KR20060106809A - 개과 감염 호흡기 질환에 대해 개에게 백신 접종을 하기위한 백신 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 (a) 개에서 스트렙토코커스 에쿠이 서브 종 주에피데미커스(S.zooepidemicus)에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; (b) 개에서 미코플라스마 시노스(M.cynos)에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및 (c) 개에서 클라미도필라(Chlamydophila)에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체중 어느 하나 이상을 포함하는 개에 백신 접종을 하기 위한 백신 조성물에 관한 것이다.

백신, 개과 감염성 호흡기 질환

Description

개과 감염 호흡기 질환에 대해 개에게 백신 접종을 하기 위한 백신 조성물{Vaccine composition for vaccinating dogs against canine infectious respiratory disease(CIRD)}

본 발명은 백신 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 개과 감염 호흡기 질환(Canine infectious respiratory disease)에 대해 사용하기 위한 백신 조성물에 관한 것이다.

개과 감염 호흡기 질환(CIRD)는 새가정 입주 센터(re-homing centres), 및 보딩(boarding) 또는 훈련 컨넬(kennel)과 같은 붐비는 환경에서 사는 개에게 흔한 전염성이 높은 질환이다. 많은 개들은 가벼운 기침만을 앓고 짧은 시간 후에 회복되나, 그러나 어떤 경우에는 심한 기관지 폐렴으로 발전할 수 있다(Appel and Binn, 1987). CIRD는 거의 치명적이지는 않으나, 이로 인해 구조 센터에서 개의 새가정 입주가 지연되고 훈련 컨넬에서는 상당한 치료비뿐만 아니라 스케줄이 엉망이 되기도 한다.

CIRD의 병인론은 몇몇의 바이러스 및 박테리아를 포함하는 다중인자인 것으로 생각된다. CIRD의 주된 원인이 되는 병원체는 개과 파라인플루엔자 (CPIV) (Binn et al , 1967), 개과 아데노바이러스 유형 2 (CAV-2) (Ditchfield et al,1962), 및 개과 헤르피스바이러스 (CHV) (Karpas et al , 1968a and 1986b), 개과 호흡기 코로나바이러스 (CRCV) (WO2004/011651 (The Royal Veterinary College) and Erles et al, 2003) 및 박테리움 보르데텔라 브론셉티카(Bordetella bronchiseptica; B. bronchiseptica) (Bemis et al, 1977a, Keil et al, 1998)이다.

이러한 바이러스 및 박테리아들은 때때로 발병하는 동안 분리되고, 실험상 감염에서 호흡기 증상 또는 폐 병변을 야기하는 것으로 보여져 왔다 (Appel and Percy 1970, Swango et al, 1970, Karpas et al, 1986b).

또한, 인간 레오바이러스 및 미코플라즈마 종은 CIRD의 증상을 갖는 개로부터 분리되어 왔다(Lou and Wenner 1963, Randolph et al , 1993). 스트레스 같은 부가적인 원인이 또한 중요할 수 있다.

B. bronchiseptica는 호흡기 질환 "켄넬 코프(kennel cough)"의 주된 병인 병원체로 보고되었다(Bemis et al, 1977b and Thompson et al, 1976). 이는 개가 다른 호흡기 병원체의 영향을 받기 쉽게 하고, 때때로 이러한 다른 호흡기 병원체와 동시에 존재한다. 켄넬 코프는 유독한 B. bronchiseptica가 공격함으로써 재생될 수 있다(Ellis et al, 2001). 나아가, 추위, 바람, 높은 습도와 같은 환경적인 요인, 종종 개의 컨넬의 전형적인 조건은 병에 대한 민감성을 증가시킨다.

항생제는 주된 질환을 치료하는데 좋지 않은 약품으로 인정된다(Ellis et al, 2001). 이와 달리, B. bronchiseptica의 면역예방은 질환의 제어에 있어서 도움이 되는 비교적 효과적인 수단을 제공한다.

B. bronchiseptica 감염에 대한 눈에 띄는 징후는 거칠고 마른 기침인데, 이는 활동이나 흥분에 의해 악화된다. 기침은 발작에서 나타나고, 그 뒤에 목구멍으로부터 나오는 맑고 적은 양의 점액에 의해 구역질 또는 구토가 일어난다. 체온은 2차 박테리아 감염이 일어날 때 높아질 수 있다. 컨넬 코프는 전염성이 높기 때문에 병은 즉시 감염되기 쉬운 개로 전염되고 심한 기침을 야기할 수 있다. 대부분의 심한 징후는, 감염된 후 초기 2 내지 5일 동안 나타나지만, 연장된 기간동안 계속될 수 있다. 스트레스, 특히 불리한 환경 조건은 상기 질환의 후기 단계 동안 재발을 야기할 수 있다.

컨넬 코프는 전형적으로 상부 기도의 질환이고, 코 분비물 및 기침으로 특징지워진다. 컨넬 코프는 상부 호흡기 관의 변화와 관련된 반면, CIRD의 병상은 폐 손상, 어떤 경우에는 기관지폐렴에 연관된다. 컨넬 코프는 CIRD보다 그 정도가 가벼운 증상이고, CIRD에서 보여지는 넓은 범위의 병상을 가지지 않는다. CIRD는 또한 높은 심각성 및 치사성에 의해 구별된다.

CIRD는 개에게 가벼운 정도부터 치명적인 질환에 이르는 호흡기 징후를 야기하는 증상이다. 이는, 염증성에서 삼출성 부종으로 진행되고 때때로 폐 조직에서 넓게 나타날 수 있는 출혈 병상과 함께, 상부 및 하부 기도 감염이 관련되는 특징을 갖는다. CIRD는 또한 B. bronchiseptica 가 존재하지 않아도 발생할 수 있고, 실제로 일부 개들은 B. bronchiseptica가 검출되지 않으면서도 CIRD에 걸리는데, 이는 컨넬 코프와 CIRD는 별개의 감염임을 보여준다.

우리는 B. bronchiseptica와 호흡기 질환이 관련됨을 확인하였으며, 이와 동 시에 다른 병원체들이 호흡기 질환에 관여한다고 결론내었다 (Chalker et al, 2003).

우리는 지금 스트렙토코커스 에쿠이 서브 종 주에피데미커스(Streptococcus equi sub species zooepidemicus)(실시예 1 참조), 미코플라즈마 시노스(Mycoplasma cynos)(실시예 2 참조), 및 클라미도필라(Chlamydophila)(실시예 3 참조)는 CIRD와 연관되어 있음을 밝힌다. 우리 연구의 개체군중의 모든 개들에게 CPIV 및 CAV-2에 대해 백신접종을 하였을때, 우리는 CIRD에 상기 바이러스가 연관되었음을 뒷받침하는 신규한 데이터를 갖지 못하였다. 그러나, 우리는 또한 더욱 심한 호흡기 증상을 갖는 개에서 개과 헤르피스바이러스의 더 증가된 유병력(prevalence)을 발견하였다(실시예 4 참조).

스트렙토코커스 에쿠이 서브 종 주에피데미커스(S. zooepidemicus)은 종종 다양한 동물 숙주(말은 제외)로부터 분리되는 기회감염 병원체이다. 이는 종종 포유동물의 상부 호흡기 관 점막 공생생물체로서 발견되었으며 (Timoney et al , 1988; Quinn et al , 1999), 말에서의 하부 기도 질환, 병소 폐렴 및 자궁경염 (Chanter, 1997; Biberstein and Hirsh, 1999), 라마(llama)Y에서의 폐렴(Biberstein and Hirsh, 1999), 돼지에서의 패혈증 및 관절염(Timoney, 1987), 암소 및 염소에서의 유선염(Timoney et al , 1988), 가금에서의 패혈증, 새끼 양에서의 심막염 및 폐렴(Timoney, 1987), 기니 돼지에서의 림프절염 (Quinn et al , 1999), 인간에서의 사구체염 (Balter et al , 2000) 및 인간에서의 수막염 (Ural et al, 2003)을 포함하는 여러 질환 증상에 관련되어 있다. 개에서, S. zooepidemicus 는 상처 감염 및 패혈증 (Quinn et al , 1999) 및 급성 괴사성의 출혈성 폐렴 (Garnett et al, 1982)과 관련이 있다.

비록 출혈성 스트렙토코커스성 페렴(hemorrhagic streptococcal pneumoniae, HSP)의 후기 단계의 개는 CIRD에 걸린 개와 몇몇의 조직학적 특징이 같다고 하더라고, 초기 단계에서는 그렇지 않으며(see Chalker et al, 2003) HSP에서는 패혈증 혈전이 존재한다(Garnett et al, 1982). HSP는 빠르게 발병되는데, 이러한 발병은 대부분의 경우 임상적인 징후 없이 치명적임에 반하여, CIRD는 느린 발병을 나타내고 코의 분비물, 기침, 재채기, 구역질, 식욕부진, 페렴 및 기관지폐렴과 같은 많은 임상적인 징후를 나타낸다.

미코플라즈마 시노스(M.cynos)는 개과 비뇨기 관 감염과 관련되어 있다(Jang et al, 1984). 그것은 또한 디스템퍼(distemper)에 걸린 개의 폐에서 동정되었고 (Rosendal, 1978), M. cynos를 기관지 내부에 접종하면 개에서 폐렴을 야기하는 것을 발견하였다 (Rosendal & Vinther, 1977).

문헌[Rosendal (1978)]에 기재된 개과 디스템퍼(canine distemper)는 개과 디스템퍼 바이러스, 다양한 미코플라즈마 종 및 박테리움 슈도모나스(Pseudomonas)의 감염에 의해 일어나는 복합성 질환이다. 이는 미생물 침입의 강력한 조합이고, 이는 놀랄 것도 없이 폐렴을 일으킨다. 미코플라즈마 종에 기인한 병상의 일부는 분명하지 않다. 비록 M. cynos가 접종된 5마리의 개중 4마리에서 어떤 국소적인 적은 염증 병변이 나타났다 하더라도, M. cynos의 그 둥의 침입은 병의 징후가 없다는 것을 특징으로 하였다. 이러한 증상에서의 M. cynos의 중요성은, Resendal이 언 급한 것처럼, "측정하기 어렵다".

CIRD와 관련된 클라미도필라(Chlamydophila) 종은, 23S rRNA 유전자중 218개의 뉴클레오티드와 비교해 보면, 클라미도필라 아보르투스(Chlamydophila abortus, C.abortus)와 매우 밀접하게 관련되어 있다. 이러한 클라미도필라 종의 이 영역의 뉴클레오티드 서열(서열번호: 1)은 C. abortus의 것과 99% 이상 동일하고, 클라미도필라 프시타시(Chlamydophila psittaci)의 것과 98.6% 이상 동일하고, 클라미도필라 펠리스의 것과 96.3% 이상 동일하다.

클라미도필라 종은 CRID에 걸린 개의 기관 및 폐에서 동정되었다. 반대로, C. abortus의 감염은 전형적으로 생식기 질환과 관련되어, 특히 양에서, 때때로 원하지 않는 유산을 유도한다. C. abortus는 개에서 호흡기 감염에 어떤 역할을 담당하는지에 대해 이전에 기술된 것이 없다.

개를 감염시키는 클라미디아에 종에 관한 간행물은 거의 없고, 그러므로 개과 클라미디아에 종의 생물 다양성(biodiversity)에 대해서는 거의 알려지지 않았다. 최근에, 클라미디아 뉴모니아에(Chlamydia pneumoniae , C. pneumoniae)는 개에서의 아테롬성 동맥 경화증과 관련되었다(Sako et al, 2002). 동정되지 않은 클라미도필라 종은 또한 패혈증 다발성 관절염에 걸린 개에서 동정되었다(Lambrechts et al, 1999).

C. psittaci는 이미 집안에서 키우는 개의 분(糞), 뇌, 간, 비장, 신장 및 신장 조직으로부터 분리되었다 (Arizmendi et al, 1992; Fraser et al, 1985 and Gresham et al, 1996). 연구는, 독일의 애완용 개과 개체군의 20% 및 일본의 경우 는 10%가 클라미디아세아에(Chlamydiaceae)에 노출되었고 클라미디아세아에에 대한 항체가 증가되었다(Werth et al, 1987 and Fukushi et al, 1985)는 것을 입증하였다. 영국에서는 C. psittaci 에 대해 혈청반응 양성인 개들의 유병력은 알려지지 않았다 (Gresham et al, 1996). C. psittaci로 감염된 개들은 잠재성의 만성 감염, 아테롬성 동맥경화증, 관절염, 결막염 또는 호흡기 질환까지 발생할 수 있다 (Gresham et al, 1996 and Storz 1988). Gresham et al, (1996)는 C. psittaci를 호흡기 질환의 증상을 갖는 개로부터 분리하였는데, 이러한 증상은 CIRD에서 나타나는 증상만큼 심각한 것을 아니었다. 이는, 개가 잠재적인 저장소가 될 수 있으며, 그러므로 개는 인간 클라미디아에의 감염에 있어서 유행병학적으로 중요하다는 것을 제시하고 있다 (Gresham et al, 1996; Werth 1989). C. psittaci를 자연적으로 감염된 개로부터 세포 배양물에서 분리한 단 하나의 증거가 되는 사례 (Arizmendi et al, 1992), 및 실험적으로 감염된 개로부터 분리된 하나의 사례가 있다(Young et al, 1972).

백신은 CIRD에 관련된 어떤 전염성 병원체, 즉 CPIV 및 CAV-2 뿐만 아니라 B.bronchiseptica에 대해 이용할 수 있다. 그러나, 이러한 백신의 사용에도 불구하고 CIRD는 여전히 전 세계의 켄넬에서 유행인데, 이는 아마도 CIRD에 관련된 모든 간염성의 병원체를 방어하지 못하는 백신에 의한 것이다.

본 발명의 제1 태양은 하기 (a) 내지 (c)중 어느 하나 이상을 포함하는 개에서 백신 접종을 하기 위한 백신 조성물을 제공하는 것이다:

(a) 개에서 스트렙토코커스 에쿠이 서브 종 주에피데미커스(S.zooepidemicus)에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(b) 개에서 미코플라스마 시노스(M.cynos)에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(c) 개에서 클라미도필라(Chlamydophila)에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체.

이러한 조성물은 상기 병원체들중 어느 두개, 예를 들면 (a) 및 (b), (a) 및 (c), 또는 (b) 및 (c)를 포함할 수 있는 것으로 이해된다. 이러한 조성물은 병원체 (a), (b) 및 (c)의 셋 모두를 포함할 수 있다.

개에서 특정 생물체에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체라는 것은, 면역타협이나 또는 면역억제가 없는 개에 투여하는 경우 이러한 병원체는 개의 면역 시스템을 일으켜서 생물체에 특이적으로 결합하는 항체를 생산한다는 의미를 포함한다.

따라서 생산된 항체는 각각에 있어서 어느 다른 분자에 대한 것보다 큰 친화도를 갖고 특정 생물체에 특이적으로 결합하는 것이 바람직하다. 바람직하게는, 항체는 각각에 있어서 어느 다른 분자에 대한 것보다 2배 이상, 또는 5배 이상, 또는 10배 이상 또는 50배 이상 큰 친화도를 갖고 특정 생물체에 결합한다. 더욱 바람직하게는, 항체는 각각에 있어서 어느 다른 분자에 대한 것보다 100배 이상, 또는 1,000배 이상, 또는 10,000배 이상 큰 친화도를 갖고 특정 생물체에 결합한다.

개에서 특정 생물체에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체라는 것은, 면역타협이나 또는 면역억제가 없는 개에 투여하는 경우, 상기 병원체는 개의 면역 시스템을 일으켜서 생물체로부터 분비되는 단백질과 같은 거대 분자에 특이적으로 결합하는 항체를 생산한다는 의미를 포함한다. 이러한 항체는 독소 또는 헤모라이신(hemolysin)과 같은 분비된 거대 분자에 특이적으로 결합하고 이를 비활성시킬 것이므로, 숙주에서 질환을 일으키는 변화 및 질환의 위중함을 감소시켜 숙주가 감염을 극복할 수 있다. 그러므로, 개에서 특정 생물체에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는, 분비된 거대 분자와 같은 생물체의 일부에 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체를 포함한다.

전형적으로, 개에서 S. zooepidemicus에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는 비활성화되거나 감독시킨 S. zooepidemicus , S. zooepidemicus의 면역성 단편 또는 그의 유도체, 또는 상기 단편 또는 그의 유도체를 코딩하는 핵산을 포함한다(이 경우에 상기 단편 또는 그의 유도체는 폴리펩티드를 포함한다).

스트렙토코커스 에쿠이 서브 종 주에피데미커스(Streptococcus equi sub species zooepidemicu)는 NCTC (기탁번호: 4676. S34), ATCC (기탁번호: 43079) 및 국립 낙농 생물체 수집원(the National Collection of Dairy Organisms, NCDO) (기탁번호 1358)에 기탁되었으며, 이러한 내용은 문헌[Farrow et al (1984)]에 기재되어 있다.

백신의 "비활성화된" 성분은, 박테리아, 미코플라즈마 또는 바이러스와 같은 특정 백신 성분이 질환을 야기할 수 있는 능력을 감소시키는 방식으로 처리되었으나, 보호의 면역성을 유발할 수 있는 능력을 여전히 갖고 있다는 의미를 포함한다. "비활성화된" 백신 조성물은 죽은 생물체를 포함한다.

백신에 사용하기 위해 박테리아, 미코플라즈마 및 바이러스와 같은 생물체를 비활성화시키고 살생하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있고, 예를 들어 하기에 기재된 개의 백신을 위한 어느 성분을 제조하는 데에 사용되어 오고 있다.

백신 제조를 위한 미생물의 비활성화를 위한 몇가지 방법이 있다. 가장 간단한 방법은 열로 살생하거나(예를 들어, 바이러스를 58℃에서 30분 동안 가열; 박테리아를 5분 동안 끓이거나 65℃에서 1시간 동안 가열), 또는 포르말린과 혼합함으로써 살생하는 것이다. 또한, 다른 화합물 또는 UV 광을 처리하여 미생물을 살생할 수 있다.

백신의 "감독시킨" 성분은, 박테리아, 미코플라즈마 또는 바이러스와 같은 특정 백신 성분은 질환을 야기할 수 있는 능력이 크게 감소되나 보호의 면역성을 유발할 수 있는 능력을 여전히 갖도록 하는 방식으로 선택되었거나 또는 처리되었다는 의미를 포함한다.

백신에 사용하기 위해 박테리아, 미코플라즈마 및 바이러스와 같은 생물체를 감독시키는 방법은 당업계에 잘 알려져 있고, 예를 들어 하기에 기재된 개 백신을 위한 어느 성분을 제조하는 데에 사용되어 오고 있다.

다르게 세팅된, 즉 바이러스 또는 클라미도필라에 대한 세포 배양에서 있어서 연장된 통로에 의해, 그리고 고체 배지 또는 박테리아에 대한 다른 숙주에서 발병력의 감소가 나타날 때까지 미생물을 감독시킬 수 있다. 또 다르게는, 발병력에 관련된 박테리아에서 점 돌연변이를 일으키거나 또는 특정 유전자를 결실시킴으로써 생물체의 발병 잠재력을 제한시킬 수 있고, 또는 생물체에 돌연변이를 일으켜 숙주 동물에 존재하는 않는 화합물에 대한 특정 요구성을 갖도록 하여, 일단 숙주에서는 증식하거나 생존할 수 없게 한다. 또한, 감독은 박테리아에 대해 화합물 및 UV 광 처리를 함으로써 게놈에 점 돌연변이를 유발시킴으로써 수행될 수 있다.

S. zooepidemicus의 면역성 단편은 개에서 보호 면역 반응을 일으킬 수 있는 S.zooepidemicus의 어느 단편일 수 있다. 그러므로, 면역타협 또는 면역억제가 없는 개에 S. zooepidemicus의 면역성 단편을 투여하는 경우, 이러한 단편은 개의 면역 시스템을 일으켜서 S. zooepidemicus에 특이적으로 결합하는 항체를 생산한다.

전형적으로, 특정 생물체의 면역성 단편은 상기 생물체의 단백질 성분이다. 생물체의 "단백질" 성분은 완전한 단백질 또는 단백질의 부분이라는 의미를 포함한다. 단백질 단편은 글리코실화되거나 되지 않을 수 있는 것으로 해석된다. 그러므로, 단백질은 또한 글리코단백질을 포함한다. 글리코단백질의 아미노산 서열은, 그에 부착된 당의 유형, 수, 서열 및 위치에 관계없이, 글리코단백질의 폴리펩티드 골격의 아미노산 서열을 가리킨다.

S. zooepidemicus 단백질은 세포 표면 단백질 전구체 (젠뱅크 등록번호 AAA86832 및 BAD00711), Cpn60 (젠뱅크 등록번호 AAM88472), M-유사 단백질 (젠뱅크 등록번호 AAP33082, AAP33081, AAP33080, AAP33079, AAP22285, AAB92635, AAB92634, AAB92633, AAB92632, AAB92631, AAB92630, AAB92629, AAB92628, AAB92627, AAB92626, AAB92625, AAB92624, AAB92623, AAB92622, 2111310A 및 BAD00712), M-유사 단백질 전구체(젠뱅크 등록번호 AAD37432), M-유사 단백질 Szp2 전구체 (젠뱅크 등록번호 AAF75674), M-유사 단백질 Szp3 전구체 (젠뱅크 등록번호 AAF75675), M-유사 단백질 Szp4 전구체 (젠뱅크 등록번호 AAF75676), 스트렙토코커스 뉴모니아에(Streptococcus pneumoniae) ORF5에 유사한 단백질 (젠뱅크 등록번호 BAB16041), 추정의 금속 결합/부착소(adhesin) 단백질 (젠뱅크 등록번호 CAB56710), 주신(zoocin) A 면역 인자 (젠뱅크 등록번호 AAC46073) 및 문헌[Walker et al (1998, 2003)]에 의해 기재된 Szp 단백질 (젠뱅크 등록번호 AAQ08488-AAQ08510)를 포함한다.

바람직하게는, S. zooepidemicus의 면역성 단편은 S. zooepidemicus의 구조적인 단백질 또는 그의 면역성 영역이다. 더 바람직하게는, S. zooepidemicus의 면역성 단편은 분비된 독소, 헤모라이신, 부착/표면 단백질, 또는 그의 면역성 영역이다.

부가적인 표면 단백질은 당업자에 알려진 표준 방법에 의해 S. zooepidemicus와 같은 박테리아로부터 분리될 수 있다. 인용에 의해 그 내용이 본원에 포함되는 문헌[Sambrook et al (2001), 3^rd edition, Sambrook et al (eds), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, USA)은 이와 같은 목적으로 사용될 수 있는 일반적인 박테리아 클로닝 기술이 기재되어 있다.

개에서 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체가 단백질과 같은 생물체의 성분이라면 생물체의 배양물로부터 분리될 수 있다. 더 바람직하게는, 단백질은 재조합 DNA 기술을 사용하여 단백질을 코딩하는 적당한 DNA 구조물의 발현에 의해 만들어진다.

핵산의 클로닝, 조작, 변형 및 발현, 및 발현된 단백질의 정제에 대한 적당한 기술은 당업게에 잘 알려져 있고, 예를 들면 인용에 의해 그 내용이 본원에 포함되는 문헌[Sambrook et al (2001)]의 문헌에 기재되어 있다.

또 다르게는, 단백질은 단백질 화학 기술, 예를 들면 분리된 단백질의 부분적인 단백질 가수분해(외부 용해 또는 내부 용해중 어느 하나)를 사용하거나, 또는 새롭게 합성함으로써 제조될 수 있다. 펩티드는, 인용에 의해 본원에 그 내용이 포함되는 문헌[ Lu et al (1981) J. Org . Chem. 46, 3433)에 개시된 고체-상 펩티드 합성의 Fmoc-폴리아마이드 모드에 의해 합성될 수 있다.

생물체의 면역성 단편의 "유도체"는 생물체에 자연적으로 존재하는 형태로부터 변형되었으나 개에서 면역 반응을 일으킬 수 있는 능력(예를 들어 생물체에 특이적으로 결합하여 항체의 생산을 유도하는 능력)은 존재하는 단백질 또는 단백질의 일부의 의미를 포함한다.

예를 들면, 유도체는 생물체에 특이적으로 결합하는 항체의 생산을 유도하는데 사용될 수 있는 단백질 또는 그의 일부분의 서열 변이체를 포함할 수 있다. 전형적으로 아미노산 치환체는 백신의 항원성을 향상시키기 위해 만들어진다. 바람직하게는, 서열 변이체는 단백질 또는 그의 일부분의 본래 서열에 대해 90% 이상, 또는 91% 이상, 또는 92% 이상, 또는 93%이상, 또는 94% 이상, 또는 95% 이상 동일하다. 더욱 바람직하게는, 서열 변이체는 단백질 또는 그의 일부분의 본래 서열에 대해 96 이상, 또는 97% 이상, 또는 98% 이상, 또는 99% 이상, 또는 99.5% 이상 동일하다.

두 폴리펩티드 사이에 서열 동일성(%)은 적당한 컴퓨터 프로그램, 예를 들면, 위스콘신 대학 유전 컴퓨팅 그룹(University of Wisconsin Genetic Computing Group)의 GAP 프로그램을 사용하여 측정될 수 있다. 두 뉴클레오티드 또는 두 아미노산 서열 사이의 동일성(%)은 GCG 버젼 10(Genetics Computer Group, (1991), Program Manual for the GCG Package, Version 7, April 1991, 575 Science Drive, Madison, Wisconsin, USA 537)을 사용하여 측정될 수 있다. 사용되는 GCG 파라미터는, Gap 크리에이션 페널티 50 (Gap creation penalty 50), DNA에 대한 gap 연장 페널티 3 (gap extension penalty 3), 및 Gap 크리에이션 페널티 8 (Gap creation penalty 8) 및 단백질에 대한 Gap 연장 페널티 2 (Gap extension penalty 2)일 수 있다. 또한, 두 뉴클레오티드 또는 두 아미노산 서열 사이의 동일성(%)은 FASTA 버젼 34(Pearson WR. (1990) "Rapid and sensitive sequence comparison with FASTP and FASTA". Methods Enzymol .183:63-9)를 사용하여 측정될 수 있다. FASTA 세팅은 Gap 개방 페널티-16 (Gap open penalty -16) 및 Gap 연장 페널티-4 (Gap extension penalty 4)일 수 있다.

동일성 (%)은 그의 서열이 최적으로 배열되어 있는 폴리펩티드에 대해 계산되는 것으로 해석될 것이다.

또 다르게는 배열은 클러스탈 W 프로그램 (Clustal W program)(Thompson et al., (1994) Nucleic Acids Res 22, 4673-80)을 사용해서 수행될 수 있다. 그 사용된 파라미터는 다음과 같을 수 있다:

빠른 쌍 방식의 배열 파라미터: K-튜플(워드) 크기; 1, 윈도우 크기; 5, gap 페널티; 3, 탑 대각선의 수; 5. 계산 방법: x 퍼센트.

다수 배열 파라미터: gap 개방 페널티; 10, gap 연장 페널티; 0.05. 지수 매트릭스: BLOSUM.

전형적으로, 서열 변이체는 단백질 또는 그의 일부분의 본래 서열과 100개 미만, 또는 50개 미만, 또는 30개 미만, 또는 20개 미만의 다른 아미노산 잔기를 갖는다. 더욱 바람직하게는, 서열 변이체는 단백질 또는 그의 일부분의 본래 서열과 15개 또는 14개 또는 13개 또는 12개 또는 11개 또는 10개 또는 9개 또는 8개 또는 7개 또는 6개 또는 5개 또는 4개 또는 3개 또는 2개 또는 1개의 다른 아미노산 잔기를 갖는다.

유도체의 서열은 병원체에 대한 면역성을 향상시키도록 변형될 수 있고, 또는 그의 면역성에 어떠한 영향도 미치지 않을 수 있다. 예를 들어, 유도체는 면역성이 제거되는데 필요하지 않은 하나 이상의 아미노산 서열을 가질 수 있다.

"유도체"는, 펩티드의 기능은 본질적으로 변화하지 않으면서, 즉 생체 내에서 특정 항체의 생산을 제공하면서, 펩티드 합성 이전 또는 이후에 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학적으로 변형된 폴리펩티드를 포함한다. 이러한 변형은 산 또는 염기와 염, 특히 생리학적으로 허용가능한 유기 또는 무기 산 및 염기와 염을 형성하는 것, 말단 카르복실 기에 에스테르 또는 아마이드를 형성하는 것, 및 N-t-부톡시카보닐과 같은 아미노산 보호기를 부착하는 것을 포함한다. 이러한 변형은 생체내 대사 작용으로부터 펩티드를 보호할 수 있다. 펩티드는 하나의 복사본 또는 다수체(예를 들어 직렬 반복체)로서 존재할 수 있다. 이러한 직렬 또는 다수 반복체는 담체를 사용하지 않고 그들 자신이 충분히 항원성을 나타낼 수 있다. 펩티드가 N-말단과 C-말단이 함께 결합하여 루프 구조를 형성하거나, 또는 하나 이상의 Cys 잔기가 말단에 부가되어 항원성을 증가시키고/증가시키거나 이황화물 결합이 형성될 수 있도록 하는 것이 유리할 수 있다. 펩티드가 담체(바람직하게는 펩티드)에 공유적으로 연결된다면, 본 발명의 펩티드가 루프 구조를 형성하도록 배열되는 것이 바람직하다.

현재의 면역학적 이론에 따르면, 면역성 제제에는 면역 시스템을 자극시키거나 또는 자극을 강화시키기 위해 담체 기능이 존재하여야 한다. 가장 좋은 담체는 T-세포 에피토프를 포함하는 것이다(또는 항원과 함께 T-세포 에티토프를 생산하는 것이다). 펩티드는, 예를 들면 교차-결합에 의해, 분리된 담체(예를 들어, 혈청 알부민, 미오글로빈, 박테리아 톡소이드 및 키홀 림펫 하에모시아닌(keyhole limpet haemocyanin))와 결합될 수 있다. 더 최근에 개발된 담체는 면역 반응에서 T 세포 도움을 유도하는데, 이러한 담체는 B형 간염 코어 항원(또한 뉴클레오캡시드 단백질로 일컬음), 추정되는 T-세포 에피토프, 베타-갈락토시다제 및 인터루킨-1의 163-171 펩티드를 포함한다. 후자 화합물은 담체, 보조제, 또는 둘 모두로 다양하게 간주될 수 있다. 또 다르게는, 본 발명에 따른 동일하거나 다른 펩티드의 몇몇의 복사본은 서로 교차 결합될 수 있으며; 그러나, 이러한 분리된 담체가 없는 상황에서는, 담체 기능은 그러한 교차 결합에 의해 제공될 수 있다. 적당한 교차-결합 제제는 시그마 및 피얼스(Sigma and Pierce) 카탈로그에 나열된 것(예를 들어, 글루타르알데히드, 카르보디이미드 및 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카르복실레이트)과 같은 것을 포함하고, 후자 제제는 (존재한다면) C-말단 시스테인 잔기에 SH 기를 이용한다.

펩티드가 적당한 숙주에서 적당한 뉴클레오티드 서열의 발현에 의해 제조된다면, 그때 펩티드는 담체로서 작용하는 펩티드 서열과 함께 융합 산물로서 발현되는 것이 유리할 수 있다. 카비젠(Kabigen)의 "Ecosec" 시스템은 이러한 배열의 한 예이다.

전형적으로, S. zooepidemicus의 면역성 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 구조 단백질, 더욱 바람직하게는 S. zooepidemicus의 표면 단백질, 또는 그의 면역성 일부분, 또는 그의 유도체를 코딩한다. 다양한 S. zooepidemicus 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 상기 젠뱅크 등록번호를 참조하여 즉시 확인될 수 있다.

전형적으로, 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는 비활성화되거나 감독시킨 M. cynos , M. cynos의 면역성 단편 또는 그의 유도체, 또는 상기 단편 또는 그의 유도체를 코딩하는 핵산을 포함한다.

미코플라즈마 시노스(Mycoplasma cynos)는 NCTC (기탁번호 10142 H831) 및 ATCC (기탁번호 27544)에 기탁하였으며, 이는 문헌[Resendal(1972)]에 기재되어 있다.

바람직하게는, M. cynos 면역성 단편은 M. cynos의 구조적인 단백질 또는 그의 면역성 영역, 그리고 더욱 바람직하게는 M. cynos의 표면 단백질 또는 그의 면역성 영역 또는 그의 유도체이다. 표면 단백질은 당업자에 알려진 표준 방법으로 M. cynos와 같은 미코플라즈마로부터 분리될수 있다.

미코플라즈마 단백질을 동정하고 분리하는 방법은, 어떤 유전자들은 미코플라즈마 특유의 코돈 사용법을 인식할 수 있는 특수 벡터를 요구할 수 있다는 점을 제외하고는 박테리아에 대한 것과 동일하다(섹션 B의 모든 장, on Genome Characterisation and Genetics, in Molecular and Diagnostic Procedures in Mycoplasmology. Vol. 1 Ed S. Razin & J. Tully. Academic Press Inc. 1995 참조).

가장 효과적인 미코플라즈마 백신은 가열- 또는 포르말린-비활성화된 전체 세포 또는 살아있는 감독된 백신을 포함하는 경향이 있고, 그러므로 그의 단백질 모두 또는 적어도 대부분을 포함한다. 백신으로 사용할 수 있는 잠재적인 미코플라즈마 성분은, 약 45kDA으로 믿어지는 주요 부착 구조 막 단백질(M. pneumoniae의 P1 시타드헤신(cytadhesin) 및 세 개의 유전자 오페론의 모든 부분인 M. genitalium의 MgPa에 상응함), 표면 노출 단백질 및 다른 부착 단백질, 막 당지질, 막 다당류 분획, 리포글리칸 및 동물 미코플라즈마 백신의 연구에서 언급된 모든 것을 포함한다 (Barile 1985 and Barile et al, 1985).

본 발명의 구체예에서, 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 변원체는 비활성화되거나 감독시킨 C. abortus, C. abortus의 면역성 단편 또는 그의 유도체, 또는 상기 단편 또는 그의 유도체를 코딩하는 핵산을 포함한다.

클라미도필라 아보르투스(Chlamydophila abortus)(ATCC 기탁번호 VR-656) 는 양의 클라미디아의 유산 균주 B-577(chlamydial abortion strain B-5)로서 Everett 등에 의해 기탁되었다.

본 발명의 다른 구체예에서, 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는, 비활성화되거나 감독시킨 C. psittaci, C. psittaci의 면역성 단편 또는 그의 유도체, 또는 상기 단편 또는 그의 유도체를 코딩하는 핵산을 포함한다.

클라미도필라 프시타시(Chlamydophila psittaci)는 또한 클라미디아 프시타시(Chlamydia psittaci)로서 알려져 있으며, 이는 ATCC에 기탁번호 VR-125로 기탁되었다 (Lillie (1930) page 1968, Int . J. Syst . Bacteriol. 30:274 (AL)).

본 발명의 또다른 구체예에서, 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는, 비활성화되거나 감독시킨 C. felis, C. felis의 면역성 단편 또는 그의 유도체, 또는 상기 단편 또는 그의 유도체를 코딩하는 핵산을 포함한다.

클라미도필라 펠리스(Chlamydophila felis)(ATCC 기탁번호 VR-120)는 고양이과의 폐렴 균주 번호 1(pneumonitis strain No.1)로서 Everett 등에 의해 기탁되었다.

본 발명의 다른 구체예에서, 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는, 비활성화되거나 감독시킨 클라미디아 무리다룸(Chlamydia muridarum)(ATCC VR 123, MoPn; Everett et al , 1999, Int . J. Syst . Bacteriol. 49: 431); 클라미디아 페코룸(Chlamydia pecorum)(ATCC VR 628, Bo/E58; Fukushi and Hirai 1992, Int . J. Syst . Bacteriol. 42: 307); 클라미디아 뉴모니아에(Chlamydia pneumoniae)(Type strain: TW-183; Grayston et al , 1989, Int . J. Syst. Bacteriol. 39: 88); 클라미디아 수이스(Chlamydia suis)(ATCC VR 1474, S45; Everett et al , 1999, Int . J. Syst . Bacteriol. 49: 431); 또는 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis) (유형 종) (ATCC VR 571; Busacca 1935 Rake 1957 amend. Everett et al , 1999, Int . J. Syst . Bacteriol. 30: 274(AL)), 또는 그의 면역성 단편 또는 그의 유도체, 또는 상기 단편 또는 그의 유도체를 코딩하는 핵산을 포함한다.

C. abortus, C. psittaci 또는 C. felis , 또는 C. muridarum , C. pecorum , C. pneumoniae , C. suis 또는 C. trachomatis의 면역성 단편은 개에서 방어적인 면역 반응을 일으킬 수 있는 어떤 단편이 될 수 있다. 전형적으로, 그러한 면역성 단편은 단백질 또는 일부분이다. 바람직하게는 이러한 면역성 단편은 그의 구조 단백질 또는 그의 면역성 부분이다. 더욱 바람직하게는 면역성 단편은 표면 단백질, 또는 그의 면역성 부분 또는 그의 유도체이다. 상기에서 언급한 것처럼 표면 단백질은 당업자에게 공지된 표준 방법에 의해 클라미도필라와 같은 박테리아로부터 분리될 수 있다.

C. abortus는 60kD의 열 충격 단백질 GroEL (젠뱅크 등록번호: AAD26144), 60 kDa 시스테인이 풍부한 막 복합체 단백질 (젠뱅크 등록번호 AAG60550), 90-kDa의 단백질 (젠뱅크 등록번호 AAC44400 및 AAC44401), 시스테인이 풍부한 외부 막 단백질 Omp-2 (젠뱅크 등록번호 AAD09597), DnaK (젠뱅크 등록번호 AAN77259), 연장 인자 P (젠뱅크 등록번호 AAK72389), GrpE (젠뱅크 등록번호 AAN77258), HrcA (젠뱅크 등록번호 AAN77257), 주요 외부 막 단백질 (젠뱅크 등록번호 AAK00237, CAA36152, CAD29327), 주요 외부 막 단백질 전구체 (젠뱅크 등록번호 AAD29103, AAD29102, AAG53881, P16567), MutS (젠뱅크 등록번호 AAD25864), Omp1 (젠뱅크 등록번호 CAA06182, CAA06620, CAA06621, CAA06622, CAA06624, CAA06625, CAA06183, CAA06184), 외부 막 단백질 (젠뱅크 등록번호 AAB02850), 외부 막 단백질 2 (젠뱅크 등록번호 AAD20336), POMP90A 전구체 (젠뱅크 등록번호 AAC15922), POMP90B 전구체 (젠뱅크 등록번호 AAC15924), POMP91A (젠뱅크 등록번호 No. AAC15921), POMP91B 전구체 (젠뱅크 등록번호 AAC15923), 추정의 98 kDa의 외부 막 단백질 (젠뱅크 등록번호 AAB18188), 추정의 외부 막 단백질 (젠뱅크 등록번호 AAB18187), 소형의 시스테인이 풍부한 외부 막 지질단백질 (젠뱅크 등록번호 AAG60549), 황이 풍부한 단백질 (젠뱅크 등록번호 AAG60551), 및 OmpA (젠뱅크 등록번호 AAT36355 및 AAT36356)을 포함한다.

C. psittaci는 60K의 시스테인이 풍부한 외부 막 단백질 전구체 (젠뱅크 등록번호 P23701, B39439, JC5204 및 P27606); 60K 시스테인이 풍부한 단백질 (젠뱅크 등록번호 CAA37592 및 CAA37591); 샤페로닌 동족체(chaperonin homolog) (젠뱅크 등록번호 AAB22560); 초기 상부 개방 외래 전사해독 프레임(early upstream open reading frame, EUO) (젠뱅크 등록번호 AAA23124, Q06566 및 C36909); EUO 단백질 동족체 (젠뱅크 등록번호 JC5207); ewe 유산 단백질 (젠뱅크 등록번호 1601347A); 속 특정 단백질(genus specific protein)(젠뱅크 등록번호 AAB22559); 고분자량의 시스테인이 풍부한 외피 단백질 (젠뱅크 등록번호 AAB61619); 히스톤 H1-유사 단백질 (젠뱅크 등록번호 AAA23132, JH0658, Q46204); hypA 단백질 (젠뱅크 등록번호 JL0116); hypB 단백질 (젠뱅크 등록번호 JL0117); 가상 단백질 (젠뱅크 등록번호 JC5206, NP_052329, NP_052332, NP_052331, NP_052330, NP_052328, NP_052327, NP_052326, NP_052325, NP_052323, CAA44340, CAA44339, CAA44334, CAA44341, CAA44338, CAA44337, CAA44336, CAA44335, CAA44332, A39999, NP_052324, CAA44333, S61492, S18143, C39999, D39999, E39999, F39999, S18148, G39999, H39999 및 I39999); 봉입 막 단백질 (젠뱅크 등록번호 2108371A, S61491); 저분자량의 시스테인이 풍부한 외피 단백질 (젠뱅크 등록번호 AAB61618); 라이신이 풍부한 가상 단백질 LRO (젠뱅크 등록번호 B36909); 주요 외부 막 단백질 밀 전구체 (젠뱅크 등록번호 CAA31177, 2006276A 1616229A, AAA23148, AAA23147, AAA17396, I40864, I40740, AAA23146, CAA40300, AAK00262, AAK00250, AAK00249, AAK00248, AAK00247, AAK00246, AAK00245, AAK00244, AAK00243, AAK00242, AAK00241, AAK00240, CAC84081, A60341, A40371, B60109, A60109, MMCWPM, MMCWP3, Q00087, P10332 및 AAQ91209); 주요 시그마 인자 (젠뱅크 등록번호AAA50747); MutS (젠뱅크 등록번호 AAD25866 및 AAD25863); 미지의 기능을 갖는 단백질의 N-말단 (젠뱅크 등록번호 CAA90624); ORF 2 (젠뱅크 등록번호 2108371B); 외부 막 단백질 1 (젠뱅크 등록번호 CAA76286 및 CAB96859); 외부 막 단백질 3 전구체 (젠뱅크 등록번호 JC5203); 미지의 기능을 갖는 단백질 (젠뱅크 등록번호 CAA90623); 가상의 다형 막 단백질 (젠뱅크 등록번호 AAL36963, AAL36962, AAL36961, AAL36960, AAL36959, AAL36958, AAL36957, AAL36956, 및 AAL36955); 소형의 시스테인이 풍부한 외피 단백질 envA 전구체 (젠뱅크 등록번호 A39439); 황이 풍부한 단백질 (젠뱅크 등록번호 P28164, AAB61620 및 JC5205); 미지의 단백질 (젠뱅크 등록번호 AAB22561 및 AAB22558); 발병력이 있는 플라스미드 parA 계열 단백질 pGP5-D; (젠뱅크 등록번호 Q46263); 발병력이 있는 플라스미드 단백질 pGP2-D (젠뱅크 등록번호 Q46260); 발병력이 있는 플라스미드 단백질 pGP3-D (젠뱅크 등록번호 Q46261); 발병력이 있는 플라스미드 단백질 pGP4-D (GenbankAccession No. Q46262); 발병력이 있는 플라스미드 단백질 pGP6-D (젠뱅크 등록번호 Q46264), OmpA (젠뱅크 등록번호 AAT36351 및 AAT36354) 및 60kDa 샤페로닌 단백질 (젠뱅크 등록번호 AAT38208)을 포함한다.

C. felis 단백질은 열 충격 단백질 GroEL (Genbank Accession Nos. AAL38954 및 AAO24106); 주요 외부 막 단백질 (Genbank Accession Nos. AAK00238, AAK00239, AAO24108 및 CAA43409); MutS (Genbank Accession No. AAD25865); 및 외부 막 단백질 2 (Genbank Accession Nos. AAK38113, AAK38114, AAK38115, AAL89722, AAO24107, AAQ19779)를 포함한다.

바람직한 구체예에서, 사용된 클라미도필라 단백질은 주요 외부 막 단백질(MOMP)와 같은 외부 막 단백질이다. 다른 적당한 클라미도필라 단백질은 LPS 또는 OmcB 단백질을 포함한다.

전형적으로, C. abortus, C. psittaci, C. felis의 면역성 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 구조 단백질, 더욱 바람직하게는 표면 단백질, 또는 그의 면역성의 부분, 또는 그의 유도체를 코딩한다. 다양한 단백질을 코딩하는 핵산 서열은 상기 젠뱅크 등록번호를 참조하여 즉시 확인될 수 있고, 표준 분자 생물학적 기술에 의해 즉시 측정될 수 있다.

본 발명의 구체예에서, 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는 서열번호: 1의 23 rRNA 유전자의 일부 서열인 218개의 뉴클레오티드를 갖는 비활성화되거나 감독시킨 클라미도필라, 또는 그의 면역성 단편 또는 그의 유도체, 또는 상기 단편 또는 유도체를 코딩하는 핵산을 포함한다. 서열번호: 1의 23 rRNA 유전자의 일부 서열인 218개의 뉴클레오티드를 갖는 클라미도필라는 CIRD에 걸린 개, 전형적으로 새가정 입주 센터, 및 보딩(boarding) 또는 훈련 개집 출신의 CIRD에 걸린 개의 기관 및 폐에서 발견되고 분리될 수 있다.

클라미도필라는 사이클로헥시미드(cycloheximide)의 존재 또는 부존재하에서 McCoy 세포주로 조직 추출물을 접종하고, 5% CO₂, 37℃에서 10일 이하 동안 세포를 배양하고 나서, 세포를 냉동 파쇄함으로써 클라미도필라를 추출함으로써 개로부터 분리될 수 있다. 이 방법은 새, 고양이, 인간 및 다른 숙주로부터 클라미도필라를 분리하는데 일반적으로 이용된다. 23S rRNA 유전자의 단편은 실시예 3에 기재된 PCR 조건을 사용하여 클라미도필라로부터 증폭될 수 있고, 수득된 서열은 도 5 또는 8의 서열과 비교함으로써 증명할 수 있다.

백신의 사용을 위하 폴리뉴클레오티드 병원체는 다양한 복제(예를 들어, 재조합 아데노바이러스 백신) 또는 비-복제(DNA 백신) 벡터로 전달될 수 있다.

재조합 단백질로 이루어진 백신의 전형적인 투여량은 약 5-10㎍이다. 박테리아 백신의 전형적인 투여량은 단위 ml당 10⁸ 콜로니이다.

전형적으로, 백신 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 보조제를 추가로 포함한다.

어떤 담체 및 보조제는 상기에 기재된 바와 같다. 다른 적당한 보조제는 프로인드(Freund)의 완전한 또는 불완전한 보조제, 무라밀 다이펩티드, EP 109 942, EP 180 564 및 EP 231 039의 "이스콤스(Iscoms)", 수산화알루미늄, 사포닌, DEAE-덱스트란, 천연 오일 (예를 들어, 미글리올), 야채 오일 (예를 들어, 땅콩유), 리포좀, 플루로닉(Pluronic)(등록상표) 폴리올(polyols) 또는 라비 보조제 시스템(Ribi adjuvant system) (예를 들어, GB-A-2 189 141 참조)을 포함한다.

이러한 담체는 본 발명의 병원체와 양립할 수 있고 그의 수용체에 해롭지 않다는 의미에 있어서 "허용가능"해야 한다. 전형적으로, 이러한 담체는 멸균되고 발열물질(pyrogen)이 없는 물 또는 식염수일 수 있다.

전형적으로, 백신은 경구적으로, 근육 내로, 피하로, 정맥 내로, 비강내로의 경로를 통해 투여될 것이다.

백신 조성물은 비경구적 투여를 위해 제형화될 수 있고, 이러한 제형은 항산화제, 완충액, 및 의도된 수용체의 혈액과 등장성인 제형이 되게 하는 용질을 포함할 수 있는 수성 또는 비수성 멸균 주사 용액; 및/또는 병원체 및 농후제(thickening agent)를 현탁시킨 것을 포함할 수 있는 수성 또는 비수성 멸균 현탁액을 포함할 수 있다.

백신 조성물은 단위-투여량 또는 다수-투여량 용기, 예를 들어 봉인된 앰플 및 바이얼(vial)에 존재할 수 있고, 사용하기 직전에 멸균 용액 담체(예를 들어, 주사를 위한 물)의 첨가만을 요구하는 냉동 건조된(lypholised) 조건에서 저장될 수 있다. 즉석 주사 용액 및 현탁액은 멸균된 분말, 과립 및 정제로부터 제조될 수 있다.

백신 조성물은 비강내 투여를 위해 제조될 수 있는데, 이러한 조성물은 적당한 추진체(예를 들어, 다이클로로다이플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 다이클로로테트라플로우로-에탄, 하이드로플루오로알칸(예를 들어, 1,1,1,2-테트라플루오로에탄(HFA 134A) 또는 1,1,1,2,3,3,3-헵타플루오로프로판 (HFA 227EA)), 이산화탄소 또는 다른 적당한 기체와 함께 가압된 용기, 펌프, 스프레이 또는 분무기로부터 에어로졸 스프레이 형태로 편리하게 운반될 수 있다. 가압된 에어로졸의 경우, 투여 단위는 측정된 양을 운반시키는 밸브를 사용함으로써 측정될 수 있다. 가압된 용기, 펌프, 스프레이 또는 분무기는, 예를 들어 용매로서 에탄올 및 추진체의 혼합물을 사용함으로써 병원체의 용액 또는 현탁액을 포함할 수 있으며, 윤활유(예를 들어 솔비탄 트리올레이트)를 추가로 포함할 수 있다.

수의학적 이용을 위해, 백신은 일반적인 수의학적 실무에 따라 허용가능한 제형으로 제조되고, 수의사는 특정 동물에 가장 적합할 투여량 처방 및 투여 경로를 결정할 것이다.

개에 투여하기에 적당한 백신의 제형은 당업계에 잘 알려져 있고, 하기 기재된 개의 백신에 사용되는 제형을 포함한다.

상기에 언급한 것처럼, 몇몇의 바이러스 및 박테리아 병원체는 개의 호흡기 질환과 관련된 것으로 알려져 있는데, 상기 병원체에는 개과 호흡기 코로나바이러스(CRCV), 개과 파라인플루엔자 바이러스(CPIV), 개과 아데노바이러스 유형 2(CAV-2), 개과 헤르피스바이러스(CHV) 및 보르데텔라 브론키셉티카(B. bronchisepti)가 포함된다.

그러므로, 본 발명의 구체예에서, 백신 조성물은 하기 (d) 내지 (h)중 어느 하나 이상을 추가로 포함한다:

(d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(e) 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(f) 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(g) 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(h) 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체.

그러므로, 상기 백신 조성물은 임의적으로 또한 상기 추가적인 병원체중 어느 두개, 세개, 네 개 또는 다섯 개 모두를 포함할 수 있다.

전형적으로, 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는, 비활성화되거나 감독시킨 CRCV, CRCV의 면역성 단편 또는 그의 유도체, 또는 상기 단편 또는 그의 유도체를 코딩하는 핵산을 포함한다.

적당한 CRCV의 면역성 단편은 WO 2004/011651 (The Royal Veterinary College) 및 Erles et al, 2003에 기재되어 있다. 적당한 면역성 단편은 스파이크(S) 및 헤마글루티닌-에스테라제(HE) 표면 단백질, 막 당단백질(M), 뉴클레오캡시드 단백질(N) 또는 그의 면역성 부분을 포함한다. WO 2004/011651에 기재된 CRCV-유사 스파이크 및 HE 단백질은 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체로서 또한 적당할 수 있다. 밀접하게 관련된 코로나바이러스(예를 들어, 보바인 코로나바이러스 및 인간 코로나바이러스, 및 그의 면역성 단편)는 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체로서 또한 적당할 수 있다. CRCV에 대한 백신 조성물로서 사용될 수 있는 병원체에 관한 WO 2004/011651의 전체 개시내용은 참조에 의해 본원에 포함된다.

전형적으로, 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는, 비활성화되거나 감독시킨 CPIV, CPIV의 면역성 단편, 또는 상기 면역성 단편을 코딩하는 핵산을 포함한다.

전형적으로, 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는, 비활성화되거나 감독시킨 CAV-2, CAV-2의 면역성 단편, 또는 상기 면역성 단편을 코딩하는 핵산을 포함한다.

개과 아데노바이러스 유형 1은 감염성 간염을 야기하고; 개과 아데노바이러스 유형 2는 호흡기 질환을 야기한다. CAV-1은 CAV-2를 교차 방어하며 그 역도 성립하는 것을 보여주었다. 그러므로, 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는 CAV-1 또는 CAV-2중 어느 하나, 또는 그의 면역성 단편을 포함할 수 있다. 하기에 나열한 백신(사용된 바이러스 유형을 특정하지 않은 EURICAN(등록상표) DHPPi는 제외)은 CAV-2를 포함한다.

개에서 CPIV 및 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 적당한 병원체는 당업자에게 알려져 있다. 예를 들어, 하기와 개 백신은 영국에서 인가된 것들이다.

포르트 도쥐 애니멀 헬스(Fort Dodge Animal Health)의 KAVAK(등록상표) DA₂PiP69는, 조직 배양물에서 자란 개과 디스템퍼 바이러스, 개과 아데노바이러스 유형 2, 개과 파라인플루엔자 유형 2 및 개과 파르보바이러스를 감독시킨 균주를 포함하는 살아있는 냉동 건조 백신이다.

포르트 도쥐 애니멀 헬스의 KAVAK(등록상표) 파라인플루엔자는, 확립된 동족체 세포주에서 배양된 개과 파라인플루엔자 바이러스 유형 2의 감독시킨 균주로부터 유래한 살아있는 냉동 건조된 백신을 포함한다.

인테르베트 UK 리미티드(Intervet UK Limited)의 NOBIVAC(등록상표) DHPPi은, 세포주 조직 배양물에서 자란 개과 디스템퍼 바이러스, 개과 아데노바이러스 유형 2, 개과 파르보바이러스 및 개과 파라인플루엔자 바이러스를 포함하는 살아있는 감독된 냉동 건조 바이러스 백신이다.

인테르베트 UK 리미티드의 NOBIVAC(등록상표) KC는, 보르데텔라 브론키셉티카 균주 B-C2 및 개과 파라인플루엔자 바이러스 균주 Cornell을 포함하는 변형된 살아있는 냉동 건조 백신이다 (이는 비강내 백신이다). 관리 인가 번호 Vm 06376/4026.

메리얼 애니멀 헬스 리미티드(Merial Animal Health Ltd.)의 EURICAN(등록상표) DHPPi는 개과 디스템퍼, 감염성 개과 간염, 개과 파르보바이러스 및 개과 파라인플루엔자 바이러스 유형 2에 대한 혼합된 살아있는 냉동 건조 백신이다.

화이자 리미티드(Pfizer Ltd.)의 VANGUARD(등록상표)는 확립된 세포주에서 증식된 살아있는 감독된 개과 디스템퍼 바이러스(Snyder Hill 균주), 아데노바이러스(CAV-2 Manhattan 균주), 파라인플루엔자 바이러스 (NL-CPI-5 균주) 및 개과 파르보바이러스 (NL-35-D), 및 렙토스피라 캐니콜라(Leptospira canicola) 및 렙토스피라 익테로헤모르하지아에(Leptospira icterohaemorrhagiae)의 비활성화된 배양물을 포함한다.

쉐어링-플로우 애니멀 헬스(Schering-Plough Animal Health)의 QUANTUM(등록상표) DOG 7은, 개과 디스템퍼, 아데노바이러스 유형 2, 파르보바이러스, 파라인플루엔자 바이러스 유형 2 백신 (살아있는), 및 비활성화된 렙토스피라 캐니콜라 및 렙토스피라 익테로헤모르하지아에 백신을 포함한다.

비르백 리미티드(Virbac Ltd.)의 CANIGEN DHPPi는, 세포주 조직 배양물에서 자란 개과 디스템퍼 바이러스, 개과 아데노바이러스(CAV-2), 개과 파르보바이러스 및 개과 파라인플루엔자 바이러스를 포함하는 살아있는 감독된, 냉동건조된, 바이러스 백신이다.

비르백 리미티드의 CANIGEN Ppi는, 세포주 조직 배양물에서 자란 개과 파르보바이러스 및 개과 파라인플루엔자 바이러스를 포함한다.

전형적으로, 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는, 비활성화되거나 감독시킨 CHV, 또는 그의 면역성 단편, 또는 상기 면역성 단편을 코딩하는 핵산을 포함한다.

개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 적당한 병원체는 당업자에게 알려져 있다. 예를 들어, 메리알(Merial)의 유리칸 헤르피스 205(EURICAN Herpes 205)는, 태어나서 초기에 CHV 감염으로부터 야기되는 강아지의 사망, 임상적인 징후 및 병변을 예방하기 위해 임신한 암캐에 대해 활성 면역 조치로 처방되는, CHV에 대한 정제된 서브-단위 백신이다. 이것은 호흡기 질환의 예방을 위한 성인 개의 백신 접종에 대해서는 인가받지 않았다.

전형적으로, 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는, 비활성화되거나 감독시킨 B. bronchiseptica , B. bronchiseptica의 면역성 단편, 또는 상기 면역성 단편을 코딩하는 핵산을 포함한다.

개에서 CPIV 및 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 적당한 병원체는 당업자에게 알려져 있다. 예를 들어, 하기와 개 백신은 사용이 인가된 것들이다.

화이자 애니멀 헬스(Pfizer Animal Health)의 COUGHGUARD-B(등록상표)(U.S. Vet. Lic. No.: 189)는 B. bronchiseptica의 비활성화된 배양물을 포함한다. B. bronchiseptica에 의해 야기된 질환, 특히 켄넬 코프에 대해 건강한 개의 면역 조치를 위한 것이다. COUGHGUARD-B(등록상표)는 비활성화되고 개에 투여되는 경우 독성을 갖지 않는 B. bronchiseptica의 항원성 균주로부터 제조된다. 그 제조방법은 B. bronchiseptica 그대로의 면역 특성을 남긴다고 보고되어 있다.

화이자 애니멀 헬스의 VANGUARD(등록상표) 5/B(U.S. Vet. Lic. No.: 189)는 확립된 개과의 세포주에서 증식된 개과 디스템퍼 바이러스(CDV), CAV-2, CPIV 및 개과 파르보바이러스(CPV)의 감독된 균주를 포함한다. CPV 항원은 개과 세포주에서의 낮은 계대에 의해 감독되고, 그 계대 레벨에서 모계 항체를 우선할 수 있는 면역 특성을 갖는다. 그 백신은 진공 대신에 불활성 기체를 갖는 동결 건조된 형태로 포장된다. 그 박테리아 성분은 비활성화된 B. bronchiseptica 의 전체 배양물을 포함하는데, 이는 희석제로 공급되는 것이다. VANGUARD(등록상표) 5/B중의 B. bronchiseptica 성분은 비활성이고 , 개에게 투여되는 경우 독성을 가지지 않도록 처리된 높은 항원성의 균주이다.

화이자 애니멀 헬스의 NASAGUARD-B^TM(U.S. Vet. Lic. No.: 112)은 B. bronchiseptica 박테리아의 독성이 없는 살아있는 배양물이다.

인테르베트의 PROGARD(등록상표)-KC는 개과 파라인플루엔자 바이러스 및 브로데텔라 브론키셉티카 비독성의 살아있는 배양물을 포함하는 변형된 살아있는 비강내 백신이다. PROGARD(등록상표)-KC는, 복원을 위해 제공되는 멸균 희석제와 함께 건조된 형태로 존재한다. PROGARD(등록상표)-KC는, 개과 파라인플루엔자 바이러스 및 B. bronchiseptica에 의한 개과 간염성 기관기관지염("컨넬 코프")을 예방하기 위해, 건강하고 병에 걸리기 쉬운 강아지 및 개에 대한 백신 접종을 위한 것이다.

인테르베트의 PROGARD(등록상표)-KC PLUS는, 비강내 투여를 위한 것으로, B. bronchiseptica의 비독성의 균주의 살아있는 배양물, 감독시킨 개과 아데노바이러스 유형 2 및 파라인플루엔자 바이러스를 포함한다. PROGARD(등록상표)-KC Plus는 호흡기 관에서 빠르고, 국소적인 면역성을 자극하므로, 임상적인 징후를 예방할 뿐만 아니라 입구 포트에서 감염을 막는다. 국소적인 면역성 이외에, 이것은 또한 비강내로 투여된지 3주 이내에 체계적 면역성을 자극한다. PROGARD(등록상표)-KC Plus의 적은 부피(0.4mL) 및 한번의 비공내 투여는, 특히 작은 품종 및 어린 강아지에게 백신 접종을 편리하게 한다. PROGARD(등록상표)-KC Plus는 복원을 위해 제공되는 멸균 희석제와 함께 건조된 형태로 존재한다. PROGARD(등록상표)-KC Plus는, 개과 아데노바이러스 유형 2, 파라인플루엔자 바이러스 및 B. bronchiseptica에 의한 개과 간염성 기관기관지염("컨넬 코프")을 예방하기 위해, 건강하고 개와 3주 또는 그 이상이 된 강아지에 대한 백신 접종을 위한 것이다.

인테르베트의 Intrac은, 비강태 투여를 위한 것으로, B. bronchiseptica 균주 S 55를 포함하는 냉동 건조된 변형된 살아있는 백신이다. 제품 인가 번호는 PL 0201/4011이다.

상기에 기재된 Nobivac(등록상표) KC는, 또한 B. bronchiseptica를 포함한다.

본 발명의 구체예에서, 백신 조성물은,

(a) 개에서 S. zooepidemicus에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및/또는

(b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체,

그리고, 임의적으로 하기 (c) 내지 (h)중 어느 하나 이상을 포함한다:

(c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

(d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(e) 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(f) 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(g) 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(h) 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체.

본 발명의 바람직한 구체예에서, 백신 조성물은

(b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

를 포함한다.

본 발명의 다른 바람직한 구체예에서, 백신 조성물은

(b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

그리고 하기 (c), (e), (f), (g) 및 (h)중 어느 하나 이상을 포함한다:

(c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

(e) 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(f) 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(g) 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(h) 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체.

그러므로, 상기 백신 조성물은 병원체 (b) 및 (d) 뿐만 아니라, (c), (e), (f), (g) 및 (h)중에서 어느 두 개, 또는 세개, 또는 네 개, 또는 모든 다섯 개의 병원체를 포함할 수 있는 것으로 해석된다.

본 발명의 다른 바람직한 구체예에서, 백신 조성물은

(a) 개에서 S. zooepidemicus에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

그리고, 하기 (c), (e), (f), (g) 및 (h)중 어느 하나 이상을 포함한다:

(c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

(e) 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(f) 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(g) 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(h) 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체.

그러므로, 상기 백신 조성물은 병원체 (a), (b) 및 (d) 뿐만 아니라, 병원체 (c), (e), (f), (g) 및 (h)중에서 어느 두 개, 또는 세개, 또는 네 개, 또는 모든 다섯 개의 병원체를 포함할 수 있는 것으로 해석된다.

본 발명의 제2 태양은, 본 발명의 제1 태양에 따른 백신 조성물을 개에 투여하는 것을 포함하는, 개에게 CIRD에 대한 백신 접종을 하는 방법을 제공한다.

본 발명의 제3 태양은, 본 발명의 제1 태양에 따른 백신 조성물을 개에 투여하는 것을 포함하는 개에서 CIRD를 치료하는 방법을 제공한다.

그러므로, 본 발명의 제1 태양에 따른 백신 조성물은 예방 또는 치료를 위해서 CIRD와 싸우는데 사용될 수 있다는 것을 알 수 있다.

본 발명의 제4 태양은, 개에서 CIRD의 예방 및 치료를 위한 약제의 제조에 있어서, 하기 (a) 내지 (c)중 어느 하나 이상의 용도를 제공하는 것이다:

(a) 개에서 S. zooepidemicus에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체.

본 발명의 구체예에서, 그 약제는 하기 (d) 내지 (h)중 어느 하나 이상을 추가로 포함한다:

(d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(e) 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(f) 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(g) 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(h) 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체.

상기 및 하기의 본 발명의 모든 태양에서, (a), (b), (c), (d), (e), (f), (g) 및 (h)에 대한 선호는 본 발명의 제1 태양에 기재된 바와 같다.

본 발명의 제5 태양은,

(a) 개에서 S. zooepidemicus에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

중 어느 하나 이상의 각각을 개에게 투여하는 것을 포함하는, 개에 S.zooepidemicus, M. cynos 및 클라미도필라중 어느 하나 이상에 대해 면역 반응을 자극하는 방법을 제공한다.

본 발명의 구체예에서, 상기 방법은

(d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(e) 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(f) 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(g) 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(h) 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

중 어느 하나 이상을 개에게 추가로 투여하는 것을 포함한다.

본 발명의 제6 태양은, 개에서 S. zooepidemicus, M. cynos 및 클라미도필라중 어느 하나 이상의 각각에 대한 면역 반응을 자극하기 위한 약제의 제조에 있어서, 하기 (a) 내지 (c)중 어느 하나 이상의 용도이다:

(a) 개에서 S. zooepidemicus에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체.

본 발명의 구체예에서, 상기 약제는

(d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(e) 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(f) 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(g) 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(h) 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

중 어느 하나 이상을 추가로 포함한다.

본 발명의 제7 태양은,

(a) 개에서 S. zooepidemicus에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

중 어느 하나 이상을 포함하는, 약제로 사용하기 위한 조성물을 제공한다.

상기 조성물은 상기 병원체들 중 어느 두개, 예를 들면 (a)와 (b), (a)와 (c), 또는 (b)와 (c)를 포함할 수 있는 것으로 해석된다. 상기 조성물은 (a), (b) 및 (c)의 세개 모두의 병원체를 포함할 수 있다.

본 발명의 구체예에서, 상기 조성물은 가축용 약제로 사용하기 위한 것이다. 그러므로, 상기 조성물은 가축용 약제의 용도로 포장되고 출시된다.

전형적으로, 상기 조성물은 개과 가축용 약제로 사용하기 위한 것이다. 그러므로, 상기 조성물은 개과 가축용 약제로 사용하기 위해 포장 및 출시되고, 즉 개에게 사용하기 위해 포장 및 출시된다.

본 발명의 구체예에서, 상기 조성물은

(d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(e) 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(f) 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(g) 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(h) 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

중 어느 하나 이상을 추가로 포함한다.

본 발명의 제7 태양의 구체예에서, 상기 조성물은

(a) 개에서 S. zooepidemicus에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및/또는

(b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

그리고, 임의적으로 하기 (c) 내지 (h)중 어느 하나 이상을 포함한다:

(c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

(d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(e) 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(f) 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(g) 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(h) 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체.

본 발명의 제7 태양의 바람직한 구체예에서, 상기 조성물은

(b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

를 포함한다.

본 발명의 제7 태양의 다른 바람직한 구체예에서, 상기 조성물은

(b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

그리고, 하기 (c), (e), (f), (g) 및 (h)중 어느 하나 이상을 포함한다:

(c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

(e) 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(f) 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(g) 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(h) 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체.

그러므로, 상기 조성물은 병원체 (b) 및 (d) 뿐만 아니라, 병원체 (c), (e), (f), (g) 및 (h)중에서 어느 두 개, 또는 세개, 또는 네 개, 또는 모든 다섯 개의 병원체를 포함할 수 있는 것으로 해석된다.

본 발명의 제7 태양의 다른 바람직한 구체예에서, 상기 조성물은

(a) 개에서 S. zooepidemicus에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

그리고, 하기 (c), (e), (f), (g) 및 (h)중에서 어느 하나 이상을 포함한다:

(c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

(e) 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(f) 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(g) 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(h) 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체.

그러므로, 상기 조성물은 병원체 (a), (b) 및 (d) 뿐만 아니라, 병원체 (c), (e), (f), (g) 및 (h)중에서 어느 두 개, 또는 세개, 또는 네 개, 또는 모든 다섯 개의 병원체를 포함할 수 있는 것으로 해석된다.

본 발명의 제8 태양은

(a) 개에서 S. zooepidemicus에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

중 어느 하나 이상, 및 임의적으로 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 보조제를 포함하는 백신 조성물을 일부로 하는 키트를 제공하는 것이다.

그러므로, 상기 키트는 상기 병원체중 어느 두개, 예를 들면 (a)와 (b), (a)와 (c), 또는 (b)와 (c)를 포함할 수 있는 것으로 해석된다. 상기 키트는 (a), (b) 및 (c)의 세개 모두의 병원체를 포함할 수 있다.

본 발명의 구체예에서, 상기 키트는

(d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(e) 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(f) 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(g) 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(h) 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

중 어느 하나 이상을 추가로 포함한다.

본 발명의 제8 태양의 구체예에서, 상기 키트는

(a) 개에서 S. zooepidemicus에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및/또는

(b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체,

그리고, 임의적으로, 하기 (c) 내지 (h)중 어느 하나 이상을 포함한다:

(c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

(d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(e) 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(f) 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(g) 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(h) 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체.

본 발명의 제8 태양의 바람직한 구체예에서, 상기 키트는

(b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

를 포함한다.

본 발명의 제8 태양의 바람직한 구체예에서, 상기 키트는

(b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

그리고, 하기 (c), (e), (f), (g), (h)중 어느 하나 이상을 포함한다:

(c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(e) 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(f) 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(g) 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(h) 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체.

그러므로, 상기 키트는 병원체 (b) 및 (d) 뿐만 아니라, 병원체 (c), (e), (f), (g) 및 (h)중에서 어느 두 개, 또는 세 개, 또는 네 개, 또는 모든 다섯 개의 병원체를 포함할 수 있는 것으로 해석된다.

본 발명의 제8 태양의 바람직한 구체예에서, 상기 키트는

(a) 개에서 S. zooepidemicus에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

그리고, 하기 (c), (e), (f), (g) 및 (h)중에서 어느 하나 이상을 포함한다:

(c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(e) 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(f) 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

(g) 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

(h) 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체.

그러므로, 상기 키트는 병원체 (a), (b) 및 (d) 뿐만 아니라, 병원체 (c), (e), (f), (g) 및 (h)중에서 어느 두 개, 또는 세 개, 또는 네 개, 또는 모든 다섯 개의 병원체를 포함할 수 있는 것으로 해석된다.

본 발명의 제9 태양에서, 본 발명은 동물에서 S. zooepidemicus, M. cynos 및 클라미도필라중 어느 하나 이상의 각각, 또는 그의 면역성 단편에 대해 면역 반응을 일으키는 단계; 및 동물 또는 그로부터 유래된 불멸세포로부터 항체를 제조하는 단계를 포함하는, S. zooepidemicus, M. cynos 및 클라미도필라중 어느 하나 이상에 대한 항체를 제조하는 방법을 제공하는 것이다.

모노클로널 항체를 제조하는 방법 및 기술은 당업자에게 잘 알려져 있는데, 예를 들어 H Zola의 "Monoclonal Antibodies: A manual of techniques"(CRC Press, 1988), 및 J G R Hurrell의 "Monoclonal Hybridoma Antibodies : Techniques and Application"(CRC Press, 1982)에 개시된 내용은 참조에 의해 본원에 포함된다.

본 발명의 제10태양은 동물에서 S. zooepidemicus, M. cynos 또는 클라미도필라중 어느 하나 이상의 각각, 또는 그의 면역성 단편을 사용하여 항체-표시 라이브러리(antibody-display library)로부터 항체를 선택하는 단계를 포함하는, S.zooepidemicus, M. cynos 및 클라미도필라중 어느 하나 대한 항체를 수득하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 제9 및 제10 태양의 구체예에서, 클라미도필라는 C. abortus, C. psittaci 또는 C. felis이다. 다른 구체예에서, 클라미도필라는 C. muridarum, C. pecorum, C. pneumoniae, C. suis 또는 C. trachomatis이다.

본 발명의 제11 태양은 S. zooepidemicus, M. cynos 또는 클라미도필라에 특이적으로 결합하는 항체를 제공하는 것이다. 이는 본 발명의 제9 및 제10 태양의 방법에 의해 제조될 수 있다.

본 발명의 구체예에서, 클라미도필라에 특이적으로 결합하는 항체는 C. abortus, C. psittaci 또는 C. felis에 결합한다. 다른 구체예에서, 클라미도필라에 특이적으로 결합하는 항체는 C. muridarum, C. pecorum, C. pneumoniae, C. suis 또는 C. trachomatis에 결합한다.

본 발명의 상기 및 하기 태양에 있어서, "항체"에는 면역글로불린 분자 전체뿐만 아니라, Fab, F(ab')₂, Fv 및 항원-결합 부위가 남아있는 다른 단편과 같은 면역글로불린 분자의 단편도 포함된다. 이와 유사하게, "항체"라는 용어는 단쇄 Fv 분자(scFv) 및 도메인 항체(dAbs)와 같은 유전학적으로 처리된 항체의 유도체를 포함한다. 이 용어는, 파아지 발현 기술, 또는 특정 생물체 또는 특정 생물체의 영역에 결합하는 분자를 임의적으로 선택하는 다른 기술을 사용하여, 제조될 수 있는 항체 유사 분자를 포함한다. 그러므로, 이러한 정황에 있어서는, 항체라는 용어는, 천연 항체의 인식 부위의 일부분(즉, 에피토프 또는 항원과 결합 또는 화합하는 항체의 일부)인 구조, 바람직하게는 펩티드 구조를 포함하는 모든 분자를 포함한다.

항체의 가변 중(varible heavy, V_H) 도메인 및 가변 경(varible light, V_L) 도메인은 항원 인식에 관련되는데, 이는 초기 프로테아제 가수분해 실험에 의해 처음으로 확인되었다. 추가적인 확인은 설치류 항체의 "인간화"에 의해 확인되었다. 설치류 기원의 가변 도메인은 인간 기원의 불변 도메인에 융합될 수 있고, 그 결과로서 생성된 항체는 설치류 기원 항체의 항원 특이성이 남게 된다(Morrison et al (1984) Proc . Natl . Acad . Sci . USA 81, 6851-6855).

항원 특이성은 가변 도메인에 의해 부여되고, 불변 영역과의 관계없으며, 이는 하나 이상의 가변 도메인을 포함하는 모든 항체 단편의 박테리아 발현을 포함하는 실험으로부터 알게 된다. 이러한 분자는 Fab-유사 분자 (Better et al (1988) Science 240, 1041); Fv 분자 (Skerra et al (1988) Science 240, 1038); 유연한 올리고펩티드를 통해 연결된 V_H 및 V_L 파트너 도메인이 있는 단일-쇄 Fv (ScFv) 분자 (Bird et al (1988) Science 242, 423; Huston et al (1988) Proc. Natl . Acad . Sci . USA 85, 5879) 및 분리된 V 도메인을 포함하는 단일 도메인 항체 (dAbs) (Ward et al (1989) Nature 341, 544)를 포함한다. 특이적 결합 부위가 남아있는 항체 단편의 합성에 관련된 기술의 일반적인 내용은 문헌[Winter & Milstein (1991) Nature 349, 293-299]에 기재되어 있다.

"ScFv 분자"는 V_H 및 V_L 파트너 도메인이 유연한 올리고펩티드를 통해 연결된 분자를 의미한다. ScFv 항체와 같은 변형된(engineeered) 항체는 문헌[J. Huston et al, (1988) "Protein engineering of antibody binding sites: recovery of specific activity in an anti-digoxin single chain Fv analogue produced in E. coli ", Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 85, pp.5879-5883] 및 [A. Pluckthun, (June 1991) "antibody engineering; Advances from use of E. coli expression systems" Bio / technology vol 9]에 기재된 기술 및 방법을 사용하여 만들수 있으며, 그 내용은 참조에 의해 본원에 포함된다.

완전한 항체보다 항체 단편을 사용하는 경우 장점은 여러가지가 있다. 단편의 더 작은 크기는, 표적 부위에 침투가 더 우수해지는 것과 같은 개선된 약리학적 특성을 이끌어낼 수 있다. 보체 결합과 같은 완전한 항체의 작동자 기능은 제거된다. Fab, Fv, ScFv 및 dAb 항체 단편은 모두 대장균(E. coli)에서 발현되고 분비될 수 있으므로, 그러한 단편을 대량으로 쉽게 생산할 수 있다.

완전한 항체, 및 F(ab')₂ 단편은 "2가"이다. "2가"라는 것은 완전한 항체 및 F(ab')₂ 단편은 두개의 항원 결합 부위를 갖는다는 의미이다. 반대로, Fab, Fv, ScFv 및 dAb 단편은 오직 하나의 항원 결합부위를 갖는 1가이다.

비록 항체가 폴리클로널 항체가 될 수 있다고 할지라도, 항체가 모노클로널 항체인 것이 바람직하다. 어떤 경우에 있어서, 특히 항체가 개에게 반복적으로 투여될 것이라면, 그러한 모노클로널 항체가 개의 모노클로널 항체 또는 "개화된(caninised)" 항체인 것이 바람직하다.

폴리클로널 항체는 다중특이적(polyspecific) 또는 단일특이적(monospecific)이 되도록 제조될 수 있다. 단일특이적인 것이 바람직하다. 키메라 항체는 문헌 [Neuberger et al (1998), 8 ^th International Biotechnology Symposium Part 2, 792-799]에 그 내용이 기재되어 있다.

항체는 "개화된" 항체가 바람직하다. 적절하게 제조된 비-개 항체는, 공지된 방법, 예를 들어 쥐 항체의 CDR 영역을 개 항체의 외곽 구조(framework)에 삽입하는 방법에 의해 "개화"될 수 있다. 개화된 항체는 문헌[M. Verhoeyen, C. Milstein and G. Winter (1988) "Reshaping human antibodies: Grafting an antilysozyme activity", Science, 239, 1534-1536] 및 [C. Kettleborough et al., (1991) "humanisation of a mouse monoclonal antibody by CDR grafting; The importance of framework residues in loop conformation", Protein Engineering, l4 (7), 773-783]에 항체의 인간화에 대하여 개시된 내용에 상응하는 기술 및 방법을 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 문헌들에 개시된 내용은 참조에 의해 본원에 포함된다.

CIRD와 관련된 병원체와 반응하는 항체를 투여함으로써, 개는 CIRD에 대한 면역성을 수동적으로 얻을 수 있는 것으로 해석된다.

그러므로 본 발명의 제12 태양은 S. zooepidemicus, M. cynos 또는 클라미도필라중 어느 하나 이상의 각각에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체를 개에게 투여하는 것을 포함하는, CIRD에 대하여 개에게 수동적으로 면역성을 주는 방법을 제공하는 것이다.

개에서의 CIRD는 상기 질환와 관련된 병원체와 반응하는 항체를 투여함으로써 치료될 수 있는 것으로 해석된다.

본 발명의 제13 태양은, S. zooepidemicus, M. cynos 또는 클라미도필라중 어느 하나 이상의 각각에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체를 개에게 투여하는 것을 포함하는, 개에서 CIRD를 치료하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 제12 또는 제13 태양의 구체예에서, 클라미도필라에 특이적으로 결합하는 항체는 C. abortus, C. psittaci 또는 C. felis에 결합한다. 다른 구체예에서, 클라미도필라에 특이적으로 결합하는 항체는 C. muridarum, C. pecorum, C.pneumoniae, C. suis 또는 C. trachomatis에 결합한다.

본 발명의 제12 또는 제13 태양의 구체예에서, 상기 방법은 CRCV, CPIV, CAV-2, CHV 및 B. bronchiseptica중 어느 하나 이상에 특이적으로 결합하는 항체를 투여하는 것을 추가로 포함한다.

CRCV, CPIV, CAV-2, CHV 및 B. bronchiseptica에 특이적으로 결합하는 항체는 상기에 기재한 바와 같은 표준 방법에 의해 제조될 수 있다.

본 발명의 제14 태양은, 개에게 CIRD에 대한 면역성을 수동적으로 주기 위한 약제의 제조에 있어서, S. zooepidemicus, M. cynos 또는 클라미도필라중 어느 하나 이상의 각각에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체의 용도를 제공하는 것이다.

본 발명의 제15 태양은, 개에서 CIRD을 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서, S. zooepidemicus, M. cynos 또는 클라미도필라중 어느 하나 이상의 각각에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체의 용도를 제공하는 것이다.

본 발명의 제14 또는 제15 태양의 구체예에 있어서, 클라미도필라에 특이적으로 결합하는 항체는 C. abortus, C. psittaci 또는 C. felis에 결합한다. 다른 구체예에서, 클라미도필라에 특이적으로 결합하는 항체는 C. muridarum, C. pecorum, C. pneumoniae, C. suis 또는 C. trachomatis에 결합한다.

본 발명의 제14 또는 제15 태양의 구체예에서, 상기 약제는 CRCV, CPIV, CAV-2, CHV 및 B. bronchiseptica중 어느 하나 이상의 각각에 특이적으로 결합하는 항체를 추가로 포함한다.

본 발명의 제16 태양은, S. zooepidemicus에 특이적으로 결합하는 항체, M.cynos에 특이적으로 결합하는 항체, 및 클라미도필라에 특이적으로 결합하는 항체중 어느 둘 이상을 포함하는 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 구체예에서, 클라미도필라에 특이적으로 결합하는 항체는 C. abortus, C. psittaci 또는 C. felis에 결합한다. 다른 구체예에서, 클라미도필라에 특이적으로 결합하는 항체는 C. muridarum, C. pecorum, C. pneumoniae, C. suis 또는 C. trachomatis에 결합한다.

본 발명의 구체예에서, 상기 조성물은 CRCV, CPIV, CAV-2, CHV 및 B. bronchiseptica중 어느 하나 이상에 특이적으로 결합하는 항체를 추가로 포함한다.

또한, 본 발명은 진단 방법 및 분석을 포함하는 것으로 해석될 것이다. 그러므로, 본 발명은 하기 단계를 포함하는, 개가 CIRD와 관련된 클라미도필라 종에 노출되었는지 여부를 측정하는 방법을 제공하는 것이다:

(a) 개로부터 적당한 시료를 수득하는 단계;

(b) CIRD와 연관된 클라모두필라 종 또는 그에 대한 항체를 시료에서 동정하는 단계.

전형적으로, 클라미도필라 종은 서열번호: 1 내지 8중 어느 서열(RNA로서 보여지는 경우)을 포함하는 23S rRNA를 갖는 것이다(부분적인 23S RNA 서열을 보여주는 도 5 및 8, 및 실시예 3 참조).

본 발명은 또한, 하기 단계를 포함하는, 개가 CIRD에 걸렸거나 또는 CIRD에 감염되기 쉬운지 여부를 측정하는 방법을 제공하는 것이다:

(a) 개로부터 적당한 시료를 수득하는 단계;

(b) S. zooepidemicus, M. cynos 또는 클라미도필라, 또는 그에 대한 항체를 시료에서 동정하는 단계.

상기 방법들은 본 발명의 구체예에서 생물체, 예를 들어 시료 내에 생물체 자체 또는 그의 성분(예를 들어 단백질 또는 핵산)을 검출함으로써 생물체에 현재 노출되었는지를 알 수 있다. 상기 방법들은 또한 생물체 또는 그의 성분에 관한 시료에서 항체를 검출함으로써 이러한 생물체에 과거에 노출되었는지 알 수 있다.

전형적으로, 상기 시료는, 혈청, 타액, 항체, 기관 세척액 및 세기관지 세척액과 같은 시료를 함유하는 항체를 포함하는 어느 적당한 것이다.

그러므로, 개에서의 생물체의 존재는(시료는 개로부터 수득함), 생물체 또는 그의 성분의 존재에 대해 시료를 분석함으로써 측정될 수 있다. 예를 들어, 23S RNA를 포함하는 핵산 성분에 대해서, 핵산을 추출하고, 필요하다면 DNA로 만들어, 매우 엄격한 혼성화 반응, 특이적 증폭, 핵산 서열 분석 및 당업계에 공지된 다른 방법을 포함하는 기술을 사용하여 검출할 수 있다. "매우 엄격한 혼성화 반응"이란, 폴리뉴클레오티드 및 이와 혼성화되는 핵산은 매우 엄격한 조건하에서 혼성화될 수 있을 정도로 충분히 유사한 뉴클레오티드 서열을 갖는 것을 의미한다. 당업계에 알려진 바와 같이, 핵산 혼성화의 엄격성은, 혼성화가 일어나는 핵산의 길이, 혼성화되는 서열의 동일성 정도와 같은 인자, 및 온도, 이온 세기 및 서열상의 CG 또는 AT 정도와 같은 인자에 따라 좌우된다.

매우 엄격한 조건에서 생물체의 핵산 분자에 혼성화될 수 있는 핵산은 최소한 생물체의 일부 영역에 걸쳐서, 90% 초과의 서열 동일성, 바람직하게는 95% 초과 또는 96% 초과 또는 97% 초과 또는 98 초과의 서열 동일성, 더욱 바람직하게는 99% 초과의 서열 동일성을 갖는 것이 바람직하다.

전형적으로, 선택적인 혼성화를 유도하는 매우 엄격한 혼성화 조건은 당업계에 공지되어 있는데, 예를 들어 문헌[Sambrook et al (2001)]에 기재되어 있으며 이러한 기재내용은 참조에 의해 본원에 포함된다.

핵산이 나일론 막에 고정화되어 있고 프로브 핵산이 500 염기 이상인 경우에, 전형적인 혼성화 용액의 예는 다음과 같다:

6 x SSC (시트르산나트륨 식염수, saline sodium citrate)

0.5% 소듐 도데실 설페이트 (SDS)

100 μg/ml 변성되고 단편화된 연어 정자 DNA.

혼성화 반응은 68℃에서 수행된다. 고정화된 핵산을 갖는 나일론 막은 68℃에서 0.1 x SSC에서 세척될 수 있다.

20 x SSC는 다음과 같은 방법으로 제조될 수 있다. 800ml에 H₂O에 NaCl 175.3g 및 시트르산나트륨 88.2g을 녹인다. 10N NaOH 몇방울로 pH를 7.0으로 조정한다. H₂O로 부피를 1L로 조정한다. 엘리쿼트(aliquot)로 나눈다. 오토클레이빙으로 멸균한다.

핵산이 나일론 막에 고정화되어 있고 프로브 핵산이 15 내지 60 염기인 경우에, 전형적인 혼성화 용액의 예는 다음과 같다:

3.0 M 트리메틸암모늄 클로라이드 (TMACl)

0.01 M 인산 나트륨 (pH 6.8)

1 mm EDTA (pH 7.6)

0.5% SDS

100 μg/ml 변성되고 단편화된 연어 정자 DNA

0.1% 탈지 건조 분유.

혼성화를 위한 최적 온도는 주어진 쇄 길이에 대한 T_i보다 5℃ 낮도록 선택된다. T_i는 프로브와 그의 표적 서열사이에 형성되는 혼성체의 비가역적인 융점이다. 문헌[Jacobs et al (1988) Nucl . Acids Res . 16, 4637]은 T_is의 측정에 대해 기재하고 있다. 3M의 TMACl중에서 17-머(mers)에 대해 추천되는 혼성화 온도는 48-50℃, 19-머에 대해서는 55-57℃, 20-머에 대해서는 58-66℃이다.

개로부터 나온 시료내 생물체의 단백질 성분에 대한 분석은 당업계에 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 전형적으로, 그러한 방법은 결합된 항체, 생물체 또는 그의 성분에 결합된 항체를 이용하는 것이다.

예를 들어, 생물체로부터 나온 단백질의 발현은 전통적인 면역조직학적 방법으로 연구될 수 있다. 이러한 방법에서, 특이적 인식은 1차 항체(폴리클로널 또는 모노클로널)에 의해 제공되나, 2차 검출 시스템은 형광물질, 효소 또는 결합된 2차 항체를 사용할 수 있다. 그 결과, 병리학적 검사를 위한 조직 단편을 의한 면역 조직학적 염색이 수득된다. 또한, 웨스턴-브롯 또는 도트/스롯(dot/slot) 분석을 위한 단백질의 유리를 위하여, 조직은 예를 들어 요소(urea) 및 중성 세제를 이용하여 추출될 수 있다(Jalkanen, M., et al, J. Cell . Biol . 101:976-985 (1985); Jalkanen, M., et al, J. Cell . Biol . 105:3087-3096 (1987)). 양이온의 고체 상에 기초하는 이러한 방법에 있어서, 단백질의 정량은 분리된 단백질을 기준으로 사용하여 수행될 수 있다. 이러한 기술은 또한 체액 시료에 적용할 수 있다.

단백질 발현을 검출하는데 유용한, 항체에 기반을 둔 다른 방법에는, 효소 면역 분석(enzyme linked immunosorbent assay; ELISA) 및 방사성 면역 분석(radioimmunoassy; RIA)이 포함된다. 예를 들어, 반응성 모노클로널 항체는 단백질을 검출하고 정량화하기 위해 면역 흡착제 및 효소-표지된 프로브 둘 모두로서 사용될 수 있다. 시료에 존재하는 단백질의 양은 선형 회귀 컴퓨터 알고리즘을 사용하여 표준 제품에 존재하는 양을 참조하여 계산될 수 있다. 종양 항원을 검출하기 위한 ELISA는 문헌[Iacobelli et al, Breast Cancer Research and Treatment 11: 19-30 (1988)]에 기재되어 있다. 다른 ELISA 분석에 있어서 두개의 구별되는 특이적 모노클로널 항체는 체액에 있는 단백질을 검출하는데 사용될 수 있다. 이러한 분석에 있어서, 하나의 항체는 면역 흡착제로서 사용되고 다른 하나는 효소-표지된 프로브로서 사용된다.

상기 방법은 본질적으로 "1단계" 또는 "2단계" 분석으로서 수행될 수 있다. "1단계" 분석은, 단백질을 고정화된 항체에 접촉시키고, 세척 없이 상기 혼합물을 표지된 항체에 접촉시키는 것을 포함한다. "2단계" 분석은 상기 혼합물을 표지된 항체에 접촉시키기 이전에 세척 과정을 포함한다. 또한 다른 통상적인 방법도 적절하다면 사용될 수 있다. 지지체에 분석 시스템의 하나의 성분을 고정화하는 것이 바람직한데, 이에 의해 시스템의 다른 성분들은 고정화된 성분과 결합하게 되어 시료로부터 제거된다.

적당한 효소 표지는, 예를 들어 기질과 반응함으로써 과산화수소의 생산을 촉매작용하는 옥시다아제 그룹을 포함한다. 특히, 글루코스 옥시다아제가 바람직한데, 이는 안정성이 우수하며 그의 기질(글루코스)는 즉시 상업적으로 구입이 가능하기 때문이다. 옥시다아제 표지의 활성은 효소-표지된 항체/기질 반응에 의해 생성된 과산화수소의 농도를 측정함으로써 분석될 수 있다. 효소 대신에 다른 적당한 표지는 방사성 동위원소(예를 들어, 요오드(¹²⁵I, ¹²¹I), 탄소(¹⁴C), 황(³⁵S), 트리튬(³H), 인듐(¹¹²In) 및 테크네튬(⁹⁹mTc)), 형광성 표지(예를 들어, 플루오레세인 및 로다민), 및 비오틴을 포함한다.

생물체 또는 그의 성분에 대한 항체는, 예를 들어 면역 흡착 분석(immunosorbent assay)의 잘 알려진 기술(예를 들어, 효소 변역 분석(ELISA))을 사용하여 검출될 수 있다.

그러므로, 본 발명의 또다른 태양은 (a) 개에서 S. zooepidemicus에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체, (b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체, 및 (c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체중 어느 하나 이상으로 코팅된 고체 상; 및 고체상에 결합된 항체에 결합할 수 있는 검출가능한 표지 결합체(conjugate)를 포함하는, CIRD와 관련된 항체를 검출하는 면역 흡착 분석 방법을 제공하는 것이다.

바람직하게, 상기 고체 상은 미세역가 웰(microtitre well)이다. 더욱 바람직하게는 그 결합체는 항-개 항체를 포함한다. 바람직하게는, 그 결합체는 효소(예를 들어, 겨자무 페록시다아제(horseradish peroxidase))를 포함한다. 더욱 바람직하게는, 면역흡착 분석은 또한 효소에 대한 기질을 포함한다. 본 발명은 면역 흡착 분석의 성분을 일부로 하는 키트에 관한 것이다. 그러므로, 이러한 키트는 미세역가 플레이트와 같은 고체상, 생물체 또는 고체상에 코팅된 생물체로부터의 단백질, 항-생물체(또는 그의 성분)에 결합할 검출가능한 표지 결합체(예를 들어, 항-개 항체)(고체상에 결합됨)를 포함할 수 있다. 검출가능한 표지 결합체가 효소라면 키트는 또한 효소에 대한 기질을 포함한다. 키트는 또한 양성 대조군 시료(고체 기질상의 항원과 결합하는 것으로 알려진 항체를 포함하는 시료) 및 음성 대조군 시료를 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 상기 및 본 발명의 제1 태양에서 언급한 것처럼 (a), (b) 및 (c)중 어느 하나 또는 둘 또는 세개 모두로 코팅된 고체 상 기질을 포함한다. 전형적으로 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는 항체에 또한 결합할 병원체이다. 전형적으로, 병원체는 항원성 단백질이다. 전형적으로, 단백질은 미세역가 플레이트에 항원의 안정성에 따라 4℃ 내지 37℃의 온도에서 밤새도록 코팅된다. 결합되지 않은 단백질은 인산 완충 식염수 또는 트리스 완충 식염수와 같은 세척 완충액으로 세척하여 제거된다. 혈청 또는 다른 시료는 1 시간 내지 수 시간 동안 37℃의 온도에서 플레이트 상에서 반응시킨다. 결합되지 않은 물질은 세척되어 제거되고, 그 플레이트는 효소-표지된(예를 들어, 겨자무 페록시다아제) 항체(예를 들어, 혈청 시료에 대한 항-개과 IgG 또는 IgM), 또는 폐 세척액에 대한 항-개과 IgA와 함께 반응시킨다. 결합되지 않은 항체는 세척되어 제거되고, 플레이트는 OPD와 같은 기질과 함께 10분 동안 반응시키고, 그 광학밀도(OD)는 광도계로 측정된다.

바람직하게는, 고체 기질은 미세역가 웰이다.

본원에 언급된 모든 문헌은 참고로 본원에 포함된다. 본 명세서상의 선행문헌의 기재 및 개시 내용을 반드시 인식할 필요가 없는데, 그러한 문헌은 당업계의 지식 또는 통상적인 지식이기 때문이다.

도 1은 임상의 호흡기 지수를 갖는 209 마리의 컨넬에서 키운 개로부터 S. canis 및 S. zooepidemicus의 분리를 나타낸 것이다(n=각군의 개의 총수). 오차 막대는 신뢰성 구간을 의미한다(95%).

도 2는 CIRD에 걸린 개의 비율(%) 및, 컨넬에서 보낸 시간에 따른 S. canis 및 S. zooepidemicus의 감염을 나타낸 것이다(n=각군의 개의 총수). 오차 막대는 신뢰성 구간을 의미한다(95%).

도 3은 CIRD의 심각도 수준이 증가됨에 따른, 기관 및 폐에 M. cynos가 감염된 개의 비율(%)을 나타낸 것이다.

도 4는 컨넬에서 보낸 시간이 길어짐에 따른, 기관 및 폐에 M. cynos가 감염된 개의 비율(%)을 나타낸 것이다.

도 5는 CRID에 걸린 개로부터 분리된 클라미도필라의 23S rRNA 유전자의(DHB 10) 218 bp의 부분적인 뉴클레오티드 서열(서열번호 1)을 나타낸 것이다.

도 6은 CIRD의 심각도 수준이 증가됨에 따른, 기관 및 폐에 클라미도필라가 감염된 개의 비율(%)을 나타낸 것이다.

도 7은 클라미디아 및 클라미도필라의 모든 공지된 종의 23S rRNA와 함께 정렬시킨 부분적인 23S rRNA 개과 서열(DHB)(Cabor - C. abortus, Cpsit - C. psittaci, Cfel - C. felis, Ccavi - C. caviae, Cpne - C. pneumoniae, Cpec - C. pecorum, Csuis C. suis, Ctrac C. trachomatis, Wad - Waddlia, Sim - Simkania)을 나타낸 것이다.

도 8은 CIRD에 걸린 개로부터 분리된 클라미도필라 종의 7개의 추가적인 분리물로부터 나온 23S rRNA 유전자의 218 bp의 부분적인 뉴클레오티드 서열(서열번호 2 내지 8)을 나타낸 것이다(DHB 2,4,5,6,7,8 및 9).

도 9는 CIRD의 심각도 수준이 증가됨에 따른, 기관 및 폐에 개과 헤르피스바이러스가 감염된 개의 비율(%)을 나타낸 것이다.

이하, 실시예를 이용하여 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

실시예 1: 스트렙토코커스 에쿠이 서브 종 주에피데미커스와 개과 전염성 호흡기 질환의 관련성

요약

개과 전염성 호흡기 질환(CIRD)는 백신의 광범위한 사용에도 불구하고 많은 컨넬에서 사육되는 개에게 영향을 미치는 다중 인자의 감염성 질환이다. 현재 백신의 목적은 바이러스 병원체들 및 하나의 박테리아 병원체, 보르데텔라 브론키셉티카를 방어하기 위한 것이다. 우리는 CIRD에 있어서 스트렙토코커스 종의 역할을 조사하였다. 임상적으로 건강한 개 및 CIRD에 걸린 개의 하부 호흡기 관에서 스트 렙토커스를 분리 및 동정하여, 특정 스트렙토코커스 종의 존재와 호흡기 질환의 관련성을 알아보는데 사용하였다. 우리는 풍토성 CIRD에 걸린 컨넬에서 사육되는 개의 개체군에서, 스트렙토코커스 에쿠이 서브 종 주에피데미커스(S.zooepidemicus)의 존재는 질환을 더욱 심각하게 하는 것과 관련된다는 것을 보여준다.

서론

CIRD는 모든 연령의 개에 영향을 미치는 전염병이고, 일반적으로 많은 수의 개들이 좁은 공간에서 함께 사육되는 경우 발생한다. 이 질환은 초기 단계에는 후두염의 건조한 해킹(hacking) 기침 특성을 갖고, 코 및/또는 눈 분비물, 및 다양한 식욕감퇴 및 우울증을 나타내고, 기관기관지염, 폐렴 및 더 심한 경우에는 사망에까지 이를 수 있는 높은 사망률을 나타내는 질환이다. 이 질환은 역사적으로 복합성 감염으로서 간주되어 왔는데, 바이러스(CPIV 및 CAV-2) 병원체와 박테리아 병원체 둘 모두가 함께 또는 순차적으로 침입하여 임상적 지수의 상승적인 증대를 낳았다(Appel and Binn, 1987). 이 질환에 감염되어 있는 동안 검출되는 가장 일반적인 박테리아 병원체는 B. bronchiseptica (McCandlish et al, 1978)이고, 그러나 다른 박테리아 종(예를 들어, 파스테렐라(Pasteurella) 종, 미코플라즈마(Mycoplasma) 종 및 β-용혈성 스트렙토코커스(β-hemolytic streptococci; βhS))도 질환과 관련되어 있다 (McCandlish et al, 1978; Rosendal, 1978;; Thrusfield et al, 1991).

병든 개 및 건강한 개의 상부 호흡기 기관(구강 또는 비강) 및 하부 호흡기 관(기관 및 폐)와 관련된 많은 연구는 βhS의 존재를 언급한다(Smith, 1967; McCandlish et al, 1978; McKiernan et al, 1982; Azetaka and Konishi, 1988). 그러나, 다양한 종의 βhS가 개의 상부 호흡기 관에서 발견된다 하더라도, 오직 몇몇의 연구만이 하부 기도 질환과 관련된 βhS 종에 대해 집중된 것이다(Garnett et al, 1982; Angus et al, 1997). 문헌[Biberstein et al, (1980)]은 개과 호흡기 관에서의 βhS 종이 문헌 βhS 종에 의해 발견되었다 할지라도, 이 연구는 상부 및 하부 호흡기 관에서 캐리지(carriage) 사이의 구별을 무시하고 있다. 나아가 비록 참조를 위한 이유로 가축 병원 환자로부터 분리되었다고 할지라도, 특정의 임상적 질환과의 어떤 관련성은 생략되어 있다. 개에서 가장 흔한 βhS인 란스필드 군 G 스트렙토코커스, S. canis는, 피부뿐만 아니라 생식기 점막 및 호흡기 점막의 일반적인 공생 생물이다(Timoney, 1987; Quinn et al, 1999). 스트렙토코커스 캐니스(Streptococcus canis; S. canis)는 이미 건강한 개의 60 내지 73%의 편도로부터 이미 분리되었다 (Smith, 1967; Sadatsune and Moreno, 1975; Biberstein and Hirsh, 1999). S. canis는 개에서 다양한 산발성 질환 및 기회감염 질환을 일으키는데, 이러한 질환에는 폐렴, 패혈증, 농양, 이염, 유선염, 자궁농증, 직장염, 독성 쇼크 증후군 및 괴사성 근막염 등이 포함된다(Biberstein and Hirsh, 1999; Quinn et al, 1999).

S. canis βhS 이외에, A, C 및 E와 같은 다른 란스필드 군이 개로부터 또한 분리되었다(Biberstein et al , 1980). S. zooepidemicus, 란스필드 군 C는 포유동물의 상부 호흡기 관 점막의 공생동물로서 발견되었다(Timoney et al , 1988; Quinn et al , 1999). S. zooepidemicus는 여러 질환, 예를 들어 말에서 하부 기도 질환, 망아지의 폐렴 및 자궁 경관염(Chanter, 1997; Biberstein and Hirsh, 1999), 라마에서 폐렴(Biberstein and Hirsh, 1999), 돼지에서 패혈증 및 관절염(Timoney, 1987), 소 및 염소에서 유선염(Timoney et al , 1988), 가금에서 패혈증, 새끼양에서 심막염 및 폐렴(Timoney, 1987), 기니 돼지에서 림프절염(Quinn et al , 1999), 및 인간에서의 사구체염(Balter et al, 2000)과 연관된다. 개에서, S. zooepidemicus는 상처 감염, 패혈증(Quinn et al ,1999) 및 급성 괴사성 출혈성 폐렴(Garnett et al,1982)과 관련되어 있다. 이 연구에서 우리는 βhS의 종들이 건강한 개 및 CIRD에 걸린 개 둘 모두의 호흡기 관에 존재하는지 여부를 확립하려고 노력했다.

재료 및 방법

연구 개체군 및 시료 추출

주된 연구 개체군(n=209, 기관지 폐포의 세척액, BAL)은 잘 확립된 새가정 입주 센터 켄넬(약 600 마리의 개)로부터의 풍토성 CIRD에 걸린 동물들로 이루어졌다. 컨넬로 들어갈 당시, 모든 개는 디스템퍼 바이러스, CAV-2, CPIV 및 개과 파르보바이러스에 대한 살아있는 감독된 백신 KAVAK DA₂ PiP69(Fort Dodge), 및 렙토스피라병에 대한 KAVAK L로 백신 접종을 하였다. 이 센터에 있는 CIRD에 걸린 개에는 개과 코로나바이러스(CRCV) 및 B. bronchiseptica 둘 모두가 존재한다는 것이 입증되었다(Chalker et al, 2003; Erles et al, 2003). 매주마다 이 컨넬은 복지 사업상의 이유로 몇몇의 개들을 희생되어야만 하며, 이로부터 2-3마리의 개는 시료추출을 위해 임의로 선택되었다. BAL 시료는 1999년부터 2001년의 2년에 걸쳐 전체 209 마리의 개로부터 하기 방법으로 취하였다. 안락사한 지 2시간 이내에, 분기(bifurcation) 바로 위에서 기관을 고정화하여(clamp) 시료를 추출하는 동안 폐의 기관 오염을 막았다. 멸균된 카테터를 사용하여 50mL의 행크스 밸런스 염 용액(Hanks Balanced Salt solution)을 좌측 정점 폐엽에 넣었다. 그런 다음, 이 폐엽을 30초 동안 손으로 마사지하고 BAL을 수득하였다. 또한, 안락사 당시, 개들은 임상적인 호흡기 징후의 심각도를 기준으로 다음과 같은 카테고리로 등급을 매겼다: (1) 호흡기 징후 없음, n=71 (2) 가벼운 기침, n=37 (3) 기침 및 콧물, n=76 (4) 우울증 및/또는 식욕부진과 함께 기침 및 콧물, n=9 (5) 화농성의 기관지 폐렴 n=16.

BAL 시료 추출 후에, 조직학적 분석을 위해 우측 말단 엽으로부터 폐조직의 절편을 취하였다. 포르말린으로 고정된 (10% 포르말린 식염수) 조직 덩어리를 파라핀에 파묻고, 표준 헤모톡시린(haemotoxylin) 및 에오신으로 염색된 단편을 광학 현미경으로 관찰하였다(X40, X100, X400). 내부-폐포 호중구의 존재 또는 부존재가 관찰되었다.

각각의 개에 대해서 컨넬에서 보낸 총 날짜를 기록한 다음, 컨넬에서 보낸 시간을 주 단위로 계산하였다. 각각의 동물이 컨넬로 들어갈 당시의 나이 및 임상 조건을 기록하였는데, 영양 상태, 털(가죽), 태도, 식욕 및 일반적인 임상 검사(체 온, 맥박 속도, 호흡 속도)에 기초한 임상 조건 지수는 다음과 같이 등급을 매겼다: 우수(1), 열등(2), 매우 열등(3).

추가적인 개 개체군이 대조군으로 포함되는데, 이러한 대조군은 2년(1998-2000)에 걸쳐 RVC에서 진단 세균학에 관한 임상의 호흡기 증상을 갖는 집안에서 키운 애완용 개로 이루어져 있다(n=71, BAL). 시료는 대조군으로부터 문헌[Cocoran (1998)]에 기재된 내시경 유도 장치 기술(endoscopically guided technique)을 사용하여 수득하였다. 연구에 사용된 모든 시료는 세균학 검사시까지 4℃를 유지하였으며, 결빙된 BAL 상에서 수행되는 mL당 CFU의 계산을 제외한 검사는 표본 추출 후 24시간 이내에 수행되었다.

박테리아 분리 및 동정

BAL 50㎕를 콜럼비아 혈액 아가(Oxoid Ltd., Hampshire, UK) 플레이트에 5% 멸균 양 혈액과 함께 도말한 것을 두개 준비하고, 각각 호기적으로 및 혐기적으로 24시간 동안 37℃에서 배양하였다. β-용혈성 콜로니들을 동정한 다음 하나의 콜로니를 정제하였다. 그람-양성 카탈라제-음성 박테리아는, 콜로니와 세포 형태에 의해 스트렙토코커스로 동정된 다음, 라텍스 비드 슬라이드 접합 (Oxoid Ltd., Hampshire, UK)를 사용한 결과 그 혈청군은 란스필드 군으로 분류되었다. 그런 다음 분리물은, API20STREP 매뉴얼 동정 키트(bioMerieux UK Ltd., Basingstoke, UK)를 사용하여 생화학적인 방법 및 효소 작용에 의해 종 수준으로 동정되었다.

혼합된 감염체들을 검출하기 위해, 처음의 12마리 개로부터 3개의 콜로니를, 라텍스 비드 슬라이드 접합 및 API20STREP를 이용하여 검사하였다. 인산 완충 식염수(Sigma-Aldrich Co. Ltd., Dorset, UK)중 BAL의 일련의 희석물을 세개로 하여 도말하고 배양하였는 바, 그 방법은 상기에 기재된 바와 같으며, mL BAL 당 CFU를 계산하였다. βhS의 성장은 다음과 같이 등급을 매겼다: 전혀 없음(0), mL당 100미만의 CFU (1), mL당 100 내지 1000의 CFU(2), 및 mL당 1000 초과의 CFU (3).

통계학적 분석

모든 분석에서 0.05의 유의성 수준 또는 유형 I 오차 (α) 가능성은 가정되었다. 컨넬에 들어갈 당시 나이, 임상 조건 및 컨넬에서 보낸 주수에 따른 S.zooepidemicus의 존재, 내부 폐포 호중구의 존재 및 임상 호흡기 지수는 프리즘(Prism)(version 3.0, GraphPad Software Inc, San Diego, USA) 통계학적 소프트웨어 χ ² 검사를 사용하여 분석되었다. 박테리아의 성장과 호흡기 지수의 상관관계는, 각각의 호흡기 지수에 대한 S. zooepidemicus 성장의 평균 지수를 사용하여 측정되었고, 프리즘 원 웨이 아노바(Prism one way ANOVA)(파라미터 없음) 검사로 분석되었다. 또한, 주단위의 시간에 따라 이러한 컨넬에서 키운 개에 S. canis , S.zooepidemicus 및 호흡기 질환이 존재하는지도 계산되었다.

결과

β-용혈성 스트렙토코커스(βhS)는 둘 모두의 연구 개체군에서 분리되었으 며, 집에서 키운 애완견의 BAL로부터의 분리물은 컨넬에서 키운 개와는 현저히 달랐다(1.4% 집에서 키운 애완견, 23.9% 컨넬에서 키운 개, χ ² 분석 ^***p=0.000). 모든 hS 분리물은 S. canis 또는 S. zooepidemicus인 것으로 밝혀졌다. 다른 란스필드 군 또는 종의 혼합된 감염은 발견되지 않았고, 나아가 모든 각각의 플레이트는 일정한 형태의 콜로니를 생산하였다. 컨넬에서 키운 개로부터는 S. canis 및 S.zooepidemicus 둘 모두가 분리된 반면, 집에서 키운 애완견으로부터는 S. canis는 분리되지 않았고 S. zooepidemicus의 하나의 분리물만 분리되었다. 컨넬에서 키운 개에서는 S. zooepidemicus가 더 우세한 hS 종으로 밝혀졌다(92%). 컨넬에서 키운 개에서 S. canis 및 S. zooepidemicus의 캐리지를 임상 호흡기 지수의 각 등급에서 조사하였다(도 1 참조). S. canis는 임상 지수가 있는 경우 및 없는 경우 둘 모두의 개에 존재하였고, 그의 분리는 병의 심각해짐에 따라 증가되지 않았다. 이와 반대로, 건강한 개는 병에 걸린 동물보다 하부 호흡기 관에서 S. zooepidemicus 을 더 적게 가지는 것 같았고(χ² 분석, ^**p=0.004), S. zooepidemicus의 분리는 임상 호흡기 지수가 증가함에 따라 급격히 증가하였는데, 증상이 없는 개의 경우의 9.7%에서 화농성의 기관지 폐렴에 걸린 개의 경우의 87.5%로 증가하였다(χ² 분석, ^***p=0.000). 또한, 호흡기 지수가 더 높은 개들은 임상적으로 건강한 개들에 비하여 S. zooepidemicus 박테리아의 평균 성장 지수가 더 큰 것 같았다(원 웨이 아노바 분석 ^***p=0.000. R²=0.194. F=22.265). 컨넬에 들어갈 당시의 동물의 나이와 임상 조건은 S. zooepidemicus의 분리에 영향을 미치지 않았다(χ² 분석, 나이 p=0.341, 컨넬에 들어갈 당시 임상 조건 p=0.295).

CIRD에 걸린 컨넬에서 키운 개의 퍼센트는 첫째 주의 21.1%에서 둘째 주의 70.1%로 현저하게 증가하였고, CIRD는 넷째 주 후까지 개체군에서 감소되지 않았다. 비록 중요한 차이가 검출되지 않았다 하더라도, 폐에 S. zooepidemicus를 갖는 개의 수는 첫째 주의 16.7%에서 셋째 주의 34.4%로 컨넬에서 보낸 시간에 따라 20.6%까지 증가한 반면, S. canis에 대해서는 그러한 경향이 전혀 나타나지 않았다.

조직학적 분석에 따르면, S. zooepidemicus를 갖는 개는 S. zooepidemicus를 갖지 않은 개에 비하여 더 많은 내부-폐포 호중구를 갖는 것 같았다(χ ² 분석, ^**p=0.006). 더 높은 박테리아 지수를 갖는 개에서, Garnett et al, (1982)의 발견과 유사하게, 출혈성 스트렙토코커스성 폐렴(HSP)을 유도하는 S. zooepidemicus를 갖는 개에서, 중간 내지 현저한 대식세포의 결집체를 갖는 급성 화농성 또는 괴사성 폐렴이 종종 관찰되었다. 어떠한 박테리아 세포도 H 및 E 염색 단면 상에서 보이지 않았다.

토의

이 연구에서 호흡기 질환에 걸리거나 걸리지 않은 집에서 키운 개 및 컨넬에서 키운 개의 하부 호흡기 관에 존재하는 βhS 종 대해 집중적으로 연구하였다. 비록 S. canis가 개에서 호흡기 관의 우세한 βhS이고(Biberstein et al, 1980), 이번 연구에서 일부 컨넬에서 키운 개의 하부 호흡기 관으로부터 분리되었다 할지라도, S. canis는 컨넬에서 키운 개의 CIRD와 관련되지 않았다. 반대로, S. zooepidemicus의 분리 정도의 증가는 CIRD 심각도의 증가와 관련되어 있었다. 컨넬에 있어서, 어떤 호흡기 증상을 갖는 개는 건강한 개들에 비하여 하부 호흡기 관에 S. zooepidemicus을 더 많이 가진 것 같았고, S. zooepidemicus는 컨넬에서 자란 개에 비하여 집에서 자란 애완견에서 더 적은 비율로 발견되었다.

이미 스트렙토코커스 에쿠이 서브 종 주에피데미커스는 개에서 HSP와 관련지어 왔다(Garnett et al 1982). HSP 증후군은 비글의 폐쇄적 집단에서의 심각한 감염증인데, 이러한 증후군에 걸리면 임상적인 증상이 미리 나타나지 않고 급작스럽게 죽는다. 부검 결과, 기관 및 기관지 분지내에 많은 출혈성 삼출물이 있으며 폐가 검붉게 되어 있었다. 추가적으로, 다른 조직의 범위까지 반상 출혈이 있었다. 이러한 질환은 하나의 개에서 내부-기관에 S. zooepidemicus을 접종함으로써 재생되었다. 이 연구에서는 흥미롭게도, S. zooepidemicus 성장 지수가 더 높은 개들은, 낮은 성장 지수를 갖는 개들에 비하여, 더 많은 내부-폐포 호중구를 가지며 HSP에서의 폐의 조직학적 특징(문헌[Garnett et al, (1982)]에 기재됨)을 더 많이 갖는 것 같았다.

CIRD는 역사적으로 박테리아와 바이러스 병원체 둘 모두가 관련된 복합성 질환으로 생각되어져 왔다. 실제로, 여러 다른 병원체는 이러한 컨넬에서 키운 개 개체군에서 나타났는데, 이러한 병원체에는 CRCV(Erles et al , 2003) 및 B. bronchiseptica (Chalker et al , 2003)이 포함된다. 비록 CRCV의 병원성 잠재력은 아직 명확하지 않다 하더라도, 문헌[Erles et al, 2003]에 개시된 데이터는 CRCV는 가벼운 호흡기 질환(지수 2)에 걸린 개에서 우세하게 나타남을 보여주었고, 유사하게 문헌[Chalker et al, 2003]은 B. bronchiseptica가 중간 정도의 질환(지수 3)에 걸린 개에서 우세함을 보여주었다.

우리는, 일반적으로 스트렙토코커스 주에피데미커스가 더 심각한 CIRD 경우에 대해서만 관련되어 있다는 것을 알아냈는데, 이는 스트렙토코커스 주에피데미커스가 2차 침입자로서 작용할 수 있다는 것을 가리킨다. 실제로 βhS 종은 CIRD '복합체'에서 2차 침입자로서 이미 기재되어 있다(McCandlish et at , 1978). 그러나, S. zooepidemicus가 이러한 동물의 호흡기 질환에서 주요한 역할을 수행하는지, 또는 단지 호흡기 관을 침입하고 다른 병원균에 의해 손상이 일어나는지 여부는 아직 알려지지 않았다. 말에서 S. zooepidemicus는 호흡기 질환의 주요한 병원체일 수 있다는 것을 제시하는 전염병학적 증거가 있으나(Wood et al , 1993; Chanter, 1997), 이는 일반적으로 기회 감염균으로 생각된다(Walker and Timoney 1998; Anzai et al , 2000). 비록 S. zooepidemicus가 이러한 개에서 CIRD의 주된 원인은 아니라 할지라도, 화농성 기관지 폐렴에 걸린 개로부터 높은 분리 비율(87.5%)을 나타낸다는 것은, S. zooepidemicus가 이러한 컨넬에서 관찰되는 더욱 심각한 임상적인 징후의 원인이 된다는 가설을 뒷받침한다. 호흡기 질환에 걸린 집안에서 키운 애완견으로부터는 낮은 분리 비율(1.4%)을 나타낸다는 것은, 이 병원체가 일반적인 호흡기 감염체가 아닐 수 있고 이러한 컨넬에 특수한 문제가 될 수 있다는 것을 의미한다. 비록 앞서 컨넬에서 키운 것은 참고하지 않았다 할지라도, 본 연구 에서 집에서 키운 일부 애완견은 동시에 컨넬에서 키웠다. 컨넬에서 키운 개에서의 다른 경우에 있어서, S. zooepidemicus에 의해 수행되는 역할은 확실하지 않았다.

이러한 개로부터 S. zooepidemicus의 분리 정도는 컨넬에서 지낸 시간이 경과됨에 따라 증가되는데, 이는 이러한 개의 폐는 이 박테리아로 감염되었음을 의미한다. 이러한 감염은, 상부 호흡기 관의 서브-임상의 감염으로부터 또는 단 하나의 병원성 균주로부터 일어난다. 가변 M-유사 SzP 단백질의 유전자에 대한 PCR 유형 시스템은 S. zooepidemicus의 15개의 공지된 혈청-유형을 5개의 구별되는 군, HV1-5으로 나눌 수 있다(Walker and Timoney, 1998). 문헌[Anzai et al, (2000)]에 기재된 이러한 유형 시스템으로 한 분석에 따르면, S. zooepidemicus의 하나의 클론 변이체가 폐렴이 걸린 말의 폐에서 관찰되었고, 이에 반하여 다른 유형들은 건강한 말의 편도선에서 관찰되었다. 하나의 클론 변이체가 병든 개체군에 존재하는 지 여부를 측정하고, 또한 만약 존재한다면, 개과의 S.zooepidemicus 분리물이 말 및 다른 동물에서 호흡기 질환을 야기하는지를 검사하는 것은, CIRD의 발병에 관련된 S.zooepidemicus의 서브-유형에 대해 중요할 것이다. 이러한 CIRD의 발병에 있어서, 어린 개 및 컨넬에 들어갈 당시 임상 조건이 좋지 않은 개와, 늙은 개 및 컨넬에 들어갈 당시 건강한 개는 동일한 정도로 S. zooepidemicus에 감염되기 쉬웠다.

이러한 컨넬에서, 어느 정도의 감염에 대해서는 항생 물질로 치료되고, 심각한 기관지 폐렴의 경우를 제외하고는 일반적으로 CIRD에 걸린 개를 치료하지 않는다. 치료는 이 연구에서 관찰된 박테리아 범위에 영향을 미칠 수 있다. 그러나, 호흡기 질환이 자연적으로 발병하는 것에 대한 검사는, 다른 수단에 의해 수득될 수 없는 중요한 정보를 제공할 수 있다.

CIRD는 CAV-2, CPIV, B. bronchiseptica 및 미코플라즈마 종을 포함하는 여러 병원체와 관련된 다중 인자 질환으로 알려져 있다. 다양한 곳으로부터 온 많은 수의 함께 키워지고 살아가는 이러한 컨넬에서, 여러 병원체는 존재하고 그 질환의 심각성을 이를 반영할 수 있다.

실시예 2: 미코플라즈마 시노스와 개과의 감염성 호흡기 질환의 관련성

M. cynos의 존재는 생물체의 배양물 및 PCR 분석으로 동정함으로써 조사되었다. 184 마리의 컨넬에서 키운 개의 조사에 있어서, 기관 또는 폐에 M. cynos를 갖는 개의 비율(%)은 호흡기 질환의 징후에 따라 증가하였는 바, 건강한 개의 경우의 10%에서 질환에 걸린 개의 경우의 31%로 증가하였다(도 3 참조).

또한, 호흡기 질환은 컨넬에서 보낸 시간이 경과됨에 따라 증가되었는데, 컨넬에서의 첫째 주 동안에는 개들의 기도에서 M. cynos가 검출되지 않았으나, 둘째 주까지 184 마리의 개들 중 24%가 기도에서 M. cynos에 대해 양성을 나타내었는데, 이는 개체군의 24%는 이 박테리아로 감염되었다는 것을 의미한다. 더 적으나 유사한 증가는 폐의 콜로니 형성(colonisation)에 대해서도 또한 관찰되었다(15% 에서 23%)(도 4 참조).

실시예 3: 클라미도필라와 개과의 감염성 호흡기 질환의 관련성

클라미도필라의 존재를 확인하기 위해 210 마리의 개를 PCR 분석하였다. 23S rRNA 유전자의 218 bp 단편을 하기 PCR 조건하에서 클라미도필라로부터 증폭하였다. 반응 조건은 95℃에서 5분(1 주기), 95℃에서 30초, 50℃에서 30초, 72℃에서 1분 (40 주기) 및 72℃에서 5분이었다. PCR 반응 혼합물은, 5.0㎕의 10x 마그네슘이 없는 완충액(Promega), 1.5mM의 MgCl₂(Promega), 0.5㎕(0.5Units)의 Taq DNA 중합효소(Promega), 0.2mM의 PCR 뉴클레오티드 혼합물(Promega), 0.025㎍의 정방향 프라이머 C1(5'-GATGCCTTGGCATTGATAGGCGATGAAG GA-3', 서열번호 9) 및 역방향 프라이머 C2(5'-TGGCTCATCATGCAAAAGGCA-3', 서열번호 10), 40㎕의 물 및 2㎕의 시료 조직 DNA를 포함하는 전체 50㎕의 부피였다.

8마리의 개로부터 수득된 PCR 산물은 서열을 분석하고, 파스타(Fasta) 분석을 사용하여 PCR 산물과 젠뱅크에서 입수 가능한 모든 서열을 비교함으로써 클라미도필라로서 확인되었다. 하나의 이러한 서열(DHBC10)의 23S rRNA 유전자의 부분적인 서열이 도 5에 기재되어 있다(서열번호 1). 218 bp의 서열은 클라미도필라 아보르투스에서의 동일한 영역에 대해 99.08% 동일하고, 클라미도필라 프시타시에 대해 98.6% 동일하고, 클라미도필라 펠리스에 대해 96.3% 동일하고, 예비적인 계통발생학적 분석(메가린(Megalign)으로 수행하는 클러스탈 방법(clustal method))에 있어서, 대부분의 서열들은 구별되는 계통으로 무리를 이룬다(도 7 참조). 이러한 7개의 다른 클라미도필라 분리물의 23S rRNA의 부분적인 서열은 도 8에 도시되어 있다(서열번호 2 내지 8).

이 조사에서, 기관 및 폐 둘 무도에서 호흡기 질환의 심각도가 증가함에 따라 클라미도필라는 더 많이 검출되었다. 10% 검출의 약간의 증가는 기도 시료에서 관찰되었다(25%에서 34%로). 현저한 더 큰 차이는 폐에서의 클라미도필라의 검출에서 관찰되었는데, 건강한 개의 경우의 0%에서 CIRD에 걸린 개의 경우의 37.5%로 증가하였다(도 6 참조). 나아가, PCR을 수행하여 클라미도필라에 대해 양성으로 나타난 개의 전체수의 증가는 건강한 개의 경우의 25%에서 심각한 질환을 가진 개의 경우의 50%로 증가되었음이 관찰되었다(도 6 참조).

실시예 4: 개과 헤르피스바이러스와 개과 감염성 호흡기 질환의 관련성

더 심한 호흡기 증상을 갖는 개에서 개과의 헤르피스바이러스가 증가된 유병력성을 확인하였다(도 9 참조). 1년에 걸쳐 CHV에 대해 반응하는 항체를 관찰한 결과, 종종 호흡기 질환이 발병한 컨넬에서 사는 개들은, 발병이 일어나지 않은 유사한 컨넬에서 사는 개들에 비해(8.3%), 더 자주(58.3%) 혈청전환(seroconversion)을 보였다.

참고 문헌

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SEQUENCE LISTING <110> THE ROYAL VETERINARY COLLEGE <120> VACCINE COMPOSITION <130> RVCV/P30948PC <140> PCT/GB2004/002865 <141> 2004-07-01 <150> GB 0315323.6 <151> 2003-07-01 <160> 10 <170> SeqWin99 <210> 1 <211> 218 <212> DNA <213> Unknown <220> <223> Partial 23S rRNA gene sequence from Chlamydophila isolated from dog with canine infectious respiratory disease (CIRD) <400> 1 agtggtctcc ccagattcag actaggtttc acgtgcctag ccctactcag gtatcgaata 60 gagtctcttg ttttttcgtc tacgggacta tcaccctgta tcgttctact ttccagaagt 120 attcgactaa aacttaagat cccatgttat cgaccctaca accccacatt aaaaatgtgg 180 tttggtcttc tcccctttcg ctcgccgcta cacaggga 218 <210> 2 <211> 221 <212> DNA <213> Unknown <220> <223> Partial 23S rRNA gene sequence from Chlamydophila isolated from dog with CIRD <400> 2 gacagtggtc tccccagatt cavactaggt ttcacgtgtc tagccctact caggtatcga 60 atagagtctc ttgtttttwc gtctacggga ctatcaccct gtatcgttct actttccaga 120 agtattcgac taaaacttaa gatcccatgt tatcgaccct acaaccccac attaaaaatg 180 tggtttggtc ttctcccctt tcgctcgccg ctacacaggg a 221 <210> 3 <211> 224 <212> DNA <213> Unknown <220> <223> Partial 23S rRNA gene sequence from Chlamydophila isolated from dog with CIRD <400> 3 tgagagtggt ctccccagat tcagactagg tttcacgtgt ctagccctac tcaggtatcg 60 aatagagtct cttgtttttt cgtctacggg actaacaccc tgtatcgttc tactttccag 120 aagtattcga ctaaaactta agatcccatg ttatcgaccc tacaacccca cattaaaaat 180 gtggtttggt cttctcccct tttcgctcgk ccgytatcac aggg 224 <210> 4 <211> 221 <212> DNA <213> Unknown <220> <223> Partial 23S rRNA gene sequence from Chlamydophila isolated from dog with CIRD <400> 4 gadagtggtc tccccagatt cadactaggt ttcacgtgtc tagccctact caggtatcga 60 atagagtctc ttgttttttc gtctacggga ctatcaccct gtatcgttct actttycaga 120 agtattcgac taawwcttaa gatcccatgt tatcgaccct acaaccccac attwwwwatg 180 tggtttggtc ttctcccctt tygctcgccg ctacacaggg a 221 <210> 5 <211> 217 <212> DNA <213> Unknown <220> <223> Partial 23S rRNA gene sequence from Chlamydophila isolated from dog with CIRD <400> 5 tgagagtggt ctccccagat tcagactagg tktcacgtgt ctagccctac tcaggtatcg 60 aatagagtct cttgttttkt cgtctacggg actatcaccc tgtatcgttc tactttccca 120 gaagtattcg actaaaahct taagatcccc atgttatcga ccctacaacc cccacatdaa 180 aaatgtggtt tggtcttctc ccctttcgct cgccgct 217 <210> 6 <211> 221 <212> DNA <213> Unknown <220> <223> Partial 23S rRNA gene sequence from Chlamydophila isolated from dog with CIRD <400> 6 gabagtggtc tccccagatt cagactaggt ttcacgtgtc tagccctact caggtatcga 60 atagagtctc ttgttttttc gtctacggga ctatcaccct gtatcgttct actttccaga 120 agtattcgac taaaacttaa gatcccatgt tatcgaccct acaaccccac attaaaaatg 180 tggtttggtc ttctcccctt tcgctcgccg ctactcaggg a 221 <210> 7 <211> 220 <212> DNA <213> Unknown <220> <223> Partial 23S rRNA gene sequence from Chlamydophila isolated from dog with CIRD <400> 7 tgagagtggt ctccccagat tcagtcaaaa tatcacgtgt tccgacctac tcaggatact 60 attagtatta ttgagaatbt taattacagg agtatcacct tctatgctct agtttccaac 120 taattcatct attctcttta attacacatt atagtcctac aacccccmaa tgcaagcatt 180 gggtttgtcc taatcccagt tcgctcgccg ctacacaggg 220 <210> 8 <211> 220 <212> DNA <213> Unknown <220> <223> Partial 23S rRNA gene sequence from Chlamydophila isolated from dog with CIRD <220> N <222> 174 <223> N can be A, C, G or T <400> 8 tgagagtggt ctccccagat tcagactagg tttcacgtgt ctagccctac tcaggtatcg 60 aatagagtct cttgtttttt tgtctacggg actatcaccc tgtatcgttc tactttccag 120 aagtattcga ctaaaactta agatcccatg ttatcgaccc tacaacccca catnaaaaat 180 gtggtttggt cttctcccct ttcgctcgcc gctacacagg 220 <210> 9 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PCR primer <400> 9 gatgccttgg cattgatagg cgatgaag 28 <210> 10 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PCR primer <400> 10 tggctcatca tgcaaaaggc a 21 1

Claims (54)

1. (a) 개에서 스트렙토코커스 에쿠이 서브 종 주에피데미커스(S.zooepidemicus)에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

   (b) 개에서 미코플라즈마 시노스(M.cynos)에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

   (c) 개에서 클라미도필라(Chlamydophila)에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

   중 어느 하나 이상을 포함하는, 개에 백신 접종을 하기 위한 백신 조성물.
2. 제1항에 있어서, 개에서 S. zooepidemicus에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는, 비활성화되거나 감독시킨 S. zooepidemicus, 또는 S. zooepidemicus의 면역성 단편 또는 그의 유도체, 또는 상기 단편 또는 그의 유도체를 코딩하는 핵산을 포함하는 백신 조성물.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는, 비활성화되거나 감독시킨 M. cynos , 또는 M. cynos의 면역성 단편 또는 그의 유도체, 또는 상기 단편 또는 그의 유도체를 코딩하는 핵산을 포함하는 백신 조성물.
4. 제1항 내지 제3항중 어느 한 항에 있어서, 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는, 비활성화되거나 감독시킨 클라미도필라 아보르투스(Chlamydophila abortus), 또는 클라미도필라 아보르투스의 면역성 단편 또는 그의 유도체, 또는 상기 단편 또는 그의 유도체를 코딩하는 핵산을 포함하는 백신 조성물.
5. 제1항 내지 제3항중 어느 한 항에 있어서, 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는, 비활성화되거나 감독시킨 클라미도필라 프시타시(Chlamydophila psittaci), 또는 클라미도필라 프시타시의 면역성 단편 또는 그의 유도체, 또는 상기 단편 또는 그의 유도체를 코딩하는 핵산을 포함하는 백신 조성물.
6. 제1항 내지 제3항중 어느 한 항에 있어서, 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는, 비활성화되거나 감독시킨 클라미도필라 펠리스(Chlamydophila felis), 또는 클라미도필라 펠리스의 면역성 단편 또는 그의 유도체, 또는 상기 단편 또는 그의 유도체를 코딩하는 핵산을 포함하는 백신 조성물.
7. 제1항 내지 제3항중 어느 한 항에 있어서, 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는, 비활성화되거나 감독시킨 클라미디아 무리다룸(Chlamydia muridarum), 클라미디아 페코룸Chlamydia pecorum), 클라미디아 뉴모니 아에(Chlamydia pneumoniae), 클라미디아 수이스(Chlamydia suis) 또는 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis), 또는 그의 면역성 단편 또는 그의 유도체, 또는 상기 단편 또는 그의 유도체를 코딩하는 핵산을 포함하는 백신 조성물.
8. 제1항 내지 제7항중 어느 한 항에 있어서, 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 보조제를 포함하는 백신 조성물.
9. 제1항 내지 제8항중 어느 한 항에 있어서,

   (d) 개에서 개과 호흡기 코로나바이러스(CRCV)에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

   (e) 개에서 개과 파라인플로엔자바이러스(CPIV)에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

   (f) 개에서 개과 아데노바이러스 타입 2(CAV-2)에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

   (g) 개에서 개과 헤르피스반이러스(CHV)에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

   (h) 개에서 보르데텔라 브론치스셉티카(B. bronchiseptica)에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

   중 어느 하나 이상을 추가로 포함하는 백신 조성물.
10. 제9항에 있어서, 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는, 비활성화되거나 감독시킨 CRCV, 또는 CRCV의 면역성 단편, 또는 상기 단편을 코딩하는 핵산을 포함하는 백신 조성물.
11. 제10항에 있어서, CRCV의 면역성 단편은, 스파이크 단백질 또는 헤마글루티틴-에스터라제(HE) 단백질, 또는 스파이크 또는 HE 단백질의 면역성 부분을 포함하는 백신 조성물.
12. 제9항 내지 제11항중 어느 한 항에 있어서, 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는, 비활성화되거나 감독시킨 CPIV, 또는 CPIV의 면역성 단편, 또는 상기 면역성 단편을 코딩하는 핵산을 포함하는 백신 조성물.
13. 제9항 내지 제12항중 어느 한 항에 있어서, 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는, 비활성화되거나 감독시킨 CAV-2, 또는 CAV-2의 면역성 단편, 또는 상기 면역성 단편을 코딩하는 핵산을 포함하는 백신 조성물.
14. 제9항 내지 제13항중 어느 한 항에 있어서, 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는, 비활성화되거나 감독시킨 CHV, 또는 CHV의 면역성 단편, 또는 상기 면역성 단편을 코딩하는 핵산을 포함하는 백신 조성물.
15. 제9항 내지 제14항중 어느 한 항에 있어서, 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체는, 비활성화되거나 감독시킨 B. bronchiseptica, 또는 B. bronchiseptica의 면역성 단편, 또는 상기 면역성 단편을 코딩하는 핵산을 포함하는 백신 조성물.
16. 제1항 내지 제15항중 어느 한 항에 따른 백신 조성물을 개에서 투여하는 것을 포함하는, 개과 전염성 호흡기 질환(CIRD)에 대해 개를 백신 접종하는 방법.
17. 제1항 내지 제15항중 어느 한 항에 따른 백신 조성물을 개에서 투여하는 것을 포함하는, 개에서 CIRD를 치료하는 방법.
18. (a) 개에서 S. zooepidemicus에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

    (b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

    (c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

    중 어느 하나 이상의 각각을 개에게 투여하는 것을 포함하는, 개에서 S.zooepidemicus, M. cynos 및 클라미도필라 중 어느 하나 이상에 대해 면역 반응을 자극하는 방법.
19. 제18항에 있어서,

    (d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

    (e) 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

    (f) 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

    (g) 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

    (h) 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

    중 어느 하나 이상을 개에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
20. 개에서 CIRD를 예방 및 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서,

    (a) 개에서 S. zooepidemicus에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

    (b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

    (c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

    중 어느 하나 이상의 용도.
21. 개에서 S. zooepidemicus, M. cynos 및 클라미도필라중 어느 하나 이상의 각각에 대한 면역 반응을 자극하기 위한 약제의 제조에 있어서,

    (a) 개에서 S. zooepidemicus에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

    (b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

    (c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

    중 어느 하나 이상의 용도.
22. 제20항 또는 제21항에 있어서, 상기 약제는

    (d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

    (e) 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

    (f) 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

    (g) 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

    (h) 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

    중 어느 하나 이상을 추가로 포함하는 용도.
23. (a) 개에서 S. zooepidemicus에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

    (b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

    (c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

    중 어느 하나 이상을 포함하는, 약제로 사용하기 위한 조성물.
24. 제23항에 있어서, 가축용 약제로 사용하기 위한 조성물.
25. 제24항에 있어서, 개과 가축용 약제로 사용하기 위한 조성물.
26. 제23항 내지 제25항중 어느 한항에 있어서,

    (d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

    (e) 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

    (f) 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

    (g) 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

    (h) 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

    중 어느 하나 이상을 추가로 포함하는 조성물.
27. (a) 개에서 S. zooepidemicus에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

    (b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

    (c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

    중 어느 하나 이상, 및 임의적으로 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 보조제를 포함하는, 백신 조성물을 성분으로 하는 키트.
28. 제27항에 있어서,

    (d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

    (e) 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

    (f) 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

    (g) 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

    (h) 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

    중 어느 하나 이상을 추가로 포함하는 키트.
29. 동물에서 S. zooepidemicus, M. cynos 및 클라미도필라중 어느 하나 이상의 각각, 또는 그의 면역성 단편에 대해 면역 반응을 일으킬 수 있는 단계; 및 동물로부 터 또는 그로부터 유래된 불멸세포로부터 항체를 제조하는 단계를 포함하는, S.zooepidemicus, M. cynos 및 클라미도필라중 어느 하나 이상에 특이적으로 결합하는 항체를 제조하는 방법.
30. S. zooepidemicus, M. cynos 또는 클라미도필라중 어느 하나 이상의 각각, 또는 그의 면역성 단편을 사용하여 항체-표시 라이브러리(antibody-display library)로부터 항체를 선택하는 단계를 포함하는, S. zooepidemicus, M. cynos 및 클라미도필라중 어느 하나 이상에 특이적으로 결합하는 항체를 제조하는 방법.
31. S. zooepidemicus, M. cynos 또는 클라미도필라에 특이적으로 결합하는 항체.
32. S. zooepidemicus, M. cynos 또는 클라미도필라중 어느 하나 이상의 각각에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체를 개에 투여하는 것을 포함하는, CIRD에 대해 개에게 수동적으로 면역성을 주는 방법.
33. S. zooepidemicus, M. cynos 또는 클라미도필라중 어느 하나 이상의 각각에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체를 개에 투여하는 것을 포함하는, 개에서 CIRD를 치료하는 방법.
34. 제32항 또는 제33항에 있어서, CRCV, CPIV, CAV-2, CHV 및 B. bronchiseptica중 어느 하나 이상에 특이적으로 결합하는 항체를 개에 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
35. CIRD에 대해 개에게 수동적으로 면역성을 주기 위한 약제의 제조에 있어서, S.zooepidemicus, M. cynos 및 클라미도필라중 어느 하나 이상에 특이적으로 결합하는 항체의 용도.
36. 개에서 CIRD을 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서, S. zooepidemicus, M.cynos 및 클라미도필라중 어느 하나 이상에 특이적으로 결합하는 항체의 용도.
37. 제35항 또는 제36항에 있어서, 상기 약제는 CRCV, CPIV, CAV-2, CHV, 및 B. bronchiseptica중 어느 하나 이상에 특이적으로 결합하는 항체를 추가적으로 포함하는 용도.
38. S. zooepidemicus에 특이적으로 결합하는 항체, M. cynos에 특이적으로 결합하는 항체, 및 클라미도필라에 특이적으로 결합하는 항체중 어느 둘 이상을 포함하는 조성물.
39. 제38항에 있어서, CRCV, CPIV, CAV-2, CHV, 및 B. bronchiseptica중 어느 하나 이상에 특이적으로 결합하는 항체를 추가로 포함하는 조성물.
40. (b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으키는 병원체; 및

    (d) 개에서 CRCV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

    를 포함하는 백신 조성물.
41. 제40항에 있어서,

    (c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

    (e) 개에서 CPIV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

    (f) 개에서 CAV-2에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체;

    (g) 개에서 CHV에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체; 및

    (h) 개에서 B. bronchiseptica에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체

    중 어느 하나 이상을 추가로 포함하는 백신 조성물.
42. 제40항 또는 제41항에 있어서, (a) 개에서 S. zooepidemicus에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체를 추가로 포함하는 백신 조성물.
43. 하기 단계를 포함하는, 개가 CIRD와 관련된 클라미도필라 종에 노출되었는지 여부를 측정하는 방법:

    (a) 개로부터 적당한 시료를 수득하는 단계; 및

    (b) CIRD와 연관된 클라미도필라 종 또는 그에 대한 항체를 시료에서 동정하 는 단계.
44. 제43항에 있어서, CIRD와 관련된 클라미도필라 종은 서열번호: 1 내지 8중의 어느 서열(RNA로서 보여지는 경우)을 포함하는 23 rRNA를 갖는 방법.
45. 하기 단계를 포함하는, 개가 CIRD에 걸렸거나 또는 CIRD에 감염되기 쉬운지 여부를 측정하는 방법:

    (a) 개로부터 적당한 시료를 수득하는 단계; 및

    (b) S. zooepidemicus 또는 M. cynos 또는 클라미도필라, 또는 이들 중 어느 하나에 대한 항체를 시료에서 동정하는 단계.
46. 제45항에 있어서, 상기 S. zooepidemicus 또는 M. cynos 또는 클라미도필라는 항체를 사용하여 동정되는 방법.
47. 제45항에 있어서, 상기 S. zooepidemicus 또는 M. cynos 또는 클라미도필라는 핵산을 사용하여 동정되는 방법.
48. 제45항에 있어서, 상기 항-S. zooepidemicus 항체는 S. zooepidemicus 또는 그의 항원성 부분을 사용하여 검출되는 방법.
49. 제45항에 있어서, 상기 항-M. cynos 항체는 M. cynos 또는 그의 항원성 부분을 사용하여 검출되는 방법.
50. 제45항에 있어서, 상기 항-클라미도필라 항체는 클라미도필라 또는 그의 항원성 부분을 사용하여 검출되는 방법.
51. 제43항 내지 제49항중 어느 한 항에 있어서, 상기 시료는 혈청, 타액, 기관세척액 또는 세기관지 세척액과 같은 항체-함유 시료인 방법.
52. (a) 개에서 S. zooepidemicus에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체, (b) 개에서 M. cynos에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체, 및 (c) 개에서 클라미도필라에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 병원체중 어느 하나 이상으로 코팅된 고체 상; 및

    고체 상에 결합된, 항체에 결합할 수 있는 검출가능한 표지 결합체

    를 포함하는, CIRD와 관련된 항체를 검출하는 면역 흡착 분석 방법.
53. 제52항에 있어서, 고체 상은 (a), (b) 및 (c)중 어느 두개의 병원체 또는 세개의 병원체 모두를 포함하는 면역 흡착 분석 방법.
54. 제52항에 정의된 어느 두개의 병원체 또는 세개의 병원체 모두로 코팅된 고 체상 기질.

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