KR20060095772A - α-１-인산화-２-데옥시-２-플루오로아라비노시드 및２’-데옥시-２’-플루오로-β-Ｄ-아라비노뉴클레오시드의제조법 - Google Patents

α-１-인산화-２-데옥시-２-플루오로아라비노시드 및２’-데옥시-２’-플루오로-β-Ｄ-아라비노뉴클레오시드의제조법 Download PDF

Info

Publication number
KR20060095772A
KR20060095772A KR1020067008206A KR20067008206A KR20060095772A KR 20060095772 A KR20060095772 A KR 20060095772A KR 1020067008206 A KR1020067008206 A KR 1020067008206A KR 20067008206 A KR20067008206 A KR 20067008206A KR 20060095772 A KR20060095772 A KR 20060095772A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
group
formula
deoxy
represented
phosphorylated
Prior art date
Application number
KR1020067008206A
Other languages
English (en)
Inventor
코헤이 야마다
노리타케 마츠모토
히로유키 하야카와
Original Assignee
야마사 쇼유 가부시키가이샤
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 야마사 쇼유 가부시키가이샤 filed Critical 야마사 쇼유 가부시키가이샤
Publication of KR20060095772A publication Critical patent/KR20060095772A/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
    • C12P19/28—N-glycosides
    • C12P19/38—Nucleosides
    • C12P19/40—Nucleosides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two nitrogen atoms in the same ring, e.g. purine nucleosides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C07H1/02—Phosphorylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H11/00—Compounds containing saccharide radicals esterified by inorganic acids; Metal salts thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H11/00—Compounds containing saccharide radicals esterified by inorganic acids; Metal salts thereof
    • C07H11/04—Phosphates; Phosphites; Polyphosphates

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

식(I):
Figure 112006029978544-PCT00039
으로 표시되는 α-1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드 또는 식(V'):
Figure 112006029978544-PCT00040
으로 표시되는 1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드의 α- 및 β-이성체 혼합물 및 염기에 뉴클레오시드 포스포릴라제를 작용시킴을 특징으로 하는 식(II):
Figure 112006029978544-PCT00041
(식중, B는 염기를 나타낸다.)
으로 표시되는 2'-데옥시-2'-플루오로-β-D-아라비노뉴클레오시드, 특히 2'-데옥시-2'-플루오로-β-D-아라비노퓨린뉴클레오시드를 간편하고, 높은 입체 선택적으로 고수율로 제조할 수 있다

Description

α-１-인산화-２-데옥시-２-플루오로아라비노시드 및 ２’-데옥시-２’-플루오로-β-Ｄ-아라비노뉴클레오시드의 제조법 {α-1-PHOSPHORYLATED-２- DEOXY-2-FLUOROARABINOSIDE AND PROCESS FOR PRODUCING- 2'-DEOXY-2'FLUORO-β-D-ARABINONUCLEOSIDE}
본 발명은 α-1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드 및 이를 키 중간체로 하는 2'-데옥시-2'-플루오로-β-D-아라비노뉴클레오시드의 제조법에 관한 것이다.
근년, 2'-데옥시-2'-플루오로-β-D-아라비노뉴클레오시드(2'F-ANA)를 구성성분으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오티드가 그의 생물적 활성 때문에 크게 주목받고 있다(특허문헌 1 및 비특허문헌 1, 2).
2'F-ANA는 공지 화합물이며, 그의 화학적 합성법도 이미 보고 되어 있다(특허문헌 2, 비특허문헌 3, 4). 구체적으로는 2'F-ANA를 천연 뉴클레오티드로부터 유도하는 것은 곤란하기 때문에, 1-할로겐화 당유도체와 핵산 염기의 치환 반응(축합 반응)에 의해 합성되고 있다. 그러나, 반응액중에는 β-이성체 이외에 α-이성체가 혼재하기 때문에, 고순도의 2'F-ANA를 얻기 위하여는 번잡한 컬럼크로마토그래피 등의 정제 처리가 필요했다.
그 중에서도, 2'-데옥시-2'-플루오로-β-D-아라비노피리미딘뉴클레오시드는 비교적 용이하게 합성 가능하다. 이와 대조적으로 2'-데옥시-2'-플루오로-β-D-아라비노퓨린뉴클레오시드는 반응액중에 여러 가지의 이성체(α-이성체, β-이성체, 7위치에 치환된 이성체, 9위치에 치환된 이성체 등)가 혼재하기 때문에, 효율적인 합성법은 아직도 확립되어 있지 않다.
상기 화학 합성법의 결점을 극복하는 수단의 하나로서 효소 합성법이 제안되어 있다. 예를 들면, 1-인산화-2-데옥시리보오즈의 이성화 반응의 평형을 기울여 α-1-인산화당 유도체를 합성하고, 이어서, 뉴클레오시드 포스포릴라제를 이용하여 목적으로 하는 뉴클레오티드를 제조할 수가 있다(특허문헌 3).
그러나, 본 발명자들의 발견에 의하면, 1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드는 상당히 안정하여, α-이성체와 β-이성체의 평형을 한 방향으로 기울이는 것은 어려워서 2'F-ANA의 제조에 상기 효소법을 적용하는 것은 곤란하다.
한편, 2'-데옥시-2'-플루오로-β-D-아라비노피리미딘뉴클레오시드와 퓨린 염기로부터 뉴클레오시드 포스포릴라제를 이용하여 2'-데옥시-2'-플루오로-β-D-아라비노퓨린뉴클레오시드를 효소 합성하는 방법도 보고되어 있다(특허문헌 4).
특허문헌 1: 국제공개 제 99/67378호 팜플렛
특허문헌 2: 일본국 특허공개 평7-23395호 공보
특허문헌 3: 일본국 특허공개 2002-205996호 공보
특허문헌 4: 일본국 특허공개 소63-258891호 공보
비특허문헌 1: Biochemistry, 41, 3457(2002).
비특허문헌 2: Bioorg. Med. Chem. Lett., 12, 2651, (2002).
비특허문헌 3: J. Org. Chem., 50, 3644(1985).
비특허문헌 4: J. Org. Chem., 53, 85(1988).
그러나, 상기 효소법은 (i)화학적으로 합성한 고가의 2'-데옥시-2'-플루오로-β-D-아라비노피리미딘뉴클레오시드를 원료로서 이용하며, (ii) 목적물인 2'-데옥시-2'-플루오로-β-D-아라비노퓨린뉴클레오시드의 합성수율이 매우 낮고(염기수율에 대해 15% 미만), (iii) 2 종류의 뉴클레오시드 포스포릴라제를 반드시 사용해야 하는 것 등의 이유로 반드시 만족할 만한 방법이라 할 수 없다. 또한, 상기 방법의 저수율의 요인으로서는 뉴클레오시드 포스포릴라제를 이용한 2'-데옥시-2'-플루오로-β-D-아라비노피리미딘뉴클레오시드의 가인산분해(phosphorolysis)의 낮은 반응 효율에 기인하는 것으로 생각된다.
따라서, 본 발명의 목적은 높은 수율, 입체 선택적인 합성이 곤란했던 2'F-ANA, 특히 2'-데옥시-2'-플루오로-β-D-아라비노퓨린뉴클레오시드를 간편하고도 높은 입체 선택적으로, 그리고 고수율로 제조하는 방법을 제공하는 것에 있다. 특히, 본 발명의 목적은 종래 합성이 매우 곤란했던 9-(2-플루오로-β-D-아라비노실)구아닌을 공업적 스케일로, 간편하고도 고순도로 제조할 수 있는 방법을 제공하는 것에 있다.
본 발명자들은 이러한 실정을 감안하여 예의 연구한 결과, (i) 1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드는 의외로 수용액중에서 안정하여, 그의 α-이성체는 뉴클레오시드 포스포릴라제의 기질로서 충분히 이용 가능하고, (ii) 식(III)으로 표시되는 2-데옥시-2-플루오로아라비노스 유도체를 가수분해 및 인산화함으로서 α-1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드가 입체 선택적으로 얻어질 수 있으며, (iii) 식(III)으로 표시되는 화합물을 강염기 존재하에 인산화함으로서 뉴클레오시드 포스포릴라제의 기질로 작용하지 않는 β-1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드보다 기질로 작용하는 α-이성체의 생성 비율의 높은 α- 및 β-이성체 혼합물을 얻을 수 있으며, (iv) 원료로서 2'-데옥시-2'-플루오로-β-D-아라비노피리미딘뉴클레오시드 대신에 1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드(α-이성체 또는 α- 및 β-이성체 혼합물)를 이용함으로서, 2 종류의 뉴클레오시드 포스포릴라제를 사용하지 않고, 2'-데옥시-2'-플루오로-β-D-아라비노뉴클레오시드를 고수율로 얻을 수 있음을 발견하고, 본 발명을 완성하였다.
즉, 본 발명은 식(I):
Figure 112006029978544-PCT00001
으로 표시되는 α-1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드 또는 그의 염을 제공한다.
또한, 본 발명은 식(III):
Figure 112006029978544-PCT00002
(식중, R1은 히드록시기 보호기를 나타내고, X는 이탈기를 나타낸다.)
으로 표시되는 2-데옥시-2-플루오로아라비노스 유도체를 가수분해하여 식(IV):
Figure 112006029978544-PCT00003
(식중, R1은 전술한 바와 같다)
으로 표시되는 α-1-히드록실체를 입체 선택적으로 얻고, 식(IV)의 화합물을 인산화하여 식(V):
Figure 112006029978544-PCT00004
(식중, R1은 전술한 바와 같고, R2는 수소원자 또는 인산 잔기의 보호기를 나타낸다.)
으로 표시되는 α-1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드 유도체로 하고, 이어서 히드록시기 및/또는 인산 잔기의 보호기를 탈보호함을 특징으로 하는 식(I):
Figure 112006029978544-PCT00005
으로 표시되는 α-1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드의 입체 선택적인 제조법을 제공한다.
또한, 본 발명은 식(III):
Figure 112006029978544-PCT00006
(식중, R1은 히드록시기의 보호기를 나타내고, X는 이탈기를 나타낸다.)
으로 표시되는 2-데옥시-2-플루오로아라비노스 유도체를 강산염 존재하에, 인산화하여 식(V):
Figure 112006029978544-PCT00007
(식중, R1은 전술한 바와 같고, R2는 수소원자 또는 인산 잔기의 보호기를 나타낸다.)
으로 표시되는 1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드 유도체의 α- 및 β-이성체 혼합물을 얻고, 이어서 히드록시기 및/또는 인산 잔기의 보호기를 탈보호함을 특징으로 하는 식(V'):
Figure 112006029978544-PCT00008
으로 표시되는 1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드의 α- 및 β-이성체 혼합물의 제조법을 제공한다.
또한, 본 발명은 식(I):
Figure 112006029978544-PCT00009
으로 표시되는 α-1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드 또는 식(V'):
Figure 112006029978544-PCT00010
으로 표시되는 1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드의 α- 및 β-이성체 혼합물 및 염기에, 뉴클레오시드 포스포릴라제를 작용시킴을 특징으로 하는 식(II):
Figure 112006029978544-PCT00011
(식중, B는 염기를 나타낸다.)
으로 표시되는 2'-데옥시-2'-플루오로-β-D-아라비노뉴클레오시드의 제조법을 제공한다.
또한, 본 발명은 식(I):
Figure 112006029978544-PCT00012
으로 표시되는 α-1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드 또는 식(V'):
Figure 112006029978544-PCT00013
으로 표시되는 1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드의 α- 및 β-이성체 혼합물 및 2-아미노-6-치환 퓨린에, 뉴클레오시드 포스포릴라제를 작용시켜 식(VI):
Figure 112006029978544-PCT00014
(식중, Y는 치환기를 나타낸다.)
으로 표시되는 2-아미노-6-치환-9-(2-플루오로-β-D-아라비노실)퓨린을 얻고, 이것을 가수분해 효소로 처리함을 특징으로 하는 식(VII):
Figure 112006029978544-PCT00015
으로 표시되는 9-(2-플루오로-β-D-아라비노실)구아닌의 제조법을 제공한다.
더욱이, 본 발명은 식(I):
Figure 112006029978544-PCT00016
으로 표시되는 α-1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드 또는 식(V'):
Figure 112006029978544-PCT00017
으로 표시되는 1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드의 α- 및 β-이성체 혼합물 및 구아노신 5'-모노포스페이트에 뉴클레오시드 포스포릴라제와 뉴클레오시다제를 작용시킴을 특징으로 하는 식(VII):
Figure 112006029978544-PCT00018
으로 표시되는 9-(2-플루오로-β-D-아라비노실)구아닌의 제조법을 제공한다.
[발명의 효과]
본 발명에 의하면, 종래 고수율로, 그리고 입체 선택적인 합성이 곤란하였던 2'F-ANA, 특히 2'-데옥시-2'-플루오로-β-D-아라비노퓨린뉴클레오시드를 간편하고, 높은 입체 선택적으로 고수율로 제조할 수 있다. 특히, 본 발명에 의하면, 종래 합성이 지극히 곤란하였던 9-(2-플루오로-β-D-아라비노실)구아닌을 공업적 스케일로 간편하고도, 높은 입체 선택적으로 고수율로 제조할 수 있다.
따라서, 본 발명의 α-1-인산-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드 또는 그의 염 및 이를 키 중간체로 하는 본 발명의 제조법은 안티센스 의약의 공업적 제조에 유용하다.
[발명을 실시하기 위한 최선의 형태]
식(I)으로 표시되는 화합물, 즉 화합물(1)의 염으로서는 특히 제한되는 것이 아니고, 예를 들면 알칼리 금속염(예를 들면, 나트륨염, 칼륨염 등); 알칼리토류금속염(예를 들면, 칼슘염, 마그네슘 염 등); 유기염기염(예를 들면, 트리메틸아민염, 트리에틸아민염, 피리딘염, 피콜린염, 디시클로헥실아민염 등), 암모늄 염 등을 들 수 있으며, 나트륨염이 바람직하다.
이하에, 화합물(1)의 대표적인 제조법을 설명한다.
합성법 1(α-이성체):
화합물(III)의 1위치의 치환기를 가수분해하여 화합물(IV)의 α-이성체를 입체 선택적으로 얻고, 화합물(IV)의 1위치 히드록시기를 인산화하여 화합물(V)을 형성하고, 화합물(V)의 히드록시기 및/또는 인산 잔기의 보호기를 탈보호한다.
Figure 112006029978544-PCT00019
(식중, R1은 히드록시기 보호기를 나타내고, X는 이탈기, R2는 수소원자 또는 인산 잔기의 보호기를 나타낸다.)
식(III)∼(V)에 있어서, R1으로 표시되는 히드록시기의 보호기로서는 포르밀기, 아세틸기, 피발로일기, 벤조일기 등의 탄소수 1∼10의 아실기, 벤질기, p-메톡시벤질기 등의 탄소수 7∼20의 아랄킬기, t-부틸디메틸실릴기, t-부틸디페닐실릴기 등의 탄소수 1∼20의 알킬실릴기를 들 수 있다. 이들 중, 탄소수 1∼10의 아실기가 바람직하고, 특히 벤조일기가 바람직하다.
X로 표시되는 이탈기로서는 염소원자, 브롬원자, 요오드원자 등의 할로겐원자; 메실기, 토실기, 트리플루오로메탄술포닐기; 포르밀기, 아세틸기, 피발로일기, 벤조일기 등의 탄소수 1∼10의 아실기 등을 들 수 있으며, 할로겐원자가 바람직하고, 특히 브롬원자가 바람직하다.
R2로 표시되는 인산 잔기의 보호기로서는 알릴기 또는 치환기를 가지고 있어도 좋은 알킬기가 예시된다. 알킬기로서는 예를 들면, 메틸기, 에틸기, n-프로필기, 이소프로필기, n-부틸기, 이소부틸기, t-부틸기 등의 탄소수 1∼10의 알킬기를 들 수 있다. 알킬기의 치환기로서는, 예를 들면, 시아노기, 트리메틸실릴기, 페닐기 등을 들 수 있다. 치환 알킬기로서는, 예를 들면, 2-시아노에틸기, 2-트리메틸실릴에틸기, 벤질기 등을 들 수 있다.
화합물(III)은 공지의 방법(J. Org. Chem., 50, 3644(1985), J. Org. Chem., 53, 85(1988), 일본국 특허공고 평7-23395호 공보)에 준해 합성할 수 있다.
화합물(III)의 1위치의 가수분해 반응은 아세토니트릴, N,N-디메틸포름아미드(DMF), 메탄올, 테트라히드로푸란(THF) 등의 유기용매 중, 트리부틸아민, 트리에틸아민 등의 염기 존재하에서, 화합물(III) 1몰에 대해, 1몰 이상의 염기와 물을 사용해 행하면 좋다. 반응 온도는 0∼100℃가 바람직하고, 반응시간은 1∼24시간 정도가 바람직하다. 필요에 따라 교반하면서 반응시켜도 좋다.
이와 같이 하여 얻어진 화합물(IV)은 필요에 따라, 통상의 당의 정제 수단, 예를 들면, 유기용매에 의한 분배, 각종 크로마토그래피 처리에 의해 정제하여 다음 인산화 반응에 제공하면 좋다.
화합물(IV)의 1위치의 인산화 반응은 공지의 방법에 준하여 행하면 좋다. 예를 들면, 5가의 인산화제를 이용하여 인산화하는 방법, 3가의 인산화제를 이용하여 아인산화한 후, 산화하는 방법을 들 수 있다.
5가의 인산화제를 이용하는 방법으로서는 구체적으로는 아세토니트릴, THF, 디클로로메탄 등의 유기용매 중, 트리부틸아민, 트리에틸아민, 피리딘 등의 염기 존재하, 옥시염화인, 모노알킬포스포릴할라이드, 디알킬포스포릴할라이드 등의 인산화제를 화합물(IV) 1몰에 대해서 1∼10몰 사용하면 좋다. 반응 온도는 -78∼120℃가 바람직하고, 반응시간은 1∼24시간 정도가 바람직하다.
3가의 인산화제를 이용하는 방법으로서는, 구체적으로는 아세토니트릴, THF, 디클로로 메탄, 1,4-디옥산 등의 유기용매 중, 트리부틸아민, 트리에틸아민, 피리딘 등의 염기 존재하, 3염화인, 클로로포스포로디아미다이트 등의 아인산화제를 반응시키고, 이어서 시아노에탄올, 아릴알코올 등의 알코올류와 반응시켜 포스파이트로 하고, 이것을, m-클로로퍼벤조산, t-부틸퍼옥시드, 과산화수소 등의 산화제를 이용하여 산화하면 좋다. 인산화제, 알코올류 및 산화제는 화합물(IV) 1몰에 대해서 1∼10몰 사용하면 좋다. 반응온도는 -78∼120℃가 바람직하고, 반응시간은 1∼24시간 정도가 바람직하다.
이와 같이 하여 얻어진 화합물(V)은, 필요에 따라 통상의 당의 정제 수단, 예를 들면 유기용매에 의한 분배, 각종 크로마토그래피 처리에 의해 정제한 후, 다음 탈보호 반응에 제공한다.
화합물(V)의 히드록시기 및/또는 인산 잔기의 보호기의 제거는 사용한 보호기에 따라 산처리, 알칼리 처리, 접촉 환원, 불화암모늄 처리 등 통상 사용 방법을 적당 선택하여 실시하면 좋다.
상기의 방법에 의해 얻어진 화합물(I)은 필요에 따라 통상의 당의 정제 수단, 예를 들면 유기용매에 의한 분배, 각종 크로마토그래피 처리, 결정화 등에 의해 정제하여 다음의 효소 반응에 제공한다.
합성법 2(α- 및 β-이성체 혼합물):
화합물(III)을 강산염 존재하, 산화제로 처리해 보호체인 α- 및 β-이성체 혼합물(V)로 하면 좋다(이하, 이 혼합물을 "αβ-이성체 혼합물"이라 한다.)
인산화 반응은 아세토니트릴, 디클로로메탄, DMF, 메틸에틸케톤 등의 유기용매 중, 트리부틸아민, 트리에틸아민 등의 염기 존재하, 정인산, 인산모노에스테르, 인산디에스테르 등의 인산 유도체를 화합물(III) 1몰에 대해서, 1몰 이상 반응시키면 좋다. 반응 온도는 78∼120℃가 바람직하고, 반응시간은 1∼24시간 정도가 바람직하다.
인산화 시, 강산염, 특히 바람직하기로는 할로겐이온 또는 질산이온을 발생하는 강산염을, 화합물(III) 1몰에 대해서, 0.1∼20몰 정도 첨가한다. 강산염의 첨가에 의해, 표 1에 나타난 바와 같이, β-이성체보다 α-이성체를 우선적으로 합성할 수가 있다.
할로겐이온 또는 질산이온을 발생하는 강산염으로서는 테트라-n-부틸암모늄아이오다이드, 테트라에틸암모늄아이오다이드, 테트라-n-부틸암모늄브로마이드, 테트라에틸암모늄브로마이드, 테트라-n-부틸암모늄염화물, 테트라에틸암모늄염화물 등의 할로겐이온의 암모늄염 또는 금속염: 테트라-n-부틸암모늄 나이트레이트 등의 질산이온의 암모늄염 또는 금속염을 들 수 있다. 이들 중, 테트라-n-부틸암모늄아이오다이드, 테트라-n-부틸암모늄브로마이드, 테트라-N-부틸암모늄클로라이드, 테트라에틸암모늄클로라이드, 테트라-n-부틸암모늄 나이트레이트가 바람직하다.
이렇게 하여 얻어진 화합물(V)은 필요에 따라, 통상의 당의 정제 수단, 예를 들면 유기용매에 의한 분배, 각종 크로마토그래피 처리에 의해 정제하고, 다음의 탈보호 반응에 제공한다.
화합물(V)의 히드록시기 및/또는 인산 잔기의 보호기를 제거함으로써, 화합물(I)에 그의 β-이성체가 혼재한 αβ-이성체 혼합물(V')
Figure 112006029978544-PCT00020
을 얻을 수 있다. αβ-이성체 혼합물(V')중, α/β 비는 1.9∼2.6 이다. 보호기의 제거의 조건은 사용한 보호기에 따라 산처리, 알칼리 처리, 접촉 환원, 불화암모늄 처리 등, 통상 사용하는 방법을 적당 선택하여 행하면 좋다.
상기의 방법에 의해 얻어진 αβ-이성체 필요에 따라, 통상의 당의 정제 수단, 예를 들면 유기용매에 의한 분배, 각종 크로마토그래피 처리, 결정화 등에 의해 정제하여 다음의 효소 반응에 제공한다.
다음에, 화합물(I) 또는 αβ-이성체 혼합물(V')과 염기(B)에, 뉴클레오시드 포스포릴라제를 작용시켜 식(II)으로 표시되는 2'F-ANA를 제조하는 방법에 대해서 설명한다.
반응에 이용되는 뉴클레오시드 포스포릴라제로서는 화합물(II)을 합성할 수 있는 것이면 특히 제한되는 것은 아니지만, 특히 퓨린 뉴클레오시드 포스포릴라제가 바람직하다. 이러한 뉴클레오시드 포스포릴라제는 그의 조제법도 포함하여 공지이고, 당해 공지의 방법으로 용이하게 조제 가능하다. 구체적으로 뉴클레오시드 포스포릴라제는 특정의 유래의 것으로 한정되지 않고, 동물 유래, 식물유래, 미생물 유래 등 모든 유래의 것을 사용할 수가 있다. 조제의 간편성 등의 점으로부터, 미생물 유래의 뉴클레오시드 포스포릴라제가 바람직하다. 또한, 사용하는 뉴클레오시드 포스포릴라제 유전자가 클론화되어 있는 경우에는 그의 클론화된 뉴클레오시드 포스포릴라제 유전자를 이용하여 통상의 방법에 의해 대장균 등을 숙주로서 대량생산시켜, 당해 재조합 균으로부터 당해 효소를 조제하는 것도 가능하다.
이러한 뉴클레오시드 포스포릴라제는 당해 활성을 가지는 한 어떠한 형태이어도 좋다. 구체적으로는 미생물의 균체, 이 균체의 처리물, 이 처리물로부터 얻어진 효소 조제물 등을 들 수 있다.
미생물의 균체의 조제는 당해 미생물이 생육 가능한 배지를 이용하여 통상의 방법에 따라 배양한 후, 원심분리 등으로 집균하는 방법에 의해 행할 수 있다. 구체적으로는 바실러스속 또는 대장균류에 속하는 세균을 예로 들어 설명하면, 배지로서는 브이용 배지, LB 배지(1% 트립톤, 0.5% 이스트엑기스, 1% 식염), 2xYT 배지(1.6% 트립톤, 1% 이스트엑기스, 0.5% 식염) 등을 사용할 수가 있으며, 당해 배지에 종균을 접종 후, 약 30∼50℃에서 약 10∼50시간 정도, 필요에 따라 교반하면서 배양하여 얻어진 배양액을 원심분리하여 미생물 균체를 집균함으로서 뉴클레오시드 포스포릴라제 활성을 가지는 미생물균체를 조제할 수가 있다.
미생물의 균체 처리물로서는 상기 미생물균체를 기계적 파괴(웨어링 블렌더, 프렌치 프레스, 호모지나이저, 유발 등에 의한다), 동결 융해, 자기 소화, 건조(동결건조, 풍건 등에 의한다), 효소처리(리조자임 등에 의한다), 초음파 처리, 화학 처리(산, 알칼리 처리 등에 의한다) 등의 일반적인 처리법으로 따라 처리하여 얻어진 균체의 파괴물 또는 균체의 세포벽 또는 세포막의 변성물을 들 수 있다.
효소 조제물로서는 상기 균체 처리물로부터 뉴클레오시드 포스포릴라제 활성을 가지는 획분을 통상의 효소의 정제 수단, 예를 들면 염석처리, 등전점 침전 처리, 유기용매 침전 처리, 투석 처리, 각종 크로마토그래피 처리 등을 수행하여 얻어진 조악한 효소 또는 정제 효소를 사용할 수가 있다.
반응액에 첨가하는 염기(B)는 합성 목적에 따라 시판되고 있는 것, 공지의 방법으로 조제한 것 등을 사용하면 좋다.
염기(B)로서는 퓨린 염기 또는 그 유도체가 바람직하다. 퓨린 염기의 유도체로서는 할로겐원자, 알킬기, 할로알킬기, 알케닐기, 할로알케닐기, 알키닐기, 아미노기, 알킬아미노기, 히드록시기, 히드록시아미노기, 아미노옥시기, 알콕시기, 메르캅토기, 알킬 메르캅토기, 아릴기, 아릴옥시기 및 시아노기로부터 선택된 치환기를 가지는 것을 들 수 있다. 치환기의 수 및 위치는 특히 제한되는 것은 아니다.
할로겐원자로서는 염소, 불소, 요오드, 브롬을 들 수 있다. 알킬기로서는 메틸기, 에틸기, n-프로필기 등의 탄소수 1∼6의 알킬기를 들 수 있다.
할로알킬기로서는 플루오로메틸기, 디플루오로메틸기, 트리플루오로메틸기, 브로모메틸기, 브로모에틸기 등의 상기 할로겐원자로 치환된 상기 탄소수 1∼6의 알킬기를 들 수 있다.
알케닐기로서는 비닐기, 알릴기 등의 탄소수 2∼7의 알케닐기를 들 수 있다.
할로알케닐기로서는 브로모비닐기, 클로로비닐기 등의 상기 할로겐원자로 치환된 탄소수 2∼7의 알케닐기를 들 수 있다.
알키닐기로서는 에티닐기, 프로피닐기 등의 탄소수 2∼7의 알키닐기를 들 수 있다.
알킬아미노기로서는 메틸아미노기, 에틸아미노기, 디에틸아미노기, 디에틸아미노기 등의 상기 탄소수 1∼6의 알킬기로 치환된 아미노기를 들 수 있다.
알콕시기로서는 메톡시기, 에톡시기, n-프로폭시기 등의 탄소수 1∼7의 알콕시기를 들 수 있다.
알킬메르캅토기로서는 메틸메르캅토기, 에틸메르캅토기 등의 상기 탄소수 1∼6의 알킬기를 가지는 알킬메르캅토기를 들 수 있다.
아릴기로서는 페닐기; 메틸페닐기, 에틸페닐기 등의 상기 탄소수 1∼6의 알킬기로 치환된 알킬페닐기; 메톡시페닐기, 에톡시페닐기 등의 상기 탄소수 1∼6의 알콕시기로 치환된 알콕시페닐기; 디메틸아미노페닐기, 디에틸아미노페닐기 등의 상기 탄소수 1∼6의 알킬 아미노기로 치환된 알킬아미노페닐기; 클로로페닐기, 브로모페닐기 등의 할로겐원자로 치환된 할로게노페닐기 등을 들 수 있다.
아릴옥시기로해서는 상기 아릴기를 가지는 것을 들 수 있다. 예를 들면, 페녹시기; 메틸페녹시기, 에틸페녹시기 등의 상기 탄소수 1∼6의 알킬기로 치환된 알킬페녹시기; 메톡시페녹시기, 에톡시페녹시기 등의 상기 탄소수 1∼6의 알콕시기로 치환된 알콕시페녹시기; 디메틸아미노페녹시기, 디에틸아미노페녹시기 등의 상기 탄소수 1∼6의 알킬아미노로 치환된 알킬아미노페녹시기; 클로로페닐기, 브로모페닐기 등의 상기 할로겐원자로 치환된 할로겐페녹시기 등을 들 수 있다.
퓨린 염기 및 그 유도체로서는 예를 들면 퓨린, 6-아미노퓨린(아데닌), 6-히드록시퓨린(히폭산틴), 6-플루오로퓨린, 6-클로로퓨린, 6-메틸아미노퓨린, 6-디메틸아미노퓨린, 6-트리플루오로메틸아미노퓨린, 6-벤조일아미노퓨린, 6-아세틸아미노퓨린, 6-히드록시아미노퓨린, 6-아미노옥시퓨린, 6-메톡시퓨린, 6-아세톡시퓨린, 6-벤조일옥시퓨린, 6-메틸퓨린, 6-에틸퓨린, 6-트리플루오로메틸퓨린, 6-페닐퓨린, 6-메르캅토퓨린, 6-메틸메르캅토퓨린, 6-아미노퓨린-1-옥시드, 6-히드록시퓨린-1-옥시드, 2-아미노-6-히드록시퓨린(구아닌), 2,6-디아미노퓨린, 2-아미노-6-클로로퓨린, 2-아미노-6-요도퓨린, 2-아미노퓨린, 2-아미노-6-메르캅토퓨린, 2-아미노-6-메틸메르캅토퓨린, 2-아미노-6-히드록시아미노퓨린, 2-아미노-6-메톡시퓨린, 2-아미노-6-벤조일옥시 퓨린, 2-아미노-6-아세톡시퓨린, 2-아미노-6-메틸퓨린, 2-아미노-6-시클로프로필아미노메틸퓨린, 2-아미노-6-페닐퓨린, 2-아미노-8-브로모퓨린, 6-시아노퓨린, 6-아미노-2-클로로퓨린(2-클로로아데닌), 6-아미노-2-플루오로퓨린(2-플루오로아데닌), 6-아미노-3-데아자퓨린, 6-아미노-8-아자퓨린, 2-아미노-6-히드록시-8-아자퓨린, 6-아미노-7-데아자퓨린, 6-아미노-1-데아자퓨린, 6-아미노-2-아자퓨린 등을 들 수 있다.
2'F-ANA는 트리스 염산 완충액, 인산 완충액 등의 완충액중, 화합물(1) 또는 그의 α- 및 β-이성체 혼합물(V')과 상기 염기(B)에 뉴클레오시드 포스포릴라제를 약 5유닛/㎖ 이상, 바람직하기로는 약 50유닛/㎖ 이상 첨가함으로써 합성할 수 있다. 화합물(1) 또는 그의 α- 및 β-이성체 혼합물(V')의 사용량은 약 1∼200mM이 바람직하고, 특히 10∼100mM이 바람직하다. 화합물(1)에 대한 염기(B)의 사용량은 1당량 이상이 바람직하고, 특히 약 2∼5몰배 당량 정도가 바람직하다. 반응시간은 20∼70℃가 바람직하고, 특히 40∼60℃가 바람직하다. 반응시간은 약 1∼100시간 정도가 바람직하다. 필요에 따라 교반하면서 반응시켜도 좋다.
다음에, 상기 제조법을 이용하는 9-(2-플루오로-β-D-아라비노실)구아닌, 즉 화합물(VII)의 제조를 구체적으로 설명한다.
화합물(1) 또는 αβ-이성체 혼합물(V')과 2-아미노-6-치환퓨린에 상기와 동일한 뉴클레오시드 포스포릴라제를 첨가하여 화합물(VI)을 얻고, 이를 가수분해 효소로 처리하면 좋다.
반응에 사용하는 2-아미노-6-치환 퓨린으로서는 2-아미노-6-치환 퓨린의 치환기 Y가 가수분해 가능한 기인 퓨린 유도체이면 특히 제한되지 않는다. 치환기 Y로서는 염소원자, 브롬원자, 요오드원자 등의 할로겐원자, 아미노기, 히드록시기메르캅토기, 메틸메르캅토기, 히드록시아미노기, 메톡시기, 벤조일옥시기, 아세톡시기를 들 수 있다.2-아미노-6-치환 퓨린의 구체적인 예로서는 2-아미노-6-할로게노퓨린, 2,6-디아미노퓨린, 2-아미노-6-히드록시퓨린을 들 수 있어 2-아미노-6-클로로퓨린, 2-아미노-6-요오드퓨린, 2-아미노-6-메르캅토퓨린, 2-아미노-6-메틸메르캅토퓨린, 2-아미노-6-히드록시아미노퓨린, 2-아미노-6 벤조일퓨린, 2-아미노-6-아세톡시퓨린을 들 수 있으며, 특히, 2,6-디아미노퓨린이 바람직하다.
가수분해 효소로서는 2-아미노-6-치환 퓨린 또는 이것을 가지고 있는 뉴클레오티드의 6위치의 치환기를 가수분해함으로써 2-아미노-6-옥소퓨린(구아닌) 또는 이것을 가지고 있는 뉴클레오티드를 생성할 수 있는 활성을 가지는 것이면 특히 한정되지 않는다. 이러한 가수분해 효소로서는 데아미나제 등을 들 수 있으며, 특히 아데노신 데아미나제(adenosine deaminase)가 바람직하다.
가수분해 효소를 이용한 탈아미노 반응은 구체적으로는 인산 완충액, 트리스염산 완충액 등의 완충액중, 가수분해 효소를 약 5 유닛/㎖ 이상, 바람직하기로는 약 30 유닛/㎖ 이상 첨가하면 좋다. 반응 온도는 20∼70℃가 바람직하고, 반응시간은 약 1∼100시간 정도가 바람직하다. 필요에 따라 교반하면서 반응시켜도 좋다.
가수분해 효소를 이용한 탈아미노 반응은 상기 뉴클레오시드 포스포릴라제를 이용한 반응에 계속하여 또는 동시 병행적으로 행하여도 좋다.
또한, 화합물(VII)은 화합물(1) 또는 α- 및 β-이성체 혼합물(V')과 5'-모노포스페이트에, 뉴클레오시드 포스포릴라제 및 뉴클레오시다제를 첨가하여 제조할 수 있다. 반응은 트리스염산 완충액, 인산 완충액 등의 완충액중, 뉴클레오시드 포스포릴라제와 뉴클레오시다제를 각 약 5 유닛/㎖ 이상 첨가하고, 20∼70℃에서, 약 1∼100시간 정도, 필요에 따라 교반함으로써 실시할 수 있다.
반응에 사용하는 뉴클레오시다제로서는 뉴클레오티드를 핵산 염기와 당인산에 가수분해할 수 있는 활성을 가지는 효소이면 좋고, 구체적으로는 이노시네이트 뉴클레오시다제(Bull. Agric. Chem. Soc. Japan, 23, 281-288(1959))를 들 수 있다. 뉴클레오시드 포스포릴라제로서는 상기와 같은 것을 사용할 수 있다.
이와 같이 하여 얻어진 화합물(VII)은 뉴클레오티드의 통상의 분리 정제 수단, 예를 들면 이온교환 크로마토그래피, 흡착 크로마토그래피, 결정화 등에 의해분리 정제할 수가 있다.
실시예
이하에 본 발명을 합성예에 의해 더 구체적으로 설명한다. 그러나, 본 발명은 이하의 실시예의 범위에만 한정되는 것은 아니다.
합성예 1: 3,5-O-디벤조일-2-플루오로-α-D-아라비노실-1-포스페이트[식 V; R1=Bz, R2=H]
인산(5.0g, 51mmol), 몰리큘라 시브스 4A(3.6g)를 아세토니트릴(18㎖)에 현탁하고, 0℃에서 트리-n-부틸아민(24.3㎖, 102mmol)을 가하고, 실온에서 1시간 교반했다. 실온에서, 테트라-n-부틸암모늄아이오다이드(15.7g, 42.5mmol)를 가하고, 다시 10분후, 3,5-O-디벤조일-2-플루오로-α-D-아라비노실-1-브로마이드[식 III; R1=Bz, X=Br](3.59g, 8.5mmol의 아세토니트릴 용액(36㎖)을 적하하였다. 실온에서 2시간 교반한 후, 불용물을 여과하여 제거했다. 액을 감압하에서 농축하고, 잔사를 에틸아세테이트(150㎖)로 추출했다. 유기계를 0.1N 염산으로 3회 세정한 후, 무수 황산나트륨으로 건조해, 용매를 증류했다.
표제 화합물을 HPLC[UV: 230nm,분석 컬럼: SHISEIDO CAPCELL PAK NH2(4.6mm I.D.×250mm), 컬럼 온도: 30℃, 이동상: 60mM KH2PO4(50%) 아세토니트릴(50%), pH 4.0(H3PO4), 유속: 1.0㎖/min]에서 분석하여, 면적%로부터 1-인산 유도체의 생성율 및 α/β 비를 산출했다.60.3%, α/β=3.4.
잔사를 메틸에틸케톤(90㎖)에 용해하고, 인산(13.3g), 몰리큘라 시브스 4A(3.6g)를 가하고 80℃에서 2시간 교반했다. 불용물을 여과하여 제거한 후, 용매를 증류했다. 잔사를 에틸아세테이트(150㎖)로 추출했다. 유기층을 물로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 용매를 증류했다. HPLC분석: 60.5%, α/β =4.9. 다시, 잔사를 역상 ODS 컬럼크로마토그래피(600㎖, 5∼40% 아세토니트릴-물)에서 정제하여 표제 화합물을 β-이성체와의 혼합물(31P-NMR분석: α/β=5.7)로서 2.91g(41%) 얻었다(다만, 표제 화합물 1몰에 대해 0.6몰의 트리-n-부틸암모늄 및 0.1몰의 테트라-n-부틸암모늄을 함유한다).
1H-NMR(CDCl3, 500MHz) δ ppm: 8.07-8.02(4H, m), 7.51-7.36(6H, m), 5.99(1H, dd, J=5.6, 8.6Hz), 5.46(1H, dd, J=4.3, 22.9Hz), 5.30(1H, d, J=49.1Hz), 4.74-4.57(3H, m).
합성예 2: 3,5-O-디벤조일-2-플루오로-α-D-아라비노실-1-포스페이트[식 V: R1=Bz, R2=H]
1.0M 인산/트리-n-부틸아민의 아세토니트릴 용액(0.75㎖)에 몰리큘라 시브스 4A(50mg) 및 이하의 표 1에 나타내는 강산염(각 0.6mmol)을 가하고, 실온에서 40분간 교반했다. 이것에 3,5-O-디벤조일-2-플루오로-α-D-아라비노실-1-브로마이드[식 III; R1=Bz, X=Br](50mg, 0.12mmol)의 아세토니트릴 용액(0.5㎖)을 적하했다.
HPLC분석: 유지시간은 α-이성체가 3.8분, β-이성체가 4.4분이었다. 그 결과를 표 1에 나타낸다. 표 1로부터 명백한 바와 같이, 강산염의 첨가에 의해, α-이성체의 생성비율이 높아지는 것이 판명되었다.
[표 1]
강산염 반응온도 화합물(V) α/β비
없음 실온 68% 0.6
테트라-n-부틸암모늄아이오다이드 실온 69% 2.4
테트라-n-부틸암모늄브로마이드 실온 69% 2.2
테트라-n-부틸암모늄 나이트레이트 실온 65% 2.6
테트라-n-부틸암모늄클로라이드 70℃ 71% 1.9
테트라에틸암모늄클로라이드 70℃ 65% 1.9
합성예 3: 3,5-O-디벤조일-2-플루오로-α-D-아라비노스[식 IV; R1=Bz]
3,5-O-디벤조일-2-플루오로-α-D-아라비노실-1-브로마이드[식 III; R1=Bz, X=Br](2.40g, 5.7mmol)를 DMF(50㎖)에 용해하고, 트리에틸아민(4.8㎖, 34.2mmol), 물(3.1㎖, 171mmol)을 가하고, 실온에서 30분간 교반했다. 감압하에서 용매를 증류하고, 잔사를 에틸아세테이트로 추출하고, 유기층을 물, 포화 탄산수소나트륨 수용액 및 포화 식염수로 세정했다. 다시, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 용매를 증류했다. 잔사를 실리카겔 컬럼크로마토그래피(150g, 0∼5% 메탄올-클로로포름)로 정제하여 표제 화합물 1.85g(90%)를 얻었다.
1H-NMR(CDCl3, 500MHz) δ ppm: 8.08-8.01(4H, m), 7.63-7.41(6H, m), 5.70(1H, dd, J=3.6, 10.2Hz), 5.50(1H, dd, J=4.3, 22.0Hz), 5.18(1H, d, J=49.1Hz), 4.77-4.60(3H, m), 2.89(1H, t, J=3.4Hz)
합성예 4: 3,5-O-디벤조일-2-플루오로-α-D-아라비노실-1-(비스-2-시아노에틸)포스페이트 [식 V; R1=Bz, R2=CH2CH2CN]
3,5-O-디벤조일-2-플루오로-α-D-아라비노스[IV; R1=Bz](1.01g, 2.8 mmol)를 아세토니트릴로 2회 공비 탈수한 후, 아세토니트릴(20㎖)에 용해하고, 트리에틸아민(1.2㎖, 8.4mmol) 및 비스(디이소프로필아미노)클로로포스핀(1.69g, 5.6mmol)을 가하고, 실온에서 1시간 교반했다. 이것에 2-시아노에탄올(1.9㎖, 28mmol) 및 1H-테트라졸(0.98g, 14mmol)을 가하고, 실온에서 1.5시간 교반했다. 다시, 70% t-부틸히드로퍼옥시드 용액(2.5㎖)을 가하고, 실온에서 30분간 교반했다. 에틸아세테이트(100㎖)로 추출하고, 유기층을 물로 2 회, 티오황산나트륨 수용액, 포화 탄산수소나트륨수 및 포화 식염수로 1회씩 세정했다. 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 감압하에서 용매를 증류했다. 잔사를 실리카겔 컬럼크로마토그래피(70g, 50∼100% 에틸아세테이트-n헥산)에서 정제 하여 표제 화합물 0.78g(51 %)를 얻었다.
1H-NMR(CDCl3, 500MHz) δ ppm: 8.07-8.05(4H, m), 7.65-7.43(6H, m), 6.14(1H, dd, J=4.2, 8.3Hz), 5.56(1H, dd, J=3.9, 20.9Hz), 5.34(1H, d, J=48.4Hz), 4.82(1H, q, J=3.9Hz), 4.78(1H, dd, J=3.5, 12.2Hz), 4.68(1H, dd, J=4.6, 12.2Hz), 4.37-4.27(4H, m), 2.78-2.68(4H, m).
합성예 5: 3,5-0-디벤조일-2-플루오로-α-D-아라비노실-1-포스페이트[식 V; R1=Bz, R2=H]
3,5-O-디벤조일-2-플루오로-α-D-아라비노실-1-(비스-2-시아노에틸) 인산염[식 V; R1=Bz, R2=CH2CH2CN](85mg, 0.16mmol)를 메틸렌클로라이드(3㎖)에 용해하고, DBU(0.25㎖, 1.6mmol)를 가하고, 실온에서 10분간 교반했다. 이것에 클로로트리메틸실란(0.1㎖, 0.8mmol)을 가하고, 실온에서 1시간 교반했다. 반응액을 클로로포름으로 추출하고, 유기층을 0.1N 염산으로 세정한 후, 무수 황산나트륨으로 건조했다. 잔사를 에틸아세테이트(0.5㎖)에 용해하고, 이것에 n-헥산(5㎖)을 적하하여 가했다. 상징액을 제거하고, 잔사를 진공 건조하여 표제 화합물을 71mg(89%) 얻었다(다만, 표제 화합물 1몰에 대해, 0.4몰의 DBU를 함유한다).
1H-NMR(CDCl3, 500MHz) δ ppm: 8.07-8.02(4H, m), 7.51-7.36(6H, m), 5.99(1H, dd, J=5.6, 8.6Hz), 5.46(1H, dd, J=4.3, 22.9Hz), 5.30(1H, d, J=49.1Hz), 4.74-4.57(3H, m).
합성예 6: 2-플루오로-α-D-아라비노실-1-포스페이트 2나트륨염[식 I]
합성예 4에서 합성한 3,5-O-디벤조일-2-플루오로-α-D-아라비노실-1-(비스-2-시아노에틸)포스페이트[식 V; R1=Bz, R2=CH2CH2CN](590mg, 1.08mmol)를 메탄올-THF(1:1, 6㎖)에 용해하고, 28% 암모니아수(6㎖)를 가하고, 실온에서 1시간 교반했다. 용매를 증류한 후, 28% 암모니아수(10㎖)를 가하고, 실온에서 밤새 교반했다. 용매를 증류하고, 잔사에 물(20㎖)을 가하고, 이것을 에틸아세테이트(20㎖)로 세정했다. 수층을 회수하여 100㎖ 수용액으로 했다. 이것을 양이온 교환수지(미츠비시카가쿠사제, PK216, Na형, 30㎖)에 통과시켜 물을 증류하여 표제 화합물을 273mg(99%) 얻었다.
1H-NMR(D2O, 500MHz) δ ppm: 5.70(1H, dd, J=6.9, 9.8Hz), 5.02(1H, d, J=50.5Hz), 4.26-4.17(2H, m), 3.87(1H, dd, J=3.2, 12.4Hz), 3.74(1H, dd, 5.3, 12.4Hz).
합성예 7: 2-플루오로-α-D-아라비노실-1-포스페이트[식 1]
합성예 1에서 합성한 3,5-O-디벤조일-2-플루오로-α-D-아라비노실-1-포스페이트[식 V; R1=Bz, R2=H](2.8g, α-이성체로서 3.38mmol)를 메탄올(70 ㎖)에 용해하고, 28% 암모니아수(70㎖)를 가하고, 실온에서 1.5 시간 교반했다. 다시 28% 암모니아수(70㎖)를 가하고, 실온에서 밤새 교반했다. 감압하에서 용매를 증류하고, 잔사를 물(50㎖)에 용해했다. 이것을 에틸아세테이트(100㎖)로 2회 세정하고, 수층을 회수했다. 감압하에서 물을 농축하고, 맴브레인 필터(PTFE, 0.45㎛)에서 여과한 후, 액을 농축했다. 잔사에 아세톤(10㎖, 2회)을 가하고, 상징액을 제거했다. 잔사를 에탄올로 2회 공비하고, 감압하에서, 50℃에서 2시간 건조하여 표제 화합물의 조악한 물질 1.36g 얻었다.
1H-NMR(D2O, 500MHz) δ ppm: 5.71(1H, dd, J=6.9, 9.9Hz), 5.02(1H, d, J=50.3Hz), 4.27-4.18(2H, m), 3.88-3.71(2H, m).
합성예 8: 9-(2-플루오로-β-D-아라비노실)아데닌[식 II; B=아데닌]
10M 인산/트리-n-부틸아민의 아세토니트릴 용액(2.8㎖, 2.8mmol)에 몰리큘라 시브스 4A(126mg) 및 트리-n-부틸아민(0.67㎖, 2.8mmol)을 가하고, 실온에서 1시간 교반했다. 실온에서 테트라-n-부틸암모늄아이오다이드(0.87g, 2.4mmol)를 가하고, 다시 10분후, 3,5-O-디벤조일-2-플루오로-α-D아라비노실-1-브로마이드[식 III; R1=Bz, X=Br](0.2g, 0.47mmol)의 아세토니트릴 용액(2㎖)을 적하했다. 실온에서 2시간 교반한 후, 불용물을 여과하여 제거했다. 여액을 감압하에서 농축하고, 잔사를 에틸아세테이트(20㎖)로 추출했다. 유기층을 0.1N 염산으로 3회 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 용매를 증류했다. 잔사를 메틸에틸케톤(5㎖)에 용해하고, 인산(0.74g), 몰리큘라 시브스 4A(0.2g)를 가하고 80℃에서 3시간 교반했다. 불용물을 여과하여 제거한 후, 용매를 증류했다. 잔사를 에틸아세테이트(20㎖)로 추출했다. 유기층을 물로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 용매를 증류하여 표제 화합물의 조악한 물질을 얻었다(HPLC분석: 56.4%, α/β=7.3).
이것을 메탄올(4㎖)에 용해하고, 28% 암모니아수(2㎖)를 가하고, 실온에서 1시간 교반했다. 다시 28% 암모니아수(2㎖)를 가하고, 실온에서 밤새 교반했다. 감압하에서 용매를 증류하고, 잔사를 물(20㎖)에 용해했다. 이것을 에틸아세테이트(50㎖)로 2회 세정하고, 수층을 회수했다. 감압하에서 물을 농축하고, 잔사를 20mM 인산칼륨 완충액(20㎖, pH 7.6)에 용해하고, 아데닌(54mg, 0.4mmol) 및 퓨린뉴클레오시드 포스포릴라제(조 효소, 1750유닛)를 가하고, 50℃에서 4일간 정치했다. 반응액을 맴브레인 필터(PTFE, 0.45 ㎛) 로 여과하고, 여액을 40㎖의 수용액으로 조정한 후, 역상 ODS 컬럼크로마토그래피(40㎖, 0∼5% 아세토니트릴-물)로 정제하여 표제 화합물을 무색의 결정으로서 50mg(아데닌에 대한 수율 46%)을 얻었다.
1H-NMR(DMSO-d6, 500MHz) δ ppm: 8.26(1H, d, J=1.7Hz), 8.17(1H, s), 7.36(2H, brs), 6.41(1H, dd, J=4.6, 14.1Hz), 6.15(1H, br), 5.25(1H, br), 5.22(1H, dt, J=4.3, 52.7Hz), 4.47(1H, dt, J=4.5, 19.4Hz), 3.86-3.84(1H, m), 3.68-3.63(2H, m).
합성예 9: 9-(2-플루오로-β-D-아라비노실)아데닌[식 II; B=아데닌]
인산(2.8g, 28.2mmol), 몰리큘라 시브스 4A(2.0g)를 아세토니트릴(10 ㎖)에 현탁하고, 0℃에서 트리-n-부틸아민(13.4㎖, 56.4mmol)을 가하고 실온에서 1시간 교반했다. 실온에서 테트라-n-부틸암모늄아이오다이드(8.7g, 23.5mmol)를 가하고, 다시, 10분후, 3,5-O-디벤조일-2-플루오로-α-D-아라비노실-1-브로마이드[식 III; R1=Bz, X=Br](2.0g, 4.7mmol)의 아세토니트릴 용액(20㎖)을 적하했다. 실온에서 2시간 교반 한 후, 불용물을 여과하여 제거했다. 여액을 감압하에서 농축하고, 잔사를 둠을 에틸아세테이트(150㎖)로 추출했다. 유기층을 0.1N 염산으로 3회 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 용매를 증류했다. 잔사를 메틸에틸케톤(50㎖)에 용해하고, 인산(7.4g), 몰리큘라 시브스 4A(2.0g)를 가하고 80℃에서 2시간 교반했다. 불용물을 여과하여 제거한 후, 용매를 증류했다. 잔사를 에틸아세테이트(150㎖)로 추출했다. 유기층을 물로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 용매를 증류했다(HPLC분석: 67.4%, α/β=3.1).
이것을 메탄올(40㎖)에 용해하고, 28% 암모니아수(20㎖)를 가하고, 실온에서 1시간 교반했다. 다시 28% 암모니아수(20㎖)를 가하고, 실온에서 밤새 교반했다. 감압하에서 용매를 증류하고, 잔사를 물(50㎖)에 용해했다. 이것을 에틸아세테이트(200㎖)로 2회 세정하고, 수층을 회수했다. 감압하에서 물을 농축하여 표제 화합물의 조체를 얻었다.
이 표제 화합물의 조체의 1/2 양을 20mM 인산칼륨 완충액(100㎖, pH 7.6)에 용해하고, 아데닌(270mg, 2.0mmol) 및 퓨린뉴클레오시드 포스포릴라제(조 효소, 2000유닛)를 가하고, 50℃에서 6일간 정치했다. 반응액을 맴브레인 필터(PTFE, 0.45 ㎛)로 여과하고, 여액을 150㎖의 수용액으로 조정 후, 역상 ODS 컬럼크로마토그래피(200㎖, 0∼5% 아세토니트릴-물)에서 정제 하여 표제 화합물을 무색의 결정으로서 181mg(아데닌에 대한 수율 34%) 얻었다.
1H-NMR(DMSO-d6, 500MHz) δ ppm: 8.26(1H, d, J=1.7Hz), 8.17(1H, s), 7.36(2H, brs), 6.41(1H, dd, J=4.6, 14.1Hz), 6.15(1H, br), 5.25(1H, br), 5.22(1H, dt, J=4.3, 52.7Hz), 4.47(1H, dt, J=4.5, 19.4Hz), 3.86-3.84(1H, m), 3.68-3.63(2H, m).
합성예 10: 2,6-디아미노-9-(2-플루오로-β-D-아라비노실)퓨린 [식 II; B=2,6-디아미노퓨린]
합성예 9에서 얻어진 조 2-플루오로-α-D-아라비노실-1-포스페이트[식 1]의 1/2양을 20mM 인산칼륨 완충액(100㎖, pH 7.6)에 용해하고, 2,6-디아미노퓨린(300mg, 2.0mmol) 및 퓨린뉴클레오시드 포스포릴라제(조 효소, 2000유닛)를 가하고, 50℃에서 6일간 정치했다. 반응액을 맴브레인 여과하고(PTFE, 0.45mm), 여액을 150㎖의 수용액으로 조정한 후, 역상 ODS 컬럼크로마토그래피(200㎖, 0∼3% 아세토니트릴-물)에서 정제하여 표제 화합물을 무색의 결정으로서 228mg(2,6-디아미노퓨린에 대한 수율 40%) 얻었다.
1H-NMR(DMSO-d6, 500MHz) δ ppm: 7.81(16H, d, J=2.4Hz), 6.79(2H, brs), 6.18(1H, dd, J=4.2, 16.5Hz), 5.89(3H, brs), 5.20(1H, br), 5.10(1H, dt, J=3.7, 52.6Hz), 4.39(1H, ddd, J=3.7, 4.5, 18.2Hz), 3.82-3.80(1H, m), 3.79-3.60(2H, m).
합성예 11: 9-(2-플루오로-β-D-아라비노실)구아닌 [식 II; B=구아닌]
2,6-디아미노-9-(2-플루오로-β-D-아라비노실)퓨린(61.2mg, 0.21mmol)을 50mM 트리스염산 완충액(20㎖, pH 7.0)에 용해하고, 아데노신 데아미나제(71 유닛)를 가하고, 실온에서 1.5시간 교반했다. 반응액을 맴브레인 필터(PTFE, 0.5 ㎛)로 여과하고, 60㎖ 수용액으로 조정했다. 이것을 역상 ODS 컬럼크로마토그래피(80㎖, 0∼2% 아세토니트릴-물)에서 정제하여 표제 화합물을 무색의 결정으로서 60.4mg(수율 100%) 얻었다.
1H-NMR(DMSO-d5, 500MHz) δ ppm: 10.50(1H, brs), 7.80(1H, s), 6.54(2H, brs), 6.13(1H, dd, J=4.2, 16.0Hz), 5.94(1H, d, J=4.5Hz), 5.11(1H, dt, J=3.8, 52.4Hz), 5.08(1H, t, J=5.7Hz), 4.37(1H, dd, J=3.9, 17.8Hz), 3.82-3.79(1H, m), 3.66-3.57(2H, m).
합성예 12: 2-아미노-6-클로로-9-(2-플루오로-β-D-아라비노실)퓨린 [식 II; B=2-아미노-6-클로로퓨린]
실시예 7에서 얻어진 조 2-플루오로-α-D-아라비노실-1-포스페이트[식 I](200mg, 0.5mmol)를 50mM 인산칼륨 완충액(150㎖, pH 7.5)에 용해하고, 2-아미노-6-클로로퓨린(170mg, 1.0mmol) 및 퓨린뉴클레오시드 포스포릴라제(조 효소, 3519유닛)를 가하고, 50℃에서 14일간 정치했다. 반응액을 맴브레인 필터(PTFE, 0.45 ㎛)로 여과하고, 여액을 10㎖의 수용액으로 조정 후, 역상 ODS 컬럼크로마토그래피(20㎖, 0∼5% 아세토니트릴-물)에서 정제하여 표제 화합물을 얻었다.
1H-NMR(D2O, 500MHz) δ ppm: 8.20(1H, s), 6.31(1H, dd, J=3.9, 17.4Hz), 5.24(1H, dt, J=3.1, 51.2Hz), 4.56(1H, dt, J=2.2, 18.2Hz), 4.10-4.07(1H, m), 3.92-3.82(2H, m).
합성예 13: 2-아미노-9-(2-플루오로-β-D-아라비노실)퓨린 [식 II; B=2-아미노퓨린]
합성예 7에서 얻은 조 2-플루오로-α-D-아라비노실-1-포스페이트[식 I](200mg, 0.5mmol)를 50mM 인산칼륨 완충액(50㎖, pH 7.5)에 용해하고, 2-아미노퓨린(135mg, 1.0mmol) 및 퓨린뉴클레오시드 포스포릴라제(조 효소, 1517 유닛)를 가하고, 50℃에서 9일간 정치했다. 반응액을 맴브레인 필터(PTFE, 0.45 ㎛)로 여과하고, 여액을 6㎖의 수용액으로 조정한 후, 역상 ODS 컬럼크로마토그래피(40㎖, 0∼5% 아세토니트릴-물)에서 정제하여 표제 화합물을 87.3mg(2-아미노퓨린에 대한 수율 32%) 얻었다.
1H-NMR(DMSO-d, 500MHz) δ ppm: 8.63(1H, s), 8.18(1H, d, J=2.2Hz), 6.64(2H, brs), 6.50(1H, br), 6.31(1H, dd, J=4.4, 15.2Hz), 5.19(1H, dt, J=4.1, 52.6Hz), 5.15(1H, br), 4.43(1H, ddd, J=4.0, 4.9, 18.3Hz), 3.85(1H, q,] 2 4.9Hz), 3.70-3.62(2H, m).
합성예 14: 2-플루오로 9-(2-플루오로-β-D-아라비노실)아데닌 [식 II; B=2-플루오로아데닌]
합성예 7에서 얻은 조 2-플루오로-α-D-아라비노실-1-포스페이트[식 I](76mg, 0.2mmol)를 5mM 트리스염산 완충액(60㎖, pH 7.5)에 용해하고, 2-플루오로아데닌(44mg, 0.3mmol) 및 퓨린뉴클레오시드 포스포릴라제(조 효소, 722 유닛)를 가하고, 50℃에서 5일간 정치했다. 반응액을 맴브레인 필터(PTFE, 0.45 ㎛)로 여과하고, 여액을 30㎖의 수용액으로 조정 후, 역상 ODS 컬럼크로마토그래피(40㎖, 0∼5% 아세토니트릴-물)에서 정제하여 표제 화합물을 39.0mg(2-플루오로아데닌에 대한 수율 45%)을 얻었다.
1H-NMR(DMSO-d6, 500MHz) δ ppm: 8.24(1H, d, J=1.9Hz), 8.00-7.80(2H, m), 6.29(1H, dd, J=4.6,13.8Hz), 5.98(1H, d, J=5.1Hz), 5.22(1H, dt, J=4.2, 52.6Hz), 5.10(1H, t,] 2 5.6Hz), 4.43(1H, dd d, J=5.0, 9.4, 18.9Hz), 3.85(1H, dd, J=4.9, 9.6Hz), 3.71-3.61(2H, m).
합성예 15: 9-(2-플루오로-β-D-아라비노실)구아닌 [식 II; B=구아닌]
인산(48.19, 0.49mol), 몰리큘라 시브스 4A(38g)를 아세토니트릴(160 ㎖)에 현탁하고, 0℃에서 트리-n-부틸아민(233.9㎖, 0.98mol)을 가하고, 실온에서 1시간 교반했다. 실온에서 테트라-n-부틸암모늄아이오다이드(151.0g, 0.41mol)를 가하고, 다시 10분후, 3,5-O-디벤조일-2-플루오로-α-D-아라비노실-1-브로마이드[식 III; R1=Bz, X=Br](34.62g, 0.82mol)의 아세토니트릴 용액(240㎖)을 적하했다. 실온에서 2시간 교반한 후, 불용물을 여과하여 제거했다. 액을 감압하에서 농축하고, 여액에 물(200㎖)을 가하고, 에틸아세테이트(600㎖)로 2회 추출했다. 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조하고, 용매를 증류했다. 잔사를 메틸에틸케톤(830㎖)에 용해하고, 인산(110.6g)을 가하고 80℃에서 2시간 교반했다. 용매를 증류하고, 잔사에 물(1ℓ)을 가하고, 에틸아세테이트(1ℓ)로 2회 추출했다. 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 용매를 증류하여 조 결점 3,5-O-디벤조일-2-플루오로-α-D-아라비노실-포스페이트[식 V; R1=Bz, R2=H]를 얻었다.
이것을 메탄올(600㎖)에 용해하고, 28% 암모니아수(300㎖)를 가하고, 실온에서 1.5시간 교반했다. 다시, 28% 암모니아수(300㎖)를 가하고, 실온에서 밤새 교반했다. 감압하에서 용매를 증류하고, 잔사를 물(500㎖)에 용해했다. 이것을 에틸아세테이트(800 ㎖)로 2회 세정한 후, 수층을 회수했다. 감압하에서 물을 농축하고, 맴브레인 필터(PTFE, 0.45 ㎛)로 여과한 후, 물을 가하여 조 2-플루오로-α-D-아라비노실-1-포스페이트[식 I]수용액(2.5ℓ, pH 7.5)을 얻었다.
이것에 2,6-디아미노퓨린(15.4g, 0.1mol) 및 퓨린뉴클레오시드 포스포릴라제(조 효소, 108300 유닛)를 가하고, 50℃에서 10일간 정치했다. 반응액을 희염산으로 pH 4로 조정하고, 셀라이트 여과하여 침전물을 제거했다. 액을 흡착수지 컬럼(미츠비시카가쿠사제, SP206, 1.4ℓ, 0∼20% 에탄올수)에서 정제하고, 농축하여, 2,6-디아미노-9-(2-플루오로-β-D-아라비노실)퓨린[식 II; B=2,6-디아미노퓨린] 수용액(3.1ℓ)을 얻었다.
이것에 인산이수소칼륨(8.4g)을 가하고, 1N 수산화칼륨으로 pH 7.3으로 조정한 후, 아데노신 데아미나제(2000 유닛)를 가하고 40℃에서 3시간 정치했다. 반응액을 희염산으로 pH 4로 조정하고, 흡착수지 컬럼(미츠비시카가쿠사제, SP206, 1.9ℓ, 0∼15% 에탄올수)에서 정제하여 표제 화합물을 무색의 결정으로서 7.8g(HPLC 순도 99%, 2,6-디아미노퓨린에 대한 수율 27%) 얻었다.
참고예 1
(1) 퓨린뉴클레오시드 포스포릴라제의 조제
펩톤 20g/ℓ, 효모 엑기스 10g/ℓ, 염화나트륨 5g/ℓ, 글루코오스 19/ℓ, 100㎍/㎖의 앰피실린을 함유하는 영양 배지 100㎖에, 일본국 특허공개 평 9-117298호 공보에 기재된 방법에 따라 조제한 재조합 벡터 pTrc-B56을 유지하는 대장균 JM109 "pTrc-B56"를 식균하고, 37℃에서 진탕 배양했다.
4×108 개/㎖에 도달한 시점에서, 배양액에 종농도 1 mmol/ℓ가 되도록 IPTG를 첨가하고, 다시 37℃에서 5시간 진탕 배양을 계속했다. 배양 종료후, 원심분리(9,000×g, 10분간)하여 배양균체를 회수하고, 20㎖의 완충액(50mmol/ℓ, 트리스염산 완충액(pH 7.8), 5mmol/ℓ EDTA, 0.1 % Triton X100 함유)에 현탁했다. 균체 현탁액에 종농도 1mg/㎖가 되도록 라이소자임을 가하고, 37℃에서 1시간 보온하여 형질 전환체를 용균시키고, 다시 원심분리(12,000×g, 10분간)하여 균체잔사를 제거했다. 이와 같이 하여 얻어진 상청획분을 효소액으로 했다.
(2) 아데노신 데아미나제의 조제
펩톤 20g/ℓ, 효모 엑기스 10g/ℓ, 염화나트륨 5g/ℓ, 글루코오스 19/ℓ, 100 ㎍/㎖의 앰피실린을 함유하는 영양 배지 100㎖에 일본국 특허공개 평5-219978호 공보에 기재된 방법에 따라 조제한 재조합 벡터 pDR-add를 유지하는 대장균 형질전환체 JM105 [pDR-add]를 식균하고, 37℃에서 진탕 배양했다.
4×108개/㎖에 도달한 시점에서, 배양액에 종농도 0.1mmol/ℓ가 되도록 IPTG를 첨가하고, 다시 37℃에서 3시간 진탕배양을 계속했다. 배양 종료후, 원심분리(9,000×g, 10분간)하여 배양균체를 회수하고, 10㎖의 완충액(20mmol/ℓ 트리스염산(pH 8.2), 10% 에틸렌글리콜)에 현탁했다. 균체 현탁액을 초음파 파쇄기로 처리하고, 다시 원심분리(2,000×g, 10분간)하여 균체 잔사를 제거했다. 이와 같이 하여 얻어진 상청획분을 효소액으로 했다.
본 발명에 의하면, 종래 고수율로, 그리고 입체 선택적인 합성이 곤란하였던 2'F-ANA, 특히 2'-데옥시-2'-플루오로-β-D-아라비노퓨린뉴클레오시드를 간편하고, 높은 입체 선택적으로 고수율로 제조할 수 있다. 특히, 본 발명에 의하면, 종래 합성이 지극히 곤란하였던 9-(2-플루오로-β-D-아라비노실)구아닌을 공업적 스케일로 간편하고도, 높은 입체 선택적으로 고수율로 제조할 수 있다.

Claims (13)

  1. 식(I):
    Figure 112006029978544-PCT00021
    으로 표시되는 α-1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드 또는 그의 염.
  2. 식(III):
    Figure 112006029978544-PCT00022
    (식중, R1은 히드록시기 보호기를 나타내고, X는 이탈기를 나타낸다.)
    로 표시되는 2-데옥시-2-플루오로아라비노스 유도체를 가수분해하여 식(IV):
    Figure 112006029978544-PCT00023
    (식중, R1은 전술한 바와 같다.)
    으로 표시되는 α-1-히드록실체를 입체 선택적으로 얻고, 식(IV)의 화합물을 인산화하여 식(V):
    Figure 112006029978544-PCT00024
    (식중, R1은 전술한 바와 같고, R2는 수소원자 또는 인산 잔기의 보호기를 나타낸다.)
    으로 표시되는 α-1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드 유도체로 하고, 이어서 히드록시기 및/또는 인산 잔기의 보호기를 탈보호함을 특징으로 하는 식(I):
    Figure 112006029978544-PCT00025
    으로 표시되는 α-1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드의 입체 선택적인 제조법.
  3. 식(III):
    Figure 112006029978544-PCT00026
    (식중, R1은 히드록시기의 보호기를 나타내고, X는 이탈기를 나타낸다.)
    으로 표시되는 2-데옥시-2-플루오로아라비노스 유도체를 강산염 존재하에 인산화하여 식(V):
    Figure 112006029978544-PCT00027
    (식중, R1은 전술한 바와 같고, R2는 수소원자 또는 인산 잔기의 보호기를 나타낸다.)
    으로 표시되는 1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드 유도체의 α- 및 β-이성체 혼합물을 얻고, 이어서 히드록시기 및/또는 인산 잔기의 보호기를 탈보호함을 특징으로 하는 식(V'):
    Figure 112006029978544-PCT00028
    으로 표시되는 1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드의 α- 및 β-이성체 혼합물의 제조법.
  4. 제 3항에 있어서, 할로겐이온 또는 질산 이온을 발생하는 강산염을 사용함을 특징으로 하는 제조법.
  5. 식(I):
    Figure 112006029978544-PCT00029
    으로 표시되는 α-1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드 또는 식(V'):
    Figure 112006029978544-PCT00030
    으로 표시되는 1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드의 α- 및 β-이성 체 혼합물 및 염기에, 뉴클레오시드 포스포릴라제를 작용시킴을 특징으로 하는 식(II):
    Figure 112006029978544-PCT00031
    (식중, B는 염기를 나타낸다.)
    으로 표시되는 2'-데옥시-2'-플루오로-β-D-아라비노뉴클레오시드의 제조법.
  6. 제 5항에 있어서, 염기가 퓨린염기, 또는 할로겐원자, 알킬기, 할로알킬기, 알케닐기, 할로알케닐기, 알키닐기, 아미노기, 알킬아미노기, 히드록시기, 히드록시아미노기, 아미노옥시기, 알콕시기, 메르캅토기, 알킬메르캅토기, 아릴기, 아르옥시기 및 시아노기로부터 선택되는 치환기를 가지는 퓨린 염기인 것이 특징인 제조법.
  7. 제 5항 또는 제 6항에 있어서, 뉴클레오시드 포스포릴라제가 퓨린뉴클레오시드 포스포릴라제인 것을 특징으로 하는 제조법.
  8. 식(I):
    Figure 112006029978544-PCT00032
    으로 표시되는 α-1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드 또는 식(V'):
    Figure 112006029978544-PCT00033
    으로 표시되는 1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드의 α- 및 β-이성체 혼합물 및 2-아미노-6-치환 퓨린에 뉴클레오시드 포스포릴라제를 작용시켜 식(VI):
    Figure 112006029978544-PCT00034
    (식중, Y는 치환기를 나타낸다.)
    으로 표시되는 2-아미노-6-치환-9-(2-플루오로-β-D-아라비노실)퓨린을 얻고, 이것을 가수분해 효소로 처리함을 특징으로 하는 식(VII):
    Figure 112006029978544-PCT00035
    으로 표시되는 9-(2-플루오로-β-D-아라비노실)구아닌의 제조법.
  9. 제 8항에 있어서, 2-아미노-6-치환 퓨린이 2,6-디아미노퓨린인 것을 특징으로 하는 제조법.
  10. 제 8항 또는 제 9항에 있어서, 가수분해 효소가 데아미나제인 것을 특징으로 하는 제조법.
  11. 식(I):
    Figure 112006029978544-PCT00036
    으로 표시되는 α-1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드 또는 식(V')
    Figure 112006029978544-PCT00037
    으로 표시되는 1-인산화-2-데옥시-2-플루오로아라비노시드의 α- 및 β-이성체 혼합물 및 구아노신 5'-모노포스페이트에 뉴클레오시드 포스포릴라제와 뉴클레오시다제를 작용시킴을 특징으로 하는 식(VII):
    Figure 112006029978544-PCT00038
    로 표시되는 9-(2-플루오로-β-D-아라비노실)구아닌의 제조법.
  12. 제 11항에 있어서, 뉴클레오시드 포스포릴라제가 퓨린뉴클레오시드 포스포릴라제인 것을 특징으로 하는 제조법.
  13. 제 11항 또는 제 12항에 있어서, 뉴클레오시다제가 이노시네이트 뉴클레오시다제인 것을 특징으로 하는 제조법.
KR1020067008206A 2003-10-24 2004-10-22 α-１-인산화-２-데옥시-２-플루오로아라비노시드 및２’-데옥시-２’-플루오로-β-Ｄ-아라비노뉴클레오시드의제조법 KR20060095772A (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JPJP-P-2003-00364013 2003-10-24
JP2003364013 2003-10-24

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20060095772A true KR20060095772A (ko) 2006-09-01

Family

ID=34510085

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020067008206A KR20060095772A (ko) 2003-10-24 2004-10-22 α-１-인산화-２-데옥시-２-플루오로아라비노시드 및２’-데옥시-２’-플루오로-β-Ｄ-아라비노뉴클레오시드의제조법

Country Status (7)

Country Link
US (1) US7381820B2 (ko)
EP (1) EP1676853A4 (ko)
JP (1) JP4658807B2 (ko)
KR (1) KR20060095772A (ko)
CN (1) CN1867576A (ko)
CA (1) CA2542915A1 (ko)
WO (1) WO2005040181A1 (ko)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108424943B (zh) * 2017-12-22 2021-06-08 上海兆维科技发展有限公司 一种生产2’-脱氧-2’-氟-β-D-阿拉伯糖腺苷酸的方法
JP7378760B2 (ja) * 2019-03-14 2023-11-14 国立大学法人 鹿児島大学 抗ｂ型肝炎ウイルス剤

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4751221A (en) * 1985-10-18 1988-06-14 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research 2-fluoro-arabinofuranosyl purine nucleosides
GB8708050D0 (en) 1987-04-03 1987-05-07 Wellcome Found Therapeutic nucleosides
JPH0723395A (ja) 1993-06-23 1995-01-24 Canon Inc 画像処理装置
WO1999057895A1 (fr) * 1998-05-07 1999-11-11 Kabushiki Kaisha Toshiba Procede et appareil d'affichage d'un contenu enregistre
WO1999067378A1 (en) 1998-06-19 1999-12-29 Mcgill University ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE CONSTRUCTS BASED ON β-ARABINOFURANOSE AND ITS ANALOGUES
JP2002205996A (ja) * 2000-02-10 2002-07-23 Mitsui Chemicals Inc １−リン酸化糖誘導体のアノマーの選択的な製造法並びにヌクレオシドの製造法
ATE397001T1 (de) * 2000-02-10 2008-06-15 Mitsui Chemicals Inc Verfahren zur selektiven herstellung eines 1- phosphoryliertem zuckerderivativ-anomers und verfahren zur herstellung von nukleosiden
AU2002354266A1 (en) * 2001-12-28 2003-07-24 Yamasa Corporation Process for producing 2'-deoxyguanosine

Also Published As

Publication number Publication date
CN1867576A (zh) 2006-11-22
CA2542915A1 (en) 2005-05-06
US20070135627A1 (en) 2007-06-14
WO2005040181A1 (ja) 2005-05-06
US7381820B2 (en) 2008-06-03
EP1676853A1 (en) 2006-07-05
EP1676853A4 (en) 2009-12-23
JPWO2005040181A1 (ja) 2007-11-22
JP4658807B2 (ja) 2011-03-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7482188B2 (ja) ４’－エチルヌクレオシド類似体の酵素的合成
EP1502956B1 (en) Process for producing cytidine 5'-diphosphate choline
KR20160030876A (ko) 약제학적 활성 성분들로써 뉴클레오시드 유사체들의 생물촉매적 생산
JP4601060B2 (ja) アジド化アミノ糖ヌクレオチド及びその応用
EP2878604B1 (en) Monomer for synthesis of rna, method for producing same, and method for producing rna
US6677120B2 (en) Building blocks for the solution phase synthesis of oligonucleotides
KR20060095772A (ko) α-１-인산화-２-데옥시-２-플루오로아라비노시드 및２’-데옥시-２’-플루오로-β-Ｄ-아라비노뉴클레오시드의제조법
JP4802712B2 (ja) リボ核酸化合物及びオリゴ核酸化合物の液相合成法
JP4066121B2 (ja) グアノシン類及びその中間体の製造方法
KR101818564B1 (ko) 바실러스 유래 뉴클레오시드 포스포릴라아제 및 락토코쿠스 유래 아데노신 디아미나아제를 이용한 3'-아미노-2',3'-디데옥시구아노신의 제조 방법
WO2001058920A2 (fr) Procede de production selective d'un anomere derive d'un sucre 1-phosphoryle
EP0894868B1 (en) Process for producing nucleoside derivatives
RU2664472C1 (ru) Гидройодная соль 7-метил-2'-дезоксигуанозина в качестве субстрата для получения 2'-дезоксинуклеозидов методом ферментативного трансгликозилирования
KR101818561B1 (ko) 바실러스 유래 뉴클레오시드 포스포릴라아제를 이용한 3'-아미노-2',3'-디데옥시아데노신의 제조 방법
WO2007144168A1 (en) Enzymatic process for preparation of 5'-monophosphate-nucleotides
CN107849594B (zh) 有机磷-核苷的脱氨基
Barbas III et al. Overexpression and substrate specificity studies of phosphodeoxyribomutase and thymidine phosphorylase
US5393879A (en) Fructosyl C-glycoside nucleoside analogs
JP4383126B2 (ja) ４’−ｃ−エチニル−２’−デオキシプリンヌクレオシドの製造法
CN115851694A (zh) 一种用于合成2`-氟-脱氧核糖核苷的固定化酶的制备方法及应用
CN116744938A (zh) 抗病毒核苷的合成
JPH0683673B2 (ja) ２’，３’−ジデオキシヌクレオシドの製造方法
JP2005097268A (ja) フッ素化パークヌクレオチド化合物およびその医薬用途、並びにその製造方法
JP2002191392A (ja) ヌクレオシド誘導体の製造法

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E701 Decision to grant or registration of patent right
NORF Unpaid initial registration fee