JP2005533116A - マイコプラズマ・ガリセプチクム配合物 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、キジ目(Galliformes)の鳥類に適用するための、American Type Culture Collection(ATCC)(10801 University Blvd.、Manassas、Va.、20110−2209、米国)に寄託されているMG株K5054(特許寄託表示PTA−4507)から形成されるMG防御用配合物を有するワクチンに関する。好ましい実施形態において、防御量が鳥に投与される。従って、本発明の1つの局面は、キジ目の鳥類に対する防御用配合物であって、図1、図2および図3に示されるように、K5054のバンドパターンの少なくとも1つに実質的に対応するRAPDパターンを有するマイコプラズマ・ガリセプチクム細菌株(これはATCCに寄託されている;特許寄託表示PTA−4507)の防御量と、医薬的に受容可能なキャリアとを含む防御用配合物を提供することである。この場合、図1におけるK5054のバンドパターンが、プライマーとして配列番号4を使用して得られ、K5054のバンドパターンが、プライマーとして、配列番号5、配列番号6および配列番号7を使用して得られ、K5054のバンドパターンが、プライマーとして配列番号8を使用して得られる。
図面の簡単な記述
図1はCharltonプライマーを使用するRAPDゲルである。
図2はFanプライマー(M16SPCR5’、M13F、S1OLIGO3’)を使用するRAPDゲルである。
図3はGearyの1254プライマーを使用するRAPDゲルである。
図4は実験結果を示す表である。
図5は実験結果を示す表である。
図6は実験結果を示す表である。
図7は実験結果を示す表である。
図8は実験結果を示す表である。
図9は実験結果を示す表である。
図10は実験結果を示す表である。
図11は表4.1.直腸(Backpassage)である。
図12は表4.2.直腸(Backpassage)である。
図13は表5.1.免疫性の持続および持続期間である。
図14は表5.2.免疫性の持続および持続期間である。
図15は表6.1.伝染性である。
本発明によるMGは、下記のプロトコルに従って培養で成長させることができる:
培地:鳥マイコプラズマを単離するためのFrey培地
マイコプラズマ培養液基剤 22.5g
デキストロース 3g
ブタ血清 120ml
酵母抽出物 35ml
フェノールレッド(1%) 2.5ml
酢酸タリウム(10%)A 6ml
アンピシリン 1g/リットルA
感受性の七面鳥に、4つの異なる罹患した商業的な七面鳥の群れから得られた洞滲出物を接種した。MGの単離が、七面鳥に抗原投与するために使用された滲出物の1つから行われ、これはK5054と呼ばれた。
試験A
8羽の七面鳥の4群に対して、4カ所の異なる農場における罹患した商業的七面鳥から採取された洞滲出物を抗原投与した(1つの農場がK5054滲出物を有していた)。5番目の群が陰性コントロールとして使用された。七面鳥は臨床的徴候について観察され、血清学のために採血され、そして、気管塗抹物がマイコプラズマ培養のために得られた。この実験の結果が図4に示される。
試験Aからの残る七面鳥(8羽の感染元および6羽の接触鳥)を試験Bで使用した。K5054洞滲出物接種後88日目に、7羽の七面鳥(4羽の感染元および3羽の接触鳥)に対して、MGのR株をエアロゾルによって抗原投与した。残る7羽の七面鳥(4羽の感染元および3羽の接触鳥)がコントロールとして使用された。すべての七面鳥が、R株による抗原投与の10日後に検死された。それらは血清学のために採血され、気管塗抹物および気嚢塗抹物が培養のために得られた。気道切片が、気管粘膜厚測定のためにホルマリン中で固定された。
K5054洞滲出物による接種は、このバイオアッセイでは、七面鳥において臨床的反応をほとんど生じさせなかった。K5054株の安全性をさらに調べるために、予備的調査が鶏および七面鳥において行われた。これらの鳥に対して、Frey培地で増殖されたK5054を粗粒スプレーによって抗原投与した。
商業用の採卵用鶏に対して、粗粒スプレーによるK5054、ts−11およびR株を抗原投与した。鶏は、抗原投与後10日目に、血清学、気嚢病変部の全体的な評価、および気管粘膜の厚さの測定によって評価された。この実験の結果が図6および図7に示される。
実験計画
市販元から入手した七面鳥にK5054およびR株を4週齢のときに粗粒スプレーによって接種した。七面鳥は、陰性コントロール群と一緒に、10日後に検死された。結果が図8に示される。
実験計画
K5054洞滲出物が接種され、その後、R株が抗原投与されたバイオアッセイ中の七面鳥は、疾患に対する優れた防御を示した。MGに対する生ワクチンとしてのK5054の効力が、K5054が以前に接種された鶏および七面鳥に毒性MG株(R)を抗原投与することによって評価された。
商業的な採卵用鶏にK5054またはts−11を接種した。鶏は、5週間後にR株が抗原投与された(粗粒スプレー)。抗原投与後10日目に、鶏は、血清学、気嚢病変部の全体的な評価、および気管粘膜の厚さの測定によって評価された。実験計画が下記に示される。この試験の結果が図9に示される。
実験計画;
K5054によるワクチン接種を以前に受けた18羽の七面鳥に、R株(1.38x109ccu/ml)をワクチン接種後6週間目に粗粒スプレーによって抗原投与した。七面鳥は、陰性コントロール群と一緒に、10日後に検死された。七面鳥は、血清学、気嚢病変部、および気管粘膜厚さによって評価された。この試験の結果が図10に示される。
さらなる研究が、鶏における単離体の安全性および安定性を明らかにするために行われた。
商業的な採卵用鶏に対して、3週齢のときにK5054を点眼によって抗原投与した。1週間後、これらの鶏から得られた気管塗抹物を使用して、さらに15羽の鶏(3週齢)に接種した。このプロセスを、単離体が10回継代培養されるまで繰り返した。10回目の継代培養から得られた単離体を抗原投与試験で使用した。30羽の鶏からなる群に対して、K5054、K5054+10またはR株をエアロゾルによって抗原投与した。抗原投与に対する応答が、抗原投与後10日目に、全体的な病変および組織病理学的病変、ならびに血清学的反応によって、陰性コントロールと比較され、評価された。
鶏の気道におけるK5054の持続、および1回のK5054ワクチン接種により誘発される免疫性の長さが、7ヶ月の期間にわたって評価された。
K5054の伝染性を評価するために、鶏にK5054を抗原投与して、未処置の鳥との直接的接触状態および間接的接触状態に置いた。
Claims (65)
- キジ目の鳥類に対する防御用配合物であって、マイコプラズマ・ガリセプチクム細菌株の防御量と、医薬的に受容可能なキャリアとを含み、前記マイコプラズマ・ガリセプチクム細菌株が、
図1、図2および図3に示されるようにATCCに寄託されたK5054(特許寄託表示PTA−4507)のバンドパターンの少なくとも1つに実質的に対応するRAPDパターンを有し、
図1におけるK5054のバンドパターンが、プライマーとして配列番号4を使用して得られ、
図2におけるK5054のバンドパターンが、プライマーとして、配列番号5、配列番号6および配列番号7を使用して得られ、
図3におけるK5054のバンドパターンが、プライマーとして配列番号8を使用して得られる、
防御用配合物。 - 防御量が、鳥の上部気道に定着するために要求されるマイコプラズマ・ガリセプチクム株の量である請求項1記載の配合物。
- 防御量が約50〜約50,000ccu/鳥である請求項1記載の配合物。
- 防御量が約5,000ccu/鳥である請求項1記載の配合物。
- マイコプラズマ・ガリセプチクム細菌株が、図1、図2および図3に示されるように、K5054のバンドパターンの少なくとも2つに実質的に対応するRAPDパターンを有する請求項1記載の配合物。
- 防御量が、鳥の上部気道に定着するために要求されるマイコプラズマ・ガリセプチクム株の量である請求項5記載の配合物。
- 防御量が約50〜約50,000ccu/鳥である請求項5記載の配合物。
- 防御量が約5,000ccu/鳥である請求項5記載の配合物。
- マイコプラズマ・ガリセプチクム細菌株が、図1、図2および図3に示されるように、K5054の全ての三つのバンドパターンに実質的に対応するRAPDパターンを有する請求項1記載の防御配合物。
- 防御量が、鳥の上部気道に定着するために要求されるマイコプラズマ・ガリセプチクム株の量である請求項9記載の配合物。
- 防御量が約50〜約50,000ccu/鳥である請求項9記載の配合物。
- 防御量が約5,000ccu/鳥である請求項9記載の配合物。
- キジ目の鳥類に対する防御用配合物であって、配列番号1と少なくとも98%の相同性を示すヌクレオチド配列を有するPvP表面アドヘシン遺伝子を有するマイコプラズマ・ガリセプチクム細菌株の防御量と医薬的に受容可能なキャリアとを含む防御用配合物。
- 防御量が、鳥の上部気道に定着するために要求されるマイコプラズマ・ガリセプチクム株の量である請求項13記載の配合物。
- 防御量が約50〜約50,000ccu/鳥である請求項13記載の配合物。
- 防御量が約5,000ccu/鳥である請求項13記載の配合物。
- キジ目の鳥類に対する防御用配合物であって、配列番号2と少なくとも98%の相同性を示すヌクレオチド配列を有する表面リポタンパク質遺伝子を有するマイコプラズマ・ガリセプチクム細菌株の防御量と医薬的に受容可能なキャリアとを含む防御用配合物。
- 防御量が、鳥の上部気道に定着するために要求されるマイコプラズマ・ガリセプチクム株の量である請求項17記載の配合物。
- 防御量が約50〜約50,000ccu/鳥である請求項17記載の配合物。
- 防御量が約5,000ccu/鳥である請求項17記載の配合物。
- キジ目の鳥類に対する防御用配合物であって、ATCCに寄託されたK5054のマイコプラズマ・ガリセプチクム細菌(特許寄託表示PTA−4507)と類似する同定特徴を有するマイコプラズマ・ガリセプチクム細菌株の防御量と医薬的に受容可能なキャリアとを含む防御用配合物。
- 防御量が、鳥の上部気道に定着するために要求されるマイコプラズマ・ガリセプチクム株の量である請求項21記載の配合物。
- 防御量が約50〜約50,000ccu/鳥である請求項21記載の配合物。
- 防御量が約5,000ccu/鳥である請求項21記載の配合物。
- キジ目の鳥類に対するワクチンであって、マイコプラズマ・ガリセプチクム細菌株の防御量と、医薬的に受容可能なキャリアとを含み、前記マイコプラズマ・ガリセプチクム細菌株が、
図1、図2および図3に示されるようにATCCに寄託されたK5054(特許寄託表示PTA−4507)のバンドパターンの少なくとも1つに実質的に対応するRAPDパターンを有し、
図1におけるK5054のバンドパターンが、プライマーとして配列番号4を使用して得られ、
図2におけるK5054のバンドパターンが、プライマーとして、配列番号5、配列番号6および配列番号7を使用して得られ、
図3におけるK5054のバンドパターンが、プライマーとして配列番号8を使用して得られる、
ワクチン。 - 防御量が、各鳥の上部気道に定着するために要求されるマイコプラズマ・ガリセプチクム株の量である請求項25記載のワクチン。
- 防御量が約50〜約50,000ccu/鳥である請求項25記載のワクチン。
- 防御量が約5,000ccu/鳥である請求項25記載のワクチン。
- マイコプラズマ・ガリセプチクム細菌株が、図1、図2および図3に示されるように、K5054のバンドパターンの少なくとも2つに実質的に対応するRAPDパターンを有する請求項25記載のワクチン。
- 防御量が、各鳥の上部気道に定着するために要求されるマイコプラズマ・ガリセプチクム株の量である請求項29記載のワクチン。
- 防御量が約50〜約50,000ccu/鳥である請求項29記載のワクチン。
- 防御量が約5,000ccu/鳥である請求項29記載のワクチン。
- マイコプラズマ・ガリセプチクム細菌株が、図1、図2および図3に示されるように、K5054の全ての三つのバンドパターンに実質的に対応するRAPDパターンを有する請求項31記載のワクチン。
- 防御量が、各鳥の上部気道に定着するために要求されるマイコプラズマ・ガリセプチクム株の量である請求項25記載のワクチン。
- 防御量が約50〜約50,000ccu/鳥である請求項33記載のワクチン。
- 防御量が約5,000ccu/鳥である請求項33記載のワクチン。
- キジ目の鳥類に対するワクチンであって、配列番号1と少なくとも98%の相同性を示すヌクレオチド配列を有するPvP表面アドヘシン遺伝子を有するマイコプラズマ・ガリセプチクム細菌株の防御量と医薬的に受容可能なキャリアとを含むワクチン。
- 防御量が、各鳥の上部気道に定着するために要求されるマイコプラズマ・ガリセプチクム株の量である請求項37記載のワクチン。
- 防御量が約50〜約50,000ccu/鳥である請求項37記載のワクチン。
- 防御量が約5,000ccu/鳥である請求項37記載のワクチン。
- キジ目の鳥類に対する防御用配合物であって、配列番号2と少なくとも98%の相同性を示すヌクレオチド配列を有する表面リポタンパク質遺伝子を有するマイコプラズマ・ガリセプチクム細菌株の防御量と医薬的に受容可能なキャリアとを含むワクチン。
- 防御量が、各鳥の上部気道に定着するために要求されるマイコプラズマ・ガリセプチクム株の量である請求項41記載のワクチン。
- 防御量が約50〜約50,000ccu/鳥である請求項41記載のワクチン。
- 防御量が約5,000ccu/鳥である請求項51記載のワクチン。
- キジ目の鳥類に対する防御用ワクチンであって、ATCCに寄託されたK5054のマイコプラズマ・ガリセプチクム細菌(特許寄託表示PTA−4507)と類似する同定特徴を有するマイコプラズマ・ガリセプチクム細菌株の防御量と医薬的に受容可能なキャリアとを含むワクチン。
- 防御量が、各鳥の上部気道に定着するために要求されるマイコプラズマ・ガリセプチクム株の量である請求項45記載のワクチン。
- 防御量が約50〜約50,000ccu/鳥である請求項45記載のワクチン。
- 防御量が約5,000ccu/鳥である請求項45記載の配合物。
- ATCCに寄託されたK5054のマイコプラズマ・ガリセプチクム株(特許寄託表示PTA−4507)と類似する同定特徴を有するマイコプラズマ・ガリセプチクム細菌の本質的に生物学的に純粋な培養物。
- 請求項1に記載のマイコプラズマ・ガリセプチクム配合物をふ化後の鳥に投与することを含むキジ目の鳥類を保護する方法。
- 配合物がふ化後の最初の約18週間の間に投与される請求項50記載の方法。
- 配合物がふ化後の少なくとも約2週間目で投与される請求項50記載の方法。
- 鳥が鶏である請求項50記載の方法。
- 鳥が七面鳥である請求項50記載の方法。
- 配合物が呼吸器粘膜へ投与される請求項50記載の方法。
- 配合物が点眼により投与される請求項50記載の方法。
- 配合物が鼻腔投与される請求項50記載の方法。
- 配合物がエアロゾルにより投与される請求項50記載の方法。
- 配合物が水を飲むことにより投与される請求項50記載の方法。
- 約50ccu〜約50,000ccu/鳥の配合物が各鳥に投与される請求項50記載の方法。
- 約5,000ccu/鳥の配合物が各鳥に投与される請求項50記載の方法。
- 少なくとも1つの追加抗原刺激配合物を鳥に投与する工程をさらに含む請求項50記載の方法。
- キジ目の鳥をマイコプラズマ・ガリセプチクムから保護するための方法であって、
非免疫病原性のマイコプラズマ・ガリセプチクム株をふ化後の鳥に投与し、その結果、この菌株が鳥の呼吸器の上皮に持続し、他のマイコプラズマ・ガリセプチクム株を呼吸器の上皮から追い出すようにすること
を含む方法。 - 非免疫病原性のマイコプラズマ・ガリセプチクム株がATCCに寄託されたK5054株(特許寄託表示PTA−4507)と類似する同定特徴を有する株である請求項63記載の方法。
- 非免疫病原性のマイコプラズマ・ガリセプチクム株がATCCに寄託されたK5054株(特許寄託表示PTA−4507)である請求項63記載の方法。
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