KR20040019078A - 미생물채취 칩, 미생물채취 키트, 미생물 계량방법,미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체 및 미생물계량장치 - Google Patents

미생물채취 칩, 미생물채취 키트, 미생물 계량방법,미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체 및 미생물계량장치 Download PDF

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Abstract

본 발명은, 미생물을 검사대상으로부터 효율적으로 채취하고, 또한, 채취된 미생물을 정확히 검출하여 계량하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 미생물채취 칩은 이물을 제거하는 필터와 미생물을 포집하는 필터를 기본구성으로 한다. 미생물채취 키트는 상기의 것과 같은 미생물채취 칩과 흡인여과수단으로 이루어진다. 흡인여과수단은, 예를 들면, 입구부에 고무마개가 설치되어 있는 음압관이다. 또한, 미생물채취 칩은 액상검체를 주입하는 액상검체 주입용기와 음압관의 입구부에 설치된 고무마개를 관통시킬 수 있는 중공(中空)바늘을 갖는다. 액상검체 주입용기에 주입된 액상검체는 음압관의 압력에 의해서 흡인여과된다. 이물은 이물제거필터에서 제거되고, 미생물은 미생물채취용 필터상에 포집된다. 그 후, 미생물채취용 필터를 포함하는 유니트를 사용하여 미생물채취용 필터상에 포집된 미생물을 검출하여 계량한다.

Description

미생물채취 칩, 미생물채취 키트, 미생물 계량방법, 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체 및 미생물 계량장치 {MICROORGANISM-COLLECTING CHIP, MICROORGANISM-COLLECTING KIT, METHOD OF QUANTIFYING MICROORGANISMS, SPECIMEN FOR CONFIRMING NORMAL STATE OF MICROORGANISM-QUANTIFYING APPARATUS AND MICROORGANISM-QUANTIFYING APPARATUS}

종래, 이 종류의 미생물 채취수단으로서는, 펌프의 작동에 의한 압력변화에 의해서 미생물을 포함할 수 있는 액상검체로부터 미생물을 여과하여 필터 상에 미생물을 포집한 후, 유니트를 분해하여 핀셋과 같은 세밀한 작업을 할 수 있는 도구를 사용하여 채취한 미생물이 부착하고 있는 필터를 회수하여 측정하는 경우가 있었다.

이러한 종래의 미생물 채취수단으로서는, 미생물의 채취에 펌프 등의 대규모장치를 필요로 하고 있다. 또한, 이물(異物) 등의 영향이 직접 있는 것과 같은 검체의 경우, 이물제거과정을 별도로 필요로 하고 있다. 또한 필터 상에 채취한 미생물을 검사하기 위해서 필터만을 회수해야 한다. 이 작업에는 핀셋 등 세밀한 작업을 하기 위한 도구를 필요로 하고 있기 때문에, 효율을 저하하여, 대량의 샘플을 처리할 수가 없다. 또한 펌프를 사용하기 위해서 기기가 크게 되어, 식품검사공정 등, 작업공간이 좁은 장소에서는 할 수 있는 것이 아니다. 이들은, 신속성이 요구되는 미생물 검사에 있어서, 어느 정도의 검사시간 및 기술을 필요로 한다. 따라서, 누구나 간편히 신속히 할 수 있는 것은 아니라는 과제가 있다.

본 발명은, 이러한 종래의 과제를 해결하는 것으로, 이물제거용 필터와 미생물채취용 필터를 일체화시킨 것을 사용하는 것으로 신속화, 간이화를 꾀한 미생물채취 칩을 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 이물제거용 필터의 구멍지름을 5 내지 20㎛로 함으로써 미생물을 통과시키고, 이물을 극력 제거하는 동시에, 미생물채취용 필터의 구멍지름을 0.2 내지 0.8㎛로 함으로써 미생물을 확실히 포집하는 미생물채취 칩을 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 이물제거용 필터를 바닥부로 하는 액상검체 주입용기를 설치함으로써 액상검체의 용량이 다량인 경우에서도 대응할 수 있는 미생물채취 칩을 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 이물제거용 필터의 전단에 액상검체 주입용기를 설치하고, 액상검체 주입용기를 이물제거용 필터를 포함하는 부위와 탈착가능하게 함으로써, 액상검체주입용기를 반복하여 사용할 수가 있는 미생물채취 칩을 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 액상검체 주입용기 개구부를 덮는 면봉부착뚜껑을 부가함으로써, 검사대상에 있어서의 각부나 빈틈 등과 같은 미생물을 채취하기 어려운 장소로부터 이것을 간편하게 채취할 수 있는 미생물채취 칩을 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 미생물채취용 필터를 포함하는 부위를 단독으로 떼어냄으로써, 미생물 계량장치에 미생물채취용 필터를 부위마다 설치할 수 있는 미생물채취 칩을 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 미생물채취용 필터를 어두운 색의 필터로 함으로써, 배경(back ground)의 발광을 억제하여 미생물계량을 정밀도 좋게 할 수 있는 미생물채취 칩을 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 미생물채취용 필터 상에 어떤 종류의 성분으로 이루어지는 박막을 형성함으로써, 배경(back ground)의 발광을 억제하여 미생물 계량을 정밀도 좋게 할 수 있는 미생물채취 칩을 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 박막의 막두께를 적절한 값으로 함으로써, 박막을 형성하는 것의 효과를 보다 확실한 것으로 하는 미생물채취 칩을 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 본 발명은, 상기의 것과 같은 미생물채취 칩과 흡인여과수단을 구비한 미생물채취 키트를 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 흡인여과수단으로 음압관(陰壓管)을 사용함으로써, 펌프 등의 장치나특별한 기술을 필요로 하지 않는 미생물채취 키트를 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 음압관의 입구부에 고무마개를 설치함으로써, 외부에서 관을 고무마개에 찌름으로써 흡인할 수 있는 미생물채취 키트를 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 중심부가 박층(薄層)으로 되어 있는 고무마개를 사용함으로써, 외부에서 용이하게 관을 찌를 수 있는 미생물채취 키트를 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 미생물채취용 필터 하부에 음압관 내부에 다다르는 중공(中空)바늘을 설치함으로써 고무마개를 관통하여, 음압관 내부에 다다르기 쉬운 미생물채취 키트를 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 본 발명은, 상기의 것과 같은 미생물채취 칩을 사용하여 염색한 미생물을 미생물채취용 필터 위에 포집하여, 살아있는 세포와 죽은 세포의 양쪽 또는 어느 한쪽과 특정 미생물을 동시 검출하는 미생물 계량방법을 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 본 발명은, 상기의 것과 같은 미생물채취 칩을 사용하여 미생물을 미생물채취용 필터 위에 포집한 후, 미생물을 염색하여, 살아있는 세포와 죽은 세포의 양쪽 또는 어느 한쪽과 특정 미생물을 동시 검출하는 미생물 계량방법을 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 액상검체에 먹물을 첨가함으로써 미생물을 미생물채취용 필터상에 포집할 때에 필터 위를 검게 하는 것에 의해, 배경(back ground)이나 이물의 발광을 억제하여 미생물 계량을 정밀도 좋게 하는 미생물 계량방법을 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 미생물이 포집된 미생물채취용 필터의 위에서 먹물을 첨가함으로써, 상기와 같이 미생물계량을 정밀도 좋게 하는 미생물 계량방법을 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체를 사용하여 장치가 정상상태에 있는 것을 확인한 후, 미생물 계량을 함으로써, 장치이상에 따르는 부정확한 계량결과를 도출하는 것과 같은 일이 없는 미생물 계량방법을 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체로 고분자 형광입자를 표면에 고정한 기재를 사용함으로써 장치의 상태확인을 정확히 반복하여 몇 번이나 할 수 있는 미생물 계량방법을 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체로 염색한 미생물을 표면에 고정한 기재를 사용함으로써 장치의 상태확인을 정확히 할 수 있는 미생물 계량방법을 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 본 발명은, 특정파장의 여기광(勵起光)에 의해서 발광하는 발광체를 표면에 고정한 기재를 사용함으로써 장치의 상태확인을 정확히 하는 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체를 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 기재를 어두운 색으로 함으로써 배경(back ground)의 발광을 억제하여장치의 상태확인을 정확히 하는 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체를 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 발광체를 고정한 기재 상에 어느 종류의 성분으로 이루어지는 박막을 형성함으로서, 배경(back ground)의 발광을 억제하여 장치의 상태확인을 정확히 하는 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체를 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 박막의 막두께를 적절한 값으로 함으로써, 박막을 형성하는 것의 효과를 보다 확실한 것으로 하는 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체를 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

또한, 본 발명은, 미생물채취 칩에 있어서의 미생물채취용 필터에 포집된 미생물을 계량하기 위한 미생물 계량장치로서, 장치가 정상상태에 있는 것을 확인할 수 있도록 한 장치를 제공하는 것을 목적으로 한다.

[발명의 개시]

본 발명의 미생물채취 칩은, 상기 목표를 달성하기 위해서 이물을 제거하는 필터 및 미생물채취용 필터를 설치한 것으로, 여과에 의해서 미생물채취용 필터 상에 미생물을 포집하는 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 검사대상이 식품재료쓰레기나 환경중의 모래 먼지 등의 특수한 것이더라도, 야채쓰레기나 고기조각 등의 이물을 효율적으로 제거할 수 있고, 이것들의 크기보다도 작아서 이물제거용 필터를 통과할 수 있는 미생물을 미생물채취용 필터 상에 포집하여, 이들 포집한 미생물을 미리 염색 또는 포집후 염색함으로써 검출이 용이하게 되는 미생물채취 칩을 얻을 수 있다.

또한, 이물제거용 필터의 구멍지름을 5 내지 20㎛로 하고, 미생물채취용 필터의 구멍지름을 0.2 내지 0.8㎛로 한 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 이물제거용 필터의 구멍지름을 5 내지 20㎛로 하는 것으로 이물을 극력 제거하고, 미생물채취용 필터의 구멍지름을 0.2 내지 0.8㎛로 함으로써 미생물을 미생물채취용 필터 상에 확실히 포집할 수 있는 미생물채취 칩을 얻을 수 있다.

또한, 이물제거용 필터가 액상검체 주입용기의 바닥부로서 이루어지는 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 액상검체의 용량이 많은 경우라도 여과가 용이한 것으로 되고, 또한, 액상검체를 이물제거용 필터 상에 붓는 것이 용이한 것으로 되는 미생물채취 칩을 얻을 수 있다.

또한, 이물제거용 필터의 더욱 전단에 액상검체 주입용기를 설치한 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 액상검체 주입용기를 이물제거용 필터를 포함하는 부위와 탈착가능하게 함으로써, 액상검체 주입용기를 반복하여 사용할 수가 있는 미생물채취 칩을 얻을 수 있다.

또한, 액상검체 주입용기 개구부를 덮는 면봉부착뚜껑을 구비한 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 도마 위의 상처나 검사대상의 각 등 검출하기 어려운 부위로부터의 미생물의 채취를 용이한 것으로 할 수가 있는 미생물채취 칩을 얻을 수 있다.

또한, 미생물채취용 필터를 포함하는 부위를 단독으로써 떼어낼수 있는 것으로 한 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 미생물채취용 필터를 포함하는 부위를 단독으로 떼어냄으로써 필터만을 떼어낼 필요성이 없어져, 미생물계량을 위한 조작을 용이한 것으로 하는 미생물채취 칩을 얻을 수 있다.

또한, 미생물채취용 필터를 어두운 색의 필터로 한 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 배경(back ground)이 발광하여 정확한 미생물 계량을 저해하는 것을 효과적으로 억제할 수가 있는 미생물채취 칩을 얻을 수 있다.

또한, 필터 상에 금, 구리, 크롬, 백금, 팔라듐으로부터 선택되는 적어도 1종류의 금속성분을 포함하는 박막을 형성한 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 배경(back ground)이 발광하여 정확한 미생물 계량을 저해하는 것을 효과적으로 억제할 수가 있는 미생물채취 칩을 얻을 수 있다.

또한, 박막의 막두께를 10 내지 50nm로 한 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 박막을 형성하는 것의 효과를 보다 확실한 것으로 한 미생물채취 칩을 얻을 수 있다.

또한, 본 발명의 미생물채취 칩은, 상기 목표를 달성하기 위해서 상기의 것과 같은 미생물채취 칩과 흡인여과수단으로 이루어지는 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 식품공장 등의 현장에서, 누구나 간단히 더군다나 확실히 미생물의 채취 및 계량을 할 수 있는 미생물채취 키트를 얻을 수 있다.

또한, 흡인여과수단을 음압관으로 한 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 흡인여과수단으로 음압관을 사용함으로써 펌프 등의 특수하고 또한 대규모인 장치를 필요로 하지 않고, 간이하게, 또한 신속히 미생물을 채취할 수 있는 미생물채취 키트를 얻을 수 있다.

또한, 음압관의 입구부에 고무마개가 설치되어 있는 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 음압관의 입구부에 고무마개를 설치함으로써, 외부에서 관을 고무마개에 찌름으로써 흡인할 수 있는 동시에, 관을 찌를 때에 미끄러지기 어려운 등 취급이 용이하게 되어, 흡인후 여과액의 폐기가 용이하게 된다. 또한, 고무마개를 사용함으로써 미생물채취 키트에 있어서의 음압관의 밀폐성을 유지할 수 있는 미생물채취 키트를 얻을 수 있다.

또한, 음압관 입구부의 고무마개의 중심부가 박층으로 되어 있는 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 음압관 입구부의 고무마개의 중심부가 박층으로 되어 있음으로써 중공(中空)바늘 등을 적은 저항으로 찔러 넣을 수 있는 미생물채취 키트를 얻을 수 있다.

또한, 미생물채취 칩의 미생물채취용 필터하부에 음압관 내부에 다다르는 중공바늘을 설치한 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 중공바늘을 설치함으로써 중공바늘보다 상부에 설치한 액상검체를 용이하게 흡인여과할 수 있게 되는 미생물채취 키트를 얻을 수 있다.

또한, 본 발명의 미생물 계량방법은, 상기 목표를 달성하기 위해서 살아있는 세포와 죽은 세포를 발색시키는 제 1 화합물과 죽은 세포를 상기 발색과 다른 파장으로 발색시키는 제 2 화합물과 살아있는 세포를 상기 발색과 다른 파장으로 발색시키는 제 3 화합물 속에서 1종류 또는 복수종류와, 특정 미생물 유래물질과 반응함으로써 상기 발색과 다른 파장으로 발색하는 적어도 1종류 이상의 제 4 화합물을 액상검체에 접촉시켜, 미생물이 액상검체에 포함되어 있는 경우에는 미생물을 염색한 후, 상기의 것과 같은 미생물채취 칩을 사용하여 미생물을 미생물채취용 필터 상에 포집한 후, 그 파장차 및 발색량으로부터 살아있는 세포와 죽은 세포의 양쪽 또는 어느 한쪽과 특정 미생물을 동시 검출하는 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 살아있는 세포나 죽은 세포나 특정 미생물을 정밀도 좋게 간단히 계량할 수 있는 미생물 계량방법을 얻을 수 있다.

또한, 본 발명의 미생물 계량방법은, 상기 목표를 달성하기 위해서 상기의 것과 같은 미생물채취 칩을 사용하여 미생물을 포함할 수 있는 액상검체로부터 미생물을 미생물채취용 필터 상에 포집한 후, 포착된 미생물에 살아있는 세포와 죽은 세포를 발색시키는 제 1 화합물과 죽은 세포를 상기발색과 다른 파장으로 발색시키는 제 2 화합물과 살아있는 세포를 상기 발색과 다른 파장으로 발색시키는 제 3 화합물 속에서 1종류 또는 복수종류와, 특정 미생물 유래물질과 반응함으로써 상기 발색과 다른 파장으로 발색하는 적어도 1종류 이상의 제 4 화합물을 접촉시켜, 미생물을 염색한 후, 그 파장차 및 발색량으로부터 살아있는 세포와 죽은 세포의 양쪽 또는 어느 한쪽과 특정 미생물을 동시 검출하는 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 액상검체의 용량이 많은 경우이더라도 제 1 내지 제 4 화합물의 사용량은 소량으로, 살아있는 세포나 죽은 세포나 특정 미생물을 정밀도 좋게 간단히 계량할 수 있는 미생물 계량방법을 얻을 수 있다.

또한, 액상검체에 먹물을 첨가하는 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 미생물채취용 필터 상에 제조상의 문제로 미세한 함몰선 등이 존재하는 경우이더라도 그것을 바탕으로 배경(back ground)이 발광하거나 하는 것을 억제하고,또한, 이물이 발광하거나 하는 것을 억제하여 미생물계량을 정밀도 좋게 할 수 있는 미생물 계량방법을 얻을 수 있다.

또한, 미생물을 미생물채취용 필터 상에 포집한 후, 미생물채취용 필터의 위에서 먹물을 첨가하여 미생물채취용 필터 위를 검게 하는 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 상기와 같이 미생물 계량을 정밀도 좋게 할 수 있는 미생물 계량방법을 얻을 수 있다.

또한, 특정파장의 여기광에 의해서 발광하는 발광체를 표면에 고정한 기재를 포함하는 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체를 사용하여, 미리 해당 발광체를 검출하여 미생물 계량장치가 정상상태에 있는 것을 확인한 후, 살아있는 세포와 죽은 세포의 양쪽 또는 어느 한쪽과 특정 미생물을 동시 검출하는 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 장치에 이상이 있으면 발광체를 정확히 검출할 수가 없기 때문에, 장치의 상태의 확인을 함으로써 미생물 계량을 정확히 할 수 있는 미생물 계량방법을 얻을 수 있다.

또한, 발광체를 고분자 형광입자로 하는 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 고분자 형광입자가 장기간에 걸쳐 안정하고 균일한 발광을 유지하기 때문에, 장치의 상태확인을 정확히 반복하여 몇 번이나 할 수 있고, 더구나 인체에 대한 안전성이 확보된 미생물 계량방법을 얻을 수 있다.

또한, 발광체를 염색한 미생물로 하는 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 발광체가 계량대상이 되는 미생물과 같은 크기나 형상이기 때문에, 장치의 상태확인을 정확히 할 수 있는 미생물 계량방법을 얻을 수 있다.

또한, 본 발명의 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체는, 상기 목표를 달성하기 위해서 특정파장의 여기광에 의해서 발광하는 발광체를 표면에 고정한 기재를 포함하여, 미생물 계량을 하기 전에 미생물 계량장치가 정상상태에 있는 것을 확인하기 위한 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 미생물 계량장치가 정상상태에 있는지 아닌지를 정확히 판정할 수 있는 해당 장치의 정상상태 확인검사용 검체를 얻을 수 있다.

또한, 기재를 어두운 색으로 한 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 배경(back ground)의 발광을 억제하여, 장치의 상태확인을 정확히 할 수 있는 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체를 얻을 수 있다.

또한, 특정파장의 여기광에 의해서 발광하는 발광체를 표면에 고정한 기재 상에 금, 구리, 크롬, 백금, 팔라듐으로부터 선택되는 적어도 1종류의 금속성분을 포함하는 박막을 형성한 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 배경 (back ground)의 발광을 억제하여, 장치의 상태확인을 정확히 할 수 있는 동시에, 발광체의 발광강도의 조정, 예를 들면, 발광강도가 지나치게 강한 경우에 발광강도를 약하게 할 수 있고, 또한, 기재의 표면에 고정한 발광체의 탈락 등이 방지된 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체를 얻을 수 있다.

또한, 박막의 막두께를 10 내지 1000nm로 한 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 박막을 형성하는 것의 효과를 보다 확실한 것으로 한 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체를 얻을 수 있다.

또한, 본 발명의 미생물 계량장치는, 상기 목표를 달성하기 위해서 상기의것과 같은 미생물채취 칩에 있어서의 미생물채취용 필터의 미소한 일정면적에 미리 정해진 파장영역에서 여기광을 조사하는 광원과, 상기 여기광에 의해서 발광하는 미리 정해진 파장영역의 빛을 수광(受光)하는 수광수단과, 상기 광원에 의해서 조사되어 발광한 빛을 설정한 일정한 시간 내에 수광하여, 그 수광한 광량이 설정한 역치의 범위내일 때에 미생물이라고 판단하는 미생물 판단수단과, 상기 미소한 일정면적을 연속 또는 단속적으로 이동시키는 이동수단과, 미생물 판단수단으로부터 미생물이라고 판단된 신호로부터 미생물의 수량을 곱셈하는 곱셈수단을 갖는 미생물 계량장치로서, 특정 파장의 여기광에 의해서 발광하는 발광체를 표면에 고정한 기재를 포함하여, 미생물 계량을 하기 전에 미생물 계량장치가 정상상태에 있는 것을 확인할 수가 있도록 한 것을 특징으로 한다. 그리고, 본 발명에 의하면, 정상적인 장치상태에서 살아있는 세포나 죽은 세포나 특정 미생물을 정밀도 좋게 간단히 계량할 수 있는 미생물 계량장치를 얻을 수 있다.

본 발명은, 검사대상에 부착한 미생물을 채취하는 수단이고, 이들을 발색 및 발광, 형광 발광시켜, 검사대상에 존재하는 살아있는 세포 및 죽은 세포 혹은 특정한 미생물을 효율적으로 포집하고, 검출하고, 측정하기 위한 미생물채취 칩, 미생물채취 키트, 이 미생물채취 키트를 사용한 미생물 계량방법, 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체 및 미생물 계량장치에 관한 것이다.

도 1은, 본 발명의 미생물채취 키트의 1형태의 단면도이다.

도 2는, 본 발명의 미생물채취 키트의 그 밖의 형태의 단면도이다.

도 3은, 본 발명의 미생물채취 키트를 사용하여 미생물 계량을 하기 위한 장치의 1형태의 개략도이다.

도 4는, 본 발명의 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체의 1형태의 사시도(일부 투과도)이다.

도 5는, 도 4에 나타낸 검사용 검체에 있어서의 수지필름의 정면도이다.

[발명을 실시하기 위한 최선의 형태]

이하에 본 발명의 미생물채취 칩, 미생물채취 키트, 미생물 계량방법, 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체 및 미생물 계량장치를 도면을 사용하여 설명한다. 그러나 이들은 이하의 설명에 조금도 한정되는 것이 아니다.

도 1(a)은 본 발명의 미생물채취 키트의 1형태의 단면도이다. 미생물채취 키트 A는 미생물채취 칩 B와 흡인여과수단 C로 이루어진다. 미생물채취 칩 B는 기본구성으로서 전단에 있는 프리필터로서의 이물제거용 필터(1)와 후단에 있는 어두운 색(예를 들면 흑색)의 미생물채취용 필터(2)(예를 들면 백색의 필터 상에 탄소박막을 형성한 것)로 이루어진다. 이물제거용 필터(1)의 구멍지름은 이물을 극력 제거하기 위해서 5 내지 20㎛로 되어 있고, 미생물채취용 필터(2)의 구멍지름은 미생물을 확실히 포집하기 위해서 0.2 내지 0.8㎛로 되어 있다. 여기서 구멍지름은 최소구멍지름을 의미하는 것으로 한다. 미생물채취 칩 B는 액상검체 주입용기(3)를 갖고, 이물제거용 필터(1)는 액상검체 주입용기(3)의 바닥부로서 이루어진다. 미생물채취용 필터(2)는 대좌(臺座)(4) 위에 배치되고, 대좌(4)는 대좌유지부재(5)에 유지되어 있다. 대좌유지부재(5)에 유지된 대좌(4)에는 중공바늘(6)이 일체 성형되어 있다. 액상검체 주입용기(3)와 대좌유지부재(5)는 탈착자재로 끼워맞춤할 수 있도록 되어 있다. 흡인여과수단 C는 음압관(7)이고, 음압관(7)의 입구부는 고무마개(8)로 봉하여 막혀있다.

미생물채취용 필터(2)를 어두운 색의 필터로 함으로써, 배경(back ground)이 발광하여 정확한 미생물 계량을 저해하는 것을 효과적으로 억제할 수가 있다. 또한, 필터 상에 금, 구리, 크롬, 백금, 팔라듐으로부터 선택되는 적어도 1종류의 금속성분을 포함하는 박막을 형성하더라도 좋다. 이것들의 성분은 300 내지 550nm 정도의 파장의 여기광에 대한 분광반사율이 낮다고 하는 성질을 갖기 때문에, 미생물채취용 필터(2)를 어두운 색의 필터로 하고, 또한 필터 상에 상기의 박막을 형성하면, 효과는 보다 향상된다(알루미늄이나 은은 상기 파장의 여기광에 대한 분광반사율이 높기 때문에 채용할 수 없다). 박막은, 일종의 금속성분으로 이루어지는 것 이외, 합금, 금속산화물, 금속탄화물, 금속질화물, 금속탄질화물 등으로 이루어지는 것이라도 좋다. 또한, 적층박막이더라도 좋다. 박막의 형성방법으로서는, 진공증착법, 이온스패터링법, 이온플레이팅법 등의 공지의 기상성장법이 바람직하게 채용된다. 박막의 막두께는 10 내지 50nm로 하는 것이 바람직하다. 10nm를 하회하면 박막을 형성하는 것의 효과가 충분히 발휘되지 않을 우려가 있는 한편, 50nm를 넘으면 필터의 구멍이 막힘이 생겨, 필터 본래의 기능에 영향을 미치는 우려가 있기 때문이다.

액상검체는, 검사대상이 음료수 등의 액상샘플인 경우는 그 자체가 액상검체가 된다. 검사대상이 야채나 고기를 비롯한 식품재료 등의 고체 샘플인 경우는 그것을 균질화하여 액상검체를 조제하거나, 그 표면에서 면봉 등을 사용하여 미생물을 채취하고, 이것을 생리식염수 등에 유리시켜서 액상검체로 한다. 또한, 도마 등의 조리기구 등이 검사대상이 되는 경우, 그 표면에서 면봉 등을 사용하여 미생물을 채취하고, 이것을 생리식염수 등에 유리시켜 액상검체로 한다. 이렇게 하여 준비된 액상검체를 미생물채취 칩 B의 액상검체 주입용기(3)에 주입한다. 그 후,음압상태의 음압관(7)의 입구부의 고무마개(8)에 중공바늘(6)을 푹 찔러, 도 1(b)에 나타낸 바와 같이 중공바늘(6)로 고무마개(8)를 관통시킴으로써 액상검체는 흡인여과된다. 또, 대좌유지부재(5)의 하부는 중공바늘(6)을 확실히 음압관(7)의 고무마개(8)에 푹 찌르기 위한 가이드로서의 기능을 갖게 하기 위해서이지만 취급자가 중공바늘(6)로 부상을 입지 않도록 신장되어 있다.

액상검체가 이물제거용 필터(1)를 통과하였을 때, 미생물보다도 큰 이물은 이물제거용 필터(1)에 포집되어 제거된다. 이물제거용 필터(1)의 전단에 대형의 이물, 예를 들면, 야채쓰레기나 섬유 등을 포집하기 위한 필터를 설치하여, 이물제거를 목적으로 한 필터를 적층형태로 하더라도 좋다. 이물제거용 필터(1)를 통과한 액상검체는 미생물채취용 필터(2)에 도달하고, 액상검체에 미생물이 포함되어 있는 경우, 미생물은 미생물채취용 필터(2)에 포집된다. 또, 미생물채취용 필터 (2)와 대좌(4)와의 경계면에는 액상검체가 미생물채취용 필터(2)의 전면에 빈틈 없이 널리 퍼지도록 홈이 형성되어 있다. 이에 따라 미생물채취용 필터(2)의 국부에 미생물이 집중하여 포집되는 것과 같은 현상을 억제할 수가 있다.

액상검체 주입용기(3)와 대좌유지부재(5)는 탈착자유자재로 끼워 맞춰져 있기 때문에, 미생물채취용 필터(2)상에 미생물을 포집한 후, 액상검체 주입용기(3)는 떼어 내고, 도 1(c)에 나타낸 바와 같이 미생물채취용 필터(2)를 포함하는 부위만을 미생물 계량장치의 계량대로 이동하는 것이 가능하다.

또, 이물제거용 필터의 전단에 별도 액상검체 주입용기를 설치하더라도 좋다.

또, 음압관의 입구부의 고무마개의 중심부를 박층으로 하더라도 좋다.

또, 액상검체의 조제는 별도 시험관 등을 사용하여 하면 좋지만, 미리 액상검체 주입용기(3)에 생리식염수 등을 주입해 두고, 거기에 면봉 등을 사용하여 채취된 미생물을 유리시키고 액상검체로 하더라도 좋다.

또, 액상검체 주입용기(3)와 대좌유지부재(5)는 탈착자유자재로 끼워 맞춰지도록 되어 있지만, 양자의 접합은 나사를 사용하여 하더라도 좋다. 또한, 양자는 제조 당초는 일체 성형된 것이라도 좋고, 바깥둘레에 걸치는 적당한 위치에 양자의 분리를 쉽게 하기 위한 분리홈을 설치해 두고, 이 분리홈을 이용하여 양자를 분리하도록 하더라도 좋다.

또, 중공바늘은 고무마개를 관통하여, 음압관 내부에 도달하는 것이면, 길이에 제한을 갖지 않는다.

도 2(a)는 본 발명의 미생물채취 키트의 그 밖의 형태의 단면도이다. 미생물채취 키트 D는 미생물채취 칩 E와 흡인여과수단 F로 이루어진다. 미생물채취 칩 E가 도 1(a)에 나타낸 미생물채취 칩 B와 다른 점은, 액상검체 주입용기(13)의 위에 그 개구부를 덮는 면봉(51)이 부착된 뚜껑(52)을 구비하는 것이다. 미생물채취 키트에 면봉을 부속시켜 둠으로서, 표면에 상처가 많은 검사대상이나 조리장의 각 등, 형상이 복잡한 검사대상으로부터의 샘플링을 용이하고 또한 간편한 것으로 할 수가 있다. 또한 미생물채취 칩 E와 같이 면봉(51)을 뚜껑(52)과 일체화함으로써 형상을 단순화할 수가 있다. 도 2(a)에 나타낸 바와 같이 액상검체 주입용기(13) 속에 미리 생리식염수(53)를 주입해 두는 동시에, 면봉(51)을 생리식염수(53)에 담그는 길이의 것으로 해 두면, 면봉(51)을 사용하여 검사대상으로부터 미생물을 채취한 후, 뚜껑(52)을 액상검체 주입용기(13)에 씌우고 미생물채취 칩 E를 상하좌우로 흔드는 것에 의해 면봉(51)에 부착하고 있는 미생물을 생리식염수(53)에 유리시켜 액상검체를 조제하는 것이 용이하게 된다.

미생물을 생리식염수(53)에 유리한 후에는, 도 2(b)에 나타낸 바와 같이 중공바늘(16)로 고무마개(18)를 관통시킴으로써 액상검체는 흡인여과되어, 미생물채취용 필터(12)상에 미생물이 포집된다. 그 후, 도 1(c)에 나타낸 것과 같이 액상검체 주입용기(13)를 떼어내어, 미생물채취용 필터(12)를 포함하는 부위만을 미생물 계량장치의 계량대로 이동하여 계측을 한다.

또, 면봉은 뚜껑과 반드시 일체화되어 있을 필요는 없다.

또, 면봉은 반드시 생리식염수에 담그는 길이의 것일 필요는 없고, 흔드는 것에 의해, 면봉에 부착하고 있는 미생물을 생리식염수에 유리시킬 수 있는 것이면 어떠한 길이의 것이더라도 좋다.

또, 면봉은 미생물채취 키트의 제조 당초부터 생리식염수에 담가져 있더라도 좋다. 그 경우, 생리식염수로 면봉이 젖어져 있기 때문에, 특히 건조한 검체대상으로부터 미생물의 채취를 효율적으로 할 수 있다.

또, 면봉에 부착한 미생물의 생리식염수에의 유리를 별도 시험관 등에서 행하여 액상검체를 조제하고, 조제된 액상검체를 액상검체 주입용기에 주입하도록 하더라도 좋다.

이상과 같이 하여 미생물채취용 필터 상에 포집된 미생물은 여러 가지의 방법에 의해 검출할 수가 있는 동시에 계량할 수가 있지만, 이하에는 살아있는 세포와 죽은 세포의 양쪽 또는 어느 한쪽과 특정 미생물을 동시 검출하여 계량하는 방법을 설명한다.

본 발명의 제 1 미생물 계량방법은, 살아있는 세포와 죽은 세포를 발색시키는 제 1 화합물과 죽은 세포를 상기 발색과 다른 파장으로 발색시키는 제 2 화합물과 살아있는 세포를 상기 발색과 다른 파장으로 발색시키는 제 3 화합물 속에서 1종류 또는 복수종류와, 특정 미생물 유래물질과 반응함으로써 상기 발색과 다른 파장으로 발색하는 적어도 1종류 이상의 제 4 화합물을 액상검체에 접촉시켜, 미생물이 액상검체에 포함되어 있는 경우에는 미생물을 염색한 후, 미생물채취 칩을 사용하고 미생물을 미생물채취용 필터 상에 포집한 후, 그 파장차 및 발색량으로부터 살아있는 세포와 죽은 세포의 양쪽 또는 어느 한쪽과 특정 미생물을 동시 검출하는 방법이다. 이 방법에 의하면, 살아있는 세포와 죽은 세포, 살아있는 세포, 죽은 세포, 특정 미생물이 다른 파장으로 발색하기 때문에, 그 파장차 및 발색량으로부터 살아있는 세포와 죽은 세포의 양쪽 또는 어느 한쪽과 특정 미생물을 동시 검출할 수가 있다.

발색은 예를 들면 형광에 의한 것을 들 수 있다. 이 경우, 제 1 화합물을 핵산결합성 화합물로 함으로써 살아있는 세포와 죽은 세포의 세포단체(單體)레벨에서의 고정밀도의 계량을 할 수 있다. 또한, 제 2 화합물을 핵산결합성 화합물로 함으로써 죽은 세포의 세포단체레벨에서의 고정밀도의 계량을 할 수 있다. 또한, 제 3 화합물을 미생물 유래물질과 반응함으로써 발색하는 화합물로 함으로써 그 발색량의 상위에 의해 살아있는 미생물만을 계량할 수가 있다. 이 때, 미생물 유래물질을 효소단백질로 함으로써 그 반응성으로부터 미생물의 생사를 판별할 수 있다. 또한, 특정 미생물 유래물질을 효소단백질로 함으로써 그 반응성으로부터 특정 미생물의 생사를 판별할 수 있다.

미생물을 형광염색하기 위해서 사용되는 살아있는 세포와 죽은 세포를 발색시키는 제 1 화합물로서는, 예를 들면, 4',6-디아미지노-2-페닐인돌 2염산염(유도체이더라도 좋다)과 같은 살아있는 세포와 죽은 세포의 막 표면에서 비특이적으로 침투하여, 세포 내에 존재하는 핵산과 특이적으로 결합함으로써 발색하는 화합물을 들 수 있다. 죽은 세포를 상기 발색과 다른 파장으로 발색시키는 제 2 화합물로서는, 예를 들면, 프로피듐아이오다이드(유도체이더라도 좋다)와 같은 죽은 세포의 막 표면에서 비특이적으로 침투하여, 세포내에 존재하는 핵산과 특이적으로 결합함으로써 발색하는 화합물을 들 수 있다. 살아있는 세포를 상기 발색과 다른 파장으로 발색시키는 제 3 화합물로서는, 예를 들면, 6-카르복시플루오레세인디아세테이트, 2',7'시클로로플루오레세인디아세테이트, 6-(N-숙신이미딜옥시카르보닐)-3',6'-0,0'-디아세틸플루오레세인, 디히드로드로다민, 2초산플루오레세인, 2초산4-아지드플루오레세인(이것들은 유도체이더라도 좋다)과 같은 세포 내에 침투하여, 살아있는 세포 내에 존재하는 효소단백질, 예를 들면, 에스테라제에 의해서 분해됨으로써 발색하는 화합물을 들 수 있다. 특정 미생물 유래물질과 반응함으로써 상기 발색과 다른 파장으로 발색하는 제 4 화합물로서는, 예를 들면, 4-메틸움벨리페릴-β-D-갈락토시드, 4-메틸움벨리페릴-β-D-글루쿠로나이드(이것들은 유도체이더라도 좋다)를 들 수 있다. 이들은, 대장균이나 대장균군이 생산하는 효소단백질인 β-글루쿠로니다제나 β-갈락토시다제와 특이적으로 반응함으로써 분해되어 4-메틸움벨리페론을 생성한다. 4-메틸움벨리페론은 자외광에 대하여, 여기되어 형광을 발한다.

제 1 내지 제 4 화합물은, 예를 들면, 생리식염수에 용해된 상태로 사용되어, 액상검체에 첨가됨으로써, 미생물이 액상검체에 포함되어 있는 경우에는 미생물을 염색할 수 있다. 생리식염수에 용해된 상태의 제 1 내지 제 4 화합물은, 그 적당량을 점안제 용기 등에 수용하여 사용시에 액상검체에 첨가할 수 있도록 하더라도 좋다. 또, 염색시간은 검사대상의 종류나 액상검체의 용량 등에 따라서 적절히 설정되어야 하는 것이다.

염색된 미생물을 포함하는 액상검체를 본 발명의 미생물채취 키트를 사용하여 흡인여과함에 의해, 미생물채취 칩에 있어서 미생물채취용 필터 상에 염색된 미생물을 포집한다. 이 때, 예를 들면, 염색된 미생물을 포함하는 액상검체에 폴리솔베이트 80 등의 계면활성제를 첨가해 두면, 이물제거용 필터에 포집되는 이물에 부착되어 버려 미생물채취용 필터에 포집되지 않은 것과 같은 미생물도, 효율적으로 이물제거용 필터를 통과시켜 미생물채취용 필터에 포집할 수가 있다. 또한 액상검체에 폴리펩톤 등의 배지성분을 첨가해 두면, 조작 중에 있어서의 미생물의 활성을 유지할 수가 있다. 계면활성제와 동시에 배지성분을 함유하는 액제, 예를 들면, LP희석액 '다이고'(일본 제약사제의 상품명)는 이러한 목적을 달성하기 위해서 적합하게 사용된다. 흡인여과를 한 후에는, 도 1(c)에 나타낸 것과 같은 미생물채취용 필터(2)를 포함하는 부위만을 미생물 계량장치의 계량대로 이동하여 계측을 한다. 염색된 미생물을 포함하는 액상검체에 글리세린 등의 다가알코올을 첨가해 두면, 미생물채취용 필터 표면이 건조되어 버리는 것에 의한 미생물의 실활이나 발광의 감퇴를 방지할 수가 있다.

또, 미생물채취 칩에 있어서, 제 1 내지 제 4 화합물을 담지시킨 필터를 미생물채취용 필터의 전단에 설치하는 것과 같은 일도 가능하다.

도 3은 미생물 계량장치의 1형태를 나타내는 개념도이다. 이 미생물계량장치는, 광원(104), 광원 집광수단으로서의 렌즈(110), 수광부(受光部)(111)를 포함한다. 광원(104)으로부터 발생한 여기광으로부터 원하는 파장을 추출하기 위해 여기광 분광필터(112)로 분광한다. 분광된 여기광은 프리즘(113)을 지나서, 광로를 변화시키게 된다. 광로를 변화시키게 된 여기광은 렌즈(110)를 지나서 검사대 (116)에 설치된 미생물채취용 필터(2)를 포함하는 부위, 즉, 미생물채취용 필터(2)와 대좌(4)와 대좌유지부재(5)와 중공바늘(6)로 이루어지는 끼워맞춤체의 미생물채취용 필터(2)의 표면에 집광된다. 그래서 여기광에 의해서 여기된 미생물이 갖는 형광은, 다시 프리즘(113)을 투과한다. 그 때, 형광은 프리즘(113)을 그대로 투과하여, 수광부(111)에 도달한다. 수광부(111)에 도달한 형광은, 원하는 형광만을 추출하기 위해서 형광 분광필터(114)를 지나서, 수광부(111)에 내장된 광전변환소자(115)에 도달하고, 신호화되어 인식된다. 또한, 도면에는 나타나 있지 않지만, 이 미생물 계량장치는 검사대(116)를 이동하는 수단을 구비하고 있고, 미생물채취용 필터(2)의 표면의 형광발광을 모두, 혹은 일부를 수광할 수 있다.

광전변환소자(115)에 도달한 형광은, 미생물 판단수단(105)에 있어서 미생물 혹은 이물이라고 판단되고, 미생물이라고 판단된 형광은 적산되어, 그 수량이 계량된다.

광원(104)으로부터 발생한 여기광은, 렌즈(110)에 의해서 집광되지만, 그 때, 렌즈(110)에 의해서 여기광을 조사하는 범위는 미소한 일정면적에 집광된다. 이 경우, 미소한 일정면적이란 미생물의 크기에 따라서 설정한 경우, 한변 0.2㎛ 내지 7.0㎛ 정도의 범위를 지시하여 나타낸다. 또한, 현재 가장 이용되고 있는 미생물 검출수단의 하나인 한천배지확산법과의 비교에 기초한 경우, 한천배지확산법에 의해서 배양, 증식한 미생물의 집단에 의해서 형성되는 콜로니는, 그 거리가 근접하고 있는 경우, 콜로니끼리 겹치는 경우가 있고, 최종적으로 눈으로 확인한 경우, 하나의 콜로니로서 인식해 버리는 사례가 생기는 경우가 있다. 그래서, 이 경우의 미소한 일정면적이란, 콜로니끼리 겹치지 않는 거리에 기초한 경우, 한변 100㎛ 내지 500㎛ 정도의 범위를 지시한다.

렌즈(110)에 의해서 집광된 여기광의 조사시간은, 형광을 발하는 화합물의 소광시간와 여기광강도에 의존한다. 화합물의 종류에 따라서는, 자연계에 존재하는 자외광에 의해서도 분해하는 경우가 있어, 2초 내지 300초 전후의 범위 내에서 여기광을 조사하는 것이 바람직하다.

발광을 검출할 때, 광원(104)의 파장의 폭이 넓은 것인 경우는, 여기광 분광필터(112)에 의해서 여기파장을 조정, 분광하는 것이 가능하게 된다. 여기광 분광필터(112)는, 원하는 검출대상에 따라서 바뀌어지기 때문에, 여러 가지 형광을 발하는 화합물에 대응할 수 있다. 또한, 동시에, 발광한 형광파장의 폭이 넓은 것인 경우는, 원하는 발광을 검출하기 위해서 형광 분광필터(114)를 원하는 검출대상에 따라서 바꿈으로써 여러 가지 형광을 발하는 화합물에 대응할 수 있다.

광원(104)으로서는, 각종 다이오드, 할로겐램프, 크세논램프, 냉음극관, 레이저, 블랙라이트, 수은램프 등을 들 수 있다. 이들 광원중 최대여기파장이 비교적 한정되어 있는 다이오드, 냉음극관, 블랙라이트 등은, 상기 여기광 분광필터 (112) 및 형광 분광필터(114)를 사용하지 않고 실시할 수 있는 경우가 있다. 또한, 할로겐램프, 수은램프 등에 있어서는, 여기광 분광필터(112) 및 형광 분광필터 (114)를 사용해야 하는 경우가 있다.

프리즘(113) 및 렌즈(110)는, 필요에 따라서 각각 자외광을 투과하는 성질을 갖는다. 자외광을 투과하는 성질을 갖는 것으로서는 석영유리 등을 들 수 있다. 이에 따라 자외광으로 여기되는 화합물 등에도 대응할 수 있다. 미생물채취용 필터(2)를 포함하는 부위를 설치하는 검사대(116)는 회전능을 갖는다. 렌즈(110)에 의해 집광된 여기광은, 미생물채취용 필터(2)의 바깥둘레부로부터 중심부로, 혹은, 중심부로부터 바깥둘레부로, 반지름분의 거리를 이동한다. 그 때, 렌즈(110)에 의해 집광된 여기광의 위치가 바깥둘레부에 존재할 때와 중심부에 존재할 때 검사대 (116)의 회전속도를 변화시키는 것에 따라, 렌즈(110)에 의해 집광된 여기광이 바깥둘레부에 존재할 때와 중심부에 존재할 때 여기된 화합물이 발한 형광의 어긋남, 잔상 및 잔광의 발생을 방지할 수가 있다.

도 3에 나타낸 바와 같이 검사대(116)는 미생물채취용 필터(2)를 포함하는부위를 끼워 맞추게 하기 위한 함몰부분(장치홈)을 갖고, 여기에 미생물채취용 필터(2)를 포함하는 부위를 그대로 끼워 넣을 수 있는 형상으로 되어 있다. 또, 이 때, 예를 들면, 검사대(116)에, 미생물채취용 필터(2)가 그 위에 위치하도록 금속평판을 설치하고, 미생물채취용 필터(2)가 금속평판에 눌러 붙여지는 듯한 상태에서 끼워 넣어지도록 함으로써, 검사대(116)상에서 미생물채취용 필터(2)가 요철 없이 평활하게 유지되도록 하면, 미생물채취용 필터(2)에 포집된 미생물의 정량을 보다 확실한 것으로 할 수가 있다.

또, 집광한 위치를 인식하는 수단을 설치함으로써 렌즈(110)에 의해서 집광된 여기광의 위치를 인식하여, 집광이 궤도로부터 빗나가지 않도록, 또한, 빗나간 경우는 다시 궤도에 되돌리도록 설정되는 것이다.

또, 여기광을 조사하는 미소한 일정면적은, 정사각형을 포함하는 다각형에 한정되지 않고, 원형, 타원형 등이더라도 가능하고, 검체를 조사할 수 있는 것이면 좋다.

또, 여기광 혹은 형광을 분광하는 수단으로서 회절격자 등을 이용하는 것도 가능하다.

또, 검사대(116)의 회전속도를 조정함으로써 형광의 잔상 및 잔광을 막는 것으로 하였지만, 여기광을 조사하는 렌즈(110)의 이동속도를 조정함으로써 잔상 및 잔광을 막는 것도 가능하다.

또, 집광한 위치를 인식하는 수단은, 반드시 여기광의 집광위치를 직접 인식할 필요는 없고, 미생물채취용 필터(2)상의 궤도를 파악하는 것이면 좋다.

본 발명의 제 2 미생물 계량방법은, 미생물채취 칩을 사용하여 미생물을 포함할 수 있는 액상검체로부터 미생물을 미생물채취용 필터 상에 포집한 후, 포착된 미생물에 살아있는 세포와 죽은 세포를 발색시키는 제 1 화합물과 죽은 세포를 상기 발색과 다른 파장으로 발색시키는 제 2 화합물과 살아있는 세포를 상기 발색과 다른 파장으로 발색시키는 제 3 화합물 중에서 1종류 또는 복수종류와, 특정 미생물 유래물질과 반응함으로써 상기 발색과 다른 파장으로 발색하는 적어도 1종류 이상의 제 4 화합물을 접촉시키고, 미생물을 염색한 후, 그 파장차 및 발색량으로부터 살아있는 세포와 죽은 세포의 양쪽 또는 어느 한쪽과 특정 미생물을 동시 검출하는 방법이다. 이 방법에 의하면, 액상검체의 용량이 많은 경우이더라도 미생물을 미생물채취용 필터 상에 포집한 후에 미생물을 염색하기 때문에, 제 1 내지 제 4 화합물의 사용량은 소량이고, 살아있는 세포나 죽은 세포나 특정 미생물을 정밀도 좋게 간단히 계량할 수가 있다.

액상검체에 먹물을 첨가함으로써 미생물을 미생물채취용 필터 상에 포집할 때에 필터 위를 검게 하는 것에 의해, 배경(back ground)이나 이물의 발광을 억제하여 미생물 계량을 정밀도 좋게 할 수 있다. 먹물은 반드시 액상검체에 첨가하지 않으면 안되는 것이 아니고, 미생물이 포집된 미생물채취용 필터의 위에서 첨가하더라도 좋다.

도 4는 본 발명의 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체의 1형태의 사시도(일부 투과도)이다. 이 정상상태 확인검사용 검체(151)는, 그 표면에 소정개수의 특정파장 여기광에 의해서 발광하는 발광체(154)가 고정됨과 동시에 소정개수의 경사높이 확인마크(155)가 인쇄되어 있는 기재(예를 들면 수지필름)(152)와 그 지지프레임(153)으로 이루어진다.

기재의 표면에 고정하는 발광체로서는, 고분자 형광입자나 염색한 미생물 등을 들 수 있다. 고분자 형광입자는 장기간에 걸쳐 안정하고 균일한 발광을 유지하기 때문에, 장치의 상태확인을 정확히 반복하여 몇 번이나 할 수 있고, 더구나 인체에 대한 안전성이 확보되어 있는 점에서 이용가치가 높다. 고분자 형광입자는, 폴리스티렌이나 스티렌디비닐벤젠 등을 재질로 하는 입자로서, 입자를 중합할 때에 특정파장의 여기광에 의해서 발광하는 형광염료를 첨가하여 제조되는 것으로, 여러 가지의 것이 시판되고 있다. 고분자 형광입자는 0.1 내지 1.0㎛ 입자지름의 것을 사용하는 것이 바람직하다. 지나치게 작으면 그 개수를 정밀도 좋게 계측하는 것이 곤란하게 되거나, 후술하는 바와 같이 기재로서 미생물채취용 필터를 채용한 경우, 필터의 구멍으로부터 고분자 형광입자가 낙하하기 때문에 검사용 검체로서의 가공성이 나빠지기도 하는 한편, 지나치게 크면 발광강도가 지나치게 강한 것에 의해 계측 정밀도에 영향을 미칠 우려가 있기 때문이다. 고분자 형광입자는, 단일종류의 고분자 형광입자를 고정하더라도 좋고, 예를 들면, 350 내지 400nm 파장의 여기광에 의해서 청색발광하는 고분자 형광입자와, 500 내지 550nm 파장의 여기광에 의해서 적색발광하는 고분자 형광입자라고 하는 바와 같이, 다른 파장의 여기광에 의해서 다른 색채로 발광하는 복수종류의 고분자 형광입자를 고정하더라도 좋다.

염색한 미생물을 기재의 표면에 고정하는 경우, 고정하는 미생물은, 검사목적으로 하는 미생물이 살아있는 균인지 죽은 균인지 그 양쪽인지에 따라서, 살아있는 균, 죽은 균, 살아있는 균과 죽은 균을 혼합한 균 중에서 적절하게 선택된다(예를 들면, 검사목적으로 하는 미생물이 죽은 균인 경우에는 죽은 균 계량용 광원의 정상상태를 확인해야 하기 때문에 죽은 균을 기재에 고정해야만 한다). 살아있는 균이나 살아있는 균과 죽은 균을 혼합한 균을 고정하는 경우는, 조작상에 있어서 인체에의 안전성을 확보해야만 하는 것에 유의해야 한다.

기재는 수지필름 이외, 유리, 종이, 금속 등이더라도 좋다. 또한, 미생물채취용 필터를 기재로서 사용하더라도 좋다. 미생물채취용 필터를 기재로서 사용하면, 특정 파장의 여기광에 의해서 발광하는 발광체를 여과 함으로써, 해당 발광체를, 용이하게 필터 상에 포집, 즉, 기재의 표면에 고정할 수가 있다. 기재는 어두운 색(예를 들면 흑색)으로 하는 것이 바람직하다. 배경(back ground)의 발광을 억제하여, 장치의 상태확인을 정확히 할 수 있도록 하기 위해서이다. 또한, 특정 파장의 여기광에 의해서 발광하는 발광체를 표면에 고정한 기재 상에 금, 구리, 크롬, 백금, 팔라듐으로부터 선택되는 적어도 1종류의 금속성분을 포함하는 박막을 형성하면, 이들 성분은 300 내지 550nm 정도의 파장의 여기광에 대한 분광반사율이 낮다고 하는 성질을 갖기 때문에, 기재를 어두운 색으로 하고, 또한 특정 파장의 여기광에 의해서 발광하는 발광체를 표면에 고정한 기재 상에 상기의 박막을 형성하면, 효과는 보다 향상한다(알루미늄이나 은은 상기 파장의 여기광에 대한 분광반사율이 높기 때문에 채용할 수 없다). 또한, 이러한 박막을 형성하면, 발광체의 발광강도의 조정, 예를 들면, 발광강도가 지나치게 강한 경우에 발광강도를 약하게 하는 것이 가능하게 되는 동시에, 기재의 표면에 고정한 발광체의 탈락 등을 방지하는 것도 가능하게 된다. 박막은, 1종의 금속성분으로 이루어지는 것 이외, 합금, 금속산화물, 금속탄화물, 금속질화물, 금속탄질화물 등으로 이루어지는 것이라도 좋다. 또한, 적층박막이더라도 좋다. 박막의 형성방법으로서는, 진공증착법, 이온스패터링법, 이온도금법 등의 공지의 기상성장법이 적합하게 채용된다. 박막의 막두께는 10 내지 1000nm로 하는 것이 바람직하고, 20 내지 100nm로 하는 것이 바람직하다. 10nm를 하회하면 박막을 형성하는 것의 효과가 충분히 발휘되지 않을 우려가 있는 한편, 1000nm를 넘으면 기재의 표면에 고정한 발광체의 개수를 정밀도 좋게 계측하는 것이나 발광체의 발광강도의 조정이 곤란하게 되기 때문이다.

도 5는 도 4에 나타낸 표면에 소정개수의 특정 파장의 여기광에 의해서 발광하는 발광체(154)가 고정됨과 동시에 소정개수의 경사높이 확인마크(155)가 인쇄되어 있는 수지필름(152)의 정면도이다. 발광체(154)를 염색한 미생물로 하는 경우, 미생물의 염색은, 예를 들면, 상기 살아있는 세포와 죽은 세포를 발색시키는 제 1 화합물이나 죽은 세포를 발색시키는 제 2 화합물이나 살아있는 세포를 발색시키는 제 3 화합물을 적절하게 사용하여 하면 좋다. 발광체(154)는 도 3에 나타낸 것과 같은 미생물 계량장치에 의해 검출할 수가 있다. 이 정상상태 확인검사용 검체를 사용하여 소정개수의 발광체를 검출할 수 있는 것을 확인한 후, 액상검체의 미생물계량을 한다. 소정개수의 발광체를 검출할 수가 있었으면, 장치는 정상상태에 있는 것을 의미한다. 한편, 소정개수의 발광체를 검출할 수가 없었으면, 장치는 정상상태에 없는 것을 의미하기 때문에, 장치의 조정 등을 할 필요가 있다.

도 5에 나타낸 수지필름(152)의 표면에는 소정개수의 특정 파장의 여기광에의해서 발광하는 발광체(154)가 고정되어 있는 것 이외, 4개의 경사높이 확인마크 (155)가 인쇄되어 있다. 4개의 경사높이 확인마크(155)에 빛을 조사하여, 그 반사광의 출력레벨이 균등한지 아닌지를 조사하는 것에 의해, 예를 들면, 도 3에 나타낸 미생물 계량장치에 있어서의 검사대(116)의 경사의 유무 등을 검사할 수가 있다. 또한, 출력레벨이 규정치대로인지 아닌지를 조사하는 것에 의해, 검사대(116)가 규정높이로 되어 있는지 아닌지 등을 검사할 수가 있다.

또, 본 발명의 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체의 형상에 대해서는 특단의 제한이 있는 것은 아니지만, 예를 들면, 도 3에 나타낸 미생물 계량장치에 있어서의 검사대(116)가 갖는 함몰부분(장치홈)에 미생물채취용 필터(2)를 포함하는 부위와 마찬가지로 끼워 넣을 수 있는 형상으로 하는 것이 바람직하다. 또한, 검사대(116)에, 정상상태 확인검사용 검체(151)의 기재(152)가 그 위에 위치하도록 금속평판을 설치하고, 기재(152)가 금속평판에 눌러 붙여지는 것과 같은 상태로 끼워 넣어지도록 함으로써, 검사대(116)상에서 기재(152)가 요철 없이 평활히 유지되도록 하여, 장치의 정상상태의 확인을 보다 확실한 것으로 하더라도 좋다.

이상의 실시예로부터 명백하듯이, 본 발명에 의하면 액상검체로부터 미생물을 여과하는 과정에서 이물제거용 필터와 미생물채취용 필터를 설치하고, 미생물채취용 필터 상에 미생물을 포집하는 것을 특징으로 하는 것으로, 이물이 많이 존재하는 식품재료 쓰레기나 환경 중의 모래먼지 등의 특수한 검체대상으로부터 조제된 액상검체의 여과를 용이한 것으로 하여, 조작의 신속화, 구조의 간략화가 가능하다고 하는 효과가 있는 미생물채취 칩이 제공된다.

또한, 상기의 것과 같은 미생물채취 칩과 흡인여과수단을 조합하는 것에 의해, 식품공장 등의 현장에서, 누구나 간단히 더군다나 확실히 미생물 계량을 할 수 있는 미생물채취 키트가 제공된다.

또한, 상기의 것과 같은 미생물채취 키트를 사용하여 살아있는 세포나 죽은 세포나 특정 미생물을 누구나 정밀도 좋게 간단히 계량할 수 있는 미생물 계량방법이 제공된다.

또한, 상기의 것과 같은 미생물 계량을 하기 전에 장치가 정상상태에 있는 것을 확인하기 위한 특정 파장의 여기광에 의해서 발광하는 발광체를 표면에 고정한 기재를 포함하는 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체가 제공된다.

또한, 상기의 것과 같은 정상상태 확인검사용 검체를 사용하여 장치가 정상상태에 있는 것을 확인할 수가 있는 미생물 계량장치가 제공된다.

Claims (26)

  1. 전단에 프리필터로서의 이물제거용 필터와 후단에 미생물채취용 필터를 조합하여 이루어지고, 미생물을 포함할 수 있는 액상검체로부터 미생물을 여과하여 미생물채취용 필터 상에 미생물을 포집하는 미생물채취 칩.
  2. 제 1 항에 있어서, 이물제거용 필터의 구멍지름이 5 내지 20㎛이고, 미생물채취용 필터의 구멍지름이 0.2 내지 0.8㎛인 미생물채취 칩.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항 있어서, 이물제거용 필터가 액상검체 주입용기의 바닥부로서 이루어지는 미생물채취 칩.
  4. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 이물제거용 필터의 전단에 액상검체 주입용기를 더욱 설치한 미생물채취 칩.
  5. 제 3 항 또는 제 4 항에 있어서, 액상검체 주입용기 개구부를 덮는 면봉부착 뚜껑을 구비한 미생물채취 칩.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 미생물채취용 필터를 포함하는 부위를 단독으로 떼어내는 것이 가능한 것으로 한 미생물채취 칩.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 미생물채취용 필터를 어두운 색의 필터로 한 미생물채취 칩.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 필터 상에 금, 구리, 크롬, 백금, 팔라듐으로부터 선택되는 적어도 1종류의 금속성분을 포함하는 박막이 형성된 미생물채취 칩.
  9. 제 8 항에 있어서, 박막의 막두께가 10 내지 50nm인 미생물채취 칩.
  10. 전단에 프리필터로서의 이물제거용 필터와 후단에 미생물채취용 필터를 조합하여 이루어지고, 미생물을 포함할 수 있는 액상검체로부터 미생물을 여과하여 미생물채취용 필터 상에 미생물을 포집하는 미생물채취 칩과 흡인여과수단으로 이루어지는 미생물채취 키트.
  11. 제 10 항에 있어서, 흡인여과수단을 음압관(陰壓管)으로 한 미생물채취 키트.
  12. 제 11 항에 있어서, 음압관의 입구부에 고무마개가 설치되어 있는 미생물채취 키트.
  13. 제 12 항에 있어서, 고무마개의 중심부가 박층(薄層)으로 되어 있는 미생물채취 키트.
  14. 제 11 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 미생물채취 칩의 미생물채취용 필터 하부에 음압관 내부에 다다르는 중공(中空)바늘을 설치한 미생물채취 키트.
  15. 살아있는 세포와 죽은 세포를 발색시키는 제 1 화합물과 죽은 세포를 상기 발색과 다른 파장으로 발색시키는 제 2 화합물과 살아있는 세포를 상기 발색과 다른 파장으로 발색시키는 제 3 화합물 중에서 1종류 또는 복수종류와, 특정 미생물 유래물질과 반응함으로써 상기 발색과 다른 파장으로 발색하는 적어도 1종류 이상의 제 4 화합물을 액상검체에 접촉시키고, 미생물이 액상검체에 포함되어 있는 경우에는 미생물을 염색한 후, 제 1 항에 기재된 미생물채취 칩을 사용하여 미생물을 미생물채취용 필터 상에 포집한 후, 그 파장차 및 발색량으로부터 살아있는 세포와 죽은 세포의 양쪽 또는 어느 한쪽과 특정 미생물을 동시 검출하는 미생물 계량방법.
  16. 제 1 항에 기재된 미생물채취 칩을 사용하여 미생물을 포함할 수 있는 액상검체로부터 미생물을 미생물채취용 필터 상에 포집한 후, 포착된 미생물에 살아있는 세포와 죽은 세포를 발색시키는 제 1 화합물과 죽은 세포를 상기 발색과 다른 파장으로 발색시키는 제 2 화합물과 살아있는 세포를 상기 발색과 다른 파장으로 발색시키는 제 3 화합물 중에서 1종류 또는 복수종류와, 특정 미생물 유래물질과 반응함으로써 상기 발색과 다른 파장으로 발색하는 적어도 1종류 이상의 제 4 화합물을 접촉시키고, 미생물을 염색한 후, 그 파장차 및 발색량으로부터 살아있는 세포와 죽은 세포의 양쪽 또는 어느 한쪽과 특정 미생물을 동시 검출하는 미생물 계량방법.
  17. 제 15 항 또는 제 16 항에 있어서, 액상검체에 먹물을 첨가하는 미생물 계량방법.
  18. 제 15 항 또는 제 16 항에 있어서, 미생물을 미생물채취용 필터 상에 포집한 후, 미생물채취용 필터 위에서 먹물을 첨가하여 미생물채취용 필터 위를 검게 하는 미생물 계량방법.
  19. 제 15 항 또는 제 16 항에 있어서, 특정 파장의 여기광에 의해서 발광하는 발광체를 표면에 고정한 기재를 포함하는 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체를 사용하여, 미리 해당 발광체를 검출하여 미생물 계량장치가 정상상태에 있는 것을 확인한 후, 살아있는 세포와 죽은 세포의 양쪽 또는 어느 한쪽과 특정 미생물을 동시 검출하는 미생물 계량방법.
  20. 제 19 항에 있어서, 발광체가 고분자 형광입자인 미생물 계량방법.
  21. 제 19 항에 있어서, 발광체가 염색한 미생물인 미생물 계량방법.
  22. 특정 파장의 여기광에 의해서 발광하는 발광체를 표면에 고정한 기재를 포함하여, 미생물 계량을 하기 전에 미생물 계량장치가 정상상태에 있는 것을 확인하기 위한 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체.
  23. 제 22 항에 있어서, 기재를 어두운 색으로 한 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체.
  24. 제 22 항 또는 제 23 항에 있어서, 특정 파장의 여기광에 의해서 발광하는 발광체를 표면에 고정한 기재 상에 금, 구리, 크롬, 백금, 팔라듐으로부터 선택되는 적어도 1종류의 금속성분을 포함하는 박막이 형성된 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체.
  25. 제 24 항에 있어서, 박막의 막두께가 10 내지 1000nm인 미생물 계량장치의 정상상태 확인검사용 검체.
  26. 제 1 항에 기재된 미생물채취 칩에 있어서의 미생물채취용 필터의 미소한 일정면적에 미리 정해진 파장영역에서 여기광을 조사하는 광원과, 상기 여기광에 의해서 발광하는 미리 정해진 파장영역의 빛을 수광(受光)하는 수광수단과, 상기 광원에 의해서 조사되어 발광한 빛을 설정한 일정한 시간내에 수광하여, 그 수광한 광량이 설정한 역치의 범위내일 때에 미생물이라고 판단하는 미생물 판단수단과, 상기 미소한 일정면적을 연속 또는 단속적으로 이동시키는 이동수단과, 미생물 판단수단으로부터 미생물이라고 판단된 신호로부터 미생물의 수량을 적산하는 적산수단을 갖는 미생물 계량장치로서, 특정 파장의 여기광에 의해서 발광하는 발광체를 표면에 고정한 기재를 포함하여, 미생물 계량을 하기 전에 미생물 계량장치가 정상상태에 있는 것을 확인할 수 있도록 한 장치.
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Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004098741A2 (en) * 2003-04-30 2004-11-18 Biovitesse Apparatus and method for detecting live cells with an integrated filter and growth detection device
WO2005082943A1 (ja) * 2004-03-01 2005-09-09 Toyota Jidosha Kabushiki Kaisha 新規高分子化合物およびその製造方法
CA2557487C (en) * 2004-03-01 2015-04-21 Mycometer Aps Detection of contaminants retained on a filter by a detectable moiety-producing substrate
JP4779433B2 (ja) * 2004-08-26 2011-09-28 パナソニック株式会社 ろ過フィルタデバイス
JP4810871B2 (ja) * 2004-09-03 2011-11-09 パナソニック株式会社 微生物検出方法
JP2006129722A (ja) * 2004-11-02 2006-05-25 Asahi Breweries Ltd 微生物検出用メンブランフィルタ
CA2598937A1 (en) * 2005-02-22 2006-08-31 University Of Cincinnati Determination of viable microorganisms using coated paramagnetic beads
EP1883694B1 (en) * 2005-05-17 2015-07-15 Idexx Laboratories, Inc. Rapid bacterial quantification
JP2007006709A (ja) * 2005-06-28 2007-01-18 Matsushita Electric Ind Co Ltd 発光物の判別方法
FR2902799B1 (fr) * 2006-06-27 2012-10-26 Millipore Corp Procede et unite de preparation d'un echantillon pour l'analyse microbiologique d'un liquide
JP2008014689A (ja) * 2006-07-04 2008-01-24 Matsushita Electric Ind Co Ltd 蛍光読取装置および位置補正用チップ
US8362217B2 (en) 2006-12-21 2013-01-29 Emd Millipore Corporation Purification of proteins
US8569464B2 (en) 2006-12-21 2013-10-29 Emd Millipore Corporation Purification of proteins
CN101085977B (zh) 2007-06-27 2011-05-25 叶大林 微生物限度过滤器
EP2209904B1 (en) * 2007-10-10 2017-03-01 Pocared Diagnostics Ltd. System for conducting the identification of bacteria in urine
EP2062978A1 (en) * 2007-11-23 2009-05-27 Nederlandse Organisatie voor toegepast- natuurwetenschappelijk onderzoek TNO System for detecting microbial contamination
FR2934049B1 (fr) * 2008-07-16 2010-10-15 Millipore Corp Unite et procede de preparation d'un echantillon pour l'analyse microbiologique d'un liquide.
US20100107468A1 (en) * 2008-10-31 2010-05-06 Roddy Maskrey Padgham Measuring rod
WO2010074953A1 (en) * 2008-12-16 2010-07-01 Millipore Corporation Stirred tank reactor and method
US8691918B2 (en) 2010-05-17 2014-04-08 Emd Millipore Corporation Stimulus responsive polymers for the purification of biomolecules
KR101019085B1 (ko) * 2010-10-19 2011-03-07 (주)패스텍 세포 채취용 필터 용기
WO2012055077A1 (zh) * 2010-10-30 2012-05-03 湖南省天骑医学新技术有限公司 细胞或细菌的染色制片方法及装置
WO2012083150A2 (en) 2010-12-17 2012-06-21 Biomerieux, Inc. Methods for the isolation, accumulation characterization and/or identification of microorganisms using a filtration and sample transfer device
JP2013146263A (ja) * 2011-12-21 2013-08-01 Azbil Corp 微生物検出装置の校正方法、及び微生物検出装置の校正キット
JP5859329B2 (ja) * 2012-02-02 2016-02-10 アズビル株式会社 微生物検出装置の校正支援装置及び微生物検出装置の校正支援方法
CN102809501B (zh) * 2012-07-29 2014-10-15 宁波市鄞州青林医疗器械技术咨询有限公司 杂质避让式分离胶管
JP2014054232A (ja) * 2012-09-14 2014-03-27 Azbil Corp 微生物検出装置の校正方法、及び微生物検出装置の校正キット
CN104059962A (zh) * 2014-07-15 2014-09-24 光明乳业股份有限公司 一种中空容器内表面微生物的取样方法和检测方法
CN106085833B (zh) * 2016-05-31 2018-03-13 华北理工大学 水中微生物计量装置及其计量方法

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3001669C2 (ko) * 1980-01-18 1989-07-06 Max-Planck-Gesellschaft Zur Foerderung Der Wissenschaften Ev, 3400 Goettingen, De
US4741043B1 (en) * 1985-11-04 1994-08-09 Cell Analysis Systems Inc Method of and apparatus for image analyses of biological specimens
CA1317206C (en) * 1986-09-22 1993-05-04 Takeyuki Kawaguchi Method for detecting a component of a biological system and detection device and kit therefor
JPH03500003A (ko) * 1987-08-27 1991-01-10
US5139031A (en) * 1989-09-18 1992-08-18 La Mina Ltd. Method and device for cytology and microbiological testing
JPH05273217A (ja) * 1992-03-30 1993-10-22 Meidensha Corp 微生物測定装置
US5552272A (en) * 1993-06-10 1996-09-03 Biostar, Inc. Detection of an analyte by fluorescence using a thin film optical device
US5578459A (en) * 1993-11-24 1996-11-26 Abbott Laboratories Method and apparatus for collecting a cell sample from a liquid specimen
US5976824A (en) * 1993-11-24 1999-11-02 Abbott Laboratories Method and apparatus for collecting a cell sample from a liquid specimen
EP1522845A1 (en) * 1995-02-02 2005-04-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for assay of analyte by adjustment of chemiluminescence
WO1996030542A1 (en) * 1995-03-28 1996-10-03 Idemitsu Kosan Company Limited Method for rapidly determining number of bacteria and equipment for determining number of bacteria
US6040191A (en) * 1996-06-13 2000-03-21 Grow; Ann E. Raman spectroscopic method for determining the ligand binding capacity of biologicals
WO1998011250A2 (en) * 1996-09-13 1998-03-19 Maxine Helen Simmons Detection of microorganisms
US6727071B1 (en) * 1997-02-27 2004-04-27 Cellomics, Inc. System for cell-based screening
JPH11113562A (ja) * 1997-10-09 1999-04-27 Konica Corp 微生物の検出方法、微生物検出装置及び微生物検出用プレート
US6908770B1 (en) * 1998-07-16 2005-06-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Fluid based analysis of multiple analytes by a sensor array
CN2345183Y (zh) 1998-09-08 1999-10-27 东营市人民医院 无菌棉签拭子
US6468657B1 (en) * 1998-12-04 2002-10-22 The Regents Of The University Of California Controllable ion-exchange membranes
US6485962B1 (en) * 2000-04-05 2002-11-26 Echo Technologies Methods for signal enhancement in optical microorganism sensors

Also Published As

Publication number Publication date
KR100841827B1 (ko) 2008-06-26
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