카세트로부터 용액을 배출하도록 하며, 그 공정에서 다음 화학 용액을 함유하는 반응실로 배스킷을 이동시킨다. 배관(tubing/piping)을 물로 세척하고, 반응실을 청소하는 것은 반응 뒤에 남겨진 용액의 총량이 매우 작기 때문에 필요하지 않다. 결국, 덮개와 개스킷은 원위치로 놓여진다. 그러한 이동의 총 시간은 약 1분이다.
본 발명에 따라서, 상기 구체물의 변화는 가시적이다. 다양한 조직 가공 시스템의 구성이 가능하며, 임의의 모듈은 시스템의 부분을 형성하기 위해 연결될 수 있다. 선택된 특이 구성은 임상 실험실에 의해 매일 기본적으로 가공될 수 있는 검체의 평균적인 수, 및/또는 조직학 또는 병리학 보고서가 준비되어야 하는 속도에 의해 영향을 받을 수 있다.
상기 시스템은 수동식으로 조작되거나 자동화될 수 있다. 수동식 조작은 특히 연구 및 개발(research & development)에 적절한데, 그 이유는 상기 공정 및 장치에 있어서의 변화, 또는 적은 수의 검체를 가공하는 설비에서의 변화가 신속하게 평가될 수 있기 때문이다. 자동화된 장치에 있어서, 조직 검체는 로봇 암(robot arm), 벨트 및 롤러에 의해 형성된 트랙 등의 기계적 수송기관에 의해서 운반될 수 있고/있거나 화학적 조성물은 내부식성(corrosion-resistant) 배관에 의해서 이동될 수 있다. 따라서, 조직 가공은 특정한 순서로 고정된 모듈 사이에서 검체를 운반하는 것, 고정된 조직 검체가 특정한 순서로 배양되는 그런 모듈을 상이한 화학물질로 채우거나 비우는 것, 또는 그 결합에 의해서 자동화 될 수 있다. 조직 가공의 매개변수를 제어하는 프로그램(예를 들면, 장치의 개시 및 종결, 많은 수의 검체를 적재 및 하역하는 것, 반응 시간과 같은 조건들, 시스템을 통한 검체의 경과)은 스크린 상에서 감시될 수 있다; 조직 가공의 매개변수(예를 들면, 약 15, 30 또는 45분 동안 반응실 내에 있는 검체)는 키패드(key pad)를 통해 조작자에 의해 미리 조절되거나 선택될 수 있다.
전동자(armature) 수송기관은 예를 들어, 집게 같은 장치로 검체를 움켜잡거나 갈고리 같은 장치로 검체를 잡을 수 있을 수 있다. 로봇 암은 인간과 같은 움직임을 수행하기 위해 관절로 이어져 있을 수 있다; 또는 직선 또는 평면적인 움직임으로 고정된 균형잡힌 선반에 올려질 수 있으며, 시스템 상에서 암(arm)의 높이를 다양화함으로써 다른 규모의 움직임이 임의로 제공될 수 있다. 트랙 수송기관은 마찰에 의해 검체를 트랙 상에서 고정하도록 탄력있거나 끈끈한 물질로 구성될 수 있으며, 또한 검체를 포획하기 위한 일정한 일련의 돌기 또는 벽으로 구성될 수 있다. 트랙은 연속적인 벨트로서 구성될 수 있고, 롤러 또는 스프로켓(sprocket) 장치와 더불어 움직임을 부과한 벨트로 조직 검체를 운반하는 일련의 벨트일 수 있다. 카세트 또는 홀더는 움켜잡기 위한 손잡이가 있거나 없는 대(stem)가 있거나 암(arm)으로 잡기 위한 루프(loop)가 있음으로써, 또는 트랙 내에 홈(groove)이나 새김눈(indentation) 내로 끼워맞춤으로써 운송에 적합하게 될 수 있다. 마찬가지로, 카세트 또는 홀더는 많은 수의 검체를 가공하기 위해 캐리어 또는 배스킷에 정렬될 수 있으며, 캐리어 또는 배스킷은 전동자 또는 트랙 수송기관에 의해 운송에 적합하게 될 수 있다.
전기 모터와 컨트롤러는 조작자의 실시간 명령 또는 저장된 프로그램의 선택에 의해서 조직 검체를 운반하기 위해 사용될 수 있다. 각각의 모듈에서 조직 검체에 의해 경과된 시간을 제어하는 간단한 장치는 일정한 속도로 그곳의 조직 검체 또는 홀더를 옮길 것이며, 의도된 배양 시간을 맞추기 위해 각각의 모듈을 통한 경로의 길이를 조정할 것이다.
배관(plumbing)의 다른 부품 뿐만 아니라 굽어진 튜브 또는 고정된 파이프는 부식을 막기 위해 유리, 스테인레스 철강, 폴리에틸렌, 폴리테트라플루오르오에틸렌, 폴리비닐클로라이드 등의 내화학성 물질로 제조되어야 한다. 컨트롤러 및 펌프/밸브는 화학적 조성물을 저장실에서 반응실로, 조성물이 재사용될 수 있다면 반응실에서 저장실로, 그리고 조성물이 시스템으로부터 세척되어야 한다면 반응실에서 폐기물실로 운반하기 위해; 저장실를 채우기 위해; 그리고, 조작자의 실시간 명령 또는 저장된 프로그램의 선택에 의해 폐기물실을 세척하기 위해 사용될 수 있다. 가열된 저장실와 가열된 배관 부품들은 화학적 조성물을 반응 온도에서 유지시키기 위해 또는 왁스 용액 등의 화학적 조성물이 이동가능한 액체 상태로 유지하는 것을 분명하게 하기 위해 필요할 수 있다. 증발 기체 봉인(vapor seals) 및/또는 냉각은 부식된 증발 기체를 시스템의 기계적, 전기적 부품으로부터 분리시키기 위해 필요할 수 있다.
본 명세서에 인용된 모든 특허, 특허 출원, 및 다른 간행물들은 전부 참고 문헌으로써 본 명세서에 기재된다.
하기의 실시예들은 본 발명을 상세히 설명하지만, 본 발명은 이들에 의해 어떤 방식으로든 한정되지 않는다.
도 1A는 본 발명을 구체화(embodiment)한 도식이다. 비수성 혼합물은 제 1저장실(1)에 저장되며, 조직 검체와 접촉하기 위해 극초단파 레토르트(2)로 운반된다. 이후조직 검체는 극초단파 레토르트(2)로부터 진공 레토르트(3)으로 이동된다. 왁스 용액은 제 2저장실(4)에 저장되며, 조직 검체와 접촉하기 위해 진공 레토르트(3)으로 이동된다.
도 1B는 본 발명의 또 다른 구체화의 도식이다. 조직 검체는 극초단파/진공 레토르트(5)에서 가공된다. 비수성 혼합물은 제 1저장실(6)에 저장되고 왁스 용액은 제 2저장실(7)에 저장된다. 이후비수성 혼합물과 왁스 용액은 조직 검체와 접촉 하기 위해 극초단파/진공 레토르트(5)로 이동된다.
도 2는 변성시킨 겔 전기영동(gel electrophoresis)에 의해 분리 후 검출된 18S 및 28S RNA 밴드를 보여준다. 신선한 마우스 간으로부터 추출된 RNA는 양성대조군으로 사용되었다(레인(lane) C). RNA는 마우스 두 마리의 가공된 간 조직으로부터 추출되었다(첫번째 마우스의 레인 1과 레인 2; 두번째 마우스의 레인 3와 레인 4). 레인 1 및 3은 각각의 반응에서 15분 동안 가공되었고, 레인 2 및 4는 각각의 반응에서 30분 동안 가공되었다.
[실시예 1]
일련의 비수성 용액으로 가공하는 조직은 미국 특허 6,207,408에 기재되어 있다. 특히, 일련의 네 가지 용액은 PCT 공개 WO 01/447683 및 미국 출원공개(published U.S. Appln.) 2001/0051365에서 조직 구조의 조사를 위한 조직을 성공적으로 가공하기 위해 사용되었다. 상기 선행 발명을 사용한 실례는 Morales et al.(Arch. Pathol. Lab. Med. 126:583-590, 2002; Am. J. Clin. Pathol. 121:528-536, 2004)에 기재되어 있다. 여기서, 우리는 성공적인 단편 분할(microtomy) 및 조직 구조(histology)에 대한 각 용액의 기여를 결정하기 위해 분리된 모듈에서 일련의 네 가지 용액으로 신속한 조직 가공 장치에서 사용된 프로그램을 변경하였다. 이들 변경된 프로그램을 사용하여, 시스템의 네 가지 모듈 내에 상이한 용액들이 선택되었고, 그 결과는 표 1에 나타내었다. 각각의 용액에 대한 필요성은 약 1.5mm 두께의 포르말린으로 고정된 다양한 조직으로 검토하였다.
[표 1]
성공적인 조직 가공을 위해서는 오직 두 용액만이 요구되었다.
| 극초단파 유닛 | 진공 유닛 | 단편 분할 (Microtomy) | 조직 구조 (Histology) | ||
| Ⅰ | Ⅱ | Ⅲ | Ⅳ | ||
| 15분 | 15분 | 15분 | 15분 | +++ | +++ |
| 30분 | 15분 | 15분 | + | + | |
| 45분 | 15분 | 15분 | + | ++ | |
| 45분 | 15분 | 15분 | ++ | +++ | |
| 45분 | 45분 | - | - | ||
| 45분 | 45분 | ++ | ++ | ||
| 60분 | 60분 | +++ | +++ | ||
용액 Ⅰ: 40% 이소프로판올, 40% 아세톤, 20% 폴리에틸렌 글리콜(MW300). 빙초산(glacial acetic acid)은 총 부피의 약 0.5%의 농도로 첨가되고, 디메틸 술폭시드(DMSO)는 약 62℃에서 총 부피의 약 1%의 농도로 첨가된다.
용액 Ⅱ: 55% 이소프로판올, 25% 아세톤, 20% 미네랄 오일. 빙초산(glacial acetic acid)은 총 부피의 약 0.5%의 농도로 첨가되고, 디메틸 술폭시드(DMSO)는 약 62℃에서 총 부피의 약 1%의 농도로 첨가된다.
용액 Ⅲ: 약 65℃, 약 640torr의 압력에서 30% 미네랄 오일 및 70% 용융된 파라핀.
용액 Ⅳ: 약 65℃, 약 640torr의 압력에서 용융된 파라핀.
국제공개 WO 01/447683 및 미국 출원공개(published U.S. Appln.) 2001/0051365의 실시예 4에 기재된 조직 가공의 변경에서, 검체는 다양한 통제하에 조직 가공 장치에서 가공되었다. 초기 가공은 네 가지 상이한 용액을 각각으로 함 유하는 두 개의 극초단파 유닛과 두 개의 진공 유닛으로 된 네 개의 모듈을 사용하였고, 모듈당 배양 시간은 15분이었다. 배양 시간을 확장하고, 용액 Ⅰ, Ⅲ을 사용하는 모듈을 생략한 조직 가공 장치를 프로그램한 것은 한 시간 동안 네 가지 용액을 사용한 것과 두 시간 동안 두 가지 용액을 사용한 것 모두 탁월한(+++, exellent) 결과를 나타내었음을 증명하였다. 탁월한 결과를 고려해 본다면, 조직 블록(tissue blocks)의 단편 분할(microtomy)은 파열되지 않고 수조(water bath)에서 떠다닐 수 있는 만족할만한 일련의 단편을 생산해야 했으며, 그 후 다양한 조직 타입을 두루두루 일정하고 균일하게 갈라짐이 없는 조직학적 염색을 하기 위해 슬라이드 글라스 상에 올려놓았다. 마이크로톰(microtome)으로 분할 후, 상기 조직 단편의 조작 특성은 염색된 단편에서 관찰된 구조를 기초로 한 효율적이고 신뢰할 수 있는 병리학적 진단을 제공하는데 필수적이었다. 불충분하게 염색되거나 염색을 빠뜨린 단편 부위는 그 단편에서 조직의 구조에 대한 판단을 제공하기 어려울 것이고, 그로 인해서 진단 결과에 대한 신뢰를 감소시킬 것이다. 그러므로, 임상 병리 실험실에서 사용되는 공정 및 장치는 일정하고 효율적으로 수행될 수 있는 타당성이 필요하고, 다양한 조직 타입이 가공될 수 있으며, 상이한 진단 기준이 표준화된 프로토콜(protocol)을 사용함으로써 처리된 조직에 적용될 수 있고, 값비싼 검체가 신뢰할 수 있게 가공될 것이다. 두 공정들은 탁월한 결과를 나타낸다. 그러나, 본 발명은 단지 두 개의 상이한 화학적 조성물과 일련의 비수성 용액을 사용하는 조직 가공에 필요한 시스템 구성요소의 절반만을 필요로 하는 이점을 가진다. 더 오랜 가공 시간은 수용할만한 절충안이며, 더 얇은 조직 검체를 사용하고/하거나 검체의 예비공정에 의해 경감될 수 있다.
단편 분할(microtomy)이 일어나는 동안, 불충분히 가공된 조직 검체는 일련의 단편을 형성하지 않고, 상기 단편은 수조 내에서 부유할 때 파열(excluding)되며, 그 단편 내에서 갈라짐(crack)이 일어난다. "양호한(Good)" 또는 "탁월한(Exellent)" 조직 가공 결과는 단편 분할(microtomy)이 세포 구조 및 조직 유기체 등에 있어 보존된 형태로 단편을 생성하기 때문에 조직 구조 염색, 항체에 의한 항원 결합, 인 시투 혼성화 등의 뒤이은 분석이 행해지는 동안에 그러한 하자를 경험하지 않는다. 그러나, 양호한(++, good) 결과는 (a) 동일한 조직 타입으로부터 생성된 단편들이 일치하지 않거나 (b) 몇몇 조직 타입은 일치하나 다른 조직 타입과는 만족스럽지 못하는 등 가변적이다. 실험실에서 가공되는 모든 검체에 대해서는 동일한 프로토콜을 사용하는 것이 바람직하기 때문에 그러한 가변적인 결과는 진단 목적으로써 수용할 수 없다.
용액 Ⅱ의 제거는 심지어 용액 Ⅰ의 배양 시간이 45분으로 연장되었을 때에도 탁월한 결과를 나타내지 않았다. 단편 분할(microtomy)은 수조 위에 부유하는 파라핀 단편이 슬라이드 글라스 상에 놓이기 전에 파열되고, 그 표면상에서 받아들일 수 없을 정도로 흩어짐을 나타내었다. 그러나, 조직 구조(histology)는 용액 Ⅰ의 배양 시간이 30분에서 45분까지 연장되었을 때, 탈파라핀화된 단편을 헤마톡실린-에오신(hematoxylin-eosin)으로 염색한 후 깨짐이 거의 없었음을 나타내었다.
그러므로, 남은 조사는 용액 Ⅰ을 제외하고 용액 Ⅱ로 수행되었다. 용액 Ⅱ에서의 배양은 45분 또는 60분이었다. 용액 Ⅲ과 Ⅳ을 각각 15분씩 처리한 경우는 만족할만한 조작 특성을 가진 단편이 생성되지 않았다. 일련의 단편은 비록 조직 구조는 적절했지만 만족할만한 리본(ribbons)을 형성하지 않았다. 오직 용액 Ⅲ만을 사용한 경우는 블록이 분할될 수 없었기 때문에 비참한 결과가 나왔다(45분간 오직 용액 Ⅲ만을 사용한 경우에서 45분간 용액 Ⅳ만을 사용한 경우를 참조). 용액 Ⅱ와 Ⅳ만을 사용한 경우는 적어도 단편 분할(microtomy)과 조직 구조(histology)에 대해서 양호한 결과를 나타냈다. 그러나, 45분 대신에 60분의 배양시간은 45분의 배양이 고정되지 않은(fresh) 조직을 만족스럽게 가공하지 못한 반면에, 60분의 배양이 고정되지 않은(fresh) 검체와 포르말린으로 고정된 검체를 모두 가공할 수 있었기 때문에 바람직하다. 또한, 더 짧은 배양 시간은 비장(spleen)과 같은 림프성 세망내피조직(lymphoreticular tissues)에서는 갈라짐, 유방과 같은 지방 조직에서는 달갑지 않은 형태의 불규칙한 결과가 나타났다. 다양한 조직 타입은 더 오랜 배양 시간으로 성공적으로 가공되었다.
[실시예 2]
가장 얇은 크기로 약 1.0 ~ 2.0mm, 바람직하게는 약 1.5mm의 조직 검체가 고정되지 않거나 포르말린으로 고정되거나, 또는 UM-FIX로 처리되어 가공되었다. 방광, 유방, 폐의 악성종양, 경부(cervix, squamous epithelium), 신장, 간, 난소, 비장, 편도선, 및 자궁(자궁내막 및 자궁근)은 단편 분할(microtomy) 및 탈파라핀화된 단편의 헤마톡실린-에오신 염색에 의한 조직 구조(histology)에 있어서 균일하게 탁월한 결과를 나타내었다.
상기 비수성 혼합물은 약 25% 아세톤, 약 55% 이소프로판올, 약 20% 미네랄 오일, 총 부피의 약 0.5% 농도로 첨가되는 빙초산(glacial acetic acid), 총 부피의 약 1% 농도로 첨가되는 DMSO로 구성된다.
세 가지 주요 구성성분은 3.8L 부피로 혼합되었고, 그 후 초산(acetic acid)과 DMSO가 첨가되었다. 검체는 약 62℃에서 비수성 혼합물 내에 약 60분 동안 배양되었다; 화학적 교류는 통기(aeration) 등으로 비수성 혼합물을 교반함으로써 촉진되었다. 검체와 비수성 혼합물은 모두 배양되는 동안에 극초단파 에너지에 의해 가열되었다.
비수성 혼합물 내의 화학물질 및/또는 극초단파 복사선에 의한 조직 검체의 고형화에 뒤이어, 조직 검체는 약 65℃ 및 약 640mmHg의 감압하에서 탈가스화되고 탈수화된, 용융된 파라핀 내에서 60분 동안 함침되었다. 함침은 P/V 사이클로 왁스 용액을 교반함으로써 촉진되었다. 약 2시간의 총 가공 시간이 종결된 후에, 상기 조직 검체는 단편 분할(microtomy) 및 후속 분석, 또는 저장을 위해 준비되었다.
약 2.5mm 두께의 슬라이스와 같은 더 두꺼운 조직 검체에 있어서, 비수성 혼합물과 왁스 용액의 배양 시간은 각각의 용액에 대해 약 90분 또는 120분까지 연장될 필요성이 있을 수 있다.
[실시예 3]
가장 얇은 크기로 약 1.0 ~ 2.0mm, 바람직하게는 약 1.5mm의 조직 검체가 고정되지 않거나 포르말린으로 고정되거나, 또는 UM-FIX로 처리되어 가공되었다. 하 기의 조건(즉, 두 반응이 각각 30분 동안 이루어진 경우)하에서 선(線, adenoid), 유방, 신장, 지방종(lipoma), 간, 태반, 피부, 비장, 및 자궁 등의 인간 조직은 단편 분할(microtomy) 및 탈파라핀화된 단편의 헤마톡실린-에오신 염색에 의한 조직 구조(histology)에 있어서 균일하게 탁월한 결과를 나타내었다.
상기 비수성 혼합물은 약 50% 아세톤, 약 30% 이소프로판올, 약 20% 미네랄 오일, 총 부피의 약 0.5% 농도로 첨가되는 빙초산(glacial acetic acid), 총 부피의 약 1% 농도로 첨가되는 DMSO로 포함된다.
세 가지 주요 구성성분은 3.8L 부피로 혼합되었고, 그 후 초산(acetic acid)과 DMSO가 첨가되었다. 검체는 약 62℃에서 비수성 혼합물 내에 약 30분 동안 배양되었다; 화학적 교류는 통기(aeration) 등으로 비수성 혼합물을 교반함으로써 촉진되었다. 검체와 비수성 혼합물은 모두 배양되는 동안에 극초단파 에너지에 의해 가열되었다.
비수성 혼합물 내의 화학물질 및/또는 극초단파 복사선에 의한 조직 검체의 고형화에 뒤이어, 조직 검체는 약 65℃ 및 약 640mmHg의 감압하에서 탈가스화되고 탈수화된, 용융된 파라핀 내에서 30분 동안 함침되었다. 함침은 P/V 사이클로 왁스 용액을 교반함으로써 촉진되었다. 약 2시간의 총 가공 시간이 종결된 후에, 상기 조직 검체는 단편 분할(microtomy) 및 후속 분석, 또는 저장을 위해 준비되었다.
직경이 약 2 ~ 3mm인 실린더와 같은 투관침으로 획득된 더 작은 생검 검체(biopsy specimens) 있어서, 비수성 혼합물과 왁스 용액의 배양 시간은 각각의 용액에 대해 약 15분까지 단축될 필요성이 있을 수 있다.
다른 구체물(embodiments)에서, 맹장, 내장, 유방, 수란관(나팔관), 신장, 간, 폐, 이하선, 태반, 전립선, 갑상선, 및 자궁은 각각의 반응 시간이 약 20분으로 단축되었을 때, 단편 분할(microtomy) 및 조직 구조(hitology)를 위해 가공되었다. 그러나, 또 다른 구체물에서, 신선한 마우스 간 뿐만 아니라 선(線, adenoma, 맹장, 유방, 경부, 쓸개, 방광, 신장, 간, 폐, 난소, 피부, 비장, 갑상선, 편도선, 및 자궁체는 약 15분으로 단축되었을 때, 단편 분할(microtomy) 및 조직 구조(hitology)를 위해 가공되었다.
[실시예 4]
도 1A에서 보는 바와 같이, 조직 가공은 하기의 방법으로 발명의 구체물을 사용하여 수행될 수 있다. 3.8L 비수성 혼합물의 용기가 결합되고, 파라핀 덩어리(pellets)가 첨가된다. 비수성 혼합물은 미리 데워지며, 액체 상태에서 탈가스화되고 탈수화되었던 고체 파라핀은 검체가 적재되기 전에 용융된다. 진공 상태(vaccum)가 초래되고 기압은 용액을 이동시키기 위해 상승되며, 만약 필요하다면 버블링(bubbling, pump BP) 또는 P/V 사이클(pump AP)로 레토르트 내의 용액에 교반을 제공한다. 연결부가 시스템의 다른 부품들을 이어주는 굽은 배관 등의 커넥션(connection) 및 포트(port)는 펌프 LP와 솔레노이드 밸브(solenoid valve)를 사용하여 제 1저장실와 극초단파 레토르트 사이의 용액을 이동시키기 위해 사용될 수 있다. 고형화 및 초기 함침 등의 극초단파 레토르트 내의 조직 가공은 버블링(bubbling) 펌프를 사용하는 기계적 교반으로 대기압에서 수행되기 때문에, 진공 레토르트에서의 함침은 오직 공기 펌프(air pump)와 관련하여 압력의 감소를 필요로 한다.
용액과 레토르트들은 조작 온도를 적절하게 하기 위하여 데워진다. 예를 들면, 비수성 혼합물은 극초단파 레토르트(2)로 이동하기 전에 제 1모듈의 저장실(1)에서 전기 히터(electric heater)에 의해 약 55℃로 예열된다. 비수성 혼합물은 일반적으로 극초단파 레토르트(2)가 개시되기 전에는 제 1저장실(1)로 환수되므로 조직 검체는 빈 반응실에 놓여있게 된다. 마찬가지로, 고체 파라핀은 왁스 용액이 일반적으로 매일 실험이 개시되는 때에는 진공 레토르트(3)로 이동되고, 실험이 종결될 때에는 제 2저장실(4)로 환수되는 제 2모듈의 저장실(4)에서 용융된다. 용액의 온도는 극초단파 레토르트(2)에서는 약 62℃에서, 진공 레토르트(3)에서는 약 65℃에서 유지된다. (ⅰ) 제 1저장실(1)와 극초단파 레토르트(2) 또는 (ⅱ) 제 2저장실(4)와 진공 레토르트(3) 사이의 튜브(tube)는 이원 유체 커뮤니케이션(two-way fluid communication)을 제공한다. 비수성 용액 및 왁스 용액의 두 저장실(1, 4)는 분리되어 있다. 레토르트(2, 3) 내의 용액 및/또는 배스킷의 존재 유무는 그 용액의 치환(displacement) 또는 부피를 탐지하는 레벨 센서로 결정될 수 있다.
카세트 내의 조직 검체를 함유하는 구멍이 뚫린 배스킷은 적재된다. 적재 장소(loading station)는 임의적이며, 적재 장소가 존재한다면 배스킷을 극초단파 레토르트(2)로, 그 후에는 진공 레토르트(3)로 이동시키는 수송기관 상에서 비수성 혼합물을 함유하는 적재 장소에 속한 반응실에 놓일 수 있으며, 또한 직접적으로 극초단파 레토르트(2)의 반응실 내로 놓일 수 있다. 수송기관은 가역적으로 배스킷 과 결합하는 훅(hook)을 가진 로봇 암(robot arm)이 바람직하다; 대체할 수 있는 흡수성있는 깔판을 가진 팬(pan)은 로봇 암에 결합되고, 뚝뚝 떨어지는 비수성 혼합물 또는 왁스 용액을 담기 위해 배스킷 밑에서 선회한다. 덮개는 경첩(hinge)에 의해서 각각의 반응실에 부착된다; 각각의 덮개는 고무 개스킷을 사용하여 반응실과 함께 봉인을 형성하며, 전기 모터(M)로 작동되는 체인에 의해 열리고 닫힌다. 결국, 조직 함침이 완료될 때, 적재된 배스킷은 진공 레토르트로부터 이동된다. 하역 장소는 임의적이며, 하역 장소가 존재한다면, 하역 장소에 속한 반응실은 잉여의 용융된 파라핀이 배스킷으로부터 배출될 수 있도록 하기 위하여 비어있게 된다. 적재 장소와 하역 장소 사이에 배스킷을 이동시키는 시간은 약 10초 미만이다. 그때, 조직 카세트는 배스킷으로부터 분리될 수 있다.
실시예 2 또는 3에서 기재되어 있는 가공은 상기 시스템에서 사용될 수 있다. 비수성 혼합물은 극초단파 레토르트(2)와 가열된 저장실(1) 사이에서 이동된다. 배스킷은 극초단파 레토르트(2)의 비어있는 반응실 내로 이동되고, 반응실의 덮개는 닫히며, 비수성 혼합물은 조직 검체와 접촉하기 위해 가열된 제 1저장실(1)로부터 극초단파 레토르트(2) 내로 이동되고, 상기 비수성 혼합물은 조직 검체를 적절히 고형화시키는 배양이 종료될 때 가열된 제 1저장실(1)로 환수되며, 그 후 덮개가 열리고 배스킷은 왁스 용액을 함유하는 진공 레토르트(3)으로 이동되며, 조직 검체는 함침이 종료될 때까지 그 속에서 배양된다.
함침 시약을 함유하는 반응실은 복사 열 소스(radiant heating source)를 사용하여 가열된다. 택일적으로, 히터(heater)는 용융된 상태의 함침 시약과 접촉하 는 튜브(tube) 내에 순환하는 물의 온도를 유지한다. 예를 들면, 튜브의 코일은 반응실 내에 위치할 수 있으며, 그 후 히팅 코일(heating coil)은 열을 내용물로 이동시킬 것이다. 바람직하게는, 상기 히팅 코일(heating coil)은 열을 벽을 통해 반응실의 내용물로 유도하는 전선(electrical wire)으로, 반응실의 외벽을 둘러싸는 외부 히팅 코일로 대체된다. 진공 레토르트 내에서의 교반은 아주 작은 압력인 0.35Kg/cm2 및 500mmHg의 진공 상태와 관련되는 P/V 사이클에 의해 수행될 수 있다.
각각의 배양 시간 및 온도 등의 다른 조건들은 실시예 2 ~ 3에서 기재된 바와 같다. 상기 시스템은 일정한 가스를 함유하고 그 가스를 발산하는 캐비넷 안으로 넣을 수도 있다(가스 제어). 탁상용 시스템(tabletop system)은 조직 검체를 이동시키는 기계적 수송기관을 사용할 수 있고, 또는 수동식으로 이동될 수 있다. 택일적으로, 몸통 높이의 유리창이 달린 문은 조작자가 움직임이 없는 배스킷에 접근하고, 배스킷을 시스템 내에 적재하거나 시스템으로부터 하역하며, 배스킷의 움직임을 관찰하는 것을 가능케 한다. 안전을 위해서는, 레토르트 상에 로봇 암(arm) 또는 덮개(lid)가 움직일 때, 문을 잠그는 것이 바람직하다. 무릎 높이의 또 다른 문은 조작자가 (ⅰ) 비수성 혼합물의 용기를 극초단파 레토르트(2)에 연결된 제 1저장실(1)로 인도하는 하역구(port)와 결합하도록 하며, (ⅱ) 진공 레토르트(3)에 연결된 제 2저장실(4) 내의 파라핀을 용융시키도록 한다.
도 1B에서 보는 바와 같이 대안적인 구체물(embodiment)에서는, 단일 레토르트(5)가 동일한 위치에서 극초단파 및 진공 기능이 모두 병합된 것으로 사용될 수 있다. 제 1저장실(6)로부터 나온 비수성 혼합물과 제 2저장실(7)로부터 나온 왁스 용액은 조직 검체를 두 레토르트 사이에서 이동시켜야 할 필요성을 없앤 극초단파/진공 레토르트(5) 내로 성공적으로 이동된다.
[실시예 5] 조직 단편(tissue sections)에서의 항원 탐지
조직 검체는 포르말린 또는 UM-FIX로 고정되었고, 이후각각의 두 반응실에서 30분 동안 가공되었다. 파라핀 단편을 마이크로톰(microtome) 상에서 3 마이크론의 두께로 분할하였고, 수조(water bath) 안에 놓았으며, 슬라이드 글라스 위로 띄웠다. 파라핀은 30분 동안 58℃의 오븐, 또는 바람직하게 약 18시간 또는 밤새도록 37℃의 오븐 안에 슬라이드를 넣어서 용융시켰고, 그 후 슬라이드는 10분 동안 크실렌 용기 안에서 탈왁스화되었다. 슬라이드는 두 개의 순수한 알코올 용기, 두 개의 95% 알코올 용기, 및 한 개의 90% 알코올 용기에 각각 1분 동안 고농도에서 저농도로 알코올(에탄올) 용액 내에서 다시 수화(rehydrating)하였으며, 이후2분 동안 수돗물(tap water)에 담궈서 헹구었다.
내재성 페록시다아제(Endogenous peroxidase)는 15분 동안 배양된, 6%의 과산화수소 및 메탄올로 이루어진 용액 또는 6%의 과산화수소 35ml와 메탄올 140ml로 된 용액으로 차단되었다. 슬라이드는 2분 동안 수돗물에 담궈 헹구었고, 2분 동안 인산 버퍼 식염수(PBS)에 담궈 헹군 후, 건조되었다.
슬라이드는 습윤실로 이동되었고, 정상 말 혈청(NHS, normal horse serum)이 10분 동안 억제하기 위해 첨가되었다. 잉여의 정상 말 혈청을 슬라이드로부터 따라 내었고, 특이 1차 항체(primary antibody)는 실온에서 습윤실 내의 조직 단편 위에서 30분 동안 배양되었다. 슬라이드는 스퀴즈 병(squeeze bottle)을 사용하여 앞뒤로 움직이면서 PBS로 세척되었으며, 2분 동안 PBS 용기 내에 담구고, 잉여의 PBS는 각각의 슬라이드를 건조시켰다. 또한, 2차 항체(secondary antibody) 또는 바이오티닐레이트(biotinylate)화 된 항토끼(anti-rabbit) 또는 항마우스(anti-mouse)로써 알려진 링킹 솔루션(Linking solution)은 각각의 조직 단편에 첨가되었고, 실온에서 습윤실 내에 25분 동안 배양되었다. 상기 토끼, 랫트(rat) 및 마우스 2차 항체(예를 들면, anti-IgM, anti-IgG)는 Dako社(Carpinteria, CA)로부터 구할 수 있으며, 약 1:600의 희석액에서 사용된다. 슬라이드는 스퀴즈 병을 사용하여 PBS로 세척되었으며, 2분 동안 PBS 용기 내에 담구고, 잉여의 PBS는 각각의 슬라이드를 건조시켰다.
신호(signal)는 제작자의 장치(Vector Laboratories社)에 따라서 전개되었다. 아비딘-비오틴 컴플렉스(ABC, Avidin-biotin complex) 용액은 조직 단편에 첨가되었고, 습윤실에서 25분 동안 배양되었다. 슬라이드는 스퀴즈 병에서 PBS로 세척되었고, 2분 동안 PBS 용기에 있는 랙(rack) 내에 담궜다. 랙(rack)을 6분 동안 디아미노벤지딘(DAB, diaminobenzidine) 색원체(chromogen)의 용기 내에 담궜으며, 그 후 4분 동안 서서히 세척하기 위해서 흐르는 수중에서 담구었다. 조직 단편은 실온에서 약 15 ~ 90초로 헤마톡실린(hematoxylin)을 대비염색제로 하여 착색되었다(염색 시간은 헤마톡실린의 년수에 의존할 것이다). 슬라이드는 잉여의 대비염색제(counterstain)를 제거하기 위해 3분 동안 흐르는 수중에서 세척되었고, 85%의 알코올에서 순수한 알코올로 각각 약 10초 동안 알코올 용기 내에서 탈수화되었으며, 크실렌으로 정화하였고, 슬라이드 글라스로 덮었다. 결과는 표 2에 나타내었다.
[표 2]
조직 단편의 항체 염색(m, 모노클로날; p, 폴리클로날)
| 조직 | 고정제 | 항체 | 염색 | 주석(comment) | ||||||||||||
| 전립선 (prostate) | 포르말린 | cytokeratin HMK (m M630, Dako) | + | 양성샘(benign glands)에 국한된 염색, 선암(adenocarcina)의 포커스는 부정적이다. | ||||||||||||
| AMACR (p 5045, Dako) | - | |||||||||||||||
| 편도선 (tonsil) | 포르말린 | CD20 (m M755, Dako) | + | 예상된 반응 패턴 | ||||||||||||
| CD10 (m NCL-DC10-270 Vector) | + | |||||||||||||||
| CD3 (p A0452, Dako) | + | |||||||||||||||
| 간 (liver) | 포르말린 | HepPar1 (m M7158, Dako) | + | 간세포에 국한된 염색 | ||||||||||||
| cytokeratin7 (m M7018, Dako) | + | 담관 상피의 선택적인 염색 | ||||||||||||||
| 폐 (lung) | UM-FIX | thyroid transcription factor-1 (m M3575, Dako) | +/- | 폐포세포에서는 긍정적이나 선암에서는 부정적이다. | ||||||||||||
| P63 (m P09-0P09L, Oncogene Science) | +/- | 기저의 기관지 상피에서는 긍정적이나, 종양(tumor)에서는 부정적이다. | ||||||||||||||
| 유방 (breast) | 포르말린 | CD31 (m M823, Dako) | + | 내피 | ||||||||||||
| 신장 (kidney) | 포르말린 | renal cell antigen (m NCL-RCC, Vector) | + | |||||||||||||
| glomerular epithelial protein (m BioGenex) | + | |||||||||||||||
| 폐 (lung) | UM-FIX | cytokeratin cocktail (m M3515, Dako) | + | 폐포세포 및 기관지 상피에서는 상당히 긍정적이나, 종양은 아니다. | ||||||||||||
| CD68 (m M814, Dako) | + | 조직구(histiocytes) | ||||||||||||||
| 비장 (spleen) | 포르말린 | FVⅢ-related antigen (m M616, Dako) | + | |||||||||||||
| CD45 (m M701, Dako) | + | |||||||||||||||
| 태반 (placenta) | UM-FIX | human chorionic gonadotropin (p A231, Dako) | + | |||||||||||||
| human placental lectin (p A137, Dako) | + | |||||||||||||||
| P57 (m MS1062-P, Lab Vision) | + | |||||||||||||||
| CD34 (m 347660 B-D) | + | |||||||||||||||
| Myeloperoxidase (p A324, Dako) | + | |||||||||||||||
| 소장 (small bowel) | 포르말린 | chromogranin A (m M869, Dako) | + | |||||||||||||
| RET oncoprotein (m NCL-RET, Vector) | + | |||||||||||||||
| 맹장 (appendix) | 포르말린 | serotonin (m M758, Dako) | + | |||||||||||||
| 유방 (breast) | 포르말린 | estrogen receptor(1D5) (m M7047, Dako) | + | 섬유낭포병(fibrocystic disease)에 약한 반응 | ||||||||||||
| progesterone receptor (m M3569, Dako) | + | 상당히 긍정적 | ||||||||||||||
| 신장 (kidney) | UM-FIX | P63 (m M7247, Dako) | + | 이행세포 암종(transitional cell carcinoma) | ||||||||||||
| cytokeratin 20 (m M7019, Dako) | - | |||||||||||||||
| 피부 (skin) | UM-FIX | epithelial membrane antigen (m M613, Dako) | + | 피지선 | ||||||||||||
| T-F antigen (m M0898, Dako) | + | 피지선 | ||||||||||||||
| 간 (liver) | 포르말린 | CD68 (m M814, Dako) | + | 쿠퍼세포(Kupffer cells) | ||||||||||||
| cytokeratin 7 (m M7018, Dako) | + | 담관 상피 | ||||||||||||||
| 유방 (breast) | 포르말린 | S100 protein (p Z311, Dako) | + | 근상피성 세포 | ||||||||||||
| 자궁 (uterus) | 포르말린 | desmin (m M760, Dako) | + | 자궁근과 혈관벽(vessel wall) | ||||||||||||
| progesterone receptor (m M3569, Dako) | + | 자궁근 | ||||||||||||||
[실시예 6] 가공된 조직 단편으로부터의 DNA 추출
6 마이크론의 두 조직 단편을 1.5ml 마이크로퓨즈 튜브(microfuge tube)에 놓고, 800μl 크실렌을 첨가한 후, 와류(vortex)에 의해서 혼합시키고, 400μl 순수한 에탄올을 첨가하고, 와류에 의해서 혼합시킨 후, 상기 튜브는 마이크로퓨즈 안에서 5분동안 원심분리된다. 그리고, 표면에 뜬 부유물(supernatant)을 옮겨 따른다. 상기 펠릿(pellet)에 800μl 순수한 에탄올을 첨가하고 와류에 의해서 혼합시킨다.
표면에 뜬 부유물은 원심분리 후에 옮겨 따르고, 그 때 100μl의 세척제(detergent)와 프로티나제(proteinase) K 용액(1% NP40 또는 Triton X-100, 2.5mg/ml 프로티나제 K 2.4μl)을 펠릿에 첨가한 후 1시간 동안 55℃에서 배양시킨다. 프로틴아제 K는 10분 동안 95℃에서 배양함으로써 불활성화된다. DNA를 함유하는 부유물은 5분 동안 마이크로퓨즈에서 원심분리에 후에 모아진다. 상기 재료는 PCR을 할 준비가 된다. 만약 서던 블랏팅(Southern blotting)이 예정되어 있다면, 그것은 더 침전되고/되거나 추출되어야 한다. 더 많은 단편이 제한 분석(restriction analysis)을 위한 충분한 DNA를 확보하기 위해 요구될 것이다.
[실시예 7] 가공된 조직 단편으로부터의 RNA 추출
가공된 조직 블록으로부터 각각 7μm인 10 개의 단편이 일회용 칼을 사용하여 분할되었다. 그것들을 50ml Falcon 튜브 안에 놓고, 20ml의 크실렌으로 탈파라핀화한 후, 남은 조직은 30분 동안 순수한 알코올로 2회 세척되었다. 상기 조직은 4M 구아니디니움 티오시아네이트(guanidinium thiocyanate), 25mM 나트륨 시트레이트(Na citrate) pH 7.0, 0.5% N-라우릴사코신(N-laurylsarcosine), 및 0.1M 2-머캡토에탄올(2-mercaptoethanol)을 함유하는 용액 내에 0.5gm/ml로 현탁시켰다. 상기 용액은 와류에 의해 혼합되었고, DNA는 18 ~ 22의 표준 주사기 바늘(gauge syringe needle)에 의해 관통시킴으로써 전단(shearing)되었다.
RNA를 함유하는 용액은 몇 개의 5ml 원심분리 튜브(Sorvall) 내 5.7M CsCl 2.8ml에서 정교하게 층을 이루게 되었고, RNA는 35,000rpm의 SW55Ti rotor와 Beckman L8-53 울트라센트리퓨즈(ultracentrifuge) 내에서 14시간 동안 18℃로 원심분리를 수행함으로써 침전되었다. 상층 일부분은 튜브 밑바닥에 있는 RNA 펠릿(pellet)을 남기기 위해 조심스럽게 제거되었다. 상기 펠릿은 리보뉴클레아제가 없는 물로 재현탁되었고, Eppendorf 튜브는 10분 동안 14,000rpm에서 빠른 속도로 회전되었다. RNA를 함유하는 표면에 뜬 부유물은 보관되었고, 자외선(UV) 흡광도가 측정되었다: 1 OD280/cm의 소광 계수(extinction coefficient)는 약 40μg/ml RNA와 동등한 것으로 평가되며, OD260/OD280 비율은 약 1.8 ~ 2.0 사이에 있어야 한다.
마우스 두 마리의 간 덩어리를 약 2시간 동안 UM-FIX에 놓고, 실시예 3에 따라 가공했다. 조직은 두 반응 각각에서 15분 또는 30분 동안 가공되었다. 상기 가공된 조직의 18S 및 28S rRNA 밴드는 변성시킨 겔 전기영동에 의해 분리되었다(도 2). 신선한 마우스 간으로부터 추출된 RNA는 양성 대조군으로 사용되었다(레인 C). RNA는 마우스 두마리의 가공된 간 조직으로부터 추출되었다.(첫번째 마우스로부터 의 레인 1 및 2; 두번째 마우스로부터의 레인 3 및 4). 레인 1 및 3은 각 반응에서 15분 동안 가공되었다; 레인 2 및 4는 각 반응에서 30분 동안 가공되었다. 상기 18S 및 20S rRNA 밴드는 예상된 비율로 나타났고, 감손(degradation)은 보이지 않았다.
수적 범위를 진술함에 있어서, 범위 내의 모든 수치는 또한 기재된 것으로 이해되어야 한다(예를 들면, 1 ~ 10은 또한 2 ~ 10, 1 ~ 5, 및 3 ~ 8과 같은 모든 매개 범위 뿐만 아니라 1 ~ 10 사이의 모든 통합 수치를 포함한다). 용어 "약(about)"은 당업자가 발명의 조작 또는 그 특허성에 영향을 끼치지 않고, 이해할 수 있는 측정과 연관된 통계적 불확실성 또는 수적 양에 있어서의 다양성을 나타낼 수 있다.
청구항 및 그 법적 균등물의 범위 내 의미를 내포하는 모든 변경 및 치환은 그 범위 내에서 받아들여질 수 있다. 연결구 "comprising"을 사용하는 청구항은 상기 청구항의 범위 내에 있는 다른 구성 요소들이 포함되는 것을 가능하도록 한다; 상기 발명은 또한 용어 "comprising" 대신에 연결구 "consisting essentially of"(즉, 만약 그것들이 발명의 조작에 실질적으로 영향을 끼치지 않는다면, 청구항의 범위 내에 있는 다른 구성 요소들이 포함되는 것을 가능하도록 한다) 및 연결구 "consisting"(즉, 보통 발명과 관련된 불순물 또는 비논리적인 활동과는 다른 청구항에 기재된 구성 요소만이 가능하도록 하는)를 사용하는 청구항에 의해 기재될 수 있다. 이들 세 가지 연결구 중 어떤 것도 본 발명을 청구하기 위해 사용될 수 있 다.
상기의 구체적으로 기재된 구성 요소는 만약 그것이 청구항에서 명백하게 재인용된다면, 청구된 발명을 제한하는 것으로 해석될 수 있을 것이라는 것은 이해되어야 한다. 따라서, 상기 인정된 청구항은 청구항의 의미를 알 수 있는 구체화로부터 일정한 한계 대신에 법적 보호의 범위를 결정하는데에 있어 기초가 된다. 대조적으로, 선행 기술은 청구된 발명이 자명하고, 신규성이 상실되는 발명으로부터 특이적 구체화의 확장까지 명백하게 배척된다.
게다가, 청구항의 제한들 사이에서의 특별한 관계는, 만약 그러한 관계가 청구항에 명백하게 재인용되지 않는다면, 어떤 것도 의미하지 않는다(예를 들면, 물(物) 청구항에서의 구성 요소의 배치 또는 방법 청구항에서의 공정 순서는 명백하게 그렇게 될 것이라고 진술하지 않는다면, 그 청구항을 제한하지 않는다. 여기서 기재된 개개 구성 요소들의 모든 가능한 결합 및 치환은 상기 발명의 양상으로써 고려된다. 마찬가지로, 발명의 기재에 있어서의 개괄은 상기 발명의 부분으로써 고려된다.
앞서 말한 설명으로부터, 본 발명이 그것의 기술적 사상 또는 본질적인 특성으로부터 벗어나지 않고 다른 특이적인 형태로 구체화될 수 있다는 것은 당업자에게 자명할 것이다. 상기의 기재된 구체물들은 본 발명에 있어서 제공된 법적 보호의 범위가 상기 구체화에 의한 것보다 오히려 부가된 청구항에 의해 나타내기 때문에, 제한적이지 않고, 단지 예시적인 것으로서 고려된다.
Claims (69)
- 하나 또는 그 이상의 조직 검체에 대한 조직 가공 시스템으로서, 상기 시스템은(a) (ⅰ) 가열되는 제 1반응실 및 (ⅱ) 고정, 탈수 및 제거 기능을 포함하고 제 1반응실 내에 임의로 함유되는 비수성 혼합물을 포함하는 제 1모듈(a first module);(b) (ⅰ) 가열되고, 또한 진공 펌프에 연결되어 있는 제 2반응실 및 (ⅱ) 제 2반응실 내에 임의로 함유되는 왁스 용액을 포함하는 제 2모듈(a second mudule); 및(c) 적어도 조직 검체를 제 1모듈에서 제 2모듈로 임의로 이동시키는 수송기관;을 포함하는, 두 가지 상이한 화학적 조성물만을 사용하는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 제 1반응실은 회랑(whispering gallery)을 포함하는 내부 기하구조를 지니며, 상기 제 1모듈은 (ⅲ) 제 1반응실을 격리하기 위해 적합한 폐구, (ⅳ) 제 1반응실을 에워싸는 보온 단열재, 및 (ⅴ) 회랑으로 전도되는 극초단파 복사선 소스(source)를 더 포함하는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 조직 검체는 비수성 혼합물, 극초단파 복사선 또는 이들의 결합에 의해 충분히 고형화되는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 제 1모듈은 비수성 혼합물과 조직 검체의 화학적 교류를 증진시키기 위해 제 1반응실 내에 교반기를 더 포함하는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 비수성 혼합물은 약 55℃ 초과 및/또는 약 75℃ 미만인 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 비수성 혼합물은 고정제 및 탈수제를 약 1:6 초과 및/또는 약 6:1 미만의 부피비로 포함하는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 비수성 혼합물은 고정제를 약 20%(v/v) 초과 및/또는 약 60%(v/v) 미만으로 포함하는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 비수성 혼합물은 탈수제를 약 20%(v/v) 초과 및/또는 약 60%(v/v) 미만으로 포함하는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 비수성 혼합물은 제거제를 약 10%(v/v) 초과 및/또는 약 30%(v/v) 미만으로 포함하는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 비수성 혼합물은 계면활성제를 더 포함하는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 비수성 혼합물은 하나 이상의 케톤인 고정제 및 하나 이상의 알코올인 탈수제를 포함하는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 비수성 혼합물은 미네랄 오일인 제거제를 포함하는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 비수성 혼합물은 디메틸 술폭시드(DMSO)를 더 포함하는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 비수성 혼합물은 약 15 ~ 35%(v/v) 아세톤, 약 45 ~ 65%(v/v) 이소프로필 알코올, 및 약 10 ~ 25%(v/v) 미네랄 오일을 포함하는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 비수성 혼합물은 약 40 ~ 60%(v/v) 아세톤, 약 25 ~ 35%(v/v) 이소프로판올, 및 약 10 ~ 25%(v/v) 미네랄 오일을 포함하는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 제 1모듈은 제 1반응실에 연결된 임시 보존실을 더 포함하되 비수성 혼합물은 조직 검체가 제 1모듈로 적재된 후에 제 1반응실로 이동되고, 상기 조직 검체가 제 2모듈로 운반되기 전에 임시 보존실(holding chamber)로 이동되며, 비수성 혼합물은 임시 보존실에 있는 동안에 임의로 가열되는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 조직 검체는 약 15분 또는 그 미만 동안 제 1모듈 내에 머문 후에 충분히 고형화되도록 구성된 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 조직 검체는 약 30분 또는 그 미만 동안 제 1모듈 내에 머문 후에 충분히 고형화되도록 구성된 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 조직 검체는 약 45분 또는 그 미만 동안 제 1모듈 내에 머문 후에 충분히 고형화되도록 구성된 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 제 2모듈은 (ⅲ) 제 2반응실을 격리하기 위해 적합한 폐구, (ⅳ) 제 2반응실을 에워싸는 보온 단열재, 및 (ⅴ) 제 2반응실에서 왁스를 용융된 형태로 유지시키기 위한 가열기(heater)를 더 포함하는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 제 2반응실 내의 압력은 약 100torr 초과 및/또는 760torr 미만인 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 제 2반응실 내의 압력은 진공 펌프에 의해 주기적으로 변화되는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 왁스 용액은 약 55℃ 초과 및/또는 약 80℃ 미만인 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 왁스 용액은 탈가스화되고 탈수화된 것인 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 왁스 용액은 약 30℃ 미만에서 고체상태인 파라핀으로부터 생성된 것인 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 제 2모듈은 제 2반응실에 연결된 가열실을 더 포함하되, 고체 왁스는 가열실(heated chamber)에서 임의로 용융되고, 왁스 용액은 조직 검체가 제 2모듈로 운반되기 전에 가열실로부터 제 2반응실로 이동되는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 조직 검체는 약 15분 또는 그 이상 동안 제 2모듈 내에 머문 후에 충분히 함침되도록 구성된 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 조직 검체는 약 30분 또는 그 이상 동안 제 2모듈 내에 머문 후에 충분히 함침되도록 구성된 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 조직 검체는 약 45분 또는 그 이상 동안 제 2모듈 내에 머문 후에 충분히 함침되도록 구성된 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 수송기관은 제 1모듈과 제 2모듈을 연결하는 트랙(track)을 포함하는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 수송기관은 제 1모듈과 제 2모듈을 연결하는 전동자를 포함하는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 상기 시스템은 화학적 교류가 일어나도록 하는 다수의 조직 운반체(tissue carriers)를 더 포함하되, 각각의 조직 검체는 다수의 조직 운반체 중 한 개의 운반체 내로 넣어지며, 각각의 조직 운반체는 각 군의 조직 검체들이 지속적으로 가공될 수 있도록 하기 위하여 가역적으로 수송기관에 부착되는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 함침되지 않은 조직 검체들이 상기 조직 가공 시스템으로 들어가고, 이후 제 1모듈로 운반되는 적재 장소(loading station)를 더 포함하는 조직 가공 시스템.
- 제 1항에 있어서, 함침된 조직 검체들이 제 2모듈로부터 운반되고, 이후수동식 가공 시스템을 빠져나갈 때까지 임의로 수집되는 하역 장소(unloading station)를 더 포함하는 조직 가공 시스템.
- 하나 또는 그 이상의 조직 검체에 대한 조직 가공 방법으로서, 상기 방법은 (a) 우선, (ⅰ) 고정, (ⅱ) 탈수, 및 (ⅲ) 제거 기능을 포함하는 가열되는 비수성 혼합물에 조직 검체를 함침시키는 단계; 및 (b) 이어서, 상기 조직 검체를 대기압 미만의 압력하에서 가열시킨 왁스 용액으로 충분히 함침시키는 단계;를 포함하는 오직 두 가지 상이한 화학적 조성물만을 사용하는 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 조직 검체는 두께가 3mm 미만인 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 조직 검체는 수동식으로 가공되는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 조직 검체는 기계적으로 가공되는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 조직 검체는 알데히드를 사용하지 않고 가공되는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 조직 검체는 크실렌을 사용하지 않고 가공되는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 조직 검체는 가공 전에 고정되지 않는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 조직 검체는 가공 전에 포름알데히드로 고정되는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 조직 검체는 가공 전에 메탄올과 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 내에서 보존되는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 조직 검체는 (a)단계에 있어 극초단파 레토르트로 가공되는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 조직 검체는 비수성 혼합물, 극초단파 유닛으로부터 의 복사선, 또는 그 둘에 의해서 충분히 고형화되는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 비수성 혼합물과 상기 조직 검체 사이의 화학적 교류를 증진시키기 위해 교반하는 단계를 더 포함하는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 비수성 혼합물은 약 55℃ 초과 및/또는 약 75℃ 미만인 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 비수성 혼합물은 고정제 및 탈수제를 약 1:6 초과 및/또는 약 6:1 미만의 부피비로 포함하는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 고정제는 비수성 혼합물의 약 20%(v/v) 초과 및/또는 약 60%(v/v) 미만인 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 탈수제는 비수성 혼합물의 약 20%(v/v) 초과 및/또는 약 60%(v/v) 미만인 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 제거제는 비수성 혼합물의 약 10%(v/v) 초과 및/또는 약 30%(v/v) 미만인 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 비수성 혼합물은 계면활성제를 더 포함하는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 비수성 혼합물은 하나 이상의 케톤인 고정제 및 하나 이상의 알코올인 탈수제를 포함하는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 비수성 혼합물은 미네랄 오일인 제거제를 더 포함하는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 비수성 혼합물은 디메틸 술폭시드(DMSO)를 더 포함하는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 비수성 혼합물은 약 15 ~ 35%(v/v) 아세톤, 약 45 ~ 65%(v/v) 이소프로필 알코올, 및 약 10 ~ 25%(v/v) 미네랄 오일을 포함하는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 비수성 혼합물은 약 40 ~ 60%(v/v) 아세톤, 약 25 ~ 35%(v/v) 이소프로판올, 및 약 10 ~ 25%(v/v) 미네랄 오일을 포함하는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 조직 검체는 비수성 혼합물에서 약 15분 또는 그 이상 동안 배양된 후에 충분히 고형화되는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 조직 검체는 비수성 혼합물에서 약 30분 또는 그 이상 동안 배양된 후에 충분히 고형화되는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 조직 검체는 비수성 혼합물에서 약 45분 또는 그 이상 동안 배양된 후에 충분히 고형화되는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 조직 검체는 (b)단계에서 진공 레토르트로 가공되는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 조직 검체는 약 100torr 초과 및/또는 약 760torr 미만의 압력에서 충분히 함침되는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 왁스 용액은 약 55℃ 초과 및/또는 약 85℃ 미만인 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 왁스 용액은 탈가스화되고 탈수화된 것인 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 왁스 용액은 약 30℃ 미만에서 고체상태인 파라핀으로부터 생성되는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 조직 검체는 상기 왁스 용액에서 약 15분 또는 그 미만 동안 배양된 후에 분할될 수 있으며, 그 후 냉각되는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 조직 검체는 상기 왁스 용액에서 약 30분 또는 그 미만 동안 배양된 후에 분할될 수 있으며, 그 후 냉각되는 조직 가공 방법.
- 제 35항에 있어서, 상기 조직 검체는 상기 왁스 용액에서 약 45분 또는 그 미만 동안 배양된 후에 분할될 수 있으며, 그 후 냉각되는 조직 가공 방법.
- 제 1항 내지 제 34항의 시스템(또는 그것들의 일정한 결합)에서 가공되고/되거나 제 35항 내지 제 68항의 방법(또는 그것들의 일정한 결합)에 의해 가공된 조직 검체 또는 조직 단편.
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| US9518899B2 (en) | 2003-08-11 | 2016-12-13 | Sakura Finetek U.S.A., Inc. | Automated reagent dispensing system and method of operation |
| US20060134732A1 (en) * | 2004-12-17 | 2006-06-22 | Kram Brian H | Methods and compositions for a microemulsion-based tissue treatment |
| FR2888971B1 (fr) * | 2005-07-20 | 2007-11-02 | Nicolas Bara | Procede d'identification sequentielle d'echantillons |
| JP2007093254A (ja) * | 2005-09-27 | 2007-04-12 | Jokoh Co Ltd | 迅速脱灰・脱脂・固定装置 |
| US20070172911A1 (en) * | 2006-01-13 | 2007-07-26 | Michael Farrell | Biological sample processing composition and method |
| WO2007115374A1 (en) | 2006-04-11 | 2007-10-18 | Leica Biosystems Melbourne Pty Ltd. | Device and method for cross-referencing |
| US8459509B2 (en) | 2006-05-25 | 2013-06-11 | Sakura Finetek U.S.A., Inc. | Fluid dispensing apparatus |
| AT504371B8 (de) | 2006-10-03 | 2008-09-15 | Leica Mikrosysteme Gmbh | Vorrichtung zur mikrowellen-gestützten präparation von proben |
| US20090298172A1 (en) * | 2008-05-28 | 2009-12-03 | Steven Paul Wheeler | Histological specimen treatment apparatus and method |
| EP2316010B1 (en) | 2008-08-27 | 2022-03-16 | The University of Miami | Tissue cassette and method for preparing tissue samples |
| BRPI1011689B1 (pt) | 2009-03-11 | 2019-12-17 | Sakura Finetek Usa Inc | método de autofocalização e dispositivo de autofocalização |
| WO2010108930A2 (en) * | 2009-03-23 | 2010-09-30 | Engin Hasan Hueseyin | Laboratory type quick film drying oven |
| DE102009025574A1 (de) * | 2009-06-19 | 2010-12-23 | Leica Biosystems Nussloch Gmbh | Verfahren zum automatischen Bearbeiten von Gewebeproben in einem Gewebeprozessor |
| EP2278295A1 (en) * | 2009-07-24 | 2011-01-26 | Milestone S.r.l. | Single cavity tissue histology tissue-processor |
| US8831776B2 (en) | 2009-08-27 | 2014-09-09 | Sakura Finetek U.S.A., Inc. | Integrated tissue processing and embedding systems, and methods thereof |
| US10139613B2 (en) | 2010-08-20 | 2018-11-27 | Sakura Finetek U.S.A., Inc. | Digital microscope and method of sensing an image of a tissue sample |
| US8752732B2 (en) | 2011-02-01 | 2014-06-17 | Sakura Finetek U.S.A., Inc. | Fluid dispensing system |
| EP2518468B1 (en) * | 2011-04-26 | 2019-07-24 | Milestone S.r.l. | Method, processor and carrier for processing frozen slices of tissue of biospecimens |
| US8975562B2 (en) * | 2011-05-03 | 2015-03-10 | General Electric Company | Over the range microwave safety door |
| US8580568B2 (en) | 2011-09-21 | 2013-11-12 | Sakura Finetek U.S.A., Inc. | Traceability for automated staining system |
| US8932543B2 (en) | 2011-09-21 | 2015-01-13 | Sakura Finetek U.S.A., Inc. | Automated staining system and reaction chamber |
| US9217696B2 (en) | 2011-09-29 | 2015-12-22 | The University Of Miami | Ultra-rapid diagnostic tissue preparation as an alternative to frozen section |
| EP2864754B1 (en) | 2012-06-22 | 2020-08-26 | Leica Biosystems Nussloch GmbH | Tissue sample container |
| ES2733446T3 (es) | 2012-06-22 | 2019-11-29 | Leica Biosystems Nussloch Gmbh | Dispositivo de transporte de muestras de tejido de biopsia |
| US9759711B2 (en) * | 2013-02-05 | 2017-09-12 | Genia Technologies, Inc. | Nanopore arrays |
| US9052256B2 (en) | 2013-03-15 | 2015-06-09 | Leica Biosystems Nussloch Gmbh | Method for processing and embedding tissue |
| CA2845830C (en) | 2013-03-15 | 2020-10-27 | Leica Biosystems Nussloch Gmbh | Tissue cassette with retractable member |
| CA2845832C (en) | 2013-03-15 | 2020-09-22 | Leica Biosystems Nussloch Gmbh | Tissue cassette with biasing element |
| DE102013103971A1 (de) | 2013-04-19 | 2014-11-06 | Sensovation Ag | Verfahren zum Erzeugen eines aus mehreren Teilbildern zusammengesetzten Gesamtbilds eines Objekts |
| US9733162B2 (en) | 2014-02-11 | 2017-08-15 | Ihor Turkevych | Universal system, method and solution for the acceleration of the process of fixing, dehydrating and clearing the structure of biological tissue |
| CN106211762B (zh) | 2014-04-04 | 2020-08-14 | 麻省理工学院 | 向带电基质中、在带电基质中和/或从带电基质中主动转运带电分子 |
| US10591392B2 (en) | 2014-07-03 | 2020-03-17 | Applikate Technologies Llc | Simultaneous dehydration and staining of tissue for deep imaging |
| US10579959B2 (en) | 2014-09-10 | 2020-03-03 | Cerner Innovation, Inc. | Intelligent routing of radio-frequency identification data |
| US10365189B2 (en) | 2015-05-07 | 2019-07-30 | Steven Wheeler | Histological specimen treatment |
| CN105300753B (zh) * | 2015-09-10 | 2018-10-30 | 山东骏腾医疗科技有限公司 | 一种用于病理切片的快速组织处理试剂 |
| CN105606437B (zh) * | 2016-03-01 | 2018-06-19 | 青岛锴锦医疗器械有限公司 | 一种快速病理组织脱水机 |
| CN106018040B (zh) * | 2016-07-19 | 2019-07-26 | 杨静 | 病理组织脱水装置 |
| US11280803B2 (en) | 2016-11-22 | 2022-03-22 | Sakura Finetek U.S.A., Inc. | Slide management system |
| CN106855475A (zh) * | 2017-03-18 | 2017-06-16 | 王瑞才 | 一种用于病理切片的快速组织处理试剂 |
| CN111492223B (zh) * | 2017-12-29 | 2023-07-25 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 组织样品制备系统 |
| EP3765832A1 (en) * | 2018-03-16 | 2021-01-20 | inveox GmbH | Sample processing system and method for automatically processing histological samples |
| US20220023853A1 (en) * | 2018-12-20 | 2022-01-27 | Tecan Trading Ag | Method of treating a sample |
| JP7330065B2 (ja) * | 2019-10-30 | 2023-08-21 | サクラ精機株式会社 | 組織片処理装置 |
Family Cites Families (105)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2150757A (en) | 1937-06-22 | 1939-03-14 | Agfa Ansco Corp | Film drier |
| US2684925A (en) | 1949-03-16 | 1954-07-27 | Technicon Chemical Company Inc | Liquid for treating tissue in histologic processing |
| US3546334A (en) | 1965-05-21 | 1970-12-08 | Lerner Lab Inc | Composition for fixing and protecting a smear of body cells and method of applying same |
| US3389052A (en) | 1965-11-02 | 1968-06-18 | Ehrenreich Theodore | Fixing and drying cytological smears |
| GB1321712A (en) | 1970-03-17 | 1973-06-27 | Shandon Elliott Ltd | Sequential processing apparatus for processing an article by immersion |
| US3961097A (en) | 1971-10-28 | 1976-06-01 | Gravlee Jr Joseph F | Method of preparing tissue for microscopic examination |
| GB1454510A (en) | 1973-05-22 | 1976-11-03 | Tetronics Research Dev Co Ltd | Laying blood traces |
| US3892197A (en) | 1974-04-22 | 1975-07-01 | Thomas D Kinney | Light microscopy processing apparatus |
| IT1062484B (it) | 1975-08-08 | 1984-10-10 | Gen Electric | Combinazione di fluido colorante e incollante per vetrini da microscopio |
| US4199558A (en) | 1976-04-07 | 1980-04-22 | Shandon Southern Products Limited | Tissue processing method |
| US4099483A (en) | 1976-04-07 | 1978-07-11 | Shandon Southern Products Limited | Tissue processing apparatus |
| US4141312A (en) | 1977-05-16 | 1979-02-27 | Fisher Scientific Company | Apparatus for histological tissue processing |
| US4221823A (en) | 1978-04-21 | 1980-09-09 | Phillips Petroleum Company | Process for mounting palynological specimens |
| DE2906650A1 (de) | 1979-02-21 | 1980-08-28 | Pfrimmer Pharma | Verfahren zur herstellung von transplantatkonserven |
| US4670386A (en) | 1980-05-23 | 1987-06-02 | Stephen Sugaar | Cancer tests using tumor antigen generated lymphokines and compositions |
| US4578282A (en) | 1982-02-04 | 1986-03-25 | Harrison James S | Composition for diagnostic reagents |
| US4545831A (en) | 1982-09-13 | 1985-10-08 | The Mount Sinai School Of Medicine | Method for transferring a thin tissue section |
| US4681996A (en) | 1982-12-16 | 1987-07-21 | Cem Corporation | Analytical process in which materials to be analyzed are directly and indirectly heated and dried by microwave radiation |
| DE3319564A1 (de) | 1983-05-30 | 1984-12-06 | Arthur Pfeiffer Vakuumtechnik Wetzlar Gmbh, 6334 Asslar | Verfahren zur herstellung flexibler, dauerhaltbargemachter nicht konservierter und konservierter biologischer materialien |
| DE8509640U1 (de) | 1985-03-30 | 1985-05-30 | AGW Analysen-Geräte GmbH, 7970 Leutkirch | Küvette |
| US4839194A (en) | 1985-07-05 | 1989-06-13 | Bone Diagnostic Center | Methods of preparing tissue samples |
| US5023187A (en) | 1985-09-13 | 1991-06-11 | Fisher Scientific Company | Method and device for accelerated treatment of thin sample on surface |
| US4656047A (en) | 1986-03-06 | 1987-04-07 | Kok Lanbrecht P | Rapid method for cell block preparation |
| US4835354A (en) | 1987-03-30 | 1989-05-30 | Cem Corporation | Microwave heating apparatus for laboratory analyses |
| FR2616273B1 (fr) | 1987-06-05 | 1989-10-20 | Thomson Csf | Resonateur hyperfrequence en mode de chuchotement en galerie |
| US5782897A (en) | 1987-06-26 | 1998-07-21 | Microwave Medical Systems, Inc. | Microwave heating apparatus for rapid tissue fixation |
| US4857300A (en) | 1987-07-27 | 1989-08-15 | Cytocorp, Inc. | Cytological and histological fixative formulation and methods for using same |
| US4882128A (en) | 1987-07-31 | 1989-11-21 | Parr Instrument Company | Pressure and temperature reaction vessel, method, and apparatus |
| US4946669A (en) | 1987-10-09 | 1990-08-07 | Siegfried Barry A | Histological fixatives |
| US4911915A (en) | 1987-10-13 | 1990-03-27 | Richard-Allan Medical Industries | Method of processing tissue specimens and dehydrant solvent for use therein |
| US5544650A (en) | 1988-04-08 | 1996-08-13 | Neuromedical Systems, Inc. | Automated specimen classification system and method |
| US4891239A (en) | 1988-07-05 | 1990-01-02 | Raytheon Company | Method and apparatus for ultrafast microwave tissue fixation |
| DE68918950T2 (de) | 1988-10-10 | 1995-03-16 | Commw Scient Ind Res Org | Verfahren und vorrichtung für kontinuierliche chemische reaktionen. |
| US5104640A (en) | 1989-03-17 | 1992-04-14 | Wescor, Inc. | Fixative composition for fixing blood smears to slides |
| PT94279A (pt) | 1989-06-07 | 1991-12-31 | Wolfgang Moshammer | Processo e dispositivo para a aplicacao de radiacao de microondas a materias que contem agua ou misturadas com agua |
| US5089288A (en) * | 1989-06-24 | 1992-02-18 | Berger Hermann J | Method for impregnating tissue samples in paraffin |
| US5230865A (en) | 1989-09-08 | 1993-07-27 | Cem Corporation | Ventable rupture diaphragm-protected container for heating contained materials by microwave radiation |
| US5049510A (en) | 1990-01-05 | 1991-09-17 | Fisher Scientific Company | Process for histological tissue specimen treatment that includes variable sensitivity level control |
| US5030929A (en) | 1990-01-09 | 1991-07-09 | General Atomics | Compact waveguide converter apparatus |
| US5068086A (en) | 1990-06-12 | 1991-11-26 | Raytheon Company | Method and apparatus for batch fixating tissue specimens |
| DE4018955A1 (de) | 1990-06-13 | 1991-12-19 | Werner Lautenschlaeger | Probenbehaelter zum aufschliessen bzw. analysieren von probenmaterial |
| US5244787A (en) | 1991-01-31 | 1993-09-14 | Biogenex Laboratories | Antigen retrieval in formalin-fixed tissues using microwave energy |
| DE4143541C2 (de) | 1991-02-19 | 1999-03-04 | Mls Gmbh | Vorrichtung zum Extrahieren von Proben mittels eines Lösungsmittels bei erhöhter Temperatur |
| US5256571A (en) | 1991-05-01 | 1993-10-26 | Cytyc Corporation | Cell preservative solution |
| WO1992019952A1 (en) | 1991-05-07 | 1992-11-12 | Wescor, Inc. | Improved staining method for histology and cytology specimens |
| US5849517A (en) | 1991-05-08 | 1998-12-15 | Streck Laboratories, Inc. | Method and composition for preserving antigens and nucleic acids and process for utilizing cytological material produced by same |
| US5460797A (en) | 1991-05-08 | 1995-10-24 | Streck Laboratories, Inc. | Method for fixing tissues and cells for analysis using oxazolidine compounds |
| US5696887A (en) | 1991-08-05 | 1997-12-09 | Biotek Solutions, Incorporated | Automated tissue assay using standardized chemicals and packages |
| US5289140A (en) | 1991-08-16 | 1994-02-22 | Dako Japan Co., Ltd. | Consistent diagnostic test method using microwaves |
| DE4136416C2 (de) | 1991-11-05 | 1994-01-13 | Gossler Kg Oscar | Vorrichtung zur Mikrowellen-Bestrahlung von Materialien |
| US5422277A (en) | 1992-03-27 | 1995-06-06 | Ortho Diagnostic Systems Inc. | Cell fixative composition and method of staining cells without destroying the cell surface |
| DE4223116A1 (de) | 1992-04-30 | 1993-11-04 | Mikrowellen Labor Systeme | Vorrichtung zur verdampfungsbehandlung von vorzugsweise fluessigen stoffen, insbesondere reagenzstoffen, oder zum aufbereiten oder analysieren von probenmaterial |
| US5401625A (en) | 1993-06-24 | 1995-03-28 | E. K. Industries, Inc. | Histological composition for light microscopy |
| US5624706A (en) * | 1993-07-15 | 1997-04-29 | Electron R+D International, Inc. | Method for fabricating electron multipliers |
| US5830417A (en) | 1993-09-24 | 1998-11-03 | Duquesne University Of The Holy Ghost | Method and apparatus for microwave assisted chemical reactions |
| WO1995013133A1 (de) | 1993-11-11 | 1995-05-18 | Lautenschlaeger Werner | Verfahren und vorrichtung zum auslösen und/oder fördern chemischer oder physikalischer prozesse in einem material, insbesondere probenmaterial |
| US5432056A (en) | 1993-11-15 | 1995-07-11 | Ventana Medical Systems, Inc. | Bisulfite-based tissue fixative |
| US5431952A (en) | 1994-02-28 | 1995-07-11 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Method for preservation of biological tissue |
| ATE173173T1 (de) | 1994-03-22 | 1998-11-15 | Werner Lautenschlaeger | Vorrichtung zum aufbereiten und/oder extrahieren von proben mittels eines verdampfungsfähigen mittels bei erhöhter temperatur |
| CA2147593C (en) | 1994-04-22 | 2008-07-29 | Hyman C. Birnboim | Dual purpose tissue fixative |
| US5532462A (en) | 1994-04-29 | 1996-07-02 | Communications & Power Industries | Method of and apparatus for heating a reaction vessel with microwave energy |
| US5712605A (en) | 1994-05-05 | 1998-01-27 | Hewlett-Packard Co. | Microwave resonator |
| CA2153215A1 (en) | 1994-07-06 | 1996-01-07 | Lu Wang | Treatment of paraffin embedded tissue for gene analysis |
| WO1996021075A1 (de) | 1995-01-05 | 1996-07-11 | Lautenschlaeger Werner | Vorrichtung zur wärmebehandlung von materialien in einer heizkammer |
| DE19503591A1 (de) | 1995-02-03 | 1996-08-08 | Werner Lautenschlaeger | Verfahren und Vorrichtung zur Extraktions-Behandlung einer Probe |
| US5625706A (en) | 1995-05-31 | 1997-04-29 | Neopath, Inc. | Method and apparatus for continously monitoring and forecasting slide and specimen preparation for a biological specimen population |
| US5796080A (en) | 1995-10-03 | 1998-08-18 | Cem Corporation | Microwave apparatus for controlling power levels in individual multiple cells |
| US6072086A (en) | 1996-04-12 | 2000-06-06 | Intergen Company | Method and composition for controlling formaldehyde fixation by delayed quenching |
| ES2119535T3 (es) * | 1996-08-02 | 1998-10-01 | Milestone Srl | Procedimiento para procesar muestras organicas. |
| DE19639022B4 (de) | 1996-09-23 | 2013-03-21 | Mwt Mikrowellen Labor Technik Ag | Verfahren und Vorrichtung zum Herstellen hochreiner flüssiger Chemikalien |
| DE19639021A1 (de) | 1996-09-23 | 1998-03-26 | Mikrowellen Systeme Mws Gmbh | Vorrichtung und Verfahren zum Behandeln einer chemischen Substanz durch Erhitzen unter Druck |
| US5679333A (en) | 1996-10-25 | 1997-10-21 | Dunphy; Brian William | Formaldehyde-free tissue preservative compositions |
| DE19652339A1 (de) | 1996-12-17 | 1998-06-18 | Microm Laborgeraete Gmbh | Vorrichtung zur Behandlung von Objekten |
| AU3615297A (en) | 1997-07-15 | 1999-02-10 | Bernard Pajak | Method for fixing and embedding tissues for histological preparations |
| DK1005633T3 (da) | 1997-08-20 | 2008-12-15 | Univ Miami | Vævsfikserings-dehydratiserings-fedtfjernelses-imprægneringsmetode med höj kvalitet og kontinuerligt gennemlöb |
| US6793890B2 (en) | 1997-08-20 | 2004-09-21 | The University Of Miami | Rapid tissue processor |
| US6017725A (en) | 1997-08-21 | 2000-01-25 | Aaper Alcohol And Chemical Company | Cytological fixative and dehydrating agent for treating histological and cytological tissue |
| US6183995B1 (en) | 1997-09-05 | 2001-02-06 | Lifespan Biosciences, Inc. | Methods of measuring gene expression using wax-embedded tissue specimens |
| US6033912A (en) | 1997-11-13 | 2000-03-07 | Milestone S.R.L. | Method of controlling a chemical process heated by microwave radiation |
| ES2344873T3 (es) | 1998-05-18 | 2010-09-08 | Igenex, Inc. | Procedimiento de hibridacion in situ para detectar un acido nucleico diana. |
| AU740441B2 (en) * | 1998-06-30 | 2001-11-01 | La Mina Ltd | Cytological and histological fixative composition and methods of use |
| US6054695A (en) | 1998-07-30 | 2000-04-25 | Milestone S.R.L. | Apparatus for condensing gases within a microwave radiation field |
| US6242723B1 (en) | 1998-07-30 | 2001-06-05 | Milestone S.R.L. | Apparatus for performing chemical and physical processes without sample transfer within a microwave radiation field |
| US6204375B1 (en) | 1998-07-31 | 2001-03-20 | Ambion, Inc. | Methods and reagents for preserving RNA in cell and tissue samples |
| AU6046700A (en) * | 1999-05-10 | 2000-11-21 | California Institute Of Technology | Use of spatiotemporal response behavior in sensor arrays to detect analytes in fluids |
| DE19928820A1 (de) | 1999-06-17 | 2000-12-21 | Ulrich Groth | Fixiermittel für Zellen und Gewebe von Lebewesen |
| US6291180B1 (en) | 1999-09-29 | 2001-09-18 | American Registry Of Pathology | Ultrasound-mediated high-speed biological reaction and tissue processing |
| AU2094001A (en) * | 1999-12-14 | 2001-06-25 | Ervin Essenfeld | Microwave unit and system for tissue processing |
| US6248535B1 (en) | 1999-12-20 | 2001-06-19 | University Of Southern California | Method for isolation of RNA from formalin-fixed paraffin-embedded tissue specimens |
| US6337189B1 (en) | 2000-02-08 | 2002-01-08 | Streck Laboratories, Inc. | Fixative system, method and composition for biological testing |
| US6329645B2 (en) | 2000-03-03 | 2001-12-11 | Ted Pella, Inc. | Apparatus for dampening standing wave pattern generation in microwave oven |
| DE10015794A1 (de) | 2000-03-27 | 2001-10-11 | Univ Schiller Jena | Vorrichtung zur Durchführung chemischer Reaktionen und Prozesse in Hochfrequenzfeldern |
| EP1156309B1 (de) * | 2000-05-18 | 2003-04-16 | Precisa Instruments AG | Automatische Probenpräparation |
| DE10037417A1 (de) | 2000-07-24 | 2002-02-07 | Friedrich Schiller Uni Jena Bu | Vorrichtung zur Durchführung multipler chemischer Reaktionen und Prozesse in Hochfrequenzfeldern |
| DE10104320A1 (de) | 2001-01-25 | 2002-08-01 | Univ Schiller Jena | Vorrichtung zur Erfüllung von Sicherheitsfunktionen in Räumen mit Hochfrequenzstrahlung |
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