KR20040054692A - 17-알릴 아미노 겔다나마이신 (17-ａａｇ) 및 기타안사마이신의 제조 방법 - Google Patents

Abstract

고수율, 고순도 및 상이한 다형체형의 17-알릴 아미노 겔다나마이신 (17-AAG) 및 기타 안사마이신의 제조를 위한 효율적 화학 공정이 기재되고 청구된다.

Description

17-알릴 아미노 겔다나마이신 (17-ＡＡＧ) 및 기타 안사마이신의 제조 방법 {PROCESS FOR PREPARING 17-ALLYL AMINO GELDANAMYCIN (17-AAG) AND OTHER ANSAMYCINS}

관련 출원

본 출원은 각각 "17-알릴 아미노 겔다나마이신 (17-AAG) 및 기타 안사마이신의 제조 방법" 을 제목으로 하며, 그 각각의 전문이 모든 그림과 도면을 포함하여 본원에 참고로 도입되는 2001. 9. 21. 일자로 출원된 Zhang 등의 미국 가출원 일련번호 60/331,893 및 2001. 9. 24. 일자로 출원된 Zhang 등의 미국 가출원 일련번호 60/326,639 를 우선권으로 청구한다.

하기 설명에는 본 발명의 이해에 유용할 수 있는 정보가 포함된다. 본원에서 제공되는 임의 정보가 현재 청구되는 발명에 관련되거나 선행 기술이거나, 구체적으로 또는 내재적으로 참고되는 임의 문헌이 선행 기술이라는 의미는 아니다.

17-알릴아미노-겔다나마이신 (17-AAG) 은 겔다나마이신 (GDM) 의 합성 유사체이다. 두 분자는 모두 안사마이신으로 공지된 넓은 클래스의 항생제 분자에속한다. 미생물 스트렙토미케스 히그로스코피쿠스 (Streptomyces hygroscopicus) 에서 첫번째로 단리된 GDM 은 원래 특정한 키나아제의 강력한 억제제로서 동정되었으며, 후에 구체적으로 "분자 샤페론 (chaperone)", 예컨대 열 쇼크 단백질 90 (HSP90) 을 타겟팅함으로써 키나아제 분해를 촉진하여 작용하는 것으로 나타났다. 이어서, 다양한 기타 안사마이신이 다소간의 상기 활성을 나타내었으며, 17-AAG 가 가장 전망있는 것에 속하고, 현재 National Cancer Institute (NCI) 에서 집중적인 임상 연구 주제로 수행되고 있다. 예컨대, [Federal Register, 66 (129): 35443-35444; Erlichman 등, Proc. AACR (2001), 42, 초록 4474] 를 참고.

HSP90 은 신호 전달, 세포 주기 조절 및 전사 조절에 관여하는 주요 단백질을 포함하는 광범위한 단백질의 폴딩, 활성화 및 어셈블리에 관여하는 편재성 샤페론 단백질이다. 연구자들은, HSP90 샤페론 단백질이 Raf-1, EGFR, v-Src 패밀리 키나아제, Cdk4, 및 ErbB-2 를 포함하는 단백질 키나아제 및 스테로이드 호르몬 수용체와 같은 중요한 신호전달 단백질에 연합한다고 보고하였다 (Buchner J., 1999, TIBS, 24:136-141; Stepanova, L. 등, 1996, Genes Dev. 10: 1491-502; Dai, K. 등, 1996, J. Biol. Chem. 271: 22030-4). 추가 연구에서, 특정 공동-샤페론, 예컨대 Hsp70, p60/Hop/Sti1, Hip, Bag1, HSP40/Hdj2/Hsj1, 이뮤노필린 (immunophilin), p23, 및 p50 이 HSP90 을 그 작용에 대해 보조할 수 있는 것으로 제시되었다 (예컨대 [Caplan, A., 1999, Trends in Cell Biol., 9: 262-68] 참고).

안사마이신 항생제, 예컨대 허비마이신 (herbimycin) A (HA), 겔다나마이신(GM), 및 17-AAG 는 HSP90 의 N-말단 포켓에 단단히 결합하여 이들의 항암 효과를 나타내는 것으로 여겨진다 (Stebbins, C. 등, 1997, Cell, 89: 239-250). 상기 포켓은 매우 보존되어 있으며, DNA 선회효소의 ATP-결합 부위와는 적은 상동성을 갖는다 (Stebbins, C. 등, supra; Grenert, J.P. 등, 1997, J. Biol. Chem., 272: 23843-50). 또한, ATP 및 ADP 는 둘 다 상기 포켓과 낮은 친화도로 결합하며, 낮은 ATPase 활성을 갖는 것으로 나타났다 (Proromou, C. 등, 1997, Cell, 90: 65-75; Panaretou, B. 등, 1998, EMBO J., 17: 4829-36). 시험관 내 및 생체 내 연구에서, 안사마이신 및 기타 HSP90 억제제의 상기 N-말단 포켓의 점유는 HSP90 기능을 변화시키고, 단백질 폴딩을 억제하는 것으로 나타났다. 고농도에서, 안사마이신 및 기타 HSP90 억제제는 단백질 기질의 HSP90 으로의 결합을 방지하는 것으로 나타났다 (Scheibel, T., H. 등, 1999, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96: 1297-302; Schulte, T. W. 등, 1995, J. Biol. Chem. 270: 24585-8; Whitesell, L., 등, 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91: 8324-8328). 안사마이신은 또한 샤페론-연합 단백질 기질의 ATP-의존적 방출을 억제하는 것으로 나타났다 (Schneider, C., L. 등, 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93: 14536-41; Sepp-Lorenzino 등, 1995, J. Biol. Chem. 270:16580-16587). 두 경우 모두에서, 기질은 프로테오좀 내의 유비퀴틴 의존적 방법에 의해 분해된다 (Schneider, C., L., supra; Sepp-Lorenzino, L., 등, 1995, J. Biol. Chem., 270:16580-16587; Whitesell, L. 등, 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91: 8324-8328).

이러한 기질 불안정화는 종양 및 비암화 세포에서도 마찬가지로 일어나며,신호전달 조절자의 서브세트, 예컨대 Raf (Schulte, T. W. 등, 1997, Biochem. Biophys. Res. Commun. 239:655-9; Schulte, T. W., 등, 1995, J. Biol. Chem. 270:24585-8), 핵 스테로이드 수용체 (Segnitz, B., 및 U. Gehring. 1997, J. Biol. Chem. 272:18694-18701; Smith, D. F. 등, 1995, Mol. Cell. Biol. 15:6804-12), v-src (Whitesell, L., 등, 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:8324-8328) 및 특정 막통과 티로신 키나아제 (Sepp-Lorenzino, L. 등, 1995, J. Biol. Chem. 270:16580-16587), 예컨대 EGF 수용체 (EGFR) 및 Her2/Neu (Hartmann, F., 등, 1997, Int. J. Cancer 70:221-9; Miller, P. 등, 1994, Cancer Res. 54:2724-2730; Mimnaugh, E. G., 등, 1996, J. Biol. Chem. 271:22796-801; Schnur, R. 등, 1995, J. Med. Chem. 38:3806-3812), CDK4, 및 돌연변이 p53 (Erlichman 등, Proc. AACR (2001), 42, 초록 4474) 에 특히 효과적인 것으로 나타났다. 안사마이신 유도된 상기 단백질의 손실은 특정 조절 경로를 선택적으로 손상시켜, 이렇게 처리된 세포의 세포 주기의 특정 상에서의 성장 정지 (Muise-Heimericks, R. C. 등, 1998, J. Biol. Chem. 273:29864-72), 및 아폽토시스, 및/또는 분화를 일으킨다 (Vasilevskaya, A. 등, 1999, Cancer Res., 59:3935-40).

따라서, 안사마이신은 여러 유형의 암 및 증식성 장애의 치료 및/또는 예방을 위해 매우 전망이 밝다. 그러나, 현재 안사마이신의 공지된 다양한 제조 방법은 낮은 수율, 낮은 순도, 불안정성, 할로겐화 유기 용매의 사용과 연관된 환경 독성, 및 시간, 비용, 폐기물 처리의 관점에서 부가되는 추가 비용 및 이렇게 제조된 약물을 섭취하는 자들의 건강 위험성 중 하나 이상을 나타낸다. 공지된 방법의 예에는 다양한 유기 용매 및 장황한 추출 기법을 이용하여, 17-AAG 를 포함하는 다양한 안사마이신 유도체의 합성이 보고된, Kaken Chemical Co, Ltd. 에게 양도된 Sasaki 등의 US 4,261,989, 및 유사한 방법이 기재되고 Pfizer Inc. 에게 양도된 Schnur 등의 U.S. 5,932,566 및 PCT/IB94/00160 (WO 95/01342) 이 포함된다.

기존 분야에서의 하나 이상의 단점을 개선시키는 것이, 즉 낮은 수율, 낮은 순도, 불안정성, 할로겐화 유기 용매의 사용과 연관된 환경 독성, 및 시간, 비용, 폐기물 처리의 관점에서 부가되는 추가 비용 및 건강 위험성 중 하나 이상을 완화시키는 것이 본 발명의 목적이다.

본 발명의 개요

여러 진보적 측면이 존재한다. 첫번째 측면에 있어서, 본 발명은 휘발성 비양성자성 및 휘발성 양성자성 용매의 사용을 채택하는, 안사마이신의 효율적인 화학적 제조 방법을 특징으로 한다. 상기 방법은 특히, 벤조퀴논 겔다나마이신 (GDM) 으로부터 벤조퀴논 겔다나마이신 유도체, 예컨대 17-AAG 또는 그 4,5-디히드로 유사체를 제조하는데 유용하다. 후자의 측면의 하나의 구현예는, 예컨대 4,5-디히드로 겔다나마이신 또는 겔다나마이신 (또는 벤조퀴논 부분 상에 반응성 부분, 예컨대 메톡시를 갖는 기타 벤조퀴논 겔다나마이신) 및 휘발성 비양성자성 용매 중 친핵시약, 예컨대 표 1 에서 선택되는 멤버를 조합하여 조 산물을 제조한 후 증발을 이용하여 농축하고, 안사마이신 산물을 용액 밖으로 결정화시키거나 침전시키기 적합한 조건 하에 또는 세척액으로서 휘발성 양성자성 용매를 생성 산물에 첨가한다. 두 경우 모두, 두 개 용매 유형이, 예컨대 여과, 원심분리, 경사분리 및/또는 증발에 의해 편리하게 제거된다. 구체적 구현예에 근거하는 잇점에는 감소된 정제 작업, 증가된 수율 및/또는 순도, 및 임상적으로 허용가능한 시약의 사용이 포함되지만 이에 제한되는 것은 아니다.

하기는 본 발명의 한 측면 및 구현예를 위한 예시적인 반응 도식이다

R¹및 R²가 둘 다 수소이며, 이때 C4 및 C5 간 결합은 단일 결합이거나, R¹및 R²가 둘 다 존재하지 않으며, 이때 C4 및 C5 간에는 이중 결합이 존재한다. C4 및 C5 간 파선은 두 가지 가능성을 모두 나타낸다. Nu-H 는 반응 도중 17 위치에서 R³O- 기를 대체하는 친핵시약이다. R³은 바람직하게는 탄소수 1~4 의 알콕시, 바람직하게는 메톡시이다. 반응은 휘발성 비양성자성 용매, 예컨대 하기물: THF, 에틸-에테르, MTBE, THP, 디옥산, 에틸 sec-부틸 에테르, 메틸 부틸 에테르, 에틸 아세테이트, 또는 메틸 아세테이트로부터 선택되는 것 중에서 일어나고, 치환된 조 산물이 얻어진다. 비할로겐화 용매가 바람직하다. 일부 구현예에 있어서, 친핵시약은 주로 단일치환 산물이 생성되도록, 치환될 벤조퀴논 겔다나마이신 유도체에 천천히 첨가된다. 상기 단계는 임의로, 예컨대 크로마토그래피 기법, 예컨대, TLC, HPLC, 또는 당분야에 일반적으로 공지된 기타 기법, 예컨대 분광측정, NMR 등을 이용하여 모니터링함으로써, 반응 종료가 판단될 수 있다. 상기 기법은 또한 예컨대 후술되는 공정에서 후속 단계에 이용될 수 있다. 바람직한 구현예에 있어서, 실질적으로 모든 벤조퀴논 안사마이신 반응물이 그 상응 유도체로 전환되도록 반응을 지속하여 종료시킬 수 있다.

휘발성 비양성자성 용매 중 치환된 조 산물의 제조 이후, 산물을 증발을 이용하여 농축하고, 이어서 휘발성 양성자성 용매, 예컨대 이소프로판올, 에탄올, 및/또는 물과 슬러리화시키거나 그 중에 용해시킨다. 본원에서 사용되는 "슬러리화" 라는 용어는 고체, 예컨대 안사마이신이 뚜렷이 용해되지 않는 조건 하에서의 액체 중 고체 현탁액을 나타낸다. 특히 불순물이 상기 조건 하에서 고체보다 더 높은 용해도를 나타내는 경우, 상기 방식으로 "세척" 이 수행될 수 있다. 하기 실시예 1 이 예시된다. 세척의 대안 또는 이와 결합되는 방법에는, 예컨대 하기 실시예 2 에서 구현된 바와 같은 결정화 절차가 있다.

각각의 휘발성 비양성자성 및 양성자성 용매는, 예컨대 그 자체가 원심분리, 가열 및/또는 진공과 조합될 수 있는 증발에 의해, 편리하게 제거될 수 있다. 당업자가 이해하는 바와 같이, 압력이 대등하게 감소된다면 (진공이 증가됨) 더 낮은 온도가 또한 이용될 수 있다. 일부 구현예에서는 가열 또는 표준 실온 건조를 단독으로 이용할 수 있다. 하나 이상의 여과 단계가 또한 이용될 수 있고, 불순물을 감소시키기 위해 휘발성 양성자성 용매(들)을 이용하여 필터(들)을 통한 세척을 편리하게 이용할 수 있다.

일부 구현예에 있어서, 친핵시약은 아민, 티올, 티올레이트, 티오에테르, 알콜 및 알콕시드로 이루어진 군으로부터 선택되어 사용되며, 그 각각은, 예컨대 생성 벤조퀴논 안사마이신 유도체를 또다른 구조체로 부착시키기 위한 부가적인 화학 부분이 이후에 부착될 수 있는 하나 이상의 관능기를 구성하거나, 이를 보유하거나 또는 보유하도록 개질될 수 있다. 일부 바람직한 구현예에 있어서, 친핵시약은 하기 구조를 갖는 일차 또는 이차 아민이다:

여기서, R⁴및 R⁵는 독립적으로 수소, (C₁-C₁₂) 알킬 또는 알릴, 프로파르길, 히드록시, 아미노, 메르캅토, 카르복실라토, 또는 할로겐 관능기로 임의 치환된 (C₁-C₁₂) 알킬을 나타낸다. 일반적으로 사용될 수 있는 아민의 비제한적 목록에는 Sasaki 에게 특허 허여된 U.S. 4,261,989 의 표 I 에 나타낸 것들이 포함된다. 올레핀과 같은 기타 관능기가 또한 부착될 수 있음이 이해될 것이다. 예컨대 17-AAG 또는 4,5 디히드로 유사체의 제조에서와 같은 일부 구현예에 있어서, 친핵시약은 알릴 아민이다. 사용될 수 있는 기타 유용한 친핵시약에는 상세한 설명 부분에 나타낸 것들이 포함되지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

일부 구현예에 있어서, 산물 및/또는 반응물의 광분해를 예방하거나 최소화하기 위해, 본 발명의 방법의 하나 이상의 단계에서 감소된 조명을 이용하는 것이 유용할 수 있다. 이를 위해, 최종 산물은 또한 내광성 용기 중에 보관되어 산물 안정성 및 보관 수명을 보장하거나 보조할 수 있다.

본 발명의 상기 방법의 측면은 서로 일치되도록 기술된 임의 구현예의 조합을 특징으로 할 수 있다. 더 넓은 방법 측면에 있어서, 본 발명은 안사마이신의 농축 및/또는 정제 방법을 특징으로 한다. 본 발명의 방법은 휘발성 비양성자성 용매, 바람직하게는 비할로겐화 용매를 이용한 후 증발시키고, 하기 실시예 1 및 2 에 사용되는 것과 같은 휘발성 양성자성 용매를 이용하여 결정화시키거나 세척할 수 있다. 본 발명의 다른 측면은 상기 방법에 의해 제조된 산물을 특징으로 하며, 각각의 산물은 임의의 상기 언급된 방법 구현예에 따라 제조될 수 있다.

또다른 측면에 있어서, 본 발명은 양성자성 용매 용액 중에 용해된 17-AAG 를 제공하고, 실질적으로 물이 없는 상기 양성자성 용매 용액으로부터 상기 17-AAG 을 결정화시킨 후 상기 양성자성 용매 용액을 제거하는 것을 포함하는 17-AAG 의 제조 방법을 특징으로 한다. "제조" 라는 용어는, 예컨대 17-AAG 의 기존 다형체형으로부터 또다른 17-AAG 형으로의 농축, 정제 또는 전환을 의미한다. 상기 용어가 "포함하는" 이라는 전환 어구에 붙는 경우, 이는 또한 용액 중 용해, 제형 생성 등과 같은 부가적 후속 단계를 포함할 수 있다. "제거" 라는 용어는 반드시 완전한 제거를 나타내는 것은 아니지만, 고체인 17-AAG 가 상기 단계 후에 주로 남고, 작은 분획의 용매가 임의로 존재하도록 하는 실질적 제거를 바람직하게 나타낸다. 하나의 구현예에 있어서, 양성자성 용매는 이소프로판올이며, 이소프로판올로부터의 결정화 및 이소프로판올의 제거 후 17-AAG 는 약 146℃~153℃ 또는 약 155℃ 이하의 융점을 나타낸다. 상이하지만 관련된 측면에서는, 바람직하게는 약 200℃ 이상 범위에서 융점을 나타내는 17-AAG 의 고융점 다형체의 형성이 수반된다. 일부 바람직한 구현예에 있어서, 융점은 약 206~212℃ 이다. 이는 물을 함유하거나 함유하지 않을 수 있는 양성자성 용매 용액, 예컨대 에탄올 중에서의 결정화에 의해 달성될 수 있다. 출원인들은 용매 중 물의 존재가 통상적으로 생성 17-AAG 다형체의 최종 융점을 증가시킨다는 것을 관찰하였다. 궁극적으로 내부에 혼합된 하나 이상의 다른 제제를 갖거나 갖지 않는, 상기 방법에 의해 생성된 화합물이 또한 청구된다. 임의로, 상기 조성물은 분해를 예방하거나, 최소화하거나 또는 지연시키기 위해, 내광성 용기 중에 포장된다. 기타 친유성 화합물도 유사하게 상이한 융점 다형체를 만들 것이 예상된다. 상기 다형체는 상이한 유용성을 특징으로 하거나 특징으로 할 수 있으며, 예컨대 저융점 형태는 보다 용이하게 용해되고 제형화되며, 고융점 형태는 더 긴 안정성을 나타내는 것으로 예상된다.

또다른 측면에 있어서, 본 발명은 안사마이신의 제 2 다형체형을 생성하기에 충분한 조건 하에 안사마이신의 제 1 다형체형을 양성자성 용매 용액 중에 용해시키는 것을 포함하는, 안사마이신의 제 1 다형체형을 안사마이신의 제 2 다형체형으로 전환시키는 방법을 특징으로 한다. 고융점 유형은 저융점 형태로 전환될 수 있고, 반대도 가능하다. 안사마이신은 바람직하게는 17-AAG 이지만, 다른 친유성 화합물에 대해서도 상기 기법이 유용성을 가질 것이 예상되며, 이의 증거를 실시예 1 ~ 5 에 나타낸다. 상기 측면의 가능한 구현예는 선행 측면 구현예의 특징을 따를 수 있다.

본 발명에 의해 실현되는 장점은, 정확한 측면 및 구현예에 따라, 고수율,고순도, 안정성, 감소된 환경적 및 환자 독성, 및 시간, 비용의 부가적인 추가 감소, 제형화, 폐기물 보관 및 처리의 용이성 중 하나 이상을 포함한다. 기타 장점, 측면 및 구현예는 첨부되는 도면, 상세한 설명 및 청구범위로부터 자명할 것이다.

도면의 간단한 설명

도 1 은 Zorbax 300 SB-C8 (250 cm ×4.6 mm, 5 μ) 칼럼을 이용하여 수득된 17-알릴아미노겔다나마이신의 HPLC 크로마토그램이며, 이동상: 아세토니트릴 (0.05% TFA) : 물 (0.05% TFA); 30:70 이고; 유속: 254 nm 에서 측정되어 1 mL/분이고; 나타낸 피크에 대한 체류 시간은 16.49 분에서 나타났다.

도 2 는¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) 스펙트럼을 나타낸다. 화학적 이동 및 다중도 (multiplicity) 는 목적 산물의 형성과 일치한다.

본 발명은, 예컨대 암과 같은 다양한 증식성 질환의 치료에서 및 예컨대 항생제로서 유용한 화합물인 안사마이신에 적용되는 제조 화학에 관한 것이다.

본 발명은 안사마이신, 예컨대, 벤조퀴논 안사마이신 및 이들의 유도체, 예컨대 17-AGG 및 그 4,5 디히드로 유사체의 개선된 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법은 우수한 순도 및 수율을 제공하면서, 추출 및 분취 크로마토그래피적 분리와 연관된 시간을 소비하고 비용이 많이 드는 작업이 회피된다.

일부 측면 및 구현예에 있어서, 본 발명의 기법에는 하나 이상의 휘발성 비양성자성 용매, 예컨대 에테르 또는 아세테이트, 바람직하게는 비할로겐화물 중에서, 및 반응물과 산물(들)을 둘 다 용해시키기 적합한 조건 하에서의 친핵성 공격(nucleophilic attack) 이 포함된다. 이어서 생성 산물(들)은 증발에 의해 농축되며, 휘발성 양성자성 용매가 세척액 또는 (재)결정화 매질 중 하나의 목적으로 사용되는 조건 하에 휘발성 양성자성 용매, 예컨대 휘발성 알콜 및/또는 물이 농축된 산물에 첨가된다. 여과, 원심분리, 경사분리 및/또는 증발이 두 절차 중 하나를 보조하기 위해 사용될 수 있다. 생성 산물(들)은 안사마이신에 연관된 유용성, 예컨대 항생제 또는 항암제로서 직접적으로 또는 간접적으로 사용될 수 있다. 간접적 유용성의 견지에서, 산물(들)은, 예컨대 또다른 안사마이신 유도체, 예컨대 Pfizer Inc. 에 양도되고 Schnur 등에게 특허 허여된 U.S. 5,932,566 및 PCT/IB94/00160 (WO 95/01342) 에 기재된 것들의 합성에서 중간체(들)로서 유용하다.

본 발명 이전에는, DMF, DMSO, CH₂Cl₂, 및 CHCl₃가 안사마이신의 제조 및 여기에 치환 및 친핵성 부가를 수행하기 위한 매질로 선택되었다. 상기 시약 및 방법은 힘든 작업 및 다회의 물 세척과 EtOAc 추출을 필요로 한다. 특히 염소화 용매의 사용은 현재의 규제 환경 하에 반대된다. 염소화 용매는 환경친화적이지 않고, 잔여 노출로 잠재적 건강 위험성이 부여된다. 또한, 본 출원인은 상기 용매가 순도 및 수율을 방해하는 산물 분해를 촉진함을 발견하였다. 본 발명의 방법은 훨씬 더 직접적이며, 형성된 산물은 전형적으로 수율 및 순도가 더 크고, 환경적 및 건강 이슈들이 회피되거나 최소화되어 상업적 적용에 매우 적합하다.

청구범위에서 사용되는 "임의로" 라는 용어는 그 용어 직후 단계의 수행이 청구범위의 성취를 위해 반드시 필요한 것이 아님을 나타낸다.

"제거" 및 "농축" 이라는 용어는 용매의 100% 삭제를 반드시 의미하는 것이 아니며, 보다 적은 제거 또는 농축 백분율이 수반될 수 있다.

"비할로겐화" 라는 용어는 하나 이상의 할로겐 원자, 예컨대, F, Cl, Br, 및 I 를 포함하지 않는 것을 의미한다. 예시적 할로겐화 용매에는 CHCl₃(클로로포름) 이 포함된다.

"세척" 이라는 용어는 사용되는 조건 하에, 양성자성 용매가 안사마이신을 뚜렷이 용해시키지 않는 것을 나타낸다. 세척은 슬러리의 생성을 포함할 수 있고, 모든 경우 불순물 제거 효과가 있다.

"휘발성 비양성자성 용매" 는 약 35 내지 102℃ 간의 비점을 갖는 것을 의미한다. 하기 표 I 에 나타내는 비양성자성 용매가 바람직하다. 비양성자성 용매는 "비구조화", 즉 순수한 액체 상태에서 광범위한 수소 결합의 네트워크가 없는 것으로 간주된다. 그러나, 특정한 비양성자성 용매는 자체가 양성자성인 화합물 또는 용질, 예를 들어 알콜 또는 물 자체를 용해시키고 안정화시킬 수 있다. 예를 들어 물 및 THF 는 혼화성이다. 일반적으로, 비양성자성 용매는 통상 환경 하에 이온으로 자가해리되는 능력이 부족하다.

"휘발성 양성자성 용매" 에는, 예컨대, 이소프로판올, 에탄올, 물 및 이들의 혼합물이 포함된다. 물은 전통적인 양성자성 용매이다. 액상의 물은 광범위한 수소 결합 네트워크를 특징으로 한다. 액상 중에서, 각각의 개별 물 분자는 주변 물 분자에 4 개의 수소 결합을 형성한다. 상기 광범위한 수소 결합 네트워크의 손상에는 상당한 에너지 도입이 수반되며, 이러한 에너지 비용은 저분자량 화합물에 대해 비교적 높은 비점 (100℃) 으로 반영된다. 알콜, 특히 저분자량 알콜 (탄소수 12 미만인 것들) 은 물과 유사한 특성을 나타낸다. 액체 상태에서, 수소 결합 네트워크가 구축된다. 그러나, 알콜은 구축되는 수소 결합의 수에 있어서 상이하다: 3 개의 수소 결합만이 알콜 용매 분자 사이에 일어나는 반면, 액체 물 중에는 4 개의 상기 결합이 전형적으로 존재한다. 이는 결과적으로 알콜 용매 분자 간에 더 큰 자유도 (looseness) 로 나타나서, 물에 비해 더 낮은 비점 및 빙점으로 나타난다. 물/알콜 혼합물의 하나의 물리적 특성은 공비 혼합물의 형성이다. 물로의 알콜 첨가는 물의 비점을 감소시킨다. 하기 표는 물로의 10% 에탄올 첨가가 물 자체에 비해 보다 휘발성인 용매를 생성할 것임을 예시한다.

또한 표 I 은 대부분 에탄올인, 예컨대 대략 95 % 에탄올, 5% 물인 혼합물이 순수한 에탄올과 같은 온도에서 끓는 것을 예시한다. 상기 이유로, 실제로 물/에탄올 혼합물의 증류에 의해 순수한 에탄올을 수득하는 것은 불가능하며, 이는 주정 증류 분야에 널리 공지된 사실이다. 양성자성 용매의 또다른 특징은 어느 정도 자가 이온화를 겪는 이들의 경향에 있다. 물은, 예를 들어 하기 공식에 따라 반대로 하전된 이온으로 해리된다:

2H₂O ↔H₃O⁺+^-OH

순수한 물 자체는 작지만 측정가능한 정도로 해리하며, 이는 25℃ 에서 순수한 물에 대해 널리 알려진 값 [H₃0⁺] = 10^-7(또는 pH 7) 을 나타낸다.

"비산화 환경" 이란 산화가 불가능하거나 실제로 일어나지 않는 것이 아니라, 단순히 그러한 가능성이 감소되었음을 의미한다. 예에는 감광 (reduced lighting) 및/또는 감소된 기체 산소의 이용이 포함되지만 이에 제한되는 것은 아니다. 후자는, 예컨대 공기 또는 산소가 질소 및/또는 아르곤 기체로 대체되는 경우 일어난다.

안사마이신 및 벤조퀴논 안사마이신

"안사마이신" 이라는 용어는 당분야에 널리 공지된 것으로, 방향족 고리 구조의 반대쪽 말단을 가교하는 다양한 조성 및 길이의 지방족 고리, 및 이들의 환원된 대등물을 특징으로 하는 광범위한 구조 클래스를 나타낸다. 상기 넓은 클래스 내에는 서브클래스인 벤조퀴논 안사마이신이 포함된다. 예시적 화학종에는 하기가 포함된다:

본원에서 사용되는 "벤조퀴논 안사마이시닌" 은 벤조퀴논 부분을 보유하며, 당분야에 공지된 임의의 벤조퀴논 안사마이시닌이 포함된다. 친핵성 첨가를 특징으로 하는 일부 측면에 있어서, 상기에는 바람직하게는 분자의 벤조퀴논 부분 상의 알콕시 부분, 바람직하게는 메톡시가, 바람직하게는 친핵 시약에 의해 대체될수 있는 17 위치에서 포함된다. 상기 반응의 결과 "벤조퀴논 안사마이신 유도체" 가 형성된다. 본 발명에 따른 안사마이신 및 벤조퀴논 안사마이신은 합성물, 천연 생성물 또는 이 둘의 조합, 즉 "반합성물" 일 수 있다. 이들은 또한 단량체성 또는 이량체성일 수 있다. 이량체성 안사마이신의 예시적 예에는 2000. 4. 7. 일자로 출원하고 2000. 10. 19. 일자로 공개된 Rosen 등의 국제 출원 PCT US00/09512 (WO 00/61578) 등에 나타낸 것이 포함되지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 방법에 유용한 기타 예시적 벤조퀴논 안사마이신 및 이들의 제조 방법에는, 예컨대 U. S. 특허 3,595,955 (겔다나마이신의 제조가 기재됨), 4,261,989, 5,387,584, 및 5,932,566 에 기재된 것들이 포함되지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 겔다나마이신은 또한, 예컨대 독일 다름스타트 소재의 Merch KGaA 의 자회사이며 미국 캘리포니아주 산디에고를 본사로 하는 CN Biosciences 에서 시판된다 (cat. no. 345805). 스트렙토미케스 히그로스코피쿠스 (ATCC 55256) 의 배양물로부터 4,5-디히드로겔다나마이신 및 그 히드로퀴논의 생화학적 정제는 Cullen 등이 발명자로 기재되며, 1993. 7. 22. 일자로 WO 93/14215 로 공개된 Pfizer Inc. 에 양도된 국제 출원 번호 PCT/US92/10189 에 기재되어 있으며; 겔다나마이신의 촉매적 수소화에 의한 4,5-디히드로겔다나마이신의 대안적 합성 방법도 또한 공지되어 있다. 예컨대, [Progress in the Chemistry of Organic Natural Products, Chemistry of the Ansamycin Antibiotics, 33 1976, p. 278] 참고.

친핵시약

본원에 기재된 본 발명의 방법에 사용될 수 있는 여러 유형의 친핵시약이 존재한다. 각각이 부가적인 화학적 부분, 예컨대 항체가 차후에 부착될 수 있는 하나 이상의 관능기를 구성하거나, 보유하거나, 또는 보유하도록 개질된, 티올, 티올레이트, 티오에테르, 알콜, 및 알콕시드로 이루어진 군으로부터 선택되는 것들이 바람직하다. 일부 바람직한 구현예에 있어서, 친핵시약은 하기 구조를 갖는 일차 또는 이차 아민이다:

여기서, R⁴및 R⁵는 독립적으로 수소, (C₁-C₁₂) 알킬 또는 알릴, 프로파르길, 히드록시, 아미노, 메르캅토, 카르복실라토, 또는 할로겐 관능기로 임의 치환된 (C₁-C₁₂) 알킬을 나타낸다. 사용될 수 있는 일반적인 아민의 비제한적 목록에는 Sasaki 에게 허여된 U.S. 4,261,989 의 표 I 에 나타낸 것들이 포함된다. 올레핀과 같은 기타 관능기도 또한 부착될 수 있음이 이해될 것이다. 17-AAG 또는 4,5 디히드로 유사체의 제조에서와 같은 일부 구현예에 있어서, 친핵시약은 알릴 아민이다. 본원에 기재된 알릴 아민 및 기타 친핵시약은, 예컨대 Sigma-Aldrich 에서 시판된다.

하기 표에는 본 발명의 다양한 구현예에 사용될 수 있는 일부 바람직한 친핵시약이 예시된다.

휘발성 비양성자성 용매

본 발명의 다양한 구현예에 유용한 예시적 휘발성 비양성자성 용매에는 표 III 에 나타낸 것들이 포함된다:

상기 목록은 단지 예시적이며, 당업자는 사용될 수 있는 기타 휘발성 비양성자성 용매도 존재함을 인지할 것이다. 에테르 및 아세테이트는 이들이 극성, 비양성자성 매질이라는 점에서 특히 유용하며; 이들은 다양한 유기 화합물을 용해시키고, 물 및 탄화수소 둘 다의 특성을 공유하고, 알킬 "부분" 및 비공유 전자쌍을 갖는 산소 원자를 갖는다.

반응 용기

본 발명에 적합한 반응 용기는 가루 유리 접합점을 갖는 시판 유리 반응 플라스크이다. 상기 용기는 전형적으로, 예컨대 PTFE 또는 기타 불활성 코팅으로 코팅된 기타 불활성 물질 코팅 마그네틱 교반자 또는 테플론과 함께 사용된다. 산업적 합성의 스케일링-업에 있어서, 여러 금속 반응 용기는 봉합가능하므로 내재적으로 내광성이다. 반응 용기 내에 삽입된 교반 축 및/또는 패들을 이용한 기계적 교반이 또한 이용될 수 있다. 빛을 배제하기 위해, 단순히 실내광을 어둡게하는 것이 충분할 수 있다. 이와는 달리, 감광성 (light-sensitive) 재료를 갖는 반응의 임의 부분 및 반응 플라스크를 알루미늄 호일로 싸거나 병에 넣거나,당분야에 공지된 또다른 유형의 내광성 용기 내에 포장할 수 있다.

첨가 속도를 조절할 필요가 있는 반응은 첨가 깔대기 (적하 깔대기) 가 장착된 다중목 둥근바닥 플라스크 내에서 수행될 수 있다. 단순한 첨가 깔대기는 출구에 표준 수 테이퍼 접합점 (male standard taper joint) 을 갖는 분리 깔대기와 유사하며; 액체 반응물 또는 용액이 적가되고, 콕 마개가 적하 속도를 조절하는 장치로서 작용한다. 테플론 콕 마개는, 유기 용매 내로 유출되어 목적 산물을 오염시킬 수 있는 콕 마개 그리스를 사용하지 않으므로 첨가 깔대기를 위해 바람직하다.

여러 작은 스케일의 반응에 있어서, 종종 단위 시간 당 첨가되는 시약의 부피에 대해 정확히 조절될 수 있는 주사기로 액체를 첨가하는 것이 편리하다. 액체 시약을 첨가하기 위한 또다른 방식은 당분야에 통상적으로 공지되어 있는 주사기 펌프이다. 적응가능한 유속 펌프 및 장치도 또한 이용될 수 있다.

반응 모니터링

"크로마토그래피 기법을 이용하여 모니터링되는" 이라는 청구범위에서의 용어는 목적 산물의 존재 및/또는 양, 또는 이와는 달리 시약 또는 비목적 산물의 부재 및/또는 양을 결정하는 것을 의미한다. 당분야에 몇몇 방법이 공지되어 있으며, 그 일부를 후술한다.

TLC

박층 크로마토그래피 (TLC) 는 평면 상에 지지된 박층의 흡착제가 고정상으로서 이용되는 흡착 크로마토그래피의 한 형태이다. TLC 에서 가장 통상적으로사용되는 흡착제는 실리카 겔 및 알루미나이다. Keiselguhr 및 셀룰로오스가 가장 적게 통용된다. TLC 크로마토그래프의 용출 또는 전개는 박층의 흡착제 윗부분으로의 용매의 모세관 이동에 의해 달성된다.

TLC 에 사용되는 용출액은 흡착제의 유형 및 분석될 화합물의 흡착제에 대한 친화도에 근거할 것이다. TLC 는 반응의 진행을 모니터링하기 위해, 반응에서 중간체를 검출하는데, 성분의 수를 결정하기 위해 조 산물 또는 알려지지 않은 혼합물을 분석하는데, 및 정제 방법의 효율을 체크하기 위해 매우 유용하다. 무색 유기 화합물의 경우, 흡착제 상 화합물의 시각화는 당분야에 공지된 여러 기법을 이용하여 달성될 수 있다. 그러나 본 발명에 있어서는, 출발 물질 및 산물이 둘 다 각각 황색 및 보라색을 나타내며, 눈에 가시적이다.

HPLC

고압 액체 크로마토그래피 (HPLC) 에 있어서, 액상은 압력에 의해 고정상에서 힘을 받아, 흡착제를 포함하는 칼럼을 통해 용출액의 흐름이 증가된다. 용매 혼합물 및 용매 구배가 현재 시판되는 장치를 이용하여 채택될 수 있다. 다양한 파장의 UV 검출기가 출발 물질 및 산물의 최적 검출을 위해 전형적으로 사용되며, 신호를 적절히 보정하여 검출되는 물질의 양을 시판 소프트웨어를 이용하여 정량할 수 있다.

용매 제거

반응 혼합물, 추출물, 크로마토그래피 분획 또는 (재)결정화로부터의 모액으로부터 목적 산물을 수득하기 위해서 종종 용액을 농축하거나 용매를 완전히 제거할 필요가 있다. 이는 대기압 또는 감압 하에 단순 또는 분획 증류 기법에 의해 수행될 수 있다. 대부분의 용매를 제거하기 위해 때때로 대기압 증류가 사용되며, 이어서 잔여물은 감압 하에 제거된다. 어느 경우에 있어서도, 목적 산물의 안정성 및 휘발성에 주의를 기울여야 한다, 즉 과열로 인한 산물 분해를 피하기 위해 주의를 기울여야 한다.

용매 제거 및 동결건조를 수행하기 위해, 시판 회전 증발기가 존재한다. 기타 단순 장치들이 당업자에게 공지되어 있다. 상응하는 고 진공 하에 감온에서 용매를 제거하는 방법도 또한 당업자에게 공지되어 있다.

여과

여과는 필터로 공지된 다공성 배리어를 사용하여 액체로부터 불용성 고체를 분리하는 것이다; 액체는 필터를 통과하는 반면 고체는 필터 상에 잔여한다. 액체는 중력에 의해 (중력 여과) 및/또는 흡입을 이용하여 (흡입 여과) 필터를 통과할 수 있다. 여과 공정은 용액을 맑게 하고/하거나 고체를 수집하기 위해 이용된다. 유기 화학에서 가장 종종 사용되는 필터는 여과지 및 소결 유리 프릿이며, 둘 다 여러 공급원에서 시판되고 당업자에게 친숙한 것이다. 흡입 여과는 전형적으로 Buechner, Hirsch 또는 소결 유리 프릿을 사용한다. 흡입 여과에 있어서, 필터 아래의 압력은 흡인기 또는 기타 진공 수단에 의해 감소되며; 이어서 대기압이 액체를 필터 통과시킨다.

(재)결정화

결정화는 주어진 물질의 용융물 또는 용액으로부터의 결정의 침착이다.결정 형성 과정 동안, 친 분자 (like molecule) 가 동일한 유형의 분자로 이루어진 성장 결정에 부착되는 경향이 있으며, 이는 다른 분자들에 비해 동일한 구조의 분자가 결정 격자에서 더 나은 적합성 (fit) 을 갖기 때문이다. 결정화 공정이 거의 평형 조건 하에 일어나는 경우, 친 분자로 이루어진 표면 상에 침착하는 분자의 선호성은 결정성 물질의 순도를 증가시킬 것이다. 따라서, 결정화 공정은 중요한 정제 방법이다. 결정화는, 용해된 화합물이 용해를 중지하고, 결정화 여부와 무관하게 용액 밖으로 유효하게 고체형을 취하는 것을 나타내는 광범위한 용어인 "침전" 에 포함된다. 침전 또는 결정화는 장시간에 걸쳐, 예컨대 수초에서 수시간 또는 수일에 걸쳐 일어날 수 있다. 상기 공정은 또한 하기 실시예 2 에 나타낸 바와 같이 온도에 의존하며, 또한 난온 대 냉온에 대한 용해도 차이를 가지면서 사용되는 특정 용매 및 용질의 특성에 의존한다. "재결정화" 라는 용어는, 동일한 용매 및 조건의 사용 여부와 무관하게, 및 동일하거나 상이한 융점의 다형체를 얻기에 충분한지와 무관하게, 하나 이상의 이전 결정화가 이미 화합물 상에 수행되었음을 나타낸다.

실제로, 본 발명의 하나의 측면은 상이한 다형체 구조를 형성하고 개발하는 능력에 있다. 본 출원인들은 17-AAG 의 상대적으로 순수한 여러 형태 (다형체) 가 가능함을 확인하였고, 일부는 예컨대 실질적으로 순수한 이소프로판올로부터 결정화되는 경우 약 147 ~ 153℃ 의 상대적으로 낮은 융점을 보유하며, 일부는 예컨대 물 분획과 조합된 에탄올로부터 결정화되는 경우 약 200 ~ 212℃ 의 더 높은 융점을 특징으로 한다. 물은 에탄올과 사전 혼합되거나, 내부에 용해된 17-AAG를 이미 함유하는 에탄올 용액에 후에 첨가될 수 있다. 17-AAG 의 저융점 형태는 17-AAG 의 고융점 형태에 비해 여러 용매 및 오일 중에 실온에서 더 쉽게 가용성이며, 약물 또는 약학 조성물로서 17-AAG 를 제형화하는데 잠재적인 장점을 제공한다. 고융점 형태는 다양한 조건 하에 더 큰 화학적 안정성의 장점을 제공할 수 있다, 즉 다양한 저장 조건 하에 더 긴 보관 수명을 나타낸다. 최종 목적에 따라, 적절한 용매 중에 단순히 용매 및 결정화시킴으로써, 쉽게 한 가지 형태에서 또다른 형태로 전환시킬 수 있다. 17-아미노 겔다나마이신 ("17-AG"; 실시예 5, 6 참고) 을 이용하여 유사한 현상이 관찰되어, 상이한 다형체형이 다른 안사마이신에 대해서도 수득가능하고, 마찬가지로 기타 비관련 화합물도 또한 수득가능함을 시사한다.

실시예 1

17-알릴 아미노 겔다나마이신 (17-AAG) 의 합성

건조한 2 L 플라스크 내 1.45 L 의 건조 THF 중 45.0 g (80.4 mmol) 의 겔다나마이신에 30 분에 걸쳐 50 mL 의 건조 THF 중 36.0 mL (470 mmol) 의 알릴 아민을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 질소 하에 4 hr 동안 교반하고, 이때 TLC 분석은 반응이 종료되었음을 나타냈다 [(GDM:밝은 황색: Rf=0.40; (5% MeOH - 95% CHCl₃); 17-AAG: 보라색:Rf=0.42 (5% MeOH - 95%CHCl₃)]. 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 조 물질을 420 mL 의 H₂0:EtOH (90:10) 중에 25℃ 에서 슬러리화시키고, 여과하고, 45℃ 에서 24 hr 동안 건조하여, 40.9 g (66.4 mmol) 의 17-AAG 를 보라색 결정으로 얻었다 (82.6 % 수율, >98% 순수함이 254 nm 에서 HPLC 로 모니터링되었음). MP 206 ~ 212℃.¹H NMR 및 HPLC 는 목적 산물과 일치하였다.

실시예 2

이소프로판올 중 17-AAG 의 결정화

에탄올 중에서의 결정화 대신에 정제의 대안적 방법은 실시예 1 로부터의 조 17-AAG 를 800 mL 의 2-프로필 알콜 (이소프로판올) 중에 80℃ 에서 용해시키거나 환류시킨 후 (대략 82.2℃) 실온으로 냉각하는 것이다. 여과 후 45℃ 에서 24 hr 동안 건조하여, 44.6 g (72.36 mmol) 의 17-AAG 를 보라색 결정으로 얻었다 (90% 수율, >99% 순수함이 254 nm 에서 HPLC 로 모니터링되었음). MP 147 ~ 153℃.¹H NMR 및 HPLC 는 목적 산물과 일치하였다.

실시예 3

다형체 전환: 에탄올 중 17-AAG 의 재결정화

정제의 대안적 방법으로 실시예 2 로부터의 17-AAG 산물을 400 mL 의 H₂0:EtOH (90:10) 중에 25℃ 에서 슬러리화시키고 여과하고 45℃ 에서 24 hr 동안 건조하여, 42.4 g (68.6 mmol) 의 17-AAG 를 보라색 결정으로 얻었다 (95% 수율, >99% 순수함이 254 nm 에서 HPLC 로 모니터링되었음). MP 147 ~ 153℃.¹HNMR 및 HPLC 는 목적 산물과 일치하였다.

실시예 4

다형체 전환: 에탄올 중 17-AAG 의 재결정화

정제의 대안적 방법으로 실시예 2 로부터의 17-AAG 산물을 300 mL 의 EtOH 중에 환류 하에 용해시킨 후 (대략 80℃), 1,200 mL 의 H₂0 를 첨가하여 실온으로 냉각하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고 45℃ 에서 24 hr 동안 건조하여, 41.0 g (67 mmol) 의 17-AAG 를 보라색 결정으로 얻었다 (93% 수율, >99% 순수함이 254 nm 에서 HPLC 로 모니터링되었음). MP 206 ~ 212℃.¹H NMR 및 HPLC 는 목적 산물과 일치하였다.

실시예 5

17-아미노 겔다나마이신 (17-AG) 의 합성

열건조된 플라스크 내 40 ml 의 건조 THF 중 2.0 g (3.57 mmol) 의 겔다나마이신에 2.55 ml (17.8 mmol, 메탄올 중 용액, ca 7N) 의 암모니아를 질소 하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 24 hr 동안 교반하고, 이때 TLC 분석은 반응이 종료되었음을 나타냈다. 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 조 물질을 30 mL 의 EtOH 중에 용해시키고 120 mL 의 물을 첨가하여 결정화시켜서, 1.8 g (3.30 mmol) 의 17-AG 를 적색 결정으로 얻었다 (HPLC 에 따르면 99% 순수함). MP 284 ~ 286℃.¹H NMR 및 HPLC 는 목적 산물과 일치하였다.

실시예 6

이소프로판올 중 17-AG 의 재결정화

실시예 5 로부터 17-AG 정제의 대안적 방법으로, 최종 17-AG 산물을 30 mL 의 실질적으로 순수한 2-프로필 알콜 (이소프로판올) 중에 80℃ 에서 또는 환류 하에 용해시킨 후 (대략 82.2℃), 실온으로 냉각하였다. 여과 후 45℃ 에서 24 hr 동안 건조하여, 1.5 g (2.7 mmol) 의 17-AAG 를 보라색 결정으로 얻었다 (76% 수율, >99% 순수함이 254 nm 에서 HPLC 로 모니터링되었음). MP 267 ~ 271℃.¹H NMR 및 HPLC 는 목적 산물과 일치하였다.

* * *

상기 실시예는 제한을 위한 것이 아니며, 단순히 본 발명의 여러 측면 및 구현예의 대표예이다. 언급된 모든 문헌은 본 발명이 속한 분야의 기술 수준을 나타낸다. 각 문헌의 개시 내용은 각각이 개별적으로 그 전문이 참고로서 도입되는 것과 동일한 범위로 본원에 참고로서 도입되지만, 어느 문헌도 선행 기술로 인정되지는 않는다.

당업자는, 본 발명이 언급된 목적 및 장점 뿐만 아니라 내재적인 것들을 달성하고 목적을 수행하기 위해 잘 변형됨을 용이하게 인지할 것이다. 기재된 방법 및 조성물은 바람직한 구현예를 나타내며 예시적인 것으로, 본 발명의 범위를 제한하려는 것은 아니다. 특정 개질 및 기타 용도가 당업자에게 얻어질 것이며, 청구범위의 범위에 의해 정의되는 바와 같이 본 발명의 요지 내에 포함된다.

다양한 치환 및 개질이 본 발명의 범위 및 요지를 벗어나지 않고 본 발명에대해 수행될 수 있음이 당업자에게 용이하게 자명할 것이다. 따라서, 상기 추가적 구현예는 본 발명 및 하기 청구범위의 범위 내에 속한다.

본원에 예시적으로 기재된 본 발명은 본원에 구체적으로 개시되지 않은 임의의 성분(들), 제한(들)이 없이 적합하게 수행될 수 있다. 따라서, 예를 들어 "포함하는", "본질적으로 이루어진" 및 "이루어진" 이라는 용어 각각은 전환 어구로서 상이한 의미를 지니지만, 각각의 상기 구는 서로 대신 사용되어 본 발명의 상이한 측면 또는 구현예를 나타낼 수 있다. 사용된 용어 및 표현은 설명을 위한 용어로서 사용되며 제한을 위한 것이 아니고, 상기 용어 및 표현의 사용에 있어서 나타내고 기재된 특징의 임의 동등물 또는 그 일부를 배제하기 위한 의도는 없다. 청구되는 본 발명의 범위 내에 다양한 개질이 가능함이 인지된다. 따라서, 본 발명이 바람직한 구현예에 의해 구체적으로 개시되었지만, 본원에 개시된 개념의 임의 특징, 개질 및 변형이 당분야에 의지될 수 있으며, 이러한 개질 및 변형은 본 발명의 설명 및 첨부된 청구범위에 의해 정의되는 바와 같은 본 발명의 범위 내에 속하는 것으로 간주된다.

또한, 본 발명의 특징 또는 측면이 Markush 그룹 또는 기타 대안적 그룹화에 의해 기재되지만, 당업자는 본 발명이 또한 임의의 개별원 또는 Markush 그룹 또는 기타 그룹의 서브그룹원의 관점에서 기재되며, 적절한 개별원이 배제됨을 인지할 것이다.

기타 구현예는 하기 청구범위 내에 속한다.

Claims (45)

1. 하기를 포함하는 17-알릴 아미노 겔다나마이신 (17-AAG) 또는 그 4,5 디히드로 17-AAG 유사체의 제조 방법:

   (a) 알릴 아민 및 겔다나마이신 또는 그 4,5 겔다나마이신 디히드로 유사체를 휘발성 비양성자성 용매 중에 조합하여 조 17-AAG 또는 4,5 디히드로 17-AAG 를 형성하는 단계;

   (b) 상기 조 17-AAG 또는 4,5 디히드로 17-AAG 를 증발시켜 농축하는 단계;

   (c) 상기 농축 17-AAG 또는 4,5 디히드로 17-AAG 에 휘발성 양성자성 용매를 첨가하는 단계; 및

   (d) 임의로 여과 단계를 채택하는, 상기 조 17-AAG 또는 4,5 디히드로 17-AAG 를 정제하기에 적합한 조건 하에 상기 휘발성 양성자성 용매를 제거하는 단계.
2. 제 1 항에 있어서, 상기 휘발성 비양성자성 용매가 THF, 에틸-에테르, MTBE, THP, 디옥산, 에틸 sec-부틸 에테르, 메틸 부틸 에테르, 에틸 아세테이트, 및 메틸 아세테이트로 이루어진 하나 이상의 군으로부터 선택되며, 상기 휘발성 양성자성 용매에 휘발성 알콜, 물, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 원이 포함되는 방법.
3. 제 2 항에 있어서, 상기 휘발성 비양성자성 용매에 THF 가 포함되는 방법.
4. 제 1 항에 있어서, 반응 종료 및/또는 순도를 모니터링하기 위한 크로마토그래피 기법을 추가로 포함하는 방법.
5. 제 1 항에 있어서, 단계 (b) 또는 (d) 또는 둘 다에 가열, 원심분리, 경사분리, 및/또는 진공의 적용이 포함되는 방법.
6. 제 1 항에 있어서, 상기 휘발성 양성자성 용매가 용액으로부터 상기 17-AAG 또는 4,5 디히드로 17-AAG 를 결정화시키는데 사용되는 방법.
7. 제 1 항에 있어서, 상기 휘발성 양성자성 용매가 상기 17-AAG 또는 4,5 디히드로 17-AAG 를 세척하는데 사용되는 방법.
8. 제 1 항에 있어서, 비산화 환경 중에 하나 이상의 단계 (a) ~ (d) 를 수행하는 것이 추가로 포함되는 방법.
9. 하기를 포함하는 안사마이신의 제조 방법:

   (a) 휘발성 비양성자성 용매 중에 안사마이신을 제공하는 단계;

   (b) 상기 안사마이신을 증발시켜 농축하는 단계;

   (c) 단계 (b) 의 산물에 휘발성 양성자성 용매를 첨가하는 단계; 및

   (d) 임의로 여과 단계를 채택하는, 상기 안사마이신을 정제하기에 적합한 조건 하에 상기 휘발성 양성자성 용매를 제거하는 단계.
10. 제 9 항에 있어서, 상기 휘발성 비양성자성 용매가 THF, 에틸-에테르, MTBE, THP, 디옥산, 에틸 sec-부틸 에테르, 메틸 부틸 에테르, 에틸 아세테이트, 및 메틸 아세테이트로 이루어진 하나 이상의 군으로부터 선택되며, 상기 휘발성 양성자성 용매에 휘발성 알콜, 물, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 원이 포함되는 방법.
11. 제 9 항에 있어서, 상기 휘발성 양성자성 용매가 용액으로부터 상기 안사마이신을 결정화시키는데 사용되는 방법.
12. 제 9 항에 있어서, 상기 휘발성 양성자성 용매가 상기 안사마이신을 세척하는데 사용되는 방법.
13. 제 9 항에 있어서, 상기 휘발성 비양성자성 용매에 THF 가 포함되는 방법.
14. 제 9 항에 있어서, 반응 종료 및/또는 순도를 모니터링하기 위한 크로마토그래피 기법이 추가로 포함되는 방법.
15. 제 9 항에 있어서, 단계 (b) 또는 (d) 또는 둘 다에 가열, 원심분리, 경사분리, 및/또는 진공의 적용이 포함되는 방법.
16. 제 9 항에 있어서, 비산화 환경 중에 하나 이상의 단계 (a) ~ (d) 를 수행하는 것이 추가로 포함되는 방법.
17. 제 9 항에 있어서, 상기 안사마이신이 17-AAG 및 4,5 디히드로 17-AAG 로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
18. 임의로 내광 용기 내에 포장되는, 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 따른 산물.
19. 하기를 포함하는 17-AAG 의 제조 방법:

    실질적으로 물이 없는 양성자성 용매 용액 중에 용해된 17-AAG 를 제공하는 단계;

    상기 양성자성 용매 용액으로부터 상기 17-AAG 를 결정화시키는 단계; 및

    상기 양성자성 용매 용액을 제거하는 단계.
20. 제 19 항에 있어서, 상기 양성자성 용매가 이소프로판올이고, 상기 이소프로판올로부터의 결정화 및 이의 제거 후 상기 17-AAG 가 146℃ ~ 153℃ 의 융점을 나타내는 방법.
21. 제 19 항에 있어서, 상기 양성자성 용매가 이소프로판올이고, 상기 이소프로판올로부터의 결정화 및 이의 제거 후 상기 17-AAG 가 약 155℃ 이하의 융점을 나타내는 방법.
22. 제 20 항 또는 제 21 항의 방법에 의해 형성된 17-AAG 를 함유하는 조성물.
23. 제 19 항의 방법에 의해 형성된 17-AAG 를 함유하는 조성물.
24. 제 22 항에 있어서, 임의로 내광 용기 중에 포장된 조성물.
25. 제 23 항에 있어서, 임의로 내광 용기 중에 포장된 조성물.
26. 하기를 포함하는 17-AAG 의 제조 방법:

    물 분획을 함유하는 양성자성 용매 용액 중에 용해된 17-AAG 를 제공하는 단계;

    상기 양성자성 용매 용액으로부터 상기 17-AAG 를 결정화시키는 단계; 및

    상기 양성자성 용매 용액을 제거하는 단계.
27. 제 26 항에 있어서, 상기 양성자성 용매 용액으로부터의 결정화 및 이의 제거 후 상기 17-AAG 가 200℃ 초과의 융점을 나타내는 방법.
28. 제 26 항에 있어서, 상기 양성자성 용매 용액으로부터의 결정화 및 이의 제거 후 상기 17-AAG 가 206℃ ~ 212℃ 의 융점을 나타내는 방법.
29. 제 27 항 또는 제 28 항에 있어서, 상기 양성자성 용매 용액이 추가로 에탄올을 함유하는 방법.
30. 임의로 내광 용기 중에 포장된, 제 29 항의 방법에 의해 형성된 17-AAG 를 함유하는 조성물.
31. 안사마이신의 제 1 다형체형을 안사마이신의 제 2 다형체형으로 전환시키는 방법에 있어서, 안사마이신의 제 2 다형체형을 얻기에 충분한 조건 하에 안사마이신의 제 1 다형체형을 양성자성 용매 용액 중에 용해시키는 것을 포함하는 방법.
32. 제 31 항에 있어서, 상기 제 1 다형체형이 상기 제 2 다형체형 보다 더 높은 융점을 나타내는 방법.
33. 제 31 항에 있어서, 상기 제 1 다형체형이 상기 제 2 다형체형 보다 더 낮은융점을 나타내는 방법.
34. 제 31 항 내지 제 33 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안사마이신이 17-AAG 인 방법.
35. 제 32 항에 있어서, 상기 안사마이신이 17-AAG 가고, 상기 제 2 다형체형이 실질적으로 물이 없는 이소프로판올 용액으로부터의 결정화에 의해 형성되는 방법.
36. 제 33 항에 있어서, 상기 안사마이신이 17-AAG 가고, 상기 제 2 다형체형이 물을 함유하는 에탄올 용액으로부터의 결정화에 의해 형성되는 방법.
37. 147 ~ 153℃ 의 융점을 갖는 형태의 17-AAG 를 함유하는 조성물.
38. 제 37 항에 있어서, 상기 17-AAG 가 결정형인 조성물.
39. 267 ~ 271℃ 의 융점을 갖는 형태의 17-AG 를 함유하는 조성물.
40. 제 39 항에 있어서, 상기 17-AG 가 결정형인 조성물.
41. 하기를 포함하는, 결정성 화합물의 하나의 다형체형으로부터 또다른 형으로의 전환 방법:

    (a) 제 1 융점을 가지며 제 1 용매 중에서의 결정화에 의해 생성되는 제 1 결정형 화합물을 제공하는 단계;

    (b) 상기 화합물을 제 2 용매 중에 재결정화시켜, 상기 제 1 융점과 상이한 제 2 융점을 갖는 제 2 결정형을 얻는 단계.
42. 제 41 항에 있어서, 상기 제 1 결정형이 상기 제 2 결정형 보다 더 높은 융점을 갖는 방법.
43. 제 42 항에 있어서, 상기 제 1 결정형이 상기 제 2 결정형 보다 더 낮은 융점을 갖는 방법.
44. 제 40 항 내지 제 43 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물이 안사마이신인 방법.
45. 제 44 항에 있어서, 상기 안사마이신이 17-AAG 및 17-AG 로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.