KR20050083550A - 세팔렉신의 제조방법 - Google Patents

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KR20050083550A
KR20050083550A KR1020047012004A KR20047012004A KR20050083550A KR 20050083550 A KR20050083550 A KR 20050083550A KR 1020047012004 A KR1020047012004 A KR 1020047012004A KR 20047012004 A KR20047012004 A KR 20047012004A KR 20050083550 A KR20050083550 A KR 20050083550A
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diluent
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KR1020047012004A
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스테판 멘츨러
토마스 볼러
한스-울리히 페테라이트
크리스티안 마이에르
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룀 게엠베하 운트 콤파니 카게
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P35/00—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin
    • C12P35/04—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin by acylation of the substituent in the 7 position

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Abstract

본 발명은 친핵성 그룹을 갖는 리간드에 결합하는 비드-형태의 가교결합된 친수성 공중합체상에 고정화되는 페니실린 아미다제를 사용한 세팔렉신의 제조방법에 관한 것이다.

Description

세팔렉신의 제조방법{Method for producing cephalexin}
(하기 측정 방법은 다공성 담체 중합체 물질 영역에서 자체 공지된 당해 기술분야 숙련가에게 친숙하고, 완결을 위해서만 상세하다)
이. 콜라이 유래의 페니실린 아미다제(=페니실린 G 아실라제)에 대한 결합능의 측정(EC 3.5.1.11)
a) 담체 중합체 물질과 페니실린 아미다제의 공유 결합
1g의 담체 중합체 물질을 pH 7.5의 멸균 1M 인산칼륨 완충액 5ml중의 1530단위의 페니실린 아미다제에 첨가하고, 23℃에서 48시간 동안 항온처리한다.
이어서, 중합체 비드를 소결형-유리 프릿(다공율 2 또는 3) 상에 놓고, 탈이온수로 2회 세척한 다음, 0.05% 에틸 4-하이드록시벤조에이트를 함유하는 pH 7.5의 0.1M 인산칼륨 완충액으로 2회 세척하고, 프릿 상에서 흡입시킨다. 페니실린 아실라제로 부하된 수득한 비드의 습윤 중량을 측정한다.
b) 결합능 측정
페니실린 아미다제에 커플링된 습윤 담체 중합체 물질(중합체 비드) 250 내지 300mg을 0.05% 에틸 4-하이드록시벤조에이트를 함유하는 pH 7.5의 0.05M 인산칼륨 완충액중의 2% 농도의 페니실린 G 용액 20ml에 놓는다. 유리된 페닐-아세트산을 10분 기간 동안 일정한 pH 7.8에서 연속적으로 교반하고, 사용된 NaOH를 기록하면서 0.5M NaOH로 적정한다.
이어서, 중합체 비드를 유리 프릿을 통해 0.5% 에틸 4-하이드록시벤조에이트를 함유하는 pH 7.5의 0.05M 인산칼륨 완충액 20ml를 흡입시킴으로써 a)에서와 같이 수득하고, 측정을 2회 반복한다.
c) 결합능 계산
계산하기 위해서, 측정된 곡선의 직선 영역(통상적으로 1 내지 5분 영역)을 기본으로서 사용하고, 10분 간격으로 외삽한다. 결합능을 습윤 담체 중합체 물질 g당 페니실린 아미다제 단위(U/g 습윤)로서 기록한다. 1단위는 분당 가수분해된 페니실린 G의 1μmol(μmol/분)에 상응한다; 이러한 경우, 0.5M NaOH 1ℓ는 500μmol의 가수분해된 페니실린 G에 상응한다. (담체 중합체 물질의 수분 함량은 대략 일정하고, 따라서 무시할 수 있다).
비교 실시예 1
이. 콜라이 유래의 페니실린 아미다제 1530단위를 pH 7.5의 멸균 1M 인산칼륨 완충액 6㎖중에 용해시킨다. 용액을 1g의 Eupergit C(룀 게엠베하 운트 콤파니 카게, 독일 다름슈타트)에 첨가하고, 수득한 현탁액을 72시간 동안 23℃에서 항온처리한다. 중합체 비드를 소결형 유리 필터상에 수거하고, 0.1M 인산칼륨 완충액으로 세척한다. 하기 세팔렉신 합성 및 S/H 값의 측정은 각각 실시예 5 및 6을 따른다.
Eupergit C(N,N'-메틸렌비스메타크릴아미드, 알릴 글리시딜 에테르 및 메타크릴아미드의 공중합체) 및 이의 제조 방법은 DE-C 제27 22 751호, US-A 제4 90 713호 및 US-A 제45 11 694호에 기재되어 있다.
비교 실시예 2
WO 제97/04086호에 따라서, 세팔렉신 합성을 본원에 기재된 A형 효소 또는 B형 효소를 사용하여 실시예 6에 기재된 바와 같이 수행한다.
비교 실시예 3
이. 콜라이 페니실린 아미다제를 비교 실시예 1에 제시된 바와 같이 Sepabeads FP-EP 또는 Sepabeads FP-EP/G(Resindion S.R.I., Milan, Ttaly)상에 고정화한다. 하기 세팔렉신 합성 및 S/H 값의 측정은 각각 실시예 5 및 6을 따른다.
Sepabeads FP-EP 또는 Sepabeads FP-EP/G는 Eupergit과 같은 옥시란 그룹을 갖는 고도의 중합체성 가교결합된 아크릴성 공중합체이다. 제조사 정보에 따른 평균 입자 크기는 150 내지 300㎛이다.
비교 실시예 4
EmphazeTM로 충전된 크로마토그래피 칼럼의 유속의 측정 및 본 발명에 따라 사용될 수 있는 물질.
물질: Emphaze UltralinkTM Biosupport 배지, Lot#DC53515, Pierce, 제조사 정보에 따른 평균 입자 크기 50 내지 80㎛;
본 발명에 따라 사용될 수 있는 물질, 평균 입자 크기 208㎛.
하부 유리 프릿 및 폴리프로필렌 말단 캡이 장착된 보로실리케이트 유리 크로마토그래피 칼럼(칼럼의 차원 1 ×20cm)을 유출율을 비교하기 위해 빈채로 시험하였다. 담체 물질을 물중에 밤새 현탁시킨 후, 특정 칼럼내로 물을 사용하여 세정하고, 6.5cm의 높이로 충전된 층을 침전 및 액체를 느리게 유출시켜 수득하였다. 임의의 공간을 가볍게 톡톡 치면서 제거하였다. 칼럼 상부를 열고, 물을 유입시켜 23cm의 일정한 물 칼럼을 갖게 하였다. 유속은 오직 수압에 의해서만 이루어졌다. 유속을 스톱워치 및 10ml의 눈금 실린더를 사용하여 측정하였다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 제제에 있어서 측정된 유속은 분당 4.25ml였다. EmphazeTM에 있어서 측정된 유속은 분당 0.71ml였다. 고정층 반응기를 조작하기 위한 구형 입자의 적합성은 유속이 증가함에 따라 향상된다(보다큰 공간-시간 수율). 고정층 반응기내 압력 강하는 또한 수학적으로 계산할 수 있다[참고: K. Buchholz and B. Godelmann in "Characterization of immobilized biocatalysts", Dechema Monographs, volume 84, editor K. Buchholz, VCH Weinheim 1979, pages 128-129].
EmphazeTM과 비교하여 고정층 반응기에 사용하기 위한 본 발명에 따라 사용될 수 있는 물질의 보다 나은 기술적 적용 특성은 확실히 명백하다.
실시예 1 내지 3
실시예 1 내지 3에서의 일관된 시험 조건:
유기 용매, 보호성 콜로이드로서의 95부의 n-부틸 메타크릴레이트 및 5부의 2-트리메틸-암모늄에틸 메타크릴레이트 클로라이드의 공중합체 3g 및 5g의 드라이 아이스를 온도계, 수반 트랩, 환류 응축기, 질소-도입 튜브가 장착된 2ℓ들이 교반된 플라스크에 도입한다. 교반 및 질소를 통과시키면서, 1:1.5 비의 물과 메탄올(실시예 1) 또는 희석제로서의 포름아미드(실시예 2 및 3)로 이루어진 단량체 상, 및 10g의 메타크릴아미드, 20g의 알릴 글리시딜 에테르, 20g의 글리시딜 메타크릴레이트 및 50g의 메틸렌비스메타크릴아미드 및 2g의 4,4'-아조비스-4-시아노발레르산(중합 개시제)을 50℃에서 유기상 중에 분산시킨 후, 65 내지 70℃로 가열하여 비등시킨다. 혼합물을 약 6시간 동안 항온처리한 후, 실온으로 냉각시킨다. 수득한 중합체 비드를 흡입 여과 분리하고, 세척하여 유동층 건조기에서 건조시킨다. 페니실린 아미다제[U/g 습윤]에 대한 결합능 및 팽윤율을 측정한다[ml 습윤/ml 무수].
기본적인 시험 매개변수 및 실시예 1 내지 3의 결과를 하기 표에서 발견한다.
(본 발명에 따른)실시예 1 (비교 실시예)실시예 2 (비교 실시예)실시예 3
유기 용매(연속 상) 952g의 사이클로헥산 669g의 사이클로헥산 530g의 n-헵탄 +530g의 퍼클로로에틸렌
전체 단량체 100g 100g 100g
희석제 80g의 메탄올 +120g의 물(=1:1.5) 263g의 포름아미드 264g의 포름아미드
단량체 +희석제(단량체 상) 300g 363g 364g
단량체/희석제 비 1:2 1:2.63 1:2.64
단량체 상/연속 상 비 1:3.2 1:1.8 1:2.9
페니실린 아미다제에 대한 결합능(1530U)[U/g 습윤] 252 194 192
팽윤율[ml 습윤/ml 무수] 1.3 4.0 3.9
실시예 4
세팔렉신의 합성
고정층 반응기에서 25℃ 및 pH 7.5에서 반응을 수행한다. 0.2M 7-ADCA 및 0.2M D-페닐글리신아미드 혼합물의 10ml 수용액을 고정된 페니실린 아미다제 0.5ml를 함유하는 칼럼에 통과시킨다. 반응 동안, 부착된 교반된 저장기 용기에 HCl를 첨가함으로써 pH를 일정하게 유지시킨다. 샘플을 수득하고, 특정 시간 간격으로 실시예 5에 제시된 바와 같이 HPLC로 분석한다.
실시예 5
실시예 4 및 비교 실시예 1 내지 3으로부터의 반응 생성물을 RP-8 칼럼(Merck KGaA, 독일 다름슈타트)을 사용하여 HPLC로 분석하였다. 사용된 이동상은 pH 7.5의 멸균 67mM 인산칼륨 완충액이었다. 세팔렉신을 30% 농도(용적/용적) 메탄올 수용액을 사용하여 용출시켰다.
세팔렉신 합성율(Vceph) 및 D-페닐-글리신 가수분해율(VD - PhG)을 HPLC 분석으로 측정하였고, S/H 값(합성율/가수분해율 비(Vceph/VD - PhG))을 하기와 같이 계산하였다. 결과를 하기 표에 제시한다:
효소 공급원 담체/고정물질 Vceph/VD - PhG
이. 콜라이 본 발명에 따라서 4.6
이. 콜라이 WO 제97/04086호의 A형(비교 실시예 2 참조) 3.3
이. 콜라이 WO 제97/04086호의 B형(비교 실시예 2 참조) 3.3
이. 콜라이 비교 실시예 1 3.5
이. 콜라이 비교 실시예 3(Sepabeads FP-EP) 3.2
이. 콜라이 비교 실시예 3(Sepabeads FP-EP/G) 2.9
본 방법에 대한 값은 병행해서 수행된 7개 시험 시리즈로 이루어지고, 이는 하기 S/H 값을 야기한다: 5.3, 4.7, 3.6, 4.6, 4.3, 5.2, 4.7;
비교 실시예와 비교하여 본 방법으로 이룰 수 있는 S/H 값의 약 30%의 현저한 증가가 확실히 명백하다.
본 발명은, 친핵성 그룹을 갖는 리간드에 대한 결합 활성을 갖고 비드 형태인, 가교결합된 친수성 공중합체 상에 고정된 페니실린 아미다제를 사용하여 세팔렉신을 제조하는 방법에 관한 것이다.
선행기술
효소 페니실린 아실라제(페니실린 아미다제)를 사용한 활성화 측쇄, 예를 들어 아미드 또는 에스테르를 함유하는 베타-락탐 잔기(베타-락탐 핵)의 아실화에 의한 반합성 베타-락탐 항생제의 합성 방법은 당해 분야 숙련가에게 익히 공지되어 있다.
이들 대부분의 경우에서, 효소는 고체인 수용성 담체에 결합된 후, 후속적으로 베타-락탐 핵과 활성화 측쇄를 갖는 수용액중에 접촉된다.
지금까지 기재된 방법의 단점은, 활성화 측쇄의 가치없는 측쇄 산으로의 가수분해 및 또한 목적하는 생성물의 가수분해물과 비교한 효소에 의한 목적하는 화합물의 합성비, 소위 S/H 값이 종종 바람직하지 않고 경제적 생산이 어렵다는 사실이다.
WO 제93/12250호는 Eupergit(룀 게엠베하 운트 콤파니 카게, 독일 다름슈타트, 비교 실시예 1 참조) 상에 고정된 이. 콜라이 페니실린 아미다제에 의한 반합성 베타-락탐 항생제 세파드록실 및 세팔렉신의 합성에서 S/H값이 반응 조건 선택에 의해 유리하게 영향받을 수 있음을 기재하고 있다. 반면에, 담체 물질의 특성에 대한 영향은 기재되어 있지 않다. WO 제93/12250호에 기재된 방법의 특정 단점은, 세팔렉신을 베타-나프톨과의 복합체중의 반응 혼합물로부터 분리하기 위해 후속적인 정제 단계가 필요하고, 생성물 손실이 발생한다는 것이다.
따라서, 최적의 담체 물질을 개발하고자 시도되어 왔다. 따라서, WO 제97/04086호에는 팽윤제 및 유리 아미노 그룹을 갖는 중합체로 이루어진 담체 물질 상에 고정된 이. 콜라이 페니실린 아미다제 및 베타-락탐 유도체를 제조하기 위한 이의 용도가 기재되어 있다. 그러나, 기재된 세팔렉신 제조 방법은 베파-락탐 핵 7-아미노-데아세톡시세팔로스포란 산(7-ADCA)이 활성화 측쇄 D-페닐글리신아미드(PGA)와 비교하여 3배의 과량의 몰로 사용된다는 단점을 갖는다. 상기 화학양론적 양의 베타-락탐 핵을 사용하는 경우, 경제적으로 조작할 수 있기 위해서 핵은 산업적 규모로 재활용되어야 한다. 이는 비용이 많이 들고 수율 손실을 야기한다. 또한, 이러한 환경은 핵이 불안정하기 때문에 생성물 중의 불순물도 야기한다.
또한, EP 제0 730 035호는 허용되는 수율의 특이적 담체상의 세팔렉신 제조를 기재하고 있다. 그러나, 사용된 담체 물질(EmphazeTM)의 입자 크기는 오직 60 내지 80μm이다. 이것이 산업적 적용에 있어서 큰 단점이다. 따라서, 이러한 물질로 충전된 크로마토그래피 칼럼은 오직 낮은 유속만을 갖는다.
효소를 위한 담체 물질은 DE 제198 04 518호에 기재되어 있다. 그 물질이 아목시실린 및 암피실린의 효소 합성을 위해 사용될 수 있음이 언급되어 있다. 고정화된 페니실린 아미다제를 사용한 세팔렉신 합성의 적합성은 언급되어 있지 않다.
문제점 및 해결
따라서, 상기 논의된 선행 기술 관점에서, 본 발명은 상기 언급된 단점을 극복하는 세팔렉신 합성의 개선된 방법을 제공한다는 문제점을 근거로 하였다.
특히, 본 방법은 바람직한 S/H 값을 달성할 수 있도록 의도되었다. 추가로, 사용된 담체 물질의 입자 크기가 산업적 공정에서 바람직한 120 내지 250μm이도록 의도되었다.
본 문제점은 청구항 1에 정의된 방법으로 해결한다. 본 방법의 바람직한 양태는 청구항 1에 종속되는 종속 청구항에 정의되어 있다.
특히, 상기 문제를 해결하리라고는 예측할 수 없었던 기술적으로 간단한 방법인, 친핵성 그룹을 갖는 리간드에 대한 결합 반응성을 갖고, 비드 형태이며, 단량체 및 희석제로 이루어진 단량체 상의 역 비드 중합에 의해 제조될 수 있는 가교결합된 친수성 담체 중합체 물질을 페니실린 아미다제로 피복하고, 이들 피복된 담체는 1:2 내지 2:1, 바람직하게는 1.5:1 내지 1:1.5, 특히 바람직하게는 대략 동일한 몰비, 즉 1.2:1 내지 1:1.2의 비로 (i) 7-아미노데아세톡시세팔로스포란 산 및 (ii) D-페닐글리신아미드를 포함하는 수용액과 접촉시킴으로써 해결할 수 있었고, 여기서, 존재하는 단량체는,
(a) 유리-라디칼 중합할 수 있고, 비닐 그룹을 가지며, 실온에서 10% 농도 이상의 수용액을 형성하는, 5 내지 40중량%의 친수성 단량체,
(b) 유리-라디칼 중합할 수 있고, 비닐 그룹 및 리간드의 친핵성 그룹과 중합체-유사 반응으로 공유 결합할 수 있는 추가의 작용 그룹을 갖는, 30 내지 50중량%의 단량체,
(c) 유리-라디칼 중합할 수 있고, 2개 이상의 에틸렌계 불포화 중합가능한 그룹을 갖는, 20 내지 60중량%의 가교결합 단량체이고,
단, a), b) 및 c)를 100중량%까지 첨가하고, 사용된 희석제는 1:1.0 내지 1:4.0 비의 메탄올과 물의 혼합물이며, 여기서, 단량체 상은 탄소수 5 내지 7의 지방족 탄화수소로 이루어진 유기 용매로 이루어진 연속 상중에 적가로 분산되고, 이 때, 단량체 상 대 연속 상의 비는 1:2.0 내지 1:4.0이며, 이러한 형태로 중합 개시제 및 보호성 콜로이드의 존재하에 유리-라디칼 중합이 이루어지고, 단, 단량체 대 희석제의 비는 1:1.7 내지 1:2.4이다.
사용된 담체 물질 및 이의 제조 방법은 DE 제198 04 518호에 기재되어 있다.
본 발명의 실행
담체 물질의 제조
단량체
단량체 혼합물의 친수성을 확실히 하기 위해서, 친수성 단량체로 주로 이루어져야 한다. 친수성 단량체는 실온에서 10% 농도 이상의 수용액을 형성하고, 바람직하게는 비 이온성 그룹, 또는 산 또는 염기의 첨가에 의해 이온화될 수 있는 그룹을 포함하는 단량체를 의미한다.
단량체 a)는 유리-라디칼 중합할 수 있고, 실온에서 10% 농도 이상의 수용액을 형성하는 비닐 그룹을 갖는, 5 내지 40, 8 내지 35, 특히 9 내지 12중량%의 친수성 단량체이다.
특히 적합한 단량체 a)는 아크릴아미드 및/또는 메타크릴아미드이고, 바람직하게는 메타크릴아미드이다. 추가의 예로는 불포화 중합가능한 카복실산의 하이드록시알킬 에스테르, 예를 들어 하이드록시에틸 아크릴레이트 및 하이드록시에틸 메타크릴레이트 또는 N-비닐피롤리돈이다.
단량체 b)는 유리-라디칼 중합할 수 있고, 비닐 그룹 및 리간드의 친핵성 그룹과의 중합체-유사 반응에서 공유 결합할 수 있는 추가의 작용 그룹, 바람직하게는 옥시란 그룹(에폭시 그룹)을 갖는, 30 내지 50, 바람직하게는 35 내지 45중량%의 단량체이다. 특히 옥시란 그룹은 이들의 생물학적 활성을 갖는 결합 리간드로 적합하다.
바람직한 단량체 b)는 글리시딜 메타크릴레이트 및/또는 알릴 글리시딜 에테르이다. 특히 바람직하게는 대략 동일 양으로 동시에 사용되는 단량체 둘다이다.
단량체 c)는 유리-라디칼 중합할 수 있고, 2개 이상의 에틸렌계 불포화 중합가능한 그룹을 갖는, 20 내지 60, 특히 25 내지 55, 특히 바람직하게는 40 내지 55중량%의 친수성의 가교결합하는 단량체이다. 바람직한 단량체 c)는 N,N'-메틸렌비스아크릴아미드 또는 N,N'-메틸렌비스메타크릴아미드이다. N,N'-메틸렌비스메타크릴아미드가 특히 바람직하다. 또한, 경우에 따라서 유리-라디칼 중합할 수 있고, 2개 이상의 에틸렌계 불포화 중합가능한 그룹을 갖는 0 내지 10중량%의 추가의 가교결합하는 단량체를 사용할 수 있다. 친수성 디(메트)아크릴레이트는 예를 들어 폴리에틸렌 옥사이드 디(메트)아크릴레이트가 적합하다.
단량체 a), b) 및 c)를 각각의 경우 100중량%까지 첨가한다.
희석제
단량체 상은 1:1.0 내지 1:4.0 비의 메탄올과 물의 혼합물이어야 하는 희석제중에 용해된 단량체 a) 내지 c)로 이루어져 있다. 메탄올 대 물의 특히 바람직한 혼합비는 1:1.2 내지 1:2.5, 특히 1:1.3 내지 1:1.7이다.
단량체 대 희석제의 비
단량체 대 희석제의 비가 특히 결정적이다. 이는 1:1.7 내지 1:2.4, 특히 바람직하게는 1.9 내지 2.1의 범위이어야 한다.
연속 상
적합한 연속 상은 탄소수 4 내지 7의 지방족 탄화수소인 유기 용매이다. n-헵탄이 바람직하고, 사이클로헥산이 특히 바람직하다.
단량체 상/연속 상 비
유기 용매에 의해 형성된 단량체 상 대 연속 상 비는 1:2.0 내지 1:4.0, 바람직하게는 1:2.8 내지 1:3.3이어야 한다.
추가의 공정 조건
추가의 구성원으로서, 현탁된 단량체 상은 자체 공지된 방법에서 중합 개시제, 바람직하게는 황-비함유 개시제 및 특히 바람직하게는 4,4'-아조비스(4-발레르산), 및 보호성 콜로이드(유화제), 예를 들어 30000 내지 80000의 범위의 평균 분자량인 95부의 n-부틸 메타크릴레이트와 5부의 2-트리메틸암모늄에틸 메타크릴레이트 클로라이드의 공중합체를 포함한다.
비드 중합(또한, 현탁 중합으로서 언급됨)은 그렇지 않으면 공지된 방법, 예를 들어 연속 상 및 보호성 콜로이드, 및 개시제가 또한 존재하는 분산 단량체 상을, 예를 들어 40 내지 60℃에서 유기 상 중에 교반하면서 도입한 후, 60 내지 70℃로 가열함으로써 수행된다. 물/메탄올 혼합물을, 예를 들어 6시간 기간에 걸쳐 공비로 거의 완전하게 제거할 수 있다. 혼합물을 약 3 내지 5시간 동안 마지막으로 반응시킨 후 실온으로 냉각시킨다. 수득한 비드를 흡입 여과 분리하고, 예를 들어 진공하에 12시간 동안 건조시킨다. 대안으로, 비드 중합체를 여과 분리하고 물로 세척할 수 있다. 건조는 바람직하게는 유동층 건조기에서 수행되는데, 이는 용매 잔사가 특히 이러한 방식으로 효과적으로 제거될 수 있기 때문이다. 수득한 중합체 비드(=담체 중합체 물질)는 50 내지 500μm, 특히 120 내지 250μm 범위의 크기이다. 결합능은 담체 중합체 물질을 특정 효소로 최대로 부하에 이를 수 있는 효소 활성을 의미한다. 결합능은 담체 중합체 비드g당 페니실린 아미다제 활성 단위[U/g 습윤]로서 표현된다. 이러한 측정 방법을 사용한 본 발명의 담체 중합체 비드의 결합능은 220[U/g 습윤] 이상이다.
물중의 중합체 비드의 팽윤능은 팽윤율[ml 습윤/ml 무수]로서 표현된다. 본 발명의 담체 중합체 비드는 1.5를 넘지 않는 팽윤율을 갖는다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 담체 물질의 피복화
실시예에서, 담체 물질은 인산칼륨 완충액중에서 pH 7.5에서 피복된다. 그러나, 당해 기술분야 숙련가는 만족할 만하게 피복할 수 있는 다수의 다른 방법이 있음을 이해하고 있다.
세팔렉신 합성
전구체 (i) 7-아미노데아세톡시세팔로스포란 산 및 (ii) D-페닐글리신아미드를 10 내지 500mM, 바람직하게는 50 내지 300mM 및 특히 바람직하게는 150 내지 250mM의 농도로 사용한다.
본 발명의 유리한 효과
본 발명의 방법은 바람직한 S/H 비(합성/가수분해)로 세팔렉신을 합성할 수 있게 한다. 이와 관련하여, 유리하게는 50 내지 500μm, 특히 120 내지 250μm 범위의 입자 크기인 담체 물질을 사용함으로써 이루어진다. 보다 우수한 기술적 적용 특성은 이러한 방식, 예를 들어 고정층 반응기에서 보다 높은 유속으로 이루어진다. 보다 높은 유속은 보다 나은 공간-시간 수율을 야기한다. 보다 큰 담체 입자가 또한 뱃치 공정에서 유리하고, 이들은 보다 빠르게 여과 분리될 수 있기 때문이다. 또한, 공간-시간 수율을 증가시키므로, 공정의 상업적 실용성을 높인다.

Claims (5)

  1. 친핵성 그룹을 갖는 리간드에 대한 결합 활성을 갖고, 비드 형태이며, 단량체 및 희석제로 이루어진 단량체 상의 역 비드 중합[여기서, 존재하는 단량체는,
    (a) 유리-라디칼 중합할 수 있고, 비닐 그룹을 가지며, 실온에서 10% 농도 이상의 수용액을 형성하는, 5 내지 40중량%의 친수성 단량체,
    (b) 유리-라디칼 중합할 수 있고, 비닐 그룹 및 리간드의 친핵성 그룹과 중합체-유사 반응으로 공유 결합할 수 있는 추가의 작용 그룹을 갖는, 30 내지 50중량%의 단량체,
    (c) 유리-라디칼 중합할 수 있고, 2개 이상의 에틸렌계 불포화 중합가능한 그룹을 갖는, 20 내지 60중량%의 가교결합 단량체인데,
    단, a), b) 및 c)를 100중량%까지 첨가하고, 사용된 희석제는 1:1.0 내지 1:4.0의 비율의 메탄올 대 물의 혼합물이며, 여기서, 단량체 상은 탄소수 5 내지 7의 지방족 탄화수소로 이루어진 유기 용매로 이루어진 연속 상중에 적가로 분산되고, 이 때, 단량체 상 대 연속 상의 비는 1:2.0 내지 1:4.0이며, 이러한 형태로 중합 개시제 및 보호성 콜로이드의 존재하에 유리-라디칼 중합이 이루어지고, 단, 단량체 대 희석제의 비는 1:1.7 내지 1:2.4이다]에 의해 제조될 수 있는 가교결합된 친수성 담체 중합체 물질을 페니실린 아미다제로 피복하고, 이들 피복된 담체를 1:2 내지 2:1, 바람직하게는 1.5:1 내지 1:1.5, 특히 바람직하게는 대략 동일한 몰비, 즉 1.2:1 내지 1:1.2의 비로 (i) 7-아미노데아세톡시세팔로스포란 산 및 (ii) D-페닐글리신아미드를 포함하는 수용액과 접촉시킴을 특징으로 하는 세팔렉신의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서, 사용된 단량체가,
    a) 아크릴아미드 및/또는 메타크릴아미드
    b) 글리시딜 메타크릴레이트 및/또는 알릴 글리시딜 에테르
    c) N,N'-메틸렌비스아크릴아미드 또는 N,N'-메틸렌-비스메타크릴아미드임을 특징으로 하는 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 사이클로헥산이 유기 용매로서 사용됨을 특징으로 하는 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중의 어느 한 항에 있어서, 페니실린 아미다제가 이. 콜라이 유래임을 특징으로 하는 방법.
  5. 세팔렉신 합성을 위한 제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항에 제시된 담체 중합체 물질의 용도.
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