KR20040094302A

KR20040094302A - 펩타이드가 결합된 비타민 씨 유도체, 이의 제조방법 및이를 포함하는 조성물

Info

Publication number: KR20040094302A
Application number: KR1020040018506A
Authority: KR
Inventors: 최호일; 김선영; 김흥재; 최정우
Original assignee: 주식회사 펩트론
Priority date: 2003-04-30
Filing date: 2004-03-18
Publication date: 2004-11-09
Also published as: KR100459679B1

Abstract

본 발명은 펩타이드가 결합된 비타민 C 유도체 또는 약학적으로 허용되는 이의 염, 이의 제조방법 및 이를 조성물에 관한 것이다.

Description

펩타이드가 결합된 비타민 씨 유도체, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 조성물{Vitamin C derivatives with peptide, preparation method thereof and composition comprising the same}

본 발명은 펩타이드가 결합된 비타민 C 유도체 또는 약학적으로 허용되는 이의 염, 이의 제조방법 및 이들 조성물에 관한 것이다.

피부는 보호기능, 장벽기능, 온도조절기능, 배설기능, 호흡기능 등을 하는 기관으로 표피, 진피, 피하지방으로 이루어진다. 표피는 가장 얇은 층으로 각질형성 세포와 멜라닌 세포의 유기적인 결합으로 이루어져 있으며, 진피는 피부의 약 95%를 담당하며 피부의 보습 및 보호를 담당하는 층으로 피부탄력(주름)에 중요한 역할을 하는 대표적인 단백질인 콜라겐, 엘라스틴이 그물처럼 짜여져 있고 혈관, 신경이 존재하며 알레르기 반응에 관여하는 비만세포, Na-PCA나 히아루론산 같은 천연보습인자도 함유하고 있다. 피하지방은 표피 및 진피로 영양공급, 체형결정, 체온유지, 외부적인 충격흡수 및 피하지방하 세포보호 등의 역할을 한다.

그러나, 나이가 들면서 내인성 또는 외인성 원인으로 인해 피부기능이 급격히 저하되는 노화를 겪게 된다. 노화가 진행되면서 피부의 구성성분인 표피, 진피, 및 피하조직의 두께가 얇아지고 콜라겐과 엘라스틴이 가늘어지고 느슨해져 탄력이 떨어지고 주름등이 생긴다. 또한, 피부장벽의 기능을 맡고 있는 지질 장벽(Lipid barrier)의 지질 조성과 함량이 변화하면서 피부의 수분함량이 떨어지고 피부가 건조해지는 등의 생리적 변화를 겪게 된다. 또한, 기미, 주근깨, 색소침착과 그 외 다양한 피부 병변이 유발된다.

이런 피부노화에 따른 문제점을 해결하기 위하여 피부개선 효과를 가지는 다양한 유효 성분과 이를 포함하는 조성물이 연구되어지고 있다.

피부노화를 억제시키는 효과가 있는 성분으로는 비타민 C, 비타민 E, 베타카로틴 등 항산화 비타민 등이 많이 사용되고 있다. 이중, 비타민 C는 자외선(UV) 차단 효과, 항산화 효과, 콜라겐 형성 촉진을 통한 피부 주름 개선, 기미/주근깨/검버섯 등의 색소 침착개선 효과, 면역체계 강화 등을 가진다. 이와 같은 비타민 C의 작용을 요약하면 다음과 같다.

비타민 C는 자외선, 특히 UVA에 대한 차단기능이 강하다(Darr, D. et al., 1996, Acta Derm. Venereol. (Strckh). 76: 264-268; Black, H. S. et al., 1975, J. Invest. Dermatol. 65: 412-414). 또한, 비타민 C는 UVB에 의해 발생하는 피부 손상을 보호하는 역할을 하는데, UVB 조사전에 비타민 C를 돼지와 인간의 UVB가 쬐여지는 피부 부위에 바르면 홍반과 햇볕에 타는 현상이 방지한다고 밝혀졌다(Darr, D. et al., 1992, Brit. J. Dermatil. 127: 247-253; Murry, J. et al., 1991, J. Invest. Dermatol. 96: 587).

피부, 혈액 및 기타 조직에서 화학적 오염, 흡연, 특히 자외선(UV)에 의해 유발되는 ROS(Reactive Oxygen Species)를 중화시키는 강력한 생체 항산화제로서의 비타민 C의 작용은 비타민 C가 두개의 전자를 받아들여 탈수소-L-아스코르브산(Dehydro-L-ascorbic acid) 형태로 쉽게 산화될 수 있는 구조를 가지기 때문이다. 비타민 C는 피부의 비효소적 항산화제 방어 시스템의 중요한 요소로 비타민 C가 고농도로 존재할 때 싱글렛 산소(singlet oxygen), 슈퍼옥사이드 음이온(superoxide anion), 하이드록시 라디칼(hydroxy radical)과 같은 ROS 등이 단백질, 핵산, 세포막지질등의 생체 성분을 산화시키거나 변성시키기 전에 이들을 중화시키는 역할을 하는 것이다(Buettner, G. R. et al. 1996. Cadenas, E.,Packer, L., eds. Handbook of antioxidants. pp. 91-115).

각질층으로 경피적으로 공급됨으로써 피부 광택, 피부색 개선, 주름 감소, 탄력 증가 등을 나타내는 비타민 C의 효과는(미국 특허 제4,983,382호), 비타민 C에 의해 콜라겐 합성이 촉진되기 때문이다. 콜라겐 폴리펩타이드의 10% 정도를 차지하는 히드록시프롤린은 프롤린 하이드록실라제(proline hydroxylase)에 의해 생합성되는데 이 효소의 보조인자(cofactor)로 비타민 C가 작용한다(Tomita, Y. et al., 1980, J. Invest. Dermatol. 75(5): 379-382). 즉, 비타민 C는 프롤린 하이드록실라제의 활성을 촉진하여 하이드록실프롤린의 합성을 촉진하고, 이는 삼중나선 구조의 콜라겐 생합성을 촉진하여 피부 주름 형성 억제등의 피부 개선 효과를 가지는 것이다.

비타민 C의 미백 효과는 비타민 C가 멜라닌 형성에 중요한 티로시나아제(tyrosinase) 활성과 멜라닌 형성을 억제하기 때문이다(Tomita, Y. et al., 1980, J. Invset. Dermatol. 75(5); 379-382).

비타민 C의 면역체계를 강화시키는 역할은 알러지 반응물질인 히스타민의 세포막에서의 방출을 억제함으로써 민감성 피부에서 알러지 반응을 억제하고 쥐에서 항원에 접촉시 자외선 유도된 면역억제와 내성으로부터 보호한다는 것이 증명되었다(Nakamura, T. et al., 1997, J. Invest. Dermatol. 109: 20-24). 또한, 백혈구의 식균작용을 도와주고 감염이 전개되는 동안 백혈구 이동을 촉진시켜 감염을 억제하고 바이러스 증식 억제 물질인 인터페론의 생합성을 증가시키는 작용을 하여, 다양한 감염성 질환에 대한 생체 저항성을 상승시키는 역할도 한다. 그 외 비타민C는 생체내 엽산 대사 및 아미노산의 대사 과정에도 관여하는 등 다양한 기능을 수행한다.

상기 언급한 다양한 역할을 담당하는 비타민 C는 C₆H₈O₆의 화학식을 가지는 수용성의 물질이다. 비타민 C는 분자의 2, 3, 5, 6번 탄소에 위치하는 수산화 그룹 때문에 친수성(hydrophilicity)을 가진다. 물과 같은 중성의 pH에서는 이들 수산화 그룹, 특히 2번과 3번 탄소가 음의 전하를 가지게 되는데 이로 인해 수용액에 빨리, 완전히 녹게 되지만 수용액이 아닌 피부와 같은 유기적인 환경에서는 용해도의 제한이 있다. 또한, 비타민 C는 외용제에 공식적으로 사용되는 유기용매 예를 들어, 글리세린, 프로필렌 글리콜, 다양한 지방(fat)등에 잘 녹지 않아서, 비타민 C를 피부로 운반하는데 한계를 가진다. 즉, 비타민 C가 이온화되지 않았을 때 피부장벽을 쉽게 통과하여 흡수되는데 비이온 상태를 유지하기 위해서는 pH가 4.2 이하여야만 한다는 제한점이 있다.

비타민 C의 피부 축적양은 경구 투여보다 외용제로 사용하였을 때 20배 내지 40배 정도 높은 것으로 알려졌다. 자외선(UV) 차단 효과, 항산화 효과, 콜라겐 형성 촉진을 통한 피부 주름 개선, 기미/주근깨/검버섯 등의 색소 침착개선 효과, 면역체계 강화등을 도모하기 위한 목적으로 사용하는 피부외용제의 경우에는 효능물질이 피부의 각질층을 통과하여 표피에 있는 세포까지 도달하여야 작용을 하므로 효능물질의 경피흡수율이 높아야 한다. 일반적으로 어떤 물질의 피부 침투율은 그 물질의 친유성(lipophilicity)과 관계가 있다. 피부의 친유성과 유사한 물질인 경우 피부로의 분배계수가 커져 경피흡수가 잘되는 것으로 알려져 있는데 비타민 C의 경우는 친수성이 높아 피부로의 분배가 낮아 경피흡수가 어렵다.

상기한 바와 같이 비타민 C는 다양한 효과를 나타내지만, 안전성, 안정성, 피부 흡수가 낮기 때문에 이를 개선하기 위한 많은 연구가 진행되어 왔다.

비타민 C 유도체의 연구를 유형별로 구분하는 경우, 한가지 유형은 인산화된 아스코르브산이나 인산화된 아스코르브산의 금속염 형태의 유도체를 제공하는 것이다. 아스코르브산의 2번 탄소와 3번 탄소의 하이드록실기를 인산화기와 에스테르 결합으로 연결하여 각각 아스코르빌-2-포스페이트 또는 아스코르빌-3-포스페이트(ascorbyl-3-phosphate)를 형성하였는데 이런 종류의 유도체들은 다른 유도체에 비해 인체가 사용할 수 있는 형태인 L-아스코르브산 형태로 전환은 쉽게 이루어지지만 음의 전하를 가지기 때문에 피부흡수가 어렵다는 단점이 있다.

또 다른 유형은 지방산이 결합된 형태의 아스코르브산을 제공하는 것이다. 미국 특허 제5409693호는 아스코르브산의 친유성 지방산 에스테르(fat soluble fatty acid ester) 형태, 예를 들어 아스코르빌 팔미테이트, 아스코르빌 라우레이트, 아스코르빌 미리스테이트, 아스코르빌 스테아레이트 등의 비타민 C 유도체를 발표하였다. 그 중에서 아스코르빌-6-팔미테이트가 가장 널리 사용된다. 그러나, 아스코르빌-6-팔미테이트는 피부에 쉽게 흡수는 되지만 L-아스코르브산 형태로 전환이 어렵다는 단점이 있다. 아스코르빌-6-팔미테이트는 쥐의 피부에서 광산화로부터 보호하는데 실패하였다는 결과가 발표되었으며(Bissett, D. et al., 1990,Photodermatol Photoimmunol Photomed 7: 56-62) 10wt %의 아스코르빌-6-팔미테이트를 포함한 혈청을 처리했을 때 피부에서 아스코르브산의 현저한 증가가 관찰되지 않았다는 결과도 발표되었다(Pinnell, S. R. et al., 2001. Dermatologic Surgery. 27(2): 137-142).

세 번째 유형은 아스코르브산이 모노싸카라이드로 유도체화된 형태, 예를 들면 글리코실화, 만노실화, 프록토실화, 푸코실화, 갈락토실화, N-아세틸글루코스아민화, N-아세틸뮤라민화된 유도체들을 제공하는 것이다. 그러나, 생체내의 생리 활성에 대한 구체적이고 정확한 규명은 아직 이루어지지 않은 실정이다.

콜라겐은 피부, 혈관, 내장, 뼈 등에서 매우 많이 발견되며, 피부를 구성하고 있는 진피의 70%는 콜라겐으로 이루어져 있고 근육을 둘러싸고 있는 근막 또한 콜라겐으로 구성되어 있다. 생체 단백질 총 중량의 30%를 차지하는 콜라겐은 피부의 기계적 견고성, 결합조직의 저항력과 조직의 결합력, 세포 접착의 지탱, 유기체의 성장 또는 상처 치유시 세포 분할과 분화를 유도하는 기능을 한다. 콜라겐은 섬유아세포에서 생합성되는데 자연노화 및 광노화에 의해 양이 감소하며 20세에서 80세에 이르는 동안 65%의 감소가 일어난다고 알려져 있다(Shuster S., 1975, British journal of determatology, 93(6): 639-643). 생체내 콜라겐의 합성이 활발해지면 진피 기질 성분이 증가되어 상처치유, 탄력증가, 주름개선등의 효과를 기대할 수 있다는 것이 밝혀지면서 화장품, 식품, 의약품등에 사용되고 있다. 이러한 콜라겐을 형성하는 최소의 활성 단위인 10개 이하의 올리고펩타이드는 메신저, 자극제, 신경 전달제로서의 역할과 성장조절, 수유, 면역, 소화, 혈압, 치유와 같은 생리 대사 작용과도 관련이 있다. 특히 피부 재생 효과가 밝혀진 펩타이드는 프랑스 특허 제2,668,265호, 미국 특허 제4,665,054호, 제WO91/3488호, 제WO91/7431호 등에 공지되어 있다. 그러나, 이러한 펩타이드들의 경우 침전이 형성되어 제품의 안정도가 크게 저하되는 단점이 있다.

이런 배경하에서, 본 발명자는 비타민 C와 콜라겐 펩타이드를 접목하여 상기 언급한 종래 비타민 C 유도체의 제한점을 극복하여 안전성 및 안정성이 개선되고 피부 침투력 우수한 비타민 C 유도체를 제공하고자 하였다.

도 1은 본 발명의 화합물, 비타민 C 및 알부틴을 사용하여 멜라닌 함량을 검정한 막대그래프이다.

도 2는 본 발명의 화합물 및 비티민 C를 사용하여 엘라스타제 활성을 검정한 그래프이다.

도 3은 본 발명의 화합물 및 비티민 C를 사용하여 콜라겐 생합성능을 검정한 막대그래프이다.

도 4는 본 발명의 화합물 및 비티민 C를 사용하여 라디칼 제거능을 검정한 막대그래프이다.

하나의 양태로서, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 비타민 C 유도체 또는 약학적으로 허용 가능한 이의 염에 관한 것이다:

상기식에서,

R1 및 R2는 각각 동일하거나 상이하고, -OH 또는이며, R1과 R2가 동시에 -OH는 아니고,

X는 -OC(O)(CH₂)mC(O)-이고,

는 천연 또는 비-천연 아미노산중에서 선택되는 동일하거나 상이한 아미노산 잔기가 아미드 결합된 펩타이드이며,

R은 천연 또는 비-천연 아미노산 잔기 중에서 아미노산 잔기의 곁가지이며,

n은 3 내지 10의 정수이고,

m은 2 내지 5의 정수이다.

구체적으로, 화학식 1의 화합물은 하기 화학식 1a, 1b 및 1c를 포함한다:

바람직한 양태에서,는 글리신, 라이신, 히스티딘, 세린, 프롤린, 히드록시프롤린 및 트레오닌중에서 선택되는 동일하거나 상이한 아미노산 잔기가 아미드 결합된 펩타이드이고, R은 상기한 아미노산 잔기의 곁가지이며, n은 3 내지 7, 보다 바람직하게는 3 내지 5의 정수로서, 트리 내지 펜타 펩타이드이며, 특히 바람직하게는 글리실-라이실-히스티딘, 글리실-히스티딜-라이신, 글리실-프롤릴-히드록시프롤린 또는 라이실-트레오닐-트레오닐-라이실-세린이다. 또한, m은 2 내지 4, 보다 바람직하게는 2 또는 3의 정수, 특히 바람직하게는 2의 정수로서 X는 숙시닐기이다.

또 다른 양태로서, 본 발명은 화학식 2로 표시되는 비타민 C 유도체 또는 약학적으로 허용 가능한 이의 염에 관한 것이다:

상기식에서,

X는 -(CH₂)pO-이고,

는 천연 또는 비-천연 아미노산 중에서 선택되는 동일하거나 상이한 아미노산 잔기가 아미드 결합된 펩타이드이며,

R은 천연 또는 비-천연 아미노산 잔기 중에서 선택되는 아미노산 잔기의 곁가지이고,

n은 3 내지 10의 정수이며,

p는 2 내지 5의 정수이다.

바람직한 양태에서,는 글리신, 라이신, 히스티딘, 세린, 프롤린, 히드록시프롤린 및 트레오닌중에서 선택되는 동일하거나 상이한 아미노산 잔기가 아미드 결합된 펩타이드이고, R은 상기한 아미노산 잔기의 곁가지이며, n은 3 내지 7, 보다 바람직하게는 3 내지 5의 정수로서, 트리 내지 펜타 펩타이드이며, 특히 바람직하게는 글리실-라이실-히스티딘, 글리실-히스티딜-라이신, 글리실-프롤릴-히드록시프롤린 또는 라이실-트레오닐-트레오닐-라이실-세린이다. 또한, p는 2 내지 4, 보다 바람직하게는 3 또는 4, 특히 바람직하게는 3의 정수로서 X는 프로판올이다.

바람직한 양태에서, 본 발명의 화합물은 하기 그룹 중에서 선택된다: 6-(숙시닐-라이실-트레오닐-트레오닐-라이실-세린)아스코르브산, 5-(숙시닐-라이실-트레오닐-트레오닐-라이실-세린)아스코르브산, 5,6-디(숙시닐-라이실-트레오닐-트레오닐-라이실-세린)아스코르브산, 6-(숙시닐-글리실-라이실-히스티딘)아스코르브산, 5-(숙시닐-글리실-라이실-히스티딘)아스코르브산, 5,6-디(숙시닐-글리실-라이실-히스티딘)아스코르브산, 6-(숙시닐-글리실-히스티딘-라이신)아스코르브산, 5-(숙시닐-글리실-히스티딘-라이신)아스코르브산, 5,6-디(숙시닐-글리실-히스티딘-라이신)아스코르브산, 6-(숙시닐-글리실-프롤릴-히드록시프롤린)아스코르부산, 5-(숙시닐-글리실-프롤릴-히드록시프롤린)아스코르브산,5,6-디(숙시닐-글리실-프롤릴-히드록시프롤린)아스코르부산, 2-(프로필-라이실-트레오닐-트레오닐-라이실-세린)아스코르브산, 2-(프로필-글리실-라이실-히스티딘)아스코르브산, 2-(프로필-글리실-히스티딘-라이신)아스코르브산, 2-(프로필-글리실-프롤릴-히드록시프롤린)아스코르부산, 및 약학적으로 허용되는 이들의 염.

가장 바람직한 양태에서, 본 발명의 화합물은 하기 그룹중에서 선택된다: 6-(숙시닐-라이실-트레오닐-트레오닐-라이실-세린)아스코르브산, 6-(숙시닐-글리실-라이실-히스티딘)아스코르브산, 6-(숙시닐-글리실-히스티딘-라이실)아스코르브산, 및 약학적으로 허용되는 이들의 염.

본원에서 사용된 용어 "천연 아미노산" 은 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 메티오닌, 글리신, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 아스파르트산 및 글루탐산으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 α-아미노산을 의미한다. 또한, "비-천연 아미노산" 은 핵산 코돈에 의해 암호화되지 않는 아미노산으로, 이의 예에는 상기한 바와 같은 천연 α-아미노산의 D-이성체; Aib(아미노부티르산), bAib(3-아미노이소부티르산), Nva(노르발린), β-Ala, Aad(2-아미노아디프산), bAad(3-아미노아디프산), Abu(2-아미노부티르산), Gaba(γ-아미노부티르산), Acp(6-아미노카프로산), Dbu(2,4-디아미노부티르산), α-아미노피멜산, TMSA(트리메틸실릴-Ala), alle(알로-이소류신), Nle(노르류신), 3급-Leu, Cit(시트룰린), Orn, Dpm(2,2'-디아미노피멜산), Dpr(2,3-디아미노프로피온산), α- 또는 β-Nal, Cha(사이클로헥실-Ala), 하이드록시프롤린, Sar(사코신) 등; 사이클릭 아미노산; Nα-알킬화 아미노산, 예를 들어 MeGly(Nα-메틸글리신), EtGly(Nα-에틸글리신) 및 EtAsn(Nα-에틸아스파라긴); 및 α-탄소가 2개의 측쇄 치환체를 갖는 아미노산이 포함된다.

본원에서 사용된 용어 "펩타이드"란 아미드 결합(또는 펩타이드 결합)으로 연결된 3 내지 10개의 아미노산 잔기로 이루어진 폴리머를 의미한다. 펩타이드는 생체내의 단백질을 추출하여 단백질 분해효소를 처리하여 저분자량화시키거나 유전자 재조합과 단백질 발현 시스템을 이용할 수도 있고 바람직하게는 펩타이드 합성기 등을 통하여 시험관내에서 합성하는 방법 등으로 제조된다. 목적에 따라 펩타이드는 특정 원자나 원자단이 하이드록실기 등으로 치환된 유도체일 수 있다. 펩타이드의 COOH를 C-말단, NH₂를 N-말단이라 한다.

본원에서 펩타이드는 특히, 콜라겐 펩타이드를 포함하며, "콜라겐 펩타이드"란 콜라겐 단백질의 단편으로서, 콜라겐 합성을 촉진하거나 콜라겐 단백질의 구성요소로 사용될 수 있다. 예를 들어 본 발명의 구체예에서 사용된 트리 내지 펜타펩타이드는 진피 내부에 다량 존재하는 콜라겐과 글리코스아미노글리칸의 합성을 촉진시켜 수분 보유 효율을 높이고 진피의 탄력을 증진시킴으로써 보습효과와 주름개선 효과를 부여하는 기능을 가지고 있다. 특히, 펜타펩타이드인 라이실-트레오닐-트레오닐-라이실-세린(Lysyl-Threonyl-Threonyl-Lysyl-Serine)는 피부결합조직과 주름형성 및 보습과 관련하여 중요한 콜라겐 타입 I의 카르복실기 말단 단편(fragment)으로써, 콜라겐을 생합성하는 세포인 섬유아세포의 세포배양에서 콜라겐 타입 I과 III 및 세포와 세포의 접착과 관련하여 세포간 정보전달이 원활하게 되도록 도와주는 파이브로넥틴(fibronectin)과 성장인자인 β-TGF의 합성을 촉진하며(Kou Katayama et al., 1991, Biochemistry 30: 7097-7104), 콜라겐 유전자의 프로모터에 결합하여 이의 전사를 촉진시키는 것으로 보고되었다(Kou Katayama et al., 1993, The journal of Biological Chemistry 268(14): 9941-9944).

한국 특허 출원 제10-2001-0060244호는 HIV 단백질의 일종인 Tat 펩타이드가 결합된 비타민 C 유도체를 기술하고 있다. 상기 특허에서 Tat 펩타이드는 비타민 C의 2번 탄소 위치의 하이드록실기 또는 3번 탄소 위치의 하이드록실기에 직접(링커의 연결 없이) 에스테르 결합되거나 탄소수 6 이상의 반복적인 알콜, 예를 들어-(CH₂CH₂O)₃- 링커를 통해 에테르 결합되어 있다. 이는 콜라겐 펩타이드가 탄소수 5 이하의 알콜 -(CH₂)_2-5-O- 링커를 통해 에테르 결합되고 링커와 펩타이드가 에스테르 결합된 본 발명의 비타민 C 유도체와는 상이한 구조를 갖는 화합물이며, 에스테르 결합으로 연결된 비타민 C 유도체의 경우 에테르 결합보다 생체내에서 비타민 C로부터 콜라겐 펩타이드의 분해가 용이하다.

본원에서 사용된 용어 "약학적으로 허용되는 염"이란 약학적으로 허용되는 무기 및 유기산 및 염기로부터 유도된 것을 포함한다. 적합한 산의 예로는 염산, 브롬산, 황산, 질산, 과염소산, 푸마르산, 말레산, 인산, 글리콜산, 락트산, 살리실산, 숙신산, 톨루엔-p-설폰산, 타르타르산, 아세트산, 시트르산, 메탄설폰산, 포름산, 벤조산, 말론산, 나프탈렌-2-설폰산, 벤젠설폰산 등을 포함할 수 있다. 적합한 염기로부터 유도된 염은 알칼리금속, 예를 들어 나트륨, 알칼리토금속, 예를 들어 마그네슘, 암모늄 등을 포함할 수 있다.

또 다른 양태로서, 본 발명은 비타민 C의 2, 3번탄소 위치의 하이드록실기에 벤질기를 도입하여 보호하고, 비타민 C의 5번, 6번 또는 5번과 6번 탄소 위치의 하이드록실기와 탄소수 2 내지 5의 디카르복실산을 에스테르 결합시킨 후 펩타이드와 아미드 결합시키는 것을 특징으로 하는, 화학식 1의 비타민 C 유도체 또는 약학적으로 허용되는 이의 염의 제조방법에 관한 것이다.

바람직한 양태에서, 본 발명은 화학식 3의 5,6-이소프로필리디엔-아스코르브산을 화학식 4의 벤질할라이드와 반응시켜 2번 및 3번 탄소 위치의 하이드록실기에 벤질기를 도입시키는 단계; 화학식 5의 벤질기가 도입된 5,6-이소프로필리디엔-아스코르브산을 개환시킨 후 화학식 6의 디카복실산과 반응시키는 단계; 화학식 7의 화합물을 화학식 8의 펩타이드와 아미드 결합시키는 단계; 및 보호 그룹을 제거하는 단계를 포함함을 특징으로 하여, 화학식 1의 비타민 C 유도체 또는 약학적으로 허용되는 이의 염을 제조하는 방법을 제공한다:

HOOC(CH₂)mCOOH

상기식에서,

m은 2 내지 5의 정수이고,

Bn은 벤질이며,

Y는 염소, 브롬, 불소 또는 요오드이고,

R1'과 R2'는 각각 동일하거나 상이하고, -OH 또는 -OC(O)(CH₂)mC(O)OH이며, R1'과 R2'가 동시에 -OH는 아니며,

R은 보호되거나 보호되지 않은 천연 또는 비-천연 아미노산 잔기의 곁가지이고,

n은 3 내지 10의 정수이다.

보다 바람직한 양태에서, 화학식3의 5,6-이소프로필리디엔-아스코르브산은 화학식 4의 벤질할라이드, 바람직하게는 벤질클로라이드와 40 내지 60℃, 바람직하게는 50℃의 온도에서 3 내지 5시간, 바람직하게는 4시간 동안 반응시킨다. 구체적으로, 아스코르브산의 2번 및 3번 탄소 위치의 하이드록실기에 벤질기가 도입된화학식 5의 생성물에 산, 바람직하게는 트리플루오르아세트산을 첨가하여 3 내지 5시간, 바람직하게는 4시간 동안 반응시켜 5,6-이소프로필리디엔 환을 개환시키고, 화학식 6의 디카복실산, 바람직하게는 숙신산을 첨가하여 15 내지 17시간, 바람직하게는 16시간 동안 실온에서 아스코르브산과 에스테르 결합시켜서 화학식 7의 화합물을 합성하여, 수지상에서 전형적인 고상 합성법에 의해 보호된 펩타이드 N-말단의 NH₂와 아미드 결합시킨 후, 보호 그룹들을 제거한다.

상기 반응은 무수 조건하, 예를 들어 무수 유기 용매를 사용하여 수행한다. 무수 유기 용매는 예를 들어 디메틸포름아미드, 디메틸술폭시드, N-메틸피롤리디논, 디클로로메탄 등, 바람직하게는 디메틸포름아미드를 포함한다. 또 상기 반응의 축합제는 DCC (N,N'-dicycllohexylcarbodiimide), HOBT (N-hydroxybenzotriazole), PyBOP (benzotriazole-1-yl-oxy-tris-pyrrolidinophosphonium hexafluorphosphate), HBTU (2-(1H-benzotriazole-1-yl)-1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate) 등을 포함한다.

또 다른 양태로서, 본 발명은 비타민 C의 3번 탄소 위치의 하이드록실기를 벤질기를 도입하여 보호하고, 2번 위치의 하이드록실기와 탄소수 2 내지 5의 알코올을 에테르 결합시키고 펩타이드와 에스테르 반응시키는 것을 특징으로 하는 화학식 2의 비타민 C 유도체 또는 약학적으로 허용되는 이의 염의 제조방법에 관한 것이다.

바람직한 양태에서, 본 발명은 화학식 3의 5,6-이소프로필리디엔-아스코르브산을 화학식 4의 벤질할라이드와 반응시켜 3번 탄소 위치의 하이드록실기에 벤질기를 도입시키는 단계; 화학식 9의 화합물의 2번 탄소 위치의 하이드록실기를 화학식 10의 할라이드알코올과 반응시키는 단계; 알코올기가 도입된 5,6-이소프로필리디엔-아스코르브산을 아미노산 잔기의 C-말단과 에스테르 결합시키는 단계; 펩타이드 연장 반응시키는 단계; 및 보호 그룹을 제거하는 단계를 포함함을 특징으로 하여, 화학식 2의 비타민 C의 유도체 또는 약학적으로 허용되는 이의 염을 제조하는 방법을 제공한다:

화학식 3

화학식 4

Y(CH₂)pOH

상기식에서,

p는 2 내지 5의 정수이고,

Bn은 벤질이며,

Y는 염소, 브롬, 불소 또는 요오드이다.

보다 바람직한 양태에서, 화학식 3의 5,6-이소프로필리디엔-아스코르브산은 화학식 4의 벤질할라이드, 바람직하게는 벤질클로라이드와 40 내지 60℃, 바람직하게는 50℃의 온도에서 14 내지 18시간, 바람직하게는 16시간 동안 반응시킨다. 3번 탄소 위치의 하이드록실기에 벤질기가 도입된 화학식 9의 화합물을 화학식 10의 할라이드알콜, 바람직하게는 브로모프로판올과 40 내지 60℃, 바람직하게는 50℃에서 3 내지 5시간, 바람직하게는 4시간 동안 반응시켜 에테르 결합시킨 후, 알코올기가 도입된 5,6-이소프로필리디엔-아스코르브산을 보호된 아미노산 잔기의 C-말단과 에스테르 결합시키고, 연속해서 펩타이드 연장 반응시키고, 보호 그룹을 제거한다.

상기 반응은 무수 조건하, 예를 들어 무수 유기 용매를 사용하여 수행한다. 무수 유기 용매는 예를 들어 디메틸포름아미드, 디메틸술폭시드, N-메틸피롤리디논, 디클로로메탄 등을 포함한다. 또 상기 반응의 축합제는 DCC (N,N'-Dicycllohexylcarbodiimide), HOBT (N-Hydroxybenzotriazole), PyBOP (Benzotriazole-1-yl-oxy-tris-pyrrolidino-phosphonium hexafluorphosphate), HBTU (2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate) 등을 포함한다.

본 발명에서 사용될 수 있는 축합제, 촉매, 및 용매는 반응에 악영향을 끼치지 않는 범위 내에서 당 업계에 통상적으로 공지된 모든 것이 사용될 수 있다.

상기와 같은 방법으로 제조된 본 발명의 화학식 1 및 2의 비타민 C 유도체는 통상의 분리, 정제 방법, 예를 들어 재결정이나 칼럼 크로마토그래피법을 사용하여 정제할 수 있다.

화학식 1의 화합물을 제조하기 위한 상기 기술한 바와 같은 본 발명의 제조방법에서, 하이드록실기가 벤질기로 보호된 아스코르브산과 결합되는 펩타이드는 고상 합성법으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 각각의 아스코르브산의 하이드록실기를 보호한 후, 보호되지 않은 하이드록실기에 선택적으로 숙시닐기를 도입하고, 수지상에서 전형적인 고상 합성법에 의해 합성된 펩타이드의 N-말단에 숙시닐기가 도입된 아스코르브산을 반응시킨 후, 아스코르브산과 펩타이드의 보호기를 제거한다.

화학식 2의 화합물을 제조하기 위한 상기한 바와 같은 본 발명의 제조방법에서, 하이드록실기가 벤질기로 보호된 아스코르브산과 결합되는 아미노산 잔기의 연장 반응은 고상 합성법으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 아스코르브산의 하이드록실기를 보호한 후, 보호되지 않은 하이드록실기에 프로판올기를 도입하고, 용액상에서 아미노산 잔기의 C-말단과 결합시킨 후, 수지상에서 전형적인 고상 합성법에 의해 펩타이드를 연장 반응시킨 후, 아스코르브산과 펩타이드의 보호기를 제거한다.

본 발명의 화학식 1 및 2의 화합물을 고상 또는 용액상 합성법을 이용하여 제조하는 방법을 도식화하여 하기 반응식 1 및 2에 나타내었다. 반응식 1은 특히 화학식 1b의 화합물의 제조 과정을 나타내며, 반응식 2는 화학식 2의 화합물의 제조 과정을 나타낸다.

a. BnCl, K₂CO₃, DMF, 50℃, 4hr

b. TFA, DCM, 실온, 4hr

c. 숙신산 무수물, TEA, DMF, 실온, 16hr

d. 고상 합성

e. TFA/페놀/티오아니솔/H₂O/TIS(85/5/5/3/2)v/v, 실온, 3hr

f. 10%Pd/C, MeOH , H₂, 실온, 1hr

(BnCl: 벤질클로라이드; DMF: 디메틸포름아미드; TFA: 트리플루오르아세트산; DCM:디클로로메탄 ; TEA: 트리에틸아민; MeOH: 메탄올)

a. BnCl, K₂CO₃, DMF, 50℃, 16hr

b. 3-브로모프로판올, CsCO₃, DMF, 50℃, 4hr

c. Fmoc-아미노산, DCC, HOBT, DMF, 실온,

d, e. 고상 합성

f. TFA/페놀/티오아니솔/H₂O/TIS(85/5/5/3/2)v/v, 실온, 3hr

g. 10%Pd/C, MeOH , H₂, 실온, 1hr

(BnCl: 벤질클로라이드; DMF: 디메틸포름아미드; Fmoc: 플루오레닐메틸카보닐;DCC: N,N'-디사이클로헥실카보디이미드; HOBT: N-하이드록시벤조트리아졸; TEA: 트리에틸아민; MeOH: 메탄올)

상기 제조된 본 발명의 비타민 C 유도체는 우수한 항산화, 피부주름 개선, 미백효과를 나타낼 뿐만 아니라 피부 자극 및 감작성, 광독성 등을 나타내지 않는다.

따라서, 또 다른 양태로서 본 발명은 화학식 1 및 2의 화합물중에서 선택된 1종 이상을 포함하는 피부외용을 위한 조성물에 관한 것이다. 바람직한 양태에서, 본 발명의 조성물은 화장료, 특히 미백, 피부주름개선 등에 유용하다.

본원에서 사용된 용어 '피부외용'이란 피부의 보습효과, 주름 억제효과, 피부 거칠음 개선효과, 경피흡수 촉진효과 등의 다양한 효과를 나타내어 피부 상태를 개선하거나 피부 상태의 악화를 억제하기 위해 사용한다는 것을 의미한다. 본 발명의 피부외용제는 화장료, 의약품, 의약부외품 등으로 사용될 수 있다. 그 중에서도 화장료 형태의 사용이 바람직하며, 이러한 화장료의 형태는 특별히 한정되지 않는다.

본 발명에 따른 조성물은 화학식 1 및 2로 표시되는 화합물 중에서 선택된 1 종 이상의 물질을 0.001 내지 5%(w/w), 바람직하게는 0.01 내지 3%(w/w) 함유한다. 0.001% 미만의 농도에서는 실질적인 미백효과를 기대하기 어렵기 때문이다.

본 발명의 피부 미백용 조성물을 제조하는 경우에 용매로서 에탄올, 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 글리세레스-26, 메틸글루세스-20, 이소세틸미리스테이트, 이소세틸옥타노에이트, 옥틸도데실미리스테이트, 옥틸도데칸올, 이소스테아릴이소스테아레이트, 세틸옥타노에이트 및 네오펜틸글리콜디카프레이트 중에서 선택된 1 종 이상을 이용한다. 이러한 용매를 사용하여 본 발명의 조성물을 제조하는 경우 화합물의 종류에 따라, 용매의 혼합비에 따라 용매에 대한 화합물의 용해도가 조금씩 다르나, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자라면 제품의 특성에 따라 용매의 종류 및 사용량을 알맞게 선택하여 적용할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 피부외용을 위한 연고, 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 팩 등의 화장료 형태로 제조될 수 있다. 여기에서 피부외용연고는 화학식 1 또는 2의 화합물의 유효 성분 이외에 바셀린 50.0 내지 97.0중량% 및 폴리옥시에틸렌올레일-에테르 포스페이트 0.1 내지 5.0중량%를 함유하도록 제조되며, 유연화장수는 프로필렌글리콜, 글리세린 등의 다가알콜류 1.0 내지 10.0중량% 및 폴리에틸렌올레일에테르, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유 등의 계면활성제 0.05 내지2.0중량%를 함유하도록 제조된다. 영양화장수 및 영양크림은 화학식 1 또는 2의 유효성분 이외에 스쿠알렌, 바셀린, 옥틸도데칸올과 같은 오일류 5.0 내지 20.0중량% 및 에탄올, 스테아릴알콜, 밀납 등의 왁스성분 3.0 내지 15.0중량%을 함유하고, 에센스는 글리세린, 프로필렌글리콜 등 다가알콜류 5.0 내지 30.0중량%를 함유한다. 마사지크림은 화학식 1 또는 2의 유효성분 이외에 유동 파라핀, 바셀린, 이소노닐이소노나노에이트 등의 오일을 30.0 내지 70.0중량% 함유하여 제조되며, 팩은 폴리비닐알콜을 5.0 내지 20.0중량% 함유하는 필오프 팩 또는 일반 유화형 화장료에 카올린, 탈크, 산화아연, 이산화티탄 등의 안료가 5.0 내지30.0 중량% 함유된 워시오프 팩으로 제조된다.

또한, 본 발명의 상기 화학식 1 또는 2로 표시되는 화합물을 함유하는 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 보통의 성분, 예를 들면 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급알콜, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 필요한 만큼 적용 배합하는 것이 가능하다.

본 발명을 하기 실시예를 들어 좀더 상세히 설명하나, 본 발명의 범위가 이에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 2,3- O -디벤질-6- O -숙시닐-아스코르브산 합성

(a) 5,6-이소프로필리디엔-L-아스코르브산(5g, 23.1mmol)을 디메틸포름아미드 50㎖에 용해시킨 후 고체 탄산수소세슘(15g, 46mmol)을 첨가하였다. 이 혼합물에 벤질클로라이드(7.3g, 58mmol)를 부가한 후 50℃에서 4시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 감압하에서 디메틸포름아미드를 제거한 후, 농축된 용액을 디클로로메탄으로 희석하고, 생성된 고체를 여과한 뒤 여액을 감압 하에서 농축하였다.

(b) 상기 생성된 화합물을 디클로로메탄에 녹인 후, 20%(v/v) TFA를 첨가한 후 4시간 동안 교반시켰다. 이 반응물을 감압 하에서 용매와 TFA를 제거한 후 재결정화하여 옅은 노란색의 반고체 형태로 얻었다.

(c) 상기 수득된 화합물을 디메틸포름아미드에 용해시키고, 숙신산(1.2eq.)을 가한 후, 트리에틸아민(1.2eq.)을 서서히 적가하였다. 16시간 동안 실온에서 교반한 후, 감압 하에서 디메틸포름아미드를 제거한 후 농축된 용액을 실리카 겔 컬럼크로마토그래피를 이용하여 옅은 노란색의 반 고체형태의 화합물(3.9g)을 얻었다.

표제 화합물의¹HNMR (CDCl₃) : 2.67 (s, 4H, CH2CH2COOH) 4.06 (t, 1H, C-5-H), 4.32 (d, 2H, C-6-H2), 4.67 (d, 1H, C-4-H), 5.17 (m, 4H, O-CH2-Ph), 7.36 (m, 10H, Ar-H)

실시예 2: 2- O -(3-히드록시프로필)-3- O -벤질-5,6-이소프로필리디엔-아스코르브산 합성

(a) 5,6-이소프로필리디엔-L-아스코르브산(5g, 23.1mmol)을 디메틸포름아미드 50㎖에 용해시킨 후 고체 탄산수소세슘(3.8g, 11.5mmol)을 첨가하였다. 이 혼합물에 벤질클로라이드(1.45g, 11.5mmol)를 부가한 후 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 감압하에서 디메틸포름아미드를 제거한 후 농축된 용액을 디클로로메탄으로 희석하고 생성된 고체를 여과한 후 여액을 감압 하에서 농축하였다.

(b) 상기 생성된 화합물을 디메틸포름아미드에 녹인 후 3-브로모프로판올 1당량과 고체 탄산수소세슘 1당량을 첨가한 후 50℃에서 4시간정도 교반하였다. 이 반응물을 감압하에서 디메틸포름아미드를 제거한 뒤 농축된 용액을 실리카 겔 컬럼크로마토그래피를 이용하여 흰색의 고체 화합물(2.9g)을 얻었다.

표제 화합물의¹HNMR (CDCl₃) : 1.35 (s, 3H, C-CH3), 1.39 (s, 3H, C-CH3), 1.85 (m, 2H, O-CH2CH2CH2-OH), 3.58 (t, 2H, O-CH2CH2CH2-OH), 3.9(t, 2H, O-CH2CH2CH2-OH), 3.98-4.24 (m, 3H, C-5-H, C-6-H2), 4.51 (d, 1H, C-4-H), 5.17 (s, 2H, O-CH2-Ph), 7.37 (m, 5H, Ar-H)

실시예 3: 펩타이드 합성

본 발명에 사용되는 다양한 종류의 펩타이드의 합성은 Fmoc(9-fluorenylmethoxycarbonyl)을 Nα-아미노산의 보호기로 사용하는 고상법에 의해 합성하였으며, HOBt-DCC (N-hydroxybenzotriazole-dicyclohexylcarodiimide) 방법에 따라 펩타이드를 연장하였다(Wang C. Chan, Perter D. white, "Fmoc solid phase peptide synthesis" Oxford). 글리실-히스티딜-라이신, 글리실-라이실-히스티딘, 글리실-프롤릴-히드록시프롤린, 라이실-트레오닐-트레오닐-라이실-세린 펩타이드를 합성하였다.

실시예 4: 비타민 C 유도체의 합성

4-1: 화학식 1의 화합물의 합성

N 말단의 아미노산까지 커플링된 상기 실시예 3에서 합성된 펩타이드에 20% 피페리딘/N-메틸피롤리돈(Piperidine/N-methylpyrrolidone) 용액을 가하여 Fmoc기를 제거하고, N-메틸피롤리돈과 디클로로메탄(dichloromethane)으로 세척한 다음 실시예 1에서 합성된 비타민 C 유도체를 커플링시켰다. 커플링이 끝난 후 N-메틸피롤리돈과 디클로로메탄(dichlorometnane)으로 여러 번 세척한 다음 질소 가스로 건조시켰다. 여기에 트리플루오로아세트산 : 페놀 : 치오아니솔 : 물 : 트리이소프로필실란 (trifluoroacetic acid: phenol: thioanisole: water: triisopropylsilane)의 85 : 5 : 5 : 3 : 2 (v/v) 용액으로 2 내지 3시간 반응시켜 펩타이드 보호기를 제거하고, 레진으로부터 펩타이드가 결합된 비타민 C 유도체를 분리시킨 다음, 디에틸에테르로 펩타이드를 침전시켰다. 비타민 C의 2번 및 3번탄소에 결합된 알코올기를 보호하고 있는 벤질기를 제거하기 위하여 10% Pd/C을 메탄올에 첨가하고, 수소 하에서 약 1시간 동안 실온에서 교반한 후, 셀라이트를 사용하여 Pd/C를 제거하고 얻은 여액을 감압 농축하였다. 이렇게 얻은 비타민 C 유도체는 0.1% 트리플루오로아세트산이 포함된 아세토나이트릴를 구배로 하여 정제 역상 고성능 액체 크로마토그래피 컬럼(purified reverse phase high performance liquid chromatography column, Zobax, C8 300Å, 21.1mm X 25cm)을 이용하여 정제함으로써 화학식 1의 펩타이드가 결합된 비타민 C 유도체를 합성하였다.

4-1: 화학식 2의 화합물의 합성

실시예 2에서 합성된 비타민 C 유도체와 곁가지를 트리페닐메탄기로 보호한 C-말단의 펩타이드를 디메틸포름아미드에 용해시킨 후 N-하이드록시벤조트리아졸을 첨가하였다. 이 혼합물에 N,N'-디사이클로헥실카보디이미드를 부가한 후 상온에서 2시간 동안 교반하여 실시예 2에서 합성된 비타민 C 유도체와 C-말단의 펩타이드를 커플링시켰다. 이 반응물을 감압하에서 디메틸포름아미드를 제거한 후 농축된 용액을 디클로로메탄으로 희석하고, 트리플루오르아세트산을 1%첨가하였다. 이 혼합물을 상온에서 10분간 교반하여 C-말단의 펩타이드 곁가지의 보호기인 트리페닐메틸기를 제거하였다. 이 반응물에 트리에틸아민을 첨가한 후 클로로트리페닐메틸 수지와 커플링하여 실시예 3의 펩타이드 합성에 따라 펩타이드를 연장 반응하였다. N 말단의 아미노산까지 커플링된 상기 합성된 펩타이드가 결합된 비타민C 유도체에 20% 피페리딘/N-메틸피롤리돈(Piperidine/N-methylpyrrolidone) 용액을 가하여Fmoc기를 제거하고, N-메틸피롤리돈과 디클로로메탄(dichloromethane)으로 세척한 다음 질소 가스로 건조시켰다. 여기에 트리플루오로아세트산 : 페놀 : 치오아니솔 : 물 : 트리이소프로필실란 (trifluoroacetic acid: phenol: thioanisole: water: triisopropylsilane)의 85 : 5 : 5 : 3 : 2 (v/v) 용액으로 2 내지 3시간 반응시켜 펩타이드 보호기를 제거하고, 레진으로부터 펩타이드가 결합된 비타민 C 유도체를 분리시킨 다음, 디에틸에테르로 펩타이드를 침전시켰다. 비타민 C의 3번 탄소에 결합된 알코올기를 보호하고 있는 벤질기를 제거하기 위하여 10% Pd/C을 메탄올에 첨가하고, 수소 하에서 약 1시간 동안 실온에서 교반한 후, 셀라이트를 사용하여 Pd/C를 제거하고 얻은 여액을 감압 농축하였다. 이렇게 얻은 비타민 C 유도체는 0.1% 트리플루오로아세트산이 포함된 아세토나이트릴를 구배로 하여 정제 역상 고성능 액체 크로마토그래피 컬럼(purified reverse phase high performance liquid chromatography column, Zobax, C8 300Å, 21.1mm X 25cm)을 이용하여 정제함으로써 화학식 2의 펩타이드가 결합된 비타민 C 유도체를 합성하였다.

이러한 방법으로 합성된 각각의 펩타이드가 결합된 비타민 C 유도체를 매쓰 분광광도계(mass spectrophotometer)로 분자량을 측정하여 펩타이드와 숙신산기 또는 프로필기가 도입된 비타민 C의 결합을 확인하였다. 하기 표 1은 실시예 4에서 설명한 방법으로 합성된 비타민 C 유도체의 측정된 분자량을 정리한 것이다.

화합물번호	펩타이드	X	MS 분자량
화합물번호	펩타이드	X	이론치	실측치
Ⅰ-1	GHK	-OC(O)CH₂CH₂C(O)-	601.38	602
Ⅰ-2	GKH	-OC(O)CH₂CH₂C(O)-	601.38	602
Ⅰ-3	GPO	-OC(O)CH₂CH₂C(O)-	545.31	546
Ⅰ-4	KTTKS	-OC(O)CH₂CH₂C(O)-	821.50	822
Ⅱ-1	GHK	-OC(O)CH₂CH₂C(O)-	601.38	602
Ⅱ-2	GKH	-OC(O)CH₂CH₂C(O)-	601.38	602
Ⅱ-3	GPO	-OC(O)CH₂CH₂C(O)-	545.31	546
Ⅱ-4	KTTKS	-OC(O)CH₂CH₂C(O)-	821.50	822
Ⅲ-1	GHK	-OC(O)CH₂CH₂C(O)-	601.38	602
Ⅲ-2	GKH	-OC(O)CH₂CH₂C(O)-	601.38	602
Ⅲ-3	GPO	-OC(O)CH₂CH₂C(O)-	545.31	546
Ⅲ-4	KTTKS	-OC(O)CH₂CH₂C(O)-	821.50	822
Ⅳ-1	GHK	-CH₂CH₂CH₂O-	556.39	557
Ⅳ-2	GKH	-CH₂CH₂CH₂O-	556.39	557
Ⅳ-3	GPO	-CH₂CH₂CH₂O-	545.31	546
Ⅳ-4	KTTKS	-CH₂CH₂CH₂O-	779.53	780

상기 표 1에서 화합물 번호 I, II, III 및 IV는 각각 화학식 1a, 1b, 1c 및 2의 화합물을 나타낸다.

화합물 II-1에 대한¹H NMR (CD₃OD) : 8.78(dd, 1H), 7.38(s, 1H), 4.73(m, 3H), 4.42(m, 1H), 4.27(m, 2H), 4.14(m, 1H), 3.84(m, 2H), 3.19(m, 1H), 2.96(td, 2H), 2.76(m, 2H), 2.59(m, 2H), 1.81(m, 4H), 1.50(m, 2H)

화합물 II-2에 대한¹H NMR (CD₃OD) : 8.78(m, 1H), 7.36(s, 1H), 4.74(m, 3H), 4.24(m, 3H), 3.86(d, 2H), 3.29(m, 2H), 2.95(t, 2H), 2.66(m, 4H), 1.80(m,4H), 1.51(m, 2H)

화합물 II-4에 대한¹H NMR (CD₃OD) : 4.78(m, 3H), 4.31(m, 10H), 3.90(m, 2H), 2.96(q, 4H), 2.65(m, 4H), 1.92(m, 2H), 1.74(m, 6H), 1.52(m, 4H), 1.23(q, 6H)

시험예 1: 착색실험

상기 실시예 4에서 합성된 화합물 I 내지 IV와 비타민 C(Aldrich)를 각각 pH 7의 50mM 인산칼륨 완충용액에 50mM의 농도로 녹이고 40℃의 항온조에서 3주간 보관한 후 착색 유무 등의 경시변화를 하기 평가기준에 따라 관찰하고, 그 결과를 표 2에 나타내었다.

화합물 번호	1주	2주	3주
비타민 C	+	+++	++++
Ⅰ-1	-	+	+
Ⅰ-2	-	+	+
Ⅰ-3	-	+	+
Ⅰ-4	-	+	+
Ⅱ-1	-	+	+
Ⅱ-2	-	+	+
Ⅱ-3	-	+	+
Ⅱ-4	-	+	+
Ⅲ-1	-	+	+
Ⅲ-2	-	+	+
Ⅲ-3	-	+	+
Ⅲ-4	-	+	+
Ⅳ-1	-	+	++
Ⅳ-2	-	+	++
Ⅳ-3	-	+	++
Ⅳ-4	-	+	++

- : 무색 또는 미황색 + : 약간 착색

++: 조금 더 착색 +++: 많이 착색

상기 표 2에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 화합물 I 내지 IV은 비타민 C에 비해 비교적 안정하고 변색이 일어나지 않으며 침전이 생성되지 않았다.

시험예 2: 티로시나아제 저해 활성

상기 실시예 4에서 합성된 화합물 II-1, II-2 및 II-4를 사용하여 티로시나아제 활성 저해 효과를 측정하였다. 티로시나아제는 버섯에서 분리 및 정제된 것으로 시그마사에서 구입하여 사용하였다. 기질인 티로신은 0.05M 인산칼륨 완충용액(pH 6.8)에 녹여 0.3mg/ml 용액으로 만들어 사용하였다. 화합물 및 비타민 C는 증류수에 10mM 농도로 용해시키고 다시 적당한 농도로 증류수에 희석하여 사용하였다.

시료 티로신 용액과 완충용액을 각각 0.5㎖씩 시험관에 넣고 여기에 상기 화합물 또는 비타민 C 용액 0.5㎖을 가하여 37℃항온기에서 10분간 방치한 후 2,000U/㎖ 티로시나아제 0.05㎖을 넣고 37℃에서 10분간 반응시켰다. 이때 대조군은 각 화합물 대신 증류수 0.5㎖ 넣은 것이다. 반응액이 든 시험관을 얼음에서 급냉시켜 반응을 중지시키고 분광광도계(spectrophotometer)로 파장 475㎚에서 흡광도를 측정하여 티로시나아제 활성 저해율을 구하고, IC₅₀값은 효소활성 저해율이50%에 달하는 저해제의 농도로 결정하였다.

저해율은 수학식 1에 따라 구하였으며, 그 결과는 표 3에 나타내었다:

저해율(%)=(A-B)/A × 100

상기식에서,

A는 저해제가 첨가되지 않은 것의 475nm 에서의 흡광도이며,

B는 저해제가 첨가된 것의 475nm 에서의 흡광도이다.

화합물 번호	IC₅₀
비타민 CII-1II-2II-4	350 μM650 μM700 μM350 μM

시험예 3: 멜라닌 형성 억제능

시험관내에서 멜라닌 세포인 B16 흑색종 세포(한국세포주은행)를 배양하고, 배양 후 배지를 제거하고 시료가 적당 농도로 희석된 배지로 교체한 후, 5% CO₂, 37℃ 하에서 각 농도별 시험물질(비타민C, 알부틴, 화합물 II-1, II-2, II-4)을 첨가하여 일정시간 배양하였다. 배지를 제거한 세포를 PBS(phosphated buffer saline)로 세척하고, 이것을 트립신으로 처리하여 세포를 회수하였다. 회수된 세포는 혈구계(hematocytometer)를 이용하여 세포수를 측정한 후 5,000 내지 10,000 rpm으로 10분간 원심분리한 다음 상등액을 제거하여 펠렛을 얻었다. 이 세포 펠렛을 60℃에서 건조시킨 후 10% DMSO가 함유된 1M 수산화나트륨액 100 ㎕ 또는 적량의 세포 분해 완충액을 넣어 60℃ 항온조에서 세포내 멜라닌을 얻었다. 이 액을 가지고 마이크로플레이트 판독기로 490 nm에서 흡광도를 측정하여 세포 일정 수당 멜라닌 양 또는 일정 단백질당 멜라닌 양을 구하여 도 1에 나타내었다.

도 1에서 나타나듯이 화합물 II-4는 1mM 농도에서 알부틴보다 약 24% 높은 멜라닌 생성 억제능을 보여주었고, 비타민 C 보다는 약 10 내지 20% 높은 억제능을 보여주었다. 화합물 II-1의 경우 화합물 II-4와 유사한 억제능을 보였다.

시험예 4: 엘라스테아제 억제능

엘라스테아제(sigma)의 기질로 MeO-Suc-(Ala)2-Pro-Val-pNA를 이용하여, 엘라스테아제에 의한 분해산물인 p-니트로아닐린의 색을 측정하여 엘라스테아제의 활성을 평가하여 그 결과를 도 2에 나타내었다.

도 2에서 나타나듯이 1mM 농도 이하에서는 비타민 C 와 엘라스테아제 억제능에 있어서 큰 차이를 보이지 않았으나, 1mM 이상의 농도에서는 2 내지 20% 가량 높은 억제능을 보여주었다.

시험예 5: 세포 독성 평가

화장품에 사용되는 원료로서의 1차 안전성을 검증하고자 화합물 II-1, II-2 및 II-4에 대하여 사람 정상 섬유아세포, B16 흑색종, HaCaT 세포를 배양하여 각각 농도별로 시험물질을 처리하여 MTT 시험(Mossman T., 1983, Journal of Immunological Methods 65, 55-63)을 수행하여 세포독성을 평가한 결과, 화합물 II-4의 경우 비타민 C와 비교시 5mM 농도에서도 세포독성을 찾아 볼 수 없었으며, 화합물 II-1, II-2의 경우는 10mM 이하에서 비슷한 효과를 나타내어 안전성이 우수하였다.

시험예 6: 피부자극 시험

상기 화합물 II-4의 피부 자극성 시험을 위하여, 토기를 이용한 첩포시험을 수행하였다(Draize J.H. et al., 1944, J. Pharmacol. Exp. Ther., 82: 377-390; Gfeller W et al., 1985, Fd. Chem. Toxic., 23: 165-168; Bosshard, E et al., 1985, Fd. Chem. Toxic., 12:149-154).

화합물 II-4를 0.01M PBS에 1%가 되도록 조제한 뒤 제모된 등부위(2.5cmㅧ 2.5cm)에 한 구획당 0.5ml 씩 사용하여 1회 24시간 도포하였으며, 적용부위로부터 시험 화합물의 누출을 방지하기 위해 거즈(10cmㅧ10cm)를 한겹 덥고 시험 화합물의 증발을 막기 위해 침투성이 없고 반응성이 없는 고형 재질의 박지를 덮고 탄력붕대로 동물의 행동에 최대한 지장이 없도록 감싼 후, 종이테이프로 벗겨지지 않도록 고정하였다. 시험 화합물 도포 후 24시간, 72시간째 자극의 정도를 판정하였다. 그 결과 화학식 II-1의 화합물은 피부에 매우 안전하였다.

시험예 7: 안점막 자극 시험

국소적으로 나타나는 안점막자극성 여부 및 정도를 평가하기 위하여 토끼(New Zealand White Rabbit; NZW)의 안점막에 화합물 II-4를 적용하였다.

시험 화합물 II-4를 0.01M PBS에 1% 가 되도록 조제하여 적용부위에 0.1ml씩 적용하였다. 즉, 9마리의 토끼 한쪽 눈(우안)에 "의약품등의 독성시험기준(식품의약품안전청 고시 제 1999-61호, 1999. 12. 22)"에 따라 시험 화합물을 0.1ml/head 씩 적용 후 약 1초간 눈을 감은 상태로 유지시켜 시험 화합물의 손실을 방지하였고, 이를 이용하여 각막, 홍채 및 결막의 손상정도를 관찰하였다. 1일째부터 7일째까지 시험물질에 의한 결막발적 및 결막부종은 관찰되지 않았으며, 안점막 자극 시험결과 급성 안자극 지수(Index of Acute Ocular Irritation; I.A.O.I)는 세척군 및 비세척군 모두에서 '0'으로 "무자극물"로 판명되었다.

시험예 8: 피부감작성 시험

화합물 II-4의 피부감작성을 Hartley계 수컷 기니아 피그((주)샘타코바이오코리아)를 이용해서 GPMT (Guinea Pig Maximization Test)법에 의해 검토하였다. 이 시험은 화장품 및 기타 사람의 피부와 접촉 가능성이 있는 물질인 경우에 대해 피부접촉 자극을 일으키는 알레르기 유발가능성의 검토가 필요하기 때문에 사용된다.

시험 화합물 투여군은 경배부 감작부위에 1% 시험 화합물 조제액을 0.1ml/부위로 피내 투여하여 1차 감작하고, 1% 시험 화합물 조제액을 1ml/동물 및 0.2ml/동물을 포함하는 패취를 부착하여 48시간 폐색 첩포하여 2차 감작을 하였다. 2차 감작 2주후, 좌측복부 야기 부위에 1% 시험 화합물 조제액을 24시간 폐색 첩포하여 야기하였다. 그 결과가 표 4(챌린지 반응에 대한 감작 등급)에 나타나 있다.

그룹/시험 항목	시험시간(hour)	감작화 스코어(총 시간)	감작율(%)	감작화 등급(class)
G1/0.01M PBS	24	0	0(0/5)	I(Week)
G2/II-4	24	0	0(0/10)	I(Week)
G3/0.1%CDNB	24	3	100(5/5)	V(Extreme)
G1/0.01M PBS	48	0	0(0/5)	I(Week)
G2/II-4	48	0	0(0/10)	I(Week)
G3/0.1%CDNB	48	3	100(5/5)	V(Extreme)

PBS: 인산염 완충 염수

CDNB: 1-클로로-2,4-디니트로벤제

상기 표 4에 나타나듯이 10 마리 시험물질 투여군의 야기부위 모두에서 피부반응은 확인되지 않았다. 또한, 피부 감작률은 각각 0%로 피부감작성 평가기준 등급은 "1"(매우 약함, weak)로 평가되었다. 이 결과로부터 기니아 피그를 이용한 피부감작성 시험에서 화합물 II-4는 피부 감작성을 유발하지 않는 물질로 판단되었다.

시험예 9: 광독성 시험

Hartely계 기니아 피그 수컷 20마리를 각 군당 5마리씩 부형제 대조군(0.01M PBS), 시험 화합물 II-4 투여군, 양성 대조군 1(Chlorpromazine, CP) 및 양성 대조군 2(8-methoxypsoralen, 8-MOP)의 4군을 설정하여 기니아 피그의 피부에 적용한 후 UVA를 조사할 때 나타나는 광독성 유발 가능성을 검사하였다. 이는 화학물질에 의해서 비면역학적으로 일어나는 피부의 자외선 및 가시광선 등 광자극에 대한 이상반응으로, 알러지와는 달리 충분한 광량과 약물로 반응강도의 예측이 가능하다.

화합물 II-4는 부형제인 0.01M PBS를 이용하여 0.1%, 0.5% 및 1% 로 조제하여 사용하였다. CP 및 8-MOP를 DMSO에 최종 10%가 되도록 균일하게 조제하여 1%의 농도로 다시 희석하여 양성 대조 물질을 만들었다. 동물을 고정기에 고정후 50ul씩 균등하게 도포한 후 동물의 우측부위를 광차단대조부위로 하고, 좌측부위를 광조사 부위로 하여 UVA(320 내지 380 nm)로 약 10cm의 거리에서 약 2시간 동안 최종에너지가 15J/㎠이 되도록 조사한 후 24, 48, 및 72시간에 양성 대조군과 피부반응을 비교하여 광독성 유무를 평가한 결과 하기 표 5에서 나타나듯이 '광독성이 거의 없음'으로 평가되었다.

그룹/시험 항목	N	A.C.^*(%)	비-조사	평가	비-조사	평가
그룹/시험 항목	N	A.C.^*(%)	Total score/Site No.^a)	평가	Meanscore	평가	Total score/Site No	Meanscore
G1/WFI	5	0	0 + 0 / 10	0	자극이 거의 없음	0 + 0 / 10	0	자극이 거의 없음
		0	0 + 0 / 10	0	자극이 거의 없음	0 + 0 / 10	0	자극이 거의 없음
		0	0 + 0 / 10	0	자극이 거의 없음	0 + 0 / 10	0	자극이 거의 없음
G2/II-4	5	0.1	0 + 0 / 10	0	자극이 거의 없음	0 + 0 / 10	0	자극이 거의 없음
		0.5	0 + 0 / 10	0	자극이 거의 없음	0 + 0 / 10	0	자극이 거의 없음
		1	0 + 0 / 10	0	자극이 거의 없음	0 + 0 / 10	0	자극이 거의 없음
G3/CP	5	0.1	0 + 0 / 10	0	자극이 거의 없음	7 + 2 / 10	0.9	최소 자극이 있음
		1	0 + 0 / 10	0	자극이 거의 없음	12+10 / 10	2.2	선명한 자극이 있음
		10	0 + 0 / 10	0	자극이 거의 없음	13+12 / 10	2.5	심한 자극이 있음
G4/8-MOP	5	0.1	0 + 0 / 10	0	자극이 거의 없음	12+11 / 10	2.3	선명한 자극이 있음
		1	8 + 6 / 10	1.4	선명한 자극이 있음	16+16 / 10	3.2	심한 자극이 있음
		10	10+ 8 / 10	1.4	선명한 자극이 있음	20+20 / 10	4.0	심한 자극이 있음

N: 동물수

CP: 클로르프로마진

8-MOP: 8-메톡시프로랄렌

WFI: 주사용수

^*: 적용 농도

^a): ∑Total highest possible erythema / eschar score + ∑Total highest possible edema score / No. of erythema / eschar observation-site(5) + No. of edema observation-site(5) = 10

시험예 10: 단회 투여 독성 시험

화합물 II-4에 대한 단회 경구 투여시의 안전성을 검토하고자 암, 수 마우스((주)샘타코바이오코리아)를 이용하여 화합물 II-4를 경구로 단회 투여시 나타나는 독성을 평가하기 위해 시험 화합물 II-4 투여군은 단일용량으로 0 및 2,000mg/10ml/kg, 대조군에는 0.1M PBS를 10ml/kg를 암,수 각각 5마리씩 단회 경구 투여하고, 투여 후 14일 동안 투여에 기인한 사망례, 일반증상, 체중변화는 관찰되지 않았으며, 경구 단회 투여시 개략의 치사량은 암,수 각각 2,000mg/kg 이상으로 판단되었다.

시험예 11: 광감작 시험

화합물 II-4의 광감작성을 Hartley계 수컷 기니아 피그를 이용해서 Adjuvant & Strip 법에 따라 실시하였다.

기니픽의 경배부 피부에 감작부위를 정하고 4구획에 주사용수와 FCA를 혼합 유화한 유화액을 각각 피내투여 하였다. 감작부위의 피부는 약한 홍반이 생길 정도로 stripping을 실시하였으며, 부형제조군에 0.01M PBS, 시험물질투여군에 화합물 II-4, 양성대조군은 CP(Chlorpromazine)를 개방도포 하였다. 도포 후 2시간 후에 약 10 J/cm2로 장파장 자외선을 조사하였다. 야기 조사 후 24, 48 및 72 시간에 야기부위를 관찰하고 광감작성의 유, 무를 판정하였다.

부형제조군 및 시험물질투여군의 UVA 비조사부위와 조사부위의 피부자극지수(Irritation index)는 각각 '0'으로 평가되었으며,광감작성지수(Photosensitivity index)는 각각 '0'으로 '자극이 거의 없음(Practically non-irritating)'으로 평가되었다. 양성대조군의 UVA 비조사 부위에서의 피부자극지수는 '0' 이며, UVA조사 부위 피부자극지수는 '5.8'로 '심한 자극이 있음(Extremely irritating)'으로 평가되었다. 따라서 본시험에 사용된 기니아 피그는 이미 알려져 있는 광감작성 물질인 CP(Chlorpromazine)에서 정상적인 반응을 보인 것이 확인되었다. 관찰기간 동안 시험물질에 의한 특이한 일반증상 및 사망동물은 관찰되지 않았으며, 모든 군에서 유의성 있는 체중변화도 확인되지 않았다. 그 결과를 표 6(Group summary)에 나타내었다.

그룹/시험 항목	N	비-조사 부위	UVA-조사 부위	광감작성지수^b)
그룹/시험 항목	N	평균 스코어	자극 지구^a)	광감작성지수^b)	평균 스코어	자극 지수^a)
G1/0.01M PBS	8	(0+0) / 5	0	(0+0) / 5	0	0(자극이 거의 없음)
G2/II-4	5	(0+0) / 5	0	(0+0) / 5	0	0(자극이 거의 없음)
G3/CP	5	(0+0) / 5	0.0	(16+13) / 5	5.8	5.8(심한 자극이 있음)

a): (∑Max. score of erythema and eschar + ∑Max. score of edema)/Number of animals

b): Irritating index of UVA irradiation site - Irritation index of non-irradition site

PBS: 인산염 완충 용액

CP: 클로르프로마진

N: 동물수

상기 표 6에서 나타나듯이 이상의 시험결과로 기니아 피그를 이용한 광감작성시험에서 화합물 II-4은 광감작성을 유발하지 않는 물질로 판단된다.

시험예 12: 콜라겐 생합성능

사람의 정상 섬유아세포에 본 발명의 유효 활성 성분을 첨가하여 세포 수준에서 콜라겐 합성 촉진 효과를 시험하였다.

생합성된 콜라겐의 측정은 문헌(Martens, Gut 1992, 33, 1664~1670)의 방법을 응용하여 콜라겐 생합성 촉진 효과를 측정하였으며 시료를 첨가하지 않은 것을 100%로 하였다. 상세한 실험방법은 다음과 같다.

사람의 정상 섬유아세포를 세포 배양용 6 웰 플레이트에 분주하고 일정 수의 세포를 시딩하고 0.05% 함유된 FBS(Fetal Bovine Serum) 조건 하에서 48 시간 배양한 후 PBS로 2회 세척하였다. 배양 종료 후 위의 세포 및 배양액을 각각 1/2 씩 나누어 한쪽 분획에만 콜라게나제를 처리한 후 TCA(trichloroacetic acid)로 단백질을 침전시켜 두 분획의 방사 활성의 차이로부터 콜라겐 생합성 촉진 효과를 측정하였으며 시료를 첨가하지 않은 것을 100%로 하였다.

도 3에 나타나듯이 화합물 II-4는 비타민 C와 유사한 콜라겐 생합성능을 보였으며, 이러한 결과는 시험예 1의 착색시험으로부터 알 수 있는 안정성의 개선 효과와 더불어 우수한 콜라겐 생합성능을 갖는다는 것을 입증한다.

시험예 13: 항산화 효과

상기 실시예 4에서 합성된 화합물 II-1, II-2 및 II-4를 선별하여 자유라디칼 제거능을 실시하였다. 사용된 DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)은 산화/환원 환경변화에 따라 색을 띠는 라디칼로 시료의 라디칼 제거능력을 O.D.값 측정을 통해 확인할 수 있다.

상기 선별된 화합물을 증류수 또는 용매에 녹인 후 액상 상태의 100ul 시료에 200uM DPPH 100ul를 섞어주었다. 잘 섞은 후 상온에서 10분간 방치한 뒤 A517nm에서의 흡광도를 측정한다. 이때 사용된 대조군은 화합물을 제외한 증류수 또는 용매를 넣은 것이다.

도 4에 나타나듯이 선별된 화합물 II-4의 경우 비타민 C와 비슷한 경향으로 10uM에서 70%이상 자유라디칼 소거능을 보였으며, 화합물 II-1 및 화합물 II-2의 경우도 100uM에서 70%대의 자유라디칼 소거능을 보였다. 이 결과 선별된 화합물 II-4는 뛰어난 항산화 효과를 가지는 물질인 비타민 C와 유사한 항산화 효과를 가진다.

본 발명의 비타민 C의 유도체는 피부 자극 등의 독성이 없이 안정성, 안전성, 피부 침투력 등이 향상되었으므로 피부 상태를 개선하거나 악화를 억제하기 위해 사용될 수 있다.

Claims

하기 화학식 1로 표시되는 비타민 C 유도체 또는 약학적으로 허용 가능한 이의 염.

화학식 1

상기식에서,

R1 및 R2는 각각 동일하거나 상이하고, -OH 또는이며, R1과 R2가 동시에 -OH는 아니고,

X는 -OC(O)(CH₂)mC(O)-이고,

는 글리신, 라이신, 히스티딘, 세린, 프롤린, 히드록시프롤린 및 트레오닌중에서 선택되는 동일하거나 상이한 아미노산 잔기가 아미드 결합된 펩타이드이며,

R은 글리신, 라이신, 히스티딘, 세린, 프롤린, 히드록시프롤린 및 트레오닌중에서 선택되는 아미노산 잔기의 곁가지이고,

n은 3 내지 10의 정수이며,

m은 2 내지 5의 정수이다.
제1항에 있어서, n이 3 내지 5의 정수이고 m이 2의 정수인 비타민 C 유도체 또는 약학적으로 허용 가능한 이의 염.
제2항에 있어서,가 글리실-히스티딜-라이신, 글리실-라이실-히스티딘, 글리실-프롤릴-히드록시프롤린 및 라이실-트레오닐-트레오닐-라이실-세린 중에서 선택되는 비타민 C 유도체 또는 약학적으로 허용 가능한 이의 염.
제3항에 있어서, 6-(숙시닐-라이실-트레오닐-트레오닐-라이실-세린)아스코르브산, 6-(숙시닐-글리실-라이실-히스티딘)아스코르브산 및 6-(숙시닐-글리실-히스티딘-라이실)아스코르브산중에서 선택되는 비타민 C 유도체 또는 약학적으로 허용가능한 이의 염.
하기 화학식으로 표시되는 비타민 C 유도체 또는 약학적으로 허용 가능한 이의 염.

화학식 2

상기식에서,

X는 -(CH₂)pO-이고,

는 글리신, 라이신, 히스티딘, 세린, 프롤린, 히드록시프롤린 및 트레오닌중에서 선택되는 동일하거나 상이한 아미노산 잔기가 아미드 결합된 펩타이드이며,

R은 글리신, 라이신, 히스티딘, 세린, 프롤린, 히드록시프롤린 및 트레오닌중에서 선택되는 아미노산 잔기의 곁가지이고,

n은 3 내지 10의 정수이며,

p는 2 내지 5의 정수이다.
제5항에 있어서, n이 3 내지 5의 정수이고 p가 3의 정수인 비타민 C 유도체 또는 약학적으로 허용 가능한 이의 염.
제6항에 있어서,가 글리실-히스티딜-라이신, 글리실-라이실-히스티딘, 글리실-프롤릴-히드록시프롤린 및 라이실-트레오닐-트레오닐-라이실-세린 그룹중에서 선택되는 비타민 C 유도체 또는 약학적으로 허용 가능한 이의 염.
화학식 3의 5,6-이소프로필리디엔-아스코르브산을 40 내지 60℃에서 3 내지 5시간 동안 화학식 4의 벤질할라이드와 반응시켜 2번 및 3번 탄소 위치의 하이드록실기에 벤질기를 도입시키는 단계; 화학식 5의 벤질기가 도입된 5,6-이소프로필리디엔-아스코르브산을 개환시킨 후 화학식 6의 디카복실산과 반응시키는 단계; 생성된 화학식 7의 화합물을 화학식 8의 펩타이드와 아미드 결합시키는 단계; 및 보호 그룹을 제거하는 단계를 포함함을 특징으로 하여, 제1항에 따른 화학식 1의 비타민 C 유도체 또는 약학적으로 허용되는 이의 염을 제조하는 방법.

화학식 3

화학식 4

화학식 5

화학식 6

HOOC(CH₂)mCOOH

화학식 7

화학식 8

화학식 1

상기식에서,

Bn은 벤질이며,

R1'과 R2'는 각각 동일하거나 상이하고, -OH 또는 -OC(O)(CH₂)mC(O)OH이며, R1'과 R2'가 동시에 -OH는 아니며,

R1 및 R2는 각각 동일하거나 상이하고, -OH 또는이며, R1과 R2가 동시에 -OH는 아니고,

X는 -OC(O)(CH₂)mC(O)-이고,

는 글리신, 라이신, 히스티딘, 세린, 프롤린, 히드록시프롤린 및 트레오닌중에서 선택되는 동일하거나 상이한 아미노산 잔기가 아미드 결합된 펩타이드이며,

R은 글리신, 라이신, 히스티딘, 세린, 프롤린, 히드록시프롤린 및 트레오닌중에서 선택되는 아미노산 잔기의 곁가지이고,

n은 3 내지 10의 정수이며,

m은 2 내지 5의 정수이고,

Y는 염소, 브롬, 불소 또는 요오드이다.
제8에 있어서, n이 3 내지 5의 정수이고 m이 2의 정수이며 Y가 염소인 방법.
화학식 3의 5,6-이소프로필리디엔-아스코르브산을 40 내지 60℃에서 14 내지 18시간 동안 화학식 4의 벤질할라이드와 반응시켜 3번 탄소 위치의 하이드록실기에 벤질기를 도입시키는 단계; 화학식 9의 화합물의 2번 탄소 위치의 하이드록실기를 화학식 10의 할라이드알코올과 반응시키는 단계; 알코올기가 도입된 5,6-이소프로필리디엔-아스코르브산을 아미노산 잔기의 C-말단과 에스테르 결합시키는 단계; 펩타이드 연장 반응시키는 단계; 및 보호 그룹을 제거하는 단계를 포함함을 특징으로 하여, 제5항에 따른 화학식 2의 비타민 C의 유도체 또는 약학적으로 허용되는 이의 염을 제조하는 방법.

화학식 3

화학식 4

화학식 9

화학식 10

Y(CH₂)pOH

화학식 2

상기식에서,

Bn은 벤질이며,

X는 -(CH₂)pO-이고,

는 글리신, 라이신, 히스티딘, 세린, 프롤린, 히드록시프롤린 및 트레오닌중에서 선택되는 동일하거나 상이한 아미노산 잔기가 아미드 결합된 펩타이드이며,

R은 글리신, 라이신, 히스티딘, 세린, 프롤린, 히드록시프롤린 및 트레오닌중에서 선택되는 아미노산 잔기의 곁가지이고,

n은 3 내지 10의 정수이며,

p는 2 내지 5의 정수이고,

Y는 염소, 브롬, 불소 또는 요오드이다.
제10항에 있어서, n이 3 내지 5의 정수이고 p가 3의 정수이며 Y가 염소인 방법.
제1항 또는 제5항의 비타민 C 유도체 또는 약학적으로 허용되는 이의 염을 포함하는 피부외용 조성물.
제12항에 있어서, 화장료용 조성물.