KR101573745B1 - 콜라겐 합성 촉진 펩타이드, 이의 제조방법, 및, 이를 함유하는 조성물 - Google Patents

콜라겐 합성 촉진 펩타이드, 이의 제조방법, 및, 이를 함유하는 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 콜라겐 합성능력이 우수한 콜라겐 합성 촉진 펩타이드, 이의 제조방법 및 이를 활용한 주름개선용 조성물에 관한 것으로서, 본 발명의 펩타이드는 우수한 콜라겐 합성촉진 기능을 보여, 피부노화 경감, 주름개선용 조성물로 용이하게 사용가능하다. 특히 다이머 형태로 제조된 본 발명의 펩타이드는 기존의 펩타이드 조성물에 비해, 사용상의 안전성 및 안정성이 높다.

Description

콜라겐 합성 촉진 펩타이드, 이의 제조방법, 및, 이를 함유하는 조성물 {Peptides for promoting synthesis of collagen, method for preparing thereof, and, composition comprising thereof}
본 발명은 콜라겐 합성능력이 우수한 콜라겐 합성 촉진 펩타이드, 이의 제조방법 및 이를 활용한 주름개선용 조성물에 관한 것이다.
피부는 표피, 진피, 피하조직으로 구성되어 있는 인체를 이루는 가장 큰 기관으로 보호기능, 장벽기능, 온도조절기능, 배설기능, 호흡기능 등 다양한 역할을 담당하고 있는 중요한 기관이다. 그러나 다양한 외부환경에 의하여 표피, 진피 및 피하조직의 두께가 얇아지고, 피부장벽의 기능을 맡고 있는 지질층(lipid barrier)의 조성과 함량이 변화되면서 그 기능은 급격하게 저하되어 노화가 발생하게 된다. 분자생물학적으로 피부노화는 피부 진피에서 매트릭스를 형성하는 콜라겐의 감소가 주원인으로 알려져 있다. 콜라겐은 피부 진피의 70~80%를 차지하는 물질로서, 피부의 탄력성 유지에 관여하는 대표적인 물질이다. 대한화장품학회지 제38권 제4호 통권87호의 연구결과에 따르면, 콜라겐 펩타이드가 피부회복, 피부재생 효과 있음이 알려져 있다. 콜라겐은 나이가 들면서 그 생성이 저하되거나, 자외선과 같은 외부환경에 의해서 분해가 촉진되어 피부 주름이 증가되며, 피부 노화가 촉진된다.
이러한 피부노화, 주름개선 등의 문제를 해결하기 위하여 콜라겐의 변화에 대한 다양한 연구가 진행되고 있다. 콜라겐의 생산을 촉진시키는 저분자 화합물은 현재 피부주름 및 기미, 색소침착 개선을 위해 널리 사용되고 있는 레티노이드류, 그중에서도 레티놀(비타민 A)에 대한 피부 주름제거 임상 결과들이 다양하게 보고되고 있다. 레티놀을 함유한 화장료는 일광에 의해 형성된 피부주름살이나 피부처짐, 탄력감소 등을 효과적으로 개선한 사례가 보고된 바 있다(미국등록특허 제4,603,146호, 제4,877,805호 참조). 또한, 콜라겐 합성 과정에 필수적인 L-아스코르빈산(비타민 C)를 함유하는 화장료 조성물이 피부주름개선, 자외선차단, 기미/주근깨/검버섯 등의 색소침착 등에 효과적이다는 보고가 있다(미국등록특허 제4,938,969호, 미국등록특허 제4,772,591호 및 유럽등록특허 제533,667호 참조). 이에, 최근에는 상기에 기술된 유효성분을 안정화하는 연구가 진행되고 있다.
이 외의 주름개선용 조성물로서, 미국등록특허 제4,720,353호에는 항산화제로 BHA(butylated hydroxy anisole), 비타민 C, 프로필 갈레이트 및 토콜페롤 리놀리에이트(linoleate)를 사용하여 안정화할 수 있음이 개시되어 있으며, 유럽특허 제440,398호에서는 한 종류 이상의 수용성 항산화제와 한 종료 이상의 유용성 항산화제, 킬레이트를 함유한 유중수(W/O)형의 유화 조성물로 레티놀을 안정화시킬 수 있음이 개시되어 있는데, 이와 같은 레티놀을 안정화시키기 위한 다양한 리포좀 및 캡슐 제제가 연구되어 화장료로 사용되고 있다. 한편, 레티놀 외에는 TGF-β(Transforming growth factor), 베툴린산, 야생 참마 추출물(한국공개특허 제2009-0055079호), 대두 단백질에서 유래하는 콜라겐 펩타이드(일본등록특허 제4030067호) 등이 주름개선용 조성물로서 알려져 있다. 그러나, 상기에 기술된 피부개선 유효성분들은 빛, 수분, 공기, 열 등에 쉽게 산화되는 불안정한 성질이 있어 화장료의 원료로 사용하기에는 문제점을 포함한다. 특히 레티놀은 건성피부에 사용할 경우 피부의 각질을 벗겨내 피부자극이 심해 피부가 빨갛게 변하거나 더욱 건성이 될 가능성이 있다. 또한, 재조합 단백질 원료의 경우 고가의 비용이 소요되며, 천연 추출물의 경우 재현성이 떨어지는 단점이 있다.
이에 본 발명자들은 기능성 펩타이드를 함유한 본 발명의 조성물이 콜라겐 합성 효과가 있어 주름개선기능이 우수함을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
한편, 한국등록특허 제1135444호, 한국등록특허 제1107312호, 한국등록특허 제753472호 등에 각종 기능성 펩타이드를 함유하는 주름개선용 화장료 조성물이 개시되어 있으나, 이들의 펩타이드는 본 발명의 조성물에 함유된 펩타이드와 전혀 다른 물질로서, 상기 선행기술들은 본 발명과는 다른 기술구성을 갖는다고 할 수 있다.
미국등록특허 제4,603,146호 (Methods for retarding the effects of aging of the skin, 1986.07.29. 등록) 미국등록특허 제4,720,353호 (Stable pharmaceutical w/o emulsion composition, 1988.01.19. 등록) 미국등록특허 제4,772,591호 (Method for accelerated wound healing, 1988.09.20. 등록) 미국등록특허 제4,877,805호 (Methods for treatment of sundamaged human skin with retinoids. 1989.10.31. 등록) 미국등록특허 제4,938,969호(Method for the treatment of aging or photo-damaged skin, 1990.07.03. 등록) 유럽등록특허 제533,667호 (METHOD FOR THE TREATMENT OF AGING OR PHOTO-DAMAGED SKIN, 1995.06.28. 등록) 한국공개특허 제2009-0055079호 (야생 참마 추출물을 함유하는 피부노화 방지용 화장료조성물, 2009.06.02. 공개) 일본등록특허 제4030067호 (신규 펩티드, 2007.10.26. 등록) 한국등록특허 제1135444호 (팔미토일올리고펩타이드와 두충 추출물을 함유하는 주름 개선용 화장료 조성물, 2012.04.04. 등록) 한국등록특허 제1107312호 (펩타이드를 포함하는 피부 개선 및 보호용 화장료 조성물, 2012.01.11. 등록) 한국등록특허 제753472호 (사람 콜라겐 Ⅰ형의 Ｃ-말단에서 유래된 펩타이드에ＴＡＴ 펩타이드가 결합된 융합 펩타이드, 이의 제조방법, 및 이를 포함하는 피부주름개선 화장료 조성물, 2007.08.23. 등록)
E. Kaiser et al. Color test for detection of free terminal amino groups in the solid-phase synthesis of peptides., Anal. Biochem., 1970, 34(2), 595~598. 김인수 et al., Fractional Photothermolysis 치료 후 피부회복 촉진에 미치는 경구용 저분자 콜라겐 펩타이드의 효과, 대한화장품학회지 제38권 제4호 통권87호(2012. 12), 321-326.
본 발명의 목적은 콜라겐 합성능력이 우수한 콜라겐 합성 촉진 펩타이드, 이의 제조방법 및 이를 활용한 주름개선용 조성물을 제공하는 데에 있다.
본 발명은 하기 화학식 1 내지 화학식 4로 표현되는 콜라겐 합성 촉진용 펩타이드에 관한 것이다.
[화학식 1]
[Lys-Thr-X-Lys-Ser-Cys]
[화학식 2]
[Cys-Lys-Thr-X-Lys-Ser]
[화학식 3]
[Lys-Thr-X-Lys-Ser-Cys]2
[화학식 4]
[Cys-Lys-Thr-X-Lys-Ser]2
상기 화학식 1 내지 4에서, X는 글루탐산(Glu), 아스파트산(Asp), 히스티딘(His), 페닐알라닌(Phe), 알라닌(Ala), 시스테인(Cys), 글라이신(Gly), 글루타민(Gln), 아스파라긴(Asn), 아르기닌(Arg), 루이신(Leu), 메티오닌(Met), 이소루이신(Ile), 세린(Ser), 타이로신(Tyr), 트레오닌(Thr), 라이신(Lys), 트립토판(Trp), 프롤린(Pro) 및 발린(Val)에서 선택되며,
[ ]2는 시스테인 잔기인 티올기(-SH)를 환원체 형태(-S-S-)로 변형한 이중체(dimer)를 나타냄. 이에, 화학식 1 및 2의 펩타이드는 서열번호 1 내지 40으로 이루어진 군에서 선택되는 펩타이드를 나타내며, 화학식 3 및 4의 펩타이드는 서열번호 1 내지 40으로 이루어진 군에서 선택되는 펩타이드의 시스테인 잔기인 티올기(-SH)를 환원체 형태(-S-S-)로 변형한 이중체(dimer)를 나타냄.
바람직하게는, 상기 화학식 1 내지 4의 펩타이드는,
[Lys-Thr-Lys-Lys-Ser-Cys] (화합물 1),
[Lys-Thr-Glu-Lys-Ser-Cys] (화합물 2),
[Lys-Thr-Phe-Lys-Ser-Cys] (화합물 3),
[Lys-Thr-Thr-Lys-Ser-Cys] (화합물 4),
[Lys-Thr-Ala-Lys-Ser-Cys] (화합물 5),
[Cys-Lys-Thr-Lys-Lys-Ser] (화합물 6),
[Cys-Lys-Thr-Glu-Lys-Ser] (화합물 7),
[Cys-Lys-Thr-Phe-Lys-Ser] (화합물 8),
[Cys-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser] (화합물 9),
[Cys-Lys-Thr-Ala-Lys-Ser] (화합물 10),
[Lys-Thr-Lys-Lys-Ser-Cys]2 (화합물 11),
[Lys-Thr-Glu-Lys-Ser-Cys]2 (화합물 12),
[Lys-Thr-Phe-Lys-Ser-Cys]2 (화합물 13),
[Lys-Thr-Thr-Lys-Ser-Cys]2 (화합물 14),
[Lys-Thr-Ala-Lys-Ser-Cys]2 (화합물 15),
[Cys-Lys-Thr-Lys-Lys-Ser]2 (화합물 16),
[Cys-Lys-Thr-Glu-Lys-Ser]2 (화합물 17),
[Cys-Lys-Thr-Phe-Lys-Ser]2 (화합물 18),
[Cys-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser]2 (화합물 19), 및,
[Cys-Lys-Thr-Ala-Lys-Ser]2 (화합물 20)
에서 선택되며, 상기 펩타이드에서 [ ]2는 시스테인 잔기인 티올기(-SH)를 환원체 형태(-S-S-)로 변형한 이중체(dimer)를 나타낸다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1 내지 4의 펩타이드, 또는, 상기 화합물 1 내지 20의 펩타이드에서 1종 이상 선택되는 펩타이드를 함유하는 주름개선용 조성물을 제공한다.
이에, 본 발명은 상기 화학식 1 내지 4의 펩타이드, 또는, 상기 화합물 1 내지 20의 펩타이드에서 1종 이상 선택되는 펩타이드를 함유하는 주름개선용 약학적 조성물을 제공할 수 있다. 상기 펩타이드는 약학적 조성물에 0.0001~1.0 중량%로 포함될 수 있다.
또 다른 형태로서, 본 발명은 상기 화학식 1 내지 4의 펩타이드, 또는 상기 화합물 1 내지 20의 펩타이드에서 1종 이상 선택되는 펩타이드를 함유하는 주름개선용 화장료 조성물을 제공한다. 상기 펩타이드는 화장료 조성물에 0.0001~1.0 중량%로 포함될 수 있다. 상기 화장료는 화장수, 유액, 젤, 크림, 에센스, 팩, 앰플, 로션, 세정료, 비누, 바디제품류, 비누, 오일, 립스틱 및 파운데이션에서 선택되는 것일 수 있다.
이하 본 발명을 자세하게 설명한다. 본 발명의 서열번호 1 내지 40 펩타이드의 아미노산 서열은 하기와 같다. 서열번호 1 : Lys-Thr-Glu-Lys-Ser-Cys ; 서열번호 2 : Lys-Thr-Asp-Lys-Ser-Cys ; 서열번호 3 : Lys-Thr-His-Lys-Ser-Cys ; 서열번호 4 : Lys-Thr-Phe-Lys-Ser-Cys ; 서열번호 5 : Lys-Thr-Ala-Lys-Ser-Cys ; 서열번호 6 : Lys-Thr-Cys-Lys-Ser-Cys ; 서열번호 7 : Lys-Thr-Gly-Lys-Ser-Cys ; 서열번호 8 : Lys-Thr-Gln-Lys-Ser-Cys ; 서열번호 9 : Lys-Thr-Asn-Lys-Ser-Cys ; 서열번호 10 : Lys-Thr-Arg-Lys-Ser-Cys ; 서열번호 11 : Lys-Thr-Leu-Lys-Ser-Cys ; 서열번호 12 : Lys-Thr-Met-Lys-Ser-Cys ; 서열번호 13 : Lys-Thr-Ile-Lys-Ser-Cys ; 서열번호 14 : Lys-Thr-Ser-Lys-Ser-Cys ; 서열번호 15 : Lys-Thr-Tyr-Lys-Ser-Cys ; 서열번호 16 : Lys-Thr-Thr-Lys-Ser-Cys ; 서열번호 17 : Lys-Thr-Lys-Lys-Ser-Cys ; 서열번호 18 : Lys-Thr-Trp-Lys-Ser-Cys ; 서열번호 19 : Lys-Thr-Pro-Lys-Ser-Cys ; 서열번호 20 : Lys-Thr-Val-Lys-Ser-Cys ; 서열번호 21 : Cys-Lys-Thr-Glu-Lys-Ser ; 서열번호 22 : Cys-Lys-Thr-Asp-Lys-Ser ; 서열번호 23 : Cys-Lys-Thr-His-Lys-Ser ; 서열번호 24 : Cys-Lys-Thr-Phe-Lys-Ser ; 서열번호 25 : Cys-Lys-Thr-Ala-Lys-Ser ; 서열번호 26 : Cys-Lys-Thr-Cys-Lys-Ser ; 서열번호 27 : Cys-Lys-Thr-Gly-Lys-Ser ; 서열번호 28 : Cys-Lys-Thr-Gln-Lys-Ser ; 서열번호 29 : Cys-Lys-Thr-Asn-Lys-Ser ; 서열번호 30 : Cys-Lys-Thr-Arg-Lys-Ser ; 서열번호 31 : Cys-Lys-Thr-Leu-Lys-Ser ; 서열번호 32 : Cys-Lys-Thr-Met-Lys-Ser ; 서열번호 33 : Cys-Lys-Thr-Ile-Lys-Ser ; 서열번호 34 : Cys-Lys-Thr-Ser-Lys-Ser ; 서열번호 35 : Cys-Lys-Thr-Tyr-Lys-Ser ; 서열번호 36 : Cys-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser ; 서열번호 37 : Cys-Lys-Thr-Lys-Lys-Ser ; 서열번호 38 : Cys-Lys-Thr-Trp-Lys-Ser ; 서열번호 39 : Cys-Lys-Thr-Pro-Lys-Ser ; 서열번호 40 : Cys-Lys-Thr-Val-Lys-Ser
본 발명의 펩타이드 중, 화합물 11 내지 20의 펩타이드는 각각 화합물 1 내지 10의 펩타이드의 시스테인(펩타이드의 말단에 위치한 시스테인) 잔기인 티올기(-SH)를 환원체 형태(-S-S-)로 변형한 이중체(dimer)이다. 예를 들어, 화합물 1의 시스테인 잔기인 티올기를 환원체 형태로 변형한 이중체가 화합물 11이며, 화합물 2의 시스테인 잔기인 티올기를 환원체 형태로 변형한 이중체가 화합물 12이다. 이와 같은 방법으로 화합물 3 내지 화합물 10으로 각각 화합물 13 내지 화합물 20의 이중체를 제조할 수 있다.
본 발명의 펩타이드는 고체상에 일정하게 결합된 아미노산 골격에 하나 이상의 아미노산 또는 적합하게 보호된 아미노산을 연속적으로 아미드 결합을 형성하는 식으로 제조할 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다. 또한, 상기 펩타이드는 안정성을 크게 저하시키지 않는 범위에서 다른 아미노산의 삽입, 치환, 삭제가 가능하며, 이 또한 본 발명의 범주에 속한다.
또한, 본 발명의 펩타이드의 세포내 이동을 촉진하는 세포 투과성 펩타이드(cell permeable peptide)를 펩타이드 C-말단 또는 N-말단에 결합하여 더 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 세포 투과성 펩타이드에는 TAT 펩타이드(Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Tyr-Arg-Arg-Arg) 및 Tat-PTD 펩타이드(Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg: Tat PTD)일 수 있으나, 본 발명이 이에 국한되는 것은 아니며, 당업계에 공지된 세포 투과성 펩타이드가 본 발명에 따른 펩타이드의 활성을 저해하지 않는 범위 내의 것이라면 어느 것이라도 사용가능하다.
한편, 본 발명의 펩타이드는 염의 형태로 존재할 수도 있다. 본 발명에 사용 가능한 염의 형태는 화합물의 최종 분리 및 정제 동안 또는 아미노기를 적절한 산과 반응시키는 것에 의해 만들어지는 것일 수 있다. 예를 들면, 산 부가염으로 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 시트레이트, 아스파테이트, 벤조에이트, 벤젠설포네이트, 바이설페이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포설포네이트, 디글루코네이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 포르메이트, 푸마레이트, 하이드로 클로라이드, 하이드로브로마이드, 하이드로요오다이드, 2-하이드록시에탄설포네이트, 락테이트, 말레에이트, 메시틸렌설포네이트, 메탄설포네이트, 나프틸렌설포네이트, 니코티네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 옥살레이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로피오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 숙시네이트, 타르트레이트, 트리클로로아테이트, 트리플루오로아세테이트, 포스페이트, 글루타메이트, 바이카보네이트, 파라-톨루엔설포네이트 및 운데카노에이트일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 산 부가염을 형성하기 위해 사용될 수 있는 산의 예로는 염산, 브롬화수소산, 황산 및 인산과 같은 무기산 및 옥살산, 말레산, 숙신산 및 시트르산과 같은 유기산일 수 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다. 이 때, 트리플로로아세테이트 염 또는 아세테이트 염을 함유한 펩타이드 형태가 가장 바람직하다.
본 발명의 펩타이드 제조를 위해 이용되는 아미노산의 아미노기 또는 카복실기는 적합한 보호기에 의해 보호될 수 있다. 보호된 아미노산은 고체 지지체에 부착되거나 아미드 결합을 형성하기에 적합한 조건하에서 다음의 아미노산을 첨가함으로써 용액 중에서 반응이 이루어질 수 있다. 또한, 보호기는 적합한 보호기로 보호된 아미노산을 첨가하기 이전에 완전히 제거될 수 있다. 모든 아미노산이 목적하는 바에 따라 연결된 후, 유리된 잔류 보호기 및 유리된 고형 지지체로부터 연속적으로 또는 동시에 분리하여 최종 목적하는 펩타이드를 얻을 수 있다.
본 발명에서는 키랄 센터가 라세미화되지 않는 조건하에서 적합하게 보호된 테트라펩타이드를 적절하게 보호된 또 다른 디펩타이드와 축합시켜 아미드결합을 형성시킨 후 탈보호하여 목적하는 헥사펩타이드를 합성하여 얻는 절편 축합반응 기술을 이용하여 펩타이드를 제조할 수 있다.
본 발명의 펩타이드 화합물을 제조하기 위한 가장 바람직한 합성 방법으로는 고체상 폴리머 지체를 이용하여 합성하는 고체상 펩타이드 합성방법을 이용할 수 있으며, 상기 방법을 통해 제조된 펩타이드의 α-아미노기는 산 또는 염기 민감성 작용기에 의해 보호될 수 있다. 이 때의 아미노산의 보호기는 펩타이드 축합반응 조건에서 안정한 성질을 가져야만 하고, 연장되는 펩타이드 사슬의 파괴 없이 또는 거기에 함유된 임의의 키랄 센터의 라세미체화 없이 용이하게 제거 가능한 성질을 가져야만 한다. 따라서, 적합한 보호기들로는 9-플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc), t-부톡시카보닐(Boc), 벤질옥시카보닐(Cbz), 비페닐이소프로필-옥시카보닐, t-아밀옥시카보닐, 이소보르닐옥시카보닐, (α,α)-디메틸-3,5-디메톡시벤질옥시카보닐, O-니트로페닐설페닐, 2-시아노-t-부틸옥시카보닐 등일 수 있으며, 이러한 목적으로 당업계에 알려진 적합한 다른 보호기들 또한 본 발명의 범위 내에서 사용가능하다.
본 발명의 펩타이드 합성에서 사용된 아미노산의 가장 바람직한 보호기로는 9-플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc) 보호기가 사용할 수 있다.
특히, 본 발명의 펩타이드 합성에서 사용되는 아미노산 잔기의 보호기로는 N-메틸글루타민산의 경우, t-부틸(t-Bu)이고; 라이신의 경우, t-부톡시카보닐(Boc)이고; 세린의 경우, 7t-부틸(t-Bu)이고; 트레오닌 및 알로트레오닌의 경우, t-부틸(t-Bu)이고; 시스테인의 경우, 트리틸(Trt)인 것이 바람직하지만, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
고체상 펩타이드 합성 방법에서, C-말단 아미노산은 적합한 고형 지지체 또는 수지에 부착될 수 있다. 상기 합성을 위해 유용한 적합한 고형 지지체로는 단계적 축합-탈보호 반응의 시약 및 반응 조건에 불활성이고 사용되는 매질에 불용성인 물질이 바람직하며, 예를 들면, 링크 아미드(rink amid) 또는 링크 아미드 4-메틸벤질히드릴아민 수지(rink amid MBHA resin)일 수 있다.
특히, C-말단 아미드 펩타이드에 대해 바람직한 고형 지지체는 Novabiochem Corporation으로부터 시판되는 링크 아미드 4-메틸벤질히드릴아민 수지일 수 있다.
C-말단 아미드(amide)는 디클로로메탄, N-메틸피리돈(NMP) 또는 DMF와 같은 용매 중에서 10℃ 내지 50℃의 온도에서, 바람직하게는 30℃의 온도조건에서, 1 내지 24시간 동안 4-디메틸아미노피리딘(DMAP), 1-하이드록시벤조트리아졸(HOBt), N-메틸모르폴린(NMM), 벤조트리아졸-1-일옥시-트리스(디메틸아미노)포스포늄-헥사플루오로포스페이트(BOP) 또는 비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스핀클로라이드(BOPCI)의 존재 또는 부재하에서 N,N'-디사이클로헥실카보디이미드(DCC), N,N'-디이소프로필카보디이미(DIC), [O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄헥사플루로포스페이트](HATU) 또는 O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄헥사플루오로포스페이트(HBTU)에 카르복실산을 활성화시켜 축합을 통해 수지 또는 고체상 지지체에 축합(결합, 커플링)될 수 있다.
고형 지지체가 링크 아미드 4-메틸벤질히드릴아민 수지인 경우, 바람직한 보호기로서 Fmoc 작용기는 C-말단 아미노산으로 축합하기 전에 2급 아민 용액, 바람직하게는 20%의 피페리딘 DMF 용액을 과량 사용하여 절단한다. 상기 탈보호된 4-(2',4'-디메톡시페닐-Fmoc-아미노메틸)페녹시아세트아미도에틸 수지에 목적하는 아미노산을 축합시키는데 사용되는 바람직한 시약들로는 적합하게 보호된 아미노산에 대하여 DMF 용매 중에서 N-메틸모르폴린(NMM), 1-하이드록시벤조트리아졸(HOBt) 및 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄헥사플루오로포스페이트](HATU), O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄헥사플루오로포스페이트(HBTU), N,N'-디사이클로헥실카보디이미드(DCC) 또는 N,N'-디이소프로필카보디이미드(DIC)와 같은 축합 반응 시약들이다.
본 발명에서 수행되는 연속적인 아미노산의 축합은 관련 기술 분야에서 널리 알려져 있는 자동 펩타이드 합성기를 이용하거나 또는 수동으로 직접 수행할 수 있다. 바람직한 합성 반응의 조건으로는 Fmoc 그룹으로 보호된 α-아미노산을 2급 아민 용액, 바람직하게 피페리딘으로 처리하여 탈보호시킨 후, 충분히 과량의 용매로 세척하고 축합을 원하는 또 다른 각각의 보호된 아미노산을 이어서 3~7배 몰 과량 첨가하여, 바람직하게는 DMF 용매 중에서 반응을 수행할 수 있다.
본 발명의 고체상 수지를 이용한 펩타이드의 합성 마지막 단계에서는 펩타이드를 연속적으로 또는 1회 조작으로 수지로부터 얻고자 하는 펩타이드를 제거하고 각각 아미노산의 잔기를 보호하고 있는 보호 그룹들을 탈보호시킬 수 있다. 수지로부터 펩타이드의 제거 및 잔기에 존재하는 보호기들의 탈보호 조건으로는 일반적으로 수지-펩타이드 간의 결합을 절단하는 절단 시약 칵테일, 예를 들어, 트리플루오로아세트산(TFA), 트리이소프로필실란(TIS), 티오아니졸, 물 또는 에탄디티올(EDT)등으로 구성된 디클로로메탄 혼합 칵테일 용액을 처리하여 얻을 수 있다. 이렇게 얻어진 혼합 용액은 냉장 보관된 디에틸에테르 용매를 과량 처리하므로써 침전물을 생성시킬 수 있다. 이상과 같이 얻어진 침전물을 원심분리시켜 완전히 침전시키고 과량의 트리플루오로아세트산, 트리이소프로필실란, 티오아니졸, 물 및 에탄디티올 등을 일차 제거하고 이상의 절차를 2회 이상 반복하여 고형화시킨 침전물을 얻을 수 있다. 이 때, 완전히 탈보호된 펩타이드 염은 물과 아세트나이트릴 용매로 구성된 혼합 용매 및 역상 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 이용하여 분리 정제할 수 있다. 분리 정제된 펩타이드 용액은 동결건조를 이용하여 완전히 농축건조함으로써 고형의 펩타이드를 얻을 수 있다.
본 발명의 펩타이드들은 콜라겐 합성 효과가 있다.
본 발명의 바람직한 구현 예에 따르면, 본 발명의 조성물은 주름개선용 약학적 조성물 또는 화장료 조성물로 제공될 수 있다.
본 발명의 조성물이 약학적 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 상기 약학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 정제수, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘, 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등과 같이 통상적으로 이용되는 첨가제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 바람직하게는 비경구 투여가 좋으며, 보다 바람직하게는, 도포에 의한 국소 투여 방식으로 적용된다.
본 발명의 약학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물에 포함된 유효성분인 펩타이드의 투여량은 성인 기준으로 0.001~100㎎/kg, 바람직하게는 0.1~100㎎/kg, 보다 바람직하게는 1~50㎎/kg이며, 상기 투여량을 하루에 한번 또는 수회 나누어 투여할 수도 있다. 또한, 본 발명의 펩타이드는 상기 약학적 조성물 총중량에 대하여 바람직하게는 0.0001~1.0 중량%, 더 바람직하게는 0.001~1.0 중량%, 가장 바람직하게는 0.001~0.01% 중량%가 함유될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물은 그 유효성분인 펩타이드 뿐만 아니라, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다. 또한, 또한, 상기 담체로서, 정제수, 일가 알코올류(에탄올 또는 프로필 알코올), 다가알코올류(글리세롤, 1,3-부티렌글리콜 또는 프로필렌글리콜), 고급지방산류(팔미틸산 또는 리놀렌산), 유지류(소맥 배아유, 동백기름, 호호바유, 올리브유, 스쿠알렌, 해바라기유, 마카데미아땅콩유, 아보가드유, 또는 지방산 글리세라이드) 등을 사용할 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다. 또한, 필요에 따라, 계면활성제, 보습제, 방부제, 산화방지제 등을 첨가할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 사용될 수 있는 계면활성제로는, 음이온계 계면활성제로서, 알킬벤젠설폰산염, 폴리옥시알킬렌알킬황산 에스테르염, 알킬황산 에스테르염, 올레핀설폰산염, 알킬인산염, 폴리옥시알킬렌알킬에테르인산염, 디알킬설포석신산염, 지방산염 등을 들 수 있고, 비이온성 계면활성제로서, 폴리옥시에틸렌알킬에테르, 폴리옥시에틸렌지방산 에스테르, 다가 알콜지방산 부분 에스테르, 폴리옥시에틸렌 다가 알콜지방산 부분 에스테르, 폴리글리세린지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 유도체, 지방산디에탄올아미드 등을 들 수 있다. 또한, 양이온성 계면활성제로서는, 3급 지방족 아민염, 알킬트리메틸암모늄할라이드, 디알킬디메틸암모늄할라이드 등을 들 수 있고, 양쪽성 계면활성제로서는, 아미드베타인형, 이미다졸리늄베타인형, 설포베타인형 등을 들 수 있다. 상기 보습제로서는, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 소르비톨 등을 들 수 있다. 상기 방부제로서는, 벤조산, 데하이드로아세트산, 파라옥시벤조산에스테르(파라옥시벤조산메틸, 파라옥시벤조산부틸 등), 페녹시에탄올 등을 들 수 있다. 또한, 상기 산화방지제로서는, 아스코르브산, BHA 등을 들 수 있으며, 이외에도, 자외선 흡수제, 소염제 및 청량제 등을 첨가할 수 있다.
본 발명의 펩타이드는 상기 화장료 조성물 총중량에 대하여 바람직하게는 0.0001~1.0 중량%, 더 바람직하게는 0.001~1.0 중량%, 가장 바람직하게는 0.001~0.01% 중량%가 함유될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 화장료의 종류는 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 화장수, 유액, 젤, 크림, 에센스, 팩, 앰플, 로션, 세정료, 비누, 바디제품류, 비누, 오일 등의 스킨케어 화장료, 립스틱, 파운데이션 등의 메이크업 화장료 등을 들 수 있고, 그 제형은 특별히 제한되지 않는다.
본 발명의 화장료 조성물은 매일 사용할 수 있으며 또한 정해지지 않은 기간 동안에도 사용할 수 있다. 바람직하게는 사용자의 연령, 피부상태 또는 피부타입, 펩타이드의 농도에 따라 사용량, 사용횟수 및 기간을 조절할 수 있다.
본 발명은 콜라겐 합성능력이 우수한 콜라겐 합성 촉진 펩타이드, 이의 제조방법 및 이를 활용한 주름개선용 조성물에 관한 것으로서, 본 발명의 펩타이드는 우수한 콜라겐 합성촉진 기능을 보여, 피부노화 경감, 주름개선용 조성물로 용이하게 사용가능하다. 특히 다이머 형태로 제조된 본 발명의 펩타이드는 기존의 펩타이드 조성물에 비해, 사용상의 안전성 및 안정성이 높다.
도 1은 본 발명의 화합물들의 콜라겐 합성 증가효과를 그래프로 도식화한 것이다.
이하 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지고, 당업자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다.
<실시예 1. 펩타이드의 합성>
본 발명에 사용되는 아미노산의 명명 및 약어는 아래와 같이 표기한다.
Ala : 알라닌 / Cys : 시스테인 / Glu : 글루탐산 / Phe : 페닐알라닌 / Lys : 라이신 / Ser : 세린 / Thr : 트레오닌.
실시예 1-1. 화합물 1 및 11의 합성
Novabiochem corporation으로부터 구입한 2-chlorotrityl chloride resin (g당 1.4mmol이 로딩된 수지)을 71.4㎎(0.10mmol) 측량하여 반응용기에 넣었다. 수지를 3㎖의 DMF로 용매화시키고 5분간 충분히 반응(sweeling)시킨 다음, 20%(w/v) 피페리딘 DMF 용액을 3㎖ 첨가하고 10분간 교반(shaking)하고 피페리딘 DMF 용액을 제거한 후, 10㎖의 DMF 용매를 이용하여 5회 세척하였다(10㎖씩 5회 세척) * DMF : 디메틸포름아미드.
Fmoc-Cys(Trt)-OH(468.6㎎, 0.80mmol), HOBt(108.1㎎, 0.80mmol) 및 DIC(0.124㎖, 0.80mmol)를 2㎖의 DMF 용매에 완전히 녹인 후, 수지에 첨가하였다. 반응액을 실온에서 8시간 동안 교반(shaking)한 후, 10㎖의 DMF 용매로 5회 세척하였다. 20%(w/v) 피페리딘 DMF 용액을 3㎖ 첨가하고 10분간 교반(shaking)하고 피페리딘 용액을 제거한 후, 다시 20%(w/v) 피페리딘 DMF 용액을 첨가하여 10분간 반응시켜 수지에 보호되어 있는 Fmoc 보호기를 완전히 제거하고 10㎖의 DMF 용매를 이용하여 5회 세척하였다(10㎖씩 5회 세척). 이 단계에서 Fmoc 보호기의 탈보호 반응 여부를 Kaiser test[E. Kaiser et al. Anal. Biochem., 1970, 34(2), 595~598.]를 실시하여 확인하였다. * Fmoc : 9-플루오레닐메틸옥시카보닐 / HOBt : 1-하이드록시벤조트리아졸 / DIC : N,N'-디이소프로필카보디이미드.
다음으로는 아래와 동일한 합성 주기에 따라 연속적으로 펩타이드를 축합(커플링)시켰다.
(1) DMF 용매(10㎖)로 5회 세척 ;
(2) 20%(w/v) 피페리딘 DMF 용액(3㎖)을 사용하여 10분간 2회 탈보호 ;
(3) DMF 용매(10㎖)로 5회 세척 ;
(4) Fmoc-아미노산 첨가 ;
(5) 축합 시약을 첨가하여 아미노산 활성화 및 2시간 축합 ;
(6) DMF 용매(10㎖)로 5회 세척 ;
상기 (1) 내지 (6)은 계속 반복하였으며, 이 때, Fmoc-Cys(Trt)-OH 이후의 Fmoc으로 보호된 아미노산(0.80mmol)은 다음에 기술된 순서로 수지 반응용기에 첨가하여 축합시켰다.
(i) Fmoc-Ser(tBu)-OH ;
(ii) Fmoc-Lys(Boc)-OH ;
(iii) Fmoc-Lys(Boc)-OH ;
(iv) Fmoc-Thr(tBu)-OH ;
(v) Fmoc-Lys(Boc)-OH ;
Fmoc-Lys(Boc)-OH 축합 후의 (6) 이후에는, 마지막으로, 20% 피페리딘 DMF 용액(3㎖)을 처리하였다.
상기와 같은 합성 종결 즉시, 펩타이드가 축합된 수지를 3시간 동안 트리플루오로아세트산/티오아니졸/에탄디티올/트리이소프로필실래인/물(95:5:2.5:2.5:2.5)의 혼합물을 사용(10㎖)하여, 수지로부터 펩타이드를 절단하였다. 이렇게 얻어진 혼합 용액에 냉장 보관된 디에틸에테르 용매를 100㎖ 처리함으로써 침전물을 생성시켰다. 얻어진 침전물을 원심분리하여 완전히 침전시키고 트리플루오로아세트산, 티오아니졸 및 에탄디티올을 1차 제거하고 이상의 절차(디에틸에테르 용매를 100㎖ 첨가하여 침전물을 세척하고 원심분리하는 단계 - 1차 제거를 시도했던 트리플루오로아세트산, 티오아니졸 및 에탄디티올을 제거하기 위한 작업)를 2회 반복하여 고형화시킨 침전물을 얻었다. 상기 침전물(펩타이드)을 C-18 칼럼을 사용하여 50분에 걸쳐 0.01% 트리플루오르아세트산을 함유하는 5% 내지 100%의 아세토니트릴/물 농도구배 용매 시스템을 사용하는 HPLC로 정제하였다. 순수 정제된 분획물을 동결건조시켜 백색 분말형의 트리플루오로아세테이트염으로서 화합물 1 : H2N-[Lys-Thr-Lys-Lys-Ser-Cys]-CO2H(70㎎)을 얻었다.
상기 화합물 1 : H2N-[Lys-Thr-Lys-Lys-Ser-Cys]-CO2H(20㎎)을 디메틸설폭사이드(DMSO) 2㎖에 녹인 후 10㎖의 물을 첨가하고 3일간 상온에서 교반시켜, 시스테인 잔기인 티올기(-SH)를 환원체 형태(-S-S-)로 변형한 이중체(dimer) 형태의 하기의 화합물 11(18㎎)을 얻었다.
화합물 1 : H2N-[Lys-Thr-Lys-Lys-Ser-Cys]-CO2H : MS(ESI)m/e, [M+H]+= 694.94 ; (70㎎)
화합물 11 : H2N-[Lys-Thr-Lys-Lys-Ser-Cys]2-CO2H : MS(ESI)m/e, [M+H]+= 1386.88 ; (18㎎)
실시예 1-2. 화합물 2~10, 12~20의 합성
상기 실시예 1-1과 동일한 제조 과정을 이용하되, Fmoc으로 보호된 아미노산의 순서를 달리하여 하기의 화합물 2~10, 12~20의 펩타이드를 제조하였다.
화합물 2 : H2N-[Lys-Thr-Glu-Lys-Ser-Cys]-CO2H : MS(ESI)m/e, [M+H]+= 695.88 ; (79㎎)
화합물 12 : H2N-[Lys-Thr-Glu-Lys-Ser-Cys]2-CO2H : MS(ESI)m/e, [M+H]+= 1388.76 ; (24㎎)
화합물 3 : H2N-[Lys-Thr-Phe-Lys-Ser-Cys]-CO2H ; MS(ESI)m/e, [M+H]+= 713.94 ; (73㎎)
화합물 13 : H2N-[Lys-Thr-Phe-Lys-Ser-Cys]2-CO2H : MS(ESI)m/e, [M+H]+= 1424.88 ; (19㎎)
화합물 4 : H2N-[Lys-Thr-Thr-Lys-Ser-Cys]-CO2H ; MS(ESI)m/e, [M+H]+= 669.87 ; (67㎎)
화합물 14 : H2N-[Lys-Thr-Thr-Lys-Ser-Cys]2-CO2H : MS(ESI)m/e, [M+H]+= 1335.74 (17㎎)
화합물 5 : H2N-[Lys-Thr-Ala-Lys-Ser-Cys]-CO2H ; MS(ESI)m/e, [M+H]+= 638.34 ; (78㎎)
화합물 15 : H2N-[Lys-Thr-Ala-Lys-Ser-Cys]2-CO2H : MS(ESI)m/e, [M+H]+= 1272.68 ; (19㎎)
화합물 6 : H2N-[Cys-Lys-Thr-Lys-Lys-Ser]-CO2H ; MS(ESI)m/e, [M+H]+= 695.44 ; (72㎎)
화합물 16 : H2N-[Cys-Lys-Thr-Lys-Lys-Ser]2-CO2H : MS(ESI)m/e, [M+H]+= 1386.88 ; (17㎎)
화합물 7 : H2N-[Cys-Lys-Thr-Glu-Lys-Ser]-CO2H ; MS(ESI)m/e, [M+H]+= 696.38 ; (66㎎)
화합물 17 : H2N-[Cys-Lys-Thr-Glu-Lys-Ser]2-CO2H : MS(ESI)m/e, [M+H]+= 1388.76 ; (16㎎)
화합물 8 : H2N-[Cys-Lys-Thr-Phe-Lys-Ser]-CO2H ; MS(ESI)m/e, [M+H]+= 714.44 ; (80㎎)
화합물 18 : H2N-[Cys-Lys-Thr-Phe-Lys-Ser]2-CO2H : MS(ESI)m/e, [M+H]+= 1424.88 ; (21㎎)
화합물 9 : H2N-[Cys-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser]-CO2H ; MS(ESI)m/e, [M+H]+= 669.87 ; (76㎎)
화합물 19 : H2N-[Cys-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser]2-CO2H : MS(ESI)m/e, [M+H]+= 1335.74 ; (17㎎)
화합물 10 : H2N-[Cys-Lys-Thr-Ala-Lys-Ser]-CO2H ; MS(ESI)m/e, [M+H]+= 638.34 ; (74㎎)
화합물 20 : H2N-[Cys-Lys-Thr-Ala-Lys-Ser]2-CO2H : MS(ESI)m/e, [M+H]+= 1272.68 ; (19㎎)
<실시예 2. 펩타이드의 콜라겐 합성 촉진효과 측정 ( in vitro )>
정상 사람 피부 섬유아세포(NHDF-NB: 쿠라시키보세키 가부시키가이샤 제조)를, 1.0×104세포/㎖ 농도로 96웰 플레이트에 100㎕씩 분주하고, 37℃, 5% C02,가습 조건하에서 3일간 배양을 실시하였다. 배양액은, Medium 106S(쿠라시키보세키 가부시키가이샤 제조]에 LSGS(Low Serum Growth Supplement, 쿠라시키보세키 가부시키가이샤 제조)를 10 중량%로 함유한 배지를 각 웰 100㎕씩 사용하였다. 이어서, DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium, Sigma사 제조)으로 교환하고, 다시 100㎕의 PBS[Phosphate Buffered Saline, 타카라바이오 가부시키가이샤 제조]로 용해한 본 발명의 화합물을 처리하여 배양하였다(최종 농도 10μM). 상기 화합물을 용해하지 않는 PBS를 100㎕ 첨가한 것을 대조군으로서 사용하였다. 콜라겐 생산 촉진 시험에 있어서는, 7일간 배양한 후, 배양액을 채취하여, 배양액 중에 분비된 타입 I 콜라겐 농도를, 효소 결합 면역 측정법(Procollagen type I c-peptide EIA Kit; 타카라바이오 가부시키가이샤 제조)으로 정량하였다. 정량 결과를 기초로, 화합물을 첨가하지 않는 대조군 배양액 중의 타입 I 콜라겐 양을 100%로 하여 각 시험 샘플 배양액 중의 콜라겐 양을 산출하여 도시하였으며 이에 대한 결과는 표 1 및 도 1에 나타내었다.
Figure 112013082963398-pat00001
상기 표 1 및 도 1을 참고하면, 본 발명의 화합물 1~20은 모두 콜라겐 생성 촉진 효과를 보이며, 피부 주름 방지에 대해 충분한 효과를 나타내는 것으로 확인된다.
한편, 일반적으로 펩타이드는 생체 내에 들어갔을 때에 여러 가지의 가수분해효소들에 의해 매우 빨리 분해되어 그 능력이 급감하기 때문에, 펩타이드의 분해 속도를 늦추는 것이 매우 중요하다. 일반적으로 다양한 가수분해효소들은 펩타이드의 구조 중에서 아미드 결합(-C(=O)NH-) 부위를 카르복실산(-CO2H)과 아민(-NH2)으로 분해하는데, 본 발명의 펩타이드 화합물이 갖는 시스테인 다이머 구조는 (-S-S-) 골격을 가지고 있어서 일반적인 가수분해효소들의 분해능력을 낮추거나 교란시키는 기능을 한다. 즉, 상기 펩타이드 화합물 중, 다이머(dimer) 형태의 화합물 11~20은 모노머(monomer) 형태의 화합물 1~10에 비해 생체 내 가수분해효소에 의해 분해되는 정도가 더디다. 따라서, 본 발명의 펩타이드 화합물 중, 시스테인 다이머를 갖는 화합물 11~20의 경우, 체내 안정성이 매우 우수할 것으로 판단된다.
<제조예 1. 펩타이드를 함유한 화장료>
하기 구성성분들을 이용하여 본 발명의 펩타이드를 함유한 화장료를 제조하였다.
제조예 1-1. 크림
본 발명의 화합물 11 .................. 0.01 g
파라벤 ................................ 0.2 g
알란토인 ............................. 2.0 g
베타인 ............................... 1.0 g
히아루론산나트륨 .................... 0.13 g
초산토코페롤 .......................... 10 g
쉐어버터 ............................... 10 g
호호바오일 ............................ 1.7 g
방부제 ................................ 0.4 g
향..................................... 0.2 g
증류수 .............................. 74.36 g
제조예 1-2. 에센스
본 발명의 화합물 11 .................. 0.01 g
글리세린 ............................. 10.0 g
베타인 ............................... 5.0 g
PEG 1500 ............................. 2.0 g
알란토인 ............................. 0.1 g
DL-판테놀 ............................ 0.3 g
EDTA-2Na ............................. 0.02 g
벤조페논-9 .......................... 0.04 g
히드록시에틸 셀룰로오스................ 0.1 g
소듐히아루로네이트 .................... 8.0 g
카르복시비닐폴리머 .................... 0.2 g
트리에탄올아민 ...................... 0.18 g
옥틸도데칸올 ......................... 0.3 g
옥틸도데세스-16 ....................... 0.4 g
에탄올 ................................ 6.0 g
방부제 ................................ 0.4 g
향 .................................... 0.2 g
증류수 .............................. 66.75 g
제조예 1-3. 마스크팩
본 발명의 화합물 11 ................... 0.01 g
폴리비닐알콜 .......................... 15.0 g
셀룰로오스 검 ........................ 0.15 g
글리세린 .............................. 3.0 g
PEG-1500 .............................. 2.0 g
사이크로덱스트린 ...................... 0.15 g
DL-판테놀 .............................. 0.4 g
알란토인 .............................. 0.1 g
글리시리진산모노암모늄 ................. 0.3 g
니코틴아미드 ........................... 0.5 g
에탄올 ................................. 6.0 g
방부제 ................................. 0.4 g
향 ..................................... 0.2 g
증류수 ............................... 71.79 g
<110> Cellicon Lab Inc. <120> Peptides for promoting synthesis of collagen, method for preparing thereof, and, composition comprising thereof <130> DPC-13-0050 <160> 40 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 1 <400> 1 Lys Thr Glu Lys Ser Cys 1 5 <210> 2 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 2 <400> 2 Lys Thr Asp Lys Ser Cys 1 5 <210> 3 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 3 <400> 3 Lys Thr His Lys Ser Cys 1 5 <210> 4 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 4 <400> 4 Lys Thr Phe Lys Ser Cys 1 5 <210> 5 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 5 <400> 5 Lys Thr Ala Lys Ser Cys 1 5 <210> 6 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 6 <400> 6 Lys Thr Cys Lys Ser Cys 1 5 <210> 7 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 7 <400> 7 Lys Thr Gly Lys Ser Cys 1 5 <210> 8 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 8 <400> 8 Lys Thr Gln Lys Ser Cys 1 5 <210> 9 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 9 <400> 9 Lys Thr Asn Lys Ser Cys 1 5 <210> 10 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 10 <400> 10 Lys Thr Arg Lys Ser Cys 1 5 <210> 11 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 11 <400> 11 Lys Thr Leu Lys Ser Cys 1 5 <210> 12 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 12 <400> 12 Lys Thr Met Lys Ser Cys 1 5 <210> 13 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 13 <400> 13 Lys Thr Ile Lys Ser Cys 1 5 <210> 14 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 14 <400> 14 Lys Thr Ser Lys Ser Cys 1 5 <210> 15 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 15 <400> 15 Lys Thr Tyr Lys Ser Cys 1 5 <210> 16 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 16 <400> 16 Lys Thr Thr Lys Ser Cys 1 5 <210> 17 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 17 <400> 17 Lys Thr Lys Lys Ser Cys 1 5 <210> 18 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 18 <400> 18 Lys Thr Trp Lys Ser Cys 1 5 <210> 19 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 19 <400> 19 Lys Thr Pro Lys Ser Cys 1 5 <210> 20 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 20 <400> 20 Lys Thr Val Lys Ser Cys 1 5 <210> 21 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 21 <400> 21 Cys Lys Thr Glu Lys Ser 1 5 <210> 22 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 22 <400> 22 Cys Lys Thr Asp Lys Ser 1 5 <210> 23 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 23 <400> 23 Cys Lys Thr His Lys Ser 1 5 <210> 24 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 24 <400> 24 Cys Lys Thr Phe Lys Ser 1 5 <210> 25 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 25 <400> 25 Cys Lys Thr Ala Lys Ser 1 5 <210> 26 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 26 <400> 26 Cys Lys Thr Cys Lys Ser 1 5 <210> 27 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 27 <400> 27 Cys Lys Thr Gly Lys Ser 1 5 <210> 28 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 28 <400> 28 Cys Lys Thr Gln Lys Ser 1 5 <210> 29 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 29 <400> 29 Cys Lys Thr Asn Lys Ser 1 5 <210> 30 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 30 <400> 30 Cys Lys Thr Arg Lys Ser 1 5 <210> 31 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 31 <400> 31 Cys Lys Thr Leu Lys Ser 1 5 <210> 32 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 32 <400> 32 Cys Lys Thr Met Lys Ser 1 5 <210> 33 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 33 <400> 33 Cys Lys Thr Ile Lys Ser 1 5 <210> 34 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 34 <400> 34 Cys Lys Thr Ser Lys Ser 1 5 <210> 35 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 35 <400> 35 Cys Lys Thr Tyr Lys Ser 1 5 <210> 36 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 36 <400> 36 Cys Lys Thr Thr Lys Ser 1 5 <210> 37 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 37 <400> 37 Cys Lys Thr Lys Lys Ser 1 5 <210> 38 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 38 <400> 38 Cys Lys Thr Trp Lys Ser 1 5 <210> 39 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 39 <400> 39 Cys Lys Thr Pro Lys Ser 1 5 <210> 40 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide 40 <400> 40 Cys Lys Thr Val Lys Ser 1 5

Claims (10)

  1. 삭제
  2. 하기 화학식 3 또는 4로 표현되는 콜라겐 합성 촉진용 펩타이드:
    [화학식 3]
    [Lys-Thr-X-Lys-Ser-Cys]2
    [화학식 4]
    [Cys-Lys-Thr-X-Lys-Ser]2
    상기 화학식 3 또는 4에서, X는 글루탐산(Glu), 아스파트산(Asp), 히스티딘(His), 페닐알라닌(Phe), 알라닌(Ala), 시스테인(Cys), 글라이신(Gly), 글루타민(Gln), 아스파라긴(Asn), 아르기닌(Arg), 루이신(Leu), 메티오닌(Met), 이소루이신(Ile), 세린(Ser), 타이로신(Tyr), 트레오닌(Thr), 라이신(Lys), 트립토판(Trp), 프롤린(Pro) 및 발린(Val)에서 선택되며,
    [ ]2는 시스테인 잔기인 티올기(-SH)를 환원체 형태(-S-S-)로 변형한 이중체(dimer)를 나타냄.
  3. 삭제
  4. 제2항에 있어서,
    상기 화학식 3 또는 4의 펩타이드는
    [Lys-Thr-Lys-Lys-Ser-Cys]2 (화합물 11),
    [Lys-Thr-Glu-Lys-Ser-Cys]2 (화합물 12),
    [Lys-Thr-Phe-Lys-Ser-Cys]2 (화합물 13),
    [Lys-Thr-Thr-Lys-Ser-Cys]2 (화합물 14),
    [Lys-Thr-Ala-Lys-Ser-Cys]2 (화합물 15),
    [Cys-Lys-Thr-Lys-Lys-Ser]2 (화합물 16),
    [Cys-Lys-Thr-Glu-Lys-Ser]2 (화합물 17),
    [Cys-Lys-Thr-Phe-Lys-Ser]2 (화합물 18),
    [Cys-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser]2 (화합물 19), 및,
    [Cys-Lys-Thr-Ala-Lys-Ser]2 (화합물 20)
    에서 선택되며,
    상기 펩타이드에서 [ ]2는 시스테인 잔기인 티올기(-SH)를 환원체 형태(-S-S-)로 변형한 이중체(dimer)인 것을 특징으로 하는 콜라겐 합성 촉진용 펩타이드.
  5. 제2항 및 제4항의 어느 한 항에 따른 펩타이드에서 1종 이상 선택되는 펩타이드를 함유하는 것을 특징으로 하는 주름개선용 조성물.
  6. 제2항 및 제4항의 어느 한 항에 따른 펩타이드에서 1종 이상 선택되는 펩타이드를 함유하는 것을 특징으로 하는 주름개선용 약학적 조성물.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 펩타이드는 약학적 조성물에 0.0001~1.0 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 주름개선용 약학적 조성물.
  8. 제2항 및 제4항의 어느 한 항에 따른 펩타이드에서 1종 이상 선택되는 펩타이드를 함유하는 것을 특징으로 하는 주름개선용 화장료 조성물.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 펩타이드는 화장료 조성물에 0.0001~1.0 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 주름개선용 화장료 조성물.
  10. 제8항에 있어서,
    상기 화장료는 화장수, 유액, 젤, 크림, 에센스, 팩, 앰플, 로션, 세정료, 비누, 바디제품류, 비누, 오일, 립스틱 및 파운데이션에서 선택되는 것을 특징으로 하는 주름개선용 화장료 조성물.

















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