JP2002205996A

JP2002205996A - １−リン酸化糖誘導体のアノマーの選択的な製造法並びにヌクレオシドの製造法

Info

Publication number: JP2002205996A
Application number: JP2001035749A
Authority: JP
Inventors: Hironori Komatsu; 小松　　弘典; Hiroichi Awano; 博一粟野; Nobuyuki Fukazawa; 信幸深澤; Kiyoshi Ito; 伊藤　　潔; Ichiro Ikeda; 一郎池田; Tadashi Araki; 安楽城　　正; Takeshi Nakamura; 武史中村; Tamotsu Asano; 保浅野; Junya Fujiwara; 純也藤原; Tomoyuki Ando; 知行安藤
Original assignee: Mitsui Chemicals Inc
Current assignee: Mitsui Chemicals Inc
Priority date: 2000-02-10
Filing date: 2001-02-13
Publication date: 2002-07-23

Abstract

(57)【要約】【課題】フラノースやピラノースといった糖の骨格の
違い、デオキシ糖といった置換基の有無、あるいは天然
型や非天然型といった糖の種類に影響されることの無
い、汎用性の高い、アノマー選択的な１−リン酸化糖誘
導体ならびにヌクレオシドの製造方法を得ること。【解決手段】１−リン酸化糖誘導体のアノマー混合物
を加リン酸分解および異性化し、一方を結晶化すること
で平衡を傾け、選択的に望む異性体のみを製造する。さ
らに、ヌクレオシドホスホリラーゼの作用により、得ら
れた１−リン酸化糖誘導体と塩基より、高い立体選択性
と収率でヌクレオシドを製造する。【効果】アノマー選択的な１−リン酸化糖誘導体なら
びにヌクレオシドの製造方法を提供した。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、１−リン酸化糖誘
導体の製造法に関する。１−リン酸化糖誘導体は、広く
生物界に存在し、様々な酵素類の反応基質となって、医
薬品や栄養食品などの有用な物質の製造原料となる。ま
た、非天然型の１−リン酸化糖誘導体は、抗ウイルス剤
や酵素阻害剤の製造原料としての利用が期待されてい
る。

【０００２】さらに、本発明は、抗ウイルス医薬品、抗
ガン医薬品やアンチセンス医薬品などの原料または原体
として使用されるヌクレオシド化合物の製造法に関す
る。

【０００３】

【従来の技術】１−リン酸化糖誘導体の製造法として
は、１）１−臭素化糖とリン酸銀塩とを縮合する方法（Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．１２１，Ｐ４６５（１
９３７）、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｖｏｌ．７
８，Ｐ８１１（１９５６）、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏ
ｃ．，Ｖｏｌ．７９，Ｐ５０５７（１９５７））、２）１−ハロゲン化糖とジベンジルリン酸のトリエチル
アミン塩とを縮合する方法（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏ
ｃ．，Ｖｏｌ．７７，Ｐ３４２３（１９５５）、Ｊ．Ａ
ｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｖｏｌ．８０，Ｐ１９９４
（１９５８）、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｖｏ
ｌ．１０６，Ｐ７８５１（１９８４）、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃ
ｈｅｍ．，Ｖｏｌ．５９，Ｐ６９０（１９９４））、３）１−アセチル化糖を正リン酸と加熱縮合する方法
（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７，Ｐ１１０７
（１９６２）、ＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＲｅｓ．，
Ｖｏｌ．３，Ｐ１１７（１９６６）、Ｃａｒｂｏｈｙｄ
ｒａｔｅＲｅｓ．，Ｖｏｌ．３，Ｐ４６３（１９６
７）、Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．５０，
Ｐ５７４（１９７２））、４）１位をイミデート化して活性化した後にジベンジル
リン酸と縮合する方法（ＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＲ
ｅｓ．，Ｖｏｌ．６１，Ｐ１８１（１９７８）、Ｔｅｔ
ｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ．，Ｖｏｌ．２３，Ｐ４０
５（１９８２））、５）１位をタリウムやリチウムアルコラートとして活性
化した後にジベンジルリン酸クロリドで処理する方法
（ＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＲｅｓ．，Ｖｏｌ．９
４，Ｐ１６５（１９８１）、Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，Ｖ
ｏｌ．２３，Ｐ４０５（１９８２））、６）ヌクレオシドホスホリラーゼの作用によりヌクレオ
シドの加リン酸分解反応を行って、１−リン酸化糖誘導
体を製造する方法（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏ
ｌ．１８４、Ｐ４３７、１９５０）、等が知られてい
る。

【０００４】しかしながら、これらの方法には各々以下
の点で問題がある。

【０００５】１）〜５）の化学的な製造法について共通
する問題点としては、１位に隣接する官能基に影響され
てα体／β体のアノマー選択性が変化し、望む異性体を
選択性良く得るための一般的な合成法を考えることが難
しい点があげられる。選択性と高収率を実現するために
は、２位アセトキシ基あるいは２位アセトアミノ基など
の存在が欠かせず、加えて、２位デオキシ糖が不安定な
こともあり、これら合成法の適用範囲は狭い。そのた
め、２位デオキシピラノースの１−リン酸化体合成につ
いては、アノマー選択性の制御が難しいことから、カラ
ムクロマト精製を必要とし、収率の低い結果しか得られ
ていない［Ｃｈｅｍ．Ｚｖｅｓｔｉ，Ｖｏｌ．２８
（１），Ｐ１１５（１９７４）、Ｉｚｖ．Ａｋａｄ．Ｎ
ａｕｋＳＳＳＲ，Ｓｅｒ．Ｋｈｉｍ．，Ｖｏｌ．８，
Ｐ１８４３（１９７５）］。

【０００６】従って、２位デオキシピラノースの１−リ
ン酸化体以上に不安定で選択性の制御が困難な２位デオ
キシフラノース類の１−リン酸化体に至っては、これま
で化学的な製造例は報告されていない。

【０００７】６）に関しては、イノシンなどごく限られ
たリボヌクレオシド以外については、ヌクレオシドの供
給そのものが困難であり、リボース−１−リン酸などの
限られた１−リン酸化糖誘導体しか製造することができ
ない。また、原料となるヌクレオシド自体が高価である
ために、コスト的にも満足のゆくものではない。

【０００８】以上のように、１−リン酸化糖誘導体の工
業的な製造方法に関しては、未確立であった。

【０００９】一方、ヌクレオシドホスホリラーゼはリン
酸存在下でヌクレオシドのＮ−グリコシド結合を加リン
酸分解できる酵素の総称であり、次式で表される反応を
触媒する。ヌクレオシド＋リン酸（塩） → 塩基＋１−リン
酸化糖誘導体プリンヌクレオシドホスホリラーゼとピリミジンホスホ
リラーゼに大別される該酵素は、広く生物界に分布し、
哺乳類、鳥類、魚類などの組織、酵母、細菌に存在す
る。この酵素反応は可逆的であり、逆反応を利用した各
種ヌクレオシドの合成が以前より知られている。例え
ば、２´−デオキシリボース１−リン酸と核酸塩基（チ
ミン、アデニンまたはグアニン）からチミジン（特開平
０１−１０４１９０号公報）、２´−デオキシアデノシ
ン（特開平１１−１３７２９０号公報）または２´−デ
オキシグアノシン（特開平１１−１３７２９０号公報）
を製造する方法が開示されている。

【００１０】更に、Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．，Ｖｏｌ．５０（１），ＰＰ．１２１〜１２６，
（１９８６）では、イノシンをリン酸存在下で、Ｅｎｔ
ｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ由来のプリン
ヌクレオシドホスホリラーゼを用いた反応により、リボ
ース１−リン酸とヒポキサンチンに分解した後、イオン
交換樹脂で単離したリボース１−リン酸と１，２，４−
トリアゾール−３−カルボキサミドより、同じくＥｎｔ
ｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ由来のプリン
ヌクレオシドホスホリラーゼにより、抗ウイルス剤であ
るリバビリンを製造する技術が報告されている。

【００１１】しかしながら、前述の理由のように、１−
リン酸化糖誘導体の工業的な製造方法が未確立であるた
め、ヌクレオシドホスホリラーゼの逆反応を利用した汎
用性の高いヌクレオシドの工業的な製造方法について
も、未確立であった。

【００１２】また、該酵素の逆反応を利用して、１−リ
ン酸化糖誘導体と塩基よりヌクレオシドを生成させる反
応は平衡反応であるため、転化率が向上しないという技
術的欠点も存在していた。

【００１３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の第一の課題
は、フラノースやピラノースといった糖の骨格の違い、
デオキシ糖といった置換基の有無、あるいは天然型や非
天然型といった糖の種類に影響されることのない、汎用
性の高い、アノマー選択的な１−リン酸化糖誘導体の製
造法を提供することである。

【００１４】本発明の第二の課題は、１−リン酸化糖誘
導体と核酸塩基からヌクレオシドホスホリラーゼの作用
により汎用性の高いヌクレオシドの製造方法を提供する
ことであり、さらに、同反応におけるヌクレオシドの転
化率の向上方法を提供することである。

【００１５】すなわち、本発明の課題は、これら第一お
よび第二の課題を解決することにより、低コストで高純
度のヌクレオシドの製造法を提供することである。

【００１６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記第一
の課題を達成するべく鋭意検討を行い、１−リン酸化糖
誘導体が一定の条件下にアノマー異性体および１−リン
酸化糖誘導体のダイマーとの平衡状態で存在することを
発見し、さらにこの平衡条件を操作することで、望むア
ノマー異性体のみが結晶として析出し、その結果、平衡
が次々と傾くことにより、望むアノマー異性体のみを高
い選択性と高収率で得られることを見出し、この知見に
基づいて本発明を完成するに至った。

【００１７】すなわち、本発明は、以下の各態様を含
む。（１）１−リン酸化糖誘導体のアノマー混合物を加リン
酸分解および異性化し、生成する１−リン酸化糖誘導体
モノマーα体またはβ体の一方を選択的に晶析すること
によりアノマー混合物間の平衡を傾け、１−リン酸化糖
誘導体モノマーのα体またはβ体の一方を選択的に製造
する方法。（２）下記式（１）

【００１８】

【化２０】

【００１９】〔式中、Ｒ¹およびＲ²は、独立してそれぞ
れ水素原子、メチル基、保護されたヒドロキシメチル基
または保護されたカルボキシル基を表し、Ｒ³はアシル
基を表し、Ｒ⁴は水酸基の保護基を表し、Ｘはハロゲン
原子、アルコキシ基またはアルキルチオ基を表し、Ｗは
酸素原子またはイオウ原子を表し、Ｚは酸素原子、イオ
ウ原子または置換されてよい炭素原子を表し、ｍは１か
ら３の整数を表し、ｎは０または１を表し、ｐおよびｑ
は０から４の整数を表し、ｒは０または１を表す。（た
だし、ｐ、ｑ、ｒ、ｎは、Ｚが酸素原子、イオウ原子の
場合には、ｐ＋ｒ≦ｎ＋１、ｑ≦２×（ｎ＋１）−２×
（ｐ＋ｒ）を、Ｚが炭素原子の場合はｐ＋ｒ≦ｎ＋２、
ｑ≦２×（ｎ＋２）−２×（ｐ＋ｒ）を満たす。）〕で
示される１−リン酸化糖誘導体のアノマー混合物を加リ
ン酸分解および異性化し、生成する１−リン酸化糖誘導
体モノマーのα体またはβ体の一方を選択的に晶析する
ことによりアノマー混合物間の平衡を傾け、１−リン酸
化糖誘導体モノマーのα体またはβ体の一方を選択的に
製造する方法。（３）上記式（１）で示される１−リン酸化糖誘導体の
アノマー混合物を加リン酸分解および異性化し、生成す
る１−リン酸化糖誘導体モノマーのα体またはβ体の一
方を選択的に晶析することによりアノマー混合物間の平
衡を傾け、１−リン酸化糖誘導体モノマーのα体または
β体の一方を選択的に製造し、ついでＲ⁴で表わされる
保護基の脱離反応を行って、下記式（３）

【００２０】

【化２１】

【００２１】（式中、Ｒ¹およびＲ²は、独立してそれぞ
れ水素原子、メチル基、ヒドロキシメチル基またはカル
ボキシル基を表し、Ｒ³は水素原子またはアシル基を表
し、Ｘ、Ｗ、Ｚ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒは式（１）におけるの
と同義である。）で示される１−リン酸化糖誘導体モノ
マーを製造する方法。（４）下記式（４）

【００２２】

【化２２】

【００２３】（式中、Ｒ¹およびＲ²は、独立してそれぞ
れ水素原子、メチル基、置換されたベンゾイルで保護さ
れたヒドロキシメチル基、または保護されたカルボキシ
ル基を表し、Ｒ⁴は水素原子または水酸基の保護基を表
し、Ｒ³、Ｘ、Ｗ、Ｚ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒは、式
（１）におけるのと同義である。）で示される１−リン
酸化糖誘導体トリマー、ダイマー、モノマーまたはそれ
らの塩。（５）下記式（５）

【００２４】

【化２３】

【００２５】〔式中、ｐおよびｑは０から３の整数を表
し、ｒは０または１を表し、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｘ、
Ｗ、Ｚは、式（１）におけるのと同義である。（ただ
し、ｐ、ｑ、ｒは、Ｚが酸素原子、イオウ原子の場合に
は、ｐ＋ｑ＋ｒ≦３を、Ｚが炭素原子の場合はｐ＋ｑ＋
ｒ≦５を満たす。）〕で示される１−リン酸化糖誘導体
モノマーまたはその塩。（６）下記式（６）

【００２６】

【化２４】

【００２７】（式中、Ｒ¹およびＲ²は、独立してそれぞ
れ水素原子、メチル基、ヒドロキシメチル基、またはカ
ルボキシル基を表し、Ｒ³、Ｘ、Ｗ、Ｚ、ｎ、ｐ、ｑ、
ｒは、式（１）におけるのと同義である。）で示される
１−リン酸化糖誘導体モノマーまたはその塩。（７）下記式（７）

【００２８】

【化２５】

【００２９】〔式中、ｐおよびｑは０から３の整数を表
し、ｒは０または１を表し、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｘ、
Ｗ、Ｚは、式（１）におけるのと同義である。（ただ
し、ｐ、ｑ、ｒは、Ｚが酸素原子、イオウ原子の場合に
は、ｐ＋ｒ≦１、ｑ≦２−２×（ｐ＋ｒ）を、Ｚが炭素
原子の場合はｐ＋ｒ≦２、ｑ≦４−２×（ｐ＋ｒ）を満
たす。）〕で示される１−リン酸化糖誘導体モノマーま
たはその塩。

【００３０】（８）下記式（１８）：

【００３１】

【化２６】

【００３２】（式中、Ｒ¹¹は保護されたヒドロキシメチ
ル基を表し、Ｒ¹⁴は水酸基の保護基を表す。）で示され
る化合物を、塩基の存在下にリン酸で処理して、下記式
（１９）：

【００３３】

【化２７】

【００３４】（式中、Ｒ¹¹およびＲ¹⁴は、前記と同義で
あり、ｍは請求項２と同義である。）で示される１−リ
ン酸化糖誘導体のアノマー混合物とした後、加リン酸分
解および異性化し、生成するα体を選択的に晶析させる
ことによるアノマー混合物間の平衡を傾け、下記式（２
０）：

【００３５】

【化２８】

【００３６】（式中、Ｒ¹¹およびＲ¹⁴は前記と同義であ
る。）で示される１−リン酸化糖を製造する方法。

【００３７】（９）下記式（１８）：

【００３８】

【化２９】

【００３９】（式中、Ｒ¹¹は保護されたヒドロキシメチ
ル基を表し、Ｒ¹⁴は水酸基の保護基を表す。）で示され
る化合物を、塩基の存在下にリン酸で処理して、下記式
（１９）：

【００４０】

【化３０】

【００４１】（式中、Ｒ¹¹およびＲ¹⁴は、前記と同義で
あり、ｍは請求項２と同義である。）で示される１−リ
ン酸化糖誘導体のアノマー混合物とした後、加リン酸分
解および異性化し、生成するα体を選択的に晶析させる
ことによるアノマー混合物間の平衡を傾け、α体を選択
的に製造し、ついで保護基の脱離を行って、２−デオキ
シ−α−Ｄ−リボース−１−リン酸を製造する方法。

【００４２】さらに、本発明者らは、上記第二の課題を
達成するべく鋭意検討を行い、広く生物界に分布するヌ
クレオシドホスホリラーゼの逆反応を利用し、かつ、前
記１−リン酸化糖誘導体の合成方法と組み合わせること
で汎用性の高いヌクレオシドの合成法を確立した。さら
に、反応液にリン酸イオンと難水溶性の塩を形成しうる
金属カチオンを存在させることにより、反応の副生成物
であるリン酸イオンが難水溶性の塩として沈殿し、反応
の平衡がヌクレオシド合成方向へ移動するために反応収
率が向上することも見出した。これにより、低コストで
高純度のヌクレオシドの製造法を提供する本発明を完成
させるに至った。

【００４３】すなわち、かかる知見に基づいてなされた
本発明は以下の態様を含む。

【００４４】（１０）１−リン酸化糖誘導体のアノマー
混合物を加リン酸分解および異性化し、生成する１−リ
ン酸化糖誘導体モノマーのα体またはβ体の一方を選択
的に晶析することによりアノマー混合物間の平衡を傾
け、１−リン酸化糖誘導体モノマーのα体またはβ体の
一方を選択的に製造し、ついでＲ⁴で表わされる保護基
の脱離反応を行って１−リン酸化糖誘導体モノマーを製
造する上記（３）の態様における第一の工程と、ヌクレ
オシドホスホリラーゼにより第一の工程で得られた１−
リン酸化糖誘導体のリン酸基と塩基との交換反応を行う
第二の工程により、下記式（８）

【００４５】

【化３１】

【００４６】（式中、Ｂは、独立してそれぞれピリミジ
ン、プリン、アザプリンおよびデアザプリンからなる群
から選択された塩基を示し、それらはハロゲン原子、ア
ルキル基、ハロアルキル基、アルケニル基、ハロアルケ
ニル基、アルキニル基、アミノ基、アルキルアミノ基、
水酸基、ヒドロキシアミノ基、アミノキシ基、アルコキ
シ基、メルカプト基、アルキルメルカプト基、アリール
基、アリールオキシ基またはシアノ基によって置換され
ていてもよい。また、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｘ、Ｗ、Ｚ、
ｎ、ｐ、ｑ、ｒは式（１）におけるのと同義である。）
で示されるヌクレオシドを製造する方法。（１１）ヌクレオシドホスホリラーゼを用いて、上記
（６）の態様における１−リン酸化糖誘導体モノマーの
リン酸基と塩基との交換反応により、下記式（９）

【００４７】

【化３２】

【００４８】（式中、Ｂは式（８）におけるのと同義で
あり、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｘ、Ｗ、Ｚ、ｎ、ｐ、ｑ、
ｒは式（１）におけるのと同義である。）で示されるヌ
クレオシド化合物を製造する方法。（１２）ヌクレオシドホスホリラーゼを用いて、上記
（７）の態様における１−リン酸化糖誘導体モノマーの
リン酸基と塩基との交換反応により、下記式（１０）

【００４９】

【化３３】

【００５０】（式中、Ｂは式（８）におけるのと同義で
あり、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｘ、Ｗ、Ｚ、ｐ、ｑ、ｒは
式（１）におけるのと同義である。）で示されるヌクレ
オシドを製造する方法。

【００５１】（１３）上記（１２）の態様（但し、Ｒ
¹がヒドロキシメチル基、Ｒ²が水素原子、ｐおよびｒが
０、Ｘがフッ素原子である。）における２−デオキシ−
α−Ｄ−リボース−１−リン酸を製造する第一の工程
と、該第一の工程で得られた１−リン酸化糖誘導体のリ
ン酸基と塩基との交換反応をヌクレオシドホスホリラー
ゼにより行う第二の工程による、下記式（２１）

【００５２】

【化３４】

【００５３】（式中、Ｂは請求項１１の式（８）と同義
である。）で示されるヌクレオシドの製造方法。

【００５４】なお、上記（１０）〜（１３）の態様で
は、ヌクレオシドホスホリラーゼとして、プリンヌクレ
オシドホスホリラーゼ（ＥＣ２．４．２．１）、グアノ
シンホスホリラーゼ（ＥＣ２．４．２．１５）、ピリミ
ジンヌクレオシドホスホリラーゼ（ＥＣ２．４．２．
２）、ウリジンホスホリラーゼ（ＥＣ２．４．２．
３）、チミジンホスホリラーゼ（ＥＣ２．４．２．
４）、デオキシウリジンホスホリラーゼ（ＥＣ２．４．
２．２３）からなる群から選択される少なくとも１種を
用いることができる。

【００５５】更に、このヌクレオシドホスホリラーゼ活
性としては、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ（ＥＣ
２．４．２．１）、グアノシンホスホリラーゼ（ＥＣ
２．４．２．１５）、ピリミジンヌクレオシドホスホリ
ラーゼ（ＥＣ２．４．２．２）、ウリジンホスホリラー
ゼ（ＥＣ２．４．２．３）、チミジンホスホリラーゼ
（ＥＣ２．４．２．４）、デオキシウリジンホスホリラ
ーゼ（ＥＣ２．４．２．２３）からなる群から選択され
る一種類以上のヌクレオシドホスホリラーゼを発現して
いる微生物を用いることができる。

【００５６】更に、上記（１０）〜（１３）の態様にお
いては、ヌクレオシドホスホリラーゼにより、１−リン
酸化糖誘導体モノマーのリン酸基と塩基との交換反応を
行う際に、リン酸イオンと難水溶性の塩を形成しうる金
属カチオンを反応液中に存在させることができる。

【００５７】また、上記（１０）〜（１３）の態様にお
けるリン酸と難水溶性の塩を形成しうる金属カチオンと
しては、カルシウムイオン、バリウムイオン、アルミニ
ウムイオン及びマグネシウムイオンの中から選ばれる1
種類以上の金属カチオンを用いることができる。

【００５８】更に、本発明には、以下の式（１１）〜
（１３）、及び（２０）のいずれかにより表される化合
物が含まれる。

【００５９】

【化３５】

【００６０】（式中、Ｂ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｘ、
Ｗ、Ｚ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒは式（１）及び式（８）におけ
るのと同義である。）で示される非天然ヌクレオシドま
たはその塩（但し、トリフルオロチミジン、リバビリ
ン、オロチジン、ウラシルアラビノシド、アデニンアラ
ビノシド、２−メチル−アデニンアラビノシド、２−ク
ロル−ヒポキサンチンアラビノシド、チオグアニンアラ
ビノシド、２，６−ジアミノプリンアラビノシド、シト
シンアラビノシド、グアニンアラビノシド、チミンアラ
ビノシド、エノシタビン、ジェムシタビン、アジドチミ
ジン、イドクスウリジン、ジデオキシアデノシン、ジデ
オキシイノシン、ジデオキシシチジン、ジデヒドロデオ
キシチミジン、チアジデオキシシチジン、ソリブジン、
５−メチルウリジン、ビラゾール、チオイノシン、テガ
フール、ドキシフルリジン、ブレディニン、ネブラリ
ン、アロプリノールウラシル、５−フルオロウラシル、
２’−アミノウリジン、２’−アミノアデノシン、２’
−アミノグアノシン、２−クロル−２’−アミノイノシ
ン、ＤＭＤＣ、ＦＭＤＣは除く）。

【００６１】

【化３６】

【００６２】（式中、Ｂ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｘ、
Ｗ、Ｚ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒは式（１）及び（８）における
のと同義である。）で示される非天然ヌクレオシドまた
はその塩（但し、トリフルオロチミジン、リバビリン、
オロチジン、ウラシルアラビノシド、アデニンアラビノ
シド、２−メチル−アデニンアラビノシド、２−クロル
−ヒポキサンチンアラビノシド、チオグアニンアラビノ
シド、２，６−ジアミノプリンアラビノシド、シトシン
アラビノシド、グアニンアラビノシド、チミンアラビノ
シド、エノシタビン、ジェムシタビン、アジドチミジ
ン、イドクスウリジン、ジデオキシアデノシン、ジデオ
キシイノシン、ジデオキシシチジン、ジデヒドロデオキ
シチミジン、チアジデオキシシチジン、ソリブジン、５
−メチルウリジン、ビラゾール、チオイノシン、テガフ
ール、ドキシフルリジン、ブレディニン、ネブラリン、
アロプリノールウラシル、５−フルオロウラシル、２’
−アミノウリジン、２’−アミノアデノシン、２’−ア
ミノグアノシン、２−クロル−２’−アミノイノシン、
ＤＭＤＣ、ＦＭＤＣは除く）。

【００６３】

【化３７】

【００６４】（式中、Ｂ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｘ、
Ｗ、Ｚ、ｐ、ｑ、ｒは式（１）及び（８）におけるのと
同義である。）で示されるヌクレオシドまたはその塩
（但し、トリフルオロチミジン、リバビリン、オロチジ
ン、ウラシルアラビノシド、アデニンアラビノシド、２
−メチル−アデニンアラビノシド、２−クロル−ヒポキ
サンチンアラビノシド、チオグアニンアラビノシド、
２，６−ジアミノプリンアラビノシド、シトシンアラビ
ノシド、グアニンアラビノシド、チミンアラビノシド、
エノシタビン、ジェムシタビン、アジドチミジン、イド
クスウリジン、ジデオキシアデノシン、ジデオキシイノ
シン、ジデオキシシチジン、ジデヒドロデオキシチミジ
ン、チアジデオキシシチジン、ソリブジン、５−メチル
ウリジン、ビラゾール、チオイノシン、テガフール、ド
キシフルリジン、ブレディニン、ネブラリン、アロプリ
ノールウラシル、５−フルオロウラシル、２’−アミノ
ウリジン、２’−アミノアデノシン、２’−アミノグア
ノシン、２−クロル−２’−アミノイノシン、ＤＭＤ
Ｃ、ＦＭＤＣは除く）。

【００６５】下記式（２０）：

【００６６】

【化３８】

【００６７】（式中、Ｒ¹¹及びＲ¹⁴は式（１８）と同義
である。）で示される１−リン酸化糖またはその塩も本
発明に含まれる。

【００６８】

【発明の実施の形態】以下、本発明を更に詳細に説明す
る。

【００６９】本発明で用いられる糖類としては、好まし
くはフコース、ラムノース、ジギトキソース、オレアン
ドロース、キノボースのような６−デオキシ糖類、アロ
ース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロー
ス、イドース、ガラクトース、タロースのようなヘキソ
ース類、リボース、アラビノース、キシロース、リキソ
ースのようなペントース類、エリトロース、トレオース
のようなテトロース類、グルコサミン、ダウノサミンの
ようなアミノ糖類、グルクロン酸、ガラクツロン酸のよ
うなウロン酸類、プシコース、フルクトース、ソルボー
ス、タガトース、ペンツロースのようなケトース類、２
−デオキシリボースのようなデオキシ糖類といったＤ系
列もしくはＬ系列よりなる天然型単糖由来の残基、ピラ
ノース型あるいはフラノース型の非天然糖由来の残基、
並びにそれらが有する水酸基および／またはアミノ基が
保護もしくはアシル化された糖残基誘導体、またはそれ
らが有する水酸基がフッ素などのハロゲン原子で置換さ
れたハロゲン化糖残基を有する糖類を挙げることができ
るが、これらに限定されるものではない。

【００７０】本発明において、１−リン酸化糖誘導体と
は、天然型単糖由来もしくは非天然糖由来の残基のう
ち、１位水酸基がリン酸化された糖の誘導体を示し、特
に指定しない限り、モノマー、ダイマーおよびトリマー
をも包含し、あるいはそれらからなる混合物であっても
よく、その比率は特に限定されない。

【００７１】Ｒ¹又はＲ²で表される保護されたヒドロキ
シメチル基および水酸基の保護基における保護基とは、
加水素分解、加水分解、光分解のような化学的方法によ
って除去される保護基を指す。そのような基としては、
ホルミル基、アシル基、シリル基、アルキル基、アラル
キル基、カルボニル基があり、中でも好ましくは、ホル
ミル基、脂肪族アシル基、芳香族アシル基、シリル基、
アルコキシアルキル基、ハロゲン化アルキル基、アラル
キル基、アルコキシカルボニル基、アラルキルオキシカ
ルボニル基が挙げられる。

【００７２】脂肪族アシル基としては、アルキルカルボ
ニル基またはハロゲン置換された低級アルキルカルボニ
ル基が挙げられる。

【００７３】上記のアルキルカルボニル基の具体例とし
て、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブ
チリル基、ペンタノイル基、ピバロイル基、バレリル
基、イソバレリル基、オクタノイル基、ノニルカルボニ
ル基、デシルカルボニル基、３−メチルノニルカルボニ
ル基、８−メチルノニルカルボニル基、３−エチルオク
チルカルボニル基、３，７−ジメチルオクチルカルボニ
ル基、ウンデシルカルボニル基、ドデシルカルボニル
基、トリデシルカルボニル基、テトラデシルカルボニル
基、ペンタデシルカルボニル基、ヘキサデシルカルボニ
ル基、１−メチルペンタデシルカルボニル基、１４−メ
チルペンタデシルカルボニル基、１３，１３−ジメチル
テトラデシルカルボニル基、ヘプタデシルカルボニル
基、１５−メチルヘキサデシルカルボニル基、オクタデ
シルカルボニル基などを例示することができる。

【００７４】また、ハロゲン置換された低級アルキルカ
ルボニル基の具体例として、クロロアセチル基、ジクロ
ロアセチル基、トリクロロアセチル基、トリフルオロア
セチル基などを例示することができる。

【００７５】芳香族アシル基としては、アリールカルボ
ニル基、ハロゲン置換されたアリールカルボニル基、低
級アルキル化アリールカルボニル基、低級アルコキシア
リールカルボニル基、ニトロ化アリールカルボニル基、
低級アルコキシカルボニル化アリールカルボニル基、ア
リール化アリールカルボニル基を挙げることができる。

【００７６】上記のアリールカルボニル基の具体例とし
て、ベンゾイル基、α−ナフトイル基、β−ナフトイル
基などを例示することができる。

【００７７】また、ハロゲン置換されたアリールカルボ
ニル基の具体例として、２−フルオロベンゾイル基、３
−フルオロベンゾイル基、４−フルオロベンゾイル基、
２−クロロベンゾイル基、３−クロロベンゾイル基、４
−クロロベンゾイル基、２−ブロモベンゾイル基、３−
ブロモベンゾイル基、４−ブロモベンゾイル基、２，４
−ジクロロベンゾイル基、２，６−ジクロロベンゾイル
基、３，４−ジクロロベンゾイル基、３，５−ジクロロ
ベンゾイル基などを例示することができる。

【００７８】また、低級アルキル化アリールカルボニル
基の具体例として、２−トルオイル基、３−トルオイル
基、４−トルオイル基、２，４，６−トリメチルベンゾ
イル基などを例示することができる。

【００７９】さらに、低級アルコキシアリールカルボニ
ル基の具体例として、２−アニソイル基、３−アニソイ
ル基、４−アニソイル基などを例示することができる。

【００８０】ニトロ化アリールカルボニル基の具体例と
して、２−ニトロベンゾイル基、３−ニトロベンゾイル
基、４−ニトロベンゾイル基、３，５−ジニトロベンゾ
イル基などを例示することができる。

【００８１】さらに、低級アルコキシカルボニル化アリ
ールカルボニル基の具体例として、２−（メトキシカル
ボニル）ベンゾイル基などを、アリール化アリールカル
ボニル基の具体例として、４−フェニルベンゾイル基な
どを例示することができる。

【００８２】シリル基としては、低級アルキルシリル
基、アリール基で置換された低級アルキルシリル基を挙
げることができる。

【００８３】低級アルキルシリル基の具体例として、ト
リメチルシリル基、トリエチルシリル基、イソプロピル
ジメチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル
基、メチルジイソプロピルシリル基、トリイソプロピル
シリル基を例示することができる。

【００８４】アリール基で置換された低級アルキルシリ
ル基の具体例として、ジフェニルメチルシリル基、ジフ
ェニルイソプロピルシリル基、フェニルジイソプロピル
シリル基などを例示することができる。

【００８５】アラルキル基としては、ベンジル基、低級
アルキル基で置換されたアラルキル基、低級アルコキシ
基で置換されたアラルキル基、ニトロ基で置換されたア
ラルキル基、ハロゲン置換されたアラルキル基、シアノ
基で置換されたアラルキル基を挙げることができる。

【００８６】これらの具体的な基を例示すると、２−メ
チルベンジル基、３−メチルベンジル基、４−メチルベ
ンジル基、２，４，６−トリメチルベンジル基、２−メ
トキシベンジル基、３−メトキシベンジル基、４−メト
キシベンジル基、２−ニトロベンジル基、３−ニトロベ
ンジル基、４−ニトロベンジル基、２−クロロベンジル
基、３−クロロベンジル基、４−クロロベンジル基、２
−ブロモベンジル基、３−ブロモベンジル基、４−ブロ
モベンジル基、２−シアノベンジル基、３−シアノベン
ジル基、４−シアノベンジル基などが挙げられる。

【００８７】アラルキルオキシカルボニル基としては、
低級アルキル基で置換されたアラルキルオキシカルボニ
ル基、低級アルコキシ基で置換されたアラルキルオキシ
カルボニル基、ニトロ基で置換されたアラルキルオキシ
カルボニル基、ハロゲン置換されたアラルキルオキシカ
ルボニル基、シアノ基で置換されたアラルキルオキシカ
ルボニル基を挙げることができる。

【００８８】これらの具体例として、２−メチルベンジ
ルオキシカルボニル基、３−メチルベンジルオキシカル
ボニル基、４−メチルベンジルオキシカルボニル基、
２，４，６−トリメチルベンジルオキシカルボニル基、
２−メトキシベンジルオキシカルボニル基、３−メトキ
シベンジルオキシカルボニル基、４−メトキシベンジル
オキシカルボニル基、２−ニトロベンジルオキシカルボ
ニル基、３−ニトロベンジルオキシカルボニル基、４−
ニトロベンジルオキシカルボニル基、２−クロロベンジ
ルオキシカルボニル基、３−クロロベンジルオキシカル
ボニル基、４−クロロベンジルオキシカルボニル基、２
−ブロモベンジルオキシカルボニル基、３−ブロモベン
ジルオキシカルボニル基、４−ブロモベンジルオキシカ
ルボニル基、２−シアノベンジルオキシカルボニル基、
３−シアノベンジルオキシカルボニル基、４−シアノベ
ンジルオキシカルボニル基などを挙げることができる。

【００８９】アルコキシカルボニル基としては、低級ア
ルコキシカルボニル基、ハロゲン置換されたアルコキシ
カルボニル化合物、アルキルシリル基で置換されたアル
コキシカルボニル基を挙げることができる。

【００９０】低級アルコキシカルボニル基の具体例とし
て、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プ
ロポキシカルボニル基、ブトキシカルボニル基、ｓｅｃ
−ブトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニ
ル基などを例示することができる。

【００９１】ハロゲン置換されたアルコキシカルボニル
基の具体例として、２，２，２−トリクロロエトキシカ
ルボニル基を、低級アルキルシリル基で置換されたアル
コキシカルボニル基の具体例として、２−トリメチルシ
リルエトキシカルボニル基などを例示することができ
る。

【００９２】アルキル基としては、メトキシメチル基、
エトキシメチル基、２−メトキシエチル基、２−メトキ
シエトキシメチル基のようなアルコキシアルキル基、
２，２，２−トリクロロエチル基のようなハロゲン化ア
ルキル基、ベンジル基、α−ナフチルメチル基、β−ナ
フチルメチル基、ジフェニルメチル基、トリフェニルメ
チル基のようなアリール基で置換された低級アルキル基
が挙げられる。

【００９３】これらの中で、好ましくは、脂肪族アシル
基、芳香族アシル基、アラルキル基であり、さらに好ま
しくは、４−トルオイル基、４−クロロベンゾイル基、
またはベンジル基である。

【００９４】Ｒ¹およびＲ²でいう保護されたカルボキシ
ル基における保護基とは、加水素分解、加水分解、光分
解のような化学的方法によって除去される保護基を指
す。そのような基としては、好ましくは、メチル基、エ
チル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル
基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチ
ル基のような低級アルキル基、２−（トリメチルシリ
ル）エチル基、２−（トリエチルシリル）エチル基のよ
うなシリル化された低級アルキル基あるいは前述のアラ
ルキル基、アルコキシアルキル基などを挙げることがで
きる。さらに好ましくは、メチル基、ｔｅｒｔ−ブチル
基、またはベンジル基である。

【００９５】Ｘで示すハロゲン原子とは、フッ素原子、
塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子を示す。

【００９６】Ｘでいうアルコキシ基、アルキルチオ基と
しては、例えば、前述の低級アルキル基、アラルキル
基、アルコキシアルキル基を有するアルコキシ基、アル
キルチオ基を挙げることができる。さらに好ましくは、
メトキシ基、メトキシエトキシ基、メチルチオ基であ
る。

【００９７】Ｚが示す置換されてよい炭素原子とは、式
で表した置換基（Ｘｑ及びＮＨＲ³）のいずれかが１つ
ないし２つ置換した炭素原子を表し、置換していない場
合には、水素原子で置換されている炭素原子を指す。

【００９８】Ｒ³でいうアシル基としては、例えば、前
述の脂肪族アシル基、芳香族アシル基、アルコキシカル
ボニル基、アラルキルオキシカルボニル基、さらに、メ
タンスルホニル基、トリフルオロメタンスルホニル基の
ような低級アルカンスルホニル基、ベンゼンスルホニル
基、ｐ−トルエンスルホニル基のようなアリールスルホ
ニル基を挙げることができる。好ましくは、脂肪族アシ
ル基、芳香族アシル基、低級アルカンスルホニル基であ
り、具体的には、アセチル基、トリフルオロアセチル
基、ベンゾイル基、メタンスルホニル基である。また、
ＮＨＲ³の複数が置換基として用いられる場合には、各
ＮＨＲ³におけるＲ³はそれぞれ独立して上記の基を表
す。

【００９９】また、Ｒ⁴、Ｒ¹¹及びＲ¹⁴でいう保護され
たヒドロキシメチル基や水酸基の保護基における保護基
としては、Ｒ¹及びＲ²に関して既に説明した水酸基の保
護基が利用できる。

【０１００】式（１）〜（１７）を有する糖残基として
は、好ましくは前述の天然型単糖由来の残基、非天然糖
由来の残基、糖残基誘導体、ハロゲン化糖残基を挙げる
ことができるが、これらに限定されるものではない。

【０１０１】本発明の式（４）〜（７）で表される化合
物の塩とは、化合物が分子内に有するリン酸基が形成す
る塩を示す。塩としては、ナトリウム、カリウム、リチ
ウムのようなアルカリ金属の塩、マグネシウム、カルシ
ウム、バリウムのようなアルカリ土類金属の塩、アルミ
ニウム、鉄のような金属の塩、アンモニウム塩、１級、
２級、３級のアルキルアミンの塩が挙げられる。

【０１０２】上記において、１級アミンとしては、メチ
ルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、イソプロピ
ルアミン、ブチルアミン、ヘキシルアミン、オクチルア
ミンのようなアルキルアミン類、シクロヘキシルアミン
のようなシクロアルキルアミン類、ベンジルアミンのよ
うなものを挙げることができる。

【０１０３】また、２級アミンとしては、ジエチルアミ
ン、ジイソプロピルアミン、ジブチルアミン、ジヘキシ
ルアミン、ジオクチルアミンのようなジアルキルアミン
類、ジシクロヘキシルアミンのようなジシクロアルキル
アミン類、ピペリジン、モルフォリン、Ｎ−メチルピペ
ラジンのような環状アミンを例示できる。

【０１０４】３級アミンとしては、トリメチルアミン、
トリエチルアミン、トリプロピルアミン、Ｎ−エチルジ
イソプロピルアミン、トリブチルアミン、トリヘキシル
アミン、トリオクチルアミン、Ｎ−エチルジシクロヘキ
シルアミン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルフ
ォリン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルエチレンジ
アミンのような３級のアルキルアミン、アニリン、Ｎ，
Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン、
Ｎ，Ｎ−ジブチルアニリン、Ｎ，Ｎ−ジオクチルアニリ
ンのようなアニリン類、ピリジン、２，６−ジメチルピ
リジン、２，４，６−ルチジン、ニコチンアミドのよう
なピリジン類の塩、グリシン、アラニン、プロリン、リ
ジン、アルギニン、グルタミンのようなアミノ酸類、シ
ンコニジン、１−（１−ナフチル）エチルアミン、１−
フェニルエチルアミンのような光学活性アミンを挙げる
ことができ、何れも１価あるいは２価の塩を包含する。

【０１０５】さらに、本発明の式（４）〜（７）で表さ
れる化合物は、大気中に放置することにより水分を吸収
し、吸着水が付いたり、水和物となる場合があるが、そ
のような塩も本発明に包含される。

【０１０６】本発明における１−リン酸化糖誘導体のア
ノマー混合物は、下記反応式（Ｉ）

【０１０７】

【化３９】

【０１０８】によって製造することができるが、これに
限定されるものではない。

【０１０９】上記式において、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、
Ｘ、Ｗ、Ｚ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑおよびｒは、前述の式
（１）と同義であり、Ｙは、フッ素原子、塩素原子、臭
素原子またはヨウ素原子を表す。ｍが１の場合はリン酸
トリエステルを、ｍが２の場合はリン酸ジエステルを、
ｍが３の場合はリン酸モノエステルを意味し、それぞれ
１−リン酸化糖誘導体トリマー、１−リン酸化糖誘導体
ダイマー、１−リン酸化糖誘導体モノマーと称する。ま
た、１−リン酸化糖誘導体トリマー、１−リン酸化糖誘
導体ダイマー、１−リン酸化糖誘導体モノマーを総称し
て、１−リン酸化糖誘導体と称し、それらの混合比につ
いては、特に限定されない。

【０１１０】リン酸としては、正リン酸のように水分量
の少ないものが好ましいが、特に限定されない。

【０１１１】塩基としては、反応を阻害せず、脱酸剤と
して機能すれば特に限定はないが、好ましくは、無機塩
基としては、アルカリ金属、アルカリ土類金属の炭酸
塩、水酸化物などが、有機塩基としては、３級のアルキ
ルアミン類、アニリン類、ピリジン類、光学活性アミン
を挙げることができる。

【０１１２】脱水剤は、溶媒や添加剤から混入する水分
が、反応に悪影響を与える場合に使うことができる。脱
水剤としては、水分の吸着性あるいは水分との反応性が
あれば特に限定されないが、好ましくはモルキュラーシ
ーブスあるいは五酸化リンを挙げることができる。

【０１１３】反応は、通常、溶媒の存在下に行われる。
使用される溶媒としては、反応を阻害せず、出発物質を
ある程度溶解するものであれば特に限定はないが、例え
ば、ヘキサン、ヘプタンのような脂肪族炭化水素類、ベ
ンゼン、トルエン、キシレン、アニソールのような芳香
族炭化水素類、メチレンクロリド、クロロホルム、四塩
化炭素、ジクロロエタン、クロロベンゼン、ジクロロベ
ンゼンのようなハロゲン化炭化水素類、ギ酸エチル、酢
酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ｎ−ブチル、炭酸ジエチ
ルエステルのようなエステル類、ジエチルエーテル、ジ
イソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサ
ン、ジメトキシエタン、ジグリムのようなエーテル類、
アセトニトリル、プロピオニトリル、イソブチロニトリ
ルのようなニトリル類、ホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチ
ルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−
メチル−２−ピロリドン、Ｎ−メチルピロリジノン、
Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−イミダゾリジノンのようなアミ
ド類、アセトン、２−ブタノン、メチルイソプロピル
ケトン、メチルイソブチルケトンのようなケトン類ま
たはそれらから選択される２種ないし３種からなる混合
溶媒を挙げることができる。

【０１１４】反応温度は、特に限定はなく、通常、−８
０℃から６０℃、好適には−１０℃から２５℃の範囲で
行われる。

【０１１５】反応時間は、出発原料、試薬および溶媒の
種類、反応温度によって異なるが、通常、１分間から２
４時間、好適には１０分間から２時間で達成される。

【０１１６】尚、本反応における糖誘導体（１４）とリ
ン酸の比率は、特に限定はなく、通常、化合物（１
４）：リン酸＝１：１０〜３：１で反応を行うことがで
きる。その場合、化合物（１４）とリン酸の比率に応じ
て、生成物（１）は、通常、リン酸に結合する糖残基の
数（即ちｍ）が、１，２または３である化合物が様々に
混じった混合物となる。

【０１１７】さらに、α体またはβ体の一方を有する１
−リン酸化糖誘導体（１６ａ）または（１６ｂ）は、下
記反応式（ＩＩ）

【０１１８】

【化４０】

【０１１９】によって製造することができる。

【０１２０】上記式において、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、
Ｘ、Ｗ、Ｚ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑおよびｒは、前述の式
（１）と同義である。

【０１２１】本製造法によれば、化合物（１５）で示さ
れる１−リン酸化糖誘導体は、モノマー、ダイマーある
いはトリマーの混合物であっても、反応系内で、化合物
（１６）で示される１−リン酸化糖誘導体モノマーへと
変換可能であるため、それらの混合比については特に限
定されない。

【０１２２】リン酸としては、正リン酸のように水分量
の少ないものが好ましいが、特に限定されない。

【０１２３】塩基は、化合物（１６）が分子内に有する
リン酸基と塩を形成し、α体またはβ体の一方、（１６
ａ）または（１６ｂ）、を、選択的に晶析するために重
要である。通常、反応に使用する溶媒との組み合わせ
で、最適な塩基を選ぶことができるが、好ましくは、前
述の無機塩基類、３級のアルキルアミン類、アニリン
類、ピリジン類、アミノ酸類、光学活性アミンを挙げる
ことができ、形成する塩としては、何れも１価あるいは
２価の塩を包含する。

【０１２４】脱水剤は、溶媒や添加剤から混入する水分
が、反応に悪影響を与える場合に使うことができる。脱
水剤としては、水分の吸着性あるいは水分との反応性が
あれば特に限定されないが、好ましくはモルキュラーシ
ーブスあるいは五酸化リンを挙げることができる。

【０１２５】反応は、通常、溶媒の存在下に行われる。
使用される溶媒としては、反応を阻害せず、出発物質を
ある程度溶解し、化合物（１６）が分子内に有するリン
酸基と塩を形成して生成する、α体またはβ体の一方、
（１６ａ）または（１６ｂ）、が、選択的に晶析してく
るのを助長するならば特に限定はなく、例えば、前述の
脂肪族炭化水素類、芳香族炭化水素類、ハロゲン化炭化
水素類、エステル類、エーテル類、ニトリル類、アミド
類、ケトン類またはそれらから選択される２種ないし３
種からなる混合溶媒を挙げることができる。

【０１２６】反応温度は、化合物（１５）と（１６）と
の平衡反応を促し、化合物（１６）が分子内に有するリ
ン酸基と塩を形成して生成する、α体またはβ体の一
方、すなわち、（１６ａ）または（１６ｂ）、が、選択
的に晶析してくるのを助長するならば特に限定はなく、
通常、−８０℃から６０℃、好適には−１０℃から２５
℃の範囲で行われる。

【０１２７】反応時間は、出発原料、試薬および溶媒の
種類、反応温度によって異なるが、通常、３時間から１
週間、好適には６時間から２４時間で達成される。

【０１２８】尚、本反応における糖誘導体（１）とリン
酸の比率は、特に限定はなく、通常、化合物（１）：リ
ン酸＝１：１０〜３：１の範囲で反応を行うことができ
る。その際、反応系内のｐＨは、通常１から７、好適に
は１から４の酸性側で行うことが望ましい。

【０１２９】さらに、α体またはβ体の一方を有する１
−リン酸化糖誘導体（１６ａ）または（１６ｂ）は、塩
の交換反応を行って、精製し、反応系内で使用した塩基
とは異なった塩基のリン酸塩として取り出すことができ
る。

【０１３０】ここで使用される塩基としては、前述の無
機塩基類、１級のアルキルアミン、２級のアルキルアミ
ン、３級のアルキルアミン、アニリン類、ピリジン類、
アミノ酸類、光学活性アミンを挙げることができ、形成
する塩としては、何れも１価あるいは２価の塩を包含す
る。

【０１３１】さらに、保護基の脱離反応を下記反応式
（ＩＩＩ）

【０１３２】

【化４１】

【０１３３】によって行い、１−リン酸化糖誘導体（１
７ａ）または（１７ｂ）を製造することができる。

【０１３４】上記式において、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、
Ｘ、Ｗ、Ｚ、ｎ、ｐ、ｑおよびｒは、前述の式（１）と
同義であり、Ｒ¹’およびＲ²’は、独立してそれぞれ水
素原子、メチル基、ヒドロキシメチル基またはカルボキ
シル基を表し、Ｒ³’は水素原子またはアシル基を表
す。

【０１３５】化合物（１６ａ）または（１６ｂ）におけ
るＲ¹およびＲ²のヒドロキシメチル基あるいはＲ⁴の水
酸基の保護基として、前述の脂肪族アシル基、芳香族ア
シル基、アルコキシカルボニル基、またはＲ¹およびＲ²
のカルボキシル基の保護基として、前述の低級アルキル
基を使用した場合には、例えば、水溶性溶媒中にて塩基
で処理することにより除去することができる。塩基とし
ては、好ましくは、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムのよ
うなアルカリ金属炭酸塩、水酸化リチウム、水酸化ナト
リウム、水酸化カリウムのようなアルカリ金属水酸化
物、アンモニア水、テトラｎ−ブチルアンモニウムヒ
ドロキシドのような水酸化アンモニウム類、前述の無機
塩基、１級のアルキルアミン、２級のアルキルアミン、
３級のアルキルアミンなどを用いて行うことができる。

【０１３６】使用される溶媒としては、通常の加水分解
反応に使用されるものであれば特に限定はないが、好ま
しくは、水、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノー
ル、イソプロパノールのようなアルコール類、前述のエ
ーテル類を用いることができる。反応温度および反応時
間は出発物質や用いる塩基などによって異なり、特に限
定はないが、通常は−１０℃から１００℃で、１時間か
ら５日間で終了する。この際、反応温度、反応時間ある
いは試薬の当量数を調節することにより、Ｒ³の保護基
を所望により残すこともできるし、同時に除去すること
もできる。

【０１３７】化合物（１６ａ）または（１６ｂ）におけ
るＲ¹およびＲ²のヒドロキシメチル基あるいはＲ⁴の水
酸基の保護基として、前述のアラルキル基、アラルキル
オキシカルボニル基またはＲ¹およびＲ²のカルボキシル
基の保護基として、前述のアラルキル基を使用した場合
には、例えば、金属触媒を使用して、接触還元を行って
除去することができる。

【０１３８】触媒としては、好ましくは、パラジウム炭
素、ラネーニッケル、酸化白金、白金黒、ロジウム−酸
化アルミニウム、トリフェニルホスフィン−塩化ロジウ
ム、パラジウム−硫酸バリウムなどを用いて行うことが
できる。圧力は特に限定はないが、通常使用される溶媒
としては、通常の加水分解反応に使用されるものであれ
ば特に限定はないが、好ましくは、水、メタノール、エ
タノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノールのよう
なアルコール類、前述のエーテル類、エステル類を用い
ることができる。反応温度および反応時間は出発物質や
用いる塩基などによって異なり、特に限定はないが、通
常は−１０℃から１００℃で、１時間から５日間で終了
する。この場合、Ｒ³の保護基は、通常除去されずに残
すことができる。

【０１３９】化合物（１６ａ）または（１６ｂ）におけ
るＲ¹およびＲ²のヒドロキシメチル基あるいはＲ⁴の水
酸基の保護基として、前述のシリル基、またはＲ¹およ
びＲ²のカルボキシル基の保護基として、前述のシリル
化された低級アルキル基を使用した場合には、例えば、
フッ化テトラｎ−ブチルアンモニウムのようなフッ素ア
ニオンを生成するような化合物を使用して、除去するこ
とができる。

【０１４０】反応溶媒は反応を阻害しないものであれば
特に限定はないが、前述のエーテル類を用いることがで
きる。反応温度および反応時間は特に限定はないが、通
常は−１０℃から５０℃で、１０分間から１０時間で終
了する。この場合、Ｒ³の保護基は、通常除去されずに
残すことができる。

【０１４１】何れの保護基を除去する場合においても、
生成物が分子内に有するリン酸基は、反応系内に存在す
る塩基の塩として得られてくるが、所望により他の塩基
の塩に変更して取り出すこともできる。その際に使用す
る塩基としては、例えば、前述の無機塩基類、１級のア
ルキルアミン類、２級のアルキルアミン類、３級のアル
キルアミン類、アニリン類、ピリジン類、アミノ酸類、
光学活性アミンを挙げることができ、形成する塩として
は、何れも１価あるいは２価の塩を包含する。

【０１４２】本発明における１−リン酸化糖誘導体と
は、糖類およびその誘導体の１位にリン酸がエステル結
合したもののことである。

【０１４３】具体的には、下記式（６）

【０１４４】

【化４２】

【０１４５】（式中、Ｒ¹およびＲ²は、独立してそれぞ
れ水素原子、メチル基、ヒドロキシメチル基、またはカ
ルボキシル基を表し、Ｒ³、Ｘ、Ｗ、Ｚ、ｎ、ｐ、ｑ、
ｒは、式（４）におけるのと同義である。）で示すこと
ができる。

【０１４６】その代表例を挙げると、例えばリボース−
１−リン酸、２−デオキシリボース−１−リン酸、２，
３−ジデオキシリボース−１−リン酸、アラビノース−
１−リン酸などが挙げられるが、これらに限定されるも
のではなく、前述の汎用性の高い、アノマー選択的な製
造法により得られるものであれば、特に区別されるもの
ではない。

【０１４７】尚、１−リン酸化糖誘導体を構成する天然
物由来の糖類としては、Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビ
ノース、Ｄ−キシロース、Ｌ−リキソース、Ｄ−リボー
スのようなアルドペントース、Ｄ−キシロース、Ｌ−キ
シロース、Ｄ−リブロースのようなケトペントース、Ｄ
−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−グルコース、
Ｄ−タロース、Ｄ−マンノースのようなアルドヘキソー
ス、Ｄ−タガトース、Ｌ−ソルボース、Ｄ−プシコー
ス、Ｄ−フルクトースのようなケトヘキソース、Ｄ−２
−デオキシリボース、Ｄ−２，３−ジデオキシリボー
ス、Ｄ−フコース、Ｌ−フコース、Ｄ−ラムノース、Ｌ
−ラムノース、Ｄ−フコピラノース、Ｌ−フコピラノー
ス、Ｄ−ラムノフラノース、Ｌ−ラムノフラノース、Ｄ
−アロメチロース、Ｄ−キノボース、Ｄ−アンチアロー
ス、Ｄ−タロメチロース、Ｌ−タロメチロース、Ｄ−ジ
キタロース、Ｄ−ジギトキソース、Ｄ−シマロース、チ
ベロース、アベコース、パラトース、コリトース、アス
カリロースのようなデオキシ糖類、グルコサミン、ダウ
ノサミンのようなアミノ糖類、グルクロン酸、ガラクツ
ロン酸のようなウロン酸類を挙げることができるが、こ
れらに限定されるものではない。

【０１４８】次に、本発明にかかるヌクレオシドの製造
方法について述べる。この方法に用いられる塩基は、ピ
リミジン、プリン、アザプリンおよびデアザプリンから
なる群から選択された天然または非天然型の塩基を示
し、それらはハロゲン原子、アルキル基、ハロアルキル
基、アルケニル基、ハロアルケニル基、アルキニル基、
アミノ基、アルキルアミノ基、水酸基、ヒドロキシアミ
ノ基、アミノキシ基、アルコキシ基、メルカプト基、ア
ルキルメルカプト基、アリール基、アリールオキシ基ま
たはシアノ基によって置換されていてもよい。

【０１４９】置換基としてのハロゲン原子としては、塩
素、フッ素、ヨウ素、臭素が例示される。アルキル基と
しては、メチル、エチル、プロピルなどの炭素数１〜７
の低級アルキル基が例示される。ハロアルキル基として
は、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロ
メチル、ブロモメチル、ブロモエチルなどの炭素数１〜
７のアルキルを有するハロアルキル基が例示される。ア
ルケニル基としては、ビニル、アリルなどの炭素数２〜
７のアルケニル基が例示される。ハロアルケニル基とし
ては、ブロモビニル、クロロビニルなどの炭素数２〜７
のアルケニルを有するハロアルケニル基が例示される。
アルキニル基としては、エチニル、プロピニルなどの炭
素数２〜７のアルキニル基が例示される。アルキルアミ
ノ基としては、メチルアミノ、エチルアミノなどの炭素
数１〜７のアルキルを有するアルキルアミノ基が例示さ
れる。アルコキシ基としては、メトキシ、エトキシなど
の炭素数１〜７のアルコキシ基が例示される。アルキル
メルカプト基としては、メチルメルカプト、エチルメル
カプトなどの炭素数１〜７のアルキルを有するアルキル
メルカプト基が例示される。アリール基としては、フェ
ニル基；メチルフェニル、エチルフェニルなどの炭素数
１〜５のアルキルを有するアルキルフェニル基；メトキ
シフェニル、エトキシフェニルなどの炭素数１〜５のア
ルコキシを有するアルコキシフェニル基；ジメチルアミ
ノフェニル、ジエチルアミノフェニルなどの炭素数１〜
５のアルキルアミノを有するアルキルアミノフェニル
基；クロロフェニル、ブロモフェニルなどのハロゲノフ
ェニル基などが例示される。

【０１５０】ピリミジン塩基を具体的に例示すれば、シ
トシン、ウラシル、５−フルオロシトシン、５−フルオ
ロウラシル、５−クロロシトシン、５−クロロウラシ
ル、５−ブロモシトシン、５−ブロモウラシル、５−ヨ
−ドシトシン、５−ヨ−ドウラシル、５−メチルシトシ
ン、５−メチルウラシル（チミン）、５−エチルシトシ
ン、５−エチルウラシル、５−フルオロメチルシトシ
ン、５−フルオロウラシル、５−トリフルオロシトシ
ン、５−トリフルオロウラシル、５−ビニルウラシル、
５−ブロモビニルウラシル、５−クロロビニルウラシ
ル、５−エチニルシトシン、５−エチニルウラシル、５
−プロピニルウラシル、ピリミジン−２−オン、４−ヒ
ドロキシアミノピリミジン−２−オン、４−アミノオキ
シピリミジン−２−オン、４−メトキシピリミジン−２
−オン、４−アセトキシピリミジン−２−オン、４−フ
ルオロピリミジン−２−オン、５−フルオロピリミジン
−２−オンなどが挙げられる。

【０１５１】プリン塩基を具体的に例示すれば、プリ
ン、６−アミノプリン（アデニン）、６−ヒドロキシプ
リン、６−フルオロプリン、６−クロロプリン、６−メ
チルアミノプリン、６−ジメチルアミノプリン、６−ト
リフルオロメチルアミノプリン、６−ベンゾイルアミノ
プリン、６−アセチルアミノプリン、６−ヒドロキシア
ミノプリン、６−アミノオキシプリン、６−メトキシプ
リン、６−アセトキシプリン、６−ベンゾイルオキシプ
リン、６−メチルプリン、６−エチルプリン、６−トリ
フルオロメチルプリン、６−フェニルプリン、６−メル
カプトプリン、６−メチルメルカプトプリン、６−アミ
ノプリン−１−オキシド、６−ヒドロキシプリン−１−
オキシド、２−アミノ−６−ヒドロキシプリン（グアニ
ン）、２，６−ジアミノプリン、２−アミノ−６−クロ
ロプリン、２−アミノ−６−ヨ−ドプリン、２−アミノ
プリン、２−アミノ−６−メルカプトプリン、２−アミ
ノ−６−メチルメルカプトプリン、２−アミノ−６−ヒ
ドロキシアミノプリン、２−アミノ−６−メトキシプリ
ン、２−アミノ−６−ベンゾイルオキシプリン、２−ア
ミノ−６−アセトキシプリン、２−アミノ−６−メチル
プリン、２−アミノ−６−サイクロプロピルアミノメチ
ルプリン、２−アミノ−６−フェニルプリン、２−アミ
ノ−８−ブロモプリン、６−シアノプリン、６−アミノ
−２−クロロプリン（２−クロロアデニン）、６−アミ
ノ−２−フルオロプリン（２−フルオロアデニン）など
が挙げられる。

【０１５２】アザプリン塩基およびデアザプリン塩基を
具体的に例示すれば、６−アミノ−３−デアザプリン、
６−アミノ−８−アザプリン、２−アミノ−６−ヒドロ
キシ−８−アザプリン、６−アミノ−７−デアザプリ
ン、６−アミノ−１−デアザプリン、６−アミノ−２−
アザプリンなどが挙げられる。

【０１５３】本発明におけるヌクレオシドホスホリラー
ゼとは、リン酸存在下でヌクレオシドのＮ−グリコシド
結合を分解する酵素の総称であり、本発明においては逆
反応を利用することができる。反応に使用する酵素は、
相当する１−リン酸化糖誘導体と塩基から目的とするヌ
クレオシドを生成しうる活性を有していればいかなる種
類及び起源のものでもかまわない。該酵素はプリン型と
ピリミジン型に大別され、例えば、プリン型としてプリ
ンヌクレオシドホスホリラーゼ（ＥＣ２．４．２．
１）、グアノシンホスホリラーゼ（ＥＣ２．４．２．１
５）、ピリミジン型としてピリミジンヌクレオシドホス
ホリラーゼ（ＥＣ２．４．２．２）、ウリジンホスホリ
ラーゼ（ＥＣ２．４．２．３）、チミジンホスホリラー
ゼ（ＥＣ２．４．２．４）、デオキシウリジンホスホリ
ラーゼ（ＥＣ２．４．２．２３）などが挙げられる。

【０１５４】本発明におけるヌクレオシドホスホリラー
ゼを発現している微生物とは、プリンヌクレオシドホス
ホリラーゼ（ＥＣ２．４．２．１）、グアノシンホスホ
リラーゼ（ＥＣ２．４．２．１５）、ピリミジンヌクレ
オシドホスホリラーゼ（ＥＣ２．４．２．２）、ウリジ
ンホスホリラーゼ（ＥＣ２．４．２．３）、チミジンホ
スホリラーゼ（ＥＣ２．４．２．４）、デオキシウリジ
ンホスホリラーゼ（ＥＣ２．４．２．２３）からなる群
から選択される一種類以上のヌクレオシドホスホリラー
ゼを発現している微生物であれば特に限定はされない。

【０１５５】このような微生物の具体例としては、ノカ
ルディア(Nocardia)属、ミクロバクテリウム(Microbact
erium)属、コリネバクテリウム(Corynebacterium)属、
ブレビバクテリウム属（Brevibacterium）属、セルロモ
ナス(Cellulomonas)属、フラボバクテリウム（Flabobac
terium）属、クルイヘラ(Kluyvere)属、ミコバクテリウ
ム(Micobacterium)属、ヘモフィラス（Haemophilus）
属、ミコプラナ(Micoplana)属、プロタミノバクター(Pro
taminobacter)属、キャンディダ(Candida)属、サッカロ
マイセス（Saccharomyces）属、バチルス(Bacillus)
属、好熱性のバチルス属、シュードモナス(Pseudomona
s)属、ミクロコッカス(Micrococcus)属、ハフニア（Haf
nia）属、プロテウス(Proteus)属、ビブリオ(Vibrio)
属、スタフィロコッカス(Staphyrococcus)属、プロピオ
ニバクテリウム（Propionibacterium）属、ザルチナ(Sa
rtina)属、プラノコッカス(Planococcus)属、エシェリ
シア（Escherichia）属、クルチア(Kurthia)属、ロドコ
ッッカス(Rhodococcus)属、アシネトバクター(Acinetob
acter)属、キサントバクター(Xanthobacter)属、ストレ
プトマイセス(Streptomyces)属、リゾビウム(Rhizobiu
m)属、サルモネラ(Salmonella)属、クレブシエラ(Klebs
iella)属、エンテロバクター(Enterobacter)属、エルウ
ィニア(Erwinia)属、エアロモナス(Aeromonas)属、シト
ロバクター(Citrobacter)属、アクロモバクター(Achrom
obacter)属、アグロバクテリウム(Agrobacterium)属、
アースロバクター属(Arthrobacter)属またはシュードノ
カルディア(Pseudonocardia)属に含まれる微生物株を好
適な例として挙げることができる。

【０１５６】近年の分子生物学および遺伝子工学の進歩
により、上述の微生物株のヌクレオシドホスホリラーゼ
の分子生物学的な性質やアミノ酸配列等を解析すること
により、該蛋白質の遺伝子を該微生物株より取得し、該
遺伝子および発現に必要な制御領域が挿入された組換え
プラスミドを構築し、これを任意の宿主に導入し、該蛋
白質を発現させた遺伝子組換え菌を作出することが可能
となり、かつ、比較的容易にもなった。かかる技術水準
に鑑み、このようなヌクレオシドホスホリラーゼの遺伝
子を任意の宿主に導入した遺伝子組換え菌も本発明のヌ
クレオシドホスホリラーゼを発現している微生物に包含
されるものとする。

【０１５７】ここでいう発現に必要な制御領域とは、プ
ロモーター配列（転写を制御するオペレーター配列を含
む）・リボゾーム結合配列（ＳＤ配列）・転写終結配列
等を示している。プロモーター配列の具体例としては、
大腸菌由来のトリプトファンオペロンのｔｒｐプロモー
ター・ラクトースオペロンのｌａｃプロモーター・ラム
ダファージ由来のＰLプロモーター及びＰRプロモーター
や、枯草菌由来のグルコン酸合成酵素プロモーター（ｇ
ｎｔ）・アルカリプロテアーゼプロモーター（ａｐｒ）
・中性プロテアーゼプロモーター（ｎｐｒ）・α−アミ
ラーゼプロモーター（ａｍｙ）等が挙げられる。また、
ｔａｃプロモーターのように独自に改変・設計された配
列も利用できる。リボゾーム結合配列としては、大腸菌
由来または枯草菌由来の配列が挙げられるが、大腸菌や
枯草菌等の所望の宿主内で機能する配列であれば特に限
定されるものではない。たとえば、１６ＳリボゾームＲ
ＮＡの３’末端領域に相補的な配列が４塩基以上連続し
たコンセンサス配列をＤＮＡ合成により作成してこれを
利用してもよい。転写終結配列は必ずしも必要ではない
が、ρ因子非依存性のもの、例えばリポプロテインター
ミネーター・ｔｒｐオペロンターミネーター等が利用で
きる。これら制御領域の組換えプラスミド上での配列順
序は、５’末端側上流からプロモーター配列、リボゾー
ム結合配列、ヌクレオシドホスホリラーゼをコードする
遺伝子、転写終結配列の順に並ぶことが望ましい。

【０１５８】ここでいうプラスミドの具体例としては、
大腸菌中での自律複製可能な領域を有しているｐＢＲ３
２２、ｐＵＣ１８、ＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＩＩＳＫ
（＋）、ｐＫＫ２２３−３、ｐＳＣ１０１や、枯草菌中
での自律複製可能な領域を有しているｐＵＢ１１０、ｐ
ＴＺ４、ｐＣ１９４、ρ１１、φ１、φ１０５等をベク
ターとして利用することができる。また、２種類以上の
宿主内での自律複製が可能なプラスミドの例として、ｐ
ＨＶ１４、ＴＲｐ７、ＹＥｐ７及びｐＢＳ７をベクター
として利用することができる。

【０１５９】ここでいう任意の宿主には、後述の実施例
のように大腸菌(Escherichia coli)が代表例として挙げ
られるが、とくに大腸菌に限定されるのものではなく枯
草菌(Bacillus subtilis)等のバチルス属菌、酵母や放
線菌等の他の微生物菌株も含まれる。

【０１６０】また、本発明におけるヌクレオシドホスホ
リラーゼ活性とは、上述の該酵素活性を有する微生物菌
体のみならず、該酵素活性を有する微生物菌体の菌体処
理物またはそれらの固定化物なども使用できる。菌体処
理物とは、例えばアセトン乾燥菌体や機械的破壊、超音
波破砕、凍結融解処理、加圧減圧処理、浸透圧処理、自
己消化、細胞壁分解処理、界面活性剤処理などにより調
製した菌体破砕物などであり、また、必要に応じて硫安
沈殿やアセトン沈殿、カラムクロマトグラフィーにより
精製を重ねたものを用いても良い。

【０１６１】本発明において、リン酸イオンと難水溶性
の塩を形成しうる金属カチオンとは、反応において副生
したリン酸イオンと難水溶性の塩を形成し、反応液中に
沈殿しうるものであれば限定されない。そのようなもの
として、カルシウム、マグネシウム、バリウム、鉄、コ
バルト、ニッケル、銅、銀、モリブデン、鉛、亜鉛、リ
チウムなどの金属カチオンが挙げられる。それらのうち
工業的に汎用性や安全性が高く、反応に影響を与えない
金属塩が特に好ましく、そのようなものの例としてカル
シウムイオン、バリウムイオン、アルミニウムイオン及
びマグネシウムイオンが挙げられる。

【０１６２】本発明におけるリン酸イオンと難水溶性の
塩を形成しうる金属カチオンとは、リン酸と難水溶性の
塩を形成しうる金属カチオンを、塩素イオン、硝酸イオ
ン、炭酸イオン、硫酸イオン、酢酸イオンまたは水酸イ
オンの中から選ばれる1種類以上のアニオンとの金属塩
として反応液中に添加すればよい。具体的には、塩化カ
ルシウム、硝酸カルシウム、炭酸カルシウム、硫酸カル
シウム、酢酸カルシウム、塩化バリウム、硝酸バリウ
ム、炭酸バリウム、硫酸バリウム、酢酸バリウム、塩化
アルミニウム、硝酸アルミニウム、炭酸アルミニウム、
硫酸アルミニウム、酢酸アルミニウム、水酸化カルシウ
ム、水酸化バリウム、水酸化アルミニウム、水酸化マグ
ネシウム、塩化マグネシウム、硝酸マグネシウム、炭酸
マグネシウム、硫酸マグネシウム、酢酸マグネシウムな
どが例示される。

【０１６３】また、該金属カチオンは、ペントース−１
−リン酸の塩として反応液中に存在させてもよい。一例
を挙げると、リボース−１−リン酸・カルシウム塩、２
−デオキシリボース−１−リン酸・カルシウム塩、２，
３−ジデオキシリボース−１−リン酸・カルシウム塩、
アラビノース−１−リン酸・カルシム塩、リボース−１
−リン酸・バリウム塩、２−デオキシリボース−１−リ
ン酸・バリウム塩、２，３−ジデオキシリボース−１−
リン酸・バリウム塩、アラビノース−１−リン酸・バリ
ウム塩、リボース−１−リン酸・アルミニウム塩、２−
デオキシリボース−１−リン酸・アルミニウム塩、２，
３−ジデオキシリボース−１−リン酸・アルミニウム
塩、アラビノース−１−リン酸・アルミニウム塩、など
が挙げられる。

【０１６４】本発明におけるヌクレオシド化合物の合成
反応は、目的とするヌクレオシド、基質である１−リン
酸化糖誘導体と塩基、反応触媒であるヌクレオシドホス
ホリラーゼ又は該酵素活性を有する微生物、そしてリン
酸を反応系より除外させるために添加する金属塩の種類
とその特性により、適切なｐＨや温度などの反応条件な
らびに管理幅を選べばよいが、通常はｐＨ５〜１０、温
度１０〜６０℃の範囲で行うことができる。ｐＨに関し
て、その管理幅を外れた場合、目的物や基質の安定性、
酵素活性の低下、リン酸との難水溶性塩の未形成などが
原因で反応転化率の低下を招く可能性がある。反応途
中、ｐＨの変化が生じるようであれば必要に応じて塩
酸、硫酸などの酸や水酸化ナトリウム、水酸化カリウム
などのアルカリを適時添加すればよい。反応に使用する
１−リン酸化糖誘導体と塩基の濃度は０．１〜１０００
ｍＭ程度が適当であり、両者のモル比は添加する塩基の
比率を１−リン酸化糖誘導体又はその塩に対して０．１
〜１０倍モル量で行える。反応転化率を考えれば０．９
５倍モル量以下が好ましい。

【０１６５】また、添加するリン酸と難水溶性の塩を形
成しうる金属塩は、反応に使用する１−リン酸化糖誘導
体に対して０．１〜１０倍モル量、より好ましくは０．
５〜５倍モル量添加するのが良い。その添加方法につい
て制限は無く、一括添加や反応中に逐次添加しても良
い。また、本反応は基本的に水を溶媒としているが、必
要に応じ反応系にアルコールやジメチルスルホキシドな
ど通常の酵素反応に用いられる有機溶媒を適量添加して
も良い。なお、高濃度の反応においては、基質の塩基や
生成物のヌクレオシド化合物が溶解しきれずに反応液中
に存在する場合もあるが、このような場合にも本発明を
適用することができる。

【０１６６】このようにして製造したヌクレオシド化合
物は、濃縮、晶析、溶解、電気透析処理、イオン交換樹
脂や活性炭による吸脱着処理どの常法を適用することに
より単離することができる。（実施例）以下に実施例により、本発明を更に詳細に示
すが、本発明はこれらに限定されるものではない。

【０１６７】実施例１３，５−Ｏ−ビス（４−クロロベンゾイル）−２−デオ
キシ−Ｄ−リボース−１−リン酸（１８）およびビス
〔３，５−Ｏ−ビス（４−クロロベンゾイル）−２−デ
オキシ−Ｄ−リボース−１−イル〕リン酸（１９）のア
ノマー混合物の合成正リン酸１．１８ｇとアセトニト
リル５１ｍLの混合物にトリｎ−ブチルアミン２．
３ｇとモルキュラーシーブス４Ａ５．０７ｇを加え、
攪拌しながら５℃に冷却した。１時間後、３，５−Ｏ−
ビス（４−クロロベンゾイル）−２−デオキシ−α−Ｄ
−リボシルクロリド（純度８５％）５．０７ｇを加
えて１時間攪拌し、表記化合物（１８）と（１９）の混
合物〔（１８）：（１９）＝３：５、（１８）のα体：
β体＝５：２〕のアセトニトリル溶液を得た。

【０１６８】分析用サンプルを得るため、シクロヘキシ
ルアミン塩とし、シリカゲルカラムクロマトグラフィー
にて精製し、メタノール−酢酸エチル（１：１０）流分
より、表記化合物（１９）の２種のアノマー異性体（１
９ａ）および（１９ｂ）を得た。（１９ａ）：低極性流分¹ H NMR (CDCl₃, 270 MHz) d 8.0-7.8 (m, 8 H), 7.4-7.
2 (m, 8 H), 6.06 (m,1.2 H), 5.98 (m, 0.8 H), 5.56
(m, 1.2 H), 5.41 (m, 0.8 H), 4.7-4.3 (m,6 H), 2.6-
2.4 (m, 1 H), 2.75-2.6 (m, 2 H), 2.5-2.3 (m, 2 H),
2.2-1.9 (m,2 H), 1.8-1.6 (m, 2 H), 1.6-0.9 (m, 8
H)、 MS (APCI) m/z 883 (M-H) （１９b）：高極性流分¹ H NMR (CDCl₃, 270 MHz) d 8.0-7.8 (m, 8 H), 7.4-7.
2 (m, 8 H), 6.1-5.9(m, 2 H), 5.55 (m, 0.67 H), 5.3
9 (m, 1.33 H), 4.7-4.3 (m, 6 H), 3.1-2.85(m, 1 H),
2.75-2.4 (m, 2 H), 2.32 (m, 2 H), 2.2-1.9 (m, 2
H), 1.8-1.6 (m, 2 H), 1.6-0.9 (m, 8 H)、 MS (APCI)
m/z 883 (M-H) 実施例２３，５−Ｏ−ビス（４−クロロベンゾイル）−２−デオ
キシ−Ｄ−リボース−１−リン酸およびビス〔３，５−
Ｏ−ビス（４−クロロベンゾイル）−２−デオキシ−Ｄ
−リボース−１−イル〕リン酸のアノマー混合物の合成正リン酸１．１１ｇと２−ブタノン４９ｍLの混合
物にトリｎ−ブチルアミン２．１１ｇとモルキュラー
シーブス４Ａ４．９ｇを加え、攪拌しながら５℃に冷
却した。さらに、３，５−Ｏ−ビス（４−クロロベンゾ
イル）−２−デオキシ−α−Ｄ−リボシルクロリド
（純度８５％）４．９ｇを加えて１０分間攪拌し、表
記化合物（１８）と（１９）の混合物〔（１８）：（１
９）＝１：４、（１８）のα体：β体＝７：１０〕の２
−ブタノン溶液を得た。

【０１６９】実施例３３，５−Ｏ−ビス（４−クロロベンゾイル）−２−デオ
キシ−Ｄ−リボース−１−リン酸およびビス〔３，５−
Ｏ−ビス（４−クロロベンゾイル）−２−デオキシ−Ｄ
−リボース−１−イル〕リン酸のアノマー混合物の合成正リン酸１３６．８ｇと２−ブタノン２Lの混合物
にトリｎ−ブチルアミン９０．６ｇとモルキュラーシ
ーブス４Ａ２００ｇを加え、攪拌しながら５℃に冷却
した。１時間攪拌後、３，５−Ｏ−ビス（４−クロロベ
ンゾイル）−２−デオキシ−α−Ｄ−リボシルクロリ
ド（純度８５％）２００ｇを加えて２時間攪拌し、表
記化合物（１８）と（１９）の混合物〔（１８）：（１
９）＝５：４、（１８）のα体：β体＝５：２〕の２−
ブタノン溶液を得た。

【０１７０】実施例４３，５−Ｏ−ビス（４−クロロベンゾイル）−２−デオ
キシ−α−Ｄ−リボース−１−リン酸（１８ａ）の合成実施例１で得たアセトニトリル溶液を攪拌しながら５℃
に冷却し、正リン酸２．２９ｇを加えた。３時間攪拌
後、結晶が析出しはじめ、濃厚な懸濁液となった。５時
間後、反応懸濁液中の表記化合物（１８ａ）のα体／β
体比は１０：１であった。結晶をモルキュラーシーブス
との混合物として濾取し、メタノール１００ｍＬに溶解
後、再び濾過してモルキュラーシーブスを除いた。ＨＰ
ＬＣ定量した結果、得られたメタノール溶液中に、表記
化合物（１８ａ）は、３．６８ｇ含まれた。収率７４．
６％（原料純度換算済み：ＨＰＬＣ上、β体は検出され
ない）。

【０１７１】実施例５３，５−Ｏ−ビス（４−クロロベンゾイル）−２−デオ
キシ−α−Ｄ−リボース−１−リン酸（１８ａ）の合成実施例２で得た２−ブタノン溶液を攪拌しながら５℃に
冷却し、正リン酸２．２ｇを加えた。１時間攪拌後、
結晶が析出しはじめ、濃厚な懸濁液となった。２０時間
後、反応懸濁液中の表記化合物（１８ａ）のα体／β体
比は８：１であった。トリｎ−ブチルアミン６．３３
ｇを加えて析出晶を溶解し、モルキュラーシーブスを濾
去した。濾液にトルエン２５０ｍＬを加え、水５５
ｍＬで洗浄した。有機層を氷冷し、シクロヘキシルアミ
ン２．３２ｇを加えて、攪拌晶析した。１時間後、析
出晶を濾取し、室温で減圧乾燥し、表記化合物（１６
ａ）のジシクロヘキシルアミン塩３．１９ｇを無色粉
末として得た。収率６４．７％（原料純度換算済み：α
体：β体＝９７．５：２．５）¹ H NMR (DMSO-d₆, 270 MHz) d 8.00 (d, J = 8.6 Hz, 2
H), 7.96 (d, J = 8.6 Hz, 2 H), 7.58 (d, J = 8.6 H
z, 2 H), 7.58 (d, J = 8.6 Hz, 2 H), 5.82 (dd, J =
5.3, 5.3 Hz, 1 H), 5.36 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 4.6-
4.3 (m, 3 H),4.7-3.5 (br, 6 H), 2.7-2.6 (m, 2 H),
2.55-2.4 (m, 1 H), 2.25 (d, J = 4.2Hz, 1 H), 1.85-
1.75 (m, 4 H), 1.7-1.6 (m, 4 H), 1.55-1.45 (m, 2
H), 1.25-0.9 (m, 10 H)、 MS (APCI) m/z 590 (M+C6H1
4N) 実施例６３，５−Ｏ−ビス（４−クロロベンゾイル）−２−デオ
キシ−α−Ｄ−リボース−１−リン酸（１８ａ）の合成実施例３で得た２−ブタノン溶液を５℃に冷却し、攪拌
した。１時間攪拌後、結晶が析出しはじめ、濃厚な懸濁
液となった。２３時間後、反応懸濁液中の表記化合物
（１８ａ）のα体／β体比は７：１であった。トリｎ−
ブチルアミン２５９ｇを加えて析出晶を溶解し、モル
キュラーシーブスを濾去した。濾液を水２．２Ｌで洗浄
し、さらに水層をトルエン１Ｌで抽出した。有機層を
集め、氷冷し、シクロヘキシルアミン８７．５ｇを加
えて、攪拌晶析した。１時間後、析出晶を濾取し、室温
で減圧乾燥し、表記化合物（１６ａ）のジシクロヘキシ
ルアミン塩２１３ｇを無色粉末として得た。収率７
８．１％（原料純度換算済み：α体：β体＝９６．９：
３．１）。

【０１７２】実施例７２−デオキシ−α−Ｄ−リボース−１−リン酸（２０）
の合成実施例４で得たメタノール溶液にアンモニア水２０ｍ
Ｌを加え、室温で攪拌した。２８時間攪拌後、析出晶を
濾取し、室温で減圧乾燥して表記化合物（２０）のアン
モニウム塩５８９ｍｇを無色粉末として得た。収率２
１．１％（ＨＰＬＣ上、β体は検出されない）。

【０１７３】実施例８２−デオキシ−α−Ｄ−リボース−１−リン酸（２０）
の合成実施例６で得た化合物（１８ａ）をメタノール２．３
Ｌとアンモニア水４５０ｍＬの混合溶液に懸濁し、室
温で攪拌した。２８時間攪拌後、析出晶を濾取し、室温
で減圧乾燥して表記化合物（２０）のアンモニウム塩
６２．０ｇを無色粉末として得た。収率８１．０％（Ｈ
ＰＬＣ上、β体は検出されない。）¹ H NMR (D₂O, 270 MHz) d 5.56 (s, 1 H), 4.03 (m, 2
H), 3.52 (dd, J = 3.3,12.2 Hz, 1 H), 3.41 (dd, J =
5.3, 12.2 Hz, 1 H), 2.17 (m, 1 H) , 1.87 (d, J =
13.9 Hz, 1 H)、 MS (APCI) m/z 213 (M-H) 実施例９２，３，５−Ｏ−トリス（４−クロロベンゾイル）−α
−Ｄ−リボース−１−リン酸（２１）正リン酸３．３２ｇとメチルイソブチルケトン６７
ｍLの混合物にトリｎ−ブチルアミン２．１１ｇとモ
ルキュラーシーブス４Ａ６．６ｇを加え、攪拌しなが
ら５℃に冷却した。さらに、２，３，５−Ｏ−トリス
（４−クロロベンゾイル）−α−Ｄ−リボシルクロリ
ド６．６６ｇを加えて１時間攪拌後、結晶が析出しは
じめ、濃厚な懸濁液となった。１０時間後、反応懸濁液
中の表記化合物（１９）のα体／β体比は１０：１であ
った。トリｎ−ブチルアミン６．３３ｇを加えて析出
晶を溶解し、モルキュラーシーブスを濾去した後、濾液
を水５５ｍＬで洗浄した。有機層を氷冷し、シクロヘキ
シルアミン２．４ｇを加えて、攪拌晶析した。１時間
後、析出晶を濾取し、室温で減圧乾燥し、表記化合物
（２１）のジシクロヘキシルアミン塩７．０２ｇを無
色粉末として得た。収率７３．０％（α体：β体＝９
９：１）¹ H NMR (DMSO-d₆, 270 MHz) d 8.2-7.8 (m, 6 H), d 7.
6-7.4 (m, 6 H), 5.9-5.7 (m, 1 H), 5.6-5.4 (m, 3
H), 4.6-4.3 (m, 1 H), 4.7-3.5 (br, 6 H), 2.7-2.6
(m, 2 H), 1.9-1.7 (m, 4 H), 1.7-1.6 (m, 4 H), 1.55
-1.4 (m, 2 H), 1.3-0.9 (m, 10 H)、 MS (APCI) m/z 7
45 (M+C6H14N)。

【０１７４】実施例１０ α−Ｄ−リボース−１−リン酸（２２）の合成実施例９で得た化合物（２１）をメタノール１０５ｍ
Ｌとアンモニア水２１ｍＬの混合溶液に懸濁し、室温
で攪拌した。３２時間攪拌後、析出晶を濾取し、室温で
減圧乾燥して表記化合物（２２）のアンモニウム塩
１．９０ｇを無色粉末として得た。収率８６．０％（Ｈ
ＰＬＣ上、β体は検出されない。）¹ H NMR (D₂O, 270 MHz) d 5.6 (m, 1 H), 4.2 (m, 1
H), 4.1-4.0 (m, 2 H), 3.75 (m, 1 H) , 3.7 (m, 1
H)、 MS (APCI) m/z 229 (M-H)。

【０１７５】実施例１１５−Ｏ−（４−クロロベンゾイル）−２，３−ジデオキ
シ−α−Ｄ−リボース−１−リン酸（２３）正リン酸３．５ｇとアセトニトリル３３ｍLの混合
物にトリｎ−ブチルアミン２．２ｇとモルキュラーシ
ーブス４Ａ３．３ｇを加え、攪拌しながら５℃に冷却
した。さらに、５−Ｏ−（４−クロロベンゾイル）−
２，３−ジデオキシ−α−Ｄ−リボシルクロリド
３．２８ｇを加えて１時間攪拌後、結晶が析出しはじ
め、濃厚な懸濁液となった。２０時間後、反応懸濁液中
の表記化合物（２３）のα体／β体比は１０：１であっ
た。トリｎ−ブチルアミン６．５ｇを加えて析出晶を
溶解し、モルキュラーシーブスを濾去した後、濾液をト
ルエン７０ｍＬで希釈し、水５５ｍＬで洗浄した。有
機層を氷冷し、シクロヘキシルアミン２．５ｇを加え
て、攪拌晶析した。１時間後、析出晶を濾取し、室温で
減圧乾燥し、表記化合物（２３）のジシクロヘキシルア
ミン塩４．５６ｇを無色粉末として得た。収率７１．
５％（α体：β体＝９７：３）¹ H NMR (DMSO-d₆, 270 MHz) d 8.2-7.8 (m, 2 H), d 7.
6-7.4 (m, 2 H), 5.9-5.7 (m, 1 H), 5.6-5.4 (m, 1
H), 4.6-4.3 (m, 1 H), 4.7-3.5 (br, 6 H), 2.7-2.6
(m, 2 H), 1.9-1.7 (m, 8 H), 1.7-1.6 (m, 4 H), 1.55
-1.4 (m, 2 H), 1.3-0.9 (m, 10 H)、 MS (APCI) m/z 3
74 (M+C6H14N)。

【０１７６】実施例１２２，３−ジデオキシ−α−Ｄ−リボース−１−リン酸
（２４）の合成実施例１１で得た化合物（２３）をメタノール４６ｍ
Ｌとアンモニア水１０ｍＬの混合溶液に懸濁し、室温
で攪拌した。３０時間攪拌後、析出晶を濾取し、室温で
減圧乾燥して表記化合物（２４）のアンモニウム塩
１．６８ｇを無色粉末として得た。収率８５．０％（Ｈ
ＰＬＣ上、β体は検出されない。）¹ H NMR (D₂O, 270 MHz) d 5.2 (m, 1 H), 4.1-3.9 (m,
1 H), 3.6-3.3 (m, 2 H),2.1-2.3 (m, 2 H), 1.9-1.7
(m, 2 H)、 MS (APCI) m/z 197 (M-H)。

【０１７７】実施例１３２，３，５−Ｏ−トリス（４−クロロベンゾイル）−α
−Ｄ−アラビノフラノシル−１−リン酸（２５）正リン酸３．３ｇとメチルイソブチルケトン６７ｍ
Lの混合物にトリｎ−ブチルアミン２．１ｇとモルキ
ュラーシーブス４Ａ６．６ｇを加え、攪拌しながら５
℃に冷却した。さらに、２，３，５−Ｏ−トリス（４−
クロロベンゾイル）−α−Ｄ−アラビノフラノシルク
ロリド６．６ｇを加えて１時間攪拌後、結晶が析出し
はじめ、濃厚な懸濁液となった。８時間後、反応懸濁液
中の表記化合物（２５）のα体／β体比は１０：１であ
った。トリｎ−ブチルアミン６．３ｇを加えて析出晶
を溶解し、モルキュラーシーブスを濾去した後、濾液を
水５５ｍＬで洗浄した。有機層を氷冷し、シクロヘキシ
ルアミン２．４ｇを加えて、攪拌晶析した。１時間
後、析出晶を濾取し、室温で減圧乾燥し、表記化合物
（２５）のジシクロヘキシルアミン塩６．７２ｇを無
色粉末として得た。収率７０．５％（α体：β体＝９
９：１） MS (APCI) m/z 745 (M+C6H14N)。

【０１７８】実施例１４ α−Ｄ−アラビノフラノシル−１−リン酸（２６）の合
成実施例１３で得た化合物（２５）をメタノール９４ｍ
Ｌとアンモニア水１８ｍＬの混合溶液に懸濁し、室温
で攪拌した。４８時間攪拌後、析出晶を濾取し、室温で
減圧乾燥して表記化合物（２６）のアンモニウム塩
１．７２ｇを無色粉末として得た。収率８２．０％（Ｈ
ＰＬＣ上、β体は検出されない。）¹ H NMR (D₂O, 270 MHz) d 5.3 (m, 1 H), 3.95-3.3 (m,
5 H)、 MS (APCI) m/z229 (M-H)。

【０１７９】実施例１５（２Ｒ）−２−ベンジルオキシメチル−１，３−ジオキ
ソラン−４−リン酸（２７）の合成（２Ｒ）−２−ベンジルオキシメチル−４−（Ｒ，Ｓ）
−アセトキシ−１，３−ジオキソラン１．０６ｇのエ
ーテル１２ｍｌ溶液に、氷冷下、４Ｎ塩酸−ジオキサン
４ｍｌを加え、３．５時間攪拌後、室温まで昇温した。
溶媒を濃縮後、さらにトルエンにて共沸し、（２Ｒ）−
２−ベンジルオキシメチル−１，３−ジオキソラニル−
４−クロリド５００ｍｇを無色透明の油状物として得
た。アセトニトリル１．１ｍｌに、オルトリン酸０．２
７ｇ、トリn−ブチルアミン０．６６ｍｌ、モルキュラ
ーシーブス４Ａ０．２３ｇを順次加え、１．５時間攪
拌した。この懸濁液中に、氷冷下、先に得た油状物０．
２７ｇを加え、氷冷下、５．５時間攪拌した。トリn−
ブチルアミン０．６ｍｌを加えて３０分攪拌後、トルエ
ンで希釈して水抽出を行った。水層をｎ−ブタノールで
抽出し、濃縮した。濃縮物をトルエンに溶解後、シクロ
ヘキシルアミンを加えて濃縮し、表記化合物（２７）の
シクロヘキシルアミン塩を白色固体として得た。

【０１８０】¹H-NMR(D₂O) δ 0.98-1.10(2H, m), 1.14-
1.23(6H,m), 1.47-1.51(2H,m), 1.61-1.64(4H,m), 1.78
-1.83(4H,m), 2.94-3.00(2H,m), 3.46-3.60(2H,m), 3.7
2-3.79(1H,m), 3.92-4.00(1H,m), 4.41-4.51(2H,m), 5.
01-5.03 and 5.22-5.24(total 1H, m), 5.64-5.72(tota
l 1H,m), 7.24-7.30(5H,m) 、 MS (APCI) m/z 390 (M+C
6H14N)⁺。

【０１８１】実施例１６（２Ｒ）−２−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキソラ
ン−４−リン酸（２８）の合成実施例１５で得た化合物（２７）０．２ｇをメタノール
１０ｍｌに溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ０．１１ｇを触媒
として常圧水素添加を行った。触媒をろ過後、ろ液を濃
縮し表記化合物（２８）のシクロヘキシルアミン塩を得
た。

【０１８２】¹H-NMR(D₂O) δ 0.99-1.06(2H,m), 1.10-
1.24(6H,m), 1.47-1.50(2H,m), 1.62-1.66(4H,m), 1.80
-1.85(4H,m), 1.96-3.02(2H,m), 3.51-3.57(2H,m), 3.7
2-3.79(1H,m), 3.93-4.00(1H,m), 4.99-5.01 and 5.13-
5.15(total 1H, m), 5.64-5.67 and 5.70-5.73(total 1
H,m) 、 MS (APCI) m/z 199 (M-H)^-. 実施例１７２，３−ジデオキシ−３−フルオロ−５−O−（４−フ
ェニルベンゾイル）−α−D−エリスロペントフラノー
ス−１−リン酸（２９）の合成オルトリン酸６２ｍｇ、トリｎ−ブチルアミン５２
μＬ、アセトニトリル０．７ｍＬを室温で攪拌し、モレ
キュラシーブス４Ａ７０ｍｇを加えて氷浴下で攪拌し
た。これに２，３−ジデオキシ−３−フルオロ−５−Ｏ
−（４−フェニルベンゾイル）−Ｄ−エリスロペントフ
ラノシルクロリド７０ｍｇを加えて、同温で1日反応し
た。その後、トリｎ−ブチルアミン１５６μＬ、続い
て脱イオン水を加えて、トルエンで３回抽出した。抽出
した有機層にシクロヘキシルアミン４８μＬを加えて３
０分間攪拌した後に、減圧下で濃縮し、アセトンを加え
て析出物を濾取した。得られた残査をクロロホルムで洗
浄し、減圧下室温で乾燥した。表記化合物（２９）のジ
シクロヘキシルアミン塩を白色固体として得た。

【０１８３】¹H-NMR（CD₃OD）δ1.1‐1.4（10H、m）、
1.65（2H、m）、1.89（4H、m）、1.96（4H、m）、2.3−
2.5（2H、m）、2.91（2H、m）、4.5（2H、m）、4.6−4.
8（1H、m）、5.1−5.3（1H、m）、5.97（1H、m）、7.41
（1H、m）、7.47（2H、m）、7.68（2H、m）、7.75（2
H、m）、8.08（2H、m）、 MS (APCI) m/z 496 (M+C6H14
N)⁺. 実施例１８２，３−ジデオキシ−３−フルオロ−α−Ｄ−エリスロ
ペントフラノース−１−リン酸（３０）の合成実施例１７で得た化合物（２９）２１ｍｇのメタノール
１ｍＬ溶液にシクロヘキシルアミン２０μＬを加え、
２週間反応した。その後、減圧下で濃縮し、ジエチルエ
ーテルを加えた。これを濾過した後、減圧下で乾燥し
て、表記化合物のジシクロヘキシルアミン塩１２ｍｇを
白色固体として得た。

【０１８４】¹H-NMR（CD₃OD）δ 1.1‐1.4（10H、
m）、1.66（2H、m）、1.79（4H、m）、1.94（4H、m）、
2.3−2.4（2H、m）、2.88（2H、m）、3.59（2H、m）、
4.3−4.4（1H、m）、5.11（0.5H、m、もう一方の0.5H分
は、水のピークに隠れて判別不能）、5.89（1H、m）、
MS (APCI) m/z 215 (M-H)^-. 実施例１９２，３−ジデオキシ−３−フルオロ−５−Ｏ−（４−フ
ェニルベンゾイル）−Ｄ−エリスロペントフラノース−
１−リン酸（３１）の合成オルトリン酸７５９ｍｇ、トリn−ブチルアミン６
４６μＬ、アセトニトリル８．６ｍＬを室温で攪拌し、
モルキュラシーブス４Ａ０．８６ｇを加えて氷浴下で
攪拌した。これに２，３−ジデオキシ−３−フルオロ−
５−Ｏ−（４−フェニルベンゾイル）−Ｄ−エリスロペ
ントフラノシルクロリド８６４ｍｇを加えて、同温で1
日反応した。その後、トリn−ブチルアミン１．９４ｍ
Ｌ、続いて脱イオン水を加えて、トルエンで３回抽出
し、さらに純水で５回洗浄した。有機層を分離して、シ
クロヘキシルアミン５９０μＬを加えて３０分間攪拌
した。減圧下で濃縮し、これにアセトンを加えて攪拌し
た後に、濾取した。さらに、得られた残査をイソプロピ
ルエーテルで洗浄し、減圧下室温で乾燥し、表記化合物
（３１）を白色固体として得た。α体：β体＝６６：３
４。¹ H-NMR（CD₃OD）δ1.1‐1.4ppm（10H、m）、1.66（2H、
m）、1.78（4H、m）、1.98（4H、m）、2.3-2.6（2H、
m）、2.89（2H、m）、4.44 & 4.46 (α & β、2H)、、
4.6−4.8（1H、m）、5.1−5.3 & 5.3-5.4 (α & β、1
H、m)、5.97 & 6.00(α & β、1H、m)、7.40（1H、
m）、7.47（2H、m）、7.68（2H、m）、7.75（2H、m）、
8.07（1H、m）、8.13（1H、m）。

【０１８５】実施例２０２，３−ジデオキシ−３−フルオロ−Ｄ−エリスロペン
トフラノース−１−リン酸（３２）の合成実施例１９で得た化合物（３１）０．２９ｇのメタノー
ル１５ｍＬ溶液にシクロヘキシルアミン２７９μＬを加
え、１週間反応した。その後、減圧下で濃縮し、ジエチ
ルエーテルを加えて攪拌した。これを濾過した後、減圧
下で乾燥して、表記化合物（３２）のジシクロヘキシル
アミン塩１８５ｍｇを白色固体として得た。α体：β体
＝６６：３４。¹ H-NMR（CD₃OD）δ1.1‐1.4ppm（10H、m）、1.67（2H、
m）、1.79（4H、m）、2.2-2.4（2H、m）、2.94（2H、
m）、3.59 & 3.62(α & β、2H、m)、3.3-3.4 (2H、
m)、5.10 & 5.1-5.24(α & β、0.5H & 1H、m、αの0.5
Ｈ分は水に隠れて判別不能)、5.88 & 5.93 (α & β、1
H、m)。

【０１８６】実施例２１３，５−Ｏ−ジベンゾイル−２−Ｏ−メチルリボース−
１−リン酸（３３）の合成１，３，５−Ｏ−トリベンゾイル−２−Ｏ−メチル−α
−Ｄ−リボース２．８４ｇに４Ｎ塩酸−ジオキサン１
４．５ｍＬを加えて氷冷下攪拌した。２．５時間後、４
Ｎ塩酸−ジオキサン１０ｍＬを加え、さらに1時間攪拌
した。溶媒を留去した後、ジオキサン１０ｍＬで２回共
沸濃縮し、３，５−Ｏ−ジベンゾイル−２−Ｏ−メチル
リボシル−１−クロリドを得た。９８％リン酸２．９８
ｇを４−メチル−２−ペンタノン１５ｍＬに溶解し、モ
ルキュラーシーブス４Ａ２．８ｇを加えて３０分攪拌
した。トリｎ−ブチルアミン１．４２ｍＬを加え、次い
で先に得た３，５−Ｏ−ジベンゾイル−２−Ｏ−メチル
リボシル−１−クロリドを４−メチル−２−ペンタノン
１０ｍＬに溶解した溶液を加えた。室温で２０時間反応
させ、トリｎ−ブチルアミン７．１ｍＬで中和した。モ
ルキュラーシーブスを濾去し、濾液を水２０ｍＬで３回
洗浄した。有機層を溶媒留去し、シリカゲルカラムによ
り精製し、表記化合物（３３）９５０ｍｇを得た。 MS (APCI) m/z 451(M-H)-、IR(KBr) cm^-1 3448, 2963,
1721, 1453, 1278, 1111, 976, 711, 558.。

【０１８７】実施例２２２−Ｏ−メチルリボース−１−β−リン酸（３４）の合
成実施例２１で得た化合物（３３）８５０ｍｇに１４％ア
ンモニア−メタノール２０ｍＬを加え、室温で２０時間
反応させた。溶媒を留去し、ジイソプロピルエーテルで
スラッジした後、結晶性の粉末を濾過した。この粉末を
メタノールに溶解し、シクロヘキシルアミンを加えて攪
拌した。メタノールを留去し、残渣にジイソプロピルエ
ーテルを加えてスラッジした。結晶性の粉末を濾過し、
ジイソプロピルエーテルで洗浄した。目的物を水により
抽出し、４−メチル−２−ペンタノンにより２回洗浄し
た。水層を濃縮し、ジイソプロピルエーテルでスラッジ
した。結晶を濾取、ジイソプロピルエーテルで洗浄し、
表記化合物（３４）のジシクロヘキシルアミン塩１２０
ｍｇを得た。¹ H-NMR（D₂O）δ3.37(s,3H), 3.49(dd,1H,J=4.9Hz,12.7
Hz), 3.62(d,1H,J=4.9Hz), 3.69(dd,1H,J=2.7Hz,12.7H
z), 3.74-3.78(m,1H), 4.28(dd,1H,J=4.6Hz,7.8Hz), 5.
39(d,1H,J=5.9Hz)、 MS (APCI) m/z 243(M-H)^-。

【０１８８】実施例２３３，５−Ｏ−ビス（４−クロロベンゾイル）−２−デオ
キシ−α−Ｄ−リボース−１−リン酸（１８ａ）の合成正リン酸６．９２ｇとアセトニトリル８０ｍLの混合物
にトリｎ−ブチルアミン５．５１ｍＬとモルキュラーシ
ーブス４Ａ１０ｇを加え、室温で５時間攪拌した後、
一晩静置した。−７℃に冷却した後、３，５−Ｏ−ビス
（４−クロロベンゾイル）−２−デオキシ−α−Ｄ−リ
ボシルクロリド（純度８５％）１０ｇを加えて９時
間攪拌し、−１５℃で一晩静置した。トリｎ−ブチルア
ミン１６．５ｍＬを加えた後、モルキュラーシーブス
を濾去した。濾液を濃縮し、残さを４−メチル−２−ペ
ンタノンに溶解し、水で洗浄した。有機層を氷冷し、シ
クロヘキシルアミン５．６６ｍＬを加えて、攪拌晶析し
た。１．５時間後、析出晶を濾取し、室温で減圧乾燥
し、表記化合物（１８ａ）のジシクロヘキシルアミン塩
１３．５ｇを無色粉末として得た。（α体：β体＝９
８．８：１．２）。

【０１８９】実施例２４２−デオキシ−α−Ｄ−リボース−１−リン酸（２０）
の合成実施例２３で得た化合物７．０５ｇのメタノール溶液
に、シクロヘキシルアミン２．９２ｍＬを加え、室温で
攪拌した。７２時間攪拌後、濃縮し、エタノールを加え
て懸濁攪拌した。析出晶を濾取し、室温で減圧乾燥して
表記化合物（２０）のジシクロヘキシルアミン塩３．８
７ｇを無色粉末として得た。（ＮＭＲ上、β体は検出さ
れない。）¹ H NMR (D₂O) d 5.57 (dd, J = 5.1, 6.1 Hz, 1 H), 4.
03 (m, 2 H), 3.54 (ddd, J = 1.2, 2.2, 12.2 Hz, 1
H), 3.42 (ddd, J = 1.2, 5.1, 12.2 Hz, 1 H), 3.18-
2.94 (m, 2 H), 2.17 (m, 1 H), 1.90 (d, J = 1.2, 1
2.8 Hz, 1 H), 1.8-1.45(m, 10 H), 1.25-0.9 (m, 12
H) Anal. Calcd. for C₅H₉O₇P・C₁₂H₂₈N₂,C: 49.50 %; H:
9.04 %; N: 6.79 %; P:7.51 %, Found C: 49.26 %; H: 8.81 %; N: 6.64 %; P: 7.29
%.。

【０１９０】実施例２５２'−デオキシアデノシンの合成（１）エシェリヒア・コリＫ−１２／ＸＬ−１０株（Ｓｔｒａ
ｔａｇｅｎｅ社）を５０ｍｌのＬＢ培地に接種し、３７
℃で一夜培養した後集菌し、リゾチーム１ｍｇ／ｍｌを
含む溶菌液で溶菌した。溶菌液をフェノール処理した
後、通常の方法によりエタノール沈殿によりＤＮＡを沈
殿させた。生じたＤＮＡの沈殿は、ガラス棒に巻き付け
て回収した後、洗浄し、大腸菌染色体ＤＮＡを調製し
た。

【０１９１】ＰＣＲ用のプライマーには、エシェリヒア
・コリの既知のｄｅｏＤ遺伝子の塩基配列（GenBank ac
cession No. AE000508（コード領域は塩基番号11531-12
250）に基づいて設計した配列番号：１及び２に示す塩
基配列を有するオリゴヌクレオチドを用いた。これらの
プライマーの５’末端付近及び３’末端付近には、それ
ぞれＥｃｏＲＩ及びＨｉｎｄIIIの制限酵素認識配列を
有する。配列番号：１；GTGAATTCAC AAAAAGGATA AAACAATGGC 配列番号：２；TCGAAGCTTG CGAAACACAA TTACTCTTT 制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩで完全に消化した前記大腸菌染
色体ＤＮＡ６ｎｇ／μｌ及びプライマー各３μＭを含む
０．１ｍｌのＰＣＲ反応液を用いて、変性：９６℃、１
分、アニーリング：５５℃、１分、伸長反応：７４℃、
１分からなる反応サイクルを、３０サイクルの条件でＰ
ＣＲを行なった。

【０１９２】上記反応産物及びプラスミドｐＵＣ１８
（宝酒造（株））を、ＥｃｏＲＩ及びＨｉｎｄIII消化
し、ライゲーション・ハイ（東洋紡（株））を用いて連
結した後、得られた組換えプラスミドを用いて、エシェ
リヒア・コリＤＨ５αを形質転換した。形質転換株を、
アンピシリン（Ａｍ）５０μｇ／ｍｌ及びＸ−Ｇａｌ
（５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−
ガラクトシド）を含むＬＢ寒天培地で培養し、Ａｍ耐性
で且つ白色コロニーとなった形質転換株を得た。このよ
うにして得られた形質転換株よりプラスミドを抽出し、
目的のＤＮＡ断片が挿入されたプラスミドを、ｐＵＣ−
ＰＮＰ７３と命名した。こうして得られた形質転換体
を、エシェリヒア・コリＭＴ−１０９０５と名づけ
た。

【０１９３】エシェリヒア・コリＭＴ−１０９０５株
をＡｍ５０μｇ／ｍｌを含むＬＢ培地１００ｍＬで３７
℃・１晩振とう培養した。得られた培養液を１３０００
ｒｐｍで１０ｍｉｎ遠心分離し、菌体を集めた。菌体を
１０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）１０ｍＬに懸
濁し、超音波により破砕したものを酵素源として用い
た。

【０１９４】実施例８で得られた２．５ｍＭの２−デオ
キシ−α−Ｄ−リボース−１−リン酸ジアンモニウム
塩、２．５ｍＭのアデニン（和光純薬製、特級）、上記
のように調整した０．１ｍｌのプリンヌクレオシドホス
ホリラーゼ生産菌の超音波破砕酵素液、１０ｍＭトリス
塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）に種々の濃度の塩化カルシウ
ム（和光純薬、特級）を添加した反応液１ｍｌを３０
℃、２４時間反応させた。反応終了後、白色の沈殿物が
生成していた。

【０１９５】反応終了液を以下に示すＨＰＬＣ分析にて
分析した結果、和光純薬製の２'−デオキシアデノシン
（特級）のピークと完全に一致するピークが、すべての
反応終了液中に確認された。

【０１９６】ＨＰＬＣ分析条件カラム；ＹＭＣ−ＰａｃｋＯＤＳ−Ａ３１２１５０
×６．０ｍｍＩ．Ｄ．カラム温度；４０℃ ポンプ流速；０．７５ｍｌ／ｍｉｎ検出；ＵＶ２６０ｎｍ、溶離液；１０ｍＭリン酸：アセトニトリル＝９５：５
（Ｖ／Ｖ）また、反応終了液の２'−デオキシアデノシンの濃度を
定量し、反応転化率を計算した結果を表−１に示した。

【０１９７】

【表１】

【０１９８】実施例２６２’−デオキシアデノシンの合成（２）塩化カルシウムの代わりに塩化アルミニウムを添加する
以外はすべて実施例２５と同じ手順と条件で反応を行っ
た。反応終了後、白色の沈殿物が生成していた。反応終
了液を実施例２５と同じＨＰＬＣ分析にて分析した結
果、和光純薬製の２'−デオキシアデノシン（特級）の
ピークと完全に一致するピークが、すべての反応終了液
中に確認された。また、反応終了液の２'−デオキシア
デノシンの濃度を定量し、反応転化率を計算した結果を
表−２に示した。

【０１９９】

【表２】

【０２００】実施例２７２’−デオキシアデノシンの合成（３）塩化カルシウムの代わりに１０ｍＭの塩化バリウムを添
加する以外はすべて実施例２５と同じ手順と条件で反応
を行った。反応終了後、白色の沈殿物が生成していた。
反応終了液を実施例２５と同じＨＰＬＣ分析にて分析し
た結果、和光純薬製の２'−デオキシアデノシン（特
級）のピークと完全に一致するピークが、反応終了液中
に確認された。また、反応終了液の２’−デオキシアデ
ノシンの濃度を定量し、反応転化率を計算した結果、反
応転化率は９２．４％であった。

【０２０１】実施例２８チミジンの合成実施例８で調製した２．５ｍＭの２−デオキシ−α−Ｄ
−リボース−１−リン酸ジアンモニウム塩、２．５ｍ
Ｍのチミン（和光純薬製、特級）、１２ｕｎｉｔｓ／ｍ
ｌのチミジンホスホリラーゼ（ＳＩＧＭＡ製）、０ｍＭ
または１０ｍＭの硝酸カルシウム（和光純薬、特級）、
１０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）から成る反応
液１ｍｌを３０℃、２４時間反応させた。反応終了後、
白色の沈殿物が生成していた。反応終了液を実施例２５
と同じＨＰＬＣ分析にて分析した結果、和光純薬製のチ
ミジン（特級）のピークと完全に一致するピークが、反
応終了液中に確認された。また、反応終了液のチミジン
の濃度を定量し、反応転化率を計算した結果を表−３に
示した。

【０２０２】

【表３】

【０２０３】実施例２９２'−デオキシアデノシンの合成（４）実施例８で調製した１００ｍＭの２−デオキシ−α−Ｄ
−リボース−１−リン酸ジアンモニウム塩、１００ｍ
Ｍのアデニン（和光純薬製、特級）、実施例２５で調製
した０．１ｍｌのプリンヌクレオシドホスホリラーゼ生
産菌の超音波破砕酵素液、０〜１５０ｍＭの塩化カルシ
ウム（和光純薬、特級）、１００ｍＭトリス塩酸緩衝液
（ｐＨ８．０）から成る反応液１ｍｌを５０℃、２４時
間反応させた。反応終了後、白色の沈殿物が生成してい
た。反応終了液を実施例２５と同じＨＰＬＣ分析にて分
析した結果、和光純薬製の２−デオキシアデノシン（特
級）のピークと完全に一致するピークが、反応終了液中
に確認された。また、反応終了液の２'−デオキシアデ
ノシンの濃度を定量した結果を表−４に示した。

【０２０４】

【表４】

【０２０５】実施例３０２’−デオキシグアノシンの合成実施例８で調製した１００ｍＭの２−デオキシ−α−Ｄ
−リボース−１−リン酸ジアンモニウム塩、１００ｍ
Ｍのグアニン（和光純薬製、特級）、実施例２５で調製
した０．１ｍｌのプリンヌクレオシドホスホリラーゼ生
産菌の超音波破砕酵素液、０ｍＭまたは１５０ｍＭの塩
化カルシウム（和光純薬、特級）、１００ｍＭトリス塩
酸緩衝液（ｐＨ８．０）から成る反応液１ｍｌを５０
℃、２４時間反応させた。反応終了後、白色の沈殿物が
生成していた。反応終了液を実施例２５と同じＨＰＬＣ
分析にて分析した結果、和光純薬製の２−デオキシグア
ノシン（特級）のピークと完全に一致するピークが、反
応終了液中に確認された。また、反応終了液の２'−デ
オキシグアノシンの濃度を定量した結果を表−５に示し
た。

【０２０６】

【表５】

【０２０７】実施例３１アデノシンの合成実施例１０で調製した１００ｍＭのα−Ｄ−リボース−
１−リン酸ジアンモニウム塩、１００ｍＭのアデニン
（和光純薬製、特級）、実施例２５で調製した０．１ｍ
ｌのプリンヌクレオシドホスホリラーゼ生産菌の超音波
破砕酵素液、０ｍＭまたは１５０ｍＭの塩化カルシウム
（和光純薬、特級）、１００ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ８．０）から成る反応液１ｍｌを５０℃、２４時間反
応させた。反応終了後、白色の沈殿物が生成していた。
反応終了液を実施例２５と同じＨＰＬＣ分析にて分析し
た結果、和光純薬製のアデノシン（特級）のピークと完
全に一致するピークが、反応終了液中に確認された。ま
た、反応終了液のアデノシンの濃度を定量した結果を表
−６に示した。

【０２０８】

【表６】

【０２０９】実施例３２２’，３’−ジデオキシアデノシンの合成実施例１２で調製した１００ｍＭの２，３−ジデオキシ
−α−Ｄ−リボース−１−リン酸ジアンモニウム塩、
１００ｍＭのアデニン（和光純薬製、特級）、実施例２
５で調製した０．１ｍｌのプリンヌクレオシドホスホリ
ラーゼ生産菌の超音波破砕酵素液、０ｍＭまたは１５０
ｍＭの塩化カルシウム（和光純薬、特級）、１００ｍＭ
トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）から成る反応液１ｍｌ
を５０℃、２４時間反応させた。反応終了後、白色の沈
殿物が生成していた。反応終了液を実施例２５と同じＨ
ＰＬＣ分析にて分析した結果、シグマ社製の２’，３’
−ジデオキシアデノシン（特級）のピークと完全に一致
するピークが、反応終了液中に確認された。また、反応
終了液の２’，３’−ジデオキシアデノシンの濃度を定
量した結果を表−７に示した。

【０２１０】

【表７】

【０２１１】実施例３３アデニン−９−β−Ｄ−アラビノシドの合成実施例１４で調製した１００ｍＭのα−Ｄ−アラビノフ
ラノシル−１−リン酸ジアンモニウム塩、１００ｍＭの
アデニン（和光純薬製、特級）、実施例２５で調製した
０．１ｍｌのプリンヌクレオシドホスホリラーゼ生産菌
の超音波破砕酵素液、０ｍＭまたは１５０ｍＭの塩化カ
ルシウム（和光純薬、特級）、１００ｍＭトリス塩酸緩
衝液（ｐＨ８．０）から成る反応液１ｍｌを５０℃、２
４時間反応させた。反応終了後、白色の沈殿物が生成し
ていた。反応終了液を実施例２５と同じＨＰＬＣ分析に
て分析した結果、シグマ社製のアデニンアラビノシド
（特級）のピークと完全に一致するピークが、反応終了
液中に確認された。また、反応終了液のアデニン−９−
β−Ｄ−アラビノシドの濃度を定量した結果を表−８に
示した。

【０２１２】

【表８】

【０２１３】実施例３４２−アミノ−６−クロロプリン−２'−デオキシ−β−
Ｄ−リボシドの合成実施例８で得られた１０ｍＭの２−デオキシ−α−Ｄ−
リボース−１−リン酸ジアンモニウム塩、１０ｍＭの２
−アミノ−６−クロロプリン（東京化成）、１００ｍＭ
トリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）に、実施例２５で調整
した５０μｌのプリンヌクレオシドホスホリラーゼ生産
菌の超音波破砕酵素液を添加した反応液１ｍｌを５０
℃、４時間反応させた。反応終了液を以下に示すＨＰＬ
Ｃ分析にて分析した結果、２−アミノ−６−クロロプリ
ン−２'−デオキシ−β−Ｄ−リボシドのピークが確認
された。また、反応終了液の２−アミノ−６−クロロプ
リン−２'−デオキシ−β−Ｄ−リボシドの濃度を定量
し、反応転化率を計算したところ、２０．９％であっ
た。

【０２１４】ＨＰＬＣ分析条件カラム；ＤｅｖｅｌｏｓｉｌＯＤＳ−ＭＧ−５２５
０×４．６ｍｍＩ．Ｄ．カラム温度；４０℃ ポンプ流速；１．０ｍｌ／ｍｉｎ検出；ＵＶ２５４ｎｍ、溶離液；２５ｍＭリン酸二水素一カリウム：メタノール
＝８７５：１２５（Ｖ／Ｖ）実施例３５２，６−ジアミノプリン−２'−デオキシ−β−Ｄ−リ
ボシドの合成２−アミノ−６−クロロプリンの代わりに２，６−ジア
ミノプリン（東京化成）を添加する以外はすべて実施例
３４と同じ手順と条件で反応を行った。反応終了液を実
施例３４と同じＨＰＬＣ分析にて分析した結果、２，６
−ジアミノプリン−２'−デオキシ−β−Ｄ−リボシド
のピークが確認された。また、反応終了液の２，６−ジ
アミノプリン−２'−デオキシ−β−Ｄ−リボシドの濃
度を定量し、反応転化率を計算したところ、７５．５％
であった。

【０２１５】実施例３６６−メルカプトプリン−２'−デオキシ−β−Ｄ−リボ
シドの合成２−アミノ−６−クロロプリンの代わりに６−メルカプ
トプリン（ＫＯＵＪＩＮ）を添加する以外はすべて実施
例３４と同じ手順と条件で反応を行った。反応終了液を
実施例３４と同じＨＰＬＣ分析にて分析した結果、６−
メルカプトプリン−２'−デオキシ−β−Ｄ−リボシド
のピークが確認された。また、反応終了液の６−メルカ
プトプリン−２'−デオキシ−β−Ｄ−リボシドの濃度
を定量し、反応転化率を計算したところ、５７．２％で
あった。

【０２１６】実施例３７２−アミノ−６−ヨードプリン−２'−デオキシ−β−
Ｄ−リボシドの合成２−アミノ−６−クロロプリンの代わりに２−アミノ−
６−ヨードプリンを添加する以外はすべて実施例３４と
同じ手順と条件で反応を行った。反応終了液を実施例３
４と同じＨＰＬＣ分析にて分析した結果、２−アミノ−
６−ヨードプリン−２'−デオキシ−β−Ｄ−リボシド
のピークが確認された。また、反応終了液の２−アミノ
−６−ヨードプリン−２'−デオキシ−β−Ｄ−リボシ
ドの濃度を定量し、反応転化率を計算したところ、６
９．２％であった。

【０２１７】実施例３８２−アセチルアミノ−６−ヒドロキシプリン−２'−デ
オキシ−β−Ｄ−リボシドの合成２−アミノ−６−クロロプリンの代わりに２−アセチル
アミノ−６−ヒドロキシプリン（東京化成）を添加する
以外はすべて実施例３４と同じ手順と条件で反応を行っ
た。反応終了液を以下に示すＨＰＬＣ分析にて分析した
結果、２−アセチルアミノ−６−ヒドロキシプリン−
２'−デオキシ−β−Ｄ−リボシドのピークが確認され
た。また、反応終了液の２−アセチルアミノ−６−ヒド
ロキシプリン−２'−デオキシ−β−Ｄ−リボシドの濃
度を定量し、反応転化率を計算したところ、４８．７％
であった。

【０２１８】ＨＰＬＣ分析条件カラム；ＤｅｖｅｌｏｓｉｌＯＤＳ−ＭＧ−５２５
０×４．６ｍｍＩ．Ｄ．カラム温度；４０℃ ポンプ流速；１．０ｍｌ／ｍｉｎ検出；ＵＶ２５４ｎｍ、溶離液；２５ｍＭリン酸二水素一カリウム：メタノール
＝７５：２５（Ｖ／Ｖ）実施例３９２−アミノ−６−シクロプロピルアミノプリン−２'−
デオキシ−β−Ｄ−リボシドの合成２−アミノ−６−クロロプリンの代わりに２−アミノ−
６−シクロプロピルアミノプリンを添加する以外はすべ
て実施例３４と同じ手順と条件で反応を行った。反応終
了液を実施例３８と同じＨＰＬＣ分析にて分析した結
果、２−アミノ−６−シクロプロピルアミノプリン−
２'−デオキシ−β−Ｄ−リボシドのピークが確認され
た。また、反応終了液の２−アミノ−６−シクロプロピ
ルアミノプリン−２'−デオキシ−β−Ｄ−リボシドの
濃度を定量し、反応転化率を計算したところ、８７．６
％であった。

【０２１９】実施例４０２’，３’−ジデオキシ−３’−フルオロ−Ｄ−グアノ
シンの合成実施例１８で得られた７．０ｍＭの２，３−ジデオキシ
−３−フルオロ−Ｄ−エリスロペントフラノース−１−
リン酸、１０ｍＭのグアニン（東京化成）、１００ｍＭ
トリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）に、実施例２５のよう
に調整した０．１ｍｌのプリンヌクレオシドホスホリラ
ーゼ生産菌の超音波破砕酵素液を添加した反応液１ｍｌ
を５０℃、１１４時間反応させた。反応終了液を実施例
３４と同じＨＰＬＣ分析にて分析した結果、２’，３’
−ジデオキシ−３’−フルオロ−Ｄ−グアノシンのピー
クが確認された。また、反応終了液の２’，３’−ジデ
オキシ−３’−フルオロ−Ｄ−グアノシンの濃度を定量
し、反応転化率を計算したところ、４７．７％であっ
た。

【０２２０】実施例４１２’，３’−ジデオキシ−３’−フルオロ−Ｄ−グアノ
シンの合成実施例１８で得られた７．０ｍＭの２，３−ジデオキシ
−３−フルオロ−Ｄ−エリスロペントフラノース−１−
リン酸、１０ｍＭのグアニン（東京化成）、１００ｍＭ
トリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）に、実施例２５のよう
に調整した０．１ｍｌのプリンヌクレオシドホスホリラ
ーゼ生産菌の超音波破砕酵素液を添加した反応液１ｍｌ
を５０℃、４７時間反応させた後、終濃度２０ｍＭの塩
化カルシウムを添加してさらに５０℃、６７時間反応さ
せた。反応終了液を実施例３４と同じＨＰＬＣ分析にて
分析した結果、２’，３’−ジデオキシ−３’−フルオ
ロ−Ｄ−グアノシンのピークが確認された。また、反応
終了液の２’，３’−ジデオキシ−３’−フルオロ−Ｄ
−グアノシンの濃度を定量し、反応転化率を計算したと
ころ、８４．４％であった。

【０２２１】実施例４２６−クロロ−９−（β−Ｄ−リボフラノース−１−イ
ル）プリンの合成１０ｍＭの６−クロロプリン（Ａｌｄｒｉｃｈ）、実施
例１０で得た５０ｍＭのＤ−リボース−１−リン酸（２
２）、実施例２５で得た０．１ｍｌのプリンヌクレオシ
ドホスホリラーゼ生産菌の超音波破砕酵素液、１００ｍ
Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）からなる反応液１ｍ
ｌを５０℃、２０時間反応させた。反応終了後、反応液
を以下に示すＨＰＬＣ分析にて分析した結果、表題化合
物のピークが確認された。また、反応終了液の６−クロ
ロ−９−（β−Ｄ−リボフラノース−１−イル）プリン
の濃度を定量し、反応転化率を計算したところ、６２．
４％であった。

【０２２２】ＨＰＬＣ分析条件カラム：ＤｅｖｅｌｏｓｉｌＯＤＳ−ＭＧ−５２５
０×４．６ｍｍＩ．Ｄ．カラム温度：４０℃ ポンプ流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ検出：ＵＶ２５４ｎｍ溶離液：２５ｍＭリン酸二水素一カリウム：メタノール
＝７５：２５（Ｖ／Ｖ）実施例４３１−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノース−１−イ
ル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジンおよび３
−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノース−１−イ
ル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジンの合成実施例８で得た１０ｍＭの２−デオキシ−α−Ｄ−リボ
ース−１−リン酸アンモニウム塩、１０ｍＭの４−アザ
ベンスイミダゾール（Ａｌｄｒｉｃｈ）、１００ｍＭト
リス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）に、実施例２５で調製し
た５０μｌのプリンヌクレオシドホスホリラーゼ生産菌
の超音波破砕酵素液を添加した反応液１ｍｌを５０℃、
１７時間反応させた。反応終了液を以下に示すＨＰＬＣ
分析にて分析した結果、表題化合物のピークが２本観察
された。また、反応終了液の生成物の濃度を定量し、反
応転化率を計算したところ、３％および７．２％であっ
た。

【０２２３】ＨＰＬＣ分析分析・カラム：ＤｅｖｅｌｏｓｉｌＯＤＳ−ＭＧ−５２
５０×４．６ｍｍＩ．Ｄ．・カラム温度：４０℃ ・ポンプ流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ・検出：ＵＶ２５４ｎｍ・溶離液：２５ｍＭリン酸二水素一カリウム：メタノー
ル＝５０：５０（Ｖ／Ｖ）ＬＣ−ＭＳ分析データ：ＭＳ（ＡＰＣＩ）ｍ／ｚ２３
６（ＭＨ）⁺ 実施例４４８−アザ−２’−デオキシアデノシンの合成４−アザベンズイミダゾールの代わりに８−アザアデニ
ン（Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて、実施例４３と同様の条
件で反応を行った。反応終了液を以下に示すＨＰＬＣ分
析にて分析した結果、８−アザ−２’−デオキシアデノ
シンのピークが確認された。また、反応終了液の８−ア
ザ−２’−デオキシアデノシンの濃度を定量し、反応転
化率を計算したところ、４．８％であった。ＨＰＬＣ分析分析・カラム：ＤｅｖｅｌｏｓｉｌＯＤＳ−ＭＧ−５２
５０×４．６ｍｍＩ．Ｄ．・カラム温度：４０℃ ・ポンプ流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ・検出：ＵＶ２５４ｎｍ・溶離液：２５ｍＭリン酸二水素一カリウム：メタノー
ル＝８７５：１２５（Ｖ／Ｖ）ＬＣ−ＭＳ分析データ：ＭＳ（ＡＰＣＩ）ｍ／ｚ２５
３（ＭＨ）⁺ 実施例４５８−アザ−２’−デオキシグアノシンの合成４−アザベンズイミダゾールの代わりに８−アザグアニ
ン（東京化成）を用いて、実施例４３と同様の条件で反
応を行った。反応終了液を実施例４４と同じＨＰＬＣ分
析にて分析した結果、８−アザ−２’−デオキシグアノ
シンのピークが確認された。また、反応終了液の８−ア
ザ−２’−デオキシグアノシンの濃度を定量し、反応転
化率を計算したところ、３６．１％であった。

【０２２４】実施例４６２−クロロ−２’−デオキシアデノシン（クラドリビ
ン）の合成４−アザベンズイミダゾールの代わりに２−クロロ−４
−アミノプリンを用いて、実施例４３と同様の条件で反
応を行った。反応終了液を以下に示すＨＰＬＣ分析にて
分析した結果、表題化合物のピークが確認された。ま
た、反応終了液の２−クロロ−２’−デオキシアデノシ
ンの濃度を定量し、反応転化率を計算したところ、９６
％であった。ＨＰＬＣ分析分析・カラム：ＤｅｖｅｌｏｓｉｌＯＤＳ−ＭＧ−５２
５０×４．６ｍｍＩ．Ｄ．・カラム温度：４０℃ ・ポンプ流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ・検出：ＵＶ２５４ｎｍ・溶離液：２５ｍＭリン酸二水素一カリウム：メタノー
ル＝８７５：１２５（Ｖ／Ｖ）実施例４７１−（β−Ｄ−リボフラノース−１−イル）−１，３，
４−トリアゾール−３−カルボキジアミド（リバビリ
ン）の合成４−アザベンズイミダゾールの代わりに、１，２，４−
トシアゾール−３−カルボキシアミドを用いて、実施例
４３と同様の条件で反応を行った。反応終了液を以下に
示すＨＰＬＣ分析にて分析した結果、表題化合物のピー
クが確認された。また、反応終了液の１−（β−Ｄ−リ
ボフラノース−１−イル）−１，３，４−トリアゾール
−３−カルボキジアミドの濃度を定量し、反応転化率を
計算したところ、６９％であった。ＨＰＬＣ分析分析・カラム：ＤｅｖｅｌｏｓｉｌＯＤＳ−ＭＧ−５２
５０×４．６ｍｍＩ．Ｄ．・カラム温度：４０℃ ・ポンプ流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ・検出：ＵＶ２１０ｎｍ・溶離液：２５ｍＭリン酸二水素一カリウム実施例４８１−（β−Ｄ−リボフラノース−１−イル）−５−アミ
ノイミダゾール−４−カルボキサミド（アカデシン）の
合成４−アザベンズイミダゾールの代わりに５−アミノイミ
ダゾール−４−カルボキサミドを用いて、実施例４３と
同様の条件で反応を行った。反応終了液を以下に示すＨ
ＰＬＣ分析にて分析した結果、表題化合物のピークが確
認された。また、反応終了液の１−（β−Ｄ−リボフラ
ノース−１−イル）−５−アミノイミダゾール−４−カ
ルボキサミドの濃度を定量し、反応転化率を計算したと
ころ、４６％であった。ＨＰＬＣ分析分析・カラム：ＤｅｖｅｌｏｓｉｌＯＤＳ−ＭＧ−５２
５０×４．６ｍｍＩ．Ｄ．・カラム温度：４０℃ ・ポンプ流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ・検出：ＵＶ２５４ｎｍ・溶離液：２５ｍＭリン酸二水素一カリウム：メタノー
ル＝９３：７（Ｖ／Ｖ）実施例４９２’−デオキシグアノシンの合成２０ｇの純水に、実施例２４で得た３．２２ｇ（７．７
２ｍｍｏｌ）の２−デオキシリボース１−リン酸ジ（モ
ノシクロヘキシルアンモニウム）塩、１．１１ｇ（７．
３４ｍｍｏｌ）のグアニンと０．６７ｇ（１１．４８ｍ
ｍｏｌ）の水酸化マグネシウムを加えた。得られた反応
生成物のｐＨを２０％水酸化ナトリウム水溶液にて９に
調整後、０．１ｍｌの前述の酵素液（０．１ｍｌ）を加
え、５０℃、８時間攪拌下で反応させた。８時間後の反
応生成物をＨＰＬＣで分析したところ、所望の２’−デ
オキシグアノシンを反応収率９９％で得た。

【０２２５】実施例５０２’−デオキシアデノシンの合成２０ｇの純水に、実施例２４で得た３．２２ｇ（７．７
２ｍｍｏｌ）の２−デオキシリボース１−リン酸ジ（モ
ノシクロヘキシルアンモニウム）塩、１．０１ｇ（７．
４７ｍｍｏｌ）アデニンと０．６７ｇ（１１．４８ｍｍ
ｏｌ）の水酸化マグネシウムを加えた。得られた反応生
成物のｐＨを２０％水酸化ナトリウム水溶液にて８．６
に調整後、０．１ｍｌの前述の酵素液（０．１ｍｌ）を
加え、５０℃、３時間攪拌下で反応させた。３時間後の
反応生成物をＨＰＬＣで分析したところ、所望の２’−
デオキシアデノシンを反応収率９９％で得た。

【０２２６】

【発明の効果】本発明は、アノマー選択的な１−リン酸
化糖誘導体ならびにヌクレオシドの製造法として有用性
が高く、広範な利用が期待される。

【０２２７】

【配列表】SEQUENCE LISTING <110>MITSUI CHEMICALS, INC. <120>Anomer selective synthesis of saccharide-1-ph
osphates and synthesisof their nucleosides <130>31010006 <160>2 <210>1 <211>30 <212>DNA <213>Artificial Sequece <220> <223> Oligonucleotide to act as a PCR primer for c
loning of purine nucleoside phophrylase of E.coli
K-12 <400> 1 gtgaattcac aaaaaggata aaacaatggc 30 <210>2 <211>29 <212>DNA <213>Artificial Sequece <220> <223> Oligonucleotide to act as a PCR primer for c
loning of purine nucleoside phophrylase of E.coli
K-12 <400> 2 tcgaagcttg cgaaacacaa ttactcttt 29

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｐ 19/38 Ｃ１２Ｐ 19/38 19/40 19/40 // Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ (Ｃ１２Ｐ 19/40 (Ｃ１２Ｐ 19/40 Ｃ１２Ｒ 1:19）Ｃ１２Ｒ 1:19）Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (72)発明者深澤信幸千葉県茂原市東郷1144 三井化学株式会社内 (72)発明者伊藤潔千葉県茂原市東郷1144 三井化学株式会社内 (72)発明者池田一郎千葉県茂原市東郷1144 三井化学株式会社内 (72)発明者安楽城正千葉県茂原市東郷1144 三井化学株式会社内 (72)発明者中村武史千葉県茂原市東郷1144 三井化学株式会社内 (72)発明者浅野保千葉県茂原市東郷1144 三井化学株式会社内 (72)発明者藤原純也千葉県茂原市東郷1144 三井化学株式会社内 (72)発明者安藤知行千葉県茂原市東郷1144 三井化学株式会社内 (72)発明者土屋克敏千葉県茂原市東郷1144 三井化学株式会社内 (72)発明者丸山恭子千葉県茂原市東郷1144 三井化学株式会社内 (72)発明者梅谷豪毅千葉県茂原市東郷1144 三井化学株式会社内 (72)発明者山内孝弘千葉県茂原市東郷1144 三井化学株式会社内 (72)発明者三宅仁基千葉県茂原市東郷1144 三井化学株式会社内Ｆターム(参考） 4B024 AA03 BA10 CA01 CA03 CA09 DA06 EA04 GA11 GA19 4B064 AF33 AF34 CA02 CA19 CA21 CC24 CD12 CD15 CE03 DA16 4C057 AA04 BB02 BB03 GG03 HH02 HH04 4H050 AA01 AA02 AB84 AC80 AC90 AD15

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】１．１−リン酸化糖誘導体のアノマー混
合物を加リン酸分解および異性化し、生成する１−リン
酸化糖誘導体モノマーのα体またはβ体の一方を選択的
に晶析することによりアノマー混合物間の平衡を傾け、
１−リン酸化糖誘導体モノマーのα体またはβ体の一方
を選択的に製造する方法。
【請求項２】下記式（１）【化１】〔式中、Ｒ¹およびＲ²は、独立してそれぞれ水素原子、
メチル基、保護されたヒドロキシメチル基または保護さ
れたカルボキシル基を表し、Ｒ³はアシル基を表し、Ｒ⁴
は水酸基の保護基を表し、Ｘはハロゲン原子、アルコキ
シ基またはアルキルチオ基を表し、Ｗは酸素原子または
イオウ原子を表し、Ｚは酸素原子、イオウ原子または置
換されてもよい炭素原子を表し、ｍは１から３の整数を
表し、ｎは０または１を表し、ｐおよびｑは０から４の
整数を表し、ｒは０または１を表す。（ただし、ｐ、
ｑ、ｒ、ｎは、Ｚが酸素原子、イオウ原子の場合には、
ｐ＋ｒ≦ｎ＋１、ｑ≦２×（ｎ＋１）−２×（ｐ＋ｒ）
を、Ｚが炭素原子の場合はｐ＋ｒ≦ｎ＋２、ｑ≦２×
（ｎ＋２）−２×（ｐ＋ｒ）を満たす。）〕で示される
１−リン酸化糖誘導体のアノマー混合物を加リン酸分解
および異性化し、生成する１−リン酸化糖誘導体モノマ
ーのα体またはβ体の一方を選択的に晶析することによ
りアノマー混合物間の平衡を傾け、１−リン酸化糖誘導
体モノマーのα体またはβ体の一方を選択的に製造する
方法。
【請求項３】下記式（１）【化２】（式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｘ、Ｗ、Ｚ、ｍ、ｎ、
ｐ、ｑ、ｒは請求項２と同義である。）で示される１−
リン酸化糖誘導体のアノマー混合物を加リン酸分解およ
び異性化し、生成する１−リン酸化糖誘導体モノマーα
体またはβ体の一方を選択的に晶析することによりアノ
マー混合物間の平衡を傾け、１−リン酸化糖誘導体モノ
マーのα体またはβ体の一方を選択的に製造し、ついで
Ｒ⁴で表される保護基の脱離反応を行って、下記式
（３）【化３】（式中、Ｒ¹およびＲ²は、独立してそれぞれ水素原子、
メチル基、ヒドロキシメチル基またはカルボキシル基を
表し、Ｒ³は水素原子またはアシル基を表し、Ｘ、Ｗ、
Ｚ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒは前記と同義である。）で示される
１−リン酸化糖誘導体モノマーを製造する方法。
【請求項４】下記式（４）【化４】（式中、Ｒ¹およびＲ²は、独立してそれぞれ水素原子、
メチル基、置換されたベンゾイル基で保護されたヒドロ
キシメチル基、または保護されたカルボキシル基を表
し、Ｒ⁴は水素原子または水酸基の保護基を表し、Ｒ³、
Ｘ、Ｗ、Ｚ、ｍ、Ｒ ³、ｐ、ｑ、ｒは、請求項２と同義
である。）で示される１−リン酸化糖誘導体のトリマ
ー、ダイマーもしくはモノマー、またはそれらの塩。
【請求項５】下記式（５）【化５】〔式中、ｐおよびｑは０から３の整数を表し、ｒは０ま
たは１を表し、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｘ、Ｗ、Ｚは、請
求項２と同義である。（ただし、ｐ、ｑ、ｒは、Ｚが酸
素原子、イオウ原子の場合には、ｐ＋ｒ≦１、ｑ≦２−
２×（ｐ＋ｒ）を、Ｚが炭素原子の場合はｐ＋ｒ≦２、
ｑ≦４−２×（ｐ＋ｒ）を満たす。）〕で示される１−
リン酸化糖誘導体モノマーまたはその塩。
【請求項６】下記式（６）【化６】（式中、Ｒ¹およびＲ²は、独立してそれぞれ水素原子、
メチル基、ヒドロキシメチル基、またはカルボキシル基
を表し、Ｒ³、Ｘ、Ｗ、Ｚ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒは、請求項
２と同義である。）で示される１−リン酸化糖誘導体モ
ノマーまたはその塩（但し、天然に存在するものを除
く）。
【請求項７】前記式（６）において、ｎ＝１である請
求項６記載の１−リン酸化糖誘導体モノマーまたはその
塩。
【請求項８】Ｒ¹がヒドロキシメチル基、Ｒ²が水素原
子、ｐおよびｒが０、Ｘがフッ素原子である請求項７記
載の１−リン酸化糖誘導体モノマーまたはその塩。
【請求項９】下記式（１８）：【化７】（式中、Ｒ¹¹は保護されたヒドロキシメチル基を表し、
Ｒ¹⁴は水酸基の保護基を表す。）で示される化合物を、
塩基の存在下にリン酸で処理して、下記式（１９）：【化８】（式中、Ｒ¹¹およびＲ¹⁴は、前記と同義であり、ｍは請
求項２と同義である。）で示される１−リン酸化糖誘導
体のアノマー混合物とした後、加リン酸分解および異性
化し、生成するα体を選択的に晶析させることによるア
ノマー混合物間の平衡を傾け、下記式（２０）：【化９】（式中、Ｒ¹¹およびＲ¹⁴は前記と同義である。）で示さ
れる１−リン酸化糖を製造する方法。
【請求項１０】下記式（１８）：【化１０】（式中、Ｒ¹¹は保護されたヒドロキシメチル基を表し、
Ｒ¹⁴は水酸基の保護基を表す。）で示される化合物を、
塩基の存在下にリン酸で処理して、下記式（１９）：【化１１】（式中、Ｒ¹¹およびＲ¹⁴は、前記と同義であり、ｍは請
求項２と同義である。）で示される１−リン酸化糖誘導
体のアノマー混合物とした後、加リン酸分解および異性
化し、生成するα体を選択的に晶析させることによるア
ノマー混合物間の平衡を傾け、α体を選択的に製造し、
ついで保護基の脱離を行って、２−デオキシ−α−Ｄ−
リボース−１−リン酸を製造する方法。
【請求項１１】請求項３記載の１−リン酸化糖誘導体
モノマーを製造する第一の工程と、該第一の工程で得ら
れた１−リン酸化糖誘導体のリン酸基と塩基との交換反
応をヌクレオシドホスホリラーゼにより行う第二の工程
により、下記式（８）【化１２】（式中、Ｂは、独立してそれぞれピリミジン、プリン、
アザプリンおよびデアザプリンからなる群から選択され
た塩基を示し、それらはハロゲン原子、アルキル基、ハ
ロアルキル基、アルケニル基、ハロアルケニル基、アル
キニル基、アミノ基、アルキルアミノ基、水酸基、ヒド
ロキシアミノ基、アミノキシ基、アルコキシ基、メルカ
プト基、アルキルメルカプト基、アリール基、アリール
オキシ基またはシアノ基によって置換されていてもよ
い。また、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｘ、Ｗ、Ｚ、ｍ、ｎ、ｐ、
ｑ、ｒは請求項３記載の式（３）と同義である。）で示
されるヌクレオシドの製造方法。
【請求項１２】ヌクレオシドホスホリラーゼを用い
て、請求項６記載の１−リン酸化糖誘導体モノマーのリ
ン酸基と塩基との交換反応により、下記式（８）【化１３】（式中、Ｂは請求項１１記載の式（８）と同義であり、
Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｘ、Ｗ、Ｚ、ｐ、ｑ、ｒは請求項
６記載の式（６）と同義である。）で示されるヌクレオ
シドの製造方法。
【請求項１３】ヌクレオシドホスホリラーゼを用い
て、請求項７記載の１−リン酸化糖誘導体モノマーのリ
ン酸基と塩基との交換反応により、式（１０）【化１４】（式中、Ｂは請求項１１記載の式（８）と同義であり、
Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｘ、Ｗ、Ｚ、ｐ、ｑ、ｒは請求項
７記載の式（７）と同義である。）で示されるヌクレオ
シドの製造方法。
【請求項１４】Ｒ¹がヒドロキシメチル基、Ｒ²が水素
原子、ｐおよびｒが０、Ｘがフッ素原子である請求項１
３記載のヌクレオシドの製造方法。
【請求項１５】請求項１４記載の２−デオキシ−α−
Ｄ−リボース−１−リン酸を製造する第一の工程と、該
第一の工程で得られた１−リン酸化糖誘導体のリン酸基
と塩基との交換反応をヌクレオシドホスホリラーゼによ
り行う第二の工程による、下記式（２１）【化１５】（式中、Ｂは請求項１１の式（８）と同義である。）で
示されるヌクレオシドの製造方法。
【請求項１６】ヌクレオシドホスホリラーゼが、プリ
ンヌクレオシドホスホリラーゼ（ＥＣ２．４．２．
１）、グアノシンホスホリラーゼ（ＥＣ２．４．２．１
５）、ピリミジンヌクレオシドホスホリラーゼ（ＥＣ
２．４．２．２）、ウリジンホスホリラーゼ（ＥＣ２．
４．２．３）、チミジンホスホリラーゼ（ＥＣ２．４．
２．４）、デオキシウリジンホスホリラーゼ（ＥＣ２．
４．２．２３）からなる群から選択される１種又は２種
以上の酵素であることを特徴とする請求項１１から請求
項１５のいずれか一項に記載のヌクレオシドの製造方
法。
【請求項１７】ヌクレオシドホスホリラーゼ活性に代
えて、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ（ＥＣ２．
４．２．１）、グアノシンホスホリラーゼ（ＥＣ２．
４．２．１５）、ピリミジンヌクレオシドホスホリラー
ゼ（ＥＣ２．４．２．２）、ウリジンホスホリラーゼ
（ＥＣ２．４．２．３）、チミジンホスホリラーゼ（Ｅ
Ｃ２．４．２．４）、デオキシウリジンホスホリラーゼ
（ＥＣ２．４．２．２３）からなる群から選択される１
種又は２種以上のヌクレオシドホスホリラーゼを発現し
ている微生物を用いることを特徴とする請求項１１から
請求項１５記載のヌクレオシドの製造方法。
【請求項１８】ヌクレオシドホスホリラーゼにより、
１−リン酸化糖誘導体モノマーのリン酸基と塩基との交
換反応を行う際に、リン酸イオンと難水溶性の塩を形成
しうる金属カチオンを反応液中に存在させることを特徴
とする請求項１１から請求項１５記載の製造方法。
【請求項１９】リン酸と難水溶性の塩を形成しうる金
属カチオンがカルシウムイオン、バリウムイオン、アル
ミニウムイオン及びマグネシウムイオンの中から選ばれ
る1種類以上の金属カチオンである請求項１８記載の製
造方法。
【請求項２０】ヌクレオシドが天然ヌクレオシドであ
る請求項８記載のヌクレオシドの製造方法。
【請求項２１】下記式(１１) 【化１６】（式中、Ｂ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｘ、Ｗ、Ｚ、ｐ、
ｑ、ｒは請求項１１記載の式（８）と同義である。）で
示される非天然型ヌクレオシドまたはその塩（但し、ト
リフルオロチミジン、リバビリン、オロチジン、ウラシ
ルアラビノシド、アデニンアラビノシド、２−メチル−
アデニンアラビノシド、２−クロル−ヒポキサンチンア
ラビノシド、チオグアニンアラビノシド、２，６−ジア
ミノプリンアラビノシド、シトシンアラビノシド、グア
ニンアラビノシド、チミンアラビノシド、エノシタビ
ン、ジェムシタビン、アジドチミジン、イドクスウリジ
ン、ジデオキシアデノシン、ジデオキシイノシン、ジデ
オキシシチジン、ジデヒドロデオキシチミジン、チアジ
デオキシシチジン、ソリブジン、５−メチルウリジン、
ビラゾール、チオイノシン、テガフール、ドキシフルリ
ジン、ブレディニン、ネブラリン、アロプリノールウラ
シル、５−フルオロウラシル、２’−アミノウリジン、
２’−アミノアデノシン、２’−アミノグアノシン、２
−クロル−２‘−アミノイノシン、ＤＭＤＣ、ＦＭＤＣ
は除く）。
【請求項２２】下記式（１２）【化１７】（式中、Ｂ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｘ、Ｗ、Ｚ、ｐ、
ｑ、ｒは請求項１１記載の式（８）と同義である。）で
示される非天然ヌクレオシドまたはその塩（但し、トリ
フルオロチミジン、リバビリン、オロチジン、ウラシル
アラビノシド、アデニンアラビノシド、２−メチル−ア
デニンアラビノシド、２−クロル−ヒポキサンチンアラ
ビノシド、チオグアニンアラビノシド、２，６−ジアミ
ノプリンアラビノシド、シトシンアラビノシド、グアニ
ンアラビノシド、チミンアラビノシド、エノシタビン、
ジェムシタビン、アジドチミジン、イドクスウリジン、
ジデオキシアデノシン、ジデオキシイノシン、ジデオキ
シシチジン、ジデヒドロデオキシチミジン、チアジデオ
キシシチジン、ソリブジン、５−メチルウリジン、ビラ
ゾール、チオイノシン、テガフール、ドキシフルリジ
ン、ブレディニン、ネブラリン、アロプリノールウラシ
ル、５−フルオロウラシル、２’−アミノウリジン、
２’−アミノアデノシン、２’−アミノグアノシン、２
−クロル−２’−アミノイノシン、ＤＭＤＣ、ＦＭＤＣ
は除く）。
【請求項２３】下記式（１３）【化１８】（式中、Ｂ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｘ、Ｗ、Ｚ、ｐ、
ｑ、ｒは請求項１１記載の式（８）と同義である。）で
示されるヌクレオシドまたはその塩（但し、トリフルオ
ロチミジン、リバビリン、オロチジン、ウラシルアラビ
ノシド、アデニンアラビノシド、２−メチル−アデニン
アラビノシド、２−クロル−ヒポキサンチンアラビノシ
ド、チオグアニンアラビノシド、２，６−ジアミノプリ
ンアラビノシド、シトシンアラビノシド、グアニンアラ
ビノシド、チミンアラビノシド、エノシタビン、ジェム
シタビン、アジドチミジン、イドクスウリジン、ジデオ
キシアデノシン、ジデオキシイノシン、ジデオキシシチ
ジン、ジデヒドロデオキシチミジン、チアジデオキシシ
チジン、ソリブジン、５−メチルウリジン、ビラゾー
ル、チオイノシン、テガフール、ドキシフルリジン、ブ
レディニン、ネブラリン、アロプリノールウラシル、５
−フルオロウラシル、２’−アミノウリジン、２’−ア
ミノアデノシン、２’−アミノグアノシン、２−クロル
−２’−アミノイノシン、ＤＭＤＣ、ＦＭＤＣは除
く）。
【請求項２４】下記式（２０）：【化１９】（式中、Ｒ¹¹は保護されたヒドロキシメチル基を、Ｒ¹⁴
は水酸基の保護基を表す。）で示される１−リン酸化誘
導体またはその塩。