KR20040075360A - 살균 화합물 및 이의 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 화학식 I의 신규한 살균 화합물에 관한 것이다.

화학식 I

위의 화학식 I에서,

R은 H 또는 CH₃이다.

말라야마이신 A 및 데스메틸말라야마이신 A로 불리는 두 가지 이성체들이 특히 유용하다. 이들 이성체는 스트렙토마이세스 말레이지엔시스(Streptomyces malaysiensis) 종으로부터 이전에 공지되지 않은 미생물 균주를 조절된 조건하에 성장시킴에 의해 제조할 수 있으며, NMR 및 질량 분광학 데이타에 의해 특징화된다. 이들 화합물은 항진균 활성, 항바이러스 활성 및 항암 활성을 포함하는 살균 활성을 가지며, 농학, 원예학, 동물 및 인간 보건학에서 사용하기에 특히 유용하다.

Description

살균 화합물 및 이의 제조방법{Biocidal compounds and their preparation}

본 발명은 신규한 살균 화합물 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 보다 특히, 본 발명은 스트렙토마이세스 유기체(Streptomyces organism)를 배양하여 수득할 수 있는 살균 화합물; 살균제로서의 당해 화합물의 용도; 당해 화합물을 살균 유효량 함유하는 조성물; 당해 화합물을 사용하여 병원균을 퇴치하는 방법; 신규한 스트렙토마이세스 말레이지엔시스(Streptomyces malaysiensis) 균주 및 이의 돌연변이체에 관한 것이다.

본 발명의 제1 국면에 있어서, 화학식 I의 신규한 살균 화합물을 제공한다.

위의 화학식 I에서,

R은 H 또는 CH₃이다.

R이 H인 화합물과 R이 CH₃인 화합물은 이전에 분리되지 않은 신규한 화합물들이다. 이들 화합물은 본원의 실시예에 기재된 NMR 및 질량 분광학 데이타에 의해 특징화된다. 이들 화합물은 스트렙토마이세스 말레이지엔시스 종으로부터 이전에 공지되지 않은 미생물 균주를 조절된 조건하에 성장시킴으로써 제조할 수 있다. 본 발명의 화합물은 살균 활성, 및 특히 항진균 활성, 항바이러스 활성 및 항암 활성을 가지며, 농학, 원예학, 동물 및 인간 보건학에서 사용하기에 특히 유용하다. 당해 화합물은 또한 추가의 활성 화합물의 제조시에 중간체로서 사용될 수 있다. 화학식 I의 화합물은 발효에 의해 수득될 수 있으며 본원에 기재되어 있는 바와 같은 실질적으로 순수한 형태로 회수될 수 있다.

화학식 I의 화합물은 6개의 비대칭 중심을 가지며 하나 이상의 이성체 형태로 존재할 수 있다. 본 발명은 모든 이성체, 개별적으로 또는 하나 이상의 형태의 혼합물을 포함한다. 본 발명의 화합물은 다수의 토토머 형태로 존재할 수 있으며 당해 발명은 모든 형태를 포함한다.

화학식 II의 화합물 및 화학식 III의 화합물이 특히 유용하며, 이들은 본원에서 각각 말라야마이신 A 및 데스메틸말라야마이신 A로 불린다.

화학식 II의 화합물 및 화학식 III의 화합물은 교대로 토토머 형태로 존재할 수 있으며 본 발명은 당해 교대 형태를 포함한다.

화학식 I의 화합물은 살균제이다. 이들은, 예를 들면, AIDS 질환과 관련된 인간 면역결핍 바이러스에 대해 항바이러스 활성을 나타내는 활성 항바이러스제이다. 이들은 또한 항암 특성을 갖는 것으로 나타낸다. 예를 들면, 이들은 암 세포의 세포 증식에 대해 억제 효과를 나타낸다. 본원에서 사용되는 바와 같은 용어, "살균"이란 병원균에 대한 활성을 포함하는 것으로 사용되며 항바이러스 활성, 항진균 활성 및 항암 활성을 포함한다. 특히 식물병원성 진균에 대한 항진균제로서의 상기 화합물의 사용이 특히 중요하다.

화학식 I의 화합물은 다음의 식물 병원균 하나 이상을 살균하는 데 사용될 수 있다: 쌀 및 밀에 대한 Pyricularia oryzae(Magnaporthe grisea) 및 기타 숙주들에 대한 기타 Pyricularia spp.; 밀에 대한 Puccinia triticina(또는 recondita), Puccinia striiformis 및 보리에 대한 Puccinia hordei, Puccinia striiformis 및 기타 녹균(rust), 및 기타 숙주들(예를 들면, 잔디, 호밀, 커피, 서양배나무, 사과, 땅콩, 사탕무, 채소 및 관상 식물)에 대한 녹균; 표주박(예: 멜론)에 대한 Erysiphe cichoracearum; 보리, 밀, 호밀 및 잔디에 대한 Blumeria(또는 Erysiphe) graminis(분말 백분병) 및 각종 숙주들에 대한 기타 분말 백분병, 예를 들면, 홉에 대한 Sphaerotheca macularis, 표주박(예: 오이)에 대한 Sphaerotheca fusca(Sphaerotheca fuliginea), 토마토, 가지 및 피망에 대한 Leveillula taurica, 사과에 대한 Podosphaera leucotricha 및 덩굴에 대한 Uncinula necator; 시리얼(예: 밀, 보리, 호밀), 잔디 및 기타 숙주들에 대한 Cochliobolus spp., Helminthosporium spp., Drechslera spp.(Pyrenophora spp.), Rhynchosporium spp., Mycosphaerella graminicola(Septoria tritici) 및 Phaeosphaeria nodorum(Stagonospora nodorum 또는 Septoria nodorum), Pseudocercosporella herpotrichoides 및 Gaeumannomyces gramminis; 땅콩에 대한 Cercospora arachidicola 및 Cercosporidium personatum 및 기타 숙주들(예: 사탕무, 바나나, 대두 및 쌀)에 대한 Cercospora spp.; 토마토, 딸기, 채소, 덩굴 및 기타 숙주들에 대한 Botrytis cinerea(회색 금형) 및 기타 숙주들에 대한 기타 Botrytis spp.; 채소(예: 당근), 평지씨유, 사과, 토마토, 감자, 시리얼(예: 밀) 및 기타 숙주들에 대한 Alternaria spp.; 사과, 서양배나무, 핵과, 땅콩나무 및 기타 숙주들에 대한 [Venturia inaequalis(옴)를 포함한] Venturia spp.; 시리얼(예: 밀) 및 토마토를 포함한 범위의 숙주들에 대한 Cladosporium spp.; 핵과, 땅콩나무 및 기타 숙주들에 대한 Monilinia spp.; 토마토, 잔디, 밀, 표주박 및 기타 숙주들에 대한 Didymella spp.; 평지씨유, 잔디, 쌀, 감자, 밀 및 기타 숙주들에 대한 Phoma spp.; 밀, 목재 및 기타 숙주들에 대한 Aspergillus spp. 및 Aureobasidiumspp.; 완두콩, 서양배나무, 양파 및 기타 숙주들에 대한 Ascochyta spp.; 사과 및 서양배나무에 대한 여름 질병[예: 쓴 부패병(Glomerella cingulata), 검은색 부패병 또는 frogeye 잎 부패병(Botryosphaeria obtusa), 브룩스 열매 반점(Mycosphaerella pomi), 개잎갈나무 사과 녹균(Gymnosporangium juniperi-virginianae), 검댕 병반(Gloeodes pomigena), 매점병(Schizothyrium pomi) 및 백색 부패병(Botryosphaeria dothidea]; 덩굴에 대한 Plasmopara viticola; 기타 솜털 백분병, 예를 들면, 양상치에 대한 Bremia lactucae, 대두, 토마토, 양파 및 기타 숙주들에 대한 Peronospora spp., 홉에 대한 Pseudoperonospora humuli 및 표주박에 대한 Pseudoperonospora cubensis; 잔디 및 기타 숙주들에 대한 (Pythium ultimun을 포함한) Pythium spp.; 감자 및 토마토에 대한 Phytophthora infestans 및 채소, 딸기, 아보카도, 고추, 관상 식물, 담배, 코코아 및 기타 숙주들에 대한 기타 Phytophthora spp.; 쌀 및 잔디에 대한 Thanatephorus cucumeris 및 각종 숙주들(밀 및 보리, 땅콩, 채소, 면 및 잔디)에 대한 기타 Rhizoctonia spp.; 잔디, 땅콩, 감자, 평지씨유 및 기타 숙주들에 대한 Sclerotinia spp.; 잔디, 땅콩 및 기타 숙주들에 대한 Sclerotium spp.; 쌀에 대한 Gibberela fujikuroi; 잔디, 커피 및 채소를 포함한 범위의 숙주들에 대한 Colletotrichum spp.; 잔디에 대한 Laetisaria fuciformis; 바나나, 땅콩, 감귤류, 피칸, 파파야 및 기타 숙주들에 대한 Mycosphaerella spp.; 감귤류, 대두, 멜론, 서양배나무, 루핀 및 기타 숙주들에 대한 Diaporthe spp.; 감귤류, 덩굴, 올리브, 피칸, 장미 및 기타 숙주들에 대한 Elsinoe spp.; 홉, 감자 및 토마토를 포함하는 범위의 숙주들에 대한 Verticilliumspp.; 평지씨유 및 기타 숙주들에 대한 Pyrenopeziza spp.; 혈관 스트리크 다이백(vascular streak dieback) 유발 코코아에 대한 Oncobasidium theobromae; 특히 밀, 보리, 잔디 및 옥수수를 제외한 각종 숙주들에 대한 Fusarium spp., Typhula spp., Microdochium nivale, Ustilago spp., Urocystis spp., Tilletia spp. 및 Claviceps purpurea; 사탕무, 보리 및 기타 숙주들에 대한 Ramularia spp.; 특히 과일의 수확후 질병(예를 들면, 오렌지에 대한 Penicillium digitatum, Penicillium italicum 및 Trichoderma viride, 바나나에 대한 Colletotrichum musae 및 Gloeosporium musarum 및 포도나무에 대한 Botrytis cinerea); 덩굴에 대한 기타 병원균, 현저하게는 Eutypa lata, Guignardia bidwellii, Phellinus igniarus, Phomopsis viticola, Pseudopeziza tracheiphila 및 Guignardia bidwelli, Phellinus igniarus, Phomopsis viticola, Pseudopeziza tracheiphila 및 Stereum hirsutum; 나무 또는 목재에 대한 기타 병원균(예: Lophodermium seditiosum), 현저하게는 Cephaloascus fragrans, Ceratocysis spp., Ophiostoma piceae, Penicillium spp., Trichoderma pseudokoningii, Trichoderma viride, Trichoderma harzianum, Aspergillus niger, Leptographium lindbergi 및 Aureobasidium pullulans; 및 바이러스 질환의 진균 매개체[예: 보리 황색 모자이크 바이러스(BYMV))의 매개체로서의 시리얼에 대한 Polymyxa graminis 및 근조병의 매개체로서의 사탕무에 대한 Polymyxa betae].

화학식 I의 화합물은 하나 이상의 진균에 대해 활성인 식물 조직에서 꼭지방향으로, 염기방향으로 또는 국부적으로 이동할 수 있다.

따라서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 살진균 유효량 또는 이를 포함하는 조성물을 식물, 식물 종자, 식물 또는 종자의 서식지, 토양 또는 임의의 기타 식물 성장 배지, 예를 들면, 영양 용액에 살포함을 포함하여, 식물병원성 진균을 퇴치 또는 방제하는 방법을 제공한다.

본원에서 사용되는 "식물"이란 묘목, 관목 및 나무를 포함한다. 또한, 본 발명의 살진균 방법은 보호성, 치유성, 전신성, 살충성 및 항포자형성 처리법을 포함한다.

화학식 I의 화합물은 바람직하게는 조성물 형태로 농학, 원예학 및 잔디밭용으로 사용된다.

화학식 I의 화합물을 식물, 식물 종자, 식물 또는 종자의 서식지, 토양 또는 임의의 기타 식물 성장 배지에 살포하기 위해, 화학식 I의 화합물은 통상 화학식 I의 화합물 이외에, 적합한 불활성 희석제 또는 담체 및, 임의로, 표면 활성제(SFA)를 포함하는 조성물로 제형화된다. SFA는 계면 장력을 저하시키고 이로써 기타 특성들(예: 분산성, 유화성 및 습윤성)을 변화시킴으로써 계면(예: 액체/고체, 액체/공기 또는 액체/액체 계면)의 특성을 개질시킬 수 있는 화학약품이다. 모든 조성물(토양 및 액체 제형 모두)은 화학식 I의 화합물을 0.0001 내지 95중량%, 보다 바람직하게는 1 내지 85중량%, 예를 들면, 5 내지 60중량% 포함하는 것이 바람직하다. 당해 조성물은 일반적으로 진균을 방제하기 위해 화학식 I의 화합물이 0.1g 내지 10kg/ha, 바람직하게는 1g 내지 6kg/ha, 보다 바람직하게는 1g 내지 1kg/ha의 비율로 살포되도록 사용된다.

종자 드레싱에서 사용되는 경우, 화학식 I의 화합물은 종자 1kg당 0.0001 내지 10g(예를 들면, 0.001g 또는 0.05g), 바람직하게는 0.005 내지 10g, 보다 바람직하게는 0.005 내지 4g의 비율로 사용된다.

또 다른 국면에 있어서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 살균 유효량 및 이를 위한 적합한 담체 또는 희석제를 포함하는 살균 조성물을 제공한다.

당해 국면의 바람직한 양태에 있어서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 항바이러스 유효량 및 이를 위한 적합한 담체 또는 희석제를 포함하는 항바이러스 조성물을 제공한다.

당해 국면의 추가로 바람직한 양태에 있어서, 본 발명은 암 세포의 증식을 감소시키는 데 유효한 양의 화학식 I의 화합물 및 이를 위한 적합한 담체 또는 희석제를 포함하는 항암 조성물을 제공한다.

당해 국면의 특히 바람직한 양태에 있어서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 살진균 유효량과 이의 적합한 담체 또는 희석제를 포함하는 살진균 조성물을 제공한다.

여전히 추가의 국면에 있어서, 본 발명은 바이러스 또는 바이러스의 서식지를 화학식 I의 화합물을 포함하는 조성물 항바이러스 유효량으로 처리함을 포함하여, 바이러스를 퇴치 및 방제하는 방법을 제공한다.

여전히 추가의 국면에 있어서, 본 발명은 화학식 I의 화합물을 포함하는 조성물을 암 세포의 증식을 감소시키기에 유효한 양으로 암 세포 또는 암 세포의 서식지를 처리함을 포함하여, 암 세포를 퇴치 및 방제하는 방법을 제공한다.

여전히 추가로 바람직한 국면에 있어서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 살진균 유효량을 포함하는 조성물을 진균 또는 진균의 서식지를 처리함을 포함하여, 진균을 퇴치 및 방제하는 방법을 제공한다.

당해 조성물은 분진성 분말(DP), 가용성 분말(SP), 수용성 과립(SG), 수분산성 과립(WG), 습윤성 분말(WP), 과립(GR)(느리게 또는 신속하게 방출됨), 가용성 농축액(SL), 오일 혼화성 액체(OL), 초저용적 액체(UL), 유화성 농축액(EC), 분산성 농축액(DC), 유액[수중유(EW) 및 유중수(EO) 모두], 미세 유액(ME), 현탁 농축액(SC), 에어로졸, 안개/연기 제형, 캡슐 현탁액(CS) 및 종자 처리 제형을 포함하는, 다수의 제형 형태로부터 선택될 수 있다. 임의의 경우에 선택된 제형 형태는 직면한 특별한 목적 및 화학식 I의 화합물의 물리적, 화학적 및 생물학적 특성에 의존한다.

분진성 분말(DP)은 화학식 I의 화합물을 하나 이상의 고체 희석제(예: 천연 점도, 카올린, 피로필라이트, 벤토나이트, 알루미나, 몬모릴로나이트, 규조토, 백악, 인산칼슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 황, 석회, 밀가루, 활석 및 기타 유기 및 무기 고체 담체)와 혼합하고 당해 혼합물을 미분으로 기계적으로 분쇄함에 의해 제조할 수 있다.

가용성 분말(SP)은 화학식 I의 화합물을 하나 이상의 수용성 무기염(예: 중탄산나트륨, 탄산나트륨 또는 황산마그네슘) 또는 하나 이상의 수용성 유기 고체(예: 폴리사카라이드) 및, 임의로, 하나 이상의 습윤제, 하나 이상의 분산제 또는 이들의 혼합물과 혼합하여 수분산능/용해능을 향상시킴에 의해 제조할 수 있다.당해 혼합물은 미분으로 분쇄된다. 유사한 조성물은 또한 과립화되어 수용성 과립(SG)을 형성할 수 있다.

습윤성 분말(WP)은 화학식 I의 화합물을 하나 이상의 고체 희석제 또는 담체, 하나 이상의 습윤제 및, 바람직하게는 하나 이상의 분산제 및, 임의로 하나 이상의 현탁제와 혼합하여 액체 속에서 분산을 촉진시킴에 의해 제조할 수 있다. 당해 혼합물은 미분으로 분쇄된다. 유사한 조성물은 또한 과립화되어 수분산성 과립(WG)을 형성할 수 있다.

과립(GR)은 화학식 I의 화합물과 하나 이상의 분말 고체 희석제 또는 담체와의 혼합물을 과립화하여 형성할 수 있거나, 화학식 I의 화합물(또는 적합한 제제 중의 이의 용액)을 다공성 과립 물질[예: 부석, 아타펄자이트 점토(attapulgite clay), 풀러즈 어쓰(fuller's earth), 규조토 또는 그라운드 콘 코드(ground corn cob)] 속에서 흡수함에 의해 또는 화학식 I의 화합물(또는 적합한 제제 중의 이의 용액)을 경질 코어 물질(예: 모래, 규산염, 무기 탄산염, 황산염 또는 인산염)에 흡수하고, 경우에 따라, 건조시킴에 의해 예비형성된 바탕 과립으로부터 형성할 수 있다. 흡수 또는 흡착을 보조하는 데 통상 사용되는 제제는 용매(예: 지방족 및 방향족 석유 용매, 알콜, 에테르, 케톤 및 에스테르) 및 점결제(예: 폴리비닐 아세테이트, 폴리비닐 알콜, 덱스트린, 당 및 식물성 오일)를 포함한다. 하나 이상의 기타 첨가제는 또한 과립(예: 유화제, 습윤제 또는 분산제) 속에 포함될 수 있다.

분산성 농축액(DC)은 화학식 I의 화합물을 물 또는 유기 용매(예: 케톤, 알콜 또는 글리콜 에테르) 속에 용해시킴에 의해 제조할 수 있다. 이들 용액은 표면활성제를 (예를 들면, 스프레이 탱크 속에서 물 희석을 향상시키거나 결정화를 방지하기 위해) 함유할 수 있다.

유화성 농축액(EC) 또는 수중유 유액(EW)은 화학식 I의 화합물을 (임의로 하나 이상의 습윤제, 하나 이상의 유화제 또는 당해 제제들의 혼합물을 함유하는) 유기 용매 속에 용해시켜 제조할 수 있다. EC에서 사용하기에 적합한 유기 용매는 방향족 탄화수소(예: 알킬벤젠 또는 알킬나프탈렌: SOLVESSO 100, SOLVESSO 150 및 SOLVESSO 200로 예시된다; SOLVESSO는 등록 상표이다), 케톤(예: 사이클로헥사논 또는 메틸사이클로헥사논) 및 알콜(예: 벤질 알콜, 푸르푸릴 알콜 또는 부탄올), N-알킬피롤리돈(예: N-메틸피롤리돈 또는 N-옥틸피롤리돈), 지방산의 디메틸 아미드(예: C₈-C₁₀지방산 디메틸아미드) 및 염소화 탄화수소를 포함한다. EC 제품은 물에 첨가시에 자발적으로 유화하여 적절한 장비를 통해 분무 살포시키기에 충분한 안정성을 갖는 유액을 제조할 수 있다. EW의 제조는 액체(실온에서 액체가 아닌 경우, 적합한 온도, 통상 70℃ 이하에서 용융될 수 있다)로서 또는 (이를 적합한 용매 속에서 용해시킴에 의해) 용액 속에서 화학식 I의 화합물을 수득하고, 생성된 액체 또는 용액을 고전단하에 하나 이상의 SFA를 함유하는 물 속에 유화시켜 유액을 제조함을 포함한다. EW에서 사용하기에 적합한 용매는 식물성 오일, 염소화 탄화수소(예: 클로로벤젠), 방향족 용매(예: 알킬벤젠 또는 알킬나프탈렌), 및 물 속에서 용해도가 낮은 기타 적합한 유기 용매를 포함한다.

미세 유액(ME)은 물을 하나 이상의 용매와 하나 이상의 SFA와의 혼합물과 혼합하여 열역학적으로 안정한 등방성 액체 제형을 자발적으로 제조할 수 있다. 화학식 I의 화합물은 최초에 물 또는 용매/SFA 혼합물 속에 존재한다. ME에서 사용하기에 적합한 용매는 EC 또는 EW에서 사용하기 위해 이하에 기재하는 용매를 포함한다. ME는 수중유 또는 유중수 시스템(존재하는 시스템은 전도도 측정에 의해 결정될 수 있다)일 수 있고 동일한 제형에서 수용성 및 유용성 살충제를 혼합하기에 적합할 수 있다. ME는 미세 유액으로서 잔류하거나 통상의 수중유 유액을 형성하는 물 속으로 희석시키기에 적합하다.

현탁 농축액(SC)은 화학식 I의 화합물의 미분된 불용성 고체 입자의 수성 또는 비수성 현탁액을 포함할 수 있다. SC는 임의로 하나 이상의 분산제를 갖는 적합한 배지 속에서 화학식 I의 고체 화합물을 볼 또는 비드 밀링하여 당해 화합물의 미립 현탁액을 수득함에 의해 제조할 수 있다. 하나 이상의 습윤제는 당해 조성물 속에 포함될 수 있고 현탁제는 당해 입자가 정치되는 비율을 감소시키도록 포함할 수 있다. 대안으로, 화학식 I의 화합물은 무수 밀링하고 이하에 기재하는 제제를 함유하는 물에 가하여 목적하는 최종 생성물을 수득할 수 있다.

에어로졸 제형은 화학식 I의 화합물 및 적합한 추진제(예: n-부탄)를 포함한다. 화학식 I의 화합물은 또한 적합한 배지(예: 물 또는 수혼화성 액체, 예를 들면, n-프로판올) 속에서 용해되거나 분산되어 비가압 수동 구동 분무 펌프에서 사용하기 위한 조성물을 제공할 수 있다.

화학식 I의 화합물은 무수 상태로 열기술 혼합물과 혼합하여 둘러싼 공간에서 당해 화합물을 함유하는 연기를 발생시키기에 적합한 조성물을 형성할 수 있다.

캡슐 현탁액(CS)은 EW 제형의 제조와 유사한 방식으로 제조하되, 오일 액적의 수분산액이 수득되고 각각의 오일 액적이 중합 쉘에 의해 캡슐화되며 화학식 I의 화합물 및, 임의로 이를 위한 담체 또는 희석제를 포함하도록 추가의 중합 단계를 갖는다. 중합 쉘은 계면 축중합 반응 또는 동시군생 과정에 의해 제조할 수 있다. 당해 조성물은 화학식 I의 화합물의 제어 방출을 제공할 수 있으며 이는 종자 처리에 사용할 수 있다. 화학식 I의 화합물은 또한 생분해성 중합체 매트릭스에서 제형화되어 화합물의 느린 제어 방출을 제공할 수 있다.

조성물은 (예를 들면, 표면에 대한 습윤성, 보존성 또는 분배성; 처리된 표면에 야기되는 내성; 또는 화학식 I의 화합물의 흡수능 또는 이동능을 개선시킴에 의해) 당해 조성물의 생물학적 능력을 개선시키도록 하나 이상의 첨가제를 포함할 수 있다. 이러한 첨가제는 표면 활성제, 오일계 분무 첨가제, 예를 들면, 특정 광유 또는 천연 식물성 오일(예: 대두유 및 평지씨유) 및 이들과 기타 생체 증강 보조제와의 혼합물(화학식 I의 화합물의 작용을 보조하거나 변경하는 성분)을 포함한다.

화학식 I의 화합물은 또한 종자 처리제, 예를 들면, 무수 종자 처리제용 분말(DS), 수용성 분말(SS) 또는 슬러리 처리제용 수분산성 분말(WS)을 포함하는 분말 조성물로서 또는 유동성 농축액(FS), 용액(LS) 또는 캡슐 현탁액(CS)을 포함하는 액상 조성물로서 사용하기 위해 제형화될 수 있다. DS, SS, WS, FS 및 LS 조성물의 제조는 각각 위에서 언급한 DP, SP, WP, SC 및 DC 조성물의 제조와 매우 유사하다. 종자 처리용 조성물은 종자에 당해 조성물의 접착 보조용 제제(예: 광유 또는 막 형성 차단제)를 포함할 수 있다.

습윤제, 분산제 및 유화제는 양이온, 음이온, 양쪽성 또는 비이온계 SFA일 수 있다.

적합한 양이온계 SFA는 4급 암모늄 화합물(예: 세틸트리메틸 암모늄 브라마이드), 이미다졸린 및 아민 염을 포함한다.

적합한 음이온계 SFA는 지방산의 알칼리 금속 염, 황산의 지방족 모노에스테르 염(예: 나트륨 라우릴 설페이트), 설폰화 방향족 화합물의 염(예: 나트륨 도데실벤젠설포네이트, 칼슘 도데실벤젠설포네이트, 부틸나프탈렌 설포네이트 및 나트륨 디-이소프로필- 및 트리-이소프로필나프탈렌 설포네이트의 혼합물), 에테르 설페이트, 알콜 에테르 설페이트(예: 나트륨 라루레트-3-설페이트), 에테르 카복실레이트(예: 나트륨 라우레트-3-카복실레이트), 포스페이트 에스테르[하나 이상의 지방산 알콜과 포스포르산(주로 모노에스테르) 또는 오산화인(주로 디에스테르)과의 반응, 예를 들면, 라우릴 알콜과 테트라포스포르산과의 반응으로부터의 생성물; 추가로 이들 생성물은 에톡실화될 수 있다], 설포석시나메이트, 파라핀 또는 올레핀 설포네이트, 타우레이트 및 리그노설포네이트를 포함한다.

적합한 양쪽성 SFA는 베타인, 프로피오네이트 및 글리시네이트를 포함한다.

적합한 비이온계 SFA는 알킬렌 옥사이드(예: 에틸렌 옥사이드, 프로필렌 옥사이드, 부틸렌 옥사이드 또는 이들의 혼합물)와 지방산 알콜(예: 올레일 알콜 또는 세틸 알콜) 또는 알킬페놀(예: 옥틸페놀, 노닐페놀 또는 옥틸크레솔)과의 축합 생성물; 장쇄 지방산 또는 헥시톨 무수물로부터 유도된 부분 에스테르; 당해 부분에스테르와 에틀렌 옥사이드와의 축합 생성물; 블럭 중합체(에틸렌 옥사이드 및 프로필렌 옥사이드 포함); 알칸올아미드; 단순 에스테르(예: 지방산 폴리에틸렌 글리콜 에스테르); 아민 옥사이드(예: 라우릴 디메틸 아민 옥사이드); 및 레시틴을 포함한다.

적합한 현탁제는 친수성 콜로이드(예: 폴리사카라이드, 폴리비닐 피롤리돈 또는 나트륨 카복시메틸셀룰로즈) 및 팽윤제(예: 벤토나이트 또는 아타펄자이트)를 포함한다.

화학식 I의 화합물은 살균성 화합물을 살포하는 임의의 공지된 방식으로 살포할 수 있다. 예를 들면, 화학식 I의 화합물은 잎, 줄기, 가지 또는 뿌리를 포함하는 식물의 임의의 부분, 이식 전의 종자, 또는 식물이 성장하거나 이식될 기타 배지(예: 뿌리 주변의 토양, 일반적인 토양, 논의 물 또는 수경 배양 시스템)에 직접 살포, 제형화 또는 비제형화되거나, 토양 또는 수성 환경에서 분무되거나, 집진되거나, 침지에 의해 살포되거나, 크림 또는 페이스트 살포, 증기로서 살포되거나, 조성물의 분배 또는 혼입을 통해 살포될 수 있다.

화학식 I의 화합물은 또한 식물로 주입하거나, 전기역학 분무 기술 또는 기타 저용적 방식을 사용하여 식물로 분무하거나, 땅 또는 공기 관개 시스템에 의해 살포할 수 있다.

수성 제제로서 사용하기 위한 조성물(수성 용액 또는 분산액)은 일반적으로 고비율의 활성 성분을 함유하며 사용 전에 물에 첨가되는 농축액 형태로 공급될 수 있다. 이들 농축액은 DC, SC, EC, EW, ME, SG, SP, WP, WG 및 CS를 포함하며 흔히연장된 기간 동안 저장에 견디고 저장 후 물에 첨가되어 통상의 분무 장비에 의해 살포될 수 있는 충분한 시간 동안 균질하게 유지되는 수성 제제를 형성할 수 있도록 요구된다. 이러한 수성 제제는 사용되는 용도에 따라 화학식 I의 화합물의 양(예를 들면, 0.0001 내지 10중량%)을 변경할 것을 포함할 수 있다.

화학식 I의 화합물은 비료(예: 질소, 칼륨 또는 인 함유 비료)와의 혼합물에서 사용될 수 있다. 적합한 제형은 비료 과립을 포함한다. 혼합물은 적합하게는 화학식 I의 화합물을 25중량% 이하 포함한다.

따라서, 본 발명은 비료 및 화학식 I의 화합물을 함유하는 비료 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물은 생물학적 활성을 갖는 기타 화합물, 예를 들면, 유사한 또는 상보적 살균 활성을 가지며 제초 활성, 살충 활성, 선충구제 활성 또는 진드기 제거 활성을 조절하여 식물 성장을 유지하는 미량 원소 또는 화합물을 포함할 수 있다.

또 다른 살균제를 포함함에 의해, 생성된 조성물은 화학식 I의 화합물 단독보다 광범위한 스펙트럼 활성 또는 우수한 수준의 고유 활성을 가질 수 있다. 또한, 기타 살균제는 화학식 I의 살균 활성에 대해 상승 효과를 가질 수 있다.

화학식 I의 화합물은 당해 조성물의 유일한 활성 성분일 수 있거나, 경우에 따라, 살충제, 살균제, 상승제, 제초제 또는 식물 성장 조절제와 같은 하나 이상의 추가의 활성 성분과 혼합될 수 있다. 추가의 활성 성분은 다음과 같다: 하나의 서식지에서 광범위한 스펙트럼 활성 또는 지속성의 향상을 갖는 조성물을 제공하거나; 화학식 I의 화합물의 활성을 상승시키거나 (예를 들면, 기피성을 극복하거나 작용 속도를 향상시킴에 의해) 보충하거나; 개별 성분들에 대한 내성의 발생을 억제하거나 극복하는 데 도움을 줄 수 있다. 특별한 추가의 활성 성분은 조성물의 소정의 유용성에 의존한다.

본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 살균 화합물의 예는 AC 382042(N-1-시아노-1,2-디메틸프로필)-2-(2,4-디클로로페녹시)프로피온아미드), 아시벤졸라-S-메틸, 알라니카브, 알디모르프, 아닐라진, 아자코나졸, 아자페니딘, 아족시스트로빈, 베날락실, 베노밀, 벤티아발리카브, 빌록사졸, 비터타놀, 블라스티시딘 S, 보스칼리드(니코비펜의 새이름), 브로무코나졸, 부피리메이트, 캅타폴, 캅탄, 카벤다짐, 카벤다짐 클로르하이드레이트, 카복심, 카프로파미드, 카르본, CGA 41396, CGA 41397, 시노메티오네이트, 클로르벤즈티아존, 클로로탈로닐, 클로로졸리네이트, 클로질라콘, 구리 함유 화합물(예: 옥시염화구리, 구리 옥시퀴놀레이트, 황화구리, 구리 탈레이트 및 보르듀 혼합물, 시아미다조설파미드, 시아조파미드(IKF-916), 사이플루펜아미드, 사이목사닐, 사이프로코나졸, 사이프로디닐, 데바카브, 디-2-피리딜 디설피드 1,1'-디옥사이드, 디클로플루아니드, 디사이클로사이메트, 디클로메진, 디클로란, 디에토펜카브, 디페노코나졸, 디펜조쿠아트, 디플루메토림, O,O-디-이소프로필-S-벤질 티오포스페이트, 디메플루아졸, 디메트코나졸, 디메티리몰, 디메토모르프, 디목시스트로빈, 디니코나졸, 디노카브, 디티아논, 도데실 디메틸 암모늄 클로라이드, 도데모르프, 도딘, 도구아딘, 에티펜포스, 에폭시코나졸, 에타복삼, 에티리몰, 에틸(Z)-N-벤질-N-([메틸(메틸-디에틸리데네아미노옥시카보닐)아미노]티오)-β-알라니네이트, 에트리디아졸, 파목사돈, 페나미돈, 페나리몰, 펜부코나졸, 펜푸람, 펜헥사미드, 펜옥사닐(AC 382042), 펜피클로닐, 펜프로피딘, 펜프로피모르프, 펜틴 아세테이트, 펜틴 하이드록사이드, 페르밤, 페림존, 플루아지남, 풀로디옥소닐, 플루메토버, 플루모르프, 플루오로이미드, 플루옥사스트로빈, 플루퀸코나졸, 플루실라졸, 플루설파미드, 플루톨라닐, 플루트리아폴, 폴페트, 포세틸-알루미늄, 푸베리다졸, 푸르알락실, 푸라메트피르, 구아자틴, 헥사코나졸, 하이드록시이소옥사졸, 하이멕사졸, 이마잘릴, 이미벤코나졸, 이미녹타딘, 이미녹타딘 트리아세테이트, 이프코나졸, 이프벤포스, 이프로디온, 이프로발리카브, 이소프로파닐 부틸 카바메이트, 이소프로티올란, 카수가마이신, 크레족심-메틸, LY 186054, LY 211795, LY 248908, 만코제크, 마네브, 메페녹삼, 메파니피림, 메프로닐, 메탈락실, 메탈락실 M, 메트코나졸, 메티람, 메티람-아연, 메토미노스트로빈, 메트라페논, MON 65500(N-알릴-4,5-디메틸-2-트리메틸실릴티오펜-3-카복스아미드), 마이클로부타닐, NTN 0301, 네오아소진, 니켈 디메틸디티오카바메이트, 니트로탈레-이소프로필, 누아리몰, 오푸라세, 유기수은 화합물, 오리사스트로빈, 옥사딕실, 옥사설푸론, 옥솔린산, 옥스포코나졸, 옥시카복신, 페푸라조에이트, 펜코나졸, 펜사이쿠론, 페나진 옥사이드, 인산, 프탈리드, 피콕시스트로빈, 폴리옥신 D, 폴리람, 프로페나졸, 프로클로라즈, 프로사이미돈, 프로파노카브, 프로파노카브 하이드로클로라이드, 프로피코나졸, 프로피네브, 프로피온산, 프로퀴나지드, 프로티오코나졸, 피라클로스트로빈, 피라조포스, 피리페녹스, 피리메타닐, 피로퀼론, 피록시푸르, 피롤린트린, 쿼테나리 암모늄 화합물, 퀴노메티오네이트, 퀴녹시펜, 퀸토젠, 실티오팜(MON 65500), S-이마잘릴, 시메코나졸, 시프코나졸, 나트륨 펜타클로로페네이트, 스피록스아민, 스트렙토마이신, 황, 테부코나졸, 테클로프탈람, 테크나젠, 테트라코나졸, 티아벤다졸, 트리플루즈아미드, 2-(티오시아노메틸티오)-벤조티아졸, 티오파네이트-메틸, 티람, 티아디닐, 티미벤코나졸, 톨클로포스-메틸, 톨릴플루아니드, 트리아디메폰, 트리아디메놀, 트리아즈부틸, 트리아족사이드, 트리사이클라졸, 트리데모르프, 트리플록시스트로빈, 트리플루미졸, 트리포린, 트리티코나졸, 발다마이신 A, 바팜, 빈클로졸린, XRD-563, 지네브, 지람, 족스아미드 및 화학식및 화학식

의 화합물.

화학식 I의 화합물은 종자-운반, 토양-운반 또는 엽진균병에 대한 식물 보호를 위한 토양, 이탄 또는 기타 뿌리 배지과 혼합될 수 있다.

몇몇 혼합물은 통상의 동일한 제형으로 용이하게 유도되지 않도록 상당히 다른 물리적, 화학적 또는 생물학적 특성을 갖는 활성 성분들을 포함할 수 있다. 이러한 상황에서, 기타 제형들이 제조될 수 있다. 예를 들면, 하나의 활성 성분이 수불용성 고체이고 다른 성분이 수불용성 액체인 경우, 고체 활성 성분을 (SC의 활성 성분과 동일한 제제를 사용하여) 현탁액으로서 분산시키지만 액체 활성 성분은 (EW의 활성 성분과 동일한 제제를 사용하여) 유액으로서 분산시킴에 의해 각각의 활성 성분을 동일한 연속 수성상으로 결코 분산시킬 수 없다. 생성된 조성물은 현탁유액(SE) 제형이다.

본 발명의 화합물은 수의학 또는 사람 의학에서 사용하기에 임의의 편리한 방식으로 투여하기 위해 제형화될 수 있으며, 따라서 본 발명은 이의 범주내에 수의학 또는 사람 의학에서 사용하기에 적합한 화학식 I의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 이러한 조성물은 하나 이상의 적합한 약제학적으로 또는 수의학적으로 허용되는 담체 또는 부형제의 도움으로 통상의 방식으로 사용하도록 존재할 수 있다.

본 발명의 조성물은 비경구, 경구, 직장, 국소 또는 이식 용도로 제형화되는 형태의 조성물을 포함한다.

농학, 원예학 또는 수의학에서 사용하기 위해, 화학식 I의 개별 화합물로 분리되지 않고 본 발명의 활성 화합물의 공급원으로서 전체 발효 배양액(broth)를 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 균사체를 함유하는 건조된 배지를 사용하거나, 고체/액체 분리 또는 증발 기술을 사용하여 당해 배지로부터 분리된 살아있거나 죽은 또는 용해된 균사체를 사용하거나, 균사체의 분리 후 잔류하는 발효 배양액을 사용하는 것이 적합할 수 있다. 경우에 따라, 발표 배지 또는 균사체는 통상의 불활성 담체, 부형제 또는 희석제를 포함하는 조성물로 발효될 수 있다.

당해 분야의 숙련가는 일반적으로 본 발명의 화합물이 화학식 I의 화합물 유효량을 감염에 적합한 유기체 또는 이의 서식지에 살포함에 의해 감염을 퇴치하는 데 사용될 수 있는 것으로 이해할 것이다.

추가의 국면에 있어서, 본 발명은 화학식 I의 화합물을 제조할 수 있는 스트렙토마이세스 말레이지엔시스 균주의 유기체를 배양하여 당해 화합물을 제조하고, 경우에 따라, 이로부터 당해 화합물을 분리시키는 단계를 포함하는, 화학식 I의 화합물의 제조방법을 제공한다.

탁소노미 연구(Tzxonomic study)는 화학식 I의 화합물을 제조할 수 있는 특정 미생물이 이후로는 스트렙토마이세스 말레이지엔시스 JHCC 553434로 불리는 미생물인 신규한 스트렙토마이세스 말레이지엔시스 균주인 것으로 밝혀내었다. 토양 분리물인 이러한 미생물 샘플은 독일 데-38124 브라운쉬베이크 마숴로더 벡 1비에 소재하는 도이췌 삼룽 폰 미크로오가니즈멘 운트 첼크룰투렌 게엠베하(Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zelkulturen GmbH; DSMZ)에서 2001년 12월 17일에 기탁되었고 계승 제DSM 14702호로 양도되었다. 균주는 부다페스트 조약의 문구 및 조건하에 기탁되었고 유럽 특허조약 제28(4)조의 규정하에 접근이 제한되었다. 이 새로운 스트렙토마이세스 말레이지엔시스 균주인 스트렙토마이세스 말레이지엔시스 JHCC 553434(DSM 14702)는 본 발명의 추가의 특징을 제공한다. 본 발명은 또한 스트렙토마이세스 말레이지엔시스 JHCC 553434(DSM 14702)와 동일한 본질적인 형태 및 배양 특성을 가지며 화학식 I의 화합물을 제조할 수 있는 추가의 신규한 스 트렙토마이세스 말레이지엔시스 균주에 관한 것이기도 하다.

스트렙토마이세스 말레이지엔시스 JHCC 553434(DSM 14702)에 부여된 본질적인 형태 및 배양 특성은 다음과 같이 열거한다:

· 펩티도글리칸의 진단 아미노산은 LL-디아미노피멜리산이다.

· 마이콜리산은 부재하다.

· 이소- 및 안티-이소 지방산이 발견되었지만, 10-메틸 측쇄 지방산은 발견되지 않았다.

· 16개의 DNA로 된 염기 서열: 기타 스트렙토마이세스 종의 서열과 95% 초과 유사하다.

· 콜로니 색상: 회색에서 암갈색 공기 균사체 및 베이지 계열의 암황색 기질 균사체로 변경된다.

· 멜라닌 또는 기타 진단 색소의 형성이 발견되지 않는다.

· 전분이 가수분해된다.

· 형태: 짧고 좁은 코일의 포자.

· 생리학: 카엠퍼(Kaempfer) 등의 문헌[참조: J. Gen Microbiol. 13 1831-1891(1991)]에 따름: 탄소 공급원의 유용성 ⇒ 100% 클러스터 18: S. violaceusniger

· 지방산-패턴: S. violaceusniger와 매우 유사함(0.675).

16개의 DNA 서열화: 스트렙토마이세스 라이브러리에 대한 부분 서열의 비교 결과 S. violaceusniger 그룹의 부재인 스트렙토마이세스 말레이지엔시스와 100% 유사하다.

· 리보프린트-패턴: S. violaceusniger 그룹: S. hygroscopicus 0.83 및 S. 말레이지엔시스 0.82 종과 매우 유사하다.

스트렙토마이세스 말레이지엔시스 종은 최근 문헌[참조: International Journal of Systematic Bacteriology(1999), 49, 1395-1402, Amira Al-Tai et al.]에 기재되어 있다.

본 발명은 또한 화학식 I의 화합물을 제조할 수 있는 스트렙토마이세스 말레이지엔시스 JHCC 553434(DSM 14702)의 돌연변이체에 관한 것이기도 하다. 돌연변이는 자연 돌연변이; 방사선에 의한 이온화; 화학적 방법; 열에 대한 재조합, 변형 및 선택적 기술과 같은 유전 기술과 같은 통상의 돌연변이 유발 기술을 사용하여 자연 발생하거나 모균주의 돌연변이 유발에 의해 제조될 수 있다.

적합한 스트렙토마이세스 말레이지엔시스 균주의 배양에 의한 화학식 I의 화합물의 제조는 통상의 방법, 즉 탄소, 질소 및 무기염의 동화성 공급원의 존재하에 미생물을 배양함에 의해 영향받을 수 있다.

본 발명에 따르는 스트렙토마이세스 말레이지엔시스 균주는 바람직하게는 스트렙토마이세스 말레이지엔시스 JHCC 553434(DSM 14702)이다.

질소, 탄소 및 무기물의 동화성 공급원은 단순 또는 착물 영양물에 의해 공급될 수 있다. 탄소 공급원은 일반적으로 아미노산, 알칸, 몰라세스, 글리세라이드, 글리세롤, 글루코즈, 말토즈, 락토즈, 슈크로즈, 프럭토즈, 전분, 덱스트린, 카복실산, 알콜 및 식물성 오일을 포함한다. 탄소 공급원은 일반적으로 발효 배양액을 0.5 내지 10중량% 포함한다.

질소 공급원은 일반적으로 대두 가루, 옥수수 침적액, 효모 추출물, 면실 가루, 펩톤, 말트 추출물, 몰라세즈, 카제인, 아미노산 혼합물, 암모니아, 암모늄 염 또는 질산염, 요소 및 기타 아미드를 포함한다. 질소 공급원은 일반적으로 발효 배양액을 0.1 내지 10중량% 포함한다.

배양 배지에 혼입될 수 있는 영양 무기염은, 예를 들면, 나트륨, 칼륨, 암모늄, 철, 마그네슘, 아연, 니켈, 코발트, 망간, 바나듐, 크롬, 칼슘, 구리, 몰리브덴, 붕소, 인산염, 황산염, 염화물 및 탄산염 이온을 발생시킬 수 있는 염을 포함한다.

배양은 바람직하게는 통기 및 진탕을 유발한다. 배양은 일반적으로 pH 범위가 5 내지 8, 바람직하게는 6 내지 7, 가장 바람직하게는 pH 6.5에서 수행된다. 본 발명의 미생물은 일반적으로 20 내지 50℃, 바람직하게는 25 내지 40℃, 가장 특히 28 내지 35℃의 온도에서 배양된다. 발효는 2 내지 14일, 예를 들면, 6 내지 8일 동안 수행될 수 있다.

전체 발효 배양액으로부터 본 발명의 화합물을 분리시키는 것이 바람직한 경우, 이는 종래의 분리 기술을 사용하여 달성될 수 있다. 본 발명의 화합물은 발효 배양액에서 주로 발견되지만, 소량은 당해 세포의 균사체에서 발견될 수 있다.

추가의 국면에서, 본 발명은 당해 화합물을 함유하는 전체 발효 배양액; 당해 화합물을 함유하는 전체 발효 배양액의 고체; 당해 화합물을 함유하는 전체 발효 배양액으로부터 원형 또는 용해된 균사체; 원형 또는 용해된 균사체의 분리 후, 당해 화합물을 함유하는 전체 발효 배양액의 고체; 또는 균사체 및 모든 고체의 분리 후, 당해 화합물을 함유하는 전체 발효 배양액의 형태인 화학식 I의 화합물을 제공한다.

여전히 추가의 국면에 있어서, 본 발명은 당해 발명의 위와 같은 국면에 따르는 형태로 존재할 수 있는 화학식 I의 화합물을 유효량 포함하는 조성물을 제공한다.

본 발명의 화합물은 각종 분별증류 기술, 예를 들면, 다양한 방식으로 결합될 수 있는 흡착-용출법, 침전법, 분별결정법 및 용매 추출법에 의해 분리될 수 있다.

원심분리법 및 크로마토그라피법은 본 발명의 화합물을 분리하기에 가장 적합한 것으로 밝혀졌다.

발효 후에, 균사체는 여과 또는 원심분리와 같은 종래 기술을 사용하여 수집될 수 있다. 본 발명의 화합물은 주로 수성 배지 속에서 발견되며, 예를 들면, 원심분리 후 물 또는 적합한 수혼화성 용매, 예를 들면, 저급 케톤(예: 아세톤). 저급 알콜(예: 메탄올 또는 에탄올) 또는 저급 디올로 균사체를 추출함에 의해 균사체로부터 분리될 수 있다.

일반적으로, 최적 회수를 달성하기 위해서는 1회 이상의 추출이 바람직하다. 바람직하게는, 최초의 추출은 물 또는 수용성 용매, 바람직하게는 메탄올을 사용하여 수행된다. 본 발명의 화합물은 용매의 제거, 예를 들면, 증발에 의해 조악한 추출물로서 회수될 수 있다. 농축물은 수성 배지, 예를 들면, 물 속에 재용해되고, 임의의 잔류 고체의 추가의 원심분리에 의해 추가로 정제될 수 있다. 물 또는 수혼화성 용매의 제거에 의해 화학식 I의 화합물을 수득한다.

본 발명의 화합물의 정제는 적합한 지지체 위에서, 예를 들면, 크로마토그라피, 바람직하게는 고성능 액체 크로마토그라피와 같은 종래 기술에 의해 수행될 수 있다. 지지체는 하나의 층 형태로 존재할 수 있거나 바람직하게는 칼럼 속에 팩킹될 수 있다.

적합한 용매 속에서 화합물 용액은 일반적으로, 경우에 따라, 용매의 용적을 감소시킨 후, 실리카 위로 충전될 수 있다. 칼럼은 임의로 적합한 극성 용매로 세척 및 용출될 수 있다. 실리카의 경우, 알콜(예: 메탄올)은 물과 배합하여 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물의 용출 및 분리는 크로마토그라피, 바람직하게는 고성능 액체 크로마토그라피와 같은 종래의 기술에 의해 모니터링될 수 있다.

본 발명의 화합물은 결정화에 의해 추가로 정제될 수 있으며 당해 발명은 또한 결정 형태의 화학식 I의 화합물에 관한 것이기도 하다.

본 발명은 바이러스, 진균 또는 암 세포를 화학식 I의 화합물에 노출시킴을 포함하는, 진균, 바이러스 또는 암 세포의 퇴치방법에 관한 것이기도 하다.

본 발명은 진균 및/또는 바이러스에 대한 내성을 변경하거나 향상시키는 생물학적 시스템에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물의 용도에 관한 것이기도 하다. 생물학적 시스템은, 예를 들면, 식물일 수 있거나, 이의 기관, 조직 또는 세포와 같은 포유류 시스템일 수 있다. 식물 시스템의 경우, 발생할 수 있는 내성의 향상을 나타내는 식물이 선택되는 경우, 내성의 향상은 종래의 번식 기슬을 사용하여 식물에 도입될 수 있다. 대안으로 또는 이 뿐만 아니라, 내성의 향상은 하나 이상의 DNA 서열의 유전자 변형 DNA 재조합 기술에 의해 당해 식물로 도입되기 때문이며, 이의 발현은 숙주 식물의 내성을 향상시킬 수 있다. 이러한 방법은 흔히 통합된 곡물 관리법이라고 불린다.

따라서, 추가의 국면에 있어서, 본 발명은 선택적 번식에 의해 및/또는 바람직하게는 진균에 대한 식물의 내성 향상을 나타내는, 하나 이상의 DNA 서열이 DNA 재조합 기술을 사용하여 식물로 도입되는 유전자 변형에 의해 진균에 대한 내성이 향상되도록 유전적으로 변형된 식물 또는 이의 부분의 진균 감염 억제방법으로서,

식물 또는 이의 부분을 제1항에 따르는 화학식 I의 화합물에 노출시킴을 특징으로 하는, 식물 또는 이의 부분의 진균 감염 억제방법을 제공한다.

추가의 국면에 있어서, 본 발명은 선택적 번식에 의해 및/또는 바람직하게는 바이러스에 대한 식물의 내성 향상을 나타내는, 하나 이상의 DNA 서열이 DNA 재조합 기술을 사용하여 식물로 도입되는 유전자 변형에 의해 바이러스에 대한 내성이 향상되도록 유전적으로 변형된 식물 또는 이의 부분의 바이러스 감염 억제방법으로서,

식물 또는 이의 부분을 제1항에 따르는 화학식 I의 화합물에 노출시킴을 특징으로 하는, 식물 또는 이의 부분의 바이러스 감염 억제방법을 제공한다.

여전히 추가의 국면에 있어서, 본 발명은 살균제로서의 화학식 I의 화합물의 용도를 제공한다.

당해 국면의 바람직한 양태에 있어서, 본 발명은 항진균제로서의 화학식 I의 화합물의 용도를 제공한다.

당해 국면의 추가의 양태에 있어서, 본 발명은 항바이러스제로서의 화학식 I의 화합물의 용도를 제공한다.

당해 국면의 추가의 양태에 있어서, 본 발명은 항암제로서의 화학식 I의 화합물의 용도를 제공한다.

본 발명을 다음 실시예에 의해 설명한다:

실시예 1

화학식 I의 화합물의 표준 제조과정

pH 조절된 M3 배지(MES)에서의 진탕 플라스크

스트렙토마이세스 말레이지엔시스 균주 제조자. JHCC 553434는 우무 경사면 및 플레이트에서 성장시킨다. 이를 TSM-40 및 TSM-7/2로 옮겨서 균주 보존을 위해 성장시킨다. 우수한 성장은 TSM-7/2에서 발견되며 이는 일상의 균주 보존 과정에 사용된다. -80℃의 냉동 바이알의 보존액은 다음의 모든 실험용 출발 물질로서 제조되었다. 이러한 배양액(35℃에서 4 내지 6일)의 상청액을 사용한 HPLC-MS 시험은 화학식 I의 화합물이 제조됨을 나타낸다.

TSM-40

1l의 경우

글루코즈[머크(Merck)] 4g

맥아 추출물[디프코(Difco)] 10g

효모 추출물 4g

멸균 전 7로 pH 교정

TSM-7/2

1l의 경우

만니트 20g

소이톤 10g

대두유 2.5g

K₂HPO₄0.35g

CaCO3 0.5g

멸균 전 7로 pH 교정

진탕 플라스크에서의 제조 지침

접종: 출발 물질로서 잘 성장시킨 1 ×ISP-2 우무 플레이트를 사용하였고 35℃에서 약 5일 동안 접종하였다.

종자 배양

VK1: 1 ×SC-02 배지(1개의 배플 EMK 500㎖ 중 100㎖)를 우무 플레이트로부터 바이오매스에 접종하였고 회전 진탕기에서 35℃ 및 120rpm하에 3일 동안 접종하였다.

주요 배양액: 150 ×M3 배지(1개의 배플 EMK 500㎖ 중 60㎖)를 SC-01 5용적%에 접종하였고, 회전 진탕기에서 35℃ 및 120rpm하에 접종하였다.

배지를 100mN MES 완충액(제품 완충액)을 사용하여 완충시키고, pH를 오토클레이빙 전에 6.5(NaOH)로 조절하였다[MES 완충액은 2-N-모르폴리노 에탄설폰산 수화물이다; 최소 99.5% 적정, C₆H₁₃NO₄S 1M = 195.2g, pKa = 25℃에서 6.1, pH 범위5.5 내지 6.7, 제조자: 시그마 아트(SIGMA, ART), 제 M8250호].

샘플 및 분석도: 샘플을 4, 5 및 6일째에 점검하였다. 성장을 기록하였고 샘플 1㎖를 원심분리하였다[Biofuge A-Heraeus Sepatec, 10분 10,000rpm, RT]. 상청액을 분리하였고 바이오매스를 폐기하였다. 모든 상청액을 여과하였다. 투명한 상청액을 HPLC 바이알로 옮겼고 워터스(Waters) LC/MS 시스템으로 측정하였다[HPLC: Alliance 2790, 광다이오드 어레이 검출기 사용, MS: 마이크로매스(micromass) ZQ].

수집 및 분석도: 6일 후 모든 플라스크를 수집하고 원심분리하였다. 상청액과 바이오매스를 -20℃에서 저장하였다.

배지:

SC-02

배지 1l의 경우:

글루코즈 [머크(Merck)] 10g

가용성 전분 (머크) 10g

펩톤 (시그마) 10g

효모 추출물 [디프코(Difco)] 2g

MgSO₄× 7H₂O (머크) 1g

pH 6.5

M3

배지 1l의 경우:

글루코즈 20g

가용성 전분 10g

소야플라워 25g

효모 추출물 4g

고기 추출물 1g

성분 A 10㎖

성분 A:

배지 1l의 경우 멸균 전에 첨가한다:

NaCl 0.5g

CaCO₃0.5g

MgSO₄× 7H₂O 0.5g

KH₂PO₄50mg

FeCL₃× 6H₂O 16.7mg

ZnSO₄× 7H₂O 21.2mg

CaCl₂× 2H₂O 6.5mg

CuSO₄× 5H₂O 5mg

McCl₂× 4H₂O 5mg

일반적으로, 100배 농축시킨 보존 용액 1l를 제조한다. 보존 용액으로부터 10㎖/l를 사용한다. 보존 용액은 4℃에서 보존해야 한다.

실시예 2

화학식 I의 화합물의 분리 특성 및 물리적/화학적 특성

실시예 1에서 기재한 바와 같이 제조된 스트렙토마이세스 말레이지엔시스 JHCC 553434의 발효 배양액 1l와 상응하는 리오필리세이트(23g)를 물 속에 용해시키고, G-25 칼럼(Sephadex, 70mm × 780mm, 1㎖/min)으로 옮긴다. 물로 용출시킨 후, 화학식 I의 화합물을 함유하는 분획을 동결건조시킨다. 잔사 0.678g을 아세토니트릴:물의 기울기로 실리카 겔(실리카 32-63, 60Å, 55mm × 500mm, 20㎖/min)에서 배지 가압 크로마토그라피에서 정제하고 증발 후 풍부 물질 0.143g을 수득한다. 아세토니트릴:물의 기울기로 RP 실리카 겔(Cromasil 100, C18, 10㎛, 20mm × 250mm, 10㎖/min)에서 고압 크로마토그라피하여 추가로 분리하여 R이 H인 화학식 I의 화합물 제1 분획 0.058g 및 R이 CH₃인 화학식 I의 순수 화합물 제2 분획 0.034g을 수득한다. 제1 분획 0.014g을 용출액으로서 순수를 사용하여 역상 실리카 겔(Develosil RPAQUEOUS, 5㎛, 20 × 250mm, 유량 10㎖/min, 검출 파장 220nm, 4run)에서 추가로 정제하였다. 30분 후 용출시킨 피크는 R이 H인 화학식 I의 화합물을 함유한다. 분획물을 동결건조시켜 R이 H인 화학식 I의 순수 화합물을 0.004g 수득하였다.

실시예 3

R이 CH₃인 화학식 I의 화합물에 대한 특징적인 구조 데이타

NMR 데이타

¹H 스펙트럼, δ 4.63의 잔류 HOD 피크를 참조하여, D₂O 중의 2중량/용적%의 용액으로 수행한다. {} 속의 데이타는 δ 2.49의 HD5-DMSO를 참조하여, D6-DMSO 중의 0.5중량/용적%의 용액으로 수행한다. 스펙트럼은 399.6MHz에서 JEOL GX400 분광계를 사용하여 수행된다.

δ	H 결합된 탄소	다중도 및 H 수	결합 상수(Hz)
3.26	C9	s(3H)
3.37	C7	t(1H)	11.4
3.48	C3	dd(1H)	10.8, 4.8
3.67	C6	ddd(1H)	11.5, 5.6, 4.3
3.83	C4	dd(1H)	10.8, 3.8
3.92	C7	dd(1H)	11.4, 5.6
4.14	C2	d{d}(1H)	4.8, {4.0}
4.71	C1	dd(1H)	1.3, 0.7
4.80	C5	m(1H)
{5.12}	C2	d(1H)OH	4.0
{6.30}	C8	d(1H)NH	10.5
7.41	우라실 C6	d(1H)	1.3
{10.85}		우라실 NH 및 우레아 NH2

s = 단일선

d = 이중선

dd = 겹이중선

ddd = 삼겹 이중선

t = 삼중선

m = 다중선

¹³C 스펙트럼, δ 29.8의 D6-아세톤 {(CD₃)₂CO}를 참조하여, 100.4MHz에서 작동하는 JEOL GX400 분광계를 사용하여, D₂O 중의 2중량/용적%의 용액 수행한다.

δ	탄소	다중도
47.3	C5	d(broadened)
56.2	C9	q
65.2	C7	t
70.8	C2	d
73.2	C3	d
73.3	C3	d
74.4	C6	d
83.4	C4	q
111.4	C1	s
139.0	우리살 C5	d
152.6	우라실 C6	s
161.2	C8	s
164.5	우라실 C4	s

s = 단일선

d = 이중선

t = 삼중선

q = 사중선

위의 용어는 DEPT(135) 스펙트럼으로 측정한 시그날 전환-공명 다중도와 관련된다.

위의 NMR 데이타를 기초로 하여, 분광화학은 다음에 기재한 바와 같은 것으로 생각된다.

화학식 II

위의 화학식 II의 화합물은 본원에서 말라야마이신 A로 불린다.

질량 분광법

글리세롤 및 물 속에서 신속하게 원자 충격으로 이온화하여 분자량 342와 일치하는, 343[M+H]+의 m/z 및 365[M+Na]+의 m/z를 수득한다.

정확한 질량 측정 결과, 분자식 C₁₃H₁₈N₄O₇과 일치하는 질량 단위 342.1197의 분자량을 수득한다.

R이 H인 화학식 I의 화합물에 대한 특징적인 구조 데이타

NMR 데이타

¹H NMR 스펙트럼, δ 4.63의 잔류 HOD 피크를 참조하여, D₂O 중의 2중량/용적%의 용액으로 수행한다. {} 속의 데이타는 δ 2.49의 HD5-DMSO를 참조하여, D6-DMSO 중의 2중량/용적%의 용액으로 수행한다. 스펙트럼은 499.9MHz에서 작동하는 Varian Unity INOVA 500 NMR 분광계를 사용하여 수행된다.

δ	지정	다중도 및 H 수	결합 상수(Hz)
3.36	H-7	t(1H)	11.5
3.46	H-3	dd(1H)	10.8, 4.8
3.79	H-7	dd(1H)	11.5, 5.6
3.83	H-4	dd(1H)	10.8, 3.6
3.95	H-6	ddd{d}(1H)	11.5, 5.6, {5.0}, 4.0
4.13	H-2	d{d}(1H)	4.8, {4.1}
4.55	H-5	tb(1H)
4.69	H-1	s(1H)
{5.06}	C6 OH	{d}(1H)	{5.0}
{5.25}	C2 OH	{d}(1H)	{4.1}
{5.46}	C8 NH2	{s}(2H)
{6.14}	C8 NH	{db}(1H)	{10}
7.22	우라실 C6	s(1H)
{10.96},{11.10}	우라실 NH	{sb}(1H 각각)

결합 상수는 R이 CH₃인 화학식 I의 결합 상수와 거의 동일하다. 이는 R이 CH₃인 화학식 I의 화합물의 배위와 R이 H인 화학식 I의 화합물의 배위가 또한 동일함을 나타낸다.

s = 단일선

d = 이중선

dd = 겹이중선

ddd = 삼겹 이중선

t = 삼중선

b = broad

¹³C NMR 스펙트럼, δ 67.4ppm의 디옥산을 참조하여, 125.7MHz 및 25℃에서 작동하는 Varian Unity INOVA 500 NMR 분광계를 사용하여, D₂O 중의 2중량/용적%의 용액으로 수행한다.

δ	탄소	상관성
51.8(시그날 broad)	C5	H-5
65.5	C6	H-6
67.9	C7	H-7
71.9	C2	H-2
74.1	C3	H-3
75.5	C4	H-4
84.6	Cl	H-1, 우라실 H-6
112.5	우라실 C5	H-1, H-2, 우라실 H-6
140.1	우라실 C6	H-1, 우라실 H-6
153.7	우라실 C2	우라실 H-6
162.7	C8
165.6	우라실 C4	H-1, 우라실 H-6

상관성은 HSQC 및 HMBC 스펙트럼에서 관찰되었다.

위의 NMR 데이타를 기초로 하여, 분광화학은 다음에 기재한 바와 같은 것으로 생각된다.

화학식 III

위의 화학식 III의 화합물은 본원에서 데스메틸말라야마이신 A로 불린다.

질량 분광법

전자 분무로 이온화하여 분자량 328과 일치하는, 329[M+H]+의 m/z 및 351[M+Na]+의 m/z를 수득한다.

정확한 질량 측정 결과, 분자식 C₁₂H₁₆N₄O₇과 일치하는 질량 단위 329.1101의 분자량을 수득한다.

실시예 4

이 실시예는 화학식 I의 화합물의 살균 특성을 설명한다. 당해 화합물은 식물의 각종 엽진균병에 대해 시험한다. 사용된 기술은 다음과 같다.

식물은 인공 셀룰로즈계 성장 배지에서 성장시킨다. 시험 화합물은 사용 직전에 물 속에서 최종 농도 100ppm(즉, 최종 용적 10㎖ 중의 화합물 1mg)로 되도록 역삼투수 속에 개별적으로 희석된다. (최종 농도 0.05용적%에서) TWEEN 20을 물에 가하여 분무 침적물의 보존성을 향상시킨다. TWEEN은 등록 상표이다.

이 화합물은 시험 식물에 최대 점적 보존액을 분무함에 의해 당해 시험 식물의 잎에 살포하였다.

이 시험은 밀에서 Stagonospora Nodorum(LEPTNO), Blumeria graminis f.sp. tritici(ERYSGT) 및 Puccinia tricina(PUCCRT)에 대해 수행하였다. 각각 세 가지 식물을 함유하는 2개의 복제물을 각각의 처리에 사용하였다. 이 식물들은 화학 처리한지 6시간 또는 1일 후 무수 포자에 눈금 측정된 진균 포자 현탁액 또는 "먼지 제거액"을 접종하였다.

화학 처리 및 접종 후, 이 식물들은 (Blumeria graminis f.sp.tritici에 접종하는 조건을 제외하고) 고습 조건하에 접종하였고, 이 질병이 평가될 때까지 감염이 진행되는 적절한 환경에 두었다. 화학 적용과 평가 사이의 시간은 당해 질병 및 환경에 따라 6일에서 9일로 변경된다. 그러나, 각각의 개별적 질병은 모든 화합물에 대해 동일한 시간이 경과한 후 평가하였다.

평가는 각각의 복제물에서 식물에 대해 일괄적으로 수행하였고 복제물당 하나의 결과를 갖도록 평균내었다.

존재하는 질병 수준(질병을 활발하게 유발함에 의해 보호되는 엽 영역 비율)은 육안으로 평가하였다. 각각의 처리의 경우, 모든 복제물에 대한 평가 값은 평균 질병 값을 제공함을 의미한다. 미처리 대조군 식물은 동일한 방식으로 평가하였다. 이 데이타는 PRCO(Percentage Disease Reduction from Control; 대조군으로부터의 질병 감소율) 값을 계산하도록 처리되었다(아래 수학식 1 참조).

PRCO 값의 계산 및 밴딩된 평가 방법

이 평균 질병 값은 아래에 나타낸 방식으로 밴딩된다. 질병 수준 값이 두 지점 사이의 정확히 중간 지점이 아닌 경우, 결과는 두 지점보다 낮다.

0 = 0%의 질병이 존재한다.

1 = 0.1 내지 1%의 질병이 존재한다.

3 = 1.1 내지 3%의 질병이 존재한다.

10 = 5.1 내지 10%의 질병이 존재한다.

20 = 10.1 내지 20%의 질병이 존재한다.

30 = 20.1 내지 30%의 질병이 존재한다.

60 = 30.1 내지 60%의 질병이 존재한다.

90 = 60.1 내지 100%의 질병이 존재한다.

통상의 밴딩된 계산의 예는 다음과 같다:

처리 A의 평균 질병 수준 = 25%

이에 따른 처리 A의 밴딩된 평균 질병 수준 = 30

미처리 대조군에 대한 평균 질병 수준 = 85%

이에 따른 미처리 대조군에 대한 밴딩된 평균 질병 수준 = 90

PRCO는 거의 전체 수에 가까우며, 따라서 이러한 특정 예에서 PRCO 결과는67이다.

음의 PRCO 값이 수득될 수 있다.

PRCO 결과는 아래 표 1에 기재한다.

화합물 번호	ERYSGT6시간 보호	PUCCRT1일 보호	LEPTNO1일 보호
II	100	100	100
III	0	100	99

표 1에 대한 해설

ERYSGT = Blumeria graminis tritici PUCCRT = Puccinia triticina

LEPTNO = Stagonospora Nodorum

Claims (20)

1. 화학식 I의 화합물.

   화학식 I

   위의 화학식 I에서,

   R은 H 또는 CH₃이다.
2. 제1항에 있어서, 화학식 II의 화합물.

   화학식 II
3. 제1항에 있어서, 화학식 III의 화합물.

   화학식 III
4. 제1항 내지 제3항 중의 어느 한 항에 있어서, 당해 화합물을 함유하는 전체 발효 배양액; 당해 화합물을 함유하는 전체 발효 배양액의 고체; 당해 화합물을 함유하는 전체 발효 배양액으로부터 원형 또는 용해된 균사체; 원형 또는 용해된 균사체의 분리 후, 당해 화합물을 함유하는 전체 발효 배양액의 고체; 또는 균사체 및 고체의 분리 후, 당해 화합물을 함유하는 전체 발효 배양액의 형태인 화학식 I의 화합물.
5. 제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항에서 청구한 바와 같은 화합물을 살균 유효량으로 포함하는 살균 조성물.
6. 제5항에 있어서, 화학식 I의 화합물 살진균 유효량과 이의 적합한 담체 또는 희석제를 포함하는 살진균 조성물인 살균 조성물.
7. 진균 또는 진균의 서식지를 제6항에 따르는 조성물로 처리함을 포함하는, 진균의 퇴치 또는 방제방법.
8. 화학식 I의 화합물 살진균 유효량 또는 당해 화합물을 포함하는 조성물을 식물, 식물 종자, 식물 또는 종자의 서식지, 토양 또는 임의의 기타 식물 성장 배지, 예를 들면, 영양 용액에 살포함을 포함하는, 제7항에 따르는 식물병원성 진균의 퇴치 또는 방제방법.
9. 화학식 I의 화합물을 제조할 수 있는 스트렙토마이세스 말레이지엔시스(Streptomyces malaysiensis) 균주의 유기체를 배양하여 당해 화합물을 제조하고, 경우에 따라, 이로부터 당해 화합물을 분리시키는 단계를 포함하는, 화학식 I의 화합물의 제조방법.
10. 제9항에 있어서, 균주가 스트렙토마이세스 말레이지엔시스 JHCC 553434(DSM 14702) 또는 이의 돌연변이체인 방법.
11. 제9항 또는 제10항에 있어서, 화학식 I의 화합물이 발효 배양액으로부터 분리되는 방법.
12. 스트렙토마이세스 말레이지엔시스 JHCC 553434(DSM 14702) 및 이의 돌연변이체.
13. 바이러스, 진균 또는 암 세포를 제1항에 따르는 화학식 I의 화합물에 노출시킴을 포함하는, 바이러스, 진균 또는 암 세포의 퇴치방법.
14. 진균 및/또는 바이러스에 대한 내성을 변경하거나 향상시키는 생물학적 시스템에 사용하기 위한, 제1항에 따르는 화학식 I의 화합물의 용도.
15. 선택적 번식에 의해 및/또는 바람직하게는 진균에 대한 식물의 내성 향상을 나타내는, 하나 이상의 DNA 서열이 DNA 재조합 기술을 사용하여 식물로 도입되는 유전자 변형에 의해 진균에 대한 내성이 향상되도록 유전적으로 변형된 식물 또는 이의 부분의 진균 감염 억제방법으로서,

    식물 또는 이의 부분을 제1항에 따르는 화학식 I의 화합물에 노출시킴을 특징으로 하는, 진균 감염 억제방법.
16. 선택적 번식에 의해 및/또는 바람직하게는 바이러스에 대한 식물의 내성 향상을 나타내는, 하나 이상의 DNA 서열이 DNA 재조합 기술을 사용하여 식물로 도입되는 유전자 변형에 의해 바이러스에 대한 내성이 향상되도록 유전적으로 변형된 식물 또는 이의 부분의 바이러스 감염 억제방법으로서,

    식물 또는 이의 부분을 제1항에 따르는 화학식 I의 화합물에 노출시킴을 특징으로 하는, 바이러스 감염 억제방법.
17. 살균제로서의 제1항에 따르는 화학식 I의 화합물의 용도.
18. 항진균제로서의 제1항에 따르는 화학식 I의 화합물의 용도.
19. 항바이러스제로서의 제1항에 따르는 화학식 I의 화합물의 용도.
20. 항암제로서의 제1항에 따르는 화학식 I의 화합물의 용도.