KR20050074428A

KR20050074428A - 미코플라스마 갈리셉티쿰 포뮬레이션

Info

Publication number: KR20050074428A
Application number: KR1020057000554A
Authority: KR
Inventors: 클레븐스탠리에이치.; 페르구손나올라
Original assignee: 더 유니버시티 오브 죠지아 리서치 파운데이션, 인코포레이티드
Priority date: 2002-07-13
Filing date: 2003-07-10
Publication date: 2005-07-18
Also published as: AU2003267992A8; MXPA05000467A; AU2003267992A1; WO2004006851A2; RU2005104100A; WO2004006851A3; EP1531861A2; CN1688336A; US20060257414A1; US7217420B2; ZA200500169B; JP2005533116A; US20040009179A1; BR0312640A; EP1531861A4

Abstract

본 발명은 닭목 조류의 독성 미코플라스마 갈리셉티쿰 감염을 예방하는 예방용 포뮬레이션을 제공한다. 이 포뮬레이션은 약학적 허용성 담체내에 살아있는 MG 균주 K5054 또는 이것의 유도체를 예방적 양으로 포함한다. 닭목 조류의 독성 미코플라스마 갈리셉티쿰 감염을 예방하는 백신 또한 제공된다. 포뮬레이션 및 백신 투여 방법 또한 제공된다.

Description

미코플라스마 갈리셉티쿰 포뮬레이션{MYCOPLASMA GALLISEPTICUM FORMULATION}

본 발명은 일반적으로는 가금류의 예방에 관한 것이며, 구체적으로는 미코플라스마 갈리셉티쿰(Mycoplasma gallisepticum; MG) 예방성 포뮬레이션에 관한 것이다.

조류 호흡기도의 병원균인 미코플라스마 갈리셉티쿰은 몰리쿠테스강(綱), 미코플라스마탈레스목(目), 및 미코플라스마타세아과(科)에 속한다. 특정 환경하에서, MG는 닭 및 칠면조(칠면조가 더 민감함), 특히 어린 조류의 급성 호흡기 질환과 관련될 수 있다. 이 병원균은 또한 엽조류에서 상부 호흡기 질환을 야기시킬 수도 있다. 감염 초기의 부종성 변화는, 관찰된 일부 병리학적 증상의 원인이 면역병리학적 반응일 수 있음을 암시한다. 보다 최근에는 이 병원균이 북미지역 멕시코양진이 결막염의 원인인 것으로 인지되었다. 질환의 심각도는 뉴캐슬병 및 감염성 기관지염과 같은 바이러스에 의한 2차 감염 및/또는 에스케리치아 콜라이 같은 박테리아에 의한 2차 감염 정도에 크게 영향을 받는다. 보다 만성적인 형태의 질환이 발생할 수도 있는데, 이는 번식종과 난용종에서의 알 생산량 감소를 야기시킬 수 있다. 감염은 감염된 알을 통해서 수직적으로 전파되고 밀접한 접촉에 의해서 수평적으로 전파된다. 다른 전파 방법은 비교적 잘 기록되어 있지 않다. MG는 2가지 방식으로 검출할 수 있다. MG의 존재는 무세포 배양액에서 유기체를 분리하거나, 감염된 조직 또는 스왑(swab) 샘플에서 그 DNA를 직접 검출함으로써 확인할 수 있다. 결과가 확실하지 않은 경우에는, 의심이 가는 물질을 닭 배아 또는 닭에 접종할 수 있다. 감염 여부는 유기체나 그 DNA의 증거, 또는 체액성 특이 항체의 검출을 통해 진단한다.

분리용 샘플은 장기나 조직의 스왑, 삼출물 또는 희석시킨 조직 균질화물로 구성되어 있다. 배양은 또한 안와하동(infraorbital sinus)이나 관절강(joint cavity)으로부터의 흡출물 및 난황 또는 배아를 사용하여 시도할 수 있다. 선택된 샘플은 임상적 신호 및 존재하는 임의의 손상에 의해 영향을 받을 것이다. 분리를 위해 고깃국 및 한천을 사용하지만, 일반적으로는 동정을 시도하기 전에 한천 상에 미코플라스마 콜로니를 수득할 필요가 있다. 이것이 곤란하다면, 초기에 물질을 미코플라스마 없는 닭 배아 또는 미코플라스마 없는 닭에 통과시키는 것이 유용할 수 있다.

일부 기본적인 생화학적 시험이 미코플라스마 분리물의 예비 분류에 유용할 수 있지만, 최종 동정은 혈청학적 시험 또는 DNA 시험으로 해야 한다. 이들 시험으로 가장 만족스러운 것은 PCR, 형광 항체 시험, 및 면역과산화효소 시험이다.

주로 중합효소 사슬 반응에 기초한 DNA 검출법은 전문 실험실에서 사용하고 있다. 몇몇 국가에서 시판용 키트가 판매되고 있는데, 이것은 필드 균주를 검출하여 그들을 백신 F 균주와 구별하는 데 사용할 수 있다.

MG 항체를 검출하는 데 몇몇 혈청학적 시험을 사용하지만, 특이성 및 민감성에 있어서 이들 모두 어느 정도 부족하다. 이들은 개별적인 조류를 시험하는 것보다는 무리를 검색하는 데 더 만족스럽다. 가장 일반적으로 사용되는 것은 급속 혈청 응집(RSA) 시험, 효소 결합 면역흡수 검정법(ELISA) 및 혈구응집 억제(HI) 시험이다. RSA 시험에서는, 시판용 착색 MG 항원을 사용하여 개별적 조류의 혈청을 응집에 대해 시험한다. 2분 내에 항원과 응집 반응을 나타내는 닭 또는 칠면조 혈청은 56℃에서 30분 동안 가열하여 재시험한다. 특히 희석되었을 때도 여전히 반응하는 혈청을 양성인 것으로 간주한다. 이어서 이들을 ELISA 또는 HI 시험으로 확인할 수 있다.

미코플라스마 갈리셉티쿰(MG)은 만성 호흡기 질환, 식육용 조류의 육질 저하 및 난용종에서의 생산량 저하로 인해 닭 및 칠면조에서 유의적인 경제적 손실을 야기할 수 있다. 중요한 경제적 영향력을 갖는 산발성 발병이 칠면조 및 구이용 닭에서 발생하면, 이는 상업적 난용종에 타격이 큰 풍토병 감염을 남긴다.

MG 제어의 바람직한 방법은 무-MG 무리를 유지하는 것이지만, 생백신 및 비활성 백신이 둘다 사용되어 왔다.

원칙적으로 백신은 2그룹, 즉 생(약독)백신 및 비활성 백신으로 분류할 수 있다. 생백신의 이점에는 숙주의 면역 시스템과 관련된 모든 천연형 감염제의 면역원성 결정인자가 표현된다는 것과, 백신처리한 숙주내에서 증식하는 고유의 성질 때문에 필요한 면역화제의 양이 비교적 소량이라는 것이 포함된다. 생백신의 주요 단점은 안전성에 대한 우려인데, 생백신이 (면역타협성) 동물에서 질병을 유발할 수도 있고, 살아있는 미생물이 독성으로 되돌아가기까지 함으로써 동물들이 독성 감염을 겪을 수도 있다.

안전성 측면과 관련된 단점은 비활성 백신에 의해서는 나타나지 않기 때문에, 생백신을 능가할 수 있는 주요 이점을 구성하게 된다. 그러나, 비활성 백신의 주요 단점은 그들의 본질적으로 낮은 면역원성에 의해 나타나는데, 즉 이와 같은 비활성 면역원은 숙주의 면역 시스템을 자극시키는 능력이 제한적이다. 그러므로, 이들 비활성 면역원의 면역원성을 증대시키기 위한 적절한 수단이 필요하다. 이러한 유형의 백신은 일반적으로 질환을 예방하는 최소한의 잠재력에 도달하기 위해, 유의적인 면역자극 성능을 갖춘 보조제를 필요로 한다. 즉, 근본적으로 낮은 면역원성을 증대시키기 위해 비활성 면역원과 배합하여 사용하기 위한 추가적 면역자극제가 바람직함이 명백한데, 특히 1개를 초과하는 면역원에 적용할 수 있는 면역자극제가 바람직하다.

MG 백신은 가금류에서 일반적으로 만연된 사용에서는 인지되지 않는 독특한 상태를 나타낸다. 이들은 일반적으로, 야생형 균주에 의해 야기되는 알 생산량 손실을 방지하기 위해서 다양한 성장기의 난용종 사육단지내 조류에 사용한다. 이는 무리에 일단 MG 감염이 존재하면 이것이 영구적으로 남기 때문에 중요하다. 현재 미국에서는 상업적 난용종의 2/3를 백신처리한다. 국제적으로는, 생백신에 대한 많은 요구가 존재한다. 오스트레일리아와 같은 국가에서는 전체 구이용 번식종 대체 가축을 생백신으로 백신처리한다.

현재 실제에서, MG 관련 질환에 대한 가금류의 예방적 면역화에는 약독 백신 균주에 대한 조절된 노출, 또는 비활성화된 전체 세포 오일 에멀션 백신의 사용이 포함된다. 이들 각각의 접근법은 특정 단점을 보유한다. 예를 들면, 생백신은 질환을 발생시키거나 생식 기능을 손상시킬 수 있다. 비활성 백신은 면역화된 조류에서 질환을 예방하기에는 일반적으로 효과적이지만, 감염을 확실하게 예방하지 못하며, 백신처리하지 않은 조류에 감염 및 질환을 전파할 수도 있다.

미국에서, 백신처리는 일반적으로 무리가 감염될 것이 확실한 다양한 성장기의 사육단지에서만 사용한다. 백신처리의 일반적인 목적은 상업적 난용종에서 알 생산량 손실을 방지하는 것이지만, 백신은 번식용 가축에서 알 전염 수준을 감소시키는 데 사용되거나 다양한 성장기의 생산단지에서 MG 근절용 도구로서 사용될 수도 있다. 무리가 MG에 의한 필드 감염에 노출되기 전에 생백신 또는 사백신을 투여하는 것이 중요하다.

이용가능한 생백신은 일반적으로 MG의 F 균주, 및 보다 최근에는 향상된 안전성 특징을 갖는 비병원성 균주인 ts-11 및 6/85 균주로부터 제조한다. 비측내 또는 안구점적 경로를 통한 F 균주의 투여가 바람직하지만, 에어로솔이나 식수 투여도 사용할 수 있다. 안구점적법은 ts-11에 대해서 추천되고, 미세한 스프레이는 6/85에 대해서 추천된다. 어린 암탉은 일반적으로 12 내지 16주 사이에 백신처리한다. 단일 투여량이면 충분하고, 백신처리된 조류는 영구적인 담체로 유지된다. 다양한 성장기의 사육단지에서 F 균주를 장기간 사용하면 필드 균주가 백신 균주로 대체된다. F 균주가 6/85 또는 ts-11보다 효과적으로 독성 야생형 MG 균주를 대체하지만, ts-11은 다양한 성장기의 상업적 난용종에서 F 균주 MG를 근절하는 데 성공적으로 사용되어 왔다. 다양한 성장기의 생산단지는 또한 6/85의 장기간 사용 후, MG에 대한 시험에서 혈청학적으로 음성인 것으로 알려졌다. F 균주는 칠면조에 대해서 완전히 독성이다.

1991년 11월 12일자 발행된 미국 특허 번호 5,064,647(Paul K. Storm)은 6/85 균주를 주성분으로 하는 미코플라스마 백신에 관한 것이다. 6/85 균주를 배양액에 연속적으로 통과시킴으로써 약독화시킨다. 닭에서 이것은 극단적으로 약독 상태이다. 6/85는 닭에서는 효과적으로 사용할 수 있지만, 칠면조에서는 약독 상태를 유지하지 못한다.

반면에, ts-11은 화학적으로 돌연변이화된 감온성 돌연변이체이다. 이 균주는 오스트레일리아, 라틴 아메리카 및 아시아에서 보편적으로 사용된다. 또한 이 균주는 미국 시장의 2/3에서 사용된다. 6/85처럼 ts-11도 MG에 대한 닭의 백신처리에는 유용하지만, 칠면조의 백신처리에는 유용하지 않다.

따라서 현재의 MG 생백신은 문제가 된다. F 균주는 칠면조에서 독성이다. 그리고 약독상태의 6/85 및 ts-11은 둘다 백신 균주가 독성의 질환 유발 야생형으로 되돌아가는 불안정한 유전체를 가지기 때문에 불안정하다. 그러나, 시간이 지나 칠면조가 백신의 영향을 벗어날 정도로 성장하면 독성의 필드 MG 감염이 진행된다. 현재의 MG 생백신 그 자체는 칠면조를 대량으로 사육하는 노스 캐롤라이나 및 미네소타와 같은 주에서 허용되지 않는다. 뿐만 아니라, 이스라엘 같은 국가에서도 MG 생백신의 사용을 허가하지 않는다.

또한, 6/85 및 ts-11 균주는 닭에서 존속하지 못한다. 실제로, 종래 기술은 예방 기작으로서의 지속성이 없음을 교시한다. 1991년 11월 12일자 발행된 미국 특허 번호 5,064,647(Paul K. Storm)은 6/85 균주의 이점은 접종 후 4주 째에 닭에서 균주가 더이상 검출되지 않는다는 것이라고 교시한다. 결국 야생형 균주는 질환 및 생산량의 손실을 야기시키는 상태로 돌아간다. 반면에, 덜 약독화된 생백신 균주는 질환을 적절하게 예방한다. 즉, 백신처리의 지속성과 질환의 가벼운 정도는 반비례 관계인 것으로 보인다.

MG를 방어하기 위해 살아있는 유기체로 백신처리하는 것의 대안은 박테린(bacterin)을 사용하는 것이다. 박테린은 오일 에멀션내 MG 유기체의 농축 현탁액으로 구성되어 있다. 이들은 통상적으로 12 내지 16주 째 성장중인 어린 암탉에 투여한다. 이것은 비경구적으로, 일반적으로는 목에 피하적으로 투여한다. 2회 투여량이 바람직하지만, 비용 및 노동력을 고려하여 일반적으로는 단일 투여량이 주어진다. 박테린은 알 생산량 손실 및 호흡기 질환을 예방하는 데 효과적이지만, 야생형 MG에 의한 감염은 예방하지 못한다.

따라서, MG에 민감한 조류를 예방하기 위한 안전하고 효능있는 포뮬레이션에 대한 요구가 여전히 존재한다. 임의적으로 포뮬레이션은 닭과 칠면조 둘다에 존속하면서 최소한의 병리학적 증상만을 유발하는 살아있는 균주를 포함해야 한다. 예방용 포뮬레이션은 또한 칠면조에서 안정하고 무독성이어야 한다. 본 발명은 오랜 기간 지속되어 온 이 요구사항을 해결한다.

발명의 개요

본 발명은 닭목(目) 조류에 적용하기 위한, 아메리칸 타입 컬춰 컬렉션[American Type Culture Collection(ATCC); 10801 University Blvd., Manassas, Va. 20110-2209 USA]에 특허 기탁 명칭 PTA-4507로 기탁된 MG 균주 K5054로 제조한 MG 예방성 포뮬레이션을 갖는 백신에 관한 것이다. 바람직한 구체예에서는 예방적 양이 조류에게 투여된다. 즉, 본 발명의 일 측면은 도 1, 2, 및 3에 나타낸 바와 같은, ATCC에 특허 기탁 명칭 PTA-4507로 기탁된 K5054의 밴드 패턴 중 적어도 1개에 실질적으로 해당하는 RAPD 패턴을 갖는 미코플라스마 갈리셉티쿰 박테리아 균주의 예방적 양 및 약학적 허용성 담체를 포함하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션을 제공하는 것으로서, 여기서 도 1의 K5054의 밴드 패턴은 서열 번호 4를 프라이머로 사용하여 생성시킨 것이고, K5054의 밴드 패턴은 서열 번호 5, 서열 번호 6, 및 서열 번호 7을 프라이머로 사용하여 생성시킨 것이며, K5054의 밴드 패턴은 서열 번호 8을 프라이머로 사용하여 생성시킨 것이다.

본 발명의 또 다른 측면은 도 1, 2, 및 3에 나타낸 바와 같은, ATCC에 특허 기탁 명칭 PTA-4507로 기탁된 K5054의 밴드 패턴 중 적어도 1개에 실질적으로 해당하는 RAPD 패턴을 갖는 미코플라스마 갈리셉티쿰 박테리아 균주의 예방적 양 및 약학적 허용성 담체를 포함하는 닭목 조류용 백신을 제공하는 것으로서, 여기서 도 1의 K5054의 밴드 패턴은 서열 번호 4를 프라이머로 사용하여 생성시킨 것이고, K5054의 밴드 패턴은 서열 번호 5, 서열 번호 6, 및 서열 번호 7을 프라이머로 사용하여 생성시킨 것이며, K5054의 밴드 패턴은 서열 번호 8을 프라이머로 사용하여 생성시킨 것이다.

본 발명의 보다 또 다른 측면은 비-면역병원성 미코플라스마 갈리셉티쿰 균주를 부화 후의 조류에 투여함으로써, 균주가 조류의 호흡기 상피에 존속하면서 호흡기 상피로부터 다른 미코플라스마 갈리셉티쿰 균주를 배제시키는 단계를 포함하는, 미코플라스마 갈리셉티쿰에 대해 닭목 조류를 예방하는 방법이다.

본 발명의 한층 또 다른 측면은 조류에 백신을 투여하는 방법이다. 바람직하게는, 백신은 조류의 호흡기 점막에 투여한다. 보다 바람직하게는, 예방용 포뮬레이션을 닭에 투여한다. 부가적으로 백신을 칠면조에 투여할 수도 있다.

본 발명의 이들 및 기타 다른 측면들은 당업자라면 하기 바람직한 구체예의 설명을 숙지한 후에 명백하게 알 수 있을 것이다.

도 1은 찰턴스 프라이머(Charlton's primer)를 사용한 RAPD 겔이다.

도 2는 3개의 팬스 프라이머(Fan's primer) M16SPCR5', M13F, S1OLIGO3'을 사용한 RAPD 겔이다.

도 3은 기어리스 1254 프라이머(Geary's 1254 primer)를 사용한 RAPD 겔이다.

도 4는 실험 결과를 나타낸 표이다.

도 5는 실험 결과를 나타낸 표이다.

도 6은 실험 결과를 나타낸 표이다.

도 7은 실험 결과를 나타낸 표이다.

도 8은 실험 결과를 나타낸 표이다.

도 9는 실험 결과를 나타낸 표이다.

도 10은 실험 결과를 나타낸 표이다.

도 11은 표 4.1. 역통과이다.

도 12는 표 4.2. 역통과이다.

도 13은 표 5.1. 면역의 지속 및 지속기간이다.

도 14는 표 5.2. 면역의 지속 및 지속기간이다.

도 15는 표 6.1. 전염성이다.

본 발명은 MG 박테리아 및 이의 유도체를 제공한다. 본 발명에 따른 MG 박테리아 및 이의 유도체는 카르포다쿠스 멕시카누스(Carpodacus mexicanus) 멕시코양진이로부터 유래한 참새목(passerine) MG 균주에서 유래한다. 이제는 K5054로 지칭되는 상기 균주는 상업적 칠면조 사육장에서의 비정형성 MG 발병 동안에 발견되었다. 칠면조에서의 일반적인 MG 발병과는 달리, 이 특정한 발병에서는 질환의 신호가 거의 나타나지 않았다. 신호에는 ELISA를 사용한 혈청학적 감염 증거 뿐만 아니라 번식종에서의 부비강염이 포함된다.

이 감염의 초기 단계에서는, 혈청 플레이트 응집(SPA) 및 혈구응집 억제(HI) 시험으로 미코플라스마 갈리셉티쿰을 검출하는 데 실패했다. 기관 스왑 배양 및 PCR 또한 확실하지 않은 결과를 나타냄으로써 감염을 확인하는 데 실패했다. 분리물 수득의 가능성을 증진시키고 감염의 효과를 관찰하기 위해서, 생물검정법을 수행했다. 민감성 칠면조에 공동액(sinus fluid)을 접종하고 질환 및 혈청 반응을 모니터링했다. 모든 조류가 혈청변환되었지만, 질환의 임상학적 신호는 관찰되지 않았다. 그러나, 1종의 조류는 약하게 염증을 일으킨 공동(sinus)을 나타냈다. 이 칠면조로부터의 공동 삼출물을 수집하여 성장 배지에 접종했다. 즉, 이런 방식으로 K5054 균주를 분리했다.

무작위 증폭 다형 DNA(RAPD) 기술에 의한 DNA 핑거프린팅 및 서열분석으로부터 상기 균주가 멕시코양진이에서의 MG 균주와는 유사하지만 종래 기술의 백신 균주와는 유사하지 않음을 알 수 있었다. K5054 균주, 멕시코양진이 MG, 백신 균주(ts-11, 6/85), 필드 균주(F), 및 독성 MG 균주(R)의 RAPD 패턴을 도 1, 2 및 3에 나타냈다. S6는 플레이트 응집 시험에서 항원으로 사용된 MG 균주이다. A5969는 혈구응집 억제 시험에서 항원으로 사용된 MG 균주이다. RAPD 기술을 위해서, 3개의 상이한 프라이머 세트를 사용했다. 서열 목록은 본원에서 참고인용한다. 도 1에 나타낸 RAPD #1에서 사용된 프라이머는 서열 번호 4이다. 도 2에 나타낸 RAPD #2에서 사용된 프라이머는 서열 번호 5, 서열 번호 6, 및 서열 번호 7이다. 도 3에 나타낸 RAPD #3에서 사용된 프라이머는 서열 번호 8이다.

도 1에서, 멕시코양진이 균주(2번 레인)와 K5054(3번 레인)의 밴드 패턴은 K5054에서의 가장 유력한 PCR 산물이 상응하는 멕시코양진이 PCR 산물보다 약간 작다는 것을 제외하고는 유사하다. 이 동일한 산물이 백신 균주에서는 훨씬 더 작은 분자량을 가진다. 도 2에서, K5054에는 멕시코양진이 균주에 존재하는 대략 700 kb 내지 2000 kb의 주요 밴드 2개가 없음에도, 멕시코양진이 균주(1번 레인)와 K5054(2번 레인)의 밴드 패턴은 유사하다. 다른 필드 균주 또는 백신 균주를 나타내는 기타 다른 밴드 패턴은 멕시코양진이에 대해서 K5054보다 상이하다. 도 3에서, 멕시코양진이 균주(2번 레인)와 K5054(3번 레인)의 RAPD 패턴은 유사하지만, 다른 MG 균주들과는 상이하다. 이들 결과로부터 K5054는 아마도 멕시코양진이 MG에서 유래한 균주일 것임이 확인된다. 결과는 또한 상기 균주가 백신 균주 ts-11과 6/85, 필드 균주(F), 독성 MG 균주(R), 및 항원 균주 S6와 A5969 같은 다른 MG 균주들과는 상이함을 나타낸다.

3개의 핵심 유전자에 대한 부분적 DNA 서열분석은 K5054와 현재의 백신 균주 사이의 상동성을 증명해준다. 3개의 유전자는 각각 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3인 PvpA 표면 사이트어드히진(cytadhesin), 표면 지단백질 유전자, 및 mgc1/GapA 사이트어드히진 유전자이다. K5054의 GapA 유전자 서열은 6/85의 그것과 100% 상동성을 나타냈다. PvpA 표면 사이트어드히진 유전자 서열은 6/85의 그것과는 97.3% 상동성, ts-11의 그것과는 92.6% 상동성, F 균주와는 95.2% 상동성, 및 HF51 균주와는 98.2% 상동성을 나타냈다. 표면 지단백질 유전자 서열은 6/85의 그것과는 97.3% 상동성, ts-11의 그것과는 97.9% 상동성, F 균주의 그것과는 97.0% 상동성, 및 HF51 균주와는 100% 상동성을 나타냈다.

본 발명의 MG 예방성 포뮬레이션은 닭목 조류에서 사용하기 위한 것이다. 여기에는 닭 및 칠면조가 포함되지만 이에 한정되는 것은 아니다. 닭에는 구이용, 번식용 가축 및 채란용 가축이 포함된다. 칠면조에는 번식용 가축 및 소비용 조류가 포함된다. 예방용 포뮬레이션은 예방 면역을 자극하는 백신으로 작용하면서 호흡기 점막, 특히 백신처리된 조류의 상부 호흡기도에 존속하여, 조류의 면역적 저항성 및 선천적 저항성이 호흡기 점막으로부터 이들 균주를 자체적으로 제거할 수 있을 때까지 독성 필드 균주가 이 부위를 콜로니화하지 못하도록 함으로써 조류를 예방한다.

본 발명의 바람직한 구체예는 닭목 조류를 위한, ATCC에 특허 기탁 명칭 PTA-4507로 2002년 6월 27일자 기탁된 MG 균주 K5054로 제조한 MG 예방성 포뮬레이션이다. 바람직한 구체예로, 예방용 포뮬레이션은 닭에서 사용된다. 또 다른 바람직한 구체예로, 예방용 포뮬레이션은 칠면조에서 사용된다. 상기 K5054와 같은 특징적인 혈청학적 성질의 균주 또한 본 발명에 속한다. 여기에는 멕시코양진이로부터 분리한 감염성 참새목 균주가 포함된다. 보다 구체적으로는, K5054 균주에서 유래하여 자체의 특히 바람직한 예방적 성질을 보유하고 있는 균주가 본 발명에 속한다. 바람직하게는, 포뮬레이션에 사용된 유기체는 살아있는 것이다.

바람직한 일 구체예에서, 예방적 양은 조류의 상부 호흡기도를 충분한 기간 동안 콜로니화함으로써, 독성의 야생형 균주의 침입에 대한 예방을 제공하기에 필요한 MG 균주의 양이다. 일반적으로, 본 발명에 따른 MG 균주는 조류의 호흡기도를 콜로니화할 필요가 있다. 임의적으로, MG 균주는 적어도 1년 동안 조류의 호흡기도에 존속해야 한다. 그러나, 단기간의 콜로니화가 여전히 유용하다. 예를 들면, 8주 동안의 조류 호흡기도의 콜로니화조차도 예방을 제공한다. 또 다른 바람직한 구체예에서, 이러한 예방적 양은 조류의 한쪽 안구당 약 1 점적인데, 1 점적은 대략 0.05 ml로서, 농도는 약 1 ×10³ 내지 약 1 ×10⁶의 ml당 색 변화 단위(ccu/ml)이다. 이것은 마리당 약 50 내지 약 50,000 ccu에 해당한다. 보다 더 바람직한 구체예에서, 이러한 예방적 양은 마리당 약 5,000 ccu에 해당하는, 용액 ml당 1 ×10⁵ ccu인 약 1 점적이다.

본 발명은 추가로, 본원에 기재한 MG 예방성 포뮬레이션을 부화 후의 조류에 투여함으로써 조류를 예방하는 방법을 포함한다. 바람직하게는, 포뮬레이션은 부화 후 대략 첫 18주 동안에 투여한다. 보다 바람직하게는, 포뮬레이션은 부화 후 대략 적어도 2주 째에 투여한다.

본 발명에 따른 포뮬레이션은 호흡기 점막에 투여하기에 적절한 형태이다. 호흡기 점막 투여는 포뮬레이션이 즉시 또는 결과적으로 조류의 호흡기 점막과 접촉하도록 이를 투여함을 의미한다. 그러므로, 포뮬레이션은 비측내, 경구내, 및/또는 안구내적으로 적용할 수 있다.

본 발명의 바람직한 구체예에서, 비측내 또는 경구내 투여용 포뮬레이션은 각각 에어로솔을 포함하는 스프레이, 또는 식수를 통한 투여에 적절한 형태이다. 안구점적 전달보다 덜 효율적인 이들 전달 시스템을 통해서 각 조류에 전달되는 실제 양은 안구점적 전달을 통한 것보다 적다. 개별적인 조류를 기준으로 한 투여는 본 발명에 따르는 것이 가능하지만, 바람직하게는 포뮬레이션은 상업적으로 효율적인 투여 수단을 제공하며, MG로부터 조류를 예방하는 데 일반적으로 사용되는 비용이 적게 드는 대량 적용 경로에 의해서 투여된다.

본 발명에 따른 스프레이 또는 에어로솔 방법은 본 발명에 따른 MG 포뮬레이션을 소형 액체 입자에 혼입시켜 투여하는 단계를 포함한다. 전자의 방법에서는, 입자가 일반적으로 약 10 내지 약 100 마이크론 범위의 초기 비말 크기를 가지고, 후자의 방법에서는 약 < 1 내지 약 50 마이크론이다. 소형 입자의 생성을 위해서, 통상적인 스프레이 장치 및 에어로솔 생성기를 사용할 수 있는데, 예컨대 냅색(knapsack) 스프레이, 부화장 스프레이 및 세분화 스프레이를 위한 시판용 스프레이 생성기와 같은 것이다. 식수를 통한 포뮬레이션 투여 또한 통상적인 장치를 사용해서 수행할 수 있다.

MG 박테리아를 함유한 본 발명에 따른 포뮬레이션은 현탁액의 형태 또는 냉동건조된 형태로 제조하여 판매할 수 있으며, 부가적으로 약학적 허용성 담체 또는 이러한 조성물에 통상적으로 사용되는 희석제를 함유할 수 있다. 담체에는 당업계에 일반적으로 알려져 있는 안정화제, 보존제 및 완충제가 포함된다. 포뮬레이션은 보관을 위해서 냉동시키는데, 바람직하게는 최적의 보관을 위해 -70℃에서 냉동시킨다. 배양액에 글리세롤을 첨가하여 냉동시의 안정성을 증진시킬 수 있다.

바람직한 구체예에서는, 약 50 내지 약 50,000 ccu의 본 발명에 따른 백신을 조류에 투여한다. 보다 바람직하게는, 약 5,000 ccu의 포뮬레이션을 조류에 투여한다. 또 다른 구체예에서는, 필요하다면 적어도 1회의 추가 백신을 추후에, 예를 들면 초기 백신 투여 후 약 12주 내지 약 20주째에 조류에 투여한다.

ATCC에 특허 기탁 명칭 PTA-4507로 기탁된 살아있는 K5054 MG 균주 및 이의 유도체를 사용하여, 유리하게는 야생형 균주의 침입으로부터 조류를 예방하는 길항적 제거제로서 존속하는 생백신을 제공한다. 닭 및 칠면조에서의 실험 결과는 K5054 균주가 존속하고, 비-면역병원성이며, 최소한의 질병을 유발하고, 안전하고, 효능을 나타냄으로써, 길항적 제거제 효과를 효과적으로 제공함을 보여준다. K5054 균주와 유사한 동정 특징 및 기능적 특징을 갖춘 균주는 본 발명의 범위에 포함된다. 이러한 균주에는 자연적으로 또는 연속적 통과에 의해 인공적으로 성숙시킨 K5054의 유도체 및 필드 분리물이 포함된다. 이들 유도체는 본 발명의 특성에서 벗어나지 않으며 본원에서 고려된다.

MG 균주를 성장시키기 위한 프로토콜

본 발명에 따른 MG는 하기 프로토콜에 따른 배양으로 성장시킬 수 있다.

배양액: 조류의 미코플라스마 분리를 위한 프레이스(Frey's) 배양액.

미코플라스마 고깃국 베이스 22.5 g

덱스트로스 3 g

돼지 혈청 120 ml

효모 추출물 35 ml

페놀 레드(1%) 2.5 ml

아세트산 탈륨(10%)^A 6 ml

앰피실린 1g/리터^A

시약과 충분량 내지 1000 ml의 증류수를 배합한다. ^A - 아세트산 탈륨 및 앰피실린은 상업적인 백신 생산에서와 같이 순수 MG 배양으로 작업할 때는 생략할 수 있다.

20% NaOH를 사용하여 pH를 7.8로 조정하고 필터를 살균한다. 본 발명의 범위에서 벗어나지 않는 한 상기에 목록화한 것 대신 다른 성장 인자 및 보존제를 사용할 수 있다.

한천 배양액을 위해서는 이온 한천 #2, 노블(Noble) 한천, 또는 디프코(Difco) 정제 한천과 같은 정제 한천 1%를 사용한다. 혈청 및 앰피실린을 제외한 모든 성분들은 121℃에서 15분 동안 오토클레이브를 사용하여 살균한다. 50℃까지 냉각한 다음, 여과에 의해서 미리 살균하여 50℃까지 데운 혈청 및 앰피실린을 무균상태에서 첨가한다. 혼합하여 플레이트에 대략 5 mm 깊이까지 붓는다.

하기 실시예는 본 발명을 설명하고자 하는 것이지 본 발명을 이로써 제한하려는 것은 아니다.

실시예 Ⅰ: 칠면조 생물검정법

감염된 4마리의 상이한 시판용 칠면조 무리로부터의 공동 삼출물을 민감성 칠면조에 접종했다. 칠면조를 공격하는 데 사용한 삼출물 중 하나로부터 MG를 분리하여 이를 K5054로 지칭했다.

무리 중 하나(K5054)로부터의 공동 삼출물로 공격한 칠면조는 매우 가벼운 임상적 신호(접종 후 42일 째에 8마리의 칠면조 중 1마리의 한쪽 코에 부비강염이 발달함) 및 가벼운 손상을 나타냈고, 혈청변환되어 독성 MG 균주의 추후 공격에 대한 면역이 발달되었다.

실시예 Ⅱ

실험 A

칠면조 8마리의 4그룹을 4곳의 상이한 사육장의 감염된 시판용 칠면조로부터 수집한 공동 삼출물로 공격했다. 5번째 그룹을 음성 대조군으로 사용했다. 칠면조를 임상적 신호에 대해서 관찰하고, 혈청 반응을 위해 혈액채취한 다음, 미코플라스마 배양을 위한 기관 스왑을 수득했다. 이 실험의 결과는 도 4에 나타냈다.

공격 후 49일 째에, K5054 공동 삼출물을 접종한 조류(주체 8마리)를 민감성 칠면조(접촉체 8마리)와 섞었다. 섞은 후, 이들을 임상적 신호에 대해서 관찰하고, 혈청 반응을 위해 혈액채취한 다음, 미코플라스마 배양을 위한 기관 스왑을 수득했다. 접촉시킨 칠면조 중 2마리를 공격 후 56일 째에 해부했다.

K5054 공동 삼출물을 접종한 그룹은 혈청전환된 유일한 그룹이었다. 이들은 접종 후 21일째에 양성이었고 연구가 끝날 때까지 양성을 유지했다. K5054 공동 삼출물을 접종한 칠면조 8마리 중 1마리는 접종 후 49일 째에 한쪽 코에서 부비강염을 나타냈다. 이 칠면조의 공동 삼출물로부터 K5054를 재분리했다. 이것은 연구 동안의 유일한 K5054 재분리였다. 결과로부터 칠면조에서 K5054 균주가 존속하며 이것에 의해 가벼운 질환 증상이 야기됨을 알 수 있었다.

실험 B

실험 A의 나머지 칠면조(주체 8마리 및 접촉체 6마리)를 실험 B에서 사용했다. K5054 공동 삼출물 접종 88일 후, 칠면조 7마리(주체 4마리 및 접촉체 3마리)를 에어로솔을 이용하여 MG의 R 균주로 공격했다. 나머지 칠면조(주체 4마리 및 접촉체 3마리)는 대조군으로 사용했다. 모든 칠면조를 R 균주 공격 후 10일 째에 해부했다. 이들을 혈청 반응을 위해 혈액채취한 다음, 배양을 위한 기관 및 기낭 스왑을 수득했다. 기관 부분은 기관 점막 두께 측정을 위해서 포르말린으로 고정시켰다.

실험 B의 결과를 도 5에 정리했다. 미리 K5054를 접종한 칠면조는 R 균주의 공격 후에 기낭 손상이 없었다. 이들 칠면조의 평균 기관 점막 두께 또한 공격 대조군보다 유의적으로 얇았으며, 공격받지 않은 칠면조와 유의적으로 상이하지 않았다. 이들 칠면조로부터는 공격 후에 R 균주가 재분리되지 않았다. 결과로부터 K5054는 MG 감염에 대해 칠면조를 예방함을 알 수 있었다.

실시예 Ⅲ

K5054 공동 삼출물 접종은 칠면조의 생물검정법에서 매우 적은 임상적 반응을 나타냈다. K5054 균주의 안전성을 추가로 탐구하기 위해, 닭 및 칠면조에서 예비 조사를 수행했다. 조류를 프레이스 배양액에서 증식시킨 K5054의 조립자 스프레이에 의해서 공격했다.

닭 및 칠면조에서의 K5054 공격은 질환에 대한 약간의 징후와 함께 혈청전환을 일으켰다.

실험 1: 닭에서의 안전성

시판용 채란형 닭을 조립자 스프레이를 이용하여 K5054, ts-11 및 R 균주로 공격했다. 이들을 공격 후 10일 째에 혈청 반응, 기낭 손상의 총체적 평가 및 기관 점막 두께의 측정을 통해서 평가했다. 이 실험의 결과는 도 6 및 도 7에 제시했다.

실험 계획

그룹	조류의 수	공격 방법	적정량(ccu/ml)
ts-11	16	안구점적	1.11 ×10⁴
K5054	16	조립자 스프레이	1.59 ×10⁸
R	16	조립자 스프레이	1.91 ×10⁸
음성 대조군	16	공격하지 않음	측정하지 않음

ts-11 및 K5054 둘다 총체적인 기낭 손상이 없었다. 이들 그룹에 대한 평균 기관 점막 두께는 음성 대조군과는 유의적으로 다르지 않았지만 공격 대조군보다는 유의적으로 얇았다.

실험 2: 칠면조에서의 안전성

상업적 공급원으로부터 입수한 4주된 칠면조에 조립자 스프레이로 K5054 및 R 균주를 접종했다. 이들을 10일 후에 음성 대조군과 함께 해부했다. 결과는 도 8에 제시했다.

실험 계획

그룹	조류의 수	공격 방법	적정량(ccu/ml)
K5054	15	조립자 스프레이	7.74 ×10⁸
R	15	조립자 스프레이	8.42 ×10⁸
음성 대조군	15	공격하지 않음	측정하지 않음

K5054 그룹은 공격 대조군보다 평균 기낭 손상 기록이 유의적으로 낮고 평균 기관 점막 두께가 유의적으로 얇았으며, 음성 대조군과는 유의적으로 다르지 않았다.

실시예 Ⅳ: 효능

생물검정법에서 K5054 공동 삼출물을 접종한 뒤 R 균주로 공격한 칠면조는 질환에 대한 우수한 예방을 나타냈다. MG에 대한 생백신으로서의 K5054의 효능은 K5054를 미리 접종한 닭과 칠면조를 독성의 MG 균주(R)로 공격함으로써 평가했다.

K5054에 의한 백신처리는 R 균주 공격에 따른 질환과 관련된 MG 손상을 유의적으로 감소시켰다.

실험 1: 닭에서의 효능

시판용 채란형 닭에 K5054 또는 ts-11을 접종했다. 이들을 5주 후에 R 균주로 공격했다(조립자 스프레이 이용). 공격 후 10일 째에 이들을 혈청 반응, 기낭 손상의 총체적 평가 및 기관 점막 두께의 측정을 통해서 평가했다. 실험 계획은 아래에 제시했다. 이 실험의 결과는 도 9에 제시했다.

실험 계획

백신	공격	그룹	조류의 수
ts-11	R	공격받은 ts-11	40
ts-11	공격하지 않음	ts-11 대조군	10
K5054	R	공격받은 K5054	40
K5054	공격하지 않음	K5054 대조군	10
백신 없음	R	공격 대조군	40
백신 없음	공격하지 않음	음성 대조군	32

ts-11 및 K5054 그룹은 공격받은 대조군과 유의적으로 다른 평균 기낭 손상을 나타냈다. 백신처리된 그룹에 대한 평균 기관 점막 측정값 또한 공격 대조군의 그것과는 유의적으로 달랐지만 음성 대조군과는 유의적으로 다르지 않았다.

실험 2: 칠면조에서의 효능

K5054로 미리 백신처리한 칠면조 18마리를 백신처리 6주 후에 조립자 스프레이를 이용하여 R 균주(1.38 ×10⁹ ccu/ml)로 공격했다. 이들을 10일 후에 음성 대조군과 함께 해부했다. 칠면조를 혈청 반응, 기낭 손상 및 기관 점막 두께를 통해서 평가했다. 이 실험의 결과는 도 10에 제시했다.

K5054를 접종한 그룹에 대한 평균 기낭 손상 기록 및 평균 기관 점막 두께는 공격받은 대조군과는 유의적으로 달랐지만, 음성 대조군과는 그렇지 않았다.

시판용 칠면조에서의 비정형 발병으로부터의 미코플라스마 갈리셉티쿰(MG) 멕시코양진이성 분리물에 대한 이전의 연구는 이 균주(K5054)를 시판용 가금류에서의 생백신으로 사용하도록 권장하는 결과를 나타냈다.

실시예 Ⅴ: 닭에서의 안전성 및 안정성

분리물의 닭에서의 안전성 및 안정성을 증명하기 위해서 추가의 연구를 수행했다.

실험 1: K5054의 안전성 및 안정성을 추가로 평가하기 위해서, 분리물을 닭에 10회 통과시켰다.

닭에 통과시킨 K5054의 분리물은 K5054 및 독성의 R 균주에 비해 유의적으로 증가된 독성을 나타내지 않았다.

실험 계획:

3주된 시판용 채란형 닭을 안구점적을 사용해서 K5054로 공격했다. 1주 후에 이들 닭으로부터의 기관 스왑을 사용하여 추가의 닭(3주된 것) 15마리를 접종했다. 분리물이 10회 통과될 때까지 이 과정을 반복했다. 10번째 통과된 분리물을 공격 실험에서 사용했다. 닭 30마리의 그룹을 에어로솔을 사용해서 K5054, K5054+10 또는 R 균주로 공격했다. 공격에 대한 반응을 음성 대조군과 비교하고, 공격 10일 후에 총체적 손상 및 조직병리학적 손상, 뿐만 아니라 혈청학적 반응을 통해서 평가했다.

공격	조류의 수	적정량(ccu/ml)
K5054	30	2.31 ×10⁸
K5054+10	30	3.97 ×10⁷
R	30	6.22 ×10⁸
공격하지 않음	30	측정하지 않음

결과: 이 공격 연구의 결과는 도 11 및 도 12에 정리했다. K5054+10 그룹의 기낭 손상 기록은 K5054 그룹 또는 음성 대조군과 유의적으로 다르지 않았다.

실시예 Ⅵ: 면역의 지속 및 지속기간

닭 호흡기도에서의 K5054 존속 및 단일 K5054 백신처리에 의해 유발되는 면역의 지속기간을 7개월 동안 평가했다.

이 기간까지의 결과는 백신처리 후 6주까지 K5054이 백신처리된 닭의 기관에 존속하며 예방 면역을 유발함을 나타냈다.

실험 계획: 3주된 시판용 채란형 닭을 에어로솔을 사용해서 K5054로 백신처리했다. 이들 닭을 7개월 동안 미코플라스마에 대한 혈청 반응과 기관 배양을 위해 5회의 주기적 샘플채취를 함으로써 평가했다. 각 샘플채취 기간 중에, 백신처리된 닭 10마리를 옮겨서 독성의 R 균주로 공격했다. 공격에 대한 반응은 공격 10일 후에 총체적 손상 및 조직병리학적 손상, 뿐만 아니라 혈청학적 반응을 통해서 평가했다.

공격	백신처리 후 주일수	적정량(R) ccu/ml
1	4주	6.22 ×10⁸
2	8주	1.13 ×10⁹
3	12주	1.21 ×10⁹
4	16주	1.01 ×10⁹
5	28주	TBC

결과: 이 실험의 예비 결과는 도 13 및 14에 정리했다. K5054는 K5054로 백신처리한 조류의 기관에 존속했으며, 백신처리 후 12주 째까지 수득한 기관 스왑의 100%에서 분리되었다. K5054로 백신처리하고 공격한 닭은 음성 대조군과 유의적으로 다른 손상 기록을 나타내지 않았다.

실시예 Ⅶ: 전염성

K5054의 전염성을 평가하기 위해서, 닭을 K5054로 공격하고 미처리 조류와 직접적 및 간접적 접촉 상태에 두었다.

실험 계획: 3주된 닭(전파용) 5마리를 안구점적을 이용하여 K5054로 공격했다. 이들을 25마리의 직접 접촉시키는 닭이 있는 축사 내부 및 30마리의 철망 건너 접촉시키는 닭이 있는 축사 인근에 두었다. 빈 축사를 이용하여, 전파용과 직접 접촉시키는 닭을 빈 축사 건너 접촉시키는 3번째 그룹으로부터 분리시켰다. R 균주를 유사한 계획의 대조군으로 사용했다. MG의 전염도는 공격 후 12주 동안 기관 배양 및 혈청 반응을 통해서 평가했다.

K5054			R
			철망 건너 접촉시키는 닭(30)	전파용(5)+ 접촉체(25)	빈 축사 건너 접촉시키는 닭(30)

빈 축사 건너 접촉시키는 닭(30)	전파용(5)+ 접촉체(25)	철망 건너 접촉시키는 닭(30)

결과: 결과는 도 15에 정리했다. R 균주는 공격 후 2주만에 직접 접촉시키는 닭에 전파되었다. 다른 그룹들은 공격 후 4주째에도 MG에 대한 음성을 유지했다.

본 발명의 바람직한 구체예 및 대안적인 구체예를 전술했지만, 당업자라면 본 발명은 개시된 구체예에만 제한되는 것이 아니라, 본 발명의 취지에서 벗어나지 않는 범위에서 구성 부분 및 요소의 각종 변형, 재배열 및 대체가 가능함을 알고 있을 것이다.

당업자라면 전술한 내용을 숙지함으로써 특정한 변형 및 개선을 일으킬 수 있을 것이다. 간결성과 가독성을 위해 본원에서 삭제한 모든 변형 및 개선도 당연히 하기 청구의 범위에 속한다.

<110> Kleven, Stanley H. Ferguson, Naola <120> Mycoplasma gallisepticum Formulation <130> 1700-002 <160> 8 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 570 <212> DNA <213> Mycoplasma gallisepticum <400> 1 ctgaagttaa gactgaacaa ttaattggca cacaattagt aacaactgat gtagctagca 60 ctcaagctgt aggtactgaa gaagttcaag gtgttttatt acctcctagt caacaaccaa 120 cggaaatgcg tccagctcct tcaccaatgg gtagtcctaa gttattaggt ccaaaccaag 180 ctggtcatcc acaacacgga ccacgtccga tgaatgctca tccaggtcaa ccacgtcctc 240 aacaagctgg cccacgtcca atgggagctg gtggatctaa ccaaccaaga ccaatgccaa 300 atggtccaca aaacccacaa ggtccacgac caatgaaccc tcaaggcaat cctcgtcctg 360 gaccagctgg ccaacgacct aacggcccac aaaattctca accacgtcct caacaagctg 420 gcccacgtcc aatgggagct ggtagatcta accaaccaag accaatgcca aatggtccac 480 aaaaacaaca aggtccaaga ccaatgaacc ctgaaggcaa tcctcgtcct caaccagctg 540 gtgtcagacc taacagccca caagctacca 570 <210> 2 <211> 698 <212> DNA <213> Mycoplasma gallisepticum <400> 2 cgagaaaata agaacttact agcgttcata tttttactca tgacattcgt tgatgaatta 60 tctgatttcg aagaatcaac tgtcttcatc ccatttcatt caaagatttc gtggatatct 120 ttagttccag ctgctaaatc tgcataagca ttgtaatatg gatcagtagt tcgattcgtt 180 tcacctgttt ttaataatga attattagta atcttttgtg agtaggtgtt ggctgtgtta 240 ccatttccct tagctctaat gaaattattc atcagattga tctcatcaat atctgattga 300 attacaccaa cgttatcacg gttagtatta ttagtttgtt ttaaatattg ttgaacataa 360 gctgcactaa atgatacgtc aaaactatta aacatatcag aagcagtcat taacaactta 420 ccaccagaat ctgatgataa gttgttggga atattaatcc ctttagttgt actatttaca 480 taactgtcca accctctagt aatgaattgg ttataagctc tcatcccctt gttttcatca 540 aaaggttggt ctttgggatt tttaaatgct tggaaattat aacttgctac taatgctgtt 600 gagctaacag tacgatcatt aaagatcgaa tttagtccat ctttaggagt atcgctggta 660 aaaacaattc ttgaaactaa attagggttt tcatcagt 698 <210> 3 <211> 334 <212> DNA <213> Mycoplasma gallisepticum <400> 3 tttctagcgc tttagcccta aaccctaacc gaattactaa cccattaatg aatagagata 60 acgtaatcgg tcaaggtgcg ttcattagta gaaatgatat tccatcatca ttctttgaaa 120 acaaaattaa tgatattgta actacagaag ctgatggtaa agaagtatta gatagtaaat 180 acattaattc aatctataga tatactccac ctcaaaacaa tcctgatatt agattaagat 240 tattagtaat tgatcgttct agagcaacta atgacttcat taagttatta cctcaagtat 300 tagttgatgg cgaatacgtt gctgttccac aaga 334 <210> 4 <211> 10 <212> DNA <213> Mycoplasma gallisepticum <400> 4 cccgtcagca 10 <210> 5 <211> 17 <212> DNA <213> Mycoplasma gallisepticum <400> 5 aggcagcagt agggaat 17 <210> 6 <211> 13 <212> DNA <213> Mycoplasma gallisepticum <400> 6 gtaaaacgac ggc 13 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Mycoplasma gallisepticum <400> 7 cataactaac ataagggcaa 20 <210> 8 <211> 10 <212> DNA <213> Mycoplasma gallisepticum <400> 8 ccgcagccaa 10

Claims

도 1의 K5054의 밴드 패턴은 서열 번호 4를 프라이머로 사용하여 생성시킨 것이고, K5054의 밴드 패턴은 서열 번호 5, 서열 번호 6, 및 서열 번호 7을 프라이머로 사용하여 생성시킨 것이며, K5054의 밴드 패턴은 서열 번호 8을 프라이머로 사용하여 생성시킨, 도 1, 2, 및 3에 각각 나타낸 바와 같은 K5054(ATCC에 특허 기탁 명칭 PTA-4507로 기탁)의 밴드 패턴 중 적어도 1개에 실질적으로 해당하는 RAPD 패턴을 갖는 미코플라스마 갈리셉티쿰(Mycoplasma gallisepticum) 박테리아 균주의 예방적 양 및 약학적 허용성 담체를 포함하는 닭목(目) 조류 예방용 포뮬레이션.
제1항에 있어서, 예방적 양은 미코플라스마 갈리셉티쿰 균주가 조류의 상부 호흡기도에서 콜로니화하는 데 필요한 양인 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
제1항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 50 내지 약 50,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
제1항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 5,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
제1항에 있어서, 미코플라스마 갈리셉티쿰 박테리아 균주가 도 1, 2, 및 3에 나타낸 바와 같은 K5054의 밴드 패턴 중 적어도 2개에 실질적으로 해당하는 RAPD 패턴을 갖는 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
제5항에 있어서, 예방적 양은 미코플라스마 갈리셉티쿰 균주가 조류의 상부 호흡기도에서 콜로니화하는 데 필요한 양인 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
제5항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 50 내지 약 50,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
제5항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 5,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
제1항에 있어서, 미코플라스마 갈리셉티쿰 박테리아 균주가 도 1, 2, 및 3에 나타낸 바와 같은 K5054의 밴드 패턴 3개 모두에 실질적으로 해당하는 RAPD 패턴을 갖는 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
제9항에 있어서, 예방적 양은 미코플라스마 갈리셉티쿰 균주가 조류의 상부 호흡기도에서 콜로니화하는 데 필요한 양인 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
제9항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 50 내지 약 50,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
제9항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 5,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
서열 번호 1과 적어도 98%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열의 PvP 표면 어드히진(adhesin) 유전자가 존재하는 미코플라스마 갈리셉티쿰 박테리아 균주의 예방적 양 및 약학적 허용성 담체를 포함하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
제13항에 있어서, 예방적 양은 미코플라스마 갈리셉티쿰 균주가 조류의 상부 호흡기도에서 콜로니화하는 데 필요한 양인 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
제13항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 50 내지 약 50,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
제13항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 5,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
서열 번호 2와 적어도 98%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열의 표면 지단백질 유전자가 존재하는 미코플라스마 갈리셉티쿰 박테리아 균주의 예방적 양 및 약학적 허용성 담체를 포함하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
제17항에 있어서, 예방적 양은 미코플라스마 갈리셉티쿰 균주가 조류의 상부 호흡기도에서 콜로니화하는 데 필요한 양인 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
제17항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 50 내지 약 50,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
제17항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 5,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
ATCC에 특허 기탁 명칭 PTA-4507로 기탁된 K5054 미코플라스마 갈리셉티쿰 박테리아와 동정 특징이 유사한 미코플라스마 갈리셉티쿰 박테리아 균주의 예방적 양 및 약학적 허용성 담체를 포함하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
제21항에 있어서, 예방적 양은 미코플라스마 갈리셉티쿰 균주가 조류의 상부 호흡기도에서 콜로니화하는 데 필요한 양인 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
제21항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 50 내지 약 50,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
제21항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 5,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방용 포뮬레이션.
도 1의 K5054의 밴드 패턴은 서열 번호 4를 프라이머로 사용하여 생성시킨 것이고, K5054의 밴드 패턴은 서열 번호 5, 서열 번호 6, 및 서열 번호 7을 프라이머로 사용하여 생성시킨 것이며, K5054의 밴드 패턴은 서열 번호 8을 프라이머로 사용하여 생성시킨, 도 1, 2, 및 3에 각각 나타낸 바와 같은 K5054(ATCC에 특허 기탁 명칭 PTA-4507로 기탁)의 밴드 패턴 중 적어도 1개에 실질적으로 해당하는 RAPD 패턴을 갖는 미코플라스마 갈리셉티쿰 박테리아 균주의 예방적 양 및 약학적 허용성 담체를 포함하는 닭목 조류용 백신.
제25항에 있어서, 예방적 양은 미코플라스마 갈리셉티쿰 균주가 각 조류의 상부 호흡기도에서 콜로니화하는 데 필요한 양인 것을 특징으로 하는 닭목 조류용 백신.
제25항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 50 내지 약 50,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류용 백신.
제25항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 5,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류용 백신.
제25항에 있어서, 미코플라스마 갈리셉티쿰 박테리아 균주가 도 1, 2, 및 3에 나타낸 바와 같은 K5054의 밴드 패턴 중 적어도 2개에 실질적으로 해당하는 RAPD 패턴을 갖는 것을 특징으로 하는 닭목 조류용 백신.
제29항에 있어서, 예방적 양은 미코플라스마 갈리셉티쿰 균주가 각 조류의 상부 호흡기도에서 콜로니화하는 데 필요한 양인 것을 특징으로 하는 닭목 조류용 백신.
제29항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 50 내지 약 50,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류용 백신.
제29항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 5,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류용 백신.
제31항에 있어서, 미코플라스마 갈리셉티쿰 박테리아 균주가 도 1, 2, 및 3에 나타낸 바와 같은 K5054의 밴드 패턴 3개 모두에 실질적으로 해당하는 RAPD 패턴을 갖는 것을 특징으로 하는 닭목 조류용 백신.
제25항에 있어서, 예방적 양은 미코플라스마 갈리셉티쿰 균주가 각 조류의 상부 호흡기도에서 콜로니화하는 데 필요한 양인 것을 특징으로 하는 닭목 조류용 백신.
제33항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 50 내지 약 50,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류용 백신.
제33항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 5,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류용 백신.
서열 번호 1과 적어도 98%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열의 PvP 표면 어드히진 유전자가 존재하는 미코플라스마 갈리셉티쿰 박테리아 균주의 예방적 양 및 약학적 허용성 담체를 포함하는 닭목 조류용 백신.
제37항에 있어서, 예방적 양은 미코플라스마 갈리셉티쿰 균주가 각 조류의 상부 호흡기도에서 콜로니화하는 데 필요한 양인 것을 특징으로 하는 닭목 조류용 백신.
제37항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 50 내지 약 50,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류용 백신.
제37항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 5,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류용 백신.
서열 번호 1과 적어도 98%의 상동성을 갖는 뉴클레오티드 서열의 표면 지단백질 유전자가 존재하는 미코플라스마 갈리셉티쿰 박테리아 균주의 예방적 양 및 약학적 허용성 담체를 포함하는 닭목 조류용 백신.
제41항에 있어서, 예방적 양은 미코플라스마 갈리셉티쿰 균주가 각 조류의 상부 호흡기도에서 콜로니화하는 데 필요한 양인 것을 특징으로 하는 닭목 조류용 백신.
제41항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 50 내지 약 50,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류용 백신.
제51항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 5,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류용 백신.
ATCC에 특허 기탁 명칭 PTA-4507로 기탁된 K5054 미코플라스마 갈리셉티쿰 박테리아와 동정 성질이 유사한 미코플라스마 갈리셉티쿰 박테리아 균주의 예방적 양 및 약학적 허용성 담체를 포함하는 닭목 조류용 백신.
제45항에 있어서, 예방적 양은 미코플라스마 갈리셉티쿰 균주가 각 조류의 상부 호흡기도에서 콜로니화하는 데 필요한 양인 것을 특징으로 하는 닭목 조류용 백신.
제45항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 50 내지 약 50,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류용 백신.
제45항에 있어서, 예방적 양이 마리당 약 5,000 ccu인 것을 특징으로 하는 닭목 조류용 백신.
ATCC에 특허 기탁 명칭 PTA-4507로 기탁된 미코플라스마 갈리셉티쿰 균주 K5054와 동정 특징이 유사한 미코플라스마 갈리셉티쿰 박테리아의 본질적으로 생물학적으로 순수한 배양물.
제1항의 미코플라스마 갈리셉티쿰 포뮬레이션을 부화 후의 조류에 투여하는 단계를 포함하는 닭목 조류 예방 방법.
제50항에 있어서, 포뮬레이션을 조류 부화 후 첫 18주 동안에 투여하는 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방 방법.
제50항에 있어서, 포뮬레이션을 조류 부화 후 적어도 약 2주 째에 투여하는 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방 방법.
제50항에 있어서, 조류가 닭인 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방 방법.
제50항에 있어서, 조류가 칠면조인 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방 방법.
제50항에 있어서, 포뮬레이션을 호흡기 점막에 투여하는 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방 방법.
제50항에 있어서, 포뮬레이션을 안구점적을 통해서 투여하는 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방 방법.
제50항에 있어서, 포뮬레이션을 비측내 투여하는 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방 방법.
제50항에 있어서, 포뮬레이션을 에어로솔을 통해서 투여하는 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방 방법.
제50항에 있어서, 포뮬레이션을 식수를 통해서 투여하는 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방 방법.
제50항에 있어서, 마리당 약 50 내지 약 50,000 ccu인 포뮬레이션을 각 조류에 투여하는 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방 방법.
제50항에 있어서, 마리당 약 5,000 ccu인 포뮬레이션을 각 조류에 투여하는 것을 특징으로 하는 닭목 조류 예방 방법.
제50항에 있어서, 적어도 1회의 추가 포뮬레이션을 조류에 투여하는 단계를 추가로 포함하는 닭목 조류 예방 방법.
비-면역병원성 미코플라스마 갈리셉티쿰 균주를 부화 후의 조류에 투여함으로써, 균주가 조류의 호흡기 상피에 존속하면서 호흡기 상피로부터 다른 미코플라스마 갈리셉티쿰 균주를 배제시키는 단계를 포함하는, 미코플라스마 갈리셉티쿰에 대한 닭목 조류 예방 방법.
제63항에 있어서, 비-면역병원성 미코플라스마 갈리셉티쿰 균주가 ATCC에 특허 기탁 명칭 PTA-4507로 기탁된 균주 K5054와 동정 특징이 유사한 균주인 것을 특징으로 하는, 미코플라스마 갈리셉티쿰에 대한 닭목 조류 예방 방법.
제63항에 있어서, 비-면역병원성 미코플라스마 갈리셉티쿰 균주가 ATCC에 특허 기탁 명칭 PTA-4507로 기탁된 균주 K5054인 것을 특징으로 하는, 미코플라스마 갈리셉티쿰에 대한 닭목 조류 예방 방법.