KR102038697B1 - 피부 항산화 및 미백 효능을 갖는 피부용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

피부용 화장료 조성물이 제공된다. 상기 피부용 화장료 조성물은 아피게닌, 호오스팻, 쿠마린, 문어 추출액, 낙지 추출액, 타우린, 아마륵 추출액, 프테로스틸벤, 아포시닌, AEBSF, GK-136901, ML171, VAS2870, VAS3947, 이다라본, α-토코페롤, 카테킨 및 레스베라톨로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상과 펩타이드를 포함하여, 항산화 및 미백 효능을 갖는다.

Description

피부 항산화 및 미백 효능을 갖는 피부용 화장료 조성물{Cosmetic Composition for Anti-oxidation and Whitening of Skin}

본 발명은 화장료 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로는 피부 항산화 및 미백 효능을 갖는 피부용 화장료 조성물에 관한 것이다.

일반적으로 피부는 인체의 일차 방어막으로서 체내의 기관들을 온도 및 습도 변화, 자외선, 공해물질 등 외부환경의 자극으로부터 보호해 주며, 체온조절 등의 생체 항상성 유지에 중요한 역할을 한다.

산업이 발달함에 따라 환경 오염이 심각해지고, 피부의 산화 및 노화 방지, 미백 등에 관한 관심이 고조되고 있다. 특히, 사람의 피부는 끊임없이 변화를 겪게 되는데, 가장 대표적인 변화가 산화 및 노화에 의한 피부 기능 저하 및 시각적 아름다움의 감소이다.

피부의 주요 구성물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등은 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴될 수 있으며, 결국 피부가 노화될 수 있다. 특히 단백질의 산화에 의해 피부의 결합조직인 콜라겐, 히알루론산, 엘라스틴, 프로테오글라이칸, 피브로넥틴 등이 절단되고 과다 염증반응이 나타날 수 있으며, 더욱 심화되는 경우 DNA 변이에 의한 돌연변이, 면역기능의 저하, 암의 유발이 촉진될 수 있다.

따라서, 신체의 대사 과정 중 발생하는 활성산소종이나 자외선 조사, 염증 반응에 의해 매개되는 활성산소종을 소거하여 세포막을 보호하고, 활발한 신진대사를 통해 손상 받은 세포를 재생시켜 피부 건강을 회복시키는 것이 바람직하다.

한편, 멜라닌은 색소 세포 내에 존재하는 티로시나아제의 작용에 의해 티로신으로부터 도파(dopa), 도파퀴논(dopaquinone)으로 변환되어 도파크롬(dopachrome) 등을 거쳐 생성된다. 멜라닌은 자외선 등 피부 유해 요소로부터 신체를 보호하고 체내 호르몬 분비를 조절하는 역할을 한다.

그러나, 멜라닌은 과잉 생산되어 기미, 주근깨의 형성 및 피부노화를 촉진시킬 수 있으며, 피부암의 유발에 관여할 수 있으므로, 멜라닌의 과잉생산을 억제하기 위한 연구개발이 활발하게 이루어지고 있다.

종래에 아스코르빈산(일본특개평 4-9320), 하이드로퀴논(일본특개평 6-192062), 코직산(일본특개소 56-7710), 알부틴(일본특개평 4-93150) 및 식물 추출물 등이 티로시나아제 저해 활성을 나타내어 미백 화장료로 이용되었다. 하지만, 상기 성분들은 생체 내에서 안전성 또는 효능이 불명확하여 그 사용이 제한되고 있다.

일본특개평 4-9320 일본특개평 6-192062 일본특개소 56-7710 일본특개평 4-93150

이에 따라, 본 발명자는 최신 피부 과학 이론에 기반하여 피부의 항산화 및 미백에 효능을 갖는 새로운 화장품 소재를 개발하였으며, 그 결과 항산화능, 미백능 등 피부 상태 개선에 탁월한 효능을 갖는 화장료 성분의 배합과 신규 펩타이드를 규명하였다.

이에 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 피부 항산화 및 미백 효능을 갖는 피부용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 과제들은 이상에서 언급한 기술적 과제로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 기술적 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 일 실시예에 따른 피부용 화장료 조성물은 아피게닌, 호오스팻, 쿠마린, 문어 추출액, 낙지 추출액, 타우린, 아마륵 추출액, 프테로스틸벤, 아포시닌, AEBSF, GK-136901, ML171, VAS2870, VAS3947, 이다라본, α-토코페롤, 카테킨 및 레스베라톨로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상 및 펩타이드를 포함한다.

상기 피부용 화장료 조성물은 아피게닌, 프테로스틸벤 및 이다라본으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 포함할 수 있다.

상기 아피게닌은 0.1~10 %(w/w), 상기 프테로스틸벤은 0.1~10 %(w/w), 상기 이다라본은 0.01~10 %(w/w)로 포함할 수 있다.

상기 피부용 화장료 조성물 토너, 에멀젼 또는 크림 제형을 가질 수 있다.

상기 펩타이드는 서열번호 1 내지 27의 펩타이드 중 하나 이상을 포함할 수 있다.

상기 피부용 화장료 조성물은 항산화 및/또는 미백 효능을 갖는 것을 특징으로 할 수 있다.

상기 다른 과제를 해결하기 위한 본 발명의 일 실시예에 따른 피부용 화장료 조성물은 서열번호 1 내지 27의 펩타이드 중 하나 이상 및 아피게닌, 프테로스틸벤 및 이다라본으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 포함한다.

상기 피부용 화장료 조성물은 서열번호 1 내지 9의 펩타이드 중 하나 이상을 포함할 수 있다.

상기 아피게닌은 0.1~10 %(w/w), 상기 프테로스틸벤은 0.1~10 %(w/w), 상기 이다라본은 0.01~10 %(w/w)로 포함할 수 있다.

상기 피부용 화장료 조성물은 항산화 및/또는 미백 효능을 갖는 것을 특징으로 할 수 있다.

기타 실시예의 구체적인 사항들은 상세한 설명에 포함되어 있다.

본 발명의 실시예들에 따른 피부용 화장료 조성물은 피부 항산화 및 미백 효능 등을 갖기 때문에 전반적인 피부 상태 개선에 탁월한 효과가 있다.

본 발명의 실시예들에 따른 효과는 이상에서 예시된 내용에 의해 제한되지 않으며, 더욱 다양한 효과들이 본 명세서 내에 포함되어 있다.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.

본 명세서에서 사용된 용어는 실시예들을 설명하기 위한 것이며 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니다. 본 명세서에서, '및/또는'은 언급된 아이템들의 각각 및 하나 이상의 모든 조합을 포함한다. 또, 단수형은 문구에서 특별히 언급하지 않는 한 복수형도 포함한다. 명세서에서 사용되는 '포함한다(comprises)' 및/또는 '포함하는(comprising)'은 언급된 구성요소 외에 하나 이상의 다른 구성요소의 존재 또는 추가를 배제하지 않는다. '내지'를 사용하여 나타낸 수치 범위는 그 앞과 뒤에 기재된 값을 각각 하한과 상한으로서 포함하는 수치 범위를 나타낸다. '약' 또는 '대략'은 그 뒤에 기재된 값 또는 수치 범위의 20% 이내의 값 또는 수치 범위를 의미한다.

다른 정의가 없다면, 본 명세서에서 사용되는 모든 용어(기술 및 과학적 용어를 포함)는 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 공통적으로 이해될 수 있는 의미로 사용될 수 있을 것이다. 또 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 용어들은 명백하게 특별히 정의되어 있지 않는 한 이상적으로 또는 과도하게 해석되지 않는다.

본 발명은 피부 상태 개선 효과를 갖는 물질을 유효 성분으로 포함하는 조성물에 대한 것으로서, 상기 “피부 상태 개선 효과”는 항산화, 피부 미백, 피부 노화 및 주름의 예방 또는 개선, 피부 보호, 피부 장벽 기능 개선, 피부자극 완화, 피부 세포 증식 및 재생능, 콜라겐 합성 증진능 등 피부에 유익한 효과를 모두 포괄하는 의미이다.

상기 “항산화”는 산화를 억제하는 작용으로서, 생체 내 산화적 스트레스(oxidative stress)에 의해 산화가 촉진됨으로써 세포 손상 및 병리적 질환이 유발되는 것을 막는 것을 의미할 수 있다.

상기 "피부 미백"은 피부색에 영향을 미치는 멜라닌, 티로시나아제, 산화-환원 헤모글로빈, 카로틴, 멜라노이드 등 다양한 생체 분자의 생성을 억제함으로써 잡티, 주근깨, 기미 등의 피부 색소 침착 현상을 완화시키고, 피부 누런기, 붉은기를 완화시켜 피부 밝기 및 균일도를 향상시키는 효과를 의미할 수 있다.

상기 "주름"은 피부 진피에 존재하는 콜라겐 및 엘라스틴의 감소, 외부환경 등에 의해 피부가 쇠하여 생긴 잔줄을 의미할 수 있고, 상기 "주름 개선"은 피부에 주름이 생성되는 것을 억제 또는 저해하거나, 이미 생성된 주름을 완화하는 현상을 의미할 수 있다.

상기 "피부 탄력"은 진피층에 존재하는 엘라스틴(elastin)으로 구성된 탄력섬유에 의해 구현되는 탄성을 의미할 수 있고, 상기 "피부 탄력 개선"은 엘라스틴으로 구성된 탄력섬유가 콜라겐과 함께 존재하며 상기 엘라스틴과 콜라겐이 충분히 존재하는 상태에서 피부 탄력이 유지 또는 향상되는 현상을 의미할 수 있다.

상기 “유효 성분으로 포함하는”은 피부 개선 효과를 나타낼 수 있는, 예컨대, 피부 내 산화 작용 억제에 의한 항산화 효능, 피부의 멜라닌 합성 감소에 의한 미백 효능을 나타낼 수 있는 정도의 유효량을 함유하는 것을 의미할 수 있다.

펩타이드(peptide)란 아미드 결합(또는 펩타이드 결합)으로 연결된 하나 이상의 아미노산으로 구성된 폴리머를 의미한다. 본 발명의 목적상 상기 펩타이드는 항산화 및 피부 미백 효과를 나타내는 펩타이드 또는 이의 단편을 의미할 수 있다.

상기 펩타이드를 명명하는 일반적인 규칙은 구체적으로 지시된 예외사항이 없는 경우 3문자 또는 1문자 아미노산 코드를 기초로 할 수 있다. 예컨대, 아미노산 구조의 중심부를 3문자 코드(예컨대, Ala, Lys)로 표시하며, 3문자 코드의 앞에 "D-"를 적음으로써 D-입체형태(예컨대, D-Ala, D-Lys)를 구체적으로 지시하지 않은 경우라면 L-입체형태로 가정할 수 있다. 상기 펩타이드를 구성하는 아미노산 잔기는 천연 또는 비-천연아미노산 잔기일 수 있다.

이하, 본 발명의 실시예들에 대하여 상세하게 설명한다.

본 발명의 피부용 화장료 조성물은 피부 상태 개선 효과를 갖는 것으로서, 특히 항산화 및 미백에 탁월한 효능을 갖는다. 본 발명의 피부용 화장료 조성물은 항산화 효능을 갖는 유효성분 및/또는 미백 효능을 갖는 유효성분을 포함할 수 있다.

상기 항산화 효능을 갖는 유효성분은 아피게닌(apigenin), 호오스팻(Horse fat), 쿠마린(coumarin), 문어 추출액, 낙지 추출액, 타우린(taurine), 아마륵 추출액, 프테로스틸벤 (pterostilbene), 아포시닌(apocynin), AEBSF, GK-136901, ML171, VAS2870, VAS3947, 이다라본(edaravone), α-토코페롤(α-tocopherol), 카테킨(catechin) 및 레스베라톨(resveratrol)으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있다.

구체적인 실시예에서, 상기 피부용 화장료 조성물은 0.1~10 %(w/w) 아피게닌, 0.1~10 %(w/w) 프테로스틸벤 및 0.01~10 %(w/w) 이다라본으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 포함할 수 있다. 보다 구체적인 실시예에서, 아피게닌을 0.1~5 %(w/w), 0.1~3 %(w/w), 0.1~1 %(w/w), 0.5~10 %(w/w), 1~10 %(w/w), 3~10 %(w/w) 또는 5~10 %(w/w)로 포함할 수 있고, 프테로스틸벤을 0.1~5 %(w/w), 0.1~3 %(w/w), 0.1~1 %(w/w), 0.5~10 %(w/w), 1~10 %(w/w), 3~10 %(w/w) 또는 5~10 %(w/w)로 포함할 수 있으며, 이다라본을 0.01~5 %(w/w), 0.01~3 %(w/w), 0.01~1 %(w/w), 0.01~0.5 %(w/w), 0.01~0.3 %(w/w), 0.01~0.1 %(w/w), 0.05~10 %(w/w), 0.1~10 %(w/w), 0.3~10 %(w/w), 0.5~10 %(w/w), 1~10 %(w/w), 3~10 %(w/w) 또는 5~10 %(w/w)로 포함할 수 있다. 다만, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 항산화 효능을 갖는 유효성분을 포함하는 본 발명의 조성물은 자유라디칼 소거 활성 및 Nitric oxide (NO) 소거 활성을 갖는다. 산화적 스트레스는 활성 산소종의 발생과 항산화 방어제 간의 심각한 불균형을 초래하는 상황으로서, NO 소모가 동반된 산화반응 등은 이차적인 산화, 질소화 및 nitrosation/nitrosylation 물질을 생성하고 이러한 이차적인 nitrated species는 독특한 염증성 세포 신호를 전달하게 된다.

본 발명의 화장료 조성물은 자유라디칼 소거 활성 및 NO 소거 활성을 갖는 항산화능을 갖기 때문에 피부 항산화 효과를 구현할 수 있다.

상기 미백 효능을 갖는 유효성분은 본 발명의 신규 펩타이드들 중 하나 이상일 수 있다. 본 발명의 신규 펩타이드들은 하기 표 1에 나타난 서열번호 1 내지 27의 서열을 갖는 펩타이드들을 포함한다.

서열번호	분류번호	아미노산 서열
1	PE-05	RKKRRQRRRGHK
2	PE-06	RKKRRQRRRKTTKS
3	PE-07	RKKRRQRRRGQPR
4	PE-09	RKKRRQRRRLLTS
5	PE-10	RKKRRQRRRRFI
6	PE-11	RKKRRQRRRSSRLR
7	PE-12	RKKRRQRRRTSRVR
8	PE-13	RKKRRQRRRREGRT
9	PE-14	RKKRRQRRRGEKG
10	PE-21	D-Tyr-GRKKRRQRRRGHK
11	PE-22	D-Tyr-GRKKRRQRRRKTTKS
12	PE-23	D-Tyr-GRKKRRQRRRGQPR
13	PE-25	D-Tyr-GRKKRRQRRRLLTS
14	PE-26	D-Tyr-GRKKRRQRRRRFI
15	PE-27	D-Tyr-GRKKRRQRRRSSRLR
16	PE-28	D-Tyr-GRKKRRQRRRTSRVR
17	PE-29	D-Tyr-GRKKRRQRRRREGRT
18	PE-30	D-Tyr-GRKKRRQRRRGEKG
19	PE-33	GRKKRRQRRRGHK
20	PE-34	GRKKRRQRRRKTTKS
21	PE-35	GRKKRRQRRRGQPR
22	PE-37	GRKKRRQRRRLLTS
23	PE-38	GRKKRRQRRRRFI
24	PE-39	GRKKRRQRRRSSRLR
25	PE-40	GRKKRRQRRRTSRVR
26	PE-41	GRKKRRQRRRREGRT
27	PE-42	GRKKRRQRRRGEKG

본 발명의 서열번호 1 내지 27의 신규 펩타이드들은 상기 펩타이드들의 기능적 동등물도 포함할 수 있다. 상기 “기능적 동등물"은 아미노산의 부가, 치환 또는 결실의 결과, 상기 신규 펩타이드 각각의 아미노산 서열과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 서열 상동성을 가지는 것으로, 상기 펩타이드와 실질적으로 동질의 생리활성을 가지는 것을 의미한다. 예를 들어, 상기 서열 상동성을 갖는 펩타이드는 상기 신규 펩타이드 각각에서 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 또는 5개 이상의 아미노산이 치환(substitution)된 것일 수 있다.

상기 "실질적으로 동질의 생리활성"은 상기 펩타이드의 구조적, 기능적 상동성으로 인한 항산화, 미백 활성 등 피부 상태 개선 활성을 의미한다. 또한, 상기 펩타이드는 아미노산의 부가, 치환 또는 결실의 결과 물리화학적 특성을 수반하거나 수반하지 않을 수 있다. 예시적인 실시예에서, 상기 아미노산 치환은 펩타이드의 열안정성을 향상시키거나, 기질 특이성을 변경시키거나, 최적의 pH를 변화시킬 수 있다. 다만 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 서열번호 1 내지 27의 펩타이드들의 N 또는 C-말단은 아세틸기, 플루오레닐 메톡시 카르보닐기, 포르밀기, 팔미토일기, 미리스틸기, 스테아릴기 또는 폴리에틸렌글리콜(PEG)이 결합될 수 있다. 상기 펩타이드들은 상기 변형에 의해 안정성이 현저히 개선될 수 있다. 상기 안정성은 in vivo 안정성뿐만 아니라, 저장 안정성도 포함하는 개념이다. 상기 보호기는 생체 내의 단백질 절단효소의 공격으로부터 본 발명의 펩타이드를 보호할 수 있다.

본 발명의 신규 펩타이드들은 멜라닌의 생성 및 티로시나아제(tyrosinase)의 활성을 억제할 수 있다. 멜라닌(melanin)은 흑갈색 색소로서 눈이나 피부, 체모에 존재하며 신체에서 일정량 이상의 자외선을 흡수하는 방식으로 자외선의 침투를 차단해 신체를 보호해 주거나, 체온을 유지하는 역할을 한다. 그러나 과다한 자외선의 노출에 의해 멜라닌이 과다 분비될 수 있고, 피부색이 변색될 수 있다. 멜라닌은 티로시나아제를 비롯한 멜라닌 생성 효소와 호르몬이 복합 작용하여 생성될 수 있다.

상기 신규 펩타이드들은 상기 티로시나아제의 활성을 효과적으로 억제할 수 있고 멜라닌의 생성을 저해하므로 이를 포함하는 화장료 조성물은 피부 미백 효과를 구현할 수 있다.

본 발명의 피부용 화장료 조성물은 당해 기술 분야에서 통상적인 방법에 따라 제형화될 수 있다.

구체적으로, 상기 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 예컨대, 유연 화장수, 영양 화장수 등의 화장수(토너); 페이셜 로션, 바디로션 등의 에멀젼; 비비 크림, 썬 크림, 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림 등의 크림; 에센스; 화장연고; 스프레이; 젤; 팩; 메이크업 베이스; 액체 타입, 고체 타입 또는 스프레이 타입 등의 파운데이션; 파우더; 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일 등의 메이크업 제거제; 또는 클렌징 폼, 비누, 바디워시 등의 세정제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 화장료 조성물은 통상적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있으며, 예컨대 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 화장료 조성물은 제형에 따라 통상적으로 허용 가능한 담체를 더 포함할 수 있다. 예컨대, 페이스트, 크림 또는 젤로 제형화될 때 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물이 파우더 또는 스프레이로 제형화될 때는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있으며, 스프레이의 경우 클로로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 더 포함할 수 있다.

상기 화장료 조성물이 용액 또는 유탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 용매, 용해화제, 또는 유탁화제가 사용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-브틸글리콜 오일이 사용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물이 현탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리 옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물이 비누로 제형화될 때, 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 최종 제품의 품질이나 기능에 따라 업계에서 통상적으로 사용되는 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉 쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 추가적으로 함유할 수 있다.

상기 화장료 조성물은 피부 개선을 위해 피부용 조성물에 통상적으로 사용되는 펩타이드를 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 에스에이치-올리고펩타이드-1, 에스에이치-올리고펩타이드-2, 에스에이치-폴리펩타이드-1, 에스에이치-폴리펩타이드-16 및 에스에이치-폴리펩타이드-3으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 더 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

이하에서는 실험예를 통해 본 발명의 조성물 및 신규 펩타이드의 효능에 대해 설명하나, 본 발명의 효과가 하기 실험예에 의해 제한되지 아니함은 자명하다.

실험예 1-1: 자유라디칼 소거 활성 평가

자유라디칼 소거 활성 실험을 통해 아피게닌, 프테로스틸벤 및 이다라본을 포함하는 조성물의 항산화 효능을 확인하였다. 상기 실험은 Kim 등의 방법을 변형한 것으로, 안정한 자유라디칼인 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl) 시약을 사용하였다(참고문헌: Kor. J. Pharmacogn., 24(4), 299~303, 1993).

먼저, 적정량의 정제수 및 글리세린에 1 %(w/w) 아피게닌(Sigma-Aldrich, USA), 1 %(w/w) 프테로스틸벤(Sigma-Aldrich, USA) 및 0.5 %(w/w) 이다라본(Mitsubishi Tanabe Pharma, Japan)을 희석시켜 시료를 제조한 후, 0.2 mM DPPH 용액 1 mL에 시료를 메탄올에 50 mg/L 또는 100 mg/L로 희석하여 2 mL 혼합하고, 실온에서 10분간 반응시킨 후 microplate reader (Synergy, BioTek, USA)로 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로서 시료 용액 대신 메탄올을 넣어 같은 방법으로 측정하였으며, DPPH 용액 대신 메탄올을 넣어 각각에 대한 색 보정값을 얻었다.

하기 식 1에 따라 자유라디칼 소거율을 산출하였으며, 평가 결과는 하기 표 2와 같았다.

[식 1]

자유라디칼 소거율(%) = 100 x (각 시료의 흡광도 / 대조군의 흡광도)

구분 농도(mg/L)	자유라디칼 소거율(%)
	50	100	200
시료	15.2	32.7	64.1

상기 실험예를 통해, 상기 본 발명의 조성물은 농도 의존적으로 자유라디칼 소거 활성을 보였음을 알 수 있다.

실험예 1-2: Nitric oxide (NO) 소거 활성 평가

Nitric oxide (NO) 소거 활성 실험을 통해 아피게닌, 프테로스틸벤 및 이다라본을 포함하는 조성물의 항산화 효능을 확인하였다

구체적으로, 자연적으로 NO를 생성하는 물질인 sodium nitroprusside를 사용하여 상기 실험예 1-1의 시료의 NO 소거활성을 측정하였다. 10 mM sodium nitroprusside 용액 0.2 mL에 농도별 시료를 첨가하여 상온에서 3시간 동안 반응시켰다. 반응 후 반응액과 동일한 양의 Griess 시약 [2% (w/v) sulfanilamide 용액 (in 4% (v/v) phosphoric acid) / 0.2% (w/v) naphthylethylenediamide 용액 (in 4% (v/v) phosphoric acid)]을 첨가하였다. 실온에서 10 분간 반응을 시킨 후 542 nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성대조군으로 BHT를 사용하였고, 음성대조군으로서 메탄올을 처리하였다.

하기 식 2에 따라 잔존하는 아질산염(nitrite)의 양으로 NO 소거활성을 산출하였으며, 평가 결과는 하기 표 3과 같았다.

[식 2]

NO 소거능(%) = 100 x [1 - (각 시료의 흡광도 / 음성대조군의 흡광도)]

구분 농도(mg/L)	NO 소거능(%)
	10	50	100
시료	48.3	57.6	61.0
양성대조군	47.5	50.2	55.1

상기 실험예를 통해, 상기 본 발명의 조성물은 농도 의존적으로 NO 소거 활성을 보였으며, 대조군인 BHT와 비교하여 동등 이상 수준의 활성을 가짐을 알 수 있다.

상기 실험 결과를 통하여, 본 발명에 따른 조성물은 우수한 자유라디칼 소거 활성 및 NO 소거 활성을 보이는 것을 알 수 있다. 이를 통해, 본 발명의 조성물은 항산화 효능을 가져, 피부 항산화용 조성물 및 이를 이용한 피부 항산화용 화장료 용도로 적용이 가능함을 알 수 있다.

제조예: 신규 펩타이드의 합성

종래에 알려진 Fmoc 고상 합성법(solid phase peptide synthesis, SPPS)을 통해 신규 펩타이드들을 합성하였다(참고문헌: Wang C. Chan, Perter D. White, 'Fmoc-solid phase peptide synthesis', Oxford).

구체적으로, C-말단부터 아미노산을 하나씩 커플링하여 신규 펩타이드들을 합성하였다. 이를 위해 펩타이드의 C-말단의 첫번째 아미노산이 수지에 부착된 것을 사용하였다.

펩타이드 합성에 사용한 모든 아미노산 원료는 N-term이 Fmoc으로 보호(protection)되고, 잔기는 모두 산에서 제거되는 Trt, Boc, t-Bu (t-butylester), Pbf (2,2,4,6,7-pentamethyl dihydro-benzofuran-5-sulfonyl) 등으로 보호된 것을 사용하였다.

커플링 시약(Coupling reagent)으로는 HBTU[2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetamethylaminium hexafluorophosphate] / HOBt(N-Hydroxxybenzotriazole) / NMM(4-Methylmorpholine)를 사용하였다. Fmoc 제거는 20%의 DMF 중 피페리딘(piperidine in DMF)을 이용하였다. 합성된 펩타이드의 아미노산 수지에서 분리 및 잔기의 보호기 제거에는 절단 칵테일(Cleavage Cocktail) [TFA(trifluoroacetic acid) / TIS(triisopropylsilane) / EDT(ethanedithiol) / H2O=92.5/2.5/2.5/2.5]를 사용하였다.

아미노산 보호기가 결합된 출발 아미노산이 고상 지지체에 결합되어 있는 상태에 각 펩타이드의 서열에 따라 해당되는 아미노산들을 순차적으로 반응시키고 용매로 세척한 후 탈보호하는 과정을 반복함으로써 각 펩타이드를 합성하였다.

합성된 펩타이드를 수지로부터 끊어낸 후, C18 역상 고성능액체크로마토그래피(HPLC, Waters Associates, USA)로 정제하고, 합성 성공여부를 LC/MS로 확인한 뒤 동결 건조하였다.

본 실시예에 사용된 펩티드에 대해 고성능 액체 크로마토그래피 결과, 모든 펩타이드의 순도는 95% 이상이었다.

상기 방법에 따라 합성된 펩타이드는 하기 표 4와 같았다.

구분	서열번호	아미노산 서열
실시예 1	1	RKKRRQRRRGHK
실시예 2	2	RKKRRQRRRKTTKS
실시예 3	3	RKKRRQRRRGQPR
실시예 4	4	RKKRRQRRRLLTS
실시예 5	5	RKKRRQRRRRFI
실시예 6	6	RKKRRQRRRSSRLR
실시예 7	7	RKKRRQRRRTSRVR
실시예 8	8	RKKRRQRRRREGRT
실시예 9	9	RKKRRQRRRGEKG

실험예 2-1: 멜라닌 생성량 분석

멜라닌 생성량 분석(melanin contents assay)를 통해 상기 신규 펩타이드에 의한 멜라닌형성(melanogenesis) 저해능을 평가하였다(참고문헌: Eisinger M et al, 1982; Siegrist W and Eberle AN, 1986).

6-웰 배양용 평판(6-well plate)에 흑색종 세포주(B16F10) 세포를 접종한 후 24시간 동안 배양하였다. 멜라닌 형성을 촉진하는 α-MSH(Sigma-Aldrich, USA) 호르몬 및 상기 펩타이드들을 농도별로(10, 20, 50 mg/L) 배지에 주입하였다(참고문헌: Virador VM et al, 1999).

48시간 경과 후, 세포를 수확하여 PBS로 1회 세척하고, 1 N NaOH lysis buffer 120 μL를 넣고 95 ℃에서 10분간 가열하여 세포를 용해하였다. microplate reader를 이용하여 450 nm 파장에서 흡광도를 측정하였으며, 양성대조군으로는 100 mg/L 농도의 알부틴(arbutin)을 사용하였다.

하기 식 3에 따라 멜라닌 생성 억제율을 산출하였으며, 평과 결과는 하기 표 5와 같았다.

[식 3]

멜라닌 생성 억제율(%) = 100 x [1 - (각 시료의 흡광도 / 음성대조군의 흡광도)]

구분 농도(mg/L)	멜라닌 생성 억제율(%)
	10	20	50
양성대조군	28.5
실시예 1	31.2	39.4	44.5
실시예 2	29.7	37.4	42.3
실시예 3	32.4	40.1	45.3
실시예 4	26.5	35.7	41.8
실시예 5	30.1	38.7	42.3
실시예 6	31.9	43.2	45.5
실시예 7	28.6	39.8	43.4
실시예 8	29.0	40.5	45.9
실시예 9	32.4	43.1	46.2

상기 실험예를 통해, 상기 실시예의 신규 펩타이드들은 농도 의존적으로 멜라닌의 생성을 효과적으로 억제하였으며, 미백 효과가 널리 알려진 알부틴과 비교하여 멜라닌 생성을 동등 이상 수준으로 저해하였음을 알 수 있다.

실험예 2-2: 티로시나아제(tyrosinase) 저해 활성 실험

상기 신규 펩타이드의 미백 효과를 평가하기 위해 시험관 내에서 티로시나아제의 억제 활성을 측정하였다.

pH 6.5의 0.1 M 인산염완충액 220 μL, 상기 펩타이드의 농도별(10, 20, 50 mg/L) 시료용액 20 μL, 티로시나아제(1500 U/ml 내지 2000 U/ml) 20 μL를 순차적으로 투입하였다. 1.5 mM 티로신 용액 40 μL 를 넣고 37℃에서 약 15분 동안 반응시킨 후, ELISA reader를 이용하여 490 nm에서 흡광도를 측정하였다.

음성대조군으로는 상기 시료용액 대신 pH 6.5의 0.1 M 인산염완충액을 사용하였고, 양성대조군으로 50 uM 농도의 코직산(Kojic acid)을 사용하였으며, 하기 식 4에 따라 티로시나아제 저해 활성을 산출하였다. 평과 결과는 하기 표 6과 같았다.

[식 4]

티로시나아제 저해 활성(%) = 100 x [1 - (각 시료의 흡광도 / 음성대조군의 흡광도)]

구분 농도(mg/L)	티로시나아제 저해 활성(%)
	10	20	50
양성대조군	27.1
실시예 1	30.3	43.9	48.0
실시예 2	25.4	35.4	41.3
실시예 3	29.3	37.4	39.9
실시예 4	28.0	40.2	41.0
실시예 5	27.7	38.7	41.2
실시예 6	27.2	35.4	42.8
실시예 7	28.7	42.8	43.8
실시예 8	28.0	40.0	47.3
실시예 9	29.4	41.4	50.0

상기 실험예를 통해, 상기 실시예의 신규 펩타이드들은 농도 의존적으로 티로시나아제의 활성을 효과적으로 억제하였으며, 티로시나아제 억제능이 알려진 코직산과 비교하여 티로시나아제의 활성을 동등 이상 수준으로 저해하였음을 알 수 있다.

상기 실험 결과를 통하여, 본 발명에 따른 신규 펩타이드들 및 이를 포함하는 조성물은 우수한 멜라닌 생성 억제 및 티로시나아제 억제 활성을 보이는 것을 알 수 있다. 이를 통해, 본 발명의 신규 펩타이드 및 이를 포함한 조성물은 피부 미백의 근본적인 치료인 멜라닌 생성 억제 효과를 가져, 피부 미백용 조성물 및 이를 이용한 피부 미백용 화장료 용도로 적용이 가능함을 알 수 있다.

이하에서는 본 발명의 조성물에 포함되는 성분과 신규 펩타이드를 첨가하여 화장품 제형을 제조한 제형예에 대해 설명하나, 본 발명의 제형이 하기 제형예에 제한되지 아니함은 자명하다.

제형예 1: 크림의 제조

통상적인 방법에 따라, 하기와 같은 성분 및 함량을 포함하는 크림 제형을 제조하였다.

글리세린 8.000000 %(w/w)

마카다미아씨오일 6.000000 %(w/w)

세테아릴알코올 3.000000 %(w/w)

1,2-헥산다이올 2.000000 %(w/w)

망고씨버터 2.000000 %(w/w)

아피게닌 1.000000 %(w/w)

호호바씨오일 0.800000 %(w/w)

프테로스틸벤 0.800000 %(w/w)

판테놀 0.300000 %(w/w)

소듐하이알루로네이트 0.200000 %(w/w)

이다라본 0.200000 %(w/w)

잔탄검 0.200000 %(w/w)

폴리솔베이트80 0.050000 %(w/w)

PE-07 (서열번호 3) 0.010000 %(w/w)

PE-14 (서열번호 9) 0.005000 %(w/w)

에스에이치-올리고펩타이드-2 0.001000 %(w/w)

에스에이치-폴리펩타이드-1 0.001000 %(w/w)

정제수 잔량

제형예 2: 토너의 제조

통상적인 방법에 따라, 하기와 같은 성분 및 함량을 포함하는 토너 제형을 제조하였다.

부틸렌글라이콜 20.38710 %(w/w)

녹차추출물 19.88750 %(w/w)

락토바실러스/쌀발효물 19.88750 %(w/w)

뽕나무껍질추출물 16.00000 %(w/w)

1,2-헥산다이올 1.200000 %(w/w)

아피게닌 1.000000 %(w/w)

프테로스틸벤 0.800000 %(w/w)

폴리솔베이트20 0.200000 %(w/w)

이다라본 0.200000 %(w/w)

이디티에이 0.000500 %(w/w)

PE-07 (서열번호 3) 0.010000 %(w/w)

PE-14 (서열번호 9) 0.005000 %(w/w)

에스에이치-올리고펩타이드-2 0.001000 %(w/w)

에스에이치-올리고펩타이드-1 0.001000 %(w/w)

정제수 잔량

이상에서 본 발명의 실시예를 중심으로 설명하였으나 이는 단지 예시일 뿐 본 발명을 한정하는 것이 아니며, 본 발명이 속하는 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 실시예의 본질적인 특성을 벗어나지 않는 범위에서 이상에 예시되지 않은 여러 가지의 변형과 응용이 가능함을 알 수 있을 것이다. 예를 들어, 본 발명의 실시예에 구체적으로 나타난 각 구성 요소는 변형하여 실시할 수 있다. 그리고 이러한 변형과 응용에 관계된 차이점들은 첨부된 청구 범위에서 규정하는 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다.

<110> Abtiron bio Co., Ltd <120> Cosmetic Composition for Anti-oxidation and Whitening of Skin <130> GP190039KR <160> 27 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 1 Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Gly His Lys 1 5 10 <210> 2 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 2 Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Lys Thr Thr Lys Ser 1 5 10 <210> 3 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 3 Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Gly Gln Pro Arg 1 5 10 <210> 4 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 4 Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Leu Leu Thr Ser 1 5 10 <210> 5 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 5 Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Arg Phe Ile 1 5 10 <210> 6 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 6 Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Ser Ser Arg Leu Arg 1 5 10 <210> 7 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 7 Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Thr Ser Arg Val Arg 1 5 10 <210> 8 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 8 Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Arg Glu Gly Arg Thr 1 5 10 <210> 9 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 9 Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Gly Glu Lys Gly 1 5 10 <210> 10 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 10 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Gly His Lys 1 5 10 <210> 11 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 11 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Lys Thr Thr Lys Ser 1 5 10 15 <210> 12 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 12 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Gly Gln Pro Arg 1 5 10 15 <210> 13 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 13 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Leu Leu Thr Ser 1 5 10 15 <210> 14 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 14 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Arg Phe Ile 1 5 10 <210> 15 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 15 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Ser Ser Arg Leu Arg 1 5 10 15 <210> 16 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 16 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Thr Ser Arg Val Arg 1 5 10 15 <210> 17 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 17 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Arg Glu Gly Arg Thr 1 5 10 15 <210> 18 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 18 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Gly Glu Lys Gly 1 5 10 15 <210> 19 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 19 Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Gly His Lys 1 5 10 <210> 20 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 20 Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Lys Thr Thr Lys Ser 1 5 10 15 <210> 21 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 21 Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Gly Gln Pro Arg 1 5 10 <210> 22 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 22 Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Leu Leu Thr Ser 1 5 10 <210> 23 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 23 Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Arg Phe Ile 1 5 10 <210> 24 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 24 Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Ser Ser Arg Leu Arg 1 5 10 15 <210> 25 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 25 Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Thr Ser Arg Val Arg 1 5 10 15 <210> 26 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 26 Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Arg Glu Gly Arg Thr 1 5 10 15 <210> 27 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Novel peptide <400> 27 Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Gly Glu Lys Gly 1 5 10

Claims (10)

1. 아피게닌;
   프테로스틸벤;
   이다라본; 및
   서열번호 1 내지 9의 펩타이드 중 하나 이상을 포함하되,
   상기 아피게닌은 0.1~10 %(w/w), 상기 프테로스틸벤은 0.1~10 %(w/w) 및 상기 이다라본은 0.01~10 %(w/w)로 포함하고,
   자유라디칼 소거 활성 및 NO 소거 활성과, 멜라닌 생성 억제 및 티로시나아제 억제 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 피부용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   서열번호 3, 6, 8 및 9의 펩타이드 중 하나 이상을 포함하되,
   상기 펩타이드를 20 mg/L 이상으로 포함하는 시료는 α-MSH 호르몬 처리된 흑색종 세포에 대한 아래 식 1에 따른 멜라닌 생성 억제율이 40% 이상인 피부용 화장료 조성물.
   [식 1]
   멜라닌 생성 억제율(%) = 100 x [1 - (시료의 450 nm 파장에 대한 흡광도 / 음성대조군의 450 nm 파장에 대한 흡광도)]
3. 제1항에 있어서,
   서열번호 1, 4, 7, 8 및 9의 펩타이드 중 하나 이상을 포함하되,
   상기 펩타이드를 20 mg/L 이상으로 포함하는 시료는 아래 식 2에 따른 티로시나아제(1500 U/ml 내지 2000 U/ml) 20 μL에 대한 저해 활성이 40% 이상인 피부용 화장료 조성물.
   [식 2]
   티로시나아제 저해 활성(%) = 100 x [1 - (각 시료의 490 nm 파장에 대한 흡광도 / 음성 대조군의 490 nm 파장에 대한 흡광도)]
4. 제1항에 있어서,
   토너, 에멀젼 또는 크림 제형을 갖는 피부용 화장료 조성물.
5. 제1항에 있어서,
   서열번호 8 및 9의 펩타이드 중 하나 이상을 포함하되,
   상기 펩타이드를 20 mg/L 이상으로 포함하는 시료는,
   α-MSH 처리된 흑색종 세포에 대한 아래 식 1에 따른 멜라닌 생성 억제율이 40% 이상이고, 아래 식 2에 따른 티로시나아제(1500 U/ml 내지 2000 U/ml) 20 μL에 대한 저해 활성이 40% 이상인 피부용 화장료 조성물.
   [식 1]
   멜라닌 생성 억제율(%) = 100 x [1 - (시료의 450 nm 파장에 대한 흡광도 / 음성대조군의 450 nm 파장에 대한 흡광도)]
   [식 2]
   티로시나아제 저해 활성(%) = 100 x [1 - (각 시료의 490 nm 파장에 대한 흡광도 / 음성 대조군의 490 nm 파장에 대한 흡광도)]
   
6. 삭제
7. 삭제
8. 삭제
9. 삭제
10. 삭제