KR101405910B1 - 피부 보습 펩타이드 유도체 및 그 제조방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 피부 보습 펩타이드 유도체 또는 허용 가능한 그의 염에 관한 발명이다. 구체적으로는 인체에 해가 없는 생체친화적인 화장품 및 의약품을 제공하기 위한 피부 보습 펩타이드 유도체에 관한 발명인 것이다. 본 발명에 따른 피부 보습 펩타이드 유도체를 이용하여 펩타이드를 제조하고, 또한 이를 화장품이나 의약품 등의 원료로 사용하면 생체친화적이며 피부 보습 효과가 우수고, 또한 그러한 보습 효과의 유지력도 우수한 화장품 또는 의약품의 제공이 가능하다.

Description

피부 보습 펩타이드 유도체 및 그 제조방법{Peptide derivative supplementing water of skin and preparation method thereof}
본 발명은 피부 보습 펩타이드 유도체에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 보습 효과 및 보습 효과의 유지력이 우수한 신규의 펩타이드 유도체에 관한 것이다.
우리의 피부에서 각질층은 피부 최외곽 층을 형성하고 있으며, 건조한 외부환경으로부터 피부 내부의 수분 손실을 막아주는 중요한 역할을 수행하고 있다. 그와 동시에 그 자신도 적당한 수분을 보유하여 유연성 내지 탄력성을 보이게 된다. 보통 촉촉한 피부라고 느껴지는 정도는 각질층의 수분 함량이 15% 정도임에 반하여, 10%이하인 경우는 건성 피부로 불리운다. 그러나 노화, 호르몬 분비 불균형과 같은 내인성 변화를 비롯하여 바람, 기온, 햇빛 등과 같은 외부의 환경적 요인에 의해 각질층의 수분이 손실되게 된다. 이렇게 수분이 손실된 경우 피부의 탄력성 및 유연성이 소실되며, 궁극적으로는 피부의 고유한 보호기능이 사라져 피부조직의 갈라짐, 홍반, 모세혈관 확장증, 가려움증 등이 유발되고, 이러한 증상들이 더욱 심해지면 건선, 아토피 등과 같은 난치성 피부질환들이 발생하게 된다. 그러므로 이와 같은 문제를 해결하기 위하여 피부 각질층에 인위적인 보습막을 형성시키기 위한 연구들이 지속적으로 진행되고 있다. 또한 이러한 인위적인 보습막의 형성에도 불구하고 피부에 부작용을 일으키지 않는 등의 안전성도 수반되어져야 한다. 그리하여 최근에는 이러한 화학제제가 아닌 생물학적 제제를 활용하여 보습 효과가 우수한 피부 보습막을 형성시키려는 노력이 계속 되고 있다.
특히 종래 기술로서 히아루론산과 같은 고분자 폴리머 형태의 보습제가 개발되었다. 하지만, 이러한 히아루론산 등의 고분자 폴리머 보습제는 분자량이 커서 피부에 사용시 흡수율이 현저히 떨어지는 등의 문제가 있었다. 또한 제품화 단계에서도 분자량이 커서 정량 및 정제의 어려움이 있었다.
1. 대한민국 공개번호 10-2008-0074583호(발명의 명칭 : 히알루론산으로 이루어지는 알러지 질환 예방 및 치료용약제, 식품 및 화장품, 공개일 : 2008.08.13), 2. 대한민국 공개번호 10-2003-0041738호(발명의 명칭:라이신 첨가 숙신화 또는 술폰화 아델로콜라겐 및 히아루론산을 필수성분으로 함유하는 화장품 조성물, 공개일 : 2003.05.27)
본 발명은 상술한 문제를 해결하기 위해 안출된 것으로, 본 발명의 목적은 생체 친화적인 것으로서 피부에 안전하면서, 피부 보습 효과가 우수하고, 이에 더하여 보습 효과의 유지력도 우수하며, 저분자량으로서 피부에서의 흡수율 및 제품화 단계에서의 정제 및 정량이 용이한 신규의 펩타이드 유도체를 제공하는 것이다.
위와 같은 과제를 해결하기 위한 본 발명의 한 특징에 따른 피부 보습 펩타이드 유도체 또는 허용 가능한 그의 염은 하기 화학식 1을 포함한다.
Figure 112012025813590-pat00001
단, 상기 화학식 1에서 X1, X2, Y1, 및 Y2는 각각 독립적으로 H 또는 하기 화학식 2~3으로 표시되는 치환기 중 어느 하나이고, X1, X2, Y1, 및 Y2 중 적어도 하나는 H가 아니고, 상기 n은 1~5의 정수이고, m은 각각 독립적으로 1~5의 정수이며, 하기 화학식 2의 A1, A2, A3, 및 A4는 각각 독립적으로 H 또는 하기 화학식 4~7로 표시되는 치환기 중 어느 하나이고, A1, A2, A3, 및 A4 중 적어도 하나는 H가 아니고, m은 각각 독립적으로 1~5의 정수이다.
Figure 112012025813590-pat00002
Figure 112012025813590-pat00003
Figure 112012025813590-pat00004
Figure 112012025813590-pat00005
Figure 112012025813590-pat00006
Figure 112012025813590-pat00007
또한 상기 피부 보습 펩타이드 유도체의 분자량은 500 내지 1000인 것을 특징으로 한다. 또한 상기 n은 3 또는 4의 정수, m은 3 또는 4의 정수인 것을 특징으로 한다. 또한 상기 화학식 1에서 X1, X2, Y1, 및 Y2는 각각 독립적으로 H 또는 상기 화학식 4 내지 7로 표시되는 치환기 중 어느 하나이고, X1, X2, Y1, 및 Y2 중 적어도 하나는 H가 아니고, 상기 n은 1 내지 5의 정수이고, m은 각각 독립적으로 1 내지 5의 정수인 것을 특징으로 하며, 하기 화학식 8 내지 화학식 11(단, 하기 화학식 8 내지 화학식 11에서 m은 각각 독립적으로 1~5의 정수이다.)인 것을 특징으로 한다.
Figure 112012025813590-pat00008
Figure 112012025813590-pat00009
Figure 112012025813590-pat00010
Figure 112012025813590-pat00011
또한 상기 n은 3 또는 4의 정수, m은 3 또는 4의 정수인 것을 특징으로 한다. 또한 상기 화학식 1의 화합물은 펩타이드 유도체 1(단, m=4; n=4; X1=화학식 9; X2=H; Y1=화학식 11; Y2=화학식 11), 펩타이드 유도체 2(단, m=4; n=4; X1=화학식 8; X2=H; Y1=화학식 11; Y2=화학식 11), 펩타이드 유도체 3(단, m=4; n=4; X1=화학식 10; X2=H; Y1=화학식 11; Y2=화학식 11), 펩타이드 유도체 4(단, m=4; n=4; X1=화학식 11; X2=화학식 11; Y1=화학식 10; Y2=H), 펩타이드 유도체 5(단, m=4; n=4; X1=화학식 10; X2=H; Y1=화학식 10; Y2=H), 펩타이드 유도체 6(단, m=3; n=3; X1=화학식 9; X2=H; Y1=화학식 11; Y2=화학식 11), 펩타이드 유도체 7(단, m=3; n=3; X1=화학식 8; X2=H; Y1=화학식 11; Y2=화학식 11), 펩타이드 유도체 8(단, m=3; n=3; X1=화학식 10; X2=H; Y1=화학식 11; Y2=화학식 11), 펩타이드 유도체 9(단, m=3; n=3; X1=화학식 11; X2=화학식 11; Y1=화학식 10; Y2=H) 및 펩타이드 유도체 10(단, m=3; n=3; X1=화학식 10; X2=H; Y1=화학식 10; Y2=H) 중 어느 하나인 것을 특징으로 한다.
본 발명의 또 다른 특징에 따른 피부 보습 펩타이드는 상기 피부 보습 펩타이드 유도체에 선택적으로 N-말단 또는 C-말단에 아미드 결합을 통해 2 내지 6개의 아미노산이 결합한 것이다.
본 발명의 또 다른 특징에 따른 피부 보습 펩타이드를 제조하는 방법은 상기 피부 보습 펩타이드 유도체를 사용하는 것이다.
본 발명에 따른 신규한 피부 보습 펩타이드 유도체에 의한 펩타이드는 피부 보습 효과가 우수하다. 또한 화학제제가 혼합되지 않는 생체친화적인 것으로서 본 발명에 따른 펩타이드를 활용하여 보습막을 형성하면 피부에 부작용이 적으면서 보습 효과가 우수한 화장품이나 의약품의 제조가 가능하다. 또한 본 발명에 따른 피부 보습 펩타이드 유도체에 의한 펩타이드는 저분자로서 기존의 고분자 보습제에 비해 그 흡수율이 뛰어나며, 제품화 단계에서 정제나 정량이 용이한 장점이 있다.
도 1은 본 발명에 따른 실시예 2와 비교예 1의 보습 효과를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명에 따른 실시예 3에 의한 화장품과 비교예 2의 화장품 간의 전기전도도를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
이에 본 발명자들은 피부 보습 효과가 우수하고 생체친화적인 신규의 펩타이드 유도체를 개발하기 위하여 예의 연구 노력한 결과, 본 발명에 따른 피부 보습 펩타이드 유도체를 발견하여 본 발명을 완성하였다.
구체적으로 본 발명에 따른 펩타이드는 하기 화학식 1을 포함하는 피부 보습 펩타이드일 수 있다.
[화학식 1]
Figure 112012025813590-pat00012
(단, 상기 화학식 1에서 상기 n은 바람직하게는 1~5의 정수일 수 있고, 더욱 바람직하게는 3 또는 4의 정수일 수 있다. )
상기 화학식 1에서 X1, X2, Y1 및 Y2는 바람직하게는 각각 독립적으로 H 또는 하기 화학식 2~3으로 표시되는 어느 하나의 치환기로 치환될 수 있다. 다만, 상기 X1, X2, Y1 및 Y2 중 적어도 하나는 H가 아니다.
[화학식 2]
Figure 112012025813590-pat00013
(단, 상기 화학식 2에서 상기 m은 바람직하게는 1~5의 정수일 수 있고, 더욱 바람직하게는 3 또는 4의 정수일 수 있다.)
[화학식 3]
Figure 112012025813590-pat00014
상기 화학식 2에서 A1, A2, A3, 및 A4는 각각 독립적으로 H 또는 하기 화학식 4~7로 표시되는 어느 하나의 치환기로 치환될 수 있다. 다만, A1, A2, A3, 및 A4 중 적어도 하나는 H가 아니다.
[화학식 4]
Figure 112012025813590-pat00015
(단, 상기 화학식 4에서 상기 m은 바람직하게는 1~5의 정수일 수 있고, 더욱 바람직하게는 3 또는 4의 정수일 수 있다.)
[화학식 5]
Figure 112012025813590-pat00016
(단, 상기 화학식 5에서 상기 m은 바람직하게는 1~5의 정수일 수 있고, 더욱 바람직하게는 3 또는 4의 정수일 수 있다.)
[화학식 6]
Figure 112012025813590-pat00017
(단, 상기 화학식 6에서 상기 m은 바람직하게는 1~5의 정수일 수 있고, 더욱 바람직하게는 3 또는 4의 정수일 수 있다.)
[화학식 7]
Figure 112012025813590-pat00018
또한 상기 화학식 1에서 X1, X2, Y1 및 Y2는 바람직하게는 각각 독립적으로 H 또는 상기 화학식 4~7으로 표시되는 어느 하나의 치환기로 치환될 수 있다. 다만, 상기 X1, X2, Y1 및 Y2 중 적어도 하나는 H가 아니고, 상기 n은 바람직하게는 1~5의 정수이고, 상기 m은 바람직하게는 각각 독립적인 1~5의 정수일 수 있다. 또한 더욱 바람직하게는 상기 n은 3 또는 4의 정수일 수 있으며, 상기 m은 3 또는 4의 정수일 수 있다. 이 경우 바람직한 예시로서 아래 표 1과 같은 화합물이 제공 될 수 있다.
Figure 112012025813590-pat00019
상기 표 1에서 화학식 8, 화학식 9, 화학식 10 및 화학식 11은 아래와 같다.
[화학식 8]
Figure 112012025813590-pat00020
(단, 상기 화학식 8에서 상기 m은 바람직하게는 1~5의 정수일 수 있고, 더욱 바람직하게는 3 또는 4의 정수일 수 있다.)
[화학식 9]
Figure 112012025813590-pat00021
(단, 상기 화학식 9에서 상기 m은 바람직하게는 1~5의 정수일 수 있고, 더욱 바람직하게는 3 또는 4의 정수일 수 있다.)
[화학식 10]
Figure 112012025813590-pat00022
(단, 상기 화학식 10에서 상기 m은 바람직하게는 1~5의 정수일 수 있고, 더욱 바람직하게는 3 또는 4의 정수일 수 있다.)
[화학식 11]
Figure 112012025813590-pat00023

또한 본 발명에 따른 피부 보습 펩타이드의 분자량은 500 내지 1000일 수 있다.
상기 화학식 1에 의한 피부 보습 펩타이드는 기존의 고분자 폴리머 형태의 보습 재료에 비해 저분자로서 피부 흡수율이 우수하며, 저분자의 펩타이드이므로 HPLC 등을 통해 제품화 단계에서 기존 폴리머 형태의 보습 재료에 비해 그 정량 및 정제가 용이한 장점이 있다.
본 발명에 따른 피부 보습 펩타이드는 바람직하게는 염의 형태로 존재할 수 있다. 상기 염은 바람직하게는 본 발명에 따른 피부 보습 펩타이드 유도체의 아미노기를 적절한 산과 반응시키는 것으로 수득될 수 있다. 그리하여 상기 산과 반응하여 수득된 염으로는 바람직하게는 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 시트레이트, 아스파테이트, 벤조에이트, 벤젠설포네이트, 바이설페이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포설포네이트, 디글루코네이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 포르메이트, 푸마레이트, 하이드로 클로라이드, 하이드로브로마이드, 하이드로요오다이드, 2-하이드록시에탄설포네이트, 락테이트, 말레에이트, 메시틸렌설포네이트, 메탄설포네이트, 나프틸렌설포네이트, 니코티네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 옥살레이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로피오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 숙시네이트, 타르트레이트, 트리클로로아테이트, 트리플루오로아세테이트, 포스페이트, 글루타메이트, 바이카보네이트, 파라-톨루엔설포네이트 및 운데카노에이트로 이루어지는 군 중에서 선택된 어느 하나 이상일 수 있다. 또한 상기 산은 바람직하게는 무기산과 유기산이 사용될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 상기 무기산은 염산, 브롬화수소산, 황산 및 인산으로 이루어지는 군 중에서 선택된 어느 하나 이상이 사용될 수 있으며, 상기 유기산은 옥살산, 말레산, 숙신산 및 시트프산으로 이루어지는 군 중에서 선택된 어느 하나 이상이 사용될 수 있다.
본 발명에 있어서, 또 다른 특징은 상기 펩타이드 유도체를 선택적으로 N-말단 또는 C-말단에 아미드 결합을 통해 2~6개의 아미노산이 결합한 다이 펩타이드, 트리 펩타이드, 헥사 펩타이드(hexa peptide)등이 포함될 수 있다.
본 발명에 따른 펩타이드 유도체를 이용한 펩타이드의 합성은 통상의 펩타이드 합성방법이 모두 포함될 수 있다. 다만, 바람직하게는 고체상 펩타이드 합성방법으로서, 고체상에 일정하게 결합된 아미노산 골격에 하나 이상의 아미노산이 연속적으로 아미드 결합하여 합성될 수 있으며, 또한 보호기에 의하여 보호된 하나 이상의 아미노산이 연속적으로 아미드 결합하여 합성될 수 있다. 상기 보호기는 아미노산의 아미노기 및 카르복실기를 보호할 수 있다. 보호된 아미노산은 고체 지지체에 부착될 수 있으며, 또한 첨가된 후속 아미노산과 반응하여 아미드 결합을 형성한다. 상기 반응 후 아미노산의 보호기는 제거된다. 상기 고체상 펩타이드 합성방법을 더욱 구체적으로 설명하면 α-아미노기는 산 또는 염기 민감성 작용기에 의해 보호된다. 보호기는 펩타이드 축합 반응 조건에서 안정한 성질을 가져야만 하고 연장되는 펩타이드 사슬의 파괴 없이 또는 거기에 함유된 임의의 키랄 센터의 라세미체화 없이 용이하게 제거 가능한 성질을 가져야만 한다. 이와 같이 적합한 보호기들로는 9-플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc), t-부톡시카보닐(Boc), 벤질옥시카보닐(Cbz), 비페닐이소프로필-옥시카보닐, t-아밀옥시카보닐, 이소보르닐옥시카보닐, (α,α)-디메틸-3,5-디메톡시벤질옥시카보닐, O-니트로페닐설페닐, 2-시아노-t-부틸옥시카보닐 등일 수 있으며, 이러한 목적으로 당업계에 알려진 적합한 다른 보호기들 또한 본 발명의 범위내이다.
본 발명에 따른 항균 펩타이드 합성에서 가장 바람직한 보호기로는 9-플루오레닐메틸옥시카보닐 (Fmoc) 보호기이며, 대부분 Fmoc 보호기로 보호된 아미노산을 합성 원료로 이용하는 것이 바람직하다.
특히, 본 발명의 펩타이드 합성에서 사용되는 아미노산 잔기의 보호기로는 아르기닌의 경우 2,2,5,7,8-펜타메틸크로만-6-설포닐(Pmc) 및 2,2,4,6,7-펜타메틸디하이드로벤조푸란-S-설포닐(Pbf)이고; 아스파라긴의 경우, 트리틸(Trt)이고; 아스파트산의 경우, t-부틸(t-Bu)이고; 글루타민의 경우, 트리틸(Trt)이고; N-메틸글루타민산의 경우, t-부틸(t-Bu)이고; 히스티딘의 경우, 트리틸(Trt)이고; 라이신의 경우, t-부톡시카보닐(Boc)이고; 세린의 경우, 7t-부틸(t-Bu)이고; 트레오닌 및 알로트레오닌의 경우, t-부틸(t-Bu)이고; 트립토판의 경우, t-부톡시카보닐(Boc)이고; 티로신의 경우, t-부틸(t-Bu)인 것이 바람직하지만, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
고체상 펩타이드 합성 방법에서, C-말단 아미노산은 적합한 고형 지지체 또는 수지에 부착된다. 상기 합성을 위해 유용한 적합한 고형 지지체로는 단계적 축합-탈보호 반응의 시약 및 반응 조건에 불활성이고 사용되는 매질에 불용성인 물질이 바람직하며, 예를 들면 WANG(HMP: 4-Hydroxymethylphenoxy) 레진(resin)일 수 있다. 특히, C-말단 카프복실산 펩타이드에 대해 바람직한 고형 지지체는 Novabiochem Corporation 로부터 시판되는 WANG(HMP: 4-Hydroxymethylphenoxy) 레진일 수 있다.
C-말단 카르복실산(-CO2H)는 디클로로메탄, N-메틸피리돈(NMP) 또는 DMF과 같은 용매중에서 10℃ 내지 50 ℃의 온도에서, 바람직하게는 30 ℃의 온도조건에서, 약 1 내지 24 시간 동안 4-디메틸아미노피리딘 (DMAP), 1-하이드록시벤조트리아졸 (HOBt), N-메틸모르폴린 (NMM), 벤조트리아졸-1-일옥시-트리스(디메틸아미노)-포스포늄-헥사플루오로포스페이트(BOP) 또는 N,N'-디사이클로헥실카보디이미드 (DCC), N,N'-디이소프로필카보디이미(DIC), [O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄헥사플루로포스페이트](HATU) 또는 O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄헥사플루오로포스페이트(HBTU)에 카르복실 산을 활성화시켜 축합을 통해 수지 또는 고체상 지지체에 커플링된다.
상기 탈보호된 4-(2',4'-디메톡시페닐-Fmoc-아미노메틸)페녹시아세트아미도에틸 수지에 목적하는 제1 아미노산을 축합시키는데 사용되는 바람직한 시약들로는 적합하게 보호된 제1 아미노산 (1당량)에 대하여 DMF 용매중에서 N-메틸모르폴린(NMM, 1당량), 1-하이드록시벤조트리아졸 (HOBt, 1당량) 및 [O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄헥사플루오로포스페이트] (HATU, 1당량), O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄헥사플루오로포스페이트 (HBTU, 1당량), N,N'-디사이클로헥실카보디이미드(DCC) 또는 N,N'-디이소프로필카보디이미드 (DIC)과 같은 축합 반응 시약들이다.
본 발명에서 수행되는 연속적인 아미노산의 축합은 관련 기술 분야에서 널리 알려져 있는 자동 펩타이드 합성기 또는 수동으로 직접 수행할 수 있다. 바람직한 합성 반응의 조건으로는 Fmoc 작용기로 보호된 α-아미노산을 2급 아민 용액, 바람직하게 피페리딘으로 처리하여 탈보호시킨 후, 과량의 용매로 세척하고 커플링을 원하는 또 다른 각각의 보호된 아미노산을 이어서 약 5배 몰 과량 첨가하여 바람직하게는 DMF 용매 중에서 반응을 수행한다.
본 발명에서 고체상 수지를 이용한 펩타이드의 합성 마지막 단계에서는 펩타이드를 연속적으로 또는 1회 조작으로 수지로부터 얻고자 하는 펩타이드를 제거하고 각각 아미노산의 잔기를 보호하고 있는 보호기들을 탈보호시킨다. 수지로부터 펩타이드의 제거 및 잔기에 존재하는 보호기들의 탈보호 조건으로는 일반적으로 수지-펩타이드 간의 결합을 절단하는 절단 시약 칵테일, 예를 들어, 트리플루오로아세트산(TFA), 트리이소프로필실란(TIS), 티오아니졸, 물 또는 에탄디티올 (EDT)등으로 구성된 디클로로메탄 혼합 칵테일 용액을 처리하여 얻을 수 있다. 이렇게 얻어진 혼합 용액은 냉장 보관된 디에틸에테르 용매를 과량 처리함으로써 침전물을 생성시킨다. 상기 얻어진 침전물을 원심분리시켜 완전히 침전시키고 과량의 트리플루오로아세트산, 트리이소프로필실란, 티오아니졸, 물 및 에탄디티올 등을 일차 제거하고 이상의 절차를 2회 정도 반복하여 고형화시킨 침전물을 얻는다.
완전히 탈보호된 펩타이드 염은 물과 아세트나이트릴 용매로 구성된 혼합 용매를 흘리고 역상 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 이용하여 분리 정제한다. 분리 정제된 펩타이드 용액은 동결건조 시켜 완전히 농축 건조 시킴으로써 고형의 펩타이드를 얻는다.
이하 실시예에서 사용되는 아미노산 및 용매 등의 명명 및 약어는 아래와 같이 표기한다.
Ala, A: 알라닌; Arg, R: 아르기닌; Asn, N: 아스파라긴; Asp, D: 아스파트산; Cys, C: 시스테인; Glu, E: 글루탐산; Gln, Q: 글루타민; Gly, G: 글리신; His, H: 히스티딘; Ile, I: 이소루이신; Leu, L: 루이신; Lys, K: 라이신; Met, M: 메티오닌; Nle: 노오루이신; Phe, F: 페닐알라닌; Pro, P: 프롤린; Ser, S: 세린; Thr, T: 트레오닌; Trp, W: 트립토판; Tyr, Y: 티로신; Val, V: 발린; 오르니틴, Orn.
DMF: N,N-디메틸포름아미드; DCC: N,N'-디사이클로헥실카보디이미드; DIC: N,N'-디이소프로필카보디이미드; DIEA: 디이소프로필에틸아민; EDT: 에틸 디티올; HOBt: 1-하이드록시벤조 트리아졸; HBTU: O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N',-테트라메틸우로늄헥사플루오로포스페이트; MC: 디클로로메탄; NMM: N-메틸모르폴린 NMP: N-메틸피리돈; TIS: 트리이소프로필실란 및 TFA: 트리플루오로아세트산을 뜻한다.
이하 본 발명을 바람직한 실시예를 참고로 하여 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 펩타이드 유도체 1 내지 10의 합성
펩타이드 유도체 I의 합성:
노바바이오쳄사(Novabiochem corporation)로부터 구입한 하이드록실(Hydroxyl) 레진인Wang (HMP; 4-Hydroxymethylphenoxy) 레진 (1.1 mmol/g, Novabiochem Corporation)의 1 mmol에 대한 양을 측량하여 반응용기에 넣었다. 수지를 30 ml의 DMF(디메틸포름아미드)로 용매화시키고 10분간 충분히 스윌링(sweeling)시켰다. 감압 하에서 용매를 제거하고, DMF(디메틸포름아미드) 용매에 녹인 Fmoc-Orn(Boc)-OH (4 당량), DIC (2 당량; 디이소프로필카보디이미드, Diisopropylcarbodiimide) 및 DMAP (0.1 당량; 디메틸아미노피리딘, 4-Dimethylaminopyridine) 혼합 용액을 용기에 첨가하여, 4시간 동안 반응을 하였다.
Fmoc-아미노산이 로딩된 레진에 20% 피페리딘 DMF 용액을 30 ml 첨가하여 10분간 쉐이킹(shaking)시키고 피페리딘 용액을 제거한 후 다시 20% 피페리딘 DMF(디메틸포름아미드) 용액을 첨가하여 10분간 반응시켜 수지에 보호되어 있는 Fmoc 보호기를 완전히 제거하고 30 ml의 DMF(디메틸포름아미드) 용매를 이용하여 5회 이상 세척하였다. 이 단계에서 Fmoc 보호기의 탈보호 반응 여부를 카이저 테스트(Kaiser test[E. Kaiser et al. Anal. Biochem. (1970) 34, 595])를 실시하여 확인하였다.
Fmoc 보호기가 제거된 레진에, DMF(디메틸포름아미드) 용매에 녹인 Fmoc-Lys(Alloc)-OH (4 당량), DIC (4 당량; Diisopropylcarbodiimide), HOBt (4 당량;하이드록시벤조 트리아졸, N-hydroxybenzotriazole) 커플링 용액을 첨가하고, 4 시간 동안 실온에서 반응을 진행하였다. 반응액를 실온에서 4 시간 정도 쉐이킹(shaking)시킨 후, DMF(디메틸포름아미드) 용매로 5회 이상 충분히 세척하였다. 이 단계에서 카이저 테스트(Kaiser test)를 위와 동일하게 실시하여 Fmoc-아미노산의 커플링 반응 여부를 확인하였다.
그 후 아래와 동일한 합성 주기에 따라 연속적으로 커플링 반응을 진행하였다:
(1) DMF(디메틸포름아미드) 용매(30 ml)로 5회 이상 세척; (2) 20% 피페리딘 DMF(디메틸포름아미드) 용액(30 ml)을 사용하여 10분간 2회 탈보호; (3) DMF(디메틸포름아미드) 용매(30 ml)로 5회 이상 세척; (4) Fmoc-아미노산의 첨가; (5) 커플링 시약을 첨가하여 아미노산 활성화 및 4 시간 커플링; (6) DMF(디메틸포름아미드) 용매(30 ml)로 5회 이상 세척.
상기의 반응 절차에서 Fmoc-아미노산은 Fmoc-Lys(Alloc)-OH로 위에 언급한 커플링 조건과 동일하게 반응을 진행하였다. 4시간 커플링 반응을 진행시킨 후, 카이저 테스트(Kaiser test)를 통해 커플링 여부를 확인하였다.
다음은 아미노산의 잔기에 보호되어 있는 Alloc 보호기를 선택적으로 제거하고 하였다. 즉, Pd(PPh3)4 (1 mmol)을 10 ml의 CH3Cl:NMM:AcOH (18:1:0.5)에 녹인 후, 합성된 레진에 첨가하여 실온에서 2시간 이상 반응시켰다. 반응 레진은 CHCl3(10 ml X 6회); 20％ acetic acid CH2Cl2 solution(10 ml X 6회); CH2Cl2(10 ml X 6회); DMF(10 ml) 6회 이상 세척해 주었다. 선택적인 Alloc 보호기에 대한 탈 보호 여부는 카이저 테스트(Kaiser test)를 실시하여 확인하였다.
다음으로는 선택적으로 탈 보호된 아미노산 잔기의 아민 그룹에 알킬화 반응을 시도하였다. 시그마 알드리치(Sigma-Aldrich)사로부터 구매한 브로모아세틱 산(bromoacetic acid, 20 당량)와 트리에틸아민(triethylamine, 40 당량)을 DMF(디메틸포름아미드, 30 ml)에 용해시킨 후, Alloc 보호기가 탈 보호된 Fmoc-펩타이드 레진과 혼합시키고 50~60 ℃의 온도 조건을 유지시키며 12시간 이상 천천히 반응시켰다.
N-알킬화 반응 종료 후, 20% 피페리딘 DMF(디메틸포름아미드) 용액 (30 ml)을 이용하여 2회 반응시켜 Fmoc 보호기를 제거하고 DMF(디메틸포름아미드) 용매로 5회 이상 세척하였다. 합성 종결 즉시, 펩타이드가 커플링된 레진을 3 시간 동안 TFA/티오아니졸/EDT/TIS/H2O (95:5:2.5:2.5:2.5)의 혼합물을 사용하여 레진으로부터 펩타이드를 절단하였다. 이렇게 얻어진 혼합 용액은 냉장 보관된 디에틸에테르 용매를 과량 처리함으로써 침전물을 생성시켰다. 얻어진 침전물을 원심분리 시켜 완전히 침전 시키고 과량의 트리플루오로아세트산, 티아니졸 및 에탄디티올 등을 일차 제거하고 이상의 절차를 2회 정도 반복하여 고형화시킨 침전물을 얻었다.
얻어진 펩타이드를 C-18 칼럼을 사용하고 50분에 걸쳐 0.01% TFA를 함유하는 5% 내지 100%의 아세토니트릴/물 농도 구배 용매 시스템을 사용하는 HPLC로 정제하였다. 순수 정제된 분획물을 동결건조시켜 백색 분말형의 트리플루오로아세테이트염으로서 펩타이드 유도체 1을 얻었다. 이러한 펩타이드 유도체 1은 상기 표 1의 화합물 번호 1과 같은 것으로서, 화학식 1에서의 X1은 화학식 9, X2는 H, Y1과 Y2는 화학식 11이며, m과 n은 4이다(m=4; n=4; X1=화학식 9; X2=H; Y1=화학식 11; Y2=화학식 11).
펩타이드 유도체 1의 HPLC 정제 결과: Rt(Retention time)=3.45분(HPLC에서 혼합용매의 조건: 0.01% TFA(트리플루오르 아세트산)를 함유하는 5% 내지 100%의 아세토니트릴/물로부터 30분에 걸쳐 다양한 농도 구배); MS(ESI, Electrospray ionization)m/e, [M(분자량)+H(수소)]+= 507, 단, 본 펩타이드 유도체 1에서 수소를 뺀 분자량의 이론치는 506.5이다.
위와 동일한 펩타이드 커플링 반응, Alloc 보호기 탈 보호 반응 및 N-알킬화 반응을 진행하여 펩타이드 유도체 2 및 펩타이드 유도체 3을 각각 제조하였다.
펩타이드 유도체 2의 합성:
합성된 펩타이드 유도체 2는 상기 표 1의 화합물 번호 2와 같은 것으로서, 화학식 1에서의 X1은 화학식 8, X2는 H, Y1과 Y2는 화학식 11이며, m과 n은 4이다(m=4; n=4; X1=화학식 8; X2=H; Y1=화학식 11; Y2=화학식 11).
펩타이드 유도체 2의 HPLC 정제 결과: Rt(Retention time)=3.48 분(HPLC에서 혼합용매의 조건: 0.01% TFA(트리플루오르)를 함유하는 5% 내지 100%의 아세토니트릴/물로부터 30분에 아세트산 걸쳐 다양한 농도 구배); MS(ESI, Electrospray ionization)m/e, [M(분자량)+H(수소)]+= 507, 단 본 펩타이드 2에서 수소를 뺀 분자량의 이론치는 506.5이다.
펩타이드 유도체 3의 합성:
합성된 펩타이드 유도체 3은 상기 표 1의 화합물 번호 3와 같은 것으로서, 화학식 1에서의 X1은 화학식 10, X2는 H, Y1과 Y2는 화학식 11이며, m과 n은 4이다(m=4; n=4; X1=화학식 10; X2=H; Y1=화학식 11; Y2=화학식 11).
펩타이드 유도체 3의 HPLC 정제 결과: Rt(Retention time)=3.33 분(HPLC에서 혼합용매의 조건: 0.01% TFA(트리플루오르 아세트산)를 함유하는 5% 내지 100%의 아세토니트릴/물로부터 30분에 걸쳐 다양한 농도 구배); MS(ESI, Electrospray ionization)m/e, [M(분자량)+H(수소)]+= 623, 단, 본 펩타이드 유도체 3에서 수소를 뺀 분자량의 이론치는 622.6이다.
펩타이드 유도체 4의 합성:
펩타이드 유도체 1의 합성 과정과 동일하게 Fmoc-Lys(Alloc)-OH이 결합된 레진에 대하여 선택적으로 Alloc 보호기를 탈 보호시키고 Lys 잔기의 amine기에 Fmoc-Lys(Fmoc)-OH 아미노산을 위와 동일한 커플링 반응 조건을 적용하여 실시하였다. 커플링 반응이 종결한 후, 충분히 DMF 용매를 이용하여 세척하고 20% 피페리딘 DMF 용액 (30 ml)과 2회 반응시켜 Fmoc 보호기를 탈 보호시켰다. 탈 보호된 amine기에 대하여 N-알킬화 반응을 진행하였고 탈 레진화, 펩타이드의 침전물 수거 및 동일한 방법으로 정제를 거쳐 목적하는 펩타이드 유도체 4를 제조하였다. 이렇게 제조된 펩타이드 유도체 4는 상기 표 1의 화합물 번호 4와 같은 것으로서, 화학식 1에서의 X1과 X2는 화학식 11, Y1은 화학식 10, Y2는 H이며, m과 n은 4이다(m=4; n=4; X1=화학식 11; X2=화학식 11; Y1=화학식 10; Y2=H).
펩타이드 유도체 4의 HPLC 정제 결과: Rt(Retention time)=3.36분(HPLC에서 혼합용매의 조건: 0.01% TFA(트리플루오르 아세트산)를 함유하는 5% 내지 100%의 아세토니트릴/물로부터 30분에 걸쳐 다양한 농도 구배); MS(ESI, Electrospray ionization)m/e, [M(분자량)+H(수소)]+= 623, 단 본 펩타이드 유도체 4에서 수소를 뺀 분자량의 이론치는 622.6이다.
펩타이드 유도체 5의 합성:
펩타이드 유도체 1의 합성 과정과 동일하게 Fmoc-Lys(Fmoc)-OH이 결합된 레진에 대하여 20% 피페리딘 DMF 용액 (30 ml)과 2회 반응 시켜 두 개의 Fmoc 보호기를 탈 보호시키고 Fmoc-Lys(Fmoc)-OH 아미노산을 위와 동일한 커플링 반응 조건을 적용하여 실시하였다. 커플링 반응이 종결한 후, 충분히 DMF 용매를 이용하여 세척하고 20% 피페리딘 DMF 용액 (30 ml)과 2회 반응시켜 Fmoc 보호기를 탈 보호시켰다. 탈 보호된 amine기에 대하여 N-알킬화 반응을 진행하였고 탈 레진화, 펩타이드의 침전물 수거 및 동일한 방법으로 정제를 거쳐 목적하는 펩타이드 유도체 5를 제조하였다. 이렇게 제조된 펩타이드 유도체 5는 상기 표 1의 화합물 번호 5와 같은 것으로서, 화학식 1에서의 X1은 화학식 10, X2는 H, Y1은 화학식 10, Y2는 H이며, m과 n은 4이다(m=4; n=4; X1=화학식 10; X2=H; Y1=화학식 10; Y2=H).
펩타이드 유도체 5의 HPLC 정제 결과: Rt(Retention time)=3.22분(HPLC에서 혼합용매의 조건: 0.01% TFA(트리플루오르 아세트산)를 함유하는 5% 내지 100%의 아세토니트릴/물로부터 30분에 걸쳐 다양한 농도 구배); MS(ESI, Electrospray ionization)m/e, [M(분자량)+H(수소)]+= 867, 단 본 펩타이드 유도체 5에서 수소를 뺀 분자량의 이론치는 866.8이다.
펩타이드 유도체 6의 합성:
펩타이드 유도체 1의 합성 과정과 동일하게 Fmoc-Orn(Mtt)-OH을 최초 레진에 로딩 시킨 고, 20% 피페리딘 DMF 용액 (30 ml)과 2회 반응시켜 Fmoc 보호기를 탈 보호시켰다. 탈 보호된 amine기에 대하여 위와 동일한 방법으로 Fmoc-Orn(Mtt)-OH을 커플링 시키고 오르니틴(Orn) 아미노산 잔기의 Mtt(N-methyltrityl) 보호기는 1% TFA MC 용액(30 ml)을 첨가하여 1시간 정도 반응시켜 선택적인 탈 보호를 유도하였다. 선택적으로 Mtt 보호기를 탈 보호시키고 Lys 잔기의 아민기에 브로모아세틱산(bromoacetic acid) 및 트리에틸아민을 이용하여 N-알킬화 반응을 시킨 후, 충분히 DMF 용매를 이용하여 세척하고 20% 피페리딘 DMF 용액 (30 ml)과 2회 반응시켜 Fmoc 보호기를 탈 보호시켰다. 탈 레진화, 펩타이드의 침전물 수거 및 동일한 방법으로 정제를 거쳐 목적하는 펩타이드 유도체 6를 제조하였다. 이렇게 제조된 펩타이드 유도체 6은 상기 표 1의 화합물 번호 6과 같은 것으로서, 화학식 1에서의 X1은 화학식 9, X2는 H, Y1과 Y2는 화학식 11이며, m과 n은 3이다(m=3; n=3; X1=화학식 9; X2=H; Y1=화학식 11; Y2=화학식 11).
펩타이드 유도체 6의 HPLC 정제 결과: Rt(Retention time)=3.43분(HPLC에서 혼합용매의 조건: 0.01% TFA(트리플루오르 아세트산)를 함유하는 5% 내지 100%의 아세토니트릴/물로부터 30분에 걸쳐 다양한 농도 구배); MS(ESI, Electrospray ionization)m/e, [M(분자량)+H(수소)]+= 479, 단 본 펩타이드 유도체 6에서 수소를 뺀 분자량의 이론치는 478.5이다.
펩타이드 유도체 7의 합성:
펩타이드 유도체 1의 합성 과정과 동일하게 Fmoc-Orn(Mtt)-OH을 최초 레진에 로딩 시키고, 20% 피페리딘 DMF 용액 (30 ml)과 2회 반응시켜 Fmoc 보호기를 탈 보호시켰다. 탈 보호된 아민기에 대하여 위와 동일한 방법으로 Fmoc-Orn(Mtt)-OH을 커플링 시키고 오르니틴(Orn) 아미노산 잔기의 Mtt(N-methyltrityl) 보호기는 1% TFA MC 용액(30 ml)을 첨가하여 1시간 정도 반응시켜 선택적인 탈 보호를 유도하였다. 선택적으로 Mtt 보호기를 탈 보호시키고 Lys 잔기의 아민기에 브로모아세틱산(bromoacetic acid) 및 트리에틸아민을 이용하여 N-알킬화 반응을 시킨 후, 충분히 DMF 용매를 이용하여 세척하고 20% 피페리딘 DMF 용액 (30 ml)과 2회 반응시켜 Fmoc 보호기를 탈 보호 시켰다. Fmoc-Orn(Boc)-OH을 동일한 커플링 방법으로 커플링을 완료한 후, 20% 피페리딘 DMF 용액 처리를 통해 Fmoc 보호기를 탈 보호 시키고 위와 동일한 방법으로 N-알킬화 반응을 수행하였다. 탈 레진화, 펩타이드의 침전물 수거 및 동일한 방법으로 정제를 거쳐 목적하는 펩타이드 유도체 7를 제조하였다. 이렇게 제조된 펩타이드 유도체 7은 상기 표 1의 화합물 번호 7과 같은 것으로서, 화학식 1에서의 X1은 화학식 8, X2는 H, Y1과 Y2는 화학식 11이며, m과 n은 3이다(m=3; n=3; X1=화학식 8; X2=H; Y1=화학식 11; Y2=화학식 11).
펩타이드 유도체 7의 HPLC 정제 결과: Rt(Retention time)=3.40 분(HPLC에서 혼합용매의 조건: 0.01% TFA(트리플루오르 아세트산)를 함유하는 5% 내지 100%의 아세토니트릴/물로부터 30분에 걸쳐 다양한 농도 구배); MS(ESI, Electrospray ionization)m/e, [M(분자량)+H(수소)]+= 479, 단 본 펩타이드 유도체 7에서 수소를 뺀 분자량의 이론치는 478.5이다.
펩타이드 유도체 8의 합성:
펩타이드 유도체 7 제조방법과 마찬가지로 Fmoc-Orn(Mtt)-OH을 레진에 커플링시키고, Fmoc 보호기를 탈 보호 반응, Fmoc-Orn(Mtt)-OH 아미노산을 커플링 반응, Fmoc 보호기 탈 보호 반응 및 Mtt 보호기 탈 보호 반응을 순차적으로 진행시켰다. 탈 보호된 amine 기에 N-알킬화 반응을 진행한 후, 탈 레진화, 펩타이드의 침전물 수거 및 동일한 방법으로 정제를 거쳐 목적하는 펩타이드 유도체 8를 제조하였다. 이렇게 제조된 펩타이드 유도체 8은 상기 표 1의 화합물 번호 8과 같은 것으로서, 화학식 1에서의 X1은 화학식 10, X2는 H, Y1과 Y2는 화학식 11이며, m과 n은 3이다(m=3; n=3; X1=화학식 10; X2=H; Y1=화학식 11; Y2=화학식 11).
펩타이드 유도체 8의 HPLC 정제 결과: Rt(Retention time)=3.40분(HPLC에서 혼합용매의 조건: 0.01% TFA(트리플루오르 아세트산)를 함유하는 5% 내지 100%의 아세토니트릴/물로부터 30분에 걸쳐 다양한 농도 구배); MS(ESI, Electrospray ionization)m/e, [M(분자량)+H(수소)]+= 595, 단 본 펩타이드 유도체 8에서 수소를 뺀 분자량의 이론치는 594.5이다.
펩타이드 유도체 9의 합성:
펩타이드 유도체 7 제조방법과 마찬가지로 Fmoc-Orn(Mtt)-OH을 레진에 커플링시키고, Mtt 보호기의 선택적 탈 보호 반응을 진행한 후, Fmoc-Orn(Fmoc)-OH 아미노산 커플링, Fmoc 보호기 탈 보호 반응, N-알킬화 반응을 진행하였다. 탈 레진화, 펩타이드의 침전물 수거 및 동일한 방법으로 정제를 거쳐 목적하는 펩타이드 유도체 9를 제조하였다. 이렇게 제조된 펩타이드 유도체 9는 상기 표 1의 화합물 번호 9와 같은 것으로서, 화학식 1에서의 X1과 X2는 화학식 11, Y1은 화학식 10, Y2는 H이며, m과 n은 3이다(m=3; n=3; X1=화학식 11; X2=화학식 11; Y1=화학식 10; Y2=H).
펩타이드 유도체 9의 HPLC 정제 결과: Rt(Retention time)=3.44분(HPLC에서 혼합용매의 조건: 0.01% TFA(트리플루오르 아세트산)를 함유하는 5% 내지 100%의 아세토니트릴/물로부터 30분에 걸쳐 다양한 농도 구배); MS(ESI, Electrospray ionization)m/e, [M(분자량)+H(수소)]+= 595, 단 본 펩타이드 유도체 9에서 수소를 뺀 분자량의 이론치는 594.5이다.
펩타이드 유도체 10의 합성:
펩타이드 유도체 5의 합성 방법과 동일하게 Fmoc-Orn(Fmoc)-OH 아미노산의 커플링 반응, Fmoc 보호기의 탈보호 반응, Fmoc-Orn(Fmoc)-OH 아미노산의 커플링 반응, Fmoc 보호기의 탈보호 반응을 순차적으로 진행시킨 후, N-알킬화 반응을 유도하여 목적하는 펩타이드 유도체 10을 제조하였다. 이렇게 제조된 펩타이드 유도체 10은 상기 표 1의 화합물 번호 10과 같은 것으로서, 화학식 1에서의 X1은 화학식 10, X2는 H, Y1은 화학식 10, Y2는 H이며, m과 n은 3이다(m=3; n=3; X1=화학식 10; X2=H; Y1=화학식 10; Y2=H).
펩타이드 유도체 10의 HPLC 정제 결과: Rt(Retention time)=3.25분(HPLC에서 혼합용매의 조건: 0.01% TFA(트리플루오르 아세트산)를 함유하는 5% 내지 100%의 아세토니트릴/물로부터 30분에 걸쳐 다양한 농도 구배); MS(ESI, Electrospray ionization)m/e, [M(분자량)+H(수소)]+= 825, 단 본 펩타이드 유도체 10에서 수소를 뺀 분자량의 이론치는 824.7이다.
실시예 2
상기 실시예 1에 의하여 합성된 펩타이드 유도체 1 내지 10 각각을 글리세린 5% 용액(펩타이드 0.5 g/글리세린 10 ml)에 녹여 펩타이드 용액을 제조한 후, 얻어진 펩타이드 용액 1 ml씩을 화장솜(4 cm2)에 적하하였다.
실시예 3
㈜피코스텍에서 공급받은 크림 제형 (정제수, 글리세린, 사이클로 펜타실록산, 사이클로헥사실록산, 부틸렌글라이콜, 카프릴릭/카프릭 트리 글리세라이드, 하이드로제네이트드폴리데센, 세틸에틸헥사노에이트, 세테아릴 알코올, 글리세릴스테아레이트, 하이드로제네이티드식물성오일, 폴리글리세릴-3 메칠글루코스디스테아레이트, 자몽추출물, C14-22알코올, C12-20알킬글루코사이드, 비즈왁스, 글리세릴스테아레이트, 피이지-100스테아레이트, 바실러스/콩/폴릭 애씨드발효추출물, 피리독신에이치씨엘, 마치현추출물, 디메치콘, 베타인, 페녹시에탄올, 1,2-헥산디올, 카보머, 소듐폴리아크릴레이트, 포타슘 하이드록사이드, 트리소듐이디티에이 함유 제형) 99.9 g에 상기 실시예 1에 의하여 합성된 펩타이드 유도체 중에서 5 및 10에 따른 펩타이드를 제조한 후 각각 0.1g을 상기 제형에 더하여 피부 보습 펩타이드 화장품을 제조하였다.
비교예 1
상기 실시예 2와는 달리 어떠한 처리도 하지 않고 글리세린 1ml를 화장솜(4 cm2)에 적하한 것을 본 비교예 1로 하였다.
비교예 2
상기 실시예 3과는 달리 어떠한 처리도 되지 않은 ㈜피코스텍에서 공급받은 크림 제형 (정제수, 글리세린, 사이클로 펜타실록산, 사이클로헥사실록산, 부틸렌글라이콜, 카프릴릭/카프릭 트리 글리세라이드, 하이드로제네이트드폴리데센, 세틸에틸헥사노에이트, 세테아릴 알코올, 글리세릴스테아레이트, 하이드로제네이티드식물성오일, 폴리글리세릴-3 메칠글루코스디스테아레이트, 자몽추출물, C14알코올, C12알킬글루코사이드, 비즈왁스, 글리세릴스테아레이트, 피이지-100스테아레이트, 바실러스/콩/폴릭 애씨드발효추출물, 피리독신에이치씨엘, 마치현추출물, 디메치콘, 베타인, 페녹시에탄올, 1,2-헥산디올, 카보머, 소듐폴리아크릴레이트, 포타슘 하이드록사이드, 트리소듐이디티에이 함유 제형)의 화장품을 본 비교예 2로 하였다.
< 실험예 1: 실시예 2에 따른 펩타이드 유도체 1 내지 10과 비교예 1의 보습효과 측정>
상기 실시예 2에 의하여 제조된 각각의 펩타이드 용액이 적하된 화장솜 및 비교예 1에 따른 화장솜을 24 ℃, 45~50% RH 하에서 30분 내지 1시간 간격으로 중량의 변화를 측정하였고 세 가지 측정 샘플의 무게 변화에 대한 평균값을 도출하여 통계처리 하였다. 이에 대한 결과는 도 1에 나타내었다.
도 1에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 펩타이드 유도체 1 내지 10의 경우 모두에서 비교예 1의 경우보다 우수한 보습능력을 발휘함을 확인할 수 있었다. 또한 이에 더하여 분자 내 N-알킬화가 가장 많이 치환된 펩타이드 유도체 5 및 펩타이드 유도체 10의 경우에는 그 수분 보유 능력이 현저함을 보여주고 있음을 확인하였다. 그러므로 본 실험예 1의 결과에 의해, 본 발명에서 제시한 펩타이드 유도체들의 보습 능력이 우수함을 확인할 수 있다.
< 실험예 2: 실시예 3과 비교예 2에 따른 화장품간 전기전도도 측정>
상기 실시예 3에 따른 펩타이드 유도체 5 및 펩타이드 유도체 10을 추가한 화장품과 상기 비교예 2에 따른 화장품을 각각 피시험자 하박 안쪽에 일정량 (0.03g/16m2)을 도포한 후 잘 문지르고 나서, 도포전, 도포 1시간 후, 도포 2시간 후, 도포 3시간 후에 커리지 카자카 저먼(Courage+Khazaka Germany) 사의 코네오미터(Corneometer) CM825를 이용해 피부 전기 전도도를 측정하여 피부 수분 함량을 측정하였으며, 그 측정 결과를 도 2에 나타냈다.
도포 당시 3가지 제형 모두에서 펴발림성이나 끈적임 등에 있어서 차이가 나타나지 않았으며, 도포 이후에 홍반, 가려움 등과 같은 부작용이 나타나지 않았다. 다만, 도 2에서 확인할 수 있는 바와 같이 실시예 3에 따른 펩타이드 유도체 5 및 10에 의한 피부 보습 화장품의 경우가 비교예 2에 비해 3시간이 경과된 후에도 도포 직후부터 우수했던 전기전도도를 거의 그대로 유지하고 있음이 확인되었다. 그러므로 이를 통하여 본 발명에 따른 피부 보습 펩타이드 유도체에 의해 합성된 펩타이드를 활용하게 되면 그 보습 효과가 우수할 뿐만 아니라, 보습 효과의 유지력도 우수함이 확인된 것이다.
상기에서는 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 설명하였지만, 본 발명은 이에 한정되는 것은 아니고, 본 발명의 기술 사상 범위 내에서 여러 가지로 변형하여 실시하는 것이 가능하고, 이 또한 첨부된 특허 청구 범위에 속하는 것은 당연하다.

Claims (8)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 피부 보습 펩타이드 유도체 또는 허용 가능한 그의 염.
    [화학식 1]
    Figure 112013113808391-pat00024

    (단, 상기 화학식 1에서 X1, X2, Y1, 및 Y2는 각각 독립적으로 H 또는 하기 화학식 2~3으로 표시되는 치환기 중 어느 하나이고, X1, X2, Y1, 및 Y2 중 적어도 하나는 H가 아니고, 상기 n은 1~5의 정수이고, m은 각각 독립적으로 1~5의 정수이며, 하기 화학식 2의 A1, A2, A3, 및 A4는 각각 독립적으로 H 또는 하기 화학식 4~7로 표시되는 치환기 중 어느 하나이고, A1, A2, A3, 및 A4 중 적어도 하나는 H가 아니고, m은 각각 독립적으로 1~5의 정수이다.)
    [화학식 2]
    Figure 112013113808391-pat00025

    [화학식 3]
    Figure 112013113808391-pat00026

    [화학식 4]
    Figure 112013113808391-pat00027

    [화학식 5]
    Figure 112013113808391-pat00028

    [화학식 6]
    Figure 112013113808391-pat00029

    [화학식 7]
    Figure 112013113808391-pat00030

  2. 제 1항에 있어서,
    상기 피부 보습 펩타이드 유도체의 분자량은 500 내지 1000인 것을 특징으로 하는 피부 보습 펩타이드 유도체 또는 허용 가능한 그의 염.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 n은 3 또는 4의 정수, m은 3 또는 4의 정수인 것을 특징으로 하는 피부 보습 펩타이드 유도체 또는 허용 가능한 그의 염.
  4. 제 1항에 있어서,
    상기 화학식 1에서 X1, X2, Y1, 및 Y2는 각각 독립적으로 H 또는 상기 화학식 4 내지 7로 표시되는 치환기 중 어느 하나이고, X1, X2, Y1, 및 Y2 중 적어도 하나는 H가 아니고, 상기 n은 1 내지 5의 정수이고, m은 각각 독립적으로 1 내지 5의 정수인 것을 특징으로 하며, 하기 화학식 8 내지 화학식 11(단, 하기 화학식 8 내지 화학식 11에서 m은 각각 독립적으로 1~5의 정수이다.)인 것을 특징으로 하는 피부 보습 펩타이드 유도체 또는 허용 가능한 그의 염.
    [화학식 8]
    Figure 112013113808391-pat00031

    [화학식 9]
    Figure 112013113808391-pat00032

    [화학식 10]
    Figure 112013113808391-pat00033

    [화학식 11]
    Figure 112013113808391-pat00034

  5. 제 4항에 있어서,
    상기 n은 3 또는 4의 정수, m은 3 또는 4의 정수인 것을 특징으로 하는 피부 보습 펩타이드 유도체 또는 허용 가능한 그의 염.
  6. 제 1항에 있어서,
    상기 화학식 1의 화합물은 펩타이드 유도체 1(단, m=4; n=4; X1=화학식 9; X2=H; Y1=화학식 11; Y2=화학식 11), 펩타이드 유도체 2(단, m=4; n=4; X1=화학식 8; X2=H; Y1=화학식 11; Y2=화학식 11), 펩타이드 유도체 3(단, m=4; n=4; X1=화학식 10; X2=H; Y1=화학식 11; Y2=화학식 11), 펩타이드 유도체 4(단, m=4; n=4; X1=화학식 11; X2=화학식 11; Y1=화학식 10; Y2=H), 펩타이드 유도체 5(단, m=4; n=4; X1=화학식 10; X2=H; Y1=화학식 10; Y2=H), 펩타이드 유도체 6(단, m=3; n=3; X1=화학식 9; X2=H; Y1=화학식 11; Y2=화학식 11), 펩타이드 유도체 7(단, m=3; n=3; X1=화학식 8; X2=H; Y1=화학식 11; Y2=화학식 11), 펩타이드 유도체 8(단, m=3; n=3; X1=화학식 10; X2=H; Y1=화학식 11; Y2=화학식 11), 펩타이드 유도체 9(단, m=3; n=3; X1=화학식 11; X2=화학식 11; Y1=화학식 10; Y2=H) 및 펩타이드 유도체 10(단, m=3; n=3; X1=화학식 10; X2=H; Y1=화학식 10; Y2=H) 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 피부 보습 펩타이드 유도체 또는 허용 가능한 그의 염.
  7. 제 1항 내지 제 6항 중 어느 한 항에 따른 상기 피부 보습 펩타이드 유도체에 선택적으로 N-말단 또는 C-말단에 아미드 결합을 통해 2 내지 6개의 아미노산이 결합한 피부 보습 펩타이드.
  8. 제 1항 내지 제 6항 중 어느 한 항에 따른 피부 보습 펩타이드 유도체를 사용하여 피부 보습 펩타이드를 제조하는 방법.
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