KR920006761B1 - 가교결합 중합체의 제조방법 - Google Patents

가교결합 중합체의 제조방법 Download PDF

Info

Publication number
KR920006761B1
KR920006761B1 KR1019840007853A KR840007853A KR920006761B1 KR 920006761 B1 KR920006761 B1 KR 920006761B1 KR 1019840007853 A KR1019840007853 A KR 1019840007853A KR 840007853 A KR840007853 A KR 840007853A KR 920006761 B1 KR920006761 B1 KR 920006761B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
vinyl
acylate
polymer
weight
units
Prior art date
Application number
KR1019840007853A
Other languages
English (en)
Other versions
KR850004776A (ko
Inventor
마우즈 오토
노에첼 시에그프리에트
뉴만 베른하르트
Original Assignee
훽스트 아크티엔게젤샤프트
하인리히 벡커·베른하르트 벡크
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 훽스트 아크티엔게젤샤프트, 하인리히 벡커·베른하르트 벡크 filed Critical 훽스트 아크티엔게젤샤프트
Publication of KR850004776A publication Critical patent/KR850004776A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR920006761B1 publication Critical patent/KR920006761B1/ko

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54353—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals with ligand attached to the carrier via a chemical coupling agent
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F218/00—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by an acyloxy radical of a saturated carboxylic acid, of carbonic acid or of a haloformic acid
    • C08F218/02—Esters of monocarboxylic acids
    • C08F218/04—Vinyl esters
    • C08F218/08—Vinyl acetate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F8/00—Chemical modification by after-treatment
    • C08F8/12—Hydrolysis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
    • C12N11/082—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F2810/00—Chemical modification of a polymer
    • C08F2810/20—Chemical modification of a polymer leading to a crosslinking, either explicitly or inherently

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Manufacture Of Porous Articles, And Recovery And Treatment Of Waste Products (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Polymerisation Methods In General (AREA)
  • Filtering Materials (AREA)

Abstract

내용 없음.

Description

가교결합 중합체의 제조방법
물질을 분리 또는 정제시키거나 분자량 분포를 결정하기 위한 중합체 용액의 겔 투과 크로마토그래피에 중합체 겔을 사용하는 방법이 상당히 오랫동안 공지되어 왔다. 수용성 계를 적합한 중합체 겔과 친수성으로 언급되는 반면, 비-수용성 계(유기용매)에만 사용될 수 있는 겔은 소수성으로 언급된다. 소수성 겔의 예에는 가교결합 된 폴리스티렌에 있으며, 친수성 겔의 예에는 가교결합 된 덱스트란, 폴리비닐피롤리돈, 폴리아크릴아미드 또는 폴리비닐알코올 등이 있다. 이러한 겔의 과도한 팽윤성 및 이로 인한 겔 투과 크로마토그래피에서의 고유동 속도의 방해는, 가교결합도를 증가시킴으로써 보완될 수 있다.
아세테이트기를 가수분해시킴으로써 가교결합된 폴리비닐알코올을 기본으로 하는 친수성 겔로 제조될 수 있는 가교결합된 폴리비닐 아세테이트를 기본으로 한 소수성 겔은 이미 공지되어 있다. 여기서, 무엇보다도 중요한 점은, 가교 결합이 가수분해에 대해 높은 저항성을 가져야 한다는 사실이다.
본 목적을 위한 가교결합제로서 다수의 화합물들이 선행 기술 분야에 이미 기술되어 있다. 예를 들어, 독일연방공화국 특히 제1,517,935호에는 본 목적에 사용할 수 있는 디비닐알킬렌, 디카르복실산의 디비닐 및 디알킬에스테르 뿐만 아니라 다가 알코올의 디비닐 또는 디알릴 에테르, 바람직하게는 부탄디올 디비닐 에테르 등에 대해 기술되어 있다[참조 : 이와 관련하여 또한 Makro㏖. Chemie 176, pages 657 et seq. (1975)]. 상기 특허 문헌에 따라 수득될 수 있는 가교 결합된 폴리비닐아세테이트 및 폴리비닐 알코올은 또한 다공성 비이드(bead)의 형태일 수 있다. 부탄디올 디비닐 에테르와의 가교결합은 가수분해에 대해 안정하나, 이 에테르는 비닐 아세테이트와 공중합되기가 비교적 어려우며, 따라서 상기 가교 결합제와의 가교결합 밀도가 비교적 낮다.
공지된 기타의 가교 결합제(예 : 에틸렌 글리콜 디메틸 아크릴레이트 또는 글리시딜 메트아크릴레이트)는 가수분해-저항성 가교결합을 수행하지 못하며, 균일하게 결합되지 않는다[참조 : 미합중국 특허 제4,104,208호]. 따라서, 비닐아세테이트(M1) 및 메틸메트아크릴레이트(M2) 각각의 공중합 변수로서, r1은 0.01이고, r2는 20이다. 상기한 메트아크릴레이트의 공중합 변수도 유사할 것이다. 이리하여, 상기한 두 가교결합제는 반응 초기에 사용되며, 따라서 일정한 결합을 수득할 수 없다.
또한, 생물학적 활성물질을 분리, 즉 부동화시키기 위해 친화성 크로마토그래피에 친수성 중합체 겔을 사용하는데, 이를 사용하기 전에 통상적으로 OH기인 중합체 겔의 반응성 기를 소위 스페이서(spacers)와 반응시키는 것은 이미 본 분야의 일부가 되었다. 상기한 의미의 스페이서에는 특히 에피클로로히드린이 포함된다[참조 : 독일연방공화국 공개 공보 제2,102,514호 및 독일연방공화국 특허 제2,421,789호].
본 발명의 목적은 폴리비닐 에스테르, 특히 폴리비닐 알코올을 기본으로 하고, 선행의 불리한 상태를 유도하지 않으며, 특히 가수분해-저항성이 있고, 겔 크로마토그래피에서 흡착제로서, 또는 화학적으로 공유 결합된 생물학적 활성물질에 대한 담체 물질로서 사용하기에 적당하며, 화학적으로 공유결합된 생물학적 활성물질의 활성에 거의 손상을 주지 않고, 처리하려는 물질의 유동을 방해하지 않는 것을 보장하는 가교 결합 중합체를 제공하는 것이다.
본 발명은 비닐 아세테이트 단위 및 하기 일반식(Ⅰ) 및/또는 (Ⅱ)의 가교결합제 단위를 필수적으로 함유하는 가교결합 중합체에 관한 것이다 :
Figure kpo00001
상기식에서, R1및 R2는 동일하거나 상이할 수 있으며, 각각 비닐, 1-아실옥시비닐, 알릴 또는 2-아실옥시알릴을 나타내고, A는 탄소수 2 내지 8의 2가 탄화수소 라디칼을 나타내며, B는 탄소수 1 내지 8의 2가, 3가 또는 4가 탄화수소 라디칼을 나타내고, m은 B라디칼의 원자가이며, X는 아실옥시기를 나타내고, 가교결합제 단위의 양은 중합체의 0.1내지 60중량%이다.
비닐 아실레이트 단위의 아실레이트기는 부분적으로 또는 완전히 OH기로 치환되는 것이 바람직하다.
본 발명은 또한 비닐 아실레이트를 분산 매질의 존재하에 상기 일반식(Ⅰ) 및/또는 (Ⅱ)의 가교결합제와 공중합시킴으로써 상기 가교 결합된 중합체를 제조하는 방법을 제공한다. 이렇게 수득된 중합체를 계속해서 부분적으로 또는 완전히 가수분해시키는 것이 바람직하다.
최종적으로, 본 발명은 또한 본 발명에 따른 중합체를 크로마토그래피에서의 흡착제로서 또는 생물학적 활성 물질에 대한 담체 물질로서 사용하는 것에 관한 것이다.
본 발명에 따른 중합체의 비닐 아실레이트 단위에 있어서, 아실레이트 라디칼중의 탄소수는 2 내지 18, 특히 2 내지 6인 것이 바람직하다. 후자는 아세테이트 또는 프로피오네이트 라디칼이 바람직하다. 또한, 중합체중에는 여러가지 아실레이트 라디칼이 존재할 수 있는데, 다시 말해서, 중합체는 또한 적당한 비닐 아실레이트의 혼합물로 제조될 수 있다.
일반식(Ⅰ)의 가교 결합제에서, A는 탄소수 2 내지 5, 특히 탄소수 2 또는 3의 직쇄 또는 측쇄 지방족 탄화수소 라디칼을 나타내는 것이 바람직하다. 이러한 탄화수소 라디칼은 에틸렌 또는 프로필렌 라디칼이 특히 바람직하다. 상기 일반식(Ⅰ)의 R1/R2가 1-아실옥시비닐 또는 2-아실옥시알릴을 나타낼 경우, 여기서 아실옥시 잔기의 탄소수는 2 내지 18, 특히 2 내지 6인 것이 바람직하다. 아실옥시는 아세테이트 또는 프로피오네이트 라디칼을 나타내는 것이 바람직하다. 라디칼 R1/R2는 비닐을 나타내는 것이 바람직하다. 본 발명에 따른 중합체에 있어서, 바람직한 가교 결합제 단위는 N,N'-디비닐에틸렌 우레아로부터 상응하게 유도된다. 이러한 가교결합제는 특히 가교결합이 가수분해-저항성 형태를 유도한다. 또한, 대표적인 것으로 N,N'-디비닐프로필렌 우레아가 바람직하다.
이러한 화합물의 제조는, 예를들어, 미합중국 특허 제2,541,152호 및 문헌[참조:Ullmann, Encyklopadie der technischen chemie[Encyclopedia of Industrial Chemistry], volum 23, 611(4th edition)]에 공지 및 기술되어 있다.
일반식(Ⅱ)의 가교 결합제에서, B는 2가의 탄화수소 라디칼, 특히 탄소수 2 내지 6, 바람직하게는 2 내지 4의 측쇄 또는 직쇄 알킬렌 라디칼을 나타내는 것이 바람직하다. 이러한 예에서, 아실 옥시기는 일반식(Ⅰ)에서 R 라디칼에 대해 기술한 바와 동일한 의미를 가지는 것이 바람직하다. 이러한 형태의 바람직한 가교 결합제의 예는 특히 비닐 아세테이트와 쉽게 공중합할 수 있는 3,3-디메틸펜타디엔, 2,4-디아세테이트이다. 이러한 형태의 화합물은, 예를 들어 적합한 디케톤, 트리케톤 또는 테트라케톤을 산 촉매의 존재하에, 비닐아실레이트 또는 이소프로페닐 아실레이트와 반응시켜, 상응하는 에놀아실레이트를 형성함으로서 제조할 수 있다. 이와 동시에 형성되는 아세톤은 평형 혼합물로부터 증류에 의해 연속적으로 제거해야 한다.
일반식(Ⅱ)의 가교 결합제 단위의 양은 통상적으로 중합체성 가교결합제 단위 총량의 0 내지 100%, 특히 0 내지 60%이다.
본 발명에 따른 중합체중 가교결합제 단위의 총량은 청구된 범위내이며, 특별한 소기의 용도에 바람직한 가교결합도에 의존한다. 예를들어, 겔 크로마토그래피에서는 고안정성이 바람직하고, 이는 고가교결합도 및 고 함량의 가교결합 단량체 단위를 전제로 한다. 이와 대조적으로, 저 가교결합제 밀도는 다른 용도, 예를 들어 교반용기중의 효소반응 또는 진단용 시약에서 담체물질로 사용할 수 있다. 가교 결합제 0.1중량% 미만을 함유하는 경우에는, 대부분, 더 이상 유용한 생성물을 제조하지 못한다. 가교결합제 함량이 기본적으로 60중량%를 초과할 수 있으나, 통상적으로 더 이상의 잇점이 생기지 않는다.
소기의 용도에 따라, 가교 결합제 단위의 양은 중합체의 1 내지 50중량%, 특히 1 내지 40중량%가 바람직하다. 생물학적 활성 물질에 대한 담체 물질용으로 사용하기 위해, 하계는 2.5중량%, 특히 10중량%인 것이 바람직하다. 일반식(Ⅱ)의 가교결합제 단위만이 존재할 경우, 이들의 하계는 2.5중량%인 것이 특히 바람직하다.
몇몇 용도에 있어서, 본 발명에 따른 중합체는 또한 비닐 아세테이트와 공중합할 수 있으며, 중합체의 총중량에 대해 10중량%미만, 바람직하게는 0.1 내지 5중량%의 단량체 단위를 함유하는 것이 유리할 수 있다. 혼합물중에 사용될 수 있는 이들 단량체의 예에는, N-비닐피롤리돈, 탄산비닐렌, (메트)아크릴산, (메트)아크릴니트릴, (메트)아크릴아미드, 각각 알킬라디칼의 탄소수가 2 내지 12, 바람직하게는 2 내지 4인 알킬(메트)아크릴레이트, 알킬 잔기의 탄소수가 2 내지 6인 (메트)아크릴 산의 히드록시알킬 에스테르, N-비닐-N-알킬-아세트아미드, 스티렌, α-메틸스티렌 등이 있다.
본 발명에 따라 가교결합된 중합체는 대부분이 구형이며, 건조하고 팽윤되지 않은 상태에서의 평균 입자크기가 20 내지 800㎛, 바람직하게는 50 내지 300㎛이고, 바람직하게는 좋은 입자 크기 분포를 가지는 비이드(beads)의 형태인 것이 바람직하다. 가장 적합한 입자 크기는 각각의 경우에 주로 특정한 분야의 용도에 따라 다르다. 예를들어, 압력의 부재하에서 수행된 칼럼 방법에서는, 가압 방법에서 보다 적당히 큰 입자크기가 상기한 한계내에서 선택된다. 본 발명에 따른 중합체의 비이드(beads)는 주로 거대한 기공으로 이루어진다. 기공의 평균 직경은 통상적으로 2 내지 10,000㎚, 바람직하게는 5 내지 200㎚, 특히 20 내지 200㎚ 범위내이다.
기공의 직경(기공의 용적)은 무엇보다도 모세관 압력 방법[수은 기공측정법(mercury porosimetry)]에 의해 기공의 용적을 결정함으로써 결정될 수 있다[참조:"Ullmanns Encyklopadie der technischen Chemie"(Ullmann's Encyclopedia of Industrial chemistry), Volumn 5(1980), pages 751-752]. 그후 기공용적으로부터 상기 참고문헌의 752페이지 좌측 상부에 있는 방정식에 의해 기공의 평균 직경을 계산할 수 있다. 또한 주사 전자 현미경법(scanning electron microscopy)에 의해 기공 크기를 측정할 수 있다.
본 발명에 따른 중합체에서 비닐 아실레이트 단위의 아실레이트 잔기는 OH기로 가수분해시키는 것이 바람직하며, 가수분해도는 통상적으로 50%이상, 바람직하게는 70%이상, 특히 90 내지 100%인 것이 바람직하다. 가수분해로부터 수득된, 가교결합된 중합체, 즉 폴리비닐 알콜이 생물학적 활성 물질에 대한 담체 물질로서 사용될 경우, 바람직하게는 적어도 일부의 OH기가 하기에 정의된 소위 스페이서(spacer)기로 채워진다. 이와 대조적으로, 겔 크로마토그래피용에 있어서는 적어도 다소의 OH기가 더이상 반응성 라디칼을 함유하지 않는 소수성기로 채워지는 것이 유리할 수 있다.
본 발명에 따른 중합체는 고가교결합도와 고가수분해-저항성에 의해 특히 특징화된다. 이러한 가수분해에 대한 고저항성은 겔 크로마토그래피에서 뿐만 아니라, 효소와 같은 생물학적 활성 물질에 대한 담체 물질용으로 매우 중요하다. 담체-지지된 효소는 강알킬리성 또는 강산성 매질중에서 수년동안 주로 사용되었다. 이는 특히 에스테르 또는 카복스아미드 결합을 분열시키는 "비특이성 가수분해효소"에 있어서 사실이다. 이밖에, 안정한 가교결합은 또한 본 발명에 따른 중합체중에서 아실레이트기를 OH기로 가수분해시키는 경우에 유리하다.
본 발명에 따른 중합체는 특히 겔 크로마토그래피에서의 정지상으로서 및 생물학적 활성물질에 대한 담체물질로서 사용하기에 적합하다.
본 발명에 따라 가교결합된 중합체는, 바람직하게는 분산 매질 및 분산 안정제의 존재, 추가 첨가제의 부재 또는 존재, 자유라디칼 개시제, 바람직하게는 불활성 희석제의 부재 또는 존재하에 산소의 제거와 비이드(bead)중합 조건하에서, 통상적인 방법으로 제조한다.
비이드 중합을 수행하기에 적합한 분산 매질은, 정상적인 조건하에서 주로 액체이고, 비점이 60℃이상, 바람직하게는 85 내지 300℃ 범위내이며, 중합조건하에서의 유화중합을 억제하기 위해 단량체, 중합체, 및 바람직하게는 추가로 개시제의 불용성 또는 난용성인 화합물이다. 분산매질상에 대한 단량체상의 비율은 넓은 범위, 예를들어 0.5 : 1 내지 1 : 50, 바람직하게는 1 : 1 내지 1 : 15(중량기준)내에서 변화시킬 수 있다. 본 발명에 의하면, 바람직한 분산 매질은 물이다. 이 물은, 알칼리성 범위내로 조절하고 비닐아실레이트의 가수분해에 의해 형성된 산에 대해 수소이온 농도-저항성을 만드는 완충제를 함유하는 것이 유리하다. 이러한 완충제는 Na2HPO4/NaH2PO4또는 NaHCO3로 이루어지는 것이 바람직하다.
중합공정중에서 비이드가 응집되는 것을 방지하기 위한 분산 안정화제는 본 목적을 위한 공지된 화합물중의 하나일 수 있다. 이것은 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐알코올, 폴리아크릴아미드, 폴리에틸렌글리콜, 메틸셀룰로오즈 또는 산화 에틸렌/산화 프로필렌 공중합체와 같은 친수성 중합체가 바람직하다.
폴리비닐피롤리돈이 특히 본 목적에 바람직하다. 이러한 분산 안정화제는 단량체의 총중량에 대해 0.001중량%정도의 소량으로 사용된다. 통상적인 사용량은 0.005 내지 50중량%, 바람직하게는 0.01 내지 20중량%(단량체 총중량 기준)범위이다.
수용성 상에 전해질을 첨가(분산 매질이 물일 경우), 예를들어 염화나트륨과 같은 염을 첨가시키는 경우, 이러한 첨가는 외부상 단량체를 거의 완전히 치환시켜 에멀젼이 형성되는 것을 거의 완전히 중지시키며, 추가로 비이드의 수율을 증가시키는 효과를 가지기 때문에, 통상적으로 유리하다. 특히, 첨가된 전해질은 또한 어느 정도까지 보호 콜로이드의 작용을 한다. 이러한 전해질은 통상적으로 분산 매질을 기준으로 하여 50중량%이하, 바람직하게는 30중량%이하의 양으로 사용된다.
본 발명에 따른 적합한 자유-라디칼 개시제는 단량체상에 대해서는 가용성이며, 액체 분산 매질에 대해서는 가능한한 난용성이어야 한다. 이러한 자유-라디칼 개시제의 예에는 유기 과산화물(예 : 디-3급-부틸과산화물, 디벤조일 과산화물, 큐멘 과산화수소 또는 사이클로헥사논 과산화물) 및 지방족 아조 화합물(예 : α,α'-아조디이소부티로니트릴, 아조비스시아노발레르산, 1,1'-아조사이클로헥산-1,1'-디카르보디니트릴 또는 아조디카복스아미드)이 있다. 적합한 산화 환원계도 또한 사용될 수 있다. 개시제의 양은 통상적으로 0.01 내지 5중량%, 바람직하게는 0.1 내지 2중량%(단량체의 총량기준)이다. 또한, 개시제의 부재 또는 존재하에서 방사선 중합을 개시시킬 수 있다.
비이드 중합체에 있어서 가능한한 고기공도를 수득하기 위하여, 불활성, 액체 성분(희석제)을 중합계 또는 바람직하게는 단량체에 첨가시킨다. 본 발명의 목적을 위해, 이러한 희석제는 단량체가 쉽게 용해되거나 단량체와 혼화성이나, 한편으로는 분산매질중에서 난용성이며 이와 비혼화성인 물질이다. 이러한 유형의 희석제 및 이들의 작용양태는, 예를들어 독일연방공화국 특허 제1,517,935호 및 문헌[참조:Makromol Chemie 176, pages 657 et seq.(1975)]에 기술되어 있다.
가장 적합한 희석제 또는 희석제의 혼합물은 몇가지 간단한 통상적인 실험으로 쉽게 결정된다. 기공크기는 원료, 조성물 및 불활성 성분의 양에 영향을 받을 수 있으나, 또한 가교 결합 성분의 양에 영향을 받을 수도 있다.
희석제는 단독으로 또는 혼합시켜 사용할 수 있으며, 폴리비닐 아세테이트용 용매 또는 응고체일 수 있다. 이러한 희석제의 예에는 알칸올(예 : 부탄올, 사이클로헥산올, 이소옥탄올 또는 글리콜), 에스테르(예 : 부틸 아세테이트, 부틸글리콜아세테이트 또는 글리세롤 트리아세테이트), 아미드(예 : 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드 또는 피롤리돈), 케톤(예 : 아세톤 또는 사이클로헥사논), 탄소수 6이상의 디알킬 에테르(예 : 디-n-부틸-에테르, 디-n-아밀 에테르 또는 디페닐 에테르) 및 탄화수소(예 : 헥산, 벤젠, 이소옥틸 또는 파라핀오일)이 있다. 분산 매질로서 물에 대해 바람직한 희석제는 디-n-부틸 에테르 또는 디-n-아밀 에테르 등과 같은 탄소수 6이상의 디알킬 에테르이다. 기타의 바람직한 희석제에는, 출발물질로서 알코올, 예를들어 부탄올 중으로 산화에틸렌 및 산화 프로필렌의 혼합물 또는 단독적으로 산화 프로필렌을 가함으로써 형성된, 산화 에틸렌 및 산화 프로필렌의 랜덤(random)분포를 가지거나 또는 산화에틸렌 및 산화프로필렌의 블록 공중합체[여기서 폴리(옥시 에틸렌) 단위는 폴리(옥시 프로필렌)쇄의 양쪽 말단에 첨가된다]일 수 있는 폴리글리콜이 있다.
희석제의 첨가량은 광범위하게 변화시킬 수 있다. 이것은 특히, 중합체에 있어서 단량체 조성물 특히, 가교결합제 함량, 목적하는 기공도(기공 크기), 및 소기의 정확한 목적에 의존한다. 따라서, 높은 가교 결합도의 경우에는, 희석제의 양이 특정한 기공도(기공 크기)를 수득할 수 있을 정도로 높은 것이 적당하다. 이와 유사하게, 주어진 가교결합도에 있어서, 기공도(기공크기)가 클수록 희석제의 양은 많다. 물론, 한편으로 기계적 강도가 불충분하게 낮기 때문에, 희석제의 사용량에는 한계가 있다. 대부분의 경우, 희석제의 용적이 사용된 단량체의 용적의 0.02 내지 5배, 바람직하게는 0.04 내지 3배일 경우에는 만족스러운 결과가 수득될 것이다.
비닐 아실레이트, 가교 결합제 및 추가의 공단량체(들)는 상기량의 단량체 단위를 함유하는 중합체를 제조할 수 있는 양으로 사용된다.
본 발명에 따른 방법은 통상적으로 20 내지 150℃, 바람직하게는 20 내지 100℃의 온도 및 1 내지 10, 바람직하게는 1 내지 5bar의 압력하에 교반기가 장착된 반응 용기중에서 수행하는 것이 유리하다. 비이드 중합체의 입자크기는 교반 속도 및 상 비율(phase ratio)에 의해 통상적인 방법으로 측정된다. 반응 용기는 진공상태인 것이 바람직하며, 환류 냉각기, 여과기, 기체 유입관 및 온도-측정기를 장착시킬 수 있다. 이 용기는 통상적으로 액체조(bath), 예를 들어 오일조 또는 수조로 가열 및 냉각시킨다. 본 발명에 따른 방법은 대기 산소의 부재하에서 수행하는 것이 유리하다. 이러한 이유 때문에 반응을 개시시키기 전에 반응 용기를 불활성 기체, 바람직하게는 질소로 정화시킨다.
중합 반응이 종결된 후, 미반응된 단량체를, 예를들어 감압하에, 바람직하게는 0.1 내지 15mmHg의 압력하에서 증발시킴으로써 반응 용기로부터 제거한다. 잔류하는 단량체를 제거한 후, 분산매질을, 예를 들어 상층액을 침강, 여과 또는 흡입시킴으로써 고형 중합체로부터 분리시킨다. 경우에 따라, 우선 증기 증류에 의해 희석제를 제거할 수 있다. 그후, 경우에 따라, 저비점 유기용매(예 : 탄화수소, 저급 알코올 또는 아세톤)로 중합체를 세척하고, 최종적으로 통상 20 내지 100℃, 바람직하게는 20 내지 80℃의 온도하에 이상적으로 감압하에서 건조시킨다.
이렇게 수득된 폴리비닐 아세테이트 겔은 친수성이 아니며, 에스테르기는 물중에서 사용하기 전에 가수분해시켜야 한다. 가수분해는 알칼리성 조건하에 생성물을 알코올(예 : 메탄올)중에서 팽윤시키고, 알칼리성 수용액(예 : 수산화나트륨 용액)을 가하거나, 형성된 에스테르를 예를 들어, 증류에 의해 계속해서 제거시키면서 알코올-팽윤된 생성물을 촉매적 양의 산 또는 염기를 사용하여 에스테르 교환반응 시킴으로써 통상적인 방법으로 수행할 수 있다[참조 : 독일연방공화국 특허 제1,517,935호]. 이러한 가수분해는 겔의 친수성도를 소기의 용도에 따라 일정하게 유지시킬 수 있도록, 임의의 단계에서 중시시킬 수 있다.
비이드 유형의 가교결합된 폴리비닐 알코올 겔을 공유결합에 의해 담체상에 고정시킬 생물학적 활성 물질에 대한 담체로서 사용할 경우, 상기의 겔을 소위 스페이서에 의해 먼저 변형시키는 것이 대부분의 경우에 유리하다. 본 발명의 목적을 위해, 스페이서는 지지 중합체 및 생물학적 활성물질 모두와 반응하여, 말하자면, 둘 사이에 브리지(bridge)를 형성하는 화합물이다. 비이드 중합체와 스페이서의 반응은 아실레이트기의 가수분해 직전, 또는 바람직하게는 직후에 수행할 수 있다. 전환도는 특히, 스페이서의 벌키성(bulkiness) 및 아실레이트기 또는 이로부터 형성된 2급 히드록실기의 접근성에 의존한다. 본 발명에 의하면, 적당한 스페이서는 본 목적을 위해 공지된 호모-및 헤테로-이 작용성 화합물이다. 이의 제2의 작용기가 고정시키려는 생물학적 활성물질에 커플링(coupling)된다[참조 : 독일연방공화국 특허 제2,421,789호 및 2,552,510호, Ullmanns Encyclopadie der technischen chemie(Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry), 4th Edition, Volume 10, page 540 및 "Characterization of Immobilized Biocatalysts", Verlag Chemie, Weinheim, 1979, page 53].
본 발명에 따라 사용된 스페이서의 예에는 하기의 기들을 도입시키는 화합물이 있다 : -(CH2)n-NH2(여기서, n은 2 내지 12이다),
Figure kpo00002
(여기서, n은 1 내지 8이다),
Figure kpo00003
(여기서, n은 1 내지 8이다),
Figure kpo00004
[여기서, n은 1 내지 8이고, X는 H, OH, 할로겐, N3또는 OR(여기서 R은 탄소수 1 내지 6의 알킬라디칼이다)이다], -(CH2)n-CH(여기서, n은 1 내지 6이다), 및 -CH2
Figure kpo00005
Y(여기서, Y는 NH2, N2또는 NCO이다).
본 발명에 의하면, 바람직한 스페이서는 가수분해-저항성 화학 결합을 형성하는 것이며, 에피클로로히드린 또는 이의 동족체(α,R-에폭시-ω-할로게노알칸)을 포함한다. 폴리비닐 알코올(폴리비닐아실레이트)은 용매의 부재 또는 존재하에, 바람직하게는 촉매의 존재하에서 반응시킨다. 반응은 통상적으로 실온 내지 에피클로로히드린의 환류온도(113 내지 115℃)의 온도에 따라 30분 내지 24시간 걸린다. 적당한 촉매의 예에는 NaOH(분말형), 수용성 알칼리, 디메틸포름아미드, 트리에틸아민 및 기타의 산 수용체 등이다.
본 발명의 목적을 위해, 생물학적 활성 물질은 효소, 활성체, 억제제, 항원, 항체, 비타민, 호르몬, 효과인자, 항생제, 프로테인 등과 같이, 생체내 또는 시험관내에서 활성인 공지된 천연 또는 합성 물질이다. 프로테인은 또한 금속이온, 다당류, 포르피린기, 아데닌 디뉴클레오티드, 리보헥산, 인지질 등과 같은 비프로테인 치환부위를 갖는 프로테인을 포함한다. 생물학적 활성 물질은 심지어 폴리펩티드 분획, 예를 들어 효소분자의 활성부위를 포함한다.
본 발명에 의하면, 효소는 상기한 생물학적 활성 물질중에서 바람직하다. 효소의 예에는 우레아제, 페닐실린 아실아제, D-아미노산 옥시다제, 아데닐 탈아미노효소, 알코올 탈수소효소, 아스파라기나제, 카르보옥시팹티다제, 키모트립신, 디포스포에스테라제, α-글루코시다제, 글루코스 이소메라제, 글루코스 옥시다제, 글루코스-6-인산염 탈수소효소, 헥소키나제, 전환효소, R-락타마제, 락타제, 유산염 탈수소효소, 여러가지 렉틴, NAD 키나제, 뉴라미니다제, 파파인, 페르옥시다제, 알칼리 및 산 포스파타제, 5'-포스포디에스테라제, 초성 포도산염 키나제, 리보헥산효소 및 트립신 등이 있다.
다른 생물학적 활성 물질의 예에는 인슐린 및 여러가지 뇌하수체 호르몬과 같은 호르몬, G, M, A, D 및 E류의 항체와 같은 감마-글로불린 분획의 프로테인, 항혈우병성 인자, 혈액-응괴 인자와 같은 다른 혈액인자, 간염, 회백수염, 마진, 유행성 이하선염, 인플루엔자 또는 토끼 항체와 같은 특별 항체, 간염, 회백수염, 마진, 유행성 이하선염, 인플루엔자, 또는 항원(1회 불용화된)이 불용성 형태로 남아 계속해서 신체에 침투하여 손상시킬 수 없는, 적합한 항체 반응을 정제시키거나 자극시키기 위한 토끼 항원과 같은 항원, 및 헤모글로빈 또는 알부민과 같이 통상적인 신체프로테인 등이 있다.
생물학적 활성 물질과의 고정 반응은 예를 들어, 독일연방공화국 공개공보 제2,407,340호 또는 독일연방공화국 특허 제2,215,687호, 제2,421,789호 및 제2,552,510호에서 기술된 것처럼 통상적인 방법으로 수행된다. 이 반응은 통상적으로 실온, 즉 +40℃이하에서 수행하며, 특히 고정시키려는 생물학적 활성물질이 본래 불안정한 경우에는 +10℃이하, 바람직하게는 0 내지 +5℃에서 수행한다.
고정 반응은 약 중성 pH, 예를들어 pH 5 내지 9에서 수행하는 것이 바람직한데, 이는 대부분의 생물학적 활성물질이 상기 pH 범위에서 가장 안정하기 때문이다. 거대 다공성 비이드 중합체는 중성 범위에서조차 대부분의 문제의 물질과 급격한 반응을 일으키기 때문에, 통상적으로 이보다 강산 또는 강알칼리성 조건을 유지시킬 필요는 없다. 생성된 결합은 장시간의 저장기간동안 충분히 안정하며, 조작중에도 고안정성을 나타낸다.
본 발명은 하기 실시예에 의해 보다 상세히 기술될 것이다.
[실시예 1]
97.5g의 비닐아세테이트, 2.5g의 디비닐 에틸렌우레아 및 0.1g의 아조이소부티로니트릴의 용액을 함유하는 유기상을, 교반기, 온도계 및 환류 냉각기가 장착된 플라스크에서 질소하에 4.2g의 Na2HPO4, 0.25g의 NaH2PO4, 7.0g의 폴리비닐피롤리돈 및 700㎖의 H2O를 함유하는 수용성 상중에 교반시키면서 현탁시킨다. 뜨거운 조(hot bath)를 사용하여 75℃로 가열시킴으로써 중합을 개시시킨다. 24시간 후, 온도를 85℃까지 증가시킨다. 추가의 2시간이 지난 후 중합이 완결된다. 수득된 현탁액을 얼음에 부어 냉각시키고, 미세하게 분산된 에멀젼을 반복세척한 후, 중합체를 여과시키고, 건조시킨다. 수득된 건조 생성물의 양은 80g이다.
생성물을 가수분해시키기 위해, 이의 50g을 메탄올중에서 팽윤시키고, 25℃에서 H2O중의 NaOH 50g용액을 가열 또는 냉각시키지 않으면서 가한다. 24시간 후, 생성물을 여과시키고, 중성이 될때까지 많은 양의 물로 세척하고 건조시킨다.
생성물을 겔 크로마토그래피에 사용한다. 가수분해되지 않은 겔은 테트라하이드로푸란중의 폴리스티렌에 대해 1,200의 제한 분자량을 가짐이 밝혀진다. 가수분해된 생성물은 물중의 폴리에틸렌 글리콜에 대해 1,100의 제한 분자량을 가진다.
[실시예 2]
실시예 1의 중합반응을 수용성 상에서 140g의 NaCl의 존재하에 수행한다. 현탁액을 냉-수중에 부어 반응을 종결시킬때, 모든 비이드 중합체가 거의 에멀젼되지 않도록 즉시 침전시킨다. 비이드 중합체의 분리성 수율은 90%이상이다(중합성 상 기준).
테트라하이드로푸란중의 폴리스티렌에 있어서, 겔의 제한 분자량은 1,500이하로 증가되며, 가수분해 후 제한분자량은 물중의 폴리에틸렌 글리콜에 대해 1,300인 것으로 밝혀진다.
[실시예 3]
가교결합 성분이 2.0g의 디비닐에틸렌-우레아 및 0.5g의 3,3-디메틸펜타디엔 2,4-디아세테이트를 함유하는 것을 제외하고는 실시예 1의 중합반응을 반복 수행한다.
겔 크로마토그래피 데이타는 실시예 1의 것에 상응한다.
3,3-디메틸펜타디엔 2,4-디아세테이트를 하기와 같이 루이스 산의 존재하에 3-메틸부탄-2-온을 무수아세트산으로 아실화시키고 계속해서 생성 디케톤을 이소프로펜일 아세테이트와 반응시켜 제조한다.
순수하게 증류시킨 3-메틸렌 부타논 330g(3.84㏖)을 플라스크중에서 공업적 무수 아세트산(95%) 500g과 혼함시키고, ZnCl2160g(1.15㏖)을 질소 증기하에 교반시키면서 가한다. 플라스크의 내용물을 120℃에서 3시간 동안 가열시키고, 냉각시킨 후, 수 제트 진공하에서 증류시킨다.
이렇게 하여, 62℃(12mmHg)의 비점 및 86% GC순도를 가지는 조 생성물 363g을 제조한다.
수 제트 진공하에서 이 물질을 재증류시키면, 60℃(12mmHg)의 비점을 가지는 균일 생성물 289g이 제조되며, 이는1H-NMR 분석에 의해 3,3-디메틸펜탄-2,4-디온(1.3ppm 및 2.05ppm에서 단일 피이크)으로 밝혀졌다.
3,3-디메틸펜탄-2,4-디온 110g을 질소하에 500g의 건조 이소프로펜일 아세테이트와 혼합시키고 5g의 파라-톨루엔 설폰산을 첨가시킨다. 이 혼합물을 짧은 충진컬럼하에 환류 온도로 가열시키고, 증류분획을 수일간에 걸쳐 12시간 간격으로 단주기 동안 54℃ 내지 90℃에서 분리시킨다. 반응 혼합물의 조성물을 기체 크로마토그래피로 검사한다. 6일동안 반응시킨 후, 탄산염을 가하여 산촉매를 중화시키고 반응 혼합물을 수제트 진공하에서 급속히 증류시킨다. 대기압하에서 재증류시켜, 미반응된 이소프로페닐 아세테이트를 제거한다. 수 제트 진공하에서 재 증류시켜, 기체 크로마토그래피에 의해 100% 순수한 물질 39g(87.5℃/12mmHg)을 제조한다. 이 생성물은 3,3-디메틸펜트-1-엔-4-온-2-일 아세테이트(1H-NMR : 1.3ppm 및 2.1ppm에서 단일 피이크, 4.9ppm에서 이중 피이크)이다.
조생성물의 잔류물을 더 증류시켜, 0.01mmHg의 오일펌프 진공하에서 모노에놀 아세테이트 및 제2의 고-비등 화합물의 생성 혼합물을 제조한다. 54℃내지 65℃에서 0.01mmHg하에 순도(GC)가 93%인 추가의 디엔올 아세테이트 15g을 제조한다.
[실시예 4]
불균일 가교결합 비이드 중합을 수행하기 위해, 80g의 비닐 아세테이트, 20g의 디비닐에틸렌우레아, 1g의 아조이소부티로니트릴 및 200g의 n-헵탄올 용액을 물 500ml중의 NaH2PO40.175g, Na2HPO43g 및 폴리비닐 피롤리돈 5g 용액에서 분산 및 중합시킨다. 온도변수는 실시예 1의 것에 상응한다. 4시간 후 희석액을 증기 증류에 의해 제거시키고 생성물을 분리한다. 완전히 구형의 투명한 비이드 중합체 77.7g이 수득된다. 평균 입자 직경은 약 30㎛이다(교반 속도 460rpm).
생성물의 외부용적은 1.55㎖/g이다. 테트라하이드로푸란에서 이의 겔흡착 용적은 5.77㎖/g이며, 폴리스티렌에 있어서 제한 분자량은 80,000이다. 가수분해된 생성물의 외부 용적은 1.54㎖/g이며, 이는 물중에서 5㎖/g로 팽윤되며, 폴리에틸렌 글리콜에 있어 제한분자량은 20,000이다.
가수분해된 비이드 공중합체 20g을 실온에서 200㎖의 에피클로로히드린중에 24시간 동안 팽윤시킨다. 다음에 천천히 교반시키면서 온도를 113 내지 115℃로 상승시키고, 4시간동안 유지한다. 냉각시킨 후 혼합물을 흡인 여과시키고, 공중합체를 아세톤중에서 1시간동안 1회 반복 연마시킨다. 아세톤-흡수성 공중합체를 진공실에서 50℃하에 일정 중량으로 건조시킨다. 에폭시 당량은 244이다[악센(Axen)방법으로 측정(참조 : Acta Chem. Scand. Volume 29(1975) No.4)].
[실시예 5]
희석제를, 분자량이 약 1,200이며 출발물질로서 부탄올에 산화에틸렌 및 산화프로필렌을 가함으로써 수득된 산화 에틸렌 및 산화프로필렌의 폴리글리콜(중량비 1:1; 랜덤 분포) 20g과 2-에틸헥산올 80g의 혼합물로 대체하는 것을 제외하고는 실시예 4의 중합반응을 반복수행한다[참조 : "Polyglykol B 11/50" from Hoechst AG].
이를 분리시켜, 460rpm의 교반속도에서 입자 크기가 50 내지 200㎛인 백악-백색 구형 비이드 중합체 76g을 제조한다.
[실시예 6]
희석제를, 약 700의 분자량을 가지고 출발물질로서 부탄올에 산화 프로필렌을 가함으로써 수득된 폴리글리콜 30g과 2-에틸헥산올 70g의 혼합물로 대체하는 것을 제외하고는, 실시예 4의 중합반응을 반복수행한다[참조 : "Polyglykol B 01/20" from Hoechst AG].
이를 분리시켜, 460rpm의 교반속도에서 입자 크기가 50 내지 200㎛인 백악-백색 구형 비이드 중합체 82g을 제조한다.
[실시예 7]
희석제를, 출발물질로서 부탄올에 산화 에틸렌 및 산화프로필렌을 가함으로써 수득된 산화에틸렌 및 산화프로필렌의 폴리글리콜(중량비 : 4 : 1 : 랜덤 분포 ; 분자량 : 약 5,000) 20g과 2-에틸렌헥산올 80g의 혼합물로 대체하는 것을 제외하고는, 중합반응을 반복수행한다[참조 : "Poyglykol p 41/300"from Hoechst AG].
이를 분리시켜서, 460rpm의 교반속도에서 입자 크기가 50 내지 200㎛ 범위내인 백악-백색 구형 비이드 중합체 68g을 제조한다.
[실시예 8]
희석제를, 총분자중에 폴리옥시에틸렌을 10중량% 함유하며 폴리옥시에틸렌 단위가 폴리옥시프로필렌쇄의 양쪽 말단에 첨가되는 폴리옥시프로필렌 및 폴리옥시에틸렌의 폴리에테르 글리콜(분자량 약 1,750) 20g과 2-에틸헥산올 80g의 혼합물로 대체하는 것을 제외하고는, 실시예 4의 중합반응을 반복수행한다.
이를 분리시켜, 460rpm의 교반속도에서 입자크기가 50 내지 200㎛범위내인 백악-백색 구형 비이드 중합체 72g을 제조한다.
[실시예 9]
희석제를, 디-n-부틸에테르 100g과 2-에틸헥산올 100g의 혼합물로 대체하는 것을 제외하고는, 실시예 4의 중합반응을 반복수행한다. 이를 분리시켜, 실시예 4에서와 같은 교반속도에서 입자크기가 70㎛인 백악-백색의 완전 구형의 비이드 중합체 83g을 제조한다.
생성물의 외부 용적은 2.81㎖/g이며, 테트라하이드로푸란중에서의 겔 흡착 용적은 7.48㎖/g이고, 폴리스티렌에 대한 제한 분자량은 2×106이다. 가수분해된 생성물은 1.6㎖/g의 외부 용적을 가지며, 물중의 겔 흡착 용적은 12.8㎖/g이며, 폴리에틸렌 글리콜에 대한 제한 분자량은 2×106이다.
[실시예 10]
분산된 상이 70g의 비닐 아세테이트, 30g의 디비닐에틸렌우레아, 1g의 아조비스이소부티로니트릴 및 158g의 디-n-부틸 에테르를 함유하는 것을 제외하고는, 실시예 4의 중합반응을 반복수행한다. 이로부터 200㎛의 평균직경을 가지는 백색비이드 중합체 77g을 제조한다.
외부 용적은 2.9㎖/g이며, 테트라하이드로푸란중의 겔 흡착 용적은 7.45㎖/g이다. 생성물의 제한 분자량은 겔 크로마토그래피로 결정될 수 없으며, 25,000,000의 분자량을 가지는 폴리스티렌은 거의 내부 용적으로 용출된다. 주사전자 마이크로그래프는 직경이 100,000Å이상인 기공을 나타낸다.
가수분해된 생성물은 6.5㎖/g의 외부 용적을 가지며, 이는 골격 구조가 완전히 보존되는 것을 나타낸다. 물중의 겔 흡착 용적은 14.5㎖/g이며, 겔 크로마토그래피에 의한 분석으로, 3.8×106의 분자량을 가지는 폴리에틸렌 글리콜은 거의 완전한 내부 용적에 도달된다.
가수분해된 공중합체 10g을 에피클로로히드린 100g중에서 24시간동안 팽윤시킨 다음, 교반시키면서, 온도를 점차적으로 110℃로 상승시키고, 12시간 동안 유지시킨다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 흡인여과시키고, 공중합체를 아세톤중에서 한번에 2시간동안 천천히 반복교반시킨다. 진공실 내에서 50℃하에 건조시킨다. 에폭시 당량은 담체 물질 g당 105μ㏖이다.
본 발명에 따른 비이드 유형의 중합체 담체와 생물학적 활성 물질의 반응
[실시예 11]
트립신 용액(6.25㎎/㎖, 345u/㎖) 800㎕를 실시예 4에서와 같이 제조된 담체 100㎎에 가한다. 1M의 인산칼륨 완충제를 효소 용액에 가하여, pH 7.8이 되게 하고, 효소의 활성중심을 안정화시키기 위해 1.6×10-2M 벤즈아미딘 용액을 가한다. 효소를 담체에 고정시키는 시간은 25℃에서 72시간이다. 다음에 담체에 공유결합되지 않은 트립신을 유리프리트(fritte)를 통해 흡인 여과시키고 잔유물을 1M 염화나트륨으로 반복 세척시킨 다음 완충용액으로 세척한다. 여과기 상에서 습윤성 물질 324㎎이 수득된다. 37℃ 및 pH 7.8에서 N1-벤조일-L-아르기닌 에틸 에스테르 히드로클로라이드(BAEE)를 사용하는 자동 적정기로 측정하고, 습윤 상태에서 227.5u/g의 값 또는 진공중량을 기준으로 하여 356u/g의 값을 가지는 것을 제조한다. 출발물질 및 세척수 작용으로부터 고정수율은 20%로 계산될 수 있다.
[실시예 12]
1M 인칼륨 완충액으로 pH 8.0으로 만든 우레아제 용액(30㎎/㎖, 51u/㎖) 150㎕를 실시예 10에서와 같이 제조된 에폭시화된 담체 200㎎에 가한다. 실온에서 16시간 동안 고정시킨 후, 담체를 1M 연화 나트륨용액으로 반복세척시킨 다음, 완충 용액으로 세척한다. 여과기 상에서 습윤성 담체 754㎎이 수득된다. 30℃ 및 pH 8.0에서 기질로서 우레아를 사용하는 자동적정기로 측정하여, 100u/g(습윤) 또는 담체의 건조 중량기준 377u/g의 활성이 나타난다. 출발물질 및 세척 수작용으로부터 고정 수율은 98%로 계산될 수 있다.

Claims (14)

  1. 분산 매질, 하나이상의 불활성 희석제(이 불활성 희석제의 용적은 사용된 단량체 용적의 0.02 내지 5배이다) 및 분산 안정화제의 존재하 및 추가의 첨가제 및 자유 라디칼 개시제의 존재 또는 부재하에 산소를 차단시키면서 1 내지 10bar의 압력 및 20 내지 150℃의 온도에서, 비닐 아실레이트와 공중합될 수 있는 또 다른 단량체(이 단량체의 양은 총 중합체의 10중량%를 초과하지 않는다)의 존재 또는 부재하에 비닐아실레이트와 하기 일반식(Ⅰ) 및 (Ⅱ)의 화합물중에서 선택된 하나이상의 가교결합제를 비이드 공중합 반응시킨 다음, 생성된 중합체중 비닐 아셀레이트 단위의 아실레이트 그룹을 적어도 부분적으로 가수분해시킴을 특징으로 하여, 비닐 아실레이트 단위와 일반식(Ⅰ) 및 (Ⅱ)의 화합물중에서 선택된 하나 이상의 가교결합제 단위(이러한 가교결합제 단위의 양은 생성된 중합체의 0.1 내지 60중량%이다)를 함유하는 가교결합된 중합체를 제조하는 방법.
    Figure kpo00006
    상기식에서, R1및 R2는 동일하거나 상이하며, 각각 비닐, 1-아실옥시비닐, 알릴 또는 2-아실옥시알릴을 나타내고, A는 탄소수 2 내지 8의 2가 탄화수소 라디칼을 나타내며, B는 탄소수 1 내지 8의 2가, 3가 또는 4가 탄화수소 라디칼을 나타내고, m은 상기 B 라디칼의 원자가에 상응하며, X는 아실옥시를 나타낸다.
  2. 제1항에 있어서, 비닐 아실레이트가 비닐 아세테이트인 방법.
  3. 제1항에 있어서, 분산 매질이 알칼리성 완충 수용액인 방법.
  4. 제1항에 있어서, 분산 매질이 전해질 0 내지 50중량%를 함유하는 방법.
  5. 제1항에 있어서, 분산 매질이 분산 안정화제로서 비이온성 계면활성제를 함유하는 방법.
  6. 제1항에 있어서, 불활성 희석제로서 탄소수 6이상의 디알킬에테르를 사용하여 중합반응을 수행하는 방법.
  7. 제1항에 있어서, 일반식(Ⅰ)의 R1및 R2라디칼중의 아실옥시기 또는 일반식(Ⅱ)중의 아실옥시 라디칼의 탄소수가 2 내지 6인 방법.
  8. 제1항에 있어서, 가교 결합제 단위의 양이 1 내지 50중량%인 방법.
  9. 제1항에 있어서, 비닐 아실레이트 단위의 아실옥시기중 10중량%이상이 히드록실기로 대체되는 방법.
  10. 제1항에 있어서, 알코올로 처리하여 팽윤시킨 생성된 중합체를 수성 알칼리의 존재하에서 또는 촉매량의 산 또는 염기를 사용한 에스테르 교환반응에 의해서 가수분해시키는 방법.
  11. 제1항에 따라 생성된 가교결합된 중합체를 그 자체로 또는 스페이서에 의해 전환시킨 후에 담체로서 사용함으로써 제조한 담체-결합된 생물학적 활성물질.
  12. 제11항에 있어서, 스페이서가 에피클로로하이드린인 생물학적 활성물질.
  13. 제1항에 따라 생성된 가교결합된 중합체로부터 수득되는 크로마토그래피용 흡수제.
  14. 제1항에 있어서, 평균입자크기가 20 내지 800㎛이고, 평균기공직경이 10,000㎚인 거대 기공성 비이드의 형태로 존재하는 중합체를 제조하는 방법.
KR1019840007853A 1983-12-13 1984-12-12 가교결합 중합체의 제조방법 KR920006761B1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19833344912 DE3344912A1 (de) 1983-12-13 1983-12-13 Vernetzte polymerisate, verfahren zu ihrer herstellung und ihre anwendung
DEP3344912.0 1983-12-13

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR850004776A KR850004776A (ko) 1985-07-27
KR920006761B1 true KR920006761B1 (ko) 1992-08-17

Family

ID=6216728

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1019840007853A KR920006761B1 (ko) 1983-12-13 1984-12-12 가교결합 중합체의 제조방법

Country Status (22)

Country Link
US (2) US4906715A (ko)
EP (1) EP0150350B1 (ko)
JP (2) JPS60152518A (ko)
KR (1) KR920006761B1 (ko)
AR (1) AR244264A1 (ko)
AT (1) ATE40388T1 (ko)
AU (1) AU569353B2 (ko)
BR (1) BR8406380A (ko)
CA (1) CA1241146A (ko)
DE (2) DE3344912A1 (ko)
DK (1) DK167152B1 (ko)
ES (1) ES538489A0 (ko)
FI (1) FI85028C (ko)
GR (1) GR81231B (ko)
HU (1) HU199519B (ko)
IE (1) IE58209B1 (ko)
IL (1) IL73793A (ko)
NO (1) NO166188C (ko)
NZ (1) NZ210512A (ko)
PH (1) PH21340A (ko)
PT (1) PT79659B (ko)
ZA (1) ZA849660B (ko)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3714276C2 (de) * 1987-04-29 2002-09-19 Celanese Ventures Gmbh Hydrophile, vernetzte Polymerisate, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung
DE3737335A1 (de) * 1987-11-04 1989-05-18 Basf Ag Verfahren zur herstellung eines biokatalysators und dessen verwendung zur razematspaltung
DE3842025A1 (de) * 1988-12-14 1990-07-05 Hoechst Ag Verfahren zur herstellung von l-phosphinothricin
DE4028119C1 (ko) * 1990-09-05 1991-12-05 Hoechst Ag, 6230 Frankfurt, De
TW198064B (ko) * 1990-12-24 1993-01-11 Hoechst Ag
DE4218785A1 (de) * 1992-06-06 1993-12-09 Hoechst Ag 7-Amino-3-methoxy-3-cephem-4-carbonsäureester - Hydrolase, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung
NZ324776A (en) * 1995-12-28 1998-12-23 Eco Solutions Ltd Aqueous composition for plasticising paint prior to stripping
US7276283B2 (en) * 2004-03-24 2007-10-02 Wisconsin Alumni Research Foundation Plasma-enhanced functionalization of carbon-containing substrates
CN101258175B (zh) 2005-08-03 2011-11-16 默克专利股份公司 亲水交联聚合物
EP1754534A1 (de) 2005-08-03 2007-02-21 MERCK PATENT GmbH Hydrophiles vernetztes Polymer
US8029902B2 (en) * 2006-12-11 2011-10-04 Wisconsin Alumni Research Foundation Plasma-enhanced functionalization of substrate surfaces with quaternary ammonium and quaternary phosphonium groups
GB2473814B (en) * 2009-09-16 2014-06-11 Spheritech Ltd Hollow particulate support
CN102952048A (zh) * 2011-08-30 2013-03-06 中国石油化工股份有限公司 一种2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸粗产品的精制方法及其产品
EP4116338A1 (en) * 2012-02-09 2023-01-11 Life Technologies Corporation Hydrophilic polymeric particles and methods for making same
WO2016115101A1 (en) * 2015-01-15 2016-07-21 Dionex Corporation Chromatographic material having improved ph stability, method for preparation thereof and uses thereof
CN108064253B (zh) 2015-07-02 2020-09-15 生命技术公司 由羧基官能丙烯酰胺形成的聚合物基质
CN108659428A (zh) * 2018-05-23 2018-10-16 宁波宝亭生物科技有限公司 一种聚乙烯醇水凝胶的制备方法

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2541152A (en) * 1948-12-07 1951-02-13 Du Pont N-vinyl alkylene ureas and polymers thereof
FR1215971A (fr) * 1958-10-23 1960-04-21 Rhodiatoce S P A Alcoolyse d'esters polyvinyliques
NL297274A (ko) * 1962-09-07
NL6702806A (ko) * 1966-03-31 1967-10-02
US3619371A (en) * 1967-07-03 1971-11-09 Nat Res Dev Production of a polymeric matrix having a biologically active substance bound thereto
GB1304189A (ko) * 1969-12-16 1973-01-24
SE394820B (sv) * 1970-01-23 1977-07-11 Exploaterings Ab Tbf Sett att till en i vatten oloslig polymer kovalent binda biologiskt verksamma elektrolyter, sasom aminosyror, peptider, proteiner, nukleotider och nukleinsyror genom reaktion med en sadan polymer innehallande ...
US3755237A (en) * 1971-03-15 1973-08-28 Grace W R & Co Vinyl acetate-alpha olefin copolymer compositions
JPS5522485B2 (ko) * 1971-11-15 1980-06-17
DE2215687C3 (de) * 1972-03-30 1980-12-11 Bayer Ag, 5090 Leverkusen Neue wasserunlösliche Proteinpräparate
DE2237316C3 (de) * 1972-07-29 1985-08-29 Roehm Gmbh, 6100 Darmstadt Verfahren zur Herstellung perlförmiger, vernetzter, wasserunlöslicher Mischpolymerisate und ihre Verwendung
DE2255263C3 (de) * 1972-11-11 1975-06-05 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen Verfahren zur Herstellung von unlöslichen, vernetzten, nur wenig quellbaren Polymerisaten des N-Vinylpyrrolidon-(2)
CS167593B1 (ko) * 1973-02-05 1976-04-29
BE810605A (fr) * 1973-03-01 1974-05-29 Enzymes et autres proteines liees a des supports polymeriques contenant des unites de carbonate de vinylene
SE369825B (ko) * 1973-05-11 1974-09-23 Abu Ab
DE2552510C3 (de) * 1975-11-22 1981-02-19 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Biologisch aktive Verbindungen und Verfahren zu ihrer Herstellung
JPS52138077A (en) * 1976-03-09 1977-11-17 Toyo Soda Mfg Co Ltd Production of porous polyvinyl alcohol hard gel
SE7712058L (sv) * 1976-11-12 1978-05-13 Ceskoslovenska Akademie Ved Tredimensionell berare av oorganiskt, porost material och en reaktiv polymer och ett forfarande for framstellning derav
US4219454A (en) * 1978-09-05 1980-08-26 Air Products And Chemicals, Inc. Vinyl acetate copolymer emulsions for paint
US4314032A (en) * 1978-10-26 1982-02-02 Kureha Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha Crosslinked polyvinyl alcohol gel
JPS5861463A (ja) * 1981-10-07 1983-04-12 Kureha Chem Ind Co Ltd 液体クロマトグラフイ−用担体及び該担体を用いる脂溶性物質の分離精製方法
DE3209224A1 (de) * 1982-03-13 1983-09-15 Basf Ag Verfahren zur herstellung von unloeslichen, nur wenig quellbaren polymerisaten von basischen vinylheterocyclen und deren verwendung
CA1217195A (en) * 1983-03-10 1987-01-27 Carmine P. Iovine Polymerizable imidazolidinones and polymers thereof useful as nonwoven binders
DE3404021A1 (de) * 1983-05-28 1984-11-29 Hoechst Ag, 6230 Frankfurt Makroporoese perlpolymerisate, verfahren zu ihrer herstellung und ihre anwendung
US4489192A (en) * 1983-10-05 1984-12-18 National Starch And Chemical Corporation Cationic vinyl ester based polymer latices, their preparation and use as formaldehyde-free binders
DE3629176A1 (de) * 1986-08-28 1988-03-17 Hoechst Ag Vernetzte polymerisate mit carbonatestergruppen und verfahren zu ihrer herstellung

Also Published As

Publication number Publication date
NO166188B (no) 1991-03-04
IE843192L (en) 1985-06-13
HUT38374A (en) 1986-05-28
HU199519B (en) 1990-02-28
CA1241146A (en) 1988-08-23
FI844889A0 (fi) 1984-12-11
PH21340A (en) 1987-10-13
NO844994L (no) 1985-06-14
DE3344912A1 (de) 1985-06-20
NO166188C (no) 1991-06-12
FI85028C (fi) 1992-02-25
AU569353B2 (en) 1988-01-28
FI85028B (fi) 1991-11-15
ES8600776A1 (es) 1985-11-01
DK594884D0 (da) 1984-12-12
BR8406380A (pt) 1985-10-08
EP0150350A2 (de) 1985-08-07
ES538489A0 (es) 1985-11-01
GR81231B (en) 1985-04-17
IE58209B1 (en) 1993-08-11
DE3344912C2 (ko) 1989-10-05
PT79659B (de) 1986-11-18
DK167152B1 (da) 1993-09-06
EP0150350A3 (en) 1985-08-21
AU3657384A (en) 1985-06-20
JPH0689055B2 (ja) 1994-11-09
DE3476405D1 (en) 1989-03-02
FI844889L (fi) 1985-06-14
KR850004776A (ko) 1985-07-27
IL73793A0 (en) 1985-03-31
PT79659A (de) 1985-01-01
EP0150350B1 (de) 1989-01-25
DK594884A (da) 1985-06-14
US4906715A (en) 1990-03-06
JPS60152518A (ja) 1985-08-10
JPH05279411A (ja) 1993-10-26
AR244264A1 (es) 1993-10-29
IL73793A (en) 1989-09-28
NZ210512A (en) 1987-11-27
JPH0554379B2 (ko) 1993-08-12
US5079156A (en) 1992-01-07
ZA849660B (en) 1985-07-31
ATE40388T1 (de) 1989-02-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR920006761B1 (ko) 가교결합 중합체의 제조방법
US4568706A (en) Macroporous bead polymers, a process for their preparation and their use
US7381552B2 (en) Macroporous material in the form of plastic pearls
Xie et al. Design of reactive porous polymer supports for high throughput bioreactors: Poly (2‐vinyl‐4, 4‐dimethylazlactone‐co‐acrylamide‐co‐ethylene dimethacrylate) monoliths
CA1202748A (en) Hydrophilic polymer carrier for proteins
US4542069A (en) Vinylene carbonate polymers, a process for their preparation and their use
US4582860A (en) Oxirane resins for enzyme immobilization
US4931476A (en) Crosslinked polymers and a process for their preparation
US4767620A (en) Crosslinked polymers with carbonate ester groups, and a process for their preparation
KR20070114120A (ko) 다공성 플라스틱 비드 물질
KR920704135A (ko) 카치온 교환액체 크로마토그라피용 담체의 제조방법 및 그 담체를 사용한 당화 헤모글로빈의 정량방법

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
G160 Decision to publish patent application
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20030626

Year of fee payment: 12

LAPS Lapse due to unpaid annual fee