KR102432888B1 - 식용필름 및 이를 이용한 피부미용방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 항산화 피부 재생 효과를 제공하는 식용 필름에 관한 것으로, 일 실시예에 따른 식용 필름은 석류분말, 레몬즙, 차전자피 분말 및 콜라겐 분말, 플루란, 잔탄검, 스테비아 분말을 포함하고, 상기 석류분말은 1.00 중량비, 상기 레몬즙은 2.00 중량비, 상기 플루란은 30.00 중량비, 상기 잔탄검은 2.00 중량비, 상기 스테비아 분말은 10.00 중량비, 상기 차전차피 분말은 2.00 중량비 및 상기 콜라겐 분말은 2.00 중량비로 혼합될 수 있다.

Description

식용필름 및 이를 이용한 피부미용방법{EDIBLE FILM AND SKIN CARE METHOD USING THE SAME}

본 발명은 식용 필름 및 이를 이용한 피부미용방법에 관한 것으로서, 구체적으로는 피부 재생, 항산화 및 미백 효능을 갖는 식용 필름 및 이를 이용한 피부미용방법에 관한 것이다.

일반적으로 피부는 인체의 일차 방어막으로서 체내의 기관들을 온도 및 습도 변화, 자외선, 공해물질 등 외부환경의 자극으로부터 보호해 주며, 체온조절 등의 생체 항상성 유지에 중요한 역할을 한다.

산업이 발달함에 따라 환경 오염이 심각해지고, 피부의 산화 및 노화 방지, 미백 등에 관한 관심이 고조되고 있다. 특히, 사람의 피부는 끊임없이 변화를 겪게 되는데, 가장 대표적인 변화가 산화 및 노화에 의한 피부 기능 저하 및 시각적 아름다움의 감소이다.

피부의 주요 구성물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등은 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴될 수 있으며, 결국 피부가 노화될 수 있다. 특히 단백질의 산화에 의해 피부의 결합조직인 콜라겐, 히알루론산, 엘라스틴, 프로테오글라이칸, 피브로넥틴 등이 절단되고 과다 염증반응이 나타날 수 있으며, 더욱 심화되는 경우 DNA 변이에 의한 돌연변이, 면역기능의 저하, 암의 유발이 촉진될 수 있다.

따라서, 신체의 대사 과정 중 발생하는 활성산소종이나 자외선 조사, 염증 반응에 의해 매개되는 활성산소종을 소거하여 세포막을 보호하고, 활발한 신진대사를 통해 손상 받은 세포를 재생시켜 피부 건강을 회복시키는 것이 바람직하다.

또한, 아름다움을 위해 얼굴에 바르는 화장품과 병용되는 피부의 체질 자체를 개선하는 먹는 화장품(이너뷰티) 시장의 성장세가 꾸준히 이어지고 있다. 특히 화장품은 바르는 것이라는 고정관념을 깨는 제품들이 속속 출시되면서, 먹는 화장품을 바르는 화장품의 보완재 혹은 피부 미용에 더 효과적인 제품으로 인식하는 소비자들이 늘고 있다.

이에 따라 본 발명자는 피부 재생, 항산화 및 미백에 효능을 갖는 식용필름을 개발하였다.

이에 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 피부 재생, 항산화 및 미백 효능을 갖는 식용 필름 및 이를 이용한 피부미용방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 과제들은 이상에서 언급한 기술적 과제로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 기술적 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

일 실시예에 따른 식용 필름은 석류분말, 레몬즙, 차전자피 분말 및 콜라겐 분말을 포함할 수 있다.

상기 식용 필름은, 플루란, 잔탄검, 스테비아 분말을 더 포함하고, 상기 석류분말은 1.00 중량비, 상기 레몬즙은 2.00 중량비, 상기 플루란은 30.00 중량비, 상기 잔탄검은 2.00 중량비, 상기 스테비아 분말은 10.00 중량비, 상기 차전차피 분말은 2.00 중량비 및 상기 콜라겐 분말은 2.00 중량비로 혼합될 수 있다.

상기 식용 필름은 서열 1 및 2의 펩타이드로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩타이드를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 실시예들에 따른 식용 필름 조성물은 피부 재생, 항산화 및 미백 효능 등을 갖기 때문에 전반적인 피부 상태 개선에 탁월한 효과가 있다.

본 발명의 실시예들에 따른 효과는 이상에서 예시된 내용에 의해 제한되지 않으며, 더욱 다양한 효과들이 본 명세서 내에 포함되어 있다.

도 1은 식용필름을 제조하는 방법을 설명하기 위한 흐름도이다.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.

본 명세서에서 사용된 용어는 실시예들을 설명하기 위한 것이며 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니다. 본 명세서에서, '및/또는'은 언급된 아이템들의 각각 및 하나 이상의 모든 조합을 포함한다. 또, 단수형은 문구에서 특별히 언급하지 않는 한 복수형도 포함한다. 명세서에서 사용되는 '포함한다(comprises)' 및/또는 '포함하는(comprising)'은 언급된 구성요소 외에 하나 이상의 다른 구성요소의 존재 또는 추가를 배제하지 않는다. '내지'를 사용하여 나타낸 수치 범위는 그 앞과 뒤에 기재된 값을 각각 하한과 상한으로서 포함하는 수치 범위를 나타낸다. '약' 또는 '대략'은 그 뒤에 기재된 값 또는 수치 범위의 20% 이내의 값 또는 수치 범위를 의미한다.

다른 정의가 없다면, 본 명세서에서 사용되는 모든 용어(기술 및 과학적 용어를 포함)는 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 공통적으로 이해될 수 있는 의미로 사용될 수 있을 것이다. 또 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 용어들은 명백하게 특별히 정의되어 있지 않는 한 이상적으로 또는 과도하게 해석되지 않는다.

본 발명은 피부건강 개선용 세트 및 이를 이용한 피부미용방법에 관한 것으로서, 상기 “피부건강 개선”은 항산화, 피부 미백, 피부 노화 및 주름의 예방 또는 개선, 피부 보호, 피부 장벽 기능 개선, 피부자극 완화, 피부 재생, 콜라겐 합성 증진능 등 피부에 유익한 효과를 모두 포괄하는 의미이다.

상기 “항산화”는 산화를 억제하는 작용으로서, 생체 내 산화적 스트레스(oxidative stress)에 의해 산화가 촉진됨으로써 세포 손상 및 병리적 질환이 유발되는 것을 막는 것을 의미할 수 있다.

상기 "피부 미백"은 피부색에 영향을 미치는 멜라닌, 티로시나아제, 산화-환원 헤모글로빈, 카로틴, 멜라노이드 등 다양한 생체 분자의 생성을 억제함으로써 잡티, 주근깨, 기미 등의 피부 색소 침착 현상을 완화시키고, 피부 누런기, 붉은기를 완화시켜 피부 밝기 및 균일도를 향상시키는 효과를 의미할 수 있다.

상기 "주름"은 피부 진피에 존재하는 콜라겐 및 엘라스틴의 감소, 외부환경 등에 의해 피부가 쇠하여 생긴 잔주름을 의미할 수 있고, 상기 "주름 개선"은 피부에 주름이 생성되는 것을 억제 또는 저해하거나, 이미 생성된 주름을 완화하는 현상을 의미할 수 있다.

상기 "피부 탄력"은 진피층에 존재하는 엘라스틴(elastin)으로 구성된 탄력섬유에 의해 구현되는 탄성을 의미할 수 있고, 상기 "피부 탄력 개선"은 엘라스틴으로 구성된 탄력섬유가 콜라겐과 함께 존재하며 상기 엘라스틴과 콜라겐이 충분히 존재하는 상태에서 피부 탄력이 유지 또는 향상되는 현상을 의미할 수 있다.

상기 “피부 재생”은 주름이 생성되거나 피부 탄력이 저하된 것을 회복하여 재생시키는 것을 의미할 수 있고, 진피층에 존재하는 콜라겐 형성을 촉진하거나 증진시켜 주름 개선 및 탄력을 증진시키는 것을 의미할 수 있다.

펩타이드(peptide)란 아미드 결합(또는 펩타이드 결합)으로 연결된 하나 이상의 아미노산으로 구성된 폴리머를 의미한다. 본 발명의 목적상 상기 펩타이드는 피부 재생, 항산화 및 피부 미백 효과를 나타내는 펩타이드 또는 이의 단편을 의미할 수 있다.

상기 펩타이드를 명명하는 일반적인 규칙은 구체적으로 지시된 예외사항이 없는 경우 3문자 또는 1문자 아미노산 코드를 기초로 할 수 있다. 예컨대, 아미노산 구조의 중심부를 3문자 코드(예컨대, Ala, Lys)로 표시하며, 3문자 코드의 앞에 "D-"를 적음으로써 D-입체형태(예컨대, D-Ala, D-Lys)를 구체적으로 지시하지 않은 경우라면 L-입체형태로 가정할 수 있다. 상기 펩타이드를 구성하는 아미노산 잔기는 천연 또는 비-천연아미노산 잔기일 수 있다.

이하, 본 발명의 실시예들에 대하여 상세하게 설명한다.

본 발명의 식용필름은 피부 상태의 개선효과를 갖는 것으로서, 특히 피부 재생, 항산화 및 피부 미백 효과에 탁월한 효과를 갖는다.

상기 식용필름은 구강에서 용해되는 식용 필름일 수 있으며, 전분, 콜라겐, 젤라틴, 한천, 스테비아 등을 원료로 하여 제조되는 것일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 식용필름은 석류분말, 레몬즙, 플루란, 차전자피, 콜라겐, 잔탄검, 색소 및 스테비아를 포함하는 것일 수 있다.

석류즙은 유기산, 시트르산, 수용성 비타민(B1, B2, 나이아신)이 포함되어 있으며 면역력 증진, 항염 효과 및 갱년기 증상을 완화하는데 도움이 되고 색소 침착을 막아주는데 효과가 있다.

레몬즙은 비타민 C와 구연산을 포함하고 있으며 레몬즙에 포함되어 있는 비타민 C는 항산화 효과가 있어 바쿠치올과 함께 사용하는 경우 콜라겐 합성을 더욱 촉진할 수 있다.

차전자피는 질경이 씨앗의 껍질을 말하며 분말로 사용될 수 있고 대변의 양을 늘려 변비를 치료할 수 있으며, 대변과 함께 축적된 독소와 노폐물이 배출될 수 있도록 하여 피부 상태 개선에 도움을 준다.

콜라겐은 진피 표피 아래에 위치하여 탄력 섬유로서 역할을 하며 피부 내에서 콜라겐 형성이 늦어지거나 재생이 더디어지는 경우 노화가 촉진되며 주름이 악화될 수 있어, 콜라겐 형성의 촉진 및 유지를 위하여 콜라겐을 직접 섭취하거나 피부에 도포하여 흡수시킬 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 식용 필름은 필름 형태로 섭취가 가능한 형태의 요소를 의미할 수 있으며, 이너 필름, 부스터 이너 스트립 등의 용어로 지칭될 수 있음을 통상의 기술자가 이해할 것이다.

일 실시예에 따른 식용필름은 예시적으로 도 1에 첨부된 방식으로 제조될 수 있다. 보다 구체적으로, 석류분말을 이용한 식용 필름 제조 방법은 상기 석류분말에 레몬즙, 플루란, 잔탄검, 스테비아 분말, 차전차피 분말, 콜라겐 분말을 첨가하여 혼합하여 필름 형성 용액을 제조하고(S110), 상기 필름 형성 용액을 박막 형태로 하부에 공급되는 하부 포장지에 코팅하고(S120), 상기 하부 포장지에 코팅된 필름 형성 용액을 반건조 상태로 건조시키고(S130), 상기 코팅된 필름 형성 용액 상부에 상부 포장지를 공급하고(S140), 상기 상부 포장지와 상기 하부 포장지의 가장자리를 열 압축하여 실링한다(S150).

일 실시예에 따라, 상기 석류분말은 석류를 10 내지 200 메쉬 크기로 분쇄하여 생성될 수 있으며, 실시예에 따라 석류즙이 활용되는 경우에는, 분쇄된 석류 분말에 추출 용매를 첨가하여 48시간 냉침한 후 여과하고, 여과한 추출 원액을 농축하여 석류즙이 획득될 수 있다. 이때 사용한 추출 용매로는 정제수, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸아세테이트, 아세톤으로 구성된 군중에서 선택된 1종 또는 2종 이상의 용매를 혼합하여 추출에 사용할 수 있다.

일 실시예에 따라, 석류즙은 그 함량이 전체 조성물에 대해서 54.4 중량%내에서 사용하는 것이 바람직할 수 있다.

단계 (S110)에서 석류분말에 레몬즙, 플루란, 잔탄검, 스테비아 분말, 차전차피 분말, 콜라겐 분말을 첨가하여 혼합하여 필름 형성 용액을 제조할 수 있다.

일 실시예에 따라, 상기 필름 형성 용액 총 중량 기준으로 상기 석류분말은1.00 중량비, 상기 레몬즙은 2.00 중량비, 상기 플루란은 30.00 중량비, 상기 잔탄검은 2.00 중량비, 상기 스테비아 분말은 10.00 중량비, 상기 차전차피 분말은 2.00 중량비 및 상기 콜라겐 분말은 2.00 중량비로 혼합될 수 있다.

식용 필름 사용 시에 텁텁하거나 다소 쓴맛을 조절하기 위해 향료와 감미제가 사용되는데, 본 발명의 일 실시예에 따라, 스테비아 분말이 사용될 수 있다. 스테비아 분말은 천연감미료로써 단맛을 주지만 설탕에 비하여 칼로리가 낮을 수 있다.

이 밖에도, 필름 형성 용액은 식용 필름의 물성을 개선하기 위하여 가소제와 가교제를 첨가할 수 있다.

단계 (S120)에서 상기 필름 형성 용액을 박막 형태로 하부에 공급되는 하부 포장지에 코팅할 수 있다. 포장지는 필름형태를 유지하기 위해 내용물을 포함하는 요소로, 포장지는 추후 열 압축을 통해 필름 형태의 최종 구성 결과물이 생성될 수 있다.

일 실시예에 따라, 필름 형성 용액을 분사하여 하부 포장지에 코팅할 수 있다. 분사 시에 하부 포장지의 상면에 노즐을 통하여 수직하게 분사할 수 있다.

일 실시예에 따라, 바늘 형태의 노즐에 의해 필름 형성 용액을 한, 두방울 분사하여 코팅하는 것이 바람직하다. 바늘 형태의 노즐을 사용하여 필름 형성 용액을 분사하면, 분사량을 보다 정밀하게 조절할 수 있으며, 어린이용 식용 필름의 경우 어린이들이 좋아하는 캐릭터와 같이 여러 가지 형태로 코팅할 수 있다.

단계 (S120)에서 필름 형성 용액을 분사할 때, 일정 용량을 분사하여 일정한 두께를 가지도록 할 수 있다.

단계 (S130)에서 상기 하부 포장지에 코팅된 필름 형성 용액을 반건조 상태로 건조시킬 수 있다.

일 실시예에 따라, 필름 형성 용액을 반건조 상태로 건조시킴으로써 온도, 습도, 코팅시간, 적정 원료 배합을 유지할 수 있다. 또한, 반건조 상태를 통해 물질의 안정성 및 편리성을 추구할 수 있다.

단계 (S140)에서 반건조 된 필름 형성 용액 상부에 상부 포장지를 공급할 수 있다.

단계 (S150)에서 상부 포장지와 상기 하부 포장지의 가장자리를 열 압축하여 실링할 수 있다.

일 실시예에 따라서, 열 실링기를 이용하여 상부 포장지와 하부 포장지의 가장자리를 열 접합 방식으로 접합시켜 실링할 수 있다. 이를 통하여, 낱개 식용 필름이 개별 포장으로 밀봉될 수 있다.

일 실시예에 따른 식용 필름은 피부용 화장품과 함께 사용되는 경우, 피부 재생, 항산화 및 미백 효능이 배가될 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 화장품은 당해 기술 분야에서 통상적인 방법에 따라 제형화된 것일 수 있다.

구체적으로, 상기 화장품은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조된 것일 수 있다. 예컨대, 유연 화장수, 영양 화장수 등의 화장수(토너); 페이셜 로션, 바디로션 등의 에멀젼; 비비 크림, 썬 크림, 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림 등의 크림; 에센스; 세럼; 화장연고; 스프레이; 젤; 팩; 메이크업 베이스; 액체 타입, 고체 타입 또는 스프레이 타입 등의 파운데이션; 파우더; 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일 등의 메이크업 제거제; 또는 클렌징 폼, 비누, 바디워시 등의 세정제로 제형화된 것일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 화장품은 병풀추출물, 티트리추출물, 바쿠치올 및 EGF(Epidermal Growth Factor, 표피증식인자)를 포함하는 것일 수 있다.

병풀추출물은 쌍떡잎식물 이판화군 산형화목 미나리과의 여러해살이풀인 병풀에서 추출된 것을 말하며, 콜라겐 형성을 증가시켜 피부 재생, 탄력, 주름 개선 및 노화방지에 도움을 주는 효능을 갖고 있다.

상기 병풀추출물은 슈퍼센텔라를 포함할 수 있으며, 보다 구체적으로 센텔라아시아티카(centella asiatica)를 포함할 수 있다.

티트리추출물은 도금양목 도금양과의 상록교목인 티트리에서 추출된 것을 말하며, 염증을 치료하는 항균 효과, 항산화 및 여드름 진정에 도움을 주는 효능을 갖고 있다.

바쿠치올은 콩과의 보골지(Psoralea corylifolia) 또는 파고지에서 추출된 것을 말하며 항산화, 항염효과와 피부 재생 주기를 활성화하여 주름개선에 효능이 있다.

EGF는 표피증식인자로써 상피세포의 증식을 촉진하는 펩타이드이며 피부이식, 상처의 회복 촉진에 사용되며 피부재생에 효과가 있다.

상기 항산화 효능을 갖는 성분을 포함하는 식용필름 및 화장품은 자유라디칼 소거 활성 및 Nitric oxide (NO) 소거 활성을 갖는다. 산화적 스트레스는 활성 산소종의 발생과 항산화 방어제 간의 심각한 불균형을 초래하는 상황으로서, NO 소모가 동반된 산화반응 등은 이차적인 산화, 질소화 및 nitrosation/nitrosylation 물질을 생성하고 이러한 이차적인 nitrated species는 독특한 염증성 세포 신호를 전달하게 된다.

상기 피부재생 효능을 갖는 성분을 포함하는 식용필름 및 화장품은 콜라겐 형성을 촉진하는 효과를 나타낸다. 콜라겐은 프로콜라겐(Procollagen)이 형성된 후, 프로콜라겐과 C - 펩타이드의 결합에 분해되면서 형성된다. 콜라겐은 프로콜라겐와 C - 펩타드의 결합이 끊어지면서 형성되므로 이러한 프로콜라겐과 결합이 끊어진 C - 펩타이드의 함량은 생성된 콜라겐의 함량과 동일하다.

프로콜라겐과 결합이 끊어진 C - 펩타이드의 함량을 측정하면 콜라겐 함량 정할 수 있다

상기 화장품은 통상적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있으며 예컨대 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합한 것일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 식용필름 및 화장품 조성물은 본 발명의 신규 펩타이드를 더 포함할 수 있으며, 신규 펩타이드는 피부 재생, 항산화 및 피부 미백 효과를 나타낼 수 있다.

상기 식용필름은 하기 표 1에 나타난 서열번호 1 및 2의 서열을 갖는 펩타이드들을 포함한다.

서열번호	분류번호	아미노산 서열
1	PE-08	GRKKRRSSQRSRRTQ
2	PE-13	GRKKRRSRRQKRSHK

상기 화장품은 펩타이드는 하기 표 1에 나타난 서열번호 3 내지 5의 서열을 갖는 펩타이드들을 포함한다.

서열번호	분류번호	아미노산 서열
3	PE-07	GRKKRRHRRKQQK
4	PE-11	GRKKRRSRRHKKRS
5	PE-17	GRKKRRQRRQKRSSTQ

본 발명의 서열번호 1 내지 5의 신규 펩타이드들은 상기 펩타이드들의 기능적 동등물도 포함할 수 있다. 상기 “기능적 동등물"은 아미노산의 부가, 치환 또는 결실의 결과, 상기 신규 펩타이드 각각의 아미노산 서열과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 서열 상동성을 가지는 것으로, 상기 펩타이드와 실질적으로 동질의 생리활성을 가지는 것을 의미한다. 예를 들어, 상기 서열 상동성을 갖는 펩타이드는 상기 신규 펩타이드 각각에서 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 또는 5개 이상의 아미노산이 치환(substitution)된 것일 수 있다.

상기 "실질적으로 동질의 생리활성"은 상기 펩타이드의 구조적, 기능적 상동성으로 인한 콜라겐 형성을 촉진 및 증가 등 피부 상태 개선 활성을 의미한다. 또한, 상기 펩타이드는 아미노산의 부가, 치환 또는 결실의 결과 물리화학적 특성을 수반하거나 수반하지 않을 수 있다. 예시적인 실시예에서, 상기 아미노산 치환은 펩타이드의 열안정성을 향상시키거나, 기질 특이성을 변경시키거나, 최적의 pH를 변화시킬 수 있다. 다만 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 서열번호 1 내지 5의 펩타이드들의 N 또는 C-말단은 아세틸기, 플루오레닐 메톡시 카르보닐기, 포르밀기, 팔미토일기, 미리스틸기, 스테아릴기 또는 폴리에틸렌글리콜(PEG)이 결합될 수 있다. 상기 펩타이드들은 상기 변형에 의해 안정성이 현저히 개선될 수 있다. 상기 안정성은 in vivo 안정성뿐만 아니라, 저장 안정성도 포함하는 개념이다. 상기 보호기는 생체 내의 단백질 절단효소의 공격으로부터 본 발명의 펩타이드를 보호할 수 있다.

본 발명의 신규 펩타이드들은 피부 재생, 항산화 및 피부 미백 효과를 갖을 수 있다.

일 실시예에 따른 식용 필름은 앞서 설명된 화장품과 한 세트로서 피부건강 개선을 위하여 병용할 수 있도록 제공될 수 있다.

본 발명의 다른 일 실시예로 화장품 조성물은 병풀추출물, 티트리추출물, 바쿠치올, EGF, 흰목이버섯추출물, 콜라겐, 나이아신아마이드, 및 아데노신을 포함할 수 있다.

흰목이버섯추출물은 비타민 D, 칼슘, 라이신, 로이신, 아미노산, 콜라겐 및 교질성분이이 풍부한 균류로써 피부의 장벽을 강화시키고 콜라겐 형성 촉진 및 증가에 효과가 있다.

나이아신아마이드는 비타민 B3의 일종으로 미백 및 피부장벽 개선의 효과가 있고, 색소침착의 원인이 되는 멜라닌이 피부 표면으로 이동하는 경로를 차단하여 흉터에 따른 색소침착이나 기미가 발생하는 것을 예방하는 효과가 있다.

아데노신은 아데닌과 d-리보오스가 결합한 뉴클레오티드로서 피부 침투력이 매우 뛰어나고 진피층의 세포들의 재생에 도움을 주어 주름을 개선하는데 효과가 있다.

본 발명의 또 다른 일 실시예로 화장품 조성물은 병풀추출물, 티트리추출물, 바쿠치올, EGF, 흰목이버섯추출물, 히알루론산(Hyaluronic Acid), 및 저분자콜라겐 분말을 포함하는 것일 수 있다.

히알루론산은 다당류의 일종으로 피부, 관절액, 연골, 눈물 등에 많이 분포되어 있으며 스스로의 무게의 300 내지 1000배에 해당하는 물을 함유할 수 있는 특성이 있어 피부의 수분과 결합하여 보습효과 및 피부장벽 강화의 효과가 있다.

저분자콜라겐은 500 달톤(Da) 내지 5000 달톤(Da) 이하의 분자량의 콜라겐을 말하며 일반 식품에 포함되어 있는 콜라겐에 비하여 그 분자의 크기가 작아 흡수율을 높여 콜라겐 형성 및 유지에 효과가 있다.

상기 화장품 조성물은 바람직하게는 병풀추출물이 111.25 내지 445 중량부, 티트리추출물이 25 내지 100 중량부, 바쿠치올 5 내지 20 중량부, EGF 2.5 내지 10 중량부, 흰목이버섯추출물이 20 내지 100 중량부, 히알루론산 75 내지 300 중량부, 저분자 콜라겐이 1.25 내지 5 중량부가 포함될 수 있다.

상기 화장품 조성물은 더 바람직하게는 병풀추출물이 222.5 중량부, 티트리추출물이 50 중량부, 흰목이버섯추출물이 50 중량부, 히알루론산 150 중량부, 바쿠치올 10 중량부, EGF 5 중량부, 저분자 콜라겐이 2.5 중량부가 포함될 수 있다.

본 발명의 다른 일 실시예로 화장품 조성물은 병풀추출물, 티트리추출물, 바쿠치올, EGF, 호호바오일, 올리브오일, 밀랍(BEES WAX), 나비콩꽃추출물, 히알루론산(Hyaluronic Acid), 아데노신, 나이아신아마이드, 만다린 추출물, 비타민 E 토코페롤, 및 티타늄옥사이드를 포함할 수 있다.

호호바오일은 피부 침투력이 좋으며 피지 조절 및 보습에 효과가 있고 항균 작용이 있어 염증은 완화하는 효과가 있다.

올리브오일은 올레산, 리놀레산과 비타민 A, D, E, K를 함유하고 있으며 항균과 항염작용으로 피부의 염증과 통증을 완화시키는 효능이 있다.

밀랍은 팔미트산 에스터와 세로트산을 포함하고 있으며 피부에 코팅막을 형성하어 피부가 수분을 뺏기지 않도록 보호하는 보습 효과가 있다.

나비콩꽃추출물은 안토시아닌을 풍부하게 함유하고 있으며 항산화 효과가 있다.

만다린추출물은 알칼리성 식품인 만다린에서 추출된 것으로 피부와 점막을 튼튼히 하며 비타민 P, 아스코르빈산, 카로티노이드, 리모노이드, 플라보노이드 및 구마린 등이 포함되어 있어 항균 작용을 한다.

비타민 E 토코페롤은 산화성 스트레스로부터 세포를 보호하고 면역기능을 조절하는 효과가 있어 강력한 항산화 효과가 있다.

티타늄옥사이드는 피부에 얇은 막을 만들어 빛을 산란시키는 성질을 가지고 있으며 자외선을 차단하는 효과가 있다.

상기 화장품 조성물은 바람직하게는 병풀추출물 3.73 내지 14.92 중량부, 티트리추출물 3.75 내지 15 중량부, 바쿠치올 0.5 내지 2 중량부, EGF 0.25 내지 1 중량부, 호호바오일 3.5 내지 14 중량부, 올리브오일 1.25 내지 5 중량부, 밀랍(BEES WAX) 1.75 내지 7 중량부, 나비콩꽃추출물 3.75 내지 15 중량부, 히알루론산(Hyaluronic Acid) 0.5 내지 2 중량부, 아데노신 0.01 내지 0.04 중량부, 나이아신아마이드 0.5 내지 2 중량부, 만다린 추출물 0.5 내지 2 중량부, 비타민 E 토코페롤 2.5 내지 10 중량부, 및 티타늄옥사이드 0.75 내지 3 중량부를 포함할 수 있다.

상기 화장품 조성물은 더 바람직하게는 병풀추출물 7.46 중량부, 티트리추출물 7.5 중량부, 바쿠치올 1 중량부, EGF 0.5 중량부, 호호바오일 7 중량부, 올리브오일 2.5 중량부, 밀랍(BEES WAX) 3.5 중량부, 나비콩꽃추출물 7.5 중량부, 히알루론산(Hyaluronic Acid) 1 중량부, 아데노신 0.02 중량부, 나이아신아마이드 1 중량부, 만다린 추출물 1 중량부, 비타민 E 토코페롤 5 중량부, 및 티타늄옥사이드 1.5 중량부를 포함할 수 있다.

상기 화장품 조성물은 제형에 따라 통상적으로 허용 가능한 담체를 더 포함할 수 있다. 예컨대, 페이스트, 크림 또는 젤로 제형화될 때 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있다.

상기 화장품 조성물이 파우더 또는 스프레이로 제형화될 때는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있으며, 스프레이의 경우 클로로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 더 포함할 수 있다.

상기 화장품 조성물이 용액 또는 유탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 용매, 용해화제, 또는 유탁화제가 사용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-브틸글리콜 오일이 사용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 사용될 수 있다.

상기 화장품 조성물이 현탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리 옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 사용될 수 있다.

상기 화장품 조성물이 비누로 제형화될 때, 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 사용될 수 있다.

상기 화장품 조성물은 최종 제품의 품질이나 기능에 따라 업계에서 통상적으로 사용되는 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉 쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 추가적으로 함유할 수 있다.

상기 화장품 조성물은 피부 개선을 위해 피부용 조성물에 통상적으로 사용되는 펩타이드를 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 에스에이치-올리고펩타이드-1, 에스에이치-올리고펩타이드-2, 에스에이치-폴리펩타이드-1, 에스에이치-폴리펩타이드-16 및 에스에이치-폴리펩타이드-3으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 더 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 일 실시예로 피부미용 개선 또는 피부재생방법은 석류즙, 레몬즙, 차전자피, 콜라겐 및 스테비아를 포함하는 식용 필름을 섭취하는 단계 및 병풀추출물, 티트리추출물, 바쿠치올 및 EGF(Epidermal Growth Factor, 표피증식인자)를 포함하는 피부용 화장품을 피부에 도포하는 단계로 실시될 수 있다.

이하에서는 실험예를 통해 본 발명의 식용필름, 화장품 조성물 및 신규 펩타이드의 효능에 대해 설명하나, 본 발명의 효과가 하기 실험예에 의해 제한되지 아니함은 자명하다.

실험예 1: 신규 펩타이드의 합성과 미백 효과 평가

제조예 1: 신규 펩타이드의 합성

종래에 알려진 Fmoc 고상 합성법(solid phase peptide synthesis, SPPS)을 통해 신규 펩타이드들을 합성하였다(참고문헌: Wang C. Chan, Perter D. White, 'Fmoc-solid phase peptide synthesis', Oxford).

구체적으로, C-말단부터 아미노산을 하나씩 커플링하여 신규 펩타이드들을 합성하였다. 이를 위해 펩타이드의 C-말단의 첫번째 아미노산이 수지에 부착된 것을 사용하였다.

펩타이드 합성에 사용한 모든 아미노산 원료는 N-term이 Fmoc으로 보호(protection)되고, 잔기는 모두 산에서 제거되는 Trt, Boc, t-Bu (t-butylester), Pbf (2,2,4,6,7-pentamethyl dihydro-benzofuran-5-sulfonyl) 등으로 보호된 것을 사용하였다.

커플링 시약(Coupling reagent)으로는 HBTU[2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetamethylaminium hexafluorophosphate] / HOBt(N-Hydroxxybenzotriazole) / NMM(4-Methylmorpholine)를 사용하였다. Fmoc 제거는 20%의 DMF 중 피페리딘(piperidine in DMF)을 이용하였다. 합성된 펩타이드의 아미노산 수지에서 분리 및 잔기의 보호기 제거에는 절단 칵테일(Cleavage Cocktail) [TFA(trifluoroacetic acid) / TIS(triisopropylsilane) / EDT(ethanedithiol) / H2O=92.5/2.5/2.5/2.5]를 사용하였다.

아미노산 보호기가 결합된 출발 아미노산이 고상 지지체에 결합되어 있는 상태에 각 펩타이드의 서열에 따라 해당되는 아미노산들을 순차적으로 반응시키고 용매로 세척한 후 탈보호하는 과정을 반복함으로써 각 펩타이드를 합성하였다.

합성된 펩타이드를 수지로부터 끊어낸 후, C18 역상 고성능액체크로마토그래피(HPLC, Waters Associates, USA)로 정제하고, 합성 성공여부를 LC/MS로 확인한 뒤 동결 건조하였다.

본 실시예에 사용된 펩티드에 대해 고성능 액체 크로마토그래피 결과, 모든 펩타이드의 순도는 95% 이상이었다.

상기 방법에 따라 합성된 펩타이드는 하기 표 3과 같았다.

구분	서열번호	아미노산 서열
실시예 1	1	GRKKRRSSQRSRRTQ
실시예 2	2	GRKKRRSRRQKRSHK
실시예 3	3	GRKKRRHRRKQQK
실시예 4	4	GRKKRRSRRHKKRS
실시예 5	5	GRKKRRQRRQKRSSTQ

실험예 1-1: 멜라닌 생성량 분석

멜라닌 생성량 분석(melanin contents assay)를 통해 상기 신규 펩타이드에 의한 멜라닌형성(melanogenesis) 저해능을 평가하였다(참고문헌: Eisinger M et al, 1982; Siegrist W and Eberle AN, 1986).

6-웰 배양용 평판(6-well plate)에 흑색종 세포주(B16F10) 세포를 접종한 후 24시간 동안 배양하였다. 멜라닌 형성을 촉진하는 α-MSH(Sigma-Aldrich, USA) 호르몬 및 상기 펩타이드들을 농도별로(10, 20, 50 mg/L) 배지에 주입하였다(참고문헌: Virador VM et al, 1999).

48시간 경과 후, 세포를 수확하여 PBS로 1회 세척하고, 1 N NaOH lysis buffer 120 μL를 넣고 95 ℃에서 10분간 가열하여 세포를 용해하였다. microplate reader를 이용하여 450 nm 파장에서 흡광도를 측정하였으며, 양성대조군으로는 100 mg/L 농도의 알부틴(arbutin)을 사용하였다.

하기 식 1에 따라 멜라닌 생성 억제율을 산출하였으며, 평과 결과는 하기 표 4과 같았다.

[식 1]

멜라닌 생성 억제율(%) = 100 x [1 - (각 시료의 흡광도 / 음성대조군의 흡광도)]

구분 농도(mg/L)	멜라닌 생성 억제율(%)
	10	20	50
양성대조군	28.5
실시예 1	29.4	38.5	44.7
실시예 2	29.9	38.7	42.9
실시예 3	27.2	35.4	41.3
실시예 4	29.7	39.5	43.7
실시예 5	25.1	33.9	40.7

상기 실험예를 통해, 상기 실시예의 신규 펩타이드들은 농도 의존적으로 멜라닌의 생성을 효과적으로 억제하였으며, 미백 효과가 널리 알려진 알부틴과 비교하여 멜라닌 생성을 동등 이상 수준으로 저해하였음을 알 수 있다.

실험예 1-2: 티로시나아제(tyrosinase) 저해 활성 실험

상기 신규 펩타이드의 미백 효과를 평가하기 위해 시험관 내에서 티로시나아제의 억제 활성을 측정하였다.

pH 6.5의 0.1 M 인산염완충액 220 μL, 상기 펩타이드의 농도별(10, 20, 50 mg/L) 시료용액 20 μL, 티로시나아제(1500 U/ml 내지 2000 U/ml) 20 μL를 순차적으로 투입하였다. 1.5 mM 티로신 용액 40 μL 를 넣고 37℃에서 약 15분 동안 반응시킨 후, ELISA reader를 이용하여 490 nm에서 흡광도를 측정하였다.

음성대조군으로는 상기 시료용액 대신 pH 6.5의 0.1 M 인산염완충액을 사용하였고, 양성대조군으로 50 uM 농도의 코직산(Kojic acid)을 사용하였으며, 하기 식 2에 따라 티로시나아제 저해 활성을 산출하였다. 평과 결과는 하기 표 5과 같았다.

[식 2]

티로시나아제 저해 활성(%) = 100 x [1 - (각 시료의 흡광도 / 음성대조군의 흡광도)]

구분 농도(mg/L)	티로시나아제 저해 활성(%)
	10	20	50
양성대조군	27.1
실시예 1	28.7	42.8	43.7
실시예 2	28.9	36.8	40.2
실시예 3	31.5	44.7	48.2
실시예 4	22.3	36.4	42.3
실시예 5	28.3	37.6	44.9

상기 실험예를 통해, 상기 실시예의 신규 펩타이드들은 농도 의존적으로 티로시나아제의 활성을 효과적으로 억제하였으며, 티로시나아제 억제능이 알려진 코직산과 비교하여 티로시나아제의 활성을 동등 이상 수준으로 저해하였음을 알 수 있다.상기 실험 결과를 통하여, 본 발명에 따른 신규 펩타이드들 및 이를 포함하는 조성물은 우수한 멜라닌 생성 억제 및 티로시나아제 억제 활성을 보이는 것을 알 수 있다. 이를 통해, 본 발명의 신규 펩타이드 및 이를 포함한 식용필름 및 화장품은 피부 미백의 근본적인 치료인 멜라닌 생성 억제 효과를 가져, 피부 미백용 효과가 있음을 알 수 있다.

실험예 2: 식용 필름의 제조 및 피부건강 개선 효과 평가

제조예 2: 피부건강 개선용 식용 필름의 제조

피부건강 개선용 식용 필름의 피부 재생 효과와 피부 미백 효과를 확인하기 위하여 표 6과 같은 구성성분과 조성성비에 따라 통상적인 방법으로 식용 필름을 제조하였으며 관능 시험을 실시하였다. 식용 필름에는 경우에 따라 색소가 선택적으로 함유될 수 있으나, 효능에는 영향이 미치지 않는 것을 실험을 통해 확인된 바 있다.

조성성분	제조예 2-1 중량비	제조예2-2 중량비	제조예 2-3 중량비	제조예 2-4 중량비
정제수	51.00	51.00	51.00	51.00
석류분말	0.00	1.00	1.00	1.00
레몬즙	0.00	2.00	2.00	2.00
차전자피 분말	2.00	2.00	2.00	2.00
콜라겐	2.00	0.00	2.00	2.00
스테비아	10.00	10.00	10.00	10.00
서열 1 펩타이드	0.00	0.00	0.00	1.00
서열 2 펩타이드	0.00	0.00	0.00	1.00
플루란	30.00	30.00	30.00	30.00
잔탄검	2.00	2.00	0.10	2.00

실험예 2-1: 주름개선 및 미백효과에 대한 관능 평가

30 세 내지 50세의 건강한 여성 및 남성 160명을 대상으로 하였으며 각각 40명씩 제조예 2-1, 제조예 2-2, 제조예 2-3 및 제조예 2-4 그룹으로 나누어 제조된 식용 필름을 1일 1회 120일 동안 섭취하도록 하였다.

주름개선 및 미백의 효과를 확인하기 위하여 숙련된 전문의 2인이 다중안면검사카메라시스템 Janus(아람휴비스, 한국)로 섭취 전 및 90일 간 섭취 후의 피실험자의 피부를 촬영하였다.

전문의 2인의 피실험자 섭취 전 및 90일 간 섭취 후의 피부 상태를 비교한 소견조사를 실시하였으며, 주름 개선 정도와 피부가 밝아진 정도를 나누어 답변하되 '효과가 없으며 육안으로 효과를 확인할 수 없음(1), 미비한 효과가 있으나 육안으로 쉽게 확인이 어려움(2), 보통의 효과가 있으며 육안으로 관찰됨(3), 우수한 효과가 있으며 육안으로 쉽게 관찰됨(4), 매우 우수한 효과가 있으며 육안으로 쉽게 관찰됨(5)'을 기준으로 답변하도록 하였다.

표 7은 주름개선 효과에 대한 전문의 소견이며 각 효과에 해당하는 피실험자의 수를 표시하였다.

구분	섭취대상	효과없음(1)	미비 (2)	보통 (3)	우수 (4)	매우우수 (5)
전문의 1	제조예 2-1	2	1	13	22	2
	제조예 2-2	16	20	4	0	0
	제조예 2-3	1	2	4	27	6
	제조예 2-4	2	2	3	28	5
전문의 2	제조예 2-1	1	1	8	26	4
	제조예 2-2	14	20	6	0	0
	제조예 2-3	3	2	6	25	4
	제조예 2-4	1	3	8	24	4

상기 실험결과에 따르면 같이 콜라겐이 포함되어 있지 않은 식용필름을 섭취한 제조예 2-2 그룹의 경우 주름 개선의 효과가 우수하거나 매우 우수한 피실험자가 없으며, 콜라겐을 포함하고 있으나 석류분말 및 레몬즙이 포함되어 있지 않은 식용필름을 섭취한 있는 제조예 2-1 그룹은 주름 개선의 효과가 우수 및 매우 우수한 피실험자의 수가 24명 또는 30명이고, 콜라겐과 석류분말 및 레몬즙을 모두 포함하는 식용필름을 섭취한 제조예 2-3 그룹과 펩타이드가 더 포함된 식용필름을 섭취한 제조예 2-4 그룹의 우수하거나 매우 우수한 피실험자는 28명 이상이다.

이와 같은 실험결과는 콜라겐을 섭취하는 경우 주름 개선에 효과가 있으며 이를 석류분말 및 레몬즙과 함께 섭취하는 경우 그 효과가 더욱 증진됨을 확인할 수 있다.

표 8은 미백효과에 대한 전문의의 소견이며 각 효과에 해당하는 피실험자의 수를 표시하였다.

구분	섭취대상	효과없음 (1)	미비 (2)	보통 (3)	우수 (4)	매우우수 (5)
전문의 1	제조예 2-1	14	22	4	0	0
	제조예 2-2	3	5	12	11	9
	제조예 2-3	2	2	9	17	10
	제조예 2-4	1	3	6	18	12
전문의 2	제조예 2-1	18	21	1	0	0
	제조예 2-2	3	7	14	9	7
	제조예 2-3	2	2	8	17	11
	제조예 2-4	1	2	5	18	14

상기 실험결과에 따르면 석류즙 및 레몬즙이 포함되어 있지 않은 식용필름을 섭취한 제조예 2-1 그룹의 경우 미백 효과가 우수하거나 매우 우수한 피실험자는 없으며, 석류분말 및 레몬즙이 포함되어 있으나 콜라겐이 포함되어 있지 않은 식용필름을 섭취한 제조예 2-2 그룹의 경우 미백 효과가 우수하거나 매우 우수한 피실험자는 20명 또는 16명이고, 석류분말 및 레몬즙과 콜라겐이 포함되어 있으나 서열 1 및 2의 펩타이드가 포함되어 있지 않은 식용필름을 섭취한 제조예 2-3 그룹의 경우 미백효과가 우수하거나 매우 우수한 피실험자는 27명 또는 28명이며, 석류분말, 레몬즙, 콜라겐 및 서열 1 및 2의 펩타이드가 포함되어 있는 식용필름을 섭취한 제조예 2-4 그룹의 경우 미백효과가 우수하거나 매우 우수한 피실험자는 30명 또는 32명이다.

이와 같은 실험결과는 석류분말 및 레몬즙은 피부 미백에 효과가 있으며 이를 콜라겐과 섭취할 경우 그 효과가 더욱 증진되고, 서열 1 및 2 펩타이드와 섭취할 경우에도 그 효과가 더욱 증진됨을 확인할 수 있다.

나아가 표 7 및 표 8의 실험결과에 비추어 볼 때 석류분말, 레몬즙, 콜라겐 및 서열 1 및 2의 펩타이드가 모두 포함되어 있을 때 주름개선 및 피부미백에 효과가 가장 증진됨이 확인된다.

실험예 3-1: 자유라디칼 소거 활성 평가

자유라디칼 소거 활성 실험을 통해 병풀추출물, 티트리추출물, 바쿠치올 및 EGF 혼합물의 항산화 효능을 확인하였다. 상기 실험은 Kim 등의 방법을 변형한 것으로, 안정한 자유라디칼인 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl) 시약을 사용하였다(참고문헌: Kor. J. Pharmacogn., 24(4), 299~303, 1993).

먼저, 적정량의 정제수 및 글리세린에 45%(w/w) 병풀추출물, 45%(w/w) 티트리추출물, 6%(w/w) 바쿠치올 및 3%(w/w)을 희석시켜 시료를 제조한 후, 0.2 mM DPPH 용액 1 mL에 시료를 메탄올에 50 mg/L 또는 100 mg/L로 희석하여 2 mL 혼합하고, 실온에서 10분간 반응시킨 후 microplate reader (Synergy, BioTek, USA)로 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로서 시료 용액 대신 메탄올을 넣어 같은 방법으로 측정하였으며, DPPH 용액 대신 메탄올을 넣어 각각에 대한 색 보정값을 얻었다.

하기 식 3에 따라 자유라디칼 소거율을 산출하였으며, 평가 결과는 하기 표 9와 같았다.

[식 3]

자유라디칼 소거율(%) = 100 x (각 시료의 흡광도 / 대조군의 흡광도)

구분 농도(mg/L)	자유라디칼 소거율(%)
	50	100	200
시료	17.8	36.8	67.5

상기 실험예를 통해, 상기 본 발명의 조성물은 농도 의존적으로 자유라디칼 소거 활성을 보였음을 알 수 있다.

실험예 3-2: Nitric oxide (NO) 소거 활성 평가

Nitric oxide (NO) 소거 활성 실험을 통해 병풀추출물, 티트리추출물, 바쿠치올 및 EGF 혼합물의 항산화 효능을 확인하였다

구체적으로, 자연적으로 NO를 생성하는 물질인 sodium nitroprusside를 사용하여 상기 실험예 3-1의 시료의 NO 소거활성을 측정하였다. 10 mM sodium nitroprusside 용액 0.2 mL에 농도별 시료를 첨가하여 상온에서 3시간 동안 반응시켰다. 반응 후 반응액과 동일한 양의 Griess 시약 [2% (w/v) sulfanilamide 용액 (in 4% (v/v) phosphoric acid) / 0.2% (w/v) naphthylethylenediamide 용액 (in 4% (v/v) phosphoric acid)]을 첨가하였다. 실온에서 10 분간 반응을 시킨 후 542 nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성대조군으로 BHT를 사용하였고, 음성대조군으로서 메탄올을 처리하였다.

하기 식 4에 따라 잔존하는 아질산염(nitrite)의 양으로 NO 소거활성을 산출하였으며, 평가 결과는 하기 표 10과 같았다.

[식 4]

NO 소거능(%) = 100 x [1 - (각 시료의 흡광도 / 음성대조군의 흡광도)]

구분 농도(mg/L)	NO 소거능(%)
	10	50	100
시료	43.5	59.7	62.7
양성대조군	45.2	54.5	59.1

상기 실험예를 통해, 상기 본 발명의 조성물은 농도 의존적으로 NO 소거 활성을 보였으며, 대조군인 BHT와 비교하여 동등 이상 수준의 활성을 가짐을 알 수 있다.상기 실험 결과를 통하여, 본 발명에 따른 병풀추출물, 티트리추출물, 바쿠치올 및 EGF를 포함하는 화장품 및 화장품 조성물은 우수한 자유라디칼 소거 활성 및 NO 소거 활성을 보이는 것을 알 수 있다.

이를 통해, 본 발명의 화장품 및 화장품 조성물은 항산화 효능을 가져, 피부 항산화용 조성물 및 이를 이용한 피부 항산화용 화장품 용도로 적용이 가능함을 알 수 있다.

실험예 4: 콜라겐 형성 평가

77%(w/w) 병풀추출물, 17%(w/w) 티트리추출물, 3%(w/w) 바쿠치올 및 1%(w/w)을 희석시켜 시료를 제조하였다.

상기 시료를 배지에 첨가하고 사람 피부 상피 섬유아세포를 배지에서 배양한 뒤 배양된 사람 피부 상피 섬유아세포에서 타입 I 프로콜라겐 C - 펩타이드의 양을 측정하였다.

사람 피부 상피 섬유아세포 3 ×10⁵개를 48 - well 플레이트에서 10% 혈청(FBS)과 0.21, 0.67 및 1.2 ㎍/㎖의 시료가 각각 첨가된 배지에서 배양하였다.

대조군은 시료가 첨가되지 않은 배지에서 사람 피부 상피 섬유아세포를 배양하였다.

배양 후 0시간, 1시간, 4시간, 12시간 및 24 시간 후에 실험군 마다 각각 6개의 well에서 상층 배지를 채취하여 타입 I 프로콜라겐 C - 펩타이드의 양을 프로콜라겐 Type Ⅰ C - peptide LISAkit(Takara Shuzo)를 이용하여 측정하였으며 그 측정치는 다음 표와 같다.

구분	0시간	1시간	4시간	12시간	24시간
0.21 ㎍/㎖	1.8 ng/ml	1.8 ng/ml	2.1 ng/ml	2.5 ng/ml	3.2 ng/ml
0.67 ㎍/㎖	2.1 ng/ml	2 ng/ml	2.7 ng/ml	4.1 ng/ml	7.2 ng/ml
1.2 ㎍/㎖	2 ng/ml	2.1 ng/ml	6.8 ng/ml	9.7 ng/ml	14 ng/ml
대조군	1.8 ng/ml	1.9 ng/ml	1.8 ng/ml	1.8 ng/ml	1.7 ng/ml

상기 표에서 살펴볼 수 있는 바와 같이 대조군에서는 타입 I 프로콜라겐 C - 펩타이드가 전혀 증가하지 않았으며, 0.21 ㎍/㎖, 0.67 ㎍/㎖ 및 1.2 ㎍/㎖의 시료가 각각 첨가된 배지에서는 타입 I 프로콜라겐 C - 펩타이드가 증가된 것이 확인된다. 24시간 배양 후의 타입 I 프로콜라겐 C - 펩타이드는 0.21 ㎍/㎖ 시료가 첨가된 배지의 경우 0시간인 경우보다 1.7배 증가하였으며, 0.67 ㎍/㎖ 시료가 첨가된 배지의 경우 0시간인 경우보다 3.4배 증가하였고, 시료가 첨가된 배지의 경우 0시간인 경우보다 7배 증가하였다.

상기 실험 결과를 통하여, 본 발명에 따른 병풀추출물, 티트리추출물, 바쿠치올 및 EGF를 포함하는 화장품 및 화장품 조성물은 우수한 콜라겐 형성 촉진 및 증진효과를 갖는 것을 알 수 있다.

이를 통해, 본 발명의 화장품 및 화장품 조성물은 콜라겐 형성에 효과가 있어 피부의 주름개선, 탄력증진 및 피부재생에 효과가 있음을 알 수 있다.

실험예 5: 피부건강 개선용 세트 제조 및 피부건강 개선 효과 평가

제조예 3: 피부건강 개선용 화장품의 제조

피부건강 개선용 식용 화장품의 피부 재생 효과와 피부 미백 효과를 확인하기 위하여 표 12와 같은 구성성분과 조성성비에 따라 통상적인 방법으로 화장수를 제조하였다.

조성성분	제조예 3-1 중량비	제조예 3-2 중량비
병풀 추출물	59.95	59.95
티트리추출물	35.00	35.00
바쿠치올	2.00	2.00
EGF	1	1
서열 4 펩타이드	0.00	1.00
서열 5 펩타이드	0.00	1.00
서열 6 펩타이드	0.00	1.00
핵산디올	2.00	2.00
라일락향	0.05	0.05

30 세 내지 50세의 건강한 여성 및 남성 300명을 대상으로 하였으며 표 13과 같이 50명씩 6개의 그룹으로 나누어 화장품의 경우 아침과 저녁에 하루 2회 도포하고 식용필름의 경우 하루 1회 섭취하도록 하였다.

구분	그룹 A-1	그룹 A-2	그룹 B-1	그룹 B-2	그룹 C-1	그룹 C-2
화장품	제조예3-1	제조예3-2	-	-	제조예3-1	제조예3-2
식용필름	-	-	제조예2-3	제조예2-4	제조예2-3	제조예2-4

주름개선 및 미백의 효과를 확인하기 위하여 숙련된 전문의 2인이 다중안면검사카메라시스템 Janus(아람휴비스, 한국)로 섭취 전 및 90일 간 섭취 후의 피실험자의 피부를 촬영하였다.전문의 2인의 피실험자 도포 및 섭취 전 및 90일 간 도포 및 섭취 후의 피부 상태를 비교한 소견조사를 실시하였으며, 주름 개선 정도와 피부가 밝아진 정도를 나누어 답변하되 '효과가 없으며 육안으로 효과를 확인할 수 없음(1), 미비한 효과가 있으나 육안으로 쉽게 확인이 어려움(2), 보통의 효과가 있으며 육안으로 관찰됨(3), 우수한 효과가 있으며 육안으로 쉽게 관찰됨(4), 매우 우수한 효과가 있으며 육안으로 쉽게 관찰됨(5)'을 기준으로 답변하도록 하였다.

표 14는 주름개선 효과에 대한 전문의의 소견이며 각 효과에 해당하는 피실험자의 수를 표시하였다.

구분	그룹	효과없음 (1)	미비 (2)	보통 (3)	우수 (4)	매우우수 (5)
전문의 1	A-1	3	9	14	20	4
	A-2	2	7	18	18	5
	B-1	3	11	17	14	5
	B-2	2	12	14	16	6
	C-1	1	2	14	19	14
	C-2	2	3	12	15	18
전문의 2	A-1	4	11	13	19	3
	A-2	3	9	14	16	8
	B-1	4	8	16	15	7
	B-2	4	9	16	14	7
	C-1	3	4	10	20	13
	C-2	1	2	15	12	20

그룹 A는 화장품만 도포한 그룹이며 그룹 B는 식용 필름만 섭취한 그룹이다. 그룹 A의 경우 주름개선 효과가 우수 및 매우 우수한 피실험자는 47명 또는 46명이고, 그룹 B 주름개선 효과가 우수 및 매우 우수한 피실험자는 41명 또는 43명인 것으로 화장품 및 식용 필름에 주름개선 효과가 있음을 알 수 있다. 나아가 그룹 C는 화장품과 식용필름을 모두 사용한 그룹으로써 주름 개선 효과가 우수 또는 매우 우수에 해당하는 피실험자의 수가 66명 또는 65명 인 것으로 그룹 A 및 그룹 B에 비하여 월등히 높은바, 화장품 및 식용필름을 병행하여 사용하는 경우 주름개선의 효과가 더욱 증진됨을 확인하였다.

표 15는 미백효과에 대한 전문의의 소견이며 각 효과에 해당하는 피실험자의 수를 표시하였다.

구분	그룹	효과없음	미비	보통	우수	매우우수
전문의 1	A-1	2	12	15	16	5
	A-2	1	8	17	15	9
	B-1	4	8	23	12	3
	B-2	1	4	25	14	6
	C-1	3	3	14	18	12
	C-2	0	2	12	12	24
전문의 2	A-1	2	13	14	17	4
	A-2	1	6	21	15	7
	B-1	4	10	20	14	2
	B-2	2	4	23	16	5
	C-1	2	2	15	17	14
	C-2	1	2	10	14	23

그룹 A의 경우 미백효과가 우수 및 매우 우수한 피실험자는 45명 또는 43명이며, 그룹 B 미백효과가 우수 및 매우 우수한 피실험자는 35명 또는 37명인 것으로 본 발명의 화장품 및 식용 필름에 피부 미백효과가 있음을 알 수 있다.

나아가 그룹 C는 화장품과 식용필름을 모두 사용한 그룹으로써 미백효과가 우수 또는 매우 우수에 해당하는 피실험자의 수가 66명 또는 68명 인 것으로 그룹 A 및 그룹 B에 비하여 월등히 높은바, 화장품 및 식용필름을 병행하여 사용하는 경우 피부미백의 효과가 더욱 증진됨을 확인하였다.

또한 각 그룹에 있어 2그룹은 펩타이드가 포함된 그룹으로써 1그룹에 비하여 미백효과가 매우 우수한 피실험자가 많다는 점에 따라 본원 발명의 서열 1 내지 5의 펩타이드에 미백효과가 있음이 확인된다.

이상에서 본 발명의 실시예를 중심으로 설명하였으나 이는 단지 예시일 뿐 본 발명을 한정하는 것이 아니며, 본 발명이 속하는 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 실시예의 본질적인 특성을 벗어나지 않는 범위에서 이상에 예시되지 않은 여러 가지의 변형과 응용이 가능함을 알 수 있을 것이다. 예를 들어, 본 발명의 실시예에 구체적으로 나타난 각 구성 요소는 변형하여 실시할 수 있다. 그리고 이러한 변형과 응용에 관계된 차이점들은 첨부된 청구 범위에서 규정하는 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다.

<110> BELLESON lnc. <120> COSMETIC CONTAINER WITH A NUTRICOSMETIC INNER FILM PROVIDING PART <130> DP22-0219P1 <160> 5 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PE-08 <400> 1 Gly Arg Lys Lys Arg Arg Ser Ser Gln Arg Ser Arg Arg Thr Gln 1 5 10 15 <210> 2 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PE-13 <400> 2 Gly Arg Lys Lys Arg Arg Ser Arg Arg Gln Lys Arg Ser His Lys 1 5 10 15 <210> 3 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PE-07 <400> 3 Gly Arg Lys Lys Arg Arg His Arg Arg Lys Gln Gln Lys 1 5 10 <210> 4 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PE-11 <400> 4 Gly Arg Lys Lys Arg Arg Ser Arg Arg His Lys Lys Arg Ser 1 5 10 <210> 5 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PE-17 <400> 5 Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Gln Lys Arg Ser Ser Thr Gln 1 5 10 15

Claims (3)

1. 식용 필름에 있어서,
   석류분말, 레몬즙, 차전자피 분말 및 콜라겐 분말을 포함하고,
   상기 식용 필름은 서열 1 및 2의 펩타이드로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩타이드를 더 포함하는 식용 필름.
2. 상기 청구항 1에 있어서,
   상기 식용 필름은,
   플루란, 잔탄검, 스테비아 분말을 더 포함하고,
   상기 석류분말은 1.00 중량비, 상기 레몬즙은 2.00 중량비, 상기 플루란은 30.00 중량비, 상기 잔탄검은 2.00 중량비, 상기 스테비아 분말은 10.00 중량비, 상기 차전자피 분말은 2.00 중량비 및 상기 콜라겐 분말은 2.00 중량비로 혼합되는, 식용 필름.
3. 삭제

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